Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Очистка природных и сточных вод от нефтезагрязнений иммобилизованными углеводородокисляющими микроорганизмами

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата технических наук, Суржко, Лариса Федоровна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Углеводородокисляющие микроорганизмы и факторы, влияющие на биодеградацию нефтяных углеводородов

1.2. Пути биодеградации углеводородов нефти

1.3. Биотехнологические методы очистки от нефтезагрязнений.

1.4. Методы иммобилизации клеток, микроорганизмов - '.-■

1.5. Жизнеспособность иммобилизованных клеток

1.6. Носители для иммобилизации микроорганизмов-нефтедеструкторов

1.6.1. Вспученные вермикулиты

1.6.2. Поливинилспиртовые и поликапроамидные волокна

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Характеристика углеводородокисляющих культур и условия их культивирования

2.2. Характеристика носителей

2.3. Получение иммобилизованных клеток

2.4. Условия проведения экспериментов по биодеградации нефти иммобилизованными клетками

2.5. Методы определения содержания нефтяных углеводородов

2.6. Условия проведения полевых экспериментов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Выбор культур для иммобилизации

3.2. Иммобилизация клеток -нефтедеструктов

3.2.1. Поликапроамидные и поливинилспиртовые волокна - носители для дрожжевых клеток

3.2.2. Адгезия дрожжевых и бактериальных клеток на вермикулитах

3.2.3. Исследование жизнеспособности иммобилизованных культур

3.3. Деструкция нефтяных углеводородов иммобилизованными культурами

3.3.1. Деградация углеводородов нефти культурами, иммобилизованными на вермикулите

3.3.1.1. Биодеструкция нефти в водных средах

3.3.1.2. Биодеструкция нефти в почве

3.3.2. Деградация углеводородов нефти культурами,., иммобилизованными на поликапроамидных волокнах

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Очистка природных и сточных вод от нефтезагрязнений иммобилизованными углеводородокисляющими микроорганизмами"

Поступление нефти и продуктов ее переработки в окружающую среду влияет на естественные физико-химические и биологические процессы, происходящие в природе, нарушая сложившееся экологическое равновесие.

Самоочищение от нефтезагрязнения - процесс медленный и длительный, т.к. количество микроорганизмов, способных к активному окислению нефтяных углеводородов, в природных условиях обычно невелико /48,108 /.

Внесение в места загрязнения правильно подобранных углеводородокисляющих микроорганизмов, создание оптимальных условий для их активного функционирования способствует более быстрой и полной деструкции загрязнения /5/. Поэтому поиски микроорганизмов - активных нефтедеструкторов, изучение влияния факторов внешней среды на микробную деградацию нефтяных углеводородов, определение метаболических путей деградации загрязнения являются весьма актуальными направлениями для быстро развивающейся в настоящее время экологической биотехнологии.

Среди новых биологических методов для очистки вод от нефтяных загрязнений наиболее перспективным представляется использование биопрепаратов на основе иммобилизованных микроорганизмов, которые хорошо зарекомендовали себя для очистки сточных вод загрязнений различного типа (3, 25, 85, 112) .

Правильно подобранный носитель, способный к сорбции нефтяных углеводородов, сохраняет и поддерживает прикрепленные клетки в жизнеспособном состоянии в течение длительного времени и защищает их, особенно на начальном этапе ин5 тродукции, от неблагоприятных условий внешней среды, что увеличивает эффективность нефтедеструкции.

Настоящее исследование посвящено изучению процессов деструкции нефти иммобилизованными дрожжевыми и бактериальными культурами Candida tropicalis 637, Candida parapsilosis 907, Acinetobacter species 72S и Bacillus polymyxa 165.

Достижение этой цели предусматривало решение следующих задач:

- исследование роста коллекционных и диких культур микроорганизмов на углеводородах нефти и отбор штаммов, отличающихся наибольшей эффективностью.

-подбор носителей, подходящих для иммобилизации клеток, способных к сорбции нефтяных углеводородов и приемлемых для эксплуатации в очистных сооружениях и для очистки природных вод.

- выбор оптимального метода иммобилизациии, обеспечивающего сорбцию максимального количества клеток и сохранение жизнеспособности иммобилизованных культур.

-исследование и определение деструкции углеводородов нефти иммобилизованными культурами; изучение их воздействия на различные классы углеводородов нефти.

-оценка возможности использования полученных иммобилизованных культур микроорганизмов для очистки нефтезагрязненных природных и сточных вод и для биоремедиации нефтезагрязненных почв.

В работе проведено исследование процесса адгезионной иммобилизации дрожжевых и бактериальных культур на поли-винилспиртовых, поликапроамидных волокнах и вспученных вермикулитах.

Определены закономерности адгезионной иммобилизации в зависимости от времени контакта, структурных характеристик и химии поверхности носителей. Рассмотрено влияние химических 6 модификаций носителей (обработка глутаровым альдегидом, полиэтиленимином, монохлоруксусной кислотой, низкомолекулярным кремнийорганическим каучуком, кремнийорганической жидкостью)на количество иммобилизованных клеток.

Созданы новые биопрепараты иммобилизованных микроорга-низмов-нефтедеструкторов, сохраняющие жизнеспособность в течение длительного времени.

Исследована деструкция различных классов нефтяных углеводородов свободными и иммобилизованными культурами и их ассоциациями в почве и водных средах.

Усовершенствована методика сорбционного разделения и последующей идентификации углеводородов, входящих в состав нефти, использованная для качественной и количественной оценки процессов биодеструкции.

Работа имеет практическую ценность. Результаты проведенных исследований являются основой для разработки технологии получения иммобилизованных культур -нефтедеструкторов на минеральных и синтетических носителях для очистки природных и сточных вод от нефти и нефтепродуктов.

Проведены натурные испытания опытных партий биопрепаратов для очистки от нефтезагрязнений сточных вод в очистных сооружениях Зеленогорской станции аэрации и на территории ПО "Кировский завод". Показана целесообразность использования культур, иммобилизованных на поликапроамидные волокна для очистки сточных вод от растворенных и эмульгированных нефтепродуктов. 7

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Суржко, Лариса Федоровна

ВЫВОДЫ.

1. Поиск среди коллекционных и, выделенных из природных субстратов углеводородокисляющих микроорганизмов, позволил выбрать для иммобилизации 4 культуры: Candida tropicalis 637, Candida parapsilosis 907, Acinetobacter species 72S и Bacillus polymyxa 165, которые активно развиваются на углеводородах сырой нефти и дают наибольший прирост биомассы.

2. Установлено, что клетки С. tropicalis. 637 и С. parapsilosis 907 обладают высокой способностью к иммобилизации на поливинилспиртовых и поликапроамидных волокнах, достигая максимальной концентрации - 89-131,0 и 100-186 мг/г носителя, соответственно, за 150 минут иммобилизации.

Показано, что самой эффективной химической модификацией волокнистых носителей (модификации полиэтиленимином, глутаровым альдегидом, монохлоруксусной кислотой) является обработка ПВС волокон глутаровым альдегидом, которая увеличивает количество иммобилизованных дрожжевых клеток в 1,5-2 раза.

3. Установлено, что и дрожжевые и бактериальные клетки А. species 72S иммобилизуются на вспученные вермикулиты, достигая концентрации 0,5-0,6 мг/г для дрожжевых и 0,178 мг/г для бактериальной культур в течение 60 минут иммобилизации.

4. На основании, проведенных исследований получены иммобилизованные культуры на волокнах и вермикулитах, имеющие клеточный титр 1О6-1О7 для дрожжевых и 107-109 кл/г носителя для бактериальных клеток. Иммобилизованные на вермикулите клетки могут храниться в высушенном состоянии без потери жизнеспособности в течение 6 месяцев и более при оптимальной влажности биопрепаратов -12-15%.

5. Исследована деструкция сырой нефти свободными и им

87 мобилизованными на вермикулите культурами и их ассоциациями в водных средах в различных условиях.

Показано, что степень деструкции углеводородов нефти иммобилизованными культурами и их ассоциациями составляет 688 6%, причем биодеградация алифатических углеводородов составляет 92-96%, а ароматических (по сумме алкилнафталинов) - 75-7 6%. Биодеградация нефтяных углеводородов ассоциациями дрожжевых и бактериальных культур выше, чем монокультурами и дрожжевой ассоциацией на 18-20%.

Установлено, что все иммобилизованные культуры и их ассоциации способны к деструкции нефти на 72-7 6% в средах с повышенным содержанием солености.

6. В условиях полевого эксперимента с применением иммобилизованных на вермикулите культур деструкция нефтяных углеводородов достигает 7 8 %, что открывает возможность их использования для биоремедиации нефтезагрязненных почв.

7. Показана эффективность использования иммобилизованных на ПКА волокнах дрожжевых клеток в биореакторах непрерывного действия, что делает их перспективными для использования в доочистке растворенных и эмульгированных нефтезагрязнений в сточных водах.

88

Библиография Диссертация по биологии, кандидата технических наук, Суржко, Лариса Федоровна, Санкт-Петербург

1. Ацетилирование поливинилспиртовых волокон глутаровым альдегидом/А.Б.Лобова, И. А.Гончарова,И.И.Шамолина, А. А.Вольф// Химические волокна.-1984.-№ 6.-С.39-40.

2. Батталова Ш.Б. Физико-химические и каталитические свойства вермикулитов.-Алма-Ата:Наука, 1982.-148 с.

3. Биологическая очистка ливневых вод от нефтепродуктов / О.В. Клямар, Я.М. Сорока, Г.И. Дмитренко, П.И. Гвоздяк // Междунар. Конф., посвящ. Памяти акад. A.A. Баева.-Москва,20-22 мая 1996.-М.-1996.-С.162.

4. Биопрепараты для очистки воды и почвы от нефтезаг-рязнений/Суржко Л.Ф., Яковлев С.А., Янкевич М.И., Яковлев В.И.//Химия и технология лекарственных веществ: Материалы Всероссийской научной конф.-СПб, 1994.-С.29.

5. Вельков В.В. • Биоремедиация: принципы, проблемы, подходы//Биотехнология.-1995.-№3-4.-С.20-27.

6. Гвоздяк П.И. Перспективы использования электроудерживания для иммобилизации биологически активных частиц//Иммобилизованные клетки м-ов.-Пущино: Научн.центр биол. исследований АН СССР,1978.-С.80-84.

7. Ждан-Пушкина С.М., Хасанова Л.А. Некоторые аспекты роста культур микроорганизмов.-Уфа,1991.-126 с.

8. Звягинцев Д. Г,. Взаимодействие микроорганизмов с твердыми поверхностями. -М.: Из-во Моек.ун-та,1973.-176 с.

9. Звягинцев Д.Т. Почва и микроорганизмы. -М.: Из-во Моск.ун-та,1987.-256 с.

10. Изучение азотфиксирующей активности клеток Azospirillum brasilense sp.7,иммобилизованного на макропористых сорбентах/Л.В. Карпухина, В.Е. Никитина, И.Ф. Воротилова и др.//Биотехнология.-1989.-Т.5.-№ 2.-С.208-211.

11. Иммобилизация бактерий-деструкторов на искусственных89волокнах для очистки воды от анионных ПАВ/С.С. Ставская, И.И.Шамолина, Г.Н. Никовская и др.//Химия и технология воды,-1991.-Т.13.-№ 6.-С.548-564.

12. Иммобилизация дрожжевых культур p.Candida на капроновых волокнах/Л.Ф.Суржко, М.И. Янкевич, В.И. Яковлев, И.И.Шамолина//Охрана окружающей среды от загрязнения промышленными выбросами ЦБП, СПб ТИ ЦБП,-СПб, 1993.-С.124-128.

13. Иммобилизация дрожжей Saccharomyces cerevisiae на алюмоборосиликатных стекловолокнах/А.П. Синицин, Е.И.Райнина,

14. A.B. Ефремов и др.//Биотехнология.-198б.-Т.9.-№ 3.-С.66-69.

15. Интенсификация биологической очистки сточных вод нефтеперерабатывающих заводов/Н.И.Павленко, 3.Т.Бега,

16. B.В.Изжеурова, П.И.Гвоздяк//Химия и технология воды.-1989.-Т.11.-№ 6.-С.541-544.

17. Использование микробиологического метода для очистки нефтезагрязненых почв/Р.К. Андерсон, Ф.Я. Багаутдинов, Т.Ф. Бойко и др.//Конф.:-Интродукция микроорганизмов в окружающую среду.-Москва,17-19 мая 1994.-М.,1994.-С.10.

18. Использование микроорганизмов при ликвидации нефтяных загрязнений почв/И.А. Борзенков, P.P. Ибатулин, Е.И. Милехина и др.//Интродукция микроорганизмов в окружающую среду: Тез. Докл.,Москва,17-19 мая1994.-С.14-15.

19. Карпухина Л.В., Никитина В.Е., Стадник Г.И. Нитрогеназная активность иммобилизованных клеток Bacillus polymyxa //Биотехнология.-1986.-№ 2.-С.97-101.

20. Колонизация волокнистой насадки бактериями-деструкторами этилейгликоля/Н.Ф.Могикевич, П.И.Гвоздяк, Р.В. Невинная, A.A. Закордонец //Микробиология.-1989.-Т.57.-№ 3.1. C.123-126.

21. Коронелли Т.В., Комарова Т.И., Игнатченко A.B. Роль эмульгирования в процессе поглощения углеводородов клетками90

22. Pseudomonas aerugenosa.//Микробиол.-1983.-T.52.-№ 1.-С.94-97.

23. Луста К.А., Фихте Б.А. Методы определения жизнеспособности микроорганизмов. -Пущино: Научн.центр АН СССР,1990.-186 с.

24. Методы почвенной микробиологии и биохимии : Учеб. пособие/под ред.Д.Г.Звягинцева.-М.:Изд-во МГУ,1991.-304с.

25. Мосичев М.С., Складнев A.A., Котов В.Б. Общая технология микробиолоических производств.-М:Легкая и пищ. промышл.,1982.-2 64 с.

26. Никовская Г.Н., Глоба Л.И. Иммобилизация бактерий в зависимости от гидратации поверхности клеток и сорбентов.

27. Докл.АНУССР.Сер.Б. Геол.хим.и биол.науки.-1989.-№ 10.-С.79-82.

28. Никовская Г.Н., Гордиенко A.C., Глоба Л.И. Сорбция91микроорганизмов волокнистыми материалами//Микробиология.-1986.-Т.55.-№ 4.-С.691-694.

29. Оптимальная среда для углеводородокисляющих бактерий Acinetobacter/Г.Н. Морщакова, М.Б. Биттеева , Л.И. Капотина, Б.Г. Мурзаков// Биотехнология.-1991.-№ 6.-С.67-69.

30. Пальгунов П.П., Сумароков М.В. Утилизация промышленных отходов. -М.: Стройиздат,1990.-352с.

31. Пат.2063386 RU, МКИ 6 С 02 F 3/34.Способ очистки природных и сточных вод от нефтепродуктов/М.И. Янкевич, И.И. Шамолина, М.Б. Биттеева и др. (РФ).-№ 9393032685/13;

32. Заявл.23.06.93; Опубл.10.07.96.-8с.

33. Пецев Н., Коцев Н.К. Справочник по газовой хроматографии. -М.: Мир, 1987.-260 с.

34. Применение дрожжей рода Candida для очистки природной среды от нефтяных загрязнений/ М.Б. Биттеева, Л.И. Козлова, Л.Н. Капотина и др.//Тез. Докл.15 Международный симпозиум по дрожжам.-Рига,1991.-С.24.

35. Роль волокнистой насадки в предотвращении биообрастаний аппаратов/ П.И.Гвоздяк, Г.Н.Никовская, О.Ф.Удилова, Л.И.Глоба//Химия и технология воды.-1990.-Т.12.-№ 5.-С.462-466.

36. Сорбция клеток Pseudomonas sp.№ 12 на различных носителях/Е.И.Козляк, З.Г.Соломан, М.М.Якимов и др. //Прикл.биохим.и микробиол.-1993.-N.29.-№ 1.-С.138-144.

37. Таранова Л.В., Жданова Е.Б. Влияние бактерий и дрожжей на биохимическое окисление нефти.//Нефть и газ Западной Сибири: Тез.докл.Междунар.научн.-техн.конф., Тюмень9221.23 мая 1996г.-T.2.-,Тюмень.-1996.-С.126.

38. Утилизация нефти в почве и воде микробными клет-ками/JI . Ф . Суржко, 3.И.Финкельштейн, Б.П.Баскунов, М.И.Янкевич, и др.// Микробиол.-1995.-т.64.-№3.-С.393-398.

39. Химия нефти и газа: Учеб. пособие для вузов/А.И. Богомолов, А.А.Гайле, В.В.Громова и др./Под ред. В.А.Проскурякова, А.Е.Драбкина-2-e изд.,перераб.-Л.: Химия,-198 9.-424 с.

40. ШЛЫГИН И.А. Нефтяные углеводороды в морских донных отложениях: химические и биологические процессы./ Обзор. Сер.87.Мониторинг состояния окружающей природной среды.-Обнинск: ВНИИГМУ-МУД.-1986.- 47с.

41. Aelion С.M.,Widdowson M.A. Nunerical modeling and fild application to the in situ bioremediation of subsurface contamination at a JP-4 jet fuel spill.//Abstr.Gen.Meet. Am. Soc.Microbiol.-1991.-91 Meet.-P.312.

42. Al-Bashir B.,Cseh T.,Leoluc R.,Samson R. Effect of soil/contaminant interaction on the biodégradation of naphtalene in flooded soil under denitrifying condition.93

43. Appl.Microbiol.Biotechnol.-19 90.-Vol.34.-N3.-P.414-419.

44. A new method for applying bioremediating microbes to ocean oil slicks//Erivironm. Science and technology.-1992.-vol.26.-№ 3.-P.421.

45. Aronstein B.N.,Colvillo Y.MAlexander M. Effect of surfactants at low concentration on the desorption and biodégradation of sorbed aromatic compounds in soil.// Environ.Sci.Technol.-19 91.-Vol.25.-N 10.-P.1728-1731.

46. Atlas R.M. Microbial degradation of petroleum hydrocarbons ran environmental perspective.//Microbiol.Rev.-1981.-Vol.45.-N 2.-P.180-209.

47. Atlas R.M. Microbial hydrocarbon degradation -bioremediation of oil spills.//J.Chem.Tech.Biotechnol.-1991. -Vol.52.-P.149-156.

48. Atlas R.M.,Bartha R. Biodégradation of petroleum in sea water at low temperatures.//Can.J.Microbiol.-1972.-Vol.18.-N 10.-P.1851-1855

49. Atlas R.M.,Bartha R. Stimylated biodégradation of oil slicks using oleophilic fertiliztrs.//Environ.Sci.Technol.-1973.-N7.-P.538-541.

50. Aust S.D. Degradation of environmental pollutants by Phanerochaete chrysosporium.//Microb.Ecol.-1990.-Vol.20.1. P.197-209.

51. Biodégradation of petroleum hydrocarbons in graundwater: situ augmented bioreclamation with enrichment isolated in California/R.J.von Wedel, J.F.Mosguera,

52. C.D.Goldsmith et.al.//Water Sci.Technol.-1988.-Vol.20.-P.501-503.

53. Baker C.,Kulpa C. Biosurfactant production by manufactured gas plant soil microflora and its potential for enhancement of naphtalene metabolism.//Abstr. Gen. Meet.

54. Am.Soc.Microbiol.-1991.-91 Meet.P.216.94

55. Batylinski D.A.,Wirsen C.0.,Jannasch H.W. Microbial utilization of naturally occurring hydrocarbons at the Guaymas basin hydrothermal vent site.//Appl. Environ. Microbiol.-1989.-Vol.55.-P.2832-2836.

56. Bauer J.E.,Capone D.G. Effects of co-occurring aromatic hydrocarbons on degradation of individual polyciclic aromatic hydrocarbons in marine sediment slurries. //Appl. Environ.Microbiol.-198 8.-Vol.54.-P.164 9-1655.

57. Beller H.R.,Grbic-Galic D.,Reinhard M. Microbial degradation of toluene under sulfat-reducing condition and the influence of iron on the process.//Appl. Environ. Microbiol.-1992.-Vol.58.-N 3.-P.786-793.

58. Biological treatment of hazardous wastes by Phanerochaete chrysosporium./J.A.Bumpus,T.Fernando,M.Jurek et.al.//Biotechnol.Appl.Hazardous Waste Treatment.-1989.-P.167-182.

59. Bumpus J.A. Biodégradation of polycyclic aromatic hydrocarbons by Phanerochaete chysosporium.//Appl. Environ. Microbiol.-198 9.-Vol.55.-P.154-158.

60. Cerniglia C.E. Biodégradation of organic contaminants overview and examples with polycyclic aromatic hydrocarbons

61. Abstr.Pap.Am.Chem.Soc.-1990.-199 Meet.-Pt.1.-ENVR 136.

62. Cerniglia C.E. Biodégradation of polycyclic aromatic hydrocarbons.//Biodegrad.-19 92.-Vol.3.-N 2-3.-P.351-368.

63. Colwell R.R.,Walker J.D. Ecological aspects of microbial degradation of petroleum in the marine environment95

64. Crit.Rev.Microbiol.-1977.-Vol.5.-P.423-445.

65. Cooney J.J.,Silver S.A.,Beck E.A. Factors influencing hydrocarbon degradation in three freshwater lakes.//Microb. Ecol.-1985.-Vol.11.-P.127-137.

66. Dart R.K.,Stretton R.J. Microbiological aspects of pollution control.-Amsterdam-Oxford-New York: Elsevier scientific publishing company,1980.-257 p.

67. Degradation cfhfcity of bacteria and fungi isolated from soil contaminated by fuel/J.Oudot, P.Fusey, D.E. Abdelouahid et.al.//Can.J.Microbiol.-1987.-Vol.33.-N 3.1. P.232-243.

68. Effect of amendments on the microbial utilization of oil applied to soil/A.Jobson, M.Mclaughlin, F.D.Cook,

69. D.W.S.Westlake//АррГ.Microbiol.-197 4.-Vol.27.-N 1.-P.166-171.

70. Elsas J.D.van,Heijnen C.E. Methods for the introdaction of bacteria into soil:a review.//Biol. Fertil. Soils.-1990.-N 10.-P.127-133.

71. Evidence for cooxidation of polynuclear aromatic hydrocarbons in soil/J.Keck,R.S.Sims,M.Coover et.al.//Water Res.-1989.-Vol.23.-P.1467-1476.

72. Falatko D.M.,Novak J.T.Effects of biologically produced surfactants on the mobility and biodtgradation of petrolium hydrocarbons.//Water Environ.Res.-1992.-Vol.64.-N 2.-P.163-169.

73. Grbic-Gallic D.,Vogel T.M. Transformation of toluence and benzene by mixed methanogenic-cultures. //Appl. Environ. Microbiol. -1987.-Vol.53.-P.254-260.

74. Heitkamp M.A.,Freeman J.P., Cerniglia C.E. Naphtalene biodégradation in environmental microcosms.//Appl. Environ. Microbiol.-1987.-Vol.53.-N 1.-P.129-136.

75. Herbes S.E.,Schwale L.R. Microbial transformation of polycyclic aromatic•hydrocarbons in pristine and petroleum-contaminated sediments.//Appl.Environ.Microbiol.-1978.-Vol.35.-P.306-316.

76. Hinchee R.T.,Arthur M. Bench scale stadies of the soil aeration process for bioremediation of petroleum hydrocarbons.//Appl.Biochem.Biotechol.-1991.-Vol.28-29.-P.901-906.

77. Identification of xylose conjugates formed from antracene by Rhizo ctoniasolani/I.B.Sutherland, A.L.Selby, J.P.Freemen et.al.//Mycol.Res.-1992.-vol.96.-P.509-517.

78. Jamison V.M.,Raymond R.L.,Hudson J. Biodégradation of hidh-octane gasoline in groundwater.//Dev.Ind.Microbiol.-1975.-Vol.16. P.305-312.

79. Jobson A.,Cook F.D.,Westlake D.W.S. Microbial utilization of crude oil.//Appl.Microbiol.-1972.-Vol.23.-P.1082-1089.

80. Kerr R.P.,Capone D.G. The effect of salinity on the microbial mine ralization of two polycyclic aromatic97hydrocarbons in estuarine sediments.//Mar.Environ.Res.-1988. Vol.26.-P.181-198.

81. Krigsvoll S.,Josefsen K.,Storro J. Microbial emulsification of crude oil.//Eur.Congr.Biotechnol.-1990.-5 Meet.-P.221-224 .

82. Kukor J.J., Olsen R.N. Diversity of toluene degradation following long term exposure to BIEX in situ// Advar. Appl. Biotechnol. Ser.,1990.-P.405-421.

83. Leahy J.G., Corwell R.R. Microbial degradation of hydrocarbons in the environment.//Microbial.Rev.-1990.-Vol.54.-N 3.-P.305-3.15.

84. Madsen E.L. Determining in situ biodégradation : facts and challuges.//Environ. Sci. Technol.-1991.-Vol.25.-N 10.-P.1663-1673.

85. Manilal V.B., Alexander M. Factors affecting the microbial degradation of phenantrene in soil. //Appl. Microbiol. Biotechnol.-1991.-Vol.35.-№ 3.-P.401-405.

86. Marx D.H., Kenney D.S. Production of ectomycorrhizal fungi inoculants. //Methods and principles of mycorrhizal research.-American Phytopathological Society.-St.Paul.-Minn. P.131-146.

87. Metabolism of dibenzo-p-dioxin by Sphingomonas sp. strain RW 1/R.M.Wittich,H.Wilkes,V.Sinnwell et.al.//Appl. Environ.Microbiol. 19'92.-Vol. 58.-№ 3 .-P . 1005-1010 .

88. Microbial degradation of crude oil in sea water in98continuous culture/J.С.Bertrand,E.Rambeloarisoa,J.F.Rontani et.al.//Biotectnol.Lett.-1983.-Vol.5.-N 8.-P.5 67-572.

89. Microbial degradation of oil spill enhanced a slow-release fertilizer /R.Olivieri,P.Becchin,A.Robertielloet.al.//Appl.Environ. Microbiol.-1976.-Vol.3.-№ 3.-P.629-634.

90. Morgan P.,Watkinson R.J. Factors limiting the supply and efficiency of nutrient and oxygen supplements for the in situ biotreatment of contaminated soil and groundwater // Water-Res.-1992.-Vol.26.-N 1.-P.73-7 8.

91. New biopreparations for water and soil decontamination from oil-products/L.Surzhro, M.Janrtvvich, V.Hadeeva, V.Jakovlev//International conference "Biotechology

92. St.Petersburg'94",September 21-23,1994,-St.Peterburg,Russia,-P.164.

93. Ogunseitan 0.A.,Lyon S.R.,Olson B.H. Incidense plasmids in chlorobiphenyl-degrading bacteria from a PAHs-contaminated soil.//Abst. Gen.Meet.Am.Soc.Microbiol.-1991.-91 Meet.-P.293.

94. Oil spill bioremediation: experiences,lessons and result from the "Exxon Valdez" oil spill in Alaska / P.H.Pritchard, J.G.Mueller, J.C.Rogers et.al. // Biodégradation. -1992.-Vol.3.-№2-3.-P.315-335.

95. Omar S.H.,Budecker U.,Rehm H.J. Degradation of oily sludge from a flotation unit by free and immobilized microorganisms.//Appl. Microbiol.Biotechnol.-1990.-Vol.34.-N 2.-P.259-263.

96. Pseudomonas putida.//J.Bacterid.-197 4.-Vol.119.-P.879-8 8 8 .

97. Perry J.J. Microbial cooxidations involving hydrocarbons.//Microbiol.Rev.-1979.-Vol.43.-N 1.-P.59-72.

98. Perry J.J. Isolation and characterization of the thermophilic hydro carbon-utilizing bacteria.//Adv. Aquat. Microbiol.-1985.-Vol.37- P.10 9-139.

99. Petroleum bioremediation-multiphas problem / E.Rosenberg, R.Legmann, A.Kushmara et.al.// Biodégradation. -1992.-Vol.3.-№ 2-3.-P.337-350.

100. Petroleum-degrading achlorophyllous alga Prototheca zopfi/ J.D.Walker, R.R.Colwell, Z.Vaituzis, S.A.Meyer // Nature.-1975.- Vol.254.-P.423-424.

101. Pyrene degradation by a Mycobacterium sp.in micricosms containing sediment and identification of ring oxidation ring fission products/M.A.Heitkamp, J.P.Freemen, D.W.Miller, C.E.Cerniglia//Appl. Environ.Microbiol.-1988.-Vol.54.-P.2556-2565.

102. Reeve C.A., Amy R.S., Matin A. Role of protein synthesis in the survival of carbon starved E.coli K-12.// J.Bacterid. -1984.- Vol.160.-N 3 .-P. 1041-104 6.

103. Resnick S.M.,Brawn E.F. Mineralization of n-hexadecane:a measure of hydrocarbon-degrading ability of bacteria from oiled beaches in Prince William Sound. //Abstr. Gen. Meet. Am. Soc. Microbiol.-1991.- 91 Meet.-P.310.

104. Song H., Bartha R. Effects of jet fuel spills on the microbial community of soil.//Appl.Environ.Microbiol.-1990.-Vol.56.-N3.-P.64 6-651.

105. Song H.G., Pedersen T.A.,Bartha R. Hydrocarbon mineralization in soil:relative bacterial and fungal contribution.//Soil.Biol.Biochem.- 198 6.-Vol.18.-P.109-111.

106. Song H.G., Wang X., Bartha R. Bioremediation potential of terrestrial fuel spills.//Appl. Environ. Microbiol.-1990.-Vol.56.-N 3.-P.652-65 6.

107. Spain J.C.,Pritchard P.H.,Bourquin A.W. Effect of adaptation on bidegradation rates in sediment/water cores from estuarine and fresh water nvironment.//Appl. Environ. Microbiol.-1980.-Vol.4 0.-P.726-734.

108. Sparrow S.D.,Ham G.E. Modulation,№ 2 fixation,and seed yield of navy beans as influenced by inoculant rate and inoculant carrier.//Agron.J.-1983.-Vol.75.-P.2 0-24.

109. Sparrow S.D.,Ham G.E. Survival of Rhizobium phaseoli in six carrier materials.//Agron.J.-1983.-Vol.75.-P.181-184.

110. Stone R. Oil-cleanup method guestioned//Science/-V.257.-№ 5068.-C.320-321.

111. Tatsuo S., Hiroki N., Naomichi M. Suishitsu odaku kenkyu.//Jap. J.Water Pollut.Res.-1991.-Vol.14.-N 11.-C.820-823.

112. The recognition of biodegraded petroleum-derived aromatic hydrocarbons in recent marine sediments/D.M.Jones, A.G.Douglas, R.J.Parkes et.al.//Mar.Pollut.Bull.-1983.-Vol.14.-P.103-108.

113. Use of alginane and other carriers for encapsulation of microbial cells for us in soil/J.T.Trevors,J.D.van Elsas,101

114. H.Lee, L.S.van Overbeek//Microb.Releases.-1992.-Vol.1.-P.61-69.

115. Use of microbes-destructors in treatment of wastewater from petroleum products/M.J Pavlenko, V.V.Izzheurova, L.M.Klenkina et.al.//Microbiol. Zn.-1991/-vol.53/-№ 4.-P.91-95.

116. Walker J.D.,Corwell R.R. Microbial degradation of model petroleum at low temperatures.//Microb.Ecol.-1974.-Vol.1.-P.63-95.

117. Ward D.M.,Brock T.D.Hydrocarbon biodégradation in hypersaline environments.//Appl.Environ.Microbiol.-1978.-Vol.35.-P.353-359.

118. Young L.Y.,'Haggblom M.M. The anaerobic microbiology and biodégradation of aromatic compounds.//Advan. Appl. Biotechnol.-Ser. Biotechnol. Biodégradation. -1990.-P.3-19.