Обратимое подавление деятельности сердца в связи с проблемой гипобиоза

Сосулина, Людмила Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Обратимое подавление деятельности сердца в связи с проблемой гипобиоза
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Обратимое подавление деятельности сердца в связи с проблемой гипобиоза"

Московский Государственный Универс^от_ им. М.В. Ломоносова I ! и V/«

Биологический факультет

! с - ^ 01

На правах рукописи

Сосулина Людмила Юрьевна

ОБРАТИМОЕ ПОДАВЛЕНИЕ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ СЕРДЦА В СВЯЗИ С ПРОБЛЕМОЙ ГИПОБИОЗА: ЭФФЕКТЫ НУКЛЕОТИДОВ И ИНГИБИТОРОВ 1-го КОМПЛЕКСА ДЫХАТЕЛЬНОЙ ЦЕПИ.

03.00.13 - физиология человека и животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-2000

Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных Биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова (заведующий кафедрой академик РАМН И.П. Ашмарин).

Научный руководитель:

кандидат биологических наук Г.С. Сухова

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук В.И. Прошева

кандидат биологических наук Т.Г. Емельянова

Ведущая организация: Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН г. Пущино

Защита диссертации состоится 24 апреля 2000 года в 15 час. 30 мин. на заседании Диссертационного совета Д.053.05.35 Биологического факультета Московского Государственного Университета им. М.В. Ломоносова по адресу: 119899, Москва, Воробьевы Горы, МГУ, Биологический факультет, ауд. М 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета МГУ.

Автореферат разослан 23 марта 2000 года.

вен.^'^ъе, о

Ученый секретарь Диссертационного совета кандидат биологических наук

ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. Обратимая, продолжительная остановка сердца или длительное снижение его функции является одной из важных задач для кардиохирургии. В настоящее время основным методом снижения работы сердца в медицине является гипотермия (Литасова и др., 1997). Однако применение гипотермии имеет целый ряд ограничений и осложнений (Покровский и др., 1984, Иванов, 1999), поэтому поиск новых средств снижения метаболизма остается по-прежнему актуальным.

Гипотермия - один из способов снижения потребления клетками кислорода. Добиться такого эффекта теоретически можно и другими методами, например, с помощью ингибирования дыхательной цепи. Действие ингибиторов дыхательной цепи на жизнедеятельность клетки до настоящего времени рассматривается на внутриклеточном уровне, их действие на целый орган, например на сердце, изучено мало, а возможная роль как эндогенных регуляторов гипобиоза неизвестна.

В то же время показано, что естественный гипобиоз - гибернация или зимняя спячка контролируется рядом физиологически активных веществ, содержащихся во фракциях из тканей и плазмы крови животных гибернантов (Swan et al, 1977, Зиганшин и др., 1994). Состав этих фракций, обладающих гипометаболическим действием, до конца не изучен. Ранее исследовали эффекты суммарных фракций и их пептидных компонентов (Кокоз и др., 1987, Игнатьев и др., 1989, Сухова и др., 1990). Роль нуклеотидов и АДФ-рибозы (ингибитора 1-го комплекса дыхательной цепи), обнаруженных в мозге и сердце зимоспящих, в поддержании гипобиоза и в обратимом ингибировании работы сердца не изучена. Выяснение полного состава этого комплекса и механизмов действия отдельных его компонентов имеет значение, как для изучения механизмов гибернации, так и в моделировании искусственного гипобиоза.

Цель настоящей работы состояла в изучении возможности применения ингибиторов 1-го комплекса дыхательной цепи для обратимого ингибирования работы сердца и исследовании кардиотропной активности нуклеотидных компонентов экстрактов тканей зимоспящих животных.

В работе были поставлены следующие задачи:

1) исследовать возможность применения ингибиторов 1-го комплекса дыхательной цепи АДФ-рибозы и ротенона для обратимого торможения работы сердца;

2) изучить эффект АДФ-рибозы на сердце на уровне ткани и органа в сравнении с действием ее предшественников и метаболитов;

3) сравнить кардиотропное действие на изолированное сердце лягушки нуклеотидных фракций, выделенных из мозга сусликов, находящихся в разных физиологических состояниях (летний активный, зимний активный, засыпающий, просыпающийся и гибернирующий);

4) исследовать действие некоторых нуклеотидов и их смесей на изолированное сердце лягушки;

Научная новизна полученных результатов.

В работе впервые было рассмотрено действие АДФ-рибозы на работу изолированного сердца лягушки. Установлено, что АДФ-рибоза обладает прямым действием на изолированное сердце. Ингибиторное действие на изолированное сердце лягушки частично опосредовано Агаденозиновыми рецепторами и изменяется в присутствии изопротеренола. Во второй части работы было показано различие в действии нуклеотидных составляющих суммарных низкомолекулярных фракций, полученных из мозга сусликов, находящихся в разных стадиях гибернации на изолированное сердце лягушки. На примере смеси АМФ+ГМФ установлено изменения кардиотропного действия отдельных нуклеотидных составляющих в присутствии других. Высказано предположение о пептидно-нуклеотидных и нуклеотидно-нуклеотидных взаимодействиях составляющих суммарных фракций из тканей животных-гибернантов.

Теоретическая и практическая значимость работы.

В теоретическом аспекте работа представляет интерес как для расшифровки биологической активности отдельных компонентов низкомолекулярных фракций из тканей животных-гибернантов, так и для понимания механизмов естественного гипобиоза, реализующихся у зимоспящих млекопитающих. Результаты работы могут быть применены в будущем для моделирования состояний искуственного гипобиоза, в криобиологии и медицине.

Апробация работы. Основные результаты работы были представлены на Втором Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва 1995); Международном симпозиуме "Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма" (Санкт-Петербург, 1996); Городской научной конференции молодых ученых (Пущино, 1996); IV международном симпозиум по сравнительной электрокардиологии (Сыктывкар, 1997 г.); II симпозиуме "Физиологические механизмы природных адаптаций" (Санкт-Петербург, 1998); конференции молодых ученых России с международным участием "Фундаментальные науки v прогресс клинической медицины" (Москва, 1998); XXVIth International Congress on Electrocardiology, (Syktyvkar, 1999); Международной

конференции, посвященная 150-летию И.П. Павлова, "Механизмы функционирования висцеральных систем", (Санкт-Петербург 1999); на заседании кафедры физиологии человека и животных Биологического факультета МГУ, 2000.

Структура работы. Диссертация изложена на ///страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, экспериментальной части, обсуждения результатов, выводов, списка цитируемой литературы наименований).

Иллюстрирована 2. таблицами и 3/ рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

В качестве тест-объекта в работе использовали изолированное сердце травяной лягушки {Rana temporaria L.).

Опыты проводили в осенне-зимний период. Всего в работе было использовано 315 самцов травяной лягушки.

Изолированное сердие лягушки в условиях круговой перфузии.

Основное тестирование кардиотропной активности проводили на сердце в условиях круговой перфузии. В качестве перфузионного раствора использовали раствор Рингера для холоднокровных (NaCl- 111 мМ, КС1-1,9 мМ, СаС12-1.7 мМ, NaHC03- 2.4 мМ).

В опытах регистрировали механограмму сокращений предсердия и желудочка отдельно с помощью индукционных механо-электрических преобразователей. Регистрацию параметров сокращения изолированного сердца проводили параллельно с помощью многоканального самописца Н-3030-4 и IBM-486 с использованием многофункциональной программы сбора и обработки данных ADRWIN, разработанной Закаряном A.A., и Киташовым A.B..

Регистрация потенииалов действия различных отделов сердца лягушки методом микроэлектродных отведений.

В отдельной серии экспериментов проводили регистрацию потенциалов действия различных отделов изолированного сердца лягушки. Для этого применяли стандартную микроэлектродную технику и микроэлектроды "плавающего" типа. Сигнал, регистрируемый микроэлектродом, подавался на вход выносного блока предварительного усилителя, согласующего высокое сопротивление датчика с относительно низким сопротивлением усилителя. Входной каскад усилителя постоянного тока (Сухова и др., 1977) собран по схеме истокового повторителя на полевом транзисторе КП ЗОЗ Е.

Ток затвора (ток входной цепи) не превышал 3-610"12 А. Для возможности применения микроэлектродов с широким диапазоном сопротивление усилитель имел поддиапазоны коррекции с взаимным перекрытием i разными пределами RMjnin- R^max, при которых частотная характеристик; имела допустимую неравномерность. Поддиапазоны коррекции быш проградуированны в величинах сопротивления микроэлектродов ] мегаомах (0-15, 15-40, 40-70, 70-150 МОм), Искажение переднего фронт, потенциала действия сердца - менее 1%.Сопротивление электродо] составляло 40-60 МОм.

Регистрацию потенциалов действия производили параллельно с экран! осциллографа посредством фоторегистратора ФОР-2 на фотопленку и < помощью ШМ-486, используя многофункциональную программу сбора ] обработки данных ADRWIN, разработанную Закаряном A.A. и Киташовы» A.B..

Метод выделения кардиоиитов.

Изолированные кардиоциты были получены из предсердия и желудочк сердец травяной (Rana temporaria L.) и озерной (Rana ridibunda Pall, лягушек. Лягушки содержались в холодной комнате при температуре 4°С, за 1-2 недели до начала эксперимента переносили в помещение с комнатно) температурой для адаптации.

Для получения клеток был модифицирован метод Bendukidze соавторами (Bendukidze et al., 1985), основанный на использовании проназ! в качестве протеолитического фермента. Внесенные в эту методик изменения позволили в значительной степени унифицировать выделени кардиомиоцитов из сердец животных разных видов (Alekseev et al., 1994).

Метод перфорированного пэтча.

Эксперименты этой серии были выполнены в лаборатории ионног транспорта ИТЭБ (г. Пущино). Руководитель лаборатории Кокоз Ю.М.. < помощью метода перфорировашюго пэтча были получены устойчивые Ca' токи от изолированных кардиоцитов лягушки, полученных универсальны проназным методом.

При работе методом перфорированного пэтча были использован! растворы следующего состава:

1. (камерный) - 80 мМ NaCl, 20 мМ ТЕА-С1,10 мМ CsCl, 1,2 мМ КН2РО 5 мМ MgCl2,2 мМСаСЬ, 20 мМ глюкозы, 10 мМ HEPES, pH 7,3.

2. (пипеточный) - 130 мМ CsCl, 5 мМ MgCl2,10 мМ HEPES, pH 7,3. Раствор для заполнения пипеток приготовлялся на основе раствора 2 (замена ионов К+ на Cs+ использовалась для блокирования калиевых

токов). Концентрация амфотерицина в пипеточном растворе составляла 150-250 мкг/мл.

Са2+ - природа регистрируемого тока доказывается тем, что Са2+ и Na+ компоненты тока разделены по поддерживаемому потенциалу. О Са2+ -природе этого тока свидетельствует и его чувствительность к дигидропиридинам (Alekscev et al., 1994).

Эксперименты проводили при комнатной температуре (18-20°С). Токи регистрировали при помощи усилителя (СКБ "Биоприбор") и записывали на ЭВМ, используя пакет программ "BioQuest", разработанной Алексеевым А.Е. и Кокозом Ю.М..

Фракции и вещества используемые в работе.

В настоящей работе было проведено тестирование кардиотрогаюй активности на изолированном сердце лягушки нуклеотидных фракций из мозга якутских сусликов (Citellus undulatus L.), находящихся в разных фазах баута. Были расмотрены 5 физиологических состояний: засыпающий, гибернирующий, пробуждающийся, зимний активный и летний активный. Сусликов содержали в условиях вивария. Первые 4 фракции были получены из мозга сусликов в зимний период. За фазой баута наблюдали по изменению ректальной температуры. Фракция из мозга летне-активного суслика получена летом. Работа по получению и очистке фракций была проведена сотрудниками лаборатории Химии пептидов ИБХ РАН им М.М. Шемякина, Ю.А. Овчинникова и включала уксусно-кислую экстракцию, гельфильтрацию, твердо-фазную экстракцию и ВЭЖХ. В работе были также использованы следующие соединения: АДФ-рибоза - аденозиндифосфат рибоза (АДФР) (Sigma); АМФ -аденозин-5 '-монофосфат (Sigma); ГМФ -гуанозин-5'-монофосфат (Boehringer Manheim, Венгрия); НАД^ никотинамидадениндинуклеотид (Reanal); Ротенон (Sigma); Изопротеренол (ISO) (Sigma); ДМСО - диметилсульфоксид (ICN); CGS15943 - селективный антагонист Ai аденозинового рецептора (ISN).

ДМСО служил растворителем для ротенона и CGS15943. В экспериментах с использованием данных соединений контролем служило введение раствора ДМСО.

Статистическая обработка результатов.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием непараметрических методов анализа данных (Гублер и др., 1973): парного критерия Вилкоксона (Т) и Манна-Уитни-Вилкоксона (U) из пакета статистических программ Statistica.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Важную роль в переходе животных из состояния бодрствования в состояние зимней спячки играют процессы, происходящие в митохондриях, являющихся основными потребителями кислорода и производящих большую часть тепла в клетке (Хочачка; Сомеро, 1988). Установлено, что изолированные митохондрии гибернирующих животных имеют значительно сниженную в сравнении с митохондриями бодрствующих животных скорость дыхания во всех метаболических состояниях (Брустовецкий и др1,1987).

АДФ-рибоза и ротенон известны как ингибиторы 1-го компекса дыхательной цепи митохондрий (Марри и др., 1993, Zarova, Vinogradov, 1997). До настоящего времени данные о действии этих веществ на уровне изолированного органа отсутствовали. Первая часть работы была посвящена изучению эффекта АДФ-рибозы и ротенона на сердце лягушки для определения возможности применения АДФ-рибозы и ротенона для обратимого торможения работы сердца.

-10 ■ -20 -30 -

-40 -50 • -60 -70 -

-9 -8 -7 -6 -5 -4 -3 1д[АДФР(М)]

Рис. 1. Зависимость изменения силы и частоты сокращения изолированного сердца лягушки от концентрации АДФ-рибозы в перфузате. По оси абсцисс отложена молярная концентрация АДФ-рибозы, по оси ординат - относительная величина эффекта. Каждая точка является медианой 5-9 опытов.

В экспериментах на изолированном сердце лягушки в условиях круговой перфузии АДФ-рибоза обратимо ингибировала работу изолированного сердца (0,1-100 цМ) (рис.1).

АДФР в концентрации 0,1 цМ вызывала достоверное снижение амплитуды сокращения предсердия на 7,5% (р(Т)<0,03), а достоверное снижение ЧСС

на 5% в концентрации 1 цМ (р(Т)<0,02). В концентрации выше 100 цМ отрицательному инотропному эффекту предшествовал кратковременный положительный инотропный эффект. Положительный и отрицательный инотропные эффекты имеют достоверно различные латентные периоды и времена достижения максимума эффектов (р(Т)<0,05).

2 мин 5 мин 10 мин 15 мин 20 мин 25 мпн 30 мин

ротенон (60 |дМ) ротенон (6 цМ) ротенон (0,6 цМ)

Рис. 2. Относительные изменения силы сокращения предсердия (А), желудочка (Б) и ЧСС (В) изолировшшого сердца лягушки в процентах от исходного уровня при действии ротенона в трех различных концентрациях. По оси абсцисс отложено время в минутах, по оси ординат - относительная величина эффекта. Каждая точка графика является медианой 6-7 экспериментальных значений. * - достоверные различия между действием ротенона (60 цМ) и раствора ДМСО (0,4%); р<0,05; # - достоверные различия между действием ротенона (6 цМ) и раствора ДМСО (0,04%); р<0,05.

Кардиотропное действие АДФ-рибозы сравнивали с эффектом другого ингибитора 1-го комплекса дыхательной цепи митохондрий ротенона. Ротенон - полициклическое соедините, выделенное из некоторых тропических растений. Эффект ротенона на сократительную

активность изолированного сердца тестировали в концентрациях 0,6 , 6 и 60 цМ (рис 2).

Ротенон вызывал необратимое снижение механической и ритмической активности изолированного сердца. В концентрациях 6 цМ, 60 цМ ротенон снижал силу сокращения предсердия (р(Ц)<0.05) к 5 минуте, а частоту и амплитуду сокращений желудочка (р(Ц)<0.05) к 15 минуте после введения в перфузионную систему. Достоверных отличий между действием двух эффективных концентраций ротенона 6 цМ и 60 цМ не наблюдали. Эффект ротенона был длительным и необратимым.

На основании того, что эффект ротенона развивался медленно и был практически необратим, мы сочли данное соединение малоперспективным для обратимого снижения деятельности сердца, и работу продолжали с АДФ-рибозой.

Для выяснения механизма действия АДФ-рибозы была проведена серия экспериментов по исследованию влияния АДФ-рибозы на биоэлектрическую активность изолированного сердца лягушки (рис.3).

I II III

2_/Ч_

I 50 мВ

2-J

50 мВ

Рис. 3. Изменение биоэлектрической активности разных отделов сердца лягушки под действием АДФ-рибозы.

А - схема изменений потенциалов действия венозного синуса (I), предсердий (И) и желудочка (III). 1 - исходная запись, 2 - изменение потенциалов действия соответствующего отдела. Б,В - фрагменты непрерывной записи потенциалов действия венозного синуса (Б) и предсердий (В). 1 - исходная запись, 2,3 -динамика изменений после действия АДФ-рибозы. Калибровка - 50 мВ.

При регистрации биоэлектрической активности клеток венозного синуса (п=10) изолированного сердца лягушки было показано, что АДФ-рибоза в концентрациях 2,5-250' цМ оказывает прямое действие на структуры пейсмекера, вызывая снижение ритма его разрядов. Падение ритма происходило на фоне снижения скорости нарастания медленной диастолической деполяризации (МДЦ) и ускорения реполяризации потенциалов действия клеток пейсмекера. В клетках предсердий АДФ-рибоза (п=10) вызывала существенное ускорение реполяризации и уменьшение общей длительности ПД. При микроэлектродной регастрации биоэлектрической активности миокарда желудочка изменений ПД под действием АДФ-рибозы не возникало. Характер наблюдаемых изменений ПД подразумевает изменение К+ и Са2+ токов в кардиомиоцитах под действием АДФ-рибозы. Однако для выяснения механизмов действия АДФ-рибозы на ионные токи требуются дополнительные исследования.

Сходство химической структуры АДФ-рибозы с соединениями аденозинового ряда, а также феноменология кардиотропных эффектов на изолированном сердце лягушки явились причиной серии экспериментов, в которой была поставлена задача выяснить, не опосредовано ли ингибиторное действие АДФ-рибозы на сердце активацией Ai аденозиновых рецепторов. В работе был использован блокатор At аденозиновых рецепторов (CGS15943). Было показано, что на фоне CGS15943 ингибиторный эффект АДФ-рибозы достоверно снижался (рис.4).

Однако полного блокирования эффекта зарегистрировано не было. Таким образом, эффект АДФ-рибозы, по крайней мере, частично опосредуется аденозиновыми рецепторами. Вместе с тем, отсутствие полного блокирования предполагает наличие и других механизмов действия. Отметим прочие возможные механизмы действия АДФ-рибозы: первое, непосредственное действие АДФ-рибозы на фермент дыхательной цепи митохондрий (Zharova, Vinogradov, 1997); второе, активация 1к(са2+) (Li et al, 1998) третье, АДФ-рибозилирование клеточных субстратов, приводящее к изменению их свойств (Zocchi et al, 1993).

Метаболическим предшественником АДФ-рибозы в организме является НАД*, а метаболитом - АМФ (Guida et al, 1992). Показано наличие ферментов, отвечающих за синтез и утилизацию АДФ-рибозы в том числе в гомогенатах сердечной мышцы (Meszaros et al, 1995). На рисунке 5 представлен фрагмент схемы метаболических связей НАД+ и аденозина.

О -10 -20 -30 -40 -50 -60

5 0

£ -5 < -10 -15 -20

АДФР

предсердие п=9

—I—

—I— 20

—I—

желудочек

—"ж——--

АДФР (14 цМ) з- АДФР (14 цМ) + СвБ 15943 (28 цМ) сов 15943 (28 цМ)

—I— 20

~т— 15

—I—

—I

Рис. 4. Изменение кардиотропного действия АДФР на фоне блокатора А, пуриновых рецепторов. Момент введения веществ обозначен стрелкой. А - относительное изменение амплитуды механической активности предсердия; Б - относительное изменение амплитуды механической активности желудочка; В - относительное изменение ЧСС;

* - достоверные различия между действием АДФР(14 рМ) и АДФР(14 рМ)+Сй515943(28 рМ), р(Ц)<0,05;

& - достоверные различия эффекта АДФР(14 р.М) по отношению к контролю,

Р(Т)<0,05;

# - достоверные различия эффекта АДФР(14 рМ) +СС815943(28 рМ) по отношению к контролю, р(Т)<0,05.

НАД+ 1 —► АДФР 2 - АМФ 3 -> аденозин

Рис. 5. Схема пути деградации НАД* до аденозииа с обозначением ферментов, катализирующих соответствующие реакции.

1 - НАД+-глюкогидролиза; 2 - динуклеотид-пирофосфатаза; 3 - 5'-нуклеотидаза.

Нам представлялось целесообразным оценить прямое действие НАД* и АМФ на изолированное сердце лягушки и сопоставить с эффектами АТФ, АДФ и аденозина на изолированное сердце. На рисунке 6 представлена кривая доза-эффект для трех концентраций НАД*.

-20

-4 0

-60

-80

-100

—•— предсердие —о— желудочек ч С С

-7

-6 -5

18[НАД*(М)]

Рис. 6. Зависимость изменений амплитуды механической активности предсердия, желудочка и частоты сокращений изолированного сердца лягушки от концентрации НАД+ в перфузате. По оси абсцисс отложена молярная концентрация НАД*, по оси ординат - относительная величина эффекта. Каждая точка графика является медианой 7 экспериментальных значений.

Во всех исследованных концентрациях (0,6 рМ, 6 цМ и 60 цМ) НАД* обладал выраженным отрицательным хроно-инотропным эффектом на изолированное сердце лягушки.

В экспериментах на изолированном сердце в условиях круговой перфузии и в условиях регистрации биоэлектрической активности изолированного

сердца лягушки АМФ снижал ритмическую и механическую активность изолированного сердца (Сухова и др., 1998, БозиНпа й а1, 1999).

Таблица 1. Сравнение отрицательных хроно-инотропных эффектов аденозина, АМФ, АДФ-рибозы и НАД* в концентрации 100 цМ.

изменение праметров сокращения изолированного сердца, А%

соединение предсердие желудочек ЧСС

аденозин (п=8) -71,5±6,0 -25,1±11,6 -53,7±13,1

АМФ (п=12) -61,9+8,4 -21,5±3,2 -35,4±6,4 **

АДФ-рибоза (п=9) -54,0±6,8 * -22,3+7,3 -50,0+7,4

НАД+(п=7) -76,0±7,8 * -34,4±12,4 -71,0±9,5 **

* - достоверные различия между действием АДФ-рибозы и НАД+ на амплитуду механической активности предсердия (р(Ц)<0,05)

** - достоверные различия между действием АМФ и НАД" на ЧСС (р(Ц)<0,01) Значения представлены в виде М ± тм, где М - средняя арифметическая, шм _ ошибка средней арифметической.

Несмотря на то, что НАД^, АДФ-рибоза, АМФ и аденозин обладают однонаправленным действием на изолированное сердце (таблица 1), мы предполагаем, что данные вещества обладают самостоятельными эффектами. Это подтверждает наличие у АДФ-рибозы в концентрации 100 цМ кратковременного стимуляторного эффекта на изолированное сердце. Реакции такого рода в случае АМФ, аденозина и НАД4' не наблюдали. Отличается также эффект рассмотренных соединений от действия АТФ и АДФ на изолированное сердце лягушки. АДФ (1 цМ - 100 цМ) обладает положительным ино- и хронотропным эффектом на изолированное сердце лягушки в условиях круговой перфузии. АТФ (0,1 цМ - 20 цМ) -положительным инотропным и отрицательным хронотропным эффектом (Ляшков и др. 1997).

Рассматриваемые пуриновые нуклеотиды были обнаружены как активные компоненты низкомолекулярных фракций из тканей живогных-гибернантов (Негуляев, Сосулина и др., 1996). В настоящей работе было проведено исследование кардиотропного действия нуклеотидных компонентов фракций из тканей животных-гибернантов, отдельных нуклеотидов, а также некоторых смесей нуклеотидов. В работе была протестирована кардиотропная активность нуклеотидных составляющих фракций из мозга якутских сусликов в разных физиологических состояниях: засыпающий, гибернирующий, просыпающийся, зимний активный и летний активный. Ранее было показано, что сумарная фракция из мозга гибернирующего суслика в

концентрации 0,1 мг/мл вызывала остановку изолированного сердца лягушки (Негуляев и др., 1996). Постановка задачи в данной серии экспериментов была обусловлена необходимостью проверить, воспроизводится ли ингибиторный эффект суммарной фракции лишь нуклеотидными компонентами или же для воспроизведения эффекта суммарной фракции необходимо совместное действие пептидов и нуклеотидов. В результате экспериментов было, показано, что нуклеотидные фракции из мозга сусликов, находящихся в разных состояниях, обладали ингибиторным кардиотропным, действием на изолированное сердце лягушки, но выраженность ингибиторного эффекта у разных фракций была не одинакова. Наиболее ярко ингибиторный кардиотропный эффект был выражен у фракции из мозга засыпающего, пробуждающегося и гибернирующего суслика (рис.6).

о -ю -20 -30 -40 -50 -I -60 -70 ->

ПРЕДСЕРДИЕ ЖЕЛУДОЧЕК ЧСС

засыпающий (А) спящий (Б) пробуждающийся (В) зимний активный (Г) летний активный (Д)

Рис.6. Сравнение эффектов нуклеотидных фракций на параметры сокращений изолированного сердца лягушки. Столбцы диаграммы являются медианами семи экспериментальных значений, отражающих изменение амплитуды механической активности предсердия, желудочка и ЧСС при действии соответствующих фракций.

* - р(и)<0.05; * *- р(и)<0.01.

У фракций мозга засыпающего, спящего и пробуждающегося суслика помимо ингибиторного эффекта, развивающегося через минуту после введения фракции в перфузат, был выражен кратковременный

положительный инотропный эффект, развивающийся на первой минуте. Инотропные эффекты на желудочке были менее выражены в сравнении с предсердием. Отрицательный инотропный эффект на желудочке для различных фракций был не одинаков, но обычно не превышал 20%. Таким образом, ни одна из нуклеотидных фракций не воспроизвела мощного эффекта суммарной фракций из мозга гибернирующего суслика. Хроматографический анализ рассматриваемых в работе нуклеотидных фракций, проведенный в ИБХ РАН, выявил изменение состава нуклеотидных фракций. Было определено, что в нуклеотидных фракциях уксусно-кислых экстрактов мозга преобладают два компонента: АМФ и ГМФ, причем наибольшее количество ГМФ было обнаружено в нуклеотидных фракциях мозга сусликов, находящихся в разных стадиях гибернации (засыпающий, гибернирующий, пробуждающийся). Таким образом, начальный положительный инотропный эффект наиболее выражен в тех фракциях, где было обнаружено повышенное содержание ГМФ и соотношение ГМФ:АМФ порядка 1:(1-10), а слабо выраженный отрицательный хроно-инотропный эффект во фракциях летних животных, для которых соотношение ГМФ: АМФ было минимально и по предварительной оценке составляло 1:50.

В следующей серии экспериментов исследовали действие смеси АМФ+ГМФ на изолированное сердце лягушки в сравнении с действием отдельных нуклеотидов. Смесь брали в соотношении 4:1, которое является близким к реальным соотношениям обнаруженным ®о фракциях мозга засыпающего и гибернирующего сусликов. АМФ оказывал отрицательный хронотропный и инотропный эффект на сердце лягушки (рис. 7). ГМФ проявлял положительное инотропное и хронотропное действие на изолированное сердце. Действие смеси было доза-зависимым и достоверно отличалось от действия АМФ по влиянию на ЧСС в двух концентрациях р(11)<0.05.

Таким образом, исследование совместного действия смеси АМФ+ГМФ показало, что данная смесь оказывает выраженное кардиотропное действие на изолированное сердце лягушки. Эффект смеси в ряде случаев достоверно отличается от действия ее отдельных компонентов.

Обобщая изложенные факты, приходим к заключению, что все нуклеотидные составляющие низкомолекулярных пептидных фракций обладают собственными эффектами на сердце и являются потенциальными участниками эффектов суммарных фракций, однако, проявление их активности в сочетании отличается от активности каждого компонента в отдельности и, вероятно, может модулироваться другими составляющими фракции.

А Д%

30 20 10

0 -10 -20 -30 -40 -50 -60 -70

[С], мг/мл

Б Д %

30 20 10 0 -10 -20 -30 -40 -50 -60 -70

[С], мг/мл

Рис. 7. Влияние нуклеотидов па частоту (А) и силу (Б) сокращений изолированного сердца лягушки (Rana temporaria L.). По оси абсцисс отложена концентрация, по оси ординат - относительная величина эффекта. * - p(U)<0.05

Изучение биологической активности веществ из тканей гибернирующих животных, а также агонистов аденозиновых рецепторов во многом зависит от базового Са2+ тока в клетке. Это было подтверждено и в нашей работе в серии экспериментов по регистрации L-типа Са2+ тока изолированных кардиомиоцитов лягушки методом перфорированного пэтча. Эксперименты этой серии были выполнены в лаборатории ионного транспорта Института теоретической и экспериментальной биофизики г. Пущино. Руководитель лаборатории Кокоз Ю.М.

0,0005 0,005 0,01 0,05

1 ш

( щ_ | Щ

ву33 133 ' вЯ®' 81* ■

* к. И ¡"! ' 1

•■г

__Е2 ГМФ __га АМФ 11

1 аАМФ:ГМФ

0,0005 0,005 0,01 0,05 0,05

При исследовании действии АМФ (100 дМ) на амплитуду Ь-типа Са2+ тока изолированного кардиомиоцита предсердия лягушки (п=4) было показано, что АМФ не изменяет Ь-тип Са2+ тока в контроле, но блокирует вызванный изопротеренолом Са2+ ток (рис. 8).

Аналогичные экспериментальные данные были получены и на изолированных кардиоцитах желудочка ля!ушки.

0.1 0 .0 < -0.1 * -0.2 о -0.3 ^ -0.4 -0.5 -0.6 -0.7

Рис. 8. Трассы токов, полученные при деполяризации мембраны от -60 мВ до 0 мВ. 1 - контрольная трасса; 2 - действие изопротсренола; 3 -АМФ снимает действие изопротеренола.

В заключительной части работы действия АДФ-рибозы и АМФ изучали на модели перфузии изолированного сердца лягушки на фоне изопротеренола.

При исследовании совместного действия АДФ-рибозы (14 дМ) и изопротеренола (1 цМ) на изолированном сердце лягушки показано, что ингибиторный хронотропный эффект АДФР на фоне изопротеренола достоверно углубляется с 1 по 10 минуту наблюдения (р<0,05).

Исходный отрицательный инотропный эффект сменяется на положительный инотропный, который достигает 25% для механической активности желудочка и 15% для предсердия. Таким образом, на фоне изопротеренола АДФР вызывала увеличение амплитуды механической активности предсердия и желудочка (рис. 9).

Аналогичные эксперименты были проведены с аденозин-5'-монофосфатом (АМФ). При действии АМФ на фоне изопротеренола (схема опыта и концентрации такие же как в опытах с АДФ-рибозой) наблюдали углубление тормозного действия на частоту сокращений изолированного сердца лягушки. Амплитуда механической активности изолированного сердца лягушки после действия АМФ на фоне

0 100 200 300 400 Время, м с

изопротерепола не снижалась, а возрастала на 20% в случае предсердия и до 40% в случае желудочка.

предсердие

10 15

—О- АДФР (14 цМ)

- АДФР (14 ц М) + ИЗО (1 ц М)

Рис. 9. Изменение эффекта АДФ-рибозы на изолированное сердце лягушки на фоне изопротеренола (сопоставление эффектов), * - р(Ц)<0,05

Итак, в присутствии изопротеренола меняется глубина отрицательного хронотропного эффекта АМФ и АДФ-рибозы на изолированное сердце лягушки, а также знак инотропного эффекта с отрицательного на положительный.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Приведенные в работе данные свидетельствуют о том, что АДФ-рибоза - кардиоактивное соединение, перспективное для обратимого снижения деятельности изолированного сердца и моделирования искусственного гипобиоза. Действие АДФ-рибозы на изолированное сердце реализуется через различные механизмы, один из которых опосредован пуриновыми рецепторами.

В регуляции естественного гипобиоза или гибернации могут принимать участие физиологически активные вещества нуклеотидной природы. Нуклеотидные компоненты низкомолекулярных фракций из тканей животных-гибернантов обладают самостоятельным кардиотропным действием на изолированное сердце лягушки. Активность исследованных соединений (АМФ, ГМФ) и их смесей не воспроизводит эффектов суммарных фракций из тканей гибернирующих животных и изменяется в сочетании с другими биологически-активными веществами.

ВЫВОДЫ.

1. Ингибиторы 1-го комплекса дыхательной цепи (АДФ-рибоза и ротенон) подавляют активность изолированного сердца лягушки. АДФ-рибоза (0,1100 рМ) обратимо ингибирует работу изолированного сердца лягушки. Ротенон (6-60 рМ) вызывает необратимое снижение механической и ритмической активности изолированного сердца.

2. АДФ-рибоза обладает прямым действием на пейсмекер и предсердие, изменяя биоэлектрическую активность вышеуказанных отделов изолированного сердца лягушки. Отрицательный хроно-инотропный эффект АДФ-рибозы частично блокируется антагонистом А1-аденозиновых рецепторов (СвБ 15943). АДФ-рибоза может быть перспективным препаратом для обратимого снижения деятельности сердца.

3. Нуклеотидные компоненты низкомолекулярных фракций из тканей гибернирующих животных обладают собственным прямым действием на механическую и ритмическую активность изолированного сердца лягушки. АМФ подавляет работу изолированного сердца лягушки, ГМФ — стимулирует. Действие смеси нуклеотидов (АМФ+ГМФ) может отличаться от эффектов отдельных компонентов. Отдельные нуклеотидные компоненты, а также их смесь (АМФ+ГМФ) не воспроизводят кардиотропного действия суммарной фракции.

4. При регистрации Са2+ тока L-типа методом перфорированного пэтча показано, что АМФ не уменьшает уровень базального Са2+ тока в изолированных кардиомиоцитах предсердий и желудочка лягушки, но снижает Са2+ ток, предварительно увеличенный действием изопротеренола. В присутствии изопротеренола реакция изолированного сердца лягушки на АДФ-рибозу и АМФ изменяется: отрицательный хронотропный эффект усиливается, отрицательный инотропный эффект меняется на положительный.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Негуляев О.В., Сосулина Л.Ю., Сухова Г.С., Зиганшин Р.Х., Михалева И.И., Ашмарин И.П., Кардиотропное действие компонентов пептидных фракций из мозга гибернирующих сусликов // Нейрохимия, 1995, Т. 12, вып.4, стр. 16-22.

2. Сухова Г.С., Негуляев О.В., Сосулина Л.Ю., Закарян A.A., Михалева И.И., Зиганшин Р.Х., Кардиотропная активность АМФ из пептидных фракций тканей гибернирующих животных // Тез. Докл. II Российского национального конгресса "Человек и лекарство", 10-15 апреля 1995 г., Москва, тезисы докл., стр. 152.

3. Сосулина Л.Ю., Фосфорилирование изменяет свойства Са2+ каналов, Городская научная конференция молодых ученых, 15-17 мая 1996 года, Пущино, тезисы докл., стр. 89.

4. Ашмарин И.П., Закарян A.A., Игнатьев Д.А., Негуляев О.В., Обухова М.Ф., Сосулина Л.Ю., Сухов В.П., Сухова Г.С., Обратимое подавление некоторых физиологических функций в связи с проблемой гипобиоза: эффекты киоторфина и АМФ // Материалы международного симпозиума "Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма", 25-27 ноября, 1996г., стр. 19.

5. Ляшков А.Е., Негуляев О.В., Сосулина Л.Ю., Зиганшин Р.Х., Сухова Г.С., Изучение роли нуклеотидов, входящих в состав низкомолекулярных пептидных фракций (Mr <1кДа, 1-10 кДа), выделенных из тканей летне-активных сусликов (Citellus undulatus), на изолированном сердце лягушки (Rana temporaria) // IV международный симпозиум по сравнительной электрокардиологии, Сыктывкар, 1997 г., тезисы докладов, стр. 101.

6. Сухова Г.С. , Сосулина Л.Ю., Негуляев О.В., Зиганшин Р.Х., Михалева И.И. Об участии 5'-АМФ в кардиотропном действии экстрактов

тканей гибернирующих животных II Ж. эволюц. биох. и физиол., 1998, Т. 34 ,N1, стр. 43-49.

. 7. Сосулина Л.Ю., Ляшков А.Е., Негуляев О.В., Зиганшин Р.Х., Баранник А.П., Сухова Г.С. Поиск новых эндогенных регуляторов, адаптирующих работу сердца у зимоспящих животных // Материалы VIII международного симпозиума "Эколого-физиологические проблемы адаптации", 27-30 января 1998, стр.355-356.

8. Сосулина Л.Ю., Жарова Т.В., Сухова Г.С., АДФ-рибоза регулирует работу сердца лягушки // конференция молодых ученых России с международным участием "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины", 27-30 апреля 1998 г., тезисы докладов стр. 327.

9. Сосулина Л.Ю., Закарян А.А., Жарова Т.В., Сухова Г.С., Ашмарин И.П., Возможность применения ингибиторов 1-го комплекса дыхательной цепи митохондрий для регулирования работы сердца // XVII Съезд физиологов России, Ростов-на-Дону, 1998г., тезисы докладов стр. 54.

10. Ляшков А.Е., Негуляев О.В., Сосулина Л.Ю , Зиганшин Р.Х., Михалева И.И., Сухова Г.С., Кардиотропная активность нуклеотидов, обнаруженных в составе низкомолекулярной пептидной субфракции, полученной из мозга гибернирующих сусликов Citellus undulatus // Ж. эволюц. биох. и физиол., 1999,том 35, N2, стр. 127-131.

11. Сосулина Л.Ю., Сухова Г.С., Чудный М.Н., Ашмарин И.П., Действие АДФ-рибозы на механическую и биоэлектрическую активность сердца лягушки // Российский Физиологический журнал им. И.М. Сеченова, 1999, том. 85, N4, стр. 508-514.

12. Sosulina L.Y., Sukhova G.S., Ashmarin I.P., ADP-ribose alters the mechanical and bioelectrical activity of frog heart // Journal of Hypertension, 1999, 17 (suppl 3): S285.

13. Sosulina L.Y., Lankina D.A., Negoulyaev O.V., Korystova A.F., Kokoz Y.M., Sukhova G.S., Reversible changes in the functional activity of the heart in the presence of adenosine 5'-monophosphate // XXVIth International Congress on Electrocardiology, Syktyvkar 29 June - 3 July, 1999, p.70.

14. Сосулина Л.Ю., Сухова Г.С., Прямое действие АДФ-рибозы на изолированное сердце лягушки и его изменение в присутствии изопротеренола // Международная конференция, посвященная 150-летию

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Сосулина, Людмила Юрьевна

Содержание.

Благодарности.

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Физиологические характеристики зимней спячки как естественного гипобиоза.

1.2. Изучение биологической активности низкомолекулярных пептидных фракций и отдельных составляющих из тканей животных-гибернантов.

1.3. Ингибиторы дыхательной цепи митохондрий как возможные участники изменений, вызываемых гипобиозом.

1.4. АДФ-рибоза: циклическая и нециклическая форма (роль в организме).

1.4.1. Метаболизм и транспорт в клетке АДФР и цАДФР.

1.4.2. Физиологическая роль цАДФР.

1.4.3. Физиологическая роль АДФР.

1.5. Действие аденозина и его производных на миокард.

1.5.1. Аденозиновые рецепторы (структура и функции).

1.5.2. Каналы, регулируемые соединениями аденилового ряда.

2. Материалы и методы.

2.1. Изолированное сердце лягушки в условиях круговой перфузии.

2.2. Регистрация потенциалов действия различных отделов сердца лягушки методом микроэлектродных отведений.

2.2.1. Препаровка изолированного развернутого сердца лягушки.

2.2.2. Микроэлектродная техника.

2.3. Метод выделения кардиоцитов.

2.4. Методика перфорированного пэтча.

2.4.1. Приготовление и заполнение пипеток.

2.4.2. Получение контакта с клеткой.

2.5. Фракции и вещества, используемые в работе.

2.6. Статистическая обработка результатов.

3. Результаты.

3.1. Действие АДФ-рибозы на механическую активность сердца лягушки.

3.2. Изучение эффекта ротенона (ингибитора 1-го комплекса дыхательной цепи) на изолированное сердце лягушки.

3.3. Изменение биоэлектрической актитвности разных отделов сердца лягушки под действием АДФ-рибозы.

3.4. Исследование кардиотропного действия АДФ-рибозы на фоне блокатора А1 пуринового рецептора (СвБ 15943).

3.5. Сравнение эффекта АДФ-рибозы с действием аденозина, АМФ и НАД+ на изолированное сердце.

3.6. Сравнение кардиотропного действия на изолированное сердце лягушки нуклеотидных составляющих фракций из мозга якутских сусликов, находящихся в разных состояниях.

3.7. Кардиотропная активность некоторых нуклеотидов и их смесей, обнаруженных в составе низкомолекулярной пептидной субфракции, полученной из мозга гибернирующих сусликов.

3.8. Изучение действия АМФ на Ь- тип Са2+ тока изолированных кардиоцитов лягушки.

3.9. Изменение кардиотропного действия АДФ-рибозы и АМФ на изолированное сердце лягушки на фоне изопротеренола.

4. Обсуждение результатов.

5. Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Обратимое подавление деятельности сердца в связи с проблемой гипобиоза"

Обратимая, продолжительная остановка сердца или длительное снижение его функции является одной из важных задач кардиохирургии. В настоящее время основным методом снижения работы сердца в медицине является гипотермия (Литасова Е.Е. и др., 1997). Однако применение гипотермии имеет целый ряд ограничений и осложнений. Это связано с тем, что при температуре 29-30 °С у человека слабеют сокращения сердца, падает кровяное давление. При температуре 2527 °С может возникнуть фибрилляция желудочков сердца. При температуре 24-26°С парализуется дыхание. При снижении температуры до 25-22 °С человек, как правило, теряет способность к саморазогреванию (Покровский В.М. и др., 1984, Иванов К.П., 1999). На клеточном уровне гипотермия ведет к энергетическому истощению на фоне кальциевой перегрузки клеток (Hochachka P.W., 1986). У животных-гибернантов, в отличие от других млекопитающих, при снижении температуры до 7 °С сохраняется сосудистая авторегуляция, сердце противостоит фибрилляции и сохраняет способность к сокращению (Burlington R.F., 1989). В этой связи поиск новых средств снижения метаболизма остается по-прежнему актуальным (Тимофеев Н.Н., Прокопьева Л.П., 1997).

В то же время показано, что естественный гипобиоз - гибернация или зимняя спячка контролируется рядом физиологически активных веществ, содержащихся во фракциях из тканей и плазмы крови животных гибернантов (Swan Н. et al, 1977, Зиганшин Р.Х. и др., 1994). Состав этих фракций, обладающих гипометаболическим действием, до конца не изучен. Ранее исследовали эффекты суммарных фракций и их пептидных компонентов (Кокоз Ю.М. и др., 1987, Игнатьев Д.А. и др., 1989, Сухова Г.С. и др., 1990). Роль нуклеотидов и АДФ-рибозы (ингибитора 1-го комплекса дыхательной цепи), обнаруженных в мозге и сердце зимоспящих, в поддержании 6 гипобиоза и в обратимом ингибировании работы сердца не изучена. Выяснение полного состава этого комплекса и механизмов действия отдельных его компонентов имеет значение, как для изучения механизмов гибернации, так и в моделировании искусственного гипобиоза. 7

1.Обзор литературы.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Сосулина, Людмила Юрьевна

5. Выводы:

1. Ингибиторы 1-го комплекса дыхательной цепи (АДФ-рибоза и ротенон) подавляют активность изолированного сердца лягушки. АДФ-рибоза (0,1-100 цМ) обратимо ингибирует работу изолированного сердца лягушки. Ротенон (6-60 цМ) вызывает необратимое снижение механической и ритмической активности изолированного сердца.

2. АДФ-рибоза обладает прямым действием на пейсмекер и предсердие, изменяя биоэлектрическую активность вышеуказанных отделов изолированного сердца лягушки. Отрицательный хроно-инотропный эффект АДФ-рибозы частично блокируется антагонистом А1-аденозиновых рецепторов (Св815943). АДФ-рибоза может быть перспективным препаратом для обратимого снижения деятельности сердца.

3. Нуклеотидные компоненты низкомолекулярных фракций из тканей гибернирующих животных обладают собственным прямым действием на механическую и ритмическую активность изолированного сердца лягушки. АМФ подавляет работу изолированного сердца лягушки, ГМФ - стимулирует. Действие смеси нуклеотидов (АМФ+ГМФ) может отличаться от эффектов отдельных компонентов. Отдельные нуклеотидные компоненты, а также их смесь (АМФ+ГМФ) не воспроизводят кардиотропного действия суммарной фракции.

4. При регистрации Са тока Ь-типа методом перфорированного пэтча показано, что АМФ не уменьшает уровень базального Са тока в изолированных кардиомиоцитах предсердий и желудочка лягушки, но снижает Са2+ ток, предварительно увеличенный действием изопротеренола. В присутствии изопротеренола реакция изолированного сердца лягушки на АДФ-рибозу и АМФ изменяется: отрицательный хронотропный эффект усиливается, отрицательный инотропный эффект меняется на положительный.

Заключение.

Приведенные в работе данные свидетельствуют о том, что АДФ-рибоза -кардиоактивное соединение, перспективное для обратимого снижения деятельности изолированного сердца и моделирования искусственного гипобиоза. Действие АДФ-рибозы на изолированное сердце реализуется через различные механизмы, один из которых опосредован пуриновыми рецепторами.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Сосулина, Людмила Юрьевна, Москва

1. Алабовский В.В., Кобрин В.И., Участие митохондрий в регуляции трансмембранного тока кальция внутрь клеток миокарда, Успехи Физиол Наук, т. 16, N1, стр. 3-20, 1985.

2. Алипов H.H., Пейсмекерные клетки сердца: электрическая активность и влияние вегетативных нейромедиаторов, Успехи физиологических наук, т. 24, N2, стр.37-69, 1993.

3. Алламуратов Ш.И., Энергетический обмен тепло- и холоднокровных организмов при различных гипометаболических состояниях, Автор. Док. Дис., Ташкент, стр.41, 1999.

4. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж., К., Молекулярная биология клетки, Москва, " Мир т. 2, стр. 353-371, 1992.

5. Ахременко А.К., Ануфриев А.И., Софронова В.Е., Николаева Р.Н., Соломонов Н.Г., Влияние фракции (1-10 кДа) из мозга бурого медведя (Ursus arctos) на температуру тела и метаболизм белых мышей, Докл. Акад. Наук, т. 336, N6, стр. 838-839, 1994.

6. Белоусов А.Б., Роль центральной нервной системы в контроле зимней спячки, Успехи физиологических наук, т.24, N 2, стр. 109-127, 1993.

7. Большой практикум по физиологии человека и животных: Учебн. пособие для вузов по спец. "Биология", Баскова И.П., Ипполитова Г.С., Келарева И.А. и др., под ред. Кудряшова, Москва, Высшая школа, стр. 188-198, 1984.97

8. Брустовецкий H.H., Амерханов З.Г., Гришина Е.В., Маевский Е.И., Влияние токсичности среды на скорость дыхание и окислительное фосфорилирование в митохондриях печени активных и гибернирующих сусликов, Биохимия, т. 55, вып.2, стр. 201-209, 1990.

9. Брустовецкий H.H., Амерханов З.Г., Ингибирование транспорта сукцината, ß-оксибутирата и глутамата в митохондрии печени гибернирующих сусликов, Ж эволюц биохим физиол, т. 25, N6, стр. 718-723, 1989.

10. Брустовецкий H.H., Егорова М.В., Маевский Е.И., Окислительная активность и митохондрий печени активных и гибернирующих сусликов при различных условиях инкубации, Биохимия, т. 56, вып 8, стр. 1522-1527, 1991.

11. Брустовецкий H.H., Маевский Е.И., Гогвадзе В.Г., Возможные биохимические механизмы подавления окислительного метаболизма у зимоспящих животных, Механизмы зимней спячки, Пущино, стр. 32-39, 1987.

12. Винокуров В.Н., Ахременко А.К., Популяционная экология длиннохвостых сусликов Якутии. Якутск: Изд-во Якутского филиала СО АН СССР, 164 стр., 1982.

13. Гублер Е.В., Генкин A.A., Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях, Ленинград, "Медицина", 142 стр., 1973.

14. Денков В., На грани жизни, "Знание", Москва, 192 стр., 1988.

15. Евдокимов В.В., Елисеева Н.Р., Лукьянова И.И., Влияние 5'-ГМФ и инозина на изолированное сердце лягушки, Физиол. Ж. СССР им Сеченова, т. 72, N6, стр. 763766, 1986.

16. Жегунов Г.Ф., Роль сердца в разогреве тела зимоспящих при пробуждении, Физ. Ж. им Сеч., т. LXXV, N1, стр. 105-109, 1989.

17. Жегунов Г.Ф., Электрофизиологические характеристики функционирования сердца и интенсивность синтеза белков кардиоцитов при пробуждении сусликов от зимней спячки, Ж. Эволюц. Биохим. и Физиол., т. XXIV, N1, 40-47, 1988.99

18. Жегунов Г.Ф., Электрофизиологические характеристики функционирования сердца сусликов Ciellus undulatus в процессе пробуждения от зимней спячки, Криобиология, N1, стр. 31-34, 1986.

19. Иванов К.П., Можно ли восстановить функции нервной системы млекопитающих при глубоком охлаждении без отогревания? Новые факты и эволюция взглядов, Успехи физиолог. Наук, т. 30, N 1, стр. 73-89, 1999.

20. Игнатьев Д.А., Загнойко В.И., Сухова Г.С., Баканева В.Ф., Сухов В.П., К вопросу о биологически активных веществах в тканях зимоспящих, Журнал общей биологии, т. 56, N4, стр. 450-469, 1995.

21. Игнатьев Д.А., Колаева С.Г., Михалева И.И., Крамарова Л.И., Свиряев В.И., Полькина О.В., Результаты тестирования некоторых биологически активных фракций, выделенных из тканей зимоспящих, Механизмы зимней спячки, Пущино, стр. 106-118, 1987.

22. Игнатьев Д. А., О некоторых особенностях терморегуляции зимнеспящих. Возможность вызова состояния торпидности у гомеотермов, Эколого-физиологические характеристики природных гипометаболических состояний, Пущино, т.2, стр. 101-115, 1992.100

23. Игнатьев Д.А., Сухова Г.С., Сухов В.П., Анализ изменений частоты сердцебиений и температуры суслика Citellus undulatus в различных физиологических состояниях, Ж. общей биологии (в печати).

24. Калабухов Н.И., Спячка млекопитающих, Москва: Наука, 154 стр., 1985.

25. Литасова Е.Е., Власов Ю.А., Окунева Г.Н., Караськов A.M., Ломиворотов В.Н., Клиническая физиология искуственной гипотермии, Новосибирск: Наука, Сиб предприятие РАН, 565 стр., 1997.

26. Маркевич Н.И., Корыстова А.Ф., Гриченко A.C., Панкина Д.А., Кокоз Ю.М., Регуляция Са2+ -токов L-типа в кардиоцитах крысы, Биол. мембраны, т. 17, N1, стр. 88-101,2000.

27. Марри Р., Греннер Д., Родуэлл В., Биохимия человека, Изд-во "Мир", т. 1, стр. 127139, 1993.

28. Негуляев О.В., Сосулина Л.Ю., Сухова Г.С., Зиганшин Р.Х., Михалева И.И., Ашмарин И.П. Кардиотропное действие компонентов пептидных фракций из мозга гибернирующих сусликов, Нейрохимия, т. 12, N4, стр. 12-16, 1995.

29. Пастухов Ю.Ф., Невретдинова З.Г., Словиков Б.И., Годовой бюджет активности и энерготрат у зимоспящих млекопитающих, Докл. Акад. Наук СССР, т. 305, N5, стр. 1270-1273, 1989.

30. Покровский В.М., Шейх-Заде Ю.Р., Воверейт В.В., Сердце при гипотермии, Ленинград, "Наука", 1984.

31. Соколов В.Е., Сухов В.П., Сухова Г.С., Игнатьев Д.А., Суточные и сезонные изменения температуры и сердечного ритма длиннохвостого суслика, Citellus undulatus, Доклады Академии Наук, т. 344, N2, стр.282-286, 1995.

32. Сухова Г.С., Андреева Н.В., Чудаков Л.И., Каусер Сайд. Исследование биоэлектрической активности и автоматических свойств различных отделов двухкамерного сердца. Физиол. журн. СССР, т.63, N1, стр.86-93, 1977.102

33. Сухова Г.С., Игнатьев Д.А., Ахременко А.К., Левашова В.Г., Михалева И.И., Свиряев

34. Сухова Г.С., Левашова В.Г., Крамарова Л.И., Свиряев В.И., Зиганшин Р.Х., Колаева

35. C.Г., Михалева И.И., Повзун A.A., Кардиотропная активность пептидных препаратов из тканей гибернирующих сусликов, Доклады Академии наук СССР, т. 307, N 6, стр. 1512-1514,1989.

36. Сухова Г.С., Сосулина Л.Ю., Негуляев О.В., Зиганшин Р.Х., Михалева И.И., Об участии 5'-АМФ в кардиотропном действии экстрактов тканей гибернирующих животных, Журнал Эволюц. Биохим. Физиол., т. 34, N1, стр. 43-49, 1998.

37. Тимофеев H.H., Прокопьева Л.П., Нейрохимия гипобиоза и пределы криорезистентности организма, Москва, "Медицина", 208 стр., 1997.

38. Ткачук В.А., Мембранные рецепторы и внутриклеточный кальций, Биолог. Мембраны, т. 16, N2, стр. 212-229, 1999.

39. Ткачук В.А., Рецепторы и внутриклеточный кальций, М. Наука, стр. 20-24, 1994.

40. Физиология и патофизиология сердца, под. ред. Сперелакиса Н., Москва, "Медицина", т. 2, стр. 128-143, 1988.

41. Хочачка П., Сомеро Дж., Биохимическая адаптация, Москва: Мир, 568 стр., 1988.

42. Шейхон Ф.Д., Влияние аденозинтрифосфата и продуктов его распада на изолированное сердце лягушки, Доклады Академии Наук СССР, том LX, N 7, стр. 4042, 1948.103

43. Шмидт-Нильсен К., Физиология животных, Приспособление и среда, т. 1, Москва, Мир, стр. 412-416,1982.

44. Штарк М.Б., Мозг зимоспящих, Новосибирск, Наука, 240 стр., 1970.

45. Шугалей B.C., Шортанова Т.Х., Самойлик Н.И., Головина Т.Н., Некоторые показатели азотистого обмена и интенсивность спонтанного перекисного окисления в тканях зимоспящих сусликов, Криобиология, N1, стр. 43-45, 1988.

46. Эмирбеков Э.З., Львова С.П., Энергетический метаболизм при гибернации у представителей разных филогенетических групп, Успехи физиологических наук, т. 22, N 1, стр.97-111, 1991.

47. Alekseev А.Е., Markevich N.I., Korystova A.F., Lankina D.A., Kokoz Y.M., The kinetic characteristics of the L-type calcium channels in cardiocytes of hibernators. 1/ Development of a kinetic model. Membr Cell Biol, ll(l):31-44, 1997.

48. Alekseev A.E., Korystova A.F., Mavlyutova D.A., Kokoz Y.M., Potential-dependent Ca2+ currents in isolated heart cells of hibernators, Biochem Mil Biol Int, 33(2):365-375, 1994.

49. Alivisators S.G.A., Denstedt O.F., Lactic dehydrogenase and DPN-ase activity of blood, Sciense, 114: 281-283, 1951.

50. Alvarez L., Mongo K., Seamps F., Vassort G., Effect of purinergic stimulation on the Ca2+ current in single frog cardiac cells, Pflugers Arch, 416:189-195, 1990.

51. Bean B.P., Pharmacology and electrophysiology of ATP-activated ion channels, Trends Pharmacol Sci, 13:87-90, 1992.

52. Belardinelly L., Giles W.R., West A., Ionic mechanisms of adenosine actions in pacemaker cells from rabbit heart, Journal of physiology, 405:615-633, 1988.104

53. Belardinelly L., Isenberg G., Actions of adenosine and isoproterenil on isolated mammalian ventricular myocytes, Cure Res, 53(3):287-297, 1983.

54. Belardinelly L., Isenberg G., Isolated atrial myocytes: adenosine and acetilcholine increase potassium conductance, Am. J. Physiol., 244:H734-H737, 1983.

55. Bendukidze Z., Isenberg G., Klockner U., Ca-tilerant guinea-pig ventricular myocytes as isolated by pronase in the presence of 250 microM free calcium, Basic Res Cardiol, 80 Suppll: 13-17, 1985.

56. Blishchenko E.Yu., Mernenko O.A., Yatskin O.N., Ziganshin R.H., Philippova M.M., Karelin A.A., Ivanov V.T., Neokyotorphin and neokyotorphin (1-4): cytolytic activity and comparative levels in rat tissues,, Biochem Biophys Res Com, 224: 721-727, 1996.

57. Bunger R., Haddy F. J., Gerlach E., Coronary responses to dilating substances and competitive inhibition by theophylline in the isolated perfused guinea pig heart, Pflugers Arch, 358:213-224, 1975.

58. Burlington R.F., Darvish A., Low temperature performance of isolated working hearts from a hibernator and nonhibernator, Physiol Zool, 61(5):387-395, 1988.

59. Burlington R.F., Milson W.K., The cardiovascular system in hybernating mammals: recent advances, Living in the cold, pp. 235-243, 1989.

60. Burnstock G., Receptors and recognition. Purinergic receptors, Chapman and Hall, vol.12, series B, pp. 121-158, 1981.105

61. Clapper D.L., Walseth T.F., Dargie P.J., Lee H.C., Pyridine nucleotide metabolites stimulate calcium release from sea urchin egg microsomes desensitized to inositol triphosphate. J Biol Chem, 262:9561-9568, 1987.

62. Daval J-L., Nehlig A., Nicolas F., Physiological and pharmacological properties of adenosine: therapeutic implications, Life Sciences, 49:1435-1453, 1991.

63. Davies N.W., Standen N.B., Stanfield P.R., ATP dependent potassium channels of muscle cells: their properties, regulation, and possible functions, J Bioenerg Biomembr 23: 509535,1991.

64. De Flora A. Guida L., Franco L., Zocchi E., Pestarino M., Usai C., Marchetti C., Fedele E., Fontana G., Raiteri M., Ectocellular in vitro and in vivo metabolism of cADPR in cerebelum, Biochem J, 320:665-672, 1996,

65. De Wolf, M.J.S. Van Dessel, Lagrou G.A.F., Hilderson A.R., H.J.J, and W.S.H. Dierick, Topography, purification and characterization of thyroidal NAD+ glycohydrolase, Biochem J, 226:415-427, 1985.

66. Delbro D., Burnstock G., Depressor and pressor actions of purine nucleosides and nucleotides in the anaesthetized rat, Acta Physiol Scand, 130: 373-380, 1987.

67. Di Francesco D., A new interpretation of the pacemaker current in calf Purkinie fibres, J Physiol, 314: 359-376,1981.106

68. Di Francesco D., Ferroni A., Mazzanti M., Tromba C., Properties of the hyperpolarization-activated current (If) in cells isolated from the rabbit sinoatrial node, J Physiol, 377: 61-88, 1986.

69. Dixon M., Webb E.C., Enzymes, 3 rd Edn, New York, pp.470-477, 1979.

70. Drury A.N., Szent-Gyorgyi A., The physiological activity of adenine compounds with especial reference to their action upon the mammalian heart, J Physiol (Lond), 68: 213-237, 1929.

71. Enero M. A., Saidman, B.Q., Possible feed-back inhibition of noradrenaline release by purine compounds, Naunyn Schmiederberg's Arch. Pharmacol., 297:39-46, 1977.

72. Fishmeister R., Hartzell H.C., Cyclic AMP phosphodiesteraces on Ca2+ current regulation in cardiac cells, Life Sciens., 48:2365-2376, 1991.

73. Fredholm B.B., Abbraecchio M.P., Daly J.W. et al, Nomenclature and classification of purinoceptors, Pharmacol. Rev., 46(2): 143-156, 1994.

74. Friel D.D., Bean B.P., Two ATP-activated conductances in bulfrog atrial cells, J Gen Physiol, 91(1): 1-27, 1988.

75. Fruen B.R., Mickelson J.R., Shomer N.H., Velez P., Louis C.F., Cyclic ADP-ribose does not affect cardiec or skeletal muscle ryanodine receptors, FEBS Letters, 352: 123-126, 1994.

76. Fukami J.I., Yamamoto I., Casida J.E., Metabolism of rotenone in vitro by tissue homogenates from mammels and insects, Science, 155: 713-716, 1967.

77. Genazzani A.A., Bak J., Galion A., Inhibition of cADPR-hydrolase by ADP-ribose potentiates cADPR synthesis from p-NAD+, Biochemical and Biophysical Research Communications, 223:502-507 , 1996.

78. Gerlach E., Deuticke B., Comparative studies on the formation of adenosine in the myocardium of different animal species in oxygen deficiency, Klin Wochenschr, 44:22, 1307-1310, 1966.

79. Goto M., Yatani A., Tsuba Y., Effects of ATP on the membrane currents and tension components of bullfrog atrial muscle, J Physiol Soc Jpn, 38:503-506, 1976.

80. Guida L., Zocchi E., Franco L., Benstti U., De Flora A., Presence and turnover of adenosine diphosphate ribose in human erythrocytes, Biochem Biophys Res Com, 188(1): 402-408, 1992.108

81. Guo X., Laflamme M.A., Becker P.L., Cyclic ADP-ribose does not regulate sarcoplasmic reticulum Ca2+ release in intact cardiac myocytes, Circ Res, 79: 147-151,1996.

82. Gupta, R.C., Neumann, J., Durant, P., Watanabe, A.M., Al-adenosine receptor mediated inhibition of isoproterenol-stimulated protein phosphorylation in ventricular myocytes. Evidence against a cAMP-dependent effect, Circ Res, 72:65-74, 1993.

83. Hagiwara N., Irisawa H., Kameyama M., Contribution of two types of calcium currents to the pacemaker potential of rabbit sinoatrial node cells. J Physiol. 395: 233-253, 1988.

84. Hamil O.P., Marty A., Neher E., Sakman E., Sigworth F., Improved patch-clamp technigues for high-resolution current recording from cell free membrane patches, Pflugers Arch., 391:85-100, 1981.

85. Hartzell H.C., Adenosine receptors in frog sinus venosus: slow inhibitory potentials produced by adenosine and compaunds and acetylcholine, J. Physiol. Lond., 293:23-49, 1979.

86. Hartzell H.C., Fishmeister R., Opposite effects of cyclic GMP and cyclic AMP on Ca2+ current in single heart cell, Nature, 323:273-295, 1986.

87. Hartzell H.C., Hirayama Y., Petit-Jacgues J., Effects of protein phosphatase and kinase inhibitors on the cardiac L-type Ca current suggest two sites are phosphorylated by protein kinase A and another protein kinase, J Gen Physiol, 106(3):393-414, 1995.

88. Hedqvist P., Fredholm B.B., Effects of adenosine on adrenergic neurotransmision; Prejunctional inhibition and postjunctional enhancement, Naunyn Schmiederberg's Arch. Pharmacol, 293:217-223,1976.

89. Hochachka P.W., Defense atrategies against hypoxia and hypithermia, Science, 231: 234241, 1986.109

90. Horn R., Diffusion of nistatin in plasma membrane is inhibited by a glass membrane seal, Biophis J, 60:329-333, 1991.

91. Horn R., Marty A., Muscarinic activation of ionic current measured by a new whole-cell recording method, J Gen Physiol, 92:145-159, 1988.

92. Jovanovic A. Alekseev A.E., Terzic A., Cardiac ATP-sensitive K+ channel: a target for diadenosine 5',5"-Pl,P5-pentaphosphate, Naunyn-Schmiedeberg's Arch Pharmacol, 353:241-244, 1996.

93. Kim U-H., Han M-K., Park B-H., Kim H-R., An N-H., Function of NADglycohydrolase in ADP-ribose uptake from NAD by human erythrocytes, Biochemica et Biophysica Acta, 1178: 121-126, 1993.

94. Kokoz Yu.M., Grichenko A.S., Korystova A.F., Lankina D.A., Markevich N.I., Effect of isoproterenol on the L-type Ca2+ current in cardiac cells from rats and hybernating ground squirrels, Biosci Rep ,19(1): 17-25, 1999.

95. Kumar R., Adenosine and charbochol are not eguivalent in their effects on L-type calcium current in rabbit ventricular cells, J Mol Cell Cardiol, 23: 403-415, 1996.

96. Magenknecht B., Lieberman M., Adenine nucleotide degradation in cultured chick heart muscle cells, Mol Cel Biochem, 107: 119-125, 1991.1.l

97. McDonald T.F., S. Pelzer, W. Trautwein and D. J. Pelzer. Regulation and modulation of calcium channels in cardiac, sceletal and smooth muscle cells. Physiol. Rev, 74:365-507, 1994.

98. Meszaros L.G., Bak J., Chu A., Cyclic ADP-ribose as an endogenous regulator of the non-skeletal type ryanodine receptor Ca2+ channel, Nature, 364: 76-79, 1993.

99. Meszaros V., Socci R., Meszaros L.G., The kinetics of cyclic ADP-ribose formation in heart muscle, Biochemical and Biophysical Research Communications, 210(2): 452-456, 1995.

100. Moss J., Vaughan M., ADP-rybosylating toxins and G-proteins, American Society for Microbiology, Washington, D.C., 1990.

101. Neher E., Sakman B., Single channel currents recorded from membranes of denervated frog muscle fibres, Nature, 260:779-802, 1976.

102. Nemoto E., Yu Y., Dennert G., Cell surface ADP-ribosyltransferase regulates lymphocyte function-associated molecule-1 (LFA-1) function in T cells, J Immunol, 157:8, 3341-3349, 1996.

103. Okazaki I.J., Kim H.J., Moss J., Cloning and characterization of a novel membrane -associated lymphocyte NAD:arginine ADF-ribosyltransferase, J Biol Chem, 271(36): 22052-7, 1996.

104. Okazaki I.J., Moss J., Mono-ADP-ribosylation: a reversible posttranslational modification of proteins, Adv Pharmacol 35: 247-280,1996.112

105. Panfoli I., Burlando B., Viarengo A., Cyclic ADP-ribose-dependent Ca2+ release is modulated by free Ca2+ in the scallop sarcoplasmic reticulum, Biochem Biophys Res Com, 257: 57-62, 1999.

106. Pekala P.H., Anderson B.M., Studies of bovine erythrocyte NAD glycohydrolase, J Biol Chem, 253: 7453-7459, 1978.

107. Ralevic V., Burnstock G, Receptors for purines and pyrimidines, Pharmacol Rev, 50(3): 413-492, 1998.

108. Renter H., Scholz H., The regulation of the calcium conductance of cardiac muscle by adrenaline, J. Physiol. Lond., 264: 49-62, 1977.

109. Rosemary A.T., Rubio R., Berne R.M., Comparison of the adenine nucleotide metabolism of dog atrial and ventricular myocardium, J Mol Cell Cardiol, 7:115-123,1975.

110. Sah P., Ca -activated K currents in neurones: types, physiological roles and modulation.Trends Neurosci, 19: 150-154, 1996.

111. Schrader J., Baumann G., Gerlach E., Adenosine as inhibitor of myocardial effects of catecholamines, Pflugers Arch, 372:29-35, 1977.113

112. Schrader J., Rubio R., Berne R.M., Inhibition of slow action potentials of guinea pig atrial muscle by adenosine: A possible effect on

113. Ca influx, J. Mol. Cel., Cardiol., 7: 427-433,1975.

114. Sethi J.K. Empson R.M., Galione A., Nicotinamide inhibits cyclic ADP-ribose-mediated calcium signalling in sea urchin eggs, Biochem J, 319: 613-617, 1996.

115. Simmons M.A., Hartzell H.C., Role of phosphodiesterase in regulation of calcium current in isolated cardiac myocytes,Mol Pharmacol, 33:664-671, 1988.

116. Sitsapesan R., McGarry S.J., Williams A.J., Cyclic ADP-ribose competes with ATP for the adenine nucleotide binding site on the cardiac ryanodine receptor Ca2+ -release channel, Circ Res, 75:596-600, 1994.

117. Sperelakis N., Schneider J., A metabolic control mechanism for calcium ion influx that may protect the ventricular myocardial cell, Am. J.Cardiol., 37: 1079-1085,1976.

118. Spruce A.E., Standen N.B., Stanfield P.R., Studies of the unitary properties of adenosines'-triphosphate-regulated potassium channels of frog skeletal muscle, J Physiol Lond, 382: 213-236, 1987.

119. Srinivas M., Shryock J.C., Dennis D.M., Baker S.P., Belardinelli L., Differential A1 adenosine receptor reserve for two actions of adenosine on guinea pig atrial myocytes, Mol Pharm, 52:683-691, 1997.

120. Swan H., Becker P.L., Schatte C.L., Physiologic effects of brain extracts from hibernating and non-hibernating rodents on isolated perfused rat heart, Comp Biochem Physiol, 68C:2 175-179, 1981.

121. Swan H., Jenkins D., Knox K., Anti-metabolic extract from the brain of Protopterus aethiopicus, Nature, 217: 671, 1968.114

122. Swan H., Schatte C.L., Antimetabolic extract from the brain of the hibernating ground sguirrel Citellus tridecemlineatus, Science, 195: 84-85, 1977.

123. Teixeira J.R.M., Lapa A.J., Caden Souccar, Valle J.R., Timbos: ichthyotoxic plants used by Brazilian Indias, Journal of Ethnopharmacology, 10: 311-318, 1984.

124. Terzic A., Jahangir A., Kurachi Y., Cardiac ATP-sensetive K+ channels: regulation by intracellular nucleotides and K+ channel-opening drugs, Am. J. Physiol., 269(3Ptl): 525-45, 1995.

125. Thüringer D., Lauribe P., Escande D., A hyperpolarization-activated current in human myocardial cells, J Mol Cell Cardiol, 24: 451-455, 1992.

126. Tsein R.W., Bean B.P., Hess P., Lansman J.B., Nilius B., Nowycky M.C., Mechanism of calcium channel modulation by ß-adrenergic agents and digidropyridine calcium agonist, J Mol Cell Cardiol, 18:691-710, 1986.

127. Tsein R.W., Cyclic AMP and contractile activity in heart, Adv Cyclic Nucleotide Res, 8:363-420, 1977.

128. Tsien R. W., Adrenaline like effects of intracellular ionophoresis of cyclic AMP in cardiac Purkinje fibres, Nature New Biol., 245: 120-121, 1973.

129. Tsuyama S., Inoe Y., Tanaka M., ADP-ribosylated actin as part of the actin monomer pool in rat brain, Int J Biochem Cell Biol, 29(2): 293-301, 1997.115

130. Tuganowski W., Tarnowski W., Gorzyca J., Salabin S., Effect of adenosine on electrical activity in guinea pig atrium, Pol. J. Pharmacol. Pharm., 32: 725-729, 1980.

131. Vergara C., Latorre R., Marrion N.V., Adelman J.P., Calcium-activated potassium channels, Current Opinion in Neurobiology , 8:321-329, 1998.

132. Verhaege R. H., Vanhoute P. M.,Shephard J. T., Inhibition of sympathetic neurotransmition in canine blood vessels by adenine and adenine nucleotides, Circulation Res., 40: 208-215, 1977.

133. Westfall T. H., Hunter P. E., Effects of muscarinic agonist on the release of 3H.noradrenaline erom the guinea-pig perfused heart, J. Pharm. Pharmacol., 26: 458-460, 1974.

134. Wojtczak L., Schonfeld P., Effect of fatty acids on energy coupling processes in mitochondria, Biochem Biophys Acta, 1183(1): 41-57, 1993.

135. Zaza A., Rocchetti M., Di Francesco D., Modulation of the hyperpolarization-activated current (if) by adenosine in rabbit sinoatrial myocytes, Circulation, 94: 734-741, 1996.

136. Zharova T.V., Vinogradov A.D., A competitive inhibition of the mitochondrial NADH-ubiguinone oxidoreductase (Complex I) by ADP-ribose, Biochem et Biophysica Acta, 1320: 256-264, 1997.

137. Zhou H., Huiatt T.W., Robson R.M., Sernet S.W., Graves D.J., Characterization of ADP-ribosylation sites on desmin and restoration of desmin intermediat filament assembly by de-ADP-rybosylation, Arch Biochem Biophys, 334(2): 214-222, 1996.116

138. Zocchi E., Guida L., Franco L., Silvestro L., Guerrini M., Benatti U., De Flora A., Free ADP-ribose in human erythrocytes: pathways of intra-erythrocytic conversion and non-enzymic binding to membrane proteins, Biochem J, 295: 121-130, 1993.

139. Zolkiewska A., Moss J., Integrin alpha 7 as substrate for a glycosylphosphatidylinositol-anchored ADP-rybosyltransferase on the surface of skeletal muscle cells, J Biol Chem, 268:34, 25273-25276, 1993.117

140. Список используемых сокращений.1. Ado аденозин

141. АДФ (ADP) аденозин-5'-дифосфат

142. АДФ-рибоза (АДФР) аденозиндифосфатрибоза

143. АМФ (AMP) аденозин-5'-монофосфат

144. АТФ (АТР) аденозин-5'-трифосфат

145. ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография

146. ГДФ (GDP) гуанозин-5'-дифосфат

147. ГМФ (GMP) -гуанозин-5'-монофосфат

148. ГТФ (GTP) гуанозин-5'-трифосфат1. ИЗО (ISO) изопротеренол

149. ИТФ (ITP) инозин -5'-трифосфат

150. НАД+ (НАДН) никотинамидадениндинуклеотид1. ПД потенциал действия

151. CP саркоплазматический ретикулум

152. УДФ (UDP) уридин-5'-дифосфат

153. УТФ (UTP) уридин-5'-трифосфатцАДФР циклическая аденозиндифосфатрибозацАМФ (сАМР) циклический аденозин-5'-монофосфат

154. ЦТФ (СТР) цитидин-5'-трифосфат

155. ЧСС частота сердечных сокращений

156. ЯМР ядерный магнитный резонанс

Информация о работе

Сосулина, Людмила Юрьевна
кандидата биологических наук
Москва, 2000
ВАК 03.00.13

Диссертация

Обратимое подавление деятельности сердца в связи с проблемой гипобиоза - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы