Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

ОБОСНОВАНИЕ И УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР БОРЬБЫ С ВИРУСНЫМИ БОЛЕЗНЯМИ ЗЕМЛЯНИКИ

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "ОБОСНОВАНИЕ И УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР БОРЬБЫ С ВИРУСНЫМИ БОЛЕЗНЯМИ ЗЕМЛЯНИКИ"

Я--.28449

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРОПРОМЫШЛЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

МОСКОВСКАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ имени К. А, ТИМИРЯЗЕВА

На правах рукописи БЕЛОШАПКИНА Ольга Олеговна

УДК 632.934.3: 632.38 : 634.78

ОБОСНОВАНИЕ И УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР БОРЬБЫ С ВИРУСНЫМИ БОЛЕЗНЯМИ ЗЕМЛЯНИКИ

Специальность: 06.01 Л1—защита растений от вредителей и болезней

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА —1988

Леаг^М^с^сР^ — ¿¿¿¡леу/ж^ ¿-с ¿Ф'- Ог^^сгс,

■2 г- у " (У-

Работа выполнена в лаборатории плодоводства Московской ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени сельскохозяйственной академии имени К- А. Тимирязева.

Научный руководитель —кандидат биологических наук, доцент В, А, Шмыгля.

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук, профессор Ю. И. Помазков,- кандидат биологических наук, доцент А. Ф. Константинова.

Ведущее предприятие — Научно-исследовательский зональный институт садоводства Нечерноземной полосы.

Защита диссертации состоится « 9 » 1989 г.

в ./Г час. 99. мин. на заседании Специализированного совета К-120.35.03 в Московской сельскохозяйственной академии имени К. А. Тимирязева.

Адрес: 127550, Москва И-550, ул. Тимирязевская, 49, Ученый Совет ТСХА,

С диссертацией можно ознакомиться в 1ДНБ ТСХА.

Автореферат разослан ¿Ь.&^Р?. . . 1г.

"Ученый секретарь Специализированного совета —

доцент —Ти-- л Н. К. Торянская

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Большое значение в решении задачи увеличения валового сбора земляники имеет сокращение ущерба, вызываемого различными вредителями и болезнями, в частности вирусными. Это во многом определяется тем, как решается проблема выращивания оздоровленного посадочного материала. Основой методики получения безвирусного посадочного материала земляники в настоящее время является сочетание термотерапии и культуры верхушечных меристем, требующее значительных затрат труда и денежных средств, при этом не всегда обеспечивается их высокая эффективность. Поэтому актуальной задачей остается совершенствование методики оздоровления растений земляники от вирусных болезней.

Не менее важной является проблема диагностики вирусных заболеваний земляники, позволяющая выявлять и выбраковывать пораженные вирусами растения и идентифицировать возбудителей вирусных заболеваний. Необходимы исследования в области снижения трудоемкости, повышения достоверности результатов и сокращения сроков тестирования.

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований было изучение вредоносности основных вирусных заболеваний земляники в Нечерноземной зоне РСФСР, совершенствование элементов методики оздоровления земляники в культуре апексов к тестирования растений на вирусную инфекцию. В связи с этим решались следующие задачи:

1. Изучение видового состава вирусов и вызываемых ими болезней земляники в Московской области.

2. Определение вредоносности вирусного комплекса морщинистости и крапчатости земляники.

3. Испытание химиотерапии при оздоровлении земляники от вирусов методом культуры апексов,

4. Совершенствование методики тестирования исходных растений земляники на отсутствие вирусных инфекций.

1

Й-79Ш

¡1 : і^і^ьная

¿¿Ль.МХ 'ЗНЙСІВІН. М'ЛСЧиІ

Научная новизна результатов исследований. Выяснены примерные сроки появлення вирусных инфекции в оздоровленных растениях земляники в полевых условиях Московской области.

Изучено влияние латентных вирусов-возбудителей морщинистости и крапчатостн на урожайность и вегетативную продуктивность земляники.

Показана эффективность применения химических ингибиторов вирусов в оздоровлении земляники путем добавления их в питательную среду для выращивания мернстема-тнческих верхушек, что позволяет увеличить размер безвирусной зоны. Ранее- вопрос о влиянии ингибиторов вирусов на увеличение безвнрусной зоны в эксплантатах земляники не изучался.

Предложена новая методика тестирования земляники прививкой отрезками черешка листа, которая позволяет экономно расходовать тестируемый материал, избегая ослабления проверяемых растении.

Практическая ценность работы. Использование антивирусных препаратов (АВП) до и после выделения эксплантатов для оздоровления земляники в культуре in vitro позволяет увеличить размер выделяемых апексов, при этом сокращаются сроки регенерации растений и снижается трудоемкость процесса выделения эксплантатов.

Результаты испытания АВП использованы прн разработке рекомендаций по выращиванию здорового посадочного материала земляники.

Предложенный новый метод тестирования земляники прививкой отрезками черешка позволяет сократить сроки тестирования и более экономно расходовать тестируемы ft материал, не ослабляя растений.

Апробация работы. Основные результаты исследований были доложены и обсуждены на научных конференциях ТСХА (июнь 1981, декабрь 1984, декабрь 1985 г.), Всесоюзной конференции ВАСХНИЛ по биотехнологии, 1986 (пристендовое сообщение).

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 4 печатных статьи, отражающих ее основные положення.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 122 страницах машинописного текста н состоит из введення, 5 глав, заключения, выводов и практических рекомендаций, включает 19 таблиц, иллюстрирована 2 рисунками и ^"фотографиями.

Список использованной литературы включает 200 источников, из них 105 работ зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Введение. Обоснована необходимость дальнейшего совершенствования методики оздоровления земляники от вирусных болезней, определены перспективные направления этих разработок и непосредственно задачи исследований.

В главе 1 «Обзор литературы» содержится анализ отечественной н зарубежной литературы по изучаемым вопросам. Приводятся данные о вредоносности и распространенности вирусных болезней земляники, описано современное состояние диагностики и борьбы с ними. Дается аналитический обзор литературных источников по использованию антивирусных препаратов в оздоровлении растений от вирусных заболеваний.

Глава 2. «Условия и методика проведения исследований». Диссертационная работа выполнялась в лаборатории плодоводства ТСХА, а также в совхозе «Память Ильича» Пушкинского района Московской области и в учхозе ТСХА «Михайловское».

Материалом для опытов служили растения земляники сортов, районированных в Московской области, оздоровленные от вирусов, с признаками морщинистости и крапчатос-тн, с латентной зараженностью вирусами, а также растения земляники, искусственно зараженные прививкой вирусами морщинистости и крапчатости.

Зараженность подопытного материала определяли тестированием растений, отобранных при маршрутных обследованиях промышленных насаждений земляники в совхозе «Память Ильича», учхозе «Михайловское», селекционном участке НИЗИСНП.

Основное тестирование проводили по стандартной методике путем прививки черешком листа на индикаторные клоны Fragaria vesca (EMC, ЕМК, FV-72, UC-1, UC-5) и F. virginiana в двух вариантах: общепринятом {Методич. указания по технологии производства здорового посадочного материала земляники, 1978; Compendium of strawberry diseases, 1984) и разработанном нами. Продолжительность теста 3—4 месяца для диагностики латентной вирусной инфекции и 7—8 месяцев для установления отсутствия вирусов в растениях. Механическую передачу вирусов проводили инокуляцией травянистых растений-индикаторов Chenopodium quinoa и Phaseolus vulgaris (Методич. указания по выявлению и идентификации вирусов и микоплазм.,., 1980). В качестве стабилизирующей добавки использовали 2% никотин — основание или 0,015М ДИЭКА в фосфатном буфере рН 7,4—7,8.

Оздоровление земляники от вирусов проводили методом

3

культуры верхушечных меристем по стандартной методике, принятой в странах — членах СЭВ, а также с применением антивирусных препаратов (ЛВП), любезно переданных для испытаний проф. Г. Шустером (Университет им. К. Маркса, Лейпциг, ГДР). Нами изучалось действие синтетических антивирусных препаратов: ДГТ (2,4-дноксогексагидро-1, 3, 5-триазин), нео-ДГТ (химический аналог ДГТ), Ь-ЗЗЗ (фе-нил-аллил-тномочевнна), ЛАТ (аннлино-адамаитнл-тиадна-зол), двукратно вводимых, до и после вычленения эксплантатов земляники, в питательную среду в концентрации 100 мг/л (75 мг/л для Ц-ЗЗЗ). Высаживали верхушечные меристемы покоящихся ночек рожков. Обычная величина выделяемых эксплантатов 0,3—0,5 мм, в вариантах с ингибиторами вирусов высаживали эксплантаты размером 0,7— '1,5 мм. Использовали основную питательную среду по Му-расиге и Скугу (1957 г.), среда для укоренения включала макроэлементы по Готре, микроэлементы по Хеллеру, ИУК (1 мг/г). Микроразмноженне растений вели на среде Мура-сиге и Скуга с добавлением 6-бензиламиионурина, БАП (1 мг/л), (Оздоровление и размножение плодовых и ягодных растений методом культуры меристематнческих верху-ч шек, 1Э79). При испытании ингибирующего действия антивирусных препаратов эксплантаты дважды пересаживали на свежую питательную среду с ингибитором. Возможные побочные действия антивирусных препаратов определяли по частоте появления эмбриональных деталей у АгаЫ(1ор-

ШаНапа (Ь.) НеупЬ, раса «Дижон» в пробирочной культуре (С, И. Янушевич, 1977) и апробацией растений земляники, выращенных с использованием АВП.

Динамику нарастания вирусной зараженности оздоровленного материала определяли в нолевом опыте заложенным безвирусным оздоровленным посадочным материалом земляники. Вирусологическую проверку всех растений проводили индикаторным методом в лабораторных условиях.

Опыт по изучению влияния латентной вирусной инфекции на выход посадочного материала земляники был проведен в пленочно-сетчатом изоляторе. Сравнивали оздоровленные безвирусные-растения и искусственно зараженные (прививкой) латентным вирусным комплексом. Влияние вирусов на урожайность изучали в аналогичном полевом опыте.

Выход рассады земляники учитывали по следующим параметрам: количеству усоплетей, количеству неукорененных розеток, общей массе розеток с одного растения и средней массе розетки. Учеты проводили два раза за вегетационный период; в первой декаде июля и в первой декаде сентября. Учет- количества .цветоносов к зеленых -завязей проводили Л

за десять дней до сбора первых ягод. Среднюю массу ягод вычисляли па основе трех массовых сборов. Урожайность куста рассчитывали по количеству завязей и средней массе ягоды. Содержание аскорбиновой кислоты в ягодах определяли йодометрическнч методом, содержание Сахаров — цнанидным методом, содержание сухих веществ и кислотность— по общепринятой методике (Ю. В. Волосов, 1971).

Результаты опытов статистически обработаны (Б. А. Доспехов, 1979; Г. Ф. Лаки», 1980).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ

3. Распространение и вредоносность вирусных болезней земляники

3.1. Зараженность земляники вирусной инфекцией

Промышленные участки земляники в Московской области заражены латентной вирусной инфекцией, в' основном сочетаниями вирусов крапчатости и морщинистости. Между сортами земляники имеются различия по зараженности вирусами в латентной форме, наибольший процент зараженности вирусами растений из 7 сортов был отмечен для сорта Фестивальная (42—60%). Характерные визуальные признаки вирусных заболеваний на садовой землянике отмечались очень редко.

3.2. Динамика нарастания процента растений с вирусной инфекцией

Для выяснения вопроса о том, насколько быстро в полевых условиях происходит вторичное заражение вирусной инфекцией оздоровленной земляники, нами был заложен специальный опыт, результаты которого представлены в таблице 1.

Уже за одни вегетационный период, начиная с момента посадки оздоровленной безвнрусной рассады земляники в поле, тестируемая латентная вирусная инфекция существенно нарастала и была обнаружена у 6% растений сорта Зен-га Зенгана и у 13,7% растений сорта Фестивальная. Разница по зараженности между сортами в первый год была несущественной. На следующий год наблюдалось существенное увеличение зараженности латентной вирусной инфекцией растений земляники, причем зараженность сорта Фестивальная была существенно выше.

Восстановление зараженности латентной вирусной инфекцией можно объяснить увеличением концентрации вирусов в тканях растений до улавливаемой в биотестах; оно

Таблица

Динамика нарастания процента растений с вирусной инфекцией (совхоз «Память Ильича*, Московской обл.)

Процент Оезвнрусных растений

Дата учета

Фестивальная

Зенга Зеигана

Веска 1983 г. (год посадки) Осень 1983 г. Осень 1984 г.

100 а

86.3 бв 62,5 г

100 а

94 аб 80,0 в

Примечание: одинаковые буквы обозначают отсутствие существенных различий между вариантами при 5%-ноч у рои и о значимости.

может также происходить посредством переносчиков, из которых в посадках земляники встречались тли Mysodes рег-sicae Sulrf; и белокрылкн Aleurodes fragariae Wik,

3.3. Влияние латентной вирусной инфекции на вегетативную продуктивность н урожайность земляники

С целью выявления вредоносности латентного вирусного комплекса морщинистости и крапчатостн земляники, возбудители которого встречаются наиболее часто в Нечерноземной зоне, был заложен опыт, в котором сравнивали между собой оздоровленные методом культуры верхушечных меристем, протестированные на отсутствие вирусов растения земляники и искусственно, методом прививки, зараженные вирусами морщинистости и крапчатостн растения земляники. Регулярные обследования растении в опыте не выявили внешних различий между зараженными вирусами и оздоровленными безвирусными растениями. Однако, несмотря па бессимптомное протекание заболевания, вирусная инфекция оказала значительное влияние на' продуктивность растений.

Как видно из данных таблицы 2, оздоровленные растения сорта Фестивальная образовывали в течение первых двух лет существенно большее количество усоплетей, однако на третий год эти различия становятся несущественными. Растения сорта Редгонтлит, хотя и имелась тенденция к снижению количества усов у зараженных растений, не отреагировали существенным снижением усообразовательной способности на заражение латентной вирусной инфекцией.

Сходные результаты получены при изучении влияния вирусов на количество розеток. Суммарный выход розеток за три года был выше на 23,5% у оздоровленных растений

Б

Влияние латентной вирусной инфекции на усообразоваиие земляники

Сорт Вариант Среднее количество усоплетей на одно растение, шт.

О да X VI 1.81 3 X до «О

Фестивальная Оздоровленные 10,4 6,1

растения 10,6 12,5 9,1

Вирусные 4,1*« 9,5 9,5***

растения 5,6 9,2

Редгонтлит Оздоровленные 4.4 4,7

растения — — —

Вирусные 4,1 4,9

растения

Примечание: здесь и далее1 знаками *, **, *+* обозначено наличие су шест венных различий между средними значениями признаков по вариантам, соответственно при 5, 1 и 0,1-процентных уровнях значимости.

сорта Фестивальная, чем у зараженных латентной вирусной инфекцией растений. Вирусная инфекция достоверно не снижала выход розеток у зараженных растений сорта Редгонт-лит.

Латентный комплекс крапчагости и морщинистостн не оказывал в нашем опыте отрицательного воздействия на среднюю массу розетки растений сортов Фестивальная и Редгонтлит.

Урожайность ягод у зараженных латентными вирусами морщинистости и крапчатостн растений земляннки снижалась значительно по сравнению с оздоровленными от вирусов растениями (таблица 3). Снижение урожайности под действием латентной вирусной инфекции происходило за счет образования меньшего количества цветоносов и зеленых завязей, а также вследствие того, что ягоды вирусных растений были меньше, чем у оздоровленных растений. Наиболее заметны различия по урожайности между оздоровленными растениями и зараженными латентной вирусной инфекцией были у сорта Фестивальная, земляника сорта Редгонтлит была в меньшей степени подвержена отрицательному воздействию вирусов.

Форма ягод, их консистенция, дружность созревания были идентичными в вариантах с безвнрусными и вирусными растениями земляники обоих сортов.

Влияние латентной вирусной инфекции на урожайность земляники (1984—19У6 гг., в среднем за два года)

Показатель Зенга Зенгана Редгонтлнт

оздоровленные растения вирусные растения оздоровленные растения вирусные растения

Среднее число цветоносов на растение, шт. Среднее число зелен их завязей на растение, шг. Средняя масса зрелой ягоды за 3 массовых сбора, г Урожайность с куста, г 6,7 42,5 11,3 482,1 4,6*** 30,2** 9 2807* " 1.4 17,3 7.5 128,1 1,4 13,0* 7,4 97,1

Вирусное заболевание, вызванное комплексом вирусов морщинистости и краичатости и протекающее бессимптомно, повлияло и на химический состав ягод земляники (табл, 4).

Таблица 4

Показатели химического состава ягод земляники от оздоровленных и зараженных вирусами растений (1985 г.)

Зенга Зенгана Редгонтлит

Показатель оздоров- вирус- оздоров- вирус-

ленные кие рас- ленные ные рас-

растения тения растения тения

Содержание сухих веществ, % 12,49 11,57 8,32 8,15

Содержание аскорбиновой кисло-

ты, мг/% 43,34 43,71 31,59 26,22

Кислотность, % 1,99 2.18*'* 2,35 2 92**

Содержание Сахаров, % 10,11 8,37*+ 5,89 мз

Под действием латентной вирусной инфекции не происходило достоверного снижения сухих веществ и аскорбиновой кислоты, но существенно снижалось содержание Сахаров и повышалась кислотность ягод с вирусных растений, более заметной эта разница была у сорта Зенга Зенгана, чем у сорта Редгонтлнт.

4, Некоторые вопросы совершенствования методики оздоровления земляники от вирусов в стерильной культуре

4,1. Сортовая реакция земляники на оздоровление методом культуры верхушечных мернстем

Данные по выходу безвирусных растений после оздоров-

леннн метолом культуры верхушечных меристем разных сортов земляники, имеющих одинаковую исходную зараженность, позволили разделить все изучавшиеся сорта на группы, различающиеся по эффективности оздоровления. Наибольший процент (81—85% ) безвнрусных растений после оздоровления был выявлен у сортов Деснянка, Зенга Зен-гана, элитных сеянцев 172—14—49, 168—19—22, 188—16— 109, 188—16—4 (первая группа). Наименьший процент (50—56%) безвирусных растений был получен у сортов Редгоктлит, Талисман, Ранняя Махерауха, Пурпуровая (третья группа). Остальные испытываемые сорта (Роксана, Фестивальная, Кокннская ранняя, Золушка, Зенит, Заря, Надежда) занимали промежуточное положение по эффективности оздоровления от вирусной инфекции (вторая группа).

В среднем оздоровление от вирусов методом культуры верхушечных меристем позволяет получить 72% оздоровленных растений, контрольное тестирование земляники выбраковывает около 30% растений с латентной вирусной инфекцией.

Существенные различия между сортами по эффективно* сти оздоровления означают, что к выбору методики этой работы для различных сортов необходимо подходить дифференцированно. Для сортов третьей группы требуется применение дополнительных приемов, в частности, предварительная термотерапия, повторное выделение апексов, применение ингибиторов вирусов и другие.

Установлена корреляционная зависимость (г =>0,931, р<0,001 ) между рангом выхода оздоровленных безвнрусных растений земляники и рангом регенерационной способности верхушечных меристем этих растений.

4.2. Сочетание метода культуры верхушечных меристем земляники с химиотерапией

При оздоровлении земляники от вирусов методом культуры верхушечных меристем обычно выделяют эксплантаты размером 0,3—0,5 мм, так как их увеличение приводит к снижению выхода безвнрусных растений. Регенерация растеннй из эксплантатов указанного размера длится до' 3—5 месяцев при значительном проценте их гибели. Термотерапия с целью увеличения безвирусной зоны в апексах малоэффективна, так как большинство вирусов, поражающих землянику, относится к числу термостабнльных. В связи с этнм возник вопрос об испытании синтетических ингибиторов вирусов, антивирусная активность которых ус-

Э

тановлена на других вирусах, поражающих культурные растения.

Антивирусные препараты вводили в питательную среду, на которой выращивали эксплантаты, выделенные из зараженных морщинистостью растений земляники сорта Фестивальная, до и после вычленения эксплантатов.

Сильная фитотоксичность отмечена только для препарата Ь-ЗЗЗ, который заметно угнетал развитие эксплантатов. ААТ не обнаружил никакого отрицательного воздействия на развитие меристематнческих верхушек. ДГТ и нео-ДГТ несколько сдерживали, рост эксплантатов. ДГТ стимулировал рост боковых почек и корней.

Результаты, представленные в таблице 5, свидетельствуют о том, что испытываемые препараты ДГТ, нео-ДГТ и

.. Таблица 5

1 Влияние синтетических.АВП-на эффективность оздоровления

земляники от внрусной инфекции

Вариант Концентра-шія ингибитора, мг/л Процент оздоровления Развитие регенерантов

число листьев, шт. число корней, шт. время регенерации, дней

[,-333 . . . 75 20,0 3—4 3 70

нео-ДГТ 100 ' 55,6** 3-5 3 50

ДГТ 100 63,0**« 5-6 5—6 45

ААТ 100 61,5"** 3—5 3 50

Контроль 1 (без АВП) — 15,0 3-6 3 45

Контроль 2 (без ЛВП) '—■ 50,0** 3—5 3 75

Примечание: в варианте контроль 2 — размер эксплантатов 0,3—0,5 мм; в остальных вариантах н контроле 1 размер эксплантатов 0,7—1,5 мм.

ААТ вызывали инактивацию или значительное снижение концентрации вирусов, -присутствующих в растениях земляники в латентной форме.. Увеличение размера вычленяемого эксплантата до 0.7—1,5 мм и культивирование их на средах с указанными АВГГ незначительно влияло на приживаемость эксплантатов,* но заметно ускоряло процесс образования оздоровленных растеннй-регенерантов, готовых к пересадке в нестерильные условия, по сравнению с растениями, выращенными из апексов размером 0,3—0,5 мм на средах без ингибиторов вирусов. Препарат 1,-333 в концентрации 75 мг/л не оказал существенного ингибирующе-го действия на вирусную' инфекцию, его использование на землянике, по-видимому, неэффективно из-за сильной фнто-токсичности и слабого антивирусного действия.

Проведенные исследования мутагенных свойств синтети-

ческих антивирусных препаратов в эмбрион-тесте на резуш-ке (АгаЬМорз^э ШаНапа) при введении их в питательную среду для стерильной культуры арабидоисиса, показали, что они вызывали летальные мутации существенно чаще (на 7—15% ), чем в контроле, причем частота летальных мутаций на среде с ЛАТ была существенно ниже, чем на среде с ДГТ, Однако обследование растений земляники, выращенных с использованием ЛВП, не выявило стенотипических отклонений от эталонных сортотипичных экземпляров.

5. Совершенствование методики прививки при тестировании земляники

Определение латентной вирусной инфекции в растениях земляники проводят тестированием их методом прививки черешком листа в расшеп на индикаторные клоны Ргара-па уезса и Р. \чгй1п1апа. При этом используют только верхушечную часть черешка с частью листовой пластинки, т. е. чтобы протестировать одно растение земляники на двух видах индикаторов по одному растению каждого, сделав по три прививки, надо с тестируемого растения удалить 6 листьев. Наиболее достоверно тестирование растений, выращенных методом культуры верхушечных меристем, вегетн-ровавших не менее 4—8 месяцев, к этому времени они имеют 5—8 листьев, т. е. для тестирования приходится удалять практически все листья. Нами предложено более рациональное использование растительного материала для приготовления привоев, позволяющее в 3—1 раза сократить расход листьев, необходимый для тестирования, см. рис.

В качестве привоя применяли отрезки черешка листа длиной 1,5—2,0 мм. Первую прививку делали целым черешком с листовой пластинкой, срезая с двух сторон на конус черешок, вставляли его в расшеп в подвое, закрепляли место прививки лейкопластырем, делали поперечный срез черешка на 2—3 мм выше места прививки, место среза привоя покрывали слоем 5—10% водного раствора гуммиарабика. Затем срезали с двух сторон на копус оставшийся черешок тестируемого растения, вставляли его в расщеп нового подвоя и т. д. Последний привой представляет собой отрезок черешка с частью листовой пластннки, как при обычном методе прививки.

Предложенный метод прививки, не отличаясь по сложности исполнения и достоверности результатов от распространенного метода прививки черешком листа, позволяет более экономно расходовать исследуемые на зараженность вирусами растения земляники, не ослабляя их.

Выводы-

1. Земляника в Московской области заражена вирусами в латентной форме, в основном сочетаниями вирусов крапчатости и морщинистости. Имеются различия между сортами в зараженности вирусами. Наиболее зараженнымн из обследованных сортов оказались растения сорта Фестивальная (42—60%). . .

2. Восстановление зараженности латентной вирусной инфекцией в оздоровленных от вирусов растениях земляники начинается уже в первый год после высадки в поле. Растения сорта Зенга Зенгана к концу первого года были заражены.на 6%, а сорта Фестивальная на 13,7% вирусной инфекцией в латентной форме. Нарастание инфекции происходит с различной "интенсивностью в зависимости от относительной устойчивости сорта.

3. В посадках земляники из потенциальных переносчиков вирусных болезней были обнаружены тли МуБО<1е5 рег-5)сае и белокрылки А1еиго(1еэ (га^апае, последние встречались на посадках земляники в массовом количестве.

4. Латентный вирусный комплекс морщинистости и крапчатости значительно снижал вегетативную продуктивность земляники. Вирусные растения сорта Фестивальная образовывали на 24% меньшее количество усоплетей и на' 27% меньше розеток, по сравнению с оздоровленными, на второй год посадки. У вирусных растений сорта Редгонтлит также имелась тенденция к снижению выхода посадочного материала. Наиболее заметное снижение выхода розеток отмечалось в первые два'года после посадки.

5. Латентная вирусная инфекция по-разному влияла на урожайность земляники различных сортов. Снижение урожайности у вирусных растений сорта Редгонтлит примерно в 1,7 раза меньше, чем у сорта Фестивальная, причем у последних существенно снижалось количество цветоносов, зеленых завязей, средняя масса ягод, у сорта Редгонтлит уменьшение урожайности было обусловлено главным образом снижением количества зеленых завязей,

6. Вирусный комплекс морщинистости и крапчатости в латентной форме повышал существенно общую кислотность (на 9%) и вызывал, снижение содержания Сахаров (на 17%) в ягодах земляники сорта Зенга Зенгана; для Ред-.гонтлнт на 19% и 8%, но не влиял на содержание сухих веществ и аскорбиновой кислоты.

7. Сорта земляники, различаются между собой по эффективности их оздоровления от вирусов методом культуры верхушечных меристем (от 50% до 8?% оздоровления), что

необходимо учитывать при выборе методики их освобождения от вирусов.

8. Установлена корреляционная зависимость между ре-генерационной способностью апексов исследуемых сортов земляники и выходом безвнрусных растений при оздорови лении их методом культуры верхушечных меристем, г=0,931.

9. Существующая методика оздоровления земляники от вирусов культивированием верхушечных меристем «in vitro» может быть усовершенствована путем добавления в питательную среду до и после вычленения эксплантатов синтетических антивирусных препаратов ДГТ, нео-ДГТ и ААТ. Эффект их применения проявляется в повышении процента здоровых регенерантов (на 13%) при обычном размере эксплантатов (0,3—0,5 мм) и в сокращении сроков регенерации в 1,5 раза при увеличении их размера до 0,7— 1,5 мм. Для выявления возможного мутагенного действии ЛВП желательно проводить обследования растений земляники, выращенных с использованием АВП с целью обнаружения фенотипическнх отклонений от сортотнпичных эталонных экземпляров.

10. Использование отрезков черешков листьев в качестве привоя позволяет усовершенствовать методику тестирования земляники на вирусную инфекцию, при ЭТОМ В три раза сокращается расход растительного материала, используемого в качестве привоя. Метод прививки отрезками черешков листьев не уступает по своей эффективности распространенному методу прививки черешком листа с частью листовой пластинки.

Рекомендации производству

На основании проведенных исследований рекомендуется научно-исследовательским учреждениям но культуре земляники:

— В оздоровлении земляники методом культивирования верхушечных меристем целесобразно использование синтетических антивирусных препаратов: ДГТ, нео-ДГТ, ААТ, вводимых в питательную среду до и после выделения эксплантатов, в концентрации 100 мг/л среды. Размер вычленяемого эксплантата в этом случае может быть увеличен до 0,7—1,5 мм в целях сокращения процента гибели эксплантатов, затрат труда и времени на получение оздоровленных растений.

— Вместо обычного метода прививки на индикаторные клоны Fragaria черешком листа с частью листовой пластинки возможно тестирование земляники методом прививки отрезками черешка; на место среза для предотвращения высыхания необходимо наносить слой 5—10% водного раствора гуммиарабика. При использовании данного метода рас-

ход листьев тестируемых растений земляники сокращается в 3—4 раза.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. Жаркова И. В., Белошапкина О. О., Чефранова Л. И. 'Оздоровление новых сортов земляники от вирусной инфекции методом верхушечных меристем//3ащита растений в условиях интенсивной химизации сельского хозяйства.—М.,

; ТСХА. — 1982. — С. 79—83.

2. Белошапкина О. О; Биологическая продуктивность и урожайность земляники при вирусной ннфекции.//Известия ТСХА,— 1985.— № 5,- С. 139—142.

3. Белошапкина О. О. Оздоровление земляннки//Плодо-овощное хозяйство.— 1985. — № 5. — С. 41.

4. Белошапкина О, О. Сортовая реакция земляники на оздоровление методом культуры меристем .//Проблемы вегетативного размножения в садоводстве. — М., ТСХА. — 1985,—С. 119—122.'

Л 61411 29/VIII—86 г.

Объем 1 п. л.

Заказ 2429.

Тираж 100

Типография Московской с.-х. академия им. К. Л. Тимирязева 127350, Москва И-550, Тимирязевская ул., 44