Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Обеззараживание зернофуража, контаминированного вирусом гриппа птиц, электромагнитными полями инфранизких частот

ВАК РФ 06.02.05, Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

Автореферат диссертации по теме "Обеззараживание зернофуража, контаминированного вирусом гриппа птиц, электромагнитными полями инфранизких частот"

На правах рукописи

Замула Сергей Владимирович

ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЕ ЗЕРНОФУРАЖА, КОНТАМИНИРОВАННОГО ВИРУСОМ ГРИППА ПТИЦ, ЭЛЕКТОМАГНИТНЫМИ ПОЛЯМИ ИНФРАНИЗКИХ ЧАСТОТ

06.02.05 - ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

2 6 МАЙ 2011

Москва -2011

4847653

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии).

Научные руководители: Иванов Василий Григорьевич

доктор ветеринарных наук, (ГНУ ВНИИВСГЭ)

Кушнир Анатолий Тимофеевич доктор ветеринарных наук, (ГНУ ВНИИВВиМ)

Официальные оппоненты: Боченин Юрий Иванович

доктор ветеринарных наук, (ГНУ ВНИИВСГЭ)

Чуфарова Елена Васильевна кандидат ветеринарных наук, (ГНУ ВНИИВВиМ)

Ведущая организация: ФГОУ ВПО Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина (МГАВМиБ).

Защита состоится «21» июня 2011 г. в «10:00» на заседании диссертационного совета Д 006.008.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии по адресу: 123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5, ГНУ ВНИИВСГЭ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИИВСГЭ.

Автореферат разослан «¿Ш> иС^йг^ 2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор ветеринарных наук, профессор у Долгов В.А.

Р-Ц.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ. 1.1. Актуальность темы. Инфекционные болезни играют значительную роль в патологии животных. Они возникают при внедрении возбудителей в организм животных, вызывают заболевание и способны передаваться от больного животного к здоровому. Этот факт определяет потенциальную возможность непрерывной передачи возбудителя, массовость поражения животных и тенденцию к его широкому территориальному распространению. В силу изложенного инфекционные болезни могут наносить и наносят животноводству большой экономический ущерб, а некоторые из них, такие как грипп птиц, передаются от животного человеку.

Ветеринарная практика постоянно нуждается в высокоэффективных и экологически безопасных средствах защиты животных от инфекционных болезней . В настоящее время при значительном сокращении производства отечественных дезинфицирующих препаратов и высокой стоимости зарубежных, изыскиваются новые средства и методы, обеспечивающие выполнение задач по ликвидации источников инфекции. Вместе с тем, в решении задач роста производства качественной продукции не следует уменьшать роль комплекса ветеринарно-санитарных мероприятий, которые позволяют в достаточно высокой степени эффективности профилактировать различные инфекционные заболевания.

Санация объектов окружающей среды является важнейшим звеном в технологии производства сельскохозяйственной продукции высокого качества. В настоящее время для этих целей используют различные физические, химические и биологические методы, к числу которых относятся УФ-излучение, гамма-излучение, ультразвук, озонирование, термическая обработка, орошение различными растворами, а также ряд химических веществ: кислоты, щёлочи, перекись водорода, аммиак и др. Однако большинство применяемых химических средств дезинфекции имеют ряд недостатков.

Так щелочные и кислотные препараты оказывают токсическое воздействие на животных и людей, проявляют коррозионное воздействие на технологическое оборудование и в определённой степени загрязняют окружающую среду, если не использовать соответствующие препараты для их нейтрализации. В большей степени экологическим требованиям безопасности отвечают выше упомянутые физические методы обеззараживания, однако их эффективное использование ограничивается узкими территориальными рамками применения, сложностью перемещения технологического оборудования и технических средств. Поэтому постоянно идёт процесс поиска новых перспективных высокоэффективных и экологически безопасных методов дезинфекции, позволяющих обеззараживать не только отдельные предметы, помещения и материалы, но также и значительные по размерам загрязнённые территории и большие массы зерновых кормов. К числу таких методов относится использование электромагнитных полей низких частот (ЭМП ИНЧ), способных проникать во все сферы обитания живых организмов (глубины морей и океанов, толща земной коры). Однако исследования по применению ЭМП ИНЧ в ветеринарной практике ограничены и требуют экспериментального изучения. В связи с этим разработка метода санации объектов ветеринарно-санитарного надзора ЭМП ИНЧ, и в частности зернофуража, является весьма актуальной, особенно в условиях напряженной эпизоотической ситуации по гриппу птиц и другим опасным заболеваниям. 1.2. Цель и задачи исследований

Целью нашей работы являлось экспериментальное обоснование и разработка нового метода и режимов обеззараживания зернофуража, контаминированного вирусом финна птиц.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Определить эффективные электротехнические параметры звуковых генераторов (ГЗ -110 и ГЭ-123) ЭМП ИНЧ, обеспечивающих получение

стабильных показателей (по форме сигналов, мощности получаемых частот, возможности перестраивания без искажения заданных величин и учета показателей на приборах высокой точности и чувствительности).

2. Установить оптимальный режим деконтаминиции Е.соН 1257 ЭМГ1 ИНЧ в контамшшрованпом зернофураже.

3. Установить влияние ЭМП ИНЧ на снижение общей бактериальной обсемененносги (ОБО) зернофуража.

4. Изучить влияние ЭМГ1 ИНЧ на жизнеспособность вируса гриппа птиц (ВГП) в суспензии вируса и контаминированном зернофураже.

5. Определить оптимальные режимы обеззараживания инфицированного вирусом гриппа птиц зернофуража.

6. Установить влияние ЭМП ИНЧ на лабораторных животных (белые мыши, белые крысы).

7. Определить безопасность обработанного ЭМП ИНЧ зернофуража для лабораторных животных.

8. Определить экономическую эффективность обработки зернофуража ЭМП ИНЧ.

1.3. Научная новизна работы.

Впервые разработан метод и технология обеззараживания зернофуража, контаминированного вирусом гриппа птиц (Н5Ы1), основанные на использовании электромагнитных полей низкой частоты.

Установлена полная инактивация вируса гриппа А кур в контаминированном зернофураже и безопасность обезвреженного зернофуража для лабораторных животных.

Новизна работы подтверждена патентом на изобретение № 2414931, заявка№2009)48152/15. Опубликовано: 27.03.2011 Бюл. 9.

1.4. Практическая значимость работы.

Состоит в возможности использования ЭМП ИНЧ для обеззараживания зернофуража, контаминированного вирусом гриппа птиц.

Разработана «Технология обеззараживания зернофуража от вируса гриппа птиц инфранизкими частотами звукового диапазона» (Утв. отделением ветеринарной медицины РАСХН 11.06.201 Ог) и Методическое пособие по «Обеззараживанию зернофуража от патогенных микроорганизмов и вирусов (вирус гриппа птиц Н5№) инфранизкими частотами звукового диапазона» (Утв. отделением ветеринарной медицины РАСХН 25.10.2010г.).

1.5. Личный вклад аспиранта

Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно в лаборатории токсикологии и санитарии кормов ГНУ ВНИИВСГЭ в рамках задания 08.05 раздела 08.05.02.08. Отдельные этапы работы с возбудителем гриппа птиц выполнены при методической и консультативной помощи доктора ветеринарных наук Кушнира А.Т. и ведущего научного сотрудника, кандидата биологических наук Смирнова В.Н. (ГНУ ВНИИВВиМ).

1.6. Апробация и публикация результатов исследований.

Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета ГНУ ВНИИВСГЭ в 2008-2010 г.г.

На секции «Ветеринарная санитария, гигиена и экология» отделения ветеринарной медицины РАСХН) 2009 г. Москва.

В диссертации опубликовано три научных работы в журналах, рекомендованных в перечне ВАК.

1.7. Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

Метод и технология обеззараживания зернофуража от вируса гриппа птиц инфранизкими частотами звукового диапазона.

Безвредность обработанного ЭМП ИНЧ зернофуража для лабораторных животных. 1.8 Объем и структура диссертации.

Работа оформлена на 88 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования с обсуждением результатов, выводы и практические предложения. Список использованной

литературы включает 108 отечественных и 25 иностранных источников, приложениях. Работа иллюстрирована 9 таблицами и 2 рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. 2.1. Материалы н методы исследований

Результаты исследований, представленные в диссертации, получены в период с 2007 по 2011 гг. Экспериментальная часть работы выполнена в лаборатории токсикологии и санитарии кормов ВНИИВСГЭ и лаборатории индикации микроорганизмов ВНИИВВиМ г. Покров, Владимирской области.

Для получение бактериальной суспензии E.coli 1257 и контаминации зернофуража микробную взвесь E.coli 2 млрд. м.к./мл получали путем смыва культуры с МПА выращенной в термостате в течение 24 часов при 37°С. Образцы зернофуража по 500 г каждый заражали из расчета 500 тыс. м.к./г по стандарту мутности и облучали электромагнитными полями частотами 4 и 6 Гц по 2 часа и 9 Гц 1 час, а также суммарно последовательно в течении 5 часов. После облучения проводили посев на чашки Петри с МПА, термостатировали и учитывали количество выросших колоний, сравнивали с контролем и рассчитывали степень гибели микроорганизмов.

- Получении вируссодержащей жидкости и её титрование.

Для культивирования и титрования ВГП использовали 9-11- дневные куриные эмбрионы (КЭ). Перед заражением их овоскопировали и удаляли павшие, на остальных отмечали границу пуги. Поверхность скорлупы эмбрионов в месте введения материала дезинфицировали 70%-ным раствором этанола, затем 1%-ным раствором йода на 96%-ном этаноле и фламбировали спиртовым факелом. В скорлупе над воздушной камерой на высоте не более 0,5 см от границы пуги металлическим пробойником пробивали отверстие для выхода воздуха. Отверстие для заражения эмбрионов пробивали на участке бессосудистой зоны хориоаллантоисной оболочки (ХАО) ниже линии пуги на 0,3 - 0,5 см. При заражении эмбрионы фиксировали вертикально тупым концом (пугой) вверх. Иглу вводили на

глубину не более 2-3 мм. Материал вводили в объёме по 0,1 см3. После этого отверстия закрывали расплавленным парафином. Заражённые эмбрионы инкубировали при 37°С и относительной влажности 60 - 70%. Овоскопирование проводили в течение инкубации ежедневно. Гибель эмбрионов в первые сутки после заражения считали неспецифической. Эмбрионы, павшие в последующие сроки, помещали на хранение в холодильник при 4 - 6° С. Оставшиеся живые эмбрионы охлаждали в течение 12-24 часов при 4 - 6° С. В дальнейшем проводили вскрытие эмбрионов и определяли гемагглютинирующую активность аллантоисной жидкости с 1% суспензией эритроцитов петуха или барана капельным методом на покровных стеклах или микро методом в 96-ти луночных пластиковых планшетах с и образным дном.

Для выделения вируса и получения вируссодержащего материала куриные эмбрионы заражали вируссодержащей аллантоисной жидкостью в разведении 1:10 на физиологическом растворе рН 7.2-7.4. При титровании использовали вируссодержащую жидкость в разведениях с 10" по "Ю10. На каждое разведение использовали не менее 4 куриных эмбрионов. Расчёт летальной дозы (1Л350) проводили по методу Кербера в модификации Ашмарина и Воробьёва.

- Постановка реакции агглютинации эритроцитов.

Реакцию агглютинации ставили в пластиковых планшетах с круглодонными или коническими лунками или на предметных стёклах. При работе макро- методом в один ряд лунок вносили по 0,5 см3 физраствора. Затем в первую лунку вносили 0,5 см3 вируссодержащего материала и готовили двукратные разведения с обязательной сменой пипеток. Из последней лунки после пипетирования удаляли 0,5 см3 содержимого. После этого к полученным разведениям вируса добавляли по 0,5 см3 1% - ной взвеси эритроцитов. Затем планшетку встряхивали круговыми движениями для смешивания компонентов и оставляли при комнатной температуре на 20 - 45 мин. Гемагглютинацию учитывали по форме и величине осадка

эритроцитов. При образовании осадка в виде «зонтика» реакцию оценивали положительно, а в виде пуговки - отрицательно. Титром гемагглютинирующей активности считали наибольшее разведение вируса, дающее чётко выраженную агглютинацию эритроцитов в виде «зонтика». При постановке РГА обязательно ставили контроль на наличие неспецифической агглютинации эритроцитов. Для этого к 0,5 см3 физиологического раствора добавляли 0,5 см3 1% - ной суспензии эритроцитов. Если эритроциты не обладают спонтанной агглютинацией, па дно лунки выпадает осадок эритроцитов в виде «пуговки» (отрицательная реакция). По оседанию эритроцитов в контроле определяют время учёта реакции.

При постановке РГА на предметных стеклах их делили восковым карандашом на четыре части, на каждую часть стекла наносили каплю испьпуемой вируссодержащей жидкости и каплю 2%-ных эритроцитов. Круговым покачиванием стёкол содержимое капель перемешивали и оставляли стёкла при комнатной температуре. Реакцию учитывали через 1015 минут. При положительной РГА эритроциты при круговом покачивании стекла располагались по капле в виде россыпи мелкого песочка, а при отрицательной в виде косички.

Постановка РГА микро методом отличается от таковой при макро методе количеством компонентов, а именно - вместо 0,5 см3 в реакцию берут по 0,025 см3 и используют 96-луночные планшеты. Учет реакции проводят при вертикальном наклоне планшетки примерно на 45-50°. При отсутствии агглютинации на дне лунки образуется пуговка, которая при наклоне планшета принимает форму слезинки.

- Постановка реакции задержки гемагглютинации.

РТГА ставили в микро модификации по Sever J.L. с 1% суспензией куриных эритроцитов в планшетах для микротитрования с U и V-образными лунками [25, 50]. РТГА выполняли с 4 ГАЕ антигена. Контакт антигенов и антител осуществляли при комнатной температуре в течение 1 часа.

В каждую лунку полистиролового 96-ти луночного планшета с V-образной формой дна добавляли по 0.025 мкл забуферного физиологического раствора (ЗФР). В лунки первой линии добавляли по 0.025 мкл исследуемых образцов сыворотки крови и проводили их двукратное разведение по схеме: 2'", п-2, 3, ..., 8. Лунки последней линии использовали для контроля гемагглютинационных свойств используемого антигена вируса гриппа А. Затем в каждую лунку вносили по 0.025 мкл, содержащего 4 гемагглютинирующие единицы, вирусного антигена и инкубировали 30 мин при комнатной температуре, после чего в каждую лунку добавляли по 0.025 мкл 1 %-ой взвеси эритроцитов и после легкого покачивания оставляли на контакт в течение 40 минут при комнатной температуре. Титр сыворотки определяли по наивысшему разведению, в котором наблюдалось торможение гемагтлютинации. Торможение гемагглютинации выражалось образованием на дне лунки пуговки, которая при наклоне планшеты принимала форму слезинки. Сыворотку крови считали положительной в РТГА, если её титр был не менее чем 1:16.

- Отбор и подготовка проб к анализу.

Для выявления ВГП на КЭ отбирали по времени пробы зерна (50 г). Элюцию вируса гриппа птиц с зерна проводили 5 см3 стерильного физраствора, тщательно встряхивали и отобранную жидкость центрифугировали 20 минут при 2000 об/мин, а надосадок использовали для заражения КЭ, предварительно обработав антибиотиками. Подготовка проб по унифицированной схеме для лабораторных исследований заключается в переводе твердых и полутвердых проб в жидкую фазу, предусматривающую десорбцию микроорганизмов в определенном объеме жидкости. Концентрирование проб из жидкой фазы проводили путем микрофильтрации с помощью прибора дифференциального концентрирования микроорганизмов (ПДК), снаряженного двумя фильтрами «Владипор» типа МФА-МА № 5 (или № 7) и № 2, установленными последовательно или одним фильтром из ткани Петрянова (гидрофильной). На фильтре № 5 (или № 7)

концентрируются бактерии, а на фильтре № 2 -вирусы. Пробу (50 г зернофуража) суспендировали 1:4 в фосфатно-буферный раствор (ФБР), затем перемешивали с помощью микроизмельчитсля тканей РГ-2 в течение 2 минут при 2000 об/мин. После этого пробу осветляли фильтрованием через 4 слоя стерильной марли и концентрировали на ПДК. Подготовленным к исследованию материалом проб инокулировали 9-10-дневные эмбрионы в аллантоиснуга полость по 0,1-0,2 см3 разведениями с 1:10 по 1:1000. На каждое разведение брали по 4 куриных эмбриона. После инокуляции КЭ инкубировали при 37,5 °С в течение

72-120 часов при ежедневной овоскопии. Все погибшие и выжившие в течение 120 часов КЭ охлаждали при 4 °С в течение 12-16 часов. После этого вскрывали скорлупу в области пути и брали от каждого КЭ по одной капле экстраэмбриональной жидкости (ЭЭЖ) и смешивали с одной каплей 1%-ных эритроцитов петуха на предметном стекле или в лунке полистироловых пластин. В случае выявления агглютинации эритроцитов отбирали ЭЭЖ и исследовали в РЗГА для идентификации вируса.

- Контаминация тест-объектов вирусом гриппа птиц.

Зерно коитаминировали ВГП с биологической активностью 9 lg ЭЛД50/СМ3. К 10 г зерна добавляли 5 см3 вируса в разведении 10~5 (проба №1), к 10 г зерна добавили 5 см3 вируса в разведении 10"6 (проба №2). Пробы № 1 и 2 во флаконах ёмкостью по 50см3 помещапи в 10 литровую ёмкость с зерном на глубину 22 см. Обработку проб ЭМП ИНЧ проводили в течение 5 часов (4Гц-2 часа, 6 гц-2 часа, 9Гц-1 час).

Для скармливания курам к 5 кг зерна добавляли 100 см3 вируса гриппа птиц H5N1 с биологической активностью 9 lg ЭЛДзо/см3 в разведении 10"' . Зерно погружали в стеклянную ёмкость и тщательно перемешивали. Подготовленное таким образом зерно скармливали цыплятам (12 голов) по 100 гр. в день в течение 2 дней.

- Обеззараживание ЭМП ИНЧ зерна контамгшированного E.coli 1257.

Установление параметров деконтаминиции Е.соН 1257 в зернофураже проводили на образцах пшеницы, овса и ячменя. Образцы стерилизовали в автоклаве при 110°С (0,5 атм.), в течение 30 минут.

Затем для заражения образцов готовили микробную взвесь Е.соН 2 млрд. м.к./мл путем смыва культуры с МПА выращенной в термостате в течение 24 часов при 37°С. Образцы по 500 г каждый заражали из расчета 500 тыс. м.к./г по стандарту мутности и облучали электромагнитными полями частотами 4 и 6 Гц по 2 часа и 9 Гц 1 час, а также суммарно последовательно в течение 5 часов. После облучения проводили посев на чашки Петри с МПА, термостатировали и учитывали количество выросших колоний в сравнении с контролем и рассчитывали степень уничтожения микроорганизмов.

- Влияние _ЭМП ИНЧ на снижение общей бактериальной

обсемененности зернофуража.

Определение степени снижения общей бактериальной обсемененности зернофуража ЭМП ИНЧ проводили на производственных образцах пшеницы, овса и ячменя. Образцы в количестве по 500 г. помещали на соленоид, обрабатывали ЭМП ИНЧ 4, 6 и 9 Гц, после чего проводили посевы на чашки Петри с МПА и после термостатирования учитывали результаты

- Обеззараживание ЭМП ИНЧ зерна, контамииированного вирусом гриппа птиц.

• Влияние ЭМП ИНЧ на жизнеспособность вируса гриппа птиц в суспензиях.

Вирус гриппа в разведениях 10"', 10'3 и 10"6 объемом по 5 мл каждого помещали на соленойд и обрабатывали ЭМП звуковых частот 4, 6 и 9 Гц в течение 5 часов, после чего заражали куриные эмбрионы, инкубировали их в течение 72 часов при Т=37°С, затем собирали аллантоисную жидкость в стерильные пробирки и ставили реакцшо гемагглютинации.

• Влияние ЭМП ИНЧ на вируса гриппа птиц в экранированной смеси зерна.

Зерно (пшеница) контаминировалн вирусом гриппа птиц активностью 9 ^ ЭЛД50 см3 (к 10 г зерна добавляли 5 см3 вируса в разведении 10~5 - проба №1, к 10 г зерна добавляли 5 см3 вируса в разведении 10"6 - проба №2). Пробы №1 и 2 в флаконах емкостью 50 см3 помещали в емкость (10 л) с зерном, глубина погружения 22 см. Обработку проб ЭМП ИНЧ проводили в течение 5 часов (4 Гц - 2часа, 6 Гц - 2 часа, 9 Гц - 1 час).

Элюцию вируса гриппа птиц с зерна проводили из проб, к которым добавляли по 50 см3 стерильного физраствора, тщательно встряхивали и отобранную жидкость центрифугировали при 2000 об/мин в течение 15 минут, а надостаток использовали для титрования.

Исходный вирус титровали на КЭ в разведениях 10"7 - 10"9, а пробы № 1 и 2 от исходного до разведения 10"2. КЭ инкубировали в течение 3 суток, погибшие эмбрионы помещали в холодильник. По окончании инкубирования с аллантоисной жидкостью каждого погибшего и живого КЭ ставили реакцию гемагглютинации (РГА) для подтверждения специфичности гибели. • Обеззараживание зернофуража непосредственно контаминированного вирусом гриппа птиц, на одиночных и суммарных частотах.

Зерно контаминировалн вирусом гриппа А птиц подтипа Н5Ш (штамм А/курица/Россия/22/05). К 5 кг зерна добавили 500 см3 вируса в разведении Ю"2. Зерно помещали в стеклянную емкость и на его поверхности устанавливали источник инфразвука. Обработку проб инфранизкими частотами проводили в течение 5 часов (4 Гц- 2 часа, б Гц- 2часа, 9 Гц - 1 час), соответственно отбирали пробы зерна: исходная и через 2, 4 и 5 часов для проверки на КЭ эффекта инактивации вируса. Обработанное зерно скармливали цыплятам (по 12 голов в группе) по 100 г. в день в течение 3 дней.

Обработанные пробы зерна использовали для выявления в них ВГП. Вес пробы зерна 50 г. Элюцию вируса гриппа птиц с зерна проводили из проб, к которым добавляли по 5 см3 стерильного физ. раствора, тщательно

встряхивали и элюат центрифугировали при 2000 об/мин в течение 15 минут, а надосадок использовали для заражения КЭ.

Титрование вируса на КЭ проводили по методике описанной выше.

- Оценка влияния ЭМП ИНЧ на лабораторных животных

Для определения влияния ЭМП НЧ на здоровье животных были проведены опыты на белых мышах и крысах, которые подвергались облучению на исследованных частотах и их режимах, применяемых для уничтожения вируса гриппа птиц Н5№ в суспензии, экранированном зернофураже и непосредственно контаминированном зернофураже. Применяли частоты от 3,4,5,6,7,8 и 9 Гц, при экспозиции 300 минут. Животных размещали в клетке (мышей весом 18-20 г по 10 особей), белых крыс по 5 особей. Клетки с животными устанавливали на соленоид и облучали в соответствии с режимом. После обработки животных кормили вволю гранулированным кормом в течение 14 дней.

Облучение белых крыс проводили на суммарных частотах (4+6+9 Гц) в течение 5 часов (4Гц-2 часа; 6 Гц-2часа и 9Гц-1час). Животных убивали методом декапитации, извлекали бедренные кости, которые фиксировали в течение 4 часов при температуре 4°С в смеси этанола с ледяной уксусной кислотой в соотношении 3:1. Затем материал проводили через 96% этанол, и через 30 мин. помещали в 70% этанол, перед анализом кусочки костного мозга окрашивали 1% ацетокармином и готовили препараты. Фиксацию клеток осуществляли через 24 часа (для максимального выхода хромосомных аберраций).

Определение отдаленных последствий (мутагенное действие) проводили, используя метод цитогенетического анализа клеток костного мозга белых крыс-самцов. Учитывали следующие типы нарушений: одиночные и парные фрагменты, хромосомные и хроматидные мосты, отставание и слипание. Митотический индекс с регистрацией профаз, метафаз, анафаз и телофаз определяли на делящихся и неделящихся клетоках.

- Оценка безвредности кормов, обработанных ЭМП ИНЧ.

Производственные образцы пшеницы, весом по 5 кг, обработанные ЭМП

ИНЧ частотами 4,6 и 9 Гц (4 Гц- 2 часа, 6 Гц- 2часа, 9 Гц - 1 час), и их суммарной последовательностью 4+6+9 Гц при 5 часовой экспозиции, скармливали вволю лабораторным животным (белые мыши, цыплята и белые крысы). Животных содержали по 10 особей отдельно.

- Расчёт экономической эффективности обеззараживания ЭМП ИНЧ.

При расчет затрат на обеззараживание зернофуража инфицированного

возбудителями (вирусом 115ЬТ1) гриппа птиц в расчете на тонну исходили из средних данных: себестоимости низкочастотных звуковых генераторов, наработки на отказ, срока службы, потребляемой мощности генераторов, времени работы в сутки, себестоимости электроэнергии (1 квт/час), охват облучения, допустимое количество кольцевых антенн.

Обработка контаминированных ВГП, тест-объектов (зернофураж, суспензии вирусов) проведена с использованием низкочастотных генераторов с применением в качестве излучателя соленоида и кольцевых антенн.

- Статистическая обработка результатов исследований Проводили по П.Ф. Ракитскому, 1967.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Некоторые электротехнические характеристики генераторов ГЗ-110 иГЗ-ПЗ.

ГЗ-110 является источником ЭМП ИНЧ с высокой стабильностью частоты в диапазоне от 0.01 до 1999999.99 Гц с дискретностью установки частоты 0.01 Гц. Генератор соответствует ГОСТ 10501-81. Генератор может эксплуатироваться в следующих условиях: температура окружающего воздуха от 278 до 313 К (от 5 до 40°С), относительной влажности до 95%, атмосферном давлении от 60 до 106 кПа (от 460 до 800 мм.рг.ст.), напряжение питающей сети 220В+22В, частотой 50 Гц±0,5 Гц., Мощность, потребляемая прибором от сети при номинальном напряжении, не превышает 80 ВА.

Г3-123 - генератор сигналов низкочастотный представляет собой источник синусоидального сигнала с повышенной выходной мощностью. Рабочие условия эксплуатации - температура окружающей среды от 5 до 40°С; относительная влажность воздуха до 98% при температуре 25°С, атмосферное давление 60-107 кПа (450-800 мм.рт.ст.). Генератор обеспечивает установку частоты выходного сигнала в диапазоне от 1 Гц до 299.9 кГц. Допускает непрерывную работу в рабочих условиях не менее 8 часов при сохранении своих технических характеристик. Питание прибора осуществляется от сети переменного напряжения (220±22)В, частотой (50±0,5) Гц. Мощность, потребляемая генератором от сети при номинальном напряжении, не превышает 140 В А.

3.2 Обеззараживания ЭМП ИНЧзерна, контаминированного E.coli 1257.

Экспериментальные исследования по оценки обеззараживающего воздействия ЭМП ИНЧ на контаминированный E.coli 1257 зернофураж представлены в таблице 1.

Таблица 1

Результаты обеззараживания ЭМП НЧ зернофуража,

контаминированного E.coli_____

Частоты, Гц Экспо зиция, час Степень контаминиро вания м.к./г Степень обеззараживая в %

пшеница овес ячмень

E.coli

4 2 500 96 96 96

6 2 97 97 98

9 1 98 98 99

4+6+9 5 99,8 100 99,9

контроль 500

Из таблицы следует, что частоты 4, 6 и 9 Гц при экспозиции 5 часов и мощностью около 4 Вт вполне достаточны для эффективного уничтожения кишечных бактерий. Вместе с тем, больший эффект был получен при суммировании частот. В результате чего обеззараживание достигает 99,9%.

3.3. Влияние ЭМП НЧ па эффективность снижения общей бактериальной обсемененности зернофуража.

Результаты изучения влияния ЭМП ИНЧ на изменение общей бактериальной обсемененности зернофуража (пшеница, овес, ячмень) представлены в таблице 2.

Таблица 2

Бактерицидная активность ЭМП НЧ на естественно контаминированном

зернофураже

Частоты Экспозиция Степень обеззараживания %

Гц час

пшеница овес ячмень

ОБО Степень ОБО Степень ОБО Степень

в обеззаражива в обеззаражива в обеззаражива

млн. -ПИЯ в % млн. -ния в % млн. -ния в %

м.к. м.к. м.к.

и гр. в гр. в гр.

4 2 2,7 93 3,1 94 6,1 93

6 2 97 96 96

9 1 97,8 97,7 98

4+6+9 5 99,9 99,9 99,9

контроль 2,7 3,1 6,1

Из данной таблицы видно, что ЭМП ИНЧ на частотах 4, 6 и 9 Гц показали высокую степень снижения общей бактериальной обсемененности. Степень обеззараживания составила 93-94% при частоте 4 Гц и 99,9% при суммарной обработке.

3.4. Влияние ЭМП НЧ на вирус гриппа птиц в суспензии вируса

В предварительных опытах провели оценку влияния ЭМП ИНЧ на

вирус гриппа птиц в суспензии. С этой целью вирус гриппа в разведениях 10' 10"3 и 10"6 объемом по 5 мл каждого помещали на соленойд и обрабатывали ЭМП звуковых частот 4, 6 и 9 Гц в течение 5 часов, после чего заражали куриные эмбрионы, инкубировали их в течение 72 часов при Т=37°С, затем собирали аллантоисную жидкость в стерильные пробирки и ставили реакцию гемагглютинации. Работа была проведена на базе ГНУ ВНИИВВиМ. Экспериментальные данные приведены в таблице 3.

Таблица 3

Влияние ЭМП ИНЧ на суспензии вируса гриппа птиц

№ п/п Разведение вируса Опыт контроль Гибель КЭ (погибшие/зараженные) Результаты РГА

1 ю-1 опыт 8/8 8/8

контроль 4/4 4/4

2 ю-3 опыт 8/8 8/8

контроль 4/4 4/4

3 10'" опыт 0/8 0/8

контроль 4/4 4/4

Показано, что обработка вируса гриппа птиц ЭМП НЧ с экспозицией 5 часов вызывает его инактивацию в разведении 10"6 , т.е. с инфекционной активностью 3 ЭЛД50/см3, при облучении ЭМП НЧ в диапазоне до 10 Гц.

Для обеззараживания вируса ГГ1 в более высоких концентрациях необходимо подобрать соответствующие режимы обработки. 3.5. Влияние ЭМП НЧ на вирус гриппа в экранированной смеси зерна. Зерно (пшеница) контаминировали вирусом гриппа птиц активностью 9 ЭЛД50 см3 (к 10 г зерна добавляли 5 см3 вируса в разведении 10"5 - проба №1, к 10 г зерна добавляли 5 см3 вируса в разведении 10'6 - проба №2). Пробы №1 и 2 в флаконах емкостью 50 см3 помещали в емкость (10 л) с зерном, глубина погружения 22 см. Обработку проб ЭМП №14 проводили в течение 5 часов (4 Гц - 2часа, 6 Гц - 2 часа, 9 Гц - 1 час).

Элюцию вируса гриппа птиц с зерна проводили из проб, к которым добавляли по 50 см3 стерильного физраствора, тщательно встряхивали и отобранную жидкость центрифугировали при 2000 об/мин в течение 15 минут, а надостаток использовали для титрования.

Титрование вируса проводили на куриных эмбрионах (КЭ). Исходный вирус титровали в разведениях 10"7 - 10'9, а пробы № 1 и 2 от исходного до разведения 10'2. КЭ инкубировали в течение 3 суток, погибшие эмбрионы

помещали в холодильник. По окончании инкубирования с аллантоисной жидкостью каждого погибшего и живого КЭ ставили реакцию гемагглютинации (РГА) для подтверждения специфичности гибели. Результаты опытов проведены в табл.4.

Таблица 4

Влияние ЭМП ИНЧ на вирус ГП в контаминированном зернофураже

№ п/п вирус гриппа А птиц подтип Н5№ Гибель КЭ пало/выжило Результаты РГА

Разведение 24ч 48 ч 72ч

1 Исходный вирус ю-9 0/4

10"я 2/4 2/4

Ю-7 2/4 2/4 4/4

2 Проба №1 (зерно+вирус в разведении Ю"5) Ю-2 0/4

Ю-1 0/4

10° 0/4

3 Проба №2(зерно +вирус в разведении 10"8) Ю-2 0/4

Ю-1 0/4

10° 0/4

Результаты опыта показали, что обработка инфрачастотами зернофуража,

контаминированного вирусом гриппа А птиц (из расчета 3 ^ ЭЛД50 см3 на 1 г зерна) вызывала полную его инактивацию.

3.6. Результаты обеззараживания ЭМП ИНЧ на одиночных и суммарных частотах зернофуража, коитаминированного вирусом гриппа птиц.

Зерно конгаминировали вирусом гриппа А птиц подтипа Н5Ш (штамм А/курица/Россия/22/05). К 5 кг зерна добавили 500 см3 вируса в разведении 10~2. Зерно помещали в стеклянную емкость и на его поверхности устанавливали источник инфразвука. Обработку проб инфранизкими частотами проводили в течение 5 часов (4 Гц- 2 часа, 6 Гц- 2часа, 9 Гц - 1 час), соответственно отбирали пробы зерна: исходная и через 2, 4 и 5 часов для проверки на КЭ эффекта инактивации вируса. Обработанное зерно скармливали цыплятам (по 12 голов в группе) по 100 г. в день в течение 3 дней.

Обработанные пробы зерна использовали для выявления в них вируса гриппа птиц (ГП). Вес пробы зерна 50 г. Элюция вируса гриппа птиц с зерна проводили из проб, к которым добавляли по 5 см3 стерильного физ. раствора, тщательно встряхивали и элюат центрифугировали при 2000 об/мин в течение 15 минут, а надосадок использовали для заражения КЭ.

Титрование вируса КЭ проводили по методике описанной выше.Результаты опытов отражены в таблице 5.

Таблица 5

Контроль вируса гриппа птиц на куриных эмбрионах.

№ п/п вирус гриппа А птиц подтип Н51М1 Гибель КЭ павшие/ж РГА Титр элд

Раз. 2.4ч 48ч 72ч

1 Исходный вирус 10"" 9,5

1<Г 3/4 +++

ю-7 2/4 2/4 ++++

10-" 3/4 1/4 ++++

2 Проба (зерно+вирус), через 0 часов ю-' 5,0

ю-6

кг4

Ю-4 2/4 ++

3 Проба №1 (зерно+вирус), через 2 часа обработки ЭМП ИНЧ Ю"5 3,25

ю-

10* 1/4 +

1<Г* 2/4 ++

4 Проба №2 (зерно+вирус) через 4 часа обработки ЭМП ИНЧ 10* 2,25

1/4 +

10" 1/4 1/4 ++

10* 2/4 2/4 ++++

5 Проба №3 (зерно+вирус), через 5 часов обработки ЭМП ИНЧ 10* 0,25

10*

10" 1/4 +

10"и 1/4 +++

Проведенными исследованиями установлено, что в результате обработки

инфразвуком контаминированного вирусом ГП зерна титр вируса снижался от 5,0 ^ ЭЛД50/СМ3 до 0,25 ^ЭЛД5(/см3 (на 4,75 ^ЭЛДда'см3), а снижение титра вируса в не обработанном зерне от 5,0 ^ЭЛД50/см3 до 3,75 ^ЭЛДзо/см3 (на 1,25 ^ЭЛДзо/см3). Это означает, что обработки инфразвуком контаминированного вирусом ГП зерна инактивирует вирус гриппа на 3,5 "^ЭЛДзо/см3 при экспозиции 5 часов.

Результаты влияния вируса ГП (Н5Ш), которым контаминированно зерно, на цыплятах (представлены в табл.6)

1 группа - зернофураж без вируса (контроль); 2 группа - зернофураж с вирусом (контроль) Ю'ОЛДзо/г; 3 группа - зернофураж с вирусом (контроль) 3,16108/г; 4 группа - зернофураж с вирусом (контроль); 5 группа -контаминированный и обеззараженный зернофураж (опыт) 106ЭЛД5о/г.

Таблица 6

Выделение вируса гриппа на цыплятах.

№№ групп Кол-во цыплят Расчетная доза ЭДЦм Сутки

1 2 3 4 5 6 7 8 9

1 12 0 0/12 0/12 0/12 0/12 0/12 0/12 0/12 0/12 0/12

2 12 3,0-108 0/12 0/12 0/12 1/12 0/11 1/11 0/10 0/10 2/12

3 5 6,3 Ю10 1/5 4/5 5/4 5/5

4 5 1,26-10'° 0/5 3/5 4/5 5/5 5/5

5 12 3,0-10" 0/12 0/12 0/12 0/12 0/12 0/12 0/12 0/12 0/12

Скармливание цыплятам контаминированного вирусом гриппа ГП зерна обработанного инфразвуком не вызывает их заболевания. 3.7. Влияние ЭМП НЧ на состояние здоровья животных

Для определения влияния ЭМП НЧ на здоровье животных были проведены опыты на белых мышах и крысах, которые подвергались облучению на исследованных частотах и их режимах, применяемых для уничтожения вируса гриппа птиц Н51Ч1 в суспензии, защищенном зернофураже и в зернофураже. Применяли частоты от 3 и 9 Гц, при экспозиции 60 и 120 минут. Животных размещали в клетке массой 18-20 г по 10 мышей, по 5 белых крыс.

Клетки устанавливали на соленоид и облучали в соответствии с режимом. После обработки животных кормили вволю гранулированным кормом в течение 14 дней. Результаты исследований представлены таблице 7.

Таблица 7

Частоты, Гц Экспозиция в минутах

60 мин 120 мин

кол-во животных пало живы кол-во животных пало живы

белые мыши

3 10 - 10 10 - 10

4 10 - 10 10 - 10

5 10 - 10 10 - 10

6 10 - 10 10 - 10

7 10 - 10 10 - 10

8 10 - 10 10 - 10

9 10 - 10 10 - 10

контроль 5 - 5 5 - 5

120 мин

Частота, Гц кол-во животных пало живы

Белые крысы

3-9 5 - 5

контроль 5 - 5

В результате опытов не было установлено отрицательного влияния на ЭМП НЧ. Падежа не было. Данные таблицы свидетельствуют, что ни одна из испытанных частот (для белых мышей), и суммарное воздействие частот в течение 300 минут (для белых крыс), не оказывали отрицательного влияния на здоровье животных. Свидетельством безвредности ЭМП ИНЧ при облучении лабораторных животных, являются гематологические показателей крови животных, которые представлены в таблице 8.

Таблица 8

Показатели крови лабораторных животных после воздействия ЭМГ1 НЧ

Свойства и состав крови Крыса белая Мышь белая

Средние показатели опыт Пределы колебаний норма Средние показатели опыт Пределы колебаний Норма

1 2 3 4

Эритроциты млн 7,5 5,5-11,0 9,5 8,0-11,0

Гемоглобин % 16,0 13,0-19,0 16,0 14,0-18,0

Цветовой показатель 0,8 0,62-0,94 1,0 0,9-1,1

Гематокрит 46,0 - 44,0 -

Тромбоциты тыс 400,0 200,0-600,0 300,0 200,0-400,0

Лейкоциты% 10,5 8,0-23,0 9,5 6,0-13,0

Базофилы% 0,5 0,0-1,0 1,0 0,0-2,0

Эозинофилы% 3,0 1,0-5,0 2,0 0,0-4,0

Палочкоядерные% 2.0 1,0-4,0 3,0 1,0-5,0

Сегментоядерные % 26,5 20,0-35,0 23,0 18,0-30,0

Лимфоциты% 65,0 55,0-75,0 68,0 60,0-78,0

Моноциты % 3,0 1,0-5,0 3,0 2,0-5,0

Из данных таблицы видно, что существующих отклонений от нормы в гематологической картине нет. Все показатели крови животных подвергшихся воздействию ЭМП ИНЧ находятся в пределах физиологической нормы.

Влияние ЭМП ИНЧ на мутагенное действие проводили на белых крысах. Облучение белых крыс проводили па суммарных частотах (4+6+9 Гц) в течение 5 часов (4Гц-2 часа; 6 Гц-2часа и 9Гц-1час). Животных убивали методом декапитации, извлекали бедренные кости, которые фиксировали в течение 4 часов при температуре 4°С в смеси этанола с ледяной уксусной кислотой в соотношении 3:1. Затем материал проводили через 96% этанол, и через 30 мин помещали в 70% этанол. Перед анализом кусочки костного мозга окрашивали 1% ацетокармином и готовили препараты. Фиксацию клеток костного мозга осуществляли через 24 часа (для максимального

выхода хромосомных аберраций). В результате исследований установлено, что количество хромосомных аберраций у животных опытной группы достоверно, не отличалось от контроля, что свидетельствует об отсутствии мутагенного действия ЭМП НЧ (табл.9).

Таблица 9

Цитогенетический анализ клеток костного мозга животных

подвергавшихся воздействию ЭМП НЧ

Группы Количество Митотичес кий индекс %

животных в группе проанализи рованных клеток клеток с истинными абберациями отклонения клеток со слипаниями в % клеток с отстования-ми в %

опыт 2 1800 4,1 ±0,3 Р=Ю,05 0,5±0,07 Р=0,05 0,28±0,12 Р=0,05 2,1±0,09 Р=0,05

контроль 2 1800 3,б±0,5 0,5±0,18 0,2б±0,13 2,1±0,11

3,8. Экономическая эффективность обеззараживания зернофуража ЭМПИНЧ

Расчет затрат на обеззараживание 1 тонны зернофуража. Средние исходные данные:

Срок службы -10 лет

Себестоимость низкочастотных генераторов - от 10 тыс. руб. Наработка на отказ генератора -8000 часов Потребляемая мощность - 100 Вт Время работы в сутки - 8 часов Себестоимость электроэнергии - 3 руб. кВт/час. Распространение ЭМП ИНЧ (диаметр) - 3 метра Допустимое количество антенн: при меньшем сопротивлении количество увеличивается пропорционально соответствия входного сопротивления генератора и сопротивления антенн.

4 п

Цикл работы - 5 часов; Объем шара - V = - 7гН( объем облученного объекта

кольцевой антенной); Площадь шара S=4nr2 (площадь облученного объекта исходя из площади шара).

Расчетная стоимость обработки 1 тонны зернофуража от 3 до 3,5 рублей.

4. ВЫВОДЫ.

1. Разработан метод и технология обеззараживания зернофуража, контаминированного вирусом гриппа птиц (H5N1), основанные на использовании электромагнитных полей низкой частоты.

2. Установлены параметры деконтаминации зернофуража на примере санитарно-показательного микроорганизма E.coli шт. 1257, на частоте 4 Гц при экспозиции двух часов степень обеззараживания составила 96%; 6 Гц при экспозиции двух часов степень обеззараживания составила 97%; 9 Гц при экспозиции одного часа степень обеззараживания составила 98%, а при суммировании частот с общей экспозицией пять часов степень обеззараживания составила 99,8%.

3. . Установлено, что ЭМП НЧ при обработке контаминированного зернофуража в режиме суммарных частот 4, 6 и 9 Гц в течение 5 часов оказывают инактивирующее воздействие на вирус гриппа птиц.

4. Определены режимы обеззараживания ЭМП ИНЧ зернофуража контаминированного вирусом гриппа птиц

5. Установлена безопасность не контаминированного зернофуража, обработанного ЭМП НЧ, для лабораторных животных.

6. Установлена безопасность влияния ЭМП ИНЧ на лабораторных животных.

7. ЭМП НЧ в режиме облучения суммарными частотами (4+6+9 Гц) в течение 5 часов (4Гц-2 часа; 6 Гц-2часа и 9Гц-1час) не оказали мутагенного воздействия на лабораторных животных.

8. Обработка одной тонны кормовых средств ЭМП НЧ составит от 3 до 3,5 руб.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Разработан метод и технология обеззараживания зернофуража, контаминированного вирусом гриппа птиц (1I5N1), основанный на использовании электромагнитных полей низкой частоты.

Предложены режимы обеззараживания, обеспечивающие уничтожение вируса гриппа птиц (H5N1 ) в зернофураже. На основании проведенных исследований разработаны:

- «Технология обеззараживания зернофуража от вируса гриппа птиц инфранизкими частотами звукового диапазона» (Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 11.06.2010 г.).

- «Методическое пособие по обеззараживанию зернофуража от патогенных микроорганизмов и вирусов (вирус гриппа птиц H5N1) инфранизкими частотами звукового диапазона» (Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 25.10.2010 г.)

- Патент "Способ обеззараживания кормовых средств для сельскохозяйственных животных от возбудителей инфекции" № 2414931, заявка № 2009148152/15. Опубликовано: 27.03.2011 Бюл. 9.

6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ.

1. Смирнов A.M., Дорожкин В.И., Иванов В.Г., Замула C.B., Колбасов Д.В., Кушнир А.Т., Смирнов В.Н. Обеззараживание зернофуража контаминированного вирусом гриппа птиц. Российский журнал. Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии №2(4) 2010 г. стр. 38-42

2. Замула C.B. Влияние электромагнитных полей низких частот на выживаемость вируса гриппа птиц. Российский журнал. Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии №1(3), 2010г. стр.65

3. Патент "Способ обеззараживания кормовых средств для сельскохозяйственных животных от возбудителей инфекции" № 2414931, заявка № 2009148152/15. Опубликовано: 27.03.2011 Бюл. 9

ВНИИВСГЭ, 2011 г., г. Москва, Звенигородское шоссе, дом 5 Заказ 384/3, тираж 80 экз.

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Замула, Сергей Владимирович

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1 Дезинфекция в системе ветеринарно-санитарных противоэпизоотических мероприятий.

2.2 Грипп птиц.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Обеззараживание зернофуража, контаминированного вирусом гриппа птиц, электромагнитными полями инфранизких частот"

1.1. Актуальность темы.

Инфекционные болезни играют значительную роль в патологии животных. Они возникают при внедрении возбудителя в организм животного и способны передаваться от больного животного к здоровому. Этот факт определяет потенциальную возможность непрерывной передачи возбудителя, массовость поражения животных и тенденцию к его широкому территориальному распространению. Инфекционные болезни наносят животноводству большой экономический ущерб, а некоторые из них, такие как грипп птиц, передаются от животного человеку.

Ветеринарная практика постоянно нуждается в высокоэффективных и экологически безопасных средствах защиты животных от инфекционных болезней. В настоящее время при значительном сокращении производства отечественных дезинфицирующих препаратов и высокой стоимости зарубежных, изыскиваются новые средства и методы, обеспечивающие выполнение задач по ликвидации источников инфекции.

Санация объектов окружающей среды является важнейшим звеном в технологии производства сельскохозяйственной продукции высокого качества. В настоящее время для этих целей используют различные физические, химические, биологические методы, к числу которых относятся УФ -излучение, гамма -излучение, ультразвук, озонирование, термическая обработка, орошение различными растворами, а также ряд химических веществ: кислоты, щёлочи, перекись водорода, аммиак и др.

Однако большинство применяемых химических средств дезинфекции имеют ряд недостатков. Так щелочные и кислотные препараты оказывают токсическое воздействие на животных и людей, проявляют коррозионное воздействие на технологическое оборудование и, в определённой степени, загрязняют окружающую среду, если не использовать соответствующие препараты для их нейтрализации. В большей степени требованиям экологической безопасности отвечают вышеупомянутые физические методы обеззараживания, однако их эффективное использование ограничивается узкими территориальными рамками применения, сложностью перемещения технологического оборудования и технических средств. Поэтому постоянно идёт процесс поиска новых, перспективных, высокоэффективных и экологически безопасных методов дезинфекции, позволяющих обеззараживать не только отдельные предметы, помещения и материалы, но также значительные по размерам загрязнённые территории и большие массы зерновых кормов. К числу таких методов относится использование электромагнитных полей инфранизких частот (ЭМП ИНЧ), способных проникать во все сферы обитания живых организмов (глубины морей и океанов, толща земной коры). Однако исследования по применению ЭМП ИНЧ в ветеринарной практике ограничены и требуют экспериментального изучения.

В связи с этим разработка метода санации объектов ветеринарно-санитарного надзора ЭМП ИНЧ, и, в частности, зернофуража, является весьма актуальной, особенно в условиях напряженной эпизоотической ситуации по гриппу птиц и другим опасным заболеваниям. 1.2. Цель и задачи исследований

Целью работы являлось экспериментальное обоснование и разработка нового метода и режимов обеззараживания зернофуража, контаминированного вирусом гриппа птиц.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Определить эффективные электротехнические параметры звуковых генераторов (ГЗ-110 и ГЭ-123) ЭМП ИНЧ, обеспечивающих получение стабильных показателей (по форме сигналов, мощности получаемых частот, возможности перестраивания без искажения заданных величин и учета показателей на приборах высокой точности и чувствительности).

2. Установить оптимальный режим деконтаминиции Е.соН 1257 ЭМП ИНЧ в контаминированном зернофураже.

3. Установить влияние ЭМП ИНЧ на снижение общей бактериальной обсемененности (ОБО) зернофуража.

4. Изучить влияние ЭМП ИНЧ на жизнеспособность вируса гриппа птиц (ВГП) в суспензии вируса и контаминированном зернофураже.

5. Определить оптимальные режимы обеззараживания инфицированного вирусом гриппа птиц зернофуража.

6. Установить влияние ЭМП ИНЧ на лабораторных животных (белые мыши, белые крысы).

7. Определить безопасность обработанного ЭМП ИНЧ зернофуража для лабораторных животных.

8. Определить экономическую эффективность обработки зернофуража ЭМП ИНЧ.

1.3. Научная новизна

Впервые разработан метод и технология обеззараживания зернофуража, контаминированного вирусом гриппа птиц (Н5М1), основанные на использовании электромагнитных полей низкой частоты.

Установлена полная инактивация вируса гриппа А кур в контаминированном зернофураже и безопасность обезвреженного зернофуража для лабораторных животных.

Новизна работы подтверждена патентом на изобретение № 2414931, заявка № 2009148152/15. Опубликовано: 27.03.2011, Бюл. 9.

1.4. Практическая значимость

Состоит в возможности использования ЭМП ИНЧ для обеззараживания зернофуража, контаминированного вирусом гриппа птиц.

Разработана «Технология обеззараживания зернофуража от вируса гриппа птиц инфранизкими частотами звукового диапазона» (Утв. отделением ветеринарной медицины РАСХН 11.06.2010 г.) и «Методическое пособие по обеззараживанию зернофуража от патогенных микроорганизмов и вирусов (вирус гриппа птиц H5N1) инфранизкими частотами звукового диапазона» (Утв. отделением ветеринарной медицины РАСХН 25.10.2010 г.).

1.5. Личный вклад аспиранта

Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно в лаборатории токсикологии и санитарии кормов ГНУ ВНИИВСГЭ в рамках задания 08.05 раздела 08.05.02.08. Отдельные этапы работы с возбудителем гриппа птиц выполнены при методической и консультативной помощи доктора ветеринарных наук Кушнира А.Т. и ведущего научного сотрудника, кандидата биологических наук Смирнова В.Н. (ГНУ ВНИИВВиМ).

1.6. Апробация и публикация результатов исследований.

Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета ГНУ ВНИИВСГЭ в 2008-2010 г.г.

На секции «Ветеринарная санитария, гигиена и экология» отделения ветеринарной медицины РАСХН 2009 г. Москва.

По материалам диссертации опубликовано две научные работы в журналах, рекомендованных в перечне ВАК, получен один патент.

1.7. Основные положения, выносимые на защиту.

Метод и технология обеззараживания зернофуража от патогенных микроорганизмов инфранизкими частотами звукового диапазона.

Безопасность обработанного ЭМП НЧ зернофуража для лабораторных животных.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза", Замула, Сергей Владимирович

5. ВЫВОДЫ

1. Разработан метод и технология обеззараживания зернофуража, контаминированного вирусом гриппа птиц (Н5Ш), основанные на использовании электромагнитных полей низкой частоты.

2. Установлены параметры деконтаминации зернофуража на примере санитарно-показательного микроорганизма Е.соН шт. 1257, на частоте 4 Гц при экспозиции двух часов степень обеззараживания составила 96%; 6 Гц при экспозиции двух часов степень обеззараживания составила 97%; 9 Гц при экспозиции одного часа степень обеззараживания составила 98%, а при суммировании частот с общей экспозицией пять часов степень обеззараживания составила 99,8%.

3. Установлено, что ЭМП ИНЧ при обработке контаминированного зернофуража в режиме суммарных частот 4, 6 и 9 Гц в течение 5 часов оказывают инактивирующее воздействие на вирус гриппа птиц.

4. Определены режимы обеззараживания ЭМП ИНЧ зернофуража, контаминированного вирусом гриппа птиц.

5. Установлена безопасность неконтаминированного зернофуража, обработанного ЭМП ИНЧ, для лабораторных животных.

6. Установлена безопасность влияния ЭМП ИНЧ на лабораторных животных.

7. ЭМП ИНЧ в режиме облучения суммарными частотами (4+6+9 Гц) в течение 5 часов (4 Гц-2 часа; 6 Гц-2часа и 9 Гц-1 час) не оказали мутагенного воздействия на лабораторных животных.

8. Обработка одной тонны кормовых средств ЭМП ИНЧ составит от 3 до 3,5 руб.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Разработан метод и технология обеззараживания зернофуража, контаминированного вирусом гриппа птиц (ГОШ), основанный на использовании электромагнитных полей низкой частоты.

Предложены режимы обеззараживания, обеспечивающие уничтожение вируса гриппа птиц (Н5Ш) в зернофураже. На основании проведенных исследований разработаны:

- «Технология обеззараживания зернофуража от вируса гриппа птиц инфранизкими частотами звукового диапазона» (Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 11.06.2010 г.).

- «Методическое пособие по обеззараживанию зернофуража от патогенных микроорганизмов и вирусов (вирус гриппа птиц Н5№) инфранизкими частотами звукового диапазона» (Утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 25.10.2010 г.)

- Подана заявка в Роспатент "Способ обеззараживания кормовых средств для сельскохозяйственных животных от возбудителей инфекции" № 2414931, заявка № 2009148152/15. Опубликовано: 27.03.2011 Бюл. 9.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Замула, Сергей Владимирович, Москва

1. Абдуллина, З.М. Биологическое действие магнитных полей на живой организм/ Фрунзе: Кыргызстан, 1975. - 148 с.

2. Алферов, O.A. Влияние ослабленного геомагнитного поля на устойчивость кишечной палочки к ультрафиолетовым лучам / Алферов O.A., Кузнецова Т.В. // Космическая биология и авиакосмическая медицина. 1981. - Т. 15, № 04.

3. Аржаков, В.Н. Дезинфекция и ее место в системе противоэпизоотических мероприятий / Аржаков В.Н., Аржаков Н.В. // БИО.- 2003. №7. - С. 9-21.

4. Аржаков, В.Н. Основные требования безопасности при проведении дезинфектологических работ в ветеринарии / Аржаков В.Н. , Ермакович М.М., Аржаков П.В //БИО.- 2004. № 7. - С.36-37.

5. Бахир, В.М. Эффективность и безопасность химических средств длядезинфекции, предстерилизационной очистки и стерилизации / Бахир, В.М. и др. // Дезинфекционное дело. 2003. - №1. - С. 29-36.

6. Бецкий, О.В. Миллиметровые волны в биологии / Бецкий О.В., Голант М.Б., Девятков Н.Д. М.: Знание. Серия «Физика», 1996. - 436 с.

7. Бурделеев, Т.Е. К вопросу обеззараживания сыпучих кормов /Бурделеев Т.Е., ЖильцовВ.Г. //Ветеринария. -1961.-10.- С. 64-65.

8. П.Бушканец, Т.С. Применение ионизирующего облучения для предупреждения микробиологической порчи продуктов / Бушканец, Т.С. //сб. Рациональная обработка пищевых продуктов. М.: Атомиздат. 1971. -с. 63-65.

9. Буянов, В.В. Дезинфекция последствий биотерроризма / Буянов В.В. и др. // Черноголовка, 2005. — 175 с.

10. Валькович, В.А. Дезинфекционное дело / Валькович В.А. М.: 1987.

11. Вашков, В. И. Средства и методы стерилизации применяемые в медицине / Вашков В.И. М.: Медицина, 1972.- С. 175-201.

12. Вашков, В.И. Антимикробные средства и методы дезинфекции при инфекционных болезнях / Вашков В.И. М.: Медицина, 1977. - 295 с.

13. Вашков, В.М. Вирусные и бактерицидные свойства аэрозолей некоторых химических препаратов / Вашков, В.М. // Труды ЦНИИДИС 1974. - вып.25.

14. Вашков, В.И. Антимикробные средства и методы дезинфекции при инфекционных заболеваниях / Вашков, В.И. Медицина, 1977. - С.З0-33.

15. Веткина, И.Ф. Современный подход к выбору дезинфицирующих средств в системе профилактики внутрибольничных инфекций / Веткина И.Ф. и др. // ФАР Миндекс- Практик. 2005. - №7. - С. 13-20.

16. Войтинский, Е.Я. О влиянии слабого магнитного поля на электрическуюактивность мозга / Войтинский, Е.Я., Гендельс Б.С., Гольцман Б.И. и др. //i

17. Магнитное поле в медицине. Фрунзе: Научные труды медицинского института. 1974. - С. 21 - 22.

18. Волков, В.М. Современные средства и методы стерилизации, применяемые в медицине / Волков, В.М. М: Медицина, 1973. - С. 36-38.

19. Воробьева, A.M. Изучение влияния ИК облучения на микрофлору зернового сырья, применяемого в комбикормовой промышленности/ Воробьева A.M. // Труды ВНИИПК, 1978. - В. 14. С.33-34.

20. Воробьева, О.Н. Антибактериальная активность дезинфектантов нового поколения / Воробьева A.M. и др. // Материалы VIII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: сб. статей. Т.4. М., - 2002. -С. 9-10.

21. Ганелина, И.Е. Инфаркт миокарда и электромагнитное поле Земли / Ганелина И.Е., Чурина К., Янушкене Т.С. // Управление длительностью висцеральных систем. Сб. науч. тр. JL: Наука, 1983. - 12-24.

22. Герасимов, В.Н. Антимикробные и дезинфицирующие свойства двух хлорактивных дезинфектантов: усовершенствованного гипохлорита натрия и ДТСГК / Герасимов В.Н.и др. // Дезинфекционное дело. 1999. - №4. - С.10-18.

23. Герасимов, В.Н. и др. Особенности механизма действия перекисного дезинфектанта ПВК-2 на микробные клетки и споры / Герасимов В.Н.и др. // Дезинфекционное дело. 1998. - №1. - С. 12-19.

24. Герасимов, В.Н. Микробиологические, биофизические и биохимические исследования механизма действия дезинфектанта Метацид на бактерии / Герасимов В.Н. и др. // Дезинфекционное дело. 1998. - №5. - С. 19-25.

25. Голов, Е.А. Антимикробные и физико-химические свойства новых перекисных дезинфектантов: дис. . канд. биол. наук: 03.00.06/ Голов Е. А. М.,2005. - С. 11-44.

26. Григорьев, B.C. Резонансная импульсная электромагнитная ст. / Григорьев B.C. Монография. Ярославль, 1999. 388 с.

27. Григорьев, Ю.Г. Проблемы электромагнитной безопасности населения. Фундаментальные и прикладные исследования / Григорьев B.C. // М. 1999. -45 с.

28. Гудкова, Е.И. Прошлое, настоящее и будущее четвертично-аммониевых соединений / Гудкова Е.И., Красильников A.A., Рябцева Н.Л. // Дезинфекционное дело. 2002. - №4. - С. 18-22

29. Девятков Н.Д. Миллиметровые волны и их роль в процессе жизнедеятельности / Девятков Н.Д., Голант М.Б., Бецкий O.B. М.: Радио, 1991.

30. Дмитриев, И.М. Гражданская оборона на объектах промышленного комплекса/ Дмитриев И.М., Курочкин Г.Я. // М.: Аэропромиздат, 1990. С.351.

31. Дудницкий, И.А. Дезинфицирующие средства / Дудницкий И.А., Дергачев П.П., Гришин В.В. // Ветеринария. 1989. №2. - С.58.

32. Думанский, Ю. Д. Влияние электромагнитных полей радиочастот на человека / Думанский Ю.Д., Сердюк А. М., Лось И. П. Киев : Здоров'я, 1975. - 159 с.

33. Еськов, Е.К. Экологические аномалии у пчел и ос, пораженные действием электрических полей / Еськов Е.К. // Экология, 1982. №6. - С. 76-78.

34. Еськов, Е.К. Биофизика / Еськов Е.К., Сапожников A.M. // 1976. Т. 21. - № 6. С. 1097.

35. Ефимов, K.M. Полигуанидины класс малотоксичных дезсредств пролонгированного действия / Ефимов K.M., Гембицкий П.А., Снежко А.Г. // Дезинфекционное дело. - 2000. - №4. - С.5-13.

36. Железный, A.B. Сравнительная антимикробная активность некоторых дезинфицирующих средств на основе четвертично-аммониевых соединений вотношении возбудителей особо опасных инфекций: дис.канд мед. наук:0300.07 / Железный A.B. Волгоград, 2002. - 141с.

37. Закомырдин, A.A. Аэрозольный метод дезинфекции птичников при ларинготрахеите в отсутствии и присутствии птиц / Закомырдин A.A. // Труды ВНИИВС, М.: 1964, Т.24. - С.84.

38. Закомырдин, A.A. Дезинфекция помещений в присутствии птицы мелкораспыленным раствором гипохлорита натрия / Закомырдин A.A.// Труды ВНИИВС, Т.25. - 1966.

39. Закомырдин, A.A. Научные достижения и перспективы применения аэрозолей в промышленном животноводстве / Закомырдин A.A. // Трудны ВНИИВС, 1981. -Т.70. С.82-90.

40. Замятина, Л.И. Комплексная оценка вирулицидной активности дезинфектантов на основе четвертичных аммониевых соединений в отношении вируса гепатита А /Замятина Л.И. и др. // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2007. - №1. - С. 37-41.

41. Иванов, В.Г. Обеззараживание кормов зараженных сальмонеллами / Иванов

42. В. Г. // Тезисы докл. на Всесоюзном симпозиуме по проблемам ветеринарной микологии и санитарии кормов. — М.: 1970. С. 80-82.

43. Иванов, В.Г. Обеззараживание кормов гамма-лучами / Иванов В.Г. // Проблемы ветеринарной санитарии, 1970. Т.37. - С.72-75.

44. Иванов, В.Г. Обеззараживание кормов муравьиной кислотой // Иванов В.Г., Андреева З.А. Зоогигиена и ветеринарно-санитарные мероприятия в промышленном животноводстве: Книга. 1984. - С.63-66.

45. Иванов, В.Г. Снижение бактериальной микрофлоры смесью органических кислот /Иванов В.Г., Андреева З.А. // Труды ВНИИВС, 1986. -Т. 85. -С.106-111.

46. Иванов, В.Г. РИЭС метод улучшения ветеринарно-санитарного качествакормовых средств / Иванов В.Г. , Григорьев B.C., Кушнарев А.В. и др. //

47. Проблемы ветеринарной санитарии и экологии. Сб. научных трудов, 1996. — Т.102. С.88-95.

48. Иванов, В.Г. Влияние электромагнитных инфранизких частот на биологические свойства некоторых патогенных микроорганизмов / Иванов В.Г., Журенко С.Г. // Материалы первого съезда ветеринарных фармакологов России (21-23 июня). Воронеж. 2007. С. 256-257.

49. Иванов, В.Г. Обеззараживание объектов ветеринарно-санитарного надзора / Иванов В.Г., Журенко С.Г. // РЖ. Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии, 2009. №2. - С.27-30.

50. Иванов, В.Г. Способ обеззараживания кормов / Иванов, В.Г., Клычев Е.М., Ромалийский B.C., Карташов С.Г. // Кн. Научное обеспечение реализации направления «Ускоренное развитие животноводства». Сб. научных трудов ВНИИМЖ, 2006. Т. 16. - С.64-68.

51. Иванов, В.Г. Обеззараживание кормов гамма-лучами / Иванов В.Г., Оксененко О.Ф. // Проблемы ветеринарной санитарии. Труды ВНИИВС, 1970. Т.37. -С.72-75.

52. Иванов, В.Г. Обеззараживание комбикормов ультрафиолетовым излучением / Иванов В.Г., Кушнарев A.B., Новиков H.H., Ромалийский B.C.// В кн. Влажная, аэрользоная дезинфекция в ветеринарии. Труды ВНИИВС, 1986 Т.84. -С.130-133.

53. Иванова, Е.Б. Новые отечественные разработки дезинфектантов для неспецифической профилактики инфекционных заболеваний / Е.Б. Иванова,

54. A.M. Иванов, C.B. Ковалев // Ветеринарная медицина. 2006. - №1. - С.9-10.

55. Иванова, Е.Б. Применение разработанных отечественных дезинфицирующих средств на основе четвертично-аммониевых соединений в профилактике внутрибольничных инфекций: дис. .канд. мед. наук : 14.00.30 / Иванова Е.Б. -М., 2001.- 168 с.

56. Кардаш, Г.Г. Ассоциаты на основе хлоргексидина и синергетический эффект / Кардаш Г.Г. // Материалы VIII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: сб. статей. Т.4. М., 2002. - С.21-22.

57. Карпова, Л.И. Обеззараживание гранулированных комбикормов для кролиководческих хозяйств / Л.И. Карпова, Мальцев B.C., Иванов В.Г., Огай

58. B.А. //Ветеринария. — М., 1983. — № 7. С.28-30.

59. Кострюкова, H.H. Современные представления о механизмах патогенного действия менингококка / Кострюкова H.H., Бехало В.А. // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2003. - №3. - С.40-43.

60. Кривопишин, И.П. Озон в промышленном производстве / Кривопишин, И.П. // М.: Россельхозиздат, 1979. 96 с.

61. Кушнир, А.Т. Вирулентность патогенных штаммов вируса гриппа птиц A/H5N1/ Кушнир А.Т., Казарян A.C., Щелканов М.Ю., Львов Д.К. // Ветеринария. 2008, - VIII - С. 37.

62. Кушнир А.Т. Грипп у животных / Кушнир А.Т., Колбасов Д.В. // Большая Российская энциклопедия. М.: 2007. - С. 21-22.

63. Кушнир, А.Т. Дезинфекция объектов электрохимически активным раствором хлорида натрия при гриппе птиц / Кушнир А.Т., Смирнов В.Н. и др. // Ветеринария. 2008, -VIII. - С. 37.

64. Лазаревич, В.Г. Влияние электромагнитных полей на обмен веществ в организме / Лазаревич, В.Г. // Львов. Вища школа. 1978. 10 с.

65. Леднев, В.В. Биоэффекты слабых комбинированных, постоянных и переменных магнитных полей. / Леднев В.В. / /Биофизика, 1996. Т.41. -вып.1. -С.224-232.

66. Лехтлаан-Тыниссон, Н.П. Действие магнитного поля низкой частоты на культуры бактерий E.coli / Лехтлаан-Тыниссон Н.П., Шапошникова Е.Б., Холмогоров В.Е. // Вестник ВГУ / Воронеж. -2003. № 12. - С. 145-147.

67. Львов, Д.К. Комплексные исследования по экологии вирусов/ Львов Д.К. //В кн.: Экология вирусов. М., 1982. - С. 5-9.

68. Львов, Д.К. Эпизоотия среди лебедей-шипунов (Cygnus olor) в нижней дельте Волги (ноябрь 2005 г.), вызванная высокопатогенным вирусом гриппа A/H5N1 /Львов Д.К., Щелканов М.Ю., Дерябин П.Г.и др.//Вопросы вирусологии. 2006. - Т. 51. - № 3. - С. 10-16.

69. Лярский, П.П. Дезинфекция аэрозолями / Лярский П.П. Цетлин В.М. М.: Медицина, 1981. С. 176.

70. Макеев, В.Б. Экспериментальные исследования физиологического действия электромагнитного поля инфранизкой частоты на систему крови животных. Автореф. дис. канд. биол. наук / Макеев В.Б. Симферополь, 1979. - 25 с.

71. Макеев, В.Б. Физиологически активные инфрачастотные магнитные поля / Макеев В.Б., Темурьянц H.A. Владимирский Б.М., Тишкина О.Г. // В сб. Электромагнитные поля в биосфере. Биологическое действие ЭМП. 1989. -Т.П.-С. 62-72.

72. Макеев, В.Б. Определение биологически активных частот переменных магнитных полей в диапазоне инфранизких частот / Макеев В.Б., Темурьянц H.A. Владимирский Б.М // Живые системы и электромагнитные поля. Томск: изд-во Томского ун-та. 1981. С.71-84.

73. Морозова, Н.С. Дезрезистентность микроорганизмов в проблеме внутрибольничных инфекций / Морозова Н.С., Корженевский C.B., Теленев А.В.// Вестник ассоциации. 2001. - №3 С. 4-5

74. Музалевская, Н.И. Физиологическое проявление действия магнитного поля малой напряженности в диапазоне сверхнизких частот / Музалевская Н.И. Дисс. ЛГУ. С-Петербург, 1978.

75. Музалевская, Н.И. Магнитные поля сверхнизких частот малых напряженностей и состояние адаптационного резерва у подопытных животных/ Музалевская Н.И. // Проблемы космической биологии. М,: Наука, 1982. Т.43. С.82-98.

76. Мухамедшина, А. Р. Оборудование для птицеводства / Мухамедшина А. Р. //Ветеринария. 2005. - N 3. - С. 12-13.

77. Никитин, В. Н. Лукашенко, Л. П. Баротермическая обработка комбикорма для свиней / Никитин В. Н., Лукашенко Л. П., Аравина Р. Н. // Животноводство. 1979. -№ 1.- С. 26-28

78. Опалинская, A.M. Влияние естественных и искусственных электромагнитных полей на физико-химическую и биологическую системы / Опалинская A.M., Агулова ЛИЛ Омск, изд-во Томского ун-та. 1984. 190 с.

79. Павлова, И.Б. Дезинфицирующая активность йодеза и его композиций против микобактерий / Павлова И.Б. и др. // Ветеринария. 2003. - №7. - С.9-11

80. Павлович, С.А. Влияние магнитных полей на микроорганизмы.// Влияние магнитных полей на биологические объекты / Павлович С.А. М.: Наука, 1971. -С. 41-45.

81. Минздравсоцразвития России; Роспотребнадзор; РАМН;ВНПОЭМП. М.: Санэпидмедиа, 2007. - С. 359.

82. Пантелеева, Л.Г. Вирулицидная, туберкулоцидная и фунгицидная активность новых средств из группы поверхностно-активных веществ / Пантелеева Л.Г. и др. // Дезинфекционное дело. 1998. - №3. - С.16-17.

83. Пантелеева, Л.Г. Современные дезинфицирующие средства для профилактики внутрибольничных инфекций / Пантелеева Л.Г.// Материалы VIII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: сб. статей. М., 2002. Т.4.-С.45-46.

84. Плеханов, Г.Ф. Основные закономерности низкочастотной электромагнитной биологии / Плеханов Г.Ф. Изд. Томского Университета, Томск, 1990.

85. Поляков, A.A. Актуальные вопросы дезинфекции. М.: 1967. - С.9

86. Поляков, A.A. Ветеринарная санитария. М.: Из-во Колос, 1979. - С.54.

87. Поляков, A.A. Ветеринарная дезинфекция / А.А.Поляков. М.: Колос, 1979. -416с.

88. Поляков, A.A. Аэрозоли для дезинфекции в промышленном животноводстве / Поляков A.A., Ярных B.C. Закомырдин A.A. // Ветеринария. 1981. -№1.- С.34-37.

89. Поляков, A.A. Высокоточные приборы для измерения магнитных параметров / Поляков A.A. // Электроника. Наука. Технология. Бизнес. М.: 1989. -№1. - С.37-38.

90. Попов, Н.И. Достижения НИР в области дезинфекции. Проблемы ветеринарной санитарии и экологии / Попов Н.И., Волковский Г.Д., Григанова Н.В., Мичко С.А. // Сб. научных трудов ВНИИ ВСГЭ, М.: 2005. №117. С.39-47.

91. Попов, Н.И. Достижения научно-исследовательской работы в области дезинфекции / Попов Н.И. // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии: сб. науч. тр. ВНИИВСГЭ.- М., 2005. Т. 117. - С. 39-47.

92. Попов, Н.И. Новое дезинфицирующее средство/ Попов Н.И., Удавлиев, Д.И.

93. Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля i сельскохозяйственной продукции. М.: 1997. -4.2. - С.65.

94. Правила проведения дезинфекции и дезинвазии объектов государственного ветеринарного надзора/ Утверждены заместителем руководителя Департамента Ветеринарии, М., 2002. 105с.

95. Пресман, A.C. Электромагнитные поля и живая природа / Пресман A.C. -М.: Наука, 1968.-228 с.

96. Птицина, Н.Г. Естественные и техногенные низкочастотные магнитные поля как факторы потенциально опасные для здоровья (обзор) / Птицина, Н.Г. и др.// Успехи физических наук. 1989. Т. 168. № 7. С.768-791.

97. Пхакадзе, Т.Я. Выбор дезинфектанта. Краткая характеристика наиболее часто используемых дезинфицирующих средств Электронный ресурс. : http: // www.iacmac.ru/ 2006.

98. Романов, В.Е. Применение дезинфектантов в ветеринарии / Романов В.Е., Малых О.Г.,.Тимошенко Т.А. // Международный семинар «Современныесредства и методы дезинфекции, применяемые при работе с патогенами»: тезисы докладов. Киров, 2006 - С.54-57.

99. Русяев, В.Ф. Действие электромагнитных полей на систему свертывания крови.// Электромагнитные поля в биосфере. / Русяев В.Ф. // Биологическое действие электромагнитных полей. -М.: Наука. -С.97-107.

100. Самойленко, И.И. Механизмы бактерицидного действия перекиси водорода / Самойленко И.И. и др. // ЖМЭИ. 1983.- №12. - С. 30-33

101. Селиванов, В.В. Дезинфекция в системе ветеринарно-санитарных мероприятий / Селиванов В.В., Дудницкий И.А., Попов Н.И. // Ветеринария, 1999. №2. С.З.

102. Смирнов, А. М. Актуальные проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии / Смирнов A.M. // Актуальные проблемы медико-биологической защиты: сб. материалов расширенного заседания центрального правления. М, 2006.-С.156-160.

103. Смирнов, A.M. Дезинфекция как мера профилактики и ликвидации инфекционных болезней / Смирнов A.M., Попов Н.И. // Ветеринария и кормление. 2005.- №4. - С.24-28.

104. Соколова, Н.Ф. Методологические основы определения устойчивости микроорганизмов к дезинфицирующим средствам / Соколова Н.Ф.// Материалы VIII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: сб. статей.- М., 2002. Т.4. - С.55-56.

105. Соколова, Н.Ф. Современные средства и методы дезинфекции при сибирской язве / Соколова Н.Ф.// Материалы VIII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: сб. статей. М., 2002.- Т.4. -С.56-57.

106. Сон, К.Н. Обеззараживание сточных вод заводов по производству мясокостной муки / Сон К.Н., Прокопенко A.A., Кривопишин И.П. // Ветеринария, 1979.- №2-С. 22-23.

107. Стрилец, О.И. Дезинфектанты. Новые аспекты исследований / Стрилец О.И., Дикий И.А., Стрельников JI.C. // Дезинфектанты. 1999. - Вып.11.- С. 15-19.

108. Тикунов, В.И. Комплексные дезинфектанты на основе гипохлорита натрия: дис. канд. вет. наук: 16.00.03 / Тикунов В. И. Белгород, 2000. - 140 с.

109. Темурьянц, H.A. Сверхнизкочастотные электромагнитные сигналы в биологическом мире / Темурьянц H.A., Владимирский Б.М., Тишкина О.Г. // Киев. Наукова Думка, 1992.

110. Украинцев, А.Д. Сравнительный анализ средств, применяемых для дезинфекции опасных микроорганизмов / Украинцев А.Д. и др. //Химическая и биологическая безопасность. 2005. - №6 (24). -С. 12-22.

111. Федорова, JI.C. Современные средства дезинфекции и дезинсекции. Характеристика, назначение, перспективы / Федорова Л.С. и др. // Медицина и здравоохранение. Обзорная информация.- М., 1991.- С. 3-25.

112. Федорова, Л.С. Актуальные проблемы повышения эффективности дезинфекционных мероприятий / Федорова Л.С. // Дезинфекционное дело. -2004. №4.-С. 41-45.

113. Федорова, Л.С. Научный подход к обоснованию выбора средств для дезинфекции поверхностей / Федорова Л.С. // Материалы VIII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов: сб. статей. М.: ООО «Росинэкс», 2002. - Т.4 - С.59-60.

114. Фридович, М. Радикалы кислорода, перекиси водорода и токсичность кислорода // Свободные радикалы в биологии. Т.1 / пер. с англ. ; под ред. М.Н.Эммануэля. -М.:Мир, 1979.-С.272-378.

115. Холодов, Ю.А. Судорожная активность мозга при воздействии электромагнитных полей / Холодов Ю.А. // Материалы Международной научно-практической конференции "Биологическое и лечебное действие магнитных полей". Витебск, 1998. С.64-66.

116. Чащина, Т.А. РИЭС энергосберегающая технология обеззараживания кормов и повышения продуктивности животных: Монография / Чащина Т.А. -Ярославль: 2003.

117. Чегодаев, А.Я. К вопросу , влияния электромагнитного поля низкой частоты на сердечно-сосудистую систему животных в условиях длительной экспозиции / Чегодаев А.Я. // труды Крымского медицинского института, 1973. С. 18-21.

118. Шандала, М.Г. Перспективы и проблемы современной дезинфектологии / Шандала М.Г.// ЖМЭИ. 2003. - №3. - С.119-125.

119. Шандала, М.Г. Новые дезинфекционные технологии для профилактики инфекционных болезней / Шандала М.Г.// Эпидемиология и инфекционные болезни. 2006. - №4. - С.15-17.

120. Шесточенко, M. А. Профилактика инфекционных болезней молодняка / Шесточенко М. А., Контримавичус JI.M, Голод Я.Р. и др. // М: Колос 1983. 207 с.

121. Электромагнитные поля в биосфере. Т.1. Электромагнитные поля в атмосфере Земли и их биологическое значение. М.: Наука, 1984. - 375 с.

122. Электромагнитные поля в биосфере. Т.2. Биологическое действие электромагнитных полей. М.: Наука, 1984. - 325 с.

123. Alexander H.S. Biomagnetics The biological effect of magnetic fields / Alexander H.S. H\ Am. J. Med. Electron. - 1962. - VI. - P.181-187.

124. Andrewes C.H. A short description of the myxovirus group (influenza and related viruses) / Andrewes C.H., Bang F.B., Burnet F.M. // Virology. 1955. -1. -P. 176-184.

125. Babb J. Methods of cleaning and disinfection / Babb J. // Zentr. Sterilization.-1993.-№4- P. 227-237.

126. Borick P.M. Antimicrobial activiti of nome higner amin of carboxylic acids / Borick P.M., Bratt M.// Appl. microbiol. 1961. - Vol.9. - P.475-477.

127. Bulling E. Verbreitung und Bedeutung der Tiersalmonellesen in der Bundesrepublik / Bulling E. // Vet. Med. Rehe. 1963. -10. - 3. - P. 216-225.

128. Castagnoli B. Episootologie, epidemiologic et controle des salmonellosis bovine, porcine et equine / Castagnoli B. // 35 Sessio Generale du Comité LO.I.E. Paris, 2127, mai 1967, Point 4, №40.

129. Chen С. Simultaneous control of microorganism, disinfection by-products and bio-stability by sequential chlorination disinfection /С. Chen et al. // Huan Jing Ke Xue. 2006. - Vol. 1. - №27. - P.9-74.

130. Favero N.S. Sterilization, desinfection and antisepsis in the hospital / Favero N.S. et al. // Manual of Clinical Microbiology. -5th ed. Washington, DC: American Society for Microbiology. -1991. P. 183-200.

131. Field H. Epidemiologic et prophylaxes des salmonellosis ches les equides les bovines et les pocin / Field H. // 35 Session generale de Comite de L'office Inter. Des Epizooties.- 1967. P. 41.

132. Gerasimov V. Bactericidal and Desinfectional Properties of New Preparation in Regard to Francisella tularensis / Gerasimov V. et al. // Second International Conference on Tularemia. Czech Republic, Praga. - 1997. - P.26.

133. Larson E.L. Alcohols / Larson E.L. // Disinfection, sterilization and preservation. Block S.S. (editor). 3rd ed. Philadelphia: Lea & Febiger, 1991. P. 191-203.

134. Malik Y.S. Comparative efficacy of ethanol and isopropanol against feline calicivirus, a norovirus surrogate / Malik Y.S., Maherchandani S., Goyal S.M. // Am J. Infec.t Control. 2006. - Vol. 1. -№34. - P. 5-31.

135. Moorer W.R. Antiviral activity of alcohol for surface disinfection. / Moorer W.R. // Int. J. Den.t Hyg. 2003. - Vol. 1 - №3. - P.42-138.

136. Quintiliany R. Meshanisms of resistance to antimicrobiol agents / Quintiliany R., Courvalin P.// Manual of clinical microbiology.-USA: American Society of microbiology.-1995.- P. 1308-1326.

137. Russel A.D. Principles and practice of disinfection, preservation and sterilization / Russel A.D. et al. // Blackwell sci. Publ. -1982.- 653p.

138. Tree J.A. Disinfection of feline calicivirus (a surrogate for Norovirus) in wastewaters / Tree J.A., Adams M.R., Lees D.N. // J. Appl. Microbiol.- 2005. №98. -P.62-155.

139. Turner F.J. Hydrogen peroxide and other oxidant disinfectants / Turner F.J. // Desinfection, sterilization and preservation. Block S.S. (editor). 3rd ed. Philadelphia: Lea & Febiger.- 1991. P. 240-250.