Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Новые методы детекции и идентификации вируса полиомиелита и их использование в эпидемиологическом мониторинге

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Новые методы детекции и идентификации вируса полиомиелита и их использование в эпидемиологическом мониторинге"

рг Б оа

2 г да ^

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕШШЯКСКИХ НАУК жсуйтут ПОДЙЙЙЕДГГА к ВИРУСНЫХ ЭНЦЕФАЛИТОВ жг.М.П.ЧУМАКОВА

На правах рукописи

КОНТОРОВИЧ ВЕРА БОРИСОВНА

НОВЫЕ МЕТОДЫ ДЕТЕКЦИИ И ВДШШЙКАЩК ВИРУСА ПОЛИОМИЕЛИТА й ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОМ МОНИТОРИНГЕ

03.00.06 - вирусология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1ЭЭ5 г.

Работа выполнена в Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумаков а РАКШ.

Научные руководители: доктор медицинских наук В.А.Казанцева кандидат медицинских наук О.Е.Иванова

Официальные оппоненты; доктор биологических наук

М.Б.Королев

доктор медицинских наук,

профессор

Л.Г.Карпович

Ведущая организация; НЩ экологии человека и гигиены окружавшей среда им. А. Н. Сысша РАШ.

Защита состоится: "1996 г. в час.

на заседаний диссертационного совета Д.001.2-7.01 при Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов РАШ по адресу: 142782, Московская область, Ленинский район, п/о Институт полиомиелита.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им.М.П.Чумакова РАШ.

Автореферат разослан "// " 199^г.

Ученый секретатаръ специализированого совета кандидат биологических наук

(О.А.Медведкина)

ОБШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Б 1988 году Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ) провозгласила Глобальную Программу Ликвидации Полиомиелита к 2000 году. Основными критериям ликвидации полиомиелита считается отсутствие случаев клинического полиомиелита, связанных с диким вирусом и отсутствие случаев обнаружения диких вирусов в пробах, взятых.из окружавшей среды и здорового населения. В связи с этим, одним из ключевых моментов программы стало проведение эпидемиологического мониторинга вируса полиомиелита. В нашей стране актуальность таких исследований определяется задачами здравоох-охранения и экологии. Загрязнение среды обитания человека неочищенными отходами, миграционные потоки из эпидемических регионов создают условия для развития эпидемий. Все это,делает необходимым изучение закономерностей циркуляции лолио-вирусов, выявление источника и путей распространения-..инфекции, разработки быстрых и точных методов оценки и прогноза эпидемической ситуации. Традиционные методы вирусологических исследований не позволяют решать задачи эпидемиологического мониторинга в полном объеме. Наименее отработанными этапами мониторинга остаются отбор проб из объектов окружающей среды и концентрирования вирусов и внутритиповая дифференциация выделенных штаммов, а именно - определение происхождения вирусов.

Цель работы. Разработка и внедрение в систему эпидемиологического мониторинга новых методов детекции и идентификации вируса полиомиелита.

Задачи исследования. I.Разработка метода для одновременного отбора и концентрирования проб из водных объектов окру-

жадаэй среда. 2.Определение происхождения штаммов вируса полиомиелита, выделенных от населения и из окружающей среды, в полимеразвой цепной реакции (ПНР).

• Научная новизна. Предложен новый метод для одновременного отбора и концентрирования проб из водных объектов ©кружащей среды, показавший в лабораторных, полевых и натурных испытаниях большую эффективность по сравнению с. традиционными методами.

Впзрвыз методом ПЦ? определено происхождение полиовиру-сов, выделенных от населения и из окружающей среды при проведении эпидемиологического мониторинга.

Показана циркуляция как взкшннородственных» так и диких голиовирусов в регионах отличающихся санитарно-эпидемиологическими .условиями и находящихся на различных стадиях ликвидации полиомиелита.

Показана преобладающая циркуляции вакцинкородствекных полиовкрусов одного типа среди населения и в объектах окружающей среды в некоторых районах (Тульская область(1991г.), Хабаровский край (1991г.), г.Липецк (1994г.)).

Сопоставление результатов ПЦР и других методов внутри-типовой дифференциации штаммов показало, что штаммы вакцинного происхождения з ряде случаев имели измененные маркеры ат-тенуации, что может свидетельствовать о существовании условий для проявлелешя изменчивости в процессе циркуляции.

Практическая ценность. Разработан и зпообирован в лабораторных и полевых условиях новый метод отбора проб воды с одновременным концентрированием кишзчшх вирусов. Метод внедрен в практику 25 вирусологических лабораторий. Применение ПЦР в системе эпидемиологического мониторинга показало дар-

кулящга вакциннородственных и диких вирусов полиомиелита среди населения и в окружающей среде на всех обследованных территориях. Методом ГЩР определена природа вирусов з ряде отдельных случаев и вспышек полиомиелита. Предложенный комплекс методов детекции и идентификации вирусов полиомиелита может быть использован в системе эпидемиологического мониторинга в различных регионах.

На защиту выносятся следующие основные положения:

I.Новый метод для одновременного отбора проб и концентрирования кишечных вирусов из объектов окружающей среды проявил свою эффективность в лабораторных, полелевых и натурных испытаниях и может быть рекомендован для использования в системе эпидемиологического мониторинга.

2.Эпидемиологический мониторинг, проводимый в регионах, ' отличающихся природными и санитарно-эпидемиологическими ус- -ловиями и находящихся на разных стадиях ликвидации полиомие-' лита (Европейской части России,Киргизии, Эстонии) показал, что при отсутствия эпидемического полиомиелита, происходит -постоянная циркуляция полиовирусов среди населения и в окружающей среде.

3.Исследование происхождения вирусов методом ПЦР показало, что наряду с вакциннородственными, во всех обследован-ваншх регионах циркулировали дикие полиовирусы, свидетельствующие о неблагополучной эпидемичеческой обстановке.

4.Эпидемические вспышки паралитического% полиомиелита в Таджикистане (1991 г.), Узбекистане (1993 и 1994 гг.) связаны с дикими вирусами I и 3 типов.

5.Исследование штаммов разными методами внутрктиповой дифференциации и сопоставление полученных характеристик в

ряде случаев позволяет выявить изменения вакцинных штаммоЕ в процессе циркуляции среда населения и в окружающей среде. Изученные дикие вирусы полиомиелита обладают устойчивым комплексом характеристик.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены на Всесоюзной конференции "Энтеровирусы. Общетеоретические и медицинские аспекты"(Киев, 1991), 2 съезде гигиенистов, паразитологов к инфекционистов (Бишкек, 1991), научной конференции памяти М.П.Чумакова (Москва, 1994).

Апробация работы состоялась на заседании межлабораторного Ученого Совета по проблемам общей вирусологии Института полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН 20 июня 1995 года.

Публикация результатов исследований. Материалы исследований отражены в публикациях.

Обьеы и структура работы. Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста (без списка литературы), иллюстрирована 16 рисунками и 16 таблицами. Работа состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания материалов и методов (I глава), раздела собственных исследований (3 главы), обсуждения полученных результатов и выводов. Библиографический указатель содержит 52 отечественных и 134 иностранных литературных источников.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

Материалы собраны в течении 1986-1994 г.г. в Европейской части России, "Киргизии, Эстонии, Хабаровском Крае, Таджикистане, Узбекистане. Объекта;,'и исследования являлись сточные вода (278 штаммов), воды естественных водоемов (50 штаммов), питьевая вода (25 штаммов), клинические материалы

(240 штаммов).

Отбор проб проводили согласно "Методическим рекомендациям по санитарно-вирусологическому контролю объектов окружающей среды", U., 1982, под ред. О.Г.Дроздова и В.А.Казанцевой, и методом, разработанным нами в лаборатории вирусологии окружающей среды Института полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН. Выделение цитопатогенных агентов проводили на культуре клеток почки африканской зеленой мартышки Cercopi--teous aethiops (КПЗМ), идентификацию выделенных агентов проводили в реакции нейтрализации на перевиваемой культуре клеток человеческой рабдомиосаркомы (RD) используя типоспецифи-ческие гиперимунные сыворотки.

В работе использовали лабораторные штаммы вируса полиомиелита и обезьяний ротавирус sah.

Концентрацию вируса полиошелита в образцах определяли по проявлению штопатического действия (ПДД) методом конечных разведений или методом бляшек под агаровым покрытием на КПЗМ или RD. Концентрацию антигена обезьяньего ротавируса SAH определяли методом иммунофзрментного анализа (ИФА) (Ги-невская В.А. с соавт., 1983) и в реакции непрямой гемагглю-тинации (Закирова С.ф, с соавт., 1987). Внутритютовую дифференциацию штаммов вируса полиомиелита проводили методом пс-лимеразной цепной реакции (ПНР) (Yang с.Р.et ai.,1991), методом иммуноферментного анализа (ИФА) (van Vesel et al, 1979), методом определения температурного маркирующего признака rst/40° (Ворошилова М.К. с соавт., 1964).

Для статистической обработки результатов использовали: метод Кербера, дисперсионный, корелляционкый (программа statgraf) и регрессионный (программа"ELISA") анализ, который выполняли на персональном компьютере ?G А? 286.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Разработка и оценка метода сбора и концентрирования кишечных вирусов из объектов окружающей среды

- Метод основан на сорбции-элщик вирусов макропористым стеклом '(МПС), помещенным в пакет из водопроницаемого материала, что дает возможность проводить концентрирование ви-■pvcoB во время экспозиции, как в испытуемом объеме жидкости, так и непосредственно в воде исследуемого объекта.

Результаты модельных опытов с обезьяним ротавирусом SAH показали, что ротавируе наиболее эффективно концентрируется.в питьевой воде - концентрация Еируса е пиковой фракции превышала его исходную концентрацию в 397^113 раз.;В сточных водах, вследствии наличия загрязняющих; примесей, вирус удалось сконцентрировать в 26±6 раз (рис.1).

lOOOf-

ч н

100 J

юё 3

3

4

о ки.даж|«мтчиа, nwiñti

' ЧИСТА? BCUA 2 СТОЧпАИ воал

Рис.1.Концентрирование ротавируса SAII методом пакета с ШС.

Применение реакции непрямой агглютинацшш для детекции ротавирусного антигена показало, что в питьевой воде рота-вирус был сконцентрирован в 256 раз, сточных водах в 16 раз. Результаты лабораторных экспериментов с вирусом полно-

миелита (штаммы ЪБсгаЬ и Луговской) представлены на рис.2. Концентрация вирусов в пиковых фракциях элюата значительно превышала их исходную концентрацию. При использовании пакета с МПС отмечали штаммовые различия в элюции вирусов. Штамм Луговской выходил острым пиком с максимумом в 3 фракции элюата. Его титр в пиковой фракции на 2,75^0,25 ^ ТЦД50 превышал титр вируса в исходной вируссодернащей жидкости, то есть было достигнуто концентрирование в 698-1000 раз. График элюции вакцинного штамма ЬБо2аЬ имел более сглаженный характер, наибольшее количество вируса содержалось в 5 фракции элюата. Вакцинный штамм тес2аЬ концентрировался в меньшей

*

?г I

I

в Г I

4

I

4

д

' I

I

11 щтим^уюеско!! Затмим 1-Зи£аЬ

Рис.2. Концентрирование полиовирусог методом пакета с МПС.

степени - титр вируса в хшноеой фракции превышал титр в исходной вируссодержзщей жидкости на 2,25-0,25 ТВД^,' то есть, было достигнута концентрирование в 100-698 раз. Концентрация вируса в элюате марлевого тампона превышала исходную не более, чем в 2 раза.

В сравнительных экспериментах в натурных условиях, на действующих очистных сооружениях был использован индикаторный вирус. - гуанидакзависимый вариант вакцинного штамма по-лиовируса I типа (Казанцева В.А. с соавт. Авт. свид.. 654684 (СССР), 1978, CIS KI/I0Q). Вирус смешанный .с наполнителем, имитирующим фекальные массы, вносили в ток сточных вод. Пакеты с МПС и марлевые тампоны закрепляли в токе сточной воды и синхронно снимали в течении трех суток эксперимента. Динамика накопления индикаторного вируса на.пакете с №0 и марлевом тампоне представлена на рис. 3.

Индикаторный вирус обнаруживали в пакете с МПС во все периоды наблюдения. Максимальное количество вируса (430 БОЕ/ пакет или.70 БОЕ/мл) накапливалось в пакете с МПС через два часа после его поступления на очистные сооружения, и на та-

Рис.З. Накопление индикаторного вируса на пакете о ШС. и марлевом тампоне

ком уровне удерживалось в течении первых суток. В течении последующих двух суток эксперимента содержание вируса в пакете уменьшалось, оставаясь на относительно высоком уровне,

позволяющим проводить детекцию и титрование вируса методом бляшек без предварительного пассака на культуре клеток (20 БОЕ/пакет или 3,5/ БОЕ/мл). В элюатах марлевых тампонов индикаторный вирус был обнаружен при пассировании на КПЗМ, его титр составлял <0,5 БОЕ/мл.

Эксперименты по сравнению эффективности концентрирования полиовируса методом пакетов с МПС и методом элзоции с активного ила (рекомендованным ВОЗ для испытаний) проводили на очистных сооружениях биохимического завода в г.Кириши. В начале цикла очистки в сточные воды был внесен индикаторный вирус в количестве БОЕ. Пробы отбирали синхронно на разных этзпах очистки в течении 7 суток. Время экспозиции составляло 0,5 часа в первые 8 часов, 12 часов в последующие 6 суток эксперимента. Индикаторный вирус обнаруживали в пакетах с МПС з течении 2-6 суток на различных этапах очистки и не обнаруживали в образцах активного ила. Эксперимент показал сравнительно высокие концентрирующие возможности метода пакетов с МПС при однократном залповом поступлении вируса на очистные сооружения. Отсутствие индикаторного виру- " са в образцах активного ила связано, по-видимому с тем, что' при однократном попадании вируса в. систему очистки, его контакт с активным илом оказывается недостаточным.

Динамику накопления цитояатогенных агентов (ДПА) изучали в полевом эксперименте на действующих очистных сооружена-' ях. Пакет с МПС и марлевый тампон экспонировали в токе сточных вод I, 3, 5, и 7 суток. Накопление ЦПА на пакете с МПС и марлевом тампоне пропорционально увеличивалось со временем, причем пакет с МПС показал преимущество перед марлевым тампоном, особенно при малых сроках экспозиции (рис.4).

1000зг

еоела>

I шитва * шаек

-гг э 4 в в . , откв

Рис.4. Накопление цитопатогенных агентов на пакете с МПС и марлевом тампоне в реальных условиях.

По результатам опытов оптимальным сроком экспозиции пакета с МПС.можно считать период 3-6 дней, в течении которого он, с одной стороны, аккумулировал вирусные частицы в количестве, достаточном для прямого учета на культуре клеток, а с другой, еще сохранял те вирусные частицы, которые были сорбированы в начале экспозиции.

Дальнейшие систематические исследования на Люберецкой станции аэрации показали, что метод пакетов с МПС является более результативным, чем метод марлевого тампона. Из 40 проб сточных вод, отобранных с помощью пакетов с МПС, 34 содержала полиозирус. Среди проб, отобранных методом марлевого тампона положительными были 26. Количество штаммов полко-вируса различных серотипов, изолированных из элюата МПС составляло 38, так как из некоторых проб было выделеноло два штамма. Таким образом, сравнительное исследование метода пакета с МПС и марлевого тампона в условиях крупных - действующих очистных сооружений показало большую эффективность наке-. та с МПС, так как количество штаммов вируса полиомиелита.

10

1

выделенных с ШС на 30% превышало количества штаммов, выделенных с марлевых тампонов.

Метод был успешно испытан при отборе про б воды естественных водоемов. Пробы, содержащие цитопатогешше энтерови-русы, были получены при обследовании рек Ока, Воронеж, Воронка (Тульская обл.), озера Иссык-Куль, плавательного бассейна (г, Тула).

Проведенные лабораторные л полевые эксперименты продемонстрировали преимущество разработанного метода перед другими (марлевый тампон, элюция с активного ила). Пакет с МПС позволяет сконцентрировать вирус непосредственно в токе исследуемой воды, не прибегая к сложным и трудоемким процедурам концентрирования больших объемов воды в лаборатории. При •использовании пакета с МПС для отбора проб отпадает необходимость в транспортировке, при охлаждении, больших обьэмов воды и марлевых тампонов. Уменьшается опасность взаимной контаминации проб при транспортировке в лабораторию, так как вирус в пробе находится в адсорбированном состоянии и сами пробы (пакеты) могут быть легко я надежно.изолированы. Обработка проб в лаборатории проста, технологична, не требует специального оборудования и дорогостоящих реактивов. Метод меже? быть применен при массовом обследовании объектов окружающей среды, использован в эпидемиологическом мониторинге, для масштабных эпидемиологических исследований.

Эпидемиологический мониторинг вируса полиомиелита Многолетние систематические вирусологические исследования поводили в' Европейской части России, Киргизии, Эстонии, Хабаровском Крае. За весь период исследований в этих регионах не было отмечено вспышек полиомиелита, заболеваемость носила

спорадический характер. Кроме этого, нам были предоставлены штаммы вируса полиомиелита, выделенные во время вспышек паралитического полиомиелита в Таджикистане (1991г.) и в Узбекистане (1993 и 1994 гг.).Вакциноспецифический вариант полимеразной цепной реакции использованный нами в качестве метода внутритиповой дифференциации позволил определить происхождение 593 итаммов полиовируса, выделенных от населения и объектов окружающей среды и установить некоторые закономерности эпидемиологического поведения различных вариантов вируса полиомиелита.

В течении восьмилетнего периода исследований на территории России (1987-1994) было выделено и исследовано методом ПЦР 296 шташов вируса полиомиелита. Наблюдалась активная циркуляция вируса полиомиелита среди населения и в окружающей среде,•что подтверждается идентичностью спектров выделения вирусов (рис.5).

Рис.5. Спектры выделения штаммов вируса полиомиелита в Европейской части России (1987-1994 г.г.) Условные обозначения:

ВР- вакциннородственные, НВР-невакциннородственные штаммы Наиболее . часто выделяли вакциннородственные штаммы 2 типа. Дикие етеммы полиовируса были выделены из клинических материалов и объектов окружающей среда, соответственно, в 14%

ТИП 1

/1

клннкческйе материалы

5в

окружающая сресл

и 17% случаев от числа исследованных штаммов. Большую часть выделенных диких штаммспгпредставляли птаммы I типа. Их доля среди штаммов I типа составляла: в образцах объектов окружающей среды - 61%; в клинических материалах - 40%. Из окружающей среды и от населения также были выделены штаммы 2 типа, не родственные вакцинному. Дикие штаммы 3 типа не были обнаружены.

В течении шестилетнего периода исследований на территории Киргизии (I987-1993) было выделено и исследовано методом ПЦР 73 штамма вируса полиомиелита. Наблюдалась активная циркуляция вируса полиомиелита среди населения и в окружающей среде, что подтверждается идентичностью спектров выделения вирусов (рис.6).

■riirn nrn

п

донические материалы окружающая сгеоа

Рис.6. Спектр выделения штаммов вируса полиомиелита в Киргизии (1937-1993 г.г.).

Условные обозначения:

ВР- вакциннородстзеннке, НВР-невакциннородствэнныэ штаммы Наиболее часто выделяли вакданнородственные штаммы по-лиовируса I и 2 типов. От населения и из объектов окрукающей среда, наряду с вакцинными выделяли и дикие штаммы полиови-руса в значительном количестве: соответственно 23% и 20% от числа исследованных штаммов. Большую часть выделенных диких штаммов представляли ктаммы I типа. Доля диких штаммов среди

62%; в образцах клинических материалов - 35%. Также, из окружающей среды и клинических материалов Сыли выделены штаммы 2 и 3 типа, не родственные вакцинным.

Территория Эстонии считается свободной от полиомиелита; за последние годы зарегистрировано только 3 случая с неврологическими симптомами (все в 1988 году), сопровождавшиеся выделением вакциннородственного полиовируса 2 типа. Тем не менее, в период наша исследований (1987-1988 г.) наблюдали значительную контаминацию объектов окружающей среда вирусами полиомиелита. Всего было выделено и исследовано методом ПЦР 82 штамма вируса полиомиелита..Обращает на себя внимание тот факт, что наряду с вакциннородственными, из окружающей среды были выделены 7 диких штамма полиовируса типа 3. Появление в объектах окружающей среда вакцинных штаммов объясняется плановой иммунизацией населения живой полиовярусной вакциной и недостаточной очисткой сточных вод. Наличие штаммов,- не родственных вакцинным, на территории благополучной по полиомиелиту, по-видимому, можно объяснить лишь заносом вируса из эндемичных районов.

Наряду с материалом, полученным в результате многолетних систематических исследований в крупных регионах, изучали штаммы вируса полиомиелита, выделенные во время локального повышения заболеваемости от больных с различными клиническими проявлениями, контактных и здоровых лиц и из объектов окружающей среды в Хабаровском крае (1391 г.), г.Туле (1991 г.) и г.Липецке (1994 г.).

В конце лета- начале осени 1991 года в Хабаровском крае наблюдалось повышение заболеваемости с диагнозами: "серозный вирусный менингит, энтэровирусная инфекция, полиомиелит(I

случай). В этот период по эпвдпоказаниям были отобраны "пробы водопроводной воды, вода реки Амур к сточных вод городов Хабаровска и Комсомольска-на-Амуре. Мы исследовали методом ПНР 58 штаммов вируса полиомиелита, выделенных от больных, контактных лиц и объектов окружающей среды; Спектры выделения вирусов идентичны,, что свидетельствует об их активной циркуляции среди населения и в окружающей среде. Заметно преобладали вакциннородственнае вирусы 3 типа - их доля составляла 56-58% от числа выделенных штаммов. Исследование антигенных свойств 3 вакшшнородстЕенных штаммов, проведенное В.Б.Сейбилем, показало, что они обладали измененной антигенной характеристикой. , ...

Вирусологический материал аналогичной эпидемической ситуации был получен из Тульского областного, центра. Там летом-осенью 1991 года наблюдали повышение заболеваемости с признаками энтеровирусной инфекции и, в том числе, было за-регестрировано 2 случая паралитического полиомиелита, подтвержденных клинически и серологически. Все 37 штаммов, выделенных в этот период были' закциннородственнкш. Период вспышки отличался выделением от больных, контактных и здоровых детей л из объектов окружающей среды преимущественно вирусов полиомиелита 2 типа, хотя в другие периоды наблюдений спектр выделяемых вирусов был значительно шире.

Показательна эпидемическая' ситуация, сложившаяся в г. Липецке в 1994 г.. В течении полугода -с января по сентябрь -при обследовании сточных вод выделяли только вирусы полиомиелита 3 типа. С июля по сентябрь наблюдалось повышение заболеваемости с диагнозами: серозный вирусный менингит, эн-теровирусная инфекция-мепингоэнцефалит. Зарегестрировэн I

случай с вялыми параличами. От 8 больных были выделены псли-овирусы 3 тала. Во время вспышки по эпидпоказаниям были отобраны пробы из двух водозаборов и из реки Воронеж. Из всех проб были выделены полиовирусы 3 типа. Исследование антигенных характеристик." этих штаммоЕ, выполненное методом нейтрализации под руководством к.м.н.В.Б.Сейбиля и методом ИФА позволили аттестовать эти штамма, как невакциноподобные. Исследование в ПЦР показало их вакцинное происхождение.

Методом ПЦР были исследованы 9 штаммов типа I и I штамм типа 3, выделенные д.м.н. Г.А.КоролеЕСй от больных полиомиелитом в Таджикистане (1991 г.) и штаммы, выделенные от больных во время вспышек полиомиелита в Узбекистане в 1993 г. (II штаммов) и в 1994 году (22 штамма). Все штаммы были аттестованы, .как не родственные вакцинным штаммам (дикие).

Сопоставление характеристик штампов полиовируса, полученных разными методами внутритиповой дифференциации, Анализ, сведений, сопровождавших штаммы полиовируса, выделенные из клинических материалов от 141 больного, 81 контактного и 70 здоровых вирусоносителей показал: 65 из 74 невакциннородствешшх штаммов (88%) были Еыдэлены от больных, 4 и 5 невакциннородсгвенных штамма были выделены, соответственно от контактных и здоровы?: детей.

Наряду с этим, в 76 случаях от больных были выделены вакциннородственные штаммы полиовируса всех трех серотипов. Среди вакциннородственних штаммов, выделенных от больных преобладали штаммы 2 типа (36 штаммов)и 3 типа (28 штаммов), составляя соответственно 52% и 30% от числа обследованных;

контактные и здоровые лица в 142 случаях (96%) выделяли вакциннородственные полиовирусы.

У 440 штатов, аттестованных в ПНР, определяли антигенные свойства в реакции нейтрализации со штаммоспецифическими сн-воротками и ИФА и температурный маркирующий признак го-ь./до0. Штаммы вакцинного происхождения, выделенные от населения и из окружающей среды, в ряде случаев проявляли свойства, не характерные для аттенуирсванных вакцинных штаммов. Результаты представлены в таблице I.

Таблица I

Изменение маркеров аттенуации у вакциннородственных штаммов полиоЕируса'

Маркер аттенуации (метод внутритиповой дифференциации) число штаммов с измененными маркерами аттенуации/всего изученных•штаммов, (%)

Тип вируса .

I о 3

Антигенный маркер (нейтрализация) 3/2? (11-6%) 7/77 (9±3%) 39/62 (63-6%)

Антигенный маркер (ИФА) 2/9 (22-14%) 0/32 (0%) 14/26 (54-10%)

Температурный маркер го"Ь/40° 7/39 (18-6%) 33/53 | 8/17 (62±7%) { (47-12%)

Всего штаммов с измененный маркерат»ш 12/75 (16-4%) 40/162 1 61/105 '(25%5) | (53±5&) 1

Штаммы невакцинного происхождения обладали, стабильным комплексом фенотшшческих характеристик: антигенные реакции и температурный маркер соответствовали таковым у ранее изученных, .диких штаммов.

Таким образом, изучая ряд характеристик штаммов, циркулировавших среди населения и в окружающей среде, можно отметить некоторые закономерности. Все штаммы невакцинного происхождения во всех реакциях проявили свойства диких вирусов были и аттестованы однозначно. В то же время, изменение маркеров аттенуации у вакциннородстЕенкых вирусов, позволяет предполагать наличие условий для проявления изменчивости у исходных вакцинных штаммов. Реверсии антигенных свойств, температурного маркера, усиление патогенности вакциннород-ственных вирусов, по-видимому, могли явиться результатом длительной циркуляции среди населения и в окружающей среде.

ВЫВОДЫ

1.Разработан и испытан новый метод сбора и концентрирова-рования кишечных вирусов из водных объектов окружающей среда. Эффективность и простота применения метода позволяют рекомендовать его для использования в системе эпидемиологического мониторинга.

2.Применение полимеразнсй цепной реакции позволило показать, что в регионах, находящихся на разных стадиях ликвидации полиомиелита, среди населения и в окружающей среде происходила постоянная циркуляция полиоЕирусов различного происхождения.

2Л.На территории Европейской части России в 1987-1994 г.г. наряду с накциннородственными, циркулировали дикие вирусы полиомиелита. Большая часть выделенных диких вирусов относилась»к I типу. В единичных случаях выделяли дикие по-лиовирусы 2 типа.

2.2.На территории Киргизии в 1987-1993 г.г. наряду с вакциннородстаенными, циркулировали дикие вирусы. Большая

часть наделенных диких вирусов полиомиелита относилась к I типу. В единичных случаях выделяли дикие вирусы полиомиелита 2 и 3 типов.

2.3. В Эстонии в 1987 г. из окружающей среды наряду с вакщшнородстзенными, были выделены дикие вирусы 3 типа.

2.4.Эпидемические ситуации, слокиешився в Тульской области (1991 г.), Хабаровском Крае (1991 г.), г.Липецке (1994 г.) отличались циркуляцией среди населения и в окружающей среде вакшганородственных палиовирусов преимущественно одного серотипа.

2.5.эпидемии паралитического полиомиелита в Таджикистане 1991 г.) и Узбекистане (1993 и 1994 г.г.) связаны с дикими вирусами I и 3 типов.

3.Вакцинные штаммы могут изменять маркеры аттенуацни (антигенную характеристику и температурный маркирующий признак z\jt/4cP ) в процессе циркуляции среди населения и в окружающей среде.

Список работ, опубликованных по теш диссертации.

Х.Баева Л.Е., Конторович В.Б., ГикеЕская З.А., Казанцева В.А., Шйрман Г.А. Новые методы концентрирования кишечных вирусов из вода//Знтеровирусы. Общетеоретические и медицинские аспекты. Материалы Всесоюзной конференции, Киев,-1991.-с.21-22.

2.Варгина Л.Г., Иванова О.Е., Анкудинова Л.A., Anton van boon, A.v.van der Avoort, Конторович В.Б., Казанцева В.А., Дроздов С.Г. Циркуляция вируса полиомиелита в объектах окружающей среды на территории Киргизии в 1988-1990 г.г.//Материалы 2 съезда гигиенистов, паразитологов и инфекционистов, Бшкек-1991,- с.97-98.

3.Kontorovioh V.B., Ivanova О.Е., Kazantceva У.А., Shirman G.A. "Hew technique for the concentration of enteroviruses Xrom water by macroporous Glass Bag." Newsletter of International Association on Water Quality, N 18, London, 1991» pp.8,9.

4.В.Б.Конторович, О.Е.Иванова, Т.П.Еремеева, Г.А.Шир-ман, В. А .Казанцева, С.Г.Дроздов. Метод концентрирования вирусов из объектов окружающей среды// Вопр.вирусол.-1996.- N 1—с.

'С ^

Соискатель: /// ¿-¿у-