Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

НОВЫЕ БАКТЕРИИ РОДА PSEUDOMONAS - АНТАГОНИСТЫ ФИТОИАТОГЕНОВ И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ПРАКТИКЕ

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "НОВЫЕ БАКТЕРИИ РОДА PSEUDOMONAS - АНТАГОНИСТЫ ФИТОИАТОГЕНОВ И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ПРАКТИКЕ"

На правах рукописи

СВЕШНИКОВА ЕЛЕНА ВИТАЛЬЕВНА

НОВЫЕ БАКТЕРИИ РОДА PSEUDOMONAS -АНТАГОНИСТЫ ФИТОНАТОГЕНОБ И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ПРАКТИКЕ

03,00,07 -микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа-2003

Работа выполнена в Институте биологии Уфимского научного центра РАН в рамках темы «Ферменты и метаболиты почвенных и рнзоеферных микроорганизмов» (номер государственной регистрации; ГР Кг 012002106] 2)

НаучаыЙ руководитель: кандидат биолоппеских наук,

Логинов Оли Николаевич

Официальные ошмненты: доктор биологических наук, профессор

Киреева Наиля Ахняфовна

Защита состоится 25 декабря 2003 г. в часов на заседании Регионального Диссертационного Совета КМ 002.124.01 при Президиуме Академии наук Республики Башкортостан по адресу: 450014, г. Уфа, ул. Новороссийская, 105.

С диссертаций можно ознакомиться в научной библиотеке Уфимского научно-исследовательского института вакцин и сывороток км. И.И.Мсчпикова филиала ФГУП «НПО «Микропж» МЗ РФ в г, Уфе «Иммунопрепарат» по адресу: 450014, г. Уфа, уп. Новороссийская, 105.

доктор биологических наук, профессор Егоров Сергей Юрьевич

Ведущая организации: Башкирский государственный

аграрный университет

Автореферат разослан < к ноября 2003г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, доктор медицинских наук:

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Изучение возможности практического использования явления микробного антагонизма, а также способности микроорганизмов стимулировать рост и развитие растений относится к числу наиболее важных направлений прикладной микробиологии.

Бактерия рода Pseudomonas весьма перспективны в качестве агентов биологического контроля заболеваний сельскохозяйственных растений. Анализ данных литературы показывает, что представители рода Pseudomonas выступают в качестве антагонистов широкого спектра фнтопатогаш ых грибов, вызывающих заболевания зерновых и овощных культур (A.R. Poplawsky & А,Н, Ellingboe, 1989; Е.Е. Sugimoto et ah, 1990), а также поражающих плоды при хранении (G.H. Мао & R.A. Cappellini, 1989; W, Janisiewicz & L. Youmian, 1989). Антагонизм псевдомонад обусловлен продуцированием сидерофоров, антибиотиков, летучих соединений, таких как аммиак н циановодород.

Значительный интерес исследователей вызывает также способность нсевдомонад стимулировать рост и развитие растений (N.S, lacobellis et а!., 1990; Л.Н. Олюнина и ВЛ. Шабаев, 1996). Стимуляторы роста растений, образуемые псевдомонадами, представлены фитогормонами, а также, сидерофорамн - низкомонекулярными веществами, которые облегчают транспорт железа, как в микробные клетки, так и в клетки корня. Кроме того, некоторые штаммы псевдомонад могут улучшать азотное и фосфорное питание растений.

Псевдомонады, нанесенные на семена, способны успешно колонизировать ризосферу различных культур, поддерживая высокую численность (в среднем, 103-10s КОЕ/г корней), выживать в почве и филлосфере (R.M. Zablotowicz et al., 1991; V. Caponlgro & R. Contillo, 1986).

Несмотря на большое число разработок по згой проблеме, биологический контроль за фнтосаяитарным состоянием почвы так и не получил широкого распространения в связи с непостоянством наблюдаемого защитного эффекта. Тем не менее, очевидно, по с точка зрения природоохранного земледелия биолошчсские средства защиты растений являются единственной альтернативой химическим фунгицидам,

Цель исследования. Выделение новых штаммов микроорганизмов рода Pseudomonas, проявляющих антагонистическую активность по отношению к фитопатогениым грибам, и их изучение с точки зрения возможности применения для защиты сельскохозяйственных растений от болезней.

Задачи исследования.

1. Выделить из природных и техногенных местообитаний новые штаммы бактерий-антагонистов рода Pseudomonas.

2. Охарактеризовать выделенные штаммы по видовой принадлежности, спектру антагонистической активности, механизмам взаимодействия штаммов псевдомонад с грибными фитопатогенами и растениями,

3. Разработать оптимальные условия хранения в лабораторных условия* штаммов-антагонистов с целью поддержания в течение дчительного времени антагонистических свойств культур.

4. Оценить эффективность применения изучаемых штаммов псевдомонад для улучшения развитая сельскохозяйственных растений и защиты их от болезней.

5. Изучить в лабораторных и полевых условиях приживаемость и динамику развития популяции штаммов-антагонистов, интродуцированных в ризосферу сельскохозяйственных растений.

Научная новизна. Выделена и идентифицирована группа новых штаммов рода Pseudomonas, проявляющих антагонистическую активность в отношении широкого спектра фитопатогенных грибов: Pseudomonas aureofaciens ИБ 51, Pseudomonas aureofaciens ИБ 6, Pseudomonas putida ИБ 56, Pseudomonas putida ИБ 17, Pseudomonas spccies ИБ182.

Показано, что выделенные штаммы псевдомонад продуцируют фитотормоны, а пггамм Pseudomonas sp. ИБ 182 обладает хитннолитическон и нитро^назной активностью.

Прн изучении механизмов антагонистических взаимоотношений штаммов псевдомонад и фитопатогенных грибов обнаружено, что под воздействием антибиотических веществ, синтезируемых штаммами-антагонисгами, наблюдается задержка прорастания спор фитоиатогенов, а формирующийся мицелий имеет выраженные морфологические нарушения.

В качестве метода консервации культур штаммов-антагонистов предложен способ хранения на каолине. Показано, что в смеси каолин - культуральная жидкость (КЖ) в соотношении 7:3 в течение трех месяцев сохраняется высокий титр кулыуры Р, aureofaciens ИБ 5t без утраты антагонистической активности. Данный срок хранения является вполне достаточным с точки зреиия использования биологического препарата в течение одного полевого сезона.

Практическая значимость. Разработан новый биопрепарат «Елена» из основе штамма бактерий P.aureofaciens ИБ 51 для защиты сельскохозяйственных растений от

грибных фитопатогенов. Проведен комплекс производственных испытаний н условиях открытого и закрытого грунтов, подтвердивших эффективность нового биопрепарата. В настоящее время биопрепарат «Елена» находится на с гад ни регистрации в Гоехимкомиссии Российской Федерации,

Апробация работы. Результаты работы доложены на Всероссийской конференции «Почва, жизнь, благосостояние» (Пета, 2000), на VI Международной копферешши «Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях» (Москва, 2001), на XV Междуиарод! юй научно-технической конференции «Химические реактивы, реагенты п процессы малотоннажной химии» (Уфа, 2002), на I и II Международном конгрессе «Биотехнология - состояние и перспективы развития» (Москва, 2002, 2003), ни «I конкурсе научных работ молодых ученых и аспирантов УНЦ РАН и АН РБ» (Уфа, 2002), на II Российской научно-нрактичсской конференции ((Актуальные проблемы инноваций с нстраднциош1ыми природным« ресурсами и создания функциональных гфодуктов» (Москва, 2003), на Всероссийской научно-практической конференции, носвящепной 100-летию со дня рождения заслуженного деятеля науки РФ и РБ, д.с.-хл:,, профессора Ю.А.Усманоад «Роль средств химизации в повышении продуктивное! и агроэкосистем» (Уфа, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовало 17 научных работ, в том числе 3 патента Российской Федерации.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (4 главы), описания объектов и методов исследования, экспериментальной части (4 главы), выводов, списка цитируемой литературы и приложения. Работа изложена на 154 страницах, содержит 39 таблиц и 2 рисунка. Список использованной литературы включает 158 наименований, из них 80 на русском языке.

Благодарности

Автор выряжает огромную признательность за неоценимую помошь в выполнении работы старшему научному сотрудник)' лаборатории прикладной микробиологии Института биологи Уфимского научного цептра РАН к, б. н. Галимзяновой Н,Ф, Автор сердечно благодарит за помощь н консультации старшею научного сотрудника лаборатории прикладной микробиологии Института биологии Уфимского научного центра РАМ к. б. н. Бойко Т.Ф. и доцента Башкирского государственного аграрного университета к. б. и. Исаева Р.Ф.

ОБЪЕКТЫ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследований служили штаммы псевдомонад-антагонистов, выделенные из различных почвенных и водник источников в лаборатории биологически активных веществ Института биологин Уфимского научного центра РАН. Скрининг микроорганизмов рода Pseudomonas осуществляли методом накопительных культур с использованием среды Козера (В,В. Смирнов и Е.А. Киприанова, 1990). В качестве тест-объехтов для исследования антагонистических свойств у штаммов псевдомонад использовали ф и топ ато генные грибы из Коллекции микроорганизмов Института биологии, а также полученные из Всесоюзной коллекции микроорганизмов.

Фенотип нческую характеристику выделенных культур проводили с использованием стандартных методик (Ф. Герхардт, 1984; И.Н. Скворцова, 1981).

Определение у штаммов псевдомоиад способности к синтезу индолил-3-уксусной кислоты (ПУК) и цитокининов проводили с помощью иммуноферментного анализа (Г.Р. Кудоярова и др., 1986, 1990). Определение нитрогеназной активности штаммов осуществляли методом, основанным на восстановлении ацетилена {М.М. Умаров, 19В6). Влияние железа на ангифуигальные свойства псевдомонад изучали на среде Кинг В, сравнивая антагонистическую активность культур в отсутствии железа и с добавлением 100 мкг/мл FeCtj (В.В. Смирнов и др., 1990), Хнтиполитическую активность штаммов, а также наличие у псевдомонад способности к разложению фосфатов определялн при выращивании культур на агар и зова иных средах с добавлением коллоидного креветочного хитина и соединений фосфора соответственно. О гидролизе хитина и фосфатов судили по образованию вокруг колоний бактерий зон просветления питательной среды.

При подборе оптимальных способов консервации в лабораторных условиях штаммов-антагонистов рода Pseudomonas изучали жизнеспособность и антагонистическую активность клеток при хранении в жидкой культуре, на носителях (оксиды магния и алюминия, каолин) и в лиофнльно-высушенном состоянии.

Изучение влияния штаммов псевдомонад на растения проводили на злаковых, овощных и технических сельскохозяйственных культурах. Во всех вегетационных и полевых опытах использовали препараты культур, полученные культивированием на жидких средах Кинг В (И.Н. Скворнова, 1981) либо LB (Пат. 2130261, РФ). Титр препаратов составлял 1 -5 10' КОЕ/мл. Инокуляцию семян растений проводили из расчета ! 0*-107 КОЕ/семя. В качестве эталонов средств защиты растений от болезней служили

варианты с применением химических протравителей (Дивиденд, Феразим, ТМТД) и биопрепаратов (Фнтоспорин, Планриз, Агат-25К).

Стимулирующее действие псевдомонад на всхожесть семян растений изучали ь лабораторных условиях. Для этого семена обрабатывали КЖ штаммов и проращивали во влажной камере в чашках Петри при 28 °С. Учет всхожести семян проводили на вторые и четвертые сутки инкубации.

Исследование эффективности применения выделенных штаммов бактерий рода Pseudomonas против корневых гнилей пшеницы первоначально изучали в условиях лаборатория, затем в 2002 г. провела полевые мелкоде ля ночные испытания на опытном участке совхоза им. Цюрупы по общепринятой методике (Методические указания по государственным испытаниям фунгицидов, антибиотиков и протравителей семян сельскохозяйственных культур, 1985) яа яровой пшенице сорта Жница. В 2001 г, исследовали эффективность применения выделенных штаммов бактерий рода Pseudomonas против твердой головни пшеницы в условиях закрытого (теплица Института биологии Уфимского научного центра РАН) и открытого грунтов (на опытных поляк Учебного хозяйства Башкирского государственного аграрного университета). В связи с отсутствием естественного заражения семян головневыми болезнями применили искусственное заспорение.

Оценку эффективности применения псевдомонад в качестве агентов биологического контроля заболеваний овощных культур осуществили в лабораторных и вегетационньи опытах на огурцах сорта Пионер, фасоли сорта Харьковская белосеменная Д-45, картофеле сорта Невский.

При изучении динамики численности интродуцированных культур псевдомонад в ризосфере сельскохозяйственных растений использовали стрептомицинрезистентиый клон P.aureofaciem ИБ 51SIr, сохранивший свойства исходного штамма. Учет численности интродуцированного микроорганизма производили методом разведений, путем высева на среду со стрептомицином (1000 мкг/мл).

Статистическую обработку результатов проводили, используя критерий Стьюдента на 5% уровне значимости. Данные, полученные в опытах, обработали на персональном компьютере с помощью программы Excel-97.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. СКРИНИНГ И ИЗУЧЕНИЕ НОВЫХ ШТАММОВ PGPR ( РИЗОБАКТЕРИЙ, СПОСОБСТВУЮЩИХ РОСТУ РАСТЕНИЙ) PSEUDOMONAS

1.1. Выделение и Фенотипическая характеристика ковьм. штаммов-антагонистов Фитопатогеннш грибов рода Pseudomonas

Методом накопительных культур из почвенных образцов Мелеузовского и Иглинского районов Республики Башкортостан, а также из сточных вод биологических очистных сооружений г. Орска и г. Стерши-амака выделено 5 штаммов-антагонистов, которые в дальнейшем были отнесены к различным видам рода Pseudomonas. По совокупности культуральньвс и фкэполого-биохимических характеристик 2 штамма были идентифицированы как P.aureofaciens (ИБ 51, ИБ 6), 2 штамма - как Р. putida (ИБ 56, ИБ 17), для штамма ИБ 182 видовая принадлежность не определена.

1 ^.Характеристика выделенных культур по наличию свойств, положительно влияющих на растение

С применением известных методик выделенные штаммы псевдомонад были описаны с точки зрения свойств, характерных для РОРЛ. микроорганизмов (табл.1).

Таблица 1

Характеристика выделенных штаммов рода Pseudomonas как PGPR-микроорганизмов

Штаммы Ii« Im ¿j- Я ö fe ИУК, иг/мл КЖ i g S я ff! Is jg « я s Хитнноли-тическая активность, мм/мм Растворение минеральных фосфатов ! Минерализация органи-1 ческих фосфатов

P.aureofaciens И Б 51 205 878 0,08 - - -

P.aureofaciens ИБ 6 680 511 - - - -

Р. putida ИБ 56 40 38 - - + -

Р. putida ИБ 17 - 255 - - + -

Pseudomonas sp. ИБ 182 IS - 0,43 5,75 + -

У штаммов P.aureofaciens ИЕ 51, P.aureofaciens ИБ 6 обнаружена способность К продуцированию цитоки ниноподобньк веществ и ИУК, штаммы Р. putida ИБ 56, Р. putida ИБ 17 и Pseudomonas sp. ИБ 182 могут растворять неорганические фосфаты. Штамм Pseudomonas sp. ИБ 182 - единственный из пяти изолятов - обладает нитрогеназной и

хитиишштичсской активностями. Даятшс свойства достаточно редко встречаются у представителей рода Pseudomonas.

1.3. Особенности антагонистического вействя штаммов псевдомонад на фнтопатогедные

шк§ы

Для исследования антагонистических свойств выделенных культур псевдомонал был определен спектр антигрибной активности штаммов (табл.2). Показало, что все изучаемые штаммы подавляют широкий спектр фитопатогенных и фитотоксичных грибов.

Антагонистическое действие нсеидомонад по отношению к грибным фитопатогепам выражалось в подавлении прорастания спор микромвцетов и изменении морфогенеза грибов - мицелий излишне разветвленный, часто ссптированный (рисЛ ,2). В числе других особенностей воздействия метаболитов пссвдомиаач па грибы было отмечено, что в зоне антагонистического действия бактерий некоторые представители рода Fusarium (F.oxysporum, F.gibbosum, F.semitecrum, F.solani) не сформировали воздушный мицелий, а также у фитонатогенов отсутствовало спорообразование.

Таблица 2

Размеры зон ингибирования роста 1рибных фитопатогеиов штаммами бактерий рода Pseudomonas (третьи сутки инкубации при 2S *С)

Виды фитопатогенных грибов Диаметр зоны ингибирования роста гриба, мм

Штаммы Pseudomonas

Р. аигсо-faciens HB 51 Р. aureo-t'aeiens IIB 6 P.putida ИБ56 P.putida ИБ17 Pseudomonas sp. ИБ 182

Fusarium culmorum 7-U 8-14 17-19 12-16 15-21

Fusarium gtbbosum 33-37 7-13 10-14 9-15 6-10

Fusarium gramincaram 6-8 - - - -

Fusarium nivale 29-33 15-21 8-12 10-14 7-13

Fusarium oxyspomm 27-31 8-12 6-8 8-14 8-12

Fusarium semiteclum 8-10 11-17 19-25 22-30 J4-16

Fusarium sotani 7-11 8-12 10-14 Ю-14 11-15

Fusarium avemeeum 14-IS 5-11 7-9 7-11 8-10

Bipolaris sorokiniana 52-58 34-36 26-34 20-24 22-28

Altemaria altcmata 16-22 14-16 11-17 16-20 12-16

Feniciliium fumculosum 28-34 - 8-12 12-16 -

- отсутствие зоны подавления роста тест-гриба

Рис.1 Прорастание конидий и формирование мицелия Bipolaris sorokirtiana:

а - контроль; под воздействием метаболитов:

б,д - Pseudomonas aureofaciens ИБ 6; в - Pseudomonas sp. ИБ 182; г- Pseudomonas aureofaciens ИБ 51. 48 часов инкубации. Световая микроскопия. Увеличение х 400 (а, в,г,д); х 1600(61.

Рис. 2 Прорастание конидий и формирование мицелия Fusarium culmorum:

а - контроль; под воздействием метаболитов:

б, д - Pseudomonas putida ИБ 56; в - Pseudomonas sp, ИБ 182; г- Pseudomonas aureofaciens ИБ 51. 48 ч инкубации. Световая микроскопия. Увеличение х 400 (а, в,г,д); х 1600 Гб).

Показано, чтоантагонизм выделенных штаммов псевдомонад не связано синтезом сцаерофоров и хигщвд, Установлено, что интибированне роста грибных фигогтатогенов определяется про душ фова ннем веществ антибиотической природы. Так, из КЖ штаммов Р.а u re о faciere ИБ 51, P.aureolaciens И Б 6, P.putida ИБП были выделены ангнфунгалыые метабол:¡ты, ранее неописанные для псевдомонад в литературе, которые представляли собой трипептиды глицерина (Четвериков, 2003).

1.4. Изучение ростстимУЛ1фУЮшей активности штаммов псевдомонад

При шучении воздействия выделеюих штаммов псевдомонад на растения установлено, что штаммы Р. putida ИБ 56 и Pseudomonas sp, ИБ 182 симулировали всхожесть всех испытуемых семян растений, тогда как для штамма P.auieo&ciens ИБ 51 увеличение всхожести семян было показано только на культурах капусты и огурш (табл.З). Наибольший спекулирующий эффект был отмечен При использовании КЖ штаммов псевдомонад для Замачивания семян огурца.

Таблица 3

Влияние бактеризации штамм ам и псевдом оиад на всхожесть семян

сельскохозяйственных культур (10?-10*КОЕ/г семян)_

Штамм Превышение всхожести семян над контролем (вода дистиллированнаяX %

Томат (4с утки) Свекла (4 сутки) Капуста (4 сутки) Огурец (2 сутки)

P.auieo&ciens ИБ51 - - 4,3 147,4

P.putida ИБ56 3,2 8,3 6,5 157,9

Pseudomonas sp. ИБ 182 2,2 27,8 6,5 131,6

В результате изучения влияния выделенных штаммов лсевдомонад на всхожесть семян томата, огурш, свеклы, капусты было установлено, что при выборе биологического препарата, применяемого для предпосевной бахтершэшш семян, необходимо исходить ш индивидуальных особенностей культуры растения и штамма-антагониста,

1.5. Изучение оптимальных способов хранения в лабораторных условиях штамм ов-атагоннстов

При изучении различных способов консерващш штаммов-антагонистов рода Р$еийотола5 в лабораторных условиях оптимальным вариантом было пршнано хранение культур в пноф иль но-высушенном состояшиь Но при консервашш биопрепаратов на основе псевдомоиад-атггагонистов данный способ нельзя считать технологичным из-за его

дороговщны и длительности во времени. Поэтому на примере штамма Paute о faciere НЕ 51, который послужил основой для создания биологического препарата «Елена», был разработан способ хранения культур-антагонистов на твердых носителях.

В ходе проведенных экспериментов были подобраны оппмальные сост »отеши в смеси носитель; суспензия биопрепарата (табл.4). Показано, что хранение на каолине с 30% внесением по весу жидкого биопрепарата позволяет в течешге трех месяшв поддерживать высокий титр культуры псевдомонады без утраты антагонистической активности.

Таблица 4

Жюнеспособность н антагонистическая активность ипамма Pseudomonas aureofeciens И Б 51 при хранении на твердых нос те лях_

Варпанг Время Количество клеток Радиус зоны подавления роста

хранения, м ее. в 1 г смеси Brpolarís sotokiniatia.MM

A]j03-70% 0 (7,Э±0,6>-10' 7-12

MgO-70 % 0 (2,3 ±0,6)'10* 8-М

Каолин-70 % 0 (5,4±0,&) 10" 7-12

Каолин-50 % 0 (4 ¿±0,3)10* 10-12

А1203-70% 1 (5,б±0,5)'101 5-6

M »>0-70 % 1 - -

Каол1ш-70 % 1 (M±0,Q)I0V 8-10

Каолин-50 % 1 0,5*0,5 )10" 5-7

AljOj-70% 3 (l,4±0,5)T0* -

Каолин-70 % 3 <3,4±0,5)Ю' 6-10

Каол1т-50 % 3 (5,3 ±0,5 )Ю* -

А120}-70ГО 10 - -

Каолин-70 % 10 (9,7±0,5)'Ю" 6-7

Каолин-50 % 10 (4,2*0,5)10' -

-жизнеспособные клетки не обнаружен;

-антагонистическая активность в отношении гриба Bipolare sorokinîatia не обнаружена.

2, ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ВЫДЕЛЕННЫХ ШТАММОВ РОДА PSEUDOMONAS ДЛЯ ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ ОТ БОЛ ЕЗНЕЙ И ПОВЫШЕНИЯ УЮЖАЙНОСТИСЕПЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЬГХ КУЛЬТУР

2.1 .Изучение эффективности применения штаммов псевдомонал для зашиты яровой пшеницы от корневых ги!шей, альтернариаза. твердой головни в условиях вегегапионилх И полевых опытов

Экспериненгы в условиях лаборатории послужили основой для предв артельных выводов о возможности использования выделенных штаммов-а нгаготгстов для защиты пшениш от болезней.

Покаэвю, что новые штаммы псевдомонад в условиях естественного инфекшюнного фона заражеши посевного материала (12,6% растений пораженных гельмпнгоспорнозной корневой гннлью) способствовали снижению распространения

гельмннтоспориознон корневой гнили в среднем на 60,3-87,3%. Наряду с этим выявлено также, что бактеризация семян пшеницы штаммами Р. aureofaciens КБ 51, Р, aureofaciens ИБ 6, Pseudomonas sp. 182 привела к уменьшению распространения грибов р, Altemaria на 54,7%; 53,5%; 51,4% соответственно.

Отмечено, что применение штаммов Р. aureofaciens ИБ 51, Р, aureofaciens ИБ 6, Pseudomonas sp. 182 положительно сказалось на развитии растений пшеницы, способствуя увеличению длины проростков по сравнению с контролем в среднем на 9,0-18,8%.

Результатом экспериментов, ставивших себе целью изучение эффективности использования для борьбы с корневой инфекцией пшеницы смесей штаммов-антагонистов, оказалось, что использование бактериальных комплексов псевдомонад менее эффективно, чем обработка чистыми культурами штаммов-антагонистов. Ранее методом перекрестных штрихов на мясо-пептонном агаре бьшо показано, что исследуемые штаммы не проявляют антагонистических свойств по отношению друг к другу. Но возможно, что в условиях дефицита питательных веществ (как это было в модельном опыте) микроорганизмы вступили в конкурентную борьбу за субстрат, что могло послужить основой для развития между ними антагонистических взаимоотношений и не позволило проявиться явлению синергизма.

Эффективность предпосевной бактеризации семян штаммами псевдомонад для зашиты пшеницы от корневых гнилей была оценена также в полевом мелколеляночном оиьгге 2002 г. Кроме того, изучено влияние интродукции бактерий-антагонистов на аборигенную микробиоту ризосферы пшеницы.

По результатам опыта наиболее эффективными культурами показали себя штаммы Р. aureofaciens ИБ 51 и Р. putida ИБ 17 (табл.5). Биологическая эффективность данных псевдомонад по защите пшеницы от корневых гнилей составила на период уборки урожая 15,7% и 14,7%, соответственно, по сравнению с контролем. Необходимо подчеркнуть, что предпосевная обработка семян пшеницы культурой штамма Р, aureofaciens ИБ 51 не только способствовала снижению заболевания растений корневыми гнилями, но и положительно повлияла на элементы структуры урожая ч урожай в целом. Так, применение биопрепарата на основе штамма Р. aureofaciens ИБ 51 способствовало увеличению длины растений и числа колосков в колосе на 18,1% и 18,8% соответственно; масса 1000 зерен увеличилась на 23,3%, а урожая - на 15,6%, Кроме того, было установлено, что в варианте с обработкой семян штаммом

Таблица 5

Влияние бактеризации семян пшеницы сорта Жница штаммами-антагонистами рода Pseudomonas на элементы структуры урожая и

поражение растений корневыми гнилями

Варианты опыта 0 к 1 § ■5' 1 s Высота растения, см а о о с 0 Ш £ 1 § % « а s Число колосков в главном колосе, шт Число зерен в главном колосе, шт Масса 1000 зерен, г 1 Распространение корневых гнилей (полная спелость), % Биологическая эффективность, % Развитие корневых гнилей(полная спелость), % Биологическая эффективность, %

Контроль - 90,1 ±2,6 5,4±0,7 9,6±0,7 15,3±3,1 33,5±2,1 33,4±2,2 57,7±7,9 - 20,4±1,2 -

Фитоспорин 0,5 85,9±1,9 5,1 ±0,2 9,2±0,1 11,9±1,9 36,5±5,5 273±7,й 61,9±4,1 - 23,Ш,8 -

Агат-25К 0,04 91,2*12,5 5,0±1,6 10,2±2,2 11,5±4,8 36,3±6,3 28,2±8,9 53,9±8,9 - 22,2*4,3 -

Феразим I 94Д±22,1 6,1 ±0,5 11,2±1,9 18,0±3,4 35,3±4,9 32-,8»;

Р. aureofaciens ИБ 51 10* 106,Ш 0.6' б,2±0,5 1 ¡,4iÖ,5* - 1S,2±2,4 58,<>±3,4 - 17,2±l,öf 15,7*.

Р. aureofaciens ИБ 6 10« 93,3±24,0 5,9±0,9 10,7±3,1 17,4±5,9 37,5±14,9 28,0±4,6 56,6±б,9 - 21,Ш,5 -

Р. putlda ИБ 17 10< 99,4±13,3 5,4±1,0 11,6±5,1 15,8±3,7 34,9±4,9 32,4±8,7 53,9±5,4 - Л7,41 1,7* Д4;7».

Pseudomonas sp. ИБ 182 10« штш 6,040,2 ЯШй 18,9±4,8 38,6±3,3 32,0±5,6 55,4±7,6 - 20,6±5,9 -

'различия по сравнению с Контролем существенны при р=Ю,95.

Р. aureofaciens ИБ 51 содержанке белка в зерие по сравнению с контролем статистически достоверно увеличилось на 13,3%.

При исследовании динамики численности отдельных групп риэосферной микробиоты выявлено, что интродукция пссвломо пад-аотагон и сто в и ризосферу являлась возмущающим фактором для двух сообществ - мнкромнцетов и спорообразующих микроорганизмов (табл.6). Причем численность грибов на ранних стадиях развития растений при интродукции псевдомонад снизилась, а количество бактерий рода Bacillus -возросло.

Применение биологического метода в борьбе с головневыми инфекциями зерновых культур доегаточпо редко становилось объектом изучения исследователей. Целью следующих экспериментов была оценка эффективности применения биопрепаратов на основе штаммов бактерий рода Pseudomonas для подавления твердой головни пшеницы.

При проведении опьгха на пшенице в закрытом грунте установлено, чгго предпосевная обработка ссмян биопрепаратами вызывала значительное снижение поражения растений твердой головней с биологаческой эффективностью 14,7-81,9 % (табл,7). Отмечено, что при использовании биопрепаратов на основе псевдомонад из расчета 104 КОЕ/семя (I) биологическая эффективность защиты была значительно вике, чем в варианте 10й КОЕ/семя (II) или вообще отсутствовала. Анализ данных но урожаю зерна показал, что использование биопрепарата Фитоспорин и штамма Р. aurcofaciens ИБ 51 (II) позволило увеличить собранный урожай па 38,9% и 72,2 % соответственно.

В условиях полевого эксперимента, по сравнению с испытаниями в закрытом грунте эффективность биологических средств защиты в подавлении твердой головни пшеницы снизилась. Максимум биологической эффективности в борьбе с болезнью был отмечен дня биопрепаратов на основе штаммов Р. pulida ИБ 17 (II) и Р. aureofaciens ИБ 51 (П) - 40,7 % и 29,3% соответственно.

Таким образом, показано, что бактерии-антагонисты рода Pseudomonas, могут быть эффективно использованы для зашиты яровой пшеницы от корневых гнилей, алътернариоза, твердой головни,

2,2. Изучение эффективности применения штаммов псевдомонад в качестве агентов биологического контроля заболевании овощных культур

Ряд экспериментов, по оценке эффективности использования штаммов P.aureobciens ИБ 51 и Р. pulida ИБ 17 для защиты от болезнен растений огурца и фасоли

Таблица б

Влияние бактеризации семян ашевнда сорта Жшща ва численность аборигенных микроорганизмов

Вариант Гетеротрофные микроорганизмы, *1Ö® О лигоннтроф ялы, xlO8 С порообраз угощие бактерии, xlO6 Мшсрсмидаты, *1(Г Актином ицеты, *1СР

Контроль I 1 (47±1,47 3,31 ±2,70 4Д9±5,02 24,4±8,17 4,44±1,91

II 4,72±3,47 1б,0±10,1б 2,03±0,95 3,65±1,Й1 нд

III 4,81 ±2,04 3,38±0,9б 0,31±0,28 2,39±3,14 4,17±4,48

Фвгоспо-рин I 1,15*0,58 1,13±0,41 2,52±2,60 3,54±0,89

II 9,59±4,45 7,04±5,97 ■ьЩгрЩ-^ШШШШЯШЩ} 1,37±1,69 НД

III 3,09±2,07 3,44±1,25 0,0б±0,12 13,75±22,94 7,40±10,55

АГЗТ-25К I 2,46±2,04 0,76±0,бб 1,53±1,51 шшаю&яжш 1,93±0,7б

II 25,52±33,28 I3,76±25,99 2,31 ±0,00 нд

Ш 2,33±1,16 0,03±0,08 3,99±2,07 2,77£2,39

Феразим I [,84±U6 2,08±2,16 2,25±2,41 шшттттт 3,13±1,55

И 2,98±1,I6 3,89±3,52 2,92±0,36 0,бЗ±1,81 нд

Ш 4,23 ±0,5 7 3,04±1,99 0,25±0,68 8,47±9,07 7,20±7,7б

Р. а иге о-Jaciens ИБ 51 I 1,31 ±1,51 1,58±1,23 2,14±3,32 2,3 5 ±4,3 8

II 4,04±4,09 4,02±2,05 5,21±4ДЗ 7,26±4,09 нд

HI 2,46±2,00 3,75±!,73 0,09±0,16 д. Y'7,08:i.<),45 8,33*4,48

Р. aureofaciens И Б 6 I 1,34±0,67 1,32±0,59 1,69*0,39 '••-' ¿-'.Г5,80=7,(54":.'.Ч г- 2,47 ±3,24

II 3,45±4,89 3,54±4,49 1,72±3,34 нд

III 5,16±5,37 3,84±2,41 0,16±0,12 5,92±3,18

Р. putida ИБП I 2,31 ±2,22 1,26±0,17 0,79±0,5б 2,69*4,38

II 4,42±3,71 4,87±2,47 3,53±2,44 1,89±1,34 нд

III 5,56±1,85 ^i: ••'SS',78*2.7.98*".: 0,16±0,08 7 23zl';39* 6,3 8±19,05

Pseudomonas sp. ИБ Ifi2 I 1.4Ш.05 1,81±I,15 1,80±1,22 2,50±4,48

II 5,32i3,16 15,64±19,57 5,00±0,00 нд

Ш 5,97±1,44 3,28±US 0,04±0,27 12,76±54,06

* различия по сравнению с Контролем i _ I-фаза третьего листа; Д-фаза кущения; Ш-фаза молочно-восковой спелости.

Таблица 7

Оценка эффективности использования штамм ов-аятаголистов рода Pseudomonas для подавления твердой головни пшеницы сорта

Жница в закрытом грунте

Вариант -fc О к щ • а, -С ч) Ча ti Структура урожая И В,# 5 я о я 6 s U ч р lX и Биологическая эффективность, %

Высота растения, см Длила главного колоса, см Число колосков в главном колосе, шт. Число зерен в главном колосе, шг. Масса 1000 зерен, г — Урожай, г

Контроль - 48,2±2,0 3,8*0,2 5,2*0,3 3,4*1,3 23,8±2,0 1,8±0,3 59,0±6,0 -

Планриз 0,5 42,1 ±2,5 5,0*0,3 2,8±1,5 25,7*15,9 1,4±0,7 ; 32,0±13,5*_,-

Фитоспорин 0,5 50,6±1,9 .4,5^0,3* 1,8±1,2 25,0±2,9 ~ 2,5*0,3* " 17,5±4,3*.-. «70,3 V

Дивиденд 2 43,3±2,1 >'-2;6i0,2*-.-> 1,8±0,5 25,7*5,8 1,7±1,3 ; ? 0;0i0i0*. ';: ,.:l0Q,0*i

I- Р. auieofeciens ИБ 51 1Сс 5,1 ±0,2 4,7±0,5 24,9±4,9 1,9*0,6 '50,3*3,8* Х

II- Р. auteofeciens ИБ51 49,8±1,4 3,5*0,2 5,2*0,3 3,5±0,9 29,0±3,7 •3,1 ±0,9*. , :.\;-25,7±4,9* ••, . 56,4* >

I- Р. auieo&ciens ИБ6 1 <t 51,1±2,1 3,3*0,2* ~ 5,1*0,3 3,9±0,7 25,7±9,9 2,! ±0,6 -•4Г,0±4,3*,;.- • 30,5* '

II- Р. аите oficíeos ИБ 6 1<г у 4,440,3* 2,2*0,6 25,б±8,9 1,б±2,3 ■s-10,7*12,5?, • •81,9': :

I- Р, putida ИБ 56 itf 51,2*1,8 4,8*0,3 4,0±0,8 25,2*4,7 1,8*0,8 50,0*13,1 -

11- Р. putida ИБ 56 Itf ЙШ}® 4,7*0,3 2,9*0,6 24,8±2,4 1,6±1,4 43,7±12,3 -

I-P. putida ИБ 17 lfl1 47,4±1,9 »•.•г'.тшу* 3,1±0,5 25,8*5,0 2,1±1,3 37,0±21,2 -

П- Р, putida ИБ 17 52,7±1,9 4,8±0,3 4,2*0,6 22,9±5,0 2,4*1,2 •¿.323.+15í6*;< '•45,3.*,

I- Pseudomonas sp. ИБ 182 lfl* 47,3*1,7 ММЙ 3,3 ±0,8 22,3 ±0,7 1,4±0,1 55,3±17,б -

II- Pseudomonas sp. ИБ 182 тття ЩБЩ?т 1,5*0,6 27,4±14,9 U±2,5 •767,3V

♦различия по сравнению с Контролем существенны при р=0,95.

показал, что применение исследуемых культур подавляет развитие бактериоза огурца в 1,2-2,3 раза и корневых гнилей фасоли в 2,6-5,3 раза. Кроме того, предпосевное замачивание семян стимулировало рост растений л увеличение клубеиысообразования на корнях фасоли в 8,5 н 5,4 раза соответственно.

Как видно из таблицы 8, предпосадочная обработка клубней картофеля сорта Невский штаммами псевдомонад Р, aureo facie (is ИБ 51, P.putida ИБ б привела к снижению поражения проростков ризоктонпозом, соответственно, в 2,8, 3,9 раза; а опрыскивание растений биопрепаратом на основе штамма P. aureofaciens ИБ 51 позволило снизить развитие фктофтороза в 1,3 раза.

Таблица 8

Эффективность подавления развития ризокгошюза и фитофторы картофеля сорта Невский штаммами-антагонистами

Варианты опытов Ризокгониоз Фитофтороз

Распространение ризокто-ниоза, % ё Я М 3 Я £ Й § S3 е- 1 s д ti1 d и -э- я w л Развитие фитофто- роза, % 1 л og 4 ö Е з En ° « Е tí § BÄH Д vts

Контроль 61,6*22,9 - 53,8±6,7 -

Фитоспорин 41,8±34,9 - 44,б±10,5 -

ТМТД нд нд

P. aureofaciens ИБ 51 ■-шхбт- 4!,<>¿4,9'- '

Р. aureofaciens ИБ 6 48,6±8,9 -

Р. pulida ИБ 17 27,9±20,7 - 44,5±15,2 -

Pseudomonas sp. ИБ 182 нд нд 49,8±15,8 -

* различия по сравнению с Контролем существенны при рЮ,95;

нд-нег данных,

3. ИЗУЧЕНИЕ КОЛОНИЗИРУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТИ ШТАММА PSEUDOMONAS AUREOFACIENS ИБ 51sm

Изучение динамики развития популяции штамма P.aureofaciens ИБ 5 Iм', интродуцированиого в ризосферу пшеницы, показало, что данный штамм обладает хорошей приживаемостью в ризосфере и способен к активной колонизации корней, о чем свидетельствует возрастание на порядок численности популяции штамма-акгагониста в течение первого месяца после интродукции.

Численность штамма-антагониста по отношению к обшей числе] щостн гетеротрофных микроорганизмов в ризосфере пшеницы колебалась в течение нолевого

сезона в пределах 0,4-2,7%. Максимум численности жизнеспособных клеток штамма-мутанта (1,0-107 КОЕ/г корней) отмечен в фазе третьего листа - через месяц после посева (табя.9). Показано, что в течение всего периода вегетации ивггродудированный штамм характеризовался высокой численностью популяции в ризосфере (от 107 до 106 КОЕ/г корпя), а также сохранил in vivo антагонистическую активность и отношении фитолатогенных грибов.

Анализ численности аборигенной микрофлоры в контрольном варианте н в варианте с обработкой семян КЖ штамма Р. aureofactens ИБ 51®°, показал, чго интродукция данного шгамма в ризосферу пшеницы не подавляла бактериальную мвкробиоту.

Таблица 9

Динамика численности штамма Pseudomonas aurcofaciens ИБ 5 lstr в ризосфере пшеницы

в условиях полевого опыта

Фаза развития пшеницы Численность клеток в ризосфере пшеницы, КОЕ/г Диаметр зоны подавления роста Bi polaris sorokiniana, мм

Третий лист (1,0±0,б)-10' 10-15

Кущение {Э,4±0,5>10п 20-25

Молочно-йосковая спелость (1,710,8)-10" 10-lf)

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ ИСПЫТАНИЙ БИОПРЕПАРАТА «ЕЛЕНА»

На основе пгтамма бактерий P.aureofaciens ИБ 51 создан новый биопрепарат «Елена», па который для предприятия-производителя ГУП «Опытный завод АН РБ» были разработаны лабораторный регламент и техническое задание на производство.

В 2002-2003 годах были проведены производственные испытания биопрепарата «Елена» на посевных площадях производственных объединений Мелеузовского района Республики Башкортостан, а также в тепличных хозяйствах 1"УСП «Рощинский» и ГУП «АлексесвскиЙ». Были получены положительные результаты по применению биопрепарата на горохе, картофеле, яровой и озимой пшенице, томатах защищенного rpyirra,

ВЫВОДЫ

1, Выделепы, идентифицированы и депонированы а Коллекцию микроорганизмов Института биологии Уфимского научного центра РАН пягь новых штаммов бактерий-антагоцистов рода Pseudomonas: Pseudomonas aurcofaciens ИВ 51, Pseudomonas

aureofaciens ИБ 6, Pseudomonas putida ИБ 56, Pseudomonas putida IIB 17, Pseudomonas species ИБ 182, подавляющих широкий спектр фитопатогенаых грибов.

2. Выявлено, что штаммы Pseudomonas aureofaciens ИБ 51 к Pseudomonas aureofaciens ИБ б синтезируют индолил-З-уксусную хиелоту н цигокюшиоподобные вещества. Штамм Pseudomonas species ИБ 182 обладает нитрогеназной и хктннологической активностью.

3. Установлено, что антибиотические вещества, продуцируемые псевдомонадами, задерживают прорастание спор фитонатогенных грибов и вызывают нарушение морфогенеза мицелия.

4. Для штамма Pseudomonas aureofaciens ИБ 51 предложен способ хранения бактерий в смеси с каолином (в соотношении 7:3). Данный метод консервации позволяет в течение трех месяцев поддерживать высокий титр культуры без утраты антагонистической активности.

5. В вегетационных и полевых мелкоделяночных опытах доказана эффективность применения штаммов псевдомонад для зашиты пшеницы от корневых гнилей, альтернариоза, твердой головни, а также против бактериоза огурцов, корневых гн&чей фасоли, черной парши и фитофтороза картофеля. Показано, что по ^ффектталости использования на сельскохозяйственных культурах описанные штаммы псевдомонад не уступают известным биопрепаратам Фитоспорин, Планриз, Агат-25К.

6. Выявлено, что выделенные штаммы псевдомоная стимулируют рост и развитие растений. Предпосевная обработка семян пшеницы препаратом на основе Pseudomonas aureofaciens ИБ 51 способствовала увеличению количества белка в зерне на 13,3 % по сравнению с контролем.

7. Показано, что штамм-антагонист Pseudomonas aureofaciens ИБ 511" хорошо приживается в ризосфере пшеницы, сохраняя в течение всего периода вегетации высокую численность микробной популяции (I06КОЕ/г корня) и антагонистическую активность в отношении фиходатогенных грибов. Интродуцированный штамм-антагонист пе оказывает подавляющего влияния на представителей аборигенной бактериальной микробиоты ризосферы пшеницы.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 .Свешникова К.В., Логинов О.Н., Галимзянова Н.Ф., Бойко Т.Ф. Штамм бактерий Pseudomonas sp, обладающий антагонистической активностью к фитопатотенным

грибамУ/Всероссийская конференция «Почва, жизнь, благосостояние»:Тез. докл., март 2000 г.- Пенза, 2000.-С. 135-136.

2.Логииов О.Н., Мелентьев А.И., Силшцев II.IL, Бойко Т.Ф., Галимзянова Н.Ф., Свешникова EJB. Роль бактерий-антагонистов фитопатогенов в защите сельскохозяйственных растений от болезней, - Уфа : Изд-во «Гилем», 2001,-66 с.

3. Свешникова E.D., Логинов О.Н. Штамм бактерий Pseudomonas putida 56-антагонвст фитопатогенов, проявляющий фитогормонапьную активность// VI Мелданар. конф. «Регуляторы роста и развития растений в биотехнологиях»: Тез. докл., июнь 2001г,-М.:МСХА, 2001.-С. 190-191,

4.Логанов О.Н., Свешникова Е.В., Исаев Р.Ф., Силищев Н.Н., Галимзянова Н.Ф., Бойко Т.Ф. Биопрепараты против твердой головни ггшеннцы //Защита и карантин растений.-2002,- № 9.-С. 39

5. Логинов О.Н., Свешникова Е.В., Пугачева Е.Г., Исаев Р.Ф., Снлищев IIJÎ. Бактеризация картофеля против ризоктониоза //Материалы XV Междупар. научно-техшпеской конф. «Химические реактивы, реагенты и процессы малотоннажной химии», 7-10.10.2002 г.- Уфа; Гос. изд-во иаучн-техн. rorr-ры «Реактав»,2002.-Т. 1.-С. 106.

^.Свешникова Е.В., Логинов О.Н. Исследование условий хранения биопрепаратов на основе штаммов псевдомонад //Там же, С. ¡07-108.

7. Свешникова Е.В., Логинов О.Н. Использование биопрепаратов для борьбы с твердой головней пшеницы // Материалы I Международного конгресса «Биотехнология -состояние и перспективы развитая», 14-18,10.2002 г.-М.,2002.-С. 141.

Sveshnikova E,V., Loginov O.N. The use of btoprcparations for the stinking smut control //1-st International Congress «Biotechnology - state of the art prospects of development» October, 14-18.2002,- M-,2002.-P. 141-142.

8. Пат. 2187553 Российская Федерация, 7 С 12 N 1/20, 9/42. Штамм бактерий Pseudomonas species - продуцент хшняолитических фермеитов I Логинов О.Н., Свешникова B.D., Силищев Н.Н., Мелентьев А.И., Галимзянова Н.Ф., Бойко Т,Ф.; Заявлено 11.04.2001; Опубл. 20.08.2002. Бюл, 23.

9. Пат. 2203945 Российская Федерация, 7 С 12 N 1/20, А 01 N 63/00// (С 12 N 1/20, С 12 R 1:38). Штамм бактерий Pseudomonas aureofaciens дня получения препарата против заболеваний пшеницы, вызываемых грибными фитопатогенами / Логинов ОЛ1, Свешникова Е.В., Силищев Н.Н., Мелентьев А.11, Галимзянова Н.Ф., Бойко Т.Ф.; Заявлено 17.08.2001; Опубл. 10.05.2003. Бюл. 13.

ЮЛ огни о в О.Н., Свешникова Е.В., Васильева U.C., Силищев H.H. Биопрепараты в аспекте повышения качества урожая// Материалы Ц Российской паучно-практической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами н создания функциональных продуктов», 02-03.06.2003 г.-М.,2003.-С. 89-90.

11 Логинов О.Н., Свешникова Е.В., Галимзянова Н.Ф, Исследование приживаемости шпродуцврованных псевдомонад-антагонистов в ризосфере яровой тпеницыЛТам же, С, 98-99,

12.Свешникова Е.В., Логанов О.Н., Силищев H.H., Хадыев И.Р„ Исаев Р.Ф. Новый биопрепарат комплексного действия «Елена» // Материалы Всероссийской тучпо-пракгической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения заслуженного деятеля науки РФ и РБ, д.с.-х.п., профессора Ю.А.Усманова «Роль средств химизации в повышении продуктивное™ вгроэкоснстем», 4-6,06.2003 г.- Уфа: Иэд-во БГАУ, 2003.-С. 310-313.

13.Пат. 2213774 Российская Федерация, 7 С 12 N 1/20// (С 12 N 1/20, С 12 R. 1:40). Штамм бактерий Pseudomonas putida для получения препарата против заболеваний пшеницы, вызываемых грибными фитопатогеиами / Логинов O.II,, Свешникова Е.В., Силшцев H.H., Мелентьев A.M., Галимзянова Н.Ф., Бойко Т.Ф., Исаев Р.Ф Заявлено 25.03.2002; Опубл. 10.10.2003. Бюл. 28.

14.Свешннкова Е.В., Логинов О.Н., Исаев Р.Ф., Силищев H.H., Галимзянова Н.Ф., Бойко Т.Ф.Дтя борьбы с болезнями картофеля//Защита и карантин растепнй.-2003.- № 10.-

15. Кузьмина Л.Ю., Логинов О.Н., Бойко Т.Ф,, Исаев Р.Ф., Свешникова Е.В., Мелентьев А,И. Эффективность бактериальных препаратов при защите растений яровой пшеницы от твердой головни //Сельскохозяйственная биология.-2003,- № 5.-С, 69-73.

16. Свешникова ЕЗ. Бактерии рода Pseudomonas в защите растений от болезней// Материалы 1 конкурса научных работ молодцх ученых и аспирантов УНЦ РАИ и АН РБ, 10-18,12,2002 г. -Уфа: Изд-во «Гнлем», 2003.-С. 45-46.

17. Свешникова Е.В., Четвериков СЛ., Логинов О.Н. Агешы биологического контроля рода Pseudomonas, обладающие нитрогеиазной активностью// Материалы II Московского международного Конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития», 10-14.11.2003 г,-М.,2003.-С. 226-227.

Svcshnikova E.V.; Chetvcrikov S.P,; Loginov O N. Pseudomonas- the agents of the biological control with nitrogenious activity//II Moscow International Congress «Biotechnology: state oflhc art prospccts of development» November, 10-14.2003.- M.,2ft03.-P.226-2'27.

C. 35

0 82 в

Подписано в печать 22,11.03. Формат 60x84 1/!6. Бумага офсетная . Печать Офсетная, Гарнитура "Тайме" Уел. печ. л. 0,49. Уч. из л. л. 0,98 .Тираж 110 экз. Заказ 022. Отпечатано с готовых оригиналов в типографии ИП Верко. Уфа, Цюрупы 151 оф. 22, т.: 745-935,227-600, 229-123.