Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Некоторые белки амниотической жидкости в иренатальной диагностике врожденных пороков развития и муковисцидоза плода

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кащеева, Татьяна Константиновна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Образование амниотической жидкости.

1.2. Основные биохимические характеристики амниотической жидкости на разных сроках беременности.

1.2.1. Общие положения.

1.2.2. Белковый спектр амниотической жидкости и методы его изучения.

1.3. Динамика содержания АФП в .амниотической жидкости при нормально протекающей беременности.

1.4. АФП в сыворотке крови беременной.

1.5. АХЗ в амниотической жидкости и ее значение для диагностики ДЗНТ.

1.6. Изучение активности ФМКП в пренатальной диагностике муковисцидоза.

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Получение образцов AI.

2.2. Определение содержания АФП в амниотической жидкости и в сыворотке крови беременных.

2.3. Исследование ацетилхолинэстеразы в амниотической жидкости.

2.4. Исследование активности ферментов микроворсинок кишечника плода в амниотической жидкости.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Содержание АФП в амниотической жидкости на разных сроках беременности в норме.

3.1.1. Зависимость содержания АФП в амниотической жидкости от возраста женщины.

3.1.2. Содержание АФП р амниотической жидкости в зависимости от пола плода.

3.2. Содержание ЙФП в амниотической жидкости у женщин групп высокого риска рождения детей с пороками развития.

3.3. Содержание ЙФП в амниотической жидкости плодов с пороками развития.

3.4. Количественный анализ АХЗ в амниотической жидкости в норме и при патологии у плода.

3.5. Содержание изоформ холинэстеразы в амниотической жидкости плодов с пороками развития

3.6. Исследование активности ферментов микроворсинок кишечника плода в амниотической жидкости на разных сроках беременности.

3.6Л. Исследование активности ФМКП в амниотической жидкости на разных сроках беременности в норме.

3.6.2. Содержание ФМКП в амниотической жидкости плодов с муковисцидозом.

3;6.3. Автоматизированная программа оценки результатов тестирования ФМКП в амниотической жидкости для диагностики муковисцидоза.

3.6.4. Корреляция активности ФМКП в амниотической жидкости и генотипа плода.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Некоторые белки амниотической жидкости в иренатальной диагностике врожденных пороков развития и муковисцидоза плода"

Наряду с медико-генетическим консультированием пренатальная диагностика является одной из наиболее действенных мер профилактики наследственной и врожденной патологий, частота которой, несмотря на впечатляющие успехи молекулярной биологии и массового внедрения в клиническую практику ультразвукового скринирования, продолжает сохраняться высокой и составляет 2,5-3% среди всех новорожденных /Материалы ВОЗ, 1992/. На долщ наследственных заболеваний приходится до 35-40% ранней детской смертности /Вельти^ёв, Бочков, 1992/. При этом наружения развития центральной нервной системы /ЦНС/ составляют более 30% всех врожденных пороков, обнаруживаемых у детей. Дефекты заращения невральной трубки /ДЗНТ/ - одна- ,.:ИЗ:; - наиболее часто встречающихся аномалий развития ЦНС /Лазюк и др.,1989/. Известно, что частота ДЗНТ зависит от этнической принадлежности и географических (экологических) факторов. В европейской части России частота ДЗНТ составляет примерно 1 на 1000 новорожденных, в Белоруссии - 0,8 на 1000 /Лазюк, 1989/. ДЗНТ - одно из наиболее частых мультифакториальных наружений внутриутробного развития человека. Профилактика ДЗНТ в клинической практике достигается за счет применения на ранних сроках беременности витаминных добавок и путем повыжения эффективности пренатальной диагностики /ПД/.

Помимо ультразвукового скринирования, режаюцая роль в ПД ДЗНТ принадлежит биохимическим анализам амниотической жидкости /А1/.

Вместе с тем, исследование ЙФП в амниотической жидкости на разных сроках беременности в контрольных группах и у женщин, родивжих детей с ВПР, показало, что этот тест хотя и является высокочувствительным, однако малоспецифичен, так как оказнвется положительным при самых различных патологических состояниях плода, а не только при ДЗНТ.

В 1979 году тестирование АФП в AI было дополнено измерением уровня и качественного состава холинэстеразы /ХЗ/ /Siith , 1979/. Основанием для этого послужили данные о том, что при открытых ДЗНТ в dl появляется дополнительная изоформа ХЗ, а именно, ацетилхолинэстераза /AX3//Chubb et al, 1976/.

В отечественной литературе жироко обсуждался вопрос о зависимости содержания АФП в сыворотке крови матери от особенностей течения беременности и наличия патологии у плода /Золотухина, Костюк, 1992; Кулиев, 1990; Гречанина , 1990/. На эту тему опубликован ряд обстоятельных обзоров и подготовлены методические рекомендации ( Кулиев, Гречанина, Дмитриева и др.). Данных о содержании АФП в амниотической жидкости на разных сроках беременности у женщин России в доступной литературе мы не обнаружили. Оставалось неизвестным, как коррелируют эти показатели в отечественной популяции с наличием у плода ДЗНТ, других ВПР. Корреляция содержания сывороточных маркеров с наличием хромосомных нарушений представляется особенно актуальной , так как открывает возможности для отбора женщин групп высокого риска рождения детей с хромосомной патологией. Следует подчеркнуть, что в отличие от ДЗНТ, трисомия хромосомы 21 у плода, приводящая к болезни Дауна, примерно в 30% случаев сопровождается снижением уровня АФП в сыворотке крови беременной и в амниотической жидкости /Haid and Cuckle, 1988/.

Наряду с АФП и ХЗ важное диагностическое значение имеют исследования в амниотической жидкости комплекса ферментов, продуцируемых микроворсинками кишечника плода (ФМКП). Остановлено /Brock, 1983/, что анализ этих ферментов имеет решающее значение для пренатальной диагностики муковисцидоза /МВ/ - самой распространенной моногенной болезни человека /Капранов, Рачинский, 1995/. По ориентировочным оценкам ежегодно только в России рождается около 1500-2000 детей с MB /Капранов, 1992/.

С 1983 по 1985 год анализ белков fil, таких как гаммаглутамилтранспептидаза, аминопептидаза и щелочная фосфатаза, был, по сути, единственным способом пренатальной диагностики зтого тяжелого, часто летального заболевания. После картирования гена муковисцидоза, его секвенирования и идентификации мутаций, основными в пренатальной диагностике стали методы ДНК-анализа. Однако, по опыту Лаборатории пренатальной диагностики наследственных болезней ИйГ РАМН в 80% семей высокого риска, обращающихся на НД, больной MB ребенок уже умер, таким образом эти семьи являются неинформативными для ДНК-диагностики. Прямая же ДНК-диагностика путем идентификации мутаций, согласно нажим данным, возможна только в 60-65% семей /Baranov et al.,1992/. Следовательно, и в настоящее время в России биохимическая диагностика муковисцидоза продолжает оставаться весьма актуальной.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ:

Исходя из вышеизложенного, целью данной работы является исследование содержания ряда белков в амниотической жидкости на разных сроках беременности в норме и при различных патологических состояниях плода; разработка на этой основе наиболее рациональных критериев пренатальной диагностики врожденных (ДЗНТ) и наследственных (муковисцидоз) пороков развития.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

В соответствии с цельш исследования в работе были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать динамику содержания АФП в амниотической жидкости в зависимости от срока беременности в норме и при различных патологических состояниях у плода.

2. Провести качественный и количественный анализ АХЭ в амниотической жидкости в норме и при врожденных пороках.

3. Изучить особенности изменения активностей ФМКП в амниотической жидкости в зависимости от срока беременности и состояния плода у пациенток группы высокого риска рождения детей с муовисцидозом.

4. Разработать и внедрить автоматизированную систему оценки риска МВ у плода на основе биохимического исследования ферментов микроворсинок кииечника плода во втором триместре беременности .

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВННОСИМНЕ НА ЗАЩИТИ:

1. Нормальная изменчивость уровня альфафетопротеина в амниотической жидкости достигает 30%, что необходимо учитывать при проведении пренатальной диагностики ВПР у плода.

2. Найдены количественные различия по уровня альфафетопротеина в амниотической жидкости при анэнцефалии, спинномозговой грыже и дефектах передней брюшной стенки плода, что существенно для дифференциальной диагностики

- 9 соответствующих пороков развития.

3. Доказана четкая корреляция ДЗНТ у плода с наличием специфической изоформы ХЭ в амниотической жидкости; данный тест позволяет с высокой достоверность!! дискриминировать эту патологию от ложно-положительных случаев высокого содержания АФП в амниотической жидкости.

4. В 90% семей из группы высокого риска по муковисцидозу возможно проведение пренатальной диагностики этого состояния на основании биохимического анализа белков АХ во П-м триместре беременности. Это особенно важно для семей, неинформативных или частично информативных в отномении ДНК-диагностики муковисцидоза.

5. Использование разработанной компьютерной программы оценки риска существенно повывает надежность и эффективность пренатальной диагностики муковисцидоза биохимическими методами.

6. Выявлена корреляция между активностью ферментов микроворсинок кимечника плода в амниотической жидкости и наличием мутации йе1Р508 в его генотипе.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты работы докладывались на Всесоюзных и Международных симпозиумах и конференциях: на XIX. XX, XXI и XXIII научных сессиях НИИАГ им.Д.О.Отта (1990, 1991, 1992, 1994), на Первом (Третьем) Российском съезде медицинских генетиков (1994, Москва), на ежегодней конференции Европейского Общества генетики человека (Бельгия, 1991). По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Кащеева, Татьяна Константиновна

ВЫВОДЫ

1. Исследована динамика содержания ЙФП в 220 образцах амниотической жидкости на сроках с i? по 26 неделю беременности у женщин Санкт-Петербурга и области; получены средние значения содержания альфафетопротеина и активности ацетилхолинзстеразы в норме.

2. С использованием разработанных норм исследованы изучаемые показатели в 20 образцах плодов с анэнцефалией, 10 плодов с открытой спинномозговой грыжей, 4 плодов с дефектами передней брюшной стенки, и в 2-х образцах амниотической жидкости после внутриутробной смерти плода. Получены количественные характеристики отклонений содержания альфафетопротеина в случае каждого типа пороков плода.

3. На 34 плодах с ДЗНТ открытого типа доказана четкая корреляция этой патологии с наличием специфической дополнительной полосы АХЗ; все образцы амниотической жидкости, полученные при диагностическом амниоцентезе, содержащие данную изоформу ХЗ, принадлежали плодам с указанной патологией.

4. Изучена динамика активности ферментов микроворсинок кишечника плода: гаммаглутамилтранспептидазы, аминопептидазы, общей и кишечной формы щелочной фосфатазы в 200 образцах амниотических жидкостей; получены медианы активности данных ферментов с 16 по 22 неделю.

5. Изучены особенности активности этих ферментов в 70 образцах амниотических жидкостей у плодов, больных муковисцидозом.

0. С учетом полученных данных создана компьютерная программа оценки риска рождения больного ребенка в семьях высокого риска по муковисцидозу.

- 88

7. В результате комплексного молекулярного и биохимического исследования 88 образцов амниотической жидкости плодов группы высокого риска выявлена определенная корреляция между активностью ФМКП в амниотической жидкости с наличием мутации (1е1Р508 в гене МВ.

- 89

- 82 -ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Результаты проведенных исследований заслуживают обсуждения по трем основным аспектам:

- спектр белков амниотической жидкости и врожденные пороки развития плода; активность кишечных ферментов плода в амниотической жидкости и муковисцидоз;

- связь ранних проявлений заболевания и наличие определенных мутаций в гене муковисцидоза.

Средний уровень альфа-фетопротеина в амниотической жидкости при нормально протекающей беременности здоровым плодом монотонно снижается при увеличении срока беременности от 16 до 26 недели. Содержание данного белка в норме в амниотической жидкости не зависит от возраста беременной, пола будущего ребенка и наличия моногенных заболеваний в семье. Эти выводы хорошо согласуются с аналогичными результа тами других авторов /Гречанина, 1390/. Однако, в доступной нам литературе не обнаружено данных о повышении уровня альфа-фетопротеина в амниотической жидкости у женщин, ранее родивших ребенка с ДЗНТ. Между тем, согласно нашим наблюдениям, отклонения от среднего уровня у таких женщин при сроке беременности 16- 17 недель могут достигать 33%. Можно предполагать, что у таких женщин, а, возможно, у их плодов, имеются какие-то специфические нарушения в процессах обмена веществ, приводящие к транзиторному подъему уровня АФП , или вызывающие его повышенное поступление в амниотическую жидкость. Наличие такого подъема может отражать определенную генетическую предрасположенность таких плодов к возникновение пороков ЦНС. Известно, что многие аномалии ЦНС имеют четко выраженный наследственный компонент и помимо чисто эмбриологических механизмов могут определяться мутациями определенных генов, в том числе сцепленных с Х-хромосомой /МсКиз1ск,1994/. Возможно, транзиторное повышение уровня альфафетопротеина и является проявлением эффекта соответствующих мутантных генов, однако, данное предположение требует специальной проверки.

В практическом плане необходимо учитывать такое повышение уровня альфафетопротеина при исследовании амниотической жидкости в группе беременных высокого риска рождения детей с ДЗНТ.

Отклонения до 10-127.7. от нормальных значений наблюдали также в амниотической жидкости у беременных с повышенным в 2 - 2,5 раза уровнем АФП в сыворотке крови. По-видимому, эти отклонения были следствием нарушения фетоплацентарного комплекса, вызванными хроническими заболеваниями пациентки либо неблагоприятным течением данной беременности (угроза прерывания). На результаты пренатальной диагностики пороков развития у плода подобные отклонения не оказывают существенного влияния, поскольку в случае ДЗНТ и некоторых других аномалий развития, согласно нашим данным, содержание АФП увеличивается в значительно большее число раз (в среднем в 4 - 20 раз). Вместе с тем, повышение уровня альфафетопротеина даже в 2-2,5 раза следует рассматривать как указание на необходимость более детального анамнестического и акушерского обследования данной женщины для уточнения причин повышения белка в сыворотке крови.

Согласно нашим данным, круг таких причин может быть значительно шире тех, которые обычно указываются в литературе.

Результаты комплексного исследования АФП и АХЗ в амниотической жидкости плодов с пороками развития подтвердили высокую специфичность одновременного исследования АФП и качественного анализа ХЭ для дискриминации патологии от ложно-положительных случаев повышения уровня белка. При этом количественные различия в содержании АФП при анэнцефалии, спинно-мозговой грыже и пороках передней брюшной стенки позволяют проводить дифференциальную диагностику соответствующих пороков развития.

Таким образом, выполнение первого раздела позволило, во-первых, отработать количественные критерии пренатальной диагностики ДЗНТ с помощью биохимического исследования амниотической жидкости и, во-вторых, создать научную основу для методических рекомендаций, положенных в основу региональной скринирующей программы выявления женщин групп высокого риска рождения детей с ВПР по содержанию АФП в сыворотке крови беременных.

Вторая часть исследований была посвящена проблеме биохимического метода пренатальной диагностики муковисцидоза в семьях высокого риска рождения детей с этой тяжелой патологией. Благодаря нашим исследованиям, накоплен обширный материал, позволивший получить оценки средних значений медиан и дисперсии активностей ферментов микроворсинок кишечника плода во втором триместре беременности в норме. Следует подчеркнуть, что подобные исследования в нашей стране проводятся впервые и до настоящего времени Центр пренатальной диагностики муковисцидоза является единственным в стране учреждением, где наряду с ДНК-диагностикой применяется и метод биохимического анализа амниотической жидкости /Баранов, 1994/. Актуальность биохимической диагностики, несмотря на огромный прогресс в молекулярных методах исследования гена муковисцидоза отмечается и в зарубежной литературе /Brock, 1992/. Она тем более актуальна в нашей стране, где до 80% семей высокого риска уже не имеет больного ребенка, а возможности прямой ДНК-диагностики путем идентификации мутаций все еще весьма ограничены, в связи с недостаточно полно изученным спектром возможных мутаций этого гена в отечественных популяциях /Baranov et al.,1992/.

Биохимической исследование ферментов кижечника плода не проводилось ранее в нашей стране. Частота же этой нозологии в России достаточно велика /Капранов, 1993/. Не вызывает сомнения целесообразность создания и других федеральных центров по пренатальной диагностике муковисцидоза в крупных регионах Сибири и Зрала. Разработка компьютерной программы, основанной на материале исследования ферментов микроворсинок кишечника плода в амниотнческой жидкости более чем 250 случаев, в том числе 70 с подтвержденным диагнозом муковисцидоза, позволяет стандартизовать метод биохимической диагностики, делает его общедоступным, более эффективным и позволяет рекомендовать для внедрения в других медико-генетических центрах страны.

В настоящее время исследователи уделяют большое внимание соответствию фенотипа и генотипа пациентов, страдающих наследственными заболеваниями. В литературе широко обсуждается связь клинических проявлений болезни с наличием определенных мутаций в гене муковисцидоза и клеточными механизмами нарушений транспорта ионов хлора /Bousher, 1995/. В частности, показано, что мутации, блокирующие синтез белка или нарушающие его транспорт к апикальной мембране эпителиальных клеток (например, делеция F508), как правило, приводят к особо тяжелым формам заболевания с выраженным ранним нарушением функции поджелудочной железы /Welsch, Smith, 1993/. При комплексных молекулярных и биохимических исследованиях в нашей работе была выявлена определенная корреляция между активностью ферментов микроворсинок кишечника плода в амниотической жидкости и наличием мутации delF508 в гене муковисцидоза, Эти данные можно рассматривать как свидетельство очень раннего неблагоприятного эффекта данной мутации в гомозиготном состоянии уже во внутриутробном периоде развития. Вместе с тем, у здоровых гетерозигот (delF508/+) отмечается явная тенденция к повышению активности этих ферментов в амниотической жидкости. Возможно, в какой-то мере это отражает позитивный, гетерозисный эффект данной мутации, которая, как сейчас установлено, действительно оказывает благоприятный эффект на электролитный обмен в кишечнике, препятствуя развитию диарреи "путешественников" (travel diarrhea) и обеспечивает известную устойчивость организма к действию холерного токсина (тезисы 1995 N 103).

Таким образом, в результате этой части исследований отработаны принципы биохимической пренатальной диагностики муковисцидоза во втором триместре беременности. Создана и опробована компьютерная программа оценки риска муковисцидоза у плода на основе биохимических исследований амниотической жидкости. Данная программа существенно повышает эффективность и надежность пренатальной диагностики муковисцидоза и наряду с молекулярными методами находит широкое применение в нашей стране. Полученные результаты вошли в методические рекомендации по пренатальной диагностике муковисцидоза, изданные МЗ СССР (1991). С использованием разработанной схемы проведена биохимическая пренатальная диагностика муковисцидоза в 270 семьях высокого риска и предотвращено рождение 70 больных детей.

- 87

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кащеева, Татьяна Константиновна, Санкт-Петербург

1. Абелев Г. И., Перова С.Д., Храмкова Н.И. Эмбриональный сывороточный глобулин и его синтез перевиваемыми гепатомами мышей // Биохимия. 1963. т.28,- вып. 4.- с. 14-21.

2. Баранов B.C., Гинтер Е.К. Генетические аспекты муковисцидоза //В книге Капранов Н.И., Рачинский C.B. Муковисцидоз. М., 1995,- с.8-24.

3. Вахарловский В.Г., Горбунова В.Н., Кащеева Т.К. Исследование содержания альфафетопротеина в сыворотке крови беременных как критерий наличия врожденных пороков развития у плода // Акушерство и гинекология. 1995.-N4.- с.22-24.

4. Вельтищев Ю.Е., Бочков Н.П. Наследственная патология человека. М., 1992, т.1,- с. 5-30.

5. Видерштайн Г.9., Козлова И.К., Ильина Г.С., Михайлова М.А. Изучение специфичности лизосомных гликолипидгидролаз с помощью синтетических флуорогенных субстратов // Биоорг.химия. 1988. N14.- с.1014-1026.

6. Гайцхоки B.C. Ассоциация тетрануклеотидных повторов (GATT)n с мутациями в гене муковисцидоза // ВИНИТИ. 1993.-N3.- с.70.

7. Горбунова В.Н., Баранов B.C. Особенности синтеза церулоплазмина в эмбриогенезе и в раннем постнатальном периоде у лабораторных крыс //Онтогенез.-1984.-N 15(1).-с.63-72.

8. Горбунова В.Н., Романенко О.П., Вахарловский В.Г.,- 90

9. Пигина Т.В., Калашникова Е.П., Моисеенко М.М., Зльгарт И. Баранов B.C. Исследование активности ферментов амниотической жидкости в пренатальной диагностике муковисцидоза.// Генетика. 1989. т.ХХУ,- N9,- с.1664-1672.

10. Горбунова В.Н., Вахарловский В.Г., Павловский М.М., Мартыншин М.Я., Баранов B.C. Содержание некоторых белков амниотической жидкости в разные сроки беременности.//Вопросы охр ны материнства и детства.- 1988.- N3,- с.52-55.

11. Н.Гречанина E.5L Пренатальное исследование и профилактика структурных аномалий плода. Доклад на соискание ученой степени доктора мед.наук. Москва. 1990.

12. Дубинина И.Г. Исследование альфа-фетопротеина для выявления групп с генетическим риском во время беременности // Итоги науки и техники. Генетика человека. М.- 1990.-с.119-169.

13. И.Золотухина Т.В., Кузнецов М.И., Костик З.В. Пренатальная диагностика как путь профилактики врожденных и наследственных заболеваний // Вестн. Рос. АМН.-1992. Н4.- с. 14-20.

14. Иващенко Т.З. Идентификация мутаций при муковисцидозе. Автореф. дис. канд.биол.наук.- М. 1992.- 22 с.

15. Капранов Н.И., Каширская Н.Ш., Моин Д.М. и др. Современные достижения в проблеме муковисцидоза. // Вестн.РАМН.- 1992. N4,- с. 34-39.

16. Капранов Н.В., Рачинский C.B. Муковисцидоз.- М. 1995.275 с.

17. Кулиев A.M. Возможности пренатальной диагностики в профилактике врожденных и наследственных заболеваний.// Итоги науки и техники. Генетика человека 1990.- 7.- с.5-86.

18. Кулиев A.M., Дубинина И.Г., Гречанина Е.Я. Базовые уровни альфафетопротеина в зависимости от срока беременности // Вопр. охраны материнства и детства.- 1990.- N9.- с. 34-38.

19. Кнорре А.Г. Краткий очерк эмбриологии человека. 1967. М./'Медицина".

20. Лазюк Г.И. Тератология для врачей. М.Медицина, 1989, стр.123.

21. Лазшк Г.И. Тератология человека. М. Медицина , 1979. стр.70

22. Ларичева И.П., Фукс М.А., Баранов А.И. Состояние фетоплацентарной системы у женщин с многоплодной беременностью // Акужерство и гинекология.- 1983.- N10.-с.10-12.

23. Наследственная патология человека. Под ред. И.Е.Вельтищева и Н.П.Бочкова. М., 1992, т.1, стр.5-30

24. Потапова О.Ю. Молекулярно-генетический анализ кистозного фиброза в России. Автореф. дисс. на соискание уч.степ. канд. биол. наук. СПб. 1994.

25. Розенфельд Е.Л., Попова И.А. Врожденные нарушения обмена гликогена. М. Медицина.- 1989.- с.239

26. Татаринов Ш.С. Содержание эмбриоспецифического глобулина в сыворотке плода, новорожденного и взрослого человека в случае первичного рака печени // Вопросы мед. химии.- 1965.- т. XI.- вып. 2.- стр. 14-16.

27. Цветкова И.В. Пренатальная диагностика наследственных дефектов обмена.//Итоги науки и техники. Генетика человека.-1991,т.9,- с. 5-52.- 92

28. Шишкин С.С., Калинин В.Н. Молекулярная диагностика наследственных болезней. М. 1993

29. Abramovich D.R. The volume of amniotic fluid and factors affecting or regulating this.//In: Amniotic Fluid. Fairweather D.U.I., Eskes TKAB (eds) . 1978.- Exerpta Medica. Amsterdam.- p.31-49.

30. Amniotic Fluid. Research and Clinical Application. Fairweather D.U.I., Eskes T.K.A.B.(ed).- 1973.- Excerpta Medica. Amsterdam.- p.120.

31. Andersen M., Gregory R., Thompson S. Demonstration that CFTR is a chloride channel by alteration of its anion selectivity// Science 1991.- v.253 - p.202-205.

32. Агпоп J., Ornoy A., Bach G. Cultured amniotic fluid cells for prenatal diagnosis of lysosomal storage disorders. A methodical study.// Prenat.Diagn.- 1986.- v.6.-p. 351-361.

33. Baker S., Dann L.G. Peptidases in amniotic fluid: low values in cystic fibrosis. // Lancet, 1983,- v.3.- p.716-717.

34. Baranov U.S., Gorbunova U.H., Ivaschenko Т.Е. et al. Five years of prenatal diagnosis of cystic fibrosis in the former USSR.// Pren.Diagn.- 1992.- v.12.- p.1-12.

35. Baumgasten A., DiMaio M. et al. The implication of racial differencies in maternal serum alpha-fetoprotein (MSAFP) concentrations // Amer. J. Hum. Genet.- 1986.-v.39 -p. 250-256.

36. Bergstrand C.G.,Czar B. Demonstration of a new protein fraction in serum from the human foetus. // Scand.3.Clin. Lab.Invest.- 1956. v.8.- p.174-174.

37. Bon S., Uigny M., Massoulie J. Asymetric and globular forms of acetylcholinesterase in mammals and birds. //Proc. Hatl. Acad. Sci. USA.- 1979.- v.76.- p.2546-2550.

38. Bourne G.L. The Human Amnion and Chorion. 1962.- yo 1.oyd-Luke ltd, London, p.10.

39. Boucher E. Last frontiers in cystic fibrosis and where we go? // Pulmonology.- 1995.- v.11 (suppl).- p. 340-342.

40. Bowie J.D., Clair M.R. Fetal swallowing and regurgitation: Observation of normal and abnormal activity. Radiology. 1982.- v.144.- p.877-878.

41. Bradley L.A., Simpson G.F., Dickey A.H. The effect of fetal sex on maternal serum alpha-fetoprotein values. //Am.3.Hum.Genet.,- 1986.- v.39.- p.25-253.

42. Brock D.J.H. Amniotic fluid alkaline phosfatase isoenzymes in early prenatal diagnosis of cystic fibrosis. //Lancet .- 1983.- v.3.- p.941-943.

43. Brock D.J.H. Fetospecific proteins in prenatal diagnosis. //In: Molecular aspects of medicine. Baum H., Gergely 3., Fanberg B.L. (eds)> Pergamon, Oxford, p. 433-554.

44. Brock D.G.H., Bolton A.E. Prenatal diagnosis of anencephaly through maternal serum alpha-fetoprotein// Lancet.- 1973. v.2.- p.923-924.

45. Brock D.J.H., Sütel iffe R.G. Alphafetoprotein in the antenatale diagnosis of anencefaly and spina bifida. //Lancet.- 1972.- v.l.- p.197-199. '

46. Brock D.J.H., A comparative study of microvillar enzyme activities in the prenatal diagnosis of cystic fibrosis. // Prenat.Diagn.- 1985.- v.5.- p.129.

47. Brock D.J.H., Barron L. Biochemical analysis of meconium in foetuses presumed to have cystic fibrosis. // Prenat.Diagn.- 1986.- v.6.- p.291.

48. Brumfield C.G., Cloud G.A., Finley S.C., Cosper P., Davis R.O., Huddieston 3.F. Amniotic fluid alpha-fetoprotein levels and pregnancy outcome. // Am.J.Obstet.Gynecol.- 1987.v.157.- p.822-825.

49. Burton B.K. Inborn errors of Metabolism. The clinical diagnosis in early infancy. // Pediatrics. 1987.- v.79.- p. 359-369. '

50. Carbans H.J.B., Gosden C., Brock D.J.H. Microvillar peptidase activity in amniotic fluid: possible use in the prenatal diagnosis of cystic fibrosis.// Lancet,- 1983.-v.3.- p.329-331.

51. Carter C.O., Lawrence K.M., David P.A. The genetics of the major central nervous system malformations, based on the South Hales socio-genetic investigation. // Dev. Med. Child. Heurol.- 1976.- v.!3(suppl.).- p.30.

52. Chubb I., Goodman S., Smith A.B. Is acetylcholinesterase secreted from central neurones into the cerebrospinal fluid? // Neurosciences.- 1976.- v.l.- p. 57-62.

53. Chubb I.W., Pilowsky P.M., Springwell H.J., Pollard A.C. Acetylcholinesterase in human amniotic fluid: an index of fetal neural development. // Lancet.-1979.- N2.-p.688-690.

54. Coffer U.P. Meural tube defects in Dublin 1953-1954 and 1961-1982 // Irish Med.J. 1983. - v.76 - p. 411-413.

55. Congenital malformations surveillance report. July 1976-june 1977. Center for Disease Control, Dec.1977. p.25.

56. Conzelmann E., Sandhoff K. Partial enzyme deficiencies: residual activities and the develorment of neurological disorders.// Dev.Neurosci .- 1984.- N6.-p.58-71.

57. Czeisel A, Metneki 3. Reccurence risk after neural tube defects in a genetic councelling clinic. // J.Med.Genet., 1984.- N21.- p.413-416.- 95

58. Czeisel fi. Prevention of congenital abnormalities by periconceptional multivitamin supplementation. // Brit.Med.J.- 1993.- v.306.- p.1645-1648.

59. Dallaire L., Potier M. Amniotic fluid //Genetic disorders and the fetus /Ed. Milunsky A. New York, London: Plenum Press.- 1986.- p.57-97.

60. Dewals P. Prevalence of NTDs in 16 region of Europe,1980-1983 // Int.J.Epidemiol.- 1987. N16.-p.246-251.

61. Dovoto M., Ronchetto P., Fanen P., et al. Screening for non delF5Q8 mutation in 5 exons of the CFTR gene in Italy // Am.J.Hum.Genet.- 1991.- v.48.- p.1127-1132.

62. Ellman G.L. //Biochem. Pharmacol. 1961. - N7. -p.88.

63. Fainaru M., Deckelbaum R., Golbus M.S. Apolipoproteins in human fetal blood and amniotic fluid in mid-trimester pregnancy. // Prenat.Diagn.- 1981.- N1.- p.125-129.

64. Galjaard H. Biochemical diagnosis of genetic disease. // Experientia .- 1980.- N42.- p.1075-1085.

65. Genetics Disorders and Fetus. Milunsky A. Ced). New York, London, Plenum Press,- 1986.- 875p.

66. Gilbert H.M.,Brace R.A. The missing link in amniotic fluid volume regulation. Intramembranous absorption. //Obstet.Gynecol.- 1989.- v.74.- p.748-754.

67. Gitlin B. Normal biology of alphafetoprotein. // Ann. New York Acad.Sci.- 1975.- N259.- p.7-16.

68. Hall Z. №. Multiple forms of acetylcholinesterase and their distribution in endplate and non-endplate regions of rat diaphragm muscle.// J.Neurol.- 1973.- N4.- p.343-361.

69. Hibbard E.D., Smithells R.H. Folic acid metabolism and human embryopathy. // Lancet.- 1975.- N1.- p.1254.

70. Hino M., Koki Y., Nishi S. Nimpu ketsu naka no alpha-fetoprotein// Igaku No Ayumi.- 1972.- N82.- p.512-513.

71. Kuliev A., Modell B., Galjaard H. Perspectives in fetal diagnosis of congenital disorders // Serono Symposia Review N8.- Roma: Ares Serono Symposia. 1985.- 82 p.

72. Laurell C.-B. Quantitative estimation of proteins by electrophoresis in agarose gel containing antibodies. // Analyt. Biochem.- 1966.- 15.- p. 45-52.

73. Levi C.S., Lyons E.A., Lindsay D.J. Early diagnosis of nonviable pregnancy with endovaginal ultrasound. //Radiology,- 1988.- v.167.- p.383-385.

74. Lind T., Kendall A., Hytten F.E. The role of fetus in the formation of amniotic fluid. // J.Obstet.Gynaecol.- 97

75. Br.Calth.- 1972.- v.79.- p. 289-298.

76. Lockridge 0., Bartels C.F., Uaughan T.A., et al. Complete aiinoacid sequence of humn serum Cholinesterase. // J.Biol.Chei.- 1987.- v.262.- p.549-557.

77. Massa 6., Proesaans H., Bevlieger H., Uan der Berghe K., Uan Assche A., Eggeriont E. Electrolyte composition of the aaniotic fluid in Bartter syndroae.// Eur.J. Obstet. Gynecol: Reprod. Biol.- 1987.- N24.- p.335-340.

78. McKusick U.A.: Mendelian inheritance in aan: a catalog of human genes and genetic disorders. 11th edn. (1994). Baltimore: Johns Hopkins University Press.

79. Mercatz I.R., Nitowsky H.M., Macri J.N., Johnson H.E. An association between low maternal serum alpha-fetoprotein and fetal chromosomal abnormalities.// Amer. J. of Obst. & Gynecol.- 1984.- v.148.- p.886-894.

80. Milunsky A. The prenatal diagnosis of neural tube and other congenital defects. // In: Genetic disorders in the fetus; diagnosis, prevention and treatment. Milunsky A (ed) Plenum, New York,- 1986.- p.453-520.

81. Minh H.N., Smajda A., Orcel L. Morphological study of the chorio-allantoic fetal membranes.// Eur.J.Obstet. Gynaecol,- 1984.-N 93.- p.240-244.

82. O'Brien J.S. Enzymology of sialidoses //In: Lysosomal Storage Diseases /Eds.Callahan J.H., Lowden J.A.- New York:- 98

83. Raven Press.- 1981.- 448 p.

84. Poenaru L., Kaplan L., Dumez 3., Dreyfus 3.C. Evaluation of possible first trimester prenatal diagnosis in lysosomal diseases by trophoblast biopsy // Pediatries.-1984.- N18.- p. 1032-1034.

85. Report of the European Study Group on Prenatal Diagnosis. Recommendations and protocols for prenatal diagnosis. Barcelona. 1993.- Inst. Univer. Dexeus.- 95 p.

86. Ruoslahti E., Engvall E., Pekkola ft., Seppala M. Developmental changes in carbohydrate moiety of human alphafetoprotein. // Int.J. of Cancer.- 1978.- N22.-p.515-520.

87. Schwager E.J., Weiss B.D. Prenatal testing for maternal serum alphafetoprotein // ftmer. Fam. Phys. 1987. -v.35.- p.169-174.

88. Scriver C.C., Beaudet A.L., Sly M.S., Ualle D.Ceds) The Metabolic Basis of Inherited Diseases, Mc Graw-Hill, New York,- 1989,- v.1-2,- 3002 p.

89. Second Report of the UK Collaborative Study on Alpha-fetoprotein in Relation to Neural tube defects, // Lancet.- 1979.- v.3.- p.651-662.

90. Second Report of the Acetylcholinesterase Study Amniotic fluid acetylcholinesterase measurement in the prenatal diagnosis of open tube defects.// Prenat.Diagn.-1989.- N9. p.813-829.

91. Smith A.D., Kelleher Ph.C., Belanger L. et al. Reactivity of amniotic fluid alpha-fetoprotein with concavallin A in diagnosis of neural tube defects. // Brit.Med.3. 1979.-Ni.- p.920-921.

92. ShinY.S., Enders K. First trimester diagnosis of inherited metabolic diseases by biochemical methods // 5th1.t.Congress of Early Fetal Diagnosis 8th-14th July, Prague.-1990.- p.251.

93. Simpson J.L., Golbus M.S., Martin A.O. Genetics in obstetrics and gynecology.- New York: Grune and Statton Inc., 1982,- p.58.

94. Smith A.D.E., Hald N.J., Cuckle H.S., Stirrat J.M., Bobrow M., Lagercrantz H. Amniotic fluid acetylcholinesterase as a possible diagnostic test for neural tube defects in early pregnancy. // Lancet 1979. N3.- p.685-688.

95. Talamo R.S., Rosenstein B.J., BerningerR.fi. Cystic fibrosis.//In: The metabolic basis of inherited deseases. Stanbury J.B., et al. (eds). McGraw-Hill, New York,- 1982.-p.1889-1920.

96. Torday J., Carson L., Lawson E.E. Saturated phosphatidylcholine in amniotic fluid and prediction of the respiratory distress syndrome. // New Engl.J.Med.- 1979.-V.3G1.- p. 1013-1020.

97. Tsui L.S. Mutations and sequence variations detected in the CFTR gene. // Hum. Mutation. 1992.- v.l, N3.-p.197-203.

98. Uan Diggelen O.P., Janse H.C., Kleijer H.J. Dissacharidases in amniotic fluid as possible prenatal marker for cystic fibrosis. // Lancet,- 1983,- v.l.-"p.817.

99. Uan Lith J.M.M., Bukhuis I.R. et al. Alpha-fetoprotein in fetal serum, amniotic fluid and maternal serum // Prenat. Diagnosis.- 1991. vol.11.- p. 625-628.- 100

100. Raid N.3., Cuckle H.S. Open neural tube defects // Antenatal and Heonatal Screening.- Oxford, 198?.- p. 25-73.

101. Raid N.3., Cuckle H.S., Densem J.H. et al. Maternal serum screening for Down syndrome in early pregnancy.// Brit.Med.J.,- 1988.- v.297.- p.883-887.

102. Welsh M.E., Smith A.E. Molecular mechanism of CFTR cloride chanel disfunction in cystic fibrosis // Cell.-1993.- v.73.- p.1251-1254.

103. Wenger B.A. Disorders of lipid metabolism // Genetic disorders and the fetus /Ed. Milunsky A.- Mew York, London: Plenum Press.-1986.- p. 205-255.

104. Winchester B. Prenatal diagnosis of enzyme defects// Archiv. of Dis. Childhood.- 1990.- v.65.- p.59-67.

105. Искренне признательна за постоянное внимание и поддержку всему коллективу Лаборатории пренатальной диагностики наследственных болезней НИИАГ им.Д.О.Отта РАМН.