Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Муковисцидоз, молекулярный анализ гена, разработка новых подходов диагностики и генотерапии

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Иващенко, Татьяна Эдуардовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Муковисцидоз (MB) - общие представления и история открытия гена

1.1. Тип наследования и популяционная частота

1.2. Разнообразие клинических проявлений при

1.3. Ранние попытки идентификации биохимических маркеров.

1.4. Картирование гена

1.5. Популяционный и семейный анализ внегенных полиморфных маркеров, сцепленных с геном MB

1.6. Идентификация гена

ГЛАВА 2. Характеристика гена MB и его продуктов

2.1.Структура гена CFTR

2.2. Матричная РНК

2.3. Белок

ГЛАВА 3. Мутации гена CFTR

3.1. Классификация мутаций

3.1.1. В зависимости от первичного повреждающего эффекта

3.1.2. В зависимости от степени поражения поджелудочной железы

3.2. Мутация delF508

3.3. Другие мажорные мутации, их география

3.4. Первичный механизм действия мутации гена CFTR

3.5.Идентификация новых мутаций

ГЛАВА 4. Популяционный и семейный анализ внутригенных -полиморфных маркеров гена CFTR

4.1.Тандемные повторы (ТП) интрона 6В

4.2. Микросателитные повторы интрона 8

ГЛАВА 5. Корреляция фенотипа и генотипа при муковисцидозе

5.1. Разнообразие клинических форм муковисцидоза

5.2. Корреляция мутаций гена CFTR с тяжестью заболевания

5.2.1. Корреляция мутаций гена CFTR с тяжестью заболевания у больных MB С.Петербурга

5.3 Врожденное двухстороннее отсутствие семявыводящих протоков (CBAVD)

5.4. Полудоминантные мутаций с частичной пенетрантностью

5.4.1. Политимидиновый тракт интрона 8

5.4.2 М470У-полудоминантная мутация с частичной пенетрантностью

ГЛАВА 6. Генетические факторы, влияющие на клиническую картину муковисцидоза

6.1. Гены-модификаторы функции CFTR

6.2. Гены главного локуса гистосовместимости

6. 3. Гены системы детоксикации ксенобиотиков

ГЛАВА 7. Диагностика муковисцидоза

7.1 Биохимические методы диагностики

7.2 Молекулярная диагностика

7.2 .1.Прямой метод диагностики - идентификация мутаций гена CFTR

7.2.2. Непрямой метод диагностики

7.3.Пренатальная диагностика

7. 3.1.Пренатальная диагностика MB в России

ГЛАВА 8. Молекулярные подходы к лечению муковисцидоза

8.1. Общие сведения и основные понятия генной терапии

8.2. Основные способы доставка генетических конструкций в экспериментах по генотерапии MB

8.2.1 .Вирусные носители

8.2.2.Невирусные носители

8.3. Модельные животные

8.4. Новые носители генетических конструкций, перспективные для генотерапии MB

8.5.Разработка экспериментальных подходов генотерапии MB у плода

Введение Диссертация по биологии, на тему "Муковисцидоз, молекулярный анализ гена, разработка новых подходов диагностики и генотерапии"

Молекулярно-генетический анализ генов, мутации которых приводят к тяжелым наследственным заболеваниям, является одним из быстро развивающихся разделов медицинской генетики. Возможность предсказания уже на ранних сроках беременности рождения здорового ребёнка в семьях высокого риска имеет значительный социальный аспект, связанный с сохранением семьи, а успешная разработка научных подходов к генной терапии становится все более актуальной в плане лечения этого тяжелого наследственного заболевания.

Муковисцидоз (MB) (кистозный фиброз поджелудочной железы) -наиболее распространенное, тяжелое моногенное заболевание, наследуемое по аутосомно-рецессивному типу.

Частота заболевания в разных популяциях, нациях и этнических группах существенно варьирует, составляя в среднем 1 : 2-2,5 тыс. новорожденных у представителей белой расы. По оценкам Всемирной Организации Здравоохранения в мире ежегодно рождается 45-50 тыс. детей с MB, а число гетерозиготных носителей заболевания насчитывает многие десятки миллионов. У представителей черной расы частота MB в среднем ниже и составляет 1 : 9-10 тыс. новорожденных, а у желтой расы данное заболевание встречается еще реже (Goodchild, Dodge, 1987)

Причины столь широкого распространения летального наследственного заболевания в популяциях белой расы остаются в значительной мере загадочными. Согласно классическим представлениям медицинской генетики столь высокая частота MB могла быть следствием серии мутаций этого гена в доисторическую эпоху (но уже после выделения рас) с последующей селекцией и генетическим дрейфом этих наследственных изменений в процессе миграции населения и формирования этнических групп (Pritchard, 1991). В частности, предполагается, что особи, гетерозиготные по мутантному гену MB, т.е. скрытые бессимптомные носители заболевания, имеют повышенную плодовитость в сравнении с популяцией в целом, при чем, прежде всего последнее относится к особям мужского пола (Pritchard, 1991). Еще более популярная точка зрения основывается на предположении о селективном преимуществе гетерозиготных носителей мутаций гена муковисцидоза. В частности, высказано предположение, получившее экспериментальное подтверждение, что особи гетерозиготные по мутациям гена MB, обнаруживают повышенную устойчивость к холере и другим кишечным заболеваниям.

В последние годы, благодаря решающим успехам медицины, средняя продолжительность жизни больных MB прогрессивно возрастает, достигая в экономически развитых странах 30 и более лет, т.е. болезнь все чаще приобретает хронический характер. При этом, удельный вес числа больных MB в популяции быстро увеличивается. В связи с этим проблема MB, помимо серьезного медицинского аспекта, приобретает все более выраженную социальную направленность, связанную не только с разработкой новых методов лечения, но и с социальной адаптацией больных, разработкой и внедрением соответствующих скринирующих программ, позволяющих осуществлять досимптоматическую диагностику заболевания, а так же изучать возможности детородной функции у таких больных.

Молекулярно-генетическими методами ген MB картирован на длинном плече хромосомы 7 (7q31.1) в 1985 году. В конце 1989 года идентифицирован сам ген MB и выявлена наиболее частая мутация -delF508, приводящая к этому заболеванию. Охарактеризован белковый продукт этого гена, получивший название "трансмембранный регуляторный белок муковисцидоза" (CFTR) (Riordan et al., 1989, Rommens et al., 1989, Kerem et al., 1989). Помимо мутации delF508 в гене CFTR обнаружено множество (более 800) других мутаций (Estevill X et al., 1997). В отличие от delF508, подавляющее большинство из них представлено спорадическими случаями, т.е. встречается достаточно редко.

Несмотря на существенные успехи медикаментозного лечения MB в последние годы, внимание исследователей все чаще привлекают возможности генотерапии этого заболевания, в частности, методы генноинженерного лечения MB. Успешное создание модели MB на лабораторных мышах в 1992 году, получение сел ьхозжи both ых -продуцентов белка CFTR человека, позволяет надеяться, что именно на этом пути будут достигнуты решающие успехи в борьбе с муковисцидозом (Crystal et al., 1994; Caplen et al., 1995). Учитывая важную медицинскую и социальную значимость проблемы муковисцидоза, молекулярные исследования этого гена, безусловно, являются актуальными как для медицинской генетики, так и для генетики человека.

Настоящая диссертационная работа представляет собой обобщение цикла исследований, начатых в 1987 году в Лаборатории пренатальной диагностики ИАГ им. Д.О. Отта РАМН, по выяснению популяционных особенностей тонкой структуры гена CFTR, его внегенных и внутригенных полиморфизмов, идентификации его мутаций и разработке, с учетом полученных результатов, научно-обоснованных подходов к ранней диагностике, профилактике и генотерапии MB.

Цель и задачи работы.

Цель исследования - проанализировать частоту и спектр мутаций гена CFTR при MB, а также ДНК полиморфизмы этого гена в различных популяциях и у больных MB; разработать на основе полученных данных оптимальные для жителей России варианты молекулярной диагностики MB и приступить к разработке экспериментальных подходов к генотерапии этого заболевания.

Достижение поставленной цели предусматривает решение следующих основных задач:

1. Изучить частоту и спектр мутаций гена CFTR при MB, а также ДНК полиморфизмы этого гена в различных популяциях и у больных MB;

2. Проанализировать корреляцию между тяжестью заболевания, его формой и конкретными мутациями, а так же полиморфизмами гена CFTR; изучить особенности клинического проявления мутаций гена CFTR в зависимости от аллельных вариантов глютатион-Б-трансферазы М1, микросомальной эпоксидгидролазы и аллелей главного локуса гистосовместимости (HLA);

3. Разработать на основе полученных данных оптимальный алгоритм молекулярной диагностики MB в России, включая пренатальную (дородовую) диагностику;

4. Изучить некоторые особенности экспрессии гена CFTR на молекулярном и клеточном уровнях в эпителиальных клетках человека в норме и при MB;

5. Начать разработку экспериментальных подходов к генотерапии муковисцидоза; проанализировать возможности использования невирусных способов доставки маркерных генов в эпителиальные клетки легких in vivo.

Научная новизна.

Впервые получены данные о частотах и спектрах мутаций гена CFTR, особенностях внегенных полиморфизмов ДНК локусов, сцепленных с этим геном (METH, D7S8, D7S23, IRP) и внутригенных полиморфизмов интронов 6в и 8 в различных популяциях и у больных муковисцидозом России.

Впервые установлено, что частоты и спектры мутаций, приводящих к муковисцидозу (MB) в России, отличаются от таковых в Западной Европе и в Северной Америке; впервые выявлен спектр диагностически значимых мутации для России в целом и для Северо-западного региона России (г.Санкт-Петербург), в частности.

Впервые идентифицированы 6 ранее неизвестных мутаций гена CFTR (1677delTA, E504Q, S1196X, W1282R, 552insA, 1366del5), одна из которых (1677delTA) оказалась эндемичной для жителей Причерноморья; впервые обнаружены и исследованы 4 новых полиморфизма 1716+12 Т-С (интрон 10), 1525-61 A-G (интрон 9), L467F, G 528 (G-A) (экзон 10).

Предложены новые способы тестирования мутаций 2143delT, 2184insA (экзон 13) и W1282X (экзон 20), имеющих диагностическое значение, и разработан собственный оригинальный метод мультиплексного ПЦР анализа, позволяющий в одной реакции проводить амплификацию 4-х экзонов (3, 10, 13, 20) гена CFTR и идентифицировать мажорные мутации delF508, CFTRdel21kb, 2184insA, 2143delT, W1282X, 394delTT, junction-фрагмент мутации CFTRdel21kb и еще 11 более редких мутаций (dell507, 1677delTA, 2113delA, 2118del4, 2141insA, delE672, 2176insC, 2183AAh>G, 2183delAA, 2184delA, W1282R).

Впервые в России проанализированы частоты двух мутаций гена CFTR с частичной пенетрантностью: аллели политимидинового тракта интрона 8 и мутация M470V экзона 10.

Впервые разработан и внедрен в рутинную практику метод прямой амплификации из ворсин хориона и клеток амниотической жидкости без выделения ДНК, который позволяет сократить время пренатальной диагностики MB до 5 часов.

Впервые в России разработан оптимальный алгоритм обследования и проведения пренатальной диагностики в семьях высокого риска MB.

Впервые отмечено неслучайное наследование хромосомы с мутацией delF508 в семьях высокого риска.

Установлено, что гистохимический анализ белкового продукта гена CFTR в биоптатах назального эпителия, равно как и измерение разности назальных потенциалов могут служить дополнительными, высокоинформативными лабораторными тестами для дифференциальной диагностики MB.

Впервые показано достоверное повышение частоты GSTM10/0 генотипа среди пациентов, имеющих рак легких (81%) или тяжелые формы хронического бронхита (73,6%), что свидетельствует о наличии ассоциации нулевого аллеля глутатион-Б-трансферазы М1 (GSTM1) с патологией легких и бронхов.

Высказано предположение, что, независимо от типа мутаций в гене CFTR, наличие одного и, особенно, двух медленных аллелей (S) гена микросомальной эпоксидгидролазы (тЕРХН), а также гомозиготность по нулевому аллелю GSTM1 могут усугублять течение патологического процесса, и именно у таких больных MB нарушения со стороны легких возникают особенно часто и имеют особенно неблагоприятное течение.

Впервые установлена способность полимерного носителя VSST25 служить эффективным средством доставки маркерного гена LacZ in vivo в клетки дыхательного эпителия легких мышей после однократного внутриназального введения.

Впервые в эксперименте показана способность синтетических полимерных комплексов, содержащих генноинженерные конструкции, эффективно преодолевать плацентарный барьер и достигать ткани плода.

Практическая ценность работы.

Полученные в работе данные по анализу ДНК полиморфизмов, сцепленных с геном MB и внутригенных полиморфных сайтов в популяциях, у больных MB и в семьях высокого риска, а также данные о частотах и спектрах мутаций гена CFTR в России, имеют существенное значение для верификации диагноза MB после рождения, своевременного выявления гетерозиготного носительства мутации MB в семьях высокого риска и его эффективной пренатальной диагностики. Проведена молекулярная диагностика MB в 815 семьях высокого риска (2412 человек).

Разработана и эффективно реализуется программа обследования на информативность семей высокого риска для пренатальной диагностики MB; в 386 случаях проведена пренатальная диагностика этого тяжелого заболевания и предотвращено рождение 100 детей, больных MB.

Предложены новые подходы тестирования мажорных мутаций W1282X, 2143delT, позволяющие просто и надежно проводить их идентификацию, а также оригинальный метод мультиплексного ПЦР анализа, позволяющий в одной реакции идентифицировать мажорные мутации гена CFTR в России. Итогом этих методических поисков явилась разработка рекомендаций для типированию мутаций гена CFTR .

Выявленные ассоциации клинических проявлений MB с определенными аллелями главного локуса гистосовместимости, а также с мутациями генов системы детоксикации ксенобиотиков, позволяют прогнозировать характер течения MB, более эффективно осуществлять его лечение и профилактику.

Полученные результаты явились материалом для подготовки методических рекомендаций по пренатальной диагностике муковисцидоза, одобренных и изданных МЗ СССР (1991), а также для глав в справочном руководстве "Медицинская лабораторная диагностика. Программы и алгоритмы" (1997, 1999) и в учебнике "Медицинская генетика", изданном в Болгарии в 1999 году.

Положения выносимые на защиту.

1. Определены частоты и спектры различных мутаций гена CFTR в России, которые отличаются от таковых у больных MB Западной Европы и Северной Америки; диагностически значимыми мутациями (частота >2%) для пациентов с MB России являются delF508, 394delTT, G542X, 2143delT, 2184insA, W1282X, N1303K, 3732delA, CFTRdel21kb; показано неслучайное наследование хромосомы с delF508 в семьях высокого риска: здоровые гетерозиготные сибсы вдвое чаще получают мутантную хромосому от матери, чем от отца.

2. Разработан комплексный подход в диагностики MB, который включает в себя определение мутаций гена CFTR, гистохимический анализ белкового продукта гена CFTR в биоптатах назального эпителия и измерение разности назальных потенциалов.

3. Определен оптимальный алгоритм обследования семей высокого риска MB для пренатальной диагностики.

4. Установлено, что независимо от типа мутаций в гене CFTR, наличие одного и особенно двух медленных аллелей (S) гена микросомальной эпоксидгидролазы (тЕРХН) и гомозиготность по нулевому аллелю гена глютатион-Б-трансферазы М1 (GSTM1), могут усугублять течение патологического процесса в легких.

5. Получены результаты, свидетельствующие о перспективности синтетических полимерных микросфер для доставки чужеродных генов в клетки дыхательного эпителия легких модельных животных in vivo; синтетические полимерные микрочастицы, содержащие генноинженерные конструкции, эффективно преодолевают плацентарный барьер и достигают ткани плода.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Иващенко, Татьяна Эдуардовна

1. Определена частота и спектр различных мутаций гена СРТЯ у пациентов МВ России, которые отличаются от таковых у больных МВ Западной Европы и Северной Америки; диагностически значимыми мутациями для пациентов с МВ России являются с1е1Р508, 394с1е1ТТ, С542Х, 2143с1е1Т, 21841п8А, W1282X, М1303К, 3732с1е1А, СРТРс1е121кЬ; типичными для больных МВ славянского происхождения являются мутации с1е1Р508 и протяженная делеция СРТКс1е121кЬ; установлено неслучайное наследование хромосомы с с1е1Р508 в семьях высокого риска: здоровые гетерозиготные сибсы вдвое чаще наследуют мутантную хромосому с с1е1Р508 от матери, чем от отца.2. Идентифицированы и охарактеризованы 6 ранее неизвестных мутаций гена СРТЯ (1677с1е1ТА, Е504О, 81196Х, \Л/1282Р, 552т5А, 1366с1е15), одна из которых (1677с1е1ТА) эндемична для жителей Причерноморья; идентифицированы 4 новых внутригенных полиморфизма 1716+12 Т-С (интрон 10), 1525-61 А-О (интрон 9) , 1467Р, С 528 (С-А) (экзон 10);

3. Обнаружены популяционные различия частот аллелей тетрамерных тандемных повторов (ТТП) интрона 6В и динуклеотидных СА/СТ повторов (ДП) интрона 8 в популяциях Северо-западного региона России, Грузии, Азербайджана, Молдовы и Узбекистана; выявлены достоверные различия частот полиморфных аллелей гена СРТЯ (ТТП, ДП СА/ОТ, мутации М470\/ и политимидинового тракта интрона 8) у больных МВ и в популяции Северо-западного региона России;

4. Разработан удобный вариант мультиплексной ПЦР для одновременной детекции 6 мажорных и 11 более редких мутаций гена СГТЯ;

5. Разработан оптимальный алгоритм обследования семей высокого риска на информативность и проведение пренатальной диагностики МВ;

6. Обнаружено достоверное увеличение частоты гомозигот по медленному аллелю (S) гена микросомальной эпоксид гидролазы (шЕРХН) и тенденция к увеличению частоты гомозигот по нулевому аллелю глютатион-8-трансферазы М1 (GSTM10/0) при смешанной форме и тяжелом течении МВ.

7. Выявлено, что синтетические полимерные микросферы эффективно доставляют чужеродные гены в клетки дыхательного эпителия модельных мышей в опытах in vivo и являются весьма перспективными невирусными носителями для разработки экспериментальных подходов генотерапии ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ

1. Разработаны собственные модификации тестирования мутаций 2143с1е1Т, 21841п5А (экзон 13) и \Л/1282Х (экзон 20) и оригинальный метод мультиплексного ПЦР анализа для типирования основных мажорных мутаций гена СРТР. При использования данного подхода можно идентифицировать такие мажорные мутации, как с1е1Р508, СРТРс1е121кЬ, 2184!п8А, 2143с1е1Т, 394с1е1ТТ и, помимо этого, еще 11 ранее описанных мутаций (с1е11-507, 1677с1е1ТА, 2113с1е1А, 2118с1е14, 2141 тзА , с1е1Е672, 2176т5С, 2183АА^О, 2183с1е1АА, 2184с1е1А, УУ1282Р). Внедрение данной методики в практику центров, занимающихся молекулярной диагностикой МВ, позволит ускорить проведение анализа и увеличить количество анализируемых мутаций.2. Разработан оптимальный алгоритм обследования семей вьюокого риска для пренатальной диагностики МВ. Алгоритм содержит 3 основных этапа.На 1- этапе отрабатываются варианты наиболее простой и надежной прямой молекулярной диагностики (идентификация мутаций), на следующем (при наличии больного ребенка и отсутствии идентифицируемых мутаций) - варианты косвенной диагностики (ПДРФ анализ) и, наконец, на 3-м (если семья полностью неинформативна для

ДНК-диагностики) - проводится биохимическая диагностика по активности ферментов микроворсинок плода. Данная схема с использованием комплексного подхода и применением всего спектра методов, как молекулярных, так и биохимических, позволяет провести пренатальную диагностику на любой стадии внутриутробного развития плода.3. Гистохимический анализ белкового продукта гена СРТР в биоптатах назального эпителия и измерение разности назальных потенциалов являются дополнительными, высокоинформативными лабораторными тестами для дифференциальной диагностики МВ. Благодаря этим методам удается решить спорные вопросы при диагностике МВ в случаях, когда клиническое обследование, стандартные лабораторные тесты (хлориды пота) и ДНК-анализ гена СРТР не дают однозначных результатов. Учитывая сравнительно низкую (по сравнению с Западной

Европой) частоту выявляемости мутаций при МВ в России (около 70 - 75 %), метод анализа разности назальных потенциалов может быть рекомендован для уточнения диагноза МВ в спорных случаях.4. Учитывая тот факт, что гомозиготность по 8 аллелю тЕРХН и 38ТМ10/0 являются прогностически неблагоприятными факторами при МВ полученные данные позволяют рекомендовать генотипирование всех больных МВ не только на выяснение природы мутаций в самом гене СРТР, но и на наличие неблагоприятных аллелей генов тЕРХН и 08ТМ1 с целью более объективного прогноза течения заболевания и выработки более рациональной тактики лечения.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Иващенко, Татьяна Эдуардовна, Москва

1. Агбангла К., Осиновская Н.С., Иващенко Т.Э., Баранов B.C. Молекулярногенетический анализ тандемных повторов в интроне 6В гена CPTR в некоторых популяциях и у больных муковисцидозом. // Генетика. 1992. том 28. №11. 145-150.

2. Бакай М.А. Молекулярно-генетический анализ гена трансмембранногорегуляторного белка муковисцидоза у больных Санкт-Петербурга. Корреляция фенотип-генотип. // Автореферат дис. канд. биол. наук. СПб, 1998,19 стр.

3. Бакай М.А., Швед Н.Ю., Гембицкая Т.Е., Желенина Л.А., Орлов A.B. ,Иващенко Т.Э, Генетические факторы, влияющие на фенотипическое проявление муковисцидоза. // Медико-генетическая служба СПб. К 30летию МГЦ. 1999. СПб. 79-83.

4. Баранов B.C., Горбунова В.Н., Вахарловский В.Г., Иващенко Т.Э.Кузнецова Т.В. Наследственные болезни. // В кн.: Медицинская лабораторная диагностика (программы и алгоритмы). Т.З. - Ред. А.И.Карпищенко. СПб. "Интермедика". 1997. 180-202.

5. Баранов B.C., Кузнецова Т.В., Иващенко Т.Э., Кащеева Т.К.Пренатальная диагностика. // В кн.: Медицинская лабораторная диагностика (программы и алгоритмы). Т.З. Ред. А.И.Карпищенко. СПб. "Интермедика". 1997. 203-227.

6. Баранов Б.С., Иващенко Т.Э., Горбунова и др. Аллельный полиморфизмДНК-локусов МЕТ, D7S8, D7S23, сцепленных с геном муковисцидоза в некоторых популяциях СССР, в семьях высокого риска и у больных муковисцидозом. //Генетика. 1991. том 27. №1. 113-121.

7. Боронина О.Б., Гайцхоки B.C., Баранов B.C. и др. Популяционный анализполиморфизма последовательностей ДНК, сцепленных с геном муковисцидоза. // Биополимеры и клетка. 1990. том 6. №2. 65-71.

8. Глазков П.Б., Миткина Е.Н, Гембицкая Т.Е., Иващенко Т.Э., Орлов A.B. ,Баранов B.C. Взаимоотношения генотип-фенотип у больных муковисцидозом и разработка экспериментальных основ генотерапии этого заболевания // Пульмонология. 2000. № 1. 14-23.

9. Горбунова В.Н., В.С.Баранов " Введение в молекулярную диагностику игенотерапию наследственных заболеваний". // Изд-во "Специальная литература". СПб. 1997. 286 с.

10. Желенина Л.А. Муковисцидоз у детей (клинико-генетические особенности,инфекционный процесс в легких, лечение). // Автореф. дисс. д-ра мед. наук - Санкт-Петербург. 1998.

11. Иващенко Т.Э, Бакай М.А., Михайлова Е.Г., Баранов Б.С, Гембитская Т.Е.,Желенина Л.А. Молекулярный анализ спектра и частот мутаций гена CFTR у больных муковисцидозом Петербурга.//2-ой съезд БОГИС. Петербург. 2000. 269.

12. Иващенко Т.Э, Асеев М.В., Малышева О.В. , Бакай М.А., Осиновская Н.С.и др. ДНК-методы в пренатальной диагностике генных болезней. // Бестн. Рос. Ассоц. Акушерства-Гинекологии. 1997. № 3. 46-49.

13. Иващенко Т.Э. Идентификация мутаций при муковисцидозе. // Автореф.дис. канд. биол. наук. М. 1992. 22 с.

14. Иващенко Т.Э., Лившиц Л.А., Гембовская А. и др. Сравнительный анализчастоты делеции Р508 у больных муковисцидозом. // Биополимеры и клетка. 1991. том 7. № 3. 49-53.

15. Капранов Н.В., Рачинский С В . Муковисцидоз. // М.1995. 275 с.

16. Капранов Н.И. Мукрвисцидоз в России: современное состояние проблемы.// Русский медицинский журнал. Т. 4. № 6. 355-362.

17. Капранов Н.И., Каширская Н.Ю., Моин Д.М. и др. Современныедостижения в проблеме муковисцидоза. // Вести. РАМН. 1992. № 4, 3439.

18. Кащеева Т.К., Горбунова В.Н., Иващенко Т.И., Бакай М.А. Анализсоответствия фенотипа и генотипа у плодов с муковисцидозом. // Материалы XXi l l научной сессии НИИАГ им. Д.О.Отта РАМН. - октябрь 1994 г. СПб. 102-103.

19. Кочарян Р.Х. Особенности распределения антигенов системы HLA убольных с некоторыми формами наследственно обусловленных заболеваний легких. //Автореф. дис. канд. мед. наук. СПб. 1992.16 стр.

20. Миткина. Е.Н., Гембицкая Т.Е., Фокина А.А., Куприна Е.А, Орлов А.В.,Глазков П.Б. Измерение разности назальных потенциалов - новый, информативный тест для диагностики муковисцидоза // Пульмонология. 1999. № 3 . 50-54.

21. Петрова Н.В., Капранов Н.И. Гинтер Е.К. Определение частых мутацийгена CFTR у больных муковисцидозом из Центральной России. // Генетика. 1996. том 32. 10-12.

22. Петрова М.А., Услонцев Б.М. К вопросу о возможности прогнозированияугрозы развития и характера патогенеза бронхиальной астмы. / Новое в этиологии, патогенезе, кпинике, лечении и профилактике предастмы и бронхиальной астмы. Л. 1985. 0.11-13.

23. Петрова Н.Б. Определение относительных частот некоторых мутаций генаCPTR и анализ гаплотипов сцепленных с ним ДНК-маркерных локусов в популяциях России. //Автореф. дис. канд. биол. наук. М. 1996. 24 стр.

24. Потапова О.Ю. Молекулярно-генетический анализ кистозного фиброза вРоссии. //Автореф. дис. канд. биол. наук. СПб. 1994.

25. Abeliovich О., Lavol I., Lerer I. et al. Screening for Five Mutations Detects 97%of Cystic Fibrosis (CP) Chromosomes and Predicts a Carrier Frequency of 1:29 in the Jewish Ashl<enazi Population. // Am.J.Hum.Genet. 1992. V.51. P. 951956

26. AI-Jader J . N., Meredith A.L., Ryley H.C. et al. Severity of chest disease incystic fibrosis patients in relation to their genotypes. // Med. Genet. 1992. V. 29. № 12. P. 883-887.

27. Alton E.W. Currie D., Logan-Sinclair R. et al Nasal potential difference: aclinical diagnostic test for cystic fibrosis // Eur. Respir. J . 1990. V. 8. № 3. P. 922-928.

28. Anderson M.P., Gregory R.J., Thompson S. et al. Demonstration that CPTR is achloride channel by alteration of its anion selectivity. // Science. 1991a. V. 253. P. 202-205.

29. Anderson W.F. Human gene therapy. // Nature. 1998. V. 392. P. 25-30.

30. Angelicheva D., Boteva K., Jordanova A., Savov A., Kufardjieva A., Tolun A.,Dean M., Ivaschenko Т., BaranovV., Kalaydjieva L. Cystic fibrosis patients from the black sea region: the 1677delTA Mutation. // Human Mutat.1994. №3. P. 353-357.

31. Anguiano A., Gates R.D., Amon J.A. et al. Congenital bilateral absence of thevas deference: a primarily genital form of cystic fibrosis.// JAMA. 1992. V.267. P. 1794-1797

32. Baker S., Dann L.G. Peptidases in amniotic fluid: low values in cystic fibrosis. //1.ncet. 1983. V.3. P. 716-717.

33. Baranov V.S. , Ivaschenko Т.Е., Gorbunova V .N. et al. Frequency of theP508 deletion in cystic fibrosis patients from the European part of the USSR/ /Hum.Gene t . 1991. V. 87. P. 61-64.

34. Baranov V., Ivaschenko Т., Kascheeva T. Molecular and biochemicalanalysis of cystic fibrosis in Russia. / /21-st Eur. Cystic Fibrosis Conf. Davos (Switzerland), June 1-6, 1997. P42.

35. Baranov V., Ivaschenko T.Ten years experience of CFTR gene studies andCP molecular diagnosis in Russia and in F S U countries.// Abstr.XII C F Congress, June 16-21, 1996, Jerusalem, Israel, Isr. J . Med. Genet. 1996, vol.32 (SuppI). P.260;

36. Baranov V .S . , Gorbunova V .N . , Ivaschenko Т.Е. et al. Five years of prenataldiagnosis of cystic fibrosis in the former USSR. / /P ren .D iagn . 1992. V.12. P.112.

37. Beaudet A.L. , Bowcock A., Buchwald M. et al. Linkage of cystic fibrosis to twotightly linked DNA markers: joint report from a collaborative study. // Am.J.Hum.Genet. 1986. V.39. P. 681-693.

38. Boat Т., Welsh M. and Beaudet A. Cystic fibrosis. // A . L Ed. 1989. P. 26492680.

39. Boat T.F. Phenotypic diagnosis of CP/Symposium Session Summaries. //PediatricPulmonol.-Suppl. 10.1994. P.135.

40. Boucher R.C. Status of gene therapy for cystic fibrosis lung disease. // J Clin1.vest. 1999. V.I03. P.441-446.

41. Boue A., Muller P., Nezelof C , Oury J.P., Duchatel P., Durnez Y., Aubry M.C.and Boue J . Prenatal diagnosis in 200 pregnancies with a l-in-4 risk of cystic fibrosis. // Hum Genet. 1986. V.74. P. 288-297.

42. Brockmoller J . , Kerb R., Drakoulis N., Nitz M., Roots I. Genotype andphenotype of glutathione-S-transferase class ц and \\j in lung cancer patients and controls. / /Cancer Res. V. 53. 1993. P. 1004-1009.

43. Caldwell J . Comparative aspects of detoxication in Mammals. In: Jakoby W.B.(ed). // Enzymatic basis of detoxication. V . l . Academic press, New York. 1980. P.85-114.

44. Caplen N., Kinrade E., Sorgi F., et al. In vitro liposome-mediated DNAtransfection of respiratory epithelial cell lines using the cationic liposome DCchol/dope. // Pediatric Pulmonology. 1995. Suppl. 12 P.216.

45. Carbans H.J.B., Gosden C , Brock D.J.H. Microvillar peptidase activity inamniotic fluid: possible use in the prenatal diagnosis of cystic fibrosis. // 1.ncet. 1983. V.3. P.329-331.

46. Cheng P.W., Johnson L.G. Correction of the chloride transport abnormality ofCFT1 cells by transfer mediated by liposome. // Pediatric Pulmonology 1995. 1.S. abs. LB17

47. Cheng S.H., Gregory R.J., Marshall J . , Paul S., Souza D.W., White G.A.,O'Riordan C.R., Smith A .E . Deffective intracellular transport and processing of CFTR is the molecular basis of most cystic fibrosis. / /Cell . 1990. V.63. P.827-834.

48. Chillón M., Casals T., Mercier B., et al.Mutations in the cystic fibrosis gene inpatients with congenital absence of the vas deferens.// N Engl J Med 1995 Jun 1;332(22): 1475-80

49. Chu C, Trapnell B, Curristin S, Cutting G, Crystal R. Genetic basis of variableexon 9 skipping in cystic fibrosis transmembrane conductance regulator mRNA. // Nat.Genet. 1993. V.3. P. 151-156.

50. Claustres M, Gerrard B, Kjeliberg P, Desgeorges M, Démaille J , Dean MScreening for cystic fibrosis mutations in southern France: identification of a frameshift mutation and two missense variations. // Hum Mutât. 1992. V.1. N 4. P. 310-313

51. Colledge W.H., Abella B.S., Southern K.W. et al. Generation andcharacterization of a delta F508 cystic fibrosis mouse model. // Nat Genet. 1995. V. I0. P. 445-452.

52. Conrad C , Allen S., Afione S., Reynolds T. et al. Safety of single-doseadministration of an adeno-associated virus (AAV)-CFTR vector in the primate lung. // Gene therapy. 1996. V.3. P. 658-668.

53. Crystal R. Gene Therapy for Cystic Fibrosis: Lessons Learned and Hurdles totuccess. // Pediatric Pulmonology. 1995. Suppl.12 P.67-68.

54. Crystal R.G., McElvaney N.G., Rosenfeld M.A. et al. Administration of anadenovirus containing the human CFTR cDNA to the respiratory tract of individuals with cystic fibrosis // Nature Genetics. 1994. V. 8. P. 42-51.

55. Cuppers H. Genetic studies of the cystic fibrosis transmembrane conductanceregulator gene in Belgian CP patients. // Leuven University Press. 138 p.

56. Cutting G.R., Kasch L.M., Rosenstein B.J. et al. A cluster of cystic fibrosismutations in the first nucleotide-binding fold of the cystic fibrosis conductance regulator protein. // Nature. 1990.V. 346. P. 366-369.

57. Davidson D.J., Dorin J.R., McLachlan G. et al. Lung disease in the cysticfibrosis mouse exposed to bacterial pathogens. //Nat. Genet. 1995. V.9(4). P.351-357.

58. Dean et al. NL #6 // Cystic fibrosis mutation date base.littp://www.genet.sicl<kids.on.ca/cftr-cgi-bin/FullTable

59. Dean M., Osborne L., Santis G., Knight R. Association of HLA and IL1RAalleles with pulmonary disease severity. // Pediatric Pulmonol. Suppl. 10. 1994. P. 212-213.

60. Dean M., White M., Amos J . et al. Multiple mutations in highly conservedresidues are found in mildly affected cystic fibrosis patients. // Cell. 1990. V. 61. P. 863-870.

61. Delaney S.J . , Alton E.W., Smith S.N. et al. Cystic fibrosis mice carrying themissense mutation G551D replicate human genotype-phenotype correlations. // E M B O J . 1996. V. I5. P.955-963.

62. Discher B.M., Won Y.Y., Ege D.S. et al. Polymersomes: tough vesicles madefrom diblock copolymers. / /Sc ience. 1999. Vol. 284. P. 1143-6.

63. Dorin J.R., Dickinson P, Alton E.W. et al Cystic fibrosis in the mouse bytargeted insertional mutagenesis. //Nature. 1992. V.359. P.211-217.

64. Dork T., Fislage R., Neumann T., Wulf B., Tümmler B. Exon 9 of the CPTRgene: splice site haplotypes and cystic fibrosis mutatins. // Hum.Genet. 1994. V.93. P.67-73.

65. Dork T., Dworniczak B., Aulehla-Scholz C. et al. Distinct spectrum of CPTRgene mutations in congenital absence of vas deferens. // Hum.Genet. 1997. V.I00. P.365-377.

66. Dork T., Macek M. Jr., Mekus F. et al. A novel 21-kilobase deletion,CFTRdele2,3(21kB), in the CFTR gene: a cystic fibrosis mutation of Slavic origin common in Central and East Europe. // Hum.mutation 2000 ( in press)

67. Dumar V., Gervais R., Rigot JM . et al. Abnormal distribution of C F delF508allele in azoospermic men with congenital aplasia of epididymus and vas deference. // Lancet. 1990. V.336. P. 512.

68. Duncan A., Buchwald M., Tsui L.-C. Sublocalization of two cloned chromosome7 sequence closed linked to the cystic fibrosis Cytogenet. // Cell Genet. 1988. V. 49. P. 309-310.

69. Edwards J .H. Personal communication. // J.lmmunogenet. 1974. V.7. P.249257.

70. Effect of host modification and age on ainway epithelial gene transfer mediatedby a murine leukemia virus-derived vector. // J Virol. 1998. V. 72. № 11. P. 8861-8872.

71. Eiberg H., Morh J . , Schmiegelow K., Nielsen L.S., Williamson R. Linkagerelationship of paraoxonase (PON) with other markers: Indication of P O N cystic fibrosis syntheny. // Clin.Genet. 1985. V. 28. P. 265-271.

72. Estevill X Scambler P.J. , Wainwrighl B.G. el al. Patterns of polymorhism andlinkage disequilibrium for Cystic Fibrosis. // Genomics. 1987. V. 1. P. 257—263.

73. Estivill X. Complexity in a monogenic disease. // Nat.Genet.1996, v.12,N4,P.348-350.

74. Estivill X. , Bancells C , Ramos C. et al. The Biomed CF IVIutation AnalysisConsortium Geographic Distribution and Regional Origin of 272 Cystic Fibrosis Mutations in European Populations. // Hum.Mutat. 1997, v.10, p.135-154.

75. Estivill X. , Farrall M., Grunta A .M. et al. Linkage disequilibrium between Cysticfibrosis and linked DNA polymorphism in Italian families. A collaborative studies / /Amer. J . Human Genet. 1988. V. 43. P. 23—28.

76. Feigelson J . , Pecau Y. Anomalies du sperme, des deferents et de l'epididymedans la mucoviscidose. // La Presse Médicale. 1986 V.15. p.523-525.

77. Flotte T.R., Afione S.A., Conrad C. et al. Stable in vivo expression of the cysticfibrosis transmembrane conductance regulator with an adeno-associated virus vector. // Proc Natl Acad Sei U S A . 1993. V.90. № 15. P. 10613-10617.

78. Gabriel S.E.,Bngmann K.N. Cystic fibrosis heterozygote resistance to choleratoxin measured directly in the CFTR (-/-) mouse model. // Pediatric Pulmonology 1994, LBS, abs. 39 a.

79. Gao X., Huang L. Cationic liposome-mediated gene transfer // Gene Ther.1995. V.2. №10. P. 710-722.

80. Garry R., Cutting M.D. Implications of CFTR functions on the understendingof the relationship between genotipe/phenotype. // Pediatric Pulmonology. 1995. Suppl.12. P.119-127.

81. Gasparini P., Borgo G., Mastella G. et al. Nine cystic fibrosis patientsgomozygous for the CFTR nonsense mutation R1162X have mild or moderate lung disease. / /J.Med.Genet. 1992. V.29. N 8. P. 558-562.

82. Gibinski K., Szaton R. and Maraszek J . Evaluation of gamma-glutamyltranspeptidase (GGTP) and leucylaminopeptidase (LAP) determination in internal diseases. //Gastroenterologia. 1963. V.99. P.237-246.

83. Goodchild M.C., Dodge J.A., Cystic fibrosis. IVlanual of diagnosis andmanagement. / Bailliere Tindall. London, Philadelphia, Toronto, 1987

84. Gregory R.J. , Cheng S.H., Rich D.R. et al. Expression and characterization ofthe cystic fibrosis transmembrane regulator. // Nature. 1990. V.347. P.382-386.

85. Griesenbach U., Chonn A., Cassady R., et al. Comparison betweenintratracheal and intravenous administration of liposome-DNA complexes for cystic fibrosis lung gene therapy. // Gene Therapy. 1998. V.5. P.181-188.

86. Halbert CL, Aitken ML, Miller AD Retroviral vectors efficiently transducebasal and secretory ainway epithelial cells in vitro resulting in persistent gene expression in organotypic culture. // Human Gene Therapy. 1996.V.7. № 10. P.1871-1881.

87. Hamosh A. Preliminary results of cystic fibrosis genotype-penotypeconsortiume study. // Pediatric Pulmonology.1992. Suppl.8. P. 144-145.

88. Harris A., Chalkley G., Goodman Sh., Coleman L. Expression of the cysticfibrosis gene in human development. // Development. 1991. V.113. P.305-310.

89. Hasty P, O'Neal W.K., Liu K.Q. et al. Severe phenotype in mice withtermination mutation in exon 2 of cystic fibrosis gene // Somat Cell Mol Genet. 1995. V.21. P.177-187.

90. Highsmith W.E., Burch L.H., Zhou Z. et al. A novel mutation in the cysticfibrosis gene in patients with pulmonary disease but normal sweat chloride concentrations//N.Engl. J.Med. 1994. V.331. P.974-980.

91. Highsmith W.E., Burch L.H., Zhou Z. et al. Identification of a splice sitemutation (2789+5G>A) associated with small amounts of normal CPTR mRNA and mild cystic fibrosis. // Hum.Mut. 1997. V.9. P.332-338.

92. Holsclaw D.S., Perimutter A.D., Jockin H., Shwachman H. Genitalabnormalities in male patients with cystic fibrosis. // J . Urol. 1971. V. 106. P. 568-574

93. Hosli P., Erickson R.P. and Vogt E. Prospects for prenatal of cystic fibrosis:1.duction of biochemical abnormalities in fibroblasts from patients with cystic fibrosis by a urinary glycoprotein. // Biochem. Biophys.Res.Commun. 1976. V.73. P.209-216.

95. Ivaschenko T .E, Bakay M.A., Kascheeva Т.К., Michailova E.G. Molecularanalysis , prenatal diagnosis & initial steps in gene therapy of cystic fibrosis in Russia. // ECPC . Berlin. June 1998. P62

96. Ivaschenko Т., Bakay M., Gimbovskaya S., Baranov V. Search for novelCPTR mutations in Russian CP patients. // European CP Conference, Amsterdam. Belgium. 1995. Abstract p. 186.

97. Ivaschenko Т., Bakay M., Mikhailova E., Baranov V. Molecular studies of CPin Russia Abstr.VII Baltic Sea Congress Obst.& Gynec. // Журнал акуш. и женских болезней. 1999а. XLVIII. Р.74.

98. Ivaschenko Т., Вакау М., Mikhailova Е., Baranov V. Recent progress inmolecular srudies of CP in Russia. // Progress in prevention of genetic diseases.1999 June 3-5. Prague. P.21.

99. Ivaschenko Т.Е., Bakay M., Baranov V. Novel frameshift mutation in exon 4of CPTR gene. // Hum.Mut.1994. V. 4. P. 377-379

100. Ivaschenko Т.Е., Baranov V.S. , Dean M. Two new mutations and otherCPTR gene molecular changes detected by S S C P analysis in CF-patients from the Russia // Hum.Genet.1992. V. 89. P.123-129

101. Ivaschenko Т.Е., Malysheva O.V., Kuznetzova T.V., Baranov V .S . Simplifieddirect PGR method for prenatal diagnosis of cystic fibrosis. // News Letter Europ.Assoc. CP . 19916. V. 4. P.7.

102. Ivaschenko Т.Е., Osinovskaya N., Dean M., Agambgia C. Mutationidentification and RPLP analysis of CPTR gene in the Russia./ / Pediatr.Pulmonology. Suppl.8. 1992. P.243-244.

103. Ivaschenko Т.Е., White M.B., Dean M., Baranov V .S . A deletion of twonucleotides in exon 10 of the CPTR gene in a soviet family with cystic fibrosis causing early infant death. / /Genomics. 1991. V. I0. P.298-299.

104. Jiang, C , Pinkbeiner W.E., Widdicombe J.H., McCray P. and Miller S .S.Altered fluid transport across ainway epithelium in cystic fibrosis. // Science. 1993. V. 262. P. 424-431.

105. Jianjie M., Jason E. Tasch, Tao Tao. Phosphorylation dependent blok ofCPTR chloridechannel by exogenous R domain protein.// Pediatric Pulmonology 1995-Suppl.12 P.183.

106. Johnson L.G., Mewshaw J .P. , Ni H. et al. A test of the heterozygoteadvantage hypothesis in cystic fibrosis carr iers. / /Am.J.Hum. Genet. 1988. V.42. P.808-815.

107. Kaiser C.T., Laszio A., Cywkowits K. HLA antigens in cystic fibrosis: anassociation of B18 with the disease and Disease. // J . INSERM. Paris, 1976. V.58, P.252

108. Kaplan J . , Pennington S., George J . et al. Potentiation of gene transfer tothe mouse lung by complexes of adenovirus vector and polycations improves therapeutic potential. // Human gene therapy. 1998. V.9. P.1469-1479.

109. Kaplan J . , Pennington S., George J . , Woodworth L. et al. Potentiation ofgene transfer to the mouse lung by complexes of adenovirus vector and polycations improves therapeutic potential. // Human gene therapy. 1998. V.9. P.1469-1479.

110. Kaplan J .M. , Armentano D., Sparer Т.Е. et al. Characterization of factorinvolved in modulating persistence of transgene expression from recombinant adenovirus in the mouse lung. // Human gene therapy. 1997. V.8. P.45-56.

111. Kartner N., Augustinas 0., Jensen T.J. , Naismith A.L. , Riordan J.R.Mislocalization of delta F508 CFTR in cystic fibrosis sweat gland // Nature Genetics. 1992. V. 1. № 5. P. 321-328.

112. Kascheeva Т., Gorbunova V., Ivaschenko Т., Bakay M., Lebedev V.,Baranov V. Genotype-phenotype correlation in CP fetuses. // European CF Conference. Amsterdam, Belgium. 1995. P.200.

113. Kay M.A., Liu D. and Hoogerbrugge P.M. Gene therapy. / / P N A S . 1997. V.94. P. 12744-12746.

114. Kerem В., Harel-Nave N., Augarten A. et al. Clinical presentation of patientscarrying the 5 thymideine tract in intron 8-from healthy individuals to typical CF . // Pediatric Pulmonology. 1995. Suppl.12. P.203.

115. Kerem В., Harel-Nave N., Augarten A. et al. Clinical presentation of patientscarrying the 5 thymideine tract in intron 8-from healthy individuals to typical CF . // Pediatric Pulmonology. 1995. Suppl.12. P.203.

116. Kerem В., Kerem E. The Molecular Basis for Disease Variability in CysticFibrosis. // Eur J Hum Genet. 1996. V.4. P.65-73

117. Kerem В., Zielenski J . , Markiewicz D. et al. Identification of mutations inregions corresponding to the 2 putative nucleotide (ATP)-binding folds of the cystic fibrosis gene. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. V. 87 P. 8447-8451.

118. Kerem B.S., Rommens J .M. ,Buchanan J.A. et al. Identification of the cysticfibrosis gene: genetic analysis. / /Sc ience. 1989. V.245. P.1073-1080.

119. Khan T.Z., Wagener J.S. , Bost Т., Martinez J . , Accurso F.J. and RichesD.W. Early pulmonary inflammation in infants with cystic fibrosis. // Am J Respir Crit Care Med. 1995. V. 151. P. 1075-1082.

120. Khusnutdinova E., Khidiatova I., Ivaschenko T. et al., Polymorphism ofMET and D7S23 loci linked to the cystic fibrosis gene in Bashkir and Komi populations. // Human Hereditary. 1994. V.39. P.1-4.

121. Kobayashi, K., Knowles, M., O'Brien, W.E., and Beaudet, A.L. Benignmissense variations in the cystic fibrosis gene. // Am. J . Hum. Genet. 1990. V. 47. P. 611-615.

122. Kopito L.E., Kosasky H.J. and Shwachman H. Water and electrolytes incervical mucus from patients with cystic fibrosis. // Pertil Steril. 1973. V. 24. P. 512-518.

123. Kotloff R.M., Pitzsimmons S.O. and Piel S.B. Pertility and pregnancy inpatients with cystic fibrosis. // Clin Chest Med. 1992. V. 13. P. 623-635.

124. Lamm L.U., Peterson G.B. The HLA genetic linkage group. // Transplant.Proc. 1979. V.11. N11. P. 1692-1696.

125. Maeda M, Murayama N, Ishii N, et al. A simple and rapid method for HLADQAI genotyping by digestion of PCR-am-plified DNA with allele specific restriction endonucleases. / /T issue Antigens. 1989. V.34. P. 290-298.

126. Marlin R.K. Kaplan G.C. , Hodge Th.W., Barker P.E. Cystic Pibrosis DNAmakers in Alabama blacks. // Genomics. 1988. V. 3. P. 385—388.

127. Mastella G., Castellani C , Paraguna D. et al. Longterm outcome in patientswith cystic fibrosis identified through newborn screening. // Pediatric Pulmonology. 1995. Suppl.12 P.88.

128. Meyer K., Thompson M., Levy M., Barron L., and Szoka P. Intratrachealgene delivery to the mouse airway; characterization of plasmid DNA expression and pharmacokinetics//Gene therapy. 1995. V.2. P.450-460.

129. Moelling K. Naked DNAthe poor man's gene therapy? // Gene Therapy.1998. V. 5. P.571-572

130. Morral N., Nunes V., Casals T. CA/GT microsatellite allele within theCystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) gene are not generated by unequalcrossingover. / /Genomics. 1991. V. 10. P. 692-698.

131. Mulivor RA, Hannig VL, Harris H. Developmental change in human intestinalalkaline phosphatase. // Proc Natl Acad Sei U S A 1978 V. 75. N 8. P. 3909-12

132. Nebert D.W. Pharmacogenetics: an approach to understanding chemicaland biologic aspects of cancer.// J Natl Cancer Inst. 1980. V. 64. N 6. P. 127990.

133. Ng I. S., Pace R ., Richard M.V. et al. Method for analysis of multiple cysticfibrosis mutation. // Hum.Genet 1991. V. 87. P. 613-617

134. Nunes v., Casals Т., Gaona A. et al. Cystic fibfosis patients with mutation1949del84 in exon 13 of CFTR gene have a similar clinical severity as -F508 homozygotes.//Hum.Mut. 1992. V . l . № 4 . P. 375-379

135. O'Neal W.K., Hasty P, McCray P.B. Jr., Casey В., Rivera-Perez J . , WelshM.J., Beaudet A.L., Bradley A. A severe phenotype in mice with a duplication of exon 3 in the cystic fibrosis locus. // Hum Mol Genet. 1993. V.10. P. 1561-1570.

136. Oppenheimer E.H. and Esterly J.R. Observations on cystic fibrosis of thepancreas. VI. The uterine cervix. // J Pediatr. 1970. V. 77. P. 991-996.

137. Orita M., Iwahana H., Kanazawa H., Sekya T. Detection of polymorphismof human DNA by gel electrophoresis as single ceil conformation polymorphism. // Proc. Nati.Acad. Sei. 1989. V.86. P.2766-2770.

139. Osborne L., Knight R.A., Santis G., and Hodson M. A mutation in thesecond nucleotide binding fold of the cystic fibrosis gene. / / A m . J . Hum. Genet. 1991. V. 48. P. 608-612.

140. Pedersen P. L and Young H. K.The first nucleotide binding fold of the cysticfibrosis transmembrane conductance regulator can function as an active ATPase. // Pediatric Pulmonology. 1995. Suppl.12. P. 183.

141. Pier G. , Grout M., Zaidi T. Cystic fibrosis transmembrane conductanceregulator is an epithelial cell receptor for clearance of Pseudomonas aeruginosa from the lung. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA 1997. V. 94 P. 1208812093

142. Pritchard D.J. Cystic fibrosis frequency. Sex ratio anomalies and fertility: anew theory for the dissemination of mutant alleles. // Hum.Genet. 1991. V.87. P. 671-676.

143. Ratcliff R, Evans M.J., Cuthbert A.W. et al. Production of a severe cysticfibrosis mutation in mice by gene targeting. // Nat Genet. 1993. V.4. P.35-41.

144. Rave-Harel N., Kerem E., Nissim-Ratinia M. et al. The Molecular Basis ofPartial Penetrance of Splicing Mutations in Cystic Fibrosis. // Am. J . Hum. Genet. 1997. V. 60. P.87-94.

145. Riordan J . R., Pind S., Lukacs G.L. et al. Biosynthetic arrest of delP508CFTR: characterization and manipulation. // Pediatric Pulmonology. 1994 Suppl.10. P.72-73.

146. Riordan J .M. , Rommens J .M. , Kerem B. et al. Identification of the cysticfibrosis gene: Cloning and characterization of complementary DNA. // Science. 1989. V. 245. P. 1066-1073

147. Romeo G., Devoto M., Galietta L.J. Why is the cystic fibrosis gene sofrequent? // Hum Genet. 1989. V. 84. № 1. P. 1-5.

148. Rommens J .M. , lannuzzi M.C., Kerem B. et al., Identification of CysticFibrosis gene: Chromosome walking & jumping. // Science. 1989. V.245. P. 1059-1065.

149. Rosenfeld M.A., Adenovirus-mediated transfer of a recombinant a1antitrypsin gene to the lung epithelium in vivo. // Science. 1991. V. 252. P. 431434

150. Rozmahel R., Wilschanski M., Matin A. et al. Modulation of diseaseseverity in cystic fibrosis transmembrane conductance regulator deficient mice by a secondary genetic factor. // Nat.Genet. 1996. V. I2. P.280-287.

151. Rutenberg A.M. , Goldberg J.A., Pineda E.P. Serum-glutamyltranspeptidase activity in hepatobiliary pancreatic disease. // Gastroenterology. 1963. V.45. P.43-48

152. Santis G., Osborne L., Knight R.A., Hodson M.E. Independent geneticdeterminants of pancreatic and pulmonary status in cystic fibrosis. // Lancet. V.336. 1990. P. 1080-1084

153. Scheule R., George J . , Bagley R. et al. Basis of pulmonary toxicityassociated with cationic lipid-mediated gene transfer to the mammalian lung. // Human gene therapy. 1997. V.8. P.689-707.

154. Schidlow D.V., Taussig L.M., Knowles M.R. Cystic Fibrosis Foundationconsensus conference report on pulmonary complications of cystic fibrosis.// Pediatr Pulmonol. 1993 V. 15. N 3. P. 187-98

155. Schwarz M., Anuret M., Claustres M., Eiken H.G., Eiklid K., Schaedel C ,Stolpel L., and Tranebjaerg L. 1994. 394delTT: a nordic CP mutation. // Hum. Genet. V. 93. P. 157-161.

156. Seidegard J . , Pero W.R. The hereditary transmission of high glutathionetransferase activity towards trans-stilbene oxide in human mononuclear leucocytes. // Hum.Genet. V.69. 1985. P. 66-68.

157. Seidegard J . , Pero W.R., Markowitz M.M., Roush G., Mil.er D.G., BeattieE.J . Isoenzyme(s) of glutathione transferase (class Mu) as a marker for the susceptibility to lung cancer: a follow up study. // Carcinogenesis. V. 2, N 1. 1990. P. 33-36.

158. Seidegard J . , Vorachek, Pero W.R., Pearson W.R. Hereditary différencies inthe expression of the human glutathione transferase active on trans-stilbene oxide are due to a gene deletion. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. V.85. 1988. P. 7293-7299.

159. Skach W.R. CPTR mutants G85E & G91R insert charged residues into thefirst transmembrane segment and disrupt intracellutar trafficking but do not alter transmembrane topology. // Pediatric Pulmonology. 1995. Suppl.12. P. 191.

160. Smith A .E . , Cheng S.H., Marshall J . et al. Processing of CPTR. // PediatricPulmonology. 1992. Suppl.8. P. 187-188.

161. Smith C , Harrison D. Association between polymorhism in gene formicrosomal epoxide hydrolase and susceptibility to emphysema. // Lancet. 1997. V.350. P. 630-633.

162. Smith J .J . , Travis S., Greenberg E.P. and Welsh M.J. Cystic fibrosis ain/vayepithelia fail to kill bacteria of abnormal ainA/ay surface. // Cell. 1996. V. 85. P. 229-236.

163. Smyth R.L., van Velzen D. Smyth A.R., Lloyd D.A. and Heaf D.P. Stricturesof ascending colon in cystic fibrosis and high-strength pancreatic enzymes. // 1.ncet. 1994. V. 343. P.85-91.

164. Snouwaert J .N. , Brigman K.K., Latour A .M. , Malouf N.N., Boucher R.C.,Smithies O. and Koller B.H. An animal model for cystic Fibrosis made by gene targeting. // Science. 1992. V.257. P. 1083-1091.

166. Sturgess J . and Imrie J . Quantitative evaluation of the development oftracheal submucosal glands in infants with cystic fibrosis and control infants. // Am. J . Pathol. 1982. V. 106. P. 303-314.

167. Stutts M. Molecular basis for interactions of CFTR with amiloride sensitiveNa+ channels. //Pediatric Pulmonology. 1995. Suppl.12 P. 113.

168. Stutts M.J., Rossier B.C., Boucher R.C. Cystic fibrosis transmembraneconductance regulator inverts protein kinase A-mediated regulation of epithelial sodium channel single channel kinetics. // J . Biol. Chem. 1997. V. 272. № 22. P. 14037-1440.

169. Szoka P., Meyer Jr. and Thomson M. Non-Viral Vectors for Gene Therapy.//Pediatric Pulmonology 1995. Suppl.12 P.126.

170. Tálamo R.S., Rosenstein B.J., Berninger R.W. Cystic f ibrosis./ / In: Themetabolic basis of inherited deseases. McGraw-Hill, New York. 1982. P. 18891920.

171. Tata P., Stanier P., Wicking C. et al. Cloning the mouse homolog of thehuman cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene.// Genomics. 1991. V.10 P. 301-308.

172. Taussig L.M., Lobeck C.C. , SanfAgnese P.D., Ackerman D.R. andKattwinkel J . Fertility in males with cystic fibrosis. // N. Engl. J . Med. 1972. V. 287. P. 586-595.

173. Tsan M., White J . , Shephard B. Lung-specific direct in vivo gene transferwith plasmid DNA. / /American journal of physiology. 1995. V.268. P. LI 052L1056.

174. Tsui L . -C , Buchwald M. Biochemical and molecular genetics of cysticfibrosis // In: Advances in human genetics 1991. Plenum press. New York & 1.ndon. 1991. P. 153-240.

175. Tsui L-C. Mutations and sequence variations detected in the cystic fibrosistransmenbrane conductance regulator gene: A report from the cystic fibrosis analysis consortium. // Hum.Mutation.1992. V . I . N.3. P.197-203,

176. Turner G., Dunckley M., Dicson G. Gene therapy of Duchenne musculardystrophy. / In "Dystrophin. Gene, protein and cell biology". Edited by Brown S.& Lucy J . Cambrige Univ. Press. 1997. P. 275-309.

177. Van Doornick H., French P., Verbeek E. et al. A mouse model for cysticfibrosis delF508 mutation. // EMBO. 1995. V.14. V.18. P.4403-4411.

178. Verlingue C , Kapranov N.I., Mercier B. et al. Complete Screening ofMutations in the Coding Sequence of the CFTR Gene in a Sample of CF Patients From Russia: Identification of Three Novel Alleles. // Human mutation. V. 5. N 3. P. 205-210

179. Verlinsky Y. Preimplantation genetic diagnosis.// J . Assist. Reprod. Genet.1996. V. 13. N 2 . P. 87-9

180. Vidaud M., Fanen P., Martin J . , Ghanem N., Nicolas S., and Goossens M.Three mutations in the CFTR gene in French Cystic Fibrosis Patients: identification by denaturing gradient gel electrophoresis. // Hum. Genetics. 1990. V. 85. P. 446-449.

181. Wang G. Keratinocyte growth factor induced epithelial proliferation facilitatesretroviral-mediated gene transfer to pulmonary epithelia in vivo. // J . Gene Med. 1999. V .1 .№1. P. 22-30.

182. Welsh M.J. Trials of gene transfer in humans: what have we learned?//Pediatric Pulmonology. 1995. Suppl.12. P.121.

183. Welsh M.J., Smith A .E . Molecular mechanisms of CPTR chloride channeldysfunction in cystic fibrosis. / /Ce l l . V.73. P.1251-1254

185. Wilson D. C , Ellis L., Zielenski J . , et al. Uncertainty in the diagnosis of cysticfibrosis: Possible role of in vivo nasal potential difference measurements. // The J . of Pediatrics. 1998. V. 132. №4. P.596-599.

186. Wilson D., Ellis L., Corey M. Patients previously diagnosed with cisticfibrosis: value of nasal otential difference in borderline cases. // Pediatric Pulmonology. 1995. Suppl.12 P.115.

187. Wilson G.B., Burdash N.M., Arnaud P, Monsher M.T., Pudenberg H.H.Carcinoembryonic antigen and cystic fibrosis protein in blood from cystic fibrosis homozygotes and heterozygote carriers. // Scand. J . Immunol. 1976. V.5(6-7). P.829-36

188. Yang Y., Paper S.E. , Cohn J.A., Engelhardt J.P., Wilson J .M. An approachfor treating the hepatobiliary disease of cystic fibrosis by somatic gene transfer. // Proc.Natl. Acad. Sei. 1993. V. 90. P.4601-4605.

189. Zabner J. , Ramsey B.W., Meeker D.P. et al. Repeat administration of anadenovirus vector encoding cystic fibrosis transmembrane conductance regulator to the nasal epithelium of patients with cystic fibrosis // J Clin Invest 1996. V. 97. P. 1504-1511

190. Zar H., Saiman I., Quittell L. and Prince A. Binding of Pseudomonasaeruginosa to respiratory epithelial cells from patients with various mutations in the cystic fibrosis transmembrane regulator. // Journal of Pediatrics. 1995. V. 126. P. 230-233.

191. Zeiher B.G., Eichwald E., Zabner J . et al. A mouse model for the delta F508allele of cystic fibrosis / / J Clin Invest. 1995. V.96. P.2051-2064

192. Zhong S., Forber A., Ketterer B. et al. Glutathion S-transferasemu locus:use of genotyping and phenotyping assay to assess association with lung cancer susceptibility.//Carcinogenesis V. 12. P. 1533-1537.

193. Zielenski J . , Corey M., Rozmahel R. et al. Multipoint marker analysis for thepresence of a CP modifier gene locus on chromosome 19. // Pediatric Pulmonology. 1997. Suppl.14. P.246.

194. Zielenski J , , Markiewicz D., Rininsland P. et al. A cluster of highlypolymorphic dimichotide repeats in intron 17b of the CFTR gene. // Am. J . Hum. Genet. 1991. V.49. P.1256-1262.

195. Zuelzer W.W. and Newton. W.A. The pathogenesis of fibrocystic disease ofthe pancreas. A study of 36 cases with special reference to the pulmonary lesions. // Pediatrics. 1949. V. 4. P. 53-65.