Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Научные основы интенсификации воспроизводства молочных коз

ВАК РФ 06.02.06, Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

Автореферат диссертации по теме "Научные основы интенсификации воспроизводства молочных коз"

На правах рукописи

АКСЕНОВА Полина Владимировна

НАУЧНЫЕ ОСНОВЫ ИНТЕНСИФИКАЦИИ ВОСПРОИЗВОДСТВА МОЛОЧНЫХ коз

06.02.06 - ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

6 ДЕК 2012

Новочеркасск-2012

005056746

Работа выполнена в государственном научном учреждении Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук

Научный консультант: доктор сельскохозяйственных наук, профессор Айбазов Али-Магомет Муссаевич

Ведущая организация: Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства Россельхозакадемии

Защита состоится «21» декабря 2012 года в 10-00 часов на заседании диссертационного совета Д 006.106.01 при Государственном научном учреждении Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук

346421, Ростовская область, г. Новочеркасск, Ростовское шоссе, 0

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ СевероКавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии - 346421, Ростовская область, г. Новочеркасск, Ростовское шоссе, 0.

Официальные оппоненты:

Василенко Вячеслав Николаевич

член-корреспондент РАСХН, доктор сельскохозяйственных наук, профессор, Заслуженный работник сельского хозяйства РФ Донской зональный научно-исследовательский институт сельского хозяйства РАСХН, зам. заведующего отделом животноводства и ветеринарии

Мануйлов Игорь Михайлович

доктор ветеринарных наук, профессор Северо-Кавказский федеральный университет, профессор кафедры ботаники, зоологии и общей биологин

Шкурат Татьяна Павловна

доктор биологических наук, профессор НИИ биологии Южного федерального университета, заведующая лабораторией биологии размножения и развития

Автореферат разослан « > ноября 2012 года

Ученый секретарь

диссертационного совета, профессор

А.М. Ермаков

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Козоводство является одной из важных и интенсивно развивающихся отраслей животноводства в Российской Федерации. По данным «Справочника «Овцеводство и козоводство Российской Федерации в цифрах» (2012) в 2011 г. в стране насчитывалось около 1,2 млн. коз. Принятая «Отраслевая целевая программа «Развитие овцеводства и козоводства в Российской Федерации на 2012-2014 гг. и на плановый период до 2020 г.» предусматривает увеличение численности коз до 2,6 млн. Достижение целевых индикаторов Программы будет зависеть, в первую очередь, от решения комплекса селекционных, генетических и технологических задач отрасли (Василенко В.Н. с со-авт., 2004, 2008).

Воспроизводство является первостепенной составляющей успешной селекционно-племенной работы (Мануйлов И.М., 1998; Никитин В.Я., 2005). Поэтому реализация намеченных целей невозможна без разработки современных технологий интенсивного воспроизводства коз с использованием последних достижений биологической науки. Эти технологии должны базироваться на достоверных научных знаниях об особенностях биологии репродукции молочных коз. К сожалению, к настоящему моменту отечественная наука располагает достаточно ограниченными материалами по биологии коз и, еще более редкими, -по репродукции, в основном, аборигенных и пуховых пород (Лопырин А.И., 1959; Орехов А.А., 1981; Зеленский Г.Г.; 1981, Сеитов М.С., 2001; Сивожелезо-ва Н.А., 2006; Долганова С.Г., 2007). Что же касается научного обеспечения молочного козоводства, то по данной проблеме имеются лишь отдельные, в основном зарубежные исследования (Haenlein G. F. W., 1992; Menchaca A., Ru-bianes Е., 2007; Fernandez-Modo D. e.a., 2008; Dogan I. 2008). Однако фрагментарный характер исследований и, зачастую, противоречивые выводы, к которым приходят авторы, не позволяют рассмотреть проблему как единое целое.

Зааненская порода коз - одна из самых продуктивных молочных пород. Удой за лактацию составляет 600-800 кг молока при жирности 3,8-4,5%. (Иол-чиев Б.С. и др., 2000). Выдающаяся продуктивность этих животных сделала их наиболее используемыми для улучшения коз местных пород во многих странах мира. Все российское молочное козоводство представлено, в основном, козами зааненской породы, либо местными популяциями молочных коз, выведенными с ее использованием. Поэтому, в качестве объекта исследований мы выбрали

животных зааненской породы, как наиболее типичных и перспективных представителей молочных коз.

Научная гипотеза работы — разработка комплексной системы биотехнологических способов интенсификации воспроизводства молочных коз ускорит процесс формирования племенной базы молочных коз в Российской Федерации.

Цель работы - изучить особенности биологии размножения зааненских коз и, на их основе, разработать комплекс биотехнологических приемов интенсификации воспроизводства молочных коз.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

- изучить становление репродуктивной функции у коз и козлов и возможность раннего включения животных в процесс воспроизводства;

- определить границы эстрального сезона и установить продолжительность и особенности регуляции полового цикла коз;

- разработать новые и усовершенствовать существующие способы направленного регулирования полового цикла у коз;

- разработать способ ранней диагностики беременности у коз;

- разработать способ повышения сохранности беременных коз и их потомства;

- изучить сезонные особенности функционирования репродуктивной системы козлов;

- подобрать физиологически обоснованный режим интенсивной эксплуатации козлов-производителей и изучить возможность стимуляции их репродуктивной функции;

- разработать синтетические среды для краткосрочного хранения и крио-консервации спермы козлов;

- определить биологическую и экономическую эффективности различных способов замораживания спермы;

- усовершенствовать технологию трансплантации эмбрионов у коз, включая индукцию полиовуляции, режим получения датированных зигот, методы оценки и культивирования эмбрионов.

Ыаучная новизна. Впервые установлены физиологические закономерности проявления репродуктивных функций и возрастные особенности биологии репродукции молочных коз, экспериментально обоснованы сроки наступления половой зрелости и возможности включения в воспроизводство 6-7-ми мес.

козликов, рассмотрен механизм депрессии репродуктивной функции козлов в неполовой сезон. Разработан новый способ ранней диагностики беременности у коз. Впервые изучена динамика иммунных показателей у коз при различных функциональных состояниях их репродуктивного тракта. Подтверждена возможность применения биостимулятора из мозговой ткани (БСМ) для функциональной активации неспецифических факторов иммунной системы животных и разработан способ повышения сохранности поголовья и получения потомства с высоким иммунным статусом путем биологической стимуляции беременных коз. Разработан простой и объективный экспресс-метод определения биологической активности биостимуляторов. Впервые предложен метод осеменения транспортированной спермой охлажденной в новом синтетическом разбавителе TRIS для краткосрочного хранения спермы козлов. Разработана новая биологически полноценная среда для криоконсервации спермы козлов. Разработан режим длительной интенсивной эксплуатации козлов-производителей для накопления консервированной спермы. Разработана схема стимуляции функциональной активности репродуктивной системы козлов в неполовой сезон. Впервые осуществлен комплексный подход к усовершенствованию способов регуляции воспроизводства молочных коз. Проведена сравнительная оценка эффективности различных гормональных препаратов для синхронизации половой охоты у коз. Установлена возможность использования нового препарата «Мепрегенола-цетата ■ водорастворимого» для индукции эструса вне сезона размножения. Впервые определены видовые особенности зигот коз и сконструирована видо-специфичная среда для культивирования ооцитов и эмбрионов у коз, повышающая их способность к имплантации. Разработаны схемы индукции полиовуляции у коз-доноров, позволяющие получать одновозрастные эмбрионы высокого качества. Разработан режим получения ооцитов на стадии двух пронукле-усов для получения трансгенов путем переноса рекомбинантной ДНК проядер-ным микроинъецированием зигот.

Объектом исследований были козы зааненской и в типе зааненской породы различных половозрастных групп.

Предметом исследований служили морфофизиологаческие особенности репродуктивной функции молочных коз и возможность ее направленного регулирования.

Реализация результатов исследований. Научные положения и результаты исследований вошли в научные и обучающие пособия, в т.ч. монографии:

«Воспроизводство коз» (2007), учебные пособия «Экология и этология животных» (2008) и «Биология животных с основами экологии» (2009), «Биогенные стимуляторы: определение биологической активности и применение в животноводстве» (2009), используются в учебном процессе в ВУЗах биологического и сельскохозяйственного направлений. Внедрены в производство и служат руководством к практической деятельности: «Технологический регламент по искусственному осеменению овец и коз» (2009), «Инструкция по искусственному осеменению овец и коз» (Инструкция) (2010), «Инструкция по криоконсерва-ции спермы козлов» (стандарт организации), памятки и методические рекомендации. Результаты исследований по индукции полиовуляции и получению датированных по времени эмбрионов используются в экспериментах по созданию трансгенных животных в программе Союзного государства «БелРосТрансген-2».

Научно-практическая значимость исследования. Изучены теоретические аспекты и получены новые экспериментальные данные об особенностях биологии размножения и биотехнике репродукции зааненских коз. Разработаны практические методы ускоренного воспроизводства, направленные на интенсификацию селекционно-племенной работы в молочном козоводстве. Предложены новые и усовершенствованные биотехнологические приемы, представляющие ключевые этапы получения трансгенных животных.

Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации обсуждены и одобрены на ежегодных заседаниях ученого совета института 2001-2011 гг.; международных конференциях, включая: «Биоресурсы. Биотехнологии. Инновации Юга России», Пятигорск - 2003, «Состояние, перспективы, стратегия развития и научного обеспечения овцеводства и козоводства РФ», Ставрополь - 2007; «Modarni Vymozenosti Vëdy: Lekarstvi, Biologicke vëdy, Chemie a chemicka technologie», Praha — 2008; «Научные основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных», Краснодар - 2009; «Инновационные пути развития животноводства», п. Нижний Архыз - 2009; «Dy-namika naukowych badac - 2010», Przemysl - 2010; Culegere de lucran a Sim-pozionului stiintific cu participare internationala consacrat aniversarii a 55 de la fondarea Institutului «Realizan si perspective in zootehnie, biotehnologii si medicina veterinara», 6-8 octombrie, Maximovca-2011; «Повышение интенсивности и конкурентоспособности отраслей животноводства», Жодино-2011 и др.

По результатам работы получены патенты РФ на изобретения: «Среда для культивирования доимплантационных эмбрионов коз IN VITRO» RU 2396344, заявка 2008152992/13, приоритет изобретения 31.12.08, зарег. в гос. реестре 10.08.10, Бюл. № 22; «Среда для криоконсервации спермы козлов» RU 2436299, заявка № 2010118373/13, приоритет изобретения 06.05.10, зарег. в гос. реестре 20.12.11, Бюл. № 35, оформлена заявка на изобретение «Способ раннего определения беременности у коз» № 2012105799.

Разработка «Генофондный криогенный банк гамет сельскохозяйственных животных» экспонировалась на международной выставке-конгрессе «Высокие технологии, инновации, инвестиции», Санкт-Петербург, 2008, награждена дипломом 2 степени и серебряной медалью; разработка «Комплексная технология сохранения генофонда и повышения эффективности воспроизводства животных» экспонировалась на IX Московском международном салоне инноваций и инвестиций, Москва, ВВЦ, 2009, награждена дипломом и бронзовой медалью; разработка «Среда для культивирования доимплантационных эмбрионов коз in vitro» экспонировалась на X Московском салоне инноваций и инвестиций 2010, награждена дипломом и серебряной медалью.

Публикации. Основные материалы исследований опубликованы в 71 печатных работах, в том числе в 16 журналах, рекомендованных ВАК, 4 монографиях, 2 патентах, технологическом регламенте, рекомендациях и инструкциях.

Личный вклад соискателя. Представленная работа является продуктом личных исследований автора. При этом часть научных трудов опубликована в соавторстве с д. с.-х. н., профессором Айбазовым А.-М.М., к.б.н. Коваленко Д.В., к.с.-х. н. Малаховой JI.C. и др. Все соавторы в справках, представленных в диссертационный совет, не возражают против использования совместных данных. Автор выражает искреннюю благодарность члену-корреспонденту РАСХН, д.с.-х-н., профессору Клименко А.И., д. с.-х. н., профессору Айбазову А.-М.М., д. б. н., профессору Ермакову A.M., д.б.н. Гольдману И.Л., к. х.н. Сад-чиковой Е.Р. за консультации и поддержку.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 322 страницах компьютерного текста, содержит 80 таблиц, 41 рисунок и 69 фотографий и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований, выводов и практических предложений. Список литературы включает 474 источника, в т.ч. 210 иностранных.

Основные положения, выносимые на защиту:

-Рост и развитие репродуктивной системы молочных коз завершаются к 6-ти месяцам постнатального онтогенеза и в этом возрасте животных можно включать в цикл воспроизводства.

-Осуществление репродуктивной функции у коз и механизм ее регуляции в значительной степени определяются половой сезонностью вида.

-Новые и усовершенствованные методы направленного регулирования репродуктивной функции коз позволяют индуцировать синхронизированные половые циклы вне зависимости от полового сезона и обеспечивают высокую оплодотворяемость коз и высокую выживаемость потомства.

-Технология круглогодичной эксплуатации козлов, заключающаяся в получении и криоконсервации спермы между периодами осеменения, позволяет использовать высокоценных производителей с максимальной интенсивностью.

- Усовершенствованная методика получения датированных по времени эмбрионов и ооцитов для трансгенеза и трансплантации позволяет получать оплодотворенные ооциты на стадии двух пронуклеусов с высокой способностью к имплантации.

Работа выполнена в соответствии с тематическими планами НИР, входящими в программу РАСХН №№ Гос. регистрации 15070.3666026906.06, 01.200.1 10986, а также программой Союзного государства Россия-Белоруссия «Разработка технологий и организация опытного производства высокоэффективных и биологически безопасных лекарственных средств нового поколения и биологически полноценного детского питания на основе лактоферрина человека, получаемого из молока трансгенных животных» («БелРосТрансген-2») на 2009-2013 гг.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Научно-исследовательская работа выполнялась в период 2001 - 2012 гг. в Северо-Кавказском зональном научно-исследовательском ветеринарном институте, Биотехцентре Белорусского национального НИИ животноводства, племенном репродукторе коз зааненской породы Ставропольского НИИ животноводства и кормопроизводства и козоводческих хозяйствах Московской и Ростовской областей и Ставропольского края.

Специальные исследования проводили при помощи микроскопа Axiovert-200 в комплекте с микроманипулятором, микровизора LOMO, фотометра АС-CUCELL IMV, лапароскопа Richard Wolf, автоматизированной линии для крио-консервации «IMV Technologies» и пр. Биохимические показатели определяли в биохимическом анализаторе Chem Well 2900V (Т), гематологические и иммунные - в гематологическом анализаторе PCE-90Vet, либо в соответствии с «Методическими рекомендациями по определению естественной резистентности» (1987). Концентрацию гормонов в крови определяли методом ИФА на анализаторе УНИПЛАН. Гистологические препараты изготавливали по Р. Лил-ли (1969). Осеменение коз проводили в соответствии с «Инструкцией по технологии работы организаций по искусственному осеменению и трансплантации эмбрионов с./х. животных» (2000). Получение и трансплантацию эмбрионов осуществляли с помощью лапаротомии. Кроме того, использовали методы в собственной модификации, описанные по ходу исследований.

10

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. ИЗУЧЕНИЕ РАЗВИТИЯ И ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ КОЗ, КАК ОСНОВЫ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИНТЕНСИФИКАЦИИ ВОСПРОИЗВОДСТВА

В настоящее время при организации технологических процессов воспроизводства коз принято руководствоваться инструкциями и методиками, разработанными для овец. Между тем, видовые отличия могут быть довольно значительными. Это подтверждается тем, что методы и приемы, применяемые в воспроизводстве овец, при проецировании их на коз, не дают ожидаемого эффекта, что может являться одним из сдерживающих факторов в развитии отрасли. Следовательно, для эффективного воспроизводства молочных коз необходимы более глубокие знания о развитии и функционировании репродуктивной системы этих животных.

3.1.1. ИССЛЕДОВАНИЕ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ КОЗ 3.1.1.1. Поетнатальное развитие репродуктивной системы коз

В результате комплекса морфометрических, гистологических, гормональных и рефлексологических исследований (у 0-18 мес. коз) было выявлено, что репродуктивные органы растут и формируются неравномерно, в зависимости от степени их развития на момент рождения. При этом к 6-ти мес. возрасту, репродуктивная система у коз завершает свое развитие, далее лишь незначительно увеличивается масса органов.

Рис 2. Половой аппарат новорожденной Рис 3. Репродуктивный аппарат козы с козы желтым телом в яичнике, 6 мес

Так, из всех органов репродуктивной системы в постнатальный период наиболее интенсивно росла матка. От рождения до 6-ти мес. относительная скорость роста матки составила 225% в мес., далее до 18-ти мес. - лишь 2,6% мес. Длина ее отделов увеличивалась с неодинаковой скоростью (рис. 4).

гё ! 55 1 т 1 э |

18 мес. 6 мес. при рождении

12,6

23,1

О 10 20 30 40 50 60

Рис. 4. Соотношение длииы отделов матки, %

Гистологические исследования матки у 6-ти мес. коз в сравнении с 18-ти мес. показывают полное развитие органа в полугодовалом возрасте (рис. 5).

Рис. 5. Рог матки, маточные железы и реснитчатый Рис. 6. Фолликул с яйце-

эпителий, 6 мес. клеткой, 6 мес.

Яйцеводы в основном сформированы уже до рождения. Относительная скорость роста яйцеводов от рождения до 6 мес. составила 33,5 % в мес., в период с 6-ти до 18-ти мес. - только 1%.

Относительная скорость роста яичников от рождения до 6-ти мес. составила 27% в мес., за следующий год - 3,5% в мес. К 6-ти мес. возрасту яичники округлились, объем коркового вещества значительно увеличился и его отношение к мозговому изменилось с 1:6,5 на 1:1,8. Кроме примордиальных, первичных и атретических фолликулов появились вторичные, зрелые фолликулы (рис. 6) и желтые тела (рис. 3), что свидетельствует о наличие половых циклов.

Выборка козлами-пробниками коз в охоте в течение цикла выявила наличие охоты у 81% 6-ти мес. коз. В следующем году новое поголовье того же возраста в начале эстрального сезона было фронтально обработано эстрофаном. Обработка вызвала охоту у 87,5% коз. Это значит, что у них также уже имелись половые циклы. При этом зависимости наличия половых циклов от живой массы и упитанности коз отмечено не было (в охоту приходили даже козочки с живой массой 13,5 и 14,5 кг). Уровни половых гормонов в 6-ти и 18-ти мес. возрасте достоверно не различались.

Таким образом, морфологическая зрелость репродуктивных органов, гормональный фон и наличие половых циклов подтверждают половое созрева-

ние коз в 6-ти мес. возрасте.

3.1.1.2. Определение границ полового сезона, продолжительности и особенностей полового цикла

С целью установления границ полового сезона исследования проводили в течение 7-ми лет на общем поголовье 768 животных. Наличие охоты определяли рефлекторным методом с помощью козлов-пробников. Было установлено, что начало эстрального сезона (периода массового прихождения коз в охоту) варьирует в значительной степени и в разные годы (в условиях юга России) и приходилось на период от конца сентября до второй декады ноября. Окончание полового сезона стабильно приходилось на декабрь. В это время циклиро-вало от 22,8 до 95,8 %% коз. Таким образом, эстральный сезон у коз может продолжаться от 1,5 до 3-х месяцев. Вне эстрального сезона также отмечались единичные случаи прихождения коз в охоту.

Рис. 7. Динамика прихождения коз в охоту (п=498)

Выяснено также, что, в отличие от овец, козы на протяжении периода осеменения приходят в охоту неравномерно (рис. 7). Ежедневно в охоту приходили от 0 до 14% коз из стада, в колебаниях закономерности отмечено не было. Средняя продолжительность полового цикла у молочных коз составила 19,7 сут. (lim 12-28 сут.). При этом у 73,5 % животных цикл длился 18-24 сут. У одной козы за половой сезон регистрируется 3-6 циклов, у одних и тех же животных продолжительность каждого цикла различна.

В следующей серии опытов определяли продолжительность половой охоты и сроки овуляции. Для этого у группы коз (п=10) фиксировали начало и окончание охоты (выборка каждые 1-2 ч.). С начала охоты у животных каждый час получали кровь для определения концентрации гормонов. Через 20 часов после начала охоты и далее каждые два часа до выявления овуляции проводили лапароскопию. При этом наблюдали за развитием преовуляторных фолликулов, и началом формирования желтого тела. В результате установили, что средняя продолжительность охоты составляла 43,5±1,15 ч (lim 38 - 47 ч.). Овуляции

происходили в промежутке 26 - 38 ч. от начала охоты. При этом у 70 % коз фолликулы овулировали между 28-32 ч.

Средняя концентрация прогестерона во время охоты составила 1,5 нмоль/л, эстрадиола - 186 пмоль/л, ЛГ - 45,25 МЕ/л. Преовуляторный пик ЛГ (180,68±3,45 МБ) регистрировался за 2-3 ч. до овуляции, он вызвал кратковременный подъем прогестерона (3,21±0,31 нмоль/л), спровоцировавший овуляции. Незначительные подъемы концентрации эстрадиола (271,07±4,61-304,22±2,56 пмоль/л) отмечались перед пиком ЛГ и сразу после овуляций.

3.1.1.3. Исследование иммунной регуляции репродуктивной функции

У опытной группы коз синхронизировали охоту и осеменили. Определяли гематологические и иммунные показатели, а также концентрацию циркулирующих иммунных комплексов в разные периоды воспроизводительной функции (табл. 1). Выяснили, что иммунная система коз находится в тесной функциональной зависимости от репродуктивной функции организма. Во время половой охоты напряженность естественного иммунитета повышалась на 1014,5%. Еще больше показатели увеличивались в первые часы после осеменения. Безусловно, это связано поступлением спермы в половые пути. Беременность характеризовалась низкой резистентностью. Количество Т-хелперов было снижено, а супрессоров увеличено, что говорит о направленном подавлении иммунитета. За неделю до родов иммунные показатели резко возрастали и во время родов достигали максимума. Иммуно-регуляторный индекс увеличился больше, чем в 2 раза. Концентрация ЦИК снизилась во время охоты, с развитием беременности постепенно росла, перед родами наблюдался резкий скачок показателя, что, вероятно, должно было стимулировать изгнание плода. Выяснили также, что восстановительный послеродовый период устойчиво завершился за десять дней (табл. 2). К этому времени показатели приблизились к уровню анэстрального периода.

Таблица 2. Иммунные показатели послеродового периода у коз (п=30)

Показатели Время после родов

1ч. 4ч. 10ч. 1 сут. 2 сут. 10 сут.

Гемогл., г/л 89,31+2,3 82,42 12,12 81,55+1,72 81,5712,19 82,0712,03 82,25±2,22

Эрит.,х1012/л 11,64±0,39 8,71+0,26 8,3510,13 8,4110,15 8,56+0,11 8,4410,21

Лейк,х10у/л 11,8610,28 11,23+0,35 10,8+0,13 10,7110,24 10,33+0,63 10,6610,45

у-глоб., г/л 19,8311,63 17,1Ю,7 20,9810,73 19,2+1,04 23,92+1,4 19,33+1,33

Т-лимф., % 58,0±1,97 56,0+1,97 50.5+2,03 51,1+1,19 51,4+0.89 51,5+2,24

Т-хелперы,% 51,04±2,45 41,04±2,27 41,5+1,15 30,2+0,78 34,02+1,17 37,5+1,56

Т-супр., % 14,0+1,3 18,0+1,3 16,05+1,17 20,4+1,81 20,0+0,33 19,5+1,37

В-лимф., % 15,45+0,45 12,33+0,22 11,2+0,9 8,1+0,45 8,2+0,12 8,0+0,5

Таблица 1. Иммунные показатели в разные периоды воспроизводительной функции у коз (и=30)

Показатели Анэструе Охота 24 часа после осеменения Беременность Роды

1мес. 2 мес. Змее. 4мес. за неделю до родов

Гемоглобин, г/л Б2,39±2,1б 82.54±3,62 90,57+2,03"» 82.2+3,34 81,9511,59 80,6512,33 78,4511,67 79,011,92 90,11+2,85 а

Эрнтрошпы, х1012/л 8,68+0,16 8,75+0,25 8,79±0,26 8,3910,32 8,37+0,18 5,3010,26 8,14Ю,22 8,1410,12 а* 11,6+0,35

ЦП 1.14 1,13 1.24 1.18 1,17 1.17 1,16 1,16 0.92

Лейкоциты. х10'/з 10,12±0Д7 11,6+0,33 12.48±0,21 11,1810,07 9,76+0,53 10,1710,09 10,4410,15 11,22+0,17 13,010,36

ФА. % 38,7711,62 49.0211,74 56,312,66 29,6311,09 32,1310,78 30.2811.63 & V & 46,510,98 49.4811,48 61,4712.14

ФИ 9,13+0,09 11,3+0,21 14.81+0.15 7,8510,22 8.92+0.34 **** 8,41+0,17 **** 12.210.4 14,0810,25 16.0+0.51

БАСК, % 40.32t2.S5 34,212.28 60,0513,08 28,27+1,16 28.1511.82 35.2+1.95 36.011.21 49.7S12.49 88,013.14

ЛАСК, % 22,4411,16 *** 31.5+2.6 37.1512.24 22,6311,9 23,7412,4 * 25.9211.12 25,7712,13 34.611.61 **** 43,0814,16

*,'-глобулины, г/л 21,04±1,92 31,9812,66 *** 29,4212,01 22,6710,95 24,2610,65 21,7611,34 22,5111.02 24,3711,15 22,87Ю,9

В-лимфоциты, % 14,7±0,5б 14,91±0,77 15,45±0,32 11,2+0,9

Т-лимфоцпты, % 38,12=2,53 38,9б±2,14 40,0±1,97 50,5+2,03

Т-хелперы.% 31.2±2.07 30.5±1.4 31,04±2.27 41,5±1.15

Т-супрессоры.% 2б,7±2,11 ;§.4±1.42 24,0±1.3 16,05±1.17

ПРИ 1,2 1,1 1,3 2,6

ЦПК,ЕД 15,5±0,56 9,1+0,36 16,7=0,50 **** 6,02±0,1Б **** 7,27±0Д4 7,43±0,18 ** ** 8,55±0,13 * 11,6±0,22 **** 5,5±0,26

Примечание: р - уровень достоверности относительно анэструсз * - р<0,05: ** -р<0,01: *** - р<0,005: -р<0,001.

3.1.2. ИССЛЕДОВАНИЕ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ КОЗЛОВ

3.1.2.1. Постнатальное развитие репродуктивной системы козлов

Для козлов-производителей до настоящего времени не определен рекомендуемый возраст начала их использования в воспроизводстве. В крупных хозяйствах, как правило, ждут достижения животными 1,5-2,5 летнего возраста (как это рекомендовано для баранов), фермеры допускают козликов к осеменению, как только они начинают проявлять половую активность.

Для изучения становления репродуктивной функции и определения возраста включения в цикл воспроизводства у козликов (п=12) ежемесячно определяли размеры семенников, исследовали концентрацию тестостерона, наличие половых рефлексов и качество спермопродукции. Было выявлено, что у 1-2-х мес. козликов концентрация тестостерона существенно не отличалась от таковой у их сверстниц (в пределах 1,77±0,12 - 2,04±0,33 нмоль/л). В 3-4 мес. уровень гормона возрос до 9,32±0,38 нмоль/л, и у животных впервые проявилась ориентировочная реакция на самку. В 5-6 мес. реакцию проявляли уже 58 % козликов, при концентрации гормона 22,98±2,02 нмоль/л. Тем не менее, при этом не наблюдалось связи между уровнем тестостерона и реакцией на самку. Это означает, что такое поведение было, скорее, учебно-игровым. Однако уже через месяц все козлики устойчиво реагировали на самку в охоте, также шли на искусственную вагину. При этом на 1 эякуляцию приходилось 4-8 попыток. Подвижность спермиев составляла 8,5±1,2 баллов, концентрация -2,16±0,62 млрд/мл, объем эякулята - 0,5±0,17 мл, половая активность животных - 48 сек., концентрация тестостерона в сыворотке крови - 41,42±3,74 нмоль/л.

Далее, в производственном эксперименте определяли оплодотворяющую способность спермы 6-ти мес. козликов в сравнении со взрослыми животными. Оплодотворяемость коз составила 77%, плодовитость 117,6%. Эти показатели были ниже, чем у взрослых козлов на 9-12%%, тем не менее, оставались в пределах нормы. Сохранность потомства к отбивке существенно не различалась.

Таким образом, на основании проведенных исследований можно утверждать, что козлики зааненской породы к 6-ти месячному возрасту достигают половой зрелости и в этом возрасте уже могут использоваться в воспроизводстве.

3.1.2.2. Исследование сезонных особенностей функционирования репродуктивной системы козлов

Для исследования сезонных особенностей репродуктивной функции у козлов (п=5) два года подряд исследовали гормональный статус и половую активность. Зная, что пульсация гонадотропных гормонов идет с периодичностью около 4 часов (lim =1-5 ч.), чтобы судить об амплитуде колебаний гормональных волн брали кровь в половой сезон (октябрь-ноябрь) - дважды в день с интервалом 4 часа каждые 7 дней; в неполовой сезон (март-июль) в том же режиме каждые 2 недели. Параллельно получали сперму и замораживали ее.

В результате исследований выяснили, что концентрация тестостерона в неполовой сезон уменьшалась в 3,4 раза (с 41,9±4,5-46,0±3,2 до 12,45±0,28-13,45±0,45 нмоль/л). Это происходило в тесной связи и под влиянием снижения уровня гонадотропных гормонов: ЛГ уменьшился в 6-7 раз, ФСГ — в 1,5-2 раза (рис. 8). Соответственно, падало и отношение ЛГ/ФСГ: с 2 - 2,3 до 0,5. Зарубежные ученые (Loses S.H., Turek F.W., 1979; Oxender W. D. e.a., 1977 и др.) считают, что чем больше амплитуда пульсации гонадотропинов, тем выше половой статус самца. В нашем исследовании амплитуда пульсации ЛГ в неполовой сезон сократилась в среднем в 5,5 раз, ФСГ - в 2,8 раз. При этом в неполовой сезон до 40 % козлов отказывались от садок. Половая активность уменьшилась в 2,5 -3 раза, подвижность спермиев - на 15,3-17,6 %%, их концентрация - на 3-5%%, объем спермы - на 47,5-56,8 %%, подвижность после замораживания-оттаивания - на 45-47,6 %% (табл. 3).

ЛГ, МЕ/л

оп1 оп 2

оп 1 оп 2

I I

оп 1---------оп 2

- оп 1 - on J

неполовои

неполоеой

Рис. 8. Концентрация гонадотропных гормонов в крови у козлов, (Свечи, показывают средний уровень гормонов и их min и max измерений)

Таблица 3. Половая активность и качество спермы козлов в половой и неполовой сезоны __

Сезон % козлов, пошедших на вагину ПА, сек Характеристика спермопродукции

подвижность, баллы объем, мл концентрация, млрд/мл подвижность после криоконсерв., баллы

опыт 1 (пэяк.=614)

половой 100 27,2±2,65 8,50+0,16 1,58+0,14 3,51+0,07 4,2 +0,11

неполов. 60 66,6±3,16 7,92+0,41 0,83+0,20 3,33+0.20 2,2+0,17

опыт 2 (п эяк.=360)

половой 100 23,20+3,26 8,50+0,16 1,62+0,07 3,42+0,08 4,2+0,12

неполов. 66 70,0±26,46 7,00+0,29 0,70+0,10 3, 23+0,06 2,3+0,17

Примечание: выделены достоверные показатели относительно полового сезона.

Также была подтверждена тесная коррелятивная зависимость половой активности (г=0,89) и качества спермопродукции (г=0,54-0,87) от концентрации тестостерона (при р<0,05).

Эти результаты подтверждают результаты другого эксперимента, где репродуктивная функция козлов изучалась в зависимости от сезона года (осень, зима, весна, лето).

Следовательно, можно сделать вывод, что спермиогенез у козлов-производителей осуществляется в течение всего года, однако в неполовой сезон наблюдается глубокая, гормонально обусловленная депрессия половой функции.

3.2. РАЗРАБОТКА И УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СПОСОБОВ ВОСПРОИЗВОДСТВА КОЗ

3.2.1. РАЗРАБОТКА СПОСОБОВ НАПРАВЛЕННОГО РЕГУЛИРОВАНИЯ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ КОЗ

Организации круглогодичного цикла воспроизводства коз препятствует ярко выраженная сезонность размножения этих животных. Поэтому большое значение имеет поиск эффективных способов направленного регулирования репродуктивной функции коз.

3.2.1.1. Разработка схемы индукции половой охоты у коз в анэст-ральный сезон

Сущность метода индукции половой охоты в анэстральный сезон состоит в том, что с помощью прогестерона либо его аналогов у животных искусственно моделируют лютеиновую фазу полового цикла. Введение затем гона-дотропных препаратов стимулирует развитие фолликулов в яичниках с последующим проявлением всех феноменов естественного полового цикла. Для это-

го чаще всего используют интравагинальные пессарии, пропитанные ацетатом мегестрола. Однако при индукции охоты в весенне-летние месяцы эффективность ацетата мегестрола составляет лишь 50-70%, а в самые жаркие периоды может быть еще ниже.

Новый фармакологический препарат - стероидный эфир гемисукцината амола или мепрегенолацетат водорастворимый был разработан учеными «ООО "НПК "СКиФФ" и центра "Биоинженерия" РАН и использовался для контрацепции мелких животных. Принимая во внимание высокую гестагенную активность препарата (в 31 раз выше, чем у прогестерона), мы решили применить его для индукции половой охоты.

При разработке схемы проводили серию экспериментов на козах (п=42) в период наиболее глубокой гормональной депрессии (июль-август). Для стимуляции фолликулогенеза использовали «Фоллимаг». Исследования проводили под контролем гормонального фона. Прихождение коз в охоту определяли с помощью козлов-пробников, реакцию яичников - посредством лапароскопии.

В окончательном варианте схема представляла собой интравагинальное введение 15 мг мепрегенолацетата водорастворимого сроком на 12 дней с последующей инъекцией 1000 ед. фоллимага.

Чтобы выяснить эффективность нового препарата в сравнении с ацетатом мегестрола, опытную группу коз (п=10) обрабатывали по разработанной схеме, контрольную (п=10) - традиционным введением пессариев с 30 мг ацетата мегестрола сроком на 14 дней. Обработка коз по новой схеме обеспечивала 90%-ное прихождение коз в охоту и 2,6±0,34 овуляций/гол. (против 70% и 2,1±0,32 в контроле) в течение 48 ч. после удаления пессариев. Охота наблюдалась ярко выраженная, характеризовалась меньшей концентрацией и меньшей амплитудой колебаний гормонов, чем естественная (рис. 9) и была короче естественной - в среднем 31,4±0,08 ч.

—«—прогестерон, нмоль/л —*—зстрадиол, пмоль/л |

Рис. 9. Динамика прогестерона и эстрадиола при индуцированной половой охоте

Если судить по предовуляторному пику ЛГ, произошедшему на 18 ч. охоты, овуляции пришлись в среднем на 20-22 часы.

Таким образом, применение новой схемы индукции половой охоты в анэстральный сезон с использованием мепрегенолацетата водорастворимого повышает эффективность обработки на 20%. При этом разница в дозировке препаратов (15 и 30 мг), при примерно одинаковой их стоимости, обеспечивает 50%-ную экономию денежных средств, затрачиваемых на обработку.

3.2.1.2. Исследование эффективности различных препаратов для синхронизации половой охоты в эстральный сезон

В половой сезон индуцировать охоту можно двумя способами. Первый -имитация лютеиновой фазы прогестагенными препаратами - применяют в любой фазе полового цикла. Второй - лютеолиз желтого тела с помощью проста-гландинов - эффективен только в лютеиновой фазе цикла (поэтому обработку группы животных необходимо проводить дважды, с учетом продолжительности полового цикла). В эксперименте сравнивали эффективность способов.

Коз 1-й опытной группы обрабатывали препаратом «Эстрофан» в дозе 125 мкг д.в./гол., двукратно с интервалом 14 дней. Животным 2-й опытной группы интравагинально вводили пессарии с ацетатом мегестрола в дозе 30 мг/гол. также на 14 дней. Козы с естественной охотой служили контролем.

Результаты даны в табл. 4.

Таблица 4. Результаты синхронизации половой охоты у коз

Показатели 1группа | 2 группа Контроль

1 осеменение

Обработано коз, гол/% 30/100,0 30/100,0 64/100

Проявило охоту синхронно за 3 дня, гол/% 30/100,0 29/97,6

Осеменено, гол/% 30/100,0 29/97,6

Оплодотворилось, гол/% 24/80,0 23/76,7 59/92,2

Получено козлят, гол/% 38/158,3 34/147,8 85/144,1

Затрачено дней на осеменение 3 34

Осеменено, гол/% 2 осеменение

6/100 7/100

Оплодотворилось, гол/% 3/50 3/57,1

Получено козлят, гол/%. 4/133,0 5/166,6

Затрачено дней на осеменение 7

Оплодотворяемость 90,0 86,6 92.2

Плодовитость 155,5 150,0 144,1

Многоплодие 1,6 1,3 1,4

Продолжительность козления 19 44

При аналице таблицы достоверных различий по эффективности синхронизирующего эффекта между препаратами обнаружено не было. Оплодотворя-

емость коз при синхронизации охоты, по сравнению с естественной, в целом снизилась на 2,2-5,6 %. Однако при этом сроки осеменения сократились в 3,4 раза, сроки козления сократились в 2,3 раза.

В следующем эксперименте сравнивали эффективность различных аналогов простагландина Р2а (табл. 5).

Таблица 5, Результаты синхронизации половой охоты у коз различными препаратами простагландина__

Показатели Обработка препаратами (двукратно с интервалом 12 дней в дозе 125 мкг д.в. /гол.)

Эстрофан Клатрапростин Энзапрост Анипрост

Обработано коз, гол 101 60 59 34

Проявило охоту за 3 дня, гол./ % 95/94,0 56/93,3 57/96,6 34/100,0

Окозлилось козоматок, гол./% 74/77,9 43/76,8 47/82,5 34/100

Получено козлят, гол./% 118/159,5 62/144,2 78/165,9 49/144,1

Здесь все препараты показали достаточно высокий синхронизирующий эффект. Однако по суммарному эффекту показателей лучшими были «Ани-прост» и «Энзапрост». Продолжительность козления составила 9 дней.

В следующем эксперименте охоту синхронизировали интравагинально различными прогестагенами (табл. 6).

Таблица 6. Результаты синхронизации половой охоты у коз различными прогестагеиными препаратами ___

Показатели Обработка п зепаратами

ацетат мегестрола, 30 мг/гол., 14 сут. мепрегенолацетат, 15мг/гол., 12 сут.

Обработано коз, гол 30 30

Проявило охоту за 3 дня, гол./ % 28/93,3 30/100

Окозлилось козоматок, гол. 25/89,3 29/96,6

Получено козлят, гол. 38/152,0 44/151,7

«Мепрегенолацетат водорастворимый» в дозе вдвое меньшей проявил синхронизирующий эффект выше на 6,7%. Оплодотворяемость была выше на 3,3 %. Козление продолжалось 7 дней.

Таким образом доказано, что фармакологическая синхронизация позволяет в 2,5-3 раза сократить сроки осеменения и козления. Из прогестагенных препаратов наиболее эффективно применение «Мепрегенолацетата водорастворимого»; из простагландинов - «Анипроста», либо «Энзапроста».

Экономический эффект технологии искусственного осеменения с синхронизацией полового цикла рассчитывали для фермы молочного направления на 400 коз при пастбищно-стойловом содержании и ранневесеннем козлении (табл. 7). Экономия денежных средств слагается за счет исключения из осеме-нительной кампании козлов-пробников, сокращения сроков самой кампании и сокращения сроков козления.

Таблица. 7. Экономическая эффективность технологии искусственного осеменения с синхронизацей охоты у коз_

Затраты Традиционная технология ИО Технология ИО с синхронизацией полового цикла

интравагинальная обр. мепрегенола-цетатом обр. энза-простом обр.ани-простом

Содержание козлов, руб. 11633,67 2585,26 2585,26 2585,26

Горм. обработка козоматок, руб. - 3987,4 6314,00 10224

Осеменение козоматок, руб. 22943,20 3374,00 3374,00 3374,00

Проведение козления, руб. 14845,60 6410,6 6410,6 6410,6

Итого, руб. 49422,47 16357,26 18683,86 22593,26

Экономия, руб. - 33065Д1 30738,61 26829,21

% - 66,9 62,2 543

Примечание: Расчеты даны согласно «Норм проектирования козоводческих объектов 2002 г.», экономических нормативов и действующих цен

Применение искусственного осеменения с синхронизацией полового цикла при указанных условиях позволяет сэкономить 54,3-66,9% денежных средств (или 26,8 - 33 ,6 тыс. руб.).

3.2.1.3. Разработка способа ранней диагностики беременности у коз

Своевременное определение беременности предотвращает экономические потери, связанные с недополучением приплода и молока. Идея способа диагностики беременности заключалась в том, чтобы выбрать маркерный гормон, и, изучив его динамику, составить т.н. «таблицу беременности», в которой будет указан диапазон значений гормона в сыворотке крови у коз в зависимости от срока сукозности. В качестве маркерного гормона мы выбрали прогестерон, у которого разница в концентрации у беременных и небеременных животных была максимальна. Исследовав 650 проб крови, выяснили динамику и определили средние и крайние значения гормона. У оплодотворенных коз динамика прогестерона оставалась сходной с холостыми животными до 15 дня (рис. 10).

1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39

дни после осеменения

Рис. 10. Динамика прогестерона у беременных и небеременных коз

Далее кривые концентрации гормона расходились и, к 18-му дню, различались уже в 18,4 раза. На основании исследований и с учетом крайних значений продолжительности полового цикла была создана «Таблица беременности» (рис. 11). Для диагностики беременности новым способом с 18 дня после осеменения у коз брали кровь (утром до кормления), отстаивали для получения сыворотки. В сыворотке определяли концентрацию прогестерона методом ИФА. Результаты анализа (в нмоль/л) сверяли с таблицей.

90

85

80 ■

75 ....

70 ■

65

6»

55 i

50

45

40

0 2 2 я Я »»1 ГЦ я я че * s м еъ Г) г> П irt Г5 че Г) г-п я о* 5 т? Г*» 5

о.

CJ

н

8-5

= S

и S

rt

С.

дни после осеменения

Рис. II. Таблица беременности

Для этого находили концентрацию гормона на оси ординат; находили время исследования (день после осеменения) на оси абсцисс; от найденных точек проводили перпендикуляры до их пересечения. Если точка пересечения находилась в пределах окрашенной области, животное считали беременным.

Для испытания способа в двух научно-производственных опытах было обследовано 54 и 68 условно беременных коз на 18-22 дни после осеменения. Через 2 мес. делали контрольное ультразвуковое исследование. Окончательно наличие беременности определяли по данным козления. В результате было установлено, что достоверность метода составляет 94,3% (115 верных определений из 122).

По результатам исследований оформлена заявка и получено положительное решение на изобретение «Способ ранней диагностики беременности у коз».

3.2.1.4. Разработка способа повышения сохранности поголовья путем биологической стимуляции беременных коз

Для повышения иммунного статуса коз и их потомства применяли «Биостимулятор из мозговой ткани - БСМ», пат. RU(11)2071335(13)C1. По нашему мнению иммунокоррегирующим воздействием в препарате обладает ряд нейропептидов, и, в большей степени, их метаболитов (С- и N-концевые фрагменты и отдельные аминокислоты). Для образования этих биогенных веществ на мозговую ткань воздействовали по оригинальной схеме двумя путями: замо-

раживанием-оттаиванием и обработкой УФЛ. Биологическую активность препарата исследовали при помощи собственного экспересс-метода, основанного на изменении оптической плотности раствора культуры дрожжей БассИагошу-сеэ еШрзо1(1ез в питательной среде. В экспериментах на белых мышах была доказана иммунологическая и регенеративная активность препарата.

В ряде экспериментов на козах (п=90) была выяснена безвредность БСМ для этих животных, определена оптимальная доза, установлено, что период стимуляции биологических показателей составляет 7 сут., максимально влияние препарата проявляется на 2-3 сутки после введения. На этом основании была разработана схема применения БСМ: 1 раз в месяц с 1 по 4 месяцы беременности в дозе 1мг/кг.

В научно-производственном опыте после осеменения опытную группу коз (п=10) обрабатывали БСМ, контрольная группа (п=30) оставалась интакт-ной. Применение БСМ вызывало функциональную активацию неспецифических факторов иммунитета беременных коз: гематологические показатели возрастали на 7-22%, лизоцимная и бактерицидная активности сыворотки крови -на 6,5-16%, фагоцитарная активность нейтрофилов и интенсивность фагоцитоза - на 5 -12 %. Все роды произошли в срок, без патологий. При этом сохранность потомства опытной группы к отбивке была выше на 14% (табл. 8).

Таблица 8. Плодовитость коз и сохранность потомства к отбивке (4 мес.)

Показатели Опытная группа (п=10) Контрольная группа (п=30)

Окозлилось козоматок, гол./% 10/100 28/93,3

Получено козлят, гол./% 14/140 43/143,3

Сохранность к отбивке гол/% 14/100 37/86

В таблице 9 даны результаты сравнительных исследований иммунного статуса козлят. Высокие показатели естественной резистентности, особенно при стимуляции пирогеналом, говорят о том, что введение БСМ беременным козам формирует у их потомства высокий иммунный потенциал.

Таблица 9. Иммунологические показатели козлят в 4 мес.

Показатели Опытная группа Контрольная группа Разница м/у Р

(п=14) (п=15) группами, %

Гемоглобин, г/л 102,6± 1,24 95,84±1,97 7,1 <0,05

Эритроциты, 10 "/л 10,0±0,29 9,53±0,2 4,9 >0,05

Лейкоциты, 10 '"7л 8,7±0,23 8,16±0,52 6,6 >0,05

ФА, % 66,15±1,61 62,5±2,48 5,8 >0,05

ФИ 6,98±0,52 4,26±0,72 63,8 <0,001

ФА с пирогеналом, % 85,01±3,16 70,8±2,4 20,1 <0,01

ФИ с пирогеналом 8,22±0,53 5,38±0,34 52,8 <0,001

БАСК, % 54,55±1,97 51,37±2,87 6,1 >0,05

Т- лимфоциты, % 38,1±1,23 31,01±0,88 22,9 <0,01

В- лимфоциты, % 27,45±1,08 24,14±0,68 13,7 <0,01

3.2.2. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ КРУГЛОГОДИЧНОЙ ЭКСПЛУАТАЦИИ КОЗЛОВ-ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ

Как правило, козлы-производители используются только 8-10 недель в году (во время их разработки и осеменительной кампании). Содержать же их приходится круглый год, при этом неся немалые затраты. Для более рационального их использования мы предлагаем технологию круглогодичной эксплуатации козлов, которая заключается в получении и замораживании от них спермы между периодами осеменения.

Поскольку интенсивная эксплуатация козлов негативно отражается на их репродуктивной функции, а также учитывая половую сезонность вида, при разработке технологии решали следующие задачи: во-первых, определяли принципиальную возможность накопления замороженной спермы от козлов вне сезона размножения, во-вторых, разрабатывали оптимальный режим эксплуатации, и, в-третьих, усовершенствовали технологию консервации спермы применительно к данному виду животных.

3.2.2.1. Разработка и обоснование режима эксплуатации козлов-производителей при их интенсивном использовании

Чтобы установить возможности репродуктивной системы козлов при их интенсивной эксплуатации были проведены следующие исследования.

До начала эксперимента производителей использовали в осеменительной кампании в течении 2,5 мес. По ее окончании козлов продолжали использовать в настоящем исследовании. В пределах каждой группы животных, на протяжении всего эксперимента (с декабря по июнь) эксплуатировали с нагрузкой: 4 (два сдвоенных) эякулята в неделю (режим 2x2) — группа 1 (п=3), 6 (три сдвоенных) эякулятов (режим 3x2) - группа 2 (п=3), 8 (четыре сдвоенных) эякулятов (режим 4x2) - группа 3 (п=3). В весеннее-летний период, для стимуляции половых рефлексов козлов, у коз-манекенов искусственно индуцировали охоту. Исследовали объем эякулятов, концентрацию и подвижность спермиев. Всего за время эксперимента было исследовано 1226 эякулятов. Учитывалось также качество проявления безусловных половых рефлексов.

Анализ результатов, прежде всего, подтвердил выводы предыдущих исследований о том, что половая активность козлов в большой степени зависит от времени года. Тем не менее, круглогодичное использование производителей возможно при условии их непрерывной эксплуатации.

В результате интенсивной нагрузки более всего страдал объем эякулята. У козлов 1 -й и 2-й групп объем эякулята за весь эксперимент уменьшился на 35 и 37%%, концентрация спермиев - на 11 и 15%%. активность клеток - на 13,2 и 14%%. У козлов с максимальной нагрузкой, средний объем эякулята уменьшился на 73,0 %, при этом, уже после трех месяцев использования, он снизился более чем в половину. Концентрация спермиев уменьшилась при этом на 38%, подвижность клеток - на 23,5 %.

Если в начале опыта от козлов всех групп получали 90-100 %% запланированных эякулятов, то к концу опытного периода этот показатель значительно различался в зависимости от режима нагрузки. При длительном использовании производители не выдерживали нагрузку 8 садок в неделю, количество отказов от садок в марте-июне составило в среднем 53 % (до 71% в июне), тогда как в группах с более умеренной нагрузкой число отказов не превышало 17 %, а в среднем составляло 4-9,5% %.

При длительном использовании, особенно среди козлов 3 группы, учащались случаи торможения рефлексов эрекции и совокупления (до 56% случаев). Часто, даже при наличии эрекции, рефлекс совокупления запаздывал, либо вообще не наступал. Также в большом проценте случаев эякуляция происходила вслед за эрекцией без совокупления, либо без наступления эрекции. За весь период исследования в первой группе было получено 258,4 млрд. подвижных клеток/гол., во второй - 355 млрд., и в третьей - 316 млрд. (табл. 10). Таблица 10. Уровень спермопродукции козлов при различных режимах

эксплуатации (в среднем на 1 гол.)

Показатели Режим Декабрь Январь Февр Март Апр. Май Июнь Всего

К-во садок в месяц 2x2 14,7 16,0 15,3 16,0 14,7 15,3 14,7 106,7

3x2 22,7 24,0 22,0 22,7 20,0 22,7 21,3 155,4

4x2 30,0 30,7 28,0 20,0 17,3 11,3 9,3 151,3

К-во подвижных спермиев в эякуляте, млрд. 2x2 3,62 3,28 2,46 1,99 2,11 2,01 1,46 2,42

3x2 3,54 3,11 2,35 1,74 1,83 1,79 1,47 2,26

4x2 3,88 3,0 1,91 1,16 1,05 0,70 0,50 1,74

К-во подвижных спермиев, полученных за месяц, млрд. 2x2 53,21 52,48 37,64 31,84 31,01 30,75 21,46 258,39

3x2 8036 74,64 51,7 39,5 36,6 40,63 31,31 354,91

4x2 116,4 92,01 53,48 23,2 18,17 7,91 4,65 315,82

Следовательно, наиболее перспективным представляется режим эксплуатации три сдвоенных эякулята в неделю. При этом относительно умеренном

режиме, у козлов сохраняются половые рефлексы, объем и количество спермы уменьшаются незначительно.

Устойчивость спермы к замораживанию при длительной эксплуатации козлов в зависимости от режима их использования была изучена в специальном опыте (табл. 11). Из материалов таблицы видно, что режим использования козлов не отразился на устойчивости спермы к замораживанию, что доказывает целесообразность и технологическую реальность длительной эксплуатации высокоценных козлов-производителей вне сезона размножения. Таблица П. Влияние режима использования козлов на устойчивость спер-миев к замораживанию

Режим использования козлов

2x2

Заморожено эякулятов

305

Из них пригодны после оттаивания

число

246

%

80,7

3x2

416

334

80,3

4x2

296

235

79,4

Таким образом, между осеменительными кампаниями от одного козла-производителя, эксплуатируя его в режиме три сдвоенных эякулята в неделю можно получить 2 660 доз спермы (исходя из расчета 120 млн. подвижных клеток в дозе, с вычетом стандартных 10% доз брака). Если взять среднюю стоимость дозы 100 руб, то дополнительная прибыль на каждого производителя с вычетом затрат на криоконсервацию составит 246 тыс. руб.

Для стимуляции половых рефлексов козлов-производителей в анэстраль-ный период и повышения уровня спермопродукции применяли БСМ (биостимулятор из мозговой ткани). Эксперимент проводили в анэстральный период, в мае. Предварительно в течение недели у животных изучали качество спермопродукции. Затем, козлам опытной группы вводили БСМ в дозе 1 мг/кг двукратно с интервалом в 5 дней. На 3-5-й дни после последней инъекции препарата получали сперму и исследовали объем и качество эякулята. По результатам исследования применение БСМ увеличило объем эякулята на 52,6%, концентрацию клеток - на 20,18%, их подвижность - на 10,3%. Подвижность спермиев после замораживания-оттаивания при этом повысилась на 66,8%.

3.2.2.2. Конструирование синтетических сред для краткосрочного хранения и криоконсервации спермы козлов

Конструирование суеды для краткосрочного хранения спермы козлов

Как показывает практика, потенциальные возможности метода искусственного осеменения в козоводстве реализуются не в полной мере - в первую очередь, из-за низкой оплодотворяющей способности сохраняемой спермы, что ведет к невысокой оплодотворяемости маток. В настоящее время, при разнооб-

разии разбавителей для спермы быков и баранов, имеются единичные рецепты сред для спермы козлов. Известны, например, желточно-трис-фруктозный разбавитель (Австралия), безжелточный разбавитель OVIX CELL (Франция). На практике же, при работе со спермой козлов, используют среды разработанные для баранов: глюкозо-цитратно-желточную, лактозную, фосфатную. В связи с этим возникла необходимость дальнейших научных поисков, направленных, прежде всего, на выяснение причин, снижающих оплодотворяющую способность спермиев при их сохранении, и разработку биологически полноценной защитной среды для разбавления спермы козлов.

На основании ряда экспериментов желточно-трис-фруктозный разбавитель был нами модифицирован в лимонно-трис-глюкозную среду для краткосрочного хранения спермы (TRIS) следующего состава: глюкоза кристаллическая - 0,667г; трис-(гидроксиметил)-аминометан - 4,039г; лимонная кислота 1-вод. - 2,316г; желток куриного яйца - 2,5 мл; вода дистиллированная - до 100 мл.

В лабораторном эксперименте сравнивали переживаемость гамет, разбавленных вышеперечисленными разбавителями (контроль) и экспериментальной средой. Сперму сохраняли при температуре тающего льда (+4°С), каждый час проверяли ее активность. Через 12 часов сохранения подвижность клеток в контрольных разбавителях существенно не различалась, и, в среднем, количество спермиев с прямолинейным поступательным движением уменьшилось на 19-21 %%, в среде TRIS, снижение составило лишь 4 %. Необходимую для осеменения подвижность (4 балла и выше) сперма, разбавленная средами лак-тозной и OVIX CELL сохраняла в течение 24-28-ми ч. хранения, цитратной - в течение 30-ти ч.; фосфатной - 34-х ч., желточно-трис-фруктозным разбавителем - 36-ти ч. ДЛЯля сперма, разбавленной средой TRIS этот срок составил 42 ч. Полная гибель клеток в лактозной среде наступила после 44-х ч, в среде OVIX CELL - после 46 ч., в цитратной среде — 48-ми ч., фосфатной - 60 ч., в австралийском разбавителе - 64 ч. В среде TRIS, все спермии утратили подвижность после 78 ч.

Следующий эксперимент был выполнен в рамках программы «БелРо-сТрансген-2. Учитывая предстоящую транспортировку охлажденной спермы от двух трансгенных (по гену LTFH) козлов ЛАК1 и ЛАК2 из Беларуси в Московскую область для осеменения поголовья коз, задача заключалась в сохранении спермы именно этих животных. Половину эякулятов разбавляли средой TRIS, половину - разбавителем OVIX CELL. Через 20 ч. хранения сперма, разбавленная OVIX CELL, потеряла подвижность, допустимую для осеменения. При

микроанализе спермиев отмечалось уплощение головки, появление вакуоли на хвостиках, лизис протоплазмы, множественные фрагменты клеток, агглютина-ты. Для спермы, разбавленной средой TRIS, это ограничение наступило на 16 ч. позже. На основании исследования решено было транспортировать сперму, разбавленную средой TRIS. Охлажденную сперму перевозили сначала железнодорожным, а затем автомобильным транспортом в КХ «Атлант» Московской обл. Козам (п=102) синхронизировали охоту «Эстрофаном», через 48 ч. провели фронтальное осеменение. С момента взятия спермы до 1-го осеменения прошло 14 ч., до 2-го -24 ч. По результатам козления оплодотворяющая способность спермы, сохраняемой в среде TRIS составила в среднем 70,0%; плодовитость коз - 134,7%.

Таким образом, по итогам лабораторных и научно-производственных исследований установлено, что сперма козла сохраняет высокую биологическую полноценность в среде TRIS. Это позволяет рекомендовать метод осеменения охлажденной спермой при искусственном осеменении коз на товарных фермах, расположенных на относительно небольших расстояниях от пункта получения семени.

Конструирование среды для криоконсервации спермы козлов.

При конструировании среды для криоконсервации за основу взяли среду TRIS. Дополнительно в нее были введены янтарная кислота и альгинат натрия.

Одной из причин снижения оплодотворяющей способности спермиев после криоконсервации - дефростации является повреждение наружной мембраны головки и разрушение акросомы. Известно, что альгинат натрия в слабоконцентрированных растворах образует агрегаты макромолекул разных размеров (от 20 до 370 нм). Идея заключалась в том, что макромолекулы альгината натрия, обладая полиэлектролитным эффектом, будут «заклеивать» повреждения в мембране клеток, предупреждая «вытекание» гиалуронидазы и других ферментов, а также предотвращать образование конгломератов из поврежденных спермиев, образующихся в результате нарушения действия сил электростатического отталкивания. Вторая функция альгината натрия связана с его способностью увеличивать вязкость раствора - как правило, сперма, разведенная средой, имеет вязкость меньше, чем нативная и, при интрацервикальном осеменении, часть ее вытекает из шейки матки во влагалище.

Цитопротекторное воздействие янтарной кислоты обусловлено ее способностью повышать ёмкость буферных систем, антигипоксическим действием, обусловленным ее влиянием на транспорт медиаторных аминокислот и ан-тиоксидантным действием. Восстановление дыхательной функции спермиев в

присутствии янтарной кислоты идет двумя путями: восстановлением НАД-зависимого участка цикла Кребса (Ленинджер А., 1991) или стимуляцией сук-цинатоксидазного окисления или окисления янтарной кислоты (Виноградов А. Д., 1979; Кондрашова М.Н., 1991)., замещающего, прерванные вследствие процессов кристаллизации и рекристаллизации, участки цикла окислительного фосфорилирования.

При разработке среды разбавленную сперму эквилибрировали при температуре +4°С в течение 3 ч., затем замораживали в жидком азоте при -197°С в гранулах. Всего было исследовано 611 опытных образцов. В законченном варианте рецепт «Среды для криоконсервации спермы козлов» имел следующее соотношение компонентов на 100 мл: глюкоза кристаллическая -0,600-0,667 г; трис-(гидроксиметил)-аминометан - 3,635-4,039 г; лимонная кислота 1-водная -1,887-2,084 г; янтарная кислота - 0,197-0,232 г; альгинат натрия- 0,020-0,040 г; глицерин - 5,0-5,5 мл; желток куриный - 2,5-3,0 мл.

При криоконсервации спермы в экспериментальной среде подвижность клеток сразу после замораживания-оттаивания составляла в среднем 5,6 баллов - это на 18-28 %% больше, чем в контрольных средах (ГЦЖ, молочной, жел-точно-трис-фруктозной). Спермиев с повреждениями акросомы было на 1927% меньше, чем в контроле.

Биологическую полноценность разработанной среды определяли по оплодотворяющей способности замороженной-оттаянной спермы в научно-производственном эксперименте (табл. 12).

Разбавитель Осеменено коз, гол. Из них окозли-лось, гол. Оплодотворяемость, % Получено козлят, гол. Плодовитость,%

ГЦЖ 25 11 44,0 14 127,3

Молочный 25 8 32,0 10 125,0

Желточно-трис-фруктозный 25 12 48,0 16 133,3

Экспериментальная среда 25 15 56,0 21 140,0

Оплодотворяемость коз при осеменении криоконсервированной спермой, разбавленной экспериментальной средой была выше на 12-24%, чем при осеменении спермой, разбавленной контрольными средами, плодовитость - на 6,7-15,0%.

По результатам исследований получен патент РФ на изобретение «Среда для криоконсервации спермы козлов» № 2396344.

3.2.2.3. Сравнительная характеристика различных способов криоконсервации спермы козла

Замораживание спермы можно осуществлять двумя способами: в гранулах и в пайетах. В настоящее время все большую популярность приобретает метод замораживания спермы в пайетах. Однако в отличие от гранулирования спермы замораживание в пайетах требует наличия комплекта сложного стационарного оборудования, включающего, кроме программируемого замораживате-ля, автоматические системы для маркировки, заполнения и запаивания соломинок.

Задачей эксперимента было сравнительное исследование качества спермы и себестоимости спермодозы при криоконсервации в гранулах и пайетах. Для этого отбирали сперму с подвижностью 8-8,5 баллов и концентрацией не менее 2,5 млрд./мл, разбавляли ее средой для криоконсервации спермы козлов и эквилибрировали при +4°С 4 ч. Далее часть спермы замораживали в гранулах, часть - в пайетах. Для криоконсервации в гранулах сперму раскапывали в лунки фторопластовой пластины по 0,2-0,4 мл и оставляли в парах азота (при -80°С) на 1-2 мин. до изменения цвета гранул (скорость охлаждения = 85°С/мин.), Затем пластину опускали в азот и выдерживали там до прекращения кипения (скорость охлаждения = 120°С/мин.). Обработку второй части эякуля-тов проводили на автоматизированной линии для криоконсервации «IMV Technologies». После оценки качества разбавленную сперму расфасовывали в пайеты по 0,25 мл и замораживали при следующем режиме: от +4 до -5°С со скоростью 4 °С/мин, от -5 до -110 "С со скоростью 25°С/мин, от -110 до -140 °С со скоростью 35 °С/мин. Оттаивание спермы, замороженной в гранулах, проводили в оттаивателе для гранул ОГСБ-2М, в пайетах - в отгаивателе CITO 1MV. Таблица 13. Качество спермы козла, замороженной в пайетах и гранулах

Показатели Метод замораживания

в гранулах (п=136) в пайетах (п-152)

Подвижность клеток, баллы, сразу после оттаивания/ через 2ч., % 4,64±0,13/4,23 ±0,16 5,17±0,18/4,72 ±0,14

Клетки без повреждений, %, сразу после оттаивания/ через 2ч. 18,13±0,18/14,19±0,25 22,27±0,13 /20,68±0,65

С повреждениями, %, сразу после оттаивания/ через 2ч. 81,67± 1,01/86,74± 1,40 77,72±1,21 /79,32±2,07

Характер и степень повреждений, %, сразу после оттаивания/через 2ч.:

набухание акросомы 45,13± 1,18/47,55± 1,02 44,74=Ы,55/43,01±1,57

отслоение акросомы 13,33±0,08/14,17±0,45 12,13±0,24 /14,29±0,98

потеря акросомы 12,63±0,43/13,67±0,25 12,33±0,27 /12,13±0,35

потеря головки 10,58±0,11/11,35±0,06 8,53±0,10/9,70±0,45

Примечание: выделены значения с достоверной разницей между группами

Из таблицы 13 очевидно преимущество метода замораживания спермы в пайетах: хотя количество выживших спермиев в обоих случаях различалось незначительно, клеток с ненарушенной акросомой в пайетах было значительно больше (на 41,4%). Лучшую сохранность спермиев в пайетах можно объяснить иным режимом замораживания, а также, отчасти, геометрической формой пай-ет, которая обеспечивает равномерное нагревание при оттаивании.

Для выяснения оплодотворяющей способности спермы, замороженной в гранулах и пайетах, осеменили две группы коз. Результаты опыта показали незначительное преимущество пайетирования спермодоз (табл. 14).

Таблица 14. Результаты осеменения коз криоконсервированной спермой

Показатели Метод замораживания

в гранулах в пайетах

Осеменено коз, гол 28 26

Перегуляло, гол. 14 11

Окозлилосъ, гол. 13 14

Получено козлят, гол. 20 22

Предполагаемая эмбриональная смертность 2,8 2,6

Оплодотворяемость. % 50,0 53,8

Плодовитость,% 153,8 157,1

На основании экономических расчетов, где принимали во внимание расход жидкого азота, электроэнергии и амортизацию оборудования, стоимость пайетированной спермодозы превышала стоимость гранулы в 13,2 раза (7,55 против 0,57 руб.).

Таким образом, можно констатировать, что технологические параметры криоконсервации спермы козлов, как в гранулах, так и в пайетах, обеспечивают высокую сохранность ее биологической полноценности. К преимуществам замораживания в пайетах можно отнести некоторое улучшение выживаемости и оплодотворяющей способности спермы, высокую технологичность и культуру обработки, маркировку каждой дозы, возможность международной сертификации продукта. Преимущества замораживания в гранулах: простота, универсальность, мобильность, возможность проводить замораживание непосредственно в месте ее получения (на кошаре или ферме) и низкая себестоимость спермодозы. Эти факторы следует учитывать при выборе метода криоконсервации для получения максимального эффекта.

3.2.3. СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ

3.2.3.1. Разработка схем индукции полиовуляции у коз — доноров

Ключевым моментом метода трансплантации эмбрионов является индукция полиовуляции. До настоящего времени проблема получения зигот продолжает оставаться важнейшей в комплексе мероприятий по трансплантации

эмбрионов (ВаИаББагге Н., 2004). Несмотря на большое количество работ, выполненных в различных странах, основными затруднениями, с которыми сталкиваются исследователи, являются непредсказуемость результатов обработки животных и вариабельность эффекта полиовуляции.

В связи с этим собственные исследования в этой области были направлены на разработку схемы получения одновозрастных эмбрионов от коз-доноров.

При этом для имитации лютеиновой фазы использовали интравагиналь-ные пессарии с мегестролацетатом, либо ушные импланты «Крестар» (д.в. нор-гестамет). Для её прерывания применяли «Фоллигон» (д.в. гонадотропин сыворотки жеребых кобыл). Для стимуляции полиовуляции - либо «ФСГ-супер» (д.в. свиной ФСГ, Россия), либо «Оваген» (д.в. овечий питуитарный ФСГ, Ин-тервет, Нидерланды). Синхронность овулирования фолликулов обеспечивали с помощью «Хорулона» (д.в. хорионический гонадотропин). Эксперименты проводили под контролем гормональных исследований. Наличие и качество полиовуляции определяли по результатам лапароскопии либо лапаротомии и вымывания клеток. К пригодным для трансплантации относили оплодотворенные ооциты, 2 и 4-х бластомерные эмбрионы. О качестве зигот судили на основании общепринятой классификации с собственными модификациями, адаптированной для оценки эмбрионов коз.

На первом этапе исследований проводили сравнение эффективности прогестагенов. Для этого козам двух опытных групп (п=10) вводили интраваги-нальные пессарии с мегестролацетатом (в дозе 30 мг/гол.) и ушные импланты «Крестар» (1,5 мг норгестамета) на 12 дней. Установлено однозначное преимущество препарата «Крестар»: все 100% животных пришли в охоту в течение 24 ч. (против 60% животных в 1й группе).

Во второй серии экспериментов определяли оптимальное время аппликации импланта «Крестар»: 8, 9, 10 и 12 дней. Выяснено, что продолжительность введения импланта не имела значения - козы в равной степени синхронно приходили в охоту, и, при соответствующей дальнейшей обработке, эффективность полиовуляции у них достоверно не различалась. Данные лапароскопического исследования яичников подтверждаются гормональными исследованиями крови (рис. 12). Из графика видно, что диапазон концентраций прогестерона у коз, находящихся на различных стадиях полового цикла, начинал выравниваться уже к 5 дню обработки и, к 7-8 дням, синхронизация половых циклов наблюдалась во всех сравниваемых группах. Следовательно, время аппликации можно

уменьшить с 12 до 8 дней, что дает возможность сократить срок всей обработки на 4 дня (или на 33,3%).

Далее исследования шли двумя параллельными путями - разрабатывались оптимальные схемы с использованием в качестве стимуляторов фолликулоге-неза препаратов «ФСГ-супер» либо «Оваген».

№ козы длительность

введения -■— 7372 на 8 дн. -♦—7865 на 8дн. -•— 7867 на 9 дн. —|— 7886 на 9 дн. —— 7955 на 10 дн.

-7960 на 10 дн.

-л-7992 на 12 дн. 7983 на 12 дн.

100

X ЯП ■

а

Ф 80 ■

Ф 70 ■

о Q. 60 •

К § 50 ■

S а- £ 40 ■

о. 30 -

Ё ® 20 ■

=г 10 ■

¡с 0

о

дни обработки

Рис. 12. Динамика концентрации прогестерона при синхронизации половых циклов у коз имплантами «Крестар»

При использовании «ФСГ-супер» препарат вводили козам (п=18) подкожно, дробно, по схеме: 4+4, 3+3, 3+3, 2+2 АЕ, в течение 4-х дней с интервалом 12 ч, в первой группе в общей дозе 24 АЕ/гол., во второй группе дозу увеличили вдвое. «Фоллигона» вводили 500 ед, «Хорулона» - 150 ед.

Лучшие результаты были при введении 48 АЕ ФСГ. В этой группе множественной овуляцией (12,6±1,46 желтых тел) отреагировало 100% коз при выходе пригодных эмбрионов - 62%. (против 80%-ной реакции, 6,42±1,12 ж. т. и 65,6%-ном выходе эмбрионов при введении ФСГ общей дозе 24 АЕ). Результаты достаточно высокие, однако применение столь большой дозы экзогенного ФСГ может привести к нарушению половой цикличности и оплодотворяемости при последующем использовании животного.

При разработке схемы с препаратом «Оваген» также варьировали дозы препарата, время и кратность введения. Для этого была проведена серия экспериментов на общем количестве животных - 67 гол.

Выяснили, что схема дробного введения препарата (равными дозами либо по убывающей) не имела значения: при 100% реакции полиовуляция составила 10,67-12,17 ж.т./гол. Однако, в обоих случаях высокий процент неоплодотво-ренных клеток и низкий выход полноценных эмбрионов (44,4 и 42,6%%) гово-

рили о несинхронности овуляций. На яичниках были отмечены петехии, желтые тела разного возраста, созревшие, но не лопнувшие фолликулы. В связи с низким уровнем ЛГ в сыворотке крови доза «Хорулона» была увеличена до 500 ед.; время введения препарата было изменено с момента начала охоты до 3 ч. после ее начала; для скорейшей одновременной подачи к клеткам-мишеням всей введенной дозы, изменили способ введения с внутримышечного на внутривенный. Кроме того, так как в 90% случаев охота у доноров наступала в промежутке от 12 до 20 ч. от извлечения импланта и к моменту последней инъекции «Овагена» животным уже был введен «Хорулон», и, следовательно, необходимость последней инъекции «Овагена» отпадала, то однократную дозу препарата увеличили с 0,8 до 1,0 мл, а количество введений сократили до 7-ми. Также, для одновременного оплодотворения вышедших в яйцевод ооцитов, вместо 3-4х кратного осеменения доноров начиная с момента их прихождения в охоту, было введено 2х кратное осеменение: через 6 и 10 ч. после начала охоты (рис. 13). _________________

^Фбдаигон», ч.-Д<> Хорулон», ч/з 3 ч. по-

■ Ичп.шиш «Крестар» на 8 сут. сле начала охоты

| «оваге»>,-7.ш равными ао-»«и по |ч/з каждые 12 ч_ /

Рис. 13. Схема индукции полиовуляции у коз

Обработка животных по данной схеме в четырехкратной повторности, как в осеннее-зимний, так и в весенний сезоны) дала достаточно однородные результаты. Реакция полиовуляции составила 15,52-17,5 ж.т./гол., при этом процент клеток, пригодных для трансплантации, был очень высок: 74,3-90,4%% от всех извлеченных. Продолжительность охоты в среднем составляла 22-28 ч., время от извлечения импланта до начала охоты - 14,5-19 ч.

Во время обработки уровень половых и гонадотропных гормонов был ниже, чем при естественном половом цикле. Особенно это выражено в отношении ФСГ, что несколько не согласовывается с высокой степенью фолликулоге-неза у этих животных. Однако в целом, динамика гормонов изменялась в соответствии с последовательностью введения экзогенных препаратов и соответствовала изменениям в организме, связанным с индукцией искусственного астрального цикла.

В начале раздела мы писали о вариабельности эффекта полиовуляции. Хотя мы и добились однородных результатов, но также столкнулись со случаем гиперстимуляции яичников у одной козы-донора (90 ж.т., 46 преовулятор-

ных фолликулов). Все 40 полученных ооцитов были недоразвиты. Гормональные исследования показали нормальную динамику прогестерона, но значи-

- донор с гиперстимуляцией Рис. 14. Динамика концентрации гормонов при индукции полиовуляции у коз

Также было обнаружено, что концентрация тестостерона в крови животного в начале обработки превышала средний уровень в 4 раза, еще - существенно- возросла при введении фолликулостимуляторов и к концу половой охоты у была выше среднего уровня уже в 12,5 раз. Вероятно, что анормальный рост концентрации эстрадиола и гиперстимуляция яичников произошли в связи с повышенным содержанием тестостерона, который, как известно, ароматизируется в эстрогены в гранулезных клетках яичников, а также играет определенную роль в регрессии фолликулов. Возможно, что введение экзогенных гонадо-тропинов на фоне высокого тестостерона спровоцировали его дальнейшее повышение и вызвали, в результате, гормональный сбой.

3.2.3.2. Разработка режима получения оплодотворенных ооцитов на стадии двух пронуклеусов для микрохирургических инъекций

Одной из важных проблем при получении эмбрионов для эмбриотехно-логических работ является сложность определения времени извлечения зигот из яйцеводов доноров. При создании животных с заданными свойствами, как правило, используется метод микроинъецирования генной конструкции в про-нуклеус ооцита. Следовательно, важнейшим элементом в технологии трансге-

неза является получение оплодотворенных ооцитов на стадии двух пронукле-усов (стадия, по сообщениям различньм авторов, длится 1-6 ч.).

С целью разработки режима получения оплодотворенных ооцитов означенной стадии определяли достоверный критерий для расчета времени извлечения клеток. При этом учитывали такие параметры, как продолжительность времени от извлечения импланта до операции, время от начала охоты до операции и время от конца охоты до операции. Всего было проведено 38 операций.

Было выяснено, что для расчета времени извлечения гамет, ведущее значение имеет продолжительность охоты. При анализе наиболее результативных вариантов были определены оптимальные сроки лапаротомии: для животных с продолжительностью охоты 15-22 ч. это время составило 40- 44 ч. от начала охоты до операции; для животных с продолжительностью охоты 23-36 ч. - 4854 ч. от начала охоты до операции. Из полученных от 10-ти прооперированных таким образом животных 120-ти клеток, на стадии двух пронуклеусов был 91 % (табл. 15).

Таблица 15. Результаты операций по извлечению оплодотворенных ооци-

Параметры № животного

7867 7944 7881 7865 7870 7959 7858 7371 7854 7358

Продолжит.охоты.ч 26 18 25 18 31 28 28 16 36 28

Вымыто клеток, всего 10 7 3 17 23 8 13 11 21 7

Из них на стадии двух пронуклеусов (клеток/%) 10/ 100 7/ 100 2/ 66,7 17/ 100 23/ 100 4/ 50 12/ 92,3 11/ 100 21/ 100 7/ 100

Время от извлеч. импланта до операции 65 60 64 62 68 66 69 58 66 70

Время от начала охоты до операции 47 40 43 44 53 54 51 43 62 54

Время от конца охоты до операции 21 22 21 26 22 14 23 24 26 26

При изучении особенностей ранних зигот у коз было отмечено, что ооци-ты и ранние эмбрионы у коз покрыты обильным слоем внутриклеточного жира. Для объективной оценки и работы с клетками необходимо их центрифугирование. Мужской и женский пронуклеусы в оплодотворенном ооците козы одного размера, ядрышки при световой микроскопии, как правило, не различимы.

3.2.3.3. Определение степени имплантации микроинъецированных эмбрионов и возможности ее повышения

Эксперименты по трансплантации эмбрионов, подвергшихся манипуляциям in vitro и инъекции чужеродного ДНК были проведены во время полового сезона, сразу после него и в анэстральный период. Получали ооциты на стадии

пронуклеусов, микроинъецировали генной конструкцией и культивировали в среде К80М до стадии 2-4 бластомер. В половой сезон реципиентов готовили введением им имплантов «Крестар» одновременно с донорами, также брали коз со спонтанной охотой. В неполовой сезон в день удаления импланта реципиентам дополнительно инъецировали 500 ед. «Фоллимага». Трансплантацию осуществляли методом лапаротомии. Эмбрионы пересаживали через воронку яйцевода на глубину 2-3 см.

Таблица 16. Приживляемость эмбрионов у коз

Показатели Операции 25.11.10 Операции 21-23.12.10 Операции 23-25.03.11

Прооперировано реципиентов 9 22 9

Пересажено клеток 18 51 24

Забеременело, гол/% 4/44,4 9/40,1 3/33,3

Эмбриональный лизис, гол/% 1/11,1 4/18,2 1/11,1

Абортировало, гол/% 1/11,1 - .

Гормональные нарушения (ложная беременность), гол/% 1/5,5

Беременности, закончившиеся родами, гол/% 21222 5/22,7 2/22,2

Родилось козлят, гол 5 7 2

Приживляемость клеток, % 27,7 13,7 8,3

Плодовитость, % 55,6 31,2 22,2

Приживляемость клеток была максимальной в половой сезон и составила 27%, плодовитость реципиентов - 55,6%. В анэстральный период приживляемость снижалась в 3 раза, плодовитость — в 2,5 раза (табл. 16).

В следующем эксперименте 6-ти реципиентам через сутки после операции и, повторно, через 6 сут. инъецировали «Хорулон» по 500 ед./гол. Предполагали, что хорионгонадотропин улучшит способность эндометрия к имплантированию. Остальные 9 реципиентов служили контролем. По результатам коз-ления постоперационная обработка увеличила приживляемость эмбрионов на 10,8%, «оплодотворяемость» коз (отношение родивших реципиентов к оперированным)- на 16,7%, плодовитость - 33,4%.

3.2.3.4. Создание среды для культивирования эмбрионов коз in vitro

Низкая приживляемость эмбрионов является одной из важнейших проблем биотехнологических исследований и эмбриотехнологических работ по клонированию и получению трансгенных животных. Одной из причин может быть нарушение развития эмбрионов и их неспособность к имплантации в результате манипуляций in vitro. Очевидно, что существующие методы для культивирования ооцитов и эмбрионов оказывают неблагоприятное воздействие на их развитие. В связи с этим одной из задач наших исследований была разработ-

ка биологически полноценной видоспецифичной среды для культивирования ооцитов и эмбрионов коз. При этом, в качестве базовой, мы выбрали среду DMEM. К этой среде в качестве белкового компонента добавляли инактивиро-ванную сыворотку крови 6-7 мес. козочек. В этом возрасте (стадии полового созревания) у животных максимально повышается уровень инсулиноподобных факторов роста (IGF1,2) (LeRoith D., Roberts Ch.T.; 2003, Tietz, 2006), которые в естественном комплексе с белками стимулируют в эмбрионе способность к имплантации. Глюкоза в среде также позволяет максимально приблизиться к состоянию in vivo, когда ранний эмбрион окружен богатой глюкозой средой.

При разработке среды была проведена серия экспериментов. Эмбрионы получали оперативным путем, культивировали в экспериментальных средах при 39°С и концентрации С02 -5%. Через 72 ч. подсчитывали число бластоцист, а через 96 ч. - число бластоцист, освободившихся от блестящей оболочки. В окончательном варианте новая среда содержала компоненты в соотношении: инактивированная сыворотка крови 6 мес. коз -15-20 мл, глюкоза -0,4-0,45 г, стрептомицин -0,004-0,005 мг, пенициллин - 400-500 ЕД, DMEM - до 100 мл.

При культивировании эмбрионов в экспериментальной среде процент развития эмбрионов был на 23,3%-33,3% выше, чем в известных (среда DMEM без белка, DMEM с 20% FCS и среда Хэма F-10). Эмбрионы, культивируемые в данной среде, обладали способностью прикрепляться к субстрату, формировать выраженную внутреннюю клеточную массу и давать разрастание клеток трофэктодермы. По результатам исследований получен патент РФ на изобретение «Среда для культивирования доимплантационных эмбрионов коз IN VITRO» № 2396344.

ВЫВОДЫ

1. Рост и развитие репродуктивных органов у молочных коз в постнаталь-ном онтогенезе происходит с различной скоростью, в зависимости от степени их развития к моменту рождения; половая зрелость наступает в 6 мес. возрасте: морфологическое и гистологическое строение репродуктивных органов соответствует взрослым животным, концентрации прогестерона и эстрадиола в крови составляют 4,15, нмоль/л и 134,78 пмоль/л. соответственно, у 87,5 % козочек появляются полноценные половые циклы.

2. Начало эстрального сезона у молочных коз в условиях юга России приходится на период от конца сентября до второй декады ноября, окончание - на декабрь. В течение сезона козы приходят в охоту неравномерно, от 0 до 14% коз из стада в сутки. Вне эстрального сезона возможно прихождение в охоту до 1% коз.

3. Средняя продолжительность полового цикла у молочных коз составляет 19,7 сут. (lim = 12-28 сут.), у 73,5% животных цикл длится от 18 до 24 сут. За половой сезон регистрируется 3-6 циклов, при этом у одних и тех же животных продолжительность каждого цикла различна.

4. Средняя продолжительность половой охоты у молочных коз составляет 43,5 ч. (lim 38 - 47 ч.). Уровни прогестерона и эстрадиола в крови во время охоты составляют 1,5 нмоль/л, и 186 пмоль/л соответственно. Овуляции происходят в промежутке 26 - 38 ч. от начала охоты, при этом у 70 % коз фолликулы овулируют между 28-32 ч. Преовуляторный пик ЛГ (180,68 МЕ) регистрируется за 2-3 ч. до овуляции, ему предшествует первый подъем эстрадиола (304,22 пмоль/л), вторичный и третичный подъемы гормона (271,07-291,33 пмоль/л) отмечаются сразу после овуляций.

5. Иммунная система коз находится в тесной функциональной зависимости от репродуктивной функции организма. Во время половой охоты напряженность естественного иммунитета повышается на 10-14,5%, количество у-глобулинов возрастает на 52,0 %; беременность характеризуется низкими показателями естественной резистентности и низким иммунорегуляторным индексом; за неделю до родов показатели клеточного и гуморального иммунитета возрастают и во время родов достигают максимума. Концентрация циркулирующих иммунных комплексов во время охоты уменьшается на 58,7%, постепенно возрастает с развитием беременности, перед родами наблюдается резкий подъем показателя (на 36%) и еще более резкое снижение (47%) во время родов. Восстановительный послеродовый период для иммунной системы матери завершается за десять дней.

6. Козлы-производители могут использоваться в воспроизводстве начиная с 6-7 мес. возраста, при этом у них концентрация тестостерона в крови в среднем составляет 41,7 нмоль/л, половая активность - 48 сек., объем эякулята -0,5 мл, подвижность спермиев - 8,5 баллов, концентрация клеток- 2,16 млрд/мл, оплодотворяющая способность спермы - 77,3%.

7. В анэстральный сезон у козлов отмечается глубокая гормонально обусловленная депрессия половой функции: концентрация тестостерона снижается в 3,4 раза, ФСГ — в 1,5-2 раза, ЛГ - в 6-7 раз, амплитуда пульсации гонадотроп-ных гормонов уменьшается в 5,5-2,8 раз, что обуславливает снижения половой активности в 2,5 -3 раза, уменьшение объема спермы на 47,5-56,8 %% и ухудшения ее качественных показателей (подвижность спермиев снижается на 15,317,6 %%, их концентрация — 3-5 %%, устойчивость спермы к криоконсервации на 45-47,6%%).

8. Разработанная схема стимуляции половой охоты у коз в анэстральный сезон с использованием нового препарата «Мепрегенолацет водорастворимый» вызывает 90-100%-ное синхронное прихождение коз в охоту, при уровне овуляции 2,5 фолл./гол.

9. Эффективность синхронизации половой охоты у коз препаратами «Ме-прегенолацетат водорастворимый», «Анипрост», «Энзапрост» по предложенным схемам составляет 96,6-100%% при оплодотворяемости коз 78-100%% и их плодовитости 144-166%%; при этом сроки осеменения и козления сокращаются в 2,5-3 раза, затраты на осеменение уменьшаются на 54,3-66,9%%.

10. Новый способ ранней диагностики беременности у коз позволяет установить наличие беременности с 18-го дня после осеменения с достоверностью 94,3%. |

11. Новый способ повышения иммунного статуса беременных коз и их потомства «Биостимулятором из мозговой ткани» (БСМ), повышает гематологические показатели коз на 7-22%%, фагоцитарную активность нейтрофилов и интенсивность фагоцитоза на 5 -12 %%, лизоцимную и бактерицидную активности сыворотки крови на 6,5-16%, нормализует содержание у-глобулинов, формирует у потомства высокий иммунный потенциал и увеличивает сохранность молодняка на 14%.

12. Доказана возможность длительного непрерывного получения спермы от козлов при соблюдении режима половой нагрузки: три сдвоенных эякулята в неделю. При этом режиме между периодами осеменения от одного козла можно заготовить свыше 2500 доз криоконсервированнс|й спермы.

13. Применение БСМ козлам-производителям! в неполовой сезон увеличивает качество спермопродукции и ее устойчивость к криоконсервации: объем эякулята возрастает на 46,7-52,6%%, концентрация спермиев - на 20,1-23,8%%, подвижность нативной спермы - на 10,3-16,7%%, подвижность клеток после замораживания-оттаивания - на 63,0-66,8%%.

14. Использование разработанной среды для консервации спермы при температуре тающего льда обеспечивает выживаемость спермиев в течение до 72 ч., при сохранении подвижности свыше 4 баллов в течение 36-42 ч. Осеменение коз разбавленной охлажденной спермой обеспечивает 70%-ную оплодотворяе-мость. |

15. При замораживании спермы козлов в новой «Среде для криоконсервации спермы козлов» уменьшается количество клеток с поврежденными акросомами на 19-27%%, подвижность спермиев составляет 5,6 баллов, при осеменении за-

морожено-оттаянной спермой оплодотворяемость коз составляет 60%, плодовитость - 140%.

16. Метод криоконсервации спермы в пайетах обладает преимуществом в подвижности клеток после оттаивания и в их оплодотворяющей способности на

11.4 и 3,8 %% соответственно, однако себестоимость одной спермодозы в пайе-те превышает себестоимость спермодозы в грануле в 13,2 раза.

17. Схема индукции полиовуляции для трансплантации эмбрионов с использованием ушных имплантов «Крестар», препаратов «Оваген», «Фоллигон» и «Хорулон» обеспечивает 100%-ное прихождение в охоту с эффективностью

17.5 овуляций/гол. и 84%-ном[ выходе эмбрионов, пригодных для трансплантации. |

18. Ооциты и ранние эмбрионы у коз покрыты обильным слоем внутриклеточного жира. Для объективной оценки и работы с клетками необходимо их центрифугирование. Мужской и женский пронуклеусы в оплодотворенном ооците козы одного размера, ядрышки при световой микроскопии, как правило, не различимы.

19. Режим получения оплодотворенных ооцитов на стадии двух пронукле-усов, где основными критериями для расчета времени извлечения клеток являются время осеменения и продолжительность половой охоты у донора, обеспечивает получение 91% презигот от всех извлеченных клеток.

20. Приживляемость эмбрионов (полноценная беременность, завершившаяся родами) в эстральный сезон колеблется в пределах 17,6-27,7%, эмбриональный лизис уже имплантированных эмбрионов на ранней стадии развития может достигать 18,2%. В анэстральный сезон приживляемость эмбрионов снижается в 3,3 раза. Введение «Хорулона» реципиентам после трансплантации повышает приживляемость эмбрионов в 1,5 раза.

21. Новая «Среда для культивирования доимплантационных эмбрионов in vitro» позволяет культивировать эмбрионы и бластоцисты до стадии вылупле-ния и повышает их выживаемость и способность к имплантации на 23,3%-33,3%%. j

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ 1. Для сокращения сроков осеменения и козления и повышения эффективности воспроизводства молочных коз предлагается комплекс биотехнических приемов, представляющий искусственное осеменение коз транспортированной спермой с синхронизацией половых циклов; при транспортировке спермы рекомендуется использовать среду для краткосрочного хранения спермы козлов TRIS.

2. Для предотвращения хозяйственных и экономических потерь в результате несвоевременного выявления неоплодотворившихся животных рекомендуется метод ранней диагностики беременности у коз.

3. Для повышения естественной резистентности поголовья и сохранности молодняка рекомендуется биологическая стимуляция беременных маток препаратом БСМ.

4. Для повышения эффективности использования козлов-производителей рекомендуется, между кампаниями по осеменению, использовать их для криокон-сервации спермы с нагрузкой 3 дуплетные садки в неделю. Для замораживания спермы рекомендуется применять метод криоконсервации спермы в пайетах при режиме: от +4 до -5°С со скоростью 4 "С/мин, от -5 до -110 °С со скоростью 25 °С/мин, от -110 до -140 °С со скоростью 35 °С/мин., разбавленной «Средой для криоконсервации спермы козлов».

5. При трансплантации эмбрионов и получении трансгенных животных рекомендуется индукция полиовуляции и получение одновозрастных эмбрионов по разработанным схемам. При культивировании ооцитов и эмбрионов коз для повышения их способности к имплантации рекомендуется применение «Среды для культивирования доимплантационных эмбрионов коз in vitro».

Инструкции и рекомендации:

1. Трубникова П.В. Способы и приемы стимулирования воспроизводительных функций баранов и овец в анэстральный период. Методические рекомендации / А.-М.М Айбазов, Л.С. Малахова, К.К. Ашурбегов, П.В.Трубникова, А.Н.Черкесова, И.Г. Сердюков - Ставрополь,- 2003.- 14 е., утверждены на заседании ученого совета ГНУ СНИИЖК Россельхозакадемии (протокол № 9 от 10 ноября 2003).

2. Трубникова П.В. Современные биотехнологические методы и приемы в воспроизводстве овец и коз (рекомендации) /А.-М.М Айбазов, Л.С. Малахова, К.К. Ашурбегов, П.В.Трубникова, А.Н.Черкесова - Ставрополь- 2006.-34 е., утверждены на заседании секции овцеводства и козоводства отделения Зоотехнии Россельхозакадемии (протокол № 4 от 12 октября 2006).

3. Аксенова П.В. Технологический регламент по искусственному осеменению овец и коз /М.М.Айбазов, П.В.Аксенова, Д.В. Коваленко,- Ставрополь, 2009.-10 е., утвержден на заседании секции овцеводства и козоводства отделения Зоотехнии Россельхозакадемии (протокол № 3 от 23 октября 2009).

4. Аксенова П.В. Методические наставления «Способы оценки качества зигот овец и коз, приемы их краткосрочного хранения» /М.М.Айбазов, П.В.Аксенова,

Д.В. Коваленко,- Ставрополь, 2009.-14 е., утверждены на заседании секции овцеводства и козоводства отделения Зоотехнии Россельхозакадемии (протокол № 3 от 23 октября 2009).

5. Аксенова П.В. Инструкция по искусственному осеменению овец и коз (Инструкция) /М.М.Айбазов, П.В.Аксенова, Д.В. Коваленко,- Ставрополь,- 2010, 49 е., утверждена на заседании секции овцеводства и козоводства отделения Зоотехнии Россельхозакадемии (протокол № 4 от 25 октября 2010).

6. Аксенова П.В. Инструкция по криоконсервации спермы козла(Стандарт ор-ганизации)/М.М.Айбазов, П.В.Аксенова, Д.В. Коваленко, К.К. Ашурбегов, Л.С. Малахова, И.Л. Гольдман, Е.Р. Садчикова,- СНИИЖК РАСХН - ИБГ РАН,-2012, - 59 с. СТ0004-2012.

СПИСОК

научных и учебно-методических трудов по теме диссертации

Статьи в журналах, рекомендованных ВАК:

1. Трубникова П.В. Синхронизация половой охоты у молочных коз//Овцы, козы, шерстяное дело/А-М.М. Айбазов, Л.С. Малахова, П.В. Трубникова-2006.-№ 2.-С.32-33.

2. Трубникова П.В. Результаты стимуляции половой охоты у молочных коз в анэстральный период / А-М.М. Айбазов, Л.С. Малахова, П.В. Трубникова // Овцы, козы, шерстяное дело. - 2006. - № 2. - С.34-35.

3. Трубникова П.В. Результаты индукции множественной овуляции у молочных коз / А-М.М. Айбазов, Л.С. Малахова, П.В. Трубникова //Овцы, козы, шерстяное дело. - 2007. - № 1. - С.52-53.

4. Трубникова П.В. Динамика половых гормонов у зааненских коз с естественным и индуцированным эструсом / А-М.М. Айбазов, П.В. Трубникова Н.Д., Меликов //Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные,- 2007.-С. 38-39.

5. Трубникова П.В. Результаты индукции множественной овуляции у зааненских коз / А-М.М. Айбазов, П.В. Трубникова, Д.С. Милошенко //Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. - 2007.- С. 37.

6. Трубникова П.В. Иммунологический профиль у молочных коз в разные периоды воспроизводительной функции/ П.В. Трубникова, М.М. Айбазов // Овцы, козы, шерстяное дело. - 2007. - № 4. -С. 59-61.

7. Аксенова П.В. Развитие матки у зааненских коз в постнатальном онтогенезе /П.В. Аксенова // Овцы, козы, шерстяное дело. - 2009. - № 1. - С.80-81.

8. Аксенова П.В. Возраст наступления половой зрелости у козликов зааненской породы /П.В. Аксенова //Овцы, козы, шерстяное дело.-2009.-№ 3. - С. 62-64.

9. Аксенова П.В. Восстановительный послеродовый период у молочных коз с точки зрения иммунологии /П.В. Аксенова //Овцы, козы, шерстяное дело-

2010—№ 1. - С.80-81.

10. Аксенова П.В. Лактоферрин человека от трансгенных коз 1. Особенности физиологии репродукции молочных коз зааненской породы/ Айбазов М.М., Аксенова П.В.//Вестник ветеринарии № 54 (3/2010), с. 12-16.

П.Аксенова П.В. Рациональное использование генофонда зааненских производителей //П.В.Аксенова, М.М.Айбазов, Д.В. Коваленко //Зоотехния.-2011.-№9.-С. 6-7.

12. Аксенова П.В. Сравнительная характеристика различных способов криокон-сервации спермы козла / П.В. Аксенова // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные.- 2011,- №1.-С. 13-15.

О.Аксенова П.В. Повышение эффективности технологии криоконсервации спермы козлов/П.В.Аксенова//Ветеринарная медицина-2011.-№3-4-С.-11-13.

14.Аксенова П.В. Биотехнологические методы и приемы интенсификации воспроизводства овец и коз / П.В.Аксенова, М.М.Айбазов, Д.В. Коваленко //Овцы, козы, шерстяное дело. - 2012. - № 2. - С.35-38.

15.Аксенова П.В. Половая активность и спермопродукция козлов-производителей в зависимости от режима эксплуатации /Аксенова П.В., Айбазов М.М. //Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные.* 2012,-№1.-С. 6-8.

16.Аксенова П.В. Вариабельность ответа яичников при индукции полиовуляции у коз / П.В.Аксенова, М.М.Айбазов, Д.В. Коваленко //Актуальные вопросы ветеринарном биологии.-2012.-№2 (14).-С. 11-15.

Патенты:

17. Патент на изобретение «Среда для культивирования доимплантационных эмбрионов коз IN VITRO» RU 2396344, заявка 2008152992/13, приоритет изобретения 31.12.08, зарег. в гос. реестре 10.08.10 Бюл. № 22, авторы Аксенова П.В., Айбазов М.М.

18.Патент на изобретение «Среда для криоконсервации спермы козлов» RU 2436299, заявка № 2010118373/13, приоритет изобретения 06.05.10, зарег. в гос. реестре 20.12.11 Бюл. № 35, авторы Аксенова П.В., Айбазов М.М.

Монографии:

19.Аксенова П.В. Воспроизводство коз. Монография /Айбазов В.М., Аксенова П.В.- Ставрополь.- Бюро новостей.-2007., 144 с.

20.Аксенова П.В. Экология и этология животных. Учебное пособие / Аксенова П.В. Салпагаров А.Д. - Теберда - Тебердинский государственный природный биосферный заповедник - 2008, 226 с.

21.Аксенова П.В. Биогенные стимуляторы: исследование биологической активности и применение в животноводстве. Монография / П.В.Аксенова, М.М. Айбазов, З.К. Гаджиев,- Махачкала-2009.- 124 с.

22.Аксенова П.В. Биология животных с основами экологии. Учебное пособие Аксенова П.В. Салпагаров А.Д. - Теберда - Тебердинский государственный природный биосферный заповедник - 2009,160 с.

Прочие публикации:

23.Трубникова П.В. Изменение показателей естественной резистентности молочных коз при вакцинации /П.В. Трубникова//Вестник ветеринарии -2003 -№26-С.32-35.

24.Трубникова П.В. Циклические процессы жизнедеятельности дрожжей Sac-charomyces ellipsoids /П.В.Трубникова // Мат. X Международной конференции «Циклы природы и общества».- Ставрополь, 2002. - С. 156-158.

25.Трубникова П.В. Роль биологически активных веществ в повышении естественной резистентности у молочных коз/ П.В. Трубникова // Сб. науч. тр. -СНИИЖК. - Ставрополь, 2003. - С. 105-109.

26.Трубникова П.В. Динамика содержания гемоглобина и эритроцитов у коз в разные периоды воспроизводительной функции / Экология. Культура. Образование. - 2003. -№ 13,- С. 51-53.

27.Трубникова П.В. Динамика изменения количества белка и белковых фракций у коз в послеродовой период/ П.В. Трубникова //Мат. XI Международной конф. «Циклы природы и общества»,- Ставрополь, 2004. - С. 62-64.

28.Трубникова П.В. Уровень и динамика половых гормонов у зааненских коз / А-М. М. Айбазов, П.В.Трубникова// Современные достижения зоотехнической науки и практики - основа повышения продуктивности сельскохозяйственных животных. Сб. науч. трудов.Ч.1-Краснодар.-2007,- С. 117-119.

29.Трубникова П.В. Иммунная реактивность при различном физиологическом состоянии репродуктивного тракта у коз и ее влияние на репродуктивный статус потомства/ П.В. Трубникова // Диагностика, лечение и профилактика сельскохозяйственных животных. Сб науч. тр. по мат. 71-й научной конференции. (г. Ставрополь, 17-19 апреля 2007г.).- С. 96-98.

30.Трубникова П.В. Корреляция иммунологических и гематологических показателей крови у молочных коз / П.В.Трубникова, М.М.Айбазов // мат. межд. науч.-практ. конф. «Состояние, перспективы, стратегия развития и научного обеспечения овцеводства и козоводства РФ.» Ч.З.-г. Ставрополь -ГНУ СНИИЖК. 2007.-С. 34-37.

31.Трубникова П.В. Биологическая полноценность криоконсервированной спермы разного срока хранения /М.М. Айбазов, П.В. Трубникова // Мат. межд. научно-практич. конф. «Биоресурсы, биотехнологии, экологически безопасное развитие регионов Юга России». -2-5 октября 2007 г г Сочи -С.115.

32.Трубникова П.В. О возможности круглогодового использования производителей для накопления от них замороженной спермы /М.М. Айбазов, П.В. Трубникова // Материалы Межд. научно-практич. конф. «Биоресурсы, биотехнологии, экологически безопасное развитие регионов Юга России»,- 2-5 октября 2007 г, г. Сочи - С. 116.

33.Трубникова П.В. Концентрация циркулирующих иммунных комплексов как индикаторов состояния репродуктивного тракта коз/ П.В. Трубникова

//Межд. научно-практическая конф. «Состояние, перспективы, стратегия развития и научного обеспечения овцеводства и козоводства РФ.» 4.1.-г. Ставрополь.-ГНУ СНИИЖК. 2007.-С. 145-147.

34. Трубникова П.В. Биологическая полноценность криоконсервированной спермы разного срока хранения 08.11-04Я4.32./ В.М. Айбазов, П.В. Трубникова // Реферативный журнал.-04. Биология, сводный том, раздел 04Я Генетика. Цитология, 04Я4. Генетика и селекция сельскохозяйственных животных, выпуск сводного тома,- ВИНИТИ.- М: 11. 2008,- С.-4.

35.Аксенова П.В. Технология синхронизации половой охоты и осеменения молочных коз /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов // Мат. межд. научно-практ. конф. «Инновации в аграрном секторе Казахстана», посвященной 75-летию академика К.С.Сабденова, - Алматы, Казахстан,- 2008, с.52-57.

36.Аксенова П.В. Современные биотехнологические методы повышения эффективности воспроизводства овец и коз /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов //Мат. межд. научно-практ. конф. «Инновации в аграрном секторе Казахстана», поев. 75-летию академика К.С.Сабденова, - Алматы, Казахстан,- 2008, с. 66-71.

37.Аксенова П.В. Постнатальное развитие яичников у зааненских коз /П.В. Аксенова, Д.В. Коваленко // Проблемы и перспективы современной науки. Межвузовский сб. науч. тр. Вып.2 .- Томск.-2008, С.-42.

38.Аксенова П.В. Схемы синхронизации полового цикла у молочных коз /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов //Materialy V mezinarodni vedecko-prakticka conference "Modami Vymozenosti Vedy-2009, Dil 11, Lekarstvi, Biologicke vedy, Chemie a chemicka technologie".-Praha.-Publishing House "Edication and Science" s.r.o.-2008, C.45-48.

39.Аксенова П.В. Определение беременности у коз по уровню прогестерона в крови /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов // В. сб. науч. тр. юб. межд. (2-й) научно-практ. конф., поев. 40-л. СКНИИЖ «Научные основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных».-Ч.2.- Краснодар.-2009.-С.4-5.

40.Аксенова П.В. Реализация репродуктивной функции баранов и козлов в сравнительном аспекте /Аксенова П.В. // В. сб. науч. тр. юб. межд. (2-й) науч.-практ. конф., поев. 40-л. КНИИЖ «Научные основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных».-Ч.2.- Краснодар.-2009.-с.5-7.

41. Аксенова П.В. Морфометрия репродуктивной системы коз зааненской породы /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов // Мат. межд. науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы развития агропромышленного комплекса Юга России».-Элиста.-2009.-С.70-71.

42.Аксенова П.В. Репродуктивная функция баранов и козлов в сравнительном аспекте /М.М.Айбазов, П.В.Аксенова, А.Р. Долаев // Сб. науч. тр. по мат. межд. научно-практ. конф. «Инновационные пути развития животноводства» (пос. Нижний Архыз, 27-29 мая 2009 г).- Ставрополь.-2009.-с.36-38.

43 .Аксенова П.В. Развитие эмбрионов коз in vitro в новой среде для культивирования /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов // Материали за V научна практична конф. «Динамиката на съвременната наука -2009» 17-25 юли 2009,- том 11.-София.-2009 -с.99-100.

44.Аксенова П.В. К вопросу об интенсификации использования высокоценных производителей / Д.В. Коваленко, П.В. Аксенова, М.М. Айбазов // Мат. Межд. научно-практ. конференции «Современные достижения биотехнологии воспроизводства — основа повышения продуктивности сельскохозяйственных животных».- Том 1. - Ставрополь, 2009.- с. 20-22.

45.Аксенова П.В. Особенности проявления воспроизводительной функции козлов в разные сезоны года /П.В. Аксенова // Мат. межд. научно-практ. конференции «Современные достижения биотехнологии воспроизводства — основа повышения продуктивности сельскохозяйственных животных»,- Том 1,-Ставрополь, 2009,- с. 15-17.

46.Аксенова П.В. Биотехнология сохранения и рационального использования генофонда молочных коз /М.М.Айбазов, П.В.Аксенова // Научно-тематический сборник «Научный вестник «Аскания-Нова». - Аскания-Нова,- 2009. - с. 2528.

47.Аксенова П.В. Биогенная стимуляция качества спермопродукции козлов в анэстральный период /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов // Научно-тематический сборник «Научный вестник «Аскания-Нова». - Аскания-Нова,- 2009. - с. 2932.

48.Аксенова П.В. Инсулиноподобные факторы роста в крови коз /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов // Мат. межд. науч.-практ. конф. «Развитие инновационного потенциала агропромышленного производства, науки и аграрного образования», 3-6 февраля 2009 г., ДонГАУ, том 1. - пос. Персиановский, 2009.- С. 186-187.

49.Аксенова П.В. Стимуляция охоты у коз в анэстральный период с применением нового препарата — мепрегенола ацетата /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов // Мат. межд. научно-практ. конференции «Развитие инновационного потенциала агропромышленного производства, науки и аграрного образования», 3-6 февраля 2009 г., ДонГАУ, том 1. - пос. Персиановский, 2009.- С. 187-189.

50.Аксенова П.В. Особенности проявления воспроизводительной функции козлов в разные сезоны года /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов // В. сб. научных тр. юбилейной межд. (2-й) научно-практ. конф., посвященной 40-летию образования СКНИИЖ «Научные основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных».-Ч.1.- Краснодар.-2009.-С.76-77.

51.Аксенова П.В. Определение эффективности различных способов синхронизации полового цикла у молочных коз в половой сезон /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов // Диагностика, лечение и профилактика сельскохозяйственных животных. Сб. науч. тр. по мат. межд. научно-практической интернет-конференции «Актуальные проблемы инфекционной, инвазионной и незараз-

ной патологии домашних и сельскохозяйственных животных». (СГАУ г. Ставрополь.).- 2009.-С. 56-58.

52.Аксенова П.В. Связь показателей спермопродукции козлов-производителей с уровнем тестостерона в крови /П.В. Аксенова // Стратегия развития зоотехнической науки. Тезисы докладов Межд. науч.- практ. конф., поев. 60-летию зоотехнической науки Беларуси (22-23 октября 2009 г).- г. Жодино,-БелНИИЖ. - 2009. - С. 12.

53. Аксенова П.В. Динамика половых гормонов у молочных коз во время беременности /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов // Стратегия развития зоотехнической науки. Тезисы докладов Межд. науч.- практ. конф., поев. 60-л. зоотехнической науки Беларуси (22-23 октября 2009 г).- г. Жодино,- БелНИИЖ-2009.-е. 10-11.

54. Аксенова П.В. Содержание тестостерона и гонадотропных гормонов в крови козлов в половой и неполовой сезоны /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов // Стратегия развития зоотехнической науки. Тезисы докладов Межд. науч,-практ. конф., поев. 60-летию зоотехнической науки Беларуси (22-23 октября 2009 г).- г. Жодино.- БелНИИЖ. - 2009. - С.13-14.

55.Аксенова П.В. Техника пересадки эмбрионов у коз /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов, Д.В. Коваленко // Materialy VI miedzynarodowej naukowi-praktyznej konfereneji "Dynamika naukowych badac - 2010, Vol.9 Medycyna Nauk, Biologicznych Chemia i chemiczne technologie, Ekologia, Geografía i geología, Rolnictwo Weterinaria".- Przemysl - Nauka i studia - 2010, C. 35-39.

56.Аксенова П.В. Сравнительные исследования эффективности сред для культивирования ооцитов и доимплантационных эмбрионов коз in vitro /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов // Мат. межд. научно-практ. конференции «Актуальные проблемы развития кормопроизводства и животноводства Республики Казахстан», поев. 80-летию Героя Социалистического труда, академика НАН РК и РАСХН профессора Асанова К.А. - том 2. - Алматы, 2011,- С. 195-197.

57.Аксенова П.В. Особенности оценки качества яйцеклеток и эмбрионов коз/П.В.Аксенова, М.М. Айбазов, Д.В. Коваленко// Мат. межд. науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы развития кормопроизводства и животноводства Республики Казахстан», поев. 80-л. Героя Соц. труда, академика НАН РК и РАСХН профессора Асанова К.А. - том 2. - Алматы, 2011,- С. 197-198.

58. Аксенова П.В. Разработка среды для культивирования ооцитов и доимплантационных эмбрионов коз /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов // Мат. межд. научно-практ. конференции «Актуальные проблемы развития кормопроизводства и животноводства Республики Казахстан», посвященной 80-летию Героя Социалистического труда, академика НАН РК и РАСХН профессора Асанова К.А. - том 2. - Алматы, 2011.- С. 199-200.

59.Аксенова П.В. Экономическое обоснование новой биотехнологии воспроизводства молочных коз /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов //Culegere de lucrari а

Simpozionului stiintific cu participare internationala consacrat aniversarii a 55 de la fondarea Institutului "Realizan si perspective in zootehnie, biotehnologii si medicina veterinara.-6-8 octombrie, Maximovca-2011.-C.-283-286.

60.Аксенова П.В. Трансплантация эмбрионов у молочных коз /П.В.Аксенова, М.М.Айбазов //Culegere de lucrari a Simpozionului stiintific cu participare internationala consacrat aniversarii a 55 de la fondarea Institutului "Realizan si perspective in zootehnie, biotehnologii si medicina veterinara-6-8 octombrie, Maximovca-2011.- C.-286-290.

61. Аксенова П.В. Криоконсервация гамет как эффективный способ сохранения генофонда высокопродуктивных пород, редких и исчезающих видов овец и коз /М.М.Айбазов, П.В.Аксенова // Тезисы докладов межд. науч.- практ. конф. «Повышение интенсивности и конкурентоспособности отраслей животноводства» (14-15 сентября 2011 г.).- Жодино,- Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по животноводству. - 2011. -С.8-9.

62.Аксенова П.В. Структурные нарушения и оплодотворяющая способность спермиев при разбавлении в новой среде для криоконсервации спермы козлов/ П.В. Аксенова // Тезисы докладов межд. науч.- практ. конф. «Повышение интенсивности и конкурентоспособности отраслей животноводства» (14-15 сентября 2011 г.).- Жодино.- Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по животноводству. - 2011. - С. 12-13.

63. Аксенова П.В. К вопросу о сохранении генофонда и биологической полноценности криоконсервированной спермы /М.М.Айбазов, П.В.Аксенова, К.К. Ашурбегов, Д.В. Коваленко // Сб. науч. тр. «Животноводство и кормопроизводство». - Вып. 4. — СНИИЖК, Россельхозакадемия,- Ставрополь, 2011.- С. 24-29.

64. Аксенова П.В. Влияние иммунного статуса коз на сохранность и естественную резистентность потомства / П.В.Аксенова, М.М.Айбазов, Д.В. Коваленко //Мат. per. науч.-практ. конф. Инновационные разработки молодых ученых Юга России.-Ставрополь -2012,- С. 45-47.

65. Аксенова П.В. Результаты синхронизации полового цикла у молочных коз / П.В.Аксенова, М.М.Айбазов, Д.В. Коваленко // Мат. per. науч.-практ. конф. Инновационные разработки молодых ученых Юга России.-Ставрополь -2012,- С. 48-50.

АКСЕНОВА Полина Владимировна

НАУЧНЫЕ ОСНОВЫ ИНТЕНСИФИКАЦИИ ВОСПРОИЗВОДСТВА МОЛОЧНЫХ КОЗ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Подписано в печать 12.11.12 Печать оперативная. Объем 2 усл. печ. л. Тираж 100 экз. Заказ № 478 Издательско-полиграфическое предприятие ООО "МП Книга*1, г. Ростов-на-Дону, Таганрогское шоссе, 106

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Аксенова, Полина Владимировна

Введение.

Основные обозначения и сокращения.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 ПРОИСХОЖДЕНИЕ, КЛАССИФИКАЦИЯ КОЗ И ИХ ЗНАЧЕНИЕ ДЛЯ НАРОДНОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИИ.

1.2 РЕПРОДУКТИВНАЯ СИСТЕМА КОЗ.

1.2.1. Морфологическая и функциональная характеристика репродуктивной системы коз. Гаметогенез.

1.2.2. Нейро-гуморальная регуляция репродуктивной функции.

1.2.3. Иммунная регуляция репродуктивной функции.

1.3 НАПРАВЛЕННОЕ РЕГУЛИРОВАНИЕ ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНОЙ ФУНКЦИИ ЖИВОТНЫХ.

1.3.1. Способы и приемы направленного регулирования процесса размножения.

1.3.2. Стимуляция воспроизводительной функции самцов и методы хранения спермы.

1.3.3.Технология трансплантации эмбрионов.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ЗЛ ИЗУЧЕНИЕ РАЗВИТИЯ И ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ КОЗ, КАК ОСНОВЫ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИНТЕНСИФИКАЦИИ ВОСПРОИЗВОДСТВА.

3.1.1. ИССЛЕДОВАНИЕ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ

3.1.1.1 .Постнатальное развитие репродуктивной системы коз

3.1.1.2. Определение границ полового сезона, продолжительности и особенностей полового цикла.

3.1.1.3. Исследование иммунной регуляции репродуктивной функции.

3.1.2. ИССЛЕДОВАНИЕ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ КОЗЛОВ.

3.1.2.1. Постнатальное развитие репродуктивной системы козлов.

3.1.2.2. Исследование сезонных особенностей функционирования репродуктивной системы козлов.

3.2 РАЗРАБОТКА И УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СПОСОБОВ ВОСПРОИЗВОДСТВА

3.2.1. РАЗРАБОТКА СПОСОБОВ НАПРАВЛЕННОГО РЕГУЛИРОВАНИЯ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ КОЗ.

3.2.1.1. Разработка схемы стимуляции половой охоты у коз в анэ-стральный сезон.

3.2.1.2. Исследование эффективности различных препаратов для синхронизации половой охоты в эстральный сезон.

3.2.1.3. Разработка способа ранней диагностики беременности у

3.2.1.4. Разработка способа повышения сохранности поголовья путем биологической стимуляции беременных коз.

3.2.2. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ КРУГЛОГОДИЧНОЙ ЭКСПЛУАТАЦИИ КОЗЛОВ-ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ.

3.2.2.1. Разработка и обоснование режима эксплуатации козлов-производителей при их интенсивном использовании.

3.2.2.2. Конструирование синтетических сред для краткосрочного хранения и криоконсервации спермы козлов.

3.2.2.3. Сравнительная характеристика различных способов криоконсервации спермы козла.

3.2.3. СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ.

3.2.3.1. Разработка схем индукции полиовуляции у коз доноров.

3.2.3.2. Разработка режима получения оплодотворенных ооцитов на стадии двух пронуклеусов для микрохирургических инъекций.

3.2.3.3. Изучение степени имплантации микроинъецированных эмбрионов и возможности ее повышения.

3.2.3.4. Создание среды для культивирования эмбрионов коз in vitro.

4. ВЫВОДЫ.

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Научные основы интенсификации воспроизводства молочных коз"

Воспроизводство является первостепенной составляющей успешной селекционно-племенной работы (Мануйлов И.М., 1998; Никитин В.Я., 2005). Поэтому реализация намеченных целей невозможна без разработки современных технологий интенсивного воспроизводства коз с использованием последних достижений биологической науки. Эти технологии должны базироваться на достоверных научных знаниях об особенностях биологии репродукции молочных коз. К сожалению, к настоящему моменту отечественная наука располагает достаточно ограниченными материалами по биологии коз и, еще более редкими, - по репродукции, в основном, аборигенных и пуховых пород (Лопырин А.И., 1959; Орехов A.A., 1981; Зеленский Г.Г.; 1981, Сеитов М.С., 2001; Сивожелезова H.A., 2006; Долганова С.Г., 2007). Что же касается научного обеспечения молочного козоводства, то по данной проблеме имеются лишь отдельные, в основном зарубежные исследования (Haenlein G. F. W., 1992; Menchaca A., Rubianes E., 2007; Fernandez-Modo D. e.a., 2008; Dogan I. 2008). Однако фрагментарный характер исследований и, зачастую, противоречивые выводы, к которым приходят авторы, не позволяют рассмотреть проблему как единое целое.

Зааненская порода коз - одна из самых продуктивных молочных пород. Удой за лактацию составляет 600-800 кг молока при жирности 3,8^4,5%.

Иолчиев Б.С. и др., 2000). Выдающаяся продуктивность этих животных сделала их наиболее используемыми для улучшения коз местных пород во многих странах мира. Все российское молочное козоводство представлено, в основном, козами зааненской породы, либо местными популяциями молочных коз, выведенными с ее использованием. Поэтому, в качестве объекта исследований мы выбрали животных зааненской породы, как наиболее типичных и перспективных представителей молочных коз.

Научная гипотеза работы - разработка комплексной системы биотехнологических способов интенсификации воспроизводства молочных коз ускорит процесс формирования племенной базы молочных коз в Российской Федерации.

Цель работы - изучить особенности биологии размножения заанен-ских коз и, на их основе, разработать комплекс биотехнологических приемов интенсификации воспроизводства молочных коз.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

- изучить становление репродуктивной функции у коз и козлов и возможность раннего включения животных в процесс воспроизводства;

- определить границы эстрального сезона и установить продолжительность и особенности регуляции полового цикла коз;

- разработать новые и усовершенствовать существующие способы направленного регулирования полового цикла у коз;

- разработать способ ранней диагностики беременности у коз;

- разработать способ повышения сохранности беременных коз и их потомства;

- изучить сезонные особенности функционирования репродуктивной системы козлов;

- подобрать физиологически обоснованный режим интенсивной эксплуатации козлов-производителей и изучить возможность стимуляции их репродуктивной функции;

- разработать синтетические среды для краткосрочного хранения и криоконсервации спермы козлов;

- определить биологическую и экономическую эффективности различных способов замораживания спермы;

- усовершенствовать технологию трансплантации эмбрионов у коз, включая индукцию полиовуляции, режим получения датированных зигот, методы оценки и культивирования эмбрионов.

Научная новизна. Впервые установлены физиологические закономерности проявления репродуктивных функций и возрастные особенности биологии репродукции молочных коз, экспериментально обоснованы сроки наступления половой зрелости и возможности включения в воспроизводство 67-ми мес. козликов, рассмотрен механизм депрессии репродуктивной функции козлов в неполовой сезон.

Разработан новый способ ранней диагностики беременности у коз.

Впервые изучена динамика иммунных показателей у коз при различных функциональных состояниях их репродуктивного тракта. Подтверждена возможность применения биостимулятора из мозговой ткани (БСМ) для функциональной активации неспецифических факторов иммунной системы животных и разработан способ повышения сохранности поголовья и получения потомства с высоким иммунным статусом путем биологической стимуляции беременных коз. Разработан простой и объективный экспресс-метод определения биологической активности биостимуляторов.

Впервые предложен метод осеменения транспортированной спермой охлажденной в новом синтетическом разбавителе ТИ8 для краткосрочного хранения спермы козлов.

Разработана новая биологически полноценная среда для криоконсервации спермы козлов.

Разработан режим длительной интенсивной эксплуатации козлов-производителей для накопления консервированной спермы. Разработана схема стимуляции функциональной активности репродуктивной системы козлов в неполовой сезон.

Впервые осуществлен комплексный подход к усовершенствованию способов регуляции воспроизводства молочных коз. Проведена сравнительная оценка эффективности различных гормональных препаратов для синхронизации половой охоты у коз. Установлена возможность использования нового препарата «Мепрегенолацетата водорастворимого» для индукции эстру-са вне сезона размножения.

Впервые определены видовые особенности зигот коз и сконструирована видоспецифичная среда для культивирования ооцитов и эмбрионов у коз, повышающая их способность к имплантации.

Разработаны схемы индукции полиовуляции у коз-доноров, позволяющие получать одновозрастные эмбрионы высокого качества.

Разработан режим получения ооцитов на стадии двух пронуклеусов для получения трансгенов путем переноса рекомбинантной ДНК проядерным микроинъецированием зигот.

Объектом исследований были козы зааненской и в типе зааненской породы различных половозрастных групп.

Предметом исследований служили морфофизиологические особенности репродуктивной функции молочных коз и возможность ее направленного регулирования.

Реализация результатов исследований. Научные положения и результаты исследований вошли в научные и обучающие пособия, в т.ч. монографии: «Воспроизводство коз» (2007), учебные пособия «Экология и этология животных» (2008) и «Биология животных с основами экологии» (2009), «Биогенные стимуляторы: определение биологической активности и применение в животноводстве» (2009), используются в учебном процессе в ВУЗах биологического и сельскохозяйственного направлений.

Внедрены в производство и служат руководством к практической деятельности: «Технологический регламент по искусственному осеменению овец и коз» (2009), «Инструкция по искусственному осеменению овец и коз» (Инструкция) (2010), «Инструкция по криоконсервации спермы козлов» (Стандарт организации), памятки и методические рекомендации.

Результаты исследований по индукции полиовуляции и получению датированных по времени эмбрионов используются в экспериментах по созданию трансгенных животных в программе Союзного государства «БелРо-сТрансген-2».

Научно-практическая значимость исследования. Изучены теоретические аспекты и получены новые экспериментальные данные об особенностях биологии размножения и биотехнике репродукции зааненских коз. Разработаны практические методы ускоренного воспроизводства, направленные на интенсификацию селекционно-племенной работы в молочном козоводстве. Предложены новые и усовершенствованные биотехнологические приемы, представляющие ключевые этапы получения трансгенных животных.

Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации обсуждены и одобрены на ежегодных заседаниях ученого совета института 2001-2011 гг.; международных конференциях, включая: «Биоресурсы. Биотехнологии. Инновации Юга России», Пятигорск - 2003, «Состояние, перспективы, стратегия развития и научного обеспечения овцеводства и козоводства РФ», Ставрополь - 2007; «Modarni Vymozenosti Vëdy: Lekarstvi, Biologicke vëdy, Chemie a chemicka technologie», Praha - 2008; «Научные основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных», Краснодар - 2009; «Инновационные пути развития животноводства», п. Нижний Архыз - 2009; «Dynamika naukowych badac - 2010», Przemysl - 2010; Culegere de lucrari a Simpozionului stiintific cu participare internationala consacrat aniversarii a 55 de la fondarea Institutului «Realizari si perspective in zootehnie, biotehnologii si medicina veterinara», 6-8 octombrie, Maximovca-2011; «Повышение интенсивности и конкурентоспособности отраслей животноводства», Жодино-2011 и др.

По результатам работы получены патенты РФ на изобретения: «Среда для культивирования доимплантационных эмбрионов коз IN VITRO» RU 2396344, заявка 2008152992/13, приоритет изобретения 31.12.08, зарег. в гос. реестре 10.08.10, Бюл. № 22; «Среда для криоконсервации спермы козлов» RU 2436299, заявка № 2010118373/13, приоритет изобретения 06.05.10, зарег. в гос. реестре 20.12.11, Бюл. № 35, оформлена заявка на изобретение «Способ раннего определения беременности у коз» № 2012105799.

Разработка «Генофондный криогенный банк гамет сельскохозяйственных животных» экспонировалась на международной выставке-конгрессе «Высокие технологии, инновации, инвестиции», Санкт-Петербург, 2008, награждена дипломом 2 степени и серебряной медалью; разработка «Комплексная технология сохранения генофонда и повышения эффективности воспроизводства животных» экспонировалась на IX Московском международном салоне инноваций и инвестиций, Москва, ВВЦ, 2009, награждена дипломом и бронзовой медалью; разработка «Среда для культивирования доимплантационных эмбрионов коз in vitro» экспонировалась на X Московском салоне инноваций и инвестиций 2010, награждена дипломом и серебряной медалью.

Публикации. Основные материалы исследований опубликованы в 71 печатной работе, в том числе в 16 журналах, рекомендованных ВАК, 4 монографиях, 2 патентах, технологическом регламенте, рекомендациях и инструкциях.

Личный вклад соискателя. Представленная работа является продуктом личных исследований автора. При этом часть научных трудов опубликована в соавторстве с д. с.-х. н., профессором Айбазовым А.-М.М., к.б.н. Коваленко Д.В., к.с.-х. н. Малаховой JI.C. и др. Все соавторы в справках, представленных в диссертационный совет, не возражают против использования совместных данных. Автор выражает искреннюю благодарность члену-корреспонденту РАСХН, д.с.-х.н., профессору Клименко А.И., д. с.-х. н., профессору Айбазову А.-М.М., д. б. н., профессору Ермакову A.M., д.б.н. Гольдману И.Л., к. х.н. Садчиковой Е.Р. за консультации и поддержку. и

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 322 страницах компьютерного текста, содержит 80 таблиц, 41 рисунок и 69 фотографий и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований, выводов и практических предложений. Список литературы включает 474 источника, в т.ч. 210 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных", Аксенова, Полина Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Рост и развитие репродуктивных органов у молочных коз в постна-тальном онтогенезе происходит с различной скоростью, в зависимости от степени их развития к моменту рождения; половая зрелость наступает в 6 мес. возрасте: морфологическое и гистологическое строение репродуктивных органов соответствует взрослым животным, концентрации прогестерона и эстрадиола в крови составляют 4,15, нмоль/л и 134,78 пмоль/л. соответственно, у 87,5 % козочек появляются полноценные половые циклы.

2. Начало астрального сезона у молочных коз в условиях юга России приходится на период от конца сентября до второй декады ноября, окончание -на декабрь. В течение сезона козы приходят в охоту неравномерно, от 0 до 14% коз из стада в сутки. Вне эстрального сезона возможно прихождение в охоту до 1% коз.

3. Средняя продолжительность полового цикла у молочных коз составляет 19,7 сут. (lim = 12-28 сут.), у 73,5% животных цикл длится от 18 до 24 сут. За половой сезон регистрируется 3-6 циклов, при этом у одних и тех же животных продолжительность каждого цикла различна.

4. Средняя продолжительность половой охоты у молочных коз составляет 43,5 ч. (lim 38 - 47 ч.). Уровни прогестерона и эстрадиола в крови во время охоты составляют 1,5 нмоль/л, и 186 пмоль/л соответственно. Овуляции происходят в промежутке 26 - 38 ч. от начала охоты, при этом у 70 % коз фолликулы овулируют между 28-32 ч. Преовуляторный пик ЛГ (180,68 МЕ) регистрируется за 2-3 ч. до овуляции, ему предшествует первый подъем эстрадиола (304,22 пмоль/л), вторичный и третичный подъемы гормона (271,07291,33 пмоль/л) отмечаются сразу после овуляций.

5. Иммунная система коз находится в тесной функциональной зависимости от репродуктивной функции организма. Во время половой охоты напряженность естественного иммунитета повышается на 10-14,5%), количество у-глобулинов возрастает на 52,0 %; беременность характеризуется низкими показателями естественной резистентности и низким иммунорегуляторным индексом; за неделю до родов показатели клеточного и гуморального иммунитета возрастают и во время родов достигают максимума. Концентрация циркулирующих иммунных комплексов во время охоты уменьшается на 58,7%, постепенно возрастает с развитием беременности, перед родами наблюдается резкий подъем показателя (на 36%) и еще более резкое снижение (47%) во время родов. Восстановительный послеродовый период для иммунной системы матери завершается за десять дней.

6. Козлы-производители могут использоваться в воспроизводстве начиная с 6-7 мес. возраста, при этом у них концентрация тестостерона в крови в среднем составляет 41,7 нмоль/л, половая активность - 48 сек., объем эякулята -0,5 мл, подвижность спермиев - 8,5 баллов, концентрация клеток- 2,16 млрд/мл, оплодотворяющая способность спермы - 77,3%).

7. В анэстральный сезон у козлов отмечается глубокая гормонально обусловленная депрессия половой функции: концентрация тестостерона снижается в 3,4 раза, ФСГ - в 1,5-2 раза, ЛГ - в 6-7 раз, амплитуда пульсации гона-дотропных гормонов уменьшается в 5,5-2,8 раз, что обуславливает снижения половой активности в 2,5 -3 раза, уменьшение объема спермы на 47,5-56,8 %% и ухудшения ее качественных показателей (подвижность спермиев снижается на 15,3-17,6 %%, их концентрация - 3-5 %%, устойчивость спермы к криоконсервации на 45-47,6 %%).

8. Разработанная схема стимуляции половой охоты у коз в анэстральный сезон с использованием нового препарата «Мепрегенолацет водорастворимый» вызывает 90-100%-ное синхронное прихождение коз в охоту, при уровне овуляции 2,5 фолл./гол.

9. Эффективность синхронизации половой охоты у коз препаратами «Ме-прегенолацетат водорастворимый», «Анипрост», «Энзапрост» по предложенным схемам составляет 96,6-100%% при оплодотворяемости коз 78-100%% и их плодовитости 144-166%%; при этом сроки осеменения и козления сокращаются в 2,5-3 раза, затраты на осеменение уменьшаются на 54,3-66,9%%).

10. Новый способ ранней диагностики беременности у коз позволяет установить наличие беременности с 18-го дня после осеменения с достоверностью 94,3%.

11. Новый способ повышения иммунного статуса беременных коз и их потомства «Биостимулятором из мозговой ткани» (БСМ), повышает гематологические показатели коз на 7-22%%, фагоцитарную активность нейтрофилов и интенсивность фагоцитоза на 5 -12 %%, лизоцимную и бактерицидную активности сыворотки крови на 6,5-16%, нормализует содержание у-глобулинов, формирует у потомства высокий иммунный потенциал и увеличивает сохранность молодняка на 14%.

12. Доказана возможность длительного непрерывного получения спермы от козлов при соблюдении режима половой нагрузки: три сдвоенных эякулята в неделю. При этом режиме между периодами осеменения от одного козла можно заготовить свыше 2500 доз криоконсервированной спермы.

13. Применение БСМ козлам-производителям в неполовой сезон увеличивает качество спермопродукции и ее устойчивость к криоконсервации: объем эякулята возрастает на 46,7-52,6%%, концентрация спермиев - на 20,1-23,8%%, подвижность нативной спермы - на 10,3-16,7%%, подвижность клеток после замораживания-оттаивания - на 63,0-66,8%%».

14. Использование разработанной среды для консервации спермы при температуре тающего льда обеспечивает выживаемость спермиев в течение до 72 ч., при сохранении подвижности свыше 4 баллов в течение 36-42 ч. Осеменение коз разбавленной охлажденной спермой обеспечивает 70%-ную оплодотворяемость.

15. При замораживании спермы козлов в новой «Среде для криоконсервации спермы козлов» уменьшается количество клеток с поврежденными ак-росомами на 19-27%%, подвижность спермиев составляет 5,6 баллов, при осеменении заморожено-оттаянной спермой оплодотворяемость коз составляет 60%, плодовитость - 140%.

16. Метод криоконсервации спермы в пайетах обладает преимуществом в подвижности клеток после оттаивания и в их оплодотворяющей способности на 11,4 и 3,8 %% соответственно, однако себестоимость одной спермодозы в пайете превышает себестоимость спермодозы в грануле в 13,2 раза.

17. Схема индукции полиовуляции для трансплантации эмбрионов с использованием ушных имплантов «Крестар», препаратов «Оваген», «Фолли-гон» и «Хорулон» обеспечивает 100%-ное прихождение в охоту с эффективностью 17,5 овуляций/гол. и 84%-ном выходе эмбрионов, пригодных для трансплантации.

18. Ооциты и ранние эмбрионы у коз покрыты обильным слоем внутриклеточного жира. Для объективной оценки и работы с клетками необходимо их центрифугирование.Мужской и женский пронуклеусы в оплодотворенном ооците козы одного размера, ядрышки при световой микроскопии, как правило, не различимы.

19. Режим получения оплодотворенных ооцитов на стадии двух пронукле-усов, где основными критериями для расчета времени извлечения клеток являются время осеменения и продолжительность половой охоты у донора, обеспечивает получение 91% презигот от всех извлеченных клеток.

20. Приживляемость эмбрионов (полноценная беременность, завершившаяся родами) в эстральный сезон колеблется в пределах 17,6-27,7%, эмбриональный лизис уже имплантированных эмбрионов на ранней стадии развития может достигать 18,2%. В анэстральный сезон приживляемость эмбрионов снижается в 3,3 раза. Введение «Хорулона» реципиентам после трансплантации повышает приживляемость эмбрионов в 1,5 раза.

21. Новая «Среда для культивирования доимплантационных эмбрионов in vitro» позволяет культивировать эмбрионы и бластоцисты до стадии вылуп-ления и повышает их выживаемость и способность к имплантации на 23,3%-33,3%%.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

1. Для сокращения сроков осеменения и козления и повышения эффективности воспроизводства молочных коз предлагается комплекс биотехнических приемов, представляющий искусственное осеменение коз транспортированной спермой с синхронизацией половых циклов; при транспортировке спермы рекомендуется использовать среду для краткосрочного хранения спермы козлов TRIS.

2. Для предотвращения хозяйственных и экономических потерь в результате несвоевременного выявления неоплодотворившихся животных рекомендуется метод ранней диагностики беременности у коз.

3. Для повышения естественной резистентности поголовья и сохранности молодняка рекомендуется биологическая стимуляция беременных маток препаратом БСМ.

4. Для повышения эффективности использования козлов-производителей рекомендуется, между кампаниями по осеменению, использовать их для криоконсервации спермы с нагрузкой 3 дуплетные садки в неделю. Для замораживания спермы рекомендуется применять метод криоконсервации спермы в пайетах при режиме: от +4 до -5°С со скоростью 4 °С/мин, от -5 до -110 °С со скоростью 25 °С/мин, от -110 до -140 °С со скоростью 35 °С/мин., разбавленной «Средой для криоконсервации спермы козлов».

5. При трансплантации эмбрионов и получении трансгенных животных рекомендуется индукция полиовуляции и получение одновозрастных эмбрионов по разработанным схемам. При культивировании ооцитов и эмбрионов коз для повышения их способности к имплантации рекомендуется применение «Среды для культивирования доимплантационных эмбрионов коз in vitro».

Инструкции и рекомендации: 1. Трубникова П.В. Способы и приемы стимулирования воспроизводительных функций баранов и овец в анэстральный период. Методические рекомендации / А.-М.М Айбазов, JI.C. Малахова, К.К. Ашурбегов,

П.В.Трубникова, А.Н.Черкесова, И.Г. Сердюков - Ставрополь.- 2003.- 14 е., утверждены на заседании ученого совета ГНУ СНИИЖК Россельхозакаде-мии (протокол № 9 от 10 ноября 2003).

2. Трубникова П.В. Современные биотехнологические методы и приемы в воспроизводстве овец и коз (рекомендации) /А.-М.М Айбазов, Л.С. Малахова, К.К. Ашурбегов, П.В.Трубникова, А.Н.Черкесова - Ставрополь.- 2006.-34 е., утверждены на заседании секции овцеводства и козоводства отделения Зоотехнии Россельхозакадемии (протокол № 4 от 12 октября 2006).

3. Аксенова П.В. Технологический регламент по искусственному осеменению овец и коз /М.М.Айбазов, П.В.Аксенова, Д.В. Коваленко.- Ставрополь,

2009.-10 е., утвержден на заседании секции овцеводства и козоводства отделения Зоотехнии Россельхозакадемии (протокол № 3 от 23 октября 2009).

4. Аксенова П.В. Методические наставления «Способы оценки качества зигот овец и коз, приемы их краткосрочного хранения» /М.М.Айбазов, П.В.Аксенова, Д.В. Коваленко.- Ставрополь, 2009.-14 е., утверждены на заседании секции овцеводства и козоводства отделения Зоотехнии Россельхозакадемии (протокол № 3 от 23 октября 2009).

5. Аксенова П.В. Инструкция по искусственному осеменению овец и коз (Инструкция) /М.М.Айбазов, П.В.Аксенова, Д.В. Коваленко.- Ставрополь,

2010, 49 е., утверждена на заседании секции овцеводства и козоводства отделения Зоотехнии Россельхозакадемии (протокол № 4 от 25 октября 2010).

6. Аксенова П.В. Инструкция по криоконсервации спермы козла(Стандарт организации)/М.М.Айбазов, П.В.Аксенова, Д.В. Коваленко, К.К. Ашурбегов, Л.С. Малахова, И.Л. Гольдман, Е.Р. Садчикова,- СНИИЖК РАСХН - ИБГ РАН,- 2012, - 59 с. СТ0004-2012.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора биологических наук, Аксенова, Полина Владимировна, Новочеркасск

1. Адаме, Р.Л.П. Методы культуры клеток для биохимиков / Р. Адаме.- М.: Мир, 1983.-262 с.

2. Айбазов, А-М.М. Теоретические основы, разработка и совершенствование биотехнологических методов воспроизводства овец Автореф. дисс. доктора с.-х. наук / А.-М.М.Айбазов Ставрополь, СНИИЖК, 2003. -50 с.

3. Айбазов, М.М. Биотехнология воспроизводства овец и коз/ Айбазов М.М., Абонеев В.В., Селионова М.И. Ставрополь, 2004,- 330 с.

4. Акмаев, И.Г. Структурные основы механизмов гипоталамической регуляции эндокринных функций / И.Г. Акмаев. М.: Наука, 1979. - С. 44-58.

5. Албертс, Б. Молекулярная биология клетки. Т. 3. Пер. с англ./ Б.Албертс, Д.Брей, Дж.Льюис, Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж. -М.: Мир, 1994.-504 с.

6. Александров, И.Д. Справочник по технологии приготовления лекарственных форм для ветеринарного врача и фермера / И.Д. Александров, В.М. Субботин./ Ростов-на-Дону: Феникс, 2001.-192 с.

7. Александровская, О.В. Цитология, гистология и эмбриология /О.В. Александровская, Т.Н. Радостина, H.A. Козлов.- М: Агропромиздат 1987.-448 с.

8. Амирагова, М.Г. О взаимоотношении нервных и гуморальных гормональных факторов регуляции у высших животных/ М.Г. Амирагова // Вестник АМН СССР, 1966.- № 1,- С. 45-50.

9. Асланян, М.М. Характеристика качественных и количественных показателей семени баранов асканийской породы по сезонам года / М.М.Асланян, О.И.Лисовая // Разведение овец: Сб.науч. тр./ Укр. НИИЖ, 1963. T.XI.- С. 67-80.

10. Афанасьев Н.И., Парфенова Л.Н. Вязкость водных растворов полиэлектролитов. //Изв. вузов. Лесной журнал.-1991. № 5. С. 150-153

11. Афанасьева, Г.А. Антигенная активность ангиотензина II и его фрагментов / Г.А. Афанасьева, Г.М. Залитис, Г.И. Чипенс // Биохимия.-1977.-Т.42, ВЫП.9.-С. 1720-1725.

12. Бабичев, В.Н. Нейрогуморальная регуляция овариального цикла/ В.Н. Бабичев.-М.: Медицина, 1984.- 224 с.

13. Балаболкин, М.И. Эндокринология //М.И. Балаболкин.- М: "Универсум паблишинг", 1998.

14. Балашов, Н.В. Ветеринарный контроль при искусственном осеменении животных / Н.В.Балашов. М.:Колос, 1980. - 271 с.

15. Березов, Т.Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коров-кин.-М.: Медицина, 1990.- 528 с.

16. Бернет, Ф.М. Клеточная иммунология / Ф.М. Бернет,- М., 1971.352 с.

17. Бернштейн, А.Д., Влияние неэлектролитов на переживаемость сперматозоидов / А.Д.Бернштейн, В.В.Петропавловский // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 1937. - Т.З. - Вып. 1. - С.41-43.

18. Биохимия гормонов и гормональной регуляции // Юдаев H.A., Утешева З.Ф. Гормоны гипоталамуса. -М.: Наука, 1976. С. 10-44.

19. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С.Северина.-2-е изд. М.: ГЭО-ТАР-МЕД, 2004,- 784 с.

20. Боголюбский, С.Н. Происхождение и преобразование домашних животных/ С.Н. Боголюбский.-М.: Госиздат., 1959.- 592 с.

21. Бойков, В.И. Козоводство / В.И. Бойков. JL: Сельхозгиз, 1940.174 с.

22. Боярский, К.Ю. Овариальная стимуляция и фолликулогенез в конце 90-х годов: на пороге будущего / Боярский К.Ю. // Пробл. репрод 1997; Т. 4.-С. 61— 68.

23. Бурков, И.А. Естественные клетки-киллеры у свиноматок в различные периоды полового цикла и в связи с осеменением и супоросностью /И.А.Бурков, Т.П. Трубицына, J1.B. Бабышева // Бюл. ВНИИ физиол., биохимии и питания с.-х. жив.- 1989.- № 1.- С. 62-66.

24. Бухарин, О.В. Окситоцин и вазопрессин регуляторы иммунного гомеостаза / О.В. Бухарин, Н.В. Васильев, Е.П.Володина // Мат. докл. III Все-союз. симпоз. «Регуляция иммунного гомеостаза».- Л., 1982.- С. 129-130.

25. Ветеринарное акушерство, гинекология и биотехника размножения / А.П. Студенцов, В.С.Шипилов, В.Я.Никитин и др.- М.: Колос, 2000.495 с.

26. Виноградов А. Д. Измерение активности сукцинатдегидрогена-зы/Реакции живых систем и состояние энергетического обмена. Пущино, 1979. - с. 98-125;

27. Волков, A.C. Влияние числа активных живчиков в оттаянном семени на оплодотворяемость овец / А.С.Волков // Животноводство. 1974. -№ 10. - С.69-71.

28. Гауровиц, Ф. Иммунохимия и биосинтез антител / Ф. Гауровиц.-М.,1969,- 250 с.

29. Гипотеза о функциональной связи между нейро- иммуно- и глю-комодуляторными пептидами / В.Е.Клуша, Н.А.Абиссова, Э.М. Кукайн и др.// Целенаправленный поиск новых нейротропных препаратов.- Рига: Зи-натне.-1983.-С. 21-30.

30. Говалло, В.И. Иммунология репродукции / В.И. Говалло.- М.: Медицина, 1987,- 304 с.

31. Голубец, Л.В. Повышение эффективности приживляемости за-мороженно оттаянных эмбрионов /Л.В.Голубец, И.С.Кыса, Я.А.Вестфаль // Зоотехния. - 2002. — № 10. - С. 25.

32. Гольдман, И.Л. Оценка биологической полноценности зигот методом культивирования /И.Л. Гольдман, Н.Г. Клецко, В.Д. Волынчук // Сборник исследований по генетике с.-х. животных. 1976. - Вып. 43. -С.107-108.

33. Гонадотропный статус гормонов в крови овец, синхронизация полового цикла /А.Ш.М. Амбарбаев, Б.Х. Аббасов, Г.Г. Герасимова и др.// Сельскохозяйственная биология.-1991 .-№2.-С.71 -76.

34. Громова, В. Об ископаемых останках коз/ В. Громова // Проблемы происхождения эволюции домашних животных.- М.-Л.: Изд. АН СССР,1940,- С. 53-62.

35. Давиденко, В.М. Спермопродукция баранов асканийской тонкорунной породы в зависимости от сезонных и метеорологических факторов / В.М. Давиденко, И.С.Шинкаренко, О.И.Игнатенко // Овцеводство. 1979. -№9. - С.94-100.

36. Давиденко, В.М. Способность спермы переносить глубокое замораживание в зависимости от индивидуальных особенностей баранов / В.М. Давиденко, И.С.Шинкаренко, О.И.Игнатенко // Овцеводство-Киев- 1980. -Вып. 19.-С.98.

37. Дмитриева, Т.А.Топографическая анатомия домашних животных /Дмитриева Т.А., Саленко П.Т., Шакуров М.Ш.- КолосС, 2008.

38. Донская, В.И. Синхронизация охоты у овец инъекциями прогестерона с пролонгаторами / В.И.Донская, Л.П.Рак, П.В.Сурков // Тез. докл. на-учно-произв. конф. ВНИИОК Ставрополь, 1968. - С.78-82.

39. Донская, В.И. Сравнительная оценка различных способов стимуляции полиовуляции у овец./ В.И.Донская, М.М.Кунижев // Разведение овец и коз. Шерстоведение: Сб. науч. Тр. /ВНИИОК Ставрополь, 1983. - С. 8790.

40. Донская, В.И.Сравнительная оценка эффективности интраваги-нального и перорального применения ацетата мегестрола при синхронизации охоты/ В.И. Донская, Я.П. Рак, М.И. Язвинский // Тр. ВНИИОК.- Ставрополь, 1972,- вып. 32,- т.1.- С. 206-209.

41. Егизарян, Г.Г. Динамика концентрации половых гормонов в крови коз/ Г.Г. Егизарян //Доклады Рссельхозакад.-1993.-№6.-С.29-30.

42. Емельяненко, П.А. Иммунология животных в период внутриутробного развития / П.А. Емельяненко.- М.: Агропромиздат, 1987.-215 с.

43. Желтобрюх, H.A. Влияние дозы и степени разбавления на оплодотворяющую способность замороженной спермы /Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко, А.-М.М.Айбазов // Повышение Повышение продуктивности овец и коз: Сб. науч. тр. / ВНИИОК. Ставрополь, 1990. - С. 67-70.

44. Желтобрюх, H.A. Влияние сезонных факторов и режима использования на спермопродукцию баранов / Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко, А.-М.М.Айбазов // Животноводство. -1985. №3. - С. 17-21

45. Желтобрюх, H.A. Воспроизводство овец / Н.А.Желтобрюх, В.Я.Никитин. Ставрополь, 2000. - 160 с.

46. Желтобрюх, H.A. Основные причины снижения оплодотворяющей способности барана / Н.А.Желтобрюх, В.К.Ивахненко // Тр./ ВНИИОК. -1976.-Вып. 38. С.77-84.

47. Желтобрюх, H.A. Повышение эффективности использования ценных баранов в весенне-летние месяцы /H.A. Желтобрюх, В.К. Ивахненко, А.-М.М. Айбазов//Овцеводство 1990 -№1-С. 17-18.

48. Завадовский, М. Теория и практика гормонального метода стимуляции многоплодия сельскохозяйственных животных / М.М. Завадовский М.: Сельхозиздат, 1963.- 677с.

49. Завадовский, М.М. Активизация половой циклики у овец в "мертвый" сезон и организация уплотненных окотов / М.М.Завадовский // Вестник Московского университета. 1945. - Вып. 2. - С. 18-21.

50. Завадовский, М.М. Нельзя ли вызывая искусственную овуляцию у овец достигнуть многоплодия? / М.М.Завадовский, Л.П.Падучева // Труды по динамике развития. 1935. - Т. IX. - С. 139-151.

51. Зеленский, Г.Г. Козоводство / Г.Г. Зеленский.- 1981.- 175 с.

52. Иванов, И.И. Искусственное оплодотворение у млекопитающих / И.И.Иванов // Экспериментальное исследование: СПб. 1907. - С. 134.

53. Инструкция по технологии работы организаций по искусственному осеменению и трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных. Москва .- 2000.- 174 с.

54. Иолчиев, Б.С. Молочная продуктивность коз зааненской породы/ Б.С. Иолчиев, И.С. Марзанов, Е.А. Чалых // Овцы, козы, шерстное дело, 2000.- №2.- С. 55-56.

55. Исследование крови мериносовых овец фотоэлектрическим эрит-рогемометром МРТУ-42-1443-61 / И.И. Сипко, К.Д. Сазаруков, Х.Х. Шаманов, И.В. Харченко // Труды СХИ, Ветеринария.- Ставрополь, 1968.-Вып. 29.-С.358-364.

56. Исследование рекомбинантного лактоферрина человека, секре-тируемого в молоко трансгенных мышей/А.В. Соколов, М.О. Пулина, А.В. Кристиян и др. // ДАН, т.411, №2,- 2006,- 1-3.

57. К вопросу о коррекции иммунодефицитного состояния телят в преднатальный период/ В.Н. Денисенко, ЕС. Воронин, Г.Н. Печникова и др.// Сельскохозяйственная биология. 1992. - № 6. - С. 122-127.

58. Калашник, И.А. Стимулирующая терапия в ветеринарии / И.А. Калашник. 2-е изд., перераб. и доп. - Киев.: Урожай, 1990. - 160 с.

59. Калпокас, В.К. Технология трансплантации эмбрионов /

60. B.К.Калполакс, О.В.Столярова, П.Н.Легостаев // Овцеводство. 1990. - № 1. -С. 20-21.

61. Камбаралиев, А. Воспроизводительная способность пуховых коз южнокиргизского типа/ А. Камбаралиев //Генетические аспекты селекции в Киргизии. Генетика, селекция и разведение животных.-1986.-С.36-41.

62. Касымов, К. Трансплантация эмбрионов у овец / К. Касымов, Г. Алимжанов, Н. Науанов и др. // Зоотехния. 1994. - № 8. - С. 29-30.

63. Касымов, К.Т. Биотехнологические методы размножения ценного генофонда овец в Казахстане / К.Т.Касымов // Аграрная наука, 2002. № 2.1. C.19-20.

64. Касымов, К.Т. Глубокое замораживание спермы баранов в жидком азоте / К.Т.Касымов, Ж.Б.Ашимов // Пути повышения продуктивности животноводства в Казахстане.- Алма-Ата. 1975. - С.48-49.

65. Касымов, К.Т. Оплодотворяющая способность спермы при глубоком замораживании / К.Т.Касымов, Ж.Б.Ашимов // Овцеводство, 1975. № 8.-С. 9-11.

66. Киршенблат, Я.Д. Телергоны вещества, выделяемые животными в окружающую среду для воздействия на другие организмы/ Я.Д. Киршенблат // Журнал общей биологии, 1963.- T.XXIV.- Вып.6.-С. 120-123.

67. Клиническая иммунология /Под ред. A.B. Караулова. М.: Мед. ин-форм. агентство, 1999. - 604 с.

68. Клиническая иммунология /Под ред. A.B. Караулова. М.: Мед. информ. агентство, 1999. - 604 с.

69. Клиническая иммунология: Руководство для врачей / Под ред. Е.И. Соколова. М.: Медицина, 1998. - 272 с.

70. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии / И.П. Кондрахин, Н.В. Курилов, А.Г. Малахов и др.- М.: Агропромиздат, 1985.- 285 с.

71. Клинский, Ю.Д. Использование простагландинов для регуляции воспроизводительной функции овец / Д.Ю.Клинский, А.Н.Алексеенко // Животноводство. 1980. - № 4. - С. 54-57.

72. Клинский, Ю.Д. Синхронизация половой охоты овец реформаном и анипростом/ Ю.Д. Клинский, A.C. Сторожук, М.М, Гитинов //Доклады ВАСХНИЛ, 1992.-№2.-С.38-39.

73. Клуша, В.Е. Модель структурно-функциональной организации тканевого гормона ангиотензина / В.Е.Клуша, Г.И.Чипенс // Молекулярная генетика и биофизика.- Киев, 1976.-Вып. 1.- С.32-39.

74. Кнорре, А.Г. Краткий очерк эмбриологии человека с элементами сравнительной, экспериментальной и патологической эмбриологии / Л.: Медицина, 1967.-267с.

75. Кондрашова М.Н. Взаимодействие процессов переаминирования и окисления карбоновых кислот при разных функциональных состояниях тканей// Биохимия. 1991. - т. 56. - вып. 3. -С. 388-405

76. Кржишковский, К.Н. Наблюдение за жизнеспособностью сперматозоидов высших животных / К.Н.Кржишковский, Г.Н.Павлов //Архив ветеринарных наук. 1924. - Т. 1.-С. 126-130.

77. Кривохарченко, A.C. Развитие мышиных эмбрионов in vitro в среде без белка в зависимости от количества зародышей в микрообъеме среды/ А.С.Кривохарченко, Л.И.Вильянович, Л.В.Татаринова, В.П.Рябых // Онтогенез, 24, 6, 1993,- С. 53—60.

78. Криоконсервация спермы сельскохозяйственных животных /А.Д.Курбатов, Е.М.Платов, Н.В.Корбан и др. Л.: Агропромиздат, Лен. отд. - 1988.-256 с.

79. Кудрявцев, А.А. Исследования крови в ветеринарной диагностике, ч.1 / А.А.Кудрявцев.- М.: Госсельхозиздат, 1952. -375с.

80. Кукайн, Э.М. Влияние нейропептидов и нейромедиатров на гуморальную иммунную систему / Э.М. Кукайн // Тез. докл. 4 Всесоюз. симпоз. По целенаправленному изысканию физиологически активных веществ/ Ин-т орган. Синтеза АН ЛатвССР.- Рига, 1981.- С. 19.

81. Кукайн, Э.М. Влияние нейропептидов и нейромедиатров на гуморальную иммунную систему / Э.М. Кукайн // Тез. докл. 4 Всесоюз. симпоз. По целенаправленному изысканию физиологически активных веществ/ Ин-т орган. Синтеза АН ЛатвССР.- Рига, 1982.- С. 19.

82. Культура животных клеток. Методы./Ред. Р. А. Фрешни.- М. -Мир., 1989,- 333 с.

83. Л.К.Добродеева, В.П.Белозеров, Н.И.Кондаков, Н.В.Цимбаленко, Л.П.Шилина, К.Г.Добродеев. Пищевые добавки водорослевого происхождения для профилактики и лечения иммунодефицитных состояний. Архангельск, 1996. 12 е.;

84. Ленинджер А. Основы биохимии. М.: Мир - 1991 - 384 с.

85. Лилли, Р. Патологическая техника и практическая гистология / Р. Лилли,- М.: Мир, 1969.- 646 с.

86. Логвинов, Д.Д. О массовости патологических родов у первотелок / Д.Д.Логвинов // Зоотехния. 1993. - №7. - С.39-40.

87. Логинова, Н.В. Искусственное вызывание овуляции и охоты у овец / Н.В.Логинова // Тр. /ВНИИОК. 1939. - Вып. 10. - С. 93-124.

88. Логинова, Н.В. Синхронизация охоты у овец / Н.В.Логинова, В.И.Донская, Л.П.Рак //Животноводство. 1966. - № 9. - С. 70-74.

89. Лозина-Лозинский, А.К. Жизнеспособность и анабиоз при низких температурах у животных / А.К.Лозина-Лозинский // Анабиоз. М.: АН СССР, - 1955.-С. 241-244.

90. Ломакин, М.С. Иммунобиологический надзор / М.С. Ломакин. -М.: Медицина, 1990,- 256 с.

91. Лопырин, А.И. Биология размножения овец / А.И.Лопырин. М.: Колос, 1971.-318 с.

92. Лопырин, А.И. Влияние организма матери на изменение экстерьера ягнят при межпородных пересадках зародышей / А.И.Лопырин, Н.В.Логинова, П.Л.Карпов //Труды совещания по биологическим основам повышения продуктивности. -М., 1952. С. 120-124.

93. Лопырин, А.И. Действие различных прогестагенных препаратов при стимуляции синхронизации охоты у овец / А.И. Лопырин, В.И. Донская, Л.П. Рак, П.В. Сурков // Овцеводство, 1969,- № 8.- С. 27-30.

94. Лопырин, А.И. Искусственное осеменение овец / А.И.Лопырин, Н.В.Логинова. М.: Сельхозгиз, 1960. - С. 23-46.

95. Лопырин, А.И. Краткие итоги и перспективы дальнейших исследований по замораживанию семени барана / А.И. Лопырин // Овцеводство. -1970,-№9.-С. 29-32.

96. Лопырин, А.И. Опыт межпородной пересадки зародышей / А.И.Лопырин, Н.В.Логинова, П.Л.Карпов // Советская зоотехния. 1950. -№8. - С.50-64.

97. Лопырин, А.И. Опыт скрещивания коз с туром и серной/ А.И.Лопырин, Н.В. Логинова, А.П. Инякова // Труды Тебердинского государственного заповедника, вып. 2,- Теберда, 1960.- С.-217.

98. Лопырин, А.И. Опыт скрещивания овец и коз с туром и серной/ А.И. Лопырин, Н В. Логинова, А.П. Инякова/ЛГруды Тебердинского государственного заповедника. Вып. 2. Ставропольское книжное издательство, 1960 -С. 217-235.

99. Лютинский, С.И. Коррекция пептидными биорегуляторами им-мунодефицитных состояний у животных / С.И. Лютинский // Актуальн. проблемы ветеринарии: Мат. междунар. конф./ Алтайский агр. ун-т.-Барнаул, 1995,-С 70-71.

100. Мадаминов, Х.А. Синхронизация полового цикла у коз/ Х.А. Ма-даминов //Сб.науч. тр. Эффективные приемы и методы селекционно-племенной работы в овцеводстве и козоводстве.-Ставрополь, 1988.-С.87-90.

101. МакДермотт, М.Т. Секреты эндокринологии / М.Т. МакДермотт,-М.- СПб: Бином Невский Диалект, 2007.

102. Максимов, H.A. Внутренние факторы устойчивости растений к морозу и засухе / H.A. Максимов // Тр. прикладной ботаники, генетики. -1929. T.XXII. - Вып. I. - С. 1 -41.

103. Максимов, H.A. О вымерзании и хладостойкости растений /Н.А.Максимов. СПб. - 1913. - С.330.

104. Максимов, Ю.А. Рациональное использование племенных производителей / Ю.А. Максимов. М. - 1964. - С. 223.

105. Максимов, Ю.Л. Половая иммунная избирательность коров в зависимости от их воспроизводительных функции состояния здоровья /Ю.Л. Максимов, А.К. Михайловская // Сельскохозяйственная биология,- № 6.-1993.-С. 59-61.

106. Манк, М. Биология развития млекопитающих. Методы / Манк.-М: Мир.-1990.-с. 406.

107. Мартыненко, H.A. Гистология и эмбриология домашних животных / H.A. Мартыненко Морфологическая оценка качества ранних эмбрионов.-М., 1978.-С. 76-79.

108. Маслянко, Р.П. Формирование В- системы иммунитета у животных: обзор / Р.П. Маслянко // С.-х. биология.- 1987.-№ 9.-С. 99-104.

109. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: Пособие по фармакотерапии для врачей. 1 ч. / М.Д. Машковский.- Вильнюс, 1994.-543 с.

110. Менькин, В.К. Кормление сельскохозяйственных животных / В.К. Менькин.- М.: Колос, 1997,- 303 с.

111. Методические рекомендации по определению естественной резистентности организма овец // ВНИИОК. Ставрополь, 1987. -С.45.

112. Мещеряков, Ф.А. Патент РФ Способ получения биологическиактивного препарата из тканей мозга RU (11) 2071335 (13) С1, (51) 6 А61К35/ Заявка: 94035229/15.- 5 с.

113. Мещеряков, Ф.А. Физиология систем крови, лимфы и иммунитет / Ф.А. Мещеряков,- Ставрополь: Изд-во СГАУ, 2003.-100 с.

114. Милованов, В.К. Биология воспроизводства и искусственное осеменение животных/ В.К. Милованов. М.: Сельхозиздат, 1962. - 696 с.

115. Милованов, В.К. Уровень и перспективы научных исследований / В.К.Милованов, И.И.Соколовская // Животноводство. 1980. - № 10. - С.48-50.

116. Модели активных центров тканевых гормонов / В.Е. Клуша, З.П. Ауна, Н.В. Мышлякова, H.A. Макарова // Тез. докл. Всесоюз. съезда фармакологов «Фармакология здравоохранению». — Л., 1976.-С. 101.

117. Мозгов, И.Е. Фармакология: Руководство для ветеринарных врачей / И.Е. Мозгов. Изд. 3-е перераб. и доп. - М.: Сельхозгиз, 1961. - 581 с.

118. Морозов, В.А. Сохранение семени барана в замороженном состоянии посредством гипертонических растворов / В.А.Морозов //Докл. ВАСХНИЛ. 1957.-№ 11.-С.44-48.

119. Мусиенко H.A., Атлас по гистологии: Учебное пособие для вузов / H.A. Мусиенко, П.И. Бреславец, И.Н. Сегал.- Издательство: Академический проект, БГСХА, 2006.

120. Наук, В.А. Влияние технологической обработки семени на проницаемость мембран живчиков и устойчивость их белково-липидных комплексов / В.А.Наук // Овцеводство. 1972. - № 10. - С. 31-33.

121. Наук, В.А. К вопросу о малой устойчивости живчиков барана при глубоком замораживании семени / В.А.Наук, В.К.Скворцова // Овцеводство. 1970. -№ 8.-С. 23-24.

122. Наук, В.А. Сохранение семени барана и изменение содержания аминокислот при низких температурах / В.А.Наук // Разведение и кормление с.-х. животных. Кишинев: Штиинца, 1973. - С. 111-113.

123. Никитин, И.Н. Организация и экономика ветеринарного дела: Учеб. для студ. вузов. / И.Н. Никитин, В.Ф. Воскобойник М.: ВЛАДОС, 1999.- 384 с.

124. Нормы технологического проектирования козоводческих объектов НТП-АПК 1.10.03.002-02/ МинСельхоз РФ.- Москва, 2002.-83 с.

125. Общая и экологическая иммунология / М.М. Серых, О.Н. Маку-рина, A.M. Петров и др.- Самара: Самарский университет.-2000.- с. 174.

126. Орехов, A.A. Воспроизводство и выращивание молодняка коз/ A.A. Орехов //Овцеводство, 1981.-№ 4.- С. 39.

127. Орлова, Г.А. О содержании прогестерона в крови овец при различных уровнях кормления/ Г.А.Орлова, В.В. Васильев, О.О. Губарева //С./х. биология.-№2.-С77-80.

128. Осташко, Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей / Ф.И.Осташко. Киев.: Урожай, 1968. - 342 с.

129. Осташко, Ф.И. Применение фотоэлектроколориметра для определения концентрации семени быков / Ф.И.Осташко // Мясное и молочное животноводство. 1960. -№ 2. -С. 16-18.

130. Остин, К. Гормональная регуляция размножения млекопитающих /Остин К., Шорт P.M.- М.: Мир, 1987. 187 с.

131. Отечественные экономико-географы. XVIII XX века / Под редакцией H.H. Баранского, Н.П. Никитина, Ю.Г. Саушкина,- М.: Государственное учебно-педагогическое издательство, 1957.- 328 с.

132. Отчет о научно-исследовательской работе (НИР). Ставрополь, ГНУ СНИИЖК, 2005. - С. 16-17.

133. Падучева, АЛ. Гормональные препараты в животноводстве / АЛ.Падучева; М.: Россельхозиздат, 1979. С. 102.

134. Патент РФ № 2101013 от 1998 г. Андрюшина В. А., Савинова Т.С., Скрябин К.Г., Зейналов O.A. Универсальное средство для ингибирова-ния репродукции позвоночных животных.

135. Первиков Ю. В., Эльберт JI. Б. Иммунные комплексы при вирусных инфекциях. М: Медицина; 1984 .-146с

136. Петров Р.В. Фактор, угнетающий миграцию лимфоцитов и фактор роста иммунокомпетентных клеток (ИЛ-1, ИЛ-2) / Р.В. Петров-М.,1984.-С. 18-19.

137. Петров, A.M. Динамика основных иммунологических параметров телят-трансплантантов / А.М.Петров, Е.С.Воронин, М.М.Серых. -М.: 1999.184 с.

138. Петров, A.M. Методические рекомендации по изучению резистентности телят-трансплантантов и се коррекции / A.M. Петров, Е.С. Воронин, М.М. Серых -М.: РАСХН. 1995 -78с.

139. Петров, A.M. Стимуляция иммунной системы у телят-трансплантантов / A.M. Петров, Е.С. Воронин //XXV Всемирный ветеринарный конгресс, 3-9 сентября 1995. -Иякогама. Т 1.З.1.- С.-102-106.

140. Петров, Р.В. В-лимфоциты регуляторы / Р.В. Петров, И.М. До-зиров // Иммунологические аспекты биологии развития.- М., 1984,- С. 5-15.

141. Петров, Р.В. Иммунная биотехнология / Р.В. Петров // Проблемы ветеринарной иммунологии 1985.- С. 9-13.

142. Петров, Р.В. Иммунология / Р.В.Петров, А.А.Михайлова //Итоги науки и техники. / ВИНИТИ,- М., 1983. Т. 12. - С. 63.

143. Платов, Е.М. Замораживание семени барана в лактозо-желточно-этиленгликолиевой среде /Е.М.Платов //Овцеводство 1965. - № 9. - С. 11.

144. Платов, Е.М. Замораживание семени барана в синтетической по-лисахаридной среде / Е.М.Платов, В.А.Малиновская // Животноводство. -1977.-№ 7 С.54-57.

145. Платов, Е.М. Замораживание спермы барана в средах с полисахаридами / Е.М.Платов, Н.Я.Аванов, Н.Г.Балашов // Овцеводство. 1980. - № 10.-С. 38-39.

146. Платов, Е.М. О причинах низкой суягности овец от замороженного семени / Е.М.Платов // Овцеводство. 1970. - № 8. - С. 25-26.

147. Платов, Е.М. Пути и перспективы замораживания спермы / Е.М.Платов, А.М.Малиновский, Л.И.Леонтьева и др. // Овцеводство. 1981. - № 9. - С. 34-36.

148. Платов, Е.М. Разработка и практическое применение технологии замораживания спермы баранов /Е.М.Платов. // Научн.-практич. конф. по овцеводству и козоводству: Тез. научн. сообщений / ВНИИОК. Ставрополь. -1982.-С.254.

149. Платов, Е.М. Эффективность замораживания спермы барана / Е.М.Платов, А.С.Волков // Животноводство. 1979. - № 5. - С.53-56.

150. Плященко, С.И. Повышение естественной резистентности организма животных основа профилактики болезней /С.И.Плященко // Ветеринария. - 1991. -№6 - С. 49-52.

151. Полифункциональность некоторых анальгезирующих пептидов / В.Е.Клуша, Н.А.Абиссова, Ш.В.Свирскис и др. // Тез. докл. конф. «Синтез и изучение физиологически активных веществ» (30-31 октября 1980 г.)- Вильнюс, 1980.-С. 58

152. Полянцев, Н.И. Ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных /Полянцев Н.И., Подберезный В.В. Ростов: Феникс 2001,480 с.

153. Поманский Е.А. Уплотнение окотов в связи с половой сезонностью каракульских овец / Е.А.Поманский, В.И.Стояновская // Проблемы животноводства. 1936. - № 3. - С. 77-82.

154. Поповиченко, Н.В. Роль гипоталамической нейросекреторной системы в приспособительных реакциях организма/ Н.В. Поповиченко.- Киев: Наукова думка, 1973.- с.123.

155. Практикум по акушерству, гинекологии и биотехнике размножения животных / В.Я.Никитин, М.Г.Миролюбов, В.П. Гончаров и др.- М: КолосС, 2003- 208 с.

156. Практикум по биохимии / под ред. C.B. Северина, Г.А. Соловьевой,- М.: Издательство Московского университета, 1989.-509 с.

157. Практикум по кормлению сельскохозяйственных животных / Е.А. Петухова, Н.Т. Емелина, B.C. Крылова и др.- М.: ВО Агропромиздат, 1090.253 с.

158. Прикладная иммунология / Под ред. A.A. Сохина, Е.Ф. Чер-нушенко. Киев. 1984. - 320 с.

159. Применение простагландинов для синхронизации половой охоты у овец в случной сезон /А.-М.М.Айбазов, С.Н.Слипченко, К.К.Ашурбегов и др. // Сб. науч. трудов ВНИИОК. вып. 42 //Ставрополь. - 1997. - С. 66-68.

160. Прокофьев, М.И. Регуляция размножения сельскохозяйственных животных / Прокофьев М.И. Л.: Наука, 1983.-264 с.

161. Рабочев, В.К. Новые криопротекторы для замораживания спермы баранов / В.К.Рабочев, А.М.М.Айбазов, К.К.Ашурбегов // Современные достижения науки и практики в области селекции овец и коз: Тезисы науч. сообщен. Ставрополь, 1991. - С.233-234.

162. Рабочев, В.К. Пути повышения эффективности использования метода замороженной спермы /В.К. Рабочев, А.-М.М.Айбазов, К.К. Ашурбе-гов // Генетика, селекция и качество продукции овец и коз: Сб. науч тр. / ВНИИОК. Ставрополь, 1992. - С.109-114.

163. Рабочев, В.К. Разработка системы рационального использования высокоценных баранов-производителей и овцематок /В.К. Рабочев, А.-М.М. Айбазов, М.М. Кунижев // Мат. науч.-произв. конф по овцеводству и козоводству / ВНИИОК. Ставрополь, 1992. - С. 52 - 62.

164. Разведение сельскохозяйственных животных с основами частной зоотехнии и промышленного животноводства/Н.Г. Дмитриев, А.И. Жигачев, A.B. Виль и др.,- Л.: Агропромиздат, 1989.-511 с.

165. Результаты трансплантации зародышей у крупного рогатого скота / Н.И.Сергеев, Ю.Д.Клинский, И.Я.Шихов и др. // Эндокринология и трансплантация зигот сельскохозяйственных животных. М.: Колос. - 1982. -С. 16-42.

166. Рекомендации по диагностике и профилактике иммунных дефицитов и аутоиммунных заболеваний у животных / И.М. Карпуть, J1 М. Пивовар, И.З. Севрюк и др. Витебск, 1992. - 74 с.

167. Репродуктивная эндокринология /Под ред. С.С.К. Йена, Р.Б. Джаффе,- М: Медицина, 1998.- С. 120—125, 318—353, 531—559.

168. Розен, В.И. Механизм действия гормонов на клетку // Основы эндокринологии / В.И.Розен. М.: Высшая школа, 1984. - С. 186-196.

169. Руководство по эндокринной гинекологии /Под ред. Е.М.Вихляевой. М.: Мед.информиздат, 1997.- 768 с.

170. Санников, М.Ю. Разведение молочных коз в хозяйствах Российской Федерации /М.Ю.Санников, С.И. Новопашина //СНИИЖК,- Ставрополь, 2005.

171. Сеитов, М.С. Морфофункциональная характеристика системы «мать-плод» коз оренбургской пуховой породы / М.С. Сеитов //Автореф. на соискание ученой степени доктора биологических наук, Оренбург, 2001.- 46 с.

172. Сергеев, Н.И. Биотехника трансплантации эмбрионов / Н.И.Сергеев, С.А.Мазепкин // Овцеводство. 1987. - №2. - С. 36-40.

173. Сергиенко, А.И. Профилактика бесплодия крупного рогатого скота/А.И.Сергиенко.- М.: Колос, 1984.- 188 с.

174. Середин, В. А. Цикл воспроизводства, половой цикл и его регуляция /В. А. Середин Журнал

175. Середин, В.А. Биотехнология воспроизводства в скотоводстве: учебное пособие / В.А. Середин. Нальчик: ИЦ "Эль-Фа", 2004.- 472 с.

176. Смирнов, И.В. Действие некоторых физических и биологических факторов при замораживании спермы барана / И.В.Смирнов, В.М.Давиденко, О.И.Игнатенко // Животноводство. 1978. - № 5. - С.58-60.

177. Смирнов, И.В. Сохранение семени сельскохозяйственных животных при температурах -78 ОС, -183 ОС / И.В.Смирнов // Социалистическое животноводство. 1951. - № 1. - С.94-95.

178. Соколов В.Д. Иммуностимуляторы в ветеринарии / В.Д. Соколов, H.JI. Андреева, A.B. Соколов // Ветеринария. 1992. - № 8. - С. 49-50.

179. Соколовская, И.И. Иммунология воспроизведения животных / И.И. Соколовская, В.К. Милованов.- М.: Колос, 1981.- 264 с.

180. Соколовская, И.И. О значении акросомы в оценке семени самцов / И.И.Соколовская, Р.Н.Овайдис, А.Абилов // Животноводство. 1981- № 10. - С.45-47.

181. Соколовская, И.И. Пересадка зигот / И.И.Соколовская // Проблемы оплодотворения с.-х. животных. М., 1957. - С. 87-98.

182. Солсбери, Г.У. Теория и практика искусственного осеменения коров в США / Г.У.Солсбери, Н.Л. Ван-Демарк. М.: "Колос", 1966.- 527 с.

183. Справочник. Овцеводство и козоводство / У.Х. Архипов, В.М. Виноградова, П.А. Воробьев и др.- М.: Агропромиздат, 1990,- 334 с.

184. Сторожук, A.C. Синхронизация охоты у овец алтайской тонкорунной породы с помощью простагландинов /A.C. Сторожук //Тез.докл. ВНТК Использование гормональных препаратов в животноводстве.-М.:ВИЖ, 1991.-С.33-34.

185. Студенцов А.П. Ветеринарное акушерство и гинекология. -М.: Сельхозгиз, 1953. 502 с.

186. Студенцов, А.П. Акушерство, гинекология и биотехника размножения животных / А.П.Студенцов, B.C. Шипилов, В.Я. Никитин и др. М: КолосС. 2005.-495 с.

187. Студенцов, А.П. Диагностика беременности и бесплодия с.-х. животных / А.П.Студенцов.-М.: Сельхозгиз, 1949,- 1950. 102 и 135 с.

188. Судаков, В.Г. Использование простагландинов в свиноводстве/

189. B.Г. Судаков // Зоотехния, 1994.-№2 .-С.24-25.

190. Сурков, П.В. Технология искусственного осеменения и ягнения овец с синхронизированной охотой / П.В.Сурков // Овцеводство. 1970. - № 9.-С. 24-26.

191. Сухих, Г.Т. Иммунитет и генитальный герпес / Г.Т. Сухих, JI.B. Ванько, В.И. Кулаков. Н.Новгород: Изд-во НГМА, 1997. - 224 с.

192. Сысоев, A.A. Физиология размножения сельскохозяйственных животных / A.A. Сысоев. М.: Колос, 1978.- 360 с.

193. Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин,- Биологическая химия М.: Медицина, 1990,- 528 с.

194. Тезисы докл. II респ. Науч. Конф. по физиол. и биохимии животных.- Львов, 1963.- 63 с.

195. Теоретические и практические аспекты трансплантации зигот в племенном овцеводстве / М.М.Тойшибеков, Е.Беталханов, Б.Орзалиев и др. // Генетика и селекция сельскохозяйственных животных. Алма-Ата, 1986.1. C. 53-56.

196. Тишнер, X. Фотометрическое определение иммунных реагентов / Х.Тишнер // Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля.-М.: Медицина, 1987,-С. 115-120.

197. Тойшибеков, М.М. Трансплантация эмбрионов в овцеводстве: Автореф. . дис. докт. с-х. наук / М.М.Тойшибеков. Алма-Ата. -1986. - 32 с.

198. Трансплантация эмбрионов у овец / И.Я.Шихов, Л.А.Истомина, Э.Поладов и др. // Овцеводство. 1985. - № 6. - С. 25-27.

199. Урусов С.П. Книга о козе. /С.П. Урусов, под ред. Гребнева Я.В., Киев 2005

200. Урусов, С. П. Коза, ее разведение, содержание и сельскохозяйственное значение /С. П. Урусов.- С.-Петербург, 1905,- 95 с.

201. Урусов, С.П. Коза, ее разведение, содержание и хозяйственное значение/ С.П. Урусов // Изд. 4-е переработанное и дополненное проф. И.В. Петрухиным. -М.: Воскресенье, 1992.- С. 49-51.

202. Физиология животных и этология / В.Г. Скопичев, Т.А. Эйсы-монт, Н.П. Алексеев и др.- М.: Колос, 2003.- 720 с.

203. Хаитов, P.M. Экологическая иммунология / P.M. Хаитов, Б.В.Пинегин, Х.И.Истамов. М.: Изд-во ВНИРО, 1995. - 219 с.

204. Хилькевич, С.Н. Синхронизация половых циклов коров в программе трансплантации эмбрионов/С.Н. Хилькевич, А.Г. Самоделкин, Е.А. Тяпугин // Зоотехния, 1993.-№4 .-С.24-25.

205. Цимборович, А.Ф. Влияние светового режима на половые функции у овец / А.Ф.Цимборович // Научные записки Херсонского сельскохозяйственного института. 1955 - Вып. 5. - С. 8-12.

206. Шайдуллин, И.Н. Усовершенствование метода замораживания семени барана: Автореф. . дис. канд. биол. наук. / И.Н.Шайдуллин. Дуб-ровицы, 1980. - 24 с.

207. Шергин Н.П. Биохимия сперматозоидов сельскохозяйственных животных/ Н.П. Шергин, М: Колос, 1967.- 240 с.

208. Штельнер, А. Фагоцитоз / А. Штельнер // Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля.- М.: Медицина, 1987.- С. 378-388.

209. Штельнер, А. Фагоцитоз / А. Штельнер // Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля.- М.: Медицина, 1987.- С. 378-388.

210. Эрнст JI.K. Репродукция животных/ Эрнст J1.K., , Варнавский А.Н. М: МСХ, Департамент кадровой политики и образования, 2007.- 282 с.

211. Эрнст, JI.K. Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных / Л.К.Эрнст, Н.И.Сергеев. М.: Агропромиздат, 1989. - С. 127-129.

212. Эфиры ацетомепрегенола: синтез и оценка биологического действия /О.А. Зейналов, В.А. Андрюшина, Т.С. Савинова и др. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии.- 2004.-№2. с. 8 - 11.

213. Ю.С.Оводов. Избранные главы биоорганической химии. //Сыктывкар, Сыктывкарский ун-т. 1998, 222 е.;

214. Absence of inhibition by hyper prolactinaemia on ovarian response to exogenous gonadotrophin/ M. Aono, T. Yasuba, T. Shioji e.a.// Acta endocrinol, Vol.89, 1978.- P.142-148.

215. Adolf M., Ronot Z., Froger В., Corvol M.T., Forest N./ 1983.-Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, N.Y, Tokio.- P.-377.

216. Armstrong, D.T Factors influencing success of embryo transfer in sheep and goats/ D.T.Armstrong, G.Evans // Teriogenology. 1983. - 19: P. 3142.

217. Armstrong, D.T. and Evans, G. 1983. Factors influencing success of embryo transfer in sheep and goats. Theriogenology. 19: 31-42

218. Armstrong, D.T. Blockade of spontaneous and LH-enduced ovulation in rats by indomethacin, an inhibitor of prostaglandin synthesis / D.T. Armstrong, R.L. Grinwich // Prostaglandins. 1972. - N 1. - P.21.

219. Armstrong, D.T., Pfitzner, A.P., Warnes, G.M. and Seamark, R.F. 1983. Superovulation treatments and embryo transfer in Angora goats. J. Reprod. Fert. 67: 403-410

220. Armstrong, D.T., Pfitzner, A.P., Warnes, G.M., Ralph, M.M. and Seamark, R.F. 1983. Endocrine responses of goats after induction of superovulation with PMSG and FSH. J. Reprod. Fert. 67: 395-401

221. Averill R.L.W., Rowson L.E.A. // J. Endocrinology. 1964. -16. -№2. - P.326-336.

222. Ayalon, N. Fertility losses in normal cows and repeat of breeders. Proc. 6th. Int./ N. Ayalon, J. Weis, J. Lewis // Congr. Anim. Reprod. 1978. -V.l. -P.393-396.

223. Badet M.T., Immunitary relations between mother and embryo during gestation / P. Chateaureynaud, C. Mayer // A comparative study in lower and higher vertebrates // Develop. Comp. Immunol. 1983. - Vol. 7. - P. 731-734.

224. Baird D.T. Local utero ovarian relationships. // In. "Control of ovulation". Crighton B.B., Foxcroft G.B., Haynes N.B., Lamming G.E., eds. Butterworths. London/-1978 - p.217-233.

225. Baker, A.A. Effect of PMSG, HSG or GnRH on ovulation in sheeps / A.A. Baker, G.A. Snaw, B.R. Donwey // J. Anim. Sci. 1974. - V.39. - N 1. - P. 197

226. Barraclough, Ch. A. Evidence that the hypothalamus responsible for and rogeninduced sterility of the female rat / Ch. A. Barraclough, R.A. Gorski // Endocrinology. 1961. - V.68. N1. P. 68-79.

227. Bearden, H. Joe; Fuquay, John W. Applied Animal Reproduction Fourth Edition 1997. 35 lp. Roston Publishing Company, Inc.

228. Bellows, R.A. and Short, R.E. 1972. Superovulation and multiple births in beef cattle. J. Anim. Sci. 34 (Suppl. 1): 67-79.

229. Benifla J.L. Induced apoptosis and expression of related proteins in granulosa cells from women undergoing IVF: a preliminary study / J.L. Benifla, C. Sifer, A.F.Bringuer // Hum Reprod 2002; 17 (4).-P. 916—920

230. Bennet, H.P.J. Peptide hormones and their analogues: distribution, clearance from the circulation, and inactivation in vivo / H.P.J. Bennet, C. McMartin //Pharmacol. Rev.- 1979.-Vol. 30.- P. 248-282.

231. Berhman, H.R. Regulation of ovarian cholesterolesrs. Evidence for the enzymathic sites of prostaglandin induced loss of corpus luteum function / H.R. Berhman, G.I. Macdonald, R.O. Greep //Lipids.-197l.-Vol69.-P.791-796.

232. Betteridge K.J. Embryo transfer in farm animals. A review of techniques and Applications. Agriculture Canada Monograph. - 1977. - 16. - P. 3441.

233. Betteridge, K.J. 1977. Techniques and results in cattle: Superovulation, p. 1-9. In: Embryo Transfer in Farm Animals. K.J. Betteridge (ed.), Monograph 16, Agriculture Canada, Ottawa.

234. Betteridge, K.J. Collection, description and transfer of embryos from cattle 10-16 days after oestrus/ K.J. Betteridge, M.D. Eaglensome, G.C.B.Randall, D. Nitchell // Reprod and Fert. 1980. - V.59. - N 1. - P.205-216.

235. Billig, H. Gonadal cell apoptosis: hormone-regulated cell demise /Billig H., Chun S.Y., Eisenhauer K.//Hum Reprod Update 1996; 2 (2).-P.103— 117.

236. Bindon, B.M. Control of ovarian activity in ewes with progestagens /Bindon, B.M., Roberts E.M. // J. Reprod. Fertil. 1964. - N 7. - P. 3.

237. Bisonette T. Modification of mammalian sexual cycles. I. Reactions of ferrets (Putorius vulgaris) of both sexes to electric light added after dark in November and December, Proceedings of the Royal Society of London, Series B, 110, 322—336, 1932.

238. Bittman E. L. Photoperiodic influences on testicular regression in the golden Termination of scotorefractoriness, Biology of Reproduction, 17, 871— 877, 1978.

239. Bliss, E. Dairy goat reproductive managament/ E. Bliss //Dairy Goat J.-1979.-Vol.57.-8.-P.36-37.

240. Brackett, B.G. 1981. Applications of in vitro fertilization, p. 141-161. In: New Technologies in Animal Breeding. B.G. Brackett, G.E. Seidel, Jr., and S.M. Seidel (eds.), Academic Press, New York.

241. Brackett, B.G. 1983. A review of bovine fertilization in vitro. Theriogenology 19: 1-15

242. Brandshaw, R.A. / Brandshaw R.A. Rubin J.S. //Suprumol. Struct., 1980.-P.- 14, 183.

243. Brock, H. The production of viable bovine ova /Brock H., Rollson L. // J. Agric. Sci. 1952. - V.42. - P.479.

244. Browder L. Developmental Biology. Philadelphia, Saunders, pp. 146231, 1980.

245. Bruce N.W., Miller K. The effect of prostaglandin F2a on ovarian blood flow and corpora lutea // Nature. New Biol. 1974. - V. 49. - P. 176-177.

246. Burk, B.B. // Hormonally Defined Media/ B.B.Burk // SpringerVerlag, Heideiberg, p. 57. 1983.

247. Carney E.W., Foote R.H. Improved development of rabbit one-cell embryos to the hatching blastocyst stage by culture in a defined, protein-free culture medium. J Reprod Fertil 1991; 91: 1: 113—123.

248. Cassou R. La methode des Paillettes en Plastiq ve adaptee a la generalistion de la congelation/ Cassou R. // V Congr. International per la reproduzione animale e 11a fecondazione artificiale. Trnto. -1964. - P.854.

249. Cataldo, N.A. Immunolocalization of Fas and Fas ligand in the ovaries of women with polycystic ovary syndrome: relationship to apoptosis Cataldo N.A., Dumestic D.A., Goldsmith P.C./Hum Reprod 2000; 15 (9).- P. 1889—1991.

250. Cela, M. Synchronizazione degli estri e superovulazione madiante prostaglandina F2a naturale e PMSG nella pecora/ M. Cela //Alii della societa italiana della scienze veterinariel.-1982.-Vol.36.-P.137.

251. Church R.B., Shea B. Some aspects of bovine embryo transfer. In. egg transfer in cattle, ed. L.E.A. Rowson. Commision of the European Communities. Luxemburg E.U.R. - 1976. - 491. - P. 83-86.

252. Clark, D.A. What do we know about spontaneous abortion mechanisms ? / D.A. Clark, J. Chaonat // Amer. J. Reprod. Immunol.- 1989.- P. 28-37.

253. Clermont Y. Kinetics of spermatogenesis in mammals: seminiferous epithelium cycle and spermatogonial renewal. Physiol. Rev., 52, 198-236, 1972.

254. Clinical Endocrinology, Second edition, Ed. A. Grossman, Blackwell Sience, 1998.

255. Combs, P.W. Synchronization of oestrus in ewes fed 6-methyl-17-acetoxyprogesterone/ P.W. Combs, M.P. Botkin, G.E. Nelms //J/Anim.Sci.-1961.-Vol.20.-P.250-264.

256. Compound 48/50 inhibit neurotensin-indused hypotension in rats / R. Quirion, F. Rioux, D. Regoli, S. St-Pierre //Life Sci.- 1980,- Vol. 27.- P. 18871895.

257. Coonrod S.A., Coren.R., McBride B.L., Bowen M.J., Kraemer D.C. Successful non-surgical collection of ovine embryos // Theriogenology. 1986. -V.25.-P. 149-151.

258. Cooper M.J. Control of oestrous cycles of heifers with a synthetic prostaglandin analogue. // Vet. Rec. 1974. - V. 95. - P. 200-203.

259. Cooper M.J., Rowson L.E.A. Control of oestrus cycle in Friesian heifers with © 80996, a synthetic prostaglandin analogue structurally related to PG F2a // Ann. Biol. Anim. Biochim. Biophys . - 1975. -N 15. - P.427-436.

260. Covern P.T., Laing J.A. Ovulation rate in ewes treated with pregnant mares serum gonadotrophin and luteinizing hormone releasing factor. // J. Agr. Sci .- 1976.-86.-N l.-P. 127-129.

261. Cullen R., Shearer G.S. Observations on the synchronization of oestrous in ewes during the breeding season and the effect of the subsequent fertility.

262. D'Urso, G. Effetti dell'impiego della prostaglandina F2a per la sincronizzaziane dei colori delle capre/ G. D'Urso, S. Dell'Aquila //Zootecn. Nutr. Anim.-1981.-Vol.7.- №3, P.193-197.

263. Dandekar P.V., Glass R.H. Development of two-cell mouse embryos in protein-free and protein-supplemented media. J in vitro Fertil Embryo Trans 1990; 7: 2: 107—113.

264. Deakin, J.F.W. Influence of N-terminal acetylation and C-terminal proteolysis on the analgesik activity of (3-endorphin / J.F.W. Deakin, J.O. Dostrovsky, D.G. Smyth//Biochem. J.- I980.-Vol. 189.-P. 501-506.

265. Deaver R.D., Stilley N.J., Dailey R.A. Concentration of ovarian and pituitary hormones following prostaglandin F // J. Anim. Sci. 1986. - V. 62. - P. 422-427.

266. Denamur, R. Luteotrophic factors in the sheep/ R. Denamur //J. Reprod. Fert.-1974.-Vol.38.-2.-P.251-259.

267. Desai N., Kinzer D., Loeb A., Goldfarb J. Use of synthetic serum substitute and alpha-minimum essential medium for the extended culture of human embryos to the blastocyst stage. Hum Reprod 1997; 12: 2: 328—335.

268. Development and quality of sheep embryos cultured in commercial G1.3/G 2.3 sequentil media/ Garcia-Garcia R.M., Ward. F., O'Meara C.M., Wade M., Duffy P. e. a. // Anim. reprod. Sci. 2007.98.N 3-4. C. 233-240.

269. Devies, H.I. A note on the Fertility of ewes Treated with multiple Injections of progesterone Followed by Pregnant Mare Serum/ H.I. Devies, R.B. Dan //Austral. Vet. J.-1957.-Vol.33.-4.-P277-280.

270. Dienhart M.K., Downs S.M. Cyclic AMP rerversal of hypoxantine-arrested preimplantation mouse embryos is EDTA-dependent. Zygote 1996; 4: 2: 129—137.

271. Dienhart M.K., O'Brien M.J., Downs S.M. Uptake and salvage of hypoxantine mediates developmental arrest in preimplantation mouse embryos. Biol Reprod 1997; 56: 1: 1—13.

272. Different estrous induction protocols during the transition period in lactating Turcish Saanen does following AI / Dogan I., Konyali A., Tolu C., Yurdabak S. // Acta vet. 2008. 58. N 2-3. c. 259-266.

273. Downs S.M., Dow M.P.D. Hypoxanthine-maintained two-cell block in mouse embryos: dependence on glucose and effect of hypoxanthine phosphoribosyltransferase inhibitors. Biol Reprod 1991; 44: 6: 1025—1039.

274. Drost M. A fild study on embryo transfer in sheep. //J. Amer. Vet. Medic. Assoc. - 1975,- 166.-№12.-P. 1176-1179.

275. Dulbekko, Friman/ Virology.- 1969, P.-8, 396.

276. Dutt R.H Induction of oestrus and ovulation in the anoestrual ewes by use progesterone and pregnant mare serum. // J. Anim. Sei. - 1953. - N12. - P. 3.

277. Dutt R.H., Hamm P.T. Effects of exposure to high environmental temperature and shearing on semen production of rams in winter // // J. of Anim. Sei. 1957. - V. 16. - N 2. - P.328-334.

278. Dutt R.H., Rush L. The effect of low environmental temperature of initiation of breeding season and fertility in sheep // J. of Anim. Sei. 1955. - V. 14.- N 3. P.885-896.

279. Dutt R.H., Simpson E.C. Environmental temperature and fertility of Southdown rams early in the breeding season // // J. of Anim. Sei. 1957. - V. 16. -N 1. - P.136-143.

280. Eagle H. /Biol. Chem., 1955,- P. 214, 839.

281. Eagle H./ Science., 1955,- P. 122, 501.

282. Eagle H./ Science., 1959,- P. 130, 432.

283. Edgguist L., Einarrson S., Gustaffson B. Effect of prostaglandin F2a on sperm transport in the reproductive tract of the ewe. // Acta Vet. Scand. 1975.- № 16. P.149-151.

284. Elsden R.D., Betteridge K.J. Embryo transfer in farm animals. //Monogr., 1977.

285. Elsden R.D., Nelson L.D., Seidel G.E. Superovulating cows with follicule. Stimulating hormone and pregnant mare's serum gonadotrophin. // Theriogenology. 1978. - V.9. - N. 1. - P. 17-26.

286. Endocrinology, Second edition, Eds: De Croot et al., New York, 1989582 c.

287. Erickson G.F., Shimasaki S. The physiology of folliculogenesis: the role of novel growth factors. Fertil Steril 2001; 76(5): 943—949

288. Evans G., Maxwell C. Salamon's Artificial insemination of Sheep and Goats. Butterworth Guilford, U.K. - 1987. - P.93-106.

289. Evans, G. and Robinson, T.J. 1980. The control of fertility in sheep: endocrine and ovarian responses to progestagen-PMSG treatment in the breeding season and in anestrus. J. Agric. Sei. 94: 69-88

290. Farmer N.Z, Tervit H.R. Application of the egg transfer techniques on cattle and sheep. // Proc. N.Z. Soc. Anim. Prod. - 1974. - 34. - P. 56-60.

291. Feinie I. Fertility in Merine ewes in artificial insemination programs following synchronization of ovulation using cloprostenol, a prostaglandin analogue / I. Feinie, R. Weles // Proc. Austral.Soc. Anim.Product.-1980.-Vol.-13.-P.317-320.

292. Floch F. Immunostimulators / F. Floch .-Progr. Pharm. Res. Oxford., 1982 -P. 133-180.

293. Foote R.H., Onuma H. Superovulation, ovum collection. Culture and transfer. A review.J. Dairy. Sei. 1970. -N 53. - P.1681-1692.

294. Fornusek L., Vetvickova V., Petelikova I. Usinek redidel pro dlouhodobe uchovavani na akrosomy beranich spermii // Veter.-Med. (CSSR). -1981. N.26. - V.4. - P.213-221.

295. Fortagne, M. Hamatologische Parameter der Probstheidaer Kleinziege in Abhängigkeit Von Craviditat und Lactation / M. Fortagne, M. Schafer // Arch. Exp. Veterinarmed.- 1989.-43,- № 2.-P. 223-230.

296. Fukui E., Roberts E.M. Sperm transport after no surgical intrauterine inseminion with frozen semen in owes treated with prostaglandin F2a //J. Reprod. Pert. / 1977.-V.51.-N 1. P.141-143.

297. Fuxe, K. Cholecyctokinin peptides produce marked reduction of dophamin turnover in discrete areas in the rat brain following intraventricular injection // К. Fuxe, К. Andersson, V. Locatelli e.a 11 Europ. J. Pharmacol.- 1980.-Vol. 67,-P. 329-331.

298. Fuxe, K. Cholecyctokinin peptides produce marked reduction of dophamin turnover in discrete areas in the rat brain following intraventricular injection // K. Fuxe, K. Andersson, V. Locatelli e.a // Europ. J. Pharmacol.- 1980.-Vol. 67.-P. 329-331.

299. G. В., Losee S. H., Turek F. W. Prolonged exposure of castrated male hamsters to a nonstimulatory photoperiod: Spontaneous change in sensitivity of the hypothalamic-pituitary axis to testosterone feedback, Endocrinology, 104, 631— 635 (1979).

300. Gabig, T. G. The killing of pathogens by phagocytes / T.G. Gabig, B.M. Babior // Ann. Rev. Med., 1981,- P. 32, 313-325.

301. Garcia M. C, GintherJ. Effects of ovariectomy and season on plasma luteinizing hormones in Endocrinology, 98,(1976).308. geo.l September.ru/articlef.php?ID=2005 02106 H.H. Клюев Сельскохозяйственное природопользование в современной России.

302. Giudice L. The insulin — like growth factor system in normal and abnormal human ovarian follicle development. Am J Med 1995; 98: 48—54

303. Goat Handbook, United States, 1992 G. F. W. Haenlein; U. of Delaware, Newark D. L. Ace; Pennsylvania State U., University Park.

304. Gordon J. The induction of pregnancy in the anoestrous ewe by hormonal therapy. 3. The use of repeated progesterone and pregnant mare serum thera // J.Agr. Sci.- 1963. - V.60. N 1.

305. Gordon J. The use of progesterone and serum gonadotropin (PMS) in the control of fertility in sheep. II. Studies in the extra seasonal production of lambs // J. Agr. Sci. 1958. - V.50- N 2.

306. Greve T., Lehn-Jensen H., Rasbech N.O. Ei transplantation seim Rind nicht chururgisches Aufsam mem von bovinen embryonen in der Prakis // Teiriirzte. Praxis. 1978.-N.3 -P 313-324.

307. Greve T., Lehn-Jensen H., Rasbech N.O. Morphological evolution of bovine embryos recovered non-surgically from superovulated dairy cows on days 6,5 to 7,5. A field study. // Ann. Biol. Anim. Biochim. Biophys. 1979. - V.19. -N5. - P.1599.

308. Greve T., Lehn-Jensen H., Raslech N.O. Egg transfer in sheep effect of injecting PMSG on different days // Theriogenology 1979, 5(1) - V. 5. - N 1. -P. 15-19.

309. Haffes E.S.E. Techniques of collection and transplantation of ova in farm animals // J:Amer. Veter. Med. Assoc. 1958. - V.133. -N 10. - P. 506.

310. Haffes E.S.E., Badreldin A.Z., Darwish V.H. Seasonal variations in semen characteristics of sheep in subtropics // J.Agr. Sei. 1955. -V. 45. - P.283-292.

311. Hammond J.M., Baranao J.L., Skaleris D. Production of insulin-like growth factors by ovarian granulosa cells. Endocrinology 1985; 117: 2553—2555

312. Hanself, W. Corpora lutea of the large domestic animals/ W. Hanself, P.W. Concannon, J.H. Lukaszewski //Biol.Reproduct.-1973.-Vol.-2.-P.222-243.

313. Hanself, W. Lutial regression in domestic animal/ W. Hanself //Ann. Biol. Biochim. Biophys.-1975.-Vol.l5.-2.-P.147-160.

314. Hant W.L., Aldelman D. Superovulatory response to different PMG dose//Theriogenology - 1979,- 17,-N 1.-P.100.

315. Hanter R.H.F., Lawson R.A.S., Rowson L.E.A. // J. Reprod. and Fert. 1972.-30.-N. I. -P.325.

316. Haresign, W. Controlled breeding in sheep using the prostaglandin analogue/ W.Haresign, L. Acritopoulou //Livest. Product. Sci.-1978.-Vol5.-3,-P.313-319.

317. Harper M.E.K., Chang M.C.Some aspects of the biology of mammalian eggs and spermatozoa//Ln. Advances in reproductive Physiology edit. Bishop M.N.H-1975 V.5 - P.167.

318. Harris, G.W. Neural control of the pituitary gland/ G.W. Harris //Physiol.Rev.-1948.-Vol.28.-P.139.

319. Hashath, M. Animal genetic resources in Bangladesh/ M. Hashath // Anim. Genet. Resources in Asia and C)ceania.-1980.-P.415-418.

320. Hawk H.W., Convey H.H. The use of progesterone and serum gonadotrophin (PMS) in the control of fertility in sheep // Biol. Reproduct. - 1975. -V. 13. - N1. - P.322-328.

321. Hawk H.W., Estemcamp L.E. Controlled breeding in sheep using the prostaglandin analogue ICI 80996 // Biol. Reproduct. 1973. - V. 34. - N 1. -P.347-349.

322. Heptner, V. G. Mammals of the Sowjetunion Vol. I UNGULATES. -Leiden, New York, 1989.

323. Hoffman R. ., Reiter R. J. Pineal gland: Influence on the gonads of male hamsters, Science, 148, 1609—1611 (1965).

324. Hoffmann J.Hoffmannl. Pinealectomy inhibits stimulation of testicular development by longa hamster (Phodopus sungorus), Experientia, 31, 122— 123 (1975).

325. Hoffmann K, Nieschlag E. Circadian rhythm of plasma testosterone inmale Djungarian hamster (Phodopus sungorus), Acta Endocrinologica, 86, (1977).

326. Hoffmann Testicular involution in short photoperiods inhibited by melatonin, Naturwissenschaften, 61, 364—365,1979.

327. Hunter, G.L., Adams, G.E. and Rowson, L.E.A. 1955. Interbreed ovum transfer in sheep. J. Agric. Sci. 46: 143-149.

328. Illnerova H., Vanecek J., Krecek J., Wetterberg L., Saaf J. Effect of oneminute exposure to light at night on rat pineal serotonin rase and melatonin, J. of Comparative Physiology 32, 673—675, 1979.

329. Influence of citohalazin-B and saccharoses and maturing time on anucliation goats oocytes /Gao Li-gong, Chan Ling, Liu Feng-jin, Zhao Xiao-e, Zang Yong// J. Noth/west Sci-Tech Univ. Agr. and Forest. Nat. Sci. Ed. 2007.-35.-N5. C. 6-8,13.

330. Jennings S.D., Ham R.G. \ In Vitro, 1981.-P. -17, 238/

331. Jennings S.D., Ham R.G. In Vitro, 17, 283 (abstract N155) 1981

332. Jones R.C., Mann T. Lipid peroxides in spermatozoa; formation, role of plasmalogen and physiological significance // Proc. R. Soc. London.: Ser.B. -1976,- 193. -1113. -P.317-333.

333. Karech P.I., Goodman R.S., Segan S.J. Feedback basis of seasonal breeding test of an hypothesis // J. Reprod. Pert. - 1980. - V.58 Sump . Rep. - N 15. - P.521-535.

334. Karp G., Berrill N.J. Development. New York, McGraw-Hill, 1981.

335. Kim J.-M., Yoon Y.-D., Tsang B.K. Involvement of the Fas/Fas lig-and system in p53-mediated granulosa cell apoptosis during follicular development and atresia. Endocrinology 2000; 140 (5): 2307—2317;

336. Kruger T.F., Stander F.S.H., Smith K., Lombard C.J. The development of one- and two-cell mouse embryos in the absense of human serum. S Afr Med J 1986; 70: 9: 542—543.

337. Kupfercshmied, H. Erfahrungen mitder kunstlichen Besamung and der Brunst synchronierung bei der ziege/ H. Kupfercshmied, E. Muther //Schweiz. Arch. Tierheillc.,- 1977, Vol.l 19.-10.- P. 405-413.

338. L. Benson B. A survey of the evidence that unidentified pineal stances affect the reproductive system in In: R. J. Reiter (ed.), The Pineal Gland and Reproduction, Basel, 1978.

339. Lamond D.R. Multiple births in sheep an assessment // Theriogenology. 1974. - N 1. - P. 181 -212.

340. Land, R.B. and Hill, W.G. 1975. The possible use of superovulation and embryo transfer in cattle to increase response to selection. Anim. Prod. 21: 1-12

341. Landau, C. Is there a role for the endogenous opioid peptides in the regulation of blood glucose? / C. Landau, R. Palmour, J.-K. Chang // Abstr. 9th Annu. Meet., Atlanta, Georgia, Nov. 2-6.-1979., Bethesda, Soc. Neurosci.-1980.-Vol.5.-P. 532.

342. Landau, C. Is there a role for the endogenous opioid peptides in the regulation of blood glucose? / C. Landau, R. Palmour, J.-K. Chang // Abstr. 9th Annu. Meet., Atlanta, Georgia, Nov. 2-6.-1979., Bethesda, Soc. Neurosci.-1980.-Vol.5.-P. 532.

343. Legendre X. Embryo collection from ewes by laparoscopy using a 3-way rigid catheter /X. Legendre, S. Boussean, S. Koyundjiev// Theriogenology, 1988,-vol. 29.-N1.-297P.

344. Lindner H.R., Amsterdam A., Salamon Y., Tsafriri A., Nimrod A., Lamprecht S.A., Zor U., Koch Y. Intraovarian factors in ovulation: determinants of follicular response to gonadotrophins // J. Reprod. Fert. 1977. -V. 51. - P.215-235.

345. Lindsley D.L., Tokuyasu K.T. Spermatogenesis. In: The Genetics and Biology of Drosophila (M.Ashburner, T.R.F. Wright, eds.), Vol. 2, pp. 225-294, New York, Academic, 1980.

346. Loutradis D.K., John D., Kiessling A.A. Hypoxanthine causes a 2-cell block in random-bred mouse embryos. Biol Reprod 1987; 37: 311—316.

347. Loutradis D.K., Kiessling A.A., Kallianidis K., Siskos K., Creatsas G., Michalas S., Aravantinos D. A preliminary trial of human zygote culture in Ham's F-10 without hypoxanthine. J Assist Reprod Genet 1993; 10: 4: 271—275.

348. Lovelock J. The immobilization of spermatozoa by freezing and hawing and protective action of glycerol // Biochem. J. 1954. - V.58. - P.618-622.

349. Loy, R.G., Penstein, R., O'Canna, D. and Douglas, R.H. 1981. Control of ovulation in mares with ovarian steroids and prostaglandin. Theriogenology. 15: 191-200

350. Lugar J. Synchronization of the oestrus cycle with prostaglandin F2a for use in artificial insemination of cattle (A review) // Veter. Med. Small Anim. Clin. 1977. - V. 72. - P. 87-92.

351. Macpherson I. A., Stoker M./ Virology.- 1962, P.-16, 147.

352. Mahmood S., Koul G.L., Biswos J.S. Comparative efficacy of FSH-p and PMSG on superovulation in Pashmina goats. // Theriogenelogy. 1991. -V.35. -N 6. -P. 1191-1196.

353. Mapletoft, R.J., Johnson, W.H. and Miller, D.M. 1980. Effects of a progestagen ear implant on superovulatory response in the cow. Theriogenology 13:102

354. Marcus, M.E. Alterations in bovine lymphocyte function during the periparturient period /M.E. Marcus, B.J. Nonnecke, J. A. Roth, // Amer. Vet. Res.-1989.-50,-№2.-P. 215-220.

355. Maurer R. Superovulation and embryo transfer in sheep. // J. Meat. Animal. 1986. - N 8. - P. 27-39.

356. Maxwell, D.P., Massey, J.M. and Kraemer, D.C. 1978. Timing of ovulations in the superovulated bovine. Theriogenology 9: 97

357. Maxwell, M.S. Искусственное размножение: трансплантация эмбрионов и клонирование /M.S. Maxwell. A. Szell, J.R. Hunton, O.R. Ryan//Reproductive Physiology of Merino Sheep, 1990

358. McDaniel, B.T. and Cassell, B.G. 1981. Effects of embryo transfer on genetic change in dairy cattle. J. Dairy Sci. 64: 2484-2492

359. McKelvey W.A.C., Robinson J.J. Aitken R.P., Robertson I.S. Repeated recoveries of embryos from ewes by laparoscopy // Theriogenology. 1986. -N 25. - P.855-865.

360. McKelvey W.A.C., Robinson J.J. Repeated recoveries of ovine ova by laparoscopy // Theriogenology. 1986. - N 25. - P. 171 -173.

361. Menchaca A., Rubianes E. Pregnancy rate obtained with sort-term protocol for timad artifical insemination in goats//Reprod. Domest. Anim. 2007. 42. N6. C. 590-593.

362. Metz C.B., Monroy A. Biology of Fertilization. Vol. 3, The Fertilization Response of the Egg. Orlando FL, Academic, 1985.

363. Minoia, P. Primi tentaviti di synchronizacione dei calori in care di razza garganica1 P. Minoia, F. Di Taranto //Acta Med.Vet.-1976.-Vol.21.-16.-P.209-213.

364. Mollova M. Changes in the structure of ram spermatozoa after equilibration and deep frizzing // Biol. Immunol. Reproduce. 1980. - V. 33. - N 3. - P. 393-395.

365. Molorwu, E. Reproduction and breeding management of goat/ E. Molorwu, D. Oliveira // Veter. Med. All anim.Csin.-1981.-Vol.76.-10.-P. 14731477.

366. Monniaux D., Huet C., Pisselet C. Mechanism, regulation, and manipulations of follicular atresia. Contracept Fertil Sex 1998; 26 (7—8): 528—535

367. Moor R.M., Rowson L.E. Influence of the embryo and uteris on luteal function in the sheep // Nature. 1963. - V. 201. - N 4918. - P. 108-109.

368. Moor R.M., Trouson A.O. Hormonal and follicular factors affecting maturation of sheep oocytes in vitro and their subseguent develop mental capacity //J. Reprod. and Fertil. 1980. - V. 49.-N 1. - P. 101-109.

369. Moore M.W., Shelton J.N. Egg transfer in sheep // Austral. J. Agric. Ree. 1963. - V.13. -N 4. - P.718-724.r

370. Mul A.I. Pharmacological of luteolitisis // Trend. Vet. Pharmacol. Toxicol. Proc. 1st Eur. Congr. Zeist (1979) Amsterdam. - 1980. - V.23. -N 4. -P.927-939.

371. Mutiga E.R., Baker A.A. Superovulation of sheep using follicle stimulating hormone and prostaglandin F // Theriogenology. 1982. - V.ll. - N 1. -P.104.

372. Maurer H.R. , Cell Tissue Kinetics, 1981 .-P. 14, 111.

373. Nagaze H., Niva T. Deep-freezing bull semen in concentrated pellet form. I. Factors effecting survival of spermatozoa // Vth Cong. Intern. Per la reproduzione animale e la fecondazione artficialle. Trento. - 1964. - P.440.

374. Nakanoto R., Akahori T., Katayama K., Tojo S. Binding of LH and FSH to porcine granulöse cells during follicular maturation // J. Reprod. Fert. -1977.-V.51.-P.23-27.

375. Nelson L.D., Bowen R.A., Homan N.R., Seidel G.E. Seminal treatments for superovulated heifers // Proc. 89th Ann. Res. Conf. Colorado State Univ. Abstr.- 1976.-P. 109.

376. Neurohumoral regulation of ovarian cycle./ G.D. Niswender, R.H. Schwall, T.A. Fits e.a.//Recent Progr. Horm. Res.-1985.-Vol.41.-1.-P. 101-151.

377. Newcomb R., Rowson L.E.A. Tpounson A.O. The eatery of superovulated eggs into the uterus. // Egg transfer in cattle ed. L.E.A. Rowson. / Commission of the European Communities EUR. 1976. - Luxembourg. - P. 1-15.

378. Newcomb, R. and Rowson, L.E.A. 1980. Investigation of physiological factors affecting non-surgical transfer. Theriogenology. 13: 41-50

379. Newcomb, R., Christie, W.B., Rowson, L.E.A., Walters, D.E. and Bousfield, W.E.D. 1979. Influence of dose, repeated treatment and batch of hormone on ovarian response in heifers treated with PMSG. J. Reprod. Fert. 56: 113-118

380. Noda Y., Shiotani M., Goto Y., Nakagama T., Umaoka Y., Mori T. Culture of human embryos in alpha modification of Eagl's medium under low oxygen tension and low illumination. Fertil Steril 1994; 62: 5: 1022—1027.

381. Nowak R., Rodway R.G. Length if melatonin exposure and onset of ovarian activity in anoestrus ewes // J. Reprod. and Fertil. 1987. - V.80. - N1. -P. 343-347.

382. O'Dell N., Almquist J., March L. Freezing bovine semen. III. Effect of freezing rate on bovine spermatozoa frozen and stored at -79 0C // J. Dairy. Sci. 1958.-V. 41.-N l.-P. 340-345.

383. Ojeda S.R., Jemeson H.E., McCulm S.M. Hypothalamic areas in prostaglandin induced gonadotrophin release // Endocrinology. 1977. - V.100. -P.1585-1595.

384. Oqunbiyi, P. Estrus synchronization and controlled breeding in goat using PG-F2a/ P. Oqunbiyi, S. Molokwu //Theriogenolody.-1980.-Vol.l 3.-4,-P.257-261.

385. Otsuki, K. and Soma, T. 1964. Transfer of fertilized ova through the cervix in the goat. Nat. Instit. Anim. Ind. Chiba, Japan. Bull. 6: 27-32.

386. Oxender W. D., Noden P. ., Hafs H. D. Estrus, ovulation and serum progesterone, estradiol, and LH concentrations in mares after an increased photo-period during winter, American J. of Veterinary Research, 38,207 (1977).

387. Peptides and central nervous system / A.J. Prange, Ch.B. Nemeroff, M.A. Pilton e.a./ Ed. By L.L. Iversen e.a. // Handbook of psychopharmacology.-New-York: Plenum Press.- 1978,-Vol. 13.-P. 1-107.

388. Philippo M., Rowson L.E.A. Embryo transfers in sheep // Ann. Biol. Anim., biochim. biophys. 1975. - V.15. -N2. - P. 233-240.

389. Phillippo M., Rowson L.E.A. Prostaglandins and superovulation in the bovine. // Ann. Biol. Anim. Biochim. Biophys. 1975 - 15. - P. 223-230.

390. Phillippo, M. and Rowson, L.E.A. 1975. Prostaglandins and superovulation in the bovine. Ann. Biol. Anim. Bioch. Biophys. 15: 233-240

391. Phylogenetic Reconstructions in the Genus Capra (Bovidae, Artiodactyla) Based on the Mitochondrial DNA Analysis. Russian Journal of Genetics, 2007, Vol. 43, No. 2, pp. 181-189.

392. Pincus G. Observations on the development of cow ova in vivo and in vitro // Proc. Natur. Egg transfer and breeders conf. San Antario, Texas. 1949. -Nl.-P. 18.

393. Plasma oestrogen and progesterone in relation to super ovulation and egg recovery in the sheep /Booth W.D., Newcomb R., Strange H. e.a. // Vet. Ree. -1975.-V.97.-N 19.-P. 366-369.

394. Plasma steroid hormones during breeding, pregnancy and lactation in Chilean Creole Goat /V.H. Parraguez, G. Ferranndo //Archivos de zootecnia.-1995.-Vol.44.-165.-P73-781.

395. Poldge C.H., Rowson G.E.A. Fertilizing capacity of bull spermatozoa after freezing at -79 0C // Nature. London. - 1952. - V. 169. - N 4302. - P.626-627.

396. Powell W.L., Hammerstrom S., Samuelson B., Sjoberg B. Prostaglandin F2a receptor in human corpora lutea // Lancet. 1974. - V.l. - P. 120.

397. Predovulatory follicle development in goats following estrous synchronizatin with progestagens or prostaglandins// Fernandez-Modo D., veiga-Lopez A., Ariznavarreta C. e.a. // Reprod. Dornest. Anim. 2008. 43. N1. C. 9-14.

398. Pretorius, P. Cyclic reproductive activity in the Angora goat/ P. Preto-rius //Agroanimalia.-1973.- Vol.15.-3.-P.55-58.

399. Purification, amino asid composition and N terminus of the hypothalamic luteinising hormone releasing factor (LRF) of ovine origin/ M.L. Amoss, R. Burgus, R. Bleckwell e.a.//Biophys. Res. Commun.-1971.-Vol.440-P.205-210.

400. Quinliran T.D., Robinson T.S. Numbers of spermatozoa in the genital tract after artificial insemination of ptogestagen treated ewes // J. Reprod. Fert. -1969.-V. 19.-P. 73-76.

401. R.G.Ham, In Gormonally Defined Media/ Springer-Verlag, Berlin, Heidelberg, N.Y, Tokio.1983.- P.-16.

402. R.G.Ham, In Tissue Growth Factors/ Handbook of Experimental Pharmacology, 1981.-Vol. 35.-P.-13.

403. R.G.Ham, W.L Mceehan, In Metods in Enzimology, Vol 53. Academics Press.- N.Y., 1979.-P 44.

404. Raff, M.E. Cantor-Progress Immunology / M.E. Raff.- 1971.-V.1.1. P.83.

405. Reiter R. J., Johnson L. Y. Depressant action of the pineal gland on pituitary luteinizing hormone and prolactin in male hamsters, Hormone Research, 311—320 (1974).

406. Reiter R. J., JohnsonPineal regulation ofluteinizing hormone and prolactin in light-deprived female hamsters, Fertility and Sterility, 25, 958—964 (1974).

407. Riddell M.G. Superovulation of sheep during the spring and summer in the southeastern United States / M.G. Riddell, D.F. Wolfe, D.A. Stringfellow// Theriogenology, 1988.- vol. 29.-N1.-297P.

408. Rischen, G. Reproductive management of the dairy goat doe / G. Rischen, R. Ricse //Iowa State Univ. Veter.-1982.-Vol.-44.-2.-P.82-89.

409. Roberts E.M. The use of intravaginals pongees impregnated with 6-methyl-17-acetoxyprogesterone (MAP) to synchronies ovarian activity in cyclic ewes // Proc. Austral. Soc. Anim. Product. 1966. - N 6.

410. Robinson T.J. Fertility of anoestrous ewes following injection of progesterone and pregnant mare serum (PMS) // Austral. J. Agr. 1956. - V. 7. -N3.

411. Robinson T. J. Synchronization of oestrus by intravaginal and subcutaneous application of projecting impregnated sponges // Proc. Austral. Soc. Anim. Product. 1964.-N 5.

412. Rossie, S.S. Regulation of mast cell histamin release by neurotensin / S.S. Rossie, R.J. Miller // Life Sci.- 1982,- Vol. 31.- P. 509-51.

413. Roudebush W.E., Often N.L., Butler W.J. Alpha-minimum essential medium (MEM) enhances in vitro hatched blastocyst and cell number per embryo over Ham's F-10. J Assist Reprod Genet 1994; 11:4: 203—207.

414. Rowson L E.A., Fervit Q., Brand A. Synchronization of oestrus en cattle by means of prostaglandin F2a // Proc. 7-the Intern. Congr. Anim. Reprod. A. J.Mynich. 1972. -N2. - P.865.

415. Rowson L. Cattle twins from egg transplants. N.Z.J. Agric. 1972. -V.124. -Nl. -P.20.

416. Rowson L.E. The storage of bull semen at low temperature // Vet. Res. 1953.-N65.-P. 35.

417. Rowson L.E.A. Egg transfer in cattle // Seminar CEC Luxemburg, EUR/5491,- 1976.-P. 393-395.

418. Rowson L.E.A. Methods of inducing multiple ovulation in sheep // J. Endocrinol. 1957. - N 7. - P. 260-270.

419. Rowson L.E.A., Moor R.M. Non-surgical transfer of cow eggs. // J. Reprod. Fertil. 1966. - N 11.-P. 311-312.

420. Rowson, L.E. 1951. Methods of inducing multiple ovulation in cattle. J. Endocrinol. 7: 260-270

421. Rowson, L.E.A. and Moor, R.M. 1966. Embryo transfer in the sheep: the significance of synchronizing oestrus in the donor and recipient animal. J. Reprod. Fert. 11: 207-212

422. Ryan, J.P. Time of ovulation in Merino ewes superovulated with PMSG and FSH-P/ J.P. Ryan, J.R. Hunton, W.M.C. Maxwell// Reprod. Fert. Dev., 1992.-91-7.

423. Saborio J.L., Pong S.S., Koch G./ mol. Biol., 1974,- P. 85, 195.

424. Sadchikova E. New dietetic nutrition: goat milk with human Lactoferrin. International Congress "Euromedica", 2006, p.65.

425. Saffran, M. Stimulation of the release of corticotrophin from the adenohypophysis by newrohypophysial factor/ M. Saffran, A.V. Schally, B. Banfey // Endocrinology.-1955.-Vol.57.-P.439-444.

426. Salamon S. Observation on fertility of ram semen frozen by different methods // Austral. J. Exp. Agric. And Anim. Husb. 1967. - N 7. - P.29.

427. Salamon S. Studies on the A.I. of merino sheep. The effect of frequent ejaculation on semen characteristics and fertility capacity // Austr. Agric. Res. -1962. V. 13. - N 6. - P. 1137.

428. Salamon S., Lightfoot R. Fertility of ram spermatozoa frozen by the pellet method. III. The effect of insemination technique, oxitocin and lambing // J. Reprod. Fertil. 1970. -N 22. p. 114.

429. Salamon S., Lightfoot R. fertilization and embryonic loss in sheep after insemination with deep frozen semen // Nature. 1967. -V. 216. - N5111.-P.194-195.

430. Salamon S., Visser D. Effect of composition of trisbaseol diluents and of thawing solution on survival of ram spermatozoa frozen by the pellet method // Austral. J. Biol. Sei. 1972. - V. 25. -N3. - P. 215-220.

431. Scaramussi, R.T. The oestrus cycle of the ewe after immunization against prostaglandin F2a/ R.T. Scaramussi, D.T. Baird //J. Reprod. FertiL-1976.-VoL-P.39-47.

432. Scaulon P., Sreenan J., Gordon J. Hormonal induction of superovulation in sheep // J. Agric. Sei. Camb. 1968. - N 70. - P. 179.

433. Schiewe M.C., Bush M., Stuart L.S., Wildt D.E. Laparoscopic embryo transfer in domestic Sheep: Preliminary study // Theriogenology. 1986. - V. 22. -P. 675-682.

434. Seasonal variation in LH and FSH of bilaterally castrated snowshoe hares, General and Comparative Endocrinology, 20, 61—68, 1973.

435. Sehwust, F.Synchronizing estrus with PG-F2a/ F. Sehwust D., Simms //Sheep Breeder.-1982.-Vol. 102.-10.-P.26-28.

436. Seidel, G.E. Jr., Elsden, R.P., Takeda, T. and Farrand, G.D. 1983. Field trails with cryopreserved bovine embryos, p. 343-352. In: Fertilization of the Human Egg In Vitro. H.M. Beier and H.R. Lindner (eds.), Springer-Verlag, Berlin.

437. Serum vascular endothelial growth factor concentrations and ovarian stromal blood flow are increased in women with polycystic ovaries/Agrawal R., Sladkevicius P., Engman R. Hum Reprod., 1998; 13 (3): P.651—655

438. Shally A.V., Arimura A., Kastin A.J. et.al. Gonadotrophinrelising hormone: one polypeptide regulated secretion of luteinizing and follicle stimulating hormone//Science. - 1971. - V. 173. - P.1036-1037.

439. Shea B.T., Hines D.J., Lightaat D.E., Oilis G.W., Olson S.U. The transfer of bovine embryos in egg transfer in cattle. Ed. L.E.A. Rowson. Commission of the European Commission Luxemburg, EUR. 1976. - 5491. - P. 145152.

440. Sheiko I.P., Budzevich A.I., Sadchikova E.R., Goldman I.L., Production of transgenic goats with human lactoferrin. 8th International Conference on Lactoferrin, Structure, Function and Applications, 2007, p. 14.

441. Shelton J.H. An assessment of never progestins for control of oestrus and ovulation in the ewe // Proc. Austral. Soc. Anim. Product. -1964. V.5.

442. Shelton, M. Reproductive efficiency in Angora goat / M. Shelton, I. Croff//Texas Univ. System.-1974.-Vol.l 136.-P2-14.

443. Shemsh, M. Levels of prostaglandin F2a in bovine endometrium, uterine, ovarian and jugular plasma during the oestrus cycle/ M. Shemsh, W. Hansel //Proc. Soc. Biol. Med.-1975.-Vol. 148.-1.-P. 123-126.

444. Shie, J. Morphology of 6-, 7- and 8-day embryos from superovulated sheep /J. Shie, Z. Yuding, Z. Chengkuan// Theriogenology, 1988.- vol. 29.-Nl.-306P.

445. Shirley B., Wortham E.J., Witmyer J. et al. Effects of human serum and plasma on development of mouse embryos in culture media. Fertil Steril 1985; 43: 1: 129—134.

446. Siedel J. E., Siedel S.M. Embryo transfer costs and success rates // Advanc, Anim. breeder. 1978. -N 1. -P.6-10.

447. Singh, R.A. Oestrus synchronization and fertility in cycle eves using prostaglandin F2a and progesterone/ R.A. Singh //Indian. J. Anim. Sci.-1985.-Vol.55.-12.-P. 1034-1037.

448. Slozarz Piotr, Wojtowski Jacek Metody intensyfikacji rozrodu koz|/ Wiad. Zootechn. 2007. 45. N 1-2. c. 5-13.

449. Smith A.U. Biological effect of freezing and super cooling // London,1961.

450. Smith J.T., Allisson A., Use of progestagen impregnated sponges inserted intravaginally or subcutaneously for the control of oestrus cycle in the sheep. // Nature. 1971. - V. 206. - P. 4979.

451. Sreenan J.M. Successful non surgical transfer of fertilized cow eggs // Veter. Rec. - 1975. - V.96. - N 22. - P. 490-491.

452. Sreenan, J.M. and Gosling, J.P. 1977. The effect of cycle stage and plasma progesterone level on the induction of multiple ovulations in heifers. J. Reprod. Fert. 50: 367-369

453. Stereoselective muscarinic acetylcholin and opiate receptors of human phagocitic leucocytes / A. Lorker, L.G. Abbod, W. Hoss, F.J. Lionetti // Biochem. Pharmacol.- 1980.- Vol. 29.- P. 1361-1365.

454. Stereoselective muscarinic acetylcholin and opiate receptors of human phagocitic leucocytes / A. Lorker, L.G. Abbod, W. Hoss, F.J. Lionetti // Biochem. Pharmacol.- 1980,- Vol. 29,- P. 1361-1365.

455. Stewart S., Axelrad. A./ Exp. Hematol.,1984.- P. \2< 309.

456. Stewart T., Alien W.R., Moor R.M. Pregnant mare serum gonadotropin, ratio of follicle stimulating hormone and luteinizing hormone activities measured by radioreceptor assay // J. Endocrinol. 1976. - 71. - P. 371-382.

457. Stupnf, W.P. Steroid hormone target sites in the sites in the brain: the differential distribution of oestrogen, progestin androgen and glucocorticosteroid./ W.P. Stupnf, P. Sar//J. Steroid Biohem.-1976.-Vol.7.-P.l 163-1170.

458. Substance P Ausgewählte Probleme der Chemie, Biochemie, Pharmakologie, Physiologie und Pathophysiologic / P. Oehme, V. Bienert, K. Hecht, J. Bergm.- Berlin, 1981.-185 p.

459. Substance P Ausgewählte Probleme der Chemie, Biochemie, Pharmakologie, Physiologie und Pathophysiologic / P. Oehme, V. Bienert, K. Hecht, J. Bergm.- Berlin, 1981.-185 p.

460. Substance P new aspects to its modulatory function / P. Oehme, K. Hecht, L. Piesche e.a. - Acta Biol. Med. Germ., 1980.-Bd. 39.-P. 469-477.

461. Substance P new aspects to its modulatory function / P. Oehme, K. Hecht, L. Piesche e.a. - Acta Biol. Med. Germ., 1980.-Bd. 39.-P. 469-477.

462. Swanson, L.W. LH and prolactin in blood serum from oestrus to ovulation in Holstein heifers/ L.W. Swanson, A.D. Hafes //J. Anim.Sei.-1971.-Vol.33.-P.1038-1041.

463. Scheridan, P.L. Localization of androgen and estrogen concentrating 777in the diencephalons and of telencephalon of the mouse/ P.L. Scheridan // Endocrinology.-1 978.-Vol. 103 .-P. 1328-1334.

464. Tesarik J., Mendoza C. Nongenomic effects of 17 beta-estradiol on maturing human oocytes: relationship to oocyte developmental potential. J Clin Endocrinol Metabol 1995; 80: 1438—1443

465. Theocharides, T.C. Somatostatin induses histamin secretion from rat peritoneal mast cells / T.C Theocharides, W.V. Douglas // Endokrinology.-1978.-Vol. 102.-P. 1637-1640.

466. Theocharides, T.C. Somatostatin induses histamin secretion from rat peritoneal mast cells / T.C Theocharides, W.V. Douglas // Endokrinology.-1978.-Vol. 102,-P. 1637-1640.

467. Tietz Clinical guide to laboratory tests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B.-USA,W.B Sounders Company, 2006,1798 p.

468. Tramanmi G., Prandi A., Bracchessi D. Effect of melatonin treatment on the onset of ovarian activity reproductive parameters and PRL plasma levels of immature ewes // Anim. Reprod. Sc. 1987. - V. 13. - N 4. - P. 283-290.

469. Trounson A.O., Rowson L.E.A. Research on embryo transfer in domestic animals // J.R. Agric. Soc. England. 1976. - V. 137. - P. 77-85.

470. Trounson, A.O. and Moore, N.W. 1974. Fertilization in the ewe following multiple ovulations and uterine insemination. Aust. J. Biol. Sci. 27: 301-304

471. Trounson, A.O. Fertilization in the ewe following multiple ovulation and uterine insemination /Trounson A.O., Moor N.W.// Aust. J. Biol. Sci. 1974. - V.27.-P. 301-309.

472. Trounson, A.O., Willadsen, S.M. and Moor, R.M. 1976. Effect of prostaglandin analogue Cloprostenol on oestrus, ovulation and embryonic viability in sheep. J. Agric. Sci. 86: 609-611

473. Tsai F.C., Gardner D.K. Nicotinamide, a component of complex cultire media, inhibits mouse embryo development in vitro and reduces subsequent developmental potential after transfer. Fertil Steril 1994; 61: 2: 376—382.

474. Turek F. W. Effect of melatonin on photic-independent and photic-dependent testicular growth in juvenile and adult male golden hamster, Biology of Reproduction, 20, 1119—1122 (1979).

475. Turman, E.J. Multiple sirths in beef cows treated with equine gonadotrophin (PMS) and chorionic gonadotrophin (HGG) /Turman E.J, Laster D.B., Renbarger R.E., Stephens D.E. // J. Anim. Sci. 1971. - V.32. - P. 962-967.

476. Umbaugh, R.E. 1949. Superovulation and ovum transfer in cattle. Am. J. Vet. Res. 10: 295-305

477. Umo, J. Effect of prostaglandin F2a on the ultra structure and function of sheep corpora lutea / J. Umo //J.Reprod.Fertil.-1975.-Vol.43.-2.-P.287-292.

478. Van Furth, R. Mononuclear Phagocytes: functional aspects / R. Van Furth.-Hague, 1980.- 187 p.

479. Van Riezen, H. Critical appraisal of peptide pharmacology / H. Van Riezen, H. Righter, M. Griven // Neuropeptide influence on brain and behavior / Ed. by L. H. Miller e.a.- New-York, London: Raven Press.- 1977.- P. 11-27.

480. Veen T. Spectral characteristics of visible radiation penetrating into the brain and stimulating extraretinal photoreceptors, J. of Comparative Physiology, 130, 277—282, 1979.

481. Wagner, J.E. Henneman Hormonal control of reproductive activity in the cycling and anoestrous ewe / J.E. Wagner, E.F. Reinoke, J.E. Nellor, H.A. // J. Anim. Sci. 1960.-V.19.-P.2.

482. Waksman, B.N. Adjuvants and immuneregulation by lymphoid cells / B.N. Waksman // Spring. Sem. Immunopath.- 1979. V. 2. - P. 5-33.

483. Walker, S.K. Laporoscopic techniques for the transfer of embryos in sheep /S.K.Walker, G.M.Wames, P.Quinn, R.F.Seamark, D.H.Smith // Aust. Vet. J. 1985. -V.62. -P.105-106.

484. Wang, G. Embryo freezing and transfer in milk goats/ G.Wang, B. Ma, J. Wang, J. Qian, Y. Zhang// Therioligy.-1988.- vol. 29, N01,- P.-322.

485. Warwick, B.L. and Berry, R.O. 1949. Inter-generic and intraspecific embryo transfers. J. Hered. 40: 297-303

486. Warwick, B.L., Berry, R.O. and Horlacher, W.R. 1935. Results of mating rams to angora female goats. Proc. 27 th Ann. Meet. Am. Soc. Anim. Prod. p. 225-227

487. Watson H., Franks S., Bonney R.C. Regulation of epidermal growth factor receptor by androgens in human endometrial cells in culture. Hum Reprod 1998; 13(9).-P. 2589—2591.

488. Watson, P. Use of a Giemsa stain to defect changes in acrosomes of frozen ram spermatozoa/ P. Watson // Veter. Res. 1975. - V. 97. - N 1. - P.12-15.

489. Weestergaad, L.G. Epidermal growth factors in small antral ovarian follicles of pregnant women / L.G. Weestergaad, C.Y. Andersen, A.G. Byskov // J Endocrin 1990; 127(3).-P. 363—367.

490. White, I.G. Metabolic and motility studies relating to the low temperature storage of ram and bull spermatozoa / I.G. White, A.W. Blackshaw, C.W Emenes // The Austral. Veter. J. 1954. - V. 30. - N 4. - P.85-94.

491. Wildt, L. Die endocrine controller des menstrual en cyclic/ L. Wildt, G. Leyendeskeer // Gunakologe.-1981.-Vol. 14.-P.64-83.

492. Willett, E.L., Black, W.G., Casida, L.E., Stone, W.H. and Buckner, P.J. 1951. Successful transplantation of a fertilized bovine ovum. Science 113: 247

493. Williams, J.D. Textbook of Endocrinology.-W.B. Saunders Company, Philadelphia, 1992 .

494. Wilson, D. E. Mammal Species of the World /D. E.Wilson, D. M. Reeder (eds) //National Museum of Natural History, 1993.

495. Wisser D. Fertility following insemination with deep frozen-thawed ram reconcentrated and unconcentrated ram semen / D.Wisser, S.Salamon // Austral. J. Biol. Sci.- 1974.-V. 2.-N4.-P. 423.

496. Wright, R.W. Jr. and Bondioli, K.R. 1981. Aspects of in vitro fertilization and embryo culture in domestic animals. J. Anim. Sci. 53: 702-729

497. Zolman, J. Relation sheep between the luteinisung hormone response to gonadotrophin releasing hormone and endogenous steroids./ J. Zolman, E.M. Convey, J.H. Britt // J. Anim.Sci.-1974.-Vol.39.-P.355-359.

498. Preovulatory changes in the concentration of prostaglandins in rabbit creation follicles/ I.J. Le Maire, N.S.T. Yoang, H.R. Rehrmen, J.N. Maral //Prostaglandins.-1973 .-Vol.3 .-P.3 67-3 76.