Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Научное обоснование и разработка практических способов разрушения нитратов и нитритов в кормах
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов
Автореферат диссертации по теме "Научное обоснование и разработка практических способов разрушения нитратов и нитритов в кормах"
»7.-2 9?
всесоюзный научно-исследовательскии
институт физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных
На правах рукописи
ЗАПОРОЖЕЦ Николай Федорович
удк 636.085.52 : 546.175.173
Научное обоснование и разработка практических способов разрушения нитратов к нитритов в кормах
Специальность 06.02.02. — кормление сельскохозяйтвенных
животных и технология кормов
03.00.04 — биохимия
диссертация
в форме научного доклада на соискание ученой степени доктора биологических наук
Боровск—1992
Работа выполнена на кафедре физиологии сельскохозяйственных животных и биохимии Винницкого сельскохозяйственного института.
доктор сельскохозяйственных наук, профессор М. П. Кирилов; доктор биологических наук, член-корреспондент Украинской академии аграрных наук, профессор В. Г. Герасименко; доктор биологических наук Л. В. Харитонов.
Ведущее учреждение — Украинский научно-исследовательский институт физиологии и биохимии сельскохозяйственных животных.
сов на заседании специализированного совета Д 020.17.01 при Всесоюзном научно-исследовательском институте физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных.
Адрес: 249010, Калужская обл., г. Бороьск, ВНИИФБиП.
: С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан « & * 1992 г.
Официальные оппоненты:
Защита состоится
Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук
В. И. Дудни.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Для успешного решения продовольственной программы в стране одно из ведущих мест отводится интенсивному производству кормов для молочного и мясного скотоводства. Интенсификация полевого кормопроизводства tía современном этапе земледелия тесно связана с внесением в почву повышенных и высоких доз минеральных удобрений, в первую очередь азотных. Последние являются мощным фактором воздействия на урожайность кормовых культур и накопления в них питательных веществ. Одновременно с этим'азотные удобрения способствуют увеличению в растениях и продукции растениеводства повышенных и высоких концентраций, зачастую превышая нормы предельно допустимые для животных, небелковых форм азота: ;штратов и их производных — нитритов, гидроксиламина, нитрозаминов и аммиака.
Попадая в организм животных в период потребления таких кормов или с водой, нитраты и нитриты нарушают метаболические процессы, снижают оплодотворяемость, отрицательно влияют на здоровье приплода, могут вызывать аборты, отравления и гибель животных. Это наносит животноводству большой экономический ущерб.
Кратковременное или длительное скармливание животным кормов, содержащих нитраты и нитриты выше допустимых пределов, ведет к увеличению их концентраций в органах, тканях, молоке, то есть, в конечном счете в продуктах питания для людей. Потребление такой продукции животноводства (молоко, мясо) человеком небезопасно для его здоровья, особенно для детей. И не случайно в последнее десятилетие. участились случаи отравления и среди населения возникла боязнь (нитратофобия) потребления не только продукции растениеводства, но и животноводства.
В животноводстве нередко складывается парадоксальная ситуация: при обилии зеленых кормов скармливание их не представляется возможным из-за боязни отравлений и гибели животных вследствие содержания в этих кормах высоких концентраций нитратов и нитритов. В таких случаях наступают перебои в кормлении животных, что ведет к потере продуктивности. С целью выхода из такой ситуации прибегают к всевозможным мерам; такие корма задают животным в заниженных количествах,, вымачивают их в водо. последовательно замораживают и оттаивают, высушивают (А. Е. Берета и (др., 1973; Д. Д. Полоз и др., 197-9). В. других случаях в силосуемые корма вносят глюкозу, растворы соды или измельченный известняк и снижают на 31 — 47% концентрации одних лишь нитратов, не затрагивая нитритов. При это!у! процесс разрушения длится 2 месяца и более (И. Г. Шарабрин и др., 1983). Однако эти мероприятия вынужденные, мало эффективны и трудоемки.
Если принять во внимание, что нитраты в засилосованных и других кормах с нарушенной технологией заготовки и хранения, а также в: толстом отделе кишечника животных могут превращаться в нитрозамины, а они наряду с нитритами и гидроксиламином обладают канцерогенным, мутагенным, эмбриотропным и тератогенным действием, то становится очевидным — нитраты и нитриты для животных и людей превратились-в большую и острую проблему, положительное разрешение которой является исключительно актуальной и неотложной задачей ученых и практиков.
Цель к задачи исследования. Целью настоящей работы является научное обоснование и разработка новых способов снижения, нейтрализации или полного разрушения (деструкции) нитратов и нитритов в триадной цепи: растение - (корма) —■ животное (его организм) — продукция животноводства с параллельным изучением обмена веществ и продуктивности лактирующчх коров и бычков на откорме в период потребления «безнитратных» кормов, приготовленных согласно предложенным способам.
На разрешение были поставлены следующие задачи:
1. Изыскать из набора применяемых в кормлении и ветеринарии вещества, которые после внесения в силосуемую массу растений с высокими концентрациями нитратов и нитритов, способствовали бы снижению или полному разрушению этих соединений в силосе.
2. Изыскать новые источники растительного сырья для применения их в качестве добавок к силосуемым кормам с целью полной нейтрализации или деструкции нитрат—нитрнт-ных соединений при одновременном обогащении силоса питательными веществами.
3. Разработать технологические приемы предотвращения образования нитритов из нитратов в корнеклубнеплодах после варки с одновременным полным разрушением этих небелковых форм азота в кормах.
4. Разработать способ снижения нитрат - нитритных компонентов в организме животных после потребления кормов с высокими концентрациями отмеченных азотсодержащих веществ.
5. Разработать простой и надежный метод полного разрушения нитратов и нитритов в цельном и обезжиренном молоке.
6. Приспособить ранее разработанные автором способы для других целей по новому назначению — снижению концентрации азота нитратов и нитритов в вегетативной массе растений,, кормах и кисломолочных продуктах.
7. Изучить обмен веществ и продуктивность лактирующих коров и бычков на откорме в период потребления «безнитратных» кормов согласно разработанным способам.
8. Разработать гидробиологические методы диагностики загрязнения воды нитратами и их производными.
Исследования выполнены по Государственной теме 01.86.0136228, № госрегистрации 086734.
Научная новизна. Изучены механизмы разрушения, нейтрализации и снижения концентрации нитрат-нитритных соединений в триадной цепи: «растение — животное — продукция животноводства», а также гидробиологических методов диагностики загрязнения воды нитратами и их производными, которые послужили основой для создания разработанных способов.
Установлено, что клубеньки,, как ..сумма : природных биологических катализаторов (нитрат-, ширит.-, и гидроксилаынп-редуктаза совместно с леггемоглобином). корней бобовых растений, свежеопавших листьев (содержат высокие .-концентрации этилена и каротиноидов и за . счет имеющихся- в .молеку-. лах двойных связей в реакциях проявляют, повышенную, химическую активность-к присоединению других, реагентов), растворы- солей железа- сернокислого.закисного, окисного пли молочнокислого, а-также молибдената аммония (атомы железа, и-молибдена; входящие в состав активных центров редуцирующих ферментов клубеньковых и денитрифицирующих . бактерий засилосованной массы,- активируют их) после внесения их в силосуемые корма с высокими уровнями содержания нитратов и нитритов- проявляют деструктивное или нейтрализующее действие по отношению к указанным ■ азотсодержащим соединениям,- превращая их в смесь газообразных вещее I б: аммиак, азот и его оксиды. (монооксид,, диоксид, закись , азота и азотистый ангидрид). Отмеченные препараты сернокислого (лактата) железа проявляют аналогичное действие в, корнеклубнеплодах в период вар^и (также в.преджелудках крупного рогатого скота после потребления .нитратов и нитритов с кормами). , .
Получены-приоритетные-данные о том, что нитраты и их производные вызывают депигментацию кожного покрова у земноводных; влияют на' репродуктивные органы улиток, путем синхронного-отложения яиц, икрометания и изгнания из полости матки маленьких улиток (у живородящих видов); проявляют антигельминтНое и акарицидное действие в органах локализации паразитов у муравьев, земноводных, моллюсков, сельскохозяйственных животных. и птицы.
Установлено также, что центрифужным давлением можно регулировать интенсивность ростовых реакций в растениях и эмбрионах лиц насекомых, а- также степенью активности ферментов прокариот (лактобактерий н дрожжей) с целью торможения- или ускорения мегаболизма нитратез и .нитритов для снижения концентраций ётих соединений в вегетативной массе растений, кормах и кисломолочных продуктах.
Изучены переваримость «безнитратных» кормов и ретенция азота и их влияние на продуктивность дойных коров и бычков в период откорма.
Практическая значимость. Впервые в науке и практике разработаны приоритетные способы одновременною снижения или полной деструкции и нейтрализации нитратов и нитритов в три-адной цепи: «растение—животное — продукция животноводства» для предупреждения возникновения нитрат-нт ритного токсикоза и его последствий у животных и получение диетической «безнитратной» продукции животноводства: в засилосованных кормах (а. с. №№ 1192769, 1212406, 1371601, 1337035); в вареных корнеклубнеплодах (а. с. № 1281242); в организме животных после потребления кормов (а. с. № 1362433); в цельном или обезжиренном молоке (а. с. № 1361744 — «Т»),
Проведены испытания ранее разработанных автором способов для других целей по новому назначению - - снижению уровней содержания нитратов и нитритов в период выращивания растений на зеленый корм (а. с. № 725592), в кормах (а. с. № 1 102809). в кисломолочных продуктах (а. с. № 1147326).
Разработаны гидробиологические методы диагностики загрязнения воды нитратами и их производными с одновременным выделением из организма лабораторных животных биообъектов для учебных и научных целей (а. с. №№ 1253553, 1355203, 1355287, 1391557, 1430017, 1445660, 1464991).
За содержание пионерской мировой новизмы в технологических решениях разработанных способов Государственный Комитет по изобретениям и открытиям СССР 6 авторским свидетельствам присвоил фамилию автора.
Установлено, что потребление животными «безнитратных» кормов после разрушения или нейтрализации нитратов и нитритов способствует более эффективному использованию их вследствие повышения переваримости, усвояемости питательных веществ и ретенции азота, и, как следствие, сопровождается достоверным повышением молочной и мясной продуктивности.
В ■ конечном . итоге разработанные/ способы обеспечивают получение, «безнитратной» • продукции животноводства, что предупреждает возникновение нитрат-нитритносо; токсикоза у людей.
Реализация результатов исследований. Отдельные научные положения диссертационной работы были использованы в период проведения научно-хозяйственных опытов на животных студентами зооинженерного факультета Винницкого СХИ. Материалы экспериментальных исследований • были положены в основу для написания и успешной защиты 12 дипломных работ.
Теоретические и. методические разработки проблемы нитратов являются главной. темой' биохимического кружка при кафедре физиологии сельскохозяйственных животных . и биохимии, где студенты зооинженерного и агрономического факультетов Винницкого СХИ занимаются научно-исследовательской работой:
■ Способы снижения, разрушения и нейтрализации нитратов и нитритов в; растениях,- кормах, в организме животных и кисломолочных продуктах нашли постоянное использование в отдельных колхозах и молокозаводах Винницкой (с 1983 г. ) и Запорожской (с 1989 г.) областях.
Разработки автора введены в программу лабораторных и лекционных занятий • студентов зооинженерного факультета по курсам биологической и органической химии и кормления сельскохозяйственных животных и используются - в Винницком СХИ с 1986 года.
. Совместно с. сотрудниками У.СХА автор принимает участие в выполнении исследований по союзной теме «Нитраты». . Результаты разработок автора включены профессором Харьковского зооветеринарного • института ¡Максаковым В. Я. к Шевцовой Г. Н. в брошюру «Нитраты- и кормление, животных» (Киев: Урожай, 1990).
Основные положения, выносимые на защиту:
— биох-имическое и биологическое обоснование механизмов разрушения и нейтрализации нитратов и.нитритов в три-адной цепи: «растение — животное — продукция' животноводства»;
— химико-биологические аспекты гидробиологических способов диагностики загрязнения воды нитратами и их производными; '
— влияние нитрат-нитритных соединений на обмен веществ у животных;
— результаты исследований по переваримости «безнитратных» кормов и влиянию их на продуктивность лактирующих коров и бычков в период откорма.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Всесоюзных конференциях во Всесоюзном НИИ физиологии, биохимии и питания с.-х. животных (Боровск, 1985, 1988 г.г.) на ученом совете ВНИИФБиП (Боровск, 1991 г.), на Республиканской конференции «Проблема нитратов в животноводстве и ветеринарии» (Киев, .1990 г.), на республиканском семинаре директоров и ветврачей-токсикологов областных ветлабораторий Украины (Киев, 1990 г.), на выездных заседаниях научного совета Президиума АН УССР по проблеме «Биохимия животных и человека» совместно с Винницким областным биохимическим обществом (Винница, 1984, 1988 г.г.), на конференциях «II и V объединенная научная медико-техническая конференция» (Винница, 1984, 1986 г.г.) на заседаниях ученых советов Винницкого СХИ И УСХА (1983 — 1991 г. г.).
Публикации. Материалы научных исследований по теме диссертации (доклада) опубликованы в 42 работах, двух методических указаниях для проведения лабораторных занятий студентов, двух сборниках и 30 авторских свидетельствах (а. с.) на изобретения. Список основных статей, а. с. и ссылки на них приведены в диссертации (докладе).
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ
Экспериментальные исследования проводились в 1983 — 1990 годах на кафедре физиологии сельскохозяйственных животных и биохимии Винницкого сельскохозяйственного института, на полеЕых участках, фермах и комплексах по производству молока и мяса колхозов, а также на молокозаводах Винницкой и Запорожской областей. ......
Для получения .кормовых культур (трава посевных злаков, .кукуруза на зеленый корм и силос, картофель, -корнеплоды к „ботва сахарной или кормовой свеклы и другие) ,с высоким уровнем содержания нитратов и нитритов на отведенных посевных площадях вносили высокие дозы аммиачной селитры .— по 720-900 кг действующего вещества (д. в.) азота на 1 га, как правило, 3 раза за период вегетации растений по 240-300 кг. Такие корма использовали в экспериментах для приготовления силоса или варки (корнеклубнеплоды). Это было необходимо, чтобы убедиться в том, что испытуемые компоненты химического или биологического происхождения обеспечивают после внесения в корма высокой степенью деструкции или нейтрализации нитрат-нитритных веществ.
Если поставленцая цель достигается, то это заведомо даст гарантию полного разрушения или нейтрализации и более низких концентраций нитратов и нитритов, которые чаще имеют место в полевом кормопроизводстве.
В научно-хозяйственных опытах на животных использовали корма с более низким содержанием нитрат-нитритных соединений. Для этого на отведенных участках под кормовые культуры вносили аммиачную селитру по 240 — 300 кг/га д. в. азота два раза в течение периода вегетации растений.
Опыты по определению переваримости питательных веществ ц баланс азота у коров и бычков осуществляли по методикам, описанным А. И. Овсянниковым (1976). ' Условия кормления животных, методики силосования кормов, снижения или разрушения нитратов и нитритов в цепи «растение—животное — продукция животноводства» описаны при изложении опытов.
-- Химический анализ кормов, молока, мочи и кала проводили по методикам в изложении Т. П. Лебедева, А. Т. Усовича (1976). Синильную, кислоту- в кормах определяли по методу и описании В. Я. Антонова, II. Н. Блинова (1971).
В отобранных пробах крови у животных определяли количество эритроцитов, ретикулоцитов, содержание гемоглобина (А. А. Кудрявцев, Л. А. Кудрявцева, 1974), активность аль-долазы в изложении В. Г. Колба, В. С. Камышникова (1976), пероксидазы и метгемоглобин (1, 13), в сыворотке крови, молоке и образцах кормов —азот нитратов и нитритов (12, 16. 22); в моче — оксипролин (20).
Учет молочных продуктивностей коров и определение среднесуточного прироста бычков на откорме проводили общепринятыми методами.
В период проведения научно-хозяйственных опытов по заготовке кормов на силос и на животных в отдельных этапах исследований принимали участие студенты-дипломники зоо-инженерного факультета.
Проведено 16 опытов по силосованию кормов в лабораторных условиях и в производственных, 28 — на животных (в т. ч. 6 балансовых и 16 на мелких лабораторных животных), 2 полевых и 3 по приготовлению кисломолочных продуктов.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Биологический способ разрушения нитратов и нитритов в засилосованных кормах (а. с. № 1212406)
В основу разработанного биологического способа деструкции нитрат-нитритных соединений в засилосованных кормах была заложена следующая концепция механизма разрушения этих веществ. Известно, что в составе клубеньков бобовых растений (в опытах использовали измельченные корни боба конского, клевера, люцерны и других) содержатся леггемогло-бин (аналог гемоглобина эритроцитов животных и челосгкл) я клубеньковые бактерии (Д. Мецлер, 1980). Последние в процессе симбиоза вырабатывают ферменты: нитрат —, нитрит- и гидроксиламинредуктазу и принимают участие в метаболических превращениях нитратов, нитритов и гидрокси-ламнна соответственно, в конечном итоге, до аммиака (В. Л. Ь'ретович. 1980; Л. СтраГир, 1984). При этом реакции протекают последовательно в" три стадии (Д. Мецлер, 1980; Г. Шлегель, 1987).
На первой стадии нитраты восстанавливаются до нитритов при участии энзима нитратредуктазы и НАДФН2.
Во второй стадии нитриты взаимодействуют с ферментом иитритредуктазой с образованием промежуточных соединений монооксид азота и нитроксила. ,
И на третьей стадии гидроксиламин в присутствии НАДФН2 реагирует с гидроксиламинредуктазой, вследствие чего образуется аммиак.
Это первая часть концепции. Вторая — сводится К тому, что поверхность силосуемых растений обсеменена эпифитной микрофлорой (М. Г. Таранов, А. X. Сабиров, 1987). среди которой содержатся денитрифицирующие бактерии. Им присущ нитратный тип дыхания,'которое протекает в анзэррбных условиях (такие имеются в массе после закладки кормов на силос).' Денитрифицирующие бактерии обладают способностью восстанавливать нитраты через нитриты до газообразных соединений —" азота и его оксидов (Г. Шлегель, 1987).
В конечном счете после денитрификации нитратов и нитритов образуется газообразная смесь, которую называют силосным газом (В. Д. Фокипа, В. В. Мальцев, 1978).
Паралельно с изложенным могут протекать и другие не менее важные биохимические процессы. Так, оксидоредуктаз-ные ферменты пероксидаза и каталаза клубеньков и клубеньковых растений, а также леггемоглобин и цитохромы, обладающие иероксидазными свойствами, могут способствовать преобразованию нитрат-нитритных соединений в другие азотсодержащие вещества (Г. Я. Жизневская, 1972; Б. К. Са-ундерс, 1978). Не исключено также активирование ферментов изложенных реакций химическими элементами, которые во внесенной корневой массе составляют 60 — 80% от концентрации их в целом растении (А. А. Титлянова, 1979). В итоге происходит полное разрушение нитратов и нитритов в засилосованном корме, то есть, в целом клубеньки (как сумма биологических катализаторов) бобовых растений в сочетании с денитрифицирующими бактериями являются высокоэффективными деструктивными агентами по отношенью к отмеченным азотсодержащим веществам.
В первом опыте после уборки зеленой массы боба конского, клевера, люцерны и других бобовых растений проводили вспашку земельных участков. На этих площадях собирали корневую массу с клубеньками, промывали водой и измельчали на соломорезке, получая однородную массу, которую использовали в виде добавок в силосуемые корма. Затем, брали навеску измельченной массы кукурузы с подсолнечником (стадия молочно-восковой спелости) массой 12 кг и разделяли на 6 равных частей (первая — для контроля, остальные — для опытов). В каждую навеску корма, за исключением первой, вносили добавки измельченных корней с клубеньками бобовых растений в количестве 0,05, 0,1, 0,5, 1 и 2% во II, III, IV, У и VI порцшо соответственно (табл. I).
Через 10 и 20 сут с момента закладки корма сосуды вскрывали и в отобранных образцах определяли уровень нитратов и нитритов. - :
В таблице 1 приведены данные по внесению корней с клубеньками люцерны, так как при использовании корневой массы других видов бобовых растений выявлена такая же закономерность. Они свидетельствуют о том, что дозами, при которых наступает полное разрушение нитратов в силосуемых кормах в смеси с корнями бобовых растений с клубеньками следует считать 0,1 — 1% от массы исходного сырья.
Во втором опыте проведено испытание рекомендуемых доз измельченных корней в производственных условиях в колхозе «Маяк» Винницкой области. Для этого после скашивания, зеленой массы боба конского, имеющего массивную корневую систему с обилием клубеньков крупных размеров, земельный участок вспахивали, собирали корни, промывали их и измельчали. Затем к измельченной зеленой массе кукурузы добавляли 5 кг (05%) корней боба ктст-'г^о. Смесь тщательно перемешивали до получения однородной массы. Для контроля была заложена яма с зеленой массой кукурузы без добавок.
Перед силосованием и через 10 и 20 суток после закладки отбиоалн образцы для определения азота нитратов и нитритов. При этом в исходной зеленой массе кукурузы содержа1 .т'ось в среднем 391 мг% нитратов и 11.1 мг% нитритов или' 2,172 и 0,061% в пересчете на сухое вещество. В силосс
контрольного варианта через 10 суток после, закладки было соответственно 348 и 10 мг% изучаемых соединений, то есть уровень азота нитратов по отношению к исходной массе снизился на 11%, а. азота нитритов — на 9,9%. В опытном силосе через 10 суток содержалось 80 мг% азота нитратов и 2,8 мг%- азота нитритов- (снижение на 78 и 75% соответственно). Через 20 суток токсиканты не обнаружены, а в контроле снижение составило всего лишь 30%. Из этого следует, что результаты исследований в производственных условиях согласуются с данными, полученными в первом опыте.
1. Содержание азота нитратов и нитритов в зеленой массе и в силосе, мг%
№ сосуда
Корм 1 ?! 3 I 4 1 5 б
доза измельченных корней люцерны, %
0 О.Оо I 0,1 I Г,5 1 1 2
I вариант
Зеленая масса Силос
Разрушилось, %
Зеленая масса Силос
Разрушилось % II. вариант —
определение через 10 сут АЗОГ НИТРАТОВ
390 390 394 388
351 320 110 87
10 18 72 78
АЗОТ НИТРИТОВ
11,0 11,2 11,8 11,0
9,7 8,8 2,5 1,9
12 21 79 83
Зеленая масса Силос
Разрушилось, %
Зеленая масса Силос Разрушилось,
определение через 20 сут АЗОТ НИТРАТОВ
390 390 394 388 270 43 О О 31 89 100 100
АЗОТ НИТРИТОВ 11,0 11,2 11,8 11,0 7,8 1,8 О О % 33 84 100 100
392 43 89
11,4 1,4 88
392 О 100
11,4 О 100
390 39 90
11,0 1Д 90
390 О 100
11,0 О 100
3.2. Биологический метод нейтрализации нитратов и синильной кислоты в засилосованных кормах (а. с. №1337035)
Рабочая гипотеза сущности механизма нейтрализации нитратов и синильной кислоты в засилосованных зеленой массе кукурузы или в ботве сахарной (кормовой) свеклы в смеси с внесенными добавками свежеопавших листьев деревьев (липы, береста, березы, клена и других используемых нами в опытах), предположительно, сводится к следующему. В свежеопавших листьях (в период осеннего листопада) по сравнению с зелеными в период вегетации растений содержатся в высоких концентрациях пигменты карогиноиды (каротины, ксантофиллы, лутены) и этилен (СН2=СН2). Уровни последнего возрастают в сто раз (А. Гэлстон и др., 1983). Молекулы каротиноидов состоят из четырех изопреновых остатков ■ и друх циклогексеновых ядер (А. И. Колотилова, Е. П. Глу-шанков, 1976). В остатках изопреновой цепи и в молекуле этилена содержатся двойные связи, которые обуславливают повышенную активность этих соединений в реакциях к присоединению других химических веществ по месту расположения их (Л. Полинг, П. Полинг, 1978).
Молекулы нитратов и синильной кислоты в растительной массе силосуемых кормов находятся в ионном состоянии, что существенно повышает активность с присущими им химическими свойствами к присоединению (Н. Г. Глинка, 1986). В этой связи, полагаем, что нитраты и синильная кислота в си лесах легко вступают в реакцию присоединения (по месту расположения двойных связей) с этиленом и остатками изопреновой цепи каротиноидов, образуя при этом новые соединения с углеводородами.
Вероятно, в таких органических формах нитраты и цианистая кислота не оказывают отрицательное влияние на организм животных в период потребления их в составе силосов. Поэтому в способе (а. с. № 1337035) нитраты и синильная кислота пе разрушаются, а нейтрализуются. ■ Мы пе исключаем возможностей образования других соединений между указанными реагентами.
.Научно-хозяйтвенные опыты в двух вариантах'проводили в 1984 г. в колхозе им. Куйбышева Винницкой, области. Для этого в I (II) вариантах (по 4 ямы на каждый — первые емкости для контроля, остальные — для опытов) проводили силосование, зеленой массы кукурузы в стадии молочной' спелости и ботвы сахарной свеклы. Для этого в конце сентября в лесу собирали необходимое количество свежеопавших листьев (смесь липы, береста, березы, клена и других); Лиственную массу (в количестве 5, 12, 5 и 20%) вносили-порциями к навескам, силосуемых кормов,- Смесь перемешивали до ■получения однородной массы. Поочередное внесение листьев, навесок массы корма и перемешивание проводили до наполнения емкостей, которые герметизировали общепринятым методом. В исходных образцах кормов и в силосах, отобранных через 17 и 20 дней после заготовки, определяли концентрацию нитратов и синильной кислоты. Установили, что добавки свежеопавших листьев деревьев к' силосуемой массе ботвы сахарной свеклы способствуют полному разрушению нитратов и синильной", кислоты в силосе через 20 дней с момента заготовки. Аналогичная полная- нейтрализация отмеченных соединений. за указанный период отмечалась и в 1 варианте при силосовании зеленой массы кукурузы в смеси с добавками свежеопавших листьев.
.. .Приведенные результаты исследований дают основание заключить, что с целью одновременной полной нейтрализации в силосуемых кормах' нитратов и синильной кислоты следует использовать свежеопавшие листья лиственных пород деревьев в количестве от' 5 до 20% от общей массы.
3.3. Химический способ разрушения нитраг-нитритных " соединений в засилосованных кормах (а. с. № 1192769)
Известно, что в составе эпифитной микрофлоры силосуемых растений содержатся денитрификаторы (эптеробактерии, клостридии, псевдомонады и другие; сюда относятся так;:со лактобацнллы). В процессах метаболизма они получают энергию путем использования нитратов-. Синтез ферментов (нитрат- и нитритредуктаза), необходимых для денитрифика-цнп, индуцируется только в анаэробных условиях (Г. Шле-
гель. 1987), которые имеют место в засилосованных кормах.
Молекулы нитритредуктазы в составе каталитических центров содержат атомы железа (Ф. Боуден, 1978). Кроме того, при нитратном дыхании денитрифицирующие бактерии получают энергию путем фосфорилирования углеводов и, обладая системой переноса электронов в митохондриях, содержат ци-тохромы (Г. Шлегель, 1987). В составе молекул ттт'то-'^тт^г-также имеются атомы железа (М. Макинен, 1978).
Известно также и то, что к группе окислительно-восстановительных металлоферментов, содержащихся в молочнокислых бактериях, относятся каталаза и пероксидаза (Г. Готт-шалк, 1982). Составными частями молекул этих энзимов является железо (М. Хьюз, 1983). ГТероксидазы катализируют реакции ряда химических соединений, в том числе нитратов и нитритов (1, 10). Установлено также, что каталаза обладает пероксидазными свойствами (А. Уайт и др., 1981). Видимо, названные энзимы и, в первую очередь' нитрат-- и нитритредуктаза в процессах заквашивания кормов,- играют одну из важнейших функций по разрушению нитратов и нитритов (для бактерий силоса такой процесс, очевидно, служит одним из главных источников получения энергии и азота для метаболических реакций). После внесения путем увлажнения растворов железа (также обладают пероксидазными свойствами — Б. Саундерс, 1978) закисного или окисного — эти препараты мы использовали в опытах — в силосуемую массу растений, особенно при повышенной температуре (процесс сомосогревания корма впервые дни после закладки его в емкости) наступает резкое повышение активности ферментой (увеличение в кормовой смеси температуры на 10° сопровождается увеличением скоростей биокаталитических реакций в 2 — 3 раза — М. Т. Таранов, А. X. Сабиров, 1987). Это проявляется уск-юэнным ресщеплением нитратов и нитритов с образованием г--осных газов. Высокая концентрация этих гассобразных соединений появляется в первую пятидневку после закладки кормов на силос. При образовании диоксида агста газы, собирающиеся над поверхностью силоса, приобретают бурый цвет и пезкнй запах, что отмечагось в наших опытах (24, 27, 28, 30).
Изложенная концепция была положена в основу механизма деструкции нитрат-нитритиых соединений в засилосованных кормах с применением солей железа (а. с. № 1192769).
' Ход работы в. период проведения опыта был аналогичным испытаниям ■ но силосованию кормов с добавками измельченной корневой массы бобовых за исключением того, что здесь исходное сырье перед закладкой в емкости опытных сосудов увлажняли растворами сернокислого железа окисши о или закисного различных концентраций (которые для второго реагента указаны в таблице 2). Расход раствора на корм 1:50. Определение концентрации нитратов и нитритов в си-лосах проводили через 8 и 15 дней от начала опыта. Результаты исследований (табл. 2) свидетельствуют, что увлажнение зеленой массы кукурузы, содержащей высокую концентрацию нитратов и нитритов (в среднем 1,378% и 0,033% соответственно в пересчете на сухое вещество), 0,05 — 0,25%-нымн растворами сернокислого .железа закисного через 8 сут от начала силосования приводило к снижению концентрации азотсодержащих токсикантов на 27 — 44% по сравнению с контролем, а через 15 сут они разрушились полностью. Из этого следует, что для практического использования можно ■рекомендовать 0,05 —0,25%-ные растворы сернокислого же леза закисного.
.Для проверки результатов лабораторных исследований в производственных условиях: был заложен специальный опыт в 'колхозе «Маяк» Винницкой области.
Результаты показали, что через 8 дней от начала консервирования зеленой массы кукурузы уровень нитратов и нитритов снизился соответственно на 41 и 38% (в контроле — на . 5" и 6). Через 15 сут — эти вредные вещества в сп.-осс-опытной ямы разрушились полностью, а в контроле" — ~ всего лишь на.12%.. Таким образом, результаты производственного опыта подтвердили закономерности, установленные нами в лабораторных исследованиях.
2. Содержание азота нитратов и нитритов в зеленой массе кукурузы и силосе
Содержание азота, мг%
Концентрация соли в растворах, °/0 Нитратного Нитрит" но го
в зеле-11 о й магсе в силосе разрушилось, й) г £ и О ге X Е ¡Е • В силосе разрушилось, %
I вариант (определение через 8 сут.) 0 — контроль 244 232 5 6,0 5,7 о 0,05 240 158 34 5,7 3,9 32 0,1 248 144 42 5,9 3,4 42 0,25 258 132 49 6,2 3,3 47
II вариант (определение через 15 сут.)
0 — контроль 244 217 11 6,0 5,0 12
0,05 240 0 100 5,7 0 100
0,1 248 0 100 5,9 0 100
0,25 258 0 100 6,2 0 100
В других опытах проводили испытания с сернокислым железом окисным и установили, что полная деструкция нитратов и нитритов в силосуемых кормах наступает через 15 сут. после увлажнения исходного сырья 0,065 — 0,325%-ны-ми растворами соли железа при соотношениях массы раствора к корму от 1:50 до 1:100.
3.4. Ускоренный биолого-химический метод деструкции нитратов и нитритов в силосуемых кормах (а. с. № 13716"
Сущность рабочей гипотесы механизма разрушения нитратов и нитритов в засилосованных кормах с внесенными добавками измельченных корней о -кубеньками бобовых растений и последующим увлажнением исходной смеси растворами железа сернокислого закисио:о и молибдената аммония (использовали их в проводимых нами опытах) состоит в следующем. Клубеньковые бп:терии, как уже отмечалось, содержат редуцирующие ферменты: нитрат-, нитрит- и гидро-
ксиламннредуктазу. В составе каталитических центров молекул первого энзима и второго имеются атомы молибдена и железа соответственно (Ф. Боуден, 1878; К. Мак Олифф, 1978). Из этого следует, что увлажнение силосуемой кормовой смеси, содержащей повышенную или высокую концентрацию нитратов и нитритов, растворами солей железа и молибдена (являются активаторами нитрат-и нитритредуктазы — М. Макинен, 1978) должно вызывать существенное увеличение скоростей биохимических реакций между субстратами .(нитрат-питритпыми соединениями), редуцирующими ферментами внесенных клубеньков бобовых растений и анаэробных денитрификаторов засилосованной смеси с образованием силосного газа.
По существу рабочая гипотеза этого метода объединяет механизмы разрушения нитратов и нитритов в засилосованных кормах двух разработанных нами способов — биологического (с применением клубеньков корней бобовых растений) И химического (с использованием растворов солей железа и молибдена).
1 Такое 'сочетание в прикладном аспекте дало возможное!"^ " проводить . деструкцию нитрат-нитритных соединений в течение пяти суток' после начала силосования, что в 3 и 4 рг'-за быстрее по сравнению с химическим (а. с. № 1192769) и биологическим (а. с. № 1212406) способами.
Методики проведения экспериментальных исследований в лабораторных и производственных условиях были такие же, ""как и в предыдущих опытах но приготовлению силосов за " исключением того, что здесь к измельченной зеленой массе - растений, перед силосованием вносили от 2 до 20% измельченных корней с клубеньками бобовых растений. Смесь увлажняли 0,1%-ным раствором сернокислого железа закисного и соотношении 1:75, тщательно перемешивали и дополнительно Опрыскивали 0,05 — 0,015%-ными растворами молибдепата аммония (1:50). В исходном корме и в образцах силосов "а 4-й и 5-й дни после заготовки определяли концентращп агота нитратов и нитритов. Установили (табл. 3), что псицей-трация нитратов- и нитритов в засилосованной смеси зеленой массы кукурузы в стадии молочно-восковой спелости и
3. Динамика разрушения нитрат-нитритных соединений в засилосованном корме
Корм
№ ями для силосования
-КОНТРОЛЬ I £
Внесено кормезоЙ иассы,
О
II
Растворы соли молибдена, %
О
0,005
0,01
I вариант — определения через 4 дня Азот нитратов, мг% 390 386
Зеленая масса
Силос 304 100
Разрушилось, % 22 74
Зеленая масса
Силос 9,2 3,0
Разрушилось, % 21 74
Азот нитритов, мг% 11,8 11,4
376 75 80
10,6
2,0 81
II вариант — определения через 5 дней Азот нитратов, мг%
4 20
0,015
362 29 92
8,8
0,9 90
Зеленая масса 390 386 376 362
Силос 292 0 0 0
Разрушилось, % 25 100 100 100
Азот нитритов, мг%
Зеленая масса 11,8 1-1,4 10,6 8,8
Силос 8,7 0 0 0
Разрушилось, % 26 100 100 100
корней боба конского через 4 дня после закладки ее в дикости по отношению к исходному сырью снизились на 74— 92% (в контроле всего лишь на 21 — 22%), а через 5 суток — они разрушились полностью (в первой яме — на 25 — 26%). Из этого следует, что для ускоренной и полной деструкции нитрат-нитритных токсикантов в силосуемые корма следует вносить в виде добавок ог 2 до 20% измельченных корней с клубеньками бобовых растений с последующим чередованием перемещения и увлажнения 0,1%-ным раствором сернокислого железа закисного в соотношении 1:75 и 0,005 — 0,015%-нымИ' растворами молибдената аммония (1:50). Это дает возможность без каких-либо ограничений использовать корма животным уже через 5 дней после заготовки на силос.
3.5. Технологические приемы деструкции небелковых форм азота и предотвращение образования нитритов из нитратов в корнеклубнеплодах (а. с. № 1281242)
В рацион кормления животных часто включают свеклу, картофель и турнепс в вареном или запаренном виде. В таких кормах в период остывания и хранения свыше 5 — 6 часов происходит преобразование нитратов в нитриты, концентрация кс-торых прогрессивно нарастает по мере удлинения сроков хранения. Если в течение отмеченного времени корма не используют, то их не разрешают задавать животным («Методические указания по диагностике, профилактике и лечению отравлений сельскохозяйственных животных нитратами и нитрн тами». М., 1979; 1986)..
В этой связи нами разработан способ одновременно~о н полного разрушения нитрат-нитритных соединений в корнеклубнеплодах с одномоментным предотвращением образован;!;] нитритов из нитратов в этих кормах после проварки в период хранения. Основой для теоретического. обоснования этого способа послужили следующие положения. В связи с тем, что железо (в опытах применяли растворы солсй железа сернокислого закисного или окисного) обладает пероксидааныг.ш свойствами, то оно может катализировать реакции с нитратами, нитритами и окисью азота (Д. Уэбб. 1978; Б. К. Саун-
дере, 1978) за счет избыточного количества перекисей (Д. Мецлер, 1980), образование которых не исключено при длительном варении (2 — 3 часа) корнеклубнеплодов (корней свеклы кормовой или сахарной, турнепса, картофеля и других) в растворах солей железа сернокислого закисного и;нг окисного. Возможно также усиление каталитических свойств железа в растворах при высокой температуре (100°С в период кипячения) и рядом органических и неорганических соединений, содержащихся в кормах. При этом могут активно протекать окислительно-восстановительные реакции, в которых железо может соединяться с донорными атомами азотсодержащих соединений и кислорода (Г. Б. Грэй, Г. Д. Шугар, 1978). Полагаем, что следствием взаимодействия применяемых нами растворов железа с нитратами и нитритами, является расщепление их на газообразные вещества, аналогичные конечным продуктам, образующимся при силосовании.
Опыт проводили следующим образом. Брали 4 кастрюли емкостью 10 л каждая и вносили по 6 кг измельченных корнеплодов сахарной свеклы. В 1 кастрюлю (контроль) наливали 3 л воды (отношение ее к корму 1:2), а во II—IV — по 3 л растворов сернокислого железа закисного в концентрациях соответственно 0,035, 0,07 и 0,1% (опыт). Содержимое кипятили в течение 3 часов. По мере испарения воды в каждый сосуд до меток добавляли кипяченую воду. После истечения указанного времени варки растворы и воду удаляли и варе ный корм в открытых емкостях оставляли в помещении на 24 часа. Сразу же после варки — 0 ч и через 1,5, 2, 12 и 24 ч брали средние образцы корма для определения концентрации асота нитратов и нитритов (то же делали и в сырой свекле).
Результаты исследований (табл. 4) свидетельствуют о том, что после варки на протяжении 3 ч в 0,035 — 0,1%-ных растворах сернокислого железа закисного по сравнению с контролем через 2 ч наступает полное разрушение в корме как нитратов,'так и гптритов. Паралелыю с этим в контроле после варки в период хранения наступает снижение нитратов и одновременно наргщиван№ пигриточ, концентрации которых достигают максимума через 24 ч хранения.
4. Содержание небелковых форм азота в свекле в зависимости от концентрации солн железа в растворах в период, варки и времени хранения после нее, мг%
к № СиСудив
£ о С. I—контроль 3 4
X Конце» фации соли железа в раствор IX, %
2 <У о. СО сг О 0,035 0,07 0,1
0. 1,5
о
12 24
О
1,5
2 12
24
272 264 262 236 181
7,1 7,3 7,5 34,4 88,8
Азот нитратов 114(58) 93(66)
52(81) 27(90)
0(100) 0(100) 0(100) 0(100) 0(100) 0(100) Азот нитритов
3,2(55) 1,6(77) 0(100) 0(100) 0(100)
2,8(61) 0,9(87) 0(100) 0(100) 0(100)
52(81) 5(98) 0(100) 0(100) 0(100)
1,8(75) 0,4(96) 0(100) 0(100) 0(100)
Примечание: в скобках цифры показывают разрушение, %.
Аналогичным разрушающим действием по отношению к пи-тратам и интригам как в клубне-, так и в корнеплодах обладают и растворы сернокислого железа окисного в концентрациях 0,045 — 0,135% (25, 26).
Таким образом, для предупреждения возникновения нитрат-пнтритпого токсикоза у зкяеопгых в период потребления ими корнеклубнеплодов в вареном виде следует такие корма (свекла, картофель), варить в 0,035 — 0,1 или 0,045 — 0,135%-ных растворах сернокислого железа закиспого или окисного соответственно (отношение кормов к- растворам
1:1 или 1:2) путем кипячения на протяжении 3 ч с последующим остыванием в течение 2 ч и скармливанием животным на протяжении 22 часов с момента охлаждения.
3.6. Метод снижения нитратов и нитритов в организме животных (а. с. № 1362433)
Эволюционное развитие органов пищеварения у жвачных животных в филогенезе привело к образованию многокамерного желудка в отличие от моногастричных. Видимо, сама природа преджелудков полигастричных животных способна смягчать вредное действие нитратов и нитритов на их организм за счет спмбиотической микрофлоры. Среди этих бактерий имеются прокариоты, которые в процессе роста и размножения синтезируют для обеспечения метаболических процессов редуцирующие ферменты: нитрат-, нитрит- и гидрокси-ламинредуктазу (Н. А. Шианенков и др., 1978). Механизм превращений нитратов и нитритов кормов в преджелудках жвачных при участии указанных энзимов до аммиака (он частично используется прокариотами для синтеза аминокислот и других азотсодержащих компонентов их клеток) аналогичный преобразованию этих соединений микроорганизмами клубеньковых бактерий.
В проведенных нами опытах на бычках и коровах, потреблявших корма с высоким уровнем нитратов, использовали лактат железа. В этом препарате железо связано с органическим соединением — молочной кислотой, что существенно повышает сто биологическую активность в организме животных.
Мы уже отмечали, что растворы солей железа, активируют нитрат-, нитрит- и гидог кеиламинредуктазу. По этой аналогии, полагаем, что применяемый нами в опытах на животных лактат железа в преджелудках жвач"ых, является сильным активатором редуцирующих ферментов прокариот и других био-каталнзаторов желудочпо-кишечгого тракта, а после его усвоения — ряда энзимов органов и тканей. Это может проявляться существенным стимулированием окислительно-госста-пчвитсльных процессов в организме животных (Л. М. ДжопС, 1972; II. Е. Мозгов, 1981) и в клетках прокариот прсджс-
лудков где, очевидно, повышается степень диструкции нитратов и нитритов, усиливается ассимиляция их клетками денитрифицирующих бактерий, возрастает степень усвоения аммиака другими видами сиыбиотической микрофлоры. Полагаем также, что при разрушении нитратов и нитритов в преджелудках бычков и коров при участии лактата железа образуются азотсодержащие вещества (идентичные по составу силосным газам), которые у животных в смеси с другими газами при регургитации выделяются наружу.
В физиологическом опыте измельченную зеленую массу кукурузы увлажняли растворами лактата железа в концентрациях 0,1, 0,2 и 0,3% вторую — четвертую навески (опытные) соответственно. Расход растворов к навескам корма 1:75. Затем по методу аналогов формировали 4 группы (1 — контрольная, II — IV — опытные) бычков (по 4 в каждой) симментальской породы, возрастом-12—14 мес. и средней живой массой 308±12 кг. Приучать животных всех групп к потреблению корма с высоким содержанием нитратов (78,7 мгг/о азота нитратов) начинали постепенно: первый день задавали в расчете па одну голову 15 кг зеленой массы кукурузы, выращенной на участке с внесением высокой дозы аммиачной селитры (и 25 кг такого же корма, ко без применения минерального удобрения в период вегетации растений), па второй день — 20(20), 3-й — 25(15), 4-й — 30(10), 5-й — 35(5 кг) и па 6 — 7-й — по 40(0). Каждое животное за исключением контрольной группы на шестые — седьмые сутки в составе рациона принимало по 31, 48 г азота нитратов. Всем животным дополнительно скармливали ячменную дерть (2 кг/сут ). Кормление было двухразовое, поение водой из автопоилок. В конце опытного периода (7 дней) через 3 часа после утреннего кормления из яремной вены брали кровь у всех бычков. В сыворотке крови определяли концентрацию нитратов и нитритов.
Результаты исследовашшй (табл. 5) показали, что испытуемый лактат железа при концентрациях в растворе ОД—0,3% п расходе реагента на корм 1:75 после увлажнения зелено!! массы кукурузы с высоким содержанием нитратов и потребление ее бычками сопровождалось снижением уровня азота пнт-
ратов и нитритов на 19 — 91% по сравнению с контрольной группой' животных.
В последующих опытах, проводимых по аналогичной схеме, изучали действие на нитрат-нитритные соединения соли железа молочной кислоты по 1—3 г/гол/сут в кристаллическом виде в смеси с концентратами перед скармливанием зеленой массы. Установили,' что для снижения концентрации нитратов и нитритов в кормах после их скармливания и в организме животных необходимо использовать 0,1 — 0,3%-ные растворы лакта-та железа и вводить их в корма путем увлажнения в соотношениях 1:50—1:100. В других случаях при поступлении для крупного рогатого скота кормов с высокой концентрацией нитратов и нитритов перед их скармливанием животных следуст задавать по 1 — 3 г на одну голову в сутки лактата железа,
5. Содержание азота нитратов и нитритов в сыворотке креви бычков в зависимости от концентрации лактата железа в растворах
РЗ е • о «и гз а а о. « 5 Содержание азота, Сннх^чие азота, %
е с. 1_ 3 я 2 <•-> 2 £ - ^ нитратов, " интриган, 'г То 1 .'-'КГ % нитратов 1 нит-'ритоп
1-К 0 0,96±0,18 62 + 1,0 0 0
2 од 0,78±0,13 4*9±2,3 19 21
3 0,2 0,61+0,17 37 ±1,8 37 40
4 0,3 0,09 + 0,01 , 6±0,2 91 90
3.7. Другие способы снижения нитратов в триаде: растение—животное—продукция животноводства
Для снижения содержания нитратов в триаде: растение—животное— продукция животноводства в опытах использовали технические приемы ранее разработанных собственных способов по новому назначению.
Что- кссается механизма снижения содержания нитратов и вегетативной массе растений после предпосевной обработки семян центрифугированием (его использовали в проведенных опытах), а также в вареной свекле, силосуемых кормах и
кисломолочных продуктах (кефире и ацидофильной простокваше) после добавления к ним дрожжей рода кандида,, закваски молочнокислых бактерий для силосования и закваски лактобактерий (ацидофильной и болгарской) соответственно, то они изложены в нашей работе (7). Сущность заключается в следующем. Во время ускорения оборотов центрифуги в пробирках с прокариотами или зерном возникает высокое (пи-;" 8000 ¡2 до ат. — Г. Хиллман, 1975) центрифужное давление, действующее на цитоплазматические мембраны и внутриклеточные органеллы, молекулы ферментов и ДНК. (Д. Бергельсон, 1975), вызывая деформацию энзимов, белков и структуры генетического аппарата. Такой процесс сопровождается изменениями конформации как биокатализаторов, так и других белков, ДНК и проявляется изменениями активности ферментов (П. Хочачка, Д. Сомеро, 1977).
Одним из доказательств не индеферентности центрифужного давления к биологическим объектам являются наши экспериментальные данные по ингибированию прорастания семян сельскохозяйственных культур (а. с. № 725592) и вылуплива-ния личинок насекомых из яиц (а. с. № 102101) после обработки центрифугированием, т. е. суммарное выражение скоростей течения ферментативных реакций (по А. Меркису, 1976 — ростовые реакции в растениях и эмбрионах) после прессорного стресса (П. Хочачка, Д. Сомеро, 1977) проявилось в их торможении. Видимо, это в нашем опыте способствовало более полной ассимиляции нитратов и их производных в метаболические процессы и проявилось существенным снижением их в вегетативной массе растений за счет повышенной ассимиляции.
Для проведения опыта необходимое количество для посева ■зерна кукурузы замачивали водой в течение 1 — 2 суток. Затем зерно порциями подвергали обработке центрифужным давлением в течение 5 — 20 минут при относительном центрифужном ускорении (ОЦУ) ротора 7800 — 8200 г. Подготовленное таким обрагом зерно высевали (1986 г."У в колхозе «Маяк» Винницкой области на отведенные полевые участки. Для контроля использовали увлажненное зерно без центрифужной обработки. В стадиях выброса метелки и молочно-
восковой спелости початков в отобранных средних образцах определяли содержание азота нитратов. Установили, что в зеленой массе кукурузи контрольного участка содержалось 242 мг% нитратов, а в опытных II, III и IV вариантов соответственно 203, 189 и 186, что па 16, 22 и 23% ниже. В другом опыте в зеленой массе овса перед началом колошения (контроль) было 118 мг% изучаемого небелкового азота, а в трехвариантном опыте — 96, 91 и 91 (снижение — на 14, 23 и 23% соответственно).
В другом опыте прессованные дрожжи рода кандида суспендировали в 0,85%-ном растворе поваренной соли. Смесь центрифугировали на протяжении 20 мин. при ОЦУ 1400 — 2400£ (а. с. № 1102809). Осадок перемешивали с надоса-дочнои жидкостью и суспензию использовали для дрожжева-пия корма. Для этого к измельченной сахарной свекле после варки и охлаждения до температуры 25 — 30° вносили приготовленную взвесь дрожжевых клеток в физрастворе. Дрожжевание проводили в теплом помещении в течение суток. В образцах корма контроля и опыта определяли концентрацию нитратов н нитритов. Установили, что через 24 ч от начала дрожжевания в свекле контроля содержалось 181 мг% азота нитратов и 88,8 мг% азота нитритов, а в опыте — 60 и 26 соответственно (снижение на 67 и 71%).
В третьем опыте сухую закваску молочнокислых бактерии дня силосования разводили в воде. Взвесь микроопганизмоп гентригЬугисовали (20 мин. ОЦУ 200 с —а. с. 1102809). Осадок смешивали с падосадэчной жидкостью и дополнительно разводили ь 90 л. воды. На 1 т сулосуемой зеленой массы кукурузы в стадии молочпо-восковой спелости путем увлажнения расходовали 5 л разведенной закваски лакгобактерий. Результаты исследований показали, что в зеленом корме содержалось 390 и 11 мг% азота нитратов и нитритов соответственно. В спросе (контготь) через 20 сут от начала закладки исход-ист ко-туп бы-о 270 и 7,8 мг% (снижение на 31 и 33%), а в с-пыт" -- 171 и 4 глг% пли па 59 и 64% меньше.
На зркэточительнгм этапе наших методических разрабо_о>; по деструкции или нейтрализации изучаемых азотсодержащих соединений в триаде мы ктозелп ряд испытаний в период вне-
дрспия изобретения (а. с. № 1102809) на молокозаводах Запорожской области. Для этого закваски молочнокислых палочек ацидофильной и болгарской подвергали обработке в поле центробежных сил при ОЦУ 550q в течение 40 мин. или при 200 £ — 20 мин. Осадок после обработки перемешивали с надосадочной жидкостью и переносили в молоко для приготовления кефира или ацидофильной простокваши. Установили, что в исходном молоке содержалось в среднем 0,38 мг% азота нитратов, кефире и ацидофильном в контроле — соответственно 0,30 и 0,31 мг% (снижение на 21 и 18%), а в опыте — 0,02 и 0,03 мг% (уменьшение на 93 и 90%). В «Способе разрушения нитратов и нитритов в цельном или обезжиренном молоке» (а. с. № 1361744 — «Т») удается достигнуть 100%-ной деструкции.
3.8. Гидробиологические методы диагностики загрязнения воды нитратами и их производными
Известно, что повышенные и высокие дозы азотных удобрений, внесенные в почву под кормовые, зерновые, технические и другие культуры для повышения урожайности, усваиваются корневой массой растений всего лишь на 30 — 70% (3. К. Благовещенская, Л. С. Могиндович, 1987), а остальная часть вымывается осадками, почвенной водой и попадает в естественные и искусственные водоемы, загрязняя их. Одновременно с этим азотсодержащие удобрения под воздействием ферментов (нитрат-, нитрит- и гидроксиламинредуктазы) микроорганизмов почвы и воды превращаются в ряд токсикантов: нитриты, гид-роксиламин, нитрозамины и аммиак (А. Шлегель, 1987). В этой связи, наряду с аналитическими способами, особую значимость приобретают гидробиологические методы дифференциальной диагностики содержания нитратов и их производных в воде. Это является одним из профилактических приемов, позволяющих предотвратить возникновения отравлений, как людей, так и животных. Учитывая актуальность изложенного, нами разработаны гидробиологические методы (а. с. №№ -1253553, 1355203, 1355287, 1391557, 1430017, 1464991), сущность которых состоит в следующем. Аналитическими лабораторными методами в отобранных пробах воды
(в колодцах, прудах и речках, расположенных вблизи или па территории животноводческих ферм, складских помещений для хранения минеральных азотных удобрений, полевых участков с внесением повышенных и высоких доз азотсодержащих удобрений) из водоемов определяли содержание нитратов и их производных. Расчитывали их соотношение между собой. Затем в лабораторных условиях готовили аналогичные растворы 110 составу. Испытуемую воду и приготовленные растворы дополнительно разводили дистиллированной водой, вносили в определенных концентрациях карбамид, в других случаях — уксусную кислоту, или нитроглицерин и помещали на 24 — 96 часов (иногда до 4 — 5 суток) в эти растворы или лягушек или моллюсков.
Установили, что соблюдение определенной концентрации нитратов и их производных в сочетании с вносимыми добавками отмеченных химических реагентов через определенные промежутки времени способствует дифференцированному выделению гельминтов из легких и кишечника, моногеней из мочевого пузыря, опалин из прямой кишки, гамазоидных клещей с поверхности кожного покрова у лягушек. Из органов тела моллюсков выделялись: инфузории, живые улитки, гельминты, неполовозрелые формы трема год, церкарин, кладки яиц (а. с. №№ 1417856, 14*45660).
Следует отметить высокую степень информативности (эго логические, клинические и другие данные) разработанных нами гидробиологических способов по сравнению с аналитическими методами количественного определения нитратов и нитритов в воде.
Установленные зависимости и закономерности в этих экспериментальных исследованиях послужили основой к разработке производству оригинального метода борьбы с эндопаразитами животных — «Способ дегельминтизации сельскохозяйственных животных и птиц» (а. с. № 1534185 - «Т»).
3.9. Обмен веществ л молочная продуктивность коров в перйсд потребления в рационах кормленая «безнитратных.» кеомсв
г
Д"я проведения научно-хозяйственного опыта на коровах предварительно выршцИвали зеленую массу кукурузы на силос
с внесением высокой дозы аммиачной селитры. Силосование одной части корма (контроль) проводили общепринятой технологией, а второй — с добавлением к исходной массе 1% измельченных корней с клубеньками боба конского (а. с. № 1212406) — опыт.
Опыт проводился на двух группах коров (I — контрольная, II — опытная) по 10 голов в каждой (симментальской породы, 3-й лактации, через 1 мес. после отела и живой массой ^ 520 кг, подобранных по методу аналогов) в колхозе «Большевик» Винницкой области с 1 января по 30 апреля 1989 года. Рационы кормления коров в уравнительный период (январь месяц) состоял из кормов, используемых в хозяйстве для молочного стада. В опытный период коровы 1 группы в течение 3-х месяцев в составе рациона потребляли кукурузный сихос с ни-трат-нитритными соединениями, а II — без наличия этих веществ. Для сравнительного изучения влияния нитратов и нитритов до и после разрушения их в потребляемом силосе на переваримость питательных веществ рационов и баланс азота в организме коров был проведен обменный опыт на двух группах животных по 4 головы в каждой. Кормление и доение коров осуществлялось 3 раза в сутки, учет молочной продуктивности — ежедневно и индивидуально от каждого животного, определение процента жира в молоке — один раз в декаду.
Рацион кормления коров в опытный период состоял из силоса кукурузного — 30 кг, свеклы сахарной — 4, сена клеверного и дерти ячменной — по 2 кг, соломы ячменной — 3 н'дерти гороховой — 2,5 кг.
Следует отметить, что в корнеплодах сахарной свеклы, семе клеверном и соломе ячменной, используемых в рационах животных, содержалось нитратов (нитритов) 13,0, 7,2 и 6,65 (1,46, 0,20 и 0 мг%) соответственно. С учетом этого и данных по кукурузному силосу, (содержалось 43,1 мг% азота нитратов и 0,67 мг% азота нитритов) следует, что каждое животное контрольной группы в составе кормов рациона ежесуточно потребляло 93,44 г нитратов и 1,334 нитритов, а опытной группы — 6 и 0,41% нитратов (0,01 нитритов) и 0,04 (0,003%), при допустимых — 0,5 (0,01%). (Д. Д. Полоз, и др., 1979).
Результаты обменного опыта (табл. 6) на коровах показали, что высокое содержание в рационе кормления коров I группы нитратов с верхней допустимой границей нитритов способствовало снижению переваримости питательных веществ по
6. Переваримость питательных веществ рационов кормления коров (Ш±пг), %
Питательные вещества
Группы
¿—контрольная
2 опытная
Сухое вещество 61,3±0,8
Органическое вещество 63,4 ±0,7
Протеин 65,0±0,6
Жир 58,0±2,0
Клетчатка 5 2,4 ±1,2
БЭВ 76,6 + 0,8
65,8±1,1Ч
68,8±0,9
71,8±0,6'
63,8±1,2*
58,3± 1,8*
79,3±0,8*
* — здесь и далее в таблицах различия достоверны.
всем изучаемым показателям. Это, по-видимому, связано с увеличением в рационе небелковых форм азота (к которым относятся азот нитратов и нитритов), недостаточным количеством сахара, нарушенным (0,4) против кормы (0,8—1) саха-ропротеиновым отношением. Несмотря на такие же несоответствия по углеводам, протеину и в рационе опытной группы, коэффициенты переваримости питательных веществ у этих животных были значительно и достоверно выше. Полагаем, что причиной тему было отсутствие нитратов и нитритов, которые ингибируют ферменты и метаболизм микроорганизмов преджелудков у коров контрольной группы, что согласуется с данными С. А. Ризель, И. Г. Пупина (1987). Мы не исключаем тгкже положительного влияния на процессы пищеварения у коров наличия в потребляемом силосе дополнительного количества биологически активных соединений за счет вносимых добавок корней с клубеньками боба конского (содержат 60 — 80% органических и минеральных веществ по отношению к надземной части растений — А. А. Титлянова, 1979) и,
в первую очередь, нормальным течением метаболических процессов в организме животных вследствие отсутствия факторов возникновения хронического нитрат-нитритного токсикоза, который, по-видимому, является одной из основных причин.
Из изложенного по обменному опыту следует, что предложенный нами способ одновременного разрушения нитратов и нитритов в засилосованных кормах способствует сущетвенно-му повышению переваримости питательных веществ рационов кормления лактирующих коров в зимний период их содержания. Результаты обменного опыта на коровах показали также, что у животных обеих групп баланс азота (табл. 7) был положительным, однако использование его организмом животных зависело от количества нитратов и нитритов в рационах кормления. Самое незначительное содержание этих токсикантов в кормах для коров II группы вызывало увеличение коэффициента-переваримости (на 6,1%) и дополнительному удержанию (на 5 г) азота в теле по сравнению с контролем. Самая низкая ретенция азота в организме коров I группы связана с тем, что нитраты и нитриты в рубце при участии редуцирующих ферментов микрофлоры распадаются до аммиака, высокие уровни которого тормозят бактериальный синтез его и' снижают усвояемость азота корма (Е. С. Воробьев, 1931).
7. Баланс азота у лактирующих коров
Г р у 11 п ы
Показатели I
2 .
Принято с кормом, г 007 о о ( 309
Выделено, г: с калом 1 1 о 87
с-мочой 131 118
с молоком ■ 87 98
Переварилось, г Коэффициент^нереваримости, % 219 222
65,0±0,6 71,8±0,6*
Удержалось в теле, г 1+0,1 6±0,2*
Отложено, % от принятого 0,3 ~ 0,5
от переваренного 2,0 2,9
Обращает па себя внимание повышенное па 20 г или па 9,2% потребление с кормами и выделение с и г.точоп
соответственно на 31 (26,3%) и 13 г.(10%) азота у кори?. > по сравнению со II группой. Это связано с тем, чю излишки азота, в том числе и небелкового (нитратного и нитритпого) выводятся из организма животных. Одновременно с этим у корон опытной группы по сравнению с контрольной ежесуточно с .молоком выделялось азота па 11 г или 12,6% больше. Это свидетельствует о положительном влиянии «безнитратных» рационов на молочную продуктивность. II это подтверждается следующими данными (табл. 8).
8. Среднесуточные удои и процент жира в молоке в течение опыта
Групп!,I корон
Месянм (продтктиинссть)
I
кг
Уравнительный период
Январь 14,4 3,6 14,6 3,6
Опытный период
Февраль 14,8 3,6 15,7 3,6
Март 15,1 3,0 16,8 3,7
Апрель 14,9 3,7 16,2 . 3,8
За опытный период
Среднесуточный удой, кг 15,0±04 16,4± 0,2
% жира 3,7±0,09 3,7±0,1 1
4%-ное молоко 13,8+0,3 15,0^0,4
IIa протяжении опытного периода среднесуточные удои у ко-роз II группы, потреблявшей в рационе кормления силос кукурузный после разрушения шпрат-ннтритных токсикантов, по сравнению с контрольной в I, II и III месяцы отмеченного периода созрасли соответственно па 0,9 кг (или на 6,1%), 1,7 (11.3%) и 1,3 (8,7%) молока, а за 3 месяца опыта в срсд-
нем на 1,4 кг (9,3%) или в пересчете па 4%-ное молоко — 1,2 кг (8,7%) при p¿0,05 — 0,02 и не существенных колебаниях процента жира.
Второй опыт на коровах проводили в колхозе «Маяк» Винницкой области на трех группах (I — контрольная, II и III — опытные) животных (по 10 голов в каждой) симментальской породы (через 3 — 4 недели после растела), сформированных по принципу аналогов с живой массой 470 — 490 кг и 3-й лактацией. В уравнительный период (декабрь 1987 г.) рацион кормления животных всех групп был одинаковым по набору кормов и количеству питательных веществ, используемых в хозяйстве для молочного стада. В марте месяце опытного периода (январь — апрель 1988 г.) был проведен обменный опыт (10 дней) на 12 коровах (по 4 головы из каждой группы). Рационы кормления включали: силос кукурузный — 35 кг, свекла кормовая — 5, сено клеверное и солома озимой пшеницы — по 2 и дерть ячменная — 3 кг.
Зеленую массу кукурузы на силос для коров I и II групп заготавливали общепринятым методом, а для III —согласно а. с. № 1192769 (при этом применяли 0,13%-ный раствор сернокислого железа закисного при отношении массы реагента к корму 1:75). В силосе для коров контрольной ч первой опытной групп содержалось соответственно 8,3 и 31 мг% азота нитратов и 0,022 и 0,63% азота нитритов, что в пересчете на сухое вещество рациона и на нитрат калия и нитрит натрия составляло 0,16 и 0,57% нитратов и 0,003 и 0,008% нитритов. В силосе для животных 3-й группы указанных веществ не обнаружено.
Условия содержания, кормления и метод проведеЕшя исследований аналогичные первому опыту на коровах.
Коэффициенты переваримости питательных веществ рационов кормления дойных коров I (II) III групп в зависимости ог концентрации нитратов и нитритов в кукурузном си roce в период проведения обменного опыта составляли: сухого вещества — (М + 2,0 (62,0+0,6) 66,9± 1,2; органического вещества — 66,1 ±1.2 (63,6±1,4) 67,2 ± 1,2; протеина — 64,9±0,7 <01,0±0,8) 67,8±0,7; жира — 55,4±1,0 (59,0±1.3) 64.2^ ±1,7; клетчатки — 56,6±0,8 (51,8±1,6) 59,9±0,6'и БЭВ--
7G,0±0,4 (78,0=fc0,6) 80,9±0,3% соответственно. Эти данные показывают, что повышенное по отношению к допустимой норме содержание (0,57%) нитратов в рационе кормления коров второй группы по сравнению с первой (0,16%) достоверно (р^ОД—0,01) отрицательно сказывалось на переваримости сухого и органического вещества, протеина и клетчатки за исключением жира и БЭВ, показатели которых возросли (при р/0,1 и р^0,02 соответственно). В противоположность этому устранение путем разрушения причинного фактора (токсикантов) торможения переваримости отмеченных компонентов в кормах для животных третьей группы способствовало существенному повышению коэффициентов переваримости органического вещества, жира, клетчатки, БЭВ (при средних степенях достоверности — Р/0,01—0,05), сухого вещества и протеина (высокая степень достоверности — p^0,0Ôl). Примечательным при этом является и то, что уровни коэффициентов переваримости в третье и группе животных выше таковых контроля. Это весомый аргумент в пользу настоятельной необходимости в практике кормления животных использовать «безнитратные» корма для более эффективного переваривания их в желудочно-кишечном тракте лактнрующих коров. Даже низкие (0,16% от сухого вещества рапиона) концентрации нитратов и нитритов (0,003%) отрицательно влияют на переваримость питательных веществ кормов, молочную продуктивность коров при одновременном повышении' расхода кормов на 1 ц производимого молока и его себестоимости.
Баланс азота у коров трех групп был положительным. Однако его ежесуточная ретенция у ншеотиых второй группы, потреблявшей силос с высоким содержанием нитратов, была самой низкой (5,3±0,5 г) по отношению к третьей (10±0,4) н контрольной 8±0,7). fia образоьашге молока у коров третьей группы расходовалось 87±2,6 г азота, что на 10,1% (р^0,01) выше, чем у животных второй группы. Эти данные также свидетельствуют о положительном влиянии безнитратного корма, превалирующего в рационе (по питательности ои состоял из силоса — 57%, концентратов — 28 и других коркоз — 15), па ретенцию азота в организме лактнрующих коров и повьппеп-
ный расход принятого азота с кормом на биосинтез молока при силосно-концентратном типе кормления.
Показатели среднесуточных удоев молока на протяжении опытного периода (121 день) у коров I (II) Ш групп в среднем были следующие: 13,7±0,3 (13,3±0,3) 14,4±0,4, а в пересчете на 4%-ное молоко — 13,9±0.3 (13,2±0,1) 14,6^ 0,4 кг соответственно. Среднесуточный удой молока за период опыта у коров третьей группы, потреблявших силос после разрушения нитратов и нитритов сернокислым железом закисным, по отношению ко второй достоверно увеличился на 1,1 кг или 8,3%, что в пересчете на 4%-ное молоко составило 1,4 кг (на 10,6% больше). Существенных изменений содержания жира в молоке между группами коров на протяжении опытного периода не отмечалось.
Третий опыт проводили на трех группах коров (I — контрольная, II и III — опытные — по 10 голов в каждой), сформированных по методу аналогов, симментальской породы на 4-й лактации, живой массой 480 — 500 кг, через 2 — 3 педели после растела. Рационы кормления животных в уравнительный период (ноябрь 1987 г.) были аналогичные опыту на коровах колхоза «Маяк». Коровы всех групп в опытный период (декабрь 1987 г. — февраль 1988 г.) потребляли: силос кукурузный — по 20 кг/гол/сут, силос ботвы сахарной свеклы — по 10, корнеплоды сахарной свеклы, жом кислый — по Г>, измельченную ячменную солом у — по 5, дерть ячменную — по 2 и гороховую — по 2,5 кг.
В период проведения обменного опыта (по 4 головы в каждой группе) животные 1, II и Ш групп потребляли в составе рационов соответственно по 11,61 11,69 и 11,89 кг/гол/сут сухого вещества. За счет силоса корнеплодов и жома каждое животное контрольуой группы принимало 0,35% нитратов к 0,008% нитритов, второй и третьей — соответственно по 0,66 и 0,014 в расчете па сухое вещество рационов. Для снижения содержания ниграт-нитритных соединений в кормах и в организме животных III группы им перед началом кормления задавали по 1 г лактага железа (по 3 г/сут ) в смеси с 0,5 кг ячменной дерти (а. с. № 1362433). В конце уравнительного, а также в середине и в конце опытного периодов от четырех
коров из каждой группы брали пробы крови, мочи, а также молока. Определяли;' в крови — эритроциты. ретикулоцитм, гемоглобин, активность лероксидазы и метгемоглобин; в сыворотке крови и молоке — мочевину, цитраты и нитриты; в моче — общий оксипролин.
В результате проведенных исследований установлено (табл. 9), что потребление коровами I (II) групп в составе рационов кормления соответственно по 0,35% нитратов и 0,008% нитритов (0,66 и 0,014%) по сравнению с данными уравнительного периода в середине и в конце опытного периода способствовало достоверному увеличению в крови количества эритроцитов, ретикулоцитов, гемоглобина и метгемоглобина при одновременном повышении концентрации нитрат-нитритных соединений в сыворотке крови. Это связано с тем, что при длительном поступлении в кровь нитриты разрушают путем химического гемолиза эритроциты, о чем свидетельствует высокий уровень метгемоглобина. В организме животных наступает кислородное голодание, которое нейрогуморальным путем стимулирует почки к усиленной выработке дополнительного количества эрптропоэтина. Между концентрацией этого гормона в крови1 и содержанием ретикулоцитов существует прямая зависимость.-Возникший ретнкулоцигоз в нашем спыте свидетельствует о высоком напряжении биосинтеза в органах гемопоэза (красном костном мозге, селезенке и других), которые вырабатывают и' выбрасывают в кровеносное русло дополнительное количество ретикулоцитов, эритроцитов, а в их составе гемоглобин для предупреждения кисгородной недостаточности.
В проведенном опыте между концентрацией нитратов и нитритов в сыворотке крози и активностью пероксидпзы крови установлена прямая зависимость, что следует отнести за счет де-токенрующей роли фермента по отношению к отмеченным азотсодержащим веществам (10). У коров III группы по отношению ко II в сыворотке крови и молоке под действием лакта-. та железа наступило резкое снижение (на 91 — 97%) концентрации нитратов и нитритов. Содержание мочевилы в молоке.' коров III группы быго также ниже (23,1 и 23 мг%), чем во II (30,3 и 35,4). Устагозлено тгкже увеличение содержания ок-сипролина в моче кэров I группы (333 и 356 мкг%) и, особо!;-.
по, II (347 и 404) в середине и в конце опытного периода но сравнению с данными III группы (323 и 319). Это свидетельствует об усилении процессов деминерализации, протекающих в костной ткани скелета животных (В. И. Георгиевский и др., 1979). То есть, при длительном потреблении дойными коровами нитрат-нитритных соединений с кормами в их организме возникают нарушения в обмене макроэлементов — кальция, фосфора, магния и других (5).
9. Показатели крови у коров колхоза им. Щорса
ч с В конце уравнительного Опытный период
с
i-1 а. U периода середина конец
Эритроциты х 1012/л
1 5746±12 6209±12 6591±28
2 5738±22 6721±18 7219+37
3 5716+16 5848±52 5896+37
Ретикулоциты, %
1 1,08 + 0,07 7,23 + 0,09 8,32±0,13
2 1,09±0,08 11,73±0,51 12,60±0,25
3 1,12+0,10 1,43±0,09 1,36+0,09
Метгемоглобин, г/л
1 2,1 ±0,26 9,2 + 0,37 9,9±0,38
2 2,3±0,27 14,2 + 0,13 16,3 + 0,44
3 2,2+0,18 2,4±0,29 2,3±0,Ь0
Активность пероксидазы, с
1 61,6±0,5 55,1 ±0,8 54,1+0,6
2 61,2+0,9 42,2 + 1,0 40,2± 1,2
3 61,5+0,7 60,6 + 0,5 60,3+0,7
Повышенная и высокая концентрация нитратов, нитритов н мочевины в сыворотке крови и молоке животных первых двух
групп свидетельствует о нарушении азотистого обмена в их организме (В. К. Менькин, Н. П. Буряков, 1979). Это подтверждается также результатами обменного опыта, где между уровнем нитратов и нитритов в рационах кормления коров двух первых групп и коэффициентами переваримости сухого и органического вещества, протеина и клетчатки устанавливается обратная, а по отношению к жиру и ВЭВ — прямая завися-, мости. Увеличение этих показателей у коров 3-й группы следует отнести за счет лактата железа, резко снижающего в организме животных уровень нитратов и нитритов, и положительно сказывалось на молочной продуктивности. При этом высокое содержание нитратов и нитритов в кормах коров второй группы по сравнению с первой вызывали тенденцию к снижению на 0,5 — 0,8 кг суточных удоев молока. В то же время существенное снижение указанных токсикантов в организме коров третьей группы по отношению ко второй сопровождалось достоверным увеличением среднесуточных удоев на 10,2 —17,6%, а в пересчете на 4%-ное — на 13,7%.
3.10. Влияние «безнитратных» кормов в рационах кормления бычков в период откорма на обмен веществ и их продуктивность
Первый научно-хозяйтвенный опыт проводили с декабря месяца 1985 г. по март 1986 г. в колхозе «Маяк» Винницкой области на трех группах бычков (симментальской породы I — контрольная, II и III — опытные, по 12 голов в каждой) с живой массой перед постановкой 274 — 285 кг. В уравнительный период (декабрь месяц) и опытный (январь — март) периоды животные всех групп получали одинаковый рацион. Он состоял: из силоса кукурузного 25 кг, соломы озимой пшеницы — 1,5, дерти ячменной и гороховгй — по 1 кг и мелассы — 0,6. Кормление животных двухразовое, поение водой из автопоилок.
В составе кормов лл счет силоса кукурузного молочно-воско вой спелости для животных контрольной группы содержалось 0,22% нитратов и 0,003% нитритов (в пересчете на сухое вещество рациона), для второй 0,59 и 0,011 соответственно. В третьей группе бычки потребляли силос без наличия в нем
отмеченных небелковых форм азота (в период силосования в зеленую массу кукурузы вносили 11% измельченных корней боба конского — а. с. № 1371681).
Результаты проведенного опыта показали, что потребление бычками при откорме силоса кукурузного с допустимыми нормами (I группа) и превышение'их (II группа) содержание нит-рат-нитритных соединений вызывало снижение переваримости питательных веществ, (табл. 10) рационов кормления (за исключением жира и БЭВ) и уровней среднесуточного прироста живой массы (табл. 11).
Одновременно с этим отмеченные показатели у животных 3-й- группы существенно повышались, что следует отнести за счет отсутствия в рационе кормления вредных небелковых форм -азота. Об этом также свидетельствуют данные по изучению баланса азота. При этом его суточная ретенция у животных 3-й группы составляла 35,9±0,9 г против 30,5±0,6 и 32,9±0,8 у-бычков II и I групп соответственно. Из этого также следует, что повышенная и высокая концентрация нитратов и нитритов в рационах кормления животных первых двух трупп отрицательно влияют па метаболизм азота и его отложение в их организме.
10. Переваримость питательных веществ рационов кормления бычков (М+^х- ), %
Показатели Группы
1 2 л
Сухое вещество 63,1±0,7 60,3 + 0,2 65,0+1,0
Органическое
вещество 65,5 + 0,4 63,3+0,7* 67,7 ±0,5'
Протеин 67,2±0,3 64,6+0,7* 69,8±0,5'
Жир . - 56,9± 1,2 . 61,2±1,5* 62,6± 1,3*
Клетчатка 57,6 + 0,6 513,8 + 0,4* 60,4±0,3*
пэв 74,0± 0,3 75,0+0,3* 78,8±0.4*
II. Среднесуточный прирост живой массы бычков (М±ль. ), г.
3 В среднем
(3 с Январь Февраль Март за опытный
>, о. L. период
1 869± 11 846±18 854±22 856±15
2 850±14 776±15 752± 18 792± 16
3 886± 12 951±14 1021±13 952+14
Второй научно-хозяйственный опыт проводился в колхозе
имени Куйбышева Винницкой области на двух группах (I — контрольная, II — опытная) бычков симментальской породы (по 10 голов в кая{Дой), возрастом по 9—10 мес. и живой массой 185 — 200 кг. Рационы кормления в уравнительный период (декабрь 1984 г.) и опытный (январь — март 1985 г.) периоды для всех животных состояли: из силоса кукурузного н ботвы сахарной свеклы по 10 кг каждого, соломы озимой пшеницы — 2. дертей ячменной — 1 и гороховой — 0,8, патоки, — 0,3. Однако в опытный период в составе силосов для животных II группы содержалось 12,57« лиственной массы (а. с. № 1337055). В расчете на сухое вещество рациона контрольной группы содержалось 0,59% нитратов, которые отсутствовали в кормах для бычков опытной группы. Кормление двухкратное, поение — из автопоилок; В середине февраля был проведен обменный опыт на 4-х животных из каждой группы.
Результаты исследований свидетельствуют о том, что потребление бычками второй группы в составе рациона силосов с листьями без наличия в них нитратов и синильной кислоты (при силосовании нейтрализовались) по сравнению с контролем сопровождалось достоверным увеличением переваримости сухого (68,3+1,1%) и органического (69,5±0,8) веществ, протеина (65,4±1,2) и клетчатки (57,3 + 1,3) за исключением жира (57,8± 1,5) и БЭВ (79.1+0,8). В первой группе живот-пых эти параметры составляли: 65,1 ¿1,2; 67,1 ±0,5; 60,7±
<П
0,9; 52,8±1,6; 55,0 ±2,2 и 77,8±0,6% соответственно. Одновременно с этим ретенция азота у бычков опытной группы составляла 24,1 ±0,8 г/гол/сут, что на 5,2 г выше, чем в контрольной. Все это положительно отразилось и на среднесуточных приростах, показатели которых по месяцам опытного периода для I (II) групп животных составляли: в январе — 680 (775), феврале — 613 (709), марте — 679 (824), а в среднем за 3 месяца опыта — 656±26 (778±19 г).
В проведенном опыте определенный интерес представляет то, что у бычков I группы, потребляшей в составе рациона 0,59% нитратов, в крови возросло содержание метгемоглоб:;::-' до 13,6 г/л и повысилась активность фермента алдолазы до 18,8±0,5 ед. по сравнению со II группой, где уровни этих показателей составляли 2,1 и 13,6±0,7 соответственно.
Высокое содержание метгемоглобина в крови животных контрольной группы характеризует повышенный гемолиз эритроцитов нитратами и синильной кислотой, вследствие чего возникает гипоксия. А при недостаточной обеспеченности органов и тканей кислородом в организме животных преобладает анаэробный путь превращения углеводов, пчи котором образованный фруктозо-1,6-дифосфат взаимодействует с альдол^зс и К расщепляется на фосфотриозы (А. Ленинджер, 1985). Эти данные дополняют результаты исследований на коровах второго опыта и показывают, что нейтрализация добавками листьев нитратов и синильной кислоты в силосе с последующим истреблением его бычками II группы предупреждает возникновение метгемоглобинемии и нормализует в их организме обм^н углеводов.
Для проведения третьего опыта па бычках было сформировано 2 группы (I — контрольная, II опытная, по 10 голов в каждой). Порода симментальская, возраст 12—14 мес. и живой массой в среднем 318 кг. Рационы кормления в уравнительный (апрель 198-5 г.) период для всех жиеотных были одинаковые и состояли из силоса кукурузного 25 кг, соломы овсяной — 2 и дерти ячменной — 3. В опытный период (май — август) животным задавали в расчете на оцну голову в сутки: 35 кг травы посевных злаков, 3 и 0,5 — соответственно дерти ячменной и патоки. В траве в расчете на сухое вещество
содержалось 0,69% нитрата калия. Для снижения концентрации нитратов в корме и организме бычков каждому животному перед-утренним и вечерним кормлением задавали по 1,5 г лактата железа (а. с. № 1362433) в смеси с Г,5 кг концентратов. Контроль- за содержанием нитратов в- организме бычков осуществляли путем- анализа сыворотки крови. Исследовали гематологические и серологические показатели и оксииролии в моче.
Установили существенное и- достоверное' повышение в. крови животных I'группы за-счет потребления высокой концентрации нитратов количества эритроцитов, ратикулоцитов, содержания гемоглобина, метгемоглобйна-и.активности пероксидазы; в сыворотке крови—нитратов-и мочевины, а-, в.; моче—оксипро-лина. В. противоположность этому уровни- отмеченных показ-артелей у животных II группы находились в пределах физиологической нормы за исключением- содержания 0,06 мг% азота нитратов- в сыворотке крови против- контроля — 1,94' мг% (снижение на 96,1%).
Переваримости питательных веществ кормов рационов у бычков опытной группы по сравнению с контрольной, были значительно выше, что следует отнести за счет отсутствия нн-гибирующего действия нитратов на пищеварительные ироцес: сы в преджелудках в первую очередь. Балансы азота, у живот-пых обеих групп были положительными, однако его ретенция у бычков, потреблявших в составе рациона лактат железа,., был<£ достоверно выше (35,3±1,0) по отношению к контролю (28,5±0,7).
Резкое снижение-на 96,1% в- организме бычков II группы азота нитратов (до 0,06 мг% в сыворотке крови)'по сравнению с 1 (1,94 мг%) сопровождалось увеличением, переваримости питательных веществ рационов, кормления, дополнительным удержанием азота в теле — все это оказывало положительное влияние на показатели среднесуточного прироста живой массы, которые по месяцам опытного периода, для I (II) групп, колебались в пределах от 860 (944) до 898 (1003 г).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Изученные нами механизмы разрушения и нейтрализации нитрат-нитритных соединений в триадной цепи: «растение — .животное—продукция животноводства», а также познание механизмов действия нитратов и их производных на земноводных и моллюсках послужили основой для создания разработанных способов и получения «безнитратных» кормов. При этом было учтено, что в естественных условиях в вегетативной массе бобовых растений по сравнению со злаковыми, как правило, нитраты и нитриты содержатся в более низкой концентрации. Причиной тому являются клубеньковые бактерии, которые синтезируют нитрат-, нитрит- и гидроксиламинредуктазу. Эти ферменты способствуют более плавному и полноценному метаболическому превращению нитратов и их производных до аммиака с оптимальным усвоением и использованием его для биосинтеза аминокислот и белков растений. Эта природная высокоэффективная биологическая активность клубеньков корней бобовых растений, наделенная суммарными количествами редуцирующих ферментов по превращению нитратов до аммиака, была использована нами для деструкции нитрат-нитритных соединений в засилосованных кормах.
На основании сведений о том, что в составе молекул гемоглобина, миоглобина, цитохромов, каталазы и пероксидазы тканей, а также нитрат- и нитритредуктазы, леггемоглобина находятся атомы железа в двухвалентном состоянии (его биологическая активонсть выше трехвалентного) и с учетом того, что молибден входит в состав молекулы нитритредуктазы и является сильным ее активатором (как я железо для всех редуцирующих ферментов и энзимов денитрифицирующих бактерий) — все это было учтено нами при разработке рабочей концепции механизмов разрушения нитрат-нитритных соединений в засилосованных кормах, в преджелудках и организме жвачных.' "Для' этих целей использовали соли молочнокислого и "сернокислого закисного железа, где его атомы находятся в двухвалентном состоянии, с учетом целенаправленного активного воздействия на денитрифицирующие бактерии в преджелудках крупного рогатого скота и эпифнтную микрофлору в засилованиых кормах.
Учитывая высокое содержание в свежеопавших- листьях деревьев в период осеннего листопада этилена. И: каротшюидов, содержащих в структуре молекул-двойные связи и обуславливающие их высокую реакционную активность, к; присоединению, эти химические свойства углеводородов', были положены' в основу механизма, нейтрализации нитратов; и'синильной кислоты в засилосованных кормах.
Действие центрифужного давления; как и. других физических факторов на ферменты, белки, ДНК и прокариоты- вызывает деформацию структурных субъедшшц клеток, их органелл- :. самих клеток. Это способствует - изменению, конформаций? их, что сопровождается ингибированием или. активированиями энзиматических активностей, и проявляется- положительными-эффектами в прикладных аспектах- — снижением концентра--ции нитратов в растениях, кормах и кисломолочных продуктах.
На основании познания механизмов проведенные нами исследования позволили в прикладных аспектах для- биохимии, биотехнологии, животноводства, кормления- сельскохозяйственных животных и технологии кормов- решить самую главную проблему нитратов — снижение или полное разрушение нитрат-нитритных соединений в триадной цепи: растение (корма) — животное (его организм) — продукция животноводства, на каждое звено из которой предложены, апробированные способы. Они дают возможность использовать корма, содержащие высокие концентрации нитратов и нитритов через 5 — 20 дней после силосования; Применение же лактата железа для отмеченных целей не ограничивается и этим временем, ибо позволяет задавать корма в момент поступления их на ферму.
В этой связи после разрушения нитратов и нитритов, в, кормах с последующим их скармливанием дойным коровам и. бычкам. на откорме наступает достоверное увеличение переваримости питательных веществ, повышается ретенция азота иор-: ганизме животных и, как следствие, возрастает молочная и мясная продуктивности.
Разработанные гидробиологические способы диагностики загрязнения воды нитратами и их производными, обладающие широким спектром информативности, пополняют арсенал лабораторных методов исследований новыми данными, направленными на предотвращение отравлений животных и человека отмеченными азотсодержащими веществами в период потребления питьевой воды.
Следует также отметить и то, что технические данные в разработанных способах не нарушают традиционные технологии заготовки кормов или приемов кормления животных. Они простые в выполнении, не ограничены сырьевыми источниками, ареалом их распространения, с доступными солевыми компонентами — все это вместе дает неограниченные возможности применять их в любом хозяйстве для повышения эффективности использования кормов, продуктивности крупного рогатого скота и его сохранности.
.' Познание в экспериментальных исследованиях новых качеств биохимического и фармакологического спектров действия нитратов и их производных раздельно или в сочетании с органическими активаторами или пролонгаторами на организм животных способствует расширению наших знаний о влиянии этих соединений на репродуктивные органы, а также использованию нитратов, нитритов и гидроксиламина по новому назначению — для дегельминтизации животных и птицы, в клинической и лабораторной диагностике, в педагогической работе учебных заведений биологического профиля и научно-исследовательском процессе.
: ВЫВОДЫ
.1. Внесение клубеньков измельченных корней бобовых растений (0'. 1 — I %) в силосуемую массу растений с высокими уровнями содержания нитратов и нитритов способствуют полному разрушению этих соединений в корме через 20 дней с момента заготовки.
2. Свежеопавшие листья деревьев после добавления их (о — 20%) к силосуемой массе кормов с высокими концентрациями
нитратов и синильной кислоты 'полностью нейтрализуют их в течение 20 дней после силосования.
3. Внесение растворов 0,05 —0,325%-ных концентраций сернокислого железа окисиого или закисного путем увлажнения (1:50 —1:100) силосуемых кормов с высокими концентрациями нитратов и нитритов активируют - редуцирующие • ферменты денитрифицирующих бактерий в заложенной массе и вызывают через 15 дней полное разрушение указанных небелковых форм азота.
4. Растворы 0,1%-ного сернокислого железа окисиого и 0,005 — 0,015%-ного молибдената аммония, после опрыскивания смеси (1:75 и 1:50 соответственно) силосуемых кормов с добавками (2—'20%) измельченных корней с'клубеньками бобовых растений (при расходе реагентов 1:75 и 1:50 соответственно) существенно повышают активность редуцирующих ферментов клубеньковых, денитрифицирующих бактерий, что сопровождается полной деструкцией высоких концентраций нитратов и нитритов в кормовой смеси через 5 дней с момента ее заквашивания.
5. Варка корнеклубнеплодов (с высоким содержанием нитрат-нитритных соединений) путем кипячения в 0,035 — 0,135%-ных растворах сернокислого железа окисиого или закисного (при расходе реагентов 1:1 — 1:2) в течение 3-х часов с последующим двухчасовым остыванием способствует повышению каталитических свойств железа и это • вызывает полное разрушение указанных азотсодержащих веществ и предотвращает образование нитритов" из нитратов на протяжении 22 ч после охлаждения кормов.
6. Внесенный в концкорма . лактат железа в количестве 1 —-3 г/гол/сут или увлажнение им кормов 0,1 — 0,3%-ными растворами при расходе реагента 1:50—1:100 с последующим скармливанием бычкам или коровам повышает католическую активность денитрифицирующих ферментов бактерий преджс-лудков и оксидоредуктазных энзимов, что вызывает снижение уровня нитратов и нитритов в организме животных на 19-97%.
7. Обработка перед посевом семян кормовых культур, дрожжей рода кандида для дрожжевания вареной свеклы, закваски лактобактерий для силосования кормов или приготовления кисломолочных продуктов центрифужным давлением, ингибирует редуцирующие ферменты в растениях и активирует их в прокариотах и это проявляется снижением концентрации нитратов и нитритов в вегетативной массе растений, кормах и названных продуктах на 14— 23, 59 — 71 и 90 — 97% соответственно.
8. Потребление животными в составе рационов кормления кормов с высоким уровнем нитрат-нитритных соединений вызывает в их организме гиперферментемию пероксидазы и альдолазы, метгемоглобинемию, гемоглобинемию, ретикуло-, эритро- и лейкоцитоз; достоверно возрастают в сыворотке крови концентрации азота нитратов, нитритов и мочевины, а в моче — оксипролииа, в противоположность животным, полу-яавшим «безнитратные» корма, у которых эти показатели находились в пределах физиологических величин.
9. Скармливания лактирующим коровам и бычкам в периоды откорма «безнитратных» кормов при сравнениях с животными, потреблявшими 0,57 — 0,69% нитратов и 0,08 — 0,014 нитритов в составе рационов кормления, сопровождалось достоверным повышением коэффициентов переваримостей питательных веществ, а также ретенций азота при одновременных увеличе-ьиях среднесуточных удоев молока на 1,1 — 2,1 кг или на 3,3 —16,2%-и прироста живой массы у бычков на 61 —145 г/ сут или на 7 — 21%.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Для повышения мясной, молочной продуктивностей и предупреждений отравлений крупного рогатого скота нитратами и литритамы в периоды поступления на фермы зеленой массы или корнеклубнеплодов с повышенными и высокими уровнями этих азотсодержащих веществ реноме ндуем такие корма подвергать силосованию (а. с. №М 1192769, 1212406, 1337035, 137168.1) или варке (а. с. № 1281242).
2. С целью снижения вредного действия нитратов и нитритов на организм дойных коров и бычков в период потреблений кормов с этими соединениями их следует увлажнять 0,1 — 0,3%-ными растворами лактата железа (а. с. № 1362433) или перед кормлением задавать по 1 — 3 г/гол/сут этой 'соля в смеси с концентратами.
3. Для снижения концентрации нитратов и нитритов в зеленой массе растений, в вареной свекле, в силосах и кисломолочных продуктах зерно перед посевом, кандиды перед дрожжеванием, лактобактерии для силосования или приготовления продуктов следует обрабатывать центрифужным давлением (а. с. №№ 725592, 1102809, 1147326).
4. Гидробиологические методы диагностики загрязнения воды нитратами и их производными (а. с. №№ 1253553, 1355203, 1355287, 1391557, 1417856, 14300 Г7, 1464991 и 1445660), обладающие широким диапазоном информации и надежностью, могут быть с успехом использованы в производственных и научно-исследовательских лабораториях й учебных заведениях зоотехнического, ветеринарного и медицинский профилей, а также в террариумах и вивариумах.
АВТОРСКИЕ СВИДЕТЕЛЬСТВА
1. А. с. 725592 (СССР). Способ ингибировання прорастания семян/Запорожец Н. Ф. — Опубл. в В. И. № 13, 1980 г.
2. А. с. 1020101 (СССР). Способ регулирования вылуплц-пания личинок насекомых из яиц/Запорожец Н. Ф., Пшеничный Н. Ф., Запорожец Н. Н.—Опубл. в Б. И. № 20, 1983 г
3. А. с. 1102809 (СССР). Способ выращивания дрожжей/ Запорожец Н. Ф., Палий Г. К., Иванова С. А., Пшеничный Н. Ф. — Опубл. в Б. И. № 26. 1984 г.
4. А. с. 1147326 (СССР). Способ приготовления закваски молочнокислых палочек/Запорожец Н. Ф., Палий Г. К., Пшеничный Н. Ф., Шевчук Г. И. — Опубл. в Б. И. № 12, 1985 г.
5. А. с. 1192769 (СССР). Способ силосования кормой/За-норожсц Н. Ф., — Опубл. в Б. И. № 43, 1985 г.
6. А. с. 1212406 (СССР). Способ силосования зеленой мас-,сы растений/Запорожец Н. Ф. — Опубл. в Б. И. № 5, 1986 г.
7. А. с. 1281242 (СССР). Способ приготовления корма для с.-х. животных из корней сахарной или кормовой свеклы/ Запорожец Н. Ф., Запорожец Н. Н., Запорожец И. В. — Опубл. в Б. И. № 1, 1987 г.
. 8. А. с. 1337035 (СССР). Способ силосования зеленой массы растений/Запорожец Н. Ф., Лисовик JI. П., Савчук М. С. — Опубл. в Б. И. № 34, 1987 г.
9. А. с. 1262433 (СССР). Способ подготовки зеленой массы растений к скармливанию/Запорожец Н. Ф. — Опубл. в Б. И. № 48, 1987 г.
10. А. с. 1371681 (СССР). Способ силосования кормов/ Запорожец Н. Ф., Лебединский Б. Р., Лисовик Л. П., Скоц-кая Н. В. — Опубл. в Б. И. № 5, 1988 г.
11. А. с. 1253553 (СССР). Способ выделения живых гельминтов из лягушек/Запорожец Н. Ф., Запорожец Ж. Н., Ста-«ок В. П., Попов А. И. — Опубл. в Б. И. № 32, 1986 г.
12. А. с. 1354238 (СССР). Способ приготовления анатомического препарата лягушек/Запорожец Н. Ф., Запорожец Ж. Н. — Опубл. в Б. И. № 43, 1985 г.
13. А. с. 1355203 (СССР). Способ моделирования нарушений пигментации кожи у лягушек/Запорожец Н. Ф., Попов В. И., Запорожец Н. Н., Стасюк В. П. — Опубл. в Б. И. № 44, 1987 г.
14. А. с. 1355287 (СССР). Способ дегельминтизации лягушек/Запорожец Н. Ф., Юрченко В. К., Запорожец Ж. Н., Попов В. И., Стасюк В. П. — Опубл. в Б. И. № 44, 1987 г.
15. А. с. 1391557 (СССР). Способ выделения неполовозрелых форм трематод из моллюсков/Запорожец Н. Ф., Стасюк -В. П. — Опубл. в Б. И. № 16, 1988 г.
■ 16. А. с. 1417856 (СССР). Способ Н. Ф. Запорожца приготовления биологического препарата для лабораторных исследований из виноградных улиток/Запорожец Н, Ф.— .Опубл. в Б. И. № 31, 1988 г.
17. А. с. 1426519 (СССР). Способ выделения метацерка-рий и""динроцелий' из муравьев1 для лаббраторпых -исследований по И. Ф. Запорожцу и Ш. Н;" Запорожец/Запорожец Н. Ф". Запорожец Ш. Н. — Опубл.-в Б. И. № 36, 1988 г.
18. А. с. 1430017 (СССР). Способ выделения живых улиток, гельминтов и инфузорий из обыкновенной лужанки для лабораторных исследований/Запороя^ец Н. Ф., Зрибияк Б. И., Марчак Т. В.. Стасгок В. П., Запорожец Ж. Н. — Опубл. в Б. И. № 38, 1988 г.
19. А. с. 1445660 (СССР). Способ разведения моллюсков-по Н. Ф. Запорожцу и В. П. Стасюку/Запорожец Н.- Ф., Стасюк В. П. — Опубл. в Б. И. № 47,, 1988. г.
20. А. с. 1464991 (СССР). Способ выделения паразитов, из малых прудовиков для лабораторных исследований/Запорожец Н. Ф. — Опубл: в Б. И. № 10, .1989 г.
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫЕ ОСНОВНЫХ РАБОТ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ
1. Запорожец- Н.- Ф. К методике определения активности пе-роксидазы//Ветеринария. — 1978. — № 11. — С. 101 — 102.
2- Запорожец Н. Ф., Прокопенко Л. С. Одновременное определение мочевины и аммиака в биологических жидкостях// Ветеринария. — 1979. — № 9. - - С. 72 — 74.
3. Запорожец П. Ф. Динамика накопления нитратов в траве, крови и молоке лактирующих коров три выпасе их на пастбй--щах с высокими дозами минеральных удобрений//Вюлл. ВНИИФБиП с.-х. животных — 1980. — В. I. (57). — С. 7—11.
4. Кулик М. Ф., Запорожец Н Ф., Демченко В. Е. Влияние гипербарического действия на активность ферментов, кропя крупного рогатого скота//'Научные-труды УСХА. — 1980. —' В. 250 — с: 169—172.
5. Запорожеи Н. Ф. Обмен основных макроэлементов у лагстирующил коров при выпасе на пастбищах с высокими дозами-внесения (К<РК) ■ удобрсиий//Бюлл. ВНИИФБиП с.-х;'животных. — 1980. — В. 2(58). —С. 16-19.
6. Запорожец Н. Ф. Активность ферментов и щелочной резерв сыворотки крови у лактирующих коров на пастбище с высокими дозами минеральных удобрений//Бюлл. ВНИИФБиП с.-х. животных. — 1980. — В. 3(59). — С. 64 —66.
7. Кулик М. Ф., Запорожец Н. Ф. Активность ферментов крови до и после центрифугирования//Ветеринария. — 1981.
— № 6. — С. 61 — 63.
8. Проскура И. П., Макаренко П. С., Химич В. В., Осец-кий С. И., Кулик М. Ф., Запорожвц Н. Ф. Применение высоких доз азота на культурных пастбищах Центральной лесосте-пи//Кормопроизводство. — Киев, — 1981. — В. 12. — С. 39 — 44 (на украинском языке).
9. Запорожец Н. Ф. Предрасположенность к возникновению обменного алкалоза у лактирующих коров при выпасе их на интенсивно удобренных пастбищах//Тез. докл. Всесоюзной конф. «Биологические аспекты изучения и рационального использования животного и растительного мира». — Рига. — 1981. — С. 196—197.
10. Запорожец Н. Ф., Кальницкчй Б. Д. Об участии перо-ксидазы в детоксидации нитрат-нитритных соединений в организме крупного рогатого скота//Тез. докл. Республиканской конф. «Биологические аспекты изучения и рационального использования животного и растительного мира». — Рига. —
1981. — С. 198—199.
• 11. Запорожец П. Ф., Кулик М. Ф., Химич В. В. Колориметрический метод определения хлоридов//Агрохимия. —
1982. — № 2. — С. 120—123.
12. Запорожец Н. Ф. Одновременное определение содержания нитратов и нитритов в кормах//Корма и кормопроизводство. — Киев. —1982. — В. 13. — С. 48 — 51 (на украинском языке)..
13. Запорожец Н. Ф. Метод определения метгемоглобинд в крови//Вестник с.-х. науки Казахстана. — 1983. — № 8
— С. 77—78.
14. Запорожец Н. Ф. Комплексирование нитратов и нитритов с белками криви//Ретеринария. — 1983. -- № 8. — С. 63 — 65.
. 15. Запорожец Н. Ф. Ретикулоциты крови — диагностический тест. гемопоэза в организме животлых//В : сб. «Методики лабораторных исследований и.расчетов в сельском хозяйстве».
— Целиноград..— 1983. — С.- 19 —21..
16. Запорожец Н, Ф. Одновременное .опрецо'Ч'.ттс г^отл ч?г-тратоз и нитритов в биологических материалах и воде//Ъ сб.. «Методики лабораторных исследований и. расчетов в сельском хозяйстве». — Целиноград. — 1983. -- С. 28—31.
17. Запорожец Н. Ф., Солдатенко В. А. Лягушки — как биологическая модель изучения воздействия загрязнения ок-' ружающей среды нитратами, нитритами и другими высоко-' активными соединениями//В . сб. «Методики .лабораторных исследований в сельском хозяйстве». — Целиноград. —■ 1983.
— С. 32 — 35.
18. Запорожец Н. Ф. Снижение уровней содержания нитратов ,и , нитритов в. организме ..и „молоке; лактирующих коров// Тез. доклада «II объединенная научная, методико:техническая конференция». — Винница. — 1984- — С. 62 — 63.
19. Запорожец Н. Ф. Метод определения токсичности нитратов, нитритов, гидроксиламина и других высокоактивных соединений на куриных эмбрионах//Р» сб. «Лабораторные методы исследований и диагностика заболеваний в сельском хозяйстве». — Целиноград. — 1985. — С. 45 — 78.
20. Запорожец Н. Ф., Солдатенко В. А. Совершенствование метода определения оксипролина в биологических мате-риалах//Вестник с.-х. науки. — 1986. — № 2. С. 85 — 88 (на украинском языке).
21. Запорожец Н. Ф. Влияние нитратов и нитритов на гемо-тюэз у животных/УВегеринария. —■ 1986. —' № 4. '—"С. 67 — 70.
22. Запорожец II. Ф., ЗриСняк Б. И. А!етод одновременного определения азота нитратоз и нитритов в к'ормах//Рукоиись депонирована во ВНШТЛЭИСХ 3.04.1986 г. - К" 114, ВС — 86, — 16 с.
23. Запорожец Н. Ф. Гидробиологические методы диагностики загрязнения воды нитратами и их производными//Тез. докл. «V объединенная научная медико-техническая конференция». — Винница. — 1987. — С. 96 — 97.
24. Запорожец Н. Ф. Разрушение нитратов и нитритов при помощи сернокислого железа//Животноводство Украины. — 1987. — № 3. — С. 18—19 (на украинском языке).
25. Запорожец Н. Ф. Метод одновременного разрушения нитратов и нитритов в корне- и клубнеплодах//Ветеринария. — 1987. — № 6. — С. 59 — 61.
26. Запорожец Н. Ф. Технологические приемы разрушения нитрат-нитритных соединений в корнеклубнеплодах//Доклады ВАСХНИЛ. — 1987. — № 8. — С. 25 — 27.
27. Запорожец Н. Ф. Способы разрушения нитратов и нитритов в силосуемых кормах//Доклады ВАСХНИЛ. — 1988.
— № 6. — С. 33 — 35.
28. Запорожец Н. Ф. Обезвреживание нитратов и нитритов в зеленых кормах при силосовании//Ветеринария. — 1988.
— № 4. — С. 55 — 58.
29. Запорожец Н. Ф. Методы снижения нитратов и нитритов в силосуемых ,кормах//Сельскохозяйственная биология.
— 1989. — № 2. — С. 99—103.
30. Запорожец Н. Ф. Как избавиться нитратов и нитритов// Агропром Украины. — 1989. — № 9. — С. 41—42 (на украинском языке).
31. Запорожец Н. Ф. Разрушение нитратов в кормах — эффективный способ повышения продуктивности крупного рогатого скота//Тез докл. Республ. нонф. «Проблема нитратов в животноводстве и ветеринарии». — Киев. — 1990. — С. 9—10.
-
Запорожец, Николай Федорович
-
доктора биологических наук
-
Боровск, 1992
-
ВАК 06.02.02
- Влияние разной концентрации нитратов и нитритов в комбикормах на содержание их в органах и тканях цыплят-бройлеров
- Экологическая оценка содержания нитратов и нитритов в пищевых продуктах растительного и животного происхождения и методы их снижения
- Продуктивность, особенности обмена веществ у высокопродуктивных коров при использовании в рационах витамина С и протосубтилина ГЗх для денитрификации
- Продуктивность цыплят-бройлеров при обогащении кормосмесей, содержащих нитраты, витаминами B12 и C
- ПРОДУКТИВНОСТЬ ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ ПРИ ОБОГАЩЕНИИ КОРМОСМЕСЕЙ, СОДЕРЖАЩИХ НИТРИТЫ, ВИТАМИНАМИ В12 И С
