Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Научно-практические аспекты рационального использования плодовых тел Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond. et Sing.
ВАК РФ 03.00.32, Биологические ресурсы

Автореферат диссертации по теме "Научно-практические аспекты рационального использования плодовых тел Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond. et Sing."

На правах рукописи

Ооржак Урана Спартаковна

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РАЦИОНАЛЬНОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПЛОДОВЫХ ТЕЛ FOMITOPSIS OFFICINALIS (X'lLL.: FR) BOND. ET SING.

03.00.32 - Биологические ресурсы

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Красноярск - 2006

Работа выполнена па кафедре промышленной экологии, процессов и аппаратов химических производств ГОУ ВПО «Сибирский государственный технологический университет»

Научный руководитель:

кандидат технических наук, доцент Ушанова Валентина Михайловна

Официальные оппоненты:

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Буторова Ольга Федоровна кандидат биологических наук, доцент Марчснкова Татьяна Викторовна

Ведущая организация:

Институт леса им. В.Н. Сукачева СО РАН, г. Красноярск

Защита состоится « 29 » сентября 2006 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета К 212.099.02 при Красноярском государственном университете по адресу: 660041, г. Красноярск, пр. Свободный, 79, Красноярский государственный университет, биологический факультет. Факс: (3912)448626, E-mail: radast@lan.krasu.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Красноярского государственного университета

Автореферат разослан « 29 » августа 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук, доцент ГЛ. Скопцова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В настоящее время рациональное использование природных ресурсов становится все более актуальной проблемой. Одним из перспективных биоресурсов, содержащим биологически активные вещества, являются высшие базидиальные грибы. Они способны синтезировать широкий комплекс веществ углеводной, белковой, ароматической природы, липидов и витаминов, оказывающих действие на укрепление иммунной защиты организма человека.

Огромный резерв полезных трутовых грибов представляет микофлора Сибири. Среди них особое внимание привлекает трутовик лекарственный Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond, et Sing., представитель рода Fomitopsis Karst., произрастающий в основном на стволах лиственниц Larix sibirica Ledb., L. sukaczerwii Dyl., L. gmelinii (Rupr) Rupr., L. kamchatica (Rupr.) Carr. [V. Mukhin, 1993; A. Chlebicki, 2003]. Степень поражения лиственничников Красноярского края, Бурятии и Тывы трутовиком лекарственным по оценке ряда исследователей достигает 30 % [Государственный доклад ..., 2001]. Запас сырья в них составляет от 10 до 30 т [Атлас ареалов и ресурсов ..., 1980].

Трутовик лекарственный известен народной медицине лечебными свойствами и используется в странах Юго-Восточной Азии в создании лечебно-профилактических "препаратов, является предметом традиционного экспорта из России [П.А. Кьосев, 2002; И.А. Филиппова, 2005; Н.П. Денисова, 1998]. Проведенный анализ публикаций по имеющимся ресурсам трутовика лекарственного, его состава и применения показал, что до настоящего времени отсутствуют сведения по комплексной оценке биохимического разнообразия плодовых тел, произрастающих в разных лесорастительных условиях, а также изменениям в процессе их развития.

Одной из важнейших задач рационального использования биоресурсов является комплексная переработка таких нетрадиционных видов сырья, как плодовые тела трутовика лекарственного. Решение ее с научным обоснованием рационального использования плодовых тел, их переработки и практического применения является основанием для проведения данного исследования.

Исследования выполнялись при финансовой поддержке гранта «Председателя Правительства Республики Тыва».

Цель работы: исследование эколого-ресурсных ценностей, биохимического состава плодовых тел трутовика лекарственного из-разных районов Тывы и изучение возможностей их использования в создании новых перспективных продуктов.

Задачи исследований:

- оценить ресурсы трутовика лекарственного и исследовать его воздействие при развитии и формировании плодовых тел на древесину лиственницы сибирской;

- определить биохимический состав трутовика лекарственного из разных лесорастительных условий произрастания и динамику в процессе развития плодовых тел;

- исследовать биологическую активность экстрактов, полученных при комплексной переработке плодовых тел трутовика лекарственного.

Защищаемые положения:

1. Экологические аспекты формирования плодовых тел трутовика лекарственного на древостоях лиственницы сибирской, произрастающей в Тыве.

2. Биохимический состав трутовика лекарственного из Тес-Хемского района отличается повышенным содержанием липидов, белковых веществ, хитина, из Чеди-Хольского - органических кислот и минеральных компонентов.

3. Трутовик лекарственный - перспективный биологический ресурс содержащий амино- и жирные кислоты, летучие терпеноиды, витамины, стерины, фенольные соединения. Оценка ресурсов плодовых тел показала возможность промышленной заготовки трутовика лекарственного.

4. Экстракты трутовика лекарственного проявляют биологическую активность в отношении микобактерий туберкулеза и штаммов условно-патогенных микроорганизмов Micrococcus luteus, Vibrio sp., Bacillus subtilis, Bacillus anthracis СТИ.

Научная новизна. В работе впервые проведены исследования биохимического состава трутовика лекарственного, произрастающего в разных лесорастительных условиях - Тес-Хемском и Чеди-Хольском районах Тывы. Определен состав летучих терпеноидов, амино- и жирных кислот, стеринов, витаминов, фенольных и минеральных компонентов. Изучен состав плодовых тел в процессе их развития.

Впервые исследована биологическая активность углекислотных, водных и спиртовых экстрактов трутовика лекарственного в отношении Шcobacterium tuberculosis и штаммов условно-патогенных микроорганизмов: Acinetobacter baumanii, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis и музейных штаммов Yersinia pseudotuberculosis, Micrococcus luteus, Vibrio sp., Bacillus subtilis, Bacillus anthracis СТИ.

Разработаны научные и практические аспекты рационального использования плодовых тел трутовика лекарственного.

Достоверность и обоснованность научных положений подтверждается выбором современных методов анализа биохимического

состава й биологической активности, объемом проведенных исследований, а также применением методов статистического анализа.

Практическая значимость. На основе результатов исследований установлены особенности формирования и биохимического состава трутовика лекарственного, предложена комплексная переработка плодовых тел, позволяющая рационально использовать природное сырье.

Апробация работы. Основные результаты исследований докладывались на Международной научно-практической конференции «Биоразнообразие и сохранение генофонда флоры, фауны и народонаселения Центрально-азиатского региона» (г. Кызыл, 2003); Международной конференции, посвященной 100-летию начала работы проф. A.C. Бондарцева в Ботаническом институте им. B.JI. Комарова РАН «Грибы в природных и антропогенных экосистемах» (г. Санкт-Петербург, 2005); всероссийских конференциях (г. Красноярск, 2001 - 2004, г. Барнаул, 2005).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 печатных работ, в том числе 1 патент. Экспериментальные данные, представленные в диссертации, получены лично соискателем и опубликованы в соавторстве с руководителем и сотрудниками, работавшими совместно с автором.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, семи глав, выводов, библиографического списка, состоящего из 230 наименований, трех приложений. Работа изложена на 141 страницах машинописного текста, содержит 29 таблиц, 29 рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Обзор литературы

Обобщены сведения об эколого-биологических особенностях высших базидиальных грибов, ареала и химического состава трутовика лекарственного, влиянии экологических и географических факторов на состав грибов. Рассмотрены иммуномоделирующие, противоопухолевые и биологически активные свойства базидиомицетов [Н.В. Белова, 1991; Е.Ю. Ершова, 2003; И.А. Филиппова, 2005]. Проведен анализ литературы по вопросам практического применения грибов, в том числе трутовика лекарственного, и продуктов их переработки [В.К. Шумный, 2004; Г.Л. Рыжова, 1993; W. Xiao, 2003; R. Bertholet, 2004; Р. Lennon, 2003; U. Griesbach, 1998].

2. Объекты и методы исследования

В пределах насаждений лиственниц в районе исследования выбирали древостой, пораженные трутовиком лекарственным, по методам отбора проб, предложенным Э. Д. Левиным (1980). Исследования структуры древесины проводили на срезах, изготовленных вручную [М.Н. Прозин, 1960], химический состав - по общепринятым методикам химии древесины.

Для исследований использовали плодовые тела трутовика лекарственного, заготовленные согласно ГОСТ 21564-76. Анализ

биохимического состава плодовых тел проводился методами Государственной фармакопеи СССР (1987, 1989). Содержание влаги, летучих терпеноидов, минеральных и дубильных веществ определяли по ГОСТ 24027.2-80; хитина и агарициновой кислоты - по методам, предложенным В.И. Билай (1973) и О.М. Ефименко (1965); каротиноиды -спектрофотометрией; витамины К, Вь В2, Be, Р, С - титрованием; витамин Е - высокоэффективной жидкостной хроматографией. Состав минеральных компонентов золы исследовали на приборе ДФС-8 спектральным методом. Содержание общего и белкового азота определяли по стандартной методике, качественный состав аминокислот - с помощью аминокислотного анализатора KLA-3B (Hitachi, Japan), содержание липидов - по Кейтсу (1975), жирные кислоты - газожидкостной хроматографией. Идентификацию жирных кислот, стеринов, летучих терпеноидов проводили на хромато-масс-спектрометре GCD Plus «Hewlett Packard, США».

. Противотуберкулезную активность экстрактов исследовали методом абсолютных концентраций [Приказ Минздрава РФ ..., 2003]; бактерицидную активность - методом посева культур на агаризованную среду перпендикулярным штрихом и методом лунок [Г.К. Решедько, 2001; JI.E. Бриан, 1984]; токсикологические исследования осуществляли на Лабораторных животных — белых мышах [Т.А. Гуськова, 1990].

Дано обоснование выбора экстрагентов как экологически чистых и токсически безопасных в создании продуктов пищевого, фармацевтического и парфюмерно-косметического назначения.

Математическая обработка результатов экспериментов осуществлялась построением и анализом моделей по плану полного факторного эксперимента с использованием пакетов программы STATGRAF.

3. Развитие и формирование плодовых тел трутовика лекарственного на древесине лиственницы сибирской

Лесные ресурсы Республики Тыва составляют почти половину ее территории (46,7 %), где основной лесообразующей породой является лиственница сибирская (47 %). Исследования показали, что трутовик лекарственный в основном встречается во влажных и сырых местообитаниях лиственницы, произрастающей в труднодоступных горных районах Тоджи, Тес-Хема и Чеди-Холя. Ареал трутовика лекарственного совпадает с ареалом лиственницы. В ходе работ, проведенных специалистами Центра защиты леса РТ, и опроса местного населения, выявлено, что заготовка его в основном происходит за счет эксплуатации ценополуляций, расположенных вблизи населенных пунктов. Среднегодовая заготовка составила 10 т трутовика лекарственного (40 % от биологического запаса). Для сравнения запасы сырья Красноярского края и Бурятии - от 10 до 30 т; Кемеровской области - менее 1 т [Атлас ареалов и ресурсов ..., 1980].

Исследования древостоев в возрасте от 160 до 250 лет, пораженных трутовиком лекарственным, показали, что он вызывает центральную стволовую гниль на высоте от 12 до 15 м, ее протяженность - 4±0,5 м. Число

плодовых тел на стволах может достигать 5 и более. Трутовик при развитии на лиственнице сибирской выделяет комплекс ферментов, с помощью которых разлагает одревесневшие клеточные стенки, в результате чего изменяется структура и химический состав древесины. Процесс биологического разрушения древесины трутовиком лекарственным протекает по стадиям и сопровождается изменением окраски древесины без видимых структурных разрушений, затем происходит постепенное разрушение клеточной ткани, которая приводит к разрушению структуры, расслоению ее по годичным слоям (рис. 1).

здоровая пораженная

Рис. 1. Срез древесины лиственницы сибирской

Для определения характера воздействия Fomitopsis officinalis на лиственницу (на микроскопическом уровне, увеличение 400 раз) была исследована ее структура (рис. 2).

здоровая пораженная

Рис. 2. Структура древесины лиственницы сибирской

В здоровой древесине стенки клеток ровные, имеют овально-округлую форму, хорошо просматриваются четкие контуры и срединная пластинка. Сравнительный анализ показал, что в пораженной древесине контуры клеток размыты и срединная пластинка практически слабо заметна. Хорошо видно расслоение клетки и отдельные обрывки от них. Разрушен полностью внутренний слой вторичной стенки, и они имеют неровные формы.

Анализ химического состава древесины на различных стадиях поражения трутовиком лекарственным показал возрастающую потерю легкогидролизуемых полисахаридов, количество которых уменьшается от

23,8 до 18,2 %, при этом трудногидролизуемые полисахариды подвергаются незначительным изменениям. Относительное содержание лигнина в пораженной древесине лиственницы увеличивается от 25,6 до 36,2 %, хотя его абсолютное количество остается без изменений.

На микроскопическом уровне первоначальное проникновение гиф наблюдается по сердцевинным лучам. Обильное ветвление гиф способствует образованию мицелия. При встрече вершинных клеток двух первичных мицелиев, возникших из разных спор, осуществляется их объединение, с образованием вторичного мицелия, происходит интенсивный рост плодового тела на стволе растущего дерева (рис. 3).

однолетние многолетние

Рис. 3. Образцы плодовых тел трутовика лекарственного

Плодовые тела трутовика лекарственного имеют копытообразную форму, желтовато-белого цвета. Кора тонкая, часто растрескивающаяся, беловатая, желтоватая с желтоватыми или коричневато-бурыми зонами. Ткань легкая, мягкая со временем твердеющая и крошащаяся, слегка желтоватая, горькая на вкус. Исследования показали, что масса плодовых тел разного возраста (от 1 до 4 лет) изменяется от 0,5 до 2 кг.

4. Биохимический состав плодовых тел трутовика лекарственного в разных условиях произрастания и их динамика в процессе развития

В последнее время в Тыве ведется интенсивный сбор многих видов пищевого и лекарственного сырья. Среди них особое внимание привлекает трутовик лекарственный, имеющий спрос на рынке и, в основном, заготавливающийся для экспорта, при этом в эксплуатацию вовлекаются все новые территории, включая ранее недоступные массивы. Учитывая необходимость сохранения вида и природоохранные задачи рационального использования лекарственно-технического сырья, проведены исследования биохимического состава трутовика лекарственного в зависимости от разных лесорастительных условий - Тес-Хем (Северо-Таннуольский округ перистепных лиственничных и горно-таежных лиственничных и кедровых лесов) и Чеди-Холь (Улуг-Хемский котловинно-степной округ островных сосновых боров) [A.B. Куминова, 1985].

В составе биологически активных веществ трутовика особое внимание привлекают липиды, белковые вещества, полисахариды, минеральные компоненты и хитин. Сравнительный анализ биохимического состава плодовых тел показал, что наибольшее количество липидов и белков находится в трутовике Тес-Хемского района и составляет 21,0 и 12,6 %, соответственно. Содержание легко- и трудногидролизуемых полисахаридов в плодовых телах составляют 12,8 и 15,8 % (Тес-Хем), 11,2 и 17,7 % (Чеди-Холь), соответственно. Отмечено уменьшение хитина в образцах из Чеди-Холя (8,5 %), его максимальное количество обнаружено в трутовике из Тес-Хема (10,3 %). Органические кислоты (4,7 %) и минеральные компоненты (5,8 %) преобладают в плодовых телах из Чеди-Хольского района в 2 и 1,6 раз по сравнению с Тес-Хемским.

Для наиболее полного изучения биохимического состава трутовика в нем определяли минеральные соединения. Содержание таких макроэлементов, как калий, натрий, кальций, алюминий в образцах из различных условий произрастания остается неизменным и составляет 3 - 4 % для всех элементов. Что касается марганца, цинка, бора, меди, то наблюдается их уменьшение в плодовых телах из Тес-Хема. При этом в них бария содержится в 1,25 раз больше, чем в образцах из Чеди-Холя, циркония — в 1,2 раза. Из токсичных элементов, предусмотренных СанПиН 2.3.2.560-96, разделом 6.10.2.1, в плодовых телах трутовика обнаружен только свинец. Его содержание не превышает допустимый уровень и составляет не более 6 мг/кг.

Биохимический состав трутовика лекарственного варьирует и зависит от условий произрастания. Плодовые тела из Тес-Хемского района отличаются повышенным содержанием липидов, белковых веществ, легкогидролизуемых полисахаридов и хитина. Дальнейшие исследования состава биологически активных веществ трутовика лекарственного проводили на образцах из Тес-Хемского района. Такой выбор района исследования обоснован тем, что он выгодно отличается экологической чистотой и транспортной доступностью.

Для исследований биохимического состава плодовых тел в процессе развития отобраны образцы трутовика лекарственного разного возраста от одного до четырех лет. Они предварительно были разделены на траму (внутренняя часть) и дерму (корка) (табл. 1).

Результаты показали, что содержание общего азота в плодовых телах разного возраста изменяется от 1,8 до 2,3 %. Наибольшее его количество находится в однолетних плодовых телах - 2,1 % (дерма) и 2,2 % (трама). Количество белковых веществ в трутовике лекарственном зависит от его возраста и части плодового тела. С увеличением возраста плодовых тел их содержание уменьшается как в траме, так и в дерме. Белки преобладают в траме одно- и двухлетних плодовых телах.

В работе впервые проведены исследования аминокислотного состава трутовика лекарственного в процессе развития. В составе белковых веществ идентифицировано 17 аминокислот. Среди незаменимых аминокислот

количественно преобладают лейцин 6,0 - 7,9 %, лизин 6,1 - 6,9 %, валин 6,4 -8,5 % (от суммы кислот). Основную долю заменимых аминокислот составляют глутаминовая (13,1 - 17,3 %) и аспарагиновая (6,5 - 11,4 %) кислоты.

Таблица 1

Биохимический состав плодовых тел трутовика лекарственного в его процессе развития

Наименование компонента Содержание, % от а.с.с.

Возраст плодовых тел, годы

1 2 3 4

Белковые вещества 11,5±0,3 11,0±0,2 10.8±0.3 10,0±0,2 9,6±0.2 9,0±0,1 8.7±0.1 8,1±0,1

Агарициновая кислота 9,3±0.1 9,8±0,1 10,5±0,3 10,9±0,3 10,2±0,2 10,3±0,3 10.0±0.1 10,1±0,2

Суммарные липиды 17.1 ±0,2 18,1±0,4 18,4±0,4 19,5±0,6 18,1±0,4 18,8±0,5 17.8±0.3 18,4±0,4

Стерины 0,7±0,1 0,9±0,1 2,0±0.3 2,6±0,3 1,5±0,2 1,7±0,2 1.0±0.1 1,3±0,2

Воскообразные вещества 3,3±0,2 4,6±0,5 3.7±0.3 5,9±0,7 3,6±0,3 5,8±0,7 3,4±0,2 5,6±0,6

Легкогидролизуемые полисахариды 10,3±0,6 10,1 ±0,5 9,8±0,5 9,3±0,4 9,4±0,4 8,9±0,3 9.3±0,4 8,5±0,3

Трудногидролизуемые полисахариды 14,0±0,3 15,1±0,5 15,2±0,5 15,6±0,4 16,1 ±0,6 16,5±0,5 16,2±0,6 16,7±0,5

Свободные органические кислоты (в пересчете на щавелевую кислоту) 2.1±0,3 4,0±0,5 2,5±0.3 4,2±0,5 1.8±0,2 3,0±0,4 1.6±0.2 2,7±0,3

Сумма фенольных соединений 4.2±0,2 4,5±0,3 4.4±0,3 5,5±0,5 4,5±0.3 5,6±0,5 4,8±0.4 5,8±0,5

Минеральные вещества 3,4±0,2 3,7±0,3 3.8±0,3 4,8±0,3 4,5±0,4 4,7±0,4 4.8±0.4 5,0±0,5

Хитин 7,7±0,2 8,4±0,3 8,7±0,3 9,1±0,4 9,6±0,4 9,8±0,5 10,5±0,5 10,7±0,5

Примечание: содержание компонентов в числителе для трамы, в знаменателе - для дермы плодовых тел

Содержание липидов в трутовике лекарственном с возрастом плодовых тел увеличивается. На долю нейтральных липидов приходится от 62,3 до 79,6 % (от суммарных липидов), содержание глико- и фосфолипидов составляет 13,3 - 24,7 % и 6,7 — 13,6 %, соответственно.

Впервые проведены исследования состава жирных кислот, стеринов и летучих терпеноидов плодовых тел трутовика лекарственного.

Анализ жирнокислотного состава трутовика показал, что основными ненасыщенными кислотами являются линолевая и олеиновая. Их суммарное

содержание в плодовых телах разного возраста изменяется от 83,7 до 84,9 %. Среди насыщенных кислот преобладают пальмитиновая (4,5 - 5,5 %) и стеариновая (2,7 - 3,8 %).

Ранее проведенные исследования химического состава трутовика лекарственного О.М. Ефименко и JI.B. Агеенковой (1965) показали наличие двух стеринов, один из которых идентифицирован как эргостерол. Использование в работе современных методов анализа позволило установить в составе стеринов эргостерол, эргоста-7,22-диен-3-ол (3.ß., 22 Е), эргоста-7,22-диен-З-ол (3.ß., 5.а., 22 Е), эргоста-5-ен-З-ол (3.ß.), эргоста-5,24(28)-диен-3-ол (3.ß.), 9,19-циклоланост-25-ен-3-ол, 24-метил-, (3.ß., 24 S). Сравнительный анализ содержания стеринов трутовика разного возраста показал, что наибольшее количество эргостерола 32,0 % (от суммы стеринов) находится в двухлетних плодовых телах.

С возрастом плодовых тел содержание летучих терпеноидов изменяется от 0,2 до 0,6 %, наибольшее их количество находится в двухлетних образцах (0,5 - 0,6 %). Основную массу терпеноидов составляют кислородсодержащие соединения, среди которых на долю борнилацетата приходится 30,0 %. В составе сесквитерпеновых углеводородов преобладают кариофиллен (6,3 %), а-кариофиллен (5,2 %) и изокариофиллен (4,3 %). Во фракции монотерпеноидов а-пинен и ß-пинен содержатся в равных количествах (2,6 %).

Среди биологически активных веществ трутовика лекарственного представляет интерес агарициновая кислота, придающая плодовым телам горький вкус. Содержание ее в плодовых телах разного возраста изменяется от 9,3 до 10,9 %. Полученные результаты согласуются с данными О.М. Ефименко (1965).

Исследования показали, что фенольные соединения преобладают в дерме плодовых тел второго, третьего и четвертого годов. На долю флавоноидов приходится около 40 % от общего количества фенольных соединений. Флавоноиды, обладающие Р-витаминной активностью, являются ценными соединениями.

Высшие базидиальные грибы способны синтезировать жиро- и водорастворимые витамины. В плодовых телах трутовика лекарственного присутствуют витамины Е, К, В|, В2, В6, Р и С. Среди них преобладают витамины Е, В2, С. Наибольшим содержанием витамина Е (49,1 мг%) отличаются плодовые тела второго года, витамина (11,8 мг%) и С (16,2 мг%) — первого года.

Таким образом, исследования показали, что состав трутовика лекарственного представлен в виде сложного многокомпонентного комплекса, состоящего из аминокислот, терпеноидов, стеринов, жирных кислот, витаминов и других соединений. Биохимический состав плодовых тел в процессе развития подвергается изменениям. Однолетние плодовые тела отличаются высоким содержанием белковых веществ, водорастворимых витаминов и легкогидролизуемых полисахаридов. В плодовых телах второго года увеличивается количество ■ терпеноидов, липидов, стеринов,

жирорастворимых витаминов. Сравнительные исследования биохимического состава трамы и дермы показали, что существенных различий в содержании основных компонентов не наблюдается, поэтому для переработки рекомендуется заготавливать плодовые тела от одного до четырех лет без очистки от дермы, что предусматривает рациональное использование сырья.

5. Получение биологически активных веществ путем экстрагирования плодовых тел трутовика лекарственного

■ В работе представлен новый подход к использованию трутовика лекарственного, который заключается в комплексной переработке плодовых тел с применением экологически чистых и безопасных экстрагентов: сжиженного диоксида углерода, воды и этилового спирта.

Экстракция диоксидом углерода выделяет биологически активные вещества трутовика лекарственного в нативном виде, а именно: летучих терпеноидов, токоферолов, каротиноидов, стеринов и жирных ненасыщенных кислот. Результаты предварительных исследований показали, что при продолжительности экстрагирования 6 ч, крупности сырья 1-5 мм, жидкостном модуле 7 достигается максимальное извлечение экстрактивных веществ. Углекислотный экстракт трутовика лекарственного, полученный при этих условиях, характеризуется высоким содержанием линолевой и олеиновой кислот (91,1 % от суммы кислот), летучих терпеноидов (8,5 %), стеринов (0,4 %), каротиноидов (16,6 мг%), витаминов Б (1077,8 мг%) и К (27,2 мг%) (от экстрактивных веществ).

Одним из важнейших компонентов углекислотного экстракта являются летучие терпеноиды, их групповой состав приведен на рисунке 4.

. ■ Монотерпеноиды 0 Сесквитерпеноиды ■ Кислородсодержащие В Не идентифицировано

Рис. 4. Групповой состав летучих терпеноидов углекислотного экстракта трутовика лекарственного

Основную массу терпеноидов экстракта, как и в исходном сырье, составляют кислородсодержащие соединения. Среди них преобладают борнилацетат (30,0 %) и кариофиллен оксид (9,0 %).

При экстрагировании плодовых тел сжиженным диоксидом углерода извлекается лишь часть экстрактивных веществ. Большинство высших

базидиальных грибов содержат биологически активные вещества, которые экстрагируются водой. Поэтому традиционные чаи и водные экстракты, применяющиеся в народной медицине, являются вполне оправданной формой их перорапьного использования. Твердый остаток плодовых тел после экстракции сжиженным диоксидом углерода экстрагировали водой.

Для подбора оптимальных условий экстракции водой твердого остатка была проведена серия опытов, математическая обработка которых проводилась по плану Коно. В качестве независимых переменных взяты: Х[ - температура экстракции, °С; Хг — продолжительность экстракции, ч. Температуру экстракции варьировали в пределах 20 - 100 °С, продолжительность — от 1 до 5 ч. Параметры оптимизации: У) — выход суммарных экстрактивных веществ, % от а.с.с.; У2 - выход редуцирующих веществ, %; У3 - выход белковых веществ, %.

Оценка воспроизводимости опытов по критерию Кохрена показала их 5 % уровень значимости. Адекватность моделей проверялась по критерию Фишера. Условия задачи оптимизации формировались с учетом требований нормативной документации: У|-> мах; У2, > 18,50; У3 > 30.

Динамика извлечения водорастворимых веществ из твердого остатка плодовых тел при разных температурах представлена на рисунке 5.

3 14

Г 12

1 Ю

у

- а

2 3 8 I " б

и

± о

О 1 2 3 4 5

прололж1гтельность экстракта! (О, ч

° факт (2(?С) —расчет (20*С) о факт (40*С)

— расчет(4#С) ° факт(ЮСГС) —расчет (100°С)

Рис. 5. Динамика извлечения водорастворимых веществ из твердого остатка плодовых тел трутовика лекарственного при разных температурах

Расчеты показали, что оптимальному режиму экстрагирования соответствуют: продолжительность экстракции 3,5 ч; температура 60 °С. В разработанном оптимальном режиме был получен водный экстракт. Экстракт содержит (к экстрактивным веществам): белковые (32,5 %), дубильные

..........I...........Г

\ЧЦ = П,35<1 - схр(-2,200) Р." = 0.9996

\"(0 = 6.36П - ехр(-1.920) Я" = 0.996 I I

У(0 = 8,43(1 -ехр(-2,120) Г = 0.995 _

(8,7 %), редуцирующие вещества (19,2 %), витамины С (107,5 мг%), В, (4,9 мг%), В2 (46,5 мг%), В6 (3,4 мг%) и Р (4,5 мг%).

В твердом остатке плодовых тел трутовика лекарственного после водной экстракции остается часть липофильных компонентов. Для их извлечения проводилась экстракция этиловым спиртом, который является одним из наиболее часто применяемых растворителей в производстве фармацевтических и парфюмерно-косметических продуктов. Как экстрагент он имеет относительно низкую температуру кипения, при этом обладает широким диапазоном извлечения биологически активных веществ, которые не извлекает вода, причем его извлекающая способность зависит от концентрации, температуры и продолжительности.

Для установления оптимального режима экстрагирования в качестве независимых переменных выбраны следующие факторы: Х| — продолжительность экстракции, ч; Х2 - температура экстракции, °С; Хз — концентрация этилового спирта, %. В качестве параметров оптимизации взяты: У] — выход суммарных экстрактивных веществ, % от а.с.с.; У2 — выход фенольных соединений, % от экстрактивных веществ; Уз - выход суммарных липидов, % от экстрактивных веществ; У; - выход агарициновой кислоты, % от экстрактивных веществ.

Для получения регрессионных зависимостей был реализован трехфакторный план Бокса. Оптимизацию проводили методом нелинейного программирования. Задача оптимизации сводилась к определению значений технологических параметров, обеспечивающих максимальный выход экстрактивных веществ. При этом выход фенольных соединений, агарициновой кислоты и липидов регламентировался нормативной документацией: У| —> мах; У2 5:10; Уз>45, У4>8. Получены следующие уравнения регрессии:

Анализ моделей (1) — (4) показал их адекватность изучаемым процессам при доверительной вероятности, равной 95 %. Расчеты показывают, что оптимальному режиму экстрагирования соответствуют: X, - 4,5 ч; Х2 - 78 °С; Х3 - 88 %.

В разработанном оптимальном режиме был получен спиртовый экстракт. Состав спиртового экстракт включает (к экстрактивным

У,=25,68+2,37x1+3,92х2+3,93x^3,70х12+0,54х|Х2+1,02х1х3+

+1,92х22+1,28х:Х3-11,99х32;

У2=10,06+1,18Х|+2,79x2-0,20хз-1,08х,2+0,17х|х2-0,18х|хз+ +0,94хг2+0,01 х:хз-1,84х32;

У3=23,46+0,56x1+5,28x2+14,32хз-0,60х,2-2,71х,х2-4,45х,хз--1,68х22+8,30х2хз+6,51х32;

У 4=3,91+0,66х,+1,62х2+1,84хз-0,12х!2+0,22х, х2+0,27х, х3--0,29х22+0,74х2хз+0,59хз2.

(2)

(3)

(4)

веществам): липиды (46,6 %), витамины Е (72,3 мг%) и К (1,9 мг%), каротиноиды (6,7 %), фенольные соединения (11,4 %), а также агарициновую кислоту (8,3 % к а.с.с.).

Исследования состава твердого остатка показали наличие белковых и минеральных веществ, полисахаридов, хитина. Послеэкстракционный твердый остаток плодовых тел может быть использован в качестве источника хитин-глюканового комплекса.

6. Биологическая активность экстрактов трутовика лекарственного

В связи с широким распространением условно-патогенных микроорганизмов и лекарственно-устойчивого туберкулеза, в последнее время повысился интерес к природным источникам, проявляющим высокую бактерицидную активность. Для оценки возможности использования экстрактов трутовика лекарственного в качестве бактерицидных веществ были проведены исследования по изучению биологической активности.

В лаборатории микробиологии Тывинского республиканского отделения «Фтизиатрия» г. Кызыла проводили испытания активности водных, спиртовых, углекислотных экстрактов в отношении М. tuberculosis, выделенных от больных различными формами туберкулеза: фиброзно-кавернозного, диссеминированного, инфильтративногО и в состоянии после операции. Использовали штаммы, выделенные ' у . пациентов со множественной лекарственной устойчивостью, которые, проявляя резистентность к применяемым на практике антибиотикам, составляют проблемную группу микроорганизмов. Сравнительный анализ показал, что высокую противотуберкулезную активность ко всем испытанным микобактериям проявляют углекислотные экстракты. Спиртовые экстракты активны в отношении микобактерий, выделенных от больных диссеминированного, инфильтративного туберкулеза. Микобактерии туберкулеза, находящиеся в состоянии покоя, проявили чувствительность к водным экстрактам.

На кафедре микробиологии КрасГМА г. Красноярска проводили испытания углекислотных экстрактов в отношении штаммов условно-патогенных микроорганизмов. Исследования показали, что углекислотные экстракты трутовика лекарственного обладают бактериостатическим и бактериолитическим действием в отношении граммположительных бактерий. Зона подавления углекислотным экстрактом роста микроорганизмов Bacillus anthracis СТИ на первые сутки составил 23,0±2,2 мм, Micrococcus luteus - 16,0±2,0 мм, Bacillus subtilis — 14,0±0,1 мм. В отношении Vibrio sp. установлен более выраженный бактериолитический эффект на девятые сутки: зона подавления роста микроорганизмов на первые сутки составил 15,2±1,1 мм, пятые—16,4±0,9 мм и девятые - 23,8±1,3 мм.

Изучение токсичности водных экстрактов трутовика лекарственного .проводили на белых мышах. При наблюдении опытных животных (в течение 30 сут) не была выявлена токсичность экстрактов,

. Исследования показали, что углекислотные, водные и спиртовые экстракты трутовика лекарственного могут быть использованы в качестве бактерицидныхвеществ.

7. Комплексная переработка плодовых тел трутовика лекарственного

Комплексная переработка трутовика лекарственного, позволяющая рационально использовать сырье, предусматривает трехступенчатую экстракцию различными по полярности растворителями. Первая стадия включает экстракцию измельченных плодовых тел сжиженной углекислотой, оставшийся после' экстракции остаток экстрагируют водой. Проведение водной экстракции позволило получить экстракт с выходом экстрактивных веществ 1.0,7 %. Дополнительное извлечение экстрактивных веществ проводят этиловым спиртом (27,5 %). Послеэкстракционный остаток может быть использован в качестве источника хитин-глюканового комплекса.

Разработанная комплексная переработка трутовика лекарственного позволяет расширить ассортимент готовой продукции (углекислотные, водные и спиртовые экстракты), увеличить коэффициент рационального использования сырья за счет более полного извлечения экстрактивных веществ. На основании проведенных исследований разработаны технические . условия на углекислотные, водные испиртовые экстракты плодовых тел.

*•■ Проведены испытания полученных экстрактов на предприятии :-г.' Кызыла (ООО «Бойдус»). Технико-экономические расчеты (на 500 кг перерабатываемого в год сырья) показали экономическую целесообразность • предлагаемого варианта комплексной переработки плодовых тел трутовика .лекарственного. Рентабельность предприятия составила 38,03 %, срок окупаемости - 2,6 лет.

Выводы:

Г. Рост плодовых тел трутовика лекарственного на лиственнице сибирской приводит к разрушению ее структуры, снижению содержания легко- и трудногидролизуемых полисахаридов в 1,3 и 1,2 раз, соответственно. Масса плодовых тел одно — четырехлетнего возраста составляет 0,5 — 2 кг.

2.' Биохимический состав трутовика лекарственного варьирует в зависимости от условий произрастания. В плодовых телах из Тес-Хема преобладают липиды (21,0 %), белковые вещества (12,6 %), легкогидролизуемые полисахариды (12,8 %), хитин (10,3 %). В образцах из Чеди-Холя больше в 2 раза органических кислот и в 1,6 раз минеральных компонентов.

3. Плодовые тела первого и второго годов отличаются высоким содержанием белковых веществ (10,8 - 11,5 %). Среди незаменимых аминокислот преобладают лейцин, лизин, валин, заменимых -глугаминовая и аспарапиновая.

4. Липидные компоненты с возрастом плодовых тел увеличиваются от 17,1 до 19,5 %. Ненасыщенные кислоты липидов представлены линолевой и олеиновой (83,7 — 84,9 % от суммы кислот). Основную массу летучих терпеноидов плодовых тел составляют кислородсодержащие соединения (65,20 %). Плодовые тела двухлетнего возраста отличаются наибольшим содержанием эргостерола (32 % от суммы стеринов) и витамина Е (49,1 мг%).

5. С возрастом плодовых тел от одного до четырех лет увеличивается содержание трудногидролизуемых полисахаридов в 1,2; фенольных соединений - 1,4; минеральных компонентов - 1,4; хитина — 1,3 раз.

6. Углекислотные экстракты трутовика лекарственного проявляют высокую противотуберкулезную активность и бактерицидное действие в отношении условно-патогенных микроорганизмов (Micrococcus luteus, Vibrio sp.. Bacillus subtilis, Bacillus anthracis СТИ). Экстракты плодовых тел не токсичны и могут быть использованы в качестве бактерицидных веществ.

7. Оценка ресурсов трутовика лекарственного показала возможность его промышленной заготовки при ежегодном сборе до Ют сырья. Предложена комплексная переработка плодовых тел трутовика лекарственного, позволяющая получить углекислотные, водные и спиртовые экстракты. Данная технология апробирована на предприятии г.Кызыла.

Список опубликованных работ по теме диссертации:

1. Ооржак, У.С. Влияние места произрастания на состав минеральных компонентов лиственничной губки / У.С. Ооржак, В.М. Ушанова И Биоразнообразие и сохранение генофонда флоры, фауны й народонаселения Центрально-азиатского региона: материалы 1-й междунар. науч.-практ. конф. - Кызыл, 2003. - С. 56 - 57.

2. Ооржак, У.С. Влияние технологических факторов на процесс извлечения водорастворимых веществ из лиственничной губки / У.С. Ооржак, В.М. Ушанова, С.М. Репях // Биоразнообразие и сохранение генофонда флоры, фауны и народонаселения Центрально-азиатского региона: материалы 1-й междунар. науч.-практ. конф. - Кызыл, 2003. — С. 57 - 58.

3. Ооржак, У.С. Водные экстракты из плодовых тел лиственничной губки / У.С. Ооржак, В.М. Ушанова, С.М. Репях // Химико-лесной комплекс -проблемы и решения: сб. ст. по материалам Всерос. науч.-практ. конф. - Красноярск, 2001. - Т. II. - С. 78 - 80.

4. Ооржак, У.С. Исследование химического состава лиственничной губки /У.С. Ооржак, Т.П. Раймер, В.М. Ушанова // Химико-лесной

комплекс — проблемы и решения: сб. ст. по, материалам Всерос. науч.-практ. конф. - Красноярск, 2002. — Т. Ш. - С. 45 - 46. 5. Ооржак, У.С. Полифенольные соединения в лиственничной губке / У.С. Ооржак, В.М. Ушанова // Лесной и химические комплексы: проблемы и решения: сб. ст. Всерос. науч.-практ. конф. - Красноярск,

2003. — Т. 1. — С. 318 - 321.

. 6. Ооржак, У.С. Влияние бурой гнили на древесину лиственницы сибирской ;f_ / У.С. Ооржак, В.М. Ушанова // Лесной и химические комплексы: проблемы и решения: сб. ст. Всерос. науч.-практ. конф. — Красноярск,

2004.-Т. З.-С. 19-23.

7. Ооржак, У.С. Исследование влияния технологических факторов на процесс извлечения экстрактивных веществ из лиственничной губки / У.С. Ооржак, В.М. Ушанова, С.М. Репях // Химия растительного сырья. -2003.-№ 1.-С. 69-72.

8. Ооржак, У.С. Состав минеральных элементов трутовика лекарственного в процессе развития / У.С. Ооржак, В.М. Ушанова, С.М. Репях // Вестник СибГТУ. - 2003. - Ж1. - С. 76 - 78.

, 9. Биологически активные вещества лиственничной губки / Ооржак У.С., Ушанова В.М. - Красноярск: СибГТУ, 2004. - 6 с. - Деп. в ВИНИТИ 16.04.04, № 634-В2004. 10.Ооржак, У.С. Белковые вещества и витамины гриба Fomitopsis officinalis . (Vill.: Ft.) Bond, et Sing. / У .С. Ооржак, B.M. Ушанова // Хранение и ,.. переработка сельхозсырья. - 2004. - № 11. - С. 52 - 53. 11.Пат. 2257222 RU, МПК 7 А61К35/84. Комплексная переработка гриба трутовик лекарственный Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond, et Sing. / В.М. Ушанова, У.С. Ооржак, В.И. Канзай; заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО СибГТУ. - № 2004120448, заявл. 02.07.04; опубл. 27.07.05., Бюл. №21.-5 с.

. 12.Щариков, A.M. Бактерицидная активность метаболитов гриба Fomitopsis officinalis в отношении условно-патогенных бактерий / A.M. Шариков, У.С. Ооржак, О.В. Перьянова, ВМ. Ушанова, Д.А. Нешумаев // Грибы в природных и. антропогенных экосистемах: тр. междунар. конф.

- Санкт-Петербург, 2005. - Т. 2. - 305 - 307 с.

13.Ооржак, У.С. Новое направление переработки плодовых тел Fomitopsis officinalis (Vill. Fr.) Bond, et Sing. / У.С. Ооржак // Грибы в природных и антропогенных экосистемах: тр. междунар. конф. - Санкт-Петербург,

2005.-Т. 2.-57-60 с.

14.Sharikov, A.M. Metabolites of the fungus Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond, et Sing: the bactericidal activity regarding the conditionally-pathogenic bacteria / A.M. Sharikov, U.S. Oorzhak, T.I. Gromovykh, O.V. Peryanova, D.A. Neshumaev // Program & abstracts: The ХП Symposium of the Russia

— Japan medical exchange. - Krasnoyarsk, 2005. - P. 659 - 661.

Подписано в печать 28.08.06 Уч.-изд. л. 1,3. Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Тираж 110 экз. Заказ № 182. Отпечатано Изд-во «Красноярский писатель», 660049, г. Красноярск, ул. Лебедевой, 89, тел.: 23-48-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ооржак, Урана Спартаковна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1 Экология дереворазрушающих базидиомицетов.

1.2 Ареал и химический состав плодовых тел трутовика лекарственного.

1.3 Пути использования плодовых тел трутовика лекарственного.

Выводы по главе 1.

Глава 2. Объекты и методы исследования.

2.1 Объекты и методы отбора проб сырья.

2.2Исследования биохимического состава сырья.

2.3Выбор экстрагентов.

2.4Исследования химического состава экстрактов.

2.5Исследования биологической активности и токсичности экстрактов.

2.6Установки для экстракции сырья органическими растворителями.

Выводы по главе 2.

Глава 3. Развитие и формирование плодовых тел трутовика лекарственного на древесине лиственницы сибирской.

Глава 4. Биохимический состав трутовика лекарственного.

4.1 Биохимический состав трутовика лекарственного в разных условиях произрастания.

4.2 Динамика биохимического состава трутовика лекарственного в процессе развития.

Глава 5. Получение биологически активных веществ путем экстрагирования плодовых тел трутовика лекарственного.

5.1 Экстрагирование плодовых тел сжиженным диоксидом углерода.

5.2 Экстрагирование твердого остатка плодовых тел трутовика лекарственного водой.

5.3 Экстрагирование твердого остатка плодовых тел трутовика лекарственного этиловым спиртом.

Глава 6. Биологическая активность экстрактов плодовых тел трутовика лекарственного.

Глава 7. Комплексная переработка плодовых тел трутовика лекарственного.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Научно-практические аспекты рационального использования плодовых тел Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond. et Sing."

В настоящее время одним из актуальных направлений рационального использования местных природных ресурсов является получение биологически активных веществ (БАВ). В этом плане их источником могут служить высшие базидиальные грибы, способность синтезировать комплекс веществ углеводной, белковой, ароматической природы, липидов и витаминов делает их перспективными продуцентами БАВ. Биомасса базидиомицетов, за счет этих соединений, является не только ценным продуктом питания, но и обладает противоопухолевым, антисклеротическим, иммунокоррегирующим действием.

Грибы принимают активное участие в процессах деструкции и минерализации органических веществ, что необходимо для нормальной жизнедеятельности природного сообщества. Они осуществляют регенерацию, возврат углерода и минеральных элементов вновь в биологический круговорот. Огромный резерв высших базидиальных грибов представляет микофлора Сибири. Среди них особое внимание привлекает трутовик лекарственный Fomitopsis officinalis (Vill.:Fr.) Bond, et Sing., представитель рода Fomitopsis Karst., произрастающий в основном на стволах лиственниц Larix sibirica Ledb., L. sukaczewii Dyl., L. gmelinii (Rupr) Rupr., L. kamchatica (Rupr.) Carr. Наибольшее его распространение наблюдается в лиственничниках Красноярского края, Бурятии, Тывы. В хвойных лесах в этих регионов на древостой лиственницы сибирской приходится около 47 %, при этом степень ее поражения Fomitopsis officinalis составляет 30 %.

Трутовик лекарственный является одним из перспективных источников биологически активных веществ. В народной медицине его применяют в качестве кровоостанавливающего, успокаивающего, снижающего потоотделение средства, в странах Юго-Восточной Азии используется в создании лечебно-профилактических препаратов, является предметом традиционного экспорта из России. Запас плодовых тел в древостоях Красноярского края, Тывы и Бурятии составляет от 1 до 30 т.

Проведенный анализ публикаций по имеющимся ресурсам трутовика лекарственного, его состава и применения показал, что до настоящего времени отсутствуют сведения по комплексной оценке биохимического разнообразия плодовых тел, произрастающих в разных лесорастительных условиях, а также изменениям в процессе их развития. В связи с этим возникает необходимость исследования биохимического состава, обоснований рационального использования плодовых тел, их переработки и практического применения.

Целью работы является исследование эколого-ресурсных ценностей, биохимического состава плодовых тел трутовика лекарственного из разных районов Тывы и изучение возможностей их использования в создании новых перспективных продуктов.

Задачи исследований:

- оценить ресурсы трутовика лекарственного и исследовать его воздействие при развитии и формировании плодовых тел на древесину лиственницы сибирской;

- определить биохимический состав трутовика лекарственного из разных лесорастительных условий произрастания и динамику в процессе развития плодовых тел;

- исследовать биологическую активность экстрактов, полученных при комплексной переработке плодовых тел трутовика лекарственного.

Защищаемые положения:

1. Экологические аспекты формирования плодовых тел трутовика лекарственного на древостоях лиственницы сибирской, произрастающей в Тыве.

2. Биохимический состав трутовика лекарственного из Тес-Хемского района отличается повышенным содержанием липидов, белковых веществ, хитина, из Чеди-Хольского - органических кислот и минеральных компонентов. it

3. Трутовик лекарственный - перспективный биологический ресурс содержащий амино- и жирные кислоты, летучие терпеноиды, витамины, стерины, фенольные соединения. Оценка ресурсов плодовых тел показала возможность промышленной заготовки трутовика лекарственного.

4. Экстракты трутовика лекарственного проявляют биологическую активность в отношении микобактерий туберкулеза и штаммов условно-патогенных микроорганизмов Micrococcus luteus, Vibrio sp., Bacillus subtilis, B. anthracis СТИ.

Научная новизна

В работе впервые проведены исследования биохимического состава трутовика лекарственного, произрастающего в разных лесорастительных условиях - Тес-Хемском и Чеди-Хольском районах Тывы. Определен состав летучих терпеноидов, амино- и жирных кислот, стеринов, витаминов, фенольных и минеральных компонентов плодовых тел. Изучен состав плодовых тел в процессе их развития.

Впервые исследована биологическая активность углекислотных, водных и спиртовых экстрактов в отношении Micobacterium tuberculosis и штаммам условно-патогенных микроорганизмов: Acinetobacter baumanii, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis и музейным штаммам Yersinia pseudotuberculosis, Micrococcus luteus, Vibrio sp., Bacillus subtilis, B. anthracis СТИ.

Разработаны научные и практические аспекты рационального использования плодовых тел трутовика лекарственного.

Достоверность и обоснованность научных положений подтверждается выбором современных методов анализа биохимического состава и биологической активности, объемом проведенных исследований, а также применением методов статистического анализа.

Практическая значимость

На основе результатов исследований установлены особенности формирования и биохимического состава трутовика лекарственного, предложена комплексная переработка плодовых тел, позволяющая рационально использовать природное сырье.

Апробация работы

Основные результаты исследований докладывались на Международной научно-практической конференции «Биоразнообразие и сохранение генофонда флоры, фауны и народонаселения Центрально-азиатского региона» (г. Кызыл, 2003), Международной конференции, посвященной 100-летию начала работы проф. А.С. Бондарцева в Ботаническом институте им. B.JL Комарова РАН «Грибы в природных и антропогенных экосистемах» (г. Санкт-Петербург, 2005), всероссийских конференциях (г. Красноярск, 2001 -2004, г. Барнаул, 2005).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 14 печатных работ, в том числе 1 патент. Экспериментальные данные, представленные в диссертации, получены лично соискателем и опубликованы в соавторстве с руководителем и сотрудниками, работавшими совместно с автором.

Структура и объем работы

Диссертационная работа состоит из введения, семи глав, выводов, библиографического списка, состоящего из 230 наименований, трех приложений. Работа изложена на 141 страницах машинописного текста, содержит 29 таблиц, 29 рисунков.

Заключение Диссертация по теме "Биологические ресурсы", Ооржак, Урана Спартаковна

Основные результаты работы сводятся к следующим выводам:

1. Рост плодовых тел трутовика лекарственного на лиственнице сибирской приводит к разрушению ее структуры, снижению содержания легко- и трудногидролизуемых полисахаридов в 1,3 и 1,2 раз, соответственно. Масса плодовых тел одно - четырехлетнего возраста составляет 0,5 - 2 кг.

2. Биохимический состав трутовика лекарственного варьирует в зависимости от условий произрастания. В плодовых телах из Тес-Хема преобладают липиды (21,0 %), белковые вещества (12,6 %), легкогидролизуемые полисахариды (12,8 %), хитин (10,3 %). В образцах из Чеди-Холя больше в 2 раза органических кислот и в 1,6 раз минеральных компонентов.

3. Плодовые тела первого и второго годов отличаются высоким содержанием белковых веществ (10,8 - 11,5 %). Среди незаменимых аминокислот преобладают лейцин, лизин, валин, заменимых - глутаминовая кислота и аспарагиновая.

4. Липидные компоненты с возрастом плодовых тел увеличиваются от 17,1 до 19,5 %. Ненасыщенные кислоты липидов представлены линолевой и олеиновой (83,7 - 84,9 % от суммы кислот). Основную массу летучих терпеноидов плодовых тел составляют кислородсодержащие соединения (65,20 %). Плодовые тела двухлетнего возраста отличаются наибольшим содержанием эргостерола (32 % от суммы стеринов) и витамина Е (49,1 мг%).

5. С возрастом плодовых тел от одного до четырех лет увеличивается содержание трудногидролизуемых полисахаридов в 1,2; фенольных соединений - 1,4; минеральных компонентов - 1,4; хитина - 1,3 раз.

6. Углекислотные экстракты трутовика лекарственного проявляют высокую противотуберкулезную активность и бактерицидное действие в отношении условно-патогенных микроорганизмов (Micrococcus Luteus, Vibrio sp., Bacillus subtilis, Bacillus anthracis СТИ). Экстракты плодовых тел не токсичны и могут быть использованы в качестве бактерицидных веществ.

7. Оценка ресурсов трутовика лекарственного показала возможность его промышленной заготовки при ежегодном сборе до 10 т сырья. Предложена комплексная переработка плодовых тел трутовика лекарственного, позволяющая получить углекислотные, водные и спиртовые экстракты. Данная технология апробирована на предприятии г. Кызыла.

Заключение

Трутовик лекарственный Fomitopsis officinalis (Vill.:Fr.) Bond, et Sing., является одним из часто встречаемых грибов, поражающих древостой лиственницы сибирской. Он в основном поражает лиственницу в возрасте от 160 до 250 лет на высоте ствола от 12 до 15 м. Гниль древесины, как правило, появляется в центральной стволовой части, ее протяженность 4±0,5 м. Число плодовых тел на стволах может достигать 5 и более штук.

В результате биологического разрушения древесины Fomitopsis officinalis, на стволах лиственницы формируются многолетние плодовые тела копытообразной формы, желтовато-белого цвета. Кора тонкая, часто растрескивающаяся, беловатая, желтоватая с желтоватыми или коричневато-бурыми зонами. Ткань легкая, мягкая со временем твердеющая и крошащаяся, белая или слегка желтоватая, горькая на вкус, со слабым мучным запахом. Масса плодовых тел разного возраста (от 1 до 4 лет) изменяется от 0,5 до 2 кг.

Ареал трутовика лекарственного совпадает с ареалом лиственницы. Наибольшее его распространение отмечено на стволах лиственниц произрастающих в умеренно влажных лесах Красноярского края, Бурятии и Тывы. Около 47 % хвойных лесов этих регионов приходится на лиственничники, количество пораженных трутовиком древостоев в них составляет 30 %.

В ходе работ, проведенных специалистами Центра защиты леса Республики Тыва и опроса местного населения выявлено, что трутовик лекарственный предпочитает влажные и сырые местообитания лиственницы сибирской в труднодоступных горных лиственничниках Тоджи, Тес-Хема и Чеди-Холя. Заготовка его в основном происходит за счет эксплуатации ценопопуляций, расположенных вблизи населенных пунктов. Среднегодовая заготовка составила 10 т трутовика (40 % от биологического запаса), данное количество сырья является достаточным для промышленной заготовки. Для сравнения: в Красноярском крае и Бурятии запасы трутовика составляют от 10 до 30 т, в Кемеровской области - менее 1 т.

Трутовик лекарственный известен народной медицине лечебными свойствами и широко используется в странах Юго-Восточной Азии в создании лечебно-профилактических препаратов и является предметом традиционного экспорта из России. Несмотря на это, до настоящего времени отсутствуют сведения по комплексной оценке биохимического разнообразия плодовых тел, произрастающих в различных лесорастительных условиях, а также изменениям в процессе их развития. В связи с этим возникает необходимость исследования биохимического состава, обоснований рационального использования плодовых тел, их переработки и практического применения. 7

Сравнительный анализ биохимического состава трутовика лекарственного, произрастающего в разных районах Тывы показал, что наибольшее количество липидов и белков находится в трутовике Тес-Хемского района и составляет 21,0 и 2,6 %, соответственно. Легко- и трудногидролизуемые полисахариды в зависимости от зон произрастания отличаются незначительно. В плодовых телах они составляют 12,8 и 15,8 % (Тес-Хем), 11,2 и 17,7 % (Чеди-Холь), соответственно. Отмечено уменьшение содержания хитина в плодовых телах из Чеди-Холя (8,5 %), его максимальное количество обнаружено в образцах из Тес-Хема (10,3 %). Органические кислоты (4,7 %) и минеральные компоненты (5,8 %) преобладают в образцах из Чеди-Хольского района в 2 и 1,6 раз, по сравнению с Тес-Хемским [107].

Проведенные исследования биохимического состава трутовика лекарственного показали наличие амино- и жирных кислот, летучих терпеноидов, витаминов, стеринов, фенольных соединений в плодовых телах, что позволяет использовать их в качестве перспективного источника биологически активных веществ [22,108,109].

Наибольшее количество белковых веществ содержится в плодовых телах первого (11,0 - 11,5 %) и второго года (10,0 - 10,8 %). Среди незаменимых аминокислот плодовых тел количественно преобладают лейцин (6,0 - 7,9 %), лизин (6,1 - 6,9 %), валин (6,4 - 8,5 %). Среди заменимых кислот основными являются глутаминовая и аспарагиновая кислоты, аргинин и аланин.

В составе летучих терпеноидов плодовых тел преобладают кислородсодержащие соединения, где наибольшую долю составляет борнилацетат (30,0 %). Среди монотерпеноидов преобладают а-пинен и (3-пинен (2,6 %). Во фракции сесквитерпеновых углеводородов наибольшее содержание приходится на кариофиллен (6,3 %), а-кариофиллен (5,2 %) и изокариофиллен (4,3 %).

Основную массу липидов составляют нейтральные вещества. Их количество с возрастом увеличивается от 62,3 до 79,6 % (от суммы липидов). Жирные кислоты липидов представлены соединениями ряда С9-С20, в которых содержание непредельных кислот составляет 90 %. Основными ненасыщенными кислотами являются линолевая и олеиновая, на их долю приходится от 83,7 до 84,9 % (от суммы кислот). Их содержание в процессе развития изменяется незначительно. Среди насыщенных кислот преобладают пальмитиновая (4,5 - 5,5 %) и стеариновая (2,7 - 3,8 %).

В составе стеринов идентифицировано пять соединений. Среди них количественно преобладают эргостерол и 9,19-циклоланост-25-ен-3-ол, 24-метил- (3(3.,24 S). Наибольшее количество эргостерола находится на второй год (32,0 %). Содержание 9,19-циклоланост-25-ен-3-ол, 24-метил- (Зр.,24 S) в трутовике разного возраста изменяется от 27,5 до 37,2 % (от суммы стеринов). В составе витаминов Е, К, Вь В2, В6, Р и С преобладают витамины Е (31,6 - 49,1 мг%), В2 (6,3 -11,8 мг%) и С (10,4 -16,2 мг%).

Экстракция диоксидом углерода выделяет биологически активные вещества в нативном состоянии, так как параметры технологического процесса придают ему свойства универсального растворителя практически всех классов биологически активных веществ, а именно летучих терпеноидов, токоферолов, каротиноидов, стеринов и ненасыщенных кислот. Следующая экстракция послеэкстракционоого остатка водой позволяет дополнительно извлечь такие водорастворимые вещества, как белки, углеводы, витамины Вь В2, Вб, Р и С. Проведение экстракции этиловым спиртом способствует выделению максимального количества липофильных компонентов, флавоноидов и агарициновой кислоты, витаминов Е и К. На основании проведенных исследований определен состав углекислотных, водных и спиртовых экстрактов трутовика лекарственного полученных при оптимальных условиях экстрагирования [110,111].

Исследована противотуберкулезная активность углекислотных, водных и спиртовых экстрактов трутовика лекарственного в отношении М. tuberculosis, выделенных от больных различными формами туберкулеза. Установлено, что углекислотные экстракты проявляют высокую активность ко всем испытанным микобактериям. Кроме того, они обладают бактерицидными {Bacillus subtilis, В. anthracis СТИ), бактериостатическими - (Micrococcus luteus) и бактериолитическими (Vibrio species) действиями в отношении условно-патогенных микроорганизмов [112,220].

Предложенная в работе комплексная переработка плодовых тел трутовика лекарственного предусматривает рациональное использование нового нетрадиционного сырья с получением дополнительных биологически активных продуктов [136]. Применение трехступенчатой экстракции с использованием растворителей разной диэлектрической постоянной, а также варьирование технологических параметров (давления, температуры, продолжительности, измельчения) сокращает потери сырья и повышает эффективность технологии. Технико-экономические расчеты (на 500 кг перерабатываемого в год сырья) показали экономическую целесообразность предлагаемого варианта комплексной переработки плодовых тел трутовика лекарственного. Рентабельность предприятия составила 38,03 %, срок окупаемости 2,6 лет.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ооржак, Урана Спартаковна, Красноярск

1. Антимонова, А.В. Биотехнологический способ получения биологически активной биомассы базидиальных грибов Ganoderma Lucidum / А.В. Антимонова // Биология наука XXI века: сб. тез. докл. конф. молодых ученых. - Пущино, 2003. - С. 85.

2. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР. М., 1980. -С. 261-262.

3. Алейникова, T.J1. Биохимия / Т.Д. Алейникова, J1.B. Авдеева. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004. - 779 с.

4. Бондарцев, А.С. Трутовые грибы Европейской части СССР и Кавказа / А.С. Бондарцев. Л.: Изд-во АН СССР. - 1953. - 102 с.

5. Бабицкая, В.Г. Грибы продуценты физиологически активных веществ на лигноцеллюлозе: биология и культивирование : автореф. дис. . докт. биол. наук: 03.00.16 / В.Г. Бабицкая. - Минск, 1991. -32 с.

6. Билай, В.И. Основы общей микологии / В.И. Билай. Киев : Высш. шк., 1987.-298 с.

7. Булынин, В.И. Новые методы и технологии производства пищевого и кормового белка / В.И. Булынин. М.: Знание, 1991. - 80 с.

8. Бородуля, Э.И. Биологические особенности окаймленного трутовика (Fomitopsis pinicola Fr.: Karst.) : автореф. дис. . докт. биол. наук: 03.00.16 / Э.И. Бородуля. Минск, 1972. - 24 с.

9. Бондарцева, М.А. Определитель грибов России / М.А. Бондарцева. -М., 1998.-420 с.

10. Бабицкая, В.Г. Физиологически активные соединения и биологические действия глубинного мицелия базидиомицета Ganoderma Lucidum (Kurt.: Fr.) P. Karst / В.Г. Бабицкая, C.B. Хлюстов, Л.В. Пленина. // Биотехнология. 2003. - № 4. - С. 35-44.

11. Бухало, А.С. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре / А.С. Бухало. Киев : Наук думка, 1988. - 144 с.

12. Белова, Н.В. О природе запаха базидиомицетов / Н.В. Белова // Производство высших съедобных грибов в СССР: сб. тез. докл. 2-го всесоюз. совещания. Чернигов, 1985. - С. 20-21.

13. Белова, Н.В. Базидиомицеты источники биологически активных веществ / Н.В. Белова // Растительные ресурсы. - 1991. - Вып. 2. -С. 8-17.

14. Беккер, З.Э. Физиология и биохимия грибов / З.Э. Беккер. М. : МГУ, 1988.-230 с.

15. Бабкин, В.А. Продукты глубокой химической переработки биомассы лиственницы. Технология получения и перспективы использования / В.А.Бабкин, JI.A. Остроухова, С.З. Иванова // Ж. Рос. хим. об-ва им. Д.И. Менделеева. 2004. - Т. XLVIII. - № 3. - С. 62-69.

16. Бухало, А.С., Соломко Е.Ф., Митропольская Н.Ю. // Укр. ботан. журнал. 1996. - Т. 53. - № 3. - С. 192-201.

17. Балакин, И.М. Экстракция жидким диоксидом углерода / И.М. Балакин, А.Н. Рощин, В.Т. Ильиных // Тр. Свердловского НИИ химического машиностроения. Свердловск, 1998. - 5. - С. 73-79.

18. Бриан, JI.E. Бактериальная резистентность и чувствительность к химиопрепаратам / JI.E. Бриан. М., 1984. - 272 с.

19. Биохимия / Под ред. В.Г. Щербакова. Изд. 2-е, перераб. и доп. - СПб.: ГИОРД, 2003. - 440 с.

20. Биологически активные вещества лиственничной губки / Ооржак У.С., Ушанова В.М. Красноярск: СибГТУ, 2004. - 6 с. - Деп. в ВИНИТИ 16.04.04, № 634-В2004.

21. Вахмистрова, Т.В. Влияние рН среды на рост дереворазрушающих грибов / Т.В. Вахмистрова // Превращения древесины при энзиматическом и микробиологическом воздействии. Рига : Зинатне, 1985.-С. 182-186.

22. Ганбаров, Х.Г. Эколого-физиологические особенности дереворазрушающих высших базидиальных грибов / Х.Г. Ганбаров. -Баку: ЭЛМ, 1990.- 197с.

23. Горленко, В.М. Все о грибах / В.М. Горленко, Л.В. Гарибова, Н.И. Сидорова. М.: Лесная пром-сть, 1986. - 276 с.

24. Головлева, Л.А. Микробная деградация лигнина / Л.А. Головлева, Х.Г. Ганбаров//Успехи микробиологии. 1982.-№ 17.-С. 136-158.

25. Горленко, М.И. Грибы СССР / М.И. Горленко, М.А. Бондарцева, Л.В. Гарибова. -М.: Мысль, 1980. С. 170-190.

26. Гарибова, Л.В. Грибы / Л.В. Гарибова. М.: ABF. - 1997. - 350 с.

27. Государственный доклад «О состоянии и охране окружающей среды Красноярского края в 2001 г.» // Главное управление природных ресурсов и охраны окружающей среды МПР России по Красноярскому краю. М.: НИА-Природа, РЭФИА, 2003. - 224 с.

28. Гаврилова, Н.Н. Липиды микроорганизмов для кормовых целей / Н.Н. Гаврилова. М.: ВНИИСЭНТИ, 1985. - 58 с.

29. Гвоздкова, Т.С. Влияние а-токоферола на рост и биосинтетическую активность гриба Laetiporus sulphures / Т.С. Гвоздкова // Микробиология и биотехнология на рубеже 21 столетия : материалы междунар. конф. Минск, 2000. - С. 107-108.

30. Горшина, Е.С. Технология получения биологически активной субстанции лекарственного гриба кориола опущенного / Е.С. Горшина // Биотехнология. 2003. - № 2. - С. 45-53.

31. Гаврилов, А.С. Адаптогенное действие препарата чаги / А.С. Гаврилов, А.А. Щеголев, Е.В. Гусельникова // Химико-фармацевтический журнал. -2003. -Т. 37.-№2.-43-46.

32. Горшина, Е.С. Глубинное культивирование базидиальных грибов рода Trametes Fr. с целью получения биологически активной массы : автореф. дис. . канд. биол. наук: 03.00.16 / Е.С. Горшина. М., 2003. -24 с:

33. Горшина, Е.С. Технология получения биологически активной субстанции лекарственного гриба кориола опущенного / Е.С. Горшина, М.М. Скворцова, В.В. Бирюков // Биотехнология. 2003. - № 2. -С. 45-53.

34. Гусакова, С.Д. Липофильные экстракты в фитотерапии и фитокосметике: получение и биологические свойства / С.Д. Гусакова, Ш.Ш. Сагдулаев, З.А. Хушбактова // Химия природных соединений.- 1998.-№4.-С. 437-448.

35. Горовой, Л.Ф. ХитинсодерЖащие материалы «Мйкотон», полученные из грибной биомассы / Л.Ф. Горовой // Новые перспективы в использовании хитина и хитозана : материалы всерос. конф. М., 1999. -С. 130-133.

36. Гуськова, Т.А. Оценка безопасности лекарственных средств на стадии доклинического изучения // Химико-фармацевтический журнал.- 1990.-№7.-С. 10-15.

37. Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. 11-е изд., доп. - М. : Медицина, 1989.-Вып. 2.-400 с.

38. Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - Вып. 1. - 336 с.

39. ГОСТ 24027.2-80. Сырье лекарственное растительное. Методы определения влажности, содержание золы, экстрактивных и дубильных веществ, эфирных масел. Лекарственное растительное сырье. М. : Изд-во стандартов, 1980. - С. 284-294.

40. Гавриленко, В. Ф. Большой практикум по физиологии растений. Фотосинтез. Дыхание: учеб. пособие / В. Ф. Гавриленко, М. Е. Ладыгина, Л. М. Хандобина. М.: Высш. шк., 1975. - 92 с.

41. Герег, Ш. Количественный анализ стероидов / Ш. Герег. М. : Мир, 1985.-С. 282-297.

42. ГОСТ 14618.12-78. Масла эфирные, вещества душистые и полупродукты их синтеза. Правила приемки, отбора проб и методы органолептических исследований. М : Изд-во стандартов, 1978.

43. Горяев, М. И. Методы исследования эфирных масел / М. И. Горяев, И. Плива. Алма-Ата : Изд-во АН Казахской ССР, 1962.

44. ГОСТ 21564-76. Лекарственное растительное сырье. Корни, плоды, сырье. -М.: Изд-во стандартов, 1995. С. 154-156.

45. Галатенко, О.А. Метод быстрого поиска актиномицетов-продуцентов антибиотиков, эффективных в отношении метициллинрезистентного штамма Staphylococcus aureus / О.А. Галатенко, Л.П. Терехова, Т.И. Булина // Биотехнология, 2004. № 4. - С. 17-23.

46. Денисова, Н.П. Протеолетические ферменты базидиальных грибов, таксономические и экологические аспекты их изучения : автореф. дис. .докт. биол. наук: 03.00.16/Н.П. Денисова.-Л., 1991.-31 с.

47. Дедюхина, Э.Г. Микроорганизмы как потенциальные продуценты незаменимых жирных кислот / Э.Г. Дедюхина, В.К. Ерошин // Науч. докл. высш. шк. биол. науки. 1984. - № 2. - С. 5-16.

48. Деев, С.В. Выделение убихинонов из биомассы гриба Blakeslea trispora / С.В.Деев, И.А. Буторова, П.Б. Авчиева // Биотехнология. -2003.-№5.-С. 36-46.

49. Деев, С.В. Способы получения вододиспергируемых антиоксидантов липидной природы на основе компонентов биомассы гриба Blakeslea trispora / С.В. Деев, М.И. Авчиев, И.А. Буторова // Биотехнология. 2004. - № 1. С. 58-69.

50. Дворина, А.А. Базидиальные съедобные грибы в искусственной культуре / А.А. Дворина. Киев : Штиинца, 1990. - 110 с.

51. Денисова, Н.П. Лечебные свойства грибов. Этномикологический очерк / Н.П. Денисова. СПб : СПб-МГУ, 1998. - 59 с.

52. Ершова, Е.Ю. Поиск продуцентов антибиотиков грибного происхождения, эффективных в отношении метициллинрезистентных стафилококков: автореф. дис. . канд. биол. наук: 03.00.16 / Е.Ю. Ершова. М, 2003. - 26 с.

53. Ермакова, А.Е. Методы биохимического исследования / А.Е. Ермакова, В.В. Арасимович, Н.П. Ярош; под ред. А.Е. Ермакова. Изд. 3-е, перераб. и доп. - Л.: Агропромиздат. - 1988. - 430 с.

54. Ефименко, О.М. Изучение кислотного состава трутового гриба Fomitopsis officinalis (Vill.) Dond. et Sing. / О.М. Ефименко,

55. JI.B. Агеенкова // Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. M-JI.: Наука, 1965. - С. 98-105.

56. Емельянова, Т.П. Витамины и минеральные вещества: полная энциклопедия / Т.П. Емельянова. СПб : ЗАО «Весь», 2000 - 368 с.

57. Ермаков, С.М. Математическая теория оптимизации эксперимента / С.М. Ермаков, А.А. Жиглявский. М.: Наука, 1987. - 320 с.

58. Жук, Ю.Т. Липиды некоторых съедобных грибов, произрастающих в Сибири / Ю.Т. Жук, И.Э. Цапалова, Е.Н. Степанова. // Растительные ресурсы. 1981.-Т. 17.-№ 1.-С. 109-114.

59. Заявка 2366726 Великобритания, МПК7 А 61 К 35/84. Pharmacologicalli active compounds extractable from the Cortinariaceae family of Crassulaceae family / S. Rasamny. -№ 00212878; заявл. 30.08.2000; опубл. 20.03.2002.

60. Заявка 2834450 Франция, МПК7 А 61 К 7/02. Composition contenant un copolymere silicone et un polymere d'amps, et ses utilizations notamment cosmetiques / P. Lennon; заявитель L'oreal SA. № 0200097; заявл. 04.01.2002; опубл. 11.07.2003.

61. Заявка 2358862 США, МПК7 С 07 С 403/00. Extracting carotenoids / М. Kagan, S. Braun; заявитель Fermenton Ltd (Incorporated in Israel). -№ 930194/7; заявл. 21.12.99; опубл. 08.08.01.

62. Ибрагимова, С.А. Культивирование гриба P. tigrinus ВКМ F-3616 D на соломе с целью получения кормового белка / С.А. Ибрагимова, Е.В. Лияськина // Биология наука XXI века : сб. тез. докл. конф. молодых ученых. - Пущино, 2003. - С. 103.

63. Кадималиев, Д.А.-О. Биотехнология нетоксичных композиционных материалов из отходов растительного сырья и микробиологической промышленности : автореф. дис. . докт. биол. наук: 03.00.16 / Д.А.-О. Кадималиев. Москва, 2003.-33 с.

64. Куулар, Х.Б. Экология и практическое значение дикорастущих растений Республики Тыва : автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.16 / Х.Б. Куулар. Красноярск, 2002. - 19 с.

65. Капич, А.Н. Дереворазрушающие базидиомицеты продуценты белка / А.Н. Капич, И.В. Стахеев, В.Г. Бабицкая. - Минск : БСЭ, 1984. - 69 с.

66. Капич, А.Н. Фосфолипиды дереворазрушающих базидиомицетов / А.Н. Капич, Л.Н. Шишкина // Микология и фитопатология. 1993. -Т. 27. - Вып. 3.- С. 32-37.

67. Капич, А.Н. Содержание и жирнокислотный состав липидов дереворазрушающих базидиомицетов / А.Н. Капич, Е.С. Романовен, С.П. Войт // Микология и фитопатология. 1990. - вып. 24. - № 1. -С. 51-56.

68. Калашникова, Е.А. Идентификация и количественное определение углеводов в лекарственном препарате «Бефунгин» / Е.А. Калашникова.- Пятигорск, 2003. 5 с. - Деп. в ВИНИТИ 07.08.2003, № 1536-В2003.

69. Квинн, П.Д. Соответствует ли распределение а-токоферола в мембранах его предполагаемым функциям / П.Д. Квинн // Биохимия.- 2004. Т. 69. - Вып. 1. - С. 74-84.

70. Кнорре, Д.Г. Биологическая химия / Д.Г. Кнорре, С.Д. Мызина. -М, 2002.-479 с.

71. Кьосев, П.А. Полный справочник лекарственных растений / П.А. Кьосев. М.: Эксмо, 2002. - 992 с.

72. Кузнецова, О.Ю. Способы получения водных вытяжек чаги / О.Ю.Кузнецова, М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова // Химия и технология растительных веществ : сб. материалов всерос. конф. Казань, 2002. -С. 131.

73. Кузнецова, О.Ю. Получение водных вытяжек с применением комплексонов / О.Ю. Кузнецова, М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова // Биология наука XXI века : тез. докл. 7 Пущинской конф. молодых ученых. - Пущино, 2003. - С. 111-112.

74. Куминова, А.В. Растительный покров и естественные кормовые угодья Тувинской АССР / А.В. Куминова, Ю.М. Маскаев. Новосибирск : Наука, 1985.-184 с.

75. Кейтс, М. Техника липидологии / М. Кейтс. М.: Мир, 1975. - 322 с.

76. Комов, В.П. Биохимия: учеб для вузов / В.П. Комов, В.Н. Шведова. -М.: Дрофа, 2004.-640 с. .

77. Клышев, JI.K. Флавоноиды растений / JI.K. Клышев, В.А. Бандюков, JI.C. Алюкина. Алма-Ата : Наука, 1978. - 218 с.

78. Любарский, Л.В. Дереворазрушающие грибы Дальнего Востока / Л.В. Любарский, Л.Н. Васильева. Новосибирск : Наука, 1975. -165 с.

79. Ловягина, Е.В. Характеристика дереворазрушающих грибов по содержанию в них стероидных соединений / Е.В. Ловягина,

80. A.Н. Шиврина // Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. М.: Наука, 1965. - С. 59-60.

81. Лобанок, А.Г. Состав и биологическая активность глубинного мицелия ксилотрофного базидиомицета Lentinus edodes / А.Г. Лобанок,

82. B.Г. Бабицкая, Л.В. Пленина // Прикладная биохимия и микробиология. -2003.-39, № 1.-С. 69-73.

83. Левин, Э.Д. О представительности проб при изучении химического состава древесины / Э.Д. Левин, Л.П. Рубчевская // Химия древесины. 1980,-№4.-С. 103-106.

84. Мухин, В.А. Экологические закономерности формирования и структуры биоты ксилотрофных базидиомицетов Западно-Сибирской равнины : автореф. дис. . докт. биол. наук: 03.00.16 / В.А. Мухин. -М., 1990.-32 с.

85. Мошкутело, И. Нетрадиционные корма в свиноводстве / И. Мошкутело // Комбикорма. 2003. - № 6. - С. 49-50.

86. Макаров, А.А. Лекарственные растения Якутии и перспективы их освоения / А.А. Макаров. Новосибирск : Изд-во СОР АН, 2002. -264 с.

87. Мамаев, Б.М. Стволовые вредители лесов Сибири и Дальнего Востока / Б.М. Мамаев. М.: Агропромиздат, 1985. - 208 с.

88. Минеджмян, Г.З. Сборник по народной медицине нетрадиционным способом лечения / Г.З. Минеджмян. М., 1994. - С. 323.

89. Мипро-вит // Мед. картотека МиРа. 1999. - 10. - С. 33.

90. Методы экспериментальной микологии / Под. ред. Билай В.И.- Киев: Наукова думка, 1973. 240 с.

91. Методы определения витаминов (химические и биологические) / Под ред. А. Девятнина. М.: Пищепромиздат, 1954. - 135 с.

92. Малый практикум по физиологии растений: учеб. пособие. 9-е изд., перераб. и доп. / Под ред. А. Т. Мокроносова. - М. : Изд-во МГУ, 1994. -184 с.

93. Методы биохимического анализа растений / Под ред. В. В. Полевого. -Л., 1978.-С. 90-100.

94. Негруцкий, С.Ф. Корневая губка / С.Ф. Негруцкий. М. : Агропромиздат, 1986. - 195 с.

95. Негруцкий, С.Ф. Физиология и биохимия низших растений / С.Ф. Негруцкий. Киев : Выща школа, 1990. - 191 с.

96. Николаев, А.Я. Биологическая химия / А .Я. Николаев. М., 2001. -496 с.

97. Ю2.Науменко, Н. К. Качественный эмиссионный спектральный анализ / Н.К. Науменко. Красноярск, 1976. - 104 с.

98. ЮЗ.Онучин, Н.П. Лесная энциклопедия / Н.П. Онучин, В.Г. Атрохин. М.: Советская энциклопедия, 1986. - 631 с.

99. Озолиня, Н.Р. Анатомические и химические изменения древесины березы, пораженной грибами белой гнили 7 Н.Р. Озолиня, В.Н. Сергеева, Ц.Л. Абрамович // Изв. АН Латв. ССР. 1987. - № 12. -С. 45-52.

100. Ооржак, У.С. Состав минеральных элементов трутовика лекарственного в процессе развития / У.С. Ооржак, В.М. Ушанова, С.М. Репях // Вестник СибГТУ. 2003. - № 1. - С. 76 - 78.

101. Ю9.0оржак, У.С. Белковые вещества и витамины гриба Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond, et Sing. / У.С. Ооржак, B.M. Ушанова // Хранение и переработка сельхозсырья. 2004. - № 11. - С. 52 - 53.

102. Ооржак, У.С. Исследование влияния технологических факторов на процесс извлечения экстрактивных веществ из лиственничной губки / У.С. Ооржак, В.М. Ушанова, С.М. Репях // Химия растительного сырья. 2003. - № 1. - С. 69 - 72.

103. Ооржак, У.С. Новое направление переработки плодовых тел Fomitopsis officinalis (Vill. Fr.) Bond, et Sing. / У.С. Ооржак // Грибы в природных и антропогенных экосистемах : тр. междунар. конф. Санкт-Петербург, 2005.-Т. 2.-57-60 с.

104. Попкова, К.В. Общая фитопатология / К.В. Попкова. М.: Агропромиздат, 1989. - 399 с.

105. Павлов, И.В., Канзай В.И. Распространенность стволовых гнилей в лиственничниках Тувы / И.В. Павлов, В.И. Канзай // Лиственница. Проблемы комплексной переработки. Красноярск, 1986. - С. 19-21.

106. Погорельская, А.Н. О биосинтезе компонентов эфирного масла грибом Eremothecium ashbyi (структурно-функциональные особенности) / А.Н. Погорельская, П.С. Бугорский, Е.Ф. Семенова // Вест. Рос. акад. с.-х. наук. 2003. - № 1. - С. 83-85.

107. Иб.Погабало, А.В. Гемопоэзический эффект каротин-токоферолового комплекса / А.В. Погабало / Человек и лекарство : сб. тез. докл. 4-го Рос. нац. конгр. Москва, 1997. - С. 284.

108. Пат. 4914 Белоруссия, МПК7 С 12 Р 23/00, С 12 Р1/02. Способ получения кетакаротиноидов / А.Н. Капич, Т.С. Гвоздкова, О.Н. Сорока; заявитель и патентообладатель ин-т микробиологии НАЛ Б. -№ 19980458;заявл. 12.05.98; опубл. 30.03.03. Бюл. № 23. 3 с.

109. Платонова, Е.Г. О содержании белка в плодовых телах дереворазрушающих грибов / Е.Г Платонова // Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. М.: Наука, 1965.-С. 55-58.

110. Пучкова, Т.А. Рост гриба шиитаке Lentinus edodes (Berk.) Sing. в глубинной культуре / Т.А. Пучкова, В.Г. Бабицкая, В.В. Щерба, З.А. Рожкова // Микробиология и биотехнология на рубеже 21 столетия: материалы междунар. конф. Минск, 2000. - С. 129-130.

111. Пучкова, Т.А. Рост гриба шиитаке Lentinus edodes (Berk.) Sing, в глубинной культуре / Т.А. Пучкова, В.Г. Бабицкая, В.В. Щерба // Микробиология и биотехнология на рубеже 21 столетия: материалы междунар. конф. Минск, 2000. - С. 129-130.

112. Пучкова, Т.А. Меланиновый комплекс гриба Lentinus edodes / Т.А. Пучкова // Микробиология и биотехнология на рубеже 21 столетия: материалы междунар. конф. Минск, 2000. - С. 128.

113. Пат. 6645502 США, МПК7 А 01 N 65/00, А 61 К 35/84. Revlon Consumer Products Corp. / I. Sandewicz, J. Russ, V. Zhu. № 09/953758; заявл. 17.09.2001; опубл. 11.11.2003; НПК 424/195.15.

114. Плешков, Б. П. Практикум по биохимии растений / Б.П. Плешков.- Изд.З-е; перераб. и доп. М.: Агропромиздат, 1985. - 225 с.

115. Пономарев, В.Д. Экстрагирование лекарственного сырья / В.Д. Пономарев. М.: Медицина. - 1976. - 204 с.

116. Поверин, Д.И. Технология промышленной переработки лекарственного растительного сырья / Д.И. Поверин, А.Д. Поверин. -М. :МСХА, 2001.-208 с.

117. Ш.Прозин, М.Н. Ботаническая микротехника / М.Н. Прозин. М. : Высш. школа, I960. - 185 с.

118. Пищевая химия / Под ред. А.П. Нечаева. Изд. 2-е, перераб. и испр.- СПб.: ГИОРД, 2003. 640 с.

119. Пен, Р.З. Планирование эксперимента в Statgrafics / Р.З. Пен.- Красноярск : СибГТУ, 2003. 246 с.

120. Пучкова, Т.А. Характеристика биологически активных веществ гриба Pleurotus ostreatus / Т.А. Пучкова, В.Г. Бабицкая, В.В. Щерба и др. // Грибы в природных и антропогенных экосистемах : тр. между нар. конф. СПб, 2005. - Т. 2. - С. 125-130.

121. Рубин, Л.Б. Свет и развитие низших организмов / Л.Б. Рубин. М. : Знание, 1975. - 38 с.

122. Рипачек, В. Биология дереворазрушающих грибов / В. Рипачек. М. : Лесн. пром-сть, 1978. - 368 с.

123. Рабинович, М.Л. Теоретические основы биотехнологии древесных композитов. Древесина и разрушающие ее грибы / М.Л Рабинович, А.В. Болобова, В.И. Кондращенко. М.: Наука, 2001. -264 с.

124. Рыжова, Г.Л. Химические и фармакологические свойства сухого экстракта чаги / Г.Л. Рыжова, С.С. Кравцова, С.А. Матасова // Химико-фармацевтический журнал. 1994. - С. 44-47.

125. Рязанова, Т. В. Химия древесины: учеб. пособие для студентов спец-стей 26.03.03, 26.03.04 всех форм обучения / Т. В. Рязанова, Н. А. Чупрова, Е. В. Исаева. Красноярск : КГТА, 1996. - 358 с

126. Рубчевская, Л.П. Биологически активные вещества углекислотныхfэкстрактов и пропан-бутановых экстрактов древесной зелени

127. Л.П. Рубчевская, В.М. Ушанова, Л.Н. Журавлева // Ж. Рос. хим. об-ва им. Д.И. Менделеева. 2004. - Т. XLVIII. - № 3. - С. 80-83.

128. Репях, С. М. Закономерности изменения состава и комплексная технология древесной зелени хвойных : дис. . докт. хим. наук: 05.21.03 и 05.21.04/С.М. Репях. Красноярск, 1984.-477 с.

129. Решедько, Г.К. Особенности определения чувствительности микроорганизмов дискодиффузным методом / Г.К. Решедько, О.У. Стецюк // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2001. - Т. 3. - № 4. - С. 348-354.

130. Решетникова, И. А. Деструкция лигнина ксилотрофными макромицетами / И.А. Решетникова. М.: Наука, 1997. - 197 с.

131. Репях, С.М. Химия и техническая переработка древесной зелени / С.М. Репях, Л.П. Рубчевская. Красноярск, 1994. - 320 с.

132. Стороженко, В.Г. Структура грибных дереворазрушающих биотрофных сообществ коренных лесов тайги Русской равнины / В.Г. Стороженко // Структурно-функциональная организация и динамика лесов : материалы всерос. конф. Красноярск. - 2004. -С. 203-206.

133. Степанова, Н.Т. Основы экологии дереворазрушающих грибов / Н.Т. Степанова, В.А. Мухин. -М.: Наука, 1979. 100 с.

134. Стороженко, В.Г. Научные основы устойчивости лесов к дереворазрушающим грибам / В.Г. Стороженко, М.А. Бондарцева, В.А.Соловьев. М.: Наука, 1992. - 222 с.

135. Соловьев, В.А. Изменение химического состава древесины под действием лигнинразрушающих грибов / В.А. Соловьев, О.Н. Малышева, И.Л. Малева // Химия древесины. 1985. - № 6. - С. 94-100.

136. Семенкова, И.Г. Лесная фитопатология / И.Г. Семенкова. М. : МГУЛ, 2001.-200 с.

137. Семенкова, И.Г. Фитопатология. Дереворазрушающие грибы, гнили и патологические окраски древесины (определительные таблицы) / И.Г. Семенкова. М.: МГУЛ, 2002. - 58 с.

138. Сидорова, И.И. Антибиотическая активность водных экстрактов базидиом некоторых доминантных видов агарикоидных базидиомицетов / И.И. Сидорова, Л.Л. Великанов // Микология и фитопатология. 2002. - Т. 3. - № 34. - С. 11-18.

139. Скворцова, М.М. Биологически активные добавки на основе биомассы высшего гриба Fusarium sambucinum / М.М. Скворцова, Е.С. Горшина, Д.П. Качалай // Успехи медицинской микологии : материалы всерос. конф. Москва, 2004. - С. 250-253.

140. СанПиН 2.3.2.1293-03 Санитарно-эпидемиологические правила и нормы. Гигиенические требования по применению пищевых добавок.- М.: Минздрав России, 2003. 150 с.

141. Семенов, А.А. Очерк химии природных соединений / А.А. Семенов.- Новосибирск : Наука, 2000. 664 с.

142. Смирнов, Д.А. Углеводный состав глубинного мицелия Ganoderma lucidum / Д.А. Смирнов, В.В. Щерба // Грибы в природных и антропогенных экосистемах : тр. междунар. конф. СПб, 2005. - Т. 2. -С. 201-205.

143. Телятьев, В.В. Целебные клады: растения, продукты животного и минерального происхождения Центральной Сибири и их лечебные свойства / В.В. Телятьев. Иркутск : Вост.-Сибир. книж. изд-во, 1991. -400 с.

144. Терек, Т. Эмиссионный спектральный анализ / Т. Терек, И. Мика, Э. Гегуш. М.: Мир, 1982. - 464 с.

145. Тарабанько, В.Е. Каталитические методы получения ароматических альдегидов из лигнинсодержащего сырья / В.Е. Тарабанько, Н.В. Коропачинская // Химия растительного сырья. 2003. - № 1. -С. 5-25.

146. Усачева, Р.В. Физиолого-биохимическая характеристика четырех штаммов Lentinus edodes / Р.В. Усачева, О.А. Евдокимова // Успехи медицинской микологии : материалы всерос. конф. Москва, 2004. -С. 275- 277.

147. Ушанова, В.М. Основы научных исследований. Исследование химического состава растительного сырья: учеб. пособие. / В.М. Ушанова, О.И. Лебедева, А.Н. Девятловская. Красноярск : СибГТУ, 2004.-360 с.

148. Феофилова, Е.П. Каротиноиды грибов: биологические функции и практическое использование / Е.П. Феофилова // Прикладная биохимия и микробиология. 1994. - Т. 30. - вып. 2. - С. 181-195.

149. Феденко, B.C. Влияние накопления b-каротина на спектральные параметры биомассы микроскопического гриба Blakeslea trispora / B.C. Феденко, С.В. Кияк, B.C. Стружко // Укр. биохим. журнал. -2002.-74, №4.-С. 125-128.

150. Феофилова, Е.П. Регуляция синтеза ликопина у мукорового гриба Blakeslea trispora производными пиридина / Е.П. Феофилова, В.М. Терешина, А.С. Меморская // Микробиология. 1995. - Т. 64.- № 6. С. 734-740.

151. Федорова, Л.Н. Содержание витаминов В| и Вг в плодовых телах высших грибов / Л.Н. Федорова // Высшие грибы и их физиологически активные соединения. Л.: Наука, 1973. - С. 25-27.

152. Филиппова, И.А. Естественное лекарство нового тысячелетия: грибы против рака / И.А. Филиппова. СПб.: Диля, 2005. - 128 с.

153. Фенгел, Д. Древесина (химия, ультраструктура, реакции) / Д. Фенгел, Г. Вегенер; под ред. А.А. Леоновича М. : Лесная пром-сть, 1988. -512с.

154. Фостер, Д. Химическая деятельность грибов / Д. Фостер. М. : Изд-во иностр. литературы, 1950. - С. 232-247.

155. Цирюлик, А.В. Лесная фитопатология / А.В. Цирюлик, С.В. Шевченко. -Киев, 1983.- 114 с.

156. Цапалова, И.Э. Дикорастущие съедобные грибы как источник белковых веществ / И.Э. Цапалова, В.И. Бакайтис // Известия вузов пищевой технологии. 2004. - № 1. - С. 64-65.

157. Чага и ее лечебное применение / М.П. Березиной, П.А. Якимовой; под ред. П.К. Булатова. Л.: Медгиз, 1959. - 33 с.

158. Черняева, Г.Н. Фенолкарбоновые кислоты и мономерные флаваны коры Larix Sibirica Ledeb. / Г.Н. Черняева, Г.В. Пермякова // Растительные ресурсы. 2000. - Вып. 3. - 47-51.

159. Чуешов, В.И. Промышленная технология лекарств / В.И. Чуешов, А.И. Зайцев, С.Т. Шебанова. Харков : МТК-Книга, 2002. - 560 с.

160. Шиврина, А.Н. Биологически активные вещества высших грибов / А.Н. Шиврина. -М.: Наука, 1985. 198 с.

161. Шабрукова, Н.В. Строение и физико-химические свойства хитин-глюканового комплекса мицелиального гриба Aspergillus niger / Н. В. Шабрукова, Л. М. Шестакова, Ф. Г. Халитов, В. С. Гамаюрова // Вопр. биол., мед. и фармац. химии. -2004. -№ 3. С. 37-42.

162. Шалабодов, А.Д. Химико-биологическое исследование препаратов чистотела большого и чаги / А.Д. Шалабодов, Л.Ю. Клышина,

163. М.Ю. Лежнева // Тр. Респ. науч. практ. конф., посвящ. 60-летию изв. ученого М.Н. Мухаметжанова. Караганда, 2000. - С. 183-184.

164. Шиврина, А.Н. Биосинтетическая деятельность высших грибов / А.Н. Шиврина, О.П. Низковская, М.Н. Фалина. Л. : Наука, 1969. -150 с.

165. Шанина, Е. В. Комплексная переработка биомассы Rosa acicularis Lindl. : автореф. дис. . канд. техн. наук: 05.21.03 / Е.В. Шанина.- Красноярск, 2004. 18 с.

166. Яковлева, Т.П. Растения для нас. Справочное издание / Г.П. Яковлева, К.Ф. Блинова. СПб.: Учебная книга, 1996. - С. 68-85.

167. Яковлев, В.П. Перспективы создания и внедрения новых антимикробных препаратов / В.П. Яковлев, С.В. Яковлев // Инфекция и антимикробная терапия. 2002. - Т. 4. - № 2. - С. 1-5.

168. Anke, Т. Antibiotika aus Basidiomycetes / Т. Anke 7/ Zeitschr. Mycologie.- 1978.-Bd. 44.-H. l.-S. 129-139.

169. Ayer, W.A. Terpenoid metabolites of mushrooms and related basidiomycetes / W.A. Ayer, L. M. Brown // Tetrahedron. 1981.- Vol. 37. № 12. - P. 2199-2248.

170. Anke, T. New antibiotics from the basidiomycete Marasmius alliaceus / T. Anke, W. Watson, B. Giankeibi // Plant med. 1980. - Vol. 39. - № 3. -P. 194-197.

171. Chlebicki, A. Fomitopsis officinalis (Villars: Fries) Bondartsev & Singer in Wojewoda. Atlas of geographical distribution of fungi in Poland / A. Chlebici, J. Lusszczynski. Krakow, 2002. - P. 61-67.

172. Chlebicki, A. Fomitopsis officinalis on Siberian Larch in the Urals / A. Chlebicki, V. Mukhin, N. Ushakova // Mycologist. Cambridge, 2003. -17,3.-P. 116-120.

173. Cerda-Olmedo, E.F. Biotechnology of vitamins, pigments and growth factors chap. / E.F. Cerda-Olmedo // Elsevier Appl. Sci., 1989. P. 27-42.

174. Christie, W.W. Gas chromatography and lipids. A practical quide / W.W. Christie. Scotland: The Oily Press, 1989. - 230 p.

175. Dorado, J. Elimination and detoxification of softwood extractives by white-rot fungi / J. Dorado, F.W. Classen, Т.А. Beek // J. Biotechnol. 2000. -Vol. 80.-№3.-P. 231-240.

176. Diaz, P. Truffe aroma characterization by headspace solid-phase microexrtaction / P. Diaz, E. Ibanez, F. Senorans // J. Chromatogr. A. -2003.- 1017.-№ 1-2.-P. 207-214.

177. Enoki, M. A novel fluorescent dicarboxylic acid produced by white-rot fungus Ceriporiopsis subvermispora / M. Enoki, T. Watanabe, Y. Honda // Chem. Lett. 2000. - № 1. - P. 54-55.

178. Gilbertson, R. North American Polypores. Fungiflora / R. Gilbertson., L.Ryvarden.-Oslo, 1986.

179. Gill, M. Pigments of fungi: Progress in the chemistry of organic natural products / M. Gill, W. Steglich. 1987. - Vol. 51.

180. Goodwin, T. Plant pigments / T. Goodwin, G. Britton. London San Diego Acad. Press, Harcourt Brace Iovanovich Publ., 1988. - 362 p.

181. Gladyshev, V.I. Gut content analysis of Gammarus lacustris from Siberian lake using biochemical and biophysical methods. Hydrobiologia / V.I. Gladyshev, A.Y. Emelinova, G.S. Kalachova, T.A. Zotina, M.D. Zhilenkov. 2000. - P. 155-163.

182. Homoopathisches Arzneimittelverzeichnis. Remedia homoepathica. Ausgabe Deutsche Homoopathie. - Union, 1991. - 68 S.

183. Kim, B.K. Constituents of the higer fungi of Korea. 12. Antineoplastic component of Coriolus versicolor, Pleurotus ostreatus and Lentinus edodes / B.K. Kim, E.K. Park // J. Nat. Prod. 1979. - 42, № 6. - P. 684-690.

184. Luszczynski, J. Fomitopsis officinalis (Coriolaceae) in Poland / J. Luszczynski // Fragmenta Floristica Geobotanica Polonica. 2000. - 7. -P. 271-276.

185. Moore, W. Diagrammes de synthese des principaux types de degradation de la paroi cellulaire par les champignions lignivores / W. Moore // Abres et sciences.-2000.-P. 33-42.

186. McAfee, B. Some aspects of the ecology and physiology of fungi isolated predominantly from the wood of trees of the northern temperate forest / B. McAfee, A. Taylor. // Procedings of the Nova Scotian Institute of Science.-2001.-41.-P. 160-213.

187. Mukhin, V. Rare species of wood-decaying Fungi from the West Siberian Plain. Fungi of Europe, Investigation. Recording and Conservation. / V. Mukhin. // Royal Botanic Gardens, Kew. 1993. - P. 139-145.

188. Ma, J. New lanostanoids from the mushroom Ganoderma lucidum / J. Ma, Q. Ye, D. Zhang // J. Natur. Prod. 2002. - 65, № 1. - P. 72-75.

189. Min, H.K. Studied on the constituents of the higer fungi of Korea. Components of Russula pseudodelica and Microporus affinis / H.K. Min, E.Ch. Choi, B.K. Kim // Korean J. Mycol. 1980. - Vol. 8. - № 1. -P. 13-20.

190. Mitsuhashi, H. Medicinal plants of the Ainu / H. Mitsuhashi // Econ. Bot. 1976. - V. 30. -№ 3. P. 209-217.

191. Mizuno, T. Bioactive substances in Yamabushitake, the Hericium erinaceum fungus and its medicinal utilization / T. Mizuno. // Foods and Food Ingredients Journal of Japan. 1998. - 175. - P. 105-114.

192. Pegler, D. British toxic fungi / D. Pegler, R. Watling // Dull. Brit. Mycol. Soc.-1982.-Vol. 16.-№ l.-P. 66-78.

193. Rosecke, J. Volatile constituents of wood-rotting basidiomycetes / J. Rosecke, M. Pietsch, W. Konig // Phytochemistry: The International Journal of Plant Biochemistry. 2000. - 54. -№ 8. - P. 747-750.

194. Rasser, F. Terpenoids from Bovista sp. / F. Rasser, Т. Anke, O. Sterner // Tetrahedron.-2002. 58. - № 39. - P. 7785-7789.

195. Rosecke, J. Constituents of the fungi Daedalea quercina and Daedaleopsis confragosa var. Tricolor / J. Rosecke, W. Konig // Phytochemistry: The1.ternational Journal of Plant Biochemistry. 2000. - 54. № 8. -P. 757-762.

196. Rashad, M. Production and evaluation of Pleurotus ostreatus mushroom cultivated on some food processing wastes / M. Rashad, H. Abdou // Adv. Food Sci. 2002. - 24, № 2. - P. 79-84.

197. Sprecher, E. Volatile metabolits from microorganisms / E. Sprecher // Vorkommen und Analitik atherischer Qle. Stuttgart. 1979. - P. 11-33.

198. Schindler, J. Fragrance or • aroma chemicals microbial . syntensis and enzymatic transformation / J. Schindler, R. Schmid // Process Biochem.- 1982.-Vol. 17.-№5.-P. 2-8.

199. Steglich, W. Biologically active compounds from higher fungi / W. Steglich //Pure Appl. Chem. 1981. - Vol. 53.- P. 15-28.

200. Solberg, Y. A literature of lipid constituents of higer fungi: New investigations of Agaricales species / Y. Solberg // Int. Mycol. Lichen.- 1989. Vol. 4. - № 1-2. - P. 137-155.

201. Song, C., Cho K. //Mycoiogia. 1989. - V. 81. -№ 4. - P. 514-522.

202. Su, G-H. Development of fungal mycelia" as skin substances Effects on Wound healing and fibroblast / G-H. Su, C. Sun, S. Juan // Biomaterials.- 1999.-20,1.-P. 61-68.

203. Spitzer, V. Structure analysis of fatty acids by gas chromatography-low resolution electron impact mass spectrometry of their 4,4-dimethyloxazoline derivatives, a review. Progr. Lip. Res. / V. Spitzer. 1997. - 35.- P. 387-408.

204. Valentin, I. Undersuchungen uber Inhaltsoffe des Larchenschwammes / I. Valentin, S. Knutter // Pharm. Zentralhalle. - 1957. - 86, № 8-9. -478-484 p.

205. Van den Heuvel, W. Modern Methods of Steroid Analysis / W. Van den Heuvel, J. Smith, G. Albers-Schonberg. New York, London, 1973. -P. 199-219.

206. Weete, J. D. Lipid biochemistry of fungi and other organisms / J. D. Weete.- New York; London: Plenum Press, 1980. 388 p.

207. Willard, T. Reishi mushroom herb of spiritual potency and medical wonder / T. Willard. Seattle : Sylval Press, 1990. - 167 p.

208. Wang В., Chiu S., Huang R. et al. // Int. J. Med. Mushrooms. 2001.- V. 3. № 2-3. - P. 245.

209. Yaoita, Y. Sterol constituents from five edible mushrooms / Y. Yaoita, K. Amemiya, H. Ohnuma // Chem. and Pharm. Bull. 1998. - 46, № 6. -P. 944-950.

210. Yaoita, Y. Sterol constituents from seven mushrooms / Y. Yaoita, M. Endo, Y. Tani // Chem. and Pharm. Bull. 1999. - 47, № 6. - P. 847-851.

211. Zhao, W. Zhengzhou daxue xuebao / W. Zhao // J. Zhengzhou Univ. Tng. Sci. 2003. - 24. - № 1.-P. 38-46.

212. Zhao, D. Beijing ligong daxue xuebao / D. Zhao, L. Wang, X. Yang, H. Zhu // J. Beijing Inst. Technol. 1999. - 19, 6. - P. 782-786.

213. Zaretskii, V. Mass Spectrometry of Steroids / V. Zaretskii. Wiley, New York, Toronto, 1976. - 250 p.