Биологические особенности и биохимический состав ксилотрофных базидиомицетов Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond. et Sing., Ganoderma applanatum (Pers.) Pat. и Trametes versicolor (L.: Fr.) Pilat

Ковалева, Гульмира Кажгалиевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биологические особенности и биохимический состав ксилотрофных базидиомицетов Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond. et Sing., Ganoderma applanatum (Pers.) Pat. и Trametes versicolor (L.: Fr.) Pilat
ВАК РФ 03.00.24, Микология

Автореферат диссертации по теме "Биологические особенности и биохимический состав ксилотрофных базидиомицетов Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond. et Sing., Ganoderma applanatum (Pers.) Pat. и Trametes versicolor (L.: Fr.) Pilat"

На правах рукописи

jgcJ

КОВАЛЕВА Гульмира Кажгалневна

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ II БИОХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ КСИЛОТРОФНЫХ БАЗИДИОМОЦЕТОВ FOMITOPSIS OFFICINALIS (VILL.: FR.) BOND. ЕТ SING., GANODERMA APPLANATUM (PERS.) PAT. II TRAMETES VERSICOLOR (L.:FR.) PILAT

Специальность 03.00.24 - микология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2009

003465577

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Сибирский государственный технологический университет» на кафедре химической технологии древесины и биотехнологии

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор

Громовых Татьяна Ильинична

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор кандидат биологических наук

Гарибова Лидия Васильевна Горшина Елена Сергеевна

Ведущая организация:

Институт леса им. В.Н. Сукачева СО РАН, Красноярск

Защита состоится « 10 » апреля 2009 г. в 15 час. 30 мин. на заседании диссертационного совета Д 501.001.46 при Московском государственном университете им. М.В. Ломоносова по адресу: 119991, г. Москва, Ленинские горы, МГУ им. М.В. Ломоносова, Биологический факультет, ауд. М-1; тел./факс (495) 93939-70.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова.

Автореферат разослан «_£_» 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук

М.А. Гусаковская

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одним из приоритетных направлений развития современных микологии и биотехнологии является разработка технологий с использованием базидиальных грибов для получения биологически активных соединений. Благодаря исследованиям последних десятилетий, стало известно, что базидиальные грибы являются продуцентами целого ряда биологически активных веществ: белков, липи-дов, полисахаридов, органических кислот, ферментов, витаминов и др. Многие из этих соединений являются фармакологически активными и, по сравнению с продуктами химического синтеза, менее токсичны и более эффективны при применении в медицинской практике. Большинство работ по поиску и выделению биологически активных веществ базидиомицетов проведены с использованием плодовых тел (Беккер, 1988; Белова, 2004; Гарибова, 2003; 2005; 2008; Феофилова, 2002; Шиврина и др., 1969; Reshetnicov et.al., 2001; Sliva, 2006). Известно, что биологически активные вещества высших грибов содержатся не только в базидиомах, но и в вегетативном мицелии гриба, получаемом путем жидкофазного и твердофазного культивирования (Автономова и др., 2006, Краснопольская и др., 200; Сидоренко, 2007). Важным преимуществом получения биомассы мицелия с помощью биотехнологических методов являются экологическая чистота получаемых препаратов, возможность создания производства и доступность сырьевых ресурсов.

Несмотря на то, что общий объем публикаций, посвященный базидиомицетам, чрезвычайно велик, мало работ по исследованию биологической активности плодовых тел в сравнении с биологической активностью вегетативного мицелия. Кроме того, немногочисленны сведения о химическом составе и бактерицидных свойствах плодовых тел и мицелия многих дереворазрушающих грибов, в том числе представителей из родов Fomilopsis, Ganoderma и Trametes.

Поиск и выделение новых штаммов, выделенных в Сибири и других восточных регионах, открывает перспективы пополнения коллекций и дает возможность их использования в биотехнологии.

Цели и задачи исследования. Цель работы - изучение биологических особенностей и биохимического состава мицелия и плодовых тел ксилотрофных базидиомицетов Fomitopsis officinalis, Ganoderma applanatum и Trametes versicolor и разработка условий культивирования мицелия. В связи с целью были поставлены следующие задачи:

- создание коллекции культур ксилотрофных базидиомицетов и проведение скрининга штаммов;

- определение диапазона изменчивости штаммов F. officinalis, G. applanatum и Т. versicolor по морфолого-культуральным признакам и показателям роста при различных условиях культивирования;

- проведение сравнительной оценки биохимического состава вегетативного мицелия и плодовых тел базидиомицетов;

- изучение динамики накопления биомассы мицелия при поверхностном жид-кофазном культивировании;

- изучение токсичности и зоопатогенности в отношении теплокровных животных;

- изучение антимикробной активности метаболитов и экстрактов из мицелия и плодовых тел в отношении условно-патогенных микроорганизмов;

- изучение противоопухолевой активности экстрактов мицелия и плодовых тел изучаемых штаммов;

- изучение возможности использования растительных отходов сельскохозяйственного и лесоперерабатывающего производства для выращивания мицелия штаммов.

Научная новизна.

1) Впервые проведен сравнительный анализ биохимического состава мицелия штаммов, выделенных из плодовых тел базидиомицетов Средней Сибири и Республика Тыва. Показано, что мицелий базидиомицетов Fomitopsis officinalis, Ganoderma applanatum и Trametes versicolor может быть использован для получения биологически активных соединений. В мицелии Fomitopsis officinalis идентифицировано биологически активное соединение агарициновая кислота.

2) Проведена оценка продуктивности штаммов Fomitopsis officinalis, Ganoderma applanatum и Trametes versicolor и показана возможность твердофазного культивирования изучаемых штаммов базидиомицетов на отходах лесоперерабатывающих и гидролизных производств.

3) Изучена антимикробная и противоопухолевая активность экстрактов плодовых тел и мицелия отобранных штаммов базидиомицетов в отношении клеток асцит-ной карциномы Эрлиха.

Практическая значимость работы. Создана коллекция штаммов базидиаль-ных грибов Fomitopsis officinalis, Ganoderma applanatum и Trametes versicolor, которая может быть использована в работе по скринингу продуцентов для биотехнологических производств, перспективные штаммы Fomitopsis officinalis штамм Tyv-2006 и Ganoderma applanatum штамм G.a.-04 депонированы в ВКПМ. Разработаны оптимальные условия и среды для жидкофазного и твердофазного культивирования мицелия базидиомицетов. Полученные данные можно использовать для разработки лабораторных регламентов культивирования мицелия перспективных штаммов Fomitopsis officinalis, Ganoderma applanatum и Trametes versicolor.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы доложены на Международной школе-конференции «Генетика и селекция микроорганизмов (Москва-Пущино, 2006); II Международной научно-технической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы технологии живых систем» (Владивосток, 2007); IV съезде биотехнологов России (Пущино, 2006); Всероссийской конференции аспирантов и студентов по приоритетному направлению «Рациональное природопользование» (Ярославль, 2006г.); Всероссийской научно-практической конференции «Лесной и химический комплекс. Проблемы и решения» (Красноярск, 2006, 2008); городской научно-практической конференции «Развитие инновационной деятельности в промышленном комплексе города Красноярска», (Красноярск, 2007 г.); семинаре кафедры микологии и альгологии МГУ (Москва, 2008); семинаре кафедры химия пищи и биотехнологии Московского государственного университета прикладной биотехнологии (Москва, 2008); семинаре проблемной лаборатории Сибирского государственного технологического университета (Красноярск, 2008); Всероссийской конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции», Пятигорск, 2009. Диссертация апробирована на заседании кафедры микологии и альгологии биологического факультета МГУ 3 сентября 2008 г.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Список литературы включает 247 работ, в т.ч. 89 на иностранных языках. Общий объем диссертации 171 страница (ос-

новнон текст - 160 страниц, приложение 11 страниц). Диссертация включает 28 рисунков и 26 таблиц.

Публикации. Материалы диссертации изложены в 11 публикациях (из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК). Экспериментальные данные, представленные в диссертации, получены лично соискателем и опубликованы в соавторстве с руководителями и сотрудниками, работавшими совместно с автором в процессе выполнения исследований.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность проблемы, сформулированы цели и задачи исследований, показана научная новизна и практическая ценность результатов работы.

В первой главе представлен анализ и обобщение литературы по экологическим группам и географическому распространению ксилотрофных базидиомицетов Fomitopsis officinalis, Ganoderma applanation и Trametes versicolor, а также даны современные сведения об их систематическом положении в царстве Fungi. Проведен литературный анализ по условиям культивирования базидиомицетов, описаны преимущества и недостатки твердофазного и жидкофазного культивирования с целью массового получения биологически активного вегетативного мицелия. Представлен обзор публикаций, посвященный мировому опыту практического использования афиллофоровых базидиомицетов, как продуцентов биологически активных веществ.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

При выполнении работы объектами исследования служили базидиомицетовые грибы: трутовик лекарственный (лиственничная губка) - Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond, et Sing., плоский трутовик - Ganoderma applanatum (Pers.) Pat. и трутовик разноцветный - Trametes versicolor (L.:Fr.) Pilat. Для выделения изолятов Fomitopsis officinalis и Trametes versicolor проводили сбор плодовых тел из пораженной древесины в лиственничных лесах Республики Тыва. Изоляты G. applanatum выделяли из плодовых тел, собранных в различных лесорастительных зонах Красноярского края. Выделение грибных штаммов в культуру проводили двумя методами: споровым и тканевым. Споры суспендировали в стерильной воде и высевали в чашки Петри на сусловый агар с добавлением молочной кислоты (4%), сусловый агар с добавлением 1 и 3% лиственничных опилок и картофельно-декстрозный агар. После 1-3 суток культивирования наблюдали с помощью микроскопа при увеличении в 100 раз проросшие споры и формирование микроколоний. Через 5-7 суток отдельные грибные колонии образовавшиеся, как правило, из нескольких проросших спор, отсевали в пробирки со скошенным сусловым агаром.

Тканевым методом выделение культур проводили из фрагмента гименофора плодового тела или тяжа мицелия из поражённой древесины, которые помещали в центр чашки Петри на поверхность агаризованной среды - сусловый агар с добавлением молочной кислоты (4%), сусловый агар с добавлением 1 и 3% лиственничных опилок и картофельно-декстрозный агар; через 3-7 суток роста мицелий отсевали в пробирки.

Очистку грибных культур от сопутствующей бактериальной микрофлоры проводили путем посева мицелиальной культуры на агаризованные питательные среды с

добавлением 4% молочной кислоты. После чего проводили микрокопирование для оценки возможного роста бактерий.

Культурально-морфологические признаки исследуемых штаммов изучали на различных агаризованных питательных средах (сусловый агар, сусловый агар с добавлением 1 и 3 % лиственничных опилок, картофельно-декстрозный агар и грибной агар). Учет результатов проводили в течение всего срока наблюдения по следующим показателям: диаметр разрастания колоний, текстура и форма колоний, пигментация мицелия, плотность и высота воздушного мицелия, суточная линейная скорость роста, ростовой коэффициент. Отбор продуктивных штаммов проводили по показателям ростового коэффициента на исследуемых питательных средах.

Изучение микроморфологических признаков штаммов проводили в камерах Ван-Тигема с использованием световой микроскопии при помощи светового микроскопа марки LW Scientific (США). Определяли наличие долипоровой септы в клеточной перегородке. Микроморфологию ядер изучали с использованием люминисцент-ной микроскопии, для чего 7, 14 и 21-суточный мицелий фиксировали на покровном стекле в модифицированном растворе Карнуа с последующим окрашиванием реактивом ДАПИ (4',6-диамидино-2-фенилиндол, SIGMA) в концентрации 500 нг/мл (Ota et al., 1998); в работе использовали микроскоп Axioskop 40 FL, фильтр 02 (Zeiss).

Для изучения микроморфологии бластоконидий использовали сканирующую электронную микроскопию. Агаровые блоки с наросшим 7, 14 и 21-суточным мицелием фиксировали в парах осмия. После высушивания образцы закрепляли, напыляли смесь платины и палладия (IB-3 Ion Coater) и просматривали с помощью сканирующего электронного микроскопа «Hitachi» S-405A лаборатории электронной микроскопии МГУ им. М.В. Ломоносова, за что автор выражает благодарность доктору биологических наук кафедры микологии и альгологии МГУ им. М.В. Ломоносова О.В. Камзолкиной.

Видовую принадлежность определяли на основании морфологических признаков плодовых тел, описывавшихся при сборе грибов, спор и морфолого-культуральных признаков (тип колоний, характер роста, цвет мицелия, запах, наличие экзопигмента). Результаты всех исследований были сопоставлены с данными определителей (Stalpers, 1978; Бондарцева, 1998).

Рост мицелия штаммов изучали при различных значениях температуры (20,0, 25.0,30.0, 35.0 и 40 °С) и рН (от 3.5 до 7.5) и определяли оптимальные параметры для каждого штамма Изучение динамики накопления биомассы штаммами базидиомице-тов проводили путем поверхностного жидкофазного культивирования на пивном не-охмеленном сусле (4°Б) при температуре 25±1 "С. Накопление биомассы оценивали весовым методом на 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 и 40-е сутки культивирования. Для гриба F. officinalis использовали модифицированную питательную среду пивное сусло с дополнительным внесением 1% лиственничных опилок.

Изучение биохимического состава мицелия и плодовых тел базидиомицетов проводили по классическим методам. Экстрактивные вещества, получали путем холодной, горячей и исчерпывающей экстракции дистиллированной водой мицелия и плодовых тел (Ушанова и др., 2004). Общее количество белка определяли по Г.А. Бу-зуну (Бузун и др., 1982); качественный состав аминокислот - с помощью автоматического аминокислотного анализатора типа AAA 339М (Microtechna, Чехия); количество легко- и трудногидролизуемых углеводов - по методу Кизеля и Семигановского (Рязанова и др., 1996; Ушанова и др., 2004). Содержание липидов с их последующим разделением на нейтральные, глико - и фосфолипиды - по методу Блайя и Дайера

(Кейтс, 1975). Агарициновую кислоту в мицелии определяли методом УФ-спектроскопии, разработанным М.В. Гаврилиным с соавторами (2006). Экстракцию агарициновой кислоты из мицелия проводили в смеси хлороформ-этанол 1:2. Идентификацию агарициновой кислоты проводили на хроматограмме с использованием хроматографических пластинок «Сорбфил ПТСХ-А-УФ». В качестве контроля использовали стандартный образец SIGMA ALDRICH. Количество золы определяли путем сжигания пробы в муфельной печи (Плешков, 1976; Рязанова, 1996); состав минеральных компонентов золы исследовали спектральным методом на спектрометре рентгеновском сканирующем кристалл-дифракционном «Спектроскан» (производство Чехия). Определение массовой доли витаминов в мицелии исследуемых базидиоми-цетов проводили хроматографическим методом на анализаторе жидкости «Флюорат-02» (Битуева и др., 2006).

Изучение химического состава культуральной жидкости, содержащей продукты метаболизма гриба F. officinalis, проводили методом хромато-масс-спектрометрии на газожидкостном хроматографе «Aglent Technologies» модель 6890N фирмы «Хьюлетт-Паккарт» (США) с масс-селективным детектором «Aglent Technologies» модель 5973.

Твердофазное культивирование проводили на различных растительных субстратах: коре и древесной зелени пихты, лиственничных опилках, гидролизном лигнине и зерне пшеницы. Оценку роста изучаемых штаммов проводили по показателям среднесуточная скорость роста и характер формирования воздушного мицелия.

Изучение зоопатогенностн экстрактов мицелия и плодовых тел изучаемых штаммов базидиомицетов проводили на кроликах по общепринятым методикам (Краснюк, 2006; Яковлев, 2002). Изучение токсичности водных экстрактов и метаболитов проводили на белых нелинейных мышах обоего пола.

Антимикробную активность культуральных жидкостей штаммов, содержащих продукты метаболизма, и водных экстрактов из мицелия и плодовых тел базидиомицетов изучали методом лунок (Егоров, 1994; 1995; Бурмистрова, 2002). В качестве тест-культур использовали штаммы грамположительных и грамотрицательных условно-патогенных микроорганизмов Staphylococcus aureus, S. cohnii, S. epidermidis, S. warneri, S. haemolyticus, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli k-12, Salmonella typhimurium, Listeria monocytogenes и Citrobacter freundii, а также дрожжеподобного гриба Candida albicans.

Оценку противоопухолевой активности водных экстрактов из мицелия и плодовых тел исследуемых базидиомицетов проводили in vitro и in vivo на асцитной карциноме Эрлиха (АКЭ). Цитопатический эффект водных экстрактов in vitro оценивали через 20, 60, 120 и 180 минут инкубирования опухолевых клеток в среде 199 по их физиологическому состоянию с окрашиванием 1 % раствором метиленовой сини. Изучение противоопухолевой активности экстрактов in vivo проводили на белых мышах аутбредной популяции ICR одного пола в возрасте 3 месяцев. Противоопухолевый эффект in vivo оценивали по продолжительности жизни животных, объему опухоли и количеству опухолевых клеток в организме животных.

Все результаты исследований обрабатывали статистически, используя пакет программ Statistica 6.0.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ШТАММОВ АФИЛЛОФОРОВЫХ ГРИБОВ FOMITOPS1S OFFICINALIS, GANODERMA APPLANATUMII TRAMETES VERSICOLOR

Морфологические и культуральные характеристики штаммов

В период с 2002 по 2006 гг. исследования были направлены на получение изо-лятов из плодовых тел (2-х и 3-х летнего возраста) Fomilopsis officinalis, Trametes versicolor и Ganoderma applanatum. Общее количество выделенных и отобранных для анализа штаммов F. officinalis составило - 15 (пять из которых выделено из тяжей мицелия поврежденной древесины лиственницы), G. applanatum - 10 и Trametes versicolor- 11 (в том числе использовали штамм В W9\Trameles versicolor, выделенный из плодового тела в 1999 г. и любезно предоставленный к.б.н., доц. Н.В. Пашеновой).

Изучение культурально-морфологических признаков штаммов, получение плодовых тел в искусственных условиях, наличие долипоровой септы в клеточной перегородке, а также сопоставление результатов сканирующей электронной микроскопии выделенных мицелиальных культур с коллекционными штаммами доказывает, что выделенные из плодовых тел мицеллиальные культуры являются представителями видов F. officinalis, Trametes versicolor и G. applanatum, соответственно (Бон-дарцев, 1953; Бондарцева, 1998; Сафонов, 2000; Ainsworth and Bisby's dictionary of the fungi, 2001).

Культивирование грибов F. officinalis, Trametes versicolor и G. applanatum показало, что штаммы способны расти на сусло-агаре, но с разной скоростью и характером формирования воздушного мицелия и специализированных структур.

Анализ культурально-морфологических признаков изолятов Fomilopsis officinalis показал наличие групп штаммов, имеющих различные показатели. Так штаммы, выделенные из тяжей мицелия, имели более низкий ростовой коэффициент (от 15,45 до 18,30) и среднесуточную скорость роста (от 0,75 до 0,85) на питательной среде сусло-агар. Способность к образованию бластоконидий была невысокой и составляла на 30-е сутки культивирования 6,0±0,40х107 штук на см2. Из 10 штаммов, выделенных из плодовых тел 2-х и 3-х летнего возраста, 3 имели ростовой коэффициент от 24,45 до 25,60 (различия недостоверны), и среднесуточную скорость роста от 0,90 до 0,96; титр бластоконидий был высоким на 30-е сутки и составлял 5,60±0,80х109штук на см2. Семь штаммов имели ростовой коэффициент от 20,60 до 22,55 (различия недостоверны), а среднесуточная скорость роста составляла 0,65. Титр бластоконидий на 30-е сутки культивирования составлял 7,50±0,80х108 штук на см2.

Штаммы F. officinalis формируют обильный, густой, септированный, полиморфный воздушный мицелий белого цвета с многочисленными пряжками одиночного, реже медальонообразного типа, размер гиф от 0.5-1.2 доЗ.5-5.8 мкм. Хлами-доспоры и склероции не образуют. На основе показателей скорости роста, расчета ростового коэффициента и способности к образованию плодовых тел и бластоконидий отобран штамм Tyv-2006 F. officinalis (ВКПМ-961) (рисунок 1).

Рисунок i - Морфология мицелия штамма Tyv-2006 Fomitopsis officinalis. Стрелками указаны: А - пряжки одиночного типа, Б и В - бластоконидии на кони-диеносцах; Г - дикариотичный мицелий

Изучение культуральных признаков G. applanation показало, что изоляты, выделенные как из плодовых тел как 2-х летнего, так и 3-х летнего возраста, делятся также на две группы: имеющие ростовой коэффициент 28,60 и среднесуточную скорость роста от 0,95 и 31,50 и среднесуточную скорость роста 1,18 (различия этих показателей достоверны). Штаммы G. applanatum образуют разветвленный, септированный толстостенный мицелий, с многочисленными пряжками одиночного типа. Генеративные гифы бесцветные, изредка буроватые. На 20-е сутки культивирования на сусло-агаре формируют коралловидный плотный мицелий (рисунок 2). По способности к формированию плодовых тел штаммы различались: штаммы, имеющие ростовой коэффициент 31,50, формировали плодовые тела на 35-е сутки культивирования, а штаммы с ростовым коэффициентом 28,60 - на 45-е сутки. Для дальнейших исследований был отобран штамм G.a.-04 G. applanatum (ВКПМ-983).

в г

Рисунок 2 - Морфология мицелия штамма G. а.-04 Ganoderma applanatum. Стрелками указаны: А - пряжки, Б - коралловидный мицелий; В - дикариотичный мицелий; Г - тонкий мицелий

Наиболее высокими показателями ростового коэффициента отличались штаммы Т. versicolor. Штаммы, выделенные из плодовых тел 2-х и 3-х летнего возраста также были выделены в две группы: имеющие ростовой коэффициент на сусло-агаре от 85,60 до 94,50 и среднесуточную скорость роста 3, 25 - 3,85, штаммы, имеющие более низкие показатели ростового коэффициента (78,80-82,50) и среднесуточную скорость роста 2,80 - 3,5). Но наибольший ростовой коэффициент (103,40) на сусло-агаре отмечен у штамма В18/91 Т. versicolor, выделенного в 1999 г. Среднесуточная скорость роста этого штамма составляла 4,93, а ростовой коэффициент 103, что, вероятно, связано с многолетним поддержанием штамма в лабораторных условиях в активном состоянии. Все штаммы Т. versicolor хорошо культивируется на агаризованных питательных средах с образованием густого разветвленного, септированного мицелия, с многочисленными пряжками одиночного типа. Вегетативное спороношение не выявлено. Для дальнейших исследований был использован штамм В18/91 Т. versicolor (рисунок 3).

|10 ЦГТ1|

Д Е

Рисунок 3 - Морфология мицелия штамма В 18/91 Trametes versicolor. Стрелками указаны: А - мицелий разной толщины с пряжками; Б - пряжка и утолщение клетки мицелия; В - вздутия в районе септ; Г - скелетный мицелий с толстыми клеточными стенками; Д - дикарион; Е - дикариотичный мицелий

Оценка динамики роста мицелия изучаемых штаммов на агаризованных питательных средах показала, что максимальная колонизация субстратов достигается в различный период. Наилучшими агаризованными питательными средами, по показателям среднесуточной скорости роста и ростовому коэффициенту для культивирования Fomitopsis officinalis и Ganoderma applanatum являются сусловый агар и сусловый агар с добавлением 1% лиственничных опилок (таблица 1).

Таким образом, на основании показателей ростового коэффициента и среднесуточной скорости роста на всех питательных средах к быстро растущим был отнесен В 18/91 Т. versicolor, тогда как штаммы Tyv-2006 F. officinalis и G.a-04 G. applanatum - к медленно растущим. Для накопления биомассы для штаммов Tyv-2006 F. officinalis и

G.a.-04 G. applanatum следует использовать сусло с добавлением 1% лиственничных опилок, а для штамма 18/91 Т. versicolor питательную среду, содержащую крахмал и декстрозу.

Таблица 1 - Ростовые показатели изучаемых штаммов базидиомицетов на ага-ризованных питательных средах

Питательная среда Fomitopsis officinalis Ganoderma applanatum Trametes versicolor

Сусловый агар (СА) 0,94 25,60 1.18 31,50 4.93 103,40

СА+1% лиственничных опилок 1.06 46,50 2.11 44,11 1,86 124,90

СА+3% лиственничных опилок 0.69 11,50 1.08 16,41 1.16 86,90

Грибной агар 0.49 10,30 0.82 1.31 2.50 62.10

Картофельно-декстрозный агар 0.34 2,10 0.49 7.40 5.91 102,90

Примечание: в числителе - показатель среднесуточной скорости роста штамма, в знаменателе - ростовой коэффициент

Исследования влияния температуры на скорость роста штаммов показали, что для штамма Tyv-2006 F. officinalis наиболее оптимальной является температура 25-30 °С, тогда как для роста мицелия штаммов G. applanatum и Т. versicolor - 15-25 °С. Гриб F. officinalis начал осваивать субстрат на сусловом агаре лишь при +25 °С, тогда как при росте на сусловом агаре с добавлением 1% лиственничных опилок - при 20 °С. Незначительный рост при самой низкой исследуемой температуре (+5 °С), был зафиксирован у гриба Т. versicolor.

Следует отметить, что при понижении температуры культивирования до +15 °С изменялась морфология колонии штаммов G. applanatum и Т. versicolor, воздушный мицелий становился рыхлым, паутинистым. Вместе с тем, более высокий (низкий) уровень среднесуточной скорости роста и ростового коэффициента изучаемых штаммов по отношению друг другу, имеет тенденцию сохраняться при всех температурах культивирования. Наиболее четко это прослеживается для штамма В 18/91 Т. versicolor. Исследования показали, что по отношению к температуре роста штамм Tyv-2006 F. officinalis, является стенотермным, а штаммы G.a.-04 G. applanatum и В 18/91 Т. versicolor эвритермными.

Исследование показали, что гриб Т. versicolor способен расти в широком диапазоне значений рН питательной среды - от 3,5 до 7,5. Однако максимальные значения среднесуточной скорости роста 4,95,4,80 и 4,55 мм для штамма В 18/91 отмечены на среде со значениями рН 5,5, 6,0 и 6,5. Максимальные значения скорости роста мицелия штаммов Tyv-2006 F. officinalis и G.a.-04 G. applanatum отмечены в диапазоне значений рН среды от 5,5 до 6,5 мм. Рост не наблюдается при значением рН 3,5 и ниже, а для штамма F. officinalis и при 7,5.

Динамика накопления биомассы штаммами

Интенсивность развития грибов достоверно можно оценить по накоплению биомассы мицелия при выращивании на жидких питательных средах, т.к. на агаризо-

ленно растущих штаммов Tyv-2006 F. officinalis и G.a.-04 G. applanatum и 5, 10 и 15-ти суточного мицелия быстро растущего штамма В 18/91 Т. versicolor.

Для исследования качественного и количественного состава аминокислот, экстрактивных веществ, витаминов, золы и минерального состава в мицелии изучаемых штаммов был использован 30-ти суточный мицелий медленно растущих штаммов Tyv-2006 F. officinalis и G.a.-04 G. applanatum и 15-ти суточный мицелий штамма В 18/91 Т. versicolor.

Одной из важных характеристик как плодовых тел, так и мицелия грибов является содержание экстрактивных веществ, которое дает возможность установить качество экстракта получаемого растительного сырья. Известно, что процесс извлечения экстрактивных веществ зависит от ряда факторов, таких как состав сырья, продолжительность экстракции и температура (Государственная фармакопея, 1989; Краснюк и др., 2006). Исследования показали, что суммарный выход экстрактивных веществ из мицелия и плодовых тел зависит от температуры и условий экстракции. Так, при температуре 20-22 °С количество экстрактивных веществ значительно ниже, чем при 100 °С. Время экстракции также влияет на выход экстрактивных веществ: так в условиях исчерпывающей экстракции (при 100 °С в течение 24-72 часов) повышается выход экстрактивных веществ из мицелия и плодовых тел всех изучаемых штаммов. Причем, количество экстрактивных веществ в мицелии гриба Т. versicolor увеличивается в условиях исчерпывающей экстракции, по сравнению с холодной экстракцией в 5 раз. Тогда как для всех остальных исследуемых образцов это соотношение составило 1:2 или 1:3 (таблица 2).

Таблица 2 - Количество экстрактивных веществ в мицелии и плодовых телах высших базидиомицетов полученных путем холодной (1), горячей (2) и исчерпывающей (3) экстракции, %

Базидиомицет В мицелии | В плодовом теле

i 2 3 1 2 3

F. officinalis 40,96±0,33 51,09±0 71,58±1,12 3,59±0.07 8,36±0,20 8,48±0,09

G. applanatum 10,81 ±0,06 20,03±0,21 34,31 ±0,08 5,94±0,24 10,96±0,41 20,03±0,94

Т. versicolor 3,39±0,16 15.30±0,04 23,33±0,35 3,5б±0,13 8,92±0,27 18,45±0,87

Из представленной таблицы видно, что количество экстрактивных веществ в мицелии максимально у штамма F. officinalis, тогда как в плодовом теле - у гриба G. applanatum.

Исследования по определению общего содержания белка показали, что наибольшее количество общего белка содержится в биомассе мицелия штамма Tyv-2006 F. officinalis и с возрастом оно увеличивается и на 10, 20 и 30-е сутки культивирования и составляет 12,05, 14,34 и 15,68 %, соответственно. Содержание общего белка в мицелии этого гриба в 10 раз больше, чем в плодовых телах, количество которого составляет только 1,53 %. Полученные результаты по содержанию белковых веществ в плодовых телах F. officinalis согласуются с литературными сведениями (Ооржак и др., 2004; 2006), согласно которых количество белковых веществ зависит от возраста плодовых тел, и составляет от 4,84 до 1,39 %.

Доля общего белка в мицелии гриба G. applanatum на 10, 20 и 30-е сутки культивирования составляет 8,28,10,03 и 10,74 %, соответственно, тогда как доля общего белка в плодовых телах составляет 9,95 %, т.е. количественные показатели доли общего белка в мицелии и плодовых телах гриба мало различаются. Незначительно с возрастом изменяется доля общего белка в мицелии гриба Т. versicolor. Так после 5, 10 и 15-ти суток

культивирования на пивном сусле количество общего белка в мицелии составило 13,04, 13,86 и 14,63 % соответственно, а в плодовых телах гриба Т. versicolor доля белка составляет 7,25 %, что почти в два раза ниже, чем в мицелии.

Сравнительная оценка аминокислотного состава мицелия и плодовых тел всех изучаемых базидиомицетов показала, что в исследуемых образцах содержание аминокислот в мицелии превышает таковое в плодовых телах. Причем среди незаменимых аминокислот в мицелии исследуемых базидиомицетов преобладают такие как изолейцин, лейцин и тирозин, тогда как в плодовых телах базидиомицетов G. ар-planalum и 71 versicolor - лейцин и тирозин, а в плодовых телах F. officinalis изолейцин, лейцин, тирозин, треонин и ваши. Общее количество незаменимых аминокислот от общей суммы аминокислот в чистой культуре мицелия грибов G. applanation, F. officinalis и Т. versicolor составляет 25,4, 34,8 и 23,9%, тогда как в плодовых телах -20,2, 37,0 и 34,6%, соответственно. Полученные данные свидетельствуют о том, что только в плодовых телах гриба Т. versicolor содержание незаменимых аминокислот от общего количества аминокислот превосходит почти на 30% этот показатель в мицелии. Среди заменимых аминокислот, как в мицелии, так и в плодовых телах большое количество гистиднна, аспарагиновой и глютаминовой кислот.

Биологическую активность многих грибов связывают с наличием в них углеводов, в том числе гликанов, гетерогликанов, гликозаминогликанов. По современным представлениям углеводы цитозоля клеток грибов, выполняют множество функций (Феофилова, 1997; Щерба, 2004). Изучение биохимического состава штаммов базидиомицетов показало, что наибольшее количество общего количества полисахаридов в мицелии изучаемых штаммов выявлено у гриба Т. versicolor, причем количество легкогидролизуемых углеводов в мицелии значительно отличается от количества трудногидролизуемых углеводов. Количество легко- и грудногидролизуемых углеводов в мицелии различного возраста штаммов G. applanatum и Т. versicolor различается недостоверно. У гриба F. officinalis, напротив, количество как легкогидролизуемых, так и трудногидролизуемых полисахаридов возрастает при культивировании штамма (таблица 3).

Таблица 3 - Доля углеводов в мицелии изучаемых базидиомицетов различного возраста, %_

Продолжительность культивирования штамма, сут Легкогидролизуемые полисахариды Трудногидролизуемые полисахариды

Fomitopsis officinalis

10 13,09±0,85 4,87±0,24

20 17,85±1,01 6,53±0,60

30 18,83±0,66 6,11±0,07

Ganoderma applanatum

5 21,43±0,97 8,10±0,61

10 23,04±1,13 8,25±0,30

15 22,14±0,78 9,64±0.15

Trámeles versicolor

5 38,36±1,64 7,30±0,21

10 42,10±2,05 9,13±0,44

15 41,55±1,21 12,85±0,46

Сравнительный анализ доли углеводов в плодовых телах изучаемых базидио-мицетов показал, что плодовые тела гриба Т. versicolor содержат наибольшее количество легко- и трудногидролизуемых углеводов, тогда как плодовые тела базидиоми-цетов G. applanation и F. officinalis характеризуются более низким содержанием общего количества углеводов, суммарный выход составил соответственно - 50,7, 23,2 и 12,63 % (таблица 4).

Таблица 4 - Содержание углеводов в плодовых телах базидиомицетов, %

Базидиомицет Легкогидролизуемые полисахариды Трудногидролизуемые полисахариды

Fomitopsis officinalis 7,95±0,13 4,68±0,15

Ganoderma applanatum 16,81±0,49 6,41±0,28

Trametes versicolor 37,63±0,98 13,14±0,19

Таким образом, наиболее перспективным источником, не менее ценных по сравнению с белками, веществ углеводной природы является мицелий всех изучаемых штаммов, которые могут представлять интерес для создания биологически активных добавок, а также с целью обогащения кормов для сельскохозяйственных животных. Кроме того, олигосахариды могут являться биологически активными соединениями, обладающими противоопухолевой и антимикробной активностью (Чхенкели, 1998; 2005).

Важное место среди биологически активных веществ занимают липиды, причем их ценность тем выше, чем больше в их составе важных в биологическом отношении фосфолипидов. Проведенные исследования по определению количества общих липидов в мицелии изучаемых штаммов показали довольно широкий диапазон данных (от 1,02 до 7,47 % от а.с.с.). Содержание общего количества липидов в мицелии гриба F. officinalis значительно различается от возраста культуры. Так 10-суточный мицелий содержит общую долю липидов в 2,5 раза меньше, чем 30-ти суточная культура штамма. Содержание липидов в мицелии базидиомицетов G. applanatum и Т. versicolor в зависимости от возраста различается незначительно (таблица 5).

Таблица 5 - Содержание липидов в мицелии базидиомицетов, %

Продолжительность культивирования штамма, сутки Всего липидов Нейтральные Глико-липиды Фосфо-липиды

Fomitopsis officinalis

10 3.25±0,10 77,10±2,25 20,35±0,66 1,03±0,07

20 6,18±0,25 70,85±1,56 24,44±1,10 1,76±0,04

30 7,47±0,14 60,29±1,17 33,88±0,33 3,89±0,14

Ganoderma applanatum

5 3,14±0,06 68,9±1,25 21,2±1,00 7,73±0,33

10 3,26±0,05 67,5±2,13 19,1±1,18 10,15±0,50

15 3,88±0,01 60,98±1,7 24,35±0,43 11,51±0,56

Trametes versicolor

5 1,02±0,04 68,15±2,05 17,26±1,13 10,89±0,29

10 1,37±0,01 70,40±2,64 15,15±0,805 14,00±1,06

15 1,49±0,06 66,64±1,20 16,92±1,25 13,82±0,13

ванных питательных средах при равном диаметре колонии значительно отличаются по плотности и высоте. Как показали исследования, при поверхностном культивировании на жидкой питательной среде неохмеленное сусло, которая была использована для сравнительной характеристики штаммов, наибольшее накопление биомассы наблюдалось у штамма В 18/91 Т. versicolor, что подтверждает его высокие ростовые характеристики (средний РК = 100).Так максимальное количество биомассы у штамма В 18/91 Т. versicolor на 20 и 30-е сутки культивирования составило 21,70±0,28 и 23,01±0,54 г/л, тогда как у базидиомицетов G. applanation и F. officinalis - 15,95±0,61 и 4,84±0,11 г/л, соответственно (рисунок 4).

Рисунок 4 - Динамика накопления биомассы мицелия чистой культуры базидиомицетов при жидкофазном поверхностном культивировании на пивном сусле, г/л

Таким образом, при поверхностном культивировании на жидкой питательной среде неохмеленное сусло наибольшее накопление биомассы наблюдалось у штамма В 18/91 Т. versicolor, что подтверждает его высокие ростовые характеристики на ага-ризованных питательных средах (средний РК = 100). Вторым, по интенсивности накопления биомассы мицелия, явился штамм G.&-04 G. applanation. Следует отметить, что извлеченная после культивирования мицелиальная пленка характеризовалась очень высокой плотностью и складчатой внутренней поверхностью. Самый низкий уровень накопления биомассы отмечен для штамма Tyv-2006 F. officinalis, количественный показатель биомассы которого на 40-е сутки культивирования составил лишь 5,22 г/л, но при добавлении в питательную среду 1% лиственничных опилок количество биомассы увеличилось в 2 раза.

Биохимический состав мицелия и плодовых тел базидиомицетов

Большое значение для получения биомассы базидиомицетов имеет количество в нем белка, углеводов, липидов, витаминов, экстрактивных и минеральных веществ. Биомассу мицелия для биохимического исследования наращивали путем жидкофаз-ного культивирования на пивном сусле (4 °Б). Содержание общего количества белка, углеводов и липидов определяли в мицелии 10, 20 и 30-ти суточного возраста мед-

Из представленной таблицы видно, что общей закономерностью является преобладающее количество нейтральных липидов в составе общей фракции мицелия всех изучаемых штаммов различного возраста Причем четкой тенденции к увеличению или уменьшению их количественного показателя с возрастом не прослеживается. Количество гликолипидов значительно изменяется в зависимости от возраста культуры у гриба F. officinalis. Так, 10-ти суточный мицелий содержит на 40 % гликолипидов меньше, чем 30-ти суточный мицелий. Содержание гликолипидов у базидиомице-тов G. applanatum и Т. versicolor в зависимости от возраста различается недостоверно.

На долю фосфолипидной фракции 30-ти суточного мицелия гриба F. officinalis приходится лишь 3,9 %, что в 3 раза больше, чем его доля в 10-ти суточном мицелии гриба. Наиболее высоким синтезом фосфолипидов характеризовались культуры мицелия грибов Т. versicolor и G. applanatum. Причем, содержание фосфолипидов в мицелии гриба G. applanatum и Т. versicolor изменяется с возрастом примерно на 30%.

Сравнительный анализ количественного определения доли общих липидов в плодовых телах изучаемых базидиомицетов показал, что отличительной чертой гриба F. officinalis является высокое содержание в его плодовых телах - 29,3 %, тогда как плодовые тела базидиомицетов G. applanatum и Т. versicolor содержат лишь 4,14 и 1,90 %, соответственно (таблица 6).

Таблица 6 - Содержание липидов в плодовых телах базидиомицетов, %

Базидиомицет Всего липидов Нейтральные Глико- ЛИПИДЫ Фосфо- ЛИПИДЫ

Fomitopsis officinalis 29.29±0,12 54.36±0.01 38.96±0,01 1,72±0,01

Ganoderma applanatum 4,14±0.07 84,14±0,93 5.89±0,29 7,87±fl,17

Trametes versicolor 1,90±0,03 43,10±1,17 36,85±0,22 19,23±0,69

Из представленной таблицы видно, что наибольшее количество фосфолипидов содержат плодовые тела гриба Т. versicolor. Количественный показатель в 10 и 2,5 раза выше, чем содержание таковых у базидиомицетов F. officinalis и G. applanatum, соответственно. Таким образом, по количеству общих липидов и фосфолипидов, для практического использования в различных отраслях народного хозяйства (пищевой, фармацевтической промышленности, медицине, косметологии и др.), мицелий базидиомицетов F. officinalis, G. applanatum и Т. versicolor может представлять большую значимость.

Одним из наиболее важных компонентов плодовых тел F. officinalis является агарициновая кислота. Последние исследования зарубежных авторов доказывают, что агарициновая кислота является соединением, которое индуцирует проницаемость митохондрий путем связывания с аденин-нуклеотидтранслоказой, т.е. может использоваться при раковых новообразованиях (Гаврилин и др., 2006). Проведенный сравнительный анализ ИК-спектроскопии образца мицелия F. officinalis 30-ти суточного возраста и стандартного образца агарициновой кислоты (SIGMA ALDRICH, Германия) показал идентичность спектров опытного и стандартного образцов (рисунок 5).

СФ-2000-01

]' гч П v IJ \ / 1 || V \ к Л. \ \ \ \ f

У \ \

220.0 24 0.0 260.0 260.0 300.О

образец иэ мицелия () н

2.--— — стандарт {)

Рисунок 5 - Уф-спектры раствора порошка, полученного из мицелия гриба Fomitopsis officinalis и стандартного образца агарициновой кислоты

Полученные нами результаты не согласуются с данными О.М. Ефименко (1965), которая отмечала, что 30-40-суточный мицелий Fomitopsis officinalis не содержит агарициновой кислоты. Следовательно, мицелий Fomitopsis officinalis может быть использован для получения биологически активного соединения агарициновой кислоты.

Твердофазное культивирование штаммов

Перспективным биотехнологическим способом получения мицелия грибов - продуцентов биологически активных веществ может быть твердофазная ферментация растительных материалов. Для массовой наработки биомассы грибов необходимым этапом исследований является подбор дешевых и экологически безопасных растительных субстратов. В этой связи перспективным источником сырья для ферментации могут служить отходы деревообрабатывающей промышленности и сельского хозяйства. Как показали результаты исследования, для всех изучаемых штаммов лучшим субстратом для культивирования явилось измельченное зерно пшеницы, тогда как на гидролизном лигнине рост не был отмечен. Штамм гриба F. officinalis утилизировал лиственничные опилки и кору пихты, а штамм гриба Т. versicolor утилизировал кору, древесную зелень пихты и лиственничные опилки. Скорость роста штаммов и характер формирования воздушного мицелия на различных субстратах были не одинаковы. Изучаемый штамм гриба G. applanatum не утилизировал отходы деревообрабатывающей и гидролизной промышленности.

Проведенные исследования по подбору различных композиций субстратов показало, что для наращивания мицелия штамма-продуцента F. officinalis необходимо использовать композицию растительного субстрата, где доля лигнина 60%, древесной зелени пихты и коры пихты по 20%; для штамма гриба Т. versicolor субстраты, где доля лигнина 20%, древесной зелени пихты и коры пихты по 40%.

Токсичность и зоопатогенность штаммов

Изучение токсичности и зоопатогенности штаммов-продуцентов биологически активных веществ, является обязательным условием для возможности их рекомендации в массовое производство. Водные экстракты из мицелия и плодовых тел F. officinalis, G. applanatum и Т. versicolor отнесены к классу нетоксичных. Культуральные жидкости, содержащие продукты метаболизма, штаммов G.a.-04 G. applanatum и В 18/91 Т. versicolor являются нетоксичными, тогда как метаболиты штамма Tyv-2006

F. officinalis - высокотоксичные.

Исследование химического состава метаболитов штамма Tyv-2006 F. officinalis методом хромато-масс-спектрометрии показало высокое содержание нервного яда -гидроксиметилфурфурола, количество которого в образцах составляет 60,04 % что, возможно, и определяет их токсичность.

Антимикробная активность водных экстрактов из мицелия и плодовых тел базидиомицетов

Многие макромицеты являются продуцентами широкого спектра антибиотиков и препаратов противоопухолевого и иммуномодулирующего действия. Повышенному интересу к грибам этой группы способствовали многочисленные исследования, показавшие, что они могут стать незаменимыми источниками для получения лекарственных препаратов, имеющих антимикробную активность (Низковская, 1983; Бухало и др., 1996; Даниляк, 1996; Чхенкели, 1998; 2006; Sliva, 2006; Ziegenbein et.al., 2006; Gao et.al., 2002; Ikewawa, 2003; Jeong et.al., 2008 и другие).

В настоящее время часто при инфекционных заболеваниях различной этиологии используются лекарственные средства, обладающие либо крайне низкой активностью, либо имеющие высокий процент резистентности в отношении основных возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний. В связи с этим весьма актуальна задача поиска новых продуцентов антибиотических веществ и препаратов, активных в отношении микроорганизмов, имеющих множественную лекарственную устойчивость (Сидоренко, 2002; Яковлев, 2002). Изучение антимикробной активности водных экстрактов из мицелия показало, что все тест-культуры оказались чувствительными к биологически активным соединениям, экстрагируемым водой из мицелия гриба Т. versicolor. Водный экстракт из мицелия G. applanatum обладает антимикробной активностью в отношении всех взятых для эксперимента тест-культур, кроме микроорганизмов рода Staphylococcus, из мицелия лиственничной губки обладает антимикробной активностью в отношении S. aureus, В. subtilis, P. aeruginosa 114, Е. coli к-12, S. typhimurium, L. monocytogenes и С. freundii (таблица 7).

Водный экстракт из мицелия штамма Tyv-2006 F. officinalis проявлял среднюю степень антимикробной активности к микроорганизмам S. aureus, S. typhimurium и С. freundii. Тогда как, среди тест-культур обладающих средней чувствительностью к биологически активным соединениям, экстрагируемым водой из мицелия штамма

G.a-04 G. applanatum оказались лишь С. albicans и В. subtilis. Остальные тест-культуры показали слабую чувствительность к исследуемым экстрактам. Следует отметить, что степень активности водных экстрактов из мицелия штамма В 18/91 Т. versicolor, оценивается как средняя ко всем тест-культурам, за исключением микроорганизмов Е. coli к-12, L. monocytogenes и Citrobacter freundii, где зоны вокруг лунок были менее 12 мм в диаметре, что свидетельствует о слабой чувствительности штаммов к биологически активным соединениям, экстрагируемым водой из мицелия гриба Т. versicolor.

Исследование культуральных жидкостей изученных грибов F. officinalis, G. ар-planatum и Т. versicolor, покзали, что антимикробную активность в отношении всех используемых в эксперименте тест-культур проявляют только метаболиты F. officinalis. Следует отметить, что метаболиты гриба F. officinalis обладающие антимикробной и фунгицидной активностью, являются высокотоксичными.

Таблица 7 - Антимикробная активность водных экстрактов из мицелия изучаемых базидиомицетов

TecT-KyjiLTypa Зона подавления роста тест-культур, мм

Fomitopsis Ganoderma Trametes Кон-

officinalis applanatum versicolor троль

■Staphylococcus aureus 12,05±0,41 - 11,67±0,41 -

Staphylococcus cohnii - - 16,83±0,20 -

Staphylococcus epidermidis - - 17,17±0,54 -

Staphylococcus warneri - - 16,83±0,20 -

Staphylococcus haemolyticus - - 17,00±0,35 -

Candida albicans - 13,83±0,20 16,17±0,20 -

Bacillus subtilis 9,03±0,25 13,20±0,42 14,40±0,05 -

Pseudomonas, aeruginosa 114 10,14±0,30 10,45±0,45 19,00±0,89 -

Escerichia coli k-12 9,25±0,08 11,00±0,50 11,25±0,15 -

Salmonella typhimurium 12,10±0,10 10,05±0,20 14,30±0,45 -

Listeria monocytogenes 11,41±0,10 8,73±0,01 8,25±0,05 -

Citrobacter freundii 15,35±0,29 9,17±0,36 10,55±0,281 -

Примечание: « - »- активность не вьивлена

Водные экстракты из плодовых тел гриба Т. versicolor оказывают антимикробную активность в отношении грамположительных стафилококков, в частности коагу-лазоположительного S. aureus и коагулазоотрицательного S. haemolyticus, тогда как действия экстрактов из плодовых тел базидиомицетов F. officinalis и G. applanatum в их отношении не выявлено.

Полученные данные свидетельствуют о том, что культуры исследуемых базидиомицетов F. officinalis, G. applanatum и Т. versicolor могут быть использованы как продуценты биологически активных веществ, обладающих антимикробной активностью.

Противоопухолевые свойства водных экстрактов из мицелия и плодовых тел базидиомицетов

Повышенному интересу к дереворазрушающим базидиомицетам способствовали многочисленные исследования, показавшие, что эти организмы могут стать незаменимыми источниками для получения лекарственных препаратов, имеющих имму-номодулирующую и противоопухолевую активность. Наиболее активными считаются полисахариды, стероидные соединения и каротиноидные пигменты, проявляющие модифицирующее действие на активность клеток врожденного иммунитета (Красно-польская, 2007; Феофилова, 1996; 2006; Щерба и др., 2007; Cui et.al, 2003; Cao et.al., 2004; Jiang te.al., 2007; Muller et.al., 2006; Sliva, 2006; Moradali et.al., 2006). Исследование показало, что водные экстракты мицелия и плодовых тел всех изучаемых

штаммов базидиомицетов, в той или иной степени оказывают цитопатическое действие на опухолевые клетки АКЭ. Результаты исследования in vivo, проведенные на мышах линии ICR, показали, что водные экстракты мицелия F. officinalis и плодового тела G. applanatum обладали выраженной противоопухолевой активностью. Объем и концентрация живых клеток опухоли достоверно снижался по сравнению с группой мышей, получавших противоопухолевый препарат циклофосфан, и с контрольной группой мышей, не получавших препараты.

Наиболее выраженное достоверное торможение роста опухоли (ТРО) регистрируется при введении экстракта из мицелия F. officinalis и составляет 77 %. Полученные данные о противоопухолевом действии сибирских штаммов базидиомицетовых грибов открывают новые возможности и перспективы использования в комплексной терапии рака биологически активных веществ, получаемых из биомассы мицелия продуцентов.

ВЫВОДЫ

1. В результате лабораторных исследований in vitro установлены культурально-морфологические признаки и особенности роста Fomitopsis officinalis, Ganoderma applanatum и Trametes versicolor. К быстро растущим отнесены штаммы Т. versicolor, медленно растущим - F. officinalis и G. applanatum. По особенностям роста в различном интервале температур F. officinalis относится к стенотермным видам (25-30 °С), а G. applanatum и Т. versicolor (15-25 °С) к эвритермным. Оптимальным рН для роста всех изучаемых штаммов является 5,5-6,5. По показателям ростового коэффициента и скорости роста проведен отбор продуктивных штаммов Fomitopsis officinalis Tyv-2006 (ВКПМ F-961) и Ganoderma applanatum G.a-04 (ВКПМ F-983).

2. Относительное содержание белка в мицелии грибов F. officinalis и Т. versicolor увеличивается в процессе культивирования; доля общего белка в биомассе мицелия штамма Tyv-2006 F. officinalis в 10 раз превосходит его содержание в плодовых телах. Содержание белка в мицелии грибов G. applanatum и Т. versicolor при культивировании изменяется незначительно; доля общего белка в мицелии штамма Т. versicolor почти в два раза выше, чем в плодовых телах. В мицелии штамма G.a-04 G. applanatum содержание белка на 10 % выше, чем в плодовых телах.

Качественный состав аминокислот белка мицелия базидиомицетов характеризуется преобладанием незаменимых аминокислот изолейцина, лейцина и тирозина В плодовых телах базидиомицетов G. applanatum и Т. versicolor - обнаружены - лейцин и тирозин, а в плодовых телах F. officinalis - изолейцин, лейцин, тирозин, треонин и валин.

3. При культивировании изученных грибов возрастает количество трудногид-ролизуемых (37,63±0,98) и легкогидролизуемых (13,14±0,19) полисахаридов у штамма F. officinalis, у штаммов G. applanatum и Т. versicolor эти различия не обнаружены. Наибольшее количество легко- и трудногидролизуемых углеводов содержат плодовые тела гриба Т. versicolor, плодовые тела базидиомицетов G. applanatum и F. officinalis характеризуются более низким содержанием общего количества углеводов, составляющее соответственно - 50,7,23,2 и 12,63 %.

чительно, их соотношение составило 1:1. Доля общих липидов в плодовых телах гриба F. officinalis в 4 раза выше, чем в биомассе мицелия. В липидной фракции мицелия и плодовых тел F. officinalis идентифицирована агарициновая кислота.

5. Штаммы грибов различаются характером и скоростью роста на различных питательных субстратах. Увеличение выхода биомассы медленно растущего штамма Tyv-2006 F. officinalis достигалось после обогащения питательной среды лиственничными опилками.

6. Штаммы базидиомицетов F. officinalis, G. applanatum и Т. versicolor могут быть использованы в качестве продуцентов биологически активных веществ, обладающих антимикробной активностью в отношении грамотрицательных и грамполо-жительных бактерий. Антимикробной активностью в отношении грамположительных стафилококков и отличались водные экстракты из биомассы мицелия и плодовых тел гриба Т. versicolor и культуральная жидкость штамма Tyv-2006 F. officinalis. Проти-вокандидозной активностью обладали водные экстракты мицелия Т. versicolor и G. applanatum. Водный экстракт из мицелия штамма Tyv-2006 F. officinalis проявлял избирательное действие в отношении микроорганизмов.

7. Водные экстракты мицелия всех изученных штаммов и культуральные жидкости, содержащие продукты метаболизма штаммов G. applanatum и Т. versicolor, не являются токсичным для теплокровных животных, тогда как метаболиты культураль-ной жидкости штамма F. officinalis высокотоксичны.

8. В опытах in vitro установлено, что водные экстракты из мицелия и плодовых тел гриба Т. versicolor оказывают прямое цитопатическое воздействие на опухолевые клетки асцитной карциномы Эрлиха, тогда как экстракты из мицелия штаммов G. applanatum и F. officinalis - длительное цитопатическое действие. В опытах in vivo наиболее выраженное достоверное торможение роста опухоли оказывает водный экстракт из мицелия лиственничной губки (F. officinalis).

9. Для культивирования мицелия штаммов F. officinalis и Т. versicolor.разработаны оптимальные композиции растительных субстратов с использованием отходов промышленности лесоперерабатывающего комплекса. Лучшим субстратом для твердофазного культивирования мицелия исследованных штаммов базидиомицетов G. applanatum, F. officinalis и Т. versicolor является измельченное зерно пшеницы. Полученная биомасса базидиомицетов может быть использована для получения биологически активных веществ.

Список работ опубликованных по теме диссертации

1. Садыкова B.C., Ковалева Г.К., Чижмотря Н.М., Гаврилова А.Г., Громовых Т.И., Новицкий И.А. Антимикробная активность грибов рода Trichoderma и Trametes в отношении патогенных микроорганизмов рода Staphylococcus II Сибирский медицинский журнал. - Иркутск, 2006. - Т. 66, №8. - С. 18-20.

2. Ковалева Г.К., Громовых Т.И. Биологические свойства и продуктивность нового штамма базидиомицета G.a.-04 Ganoderma applanatum (Pers. ex Wallr.) Pal // Вестник КрасГАУ. - Красноярск, 2008. - №1. - С. 70-73.

3. Ковалева Г.К., Громовых Т.И. Биологические свойства и продуктивность нового штамма базидиомицета Tyv-2006 Fomitopsis officinalis (Will.) Bond, et Singer // Вестник КрасГАУ. - Красноярск, 2009. - №1. - С. - 68-75.

4. Ковалева Г.К., Громовых Т.И. Изучение биологической активности и продуктивности на растительных субстратах сибирского штамма базидиомицета

Trámeles versicolor (L. Ex Fr.) Lloyd II Материалы Всероссийской конференции студентов и аспирантов по приоритетному направлению «Рациональное природопользование». - Ярославль, 2006. - С. 260-262.

5. Ковалева Г.К., Громовых Т.И. Перспективы создания новых биотехнологий на основе сибирских штаммов базидиомицетов // Материалы Международной школы-конференции «Генетика микроорганизмов и биотехнология» - Москва-Пущино, 2006.-С. 130-131.

6. Ковалева Г.К., Громовых Т.И. Новые альтернативные пути получения биологически активных веществ // Материалы городской научно-практической конференции «Развитие инновационной деятельности в промышленном комплексе города Красноярска». - Красноярск, 2007. - С. 74-76.

7. Ковалева Г.К., Громовых Т.И. Перспективы создания новых биотехнологий на основе сибирского штамма В 18/91 базидиомицета Trámeles versicolor II Материалы И Международной научно-технической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы технологии живых систем». - Владивосток, 2007. - С.55-57.

8. Громовых Т.И., Ковалева Г.К., Садыкова B.C., Гаврилова А.Г. Противоопухолевые свойства макро- и микромицетов Средней Сибири // Современная микология в России. Тезисы докладов второго съезда микологов России. М: Национальная академия микологии. - 2008. - С. 517.

9. Громовых Т.И., Садыкова B.C., Ковалева Г.К., Кутафьева Н.П., Гайда-шева И.И., Миронов А.Г., Пашенова Н.В. Коллекция чистых культур макро- и микромицетов средней Сибири - база для создания новых биотехнологий и образовательного процесса // Современная микология в России. Тезисы докладов второго съезда микологов России. М: Национальная академия микологии. - 2008. - С. 109-110.

10. Ковалева Г.К., Садыкова B.C., Громовых Т.И., Инжеваткин Е.В. Биология, культивирование и лекарственные свойства Trametes versicolor II Высшие бази-диальные грибы: индивидуумы, популяции, сообщества. Материалы юбилейной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения М.В. Горленко. М.: Восток-Запад, 2008. - С. 190-191.

11. Патент 2007147074/13 (051610) RU МПК7 C12N 1/14 Штамм базидиомицета Fomitopsis officinalis ВКПМ F - 961, используемый для получения противоопухолевых препаратов / Т.И. Громовых, B.C. Садыкова, Е.В. Инжеваткин, Г.К. Ковалева, Л.И. Черепанова; заявл. 17.12.07 г.

Сдано в производство 19.01.09. Формат 60x84 1/16. Усл. печ.1,0. Изд. № 5/1. Заказ № 395. Тираж 120 экз.

Редащионно-юдателъский центр СибГТУ 660049, г. Красноярск, пр. Мира, 82 факс (391) 220-61-56, тел. (391) 227-69-90

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ковалева, Гульмира Кажгалиевна

Список используемых сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Систематическое положение изучаемых видов грибов.

1.2 Характеристика грибов из родов Fomitopsis, Ganoderma, Trametes.

1.2.1 Общая характеристика Fomitopsis officinalis.

1.2.2 Общая характеристика Ganoderma applanatum.

1.2.3 Общая характеристика Trametes versicolor.

1.3 Культивирование афиллофоровых грибов.

1.3.1 Питательные среды и условия культивирования высших базидиомицетов.

1.3.2 Твердофазное культивирование высших базидиомицетов.

1.3.3 Жидкофазное культивирование высших базидиомицетов.

1.4 Мировой опыт практического использования высших базидиомицетов как продуцентов биологически активных веществ.

1.4.1 Использование грибов рода Fomitopsis.

1.4.2 Использование грибов рода Ganoderma.

1.4.3 Использование грибов рода Trametes.

2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Характеристика изучаемых штаммов из родов Fomitopsis,

Ganoderma и Trametes.

2.2 Методы исследований.

2.2.1 Выделение чистых культур ксилотрофных базидиомицетов и отбор штаммов.

2.2.2 Изучение микроморфологических особенностей штаммов.

2.2.3 Изучение культуральных особенностей штаммов в различных условиях культивирования.

2.2.4 Изучение динамики накопления биомассы штаммами.

2.2.5 Изучение биохимического состава мицелия и плодовых тел базидиомицетов.

2.2.6 Подбор растительных субстратов для твердофазного культивирования.

2.2.7 Изучение токсичности и зоопатогенности.

2.2.8 Изучение химического состава культуральной жидкости.

2.2.9 Изучение антимикробной активности метаболитов и водных экстрактов из мицелия и плодовых тел базидиомицетов.

2.2.10 Изучение противоопухолевых свойств водных экстрактов из мицелия и плодовых тел базидиомицетов.

2.2.11 Статистическая обработка полученных результатов.

3 БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ШТАММОВ АФИЛЛОФОРОВЫХ ГРИБОВ FOMTOPS1S OFFICINALIS, GANODERMA APPLANA TUMИ TRAMETES VERSICOLOR

3.1 Морфологические и культуральные особенности штаммов.

3.2 Динамика накопления биомассы штаммами.

3.3 Биохимический состав мицелия и плодовых тел базидиомицетов.

3.4 Твердофазное культивирование штаммов.

3.5 Токсичность и зоопатогенность штаммов.

3.6 Антимикробная активность водных экстрактов из мицелия и плодовых тел базидиомицетов.

3.7 Противоопухолевые свойства водных экстрактов из мицелия и плодовых тел базидиомицетов.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологические особенности и биохимический состав ксилотрофных базидиомицетов Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond. et Sing., Ganoderma applanatum (Pers.) Pat. и Trametes versicolor (L.: Fr.) Pilat"

Одним из приоритетных направлений развития современных микологии и биотехнологии является разработка технологий с использованием ба-зидиальных грибов для получения биологически активных соединений, в том числе соединений, обладающих лечебными свойствами. Благодаря исследованиям последних десятилетий, стало известно, что базидиальные грибы являются продуцентами целого ряда биологически активных веществ: белков, липидов, полисахаридов, органических кислот, ферментов, витаминов и др. Многие из этих соединений являются фармакологически активными и, по сравнению с продуктами химического синтеза, менее токсичны и более эффективны при применении в медицинской практике (Петров и др., 2006). В результате разработаны многочисленные запатентованные формулы биологически активных добавок на основе плодовых тел высших грибов.

Большинство работ по поиску и выделению биологически активных веществ базидиомицетов проведены с использованием плодовых тел. Известно, что биологически активные вещества высших грибов содержатся не только в базидиомах, но и в вегетативном мицелии гриба, получаемом путем жидкофазного и твердофазного культивирования. Важным преимуществом получения биомассы мицелия с помощью биотехнологических методов являются: неограниченная возможность и безотходность производства препаратов, недефицитность сырьевых ресурсов.

Несмотря на то, что общий объем публикаций, посвященный базидио-мицетам, чрезвычайно велик, в нем мало работ по исследованию биологической активности плодовых тел в сравнении с биологической активностью вегетативного мицелия. Кроме того, в настоящее время малочисленны сведения о химическом составе мицелия и плодовых тел многих дереворазрушающих грибов, в том числе представителей из родов ¥отиор8'18, Оапос1егта и Тгат-etes и биологически активных веществах, которые в них содержатся.

Поиск и выделение новых штаммов из этих родов открывает перспективы пополнения коллекций и даст возможность их использования в биотехнологии. Кроме того, остается мало изученным вопрос о возможности использовании штаммов базидиомицетов, выделенных в Сибири и других восточных регионах.

Цели и задачи исследования. Цель работы - изучение биологических особенностей и биохимического состава мицелия и плодовых тел ксило-трофных базидиомицетов Fomitopsis officinalis, Ganoderma applanatum и Trametes versicolor и разработка условий культивирования мицелия. В связи с целью были поставлены следующие задачи:

- создание коллекции культур ксилотрофных базидиомицетов и проведение скрининга штаммов;

- изучение динамики накопления биомассы мицелия при поверхностном жидкофазном культивировании;

- изучение токсичности и зоопатогенности в отношении теплокровных животных;

- изучение противоопухолевой активности экстрактов мицелия и плодовых тел изучаемых штаммов;

Научная новизна.

1) Впервые проведен сравнительный анализ биохимического состава мицелия штаммов, выделенных из плодовых тел базидиомицетов Средней Сибири и Республика Тыва. Показано, что мицелий базидиомицетов Fomi-topsis officinalis, Ganoderma applanatum и Trametes versicolor может быть использован для получения биологически активных соединений. В мицелии Fomitopsis officinalis идентифицировано биологически активное соединение агарициновая кислота.

3) Изучена антимикробная и противоопухолевая активность экстрактов плодовых тел и мицелия отобранных штаммов базидиомицетов в отношении клеток асцитной карциномы Эрлиха.

Практическая значимость работы. Создана коллекция штаммов ба-зидиальных грибов Fomitopsis officinalis, Ganoderma applanatum и Trametes versicolor, которая может быть использована в работе по скринингу продуцентов для биотехнологических производств, перспективные штаммы Fomitopsis officinalis штамм Tyv-2006 и Ganoderma applanatum штамм G.a.-04 депонированы в ВКПМ. Разработаны оптимальные условия и среды для жид-кофазного и твердофазного культивирования мицелия базидиомицетов. Полученные данные можно использовать для разработки лабораторных регламентов культивирования мицелия перспективных штаммов Fomitopsis officinalis, Ganoderma applanatum и Trametes versicolor.

Заключение Диссертация по теме "Микология", Ковалева, Гульмира Кажгалиевна

ВЫВОДЫ

1. В результате лабораторных исследований in vitro установлены культурально-морфологические признаки и особенности роста Fomitopsis officinalis, Ganoderma applanation и Trametes versicolor. К быстро растущим отнесены штаммы Т. versicolor, медленно растущим - F. officinalis и G. applanation. По особенностям роста в различном интервале температур F. officinalis относится к стенотермным видам (25-30 °С), a G. applanatum и Т. versicolor (15-25 °С) к эвритермным. Оптимальным рН для роста всех изучаемых штаммов является 5,5-6,5. По показателям ростового коэффициента и скорости роста проведен отбор продуктивных штаммов Fomitopsis officinalis Tyv-2006 (ВКПМ F-968) и Ganoderma applanatum G.a.-04 (ВКПМ F-983).

2. Относительное содержание белка в мицелии грибов F. officinalis и Т. versicolor увеличивается в процессе культивирования; доля общего белка в биомассе мицелия штамма Tyv-2006 F. officinalis в 10 раз превосходит его содержание в плодовых телах. Содержание белка в мицелии грибов G. applanatum и Т. versicolor при культивировании изменяется незначительно; доля общего белка в мицелии штамма Т. versicolor почти в два раза выше, чем в плодовых телах. В мицелии штамма G.a.-04 G. applanatum содержание белка на 10 % выше, чем в плодовых телах.

Качественный состав аминокислот белка мицелия базидиомицетов характеризуется преобладанием незаменимых аминокислот изолейцина, лейцина и тирозина. В плодовых телах базидиомицетов G. applanatum и Т. versicolor — обнаружены - лейцин и тирозин, а в плодовых телах F. officinalis -изолейцин, лейцин, тирозин, треонин и валин.

3. При культивировании изученных грибов возрастает количество трудногидролизуемых (37,63±0,98) и легкогидролизуемых (13,14±0,19) полисахаридов у штамма F. officinalis, у штаммов G. applanatum и Т. versicolor эти различия не обнаружены. Наибольшее количество легко- и трудногидролизуемых углеводов содержат плодовые тела гриба Т. versicolor, плодовые тела базидиомицетов G. applanatum и F. officinalis характеризуются более низким содержанием общего количества углеводов, составляющее соответственно - 50,7, 23,2 и 12,63 %.

4. В процессе культивирования всех изученных штаммов изменяется общее содержание липидов в мицелии, причем в составе общей фракции мицелия различного возраста преобладали нейтральные липиды. Содержание липидов, как в мицелии, так и в плодовых телах базидиомицетов G. applanatum и Т. versicolor различалось незначительно, их соотношение составило 1:1. Доля общих липидов в плодовых телах гриба F. officinalis в 4 раза выше, чем в биомассе мицелия. В липидной фракции мицелия и плодовых тел F. officinalis идентифицирована агарициновая кислота.

6. Штаммы базидиомицетов F. officinalis, G. applanatum и Т. versicolor могут быть использованы в качестве продуцентов биологически активных веществ, обладающих антимикробной активностью в отношении грамотрицательных и грамположительных бактерий. Антимикробной активностью в отношении грамположительных стафилококков и отличались водные экстракты из биомассы мицелия и плодовых тел гриба Т. versicolor и культуральная жидкость штамма Tyv-2006 F. officinalis. Противокандидозной активностью обладали водные экстракты мицелия Т. versicolor и G. applanatum. Водный экстракт из мицелия штамма Tyv-2006 F. officinalis проявлял избирательное действие в отношении микроорганизмов.

7. Водные экстракты мицелия всех изученных штаммов и культуральные жидкости, содержащие продукты метаболизма штаммов G. applanatum и Т. versicolor, не являются токсичным для теплокровных животных, тогда как метаболиты культуральной жидкости штамма F. officinalis высокотоксичны.

8. В опытах in vitro установлено, что водные экстракты из мицелия и плодовых тел гриба Т. versicolor оказывают прямое цитопатическое воздействие на опухолевые клетки асцитной карциномы Эрлиха, тогда как экстракты из мицелия штаммов G. applanatum и F. officinalis — длительное цитопатическое действие. В опытах in vivo наиболее выраженное достоверное торможение роста опухоли оказывает водный экстракт из мицелия лиственничной губки (F. officinalis).

9. Для культивирования мицелия штаммов F. officinalis и Т. versicolor .разработаны оптимальные композиции растительных субстратов с использованием отходов промышленности лесоперерабатывающего комплекса. Лучшим субстратом для твердофазного культивирования мицелия исследованных штаммов базидиомицетов G. applanatum, F. officinalis и Т. versicolor является измельченное зерно пшеницы. Полученная биомасса базидиомицетов может быть использована для получения биологически активных веществ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ковалева, Гульмира Кажгалиевна, Красноярск

1. Автономова, A.B. Водорастворимые полисахариды мицелия Gano-derma lucidum: биотехнологии получения и противоопухолевые свойства // A.B. Автономова, И.В. Белицкий, Е.Б. Исакова и др. / Успехи медицинской микологии. 2006. - Т. VII - С. 217-219.

2. Автономова, A.B. Оптимизация состава питательной среды для погруженного культивирования Ganoderma lucidum (Curt.: Fr.) P. Karst // A.B. Автономова, Л.М. Краснопольская, В.Н. Максимов / Микробиология. — 2006. -Том 75, №2.-С. 186-192.

3. Апрышко, Г.Н. Противоопухолевые препараты из морских организмов: научный обзор / Г.Н. Апрышко, М.В. Нехорошее. М.: Союзмедин-форм, 1989.-59 с.

4. Бабицкая, В.Г. Грибы — эффективные деструкторы лигноцеллюлоз-ных субстратов: их морфологическая и физиолого-биохимическая характеристика // В.Г. Бабицкая / Микология и фитопатология. 1993 — Т. 27, № 5. - С. 38-44.

5. Бабицкая, В.Г. Новые биологически активные добавки на основе глубинного мицелия базидиальных грибов // В.Г. Бабицкая, В.В. Щерба, Т.С. Гвоздикова / Успехи медицинской микологии. — 2006. — Т.7. С. 178-180.

6. Бабицкая, В.Г. Влияние условий глубинного культивирования лекарственного гриба G. lucidum на образование полисахаридов // В.Г. Бабицкая, В.В. Щерба, Т.А. Пучкова и др. / Биотехнология. 2007. - № 6. — С. 3441.

7. Бадалян, С.Н. Антибактериальная активность культуральной жидкости некоторых базидиомицетов // С.Н. Бадалян, Н.Г. Гарибян / Современная микология России. Тез. докл. I Конгр. микологов России. М: Национальная Академия Микологии. — 2002. — С. 249.

8. Бадалян, С.Н. Исследование антиоксидантной активности некоторых базидиальных макромицетов // С.Н. Бадалян, A.B. Гаспарян, Н.Г. Гарибян / Микология и фитопатология. 2003 - Т. 37, № 5. — С. 63-67.

9. Беккер, З.И. Физиология и биохимия грибов / З.И. Беккер. М.: Изд-во МГУ, 1988.-277 с.

10. Ю.Белова, Н.В. Перспективы использования биологически активных соединений высших базидиомицетов в России // Н.В. Белова / Микология и фитопатология. 2004. - Т. 38, №. 2. - С. 1-4.

11. П.Билай, В.И. Методы экспериментальной микологии / В.И. Билай. — Киев: Hayкова думка, 1973. —241 с.

12. Бисько, H.A. Оценка иммунологического статуса больных при применении БАДов серии «Микосвит» // H.A. Бисько, Е.Ю. Шевчук, Н.Ю. Ми-тропольская и др. / Успехи медицинской микологии. — 2006. Т. VII. — С. 180-182.

13. Н.Битуева М;В., Мангутова Е.В. Методические указания по выполнению лабораторных работ к курсу «Современные методы исследований в биохимии». Улан-Удэ: Изд-во ВСГТУ, 2006. - 74 с.

14. Бондарцев, A.C. К естественной системе трутовых грибов // A.C. Бондарцев, P.A. Зингер / Советская ботаника; № 1, 1943 - с. 29-43.

15. Бондарцев, A.C. Руководство по сбору высших грибов для научного их изучения / A.C. Бондарцев, P.A. Зингер; М.-Л.: Изд-во АН СССР, 1950. -45 с.

16. Бондарцев, A.C. Трутовые грибы европейской части России и Кавказа/A.C. Бондарцев. М.-Л-Изд-во АН: СССР, 1953. - 1107 с.

17. Бондарцева, М.А. Обзор порядка Aphyllophoralles Ленинградской области / Автореф. дисс. канд. биол. наук. Ленинград, 1963. —21 с.

18. Бондарцева, М.А. Семейсгва альбатрелловые, апорпиевые, болетоп-сиевые,бондарцевиевые, ганодермовые, кортициевые, лахнокладиевые, по-липоровые, пориевые, ригидопоровые, феоловые, фистулиновые / М.А. Бон-дарцева.-Спб.: Наука, 1998. -391 с.

19. Бриан, Л.Е. Бактериальная резистентность и чувствительность к хи-миопрепаратам / Л.Е. Бриан. М.: Изд-во «Медицина», 1984. - 272 с.

20. Бузун, Г.А. Определение белка в растениях с помощью амидо-черного // Г.А. Бузун, К.М; Джемухадзе, Л.Ф. Милешко / Физиология растений. -1982. -Вып. 1,- С. 198-204.

21. Бурмистрова, А.Л. Антибиотики и антибиотикорезистентность. Проблемы и пути решения / А.Л. Бурмистрова, Л.И. Бахарева, Н;Э. Шафикова. — Челябинск: Челябинский Дом печати, 2002. 178 с.

22. Бурова, Л.Г. Экология грибов макромицетов / Л.Г. Бурова. — М.: Наука, 1986.-221 с.

23. Бурова, Л.Г. Загадочный мир грибов / Л.Г. Бурова. М.: Наука, 1991.-93 с.

24. Бухман, В.М. Изучение противоопухолевых свойств мицелия лекарственного гриба Ganoderma lucidum {Curt.: Fr.) Karst, в опытах in vivo II В.М. Бухман, Е.Б. Исакова, A.B. Антимионова, И.В. Белицкий / Успехи медицинской микологии. 2001. — Т. 1. — С.245-247.

25. Вассер, С.П. Принципы ботанической номенклатуры и ее применение в связи с новым международным кодексом ботанической номенклатуры

26. Ващук, JI.H. Леса и лесное хозяйство Иркутской области / JI.H. Ва-щук, JI.B. Попов, В.В. Телятьев. Иркутск: Сибирь, 1997. - 288 с.

27. Великанов, JLJI. Некоторые вопросы экологии грибов (пути формирования основных экологических групп грибов, их место и роль в биогеоценозах) // JLJI. Великанов, Г.Д. Успенская / Итоги науки и техники: Ботаника. М.: ВИНИТИ, 1980. Т.4. - С. 49-105.

28. Вовк, А.Д. Клиническая эффективность микотона при лечении хронических гепатитов С // А.Д. Вовк, И.В. Соляник, О.Ф. Сенюк и др. / Успехи медицинской микологии. 2006. - Т. VII - С. 183-185.

29. Волова, Т.Г. Биотехнология / Т.Г. Волова. Новосибирск: СО РАН, 1999.-252 с.

30. Волчатова, И.В. Использование грибов для удаления древесных остатков в условиях урбанизированных экосистем // И.В. Волчатова, С.А. Медведева / Успехи медицинской микологии. 2006. - Т. VII - С. 234-235.

31. Воробьев, Г.И. Лесная энциклопедия / Г.И. Воробьев, H.A. Анучин, В.Г. Атрохин. М.: Сов. энциклопедия, 1985. - 563 с.

32. Гаврилин, М.В. Идентификация агарициновой кислоты методом инфракрасной спектроскопии // М.В. Гаврилин, В.Г. Беликов, А.Ю Айрапе-това, П.А. Цуканова / Вестник ВГУ. Серия: химия, биология, фармация. — 2006.-№. 2.-С. 231-232.

33. Гандбаров, Х.Г. Эколого-физиологические особенности деревораз-рушающих высших базидиальных грибов //Х.Г. Гандабаров. Баку: ЭЛМ, 1990. - 197.С.

34. Гарибова, Л.В. Грибы. Энциклопедия природы России / Л.В. Гари-бова, И.И. Сидорова. М.: Изд-во «ABF», 1999. - 352 с.

35. Гарибова, Л.В. Обзор и анализ современных систем грибов / Л.В. Гарибова. Петрозаводск: Карельский научный центр РАН, 1999. — 28 с.

36. Гарибова, Л.В. Основы микологии. Морфология и систематика грибов и грибоподобных организмов / Л.В. Гарибова, С.Н. Лекомцева. — М.: Товарищество научных изданий КМК, 2005. 207 с.

37. Гвоздикова, Т.С. Оценка возможности использования базидиальных грибов в качестве источников биоактивных липидных компонентов // Т.С. Гвоздикова, Т.В. Черноок, Т.В. Филимонова и др. / Успехи медицинской микологии. 2007. - Т. 9.-С. 151-154.

38. Горленко, М.В. Грибы СССР / М.В. Горленко, М.А. Бондарцева, JI.B. Гарибова, И.И. Сидорова, Т.П. Сизова. М.: Мысль, 1980. - 303 с.

39. Горленко, М.В. Все о грибах / М.В. Горленко, JI.B. Гарибова, И.И. Сидорова и др. М.: Лесная промышленность, 1985. - 280 с.

40. Горленко, М.В. Макромицеты Звенигородской биологической станции МГУ / М.В. Горленко, И.И. Сидорова, И.Г. Сидорова. М.: МГУ, 1989. -82 с.

41. Горовой, Л.Ф. Шляпочные грибы перспективный источник лечебных препаратов и биологически активных добавок // Л.Ф. Горовой / Успехи медицинской микологии. — 2006. — Т.7. — С. 276-279.

42. Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. — М.: Медицина, 1989. Вып. 2. — 400 с.

43. Грюнерт, Г. Грибы / Г. Грюнерт, Р. Грюнерт. — М.: Астрель, 2001. —288 с.

44. Гусакова, С.Д. Липофильные экстракты в фитотерапии и фитокос-метике // С.Д. Гусакова, Ш.Ш. Сагдулаев, З.А. Хушбакова / Химия природных соединений. 1998. - №4. - С. 437-448.

45. Даниляк, Н.И. Ферментные системы высших базидиомицетов / Н.И. Даниляк, В.Д. Семичаевский. Киев: Наукова думка, 1989. - 279 с.

46. Денисова, Н.П. Лечебные свойства грибов. Этномикологический очерк / Н.П. Денисова. Спб: СПГМУ, 1998. - 60 с.

47. Дженнингс, В. Подготовка образцов для газохроматографического анализа / В. Дженнингс, А. Рапп. — М.: Мир, 1986. 166 с.

48. Дудка, И.А. Методы экспериментальной микологии / И.А. Дудка, С.П. Вассер. Киев: Наукова думка, 1982. - 552 с.

49. Дудка, И.А. Грибы: справочник миколога и грибника / И.А. Дудка, С.П. Вассер. Киев: Наукова думка, 1987. - 535 с.

50. Дьяков, Ю.Т. Введение в микологию и альгологию / Ю.Т. Дьяков. -М.: Изд-во МГУ, 2000. 190 с.

51. Егоров, Н.С. Основы учения об антибиотиках / Н.С. Егоров. — М.: Изд-во МГУ, 1994. 512 с.

52. Егоров, Н.С. Руководство к практическим занятиям по микробиологии / Н.С. Егоров. М.: Изд-во МГУ, 1995. - 224 с.

53. Ершова, Е.Ю. Поиск продуцентов антибиотиков грибного происхождения эффективных в отношении метициллинрезистентных стафилококков // диссертация на соискание степени к.б.н., Москва 2003.

54. Ефименко, О.М. Изучение кислотного состава трутового гриба Fomitopsis officinalis (Vill.) Bond, et Sing. // О.М. Ефименко, JI.B. Агеенкова / Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. М.-Л.: Наука, 1965. - С. 98-105.

55. Жданова, H.H. Экстремальная экология грибов в природе и эксперименте / H.H. Жданова, A.M. Василевская. Киев: Наукова думка, 1982. — 168 с.

56. Инжеваткин, Е.В. Практикум по экспериментальной онкологии на примере асцитной карциномы Эрлиха: методическая разработка / Е.В. Инже-ваткин. — Красноярск: КГУ, 2004. — 10 с.

57. Камзолкина, О.В. Микроморфология и ультраструктура агарикоид-ных грибов на разных стадиях жизненных циклов. Автореферат на соискание ученой степени д.б.н., Москва, 2005.

58. Кейтс, М. Техника липидологии. Выделение, анализ и идентификация липидов / М. Кейтс. М.: Мир, 1975. - 322с.

59. Климко, Н.М. Кандидурия и кандидоз мочевыводящих путей: врачебная тактика // Н.М. Климко / Инфекции и антимикробная терапия Т. 4, № 2.-2002.-С. 71-74.

60. Кобзарь, А. И. Прикладная математическая статистика / А.И. Кобзарь. М.: ФИЗМАТЛИТ, 2006. - 816 с.

61. Кожемякина, Н.В. Углеводные компоненты мицелия G. applanatum и их противоопухолевая активность // Н.В. Кожемякина, С.В. Турина, Е.П. Ананьева / Успехи медицинской микологии. 2006. — Т. VII. - С. 164-165.

62. Крапивина, Е.А. Особенности развития ксилотрофных базидиоми-цетов в лесных экосистемах западной части Центрального Кавказа // Е.А. Крапивина, С.Х. Шхагапсоев / Успехи медицинской микологии. 2006. — Т. VII. - С. 286-288.

63. Краснопольская, Л.М. Грибы класса Basidiomycetes — источники лекарственных веществ // Л.М. Краснопольская / Современные проблемы микологии, альгологии и фитопатологии: сборник статей. М.: МГУ ИД «Муравей», 1998.-С. 230-232.

64. Краснюк, И.И. Фармацевтическая технология: Технология лекарственных форм / И.И. Краснюк, С.А. Валевко, Г.В. Михайлова. М.: Академия, 2006. - 592 с.

65. Круподерова, Т.А. Лекарственные свойства грибов рода Ganoderma Р. Karst // Т.А. Круподерова / Успехи медицинской микологии. 2006. - Т. VII. - С. 288-290.

66. Круподерова, Т.А. Физиологические характеристики штаммов G. applanatum (Pers.: Wallr.) Pat и G. lucidum (Curt.: Fr.) P. Karst II Т.А. Круподерова / Успехи медицинской микологии. 2007. — Т. IX. — С. 243-245.

67. Кьосев, П.А. Полный справочник лекарственных растений / П.А. Кьосев. М.: ЭКСМО-Пресс, 2001. - 992 с.

68. Лазарева, Н.В. Вредные вещества в промышленности. Справочник для химиков, инженеров и врачей / Н.В. Лазарева, Э.Н. Левина. Л.: Изд-во Химия, 1976. - Том 2. - с. 413-417.

69. Маслова, Р.А. Свободные и связанные аминокислоты некоторых афиллофоровых грибов // Р.А. Маслова / Микология и фитопатология. — 1978.-Т. 12, № 4. С. 292-296.

70. Меркулов, В.В. Основы патогистологической техники / В.В. Меркулов. М.: Медицина, 1984. - 368 с.

71. Мурашкинский, К.Е. Горно-таежные трутовики Сибири // К.Е. Му-рашкинский / Тр. Омск. с.-х. инст. им. Кирова, XVII, 1939. с. 75-108.

72. Мюллер, Э. Микология / Э. Мюллер, В. Леффлер. М.: Мир, 1995.343 с.

73. Негруцкий, С.Ф. Морфологические и физиолого-биохимические особенности гетеро- и гомокарионов Fomitopsis annosa (Fr.) Karst. // С.Ф. He-груцкий / Микология и фитопатология. 1981.- Т. 15, № 3. - С. 517-525.

74. Непокоичицкий, Г.А. Большая энциклопедия лекарственных растений / Г.А. Непокоичицкий, Г.В. Балакирев, И.А. Губанов, Е.М. Козина. М.: АИС, 2006. - 960 с.

75. Низковская, О.П. К сравнительной физиологической характеристике грибов из порядков Aphyllophoralles и Agaricales II О.П. Низковская, Н.М. Милова / Кормовые белки и физиологически активные вещества для животноводства. М.-Л.: Наука, 1965. - С. 6-11.

76. Низковская, О.П. Противоопухолевые свойства высших базидиоми-цетов // О.П. Низковская / Микология и фитопатология. 1983- Т. 13, № 3. — С. 243-247.

77. Ооржак, У.С. Состав минеральных элементов трутовика лекарственного в процессе развития // У.С. Ооржак, В.М. Ушанова, С.М. Репях / Вестник СибГТУ. 2003. - №1. - С. 76-78.

78. Ооржак, У.С. Белковые вещества и витамины гриба Fomitopsis officinalis (Will.) Bond, et Sing / У.С. Ооржак, В.М. Ушанова // Хранение и переработка сельхозсырья. 2004. -№11. — С.52-53.

79. Ооржак У.С. Научно-практические аспекты рационального использования плодовых тел Fomitopsis officinalis (Will.) Bond, et Sing. / Автореф. дисс. канд. биол. наук. Красноярск, 2006. — 18 с.

80. Осадчая, А.И. Биотехнологическое использование отходов растениеводства / А.И. Осадчая, Л.И Дудник, В.Ф. Семенов и др. Киев: Наукова думка, 1990.-96 с.

81. Осипова Н.П. Биологические особенности микрофлоры при гнойных осложнениях острого панкреатита / Дис. на соискание уч. степени к.б.н., Красноярск, 2004.

82. Пармасто, Э.Х. Распространение афиллофоровых грибов базиди-оспорами // Э.Х. Пармасто / Изв. АН Эст. ССР, биология. 1970. - Т. 19, №4.-С. 89-102.

83. Патент GB1331513, 1973-09-26 Polisaccharides having an anticar-cinogenic effect and a method of producing them from species of basydiomycetes /

84. Ohtsuka, S. Ueno, C. Yoshikumi; заявитель и патентообладатель Kureha chemical ind Co Ltd

85. Патент 6645502 США, МПК7 A 01 N 65/00, A 61 К 35/84. Revlon Consumer Products Corp. / I. Sandewicz, J. Russ, V. Zhu. № 09/953758; заявл. 17.09.2001; опубл. 11.11.2003; НПК 424/195.15.

86. Патент 2257222 RU, МПК7 А61К35/84. Комплексная переработка гриба трутовик лекарственный (Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond, et Sing) / У.С. Ооржак, В.М. Ушанова, В.И. Канзай. заявл. 02.07.04 г.; опубл. 27.07.05 г., бюллетень №21.

87. Петров, П.Т. Новые лекарственные средства на основе биологически активных соединений мицелиальных грибов // П.Т. Петров, А.Д. Скрипко, К.В. Литвинова и др. / Успехи медицинской микологии. 2006. - Т. 7. - С. 198-199.

88. Плешков, Б.П. Практикум по биохимии растений / Б.П. Плешков М.: Колос, 1976.-310 с.

89. Поединок, H.JT. Биосинтетическая активность некоторых высших лекарственных грибов после световых воздействий // H.JL Поединок, О.В. Ефременкова, О.Б. Михайлова, A.M. Негрейко / Успехи медицинской микологии. 2007. -Т. IX. - С. 176-178.

90. Проценко, В.А. Тканевые базофилы и базофильные гранулоциты крови // В.А. Проценко, С.И. Шпак, С.М. Доценко / М.: Медицина, 1987. 245 с.

91. Псурцева, Н.В. Эколого-таксономические предпосылки получения плодовых тел в культутре макромицетов, представляющих интерес для медицины // Н.В. Псурцева, A.A. Кияшко, Н.В. Шахова / Успехи медицинской микологии. 2007. - Т. IX. — С. 254-258.

92. Пучкова, Т.А. Ксилотрофные грибы родов Ganoderma и Lentinus — продуценты полисахаридов // Т.А. Пучкова, Д.А. Смирнов / Успехи медицинской микологии. 2006. - Т. VII. - С. 297-300.

93. Рабинович, M.JI. Теоретические основы биотехнологии древесных композитов. Древесина и разрушающие ее грибы / M.JI. Рабинович, A.B. Болотова, В.И. Кондращенко. М.: Наука, 2001. - 264 с.

94. Разин, Б.В. Индукция блеббинга в клетках асцитной аденокарцино-мы Эрлиха при гипертермии in vitro II Б.В. Разин, E.B. Инжеваткин, Ю.Г. Беги-шева/Бюлл. эксперим. биологии и медицины.— 2001. -Т. 131, № 3. — С.319-320.

95. Реброва, Р.Н. Грибы рода Candida при бактериальных инфекциях / И.А. Реброва. М.: Медицина, 1979. - 256 с.

96. Решетникова, И.А. Деструкция лигнина ксилотрофными макро-мицетами. Накопление селена и фракционирование его изотопов микроорганизмами / И.А. Решетникова. М.: Фактор, 1997 — 197 с.

97. Рипачек, В. Биология дереворазрушающих грибов / В. Рипачек. — М.: Лесная промышленность, 1967. — 276 с.

98. Рязанова, Т.В. Химия древесины: учебное пособие для студентов / Т.В. Рязанова, Н. А. Чупрова, Е. В. Исаева. — Красноярск: КГТА, 1996. — 358 с.

99. Сафонов, М.А. Трутовые грибы Оренбургской области: Монография / М.А. Сафонов. Оренбург: Изд-во ОГПУ, 2000. - 152 с.

100. Сидоренко, М.Л. Оптимизация среды для глубинного культивирования мицелия Fomitopsis officinalis II М.Л. Сидоренко / Успехи медицинской микологии. 2006. - T. VII. - С. 304-306.

101. Сидоренко, М.Л. Биотехнология трутовика лекарственного // М.Л. Сидоренко / Мат. II Междунар. научно-технич. конф. молод, уч. «Актуальные проблемы технологии живых систем» — Владивосток, 2007. — С. 7376.

102. Сидоренко, C.B. Исследования распространения антибиотикоре-зистентности: практическое значение для медицины // C.B. Сидоренко / Инфекции и антимикробная терапия. — 2002. Т. 4, № 2. - С. 38-41.

103. Сидорова, И.И. Современные представления о филогении и систематике грибов // И.И. Сидорова, Тарасов К.Л. / Итоги науки и техники: Ботаника. М.: ВИНИТИ, 1980. Т.4. С. 3-36.

104. Скворцова, М.М. Иммунотропные свойства Б АД «Трамелан». Биохимические, медико-биологические и клинические исследования // М.М. Скворцова, Е.С. Горшина / Успехи медицинской микологии. -2006 T. VII. — С. 206-209.

105. Смирнов, Д.А. Фагоцитоз-стимулирующий эффект полисахаридов глубинной культуры базидиомицетов // Д.А. Смирнов, В.Г. Бабицкая, Т.А. Пучкова / Успехи медицинской микологии. 2006. — T. VII. - С. 252254.

106. Смирнов, Д.А. Влияние полисахаридов глубинных культур Gan-oderma lucidum, Lentinus edodes и Crinipellis schevczenkovi на фагоцитарную активность нейтрофилов II Д.А. Смирнов, В.Г. Бабицкая, А.Н. Капич и др. / Биотехнология. 2007. - №1. - С. 47-51.

107. Спиридонова, В.А. Изучение иммуномодулирующих и противоопухолевых свойств высших грибов // В.А. Спиридонова, A.B. Панченко, H.H. Петрищев / Мат. Междунар. школы-конференции «Генетика микроорганизмов и биотехнология» — Москва-Пущино, 2006. С. 170-171.

108. Стахеев, И.В. Биотехнология малотоннажного производства микробного протеина // И.В. Стахеев, Э.И. Коломиец, H.A. Здор / Минск: Наука и техника, 1991.-264 с.

109. Сушинская, Н.В. Получение и использование в медицине меланинов из трутовых грибов // Н.В. Сушинская, В.Ш. Курченко, Л.Ф. Горовой и др. / Успехи медицинской микологии. — 2006. T. VII - С. 255-259.

110. Телятьев, В.В. Целебные клады: растения, продукты животного и минерального происхождения Центральной Сибири и их лечебные свойства / В.В. Телятьев. Иркутск: Омега, 1991. - с. 19-20.

111. Топчий, М.К. Руководство к практическим занятиям по вирусологии / М.К. Топчий, Н.П. Корнюшенко // Киев: КГУ, 1967. с. 77-79.

112. Ушанова, В.М. Основы научных исследований. Часть 2. Контроль качества и экстрагирование растительного сырья / В.М. Ушанова, О.И. Лебедева, А.Н. Девятловская. Красноярск: СибГТУ, 2004. - 168 с.

113. Феофилова, Е.П. Клеточная стенка грибов / Е.П. Феофилова. — М.: Наука, 1983.-248 с.

114. Феофилова, Е.П. Каротиноиды грибов: биологические функции и практичесоке использование // Е.П. Феофилова / Прикладная биохимия и микробиология. 1994. - Т.30, № 2. - С. 181-195.

115. Феофилова, Е.П. Биотехнология мицелиальных грибов: достижения и перспективы развития // Е.П. Феофилова / Современная микология России. Тез. докл. I конгр. микологов России. М.: Национальная академия микологии. - 2002. - С. 294-295.

116. Феофилова, Е.П. Ликопин грибов: биотехнология получения и перспективы использования в медицине / Е.П. Феофилова, В.М. Терешина, А.С. Меморская и др. // Микробиология, 2006. Т.75, № 6. - С. 725-730.

117. Феофилова, Е.П. Новые биотехнологии получения биологически активных веществ из мицелиальных грибов // Е.П. Феофилова / Успехи медицинской микологии. — 2007. Т. IX. - С. 195-196.

118. Филиппова, И.А. Действие БАД «Шиитаке Фунго-ШИ» на основе грибов Lentinus edodes, (производитель ООО «Шиитаке») на рост подкожно перевитой аденокарциномы Эрлиха // И.А. Филиппова, Разин А.Н. / Успехи медицинской микологии. -2006 — Т. 7. — С. 216-219.

119. Частухин, В.Я. Биологический распад и ресинтез органического вещества в природе / В.Я. Частухин, М.А. Николаевская. — М.-Л.: Наука, 1969.-326 с.

120. Чхенкели, В.А. Антимикробное действие дереворазрушающего гриба Coriolus pubescens (Shum.: Fr.) Quel. II В.А.Чхенкели, Т.И. Никифорова, Р.Г. Скворцова / Микология и фитопатология. — 1998. — Т. 32, № 1.- С. 69-71.

121. Чхенкели, В.А. Противотуберкулезная активность базидиомицета Coriolus pubescens (Shum.: Fr.) Quel, и препарата, получаемого на его основе // В.А.Чхенкели, Н.А. Шниль / Сибирский медицинский журнал — 2005. — Т.50, № 1.-С. 67-71.

122. Чхенкели, В.А. Биоэкологические аспекты изучения и использования биологически активных веществ дереворазрушающего гриба Coriolus pubescens (Shum.: Fr.) Quel. Автореф. на соискание уч. степени д.б.н. Иркутск, 2006.

123. Шариков, A.M. Бактерицидная активность метаболитов гриба Fomitopsis officinalis в отношении условно-патогенных бактерий // A.M. Ша

124. Шиврина, А.Н. Биологически активные вещества высших грибов / А.Н. Шиврина. -М.-Л.: Наука, 1965. 199 с.

125. Шиврина, А.Н. Пути развития отечественной биохимии высших грибов за период с 1917 по 1967 г.г. // А.Н. Шиврина / Микология и фитопатология. -1967.-Т. 1, № 5. С. 417-421.

126. Шиврина, А.Н. Высшие базидиальные грибы как источник эрго-стерина // А.Н. Шиврина, Е.Г. Платонова / Микология и фитопатология. — 1968.- Т.2,№1.-С. 65-69.

127. Шиврина, А.Н. Биосинтетическая деятельность высших грибов / А.Н. Шиврина, О.П. Низовская. М.-Л.: Наука, 1969. - 241 с.

128. Шишкина, Л.Н. Антиоксидантная активность липидов ксило-трофных базидиомицетов // Л.Н. Шишкина, А.Н. Капич / Успехи медицинской микологии. 2006. - T. VII. - С. 262-263.

129. Щерба, В.В Углеводы глубинного мицелия ксилотрофных базидиомицетов // В.В. Щерба, В.Г. Бабицкая / Прикладная биохимия и микробиология. 2004. - Т.40, № 6. - С. 634-638.

130. Щерба, В.В. Грибные метаболиты — основа функциональных препаратов нового поколения // В.В. Щерба / Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы: Мат. III Междунар. конференции. — Мн.: БГУ, 2005. Ч. 2. - С. 175-180.

131. Щерба, В.В Лечебно-профилактические препараты многофункционального назначения на основе комплекса соединений лекарственных грибов // В.В. Щерба, Л.В. Пленина, Т.С. Гвоздикова и др. / Успехи медицинской микологии. 2007. - T. IX. - С. 204-206.

132. Яковлев, В.П. Перспективы создания и внедрения новых антимикробных препаратов // В.П. Яковлев, C.B. Яковлев / Инфекции и антимикробная терапия. 2002. - Т. 4, № 2 - С. 46-49.

133. Ячевский A.A. Определитель грибов. Таблицы для определения родов грибов. М.: Сельхозгид, 1897. 240 с.

134. Ячевский A.A. Определитель грибов. Т.1. 1913. С. 1-934.

135. Ainsworth, D.C. Ainsworth and Bisby's dictionaiy of the fungi 9th edition / D.C. Ainsworth, Hawksworth D.L., Sutton B.C. Surrey: C.A.B, 2001. - 655 p.

136. Bondarzew A.S., Singer R. Zur systematic der Polyporaceen // Ann. Mycol. 1941. vol.39, N.l. -P. 43-65.

137. Bourdot H., Galzin A. Hymenomycetes de France. Paris, 1928. P. 1761.

138. Bresadola, J. Iconographia mycologica / J. Bresadola. Mediolani, XIX-XX, 1931.-tab. 901-1000; XXI, 1932.-tab. 1001-1050.

139. Brian, P.W. Antibiotics produced by mushrooms // P.W. Brian / Bot. Rev., V. 17, 1951.-P. 357-430.

140. Cao, Q.Z. Antitumor and antiangiogenic activity of Ganoderma lucidum polysaccharides peptide // Q.Z. Cao, Z.B. Lin / Acta Pharmacological Sinica, V. 25, №6, 2004. P. 833-838.

141. Chlebicki, A. Fomitopsis officinalis on Siberian larch in the Urals I I A. Chlebicki, V.A. Mukhin, N. Ushakova / Mycologist, V. 17, 2003. P. 116-120.

142. Chung, W.T. Effect of mycelial culture broth of Ganoderma lucidum on the growth characteristics of human cell lines // W.T. Chung, S.H. Lee, J.D. Kim / Journal of Bioscience and Bioengineering, V.92, №6, 2001. P. 550-555.

143. Corner E.J.H. The fruit-body of Polystictus xanthopus Fr. // Ann. Bot. 1932. Vol. 46-P. 71-111.

144. Cui, J. Polysaccharopeptides Coriolus versicolor: physiological activity, uses and production // J. Cui, Y. Chisti / Biotechnology advances V. 21, 2003. -P. 109-122.

145. Donk M.A. Revision der Niederlandischen Homobasidiomycetae — Aphyllophoraceae, II // Medd. Bot. Mus. Univ. Utrecht. 1933. N 9. 278 p.

146. Donk M.A. Notes on Malesian Fungi. 1 // Bull. Bot. Gdns, Buiten-zorg. 1948. Ser. 3, vol. 17, N 4. P. 473-483.

147. Donk M.A. A conspectus of the families of Aphyllophoralles // Per-soonia. 1964. vol. 3, pt. 2. P. 199-324.

148. Donk M.A. Progress in the study of the classification of the higher Basidiomycetes // Ed. R.H. Petersen. Evolution in the higher Basidiomycetes. Knoxville. 1971. P. 3-24.

149. Eo, S.K. Antiviral activities of various water and methanol soluble substances isolated from Ganoderma lucidum II S.K. Eo, Y.S. Kim, C.K. Lee. S.S. Han / J. of Ethnopharmacology, V. 68, 1999. P. 129-136.

150. Fries E.M. Systema mycologicum. Lund, 1821-1822. Vol. 1-2. 520 p.

151. Fries E.M. Elenchus fungorum sistens Commentarium in Systema Mycologicum. 1. Gryphiswaldiae. 1828. 238 p.

152. Fries E.M. Epicrisis systematis mycologici, seu synopsis Hymenomy-cetum. Upsala, 1836-1838. 610 p.

153. Fries E.M. Hymenomycetes Europaei sive epicriseos systematis my-cologii. Upsala, 1874. 756 p.

154. Gao Y. A Phase I/II Study of a Ganoderma lucidum (Curt.: Fr.) P. Karst. (Ling Zhi, Reishi Mushrooms) extract in Patients with Chronic Hepatitis В // Y. Gao, G. Chen / International Journal of Medicinal Mushrooms V. 4, 2002. -P.321-327.

155. Gillet C.C. Les champignons gui croissant en France. Paris, 18741878. P. 1-828.

156. Hobbs C. Medicinal mushrooms: an Exploration of Tradition, Healing and Cultures. Interweave press, 1995. 251 p.

157. Huang, L.Y. New fungal metabolites as potential antipercholesterlem-ics and anticancer agents / Huang, L.Y., Linghan R.V. // Can. J. Bot., V. 73, №.1, 1995-P. 898-906.

158. Iarosz, W.A. Effect of saponin from Midicado sativa extract on biological activity of Trametes versicolor II W.A. Iarosz, E. Malarczyk, M. Iarzysta / J. New Horizon of Bioscience in Forest products Field, 2003. P. 213-220.

159. Jeong, Y.T. Ganoderma applanatum: a promising mushroom for antitumor and immunomodulating activity // Y.T. Jeong, B.K. Yang, S.C. Jeong, S.M. Kim, C.H. Song / Phytother Res., V. 22, № 5, 2008 P.614-619.

160. Jiang, J. The anti-tumor activity and MDR reversal properties of constituents from Inonotus obliquus II J. Jiang, Y. Dou, Y. Feng, M. Bondartseva, T. Gao, F. Chen // Микология и фитопатология. — 2007. Том 41, выпуск 5 — с. 455-460.

161. Karsten P.A. Enumeratio Boletinearum, Polyperearum, Hydnearum, -Thelephorearum et Clavariarum fennicarum, systemate novo dispositarum // Revue Mycol. 1881. Vol. 3, f. 9. P. 16-19.

162. Killermann S. Pilze aus Bayern. Denksehr. Bayer. Bot. Gesellsch. in Regensburg, IX, 1922.-P. 1-134.

163. Kim, K. Evaluation of the monophyly of Fomitopsis using parsimony and MCMC methods // K. Kim, Y. Yoon, H. Jung / Mycologia, V. 97, № 4, 2005. -P. 812-822.

164. Kotiranta, H. Polypore (Aphyllophoralles, Basydiomycetes) Studie in Russia. 1. South Ural // H. Kotiranta, V.A. Mykhin, N. Ushacova, Y. Dai / Ann. Bot. Fennicci, V. 42, 2005. P. 427-451.

165. Kotlaba F., Pouzar Z. Poznamky k trideni evropskych chorosu // Ceska Mycol. 1957. R.ll, ses 3. S. 152-170.

166. Lin, Z. Cellular and Molecular Mechanisms of Immuno-modulation by Ganoderma lucidum II Z. Lin / J. Pharmacol. Sei. V. 99, 2005. P. 144 - 153.

167. Lloyd C.G. Synopsis of the stipulate Polyporoids. Bull. Lloyd library, 202. Мус. Ser., 6,1912. 95-208.

168. Lowe J.L. Polyporaceae of North America. The genus Fomes. New York, 1957, 97 p.

169. Lowe J.L. Polyporaceae of North America. The genus Poria. New York, 1966, 183 p.

170. Luszczynski, J. Fomitopsis officinalis (Coriolaceae) in Poland / Fragmenta Floristica Polonica. 2000, № 7. - P. 271-276.

171. Majewski, T. An attempt to identify to cryptogamic plants in Syren-iusz's herbal // T. Majewski / Kwart Hist Nauki Tech., V. 50, № 3-4, 2005. P. 183-196.

172. Mayer, P. Effect of a protein-bound polysaccharide from Coriolus versicolor on immunological parameters and experimental infections in mice // P. Mayer, J. Drews / Infection, V. 8, 1980. P. 13-21.

173. Mdachi, S. Amino acid composition of some Tanzanian wild mushrooms // S. Mdachi, M. Nkunya, V. Nyigo, I. Urasa / Food Chemistry, V. 86, 2004. -P. 179-182.

174. Ming, D. Chemical constituents of Ganoderma applanatum of British Columbia forests // D. Ming, J. Chilton, F. Fogarty,G. Towers / Fitoterapia, V. 73, 2002.-P. 147-152.

175. Molitoris, H.P. Mushrooms in medicine // H.P. Molitoris / Folia Microbiol, V. 39. № 2, 1994. P. 91-98.

176. Moradali, M. Investigation of potential antibacterial properties of methanol extracts from fungus Ganoderma applanatum II M. Moradali, H. Mostafavi, G. Hejaroude, A. Tehrani, M. Abbasi / Chemotherapy, V. 52, № 5, 2006.-P. 241-244.

177. Moradali, M. Immunomodulating and anticancer agents in the realm of macromycetes fungi (macrofungi) // M. Moradali, H. Mostafavi, S. Ghods, G. Hejaroude / International Immunopharmacology, V. 7, 2007 P. 701-724.

178. Mukhin, V.A. Distribution, frequency and biology of Laricifomes officinalis in the Asian part of Russia / V.A. Mukhin, H. Kotiranta, H. Knudsen, N.V. Ushakova// Микология и фитопатология. 2005. Т. 39, вып. 5 - с. 34-42.

179. Muller, С. Ganoderma lucidum causes apoptosis in leukemia, lymphoma and multiple myeloma cells // C. Muller, T. Kumagai, J. O'Kelly, N. Seeram, D. Heber, H. Koeffler / Leukemia Research V. 30, 2006. P. 841-848.

180. Murrill, W.A. The Polyporaceae of North America, II. The genus Fomes. Bull. Bot. Club, XXX, 1903. P. 225-232.

181. Murrill, W.A. North American flora. IX. Polyporaceae. 1, 2. New York, 1907-1908. 132 p.

182. Ng, T.B. Peptides and proteins from fungi // T.B. Ng / Peptides V. 25, 2004.-P. 1055-1073.

183. Ooi, V Immunomodulation and anti-cancer activity of polysaccharide-protein complex // V. Ooi, F. Liu / Current medicinal chemistry V. 7, 2000. P. 715729.

184. Overholts L.O. The Polyporaceae of the United States, Alaska and Canada. Baltimore: Univ. Michigan Press, 1953. 466 p.

185. Patouillard, N. Th. Essai taxonomy que sur les families et les genres des Hymenomycetes. Lons-le-Saunier. 1900. 184 p.

186. Pilat A. Polyporaceae // Ch. Kavina, A. Pilat. Atlas des champignons de 1 'Europe. Phara. 1936-1942. T. III, pt. 1. P. 1-624; pt. 2. - P. 1-374.

187. Quang, D. Lanostane triterpenoids from the inedible mushroom Fomi-topsis spraguei II D. Quang, Y. Arakawa, T. Hashimoto, Y. Asakawa / Phytochem-istry, V. 66, 2005.-P. 1656-1661.

188. Quelet L. Flore mycologigue de la France et des pays limitrophes. Paris, 1886.-P. 1-492.

189. Ralph, W. Effects of a mushroom mycelium extract on the treatment of prostate cancer // W. Ralph, V. White, R. Hackman, S. Soares, L. Beckett, B. Sun / Urology V. 60, T. 4, 2002. P. 640-644.

190. Rea C. British Basydiomycetae. Cambridge, 1922. P. 1-799.

191. Rebekah, L Multi-year study of Ganoderma aerobiology // L. Re-bekah, C. Levetin, E. Levetin / Aerobiologia, V. 16, 2000-P. 75-81.

192. Reshetnicov, S.V., Wasser, S.P., Tan, K.K. // International Journal of-Medicinal Mushrooms V.3, № 2-3, 2001. — P. 86.

193. Rüssel, R. Ganoderma A therapeutic fungal biofactory // R. Russel, M. Paterson / Phytochemistry V. 67, 2006. - P. 1985-2001.

194. Saccardo P.A. Sylloge fungorum omnium hucusgue cogitorum. Pata-vii. V. 6., 1888.-248 p.

195. Stalpers, J. A. Identification of wood-inhabiting fungi in pure culture // Studies in mycology. 1978, № 16. - P. 178-183; 247.

196. Sasaki, T. Antitumor polysaccharides from some polyporaceae, Ganoderma applanatum (Pers.) Pat and Phellinus linteus (Berk, et Curt) Aoshima // T. Sasaki, Y. Arai, T. Ikekawa, G. Chihara / Chem. Pharm. Bull. (Tokyo), V. 19, 1971.-P. 821-826.

197. Shao B. Immune receptors for polysaccharides from Ganoderma lucidum // B. Shao, H. Dai, W. Xu, Z. Lin, X. Gao / Biochemical and Biophysical Research Communications V. 323, 2004. P. 133-141.

198. Shiao, M.S. Natural products of the medicinal fungus Ganoderma lucidum: occurrence, biological activities, and pharmacological functions // M.S. Shiao / Chem. Ree., V. 3, 2003. P. 172-80.

199. Shope P.F. Polyporaceae of Colorado. Ann. Miss. Bot. Gard., XVIII, 1931.-P. 287-457.

200. Sliva, D. Ganoderma lucidum in cancer research // D. Sliva / Leukemia Research V. 30, 2006. P. 767-768.

201. Smania, A.J. Antibacterial activity of steroidal compounds isolated from Ganoderma applanatum (Pers.) Pat. (aphyllophoromycetideae) fruit body // A.J. Smania, D. Monache, E.F. Smania, R.S. Cuneo / Int. J. Med. Mush., V. 1, 1999.-P. 325-330.

202. Szedlay, G. Basidiocarp and mycelium morphology of Ganoderma lucidum Karst. Strains isolated in Hungary //G. Szedlay, E. Jakucs, I. Boldizsar, K. Boka/Acta Microbiol. Immunol. Hung. V.46, № 1, 1999. P. 41-52.

203. Venner, H. Uber ein Polysacharid aus Basydiomyceten // H. Venner / Z. Phys. Chem., V. 338, 1964. P. 189-197.

204. Wang, F. Highly Oxygenated Lanostane Triterpenoids from the Fungus Ganoderma applanatum //F. Wang, J. Liu / Chem. Pharm. Bull. V. 56, № 7, 2008.-P. 1035-1037.

205. Wasser, S Medicinal mushrooms as a source of antitumor and immu-nomodulating polysaccharides // S. Wasser / Applied Microbiology and Biotechnology, V. 60, 2002. P. 258-274.

206. Yang, B.K. Hypoglycemic effects of Ganoderma applanatum and Collybia confluens exo-polymers in streptozotocin-induced diabetic rats // B.K. Yang, Y.S. Jung, C.H. Song / Phytother Res., V. 21, № 11, 2007 P. 1066-1075.

207. Yuen, M. Hepatotoxicity due to a formulation of Ganoderma lucidum (Lingzhi) // M. Yuen, P. Ip, W. Ng, C. Lai / Journal Hepatology V. 41, 2004. P. 685-690.

208. Zhang, W. Effect Chinese medicinal fungus water extract on tumor metastasis and some parameters of immune function // W. Zhang, Y. Wang, Y. Hou / International Immunopharmacology V. 4, 2004. — P. 461-468.

209. Zhu X. Ganoderma lucidum polysaccharides enhance the function of immunological effector cells in immunosuppressed mice // X. Zhu, A. Chen, Z. Lin / Journal of Ethnopharmacology V. 111, 2007. P. 219-226.

210. Ziegenbein, F. Secondary metabolites from Ganoderma lucidum h Spongiporus leucomallellus // F. Ziegenbein, H. Hanssen, W. König / Phytochem-istry, V. 67, 2006. P. 202-211.

211. Zjalic, S. Trametes versicolor: A possible tool for aflatoxin control // S. Zjalic, M. Reverberi, A. Riceiii, V. Granito, C. Fanelli, A. Fabbri / International Journal of Food Microbiology, V. 107, 2006. P. 243-249.

212. Zjawiony, J.K. Biologically active compounds from Aphyllophorales (polypore) fungi // J.K. Zjawiony / J. Natural Product., V. 67, № 2, 2004. P. 300310.245. http: // www.floranimal.ru246. http: // www.herongroup.com247. http: // www.pubmed.com

Информация о работе

Ковалева, Гульмира Кажгалиевна
кандидата биологических наук
Красноярск, 2009
ВАК 03.00.24

Диссертация

Биологические особенности и биохимический состав ксилотрофных базидиомицетов Fomitopsis officinalis (Vill.: Fr.) Bond. et Sing., Ganoderma applanatum (Pers.) Pat. и Trametes versicolor (L.: Fr.) Pilat - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы