Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфометрические и физиолого-биохимические особенности представителей рода Plantago L. в связи с условиями произрастания

ВАК РФ 03.02.08, Экология (по отраслям)

Автореферат диссертации по теме "Морфометрические и физиолого-биохимические особенности представителей рода Plantago L. в связи с условиями произрастания"

На правах рукописи

Гребенкина Татьяна Михайловна

МОРФОМЕТРИЧЕСКИЕ И ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА РМЫТАвО Ь. В СВЯЗИ С УСЛОВИЯМИ ПРОИЗРАСТАНИЯ

03.02.08 - экология (биологические науки)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 8 НОЯ 2013

Саратов - 2013

005541096

005541096

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении-науки Институт экологии Волжского бассейна Российской академии наук

Научный руководитель: Розенцвет Ольга Анатольевна,

доктор биологических наук

Официальные оппоненты: Кулагин Андрей Алексеевич,

доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой экологии и природопользования ФГБОУ ВПО БГПОУ им. М. Акмуллы

Степанов Сергей Александрович, доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой микробиологии и физиологии растений биологического факультета ФГПОУ ВПО «Саратовский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского»

Ведущая организация: ФГБУН Институт биологии Карельского научного

центра Российской академии наук

Защита состоится 20 декабря 2013 года в 15.00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.243.13 при ФГПОУ ВПО «Саратовский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского» по адресу 410012, г. Саратов, ул. Астраханская, 83, e-mail: biosovet@sgu.ru

С диссертацией можно ознакомиться в Зональной научной библиотеке имени В.А. Артисевич ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского»

Автореферат разослан «18» «ноября» 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

С.А. Невский

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одним из направлений повышения качества жизни российских граждан, реализуемое Указом Президента РФ от 12.05.2009 года № 537 «О стратегии национальной безопасности Российской Федерации до 2020 года» является обеспечение населения высококачественными и доступными лекарственными препаратами. Возрастающая популярность эффективных и безопасных растительных препаратов требует постоянного расширения ассортимента лекарственных средств и развития их сырьевой базы (Курочкин, 1994; Коломиец, Ефимов, 2005; Смирнова, 2009).

Растения рода Plantage L. (подорожник) широко используются. в производстве ряда лекарственных препаратов и являются ценным источником биологически активных соединений (БАС) (Maiti, 2000; Popov, 2008; Ареха, Saravanan, 2010). При высоком видовом разнообразии рода Plantage для изготовления лекарственных препаратов в России применяется только вид Plantago major L., что ограничивает сырьевую базу. Единственным БАС, по которому оцениваются лекарственные свойства P. major в Государственной Фармакопее Российской Федерации, является концентрация полисахаридов (ПС) (Димитрук, 2004).

Известно, что эффективность растительных лекарственных средств связана с наличием в сырье не только ПС, но и других БАС, представляющих собой продукты первичного и вторичного метаболизма, такие как, липиды, жирные кислоты (ЖК), хлорофиллы, алкалоиды, фенольные соединения, каротиноиды и т.д. (Муравьева, 2002; Яковлев, 2006).

В то же время эти соединения являются компонентами, поддерживающими жизненно важные функции клетки и организма, а их содержание в растениях зависит от условий произрастания (Стоник, Толстиков, 2008). Однако взаимосвязь между морфометрическими параметрами отдельных органов растений рода Plantago и содержанием БАС, отвечающих за основные обменные процессы клетки, систематически не изучена. Кроме того, для растений данного рода практически не исследована сезонная динамика содержания БАС, суточные вариации концентраций в естественных условиях произрастания в зависимости от ведущих абиотических (обеспеченность светом, теплом, влагой, минеральным питанием) и антропогенных факторов, а также координации процессов первичного и вторичного метаболизма.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы являлось выявление особенностей изменений морфометрических и физиолого-биохимических характеристик растений рода Plantago L. от условий произрастания, а также установление закономерностей влияния абиотических и антропогенных факторов

на содержание БАС.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1) изучение морфометрических характеристик пяти видов растений рода Plantago, включая фармакопейный вид Plantago major, исследование состава и содержания БАС в разных частях растений;

2) анализ сезонных изменений морфометрических параметров и содержания

БАС;

3) исследование суточной динамики содержания БАС на примере листьев

растений Plantago media L.;

4) установление влияния «условно загрязненной» среды и географо-климатических условий на морфометрию отдельных органов и содержание БАС растений;

5) выявление взаимосвязи параметров роста Plantago media, физиолого-биохимических характеристик клетки с абиотическими и антропогенными

факторами среды произрастания.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное исследование морфометрических и физиолого-биохимических характеристик пяти видов рода Plantago. Установлено сходство качественного и различия количественного состава БАС исследованных видов растений. Обнаружено, что содержание водорастворимых ПС в листьях вида Plantago uliginosa F. W. Schmidt существенно превышает аналогичный показатель фармакопейного вида Plantago major. На примере Plantago media выявлена сезонная и суточная динамика содержания БАС в отдельных органах растений в зависимости от условий, определяемых абиотическими и антропогенными факторами.

Теоретическая и практическая значимость. Разработан метод целенаправленного поиска перспективных источников БАС, основанный на филогенетическом родстве растений. Выявлена взаимосвязь морфометрических и структурно-функциональных характеристик растений в зависимости от периода вегетации и условий обитания. Полученные результаты являются основой для разработки практических рекомендаций по определению оптимального времени сбора лекарственных растений рода Plantago и выбора условий их произрастания. Растения вида Plantago uliginosa рекомендованы в качестве перспективного источника водорастворимых ПС и других БАС для производства лекарственных препаратов.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были представлены на Всероссийском симпозиуме «Экология мегаполисов: фундаментальные основы и инновационные технологии» (Москва, 2011); VII съезде ОФР России «Физиология растений - фундаментальная основа экологии и инновационных биотехнологий» и Международной научной школе «Инновации в биологии для развития биоиндустрии сельскохозяйственной продукции» (Нижний Новгород, 2011); Международной научно-практической конференции «Медико-биологические процессы адаптации» (Сухум, 2012); Всероссийской научной конференции с международным участием «Инновационные направления современной физиологии растений» (Москва, 2013); XIII съезде Русского ботанического общества «Современная ботаника в России» (Тольятти, 2013); VIII Всероссийской конференции «Химия и технология растительных веществ»

(Калининград, 2013).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, из которых 4 в печатных изданиях, рекомендованных Перечнем ВАК РФ.

Личный вклад автора. Автор лично провел полевые и лабораторные исследования. Обработка полученных данных, их интерпретация и оформление проведены автором самостоятельно, по плану, согласованному с научным руководителем. Доля участия автора в совместных публикациях составляет 60-80%.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 141 странице, содержит 17 таблиц и 36 рисунков. Состоит из введения, трех глав, выводов, списка литературы, включающего 220 источников, в том числе 61 иностранный.

Благодарности. Выражаю искреннюю благодарность д.б.н. О.А. Розенцвет за огромную помощь в осмыслении аналитического материала, консультации и поддержку. Признательна также к.б.н. В.Н. Нестерову, к.б.н. Е.С. Богдановой, Л.М. Тарановой и J1.A. Кульдякиной за бескорыстную помощь в освоении новых методов исследования и содействии в их проведении; проф., д.б.н. С.В. Саксонову и к.б.н. Н.С. Ракову за консультативную помощь.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Выявлена взаимосвязь между морфометрическими и физиолого-биохимическими параметрами растений в зависимости от абиотических и антропогенных факторов местообитания.

2. Установлена суточная и сезонная динамика содержания БАС (полисахаридов, фенольных соединений, липидов, жирных кислот и аскорбиновой кислоты) Plantago media, в естественных и антропогенно нарушенных условиях произрастания.

3. Растения Plantago media, Plantago uliginosa, Plantago lanceolata L. и Plantago stepposa Kuprian, филогенетически родственные фармакопейному виду Plantago major, являются перспективным источником исследованных типов БАС.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во Введении обоснована актуальность проблемы, определены цель и задачи исследования, охарактеризована научная новизна, научно-практическая значимость, представлены сведения об апробации работы и сформулированы основные положения, выносимые на защиту.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В главе приведены сведения о систематике и экологии растений сем. Plantaginaceae\ классификации лекарственных растений; структурно-функциональных компонентах, обладающих свойствами БАС. На основании анализа отечественной и иностранной литературы рассматриваются некоторые механизмы адаптации растений к условиям произрастания с участием БАС.

Глава 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В качестве объектов исследования выбраны растения Plantago major, Р. uliginosa, Р. media, Р. stepposa, Р. lanceolata, в систематическом плане представляющие род Plantago, сем. Plantaginaceae, пор. Scrophulariales, отд. Magnoliophyta (Angiospermae) (Флора Европейской.., 1981).

Растительный материал отбирали в 4-х ценопопуляциях (ЦП) в летние месяцы 2010-2013 гг. ЦП-1 и ЦП-2 («условно чистая среда») локализованы в национальном парке «Самарская Лука» Самарской области (53°23'57"с.ш., 49°35'26" в.д. и 53°23'57"с.ш., 49°35'26" в.д. соответственно); ЦП-3 («условно загрязненная среда») - вблизи автомагистрали (3-5 м) в черте г. Тольятти (53°31'23"с.ш., 49°24'45" в.д.); ЦП-4 - в Кемеровской области (54°32'60"с.ш.,

85°24'00" в.д.). В образцах почвы, отобранных на глубине 15-20 см, определяли кислотность и влажность (Аринушкина, 1970). 10-12 типичных растений из каждой популяции разделяли на листья, генеративные побеги и корневую часть, измельчали, и из объединенной биомассы составляли три биологические пробы для каждого вида анализов.

Линейные измерения проводили с помощью линейки и штангенциркуля, измерения массы - на весах BJIT-200 и ЛВ 210-А (ЗАО «Сартогосм», Россия). Площадь листовых пластинок вычисляли по формуле: S = 0,66ld, где / — длина листа, мм; d - его ширина, мм (Аникеев, 1961). Удельную поверхностную плотность листьев (УППЛ) вычисляли как соотношение сухой массы листьев (мг) к их площади (см2), коэффициент роста листа (Кроста) - как соотношение массы листа растения (мг) к его длине (мм). Отношение массы надземной (М„ч) и подземной частей (Мп ч) рассчитывали по формуле: Мн ч /Мп ч. Содержание воды в растительных тканях определяли после высушивания образцов до постоянной массы (Максимов, 1999); ПС - гравиметрическим методом после удаления неуглеводных компонентов (Ананьина, 2008), водорастворимых ПС (ВРПС), пектиновых веществ (ПВ), геммицеллюлозы А и Б (ГЦ А и ГЦ Б) - в соответствии с рекомендациями Н.К. Кочеткова (1970); АК - по методу ГФ (2008); фенольных соединений - гравиметрическим методом после удаления липофильных веществ и хлорофиллов (Краснов, 1987); фотосинтетических пигментов -спектрофотометрически после экстракции ацетоном (100%), при X 662, 645 и 470 нм. Концентрацию рассчитывали по методу Н.К. Lichtenthaler (1987). Перекисное окисление липидов (ПОЛ) оценивали по содержанию малонового диальдегида (МДА) после реакции с тиобарбитуровой кислотой на спектрофотометре «ПЭ— 3000 УФ» («ПромЭкоЛаб», Россия) при длине волны 532 нм. Липиды экстрагировали смесью хлороформ-метанол (1:2) (Bligh, Dyer, 1959), идентифицировали с использованием специфических реагентов и стандартов (Кейтс, 1975), разделяли методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии на пластинках с закрепленным слоем силикагеля («Хаапсалу», Эстония; «Сорбполимер», Россия) с использованием систем растворителей, описанных ранее (Розенцвет, 2006; Розенцвет и др., 2013). Анализ ЖК проводили после метанолиза в 5% растворе НС1 в течение 1 ч на хроматографе «Кристалл 5000.1» («Хроматэк», Россия) в изотермическом режиме на капиллярной колонке Rtx-2330 («RESTEK», США) длиной 105 м, диаметром 0,25 мм. Толщина пленки фазы в колонке - 0,2 мкм. Температура колонки - 180°С, испарителя и детектора - 260°С. Скорость тока газа-носителя (гелий) - 2 мл/мин. ЖК идентифицировали, сравнивая относительное время удерживания полученных пиков со стандартной смесью «37 Сотр. FAME Mix» («Supelko», США). Относительное содержание ЖК определяли в весовых процентах от общего их содержания в исследуемом образце.

Результаты экспериментов обрабатывали с помощью пакета офисных программ Statistica 6,0 for Windows, Statgraphics Ce nturion XV, Canoco 4,5 for Windows и Microsoft Excel 2007. Результаты представлены в виде средних величин и их стандартных ошибок. Достоверность отличий оценивали с помощью непараметрического критерия Стьюдента при уровне значимости Р < 0,05.

f

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Морфометрические и физиолого-биохимические характеристики представителей рода Plantago L.

Морфометрические характеристики Plantago unliginosa, Р. media, Р. stepposa, Р. lanceolata изучали в сравнении с официнальным видом Р. major. Показано, что отношение Мн.ч/Мп.ч снижалось в ряду Р. major > Р. uliginosa > Р. lanceolata > Р. media > Р. stepposa. Листья растений Р. stepposa и Р. uliginosa имели большую длину, ширину и площадь по сравнению с остальными видами. Однако показатель УППЛ был максимальным у Р. stepposa и Р. media. Листья у Р. uliginosa, Р. major и Р. lanceolata были больше оводнены, чем у Р. stepposa и Р. media. Площадь листьев и Кроста уменьшались в ряду Р. stepposa > Р. uliginosa > Р. major > Р. media > Р. lanceolata.

В качестве физиолого-биохимических характеристик проанализированы содержание пигментов, ПС, липидов и их ЖК, аскорбиновой кислоты (АК) и фенольных соединений, выполняющих метаболическую и структурную функции. Накопление ПС - одного из классов БАС, содержащихся в листьях растений фармакопейного вида Р. major - в большей степени отмечено в надземной части растений: в листьях 355-695 мг/г сухой массы и в генеративных побегах - 264-503 мг/г, в подземной части - 515-833 мг/г (рисунок 1). По сравнению с Р. major в листьях Р. uliginosa ПС концентрировалось меньше в 1,2 раза, но больше, чем в растениях других исследуемых видов; в генеративных побегах Р. media содержание этого компонента было достоверно равным, а в корнях больше в 1,1 раза, чем у фармакопейного вида.

Р. lanceolata zishéd <б)

Р. stepposa jh¡ • ниееиї

Р. media

Р. uliginosa

Р. major

Рисунок I - Содержание полисахаридов в листьях (а), генеративных побегах (б) и корневой части (в) представителей рода Plantago Ь.

ВР - водорастворимые полисахариды, ПВ -пектиновые вещества, ГЦ А - гемицеллюлозы А, ГЦ Б - гемицеллюлозы Б. По оси абсцисс -концентрация, мг/г сухой массы, по оси ординат -виды

Р. lanceolata Р. stepposa Р. media Р. uliginosa Р. major

Р. lanceolata Р. stepposa Р. media Р. uliginosa Р. major

Липиды (суммарные липиды) (СЛ), выделенные из нативных клеток, состоят из гликолипидов (ГЛ), фосфолипидов (ФЛ) и нейтральных липидов (НЛ). Первые два типа - полярные - входят в состав липидного матрикса биологических мембран, последние являются источником энергетического и

метаболического резерва клетки. Концентрация СЛ в листьях пяти видов растений варьировала от 5 до 7, в генеративных побегах - от 7 до 10, в корневой системе - от 4 до 11 мг/г сырой массы, что свидетельствует о видо- и органоспецифичности данного показателя (таблица 1). В листьях растений концентрация CJI у Р. media и Р. major была достоверно равной; в генеративных побегах - уменьшалась в ряду Р. lanceolata > Р. uliginosa > Р. stepposa > Р. major > Р. medía; в корневой части - аккумулировались в большей степени у Р. major, в меньшей - у Р. uliginosa, Р. media и Р. stepposa.

Таблица 1 - Содержание липидов в отдельных органах представителей

рода Plantago L.

Вид Части растений Липиды, мг/г сырой массы

ГЛ ФЛ НЛ СЛ

P. major листья 2,3±0,2 3,3±0,0 1,5±0,6 7,1±0,6

генеративные побеги 2,2±0,1 1,5±0,2 3,5±0,5 7,5±0,5

корни 1,3±0,1 3,9±0,4 4,3±0,5 9,5±1,1

Р. uliginosa листья 1,5±0,1 2,8±0,0 0,8±0,1 5,1±0,5

генеративные побеги 2,7±0,1 2,9±0,2 3,7±0,6 9,2±0,9

корни 1,5±0,2 1±0,1 2,2±0,2 5,6±0,5

P. media листья 3,1±0,3 1,5±0,1 1,2±0,1 6,0±0,1

генеративные побеги 3,9±0,1 1,5±0,1 2,9±0,1 7,0±0,4

корни 1,5±0,1 1,4±0,1 3,8±0,3 5,5±0,2

P. stepposa листья 2,4±0,7 1,4±0,0 2,1±0,6 6,9±0,5

генеративные побеги 1,2±0,0 1,2±0,1 6,8±0,0 9,0±0,8

корни 1,5±0,1 1,5±0,1 2,1±0,2 5,6±0,5

P. lanceolata листья 2,5±0,1 1,3±0,0 1,5±0,1 5,3±0,5

генеративные побеги 3,9±0,2 2,9±0,2 3,8±0,5 10,4±1,0

корни 1,2±0,0 0,5±0,0 2,7±0,0 4,1±0,2

С изменением состава ЖК связывают участие мембран в адаптации растений к условиям обитания. Кроме обеспечения целостности мембран и оптимального уровня их текучести ЖК обуславливают включение и диффузное перемещение мембранных компонентов, активность мембранносвязанных ферментов, проницаемость и транспортные свойства. Доминирующими ЖК растений рода Plantago были С16:0, С18:2 и С18:3. Их содержание составляло в сумме 90-95%. Липиды листьев всех исследованных растений обогащены непредельными ЖК: С18:3 (47-56), С18:2 (12-17) и С18:1 (4-6% от фракции ЖК). В генеративных побегах и корнях больше, чем в листьях содержалось С18:2 (от 21 до 40 и от 37 до 50% соответственно). Практически для всех растений отмечена тенденция снижения концентрации С18:3 и соответственное увеличение относительного вклада С18:2 в ряду листья > генеративные побеги > корни.

В наибольшем количестве АК (витамин С) обнаружена в листьях и генеративных побегах P. media (1,8 и 1,9 мг/г сухой массы), что превышало эти

B-L

'S¡¡E

Р. uliginosa

'Ж-

X

показатели у Р. major в 3,3 и 3,1 раза соответственно; в корневой части - у Р.

lanceolata (выше в 1,6 раза).

Содержание хлорофиллов в листьях исследованных растений варьировало от 3,3 до 8,3 мг/г сухой массы и уменьшалось в ряду Р. major > Р. media > Р. lanceolata > Р. uliginosa > Р. stepposa.

Содержание каротиноидов в листьях растений находилось в диапазоне от 1,1 до 2,3 мг/г сухой массы, которое можно представить рядом убывания: Р. major = Р. lanceolata > Р. media > Р. stepposa > Р. uliginosa.

Фенольные соединения, проявляя антиоксидантные свойства наряду с каротиноидами и АК, накапливались больше в листьях всех видов растений, чем в генеративных побегах и корнях (88-166, 19-65 и 4-21 мг/г сухой массы соответственно; рисунок 2). Наибольшее их накопление в надземной части растений выявлено у Р. uliginosa и Р. media, что было выше, чем у вида Р. major, на 10-30% соответственно, а в подземной - у Р. uliginosa.

Сравнение с официнальным видом показало, что растения исследованных видов могут использоваться в качестве возможных источников исследованных БАС: Р. media и Р. uliginosa - по содержанию ПС, Р. media и Р. stepposa - липидов, Р. media - АК и хлорофиллов, Р. uliginosa и Р. lanceolata -каротиноидов и фенольных соединений, из которых наиболее перспективным является вид Р. uliginosa

3.2. Сезонная динамика морфометрических и физиолого-биохимических характеристик Plantago media

Учитывая, что на протяжении онтогенеза в тканях растения неоднократно меняются типы метаболизма в соответствии с заложенной в нем генетической программой, реализация которой в значительной степени зависит от внешних факторов (Мокроносов, 1981), на примере Р. media изучены сезонные изменения морфометрических и физиолого-биохимических параметров. На участке, где произрастали растения ЦП-1, показатели абиотических факторов (температурный режим и освещенность) были выше, чем на участке, где произрастали растения ЦП-2, при этом кислотность почв на обоих участках была одинаковой (таблица 2).

В условиях Среднего Поволжья начало вегетации приходится на конец апреля, а период цветения обычно начинается в конце мая и заканчивается в середине августа. Исследования проводили с июня по август, когда растения находились в стадии зацветания, полного цветения и отцветания.

25 50 75 100 125 150

Пк, Шг.п. О л.

Рисунок 2 - Содержание фенольных соединений в отдельных органах

представителей рода Plantago L.

к. - корни, т.п. - генеративные побеги, л. - листья. По оси абсцисс -концентрация, мг/г сухой массы; по оси ординат - виды

В июне длина листьев у растений, произрастающих на свету, превышала длину листьев растений, произрастающих в тени, на 5%, а в июле листья растений ЦП-2 были длиннее листьев ЦП-1 на 50% (таблица 3).

Таблица 2 - Абиотические факторы в местах произрастания растений P. media

Характеристика Время вегетации

Июнь Июль Август

ЦП-1 ЦП-2 ЦП-1 ЦП-2 ЦП-1 ЦП-2

Т воздуха, °С 36 30 33 24 33 24

Освещенность, лк-103 64 45 41 20 60 25

pH почвы 6,3 6,4 6,8 6,8 6,8 6,9

Влажность почвы, % 12 19 10 12 8 11

Растения ЦП-2 были более оводнены, имели большую скорость роста листа при меньшем показателе УППЛ и биомассе листьев. Следовательно, в течение летнего периода очевидны различия в размерах и массе отдельных частей растений, произрастающих в разных условиях.

Таблица 3 - Сезонные изменения морфометрических характеристик P. media

Характеристика Время вегетации

Июнь Июль Август

ЦП-1 ЦП-2 ЦП-1 ЦП-2 ЦП-1 ЦП-2

Длина листа, мм 101,0±5,6 96,3±5 84,3±8,3 116,9±10,4 181,9±15,5 138,1±9,5

Ширина листа, мм 25,1±1,1 34±1,3 29,5±2,9 25,8±1,8 28,1±1,8 33,4±1,6

Площадь листа, см2 18,6±1,7 22,7±1,6 18,6±1,8 22,3±2,2 37,2±3,7 32,2±2,9

УППЛ, мг/см2 47,0±4,2 41,4±0,4 26,6±2,6 21,6±2,1 28,6±2,1 24,1 ±2,4

проста листа» г/мм 5,9±0,3 9,5±0,9 4,5±0,4 3,0±0,1 4,9±0,3 8,2±0,2

Мсух.вещ.> /о 23,7±0,1 17,4±0,1 26,8±1,6 22,7±0,1 29,4±0,2 22,9±0,2

Длина генерат. побега, мм 44,5±4,5 177,3±32 226,5±22,6 255,8±67,2 560±81,8 422,2±9,6

Длина корня, мм 118,5±17,1 159,1±17,1 99,0±7,5 136,3±19,5 94,3±10,3 121,3±87,4

мн,/мп., 1,3±0,1 1,9±0,2 1,9±0,2 2,3±0,5 3,6±0,9 3,4±1,2

Содержание хлорофиллов у растений ЦП-2 было выше, чем у растений ЦП-1. В июне концентрация этого компонента была максимальной: 4,5 и 6,9 мг/г сухой массы у растений ЦП-1 и ЦП-2 соответственно. Отношение Хл а/Хл Ь не

различалось у растений разных популяций и имело тенденцию к снижению в течение летнего периода (таблица 4).

Таблица 4 - Сезонная динамика содержания пигментов в листьях P. media

Пигменты Содержание

Июнь Июль Август

ЦП-1 ЦП-2 ЦП-1 ЦП-2 ЦП-1 ЦП-2

Хл а+Ь, мг/г сухой массы 4,5±0,5 6,9±0,7 4,3±0,5 5,3±0,4 4,5±0,4 5,8±0,4

Хл alb 1,4±0,0 1,4±0,0 1,4±0,1 1,3±0,0 1,3±0,0 1,2±0,0

Хл о+й/Каротиноиды 3,1±0,0 5,0±0,0 3,7±0,3 3,7±0,0 3,7±0,0 3,7±0,1

В июне доля каротиноидов у растений ЦП-1 была выше, чем у растений ЦП-2. Вероятно, в условиях более высокой инсоляции на первый план выступает фотозащитная роль каротиноидов, тогда как в пигментном аппарате теневых растений каротиноиды выступают в качестве дополнительных светосборщиков (Стржалка, 2003).

Одним из критериев оценки физиологического состояния растений на уровне клетки является интенсивность образования продуктов ПОЛ (рисунок 3). Содержание МДА в июне у растений ЦП-1 и ЦП-2 не имело достоверных отличий. В середине и конце летнего периода в листьях растений ЦП-1 содержание МДА увеличивалось в 2-3 раза по сравнению с июнем, а в листьях ЦП-2 - вдвое к августу. Следовательно, процессы ПОЛ усиливались к периоду отцветания, но у растений освещенных мест обитания они начинались раньше.

Содержание липидов в разных органах растений максимальным было в июне.

Фракция ГЛ, основных структурных компонентов мембран тилакоидов, источника полиненасыщенных ЖК и углеводов, состояла из моногалактозилдиацилглицеринов (МГДГ), дигалактозилдиацилглицеринов (ДГДГ) и сульфохиновозилдиацилглицеринов (СХДГ). В листьях растений большее количество МГДГ и ДГДГ синтезировалось в июне, причем в растениях ЦП-1 их содержание было на 15% выше, чем в

Рисунок 4 - Сезонная динамика содержания гликолипидов в листьях Р.

media

МГДГ-моногалактизилдиацилглицерины, ДГДГ- дигалактозилдиацилглицерины, СХДГ-сульфохиновозилдиацилглицерины. По оси абсцисс - месяц; по оси ординат -концентрация, мг/г сырой массы

0,10

0,05

0,00

нюнь июль август

Рисунок 3 - Сезонная динамика содержания

малонового диальдегида в листьях P. media

По оси абсцисс - время сезона вегетации, месяц; по оси ординат -концентрация, мкМУг сырой массы

ЦП 1 ЦП-2 ЦП I ЦП 1 ЦП 1 ЦП 2

нюнь июль август

■ фх офг офп

ЦП-1 ИП-2 июнь

ari i цп-2 июль

цп-1 цп-2 август

Рисунок динамика

5 -

Сезонная содержания

растениях ЦП-2 (рисунок 4). В июле содержание всех компонентов ГЛ снижалось, и практически нивелировались различия между растениями разных ЦП, но к августу состав ГЛ у растений ЦП-2 восстанавливался, что может свидетельствовать о структурных перестройках фотосинтетического аппарата в течение летнего периода.

В содержании ФЛ листьев изменения были связаны с фосфатидилхолинами (ФХ), фосфатидилглицеринами (ФГ), фосфатидилэтаноламинами (ФЭ) (рисунок 5).

Вклад ФХ в пул ФЛ листьев был максимальным в начале лета у растений ЦП-1 и ЦП-2, снижаясь к июлю с 50% до 40 и 44% соответственно. Максимальное содержание ФГ коррелировало с показателем Кроста (г = 0,86 при р < 0,01), что может свидетельствовать об интенсивном формировании фотосинтетического аппарата растений, поскольку от данного типа липидов зависит организация гран тилакоидов (Мокроносов, 2006; Wada, Murata, 2009). Относительное содержание ФЭ в листьях растений ЦП-1 в течение лета снижалось на 10-15%, а в листьях ЦП-2 -оставалось постоянным.

Не менее интенсивные сезонные изменения происходили в составе НЛ. Так, в июле в листьях двух ЦП на 20% увеличивалось содержание

диацилглицеринов (ДАГ) на фоне снижения стеринов (Ст) (рисунок 6). В августе накапливалось содержание ТАГ, ЭС и Ст. Содержание НЛ в генеративных побегах было выше по сравнению с листьями у ЦП-1 и ЦП-2. Выявлена высокая степень корреляции содержания НЛ с площадью листа (г = 0,94 при р < 0,05) у ЦП-1 и ЦП-2, что может быть связано с образованием запасных органелл - липидных глобул, размер которых увеличивался по мере роста листьев (Murphy, 2011).

Максимальная концентрация АК наблюдалась в июле, когда отмечена наибольшая интенсивность процессов ПОЛ и меньшая оводненность листьев (рисунок 7 а). В отличие от АК содержание фенольных соединений снижалось к этому времени почти на 30% (рисунок 7 б). В динамике содержания

фосфолипидов в листьях P. media

ФХ- фосфотидилхолин,

ФГ- фосфотидилглицерин,

ФИ- фосфотидилинозид.

По оси абсцисс - месяц; по оси

ординат - концентрация, мг/г сырой

массы

□ таг аэс

цп-1 цп-2 нюнь

6 -

Сезонная содержания липидов в листьях

Рисунок динамика нейтральных P. media

ДАГ- диацилглицерины, ТАГ-триацилглицерины, Ст-стерины, ЭС-эфиры стеринов. По оси абсцисс -месяц, по оси ординат - концентрация мг/г сырой массы

ПС отмечена стойкая тенденция к увеличению содержания их суммы и отдельных фракций к концу летнего периода (рисунок 7 в).

л

ІІІІІІШІ

ІЩ-2 ЦІ1-1ЦП-Z ЦІ1-1 ЦІЇ-2 ЦП-1 ЦП-2 ЦП-1ІЩ-2 ЦП-1ЦП-2

іюнь июль август ИЮНЬ июль август

II II

■ ГП Б

□ ГЦ А ІПВ

□ BP ЦС

ЦП-1 ЦП-2 ннзль

цп і цп-г

авпсі

ОЦП-1 1ЦИ-2 11

Рисунок 7 - Сезонная динамика содержания аскорбиновой кислоты (а), фенольных соединений (б) и полисахаридов (в) в листьях P. media обозначения см. на рис. 1. По оси абсцисс - месяц; по оси ординат - концентрация, мг/г сухой массы

3.3. Суточная динамика физиолого-биохимических характеристик листьев

Plantago media

В естественных условиях произрастания растений постоянно меняются уровень освещенности, температура и другие условия. Приспособление растений при этом происходит в динамическом режиме, задаваемом периодом изменений (Кособрюхов и др., 2009). Исследования суточной динамики физиолого-биохимических характеристик

проводили на примере листьев P. media. В утренние часы содержание воды в листьях Р. media было максимальным и снижалось к полудню: у растений ЦП-1 - с 81% до 72%, ЦП-2 - с 11% до 75% (рисунок 8). В вечернее время содержание воды в листьях растений ЦП-1 повышалось до 76%, а в листьях растений ЦП-2 оставалось на прежнем уровне.

В растениях ЦП-1, которые произрастали на более освещенном участке, уровень ПОЛ по сравнению с утренним временем увеличивался к 14 ч на 26% и снижался к вечеру до утренних значений (рисунок 9). Следовательно, более высокая температура и высокая интенсивность света, свойственные середине летнего дня, приводили к повышенному образованию в клетках активных форм кислорода и окислению органических молекул, включая липиды. У растений ЦП-2, произрастающих в затененном местообитании, водный баланс претерпевал меньшие изменения, а уровень ПОЛ в утреннее и дневное время не менялся. Характер изменения концентрации хлорофиллов а+Ъ в течение дня у обоих типов растений различался. В листьях

7ч 14ч 21ч

Рисунок 8 - Суточная динамика содержания воды в листьях P. media

По оси абсцисс -

по оси ординат

%

время суток, ч; - концентрация,

0.08

0,(Ц

ПЦП-1 »Ш1.2

ш

Рисунок 9 - Суточная динамика содержания МДА в листьях P. media

По оси абсцисс - время суток, ч; по оси ординат - концентрация, мкМ/г сырой массы

растений ЦП-1 в дневное время содержание зеленых пигментов было минимальным, а в листьях ЦП-2 - максимальным (таблица 5). Известно, что изменение содержания хлорофиллов в листьях растений обычно сопровождается изменением числа пластид и их размеров (Любименко, 1963).

Таблица 5 - Суточная динамика содержания пигментов в листьях P. media

Пигменты Содержание

ЦП-1 ЦП-2

7ч 14 ч 21 ч 7ч 14ч 21 ч

Хл а+ Ь, мг/г сухой массы 4,9±0,1 4,0 ±0,1 4,2±0,1 5,1±0,1 6,0±0,1 5,2±0,0

Хл а/Хл b 1,2±0,3 1,5±0,1 1,6±0,1 1,6±0,1 1,5±0,1 1,5±0,1

Хл/каротиноиды 3,5±0,1 3,1±0,2 2,8±0,3 3,6±0,2 3,5±0,2 3,5±0,3

Отношение Хл а/Хл Ъ оставалось, как правило, стабильным в течение суток для затененных растений. Отмечено, что в листьях растений P. media, произрастающих в условиях Самарской области, показатель Хл а/Хл Ъ был ниже, чем у растений этого вида, произрастающих в условиях Южного Тимана (от 2,0 до 2,9) (Головко и др., 2011).

Наибольшее содержание как суммарных, так и ГЛ, наблюдалось у обоих типов растений в утреннее время. При этом содержание ГЛ у растений ЦП-1 к 14 ч снижалось и оставалось на этом же уровне до 21 ч, а у растений ЦП-2 снижалось в течение всего светового дня. Содержание ФЛ в листьях растений ЦП-1 уменьшалось к 14 ч (-20%), а в листьях растений ЦП-2 практически не менялось в течение дня (таблица 6).

Таблица 6. Суточная динамика содержаниялипидов в листьях P. media

Время суток, ч Популяции Липиды, мг/г сырой массы (% от СЛ)

ГЛ ФЛ НЛ СЛ

7 ЦП-1 7,5±0,7(62) 3,3±1,5(27) 1,2±0,1(9) 12,1±1,2

ЦП-2 5,6±0,5(64) 2Д±0,2(24) 1,1±0,0(12) 8,8±0,8

14 ЦП-1 5,2±0,1(58) 2,6±0,1(29) 1,3±0,1(13) 8,9±0,3

ЦП-2 4,2±0,1(53) 2,0±0,1(27) 1,5±0,1(20) 7,5±0,1

21 ЦП-1 5,3±1,3(62) 2,1±0,2(25) 0,8±0,0(13) 8,5±0,8

ЦП-2 4,4±0,4(64) 0,8±0,0(12) 0,7±0,1(24) 6,9±0,6

Известно, что структурное состояние мембран зависит не только от количества липидов,' но и от их соотношения (Крепе, 1981). Оказалось, что при общем снижении уровня ГЛ, относительный вклад отдельных компонентов был более стабильным. Так, содержание МГДГ во фракции ГЛ листьев растений ЦП-1 варьировало от 46 до 50%, в ЦП-2 - от 45 до 52%. При этом в листьях ЦП-2 вклад

МГДГ в пул ГЛ был максимальным в 14 ч на фоне низкого уровня ДГДГ при стабильном вкладе СХДГ. В отличие от ГЛ, состав ФЛ претерпевал ббльшие изменения в течение дня. Особенно четко эта зависимость прослеживается у растений ЦП-1 на показателе отношения ФХ/ФЭ, что может быть связано с изменением путей биосинтеза ФХ или большей их подверженности процессам ПОЛ (рисунок 10).

РЦП-1 ИЦП-2

Рисунок 10 - Суточная динамика соотношения ФХ/ФЭ в листьях P. media

ФХ - фосфатидилхолин, ФЭ - фосфатидилэтаноламин. По оси абсцисс - время суток, ч; по оси ординат -значение соотношения

август

В содержании практически всех компонентов НЛ отмечена высокая степень суточной вариабельности. Наиболее характерным было увеличение ДАГ и уменьшение концентрации Ст.

В середине дня также отмечено двукратное увеличение содержания АК и некоторое снижение концентрации ПС. Достоверных изменений содержания фенольных соединений не обнаружено (рисунок 11).

hi

п ■ 1*11

ш

ПП-1 ЦП-2 21ч

ЦП-1 ЦП-2 7 ч

R1 <ю

и <

1 1 ■

■

■ ГЦ К □ ГЦ Л ВИВ .ОВР ПС

цп-1 ЦП-:

Рисунок 11 - Суточная динамика содержания аскорбиновой кислоты (а), фенольных соединений (б) и полисахаридов (в) в листьях P. media обозначения см. на рис. 1. По оси абсцисс - время суток, ч; по оси ординат - концентрация, мг/г сухой массы

3.4. Изменение морфометрических и физиолого-биохимических характеристик Plantago media под влиянием условий произрастания

Влияние «условно загрязненной среды» на исследуемые характеристики изучено при сравнении растений, собранных в городских условиях (ЦП-3) и в «условно чистой среде» в условиях национального парка (ЦП-1,-2) в течение трех летних месяцев. Площадь листьев, длина побегов и корней растений ЦП-3 были больше по сравнению с растениями ЦП-1,-2. В июле надземная биомасса растений ЦП-3 накапливалась более интенсивно (рисунок 12).

Состав и количество ГЛ у растений ЦП-3 не отличался от растений ЦП-1,-2, т.е. городские условия не оказывали существенного влияния на состав липидов, отвечающих за формирование мембран фотосинтетического аппарата.

Рисунок 12 - Соотношение биомассы надземной и подземной частей P. media

По оси абсцисс - месяц; по оси ординат -значение соотношения

І1

ЦП-1ЦП-2 ЦП-3 ЦП-1ЦП-2ЦП-3 ЦП-1ЦП-2ЦП-3 нюнь июль август

В составе ФЛ более высоким был вклад ФХ: 40-60% от фракции ФЛ - у растений ЦП-3 и 40-50% - у ЦП-1,-2. Более интенсивные изменения показаны в концентрации ФЭ у растений ЦП-3 (5-30%) по сравнению с растениями ЦП-1,-2 (12-18%).

Уровень ПОЛ у растений ЦП-3 был выше, чем у растений ЦП-1,-2, в течение всего периода (рисунок 13). Если сравнить этот показатель с содержанием ФЛ, то очевидна их взаимосвязь, особенно четко прослеживаемая у растений, произрастающих на свету, и у растений, произрастающих в «условно загрязненной среде»: увеличение уровня ПОЛ обратно пропорционально содержанию ФЛ.

июнь Оиюль ЕЭивгуст

Рисунок 13 - Содержание малонового диальдегида (прямой порядок оси ординат) и фосфолипидов (обратный порядок оси ординат) в листьях P. media

По оси абсцисс - ценопопуляции; по оси ординат: прямой порядок - концентрация, мкМ/г сырой массы; обратный порядок - концентрация, мг/г сырой массы

В городских условиях наблюдалась более низкая концентрация фотосинтетических пигментов при достоверно одинаковой концентрации каротиноидов в течение летнего периода (таблица 7).

Таблица 7 - Содержание фотосинтетических пигментов в листьях P. media

Пигменты Содержание

Июнь Июль Август

ЦП-1 ЦГІ-2 ЦП-3 ЦП-1 ЦП-2 ЦП-3 ЦП-1 ЦП-2 ЦП-3

Хл а+Ь, мг/г сухой массы 4,5±0,5 6,9±0,7 4,0±0,4 4,3±0,5 5,3±0,4 3,6±0,6 4,5±0,4 5,8±0,4 3,8±0,3

Хл alb 1,4±0,0 1,4±0,0 1,4±0,2 1,4±0,1 1,3±0,0 1,7±0,0 1,3±0,0 1,2±0,0 1,5±0,0

Хл/Каротиноды 3,1±0,0 5,0±0,0 3,8±0,2 3,7±0,3 3,7±0,0 4,4±0,2 3,7±0,0 3,7±0,1 3„9±0,1

Низкий уровень содержания хлорофиллов, но увеличение их соотношения в растениях ЦП-3 по сравнению с растениями ЦП-1,-2 может быть вызвано приспособлением пигментного аппарата листьев к условиям обитания (Максимова, 2007; Терлеева, 2011).

В ЦП-3 содержание АК и ПС было на 30% ниже, чем в ЦП-1,-2, в то время как содержание фенольных соединений - выше на 20% (рисунок 14).

її. li. У

«пи.

□ ГЦ л

ШШШШ

ЦІМ ІІП-! ЦП-Э нюнь

ЦП11 ИИ ЦП-Э ЩИ ІШ-2 щи

Рисунок 14 - Содержание аскорбиновой кислоты (а), фенольных соединений (б), полисахаридов (в) в листьях P. media

обозначения см. на рис. 1. По оси абсцисс концентрация, мг/г сухой массы

места произрастания; по оси ординат

Учитывая, что P. media имеет широкий ареал, были проанализированы растения из разных географических районов в одинаковой фазе онтогенеза. В результате были установлены отличия: содержание липидов в листьях и корневой части растений, произрастающих в Кемеровской области, было в 2 раза больше, чем в растениях Самарской области; отмечен более высокий вклад МГДГ (на 12%) и низкий ДГДГ (на 12%) в пул ГЛ; больший вклад ФХ (на 7%) во фракцию ФЛ и высокое содержание С18:3 (на 10%) в пуле ЖК. В растениях, произрастающих в Самарской области, наблюдали более высокую концентрацию АК (на 15% выше, чем в растениях из Кемеровской области), а фенольных соединений и ПС - ниже в 1,5 и 3,8 раза соответственно. Отношение Хл а/Хл Ъ в листьях растений P. media, произрастающих в условиях Кемеровской области -2,5 - также как и в растениях, произрастающих в условиях Южного Тимана, было выше, чем у растений Самарской области.

3.5. Взаимосвязь условий обитания и структурно-функциональных свойств

Plantago media

Как видно из представленных данных, исследованные растения рода Plantago отличаются видо- и органоспецифичностью в отношении морфометрических параметров и структурно-функциональных компонентов, используемых в качестве БАС. На примере листьев P. media установлено, что на количественные показатели этих характеристик оказывают влияние факторы среды произрастания, интегрированные в фотопериод (суточная динамика), вегетационный период (сезонная динамика) и пространственную разобщенность (географо-климатические условия). Использование метода канонического анализа соответствий (ССА, или Canonical Correspondence Analysis) позволило наглядно продемонстрировать взаимосвязь между компонентами, поддерживающими

жизненно важные функции клетки и организма и используемыми в качестве БАС, с параметрами роста (рисунок 15).

о \Сухой вес пол \ £л.>/\ \ ГЛ

Ln■ ^M^jmZ,. У v ф

НЛ' АК роста

Ширина листа

о £ ^ Оводненность

*7

Рисунок 15 - Ординационная ССА-диаграмма взаимосвязи морфометрических и структурно-функциональных характеристик P. media

обозначения: ГЛ - гликолипиды, Кар - каротиноиды, НЛ - нейтральные липиды, ПОЛ -перекисное окисление липидов, УППЛ - удельная поверхностная площадь листа, ФЛ -фосфолипиды, Хл - хлорофиллы, L„. - длина генеративного побега, LK. - длина корня, L, -длина листа, S„ - площадь листа, АК - аскорбиновая кислота, BP ПС - водорастворимые полисахариды, ПВ ПС - пектиновые вещества полисахаридов, Ф - фенольные соединения.

Так, аккумуляция вторичных метаболитов - фенольных соединений и каротиноидов, тесно связана с концентрацией продуктов первичного синтеза -ФЛ и ГЛ, что в свою очередь, сопряжено с показателем УППЛ; накопление BP ПС и ПВ зависит от линейных размеров и биомассы листьев, уровня ПОЛ; концентрация хлорофиллов, связанная с Кроста, зависит от степени оводненности листьев; содержание АК обратно пропорционально накоплению фенольных

соединений и каротиноидов.

Аналогичным методом установлена связь некоторых средневзвешенных биохимических и морфометрических параметров с градиентом факторов среды и их комбинации. Например, повышенные температура и интенсивность света приводили к накоплению в листьях НЛ и каротиноидов; с повышением влажности почвы увеличивалась оводненность листьев, Кроста и длина корня.

Выявленные закономерности могут быть полезными для оптимизации времени сбора целевых БАС в лекарственном сырье, а также оценке их потенциала в зависимости от погодных или климатических условий.

ВЫВОДЫ

1. На основе комплексного исследования морфометрических и физиолого-биохимических характеристик пяти видов рода Plantago L. установлено сходство

качественного и различия количественного состава биологически активных соединений. Обнаружено, что содержание водорастворимых полисахаридов в листьях Р. uliginosa превышает на 30% аналогичный показатель фармакопейного вида Р. major. Содержание аскорбиновой кислоты в надземной части Р. media и корнях Р. lanceolata в 2-3 раза выше, чем у Р. major. Общее содержание липидов, хлорофиллов и каротиноидов в листьях четырех исследованных видов рода Plantago, как правило, находится на более низком уровне, чем у Р. major.

2. Выявлена взаимосвязь между содержанием биологически активных соединений и периодом вегетации растений Р. media. В течение летнего периода монотонно возрастает содержание полисахаридов, уменьшается содержание фенольных соединений, а зависимость содержания аскорбиновой кислоты имеет экстремальный характер с максимумом в самый жаркий период времени. С увеличением времени вегетации растений возрастает интенсивность процессов перекисного окисления липидов, что ведет к снижению общего содержания фосфолипидов. Максимальное содержание гликолипидов соответствует началу лета и коррелирует с константой роста листьев, а нейтральных липидов - концу лета одновременно с ростом площади листа. Содержание хлорофиллов, гликолипидов и состав жирных кислот суммарных липидов остается на относительно неизменном уровне.

3. На основании исследования суточной динамики физиолого-биохимических показателей в листьях Р. media установлено, что в полуденное время на 15-30% снижается общее содержание хлорофиллов, липидов, полисахаридов и существенно увеличивается концентрация аскорбиновой кислоты. Эти изменения происходят на фоне 15% снижения содержания воды с одновременным повышением уровня перекисного окисления липидов.

4. При сравнении морфометрических и структурно-функциональных характеристик растений Р. media, произрастающих в разных световых и температурных условиях, выявлено, что с увеличением интенсивности света и температуры повышается уровень перекисного окисления липидов (на 30%), показатель удельной поверхностной плотности листьев (на 15-27%) за счет снижения содержания воды. Одновременно наблюдается снижение общего содержания хлорофиллов и полярных липидов (на 15-25%).

5. Найдено, что растения, произрастающие в «условно загрязненной» урбосреде, как правило, характеризуются более развитыми листьями и корневой системой, а также пониженной концентрацией исследуемых биологически активных компонентов по сравнению с растениями из «условно чистых» местообитаний.

6. Полученные результаты являются основой для разработки практических рекомендаций по определению оптимального времени сбора лекарственных растений рода Plantago и выбора условий их произрастания. Растения вида Plantago uliginosa рекомендованы в качестве перспективного источника водорастворимых полисахаридов и других биологически активных соединений для производства лекарственных препаратов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

"■-публикации в печатных изданиях, рекомендованных Перечнем ВАК РФ

1. Гребенкина Т.М., Розенцвет O.A., Нестеров В.Н. Влияние городских условий на морфологические и физиолого-биохимические показатели Plantago media L. II Материалы Всерос. симпоз. «Экология мегаполисов фундаментальные основы и инновационные технологии». - М., 2011. - С. 48.

2. Гребенкина Т.М., Нестеров В.Н., Розенцвет O.A., Богданова Е.С. Суточная динамика содержания липидов в листьях Plantago media L. // VII съезд ОФР России «Физиология растений - фундаментальная основа экологии и инновационных биотехнологий» и междунар. науч. шк. «Инновации в биологии для развития биоиндустрии сельскохозяйственной продукции»: материалы докл. Часть I. - Н. Новгород. 2011. - С. 199-200.

3.* Гребенкина Т.М., Нестеров В.Н., Розенцвет O.A., Богданова Е.С. Липиды листьев Plantago media (L.) II Изв. Самар. НЦ РАН. - 2011. - Т. 13, № 5. - С. 130-133.

4. Гребенкина Т.М. Влияние городской среды на структурное и функциональное состояние лекарственных растений // Медико-биологические процессы адаптации: материалы междунар. науч.-практ. конф. - Сухум, 2012. -С. 43-44.

5.* Гребенкина Т.М., Розенцвет O.A., Нестеров В.Н., Богданова Е.С. Изменение состава липидов и пигментов Plantago media (PLANTAGINACEAE) в течение светлого времени суток // Растительные ресурсы. - 2012-№4.-С. 565-578.

6.* Розенцвет O.A., Гребенкина Т.М., Нестеров В.Н., Богданова Е.С. Специфичность распределения биологически активных соединений в разных органах Plantago media// Аграрная Россия. - 2012. -№ 9. - С. 19-23.

7.* Розенцвет O.A., Нестеров В.Н, Богданова Е.С., Гребенкина Т.М., Головко Т.К. Влияние кратковременных и продолжительных колебаний факторов среды на состав липидов Plantago media L. в условиях Южного Тимана // // Изв. Самар. НЦ РАН. - 2012.Т. - Т. 14, № 1 (3). - С. 791-799.

8. Гребенкина Т.М., Нестеров В.Н., Богданова Е.С., Саксонов C.B., Розенцвет O.A. Сезонная динамика морфометрических параметров и мембранных глицеролипидов Plantago media (Plantaginaceae) II Самарская лука: проблемы региональной и глобальной экологии. - 2012. - Т. 22, № 1. - С. 24-38.

9. Гребенкина Т.М., Розенцвет O.A., Нестеров В.Н., Богданова Е.С. Динамика морфометрических и физиолого-биохимических показателей Plantago medí. H Материалы Всерос. науч. конф. с междунар. участием «Инновационные направления современной физиологии растений». - М., 2013. - С. 141-142.

10. Гребенкина Т.М., Розенцвет O.A. Физиолого-биохимические и морфометрические и свойства растений рода Plantago L. // Материалы XIII съезда Русского ботанического общества «Современная ботаника в России». - Тольятти, 2013.-С. 75-77.

11. Розенцвет O.A., Гребенкина Т.М. Физиолого-биохимические свойства Plantago media II Материалы VIII Всерос. конф. «Химия и технология растительных веществ». - Калининград, 2013. - С. 191.

12. Гребенкина Т.М., Нестеров В.Н., Богданова Е.С., Розенцвет O.A. Структурно-функциональное состояние растений Plantago media в условиях городской среды // Самарская Лука: проблемы региональной и глобальной экологии. - 2013. - Т.22, № 4. - С. 21-26.

Подписано в печать 15.11.2013 г. Формат А5. Гарнитура Times New Roman. Печать RISO. Тираж 100 экз. Заказ № 209 Отпечатано с готового оригинал-макета Типография «Кассандра» 445061, Тольятти, ул. Индустриальная, д. 7 Тел./факс (8482) 57-00-04, e-mail: kassandral 989@vandex.ru (Адрес для корреспонденции: 445035, г.Тольятти, до востребования)