Морфология яичников и апоптоз в условиях гипертермии и воздействия мелатонином (экспериментальное исследование)

Бочкарева, Алла Львовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфология яичников и апоптоз в условиях гипертермии и воздействия мелатонином (экспериментальное исследование)
ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Морфология яичников и апоптоз в условиях гипертермии и воздействия мелатонином (экспериментальное исследование)"

005047034

На правах рукописи

Бочкарева Алла Львовна

МОРФОЛОГИЯ ЯИЧНИКОВ И АПОПТОЗ В УСЛОВИЯХ ГИПЕРТЕРМИИ И ВОЗДЕЙСТВИЯ МЕЛАТОНИНОМ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология.

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 0 СЕН 2012

Новосибирск-2012

005047034

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждена «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (г. Новосибирск)

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Мичурина Светлана Викторовна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Склянов Юрий Иванович (Новосибирский государственный медицинский университет, заведующий кафедрой гистологии, эмбриологии и цитологии)

доктор медицинских наук Обухова Лидия Александровна (Новосибирский национальный исследовательский государственный университет, профессор кафедры физиологии факультета естественных наук)

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Алтайский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (г. Барнаул)

Защита состоится Л А>.ОПТ 2012 2012 г. в «_» на заседании

диссертационного совета Д 208.062.05, созданного на базе Новосибирского государственного медицинского университета (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52; тел.: (383) 229-10-83)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирского государственного медицинского университета (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52)

Автореферат разослан «

0 5 (В 2012 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

А.В. Волков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. В современных условиях возрастает влияние высоких температур на организм человека в связи с освоением регионов с жарким климатом, развитием туризма и миграции, а также с работой в ряде отраслей промышленности (металлургической, угольной, горнорудной и др.). Вместе с тем известно широкое применение в народной и традиционной медицине различных тепловых процедур (сауны, бани, компрессы, горячие минеральные ванны). Накоплен обширный научный материал об использовании гипертермии для терапии онкологических, инфекционных, паразитарных заболеваний, наркозависимых состояний, СПИДа [Christophi С., 1998; Сувернев A.B. и соавт., 1999; Баллюзек Ф.В. и соавт., 2001; Киншт Д.Н., Киншт Н.В., 2006; Лопатин В.Ф., 2009; Repasky Е.А., 2010]. При этом установлено, что гипертермия в диапазоне температур от 42,5 °С до 44,0 С является экстремальным фактором внешней среды, на действие которого организм реагирует комплексом взаимосвязанных изменений, приводящих к глубоким расстройствам клеточных и внеклеточных взаимоотношений в биологических структурах [Козлов Н.Б.,1990; Kampinga H.H. et al., 1997]. В таких условиях значительную нагрузку испытывают репродуктивные органы.

Установлено, что в поддержании клеточного гомеостаза активное участие принимают механизмы программированной клеточной гибели. Согласно современной модели регуляции апоптоза считается, что отношение белков регуляторов апоптоза Вс1-2 и Bad, Вах определяет чувствительность клеток к воздействию апоптотических факторов и является «молекулярным переключателем», который определяет, будет происходить рост или атрофия ткани [Chevalier R.L. et al., 2000; Пальцев М.А., 2004; Мушкамбаров H.H., 2007]. В связи с этим, изучение морфологии яичников и процессов апоптоза в тканевом микрорайоне яичника при воздействии гипертермии необходимо для выяснения механизмов нарушений репродуктивной функции и бесплодия.

Доказано, что различные экстремальные воздействия приводят к

нарушениям систем адаптации и детоксикации, а также к десинхронизации

биоритмов организма (Гаркави Л.Х. и соавт., 1998). В восстановлении

нарушенного гомеостаза и оптимизации функции различных органов и систем принимает участие гормон эпифиза - мелатонин, являющийся основным синхронизатором эндогенных ритмов организма, мощным антиоксидантом и иммуномодулятором [Srinivasan V. et al., 2005; Arendt J., 2006; Арушанян Э.Б., 2010; Мендель В. Э., Мендель О. И., 2010]. Также мелатонин участвует в регуляции секреции половых гормонов и процессов полового созревания, обеспечивая тем самым полноценное функционирование репродуктивной системы [Rohr U.D., Herold J., 2002; Коркушко О.В., Шатило В.Б., 2003; Анисимов В.Н., 2006]. Изучение влияния введения мелатонина в условиях гипертермии на морфологию яичников и процессы апоптоза до настоящего времени не проводилось. Все вышеизложенное определило цель исследования.

Цель исследования. Изучение морфологических изменений яичников и процессов апоптоза в яичниках крыс (на примере оценки активности белков регуляторов апоптоза Bad и Вс1-2) в остром (3-й сутки) и восстановительном (7-е и 14-е сутки) периодах после однократного воздействия экспериментальной гипертермии (ЭГ) и введения мелатонина.

Задачи исследования

1. Изучить морфологические особенности яичников крыс в остром и восстановительном периодах после однократного воздействия высокой внешней температуры.

2. Изучить процессы апоптоза в клетках фолликулов и желтых тел яичников (на примере оценки активности белков регуляторов апоптоза Вс1-2 и Bad) в остром и восстановительном периодах после однократного воздействия высокой внешней температуры.

3. Оценить влияние мелатонина на морфологические особенности яичников крыс в остром и восстановительном периодах после однократного воздействия высокой внешней температуры. ■

4. Оценить влияние мелатонина на процессы апоптоза в клетках фолликулов и желтых тел яичников (на примере оценки активности белков регуляторов апоптоза Вс!-2 и Bad) в остром и восстановительном периодах после воздействия высокой внешней температуры.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное исследование тканевого микрорайона яичников и процессов апоптоза в яичниках крыс в острый (3-й сутки) и восстановительный (7-е и 14-е сутки) периоды после воздействия высокой температуры и при введении мелатонина.

Впервые выявлено, что воздействие высокой температуры:

- приводит к значительным нарушениям венозного и лимфатического дренажа яичника, которые наиболее выражены на 3-й сутки (в острый период) после перегревания;

- вызывает нарушения фолликулогенеза, овуляции и усиление процессов атрезии фолликулов, наиболее выраженные на 7-е сутки (в раннюю фазу восстановительного периода) после перегревания;

-вызывает нарушения процессов преобразования желтых тел, усиливая процессь! дегенерации и атрезии, наиболее выраженные на 7-е сутки после дестабилизирующего воздействия;

- приводит к изменению соотношения белков регуляторов апоптоза (преобладание проапоптотического белка Bad над антиапоптотическим белком Вс1-2) как в фолликулах, так и в желтых телах яичников, что свидетельствует об активации процессов апоптоза в органе.

Впервые установлено, что введение мелатонина в условиях перегревания:

- приводит к более быстрому восстановлению венозного и лимфатического дренажа яичника до уровня интактных крыс (уже на 7-е сутки после воздействия);

- приводит к ускорению восстановления первичных и преовуляторных фолликулов, а также к уменьшению процессов атрезии фолликулов (уже на 7-е сутки после перегревания);

- приводит к уменьшению повреждающего действия перегревания на морфологическую организацию желтых тел (на стадиях «железистого метаморфоза» и «расцвета») в остром периоде (на 3-й сутки) и более быстрому восстановлению желтых тел всех стадий развития начиная с 7-х суток после воздействия;

-приводит к сбалансированности процессов апоптоза и пролиферации,

снижает апоптотическую гибель клеток фолликулов и желтых тел яичников и, как следствие, уменьшает повреждающее действие перегревания на морфологическую организацию органа.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные морфологические данные об особенностях организации яичников с характеристикой их цитологического и молекулярного профилей при воздействии высокой температуры в острый и восстановительный периоды естественной реабилитации и при введении мелатонина имеют важное значение для практической деятельности. Обнаружены негативные эффекты воздействия высокой температуры на крово-и лимфообращение в органе, а также на процессы фолликулогенеза, развития желтых тел и программированной клеточной гибели (активация апоптоза) в яичниках. Установлено корригирующее влияние мелатонина на кровеносные и лимфатические сосуды, морфологическую организацию фолликулов, желтых тел яичников и на процессы апоптоза в яичниках в условиях перегревания. Полученные данные свидетельствуют о перспективности использования этого гормона в практике лечения нарушений генеративной функции, вызванных воздействием высокой температуры, а также являются основой для разработки патогенетической лимфотропной терапии заболеваний органов репродуктивной системы с помощью гормона эпифиза мелатонина.

Положения, выносимые на защиту

1. Воздействие высокой внешней температуры вызывает значительные морфологические изменения в тканевом микрорайоне яичников (нарушение лимфатического и венозного дренажа, значительные нарушения фолликулогенеза и процессов развития желтых тел), наиболее выраженные в острый период (3-й сутки) и в раннюю фазу восстановительного периода (7-е сутки) после ЭГ.

2. Действие высокой внешней температуры приводит к изменению соотношения белков регуляторов апоптоза (преобладание проапоптотического белка Bad над антиапоптотическим белком Вс1-2) как в фолликулах, так и в желтых телах яичников, что свидетельствует об активации процессов апоптоза в органе.

3. Введение мелатонина ускоряет восстановительные процессы в яичниках, о чем свидетельствует более быстрое восстановление морфологической организации компартментов тканевого микрорайона яичников (уже с 7-х суток после перегревания).

4. Воздействие мелатонином приводит к сбалансированности процессов апоптоза и пролиферации, снижению апоптотической гибели клеток фолликулов и желтых тел на 7-е сутки после ЭГ и, как следствие, к уменьшению повреждающего действия перегревания на морфологическую

организацию органа.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены на IV Съезде лимфологов России с международным участием (Москва, 2011), на X Международной конференции «Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии» (Новосибирск, 2011), на Евразийском симпозиуме «Проблемы саногенного и патогенного эффектов эндо- и экзоэкологического воздействия на внутреннюю среду организма» (Чолпон-Ата, 2009), на Юбилейной выездной научной сессии «Актуальные вопросы клинической лимфологии» (Андижан, 2009), на Международной конференции «Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии» (Новосибирск, 2008).

Внедрение результатов работы в практику. Полученные данные об особенностях морфологической организации и процессов апоптоза в яичниках в условиях гипертермии и воздействия мелатонином внедрены в практику научно-исследовательской работы лаборатории ультраструктурных исследований Научно-исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (г. Новосибирск).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 печатных работ, из них 2 - в рецензируемых научных журналах, рекомендуемых ВАК России для публикаций основных результатов исследования, получен один патент на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 193 страницах машинописного текста и состоит из введения, аналитического обзора литературы, характеристики материала и методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных данных, заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 90 рисунками, 1 таблицей. Список литературы содержит 301 источник (193 отечественных и 108 зарубежных авторов).

Личный вклад автора. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование одобрено локальным этическим комитетом Научно-исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (г. Новосибирск) (протокол № 86 от 16.04.2012).

В эксперименте использовались 155 крыс-самок линии «Вистар» (возраст 3 месяца, масса тела 180-200 грамм) из вивария Центральной научно-исследовательской лаборатории Новосибирского государственного медицинского университета. Животные содержались при температуре воздуха 20 иС - 22 С на стандартном пищевом рационе и свободном доступе к воде. Эксперименты проводились в зимне-весенний период с 10 до 12 часов.

Экспериментальные воздействия выполнены с соблюдением принципов гуманности, изложенных в директивах Европейского сообщества (86/609/ЕЕС) и Хельсинкской декларации по защите позвоночных животных, используемых для лабораторных и иных целей.

Животных, находящихся в фазе диэструс полового цикла, подвергали экспериментальной гипертермии в соответствии со «Способом экспериментального моделирования общей гипертермии у мелких лабораторных животных» (Ефремов A.B., Пахомова Ю.В. и соавт., 2001) однократно, до стадии теплового удара (ректальная температура 43,5°С). Определение фаз полового цикла проводили методом вагинальных мазков.

Введение мелатонина (М) осуществляли в день проведения гипертермии и в последующие 2-е суток после захода солнца (по 0,1 мг мелатонина в 0,2 мл физиологического раствора). Животных выводили из эксперимента под эфирным наркозом на 3-й, 7-е и 14-е сутки после однократного воздействия экспериментальной гипертермии (ЭГ). Сроки исследования были определены в соответствии с представлениями о фазности в течении постгипертермического периода: острый период после ЭГ (с первых часов до 3-х суток) и восстановительный период (с 7-х по 21-е сутки) [Пахомова Ю.В., 2006; Антонов А.Р., 2004]. Выделено 7 групп животных: 1-я - контрольная (интактные животные); проводилось взятие материала для исследований: 2-я группа - на 3-й сутки после ЭГ («ЭГ+Зсут»), 3-я - на 7-е сутки после ЭГ («ЭГ+7сут»), 4-я - на 14-е сутки после ЭГ («ЭГ+14сут»), 5-я - на 3-й сутки после ЭГ и введения мелатонина («ЭГ+М+Зсут»), 6-я - на 7-е сутки после ЭГ и введения мелатонина («ЭГ+М+7сут»), 7-я — на 14-е сутки после ЭГ и введения мелатонина («ЭГ+М+14сут»), В качестве объекта гистологического исследования использовали образцы яичников, которые забирали после декапитации животных под эфирным наркозом. Для светооптического исследования образцы яичников фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и заключали в парафин. На санном микротоме готовили парафиновые серийные срезы толщиной 5-6 мкм. После депарафинизации их окрашивали гематоксилином Майера, эозином и изучали под бинокулярным микроскопом при увеличении до 250". Методом точечного счета с использованием точечной морфометрической системы (121 тестовая точка) вычисляли относительные площади спиральных артерий, сосудов венозного сплетения и лимфатических сосудов яичника, а также примордиальных, первичных, вторичных, преовуляторных, атретических фолликулов и желтых тел на стадиях «пролиферации и васкуляризации», «железистого метаморфоза», «расцвета», «обратного развития».

Статистическая обработка полученных данных осуществлялась с помощью пакета прикладных программ Microsoft Excel 2007, на PC Pentium 4 в

среде Windows с использованием статистического пакета «Statistica 5.5», с вычислением средних арифметических величин (М), стандартных ошибок средних (m) и критерия Стьюдента. Различия между контрольной и опытными группами считали достоверными при р < 0,05 [Автандилов Г.Г., 1990; Петри А., Сэбин А., 2010]. Иммуногистохимическое исследование по оценке уровней экспрессии белков регуляторов апоптоза BcI-2 и Bad (на парафиновых срезах) проводили с помощью непрямого стрептавидин-биотинового метода [Эллиниди В. Н. и соавт., 2002; Kluck R.M. et al., 1997], используя набор Novostain 500, NCL-RTU-D. Срезы изучали при помощи моторизованного микроскопа М200 («Carl Zeiss»). Микрофотографии получали с помощью камеры AxioCam HRc («Carl Zeiss») при конечном увеличении в 630 раз. Количественную оценку интенсивности иммуногистохимической окраски на Вс1-2 и Bad в клетках фолликулов и желтых тел осуществляли с помощью компьютерной программы Axio Vision 4.7.1 («Carl Zeiss») и блока автоматических измерений (Auto measure). В программу статистических вычислений вводили значение процента площади позитивно окрашиваемых структур.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Морфологическая организация и процессы апоптоза в яичниках крыс после однократного воздействия высокой внешней температуры.

На третьи сутки (в остром периоде) выявлено выраженное нарушение лимфатического и венозного дренажа в органе (расширение интерстициальных несосудистых путей микроциркуляции, расширение и деформация лимфатических и венозных сосудов, застой тканевой жидкости в межтканевых пространствах, мозаичность кровенаполнения), различные проявления которого наблюдались и на 14-е сутки после перегревания. Нарушение крово- и лимфообращения, снижение кровотока в тканях приводят к развитию тканевой гипоксии [Султанов Ф.Ф. и соавт., 1988; Доброхотова Ю.Э. и соавт., 2002; Мичурина C.B., 2007]. Указанные изменения вызывают значительные нарушения фолликулогенеза и процессов развития желтых тел, усиление

процессов дегенерации и атрезии (Волкова О.В., 1983). Морфометрически это проявляется в снижении относительной площади примордиальных и первичных фолликулов, желтых тел на стадиях «железистого метаморфоза» и «расцвета», а также в увеличении относительной площади атретических фолликулов и желтых тел на стадии «обратного развития» (табл. 1). На 7-е сутки (в начальной фазе восстановительного периода) после ЭГ нами выявлено уменьшение выраженности нарушений в несосудистых путях микроциркуляции, а также в венозном и лимфатическом звеньях сосудистого русла яичников по сравнению с 3-ми сутками. Вместе с тем установлено, что на фоне улучшения лимфатического и венозного дренажа отмечается спазм артериол. По-видимому, обусловленная этими изменениями местная ишемия усугубляет соответствующие нарушения в корковом веществе яичника. Это подтверждают наши данные о почти полном исчезновении первичных фолликулов, значительном снижении относительной площади преовуляторных фолликулов, исчезновении желтых тел на стадиях «пролиферации и васкуляризации», «железистого метаморфоза» и «расцвета», а также выраженном увеличении относительной площади атретических фолликулов и желтых тел на стадии «обратного развития».

На более поздних сроках восстановительного периода (14-е сутки) на фоне улучшения гемодинамики и лимфоциркуляции (по сравнению с группой «ЭГ+7сут») отмечается увеличение относительной площади растущих и преовуляторных фолликулов, появление желтых тел начальных стадий развития, а также выраженное снижение относительной площади атретических фолликулов и желтых тел на стадии «обратного развития».

По данным компьютерной морфометрии, площадь иммуногистохимической окраски на антиапоптотический белок Вс1-2 в клетках фолликулярного эпителия яичников на 3-й сутки после перегревания достоверно увеличилась (почти в 2 раза) на фоне соответствующей контролю площади иммуногистохимической окраски на проапоптотический белок Bad.

Таблица 1

Относительная площадь структурных элементов яичника в, %; М ± ш

Структура яичника Контроль 3-й сутки 7-е сутки 14-е сутки

Гипертермия + физ.раствор Гипертермия + мелатонин Гипертермия + физ.раствор Гипертермия + мелатонин Гипертермия + физ.раствор Гипертермия + мелатонин

Артерии 0,73 ±0,11 0,73 ±0,13 0,79 ±0,14 0,39 ± 0,08* 0,67 ±0,11' 0,48± 0,09* 0,84 ±0,15*

Вены 2,66 ± 0,20 6,83 ± 0,60' 3,47 ±0,26" 2,44 ± 0,33 2,69 ±0,27 1,01± 0,17* 2,69 ±0,34"

Лимфатические сосуды 1,37 ±0,13 6,25 ±0,6 Г 2,16 ±0,25"* 2,88 ± 0,36' 1,15 ±0,17" 1,74 ±0,14 0,84 ±0,15""

Примордиальные фолликулы 0,36 ±0,03 0,14 ±0,02* 0,15 ±0,03* 0,14 ±0,02' 0,18 ±0,02* 0,18 ±0,03* 0,14 ±0,02*

Первичные фолликулы 0,51 ±0,04 0,22 ±0,01' 0,22 ± 0,02' 0,03 ± 0,002" 0,17 ±0,01'* 0,28 ± 0,02' 0,24 ±0,03"

Вторичные фолликулы 3,18 ±0,21 6,61 ±0,45" 6,30 ±0,40" 4,98 ±0,31" 5,52 ±0,48" 5,74 ±0,52' 5,97 ± 0,50"

Преовуляторные фолликулы 6,49 ±0,62 6,60 ±0,32 7,67 ±0,51** 2,61 ±0,22* 10,80 ±0,95*' 8,64 ± 0,62* 4,28 ±0,46*'

Атретические фолликулы 0,60 ± 0,05 1,96 ±0,16' 2,41 ±0,18'" 15,04 ± 1,30" 5,80 ±0,60"' 11,06 ±1,08" 10,86 ±0,92"

Желтые тела на стадии пролиферации и васкуляризации 13,28 ± 1,34 14,72 ± 1,30 12,88 ±1,1 0 0 5,63 ± 0,40* 12,51 ± 1,10'

Желтые тела на стадии железистого метаморфоза 16,22 ±1,46 4,65 ± 0,36* 11,47 ±1,00*' 0 1,96 ±0,25*' 2,21 ±0,09* 5,94 ±0,46*'

Желтые тела на стадии расцвета 3,06 ±0,25 0,95 ± 0,08* 1,66 ±0,12*' 0 0,34 ±0,04*' 0 1,04 ±0,08**

Желтые тела на стадии обратного развотия 4,91 ±0,20 7,17 ±0,52* 8,45 ± 0,75*" 27,41 ±2,45* 10,36 ±0,80*' 8,26 ±0,71* 8,16 ±0,49*

* - достоверное отличие от группы контроля (р О 0,05); # - достоверное отличие от группы без мелатонина (р С 0,05)

В настоящее время считается, что такие изменения могут свидетельствовать о поступлении в эти клетки проапоптотических сигналов, а также об «аварийном» включении в этих клетках Вс1-2 - зависимой антиапоптотической защиты, связанной с появлением таких сигналов в организме [Мушкамбаров H.H., Кузнецов С.Л., 2007; Мичурина C.B., Бородин Ю.И. и соавт., 2012]. В клетках желтых тел происходит синхронное увеличение площади иммуногистохимической окраски на белки Вс1-2 и Bad (в 2 раза), что указывает на сбалансированность процессов апоптоза и пролиферации в желтых телах яичников в остром периоде после воздействия. Как было отмечено выше, нарушение крово- и лимфообращения в тканях приводят к развитию тканевой гипоксии, которая является индуктором клеточной гибели. В соответствии с этим, к 14-м суткам после перегревания происходит значительное снижение интенсивности окрашивания антиапоптотического белка Вс1-2 на фоне выраженного окрашивания проапоптотического белка Bad как в фолликулах, так и в желтых телах яичников (площадь иммуногистохимической окраски на антиапоптотический белок Вс1-2 почти в 2 раза ниже контрольных величин). Таким образом, установлено, что действие высокой внешней температуры приводит к изменению соотношения белков регуляторов апоптоза (преобладание проапоптотического белка Bad над антиапоптотическим белком Вс1-2) как в фолликулах, так и в желтых телах яичников. Согласно данным литературы, подобные изменения свидетельствуют о «снятии» антиапоптотической защиты и активации процессов апоптоза в органе [Мичурина C.B., Бородин Ю.И. и соавт., 2012].

Морфологическая организация и процессы апоптоза в яичниках крыс в условиях гипертермии и воздействия мелатонином.

Нами установлено, что введение мелатонина после воздействия гипертермии приводило к менее выраженным нарушениям в тканевом микрорайоне яичника по сравнению с группами животных, не получавших мелатонин. Так, на 3-й сутки отмечалось уменьшение отечности и расширения интерстициальных несосудистых путей микроциркуляции, а также деформации

и расширения лимфатических и венозных сосудов в группе крыс, получавших мелатонин. Выявлено более быстрое восстановление нарушений венозного и лимфатического дренажа яичника до уровня интактных крыс в группе животных с введением мелатонина (уже на 7-е сутки после воздействия). Вместе с тем установлено, что введение мелатонина, нормализуя кровообращение и лимфоциркуляцию в яичнике, создает условия для ускорения восстановления генеративных элементов яичника. Воздействие мелатонином приводит к уменьшению морфологических проявлений нарушения фолликулогенеза (на стадиях первичных, преовуляторных и атретических фолликулов) уже с 7-х суток после гипертермии. Также введение мелатонина приводит к уменьшению повреждающего действия перегревания на морфологическую организацию желтых тел уже в остром периоде (на 3-й сутки) и улучшению восстановления желтых тел на 7-е и 14-е сутки после ЭГ, что подтверждается данными морфометрического исследования. На 7-е сутки в группе с введением мелатонина появляются желтые тела на стадиях «железистого метаморфоза» и «расцвета», которых нет в группе без мелатонина, а также отмечается снижение (по сравнению с группой без мелатонина) относительной площади желтых тел на стадии «обратного развития». На 14-е сутки в группе с введением мелатонина относительная площадь желтых тел яичника на стадии «пролиферации и васкуляризации» восстанавливается до контрольных значений; относительная площадь желтых тел на стадиях «железистого метаморфоза» и «расцвета» восстанавливается значительно выше, чем в группе без мелатонина (табл.1). Таким образом, установлено корригирующее действие мелатонина на морфологическую организацию кровеносных, и лимфатических сосудов, фолликулов и желтых тел яичников, особенно выраженное в восстановительный период (на 7-е и 14-е сутки после ЭГ).

Количественный анализ показал, что на 7-е сутки после ЭГ и воздействия мелатонином в клетках фолликулярного эпителия и желтых тел яичников отмечается выраженное уменьшение площади

иммуногистохимической окраски на проапоптотический белок Bad на фоне незначительного уменьшения площади иммуногистохимической окраски на антиапоптотический белок Вс1-2, что приводит к изменению соотношения белков регуляторов апоптоза (преобладание антиапоптотического белка Вс1-2 над проапоптотическим белком Bad) как в фолликулах, так и в желтых телах яичников. Приведенные данные свидетельствуют о снижении апоптотической гибели клеток фолликулов и желтых тел на 7-е сутки после ЭГ под влиянием гормона эпифиза мелатонина. На 14-е сутки площади иммуногистохимической окраски на белки Вс1-2 и Bad восстанавливаются до контрольных величин, иллюстрируя тем самым сбалансированность процессов апоптоза и пролиферации в фолликулах и желтых телах яичников при воздействии мелатонином. При этом обращает на себя внимание факт синхронных изменений активности «молекулярных переключателей» апоптоза белков Вс1-2 и Bad как в клетках фолликулярного эпителия, так и в клетках желтых тел яичников. Таким образом, воздействие мелатонином в условиях гипертермии ускоряет восстановительные процессы в тканевом микрорайоне яичников, приводит к снижению апоптотической гибели клеток фолликулов и желтых тел и, как следствие, к уменьшению повреждающего действия перегревания на морфологическую организацию органа.

ВЫВОДЫ

1. Действие высокой внешней температуры приводит к выраженным морфологическим изменениям в тканевом микрорайоне яичника, которые наблюдаются уже в остром периоде (на 3-й сутки) и сохраняются до 14-х суток (восстановительный период) после дестабилизирующего воздействия:

- выявлены значительные нарушения крово- и лимфообращения (расширение интерстициальных несосудистых путей микроциркуляции, дилятация лимфатических и венозных сосудов, увеличение относительной площади вен и лимфатических сосудов), наиболее выраженные на 3-й сутки после воздействия;

- выявлены нарушения фолликулогенеза и процессов преобразования желтых тел, усиление процессов атрезии фолликулов и желтых тел, которые наиболее выражены на 7-е сутки и сохраняются до 14-х суток после воздействия.

2. Действие высокой внешней температуры приводит к изменению соотношения «молекулярных переключателей» апоптоза Вс1-2 и Bad (преобладанию проапоптотического белка Bad над антиапоптотическим белком Вс1-2 как в фолликулах, так и в желтых телах яичников), что свидетельствует об активации процессов апоптоза в органе.

3. Введение мелатонина в условиях гипертермии активизирует восстановительные процессы в тканевом микрорайоне яичника:

- уже в остром периоде (на 3-й сутки) введение мелатонина приводит к уменьшению выраженности венозного застоя и лимфостаза (уменьшению отечности интерстициальных несосудистых путей микроциркуляции, а также деформации и расширения лимфатических и венозных сосудов, снижению относительной площади вен и лимфатических сосудов);

- на 7-е сутки после гипертермии введение мелатонина приводит к уменьшению морфологических проявлений нарушения фолликулогенеза (на стадиях первичных, преовуляторных и атретических фолликулов);

-введение мелатонина приводит к уменьшению выраженности морфологических нарушений процессов развития желтых тел (на стадиях «железистого метаморфоза» и «расцвета») уже на 3-й сутки после перегревания, а также более быстрому восстановлению желтых тел всех стадий развития с 7-х суток после воздействия.

4. Введение мелатонина приводит к изменению соотношения белков регуляторов апоптоза (преобладание антиапоптотического белка Вс1-2 над проапоптотическим белком Bad) в фолликулах и желтых телах яичников на 7-е сутки после гипертермии, что свидетельствует о снижении апоптотической гибели клеток фолликулов и желтых тел.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Мичурина C.B., Бочкарева A.JI., Белкин А.Д., Жданов А.П., Бочкарев И.Г. Морфометрический анализ сосудистого русла и желтых тел яичников в различные сроки после общей управляемой гипергермии (экспериментальное исследование) // Хирург. 2008. № 6. С. 9-13, авгора-0,13 пл.

2. Мичурина C.B., Бочкарева A.JI., Белкин А.Д., Жданов А.П., Мусихина М.А. Влияние общей управляемой гипертермии на яичники крыс // Вестник H ГУ. Серия: Биология, Клиническая медицина. 2009. Т. 7, выпуск 3. С. 21-24, автора-0,10 и.л.

3. Мичурина C.B., Бочкарева А.Л., Жданов А.П. Количественный анализ изменений генеративных элементов и внутриорганного сосудистого русла яичников крыс в различные сроки после общей управляемой гипертермии // Лимфология. Журнал имени С.У. Джумабаева (Узбекистан). 2009. № 1-2. С. 54-55, автора - 0,08 п.л.

4. Мичурина C.B., Бородин Ю.И., Бочкарева А.Л., Белкин А.Д., Бочкарев И.Г. Влияние мелатонина на сосуды, тканевую несосудистую микроциркуляцию и желтые тела яичников животных, подвергавшихся воздействию высокой температуры // Кардиолог. 2011, № 4. С.64-71, автора -0,20 п.л.

5. Мичурина С. В., Бочкарева А.Л., Архипов С.А., Ларионов П.М. Влияние гормона эпифиза мелатонина на желтые тела и апоптоз в яичниках животных, подвергавшихся воздействию высокой температуры // IV съезд лимфологов России : материалы. Москва,2011. С. 104-105, автора-0,06 п.л.

6. Мичурина C.B., Бочкарева А.Л., Белкин А.Д., Жданов А.П., Мусихина М.А. Количественная оценка изменений фолликулярного аппарата яичников в различные сроки после общей управляемой гипертермии в эксперименте // Морфология и хирургия : сборник научных трудов. Выпуск 6. Новосибирск : Сибмедиздат НГМУ, 2007. С. 133-138, автора - 0,15 п.л.

7. Мусихина М.А., Мичурина C.B., Белкин А.Д., Жданов А.П., Бочкарева А.Л. Влияние общей управляемой гипертермии на весовые и

морфологические показатели почки II Морфология и хирургия : сборник научных трудов. Выпуск 6. Новосибирск : Сибмедиздат НГМУ, 2007. С. 139142, автора - 0,10 п.л.

8. Бочкарева АЛ., Мичурина C.B., Жданов А.П., Белкин А.Д. Морфометрический анализ сосудистого русла, овуляторных фолликулов и желтых тел яичников в различные сроки после общей управляемой гипертермии (экспериментальное исследование) // Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии : материалы Международной конференции. Новосибирск, 2008. Т. 1. - С 58-59, автора- 0,06 п.л.

9. Бочкарева AJI., Мичурина C.B., Белкин А.Д., Жданов А.П., Мусихина М.А. Морфометрический анализ сосудистого русла и фолликулярного аппарата яичников крыс в различные сроки после общей управляемой гипертермии (ОУГ) // Проблемы саногенного и патогенного эффектов эндо- и экзоэкологического воздействия на внутреннюю среду организма : материалы Евразийского симпозиума. Чолпон-Ата, 2009. С. 84-85, автора - 0,05 пл.

10. Мусихина М.А., Мичурина C.B., Белкин А.Д., Бочкарева АЛ. Влияние общей управляемой гипертермии на весовые и гемоциркуляторные показатели почки // Проблемы саногенного и патогенного эффектов эндо- и экзоэкологического воздействия на внутреннюю среду организма : материалы Евразийского симпозиума. Чолпон-Ата, 2009. С. 238-241, автора-0,13 пл.

П. Мичурина C.B., Бочкарева АЛ., Архипов С.А., Ларионов П.М. Влияние гормона эпифиза мелатонина на морфологические особенности фолликулов, желтых тел, гемо- и лимфоциркуляцию и процессы апоптоза в яичниках животных, подвергавшихся воздействию высокой температуры // Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии : материалы X Международной конференции. Новосибирск, 2011.С204-207,автора-0,13пл.

12. Пат. 2418586 С 2 Российская Федерация, МПКА61К 31/4045; А61Р 15/08. Способ коррекции нарушений в репродуктивных органах, вызванных высокой температурой / Мичурина C.B., Бочкарева АЛ., Бочкарев И.Г.; Новосибирский государственный медицинский университет. - № 2009122600 / заявл. 11.06.2009; опубл. 20.05.2011. Бюл. № 14. - 13 е., автора - 0,54 п.л.

Подписано в печать 02.09.2012. Формат 60x84/16. Бумага офсетная.

_Тираж 100 экз. Печ. л. 1. Уч.-изд. л. 0,93. Заказ № 550._

Типография Сибирского университета потребительской кооперации. 630087, Новосибирск, пр. К. Маркса, 26.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Бочкарева, Алла Львовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Патогенетические и биологические аспекты действия гипертермии. Виды гипертермии.

1.2. Морфологическая организация яичника с позиции концепций тканевого микрорайона и лимфатического региона.

1.3. Апоптоз и его роль в регуляции репродуктивной функции.

1.4. Роль мелатонина как универсального регулятора гомеостаза. Мелатонин и репродуктивная функция.

Резюме.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объект исследования.

2.2. Модель эксперимента.

2.3.Схема эксперимента.

2.4.Методика забора морфологических препаратов.

2.5. Методы исследования.

2.5.1. Массометрический метод.

2.5.2. Микроскопический метод.

2.5.3. Морфометрический метод.

2.5.4. Непрямой двухэтапный иммуногистохимический метод выявления проапоптотического белка Вас! и антиапоптотического белка Вс1-2 на парафиновых срезах.

2.5.5. Статистическая обработка материала.

Резюме.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Влияние высокой внешней температуры на массу яичников крыс.

3.2. Морфологическая организация и процессы апоптоза в яичниках интакт-ных крыс.

3.3. Морфологическая организация яичников крыс в разные сроки после однократного воздействия высокой внешней температуры.

3.3.1. Морфологическая организация яичников крыс в остром периоде после воздействия высокой внешней температуры.

3.3.2. Морфологическая организация яичников крыс в восстановительном периоде после воздействия высокой внешней температуры.

3.4. Апоптоз в яичниках крыс в разные сроки после однократного воздействия высокой внешней температуры (на примере оценки активности белков регуляторов апоптоза проапоптотического белка Bad и антиапоптотического белка Вс1-2).

3.4.1. Апоптоз в яичниках крыс в остром периоде после воздействия высокой внешней температуры.

3.4.2. Апоптоз в яичниках крыс в восстановительном периоде после воздействия высокой внешней температуры.

3.5. Влияние мелатонина на морфологическую организацию яичников крыс в разные сроки после однократного воздействия высокой внешней температуры.

3.5.1. Влияние мелатонина на морфологическую организацию яичников крыс в остром периоде после воздействия высокой внешней температуры.

3.5.2. Влияние мелатонина на морфологическую организацию яичников крыс в восстановительном периоде после воздействия высокой внешней температуры.

3.6. Влияние мелатонина на апоптоз в яичниках крыс в разные сроки после однократного воздействия высокой внешней температуры (на примере оценки активности белков регуляторов апоптоза проапоптотического белка

Bad и антиапоптотического белка Вс1-2).

3.6.1. Влияние мелатонина на апоптоз в яичниках крыс в остром периоде после воздействия высокой внешней температуры.

3.6.2. Влияние мелатонина на апоптоз в яичниках крыс в восстановительном периоде после воздействия высокой внешней температуры.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфология яичников и апоптоз в условиях гипертермии и воздействия мелатонином (экспериментальное исследование)"

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

Основным признаком живой материи является воспроизводство. Жизнь на Земле и эволюция возможны только благодаря непрерывному воспроизводству живых организмов. Продолжение рода - одна из самых важных и надежных функций организма, которая обеспечивается репродуктивной системой.

Среди глобальных проблем современности, таких как предотвращение ядерной войны, продовольственная и энергетическая проблемы, преодоление отсталости развивающихся стран и ряда других особое место принадлежит проблеме репродуктивного здоровья. Согласно определению ВОЗ (1994), репродуктивное здоровье - это состояние полного физического, умственного и социального благополучия, а не только отсутствие болезней во всех сферах, касающихся репродуктивной системы, ее функций и процессов. В Программе приоритетных национальных проектов Российской Федерации одной из главных задач является улучшение общего состояния здоровья женщин, детей и подростков, а также их репродуктивного здоровья, и, как следствие, снижение уровня материнской и младенческой смертности. В рамках национального проекта «Здоровая Россия» проблему репродуктивного здоровья женщин и детей считают важным направлением медицины завтрашнего дня.

Репродуктивная система характеризуется исключительной надежностью функционирования, которая обеспечивается ее способностью к саморегуляции и существенной независимостью от внешних факторов. Подтверждением тому служит сохранность генеративной функции в самых различных клима-то - географических условиях (Руководство. , 2002). Несмотря на это имеются данные, свидетельствующие о развитии нарушений структуры и функции репродуктивной системы при влиянии различных экстремальных факторов, к числу которых относится и высокая внешняя температура.

В процессе своего существования современный человек постоянно испытывает воздействие разнообразных факторов внешней среды - тепловых, шумовых, световых, радиационных. Одним из таких факторов является высокая температура, с которой связаны такие аспекты жизнедеятельности как освоение регионов с жарким климатом (тропики, пустыни), развитие туризма и миграции. Перегревание организма человека возможно при работе на производствах, где процесс труда протекает при высокой внешней температуре (в металлургической, сталелитейной, химической, угольной, горнорудной отраслях промышленности). Тепловое воздействие является основным поражающим фактором при возникновении чрезвычайных ситуаций и стихийных бедствий (Козлов Н.Б., 1989; Графкина М.В., 2007). Проблема воздействия гипертермии на организм человека становится все более актуальной и в связи с освоением космоса, а также с глобальным потеплением климата (Горанчук В.В., 1997; Денисов В.В., 2003).

Вместе с тем известно широкое применение в народной и традиционной медицине различных лечебных тепловых процедур (сауны, бани, компрессы, грелки, обертывания, горячие минеральные ванны, геотермальные источники). Также к настоящему времени накоплен обширный научный материал об использовании гипертермии для терапии онкологических, инфекционных, паразитарных заболеваний, наркозависимых состояний, СПИДа (Жаврид Э. А. и соавт., 1987; Патока А. В., 1996; Christophi С., Winkworth А., 1998; Су-вернев А. В. и соавт., 1999; Киншт Д. Н., Киншт Н. В., 2006; Быкова Е.В., 2006; Лопатин В.Ф., 2009; Repasky Е.А., 2010). При этом установлено, что общая гипертермия в диапазоне температур от 42,5° до 44,0° С является экстремальным фактором внешней среды, на действие которого организм реагирует комплексом сложных взаимосвязанных изменений, приводящих к глубоким расстройствам клеточных и внеклеточных взаимоотношений в биологических структурах, значительным нарушениям крово - и лимфообращения, развитию гипоксии и стимуляции апоптоза (Козлов Н.Б.,1990; Kampinga H.H. et al., 1997; Сувернев A.B., 2001; Пахомова Ю.В., 2006). В таких условиях наряду с другими системами организма значительную нагрузку испытывают репродуктивные органы (в частности, яичники, являющиеся центральным звеном женской половой сферы) и их лимфатический регион (Мичурина C.B. и др., 2008).

Многочисленные исследования позволили установить, что основные де-токсикационные метаболические процессы в органе реализуются на уровне тканевого микрорайона - функциональной тканевой единицы, включающей в себя кровеносный синусоидный капилляр, прекапиллярные структуры с лимфатическими капиллярами и прилегающие клетки паренхимы (Казначеев В.П., Субботин М.Я., 1971, 1983). Расширяя понятие «микрорайон», Ю.И. Бородин, C.B. Мичурина и соавт. (2010, 2012) предложили отнести к фигурантам микрорайона лимфатический капилляр, дренирующий данный локус, а также пути несосудистой микроциркуляции тканевой жидкости в интер-стиции, которая, резорбируясь в лимфатический капилляр, образует лимфу -прелимфатики. О.В. Волкова (1983), исследуя морфологию яичников, описывает комплекс структур, состоящий из фолликулярного эпителия, прозрачной зоны, соединительнотканной среды со стероидпродуцирующими элементами и сосудов микроциркуляторного русла и использует понятие «сосудисто-тканевой регион». В настоящее время общепризнано существование взаимосвязи между морфофункциональным статусом органа и его лимфатическим аппаратом. При этом тканевой микрорайон рассматривается как составная часть лимфатического региона органа и является маркером состояния данного лимфатического региона. Из этого следует, что при различных патологических состояниях эффективная реабилитация органа возможна лишь при сохранности, морфофункциональной достаточности данного лимфатического региона (Бородин Ю.И., 1996; 1999; 2011). Многочисленные публикации посвящены исследованиям морфофункционального состояния различных органов и систем, а также их лимфатических регионов при различных эндо-и экзотоксикозах, в том числе и обусловленных воздействием высокой температуры (Мичурина C.B. и соавт., 1995, 2007; Морсина Е.В., 2002; Андросов В.Н., 2005; Пахомова Ю.В., 2006; Карелина C.B., 2009; Васендин Д.В., 2009). Также имеется значительное количество работ, свидетельствующих о нарушениях морфологической организации яичников при различных воздействиях (Гольдберг Е.Д. и соавт., 2004; Денисов А.Г., 2008; Логвинов C.B. и соавт., 2005).

Однако приходится констатировать, что в литературе недостаточно отражены вопросы, касающиеся исследования влияния гипертермии на тканевой микрорайон яичника и на процессы апоптоза в органе. Это определило наш интерес к исследованию морфологии яичника с позиции концепции тканевого микрорайона, а также к изучению процессов апоптоза в яичниках при воздействии высокой температуры.

Благодаря достижениям последних десятилетий в области молекулярной биологии и биохимии удалось установить, что в регуляции гомеостаза на клеточном уровне активное участие принимают механизмы программированной клеточной гибели. При этом пути передачи и формы апоптотического сигнала могут быть различными. Известно, что решение жить или умереть клетке принимается на уровне белковых продуктов гена Р-53, которые являются либо индукторами (Bad, Вах, Bcl-Xs, Bik, Bid, Bäk), либо ингибиторами (Bcl-2, Bcl-Xl) апоптоза. Белки Bad, Вах являются антагонистами белка Вс1-2. Индукторы апоптоза Вах и Bad способны образовывать комплекс с белком Вс1-2, тем самым инактивируя его (Введение. , 2004; Chevalier R.L. et al., 2000). Согласно современной модели регуляции апоптоза считается, что отношение белков регуляторов апоптоза Вс1-2 и Bad, Вах определяет чувствительность клеток к воздействию апоптотических факторов и является "молекулярным переключателем", который определяет, будет происходить рост или атрофия ткани. Поэтому считается, что соотношение активных форм этих белков определяет «реостат» жизни и смерти клетки (Chevalier R.L. et al., 2000; Мушкамбаров H.H., Кузнецов С.Л., 2007; Мичурина C.B., Бородин Ю.И., 2012). В связи с этим изучение морфологической организации и процессов апоптоза в тканевом микрорайоне яичника при воздействии гипертермии необходимо длявыяснения механизмов нарушений репродуктивной функции и бесплодия.

Как было упомянуто выше, любые стрессы и экстремальные воздействия приводят к нарушениям систем детоксикации и адаптации, а также к де-синхронизации биоритмов организма (Меерсон Ф.З., 1981; Гаркави JI.X. и соавт.,1998). В восстановлении нарушенного гомеостаза и оптимизации функции различных органов и систем принимает участие гормон эпифиза -мелатонин (Forsling M.L., 1993; Yu H.S., Reiter R.J., 1993; Анисимов В.Н., 2007; Арушанян Э.Б., 2010). Мелатонин, обладающий широким спектром свойств, является основным мессенджером - синхронизатором эндогенных ритмов организма, а также мощным антиоксидантом и иммуномодулятором (Арушанян Э. Б., 2005; Srinivasan V. et al., 2005; Anisimov V.N. et al., 2006). Также мелатонин участвует в регуляции секреции половых гормонов и процессов полового созревания, обеспечивая тем самым полноценное функционирование репродуктивной системы (Коркушко О.В., Шатило В.Б., 2003; Арушанян Э.Б., 2005; Анисимов В.Н., 2006). Многочисленными исследованиями установлено регулирующее влияние мелатонина на сосудистый тонус за счет связывания с собственными рецепторами гладкомышечных клеток и эндотелия кровеносных сосудов. Под регулирующим влиянием гормона эпифиза находятся также и компоненты лимфатической системы, обеспечивающие транспортные пути для лимфы и лимфоидных клеток, поскольку мелатонин индуцирует экспрессию адгезионной молекулы MAdCAM-1 на эндотелии лимфатических сосудов, влияя таким образом на клеточную рециркуляцию в лимфоидной системе и проникновение лимфоидных клеток в ткани, где они выполняют свои непосредственные функции. Одним из наиболее значимых физиологических свойств мелатонина является его способность регулировать клеточную пролиферацию и апоптоз (Arendt J., 2005). Экспериментальные исследования показали, что мелатонин оказывает ингиби-рующее действие на злокачественный опухолевый рост. При этом противоопухолевое действие мелатонина выражается в снижении пролиферативной способности клеток, увеличении числа клеток, подвергающихся апоптозу, снижении метастазирования (Bartsch С. et al., 2001; Анисимов В.Н., Виноградова И.А., 2006; Anisimov V.N. et al., 2006).

Многочисленные публикации посвящены изучению тканевого микрорайона и лимфатического региона различных органов при разнообразных стрессовых воздействиях (Бородин Ю.И. и соавт., 1998, 2007; Бородин Ю.И., Дергачева Т.И. и соавт., 1999; Мичурина C.B., 2000, 2008; Ефремов A.B., 1992; Морсина Е.В., 2002; Ищенко И.Ю., 2006; Гаскина Т.К., 2010). Также большое количество исследований посвящено оценке влияния гормона эпифиза мелатонина на различные органы и системы (Bartsch С. et al., 2001; Анисимов В. Н., Виноградова И. А., 2006, 2008; Мичурина C.B., 2008; Ефремов A.B. 2008; Карелина C.B., 2008; Ищенко И.Ю., 2009; Kos-Kudla В. et al., 2002). Однако приходится констатировать, что совершенно отсутствуют работы по изучению влияния введения мелатонина в условиях гипертермии на состояние тканевого микрорайона яичников. В доступной литературе не описаны процессы программированной клеточной гибели в яичниках крыс при действии мелатонина в условиях перегревания. Задача проведения комплексного анализа влияния мелатонина на молекулярно-генетические механизмы развития апоптоза клеток яичников во взаимосвязи с оценкой состояния интраорганных кровеносных и лимфатических сосудов в динамике развития морфологических изменений в органе, вызванных воздействием высокой температуры, составит важное направление в рамках указанной проблемы.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Выявить и оценить морфологические изменения тканевого микрорайона яичников и процессов апоптоза в яичниках крыс (на примере оценки активности белков регуляторов апоптоза проапоптотического белка Bad и анти-апоптотического белка Вс1-2) в остром (3-й сутки) и восстановительном (7-е и 14-е сутки) периодах после однократного воздействия экспериментальной гипертермии и введения мелатонина.

ОБЪЕКТ ИССЛЕДОВАНИЯ

Самки крыс линии «Вистар» (возраст 3 месяца, масса тела 180 - 200 граммов, 155 особей).

Образцы яичников крыс.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Изучить морфологические особенности яичников крыс в остром (3-й сутки) и восстановительном (7-е и 14-е сутки) периодах после однократного воздействия высокой внешней температуры.

2. Изучить процессы апоптоза в клетках фолликулярного эпителия и желтых тел яичников (на примере оценки активности белков регуляторов апоптоза Вс1-2 и Bad) в остром и восстановительном периодах после однократного воздействия высокой внешней температуры.

4. Оценить влияние мелатонина на процессы апоптоза в клетках фолликулярного эпителия и желтых тел яичников (на примере оценки активности белков регуляторов апоптоза Вс1-2 и Bad) в остром и восстановительном периодах после однократного воздействия высокой внешней температуры.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Впервые с использованием методов световой микроскопии, иммуноги-стохимии (определение активности белков регуляторов апоптоза Вс1-2 и Bad) и морфометрического анализа проведена комплексная оценка состояния лимфатических и кровеносных сосудов, фолликулов, желтых тел, а также процессов апоптоза в клетках фолликулов и желтых тел яичников крыс в различные сроки (острый и восстановительный период) после однократного воздействия высокой внешней температуры и при введении мелатонина.

Впервые выявлено, что воздействие высокой температуры:

- вызывает нарушения процессов преобразования желтых тел, усиливая процессы дегенерации и атрезии, наиболее выраженные на 7-е сутки после дестабилизирующего воздействия;

Впервые получены данные о корригирующем влиянии мелатонина на яичники животных, подвергавшихся действию высокой температуры.

Впервые установлено, что введение мелатонина в условиях перегревания:

- приводит к более быстрому восстановлению нарушений венозного и лимфатического дренажа яичника до уровня интактных крыс (на 7-е сутки после воздействия);

- приводит к сбалансированности процессов апоптоза и пролиферации, снижает апоптотическую гибель клеток фолликулов и желтых тел яичников и, как следствие, уменьшает повреждающее действие перегревания на морфологическую организацию органа.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Получены морфологические данные об особенностях организации коркового и мозгового вещества яичников с характеристикой их цитологического и молекулярного профилей при воздействии высокой температуры в острый и восстановительный периоды естественной реабилитации и при введении мелатонина. Важное значение для практической деятельности имеет выявление негативных эффектов воздействия высокой температуры на крово-и лимфообращение в органе, а также на процессы фолликулогенеза, развития желтых тел и программированной клеточной гибели (активация апоптоза) в яичниках. Установлено корригирующее влияние мелатонина на кровеносные и лимфатические сосуды, морфологическую организацию фолликулов, желтых тел яичников и на процессы апоптоза в яичниках в условиях перегревания.

Полученные в ходе исследований данные имеют фундаментальное значение, поскольку выявлена роль гормона эпифиза мелатонина в формировании морфологических особенностей различных компартментов яичников, а также в регуляции молекулярных особенностей апоптоза клеток фолликулов и желтых тел яичников в условиях перегревания. Необходимо отметить важность прикладного аспекта данной работы, так как решение поставленных в данном исследовании задач позволило выявить морфологический след комплексных воздействий вышеперечисленных факторов и определить на молекулярном уровне маркеры реагирования апоптотически измененных клеток.

В процессе экспериментального исследования был разработан способ коррекции гормоном эпифиза мелатонином нарушений в репродуктивных органах, вызванных проведением общей управляемой гипертермии (Патент на изобретение № 2418586 от 20 мая 2011 г). Нами показано, что введение мелатонина нормализует морфометрические показатели сосудистого русла яичников животных, подвергавшихся воздействию высокой температуры. Установлено корригирующее влияние мелатонина на морфологическую организацию кровеносных и лимфатических сосудов, корней лимфатической системы, фолликулов и желтых тел яичников (особенно выраженное в восстановительный период - на 7-е и 14-е сутки после перегревания). В группе животных, получавших мелатонин после ЭГ, на 7-е сутки после воздействия выявлено восстановление нарушений венозного и лимфатического дренажа органа, сохранение гистогематического и гистолимфатического барьеров, уменьшение емкости тканевых пространств, что свидетельствует о снижении перегрузки регионарного аппарата дренирования яичника и, как следствие, улучшении процессов лимфодетоксикации. Нормализация гемодинамики и лимфоциркуляции в органе приводит к уменьшению морфологических проявлений нарушения фолликулогенеза (на стадиях первичных, преовуляторных и атретических фолликулов), восстановлению до контрольного уровня относительной площади желтых тел на стадии «пролиферации и васкуляризации» и значительному улучшению состояния желтых тел на стадиях «железистого метаморфоза» и «расцвета», что свидетельствует о восстановлении естественного процесса развития желтых тел.

Результаты проведенного исследования свидетельствуют о перспективности использования этого гормона в практике лечения нарушений генеративной функции, вызванных воздействием высокой температуры, в регуляции овариально - менструального цикла, в комплексной терапии климактерического синдрома (в схемах заместительной гормональной терапии), а также в создании новых методов вспомогательных репродуктивных технологий. Полученные научные данные являются основой для разработки патогенетической лимфотропной терапии заболеваний органов репродуктивной системы с помощью гормона эпифиза мелатонина и могут быть использованы при изучении морфологических дисциплин, фармакологии, гинекологии, репродуктологии.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Воздействие высокой внешней температуры вызывает значительные морфологические изменения в тканевом микрорайоне яичников (нарушение лимфатического и венозного дренажа, значительные нарушения фолликулогенеза и процесса развития желтых тел), наиболее выраженные в острый период (3-й сутки) и в раннюю фазу восстановительного периода (7-е сутки) после ЭГ.

3. Введение мелатонина активизирует восстановительные процессы в яичниках, о чем свидетельствует более быстрое восстановление морфологической организации компартментов тканевого микрорайона яичников (уже с 7-х суток после перегревания).

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Бочкарева, Алла Львовна

ВЫВОДЫ

4. Введение мелатонина приводит к изменению соотношения белков регуляторов апоптоза (преобладание антиапоптотического белка Вс1-2 над проапоптотическим белком Bad) в фолликулах и желтых телах яичников на 7-е сутки после гипертермии, что свидетельствует о снижении апоптоти-ческой гибели клеток фолликулов и желтых тел.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Высокая внешняя температура в диапазоне от 42,5 °С до 44,0 °С является экстремальным фактором внешней среды, приводящим к выраженным метаболическим изменениям и морфофункциональным нарушениям различных органов и систем, развитию тканевой гипоксии, которая является индуктором клеточной гибели. В таких условиях значительную нагрузку испытывают репродуктивные органы.

В восстановлении нарушенного гомеостаза принимает участие гормон эпифиза мелатонин, являющийся основным мессенджером-синхронизатором эндогенных ритмов организма, мощным антиоксидантом и иммуномодуля-тором.

Нами проводилось изучение тканевого микрорайона яичников и оценка процессов апоптоза в яичниках крыс (на примере исследования активности белков регуляторов апоптоза Bad и Вс1-2) в остром (3-й сутки) и восстановительном (7-е и 14-е сутки) периодах после однократного воздействия экспериментальной гипертермии (ЭГ) и введения мелатонина. Сроки исследования были определены в соответствии с представлениями о фазности в течении постгипертермического периода: острый период после ЭГ (с первых часов до 3-х суток) и восстановительный период (с 7-х по 21-е сутки).

Установлено, что воздействие гипертермии вызывает значительные нарушения фолликулогенеза, овуляции и процессов преобразования желтых тел, усиление процессов дегенерации и атрезии, которые развивались на фоне выраженного нарушения лимфатического и венозного дренажа в органе. При этом наиболее выраженные изменения наблюдались на 7-е сутки и сохранялись до 14-х суток после воздействия.

Возникающие при действии гипертермии нарушения венозного и лимфатического дренажа приводят к нарушению гематотканевого обмена в яичнике и развитию тканевой гипоксии, что создает предпосылки для активации процессов апоптоза в органе. В этих условиях с помощью белков семейства

Bcl-2 запускается митохондриальная ветвь апоптоза.

Нашими исследованиями показано, что действие высокой внешней температуры приводило к изменению соотношения белков регуляторов апоптоза (преобладание проапоптотического белка Bad над антиапоптотическим белком Вс1-2) как в фолликулах, так и в желтых телах яичников, что свидетельствовало об активации процессов апоптоза в органе.

Также в результате проведенного эксперимента обнаружено, что воздействие мелатонином после ЭГ приводило к менее выраженным нарушениям в тканевом микрорайоне яичника по сравнению с группами животных, не получавших мелатонин. Введение мелатонина, нормализуя кровообращение и лимфоциркуляцию в яичнике, создавало условия для ускорения восстановления генеративных элементов яичника и приводило к уменьшению морфологических проявлений нарушения фолликулогенеза и процессов развития желтых тел уже в остром периоде (на 3-й сутки) и более быстрому восстановлению фолликулов и желтых тел с 7-х суток после перегревания.

Согласно опытным данным, введение мелатонина в условиях перегревания приводило к изменению соотношения белков регуляторов апоптоза (преобладание антиапоптотического белка Вс1-2 над проапоптотическим белком Bad) как в фолликулах, так и в желтых телах яичников, что свидетельствовало о снижении апоптотической гибели клеток фолликулов и желтых тел на 7-е сутки после ЭГ. На 14-е сутки площади иммуногисто-химической окраски на белки Вс1-2 и Bad восстанавливались до контрольных величин, иллюстрируя тем самым сбалансированность процессов апоптоза и пролиферации в фолликулах и желтых телах яичников при воздействии мелатонином.

Таким образом, воздействие мелатонином в условиях гипертермии ускоряет восстановительные процессы в тканевом микрорайоне яичников, приводит к снижению апоптотической гибели клеток фолликулов и желтых тел и, как следствие, к уменьшению повреждающего действия перегревания на морфологическую организацию органа.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Бочкарева, Алла Львовна, Новосибирск

1. Аббасаова С.Г. Система Fas-FasL в норме и при патологии / С.Г. Аббасаова, В.М. Липкин, H.H. Трапезников, Н.Е. Кушлинский // Вопросы биол. мед. и фарм. химии. 1999. - № 3. - С. 3 - 16.

2. Абесадзе М.Ю. Лимфатическое русло женских половых органов / М.Ю. Абесадзе, A.B. Борисов, З.И.Кацитадзе. Тбилиси: Менциеро-ба.-1990.-232 с.

3. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. / Г.Г. Автандилов. М.: Медицина, 1990. - 384с.

4. Агаджанян Н. А. Хроноструктура репродуктивной функции / Н.А.Агаджанян, И.В. Радыш, С.И.Краюшкин . М.: Крук. - 1998. -244с.

5. Агол В.И. Самопожертвование клетки / В.И.Агол // Химия и Жизнь.-1997. №4. - С.28 - 29.

6. Ажаев А. Н. Функциональные изменения в организме человека при различных уровнях гипертермии / А.Н. Ажаев // Всесоюзная конференция по авиационной и космической медицине, 3-я: сб. науч. тр. -М., 1969.-Т. 1.-С.5-10.

7. Александров Н. Н. Применение гипертермии и гипергликемии при лечении злокачественных опухолей / H.H. Александров, Н.Е. Савченко, С.З. Фрадкин, Э.А. Жаврид. М.Медицина, 1980. - 256с.

8. Александров В.Я. Клетки, макромолекулы и температура / В.Я. Александров. Л.: Наука, 1975. - 330с.

9. Андросов В.Н. Лимфоэндокринные взаимоотношения в нормальных условиях, при гипотиреозе и его коррекции: Автореф. дис . канд. мед. наук. Новосибирск, 2005. - 16с.

10. Анисимов В. Н. Мелатонин и эпиталамин угнетают процесс свободно радикального окисления у крыс / И.Н.Анисимов, В.М. Прокопенко, В.Х.Хавинсон // Доклады РАН. - 1995. - Т. 343. - С. 557 - 559.

11. Анисимов В. Н. Эпифиз, свет и рак молочной железы / В.Н.Анисимов, Д.А. Батурин, Э.К. Айламазян // Вопр. онкологии 2002. - Т. 48. - С. 524-535.

12. Анисимов В. Н. Мелатонин и его место в современной медицине // РМЖ. 2006. - Т. 14, № 4. - С. 269 - 273.

13. Анисимов В. Н. Световой режим, мелатонин и риск развития рака / В.Н. Анисимов, И.А.Виноградова // Вопросы онкологии. 2006. - Т. 53, №5. -С. 491 -498.

14. Анисимов В.Н. Мелатонин и его место в современной медицине// Русский медицинский журнал. — 2006. Т. 14, № 4. - С.269 - 273.

15. Анисимов В. Н. Мелатонин: роль в организме, применение в клинике/ В.Н. Анисимов. СПб.: Система, 2007. - 40с.

16. Анисимов В. H. Старение женской репродуктивной системы и мела-тонин / В.Н. Анисимов, И.А.Виноградова. СПб.: Издательство «Система», 2008. - 44с.

17. Антонов А.Р. Особенности гормонального фона при тепловом стрессе, индуцированном общей управляемой гипертермией / А.Р. Антонов, A.B. Ефремов, А.К. Ровина и др. // Вестник новых медицинских технологий. 2004. - T. XI, № 4. - С. 29 - 31.

18. Арушанян Э.Б. Гормон эпифиза мелатонин новое ноотропное средство? / Э.Б. Арушанян, Л.Г. Арушанян // Экспер. и клин, фармакол. -2005. - Т. 68, № 3. - С. 74 - 79.

19. Арушанян Э. Б. Гормон эпифиза мелатонин и его лечебные возможности / Э.Б. Арушанян // Русский медиц. журн. 2005. - Т. 13, № 26. -С. 1755- 1760.

20. Арушанян Э. Б. Уникальный мелатонин / Э.Б. Арушанян. Ставрополь, 2006. - 400с.

21. Арушанян Э. Б. Защитная роль мелатонина при нарушениях мозгового кровообращения / Э.Б. Арушанян // РМЖ. 2010. - Т. 18, № 8. - С. 495 - 500.

22. Баллюзек Ф. В. Управляемая гипертермия / Ф.В. Баллюзек, М. Ф. Баллюзек, В. И. Виленский, С. И. Горелов, С. А. Жигалов, А. А. Иванов, С. Н. Кузьмин, Г. А. Определяков. СПб., Невский диалект, 2001.-123с.

23. Барабой В.А. Механизмы стресса и перекисное окисление липидов / В.А. Барабой // Успехи совр. биол.—М.: Наука, 1991.—Т. III, вып. 6.—С. 923-931.

24. Белов C.B. Безопасность жизнедеятельности / C.B. Белов, A.B. Иль-ницкая, А.Ф. Козьяков и др. М.: Высшая школа, 1999. - 448с.

25. Белушкина H. Н. Молекулярные основы апоптоза. / H. Н. Белушкина, А. Хасан Хамад, С. Е. Северин // Вопр. биол., мед. и фарм. химии. -1998.-№4. -С. 15-24.

26. Белушкина H. H. Молекулярные основы патологии апоптоза / H. Н. Белушкина, С. Е. Северин // Архив патологии. 2001. №1. - С. 51-60.

27. Бородин Ю.И. Некоторые дискуссионные вопросы теоретической лимфологии / Ю.И. Бородин // Актуальные вопросы патофизиологии лимфатической системы. Новосибирск, 1995. - С. 3 - 9.

28. Бородин Ю.И. Регионарная гемо и лимфоциркуляция и ее место в реализации общей циркуляторной системы организма / Ю.И. Бородин // Труды НИИКЭЛ СО РАМН. - Новосибирск, 1995. - Т. 3. - С. 5 - 8.

29. Бородин Ю. И. Лимфология как наука: некоторые итоги и перспективы / Ю.И. Бородин // Проблемы клинической и экспериментальной лимфологии: Труды ИКиЭЛ СО РАМН. Новосибирск, 1996. - Т.5. -С.31-42.

30. Бородин Ю.И. Проблемы лимфологии и эндоэкологии / Ю.И. Бородин, В.А. Труфакин, В.Н. Горчаков, В.В. Асташов, С.М. Любарский, Т.А. Асташова, Л.Н. Рачковская, Т.И. Анисимова, Т.И. Новоселова // Материалы междун. симпоз: Новосибирск, 1998. - С. 53 - 56.

31. Бородин Ю.И. Лимфодренажный фактор эндоэкологического равновесия / Ю.И. Бородин // Проблемы лимфологии и эндоэкологии: Труды РЖ и ЭЛ СО РАМН. Новосибирск, 1998. - Т. 7. - С. 50-53.

32. Бородин Ю.И. Лимфатический регион печени как маркер экологического прессинга на организм / Ю.И.Бородин, C.B. Мичурина // Морфология. 1998. - Т. 113, № 3. - С. 27 - 29.

33. Бородин Ю.И. Общая гипертермия и энтеросорбентная детоксикация в клинической и экспериментальной онкологии / Ю.И. Бородин, М.С. Любарский, А.Ю. Летягин, A.B. Патока, С.А. Спарин, В.Х. Габитов. -Бишкек, Новосибирск: ИЛИМ, 1999. 244с.

34. Бородин Ю.И. Состояние лимфотической системы при воспалении внутренних половых органов / Ю.И. Бородин, Т.И. Дергачева, С.А.Курганов, A.B. Старкова, Е.И. Ефремов // Морфология. 1999. -№2.-С. 30-33.

35. Бородин Ю.И. Эндоэкология, лимфология и здоровье / Ю.И.Бородин // Бюлл. СО РАМН. 1999. - № 2 (92). - С. 5 - 7.

36. Бородин Ю.И. Проблемы лимфодетоксикации и лимфосанации / Ю.И. Бородин // Проблемы экспериментальной и клинической лим-фологии: Материалы междун. симпоз., Изд. НИИКЭЛ СО РАМН. -Новосибирск, 2000. Т. 8. - С. 5 - 9.

37. Бородин Ю. И. 50 лет в лимфологии / Ю.И. Бородин // Проблемы лимфологии и интерстициального массопереноса: Труды ГУ НИИКи-ЭЛ СО РАМН. 2004. - Т. 10, ч.1. - С. 25 - 28.

38. Бородин Ю.И. Лимфатический регион и регионарная лимфодетокси-кация / Ю.И. Бородин // Хирургия, морфология, лимфология. Бишкек, изд. НЦВРХ МЗ КР, Алтын Тамга, 2004 . - Т. 1, № 2. - С. 5 - 6.

39. Бородин Ю. И. Регионарный лимфатический дренаж и лимфодеток-сикация / Ю.И. Бородин // Морфология. 2005. - Т. 128, № 4. - С. 25 -28.

40. Бородин Ю.И. Мозг и жидкие среды организма / Ю.И. Бородин, Б.Я. Песин. Бишкек - Новосибирск, 2005. - 183с.

41. Бородин Ю.И. Новые сведения о роли лимфатической системы в преодолении эндотоксикоза: Материалы докладов IX конгресса Международной Ассоциации морфологов / Ю.И.Бородин, Н.П.Бгатова,

42. Я.А.Зеленская и др. // Морфология: научно теоретический медицинский журнал. - 2008. - Т. 133, № 2. - С.20.

43. Бородин Ю.И. Теоретические предпосылки профилактической лим-фологии и здоровье человека в Сибири / Ю.И.Бородин // Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии: Международная конференция. Новосибирск, 2008. - Т. 1. - С. 54 - 56.

44. Бородин Ю.И. Внутренняя среда организма и корни лимфатической системы. Проблемы лимфангиологии / под ред. Ю.И. Бородина,

45. B.И.Коненкова, А.Ф. Повещенко. Новосибирск: Издательский дом «Манускрипт», 2010. - 404с.

46. Бородин Ю.И. Лимфология в Сибири: проблемы и тенденции / Ю.И.Бородин // Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии: X Международная конференция. Новосибирск, 2011. -С. 77-85.

47. Бородин Ю.И. Структурно-временная организация печени, лимфатической, иммунной, эндокринной систем при нарушении светового режима и введении мелатонина / Ю.И. Бородин, В.А. Труфакин,

48. C.B. Мичурина, A.B. Шурлыгина. Новосибирск: Издательский дом «Манускрипт», 2012. - 208с.

49. Браншите Т. А. Клинико-функциональные, морфологические и моле-кулярно клеточные особенности развития кардиомиопатий: Авто-реф. дис. . докт. мед. наук. - М., 2003. - 48 с.

50. Буянов П.В., Береговкин A.B. О влиянии на организм человека систематического воздействия высоких температур /П.В. Буянов, A.B. Береговкин // Военно-медицинский журнал. 1966. - №11.- С. 40-44.

51. Быкова Е.В. Патогенетические и клинические аспекты безопасности общей управляемой гипертермии высокого уровня (42,5°- 44,0° С): Ав-тореф. дис. . докт. мед. наук. Новосибирск, 2006. - 40 с.

52. Васендин Д.В. Структурные изменения в тимусе после воздействия высокой температуры (экспериментальное исследование ): Автореф. дис. . канд. мед. наук. Новосибирск, 2009. - 15с.

53. Введение в молекулярную медицину / под ред. М.А. Пальцева. -М.: ОАО «Издательство Медицина», 2004. 496с.

54. Винарик Э.М. Влияние нагревающего микроклимата на функцию коры надпочечников неадаптированных лиц / Э.М. Винарик, М.В. Ратнер, J1.A. Иванова // Гигиена и санитария. 1972. - № 1. - С. 33 -35.

55. Владимиров Ю. А., Свободные радикалы и антиоксиданты / Ю.А. Владимиров // Вест. РАМН. 1998. - Т. 7. - С. 43 - 51.

56. Войцицкий В. Е. Сорбционная коррекция интоксикационного синдрома при гипертермии и химиотерапии злокачественных опухолей: Автореф. дис. канд. мед. наук. Новосибирск, 1999. - 21с.

57. Волкова О.В. Функциональная морфология женской репродуктивной системы / О.В. Волкова. М.: Медицина, 1983. - 224с.

58. Волкова О.В. Методы количественного анализа в оценке морфофунк-ционального состояния яичника / О.В. Волкова, Т.Г. Боровая // Архиванат. Ленинград, 1990 - Т. 99, № 11. - С. 81 - 83.

59. Волкова О.В. Морфогенетические основы развития и функции яичников / О.В. Волкова, Т.Г. Боровая. М., 1999. - 253с.

60. Гайдук B.C. Анатомия и гистофизиология щитовидной железы белой крысы в антенатальном и раннем постнатальном периодах онтогенеза в норме и при гипертермии: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Минск, 1992.- 18с.

61. Гаркави Л. X. Антистрессорные реакции и активационная терапия. / Л. X. Гаркави, Е. Б. Квакина, Т. С. Кузьменко. М.: Имедис, 1998. -654 с.

62. Гаскина Т.К. Структура слизистой оболочки желудка, регионарных лимфатических узлов и их микроэлементный профиль при экспериментальной язве желудка и фитокоррекции: Автореф. дис.докт. мед. наук.- Новосибирск, 2010. 27с.

63. Головнев В.А. Структурная характеристика регионарной гемолимфо-циркуляции в условиях воздействия биофлавоноидов и бальнеопроце-дур при экспериментальном инфаркте миокарда: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Новосибирск, 1994. - 41с.

64. Горанчук В.В. Биохимические показатели при развитии экстремальной гипертермии / В.В. Горанчук, Е.Б. Шустов // Физиология человека. 1997. - Т. 23, № 4. - С. 98 - 105.

65. Горанчук В.В. Механизмы развития экстремальных состояний при гипоксической гипоксии и гипертермии: Автореф. дис. . докт. мед. наук.-СПб, 1998.-405с.

66. Горчаков В.Н. Тканевой микрорайон и его основные компоненты. // Проблемы лимфангиологии / под ред. Ю.И. Бородина, В.И. Коненкова, А.Ф. Повещенко. Новосибирск: Издательский дом «Манускрипт», 2010.-404с.

67. Горчаков В.Н. Тканевой микрорайон и его основные компоненты / В.И. Коненков, Ю.И. Бородин, М.С. Любарский // Лимфология. Новосибирск: Издательский дом «Манускрипт», 2012. - С. 86-10.

68. Графкина М.В., Михайлов В.А., Нюнин Б.Н. Безопасность жизнедеятельности: учебник / под ред. Б.Н. Нюнина. М.: ТК Велби, Изд-во Проспект, 2007. - 608с.

69. Грегорас Л. Тепловой и водный баланс при физической нагрузке // Актуальные проблемы анестезиологии и реаниматологии: освежающий курс лекций / Л. Грегорас; под ред. Э.В. Недашковского. Архангельск: Тромсе, 1997. - 298с.

70. Грищенко В. И. Роль эпифиза в физиологии и патологии женской половой системы / В.И. Грищенко. Харьков: Вища школа. Изд-во при Харьк. ун-те, 1979. - 248с.

71. Дегонский А.И. Гипоталамо-аденогипофизарно-надпочечниковая нейросекреторная система в условиях гипертермии / А.И. Дегонский// Бюлл. эксп. биол. и мед. 1973. -Т.75, №3. - С.32 - 34.

72. Денисов А.Г. Морфофункциональная характеристика яичников при хемоиндуципованном стоессе: Автооеф. дис. . канд. мед. наук. —т л. А 1 Т ' ' ' 1 ' 1 У1. Волгоград, 2008. 20 с.

73. Денисов В.В.Безопасность жизнедеятельности. Защита населения и территории при чрезвычайных ситуациях/ В.В. Денисов, И.А. Денисова, В.В. Гутенев, Монтвила. Москва: ИКЦ «МарТ», Ростов -на -Дону: Издательский центр «МарТ», 2003. - 608с.

74. Доброхотова Ю.Э. Ливиал в лечении синдрома постгистерэктомии. / Ю.Э. Доброхотова // Гинекология. 2002.- Т.4, № 4.- С. 181-183.

75. Доброхотова Ю.Э. Применение индинола и эпигаллата у женщин с гиперпластическими процессами в эндометрии / Ю.Э. Доброхотова, М.Г. Бенедиктова, Ю.Н. Задонская, H.A. Литвинова // Российский вестник акушера гинеколога. - 2008. - Т. 8, № 4. - С. 84 - 87.

76. Дубровина С.О. Апоптоз в яичниках / С.О. Дубровина // Российский вестник акушера гинеколога. - 2006. - Т. 6, № 3. - С. 33 - 37.

77. Ефремов A.B. Морфофункциональные особенности лимфатического русла при СДС и его фармакологической коррекции: дис. .докт. мед. наук. Новосибирск, 1992. - 539с.

78. Ефремов A.B., Пахомова Ю.В., Пахомов Е А., Ибрагимов Р.Ш., Шо-рина Г.Н. Способ экспериментального моделирования общей гипертермии у мелких лабораторных животных // Патент России №2165105. 2001. Бюл. № 10.

79. Ефремов A.B. Влияние мелатонина на морфологические изменения в лимфатических узлах /A.B. Ефремов, С.В. Мичурина, Е.В. Овсянко // Вестник лимфологии. 2008. - Т. 3. - С. 46.

80. Жаврид Э. А. Гипертермия и гипергликемия в онкологии. / Э. А. Жаврид, С. П. Осинский, С. 3. Фрадкин. Киев: Наукова думка, 1987. - 156с.

81. Зайко Т.М. Лимфатические узлы в условиях общей гипертермии (морфофункциональное исследование): Автореф. дис. . канд. мед. наук. Новосибирск, 1987. - 17с.

82. Западнюк И.П. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте/ И.П.Западнюк , В.И.Западнюк , Е.А.Захария, Б.В.Западнюк // 3-е изд., пер. и доп. - К.: Вища школа, 1983.-383с.

83. Исмаил-заде P.C. Общая управляемая гипертермия в лечении больных со злокачественными опухолями / P.C. Исмаил-заде // Онкология. -2005.-№ 1.-С. 4- 11.

84. Ищенко И.Ю. Воздействие сорбента "Энтеросгель" на тканевой микрорайон печени и регионарные лимфатические узлы у крыс с хроническим токсическим гепатитом / И.Ю. Ищенко, С.В.Мичурина // Бюллетень СО РАМН. 2006. - № 1. - с.61 - 65.

85. Ищенко И.Ю. Влияние мелатонина на регионарные лимфатические узлы печени крыс, находящихся в состоянии десинхроноза, отягощенного алкогольной интоксикацией / И.Ю. Ищенко, C.B. Мичурина // Лимфология. Узбекистан, 2009. - № 1 - 2. С. 32 - 33.

86. Казначеев В.П. Очерки теории и практики экологии человека / В.П. Казначеев. М.: Наука, 1983. - 259с.

87. Казначеев В.П. Функциональная и структурная единица тканей и органов микрорайон / В.П. Казначеев // в кн. «Матер, всесоюз. конф. «Трофическая функция гистогематических барьеров». — Новосибирск, 1968.-С. 5-10.

88. Казначеев В.П. Этюды к теории общей патологии / В.П. Казначеев, М.Я. Субботин. -Новосибирск: Наука, 1971. 230с.

89. Казначеев В.П. Мысли о проблемах общей патологии на рубеже XXI века / В.П. Казначеев, Г.И. Непомнящих. Препринт. - Новосибирск: НИИ общей патологии и экологии человека НЦ КЭМ СО РАМН, 2000. - 47с.

90. Карелина C.B. Структурные изменения в печени и регинарных лимфатических узлах после воздействия высокой температуры и коррекции мелатонином (экспериментальное исследование ): Автореф. дис. . канд.мед.наук. Новосибирск, 2009. - 23 с.

91. Кветная Т. В. Мелатонин нейроиммуноэндокринный маркер возрастной патологии / Т.В. Кветная, И.В. Князькин, И.М. Кветной. - М.: Деан, 2005. - 144с.

92. Киншт Д. Н. Общая управляемая гипертермия: теория, практика, моделирование процессов. / Д. Н. Киншт, Н. В. Киншт. Владивосток: Дальнаука. - 2006. - 194с.

93. Киселев В.И. Гиперпластические процессы органов женской репродуктивной системы: теория и практика/ В.И. Киселев, И.С. Сидорова, А.Л. Унанян, Е.Л. Муйжнек. М.: ИД «МЕДПРАКТИКА - М». -2011.-468с.

94. Козлов Н. Б. Медико биологические аспекты действия на организм высокой внешней температуры: сб. науч. трудов / под ред.Н. Б. Козлова. - Смоленск, 1989.- 91с.

95. Козлов Н.Б. Гипертермия: биохимические основы патогенеза, профилактики, лечения / Н. Б. Козлов. Воронеж: изд - во Воронежского университета, 1990. - 104с.

96. А.П. Колесников А.П. Регуляция лимфангиогенеза / А.П. Колесников, Г.А. Шкурат, В.И. Коненков // в кн: Коненков В.И., Бородин Ю.И., Любарский М.С. Лимфология. Новосибирск: Издательский дом «Манускрипт», 2012. - С. 265 - 279.

97. Комаров Ф. И. Мелатонин в норме и патологии / Ф.И. Комаров, С.И. Рапопорт, Н.К. Малиновская. В.Н Анисимов. М.: ИД Медпрактика. - 2004.- 308 с.

98. Комаров Ф. И. Хронобиология и хрономедицина / Ф.И. Комаров, С.И.Рапопорт. М.: Триада - X. - 2000. - 488с.

99. Кондриков Н.И. Морфологические особенности яичников пациенток, перенесших синдром гиперстимуляции яичников / Н.И. Кондриков, Т.А. Назаренко, Е.И. Сотникова, В.Л. Гордеева // Акушерство и гинекология. 1999.-№ 5.-С. 38-41.

100. Коненков В.И. Функции лимфатической системы в поддержании состояния здоровья // Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии: Международная конференция. Новосибирск, 2008. -Т. 1.-С. 190-192.

101. Коркушко О. В. Шишковидная железа: физиологическая роль в организме, функциональная недостатачность в пожилом возрасте, возможные пути коррекции / О.В. Коркушко, В.Б. Шатило // Медичний Всесвгг. 2003. - Т. 3, № 2. - С. 3 - 16.

102. Коркушко О.В., Хавинсон В.Х., Шатило В.Б. Пинеальная железа: пути коррекции при старении. СПб.: Наука, 2006. - 204с.

103. Коршунов А. М. Программированная смерть клеток (апоптоз) / А. М. Коршунов, И. С. Преображенская // Неврол. журн. 1998. - № 1. -С. 37-42.

104. Краснопольский В.И. Гнойная гинекология / В.И. Краснопольский, С.Н. Буянова, H.A. Щукина. М.: МЕДпресс, 2001. - 288с.

105. Кречетова Е.В. Морфологическая характеристика органов иммунной системы и тканей лимфатического региона половых органов самок крыс при воспалении и различных методах его коррекции: дисс. .канд. мед. наук. Новосибирск, 2004. - 184с.

106. Кричевский A.JI. Тяжелая компрессионная травма конечности и ее эфферентная терапия. Томск: Изд - во Томского университета, 1991.-264с.

107. Кузнецов C.JI. Атлас по гистологии, цитологии и эмбриологии / C.JI. Кузнецов, H.H. Мушкамбаров, B.JI. Горячкина. М.: Медицинское информационное агенство, 2002. - 374с.

108. Курашвили Ю.Б. Миома матки результат «незавершенного апопто-за» / Ю.Б. Курашвили // Успехи клинической иммунологии и аллергологии /под ред. Караулова A.B.- 2001. - Т. 2. - С. 111-116.

109. Курпешев O.K. Закономерности радиосенсибилизирующего и повреждающего эффекта гипертермии на опухолевые и нормальные клетки: Автореф. дис. . докт. мед. наук-Обнинск, 1999.-35с.

110. Лазарев Н.И. Экспериментальные модели эндокринных гинекологических заболеваний / Н.И. Лазарев, Е.А. Ирд, И.О. Смирнова. М.: Медицина. - 1976. -175 с.

111. Левин Ю.М. Эндоэкологическая медицина и эпицентральная терапия / Ю.М. Левин. М.,2000. - 343с.

112. Левин Ю.М. Основы общеклинической лимфологии и эндоэкологии. Практическому врачу новые идеи и технологии доказательной медицины / Ю.М. Левин. М.: Щербинская типография, 2003. - 464с.

113. Литвинов И. В. Выбор способа ИВЛ при общей управляемой гипертермии у онкологических больных: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Новосибирск, 1998. - 20 с.

114. Логвинов С.В.Морфологические изменения яичников крыс при монополярной коагуляции и их коррекция асковертином /C.B. Логвинов, O.A. Тихоновская, М.Б. Плотников, И.Ю. Бухарина, И.А. Петров, А.О. Окороков // Морфология 2005. - Т. 128, № 4. - С. 104 - 108.

115. Лопатин В.Ф. Локальная УВЧ-гипертермия в лучевой терапии злокачественных опухолей / Ф.В. Лопатин // Медиц. радиол, и радиац. без-оп. 2009. - Т. 54, № 2. - С. 47 - 62.

116. Лукьянова Л.Д. Биоэнергетическая гипоксия: понятие, механизмы и способы коррекции / Л.Д. Лукьянова // Бюлл. эксп. биол и мед., 1997. -Т. 124, №9.-С. 224-254.

117. Максимович А. А. Структура и функции пинеальной железы позвоночных / A.A. Максимович // Ж. эвол. биохим. физиол. 2002. - Т. 38.-C.3-13.

118. Малиновская Н. К. Мелатонин: вчера, сегодня, завтра / Н.К. Малиновская // Клинич. медиц. 2002. - Т. 80, № 6. - С. 71 - 73.

119. Масленникова М.А. Эндокринно-метаболические особенности тканевой адаптации миокарда в динамике синдрома длительного сдавления (экспериментальное исследование): дис. . докт. мед. наук . Новосибирск, 2006. - 288с.

120. Маянский Д. Н. Лекции по клинической патологии / Д.Н. Маянский // Руководство для врачей. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 464 с.

121. Маянский Н. А. Апоптоз экссудативных нейтрофилов человека / Н. А. Маянский, М. И. Заславский, А. Н. Маянский // Клеточная иммунология. 2000. - № 2. - С. 11-13.

122. Меерсон Ф. 3. Адаптация, стресс и профилактика. / Ф.З. Меерсон. -М.: Медицина, 1981 278с.

123. Мендель В. Э. Мелатонин: роль в организме и терапевтические возможности / В.Э. Мендель, О.И. Мендель // РМЖ. 2010. - Т. 18, № 6. -С. 336-342.

124. Мичурина C.B. Печень и ее регионарные лимфатические узлы при воздействии 3,4-бензпиреном в онтогенезе: дисс. . докт.мед.наук. -Новосибирск, 1995. 356с.

125. Мичурина C.B. Морфофункциональные изменения тканевого микрорайона печени при воздействии 3,4-бензпиреном в онтогенезе / С.В.Мичурина // Морфология. 1996. - Т. 109, № 2. - С. 73.

126. Мичурина C.B. Влияние 3,4 -бензпирена на ультраструктурную организацию синусоидальных клеток тканевого микрорайона печени половозрелых крыс-самцов / С.В.Мичурина // Бюлл. эксп. биол и мед. -2000.-№ 12.-С. 696-699.

127. Мичурина С. В. Печень крыс Вистар в условиях сочетанного влияния алкогольной интоксикации и нарушенного светового режима и после коррекции мелатонином / C.B. Мичурина, И.Ю. Ищенко, А.Д. Белкин и др. // Вестник лимфологии. 2008. - № 2. - С. 36 - 38.

128. Мичурина С. В. Морфометрический анализ сосудистого русла и желтых тел яичников в различные сроки после общей управляемой гипертермии / С. В. Мичурина, А. Л. Бочкарева, А.Д. Белкин, А.П. Жданов, И.Г. Бочкарев // Хирург. 2008. - № 6. - С. 9 - 13.

129. Мкртчан О. 3. Микроциркуляторное русло и репродукция эпителия печени птиц на разных стадиях онтогенеза после однократного перегревания / О. 3. Мкртчан, Е. И. Антонова, Т. С. Чернявская, Л. Ю. Тысло // Морфология. 2005. - С. 109 - 111.

130. Морсина Е.В. Влияние общей гипертермии на течение экспериментального хронического туберкулезного воспаления в печени: дис. . канд. мед. наук. Новосибирск, 2002. - 137с.

131. Мушкамбаров H.H. Молекулярная биология / H.H. Мушкамбаров, С.Л. Кузнецов. М.: ООО «Медицинское информационное агенство», 2007. - 536с.

132. Непомнящих Л.М. Морфометрия и стереология гипертрофии сердца / Л.М. Непомнящих, Е.Л. Лушчикова, Г.И. Непомнящих. Новосибирск: Наука, 1986. - 304с.

133. Пальцев М.А. Молекулярная медицина и прогресс фундаментальных наук / М.А. Пальцев // Вестник РАН. 2002. - Т. 72, № 1. - С. 13-21.

134. Пахомова Ю.В. Системные механизмы метаболизма при общей управляемой гипертермии: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Новосибирск, 2006. - 33с.

135. Патока А. В. Влияние общей гипертермии на злокачественные опухоли: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Новосибирск. - 1996. - 28с.

136. Патологическая физиология / под ред. А.Д. Адо, JI.M. Ишимовой. -М.: Медицина, 1980. 520с.

137. Петри А., Сэбин А. Наглядная медицинская статистика / Под ред. В.П. Леонова. 2-е изд-е, перев. и доп. - М.: ГЭОТАР - Медиа, 2010. - 168 с.

138. Проблемы лимфангиологии / под ред. Ю.И.Бородина, В.И. Коненкова, А.Ф. Повещенко. Новосибирск: Издательский дом «Манускрипт», 2010.-405с.

139. Программированная клеточная смерть / под ред. В. С. Новикова. -СПб., "Наука", 1996. 342с.

140. Пшеничникова Т.Я. Бесплодие в браке. М.: Медицина. - 1991. -320с.

141. Райхлин Н. Т. Регуляция и проявления апоптоза в физиологических условиях и в опухолях / HT. Райхлин, А.Н. Райхлин // Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей. 2004. - С. 350 -355.

142. Роговская С. И. Папилломавирусная инфекция нижних отделов гениталий: клиника, диагностика, лечение: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Москва, 2003. - 40 с.

143. Родионов С.Ю., Сувернев A.B., Пляскин К.П., Санкин Е.И. Способ лечения СПИДа и его осложнений // Патент России № 97106128. 1999.

144. Руководство по эндокринной гинекологии / Под ред. Е.М. Вихляевой.- 3-е изд. М.: Медицинское информационное агенство, 2002. - 768с.

145. Рукша Т. Г. Апоптоз кератиноцитов и экспрессия периферических бензодиазепиновых рецепторов при псориазе: дис. . канд. мед. наук.- Новосибирск, 2003. 110 с.

146. Русньяк И. Физиология и патология лимфообращения / И. Русньяк, М. Фельди, Д. Сабо. Будапешт: Изд-во акад. наук Венгрии, 1957. - 856с.

147. Селезнева Т.Д. Гистология: учебное пособие / Т.Д. Селезнева, A.C. Мишин, В.Ю. Барсуков. М. : Эксмо, 2007. - 352с.

148. Сесслер Д. Температурный контроль во время операции // Актуальные проблемы анестезиологии и реаниматологии: освежающий курс лекций / под ред. Э. В. Недашковского. Архангельск: Тромсе, 1997. -298с.

149. Сидорова И.С. Новые аспекты патогенеза и патогенетически обоснованной терапии аденомиоза / И.С. Сидорова, A.JI. Унанян, Е.А, Коган, С.А. Леваков // Эффективная фармакотерапия в акушерстве и гинекологии. 2006. - Т. 9. - С. 38 - 43.

150. Сорочан П.П. Рак молочной железы и мелатонин / П.П. Сорочан, И.А. Громакова, Н.Э. Прохач // Онкология. 2007. - Т. 9, № 1. - С. 11-16.

151. Станоевич И. Доброкачественные гиперпластические заболевания матки: от тактики лечения к стратегии профилактики / И.Станоевич //рг--- оллп \г„ о п О 1 оорач. — ¿W7. — j. у —

152. Сувернев A.B. Пути практического использования интенсивного теплолечения / A.B. Сувернев, Г.В. Иванов, И.В. Василевич и др. Сиб. науч.- исслед. ин-т гипертермии. - Новосибирск: Академическое изд-во "

153. Сувернев А.-В., Писарев A.A., Пенягин А.Н., Верещагин И.П., Брюн Е.А., Шамов С.А., Теркулов P.A., Кузнецов А.К. Способ купирования абстинентного синдрома у наркоманов // Патент России № 2142762.1999.

154. Сувернев А. В. Основы безопасности пиковой гипертермии (первое сообщение) / A.B. Сувернев.- Сиб. науч.-исслед. ин-т гипертермии. -Новосибирск: Академическое изд-во "Гео", 2007. 125с.

155. Суйхель Р. 3. Особенности дифференцировки эпителиальных клеток предстательной железы человека в процессе онкогенеза: Автореф. дис. . докт. мед. наук. Москва, 2000. - 24 с.

156. Султанов Ф., Ф. Гипертермия (компенсация и недостаточность)/ Под ред. А. X. Бабаевой. Ашхабад: «Ылым»,1978. - 224с.

157. Султанов Ф., Ф. Адаптация человека и животных к высокой температуре среды / Ф.Ф. Султанов, Ф.И. Фрейнк // Физиология терморегуляции. Л., 1984.-С. 267-319.

158. Сухих Г.Т. Апоптоз б гормонально-зависимых тканях репродуктивной системы / Г.Т. Сухих, М.М. Дементьева, В.Н. Серов, A.B. Жданов, Л.З. Файзуллин // Акуш. и гинекол. 1995. - № 5. - С. 12-14.

159. Тимошенко A.B. Влияние гипертермии (45°С) на агрегацию лимфоид-ных клеток // A.B. Тимошенко, С.Н. Черенкевич // Биофизика. 1995. -Т. 40, № 1.-С 116-116.

160. Труфакин В. А. Пространственно временная организация лимфоид-ной системы / В.А. Труфакин, А.Ю. Летягин, А.В.Шурлыгина // Бюлл. СО РАМН. - 1993. - № 2. - С.12 - 20.

161. Туаев B.C. Хронобиология и хрономедицина. Руководство. Под ред. акад. Ф.И. Комарова / B.C. Туаев, B.C. Кожевников, О.Т. Кудаева. -М., 1989.-402с.

162. Уманский С. Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы / С. Р. Уманский // Молекулярная биология. 1996. - Т. 30, вып. 3. - С. 487 - 502.

163. Фаттахова Ф. А. Клиническое значение мелатонина в развитии нарушений центральных механизмов регуляции репродуктивной функции / Ф.А. Фаттахова, З.Ш. Гилязутдинова, М.К. Михайлов // Казанский медиц. журн. 1997. - Т. 78, № 6. - С. 401 - 480.

164. Хамидов Д.Х.Функциональная морфология овариальной железы / Д.Х. Хамидов, JI.E. Этинген, В.П. Рябченко. Ташкент, 1974. - 227с.

165. Холбеков М.Е. Влияние высокой температуры и нейропептида дер-морфина на процессы физиологической адаптации белых крыс: Авто-реф. дис. . канд. биол. наук. Душанбе, 2002. - 18 с.

166. Хэм А., Кормак Д. Гистология (в 5 т.). М.: Мир. - 1983. - Т. 2. -254с.

167. Цыпленкова В.Г. Апоптоз / В.Г. Цыпленкова, H.H. Бескровнова // Арх. патологии. 1996. - Т. 58, № 5. - С. 71 - 74.

168. Чазов Е. И., Исаченков В. А. Эпифиз: место и роль в системе нейро-эндокринной регуляции / Е.И. Чазов, В.А. Исаченков. М.: Медицит.то лап л oic^llUj 1 У / UV«

169. Чернух A.M. Функциональный элемент орган - организм / A.M. Чернух // Механизмы повреждения, резистентности, адаптации и компенсации: тез докл конф. - Ташкент, 1976. - Т. 1. - С. 13-17.

170. Чернух A.M. Воспаление / A.M. Чернух. М.: Медицина, 1979. - 448с.

171. Шкурупий В. А. Ультраструктура клеток печени при стрессе / В.А. Шкурупий. Новосибирск: Наука, 1989. - 144с.

172. Шайымов Б.К. Влияние высокой температуры на адренергическую и холинергическую реакции: Автореф. дис. .канд. биол. наук Ашхабад, 1990.- 18с.

173. Эллиниди В.Н. Практическая иммуногистохимия: методич. реком. / В.Н. Эллиниди, Н.В. Аникеева, Н.А. Максимова. СПб., 2002. - 36 с.

174. Этинген JI.E. Сосуды яичника / JI.E. Этинген. Душанбе: Изд-во «ИРФОН», 1967. - 187с.

175. Ярилин А. А. Апоптоз: природа феномена и его роль в норме и при патологии / А.А. Ярилин // Актуальные проблемы патофизиологии / под ред. Б. Б. Мороза. М.: Медицина, 2001. - С. 13-56.

176. Ярилин А. А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме / А.А. Ярилин // Патол. физиол. эксп. терап. 1998, № 2. - С. 38-48.

177. Яровая Г.А. Физиологическая роль и биохимические механизмы протеолитической деградации белков // Лаб. медицина. 2003. - №6. -С. 259-265.

178. Abastado J. P. Apoptosis : function and regulation of cell death / J.P. Abastado // Res. Immunol. 1996. - Vol. 147. - P. 443 - 456.

179. Adams, J. M. The Bcl-2 protein family: Arbiters of cell survival / J. M. Adams, S. Cory// Science. 1998. - Vol. 281. - P. 1322 - 1326.

180. Anisimov V. N.The effect of melatonin treatment regimen on mammary adenocarcinoma development in HER 2/ neu transgenic mice / V.N. Anisimov, I.N. Alimova, D.A.Baturin D. A. // Int. J. Cancer. 2003. - V. 103. -P. 300-305.

181. Anisimov V.N. Melatonin as antioxidant, geroprotector and anticarcinogen / V.N. Anisimov, I.G. Popovich, M.A. Zabezhinski // Biochim. Biophys. Acta.—2006.—Vol. 1757.—P. 573-589.

182. Arends M.J., Wyllie A.H. Apoptosis. Mechanism and role in patology / M.J. Arends, A.H.Wyllie // Intern. Rev. Exp. Pathol. -1991. Vol.32. -P.223 -254.

183. Arendt J. Melatonin and the mammalian pineal gland / J. Arendt. Chapman and Hall, 1995. - 331 p.

184. Arendt J. Melatonin: characteristics, concerns, and prospects / J. Arendt // J. Biol. Rhythms. 2005. - V. 20. - P. 291 - 303.

185. Arendt J. Melatonin and human rhythms / J. Arendt // Chronobiol. Int. -2006. Vol. 23, № 1. - P.21 - 27.

186. Aubert C. Effect of pinealectomy and melatonin on mammary tumor growth in Spraque Dawley rats under different conditions of lighting / C.Aubert, P. Janiaud , J. Lecalvez // J. Neural Transmiss. - 1980. - V. 47. -P. 121-130.

187. Bagewadikar R.S. Effect of mild whole body hyperthermia on cytotoxic action of N-metyl-N-nitro-N- nitrosoguanidine in Swiss mice /R.S. Bagewadikar, M.S. Patil // Toxicol. Lett. 2001. - Vol. 121, № 1. - P. 63 - 68.

188. Bartsch C- Pineal Gland and Cancer: An Old Concept with Potential for the Future / C. Bartsch, H. Bartsch // Neuroendocrinol. Lett. 1997. - Vol. 18. - P.63-72.

189. Bartsch C. Significance of melatonin in malignant diseases / C. Bartsch, H. Bartsch // Wien Klin. Wochenschr. 1997. - Vol. 109. - P.722 - 729.

190. Bartsch C. The pineal gland and cancer. Neuroimmunoendocrine mechanisms in malygnane / C. Bartsch, H. Bartsch, D. E. Blask et al. Berlin: Springer, 2001. - 578 p.

191. Bartsch C. Melatonin in clinical oncology / C. Bartsch, H. Bartsch, M. Ka-rasek // Neuroendocrinol. Lett. 2002. - Vol. 23, Suppl. 1. - P. 30 - 38.

192. Belzacq A. S. Bcl-2 and Bax modulate adenine nucleotide translocase activity / A. S. Belzacq, H. L. Vieira, F. Verrier et al. // Cancer Res. 2003. -Vol. 63, №2.-P. 541 -546.

193. Bubenic G. A. Diurnal variation and binding characteristics of melatonin in the mouse brain and gastrointestinal tissues/ G.A.Bubenic, L.P. Niles, S.F. Pang , P.I. Pentney // Comp. Biochem. Physiol. 1993. - V. 104. - P. 221 -224.

194. Cafforio P. Methods for assessing programmed cell death / P. Cafforio, A. Romito, M. A. Grizzuii // Recent. Prog. Med. 1996. - Vol. 87, № 7 - 8. -P. 366-373.

195. Cagnacci A. Melatonin in relation to physiology in adult humans / A. Cag-nacci // G. Pineal Res. 1996. - Vol. 21. - P. 200 - 213.

196. Cagnacci A. Influence of melatonin and photoperiod on animal and human reproduction / A.Cagnacci, A.Volpe // J. endocrinol. Invest.—1996.—Vol. 19.—P. 382-411.

197. Cardinali D.P. The use of melatonin in Alzheimer's disease / D.P. Cardinali, L.I. Brusco, C. Liberczuk, A.M. Furio // Neuroendocrinol. Lett. -2002. Apr; 23. - Suppl. 1, 20 - 23.

198. Cheng L. Role of leukemia inhibitory factor and its receptor in mouse primordial germ cell growth / L. Cheng, D.P. Gearing, L.S. White et al. // Development. 1994. - Vol. 120. - P. 3145-3153.

199. Chevalier R.L. Chronic ureteral obstruction in the rat suppresses renal tubular Bcl-2 and stimulates apoptosis / R.L. Chevalier, C.D. Smith, J. Wols-tenholme // Exp. Nephrol. 2000. - Vol. 8. - P. 115 -122.

200. Christophi C. The treatment of malignancy by hyperthermia / C. Christo-phi, A. Winkworth // Surg. Oncol. 1998. - Vol. 7, №1 - 2. P. 83 - 90.

201. Chun S.Y. Gonadotropin suppression of apoptosis in cultured preovulatory follicules: mediatory role of endogenous insulinlike qrowth factor I / S.Y. Chun, H. Billing, J.L. Tilly et al // Endocrinology. 1994. - Vol. 135. - P. 1845 - 1853.

202. Clive L. Primary disorders of the lymphatic vessels. A unitied concept / L. Clive // J. Pediat. Surg. 1989. - Vol. 24. - P. 233 - 241.

203. Collu R. Blockade of ovulation by melatonin / R. Collu, F. Fraschini, L. Martini // Experientia. 1971. - Vol. 27. - P. 844 - 848.

204. Coucouvanis, E.C. Evidence that the mechanism of prenatal germ cell death in the mouse is apoptosis / E.C. Coucouvanis, S.W. Sherwood, C. Carswell-Crumpton. et al. // Exp.Cell.Res. 1993. - Vol.209. - P.238 -247.

205. Crispe I.N. Strange brew: T Cells in the Liver / I.N. Crispe, W.Z. Mehal // Immunol. Today. 1996. - Vol.17, № 11. - P. 522 - 525.

206. Delannoy J. Hyperthermia system combined with a magnetic resonance imaging unit / J. Delannoy, D. Le Bihan, D.I. Hoult // Med. Phys. 1990. -Vol. 17, №5.-P. 855-860.

207. Fiske V.M. Estrogen and progesterone secretion in monkeys following melatonin / V.M. Fiske, G.J. MacDonald, L.L. Bigelow, M.D. Altschule // Fertil. Sterill. 1975. - Vol. 26. - P. 613 - 616.

208. Forsling M.L. The role of the pineal in the control of patterns of neurohypophysial hormone secretion / M.L. Forsling, R. Stonghton, S. Foucart // J. Pineal. Res. 1993. - Vol. 14. - P. 45 - 51.

209. Fukuya Y. Effect of vitamin D3 on the increased expression of Bel -xL in psoriasis / Y. Fukuya, M. Higaki, Y. Higaki // Arch. Dermatol. Res. 2002. - Vol. 293, № 12. - P. 620 - 625.

210. Green D.R. Mitochondria and apoptosis / D.R. Green, J.C. Reed // Science. -1998.-Vol. 281.-P.1309-1312.

211. Harman D. Free-radical theory of aging: increasing the functional life span / D. Harman // Ann. n. Y. Acad. sci. 1994. - Vol. 717. - P. 1-15.

212. Hensel H., Bruk K., Raths P. Homethermic organisms // Temperature and live. Berlin - New York. - 1973. - P. 503 - 779.

213. Himelstein Braw R. Follicular atresia in the infant human ovary / R. Hi-melstein - Braw, A. G. Byskov, H. Peters et al. // J. Reprod. Fertil. -1976.-Vol. 46.-P. 55-59.

214. Hsueh A. J. W. Ovarian follicular atresia: a hor- rnonally controlled process. / A. J. W. Hsueh, H. Billig, A. Tsafriri // Endocr. Rev. 1994. -Vol.15, № 6. -P.707- 723.

215. Hockenbery D. Bcl-2 in cancer, development and apoptosis / D. Hocken-bery // J. Cell Sci. 1994. - Vol. 18. - P.51 - 55.

216. Israels L. Apoptosis / L. Israels, E. Israels // The Oncologist. 1999. - № 4. - P. 332-339.

217. Kampinga H. H. Mild hyperthermia disturbs normal brains cells rather than that it helps killing tumours / H.H. Kampinga, G.C. van Rhoon, J. vander Zee // Int J. Hyperthermia. 1997, Jan - Feb. - Vol. 13(1). - P. 133 -139.

218. Katoh S. Nerve growth factor rescues PC 12 cells from apoptosis by increasing amount of bcl-2 / S. Katoh, Y. Mitsui, K. Kitani et al.// Biochem. biophys. Res. Commun. 1996. - Vol. 229, N 2. - P. 653 - 657.

219. Kerr F.R. Apoptosis: A basic biological phenomenon with wide ranging implications in tissue kinetics / F.R. Kerr, A.H. Wyllie, A.R. Currie // Br. J. Cancer. 1972. - Vol. 26. - P.239 - 257.

220. Kluck R.M. The release of cytochrome C from mitochondria: A primary site for Bcl-2 regulation of apoptosis / R.M. Kluck, E. Bossy -Wetzel, D.R. Green//Science. 1997.-Vol. 275.-P.l 132-1136.

221. Kos-Kudla B. Circadian rhythm of melatonin in postmenopausal asthmatic women with hormone replacement therapy / B. Kos-Kudla, Z. Ostrowska, B. Marek, D. Kajdaniuk et al. / Neuroendocrinol. Lett. 2002. - Vol. 23(3). - P. 243 - 248.

222. Krause D. N. Regulatory sites in the melatonin system of mammals / D.N. Krause, M.L. Dubocovich // Trends Neurosci. 1990. - V.13. - P.464 -470.

223. Kvetnoy I. M. Autoradiographical and immunohistochemical analysis ofmelatonin distribution in endocrine and non endocrine organs / I.M.

224. Kvetnoy, V.V. Yuzhakov, G.A. Petrova // Bull. Exp. Biol. Med. 1990. -Vn in P ¿n« - AACi1 U XV/. A • V nvi

225. Lapin I.P. Anticinvulsant activity of melatonin against seizures induced by quinolinate, glutamate, NMD A, and pentylentetrazole in mice / I.P. Lapin, S.M. Mirzaev, I.V. Ryzov//J. Pineal Res. 1998.-V. 24.-p. 215-218.

226. Laporte M. Apoptosis in established and healing psoriasis / M. La-porte, P. Galand, D. Fokan // Dermatology. 2000. - Vol. 200, № 4. - P. 314-316.

227. Lash G. E. The effects of angiogenic growth factors on extravillous trophoblast invasion and motility / G.E. Lash, J.E. Cartwright et al. // Placenta. 1999. - Vol. 20(8). - P.661 - 667.

228. Lee B. S. Expression of apoptosis related genes, Bcl-2 and TRPM-2, in human luteinized granulosa cells / B.S. Lee, R.D. Robinson, C.L. Best et al. // J. Soc. Gynec. Invest. 1995. - Vol. 2. - P. 389.

229. Lesnicar H. Interstitial water hyperthermia temperature distribution data obtained in animal experiments compared to human application measurements / H. Lesnicar, M. Budihna // Radiol. Ingosl. 1989. - Vol. 23, № 3. -P. 295-297.

230. Macaya A. Apoptosis in the nervous system / A. MacayaV/ Rev-Neurol. 1996. -Vol. 24, № 135. - P.1356 - 1360.

231. Maestroni G. Therapeutic potential of melatonin / G.Maestroni, A.Conti, R.Reiter. Basel, New York, 1997. - 256 p.

232. Magno G. Apoptosis, oncosis, necrosis / G. Magno, I. Joris // Amer. J.Pathol. 1995. - Vol.146, № 1. - P.3 - 15.

233. Mc Isaac W.M. 5-methoxytryptophol: effect of estrus and ovarian weight / W.M.McIsaac, R.G. Taborsky, G. Farrell // Science. 1964 (Jul. 3). - Vol. 145 (3627).-P. 63-64.

234. Mella O. Timing of combined hyperthermia and l,3-bis(2-chloraethyl)-l-nitrosourea of cis-diamminedchloroplatinum in BDIX rats with BTyHtumors / O. Mella, O. Dahl // Anticancer Res. 1985. - Vol. 5, № 3. - P. 259-263.

235. Mess B. Role of the pineal gland in regulation of ovulation / B.Mess, G.P. Trentini, L.Tima // Studia Biologica Hungarica. -Budapest: Publ. Hause Hung. Acad. Sci. 1978. - V. 16. - P.97 - 101.

236. Meyer F. Sweat electrolyte loss during exercise in the heat effects of gen-derand naturacion / F. Meyer, O. Bar-Or, D. McDougal // Med. Sci. Sports Exers. 1992. -Vol. 24. - P. 776 - 781.

237. Morimoto R. I. Cells in stress: transcriptional activation of heat shock genes / R.I. Morimoto // Science. 1993. - V. 259, № 5100. - P. 1409 -1410.

238. Multoff G . Activation of natural killer cells by heat shock protein 70 / G. Multoff// Int. J. Hyperthermia. 2002. - Vol. 18, № 6. - P. 576 - 585.

239. Narayanan V. Apoptosis in development of the nervous system. Naturally occurring death in the developing nervous system / V.Narayanan // Pediatr. Neurol. 1997. - Vol. 16. - P. 9 - 13.

240. Negoescu A. Importance of DNA fragmentation in apoptosis with regard to TUNEL specificity / A. Negoescu, C. Guillermet, P. Lorimier // Biomed-Pharmacother. 1998. - Vol.52, №6. - P.252 - 258.

241. Nicosia S. V. Cell proliferation and apoptosis during development and aging of the rabbit corporus luteum / S.V. Nicosia, J. Diaz, R.F. Nicosia et al. // Ann. clin. Lab. Sci. 1995. - Vol. 25. - P. 143 - 157.

242. Pablos M.I. Melatonin stimulates the activity of the detoxifying enzyme glutathione-peroxydase in several tissues of chicks / M.I. Pablos, M.T. Agapito, R. Gutierrez et al. // J. Pineal Res. 1995. - V. 19. - P.l 11 -115.

243. Palumbo A. Apoptosis as a basic mechanism in the ovarian cycle: follicular atresia and luteal regression / A. Palumbo, Y.Yeh // J. Soc.Gynecol.Invest. 1995. - Vol.2. - P. 565 - 573.

244. Pesce M. Stem cell factor and leukemia inhibitory factor promote primordial germ cell survival by suppressing programmed cell death (apoptosis) / M. Pesce, M.G. Farrace et al. // Development. 1993. - Vol. 118. - P. 1089- 1094.

245. Philpott K. L. Morphological and biochemical changes in neurons: apoptosis versus mitosis / K. L. Philpott, M. J. Mc Carthy, D. Backer // Eur. J. Neurosci. 1996. - Vol.8, № 9. - P. 1906 - 1915.

246. Piquette G. N. Detection of apoptosis in human and rat ovarian follicles / G.N. Piquette, J.L. Tilly, L.E. Prichard et al. // J. Soc. Gynec. Invest. -1994.-Vol. l.-P. 297-301.

247. Pollard L. W. Estrogens and cell death in murine uterine luminal epithelium. / L. W. Pollard, J. Pasey, S.V. Cheng, E. J. Jordan // Cell Tiss. Res. -1987. Vol. 249. - P. 533 - 540.

248. Reed J. C. Bcl-2 and the regulation of programmed cell death / J.C. Reed // J. Cell Biol. 1994. - 124(1 - 2). - P. 1 - 6.

249. Reiter R. J. Oxidative damage to nuclear DNA: amelioration by melatonin. NEL Review / R.J. Reiter // Neuroendocrinol. Lett. 1999. - Vol. 20. -P.145 - 150.

250. Reiter R. The pineal and its hormones in the control of reproduction in mammals /R. Reiter // Endocr. Rev. 1980. - V. 1. - P. 109 - 131.

251. Reiter R. Melatonin: that ubiguitonsly acting pineal hormone / R. Reiter // News Physiol. Sci. 1991.-V.6.-P.223-228.

252. Reiter R. The pineal gland: an intermidiary between the environment and the endocrine system / R. Reiter // Psychoneuroendocrinology. 1995. - № 78. - P. 572-579.

253. Reiter R. Melatonin in relation to cellular antioxidative defense mechanisms / R. Reiter, R.Carneiro, C.Oh. // Hormone Metabol. Res. 1997. - V. 29.-P. 363-372.

254. Reiter R. J. Melatonin: clinical relevance / R.J. Reiter // Best Pract. Res. Clin. Endocrinol. Metab. 2003. - V. 17, № 2. - P. 273 - 285.

255. Repasky E.A. Diverse immune mechanisms may contribute to the survival benefit seen in cancer patients receiving hyperthermia / E.A. Repasky, A.J. Peer, M.J. Grimm, E.R. Zynda // Immunol. Res. 2010. - Mar, 46 (1-3). -P. 137- 154.

256. Rohr U.D. Melatonin deficiencies in women / U.D. Rohr, J. Herold // Ma-turitas. 2002. - suppl. 1. - Vol. 15, № 41. - P.85-104.

257. Sancar A. DNA repair in humans / A. Sancar // Ann. Rev. Genet. 1995. -Vol. 29, №2.-P. 69- 105.

258. Schindowski K. Age related changes of apoptotic cell death in human lymphocytes / K. Schindowski, S. Leutner, W.E. Muller, A. Eckert // Neu-robiol. Aging. - 2000. - Vol. 21. - P. 661 - 670.

259. Sirvio J.Adenohypophyseal hormone levels during hyperthermia / J.Sirvio, J. Jolkkonen , A. Pitkanen // Endocrinologie. 1987. - Vol. 25(1). - P. 2123.

260. Srinivasan V. Melatonin, immune function and aging / V. Srinivasan, G.J. Maestroni, D.F. Cardinali et al. // Immun. Aging 2005. - Vol.2. - P.17-27.

261. Stasica P. Melatonin as a hydroxyl radical scavenger / P. Stasica, P. Ulanski, J.M. Rosiak // J. Pineal Res. 1998. - Vol. 25. - P.65 - 66.

262. Steller H. Mechanisms and genes of cellular suicide / H. Steiler //Science. -1995.-Vol. 267.-P. 1445- 1449.

263. Tilly J.L., Pru J.K., Rueda B.R. Role of apoptosis in development, functioning and function infringement in the ovary / J.L. Tilly, J.K. Pru, B.R. Rueda //The Ovary. 2004. - Vol.19. - P.321 - 345.

264. Touitou Y., Haus E. Biologic rhythms in clinical end laboratory medicine / Y. Touitou, E. Haus // Springer Verlag. - 1992. - 730 p.

265. Touitou Y. Aging of the human endocrine and neuroendocrine time structure / Y.Touitou, E. Haus // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1994. - Vol. 719. - P. 378-397.

266. Touitou Y. Human aging and melatonin. Clinical relevance / Y.Touitou // Exp. Gerontol. 2001. - Vol. 36. - P. 1083 - 1100.

267. Weber C.K. Supramaximal secretagogue stimulation enhances heat shock protein expression in the rat pancreas / C.K.Weber, T. Gress, F. Pillasch, M.M. Lerch, H.Weidenbach, G. Adler // Pancreas. 1995. - Vol. 10, № 4. -P. 360-367.

268. Whisler L. C. Regulators of proliferation and apoptosis in carcinoma of the larynx / L.C. Whisler, N.B.Wood, D.D. Caldarelli et al. // Laryngoscope. -1998. Vol. 108. - P. 630 - 638.

269. Wylle A.H. Glucocorticoid induced thymocyte apoptosis is associated with endogenous endonuclease activation / A.H. Wylle // Nature. - 1980. -Vol. 284.-P. 555-556.

270. Wylle A.H. Chromatin cleavage in apoptosis: association with condensed chromatin morphology and dependence on macromolecular synthesis / A.H. Wylle, R.G. Morris, A.L. Smith, D. Dunlop // J. Pathol. 1984. -Vol. 142. -P.67 - 77.

271. Wylle A. H. Apoptosis: cell death in tissue regulation / A.H. Wylle // J. Pa-tol.- 1987.-Vol. 153(2).-P. 313-316.

272. Yu H. S. Melatonin. Biosynthesis, physiological effects and clinical applications / H.S. Yu, R.J. Reiter // Broca Ration, FL: CRC. Press., 1993. -P.447 -475.

273. Zeleznik A.J. Administration of IGF-I to rhesus monkeys does not augment gonadotropin-stimulated steroidogenesis / A.J. Zeleznik, L.L. Ihrig, S.G. Bassett // Ibid. 1989. - Vol. 125. - P.2218 - 2220.

Информация о работе

Бочкарева, Алла Львовна
кандидата медицинских наук
Новосибирск, 2012
ВАК 03.03.04

Диссертация

Морфология яичников и апоптоз в условиях гипертермии и воздействия мелатонином (экспериментальное исследование) - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы