Особенности апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней и его взаимосвязь с функциональной активностью гипофизарно-овариальной системы

Паюхина, Марина Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Особенности апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней и его взаимосвязь с функциональной активностью гипофизарно-овариальной системы
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Особенности апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней и его взаимосвязь с функциональной активностью гипофизарно-овариальной системы"

ООЭ4ЬЬ^ии

рукописи

Паюхина Марина Александровна

ОСОБЕННОСТИ АПОПТОЗА КЛЕТОК ГРАНУЛЕЗЫ ФОЛЛИКУЛОВ В ЯИЧНИКАХ СВИНЕЙ И ЕГО ВЗАИМОСВЯЗЬ С ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ ГИПОФИЗАРНО-ОВАРИАЛЬНОЙ СИСТЕМЫ

03.00.13 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

I г ^

Белгород-2009

003466200

Работа выполнена на кафедре терапии и акушерства ФГОУ ВПО «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова»

Научный руководитель: заслуженный ветеринарный врач РФ,

доктор биологических наук, профессор Сеин Олег Борисович

Официальные оппоненты: заслуженный ветеринарный врач РФ,

доктор биологических наук, профессор Безбородов Николай Васильевич доктор биологических наук, профессор Козлов Владимир Егорович

Ведущая организация - Орловский государственный аграрный университет

Защита диссертации состоится ¿3. РУ. 2009 года в « /Ь » часов на заседании диссертационного совета Д 220.004.01 при ФГОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия» по адресу: 308503, Белгородская область, пос. Майский, ул. Вавилова, д.1. Тел/факс 8(4722) 39-22-62

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО Бел ГСХА

Автореферат разосланР3> 2009 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, доцент

Ю.Н. Литвинов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Значительный прогресс, достигнутый в понимании молекулярной биологии клетки, позволил по-иному оценить многие процессы, протекающие в ней. Более детально изучены механизмы контроля клеточного деления, поддержания генетической стабильности, путей передачи сигналов от рецепторов в ядро. Одним из таких механизмов, участ вующих в поддержании гомсостаза на тканевом и системном уровнях, является аполтоз - особый вид гибели клеток, который наблюдается как в условиях нормальной, так и патологической жизнедеятельности животных.

Исследование молекулярных механизмов запрограммированной гибели клеток стало в настоящее время одной из самых актуальных проблем биологических наук, поскольку сбои в реализации программы апоптоза в клетках лежат в основе патогенеза и прогрессии ряда заболеваний. Нарушение генетически запрограммированных процессов клеточной гибели, а именно ингибищш апоптоза может привести к неуправляемой со стороны гормональной системы организма клеточной пролиферации и развитию новообразований, возникновению аутоиммунных заболеваний.

Апоптоз стал неотъемлемым инструментом для осуществления наследственного и приобретенного, гуморального и клеточного ответа иммунной системы. Изучение процесса апоптоза открывает новые перспективы в клеточной биологии и иммунологии.

В последние годы у исследователей повысился интерес к процессам апоптоза, протекающего в репродуктивных органах самок, в частности тканях матки и яичников. Ученых интересует роль апоптоза в развитии фолликулов и их атрезии, какова его интенсивность в течение полового цикла, и какое влияние оказывают на него гонадотропные и половые гормоны. Осуществляются попытки регуляции апоптоза в фолликулах яичников с использованием различных ингибиторов (C.B. Стрижикова, 2000; L. Zhong-Hua et al., 2002; L. Chang-Kyn, 2002). Однако имеющиеся в источниках литературы сведения не многочисленны, выполнены на разных видах животных и нередко носят противоречивый характер.

Цель и задачи исследований. Принимая во внимание актуальность и научно-практическую значимость указанной проблемы, целью настоящей работы являлось изучение особенностей процесса апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней и его взаимосвязь с функциональной активностью гипофизарно-овариальной системы. Исходя из этого были поставлены следующие задачи:

1. Изучить морфологическое проявление апоптоза клеток гранулезы фолликулов и гормональную активность аденогипофиза и яичников у свиней до полового созревания.

2. Установить особенности апоптоза клеток гранулезы фолликулов и гормональной активности аденогипофиза и яичников у свиней в возрастном аспекте.

3. Выяснить роль апоптоза клеток гранулезы в процессе атрезии фолликулов в яичниках свиней.

4. Изучить влияние экзогашых гонадотропных препаратов на активность процесса апоптоза в клетках гранулезы в фолликулах яичников свиней.

5. Получить иммуногистохимическуго характеристику апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней после введения люлиберина.

Научная новизна. На основании результатов морфологических и иммуногисто-химических исследований выяснено, что клетки гранулезы подвергаются апоптозу на разных стадиях развития фолликулов в яичниках свиней. Показано, что атрезия клеток гранулезы фолликулов тесным образом связана с функциональной активностью аденогипофиза и яичников и зависит от содержания в крови гонадотропных и половых гормонов. Впервые выявлены особенности апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней, находящихся на разных стадиях атрезии. Получены новые данные о влиянии на апоптоз клеток гранулезы экзогенных гонадотропных препаратов и люлиберина.

Отличие результатов исследований от результатов, полученных другими авторами, заключается в том, что исследования были выполнены не на модулируемых системах и лабораторных животных, а на свиньях разного возраста и физиологического состояния. При этом использовались комплекс методов: гистологические, иммуногистохимические, гормональные. Это позволило изучить особенности апоптоза клеток гранулезы и гормонального статуса у неполовозрелых и половозрелых свинок, выяснить роль апоптоза в процессе атрезии фолликулов и изучить влияние экзогенных гонадотропинов и люлиберина на процесс апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследований особенностей апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней существенно дополняют представления о механизме атрезии фолликулов и интерьерных перестройках, происходящих в репродуктивной системе самок в возрастном аспекте.

Полученные данные можно использовать при разработке новых средств биологической стимуляции овуляции у свиноматок, а также в учебном процессе при изучении курсов физиологии и ветеринарного акушерства.

Реализация результатов исследований. Основные научные положения и предложения производству вошли в рекомендации «Физиологические особенности формирования половой функции у свиней» (Курск, 2007).

Основные положения выносимые на защиту:

■ Результаты качественных и количественных показателей проявления апоптоза клеток гранулезы на разных стадиях развития фолликулов в яичниках свиней.

» Особснносга процесса апоптоза клеток гранулезы у свиней в возрастном аспекте и его взаимосвязь с функциональной активностью гипофизарпо-овариалыюй системы.

■ Взаимосвязь процессов апоптоза клеток гранулезы и атрезии фолликулов в яичниках свиней.

■ Иммуногистохимическая характеристика процесса апоптоза клеток гранулезы в фолликулах свиней после введения экзогенных гонадотропинов и люлиберина.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на международных научно-практических конференциях «Региональные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса» (Курск, 2006), «Вклад молодых ученых в реализацию приоритетного национального проекта развития агропромышленного комплекса» (Троицк, 2007), «Ветеринарная медицина - теория, практика и обучение» (Санкт-Петербург, 2007), «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этане и пути их решения» (Белгород, 2007), «Проблемы и перспективы развития аграрного производства» (Смоленск, 2007), «Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса» (Курск, 2007), «Трансферт инновационных технологий в животноводстве» (Орел, 2008), «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Курск, 2008); всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства РФ в номинации «Ветеринарные науки» (Белгород, 2008), научных конференциях профессорско-преподавательского состава Курской ГСХА имени И.И. Иванова (Курск, 2005-2008);

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 134 страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы. Список литературы включает 238 источников, в том числе 167 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 10 таблицами и 26 рисунками. По результатам исследований опубликовано 10 научных статей, в том числе 1 в издании, рекомендованном ВАК РФ.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в период с 2005 по 2008 гг. на базе межкафедральной научно-исследовательской лаборатории факультета ветеринарной медицины и учебно-опытного хозяйства «Знаменское» Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И.И. Иванова; лаборатории Курского областного бюро патологической анатомии.

Объектом исследований являлись ремонтные свинки крупной белой породы. Животных подбирали по принципу аналогов ^ учетом происхождения, массы тела, возраста и развития. Материалом для исследований служили яичники, которые получали от свинок после убоя или овариоэктомии в условиях хозяйства или мясокомбината.

Экспериментальная часть работы состояла из трех серий опытов.

В первой серии опытов изучали особенности апоптоза в клетках гранулезы фолликулов в яичниках свиней в возрастном аспекте. С этой целью проводили отбор яичников у неполовозрелых и половозрелых свинок 5-месячного возраста, а также у 7-, 9-, 12- и 24-месячного возраста. У неполовозрелых свиней яичники получали во время стадии уравновешивания полового цикла.

У всех подопытных животных брали кровь, в которой определяли общие гематологические показатели (СОЭ, гематокрит, содержание эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина), содержание эстрадиола-17р и прогестерона.

Вторая серия опытов была посвящена изучению процессов апоптоза и атрезии фолликулов в яичниках свиней. Данные процессы исследовали у свинок 5-месячного возраста.

В третьей серии опытов изучали влияние экзогенных гонадотропинов и лю-либерина на течение апоптоза в клетках гранулеза фолликулов в яичниках свиней.

В качестве гонадотропинов был выбран препарат «Фоллимаг». Опыты проводили на свинках 9-месячного возраста, из которых было сформировано 5 групп. В первую группу входили контрольные животные; во 2 группу входили свинки, у которых отбор яичников проводили на первые сутки после введения препарата; в 3 группу - на третьи сутки; в 4 группу - на пятые сутки; в 5 группу - на седьмые сутки после введения препарата Препарат вводили внутримышечно в дозе 1000 ИЕ/гол.

В качестве люлиберина был выбран препарата «Сурфагон». Для выяснения его влияния на течение апоптоза в клетках гранулезы было сформировано четыре группы свинок 6-месячного возраста. Свинки 1, 2 и 3 группы являлись опытными, им вводили внутримышечно и однократно сурфагон в дозе 50 мкг/гол. Свинки 4 группы являлись контрольными, им вводили стерильный физиологический раствор. У свинок 1 опытной группы яичники отбирали через 6 часов после введения препарата, у свинок 2 и 3 группы - соответственно через 24 и 48 часов. У контрольных животных овариэктомию проводили через 24 часа после введения физиологического раствора.

В ходе выполнения диссертационной работы использовали комплекс методов.

Масса, линейные и объемные параметры. Массу устанавливали с использованием электронных весов. Диаметр яичников и фолликулов измеряли штангенциркулем. Объем определяли путем погружения в мерный сосуд с водой.

Гистологические исследования. Изготовление гистологических препаратов осуществляли по общепринятой схеме: фиксация материала, обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации и ксилоле, заливка в парафин, приготовление парафиновых срезов на сапном микротоме (Д.С. Саркисов, 1996). Окрашивали гисто-препараты гематоксилин-эозином. Для морфометрических измерений использовали винтовой окуляр-микрометр.

Иммуногистохимические исследования, //роводили стрептавидин-биотиновым иммуиопероксидазным методом на парафиновых срезах ткани яичииков с использованием моноклональных мышиных антител к PCNA - Anti-Proliferating Cell Nuclear Antigen, Clone bcl-2 (1:300, Dako); Clone Ki-67 (1:25, Dako); p53, DO-7 (1:25, Dako). Демаскировку антигена проводили в цитратном буфере (рН=б,0) в бытовой СВЧ-печи «SAMSUNG -M1774R». Для приготовления препаратов использовали стекла, покрытые силаном (DAKO S 2024).

Количественные исследования проводили путем определения индекса апопто-за (ИА) в 10 случайно выбранных полях зрения (>100 клеток) как долю (в %) положительно окрашенных ядер клеток гранулезы фолликулов яичников с соответствующими морфологическими признаками.

Аналогичным образом, что и индекс апоптоза, определяли в клетках гранулезы фолликулов яичников индекс пролиферации (ядерная метка Ki-67) и экспрессию р53, bcl-2.

Для оценки морфологических изменений зернистого слоя фолликулов использовали специальную визуально-аналоговую шкалу для полуколичественного определения выраженности активности процесса апоптоза (Аруин Л.И., 1997).

Гормональные методы. Определение в плазме крови гонадотропных препаратов (ФСГ, ЛГ) проводили методом биологического тестирования (A.Parlow, 1961) после их предварительного концентрирования в плазме крови путем насыщения сернокислым аммонием (М.И. Прокофьев, Ю.А. Селиверстов, 1977). Содержание эстрадиола-17Р и прогестерона в крови животных определяли иммуноферментным методом с использованием наборов «Vismara».

Биометрические исследования. Полученные в ходе проведенных исследований данные подвергали биометрической обработке (П.Ф. Рокицкий, 1973) с использованием ПВЭМ «ЮМ PC/AT».

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Апоптоз клеток гранулезы и функциональная активность гипофизарно-овариальной системы у свиней в период полового созревания

Анализ гистологических препаратов фолликулов в яичниках у 5-месячных неполовозрелых и половозрелых свинок показал, что клетки гранулезы, подверженные

апоптозу, отличаются от жизнеспособных клеток. Это связано с тем, что у апопго-тических клеток уплотняется цитоплазма, вследствие чего она окрашивается более интенсивно по сравнению с окружающими клетками, а также происходит фрагментация и конденсация хроматина в ядре. При этом существенных различий в течении апоптоза в клетках гранулезы у половозрелых и неполовозрелых свиней выявлено не было. Как у первых, так и у вторых процесс апоптоза осуществлялся по одному «сценарию» и сопровождался характерными признаками: уменьшение клетки, подверженной апоптозу, в размере, отграничение ее от окружающей ткани светлым ободком и образование апоптозных телец. Апоптозные тельца в гистологических препаратах выглядели преимущественно в виде округлых образований, четко отграниченных от окружающих тканей участками просветления.

Применение большого увеличения позволило выявить в апоптозных клетках изменения в ядре и цитоплазме. Было установлено, что ядерный хроматин в этих клетках конденсируется в виде отдельных крупных глыбок, которые локализуются преимущественно около ядерной мембраны. Конденсированный хроматин в одних случаях занимал всю поверхность среза такого фрагмента, в других располагался в виде «полулуния».

Несмотря на однотипность изменений в гранулезе и в общем «механизме» апоптоза у неполовозрелых и половозрелых свиней, нам удалось выявить, что интенсивность процесса апоптоза у первых была более высокой, чем у вторых. О чем свидетельствуют результаты определения индекса апоптоза: у неполовозрелых свинок (1,88±0,3 - 2,10±0,44) он был выше по сравнению с половозрелыми (1,65±0,5 -1,78±0,88).

Рис. 1 - Индекс апоптоза клеток гранулезы и содержание ФСГ и ЛГ в крови свинок 5-месячного возраста

1,0

0,5 0

порядковый номер животного

2 3 4

порядковый номер животного

|в индекс апоптоза; О прогестерон |

[риндексапогттоза; □ эстрадиол-17р ;

Рис.2 - Индекс апоптоза клеток гранулезы и содержание эстрадиола-17р и прогестерона в крови свинок 5-месячного возраста

В свою очередь было установлено, что интенсивность апоптоза в клетках гранулезы фолликулов свиней тесным образом связана с функциональной активностью аденогипофиза и яичников. Как следует из рисунков 1, 2 у свинок с относительно низким содержанием в крови гонадотропных гормонов и эстрадиола-17|3 индекс апоптоза был вьппе, чем у животных с более высоким содержанием этих гормонов.

3.2. Апоптоз клеток гранулезы и функциональная активность гипофизарно-овариальной системы у свиней в возрастном аспекте

Исследование процесса апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней в 5, 7, 9, 12 и 24 месяцев показало, что он был практически однотипным и не имел существенных различий в возрастном аспекте. В большинстве случаев в гис-топрепаратах встречались одиночные клетки с признаками апоптоза и редко обнаруживались группы апоптозных клеток. При этом в погибающих клетках гранулезы наблюдалась конденсация хроматина в виде крупных глыбок.

На ранних стадиях апоптотической смерти клеток гранулезы наблюдались округления контуров и уменьшение размеров клеток, потеря ими межклеточных контактов. Гибнущие клетки обнаруживались во всех фолликулах независимо от того, подвержены они атрезии или нет.

Расчет индекса апоптоза показал, что с увеличением возраста животных интенсивность апоптоза в клетках гранулезы снижается. Однако и в этом случае наблюдалась зависимость течения апоптотического процесса от функционального состояния аденогипофиза и яичников. У свинок с более высоким содержанием в крови гонадотропных гормонов и эстрадиола-17|3 индекс апоптоза был меньше, чем у животных с более низким содержанием этих гормонов (табл.1).

Таблица 1 - Индекс апоптоза и содержание гонадотропиых и половых гормонов в крови свиней в возрастном аспекте

Показатели Возраст, мес.

5 7 8 9 12 24

Апоптозный индекс 1,85±03 1,75±0,8* 1,65±Д4* 1,65±0,5* 1ДМ,7* 1,66Ш,6*

ФСГ мкг/ЮОмл 114,5±8,5 124,0±9,9 131,5±ЮД 130,8±9,0 141,0*10,7 150,5±11* 5

ЛГ мкг/ЮОмл 2,5±0Д 3,3 ±0,4 3,5±03 3,6±0,2* 3,8±0,1* 3,7±03*

Эстрадиол-17р, пмоль/л 66,8±5,7 70,5±6,6 71,2±8,3 75,4±6,0 81,3±7,7* 78,8±7,0*

Прогестерон, нмоль/л 20,5±3,5 23,7±2,8 34,0±3,7* 27,2±4Д 33,5±3,6* 39,6±4,5*

Примечание: * - при р<0,05, по сравнению с соответствующими показателями, получен-

ными у животных 5-месячного возраста

3.3. Особенности атрезии фолликулов в яичниках свиней в возрастном аспекте

Экспериментальная часть работы по изучению процесса атрезии фолликулов у свиней состояла из двух серий опытов. В первой серии изучали процесс атрезии фолликулов в яичниках свинок с 3- до 10- месячного возраста. Вторая серия опытов была посвящена исследованию атрезии фолликулов в яичниках свинок после введения гонадотропного препарата ПГ-600 (Голландия).

Учитывая то, что процесс атрезии фолликулов в яичниках свиней, независимо от возраста животных, имеет однотипный характер, мы обобщили результаты гистологических исследований и провели анализ. Это позволило получить, прежде всего, общее представление о «механизме» атрезии фолликулов в яичниках у свиней крупной белой породы.

Результаты исследований показали, что процесс атрезии фолликулов регистрировался как у неполовозрелых свинок, так и у половозрелых животных. Было установлено, что атрезии подвергались фолликулы на всех стадиях развития. Процесс атрезии примордиальных фолликулов протекал с плохо выраженными изменениями, поэтому о завершении атрезии этих фолликулов можно судить только по разрушению структур овоцита.

Атрезия вторичных фолликулов протекала с более характерными признаками. Прежде всего, здесь можно было заметить изменения со стороны фолликулярного эпителия, подвергавшегося дегенерации. Его клетки становились более округлыми, ядра принимали неправильную форму, овоцит находился в свободном состоянии внутри фолликула.

Атрезия третичных фолликулов, в отличие от вторичных, протекала с более выраженными признаками и сопровождалась дегенерацией не только фолликулярного

эпителия, но и клеток внутренней теки. Отмечено, что и в этом случае в овоците з чметных изменений не обнару кивалось.

Наши наблюдения показали, что при световой микроскопии первые признаки атрезии в фолликулах свиней регистрируются в фолликулярном эпителии и текапь-ных клетках, а затем проявляются в овоците. Однако не исключено, что «запуск» атретического процесса в фолликуле начинается именно с овоцита. а затем он передаётся на окружающие структуры - фолликулярный эпителий и теку. В данном случае световая микроскопия не позволяет выявить трудноуловимые изменения в структуре овоцита.

Динамика количества антральных фолликулов в яичниках свиней представлена на рисунке 3, из которого видно, что наиболее интенсивно атрезия фолликулов происходит в период полового созревания и становления половой функции.

Учитывая роль аденогипофиза в регуляции фолликулогенеза, нами был проведён эксперимент по изучению влияния гонадотропинов на ход атретического процесса в яичниках свиней. С этой целью ремонтным свинкам 8-месячного возраста вводили гонадотропный препарат ПГ-600 в дозе 600 ИЕ/гол (1 опытная группа) и 1000 ИЕ/гол (2 опытная группа), контролем являлись животные, которым вводили физиологический раствор. Через 72 часа у опытных и контрольных свинок проводили лапаротомию и извлекали яичники.

2 3 4 5

возраст, мес

Рис.3 - Динамика образования атретических фолликулов в яичниках ремонтных свинок в возрастном аспекте

Результаты гистологических исследований показали, что введение гонадотроп-ного препарата ПГ-600 оказывает определённое влияние на процесс атрезии в яичниках свинок. При этом было установлено, что введение более высокой дозы (1000

ИЕ/гол) препарата сопровождается активизацией атретического процесса и кистоз-ныч перерождением фолликулог После введения препарата в рекомендуемых дозах (600 ИЕ/гол) в яичниках свинок находилось много примордиальных, а также полноценных вторичных и третичных фолликулов и значительно меньше фолликулов, подвергавшихся атрезии.

3.4. Роль апоптоза в процессе атрезии фолликулов в яичниках свиней

При изучении взаимосвязи апоптотических и атретических процессов, нами было установлено, что в фолликулах, не имеющих признаков атрезии, единичные клетки обнаруживались в основном в тех частях зернистого слоя, которые удалены от яйценосного бугорка. В фолликулах, подвергшихся атрезии (первая стадия), апоптотические клетки обнаруживались в основной своей массе по периферии. Наоборот, в фолликулах во время второй стадии атрезии более интенсивно процесс апоптоза протекал в яйценосном бугорке, постепенно затрагивая другие клетки зернистого слоя. При этом поздние стадии апоптотического процесса преобладали по периферии, а ранние - в яйценосном бугорке.

Третья стадия атретического процесса характеризовалась тем, что в яйценосном бугорке большинство клеток гранулезы вступали в позднюю стадию апоптоза и выявлялись лишь единичные клетки, не имеющие признаков гибели. Тогда как по периферии апоптотические процессы «затухали» и количество клеток без признаков апоптоза было больше, чем в яйценосном бугорке.

Четвертая стадия атретического процесса характеризовалась резким включением в процесс гибели всех частей зернистого слоя. При микроскопии основную массу составляли апоптотические тельца. 50 40 30

в л« £ 20 о

я 5

2 1 0

Рис.4 - Динамика индекса апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней 5-месячного возраста

-И ►

X у'

зрелый фолликул 12 3

(контроль) стадия атрезии фолликула

Для получения более полной картины, происходящей в гранулезе, был произведен подсчет индекса апопте:а в зрелых фолликулах, не имеющих видимых признаков атрезии, а также в фолликулах, находящихся на первой, второй и третьей стадии атретического процесса. В этом опыте был использован иммуногистохимический метод исследования с использованием антител к гену р53. Результаты исследований представлены на рисунке 4, из которого следует, что в зрелых фолликулах, не имеющих видимых признаков атрезии, индекс апоптоза был минимальным, а в фолликулах подвергшихся атрезии он возрастал в зависимости от стадии атретического процесса.

Таким образом, увеличение индекса апоптоза указывает на наличие атретического процесса и данный показатель можно использовать в качестве «маркера» начала атретического процесса в фолликулах.

3.5. Влияние экзогенных гонадотропинов на течение апоптоза в клетках гранулезы яичников свиней

Результаты иммуногистохимического анализа апопготической активности в клетках гранулезы зрелых фолликулов в яичниках свиней после введения препарата «Фоллимаг» показали, что у животных контрольной группы морфологическая картина исследования характеризовалась слабо выраженным Ьс1-2 - окрашиванием гранулезы и лишь небольшие группы клеток имели яркую коричневую окраску. Иммуногистохимическое окрашивание на ген р53 выявило наличие позитивно реагирующих клеток зернистого слоя со степенью градации два балла (11-13%). В основном такие клетки обнаруживались по периферии. Активность коричневой окраски для ядерного антигена пролиферирующих клеток Ю-67 характеризовалась равномерностью со слабой степенью выраженности, клетки имели не однородную окраску и в основной массе окрашивались в светло-коричневый цвет.

На первые сутки после введения препарата было отмечено усиление сродства клеток гранулезы к красителю. В этот период наблюдений возрастало число клеток гранулезы, имевших Ьс1-2-позигивное окрашивание. При этом количество клеток, имеющих положительную окраску к гену р53, снижалось, составляя 9-10%. Реакция с антителами к Кл-67 не имела существенных отличий от контрольной группы.

Через трое суток с момента введения препарата было выявлено усиление иммуногистохимического окрашивания на антиапоптотический белок Ьс1-2, которое наиболее выражено проявлялось в области яйценосного бугорка. Реакция на ген р53 имела слабую выраженность признака. При морфологическом исследовании препаратов на Кл-67-позитивных клеток отмечалось увеличение сродства к красителю, наблюдалась более интенсивная коричневая окраска и увеличение числа окрашенных клеток.

На пятые сутки после введения препарата интенсивность окрашивания клеток грану пезы возросла. При этом выраженное Ьс1-2-позитивное окрашивание выявлялось не только в зернистом слое, но и затрагивало соединительно-тканный слой. Процент клеток иммуногистохимически позитивньгх к белку р53 имел незначительную степень выраженности признака и составлял менее 5%. Интенсивность коричневой окраски на Кл-67 была ярко выраженной и имела равномерность в распределении по зернистому слою.

На седьмые сутки с момента введения препарата обшая интенсивность экспрессии Ьс1-2-протеинов уменьшилась. В это время отмечалась выраженная мозаичность иммуногистохимического окрашивания разных частей фолликула: участки окрашенных на Ьс1-2 клеток гранулезы чередовались с зонами, в которых было выражено сродство красителя к клеткам. Окраска на белок р53 показала, что процент клеток положительно реагирующих вновь увеличился. При этом концентрация р53 -позитивных клеток была сосредоточена по периферии зернистого слоя. Это связано, по-видимому, с повышением интенсивности апоптотических процессов вследствие снижения защитных свойств клетки, обусловленных понижением активности белка Ьс1-2. При исследовании срезов, окрашенных на маркер пролиферации Кл-67, наблюдалось неравномерное окрашивание клеток.

Анализ результатов полуколичественной оценки апоптотических процессов, протекающих в клетках гранулезы яичников свиней после введения гонадотропного препарата, позволяет сделать предположение, что усиление экспрессии Ьс1-2-белка на пятые сутки эксперимента связано со стимуляцией механизмов блокирующих алоптоз и осуществляющих антиоксидаптную защиту клеток.

В это же время мы наблюдали уменьшение процента клеток положительно реагирующих при окраске на белок р53, что также указывает на снижение апоптотических процессов в клетках.

Сравнительное изучение выраженности апоптоза в клетках гранулезы до и после введения препарата позволило выявить значительные колебания количественных показателей индекса апоптоза, пролиферативного индекса и экспрессии белка Ьс1-2. Было установлено, что пролиферативный шщекс, полученный с использованием иммуногистохимического определения ядерного антигена пролиферирующих клеток И-67, имел тенденцию к увеличению после ведения препарата, в отличие от контроля. Так, у животных контрольной группы он составлял 47,3±1,5%, а у свинок второй и третьей опытной группы, что соответствовало 3 и 5 суткам после введения гонадотропного препарата, пролиферативный индекс был выше и достигал соответственно 49,2±3,2% и 52,5±2,0%. Однако, у свинок, у которых исследовали материал на 7 сутки после введения препарата, пролиферативный шщекс снижался (50,7±3,6%).

Экспрессия белка Ьс1-2 в период исследований изменялась параллельно динамике пролиферативного индекса. В клетках гранулезь. фолликулов у свинок на 3 сутки после введения препарата экспрессия Ьс1-2 составляла 87,3±4,8%, на 5 сутки -90,7±5,2%, что соответственно на 1,6 и 5,1% было больше по сравнению с контролем. В то же время на 7 сутки после введения гонадотропного препарата экспрессия белка Ьс1-2 вновь понизилась и составляла 87,7±4,9%.

Что касается индекса апоптоза, то его динамика была противоположной динамике пролиферативного индекса и экспрессии белка Ьс1-2. Так, у контрольных свинок индекс апоптоза в клетках гранулезы фолликулов составлял 3,1±0,3%. У свинок опытных групп на 3 и 5 сутки после введения гонадотропного препарата он понизился и соответственно достигал 2,5±0,2 и 2,0±0,2%. Однако, на 7 сутки после введения препарата он вновь увеличился (2,7±0,3%).

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что гонадотропины оказывают блокирующее действие на процесс апоптоза в клетках гранулезы фолликулов в яичниках свиней.

3.6. Иммуногистохимическая характеристика апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней после введения люлиберина

Исследование процесса апоптоза в клетках гранулезы фолликулов в яичниках свиней после введения препарата «Сурфагон» позволило выявить определенное сродство клеток к маркеру р53. При этом количество апоптоз-положительных клеток составляло в среднем 1,5%, и в основном они обнаруживались по периферии фолликула, а в яйценосном бугорке такие клетки не выявлялись. Результаты изучения маркера пролиферации К>67 в исследуемой группе подтвердили снижение про-лиферативной активности клеток и неравномерность в их окраске.

У подопытных свинок через 24 час после введения препарата количество клеток зернистого слоя, имеющих ярко-коричневую равномерную окраску к маркеру Ьс1-2 уменьшилось, а количество клеток, имеющих сродство к р53, наоборот, имело тенденцию к увеличению. Однако такие клетки, как и в предыдущем случае, в основном выявлялись по периферии фолликула. Что касается маркера пролиферации К1-67, то в ходе исследований наблюдалось снижение сродства к нему, которое характеризовалось слабо выраженной коричневой окраской клеток.

При этом в атретических фолликулах сродство к маркеру р53 было отчетливо выраженным и характеризовалось яркой окраской и отсутствием мозаичности, тогда как к маркеру Ьс!-2 сродство клеток практически не проявлялось.

Через 48 час после введения препарата в зернистом слое третичных и вторичных фолликулов наблюдали картину, схожую с таковой у контрольной группы животных. Полуколичественная оценка результатов показала лишь отличия при иссле-

довании окраски к маркеру пролиферации, которая характеризовалась слабой выраженностью, лишь отдельные клетки имели ярко-коричневую окраску.

Количественная оценка пролиферативной активности имела тенденцию к снижению по сравнению с таковой в контрольной группе животных. Так, через 6 час после введения препарата пролиферативный индекс составлял 43,6±3,9%. Через 24 часа он повысился до 45,2±4,1%, что свидетельствует о снижении способности клеток к пролиферации. Однако у свинок, у которых исследовали фолликулы через 48 час после введения препарата, пролиферативный индекс имел тенденцию к увеличению (46,7±3,5%).

Анализ состояния экспрессии р53 показал, что через 6 час после введения препарата количество р53-положительно реагирующих клеток было не высоким и в среднем составляло 1,5±0,3%, тогда как в контроле данное значение достигало 2,6±0,6%. Через 24 часа процент апоптозных клеток увеличился до 3,9±0,7%, а через 48 час вновь отмечалась тенденция к снижению показателя (3,1±0,7%).

Проведенная оценка изменений экспрессии белка Ьс1-2 показала, что данный показатель через 6 час после введения препарата составлял 88,1±4,5%, через 24 час достигал 87,2±5,2%, а через 48 час - 86,9±5,3%. В контрольной группе животных показатель экспрессии белка Ьс1-2 составлял 85,6±5,4%. Расчет индекса апоптоза показал, что в контрольной группе свинок в клетках гранулезы фолликулов он составлял 3,3±0,3%. Через 6 часов, после введения люлиберина, индекс резко понизился и достигал 2,5±0,2 %. Однако, во второй опытной группе он вновь увеличился до 2,8±0,5%.

Таким образом, полученные нами данные указывают на то, что после введения сурфагона у свинок апоптотические процессы снижаются и активизируется процесс роста фолликулов. Об этом свидетельствует тот факт, что у свинок третьей группы масса яичников (6,3±0,21г), их объем (5,3±0,35см3), количество фолликулов, размеры которых превышали 0,5см (19,8±0,44), было больше, чем у свинок других групп. При этом по сравнению с контрольными животными (5,10±0,20г; 4,4±0,27 см3; 16,4±0,35) эти различия являлись статистически достоверными (р<0,05).

В свою очередь иммуноферментный анализ половых гормонов показал, что у свинок третьей группы содержание в крови эстрадиола-17Р (84,6±4,2пмоль/л) было достоверно больше (р<0,05) по сравнению с контрольными животными (68,0±6,0 пмоль/л). Что касается прогестерона, то существенных различий (р>0,05) в его содержании в крови свинок опытных и контрольных групп нами выявлено не было.

Что касается прогестерона, то существенных различий (р>0,05) в его содержании в крови опытных и контрольных групп нами выявлено не было.

Таким образом, полученные нами данные указывают на то, что после введения сурфагона у свинок апоптотические процессы снижаются и активизируются процесс

роста фолликулов. Об этом сивдетельствует тот факт, что у свинок третьей группы, масса яичников (6,3±0.Лг), их объем (5,3±0,35см3), количество фолликулов размер.ч которых превышали 0,5см (19,8±0,44), было больше чем у свинок других групп. При этом по сравнению с контрольными животными (5,10±0,20г; 4,4±0,27 см3; 16,4±0,35) эти различия являлись статистически достоверными (р<0,05).

4. ВЫВОДЫ

1. Процесс апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках неполовозрелых и половозрелых ремонтных свинок происходит непрерывно и имеет однотипный характер. При этом его интенсивность у первых была более высокой, чем у вторых, на это указывает индекс апоптоза: у неполовозрелых свинок он находился в пределах 1,85±0,3 - 2,10±0,44, а у половозрелых -1,65±0,5 - 1,78±0,85.

2. С увеличением возраста свиней интенсивность апоптоза в клетках гранулезы снижается. Наиболее высокий индекс апоптоза был у животных 5-7 - месячного возраста (1,75±0,24-1,85±0,19), а наиболее низкий у 12-24-мссячных (1,60±0,11 -1,70±0,34).

3. Интенсивность апоптоза в клетках гранулезы свиней связана с функциональной активностью аденогипофиза и яичников. У свинок с относительно высоким содержанием в крови гонадотропных гормонов и эстрадиола-17р индекс апоптоза был меньше (1,60±0,7 - 1,65±0,5), чем у животных с низким содержанием гормонов (1,85±0,3 -2,0±0,7).

4. Апоптоз клеток гранулезы является характерным признаком атрезии фолликулов:

- в фолликулах, находящихся на первой стадии атрезии, апоптотических клеток мало и они обнаруживаются преимущественно по периферии гранулезы;

- на второй стадии атрезии процесс апоптоза более интенсивно протекает в клетках яйценосного бугорка, постепенно затрагивая другие клетки зернистого слоя;

- на третьей стадии атрезии большинство клеток яйценосного бугорка подвержены апоптозу и выявляются лишь единичные клетки, не имеющие признаков гибели;

- на четвертой стадии атрезии фолликулов все клетки гранулезы подвержены апоптозу с образованием апоптозных телец.

5. Маркеры апоптоза в клетках гранулезы Ьс1-2 и р53 являются показателями дальнейшего развития фолликула. При увеличении экспрессии белка Ьс1-2 процессы апоптоза блокируются и фолликул достигает преовуляторного состояния, при увеличении экспрессии р53 дальнейшее развитие фолликула идет по атретическому пути.

6. Экзогенные гонадотропины изменяют интенсивность процесса апоптоза в клетках гранулезы фолликулов в яичниках свиней:

- введение препарата «Фоллимаг» сопровождается относительно высоким уровнем экспрессии белка Ьс1-2 и снижением продукции гена р53, что ведет к уменьшению количества гибнущих клеток в гранулезе.

- пролиферативный индекс на 3 и 5 сутки после введения препарата «Фоллимаг соответственно составил 49,2±3,2% и 52,5±2,0%, что было больше, чем в контроле (47,3±1,5%), а индекс апоптоза, наоборот, в это время уменьшился соответственно до 2,5±0,2% и 2,0±0,2% по сравнению с контролем (3,1±0,3%).

7. Синтетический люлиберин изменяет интенсивность апоптотических процессов в клетках гранулезы фолликулов в яичниках свиней. Через 6 часов после введения препарата «Сурфагон» экспрессия белка Ьс1-2 повысилась на 2,5% и уменьшился индекс апоптоза на 1,0% по сравнению с контролем.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

■ Полученные интерьерные показатели у ремонтных свинок крупной белой породы как физиологические нормативы могут быть использованы при разработке новых способов и средств биологической стимуляции репродуктивной функции свиноматок, а также в клинической практике и в учебных целях при подготовке специалистов зооветеринарного профиля.

■ Выявленные свойства люлиберина и гонадотропных гормонов оказывать влияние на течение апоптоза в клетках гранулезы, можно использовать при изыскании эффективных путей регуляции программированной гибели клеток, контроля их роста и дифференцировки, с целью предотвращения возникновения различных патологических состояний.

б. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Сеин О.Б. Особенности апоптоза в клетках тканей яичников кроликов / О.Б. Сеин, М.А. Паюхина // Материалы XI международной научно-практической конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». - Белгород, 2007. - С.220.

2. Паюхина М.А. Апоптозный индекс и экспрессия маркеров апоптоза в клетках гранулезы фолликулов свиней / М.А. Паюхина, О.Б. Сеин // Материалы международной научно-практической конференции «Проблемы и перспективы развития аграрного производства». - Смоленск, 2007. - С.391-392.

3. Паюхина М.А. Изучение апоптоза гранулезы фолликулов яичников, находящихся на разных этапах развития у свиней / М.А. Паюхина // Материалы II Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина - теория, практика и обучение». - Санкт-Петербург, 2007. - С.55-56.

4. Паюхина М.А. Интенсивность апоптоза и показатель пролиферативной активности при исследовании клеток гранулезы фолликулов свиней / М.А. Паюхина, О.Б. Сеин // Материалы XI международной научно-практической конференции «Вклад молодых ученых в реализацию приоритетного национального проекта развития агропромышленного комплекса». -Троицк, 2007. -С.130-131.

5. Сеин О.Б. Оценка апоптотических процессов в клетках гранулезы зрелых и атретических фолликулов свиней / О.Б. Сеин, М.А. Паюхина // Материалы международной научно-практической конференции «Трансферт инновационных технологий в животноводстве». - Орел, 2008. - С.177-179.

6. Паюхина М.А. Апоптоза клеток гранулезы в зрелых фолликулах яичников свиней / М.А. Паюхина // Межвузовский сборник научных трудов Современный мир, природа и человек. Естествознание и гуманизм. - Томск, 2007. - Т.4. - №4. - С.38.

7. Сеин О.Б. Морфологические особенности апоптоза клеток гранулезы в фолликулах свиней / О.Б. Сеин, М.А. Паюхина // Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса». - Курск, 2008.-T.3.-C.132-133.

8. Сеин О.Б. Пути ингибирования апоптоза в клетках гранулезы фолликулов яичников у свиней / О.Б. Сеин, М.А. Паюхина // Материалы научно-практической конференции, посвященной 125-летию образования ветеринарной службы Курской области «Актуальные проблемы ветеринарной медицины». - Курск, 2008. - С.357-359.

9. Сеии О.Б. Процесс атрезии фолликулов в яичниках свиней в период становления половой функции / О.Б. Сеин, Д.О. Сеин, М.А. Паюхина // Вестник Курской государственной с.-х. академии им. Профессора И.И. Иванова. - Курск, 2009. - №5. -С.66-70.

10. Сеин О.Б. Апоптоз клеток гранулезы в фолликулах яичников свиней и его коррекция гонадотропными препаратом / О.Б. Сеин, М.А. Паюхина // Аграрная наука. - 2008. - №5. - С.35-36.

Сдано в набор 17.03.2009 г. Подписано » печать 17.032009 г. Формат 60x84 '/¡6. Бумага «Снегурочка». Гарнитура Times New Roman Cyr. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 670.

Отпечатало: ПБОЮЛ Киселева OJ3. ОГРН 304463202600213

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Паюхина, Марина Александровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1. Обзор литературы

1.1. Физиологические механизмы регуляции процессов размножения у животных

1.2. Биологическая сущность апоптоза, механизмы апоптотической смерти клеток

1.3. Методы исследования апоптоза

2. Собственные исследования

2.1. Материал и методы исследований

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Апоптоз клеток гранулезы и функциональная активность гипофи-зарно-овариальной системы у свиней в период полового созревания

2.2.2. Апоптоз клеток гранулезы и функциональная активность гипофи-зарно-овариальной системы у свиней в возрастном аспекте

2.2.3. Особенности атрезии фолликулов в яичнике свиней а) Общая характеристика процесса атрезии фолликулов в яичниках свиней б) Процесс атрезии фолликулов в яичниках свиней после введения гонадотропного препарата

2.2.4. Роль апоптоза в процессе атрезии фолликулов в яичниках сивней

2.2.5. Влияние экзогенных гонадотропинов на течение апоптоза в клетках гранулезы яичников свиней а) Полуколичественная оценка апоптоза в клетках гранулезы фолликулов в яичниках свиней б) Количественная оценка апоптоза в клетках гранулезы фолликулов в яичниках свиней в) Влияние гонадотропного препарата на процесс апоптоза в клетках гранулезы в фолликулах, находящихся на разных этапах развития

2.2.6. Иммуногистохимическая характеристика апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней после введения сурфагона

3. Обсуждение результатов исследований

4. Выводы

5. Практические предложения

6. Список используемой литературы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней и его взаимосвязь с функциональной активностью гипофизарно-овариальной системы"

Актуальность темы. Использование важнейших технических средств и современных биохимических, микробиологических, биофизических и физиологических методов исследований способствовало проникновению человека в тайны природы различных процессов, протекающих в организме. Экспериментальные исследования на уровне субклеточных микроструктур, выяснение закономерностей синтеза белков, механизма нервных импульсов и наследственности, характера клеточной проницаемости и, наконец, весь уровень развития биологических наук позволяют в настоящее время более объективно и глубоко понять сущность сложных явлений, происходящих в организме.

Значительный прогресс, достигнутый в понимании молекулярной биологии клетки, позволил по-иному оценить многие процессы, протекающие в ней. Более детально изучены механизмы контроля клеточного деления, поддержания генетической стабильности, путей передачи сигналов от рецепторов в ядро. Одним из таких механизмов, участвующих в поддержании гомео-стаза на тканевом и системном уровнях, является апоптоз — особый вид гибели клеток, который наблюдается как в условиях нормальной, так и патологической жизнедеятельности животных.

Исследование молекулярных механизмов запрограммированной гибели клеток стало в настоящее время одной из самых актуальных проблем биологических наук, поскольку сбои в реализации программы апоптоза в клетках лежат в основе патогенеза и прогрессии ряда заболеваний. Нарушение генетически запрограммированных процессов клеточной гибели, а именно инги-биции апоптоза может привести к неуправляемой со стороны гормональной системы организма клеточной пролиферации и развитию новообразований, возникновению аутоиммунных заболеваний, а также вызывать вирусные инфекции, нейропролиферативные заболевания.

Цель и задачи исследований. Принимая во внимание актуальность и научно-практическую значимость указанной проблемы, целью настоящей работы являлось изучение особенностей процесса апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней и его взаимосвязь с функциональной активностью гипофизарно-овариальной системы. Исходя из этого, были поставлены следующие задачи:

3. Выяснить роль апоптоза клеток гранулезы в процессе атрезии фолликулов в яичниках свиней.

4. Изучить влияние экзогенных гонадотропных препаратов на активность процесса апоптоза в клетках гранулезы в фолликулах яичников свиней.

5. Получить иммуногистохимическую характеристику апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней после введения люлиберина.

Научная новизна. На основании результатов морфологических и имму-ногистохимических исследований выяснено, что клетки гранулезы подвергаются апоптозу на разных стадиях развития фолликулов в яичниках свиней. Показано, что атрезия клеток гранулезы фолликулов тесным образом связана с функциональной активностью аденогипофиза и яичников и зависит от содержания в крови гонадотропных и половых гормонов. Впервые выявлены особенности апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней, находящихся на разных стадиях атрезии. Получены новые данные о влиянии на апоптоз клеток гранулезы экзогенных гонадотропных препаратов и люлиберина.

Отличие результатов исследований от результатов, полученных другими авторами, заключается в том, что исследования были выполнены не на модулируемых системах и лабораторных животных, а на свиньях разного возраста и физиологического состояния. При этом использовались комплексные методы: гистологические, иммуногистохимические, гормональные. Это позволило изучить особенности апоптоза клеток гранулезы и гормонального статуса у неполовозрелых и половозрелых свинок, выяснить роль апоптоза в процессе атрезии фолликулов и изучить влияние экзогенных гонадотропинов и люлиберина на процесс апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследований особенностей апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней существенно дополняют представления о механизме атрезии фолликулов и ин-терьерных перестройках, происходящих в репродуктивной системе самок в возрастном аспекте.

Внедрение результатов исследований. Основные научные положения и предложения производству вошли в рекомендации «Физиологические особенности формирования половой функции у ремонтных свинок» (Курск, 2007).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты качественных и количественных показателей проявления апоптоза клеток гранулезы на разных стадиях развития фолликулов в яичниках свиней.

2. Особенности процесса апоптоза клеток гранулезы у свиней в возрастном аспекте и его взаимосвязь с функциональной активностью гипофизар-но-овариальной системой.

3. Взаимосвязь процессов апоптоза клеток гранулезы и атрезии фолликулов в яичниках свиней.

4. Иммуногистохимическая характеристика процесса апоптоза клеток гранулезы в фолликулах свиней после введения экзогенных гонадотропинов и люлиберина.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на:

- международной научно-практической конференции «Региональные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса» (Курск, 2006 г.);

- международной научно-практической конференции «Вклад молодых ученых в реализацию приоритетного национального проекта развития агропромышленного комплекса» (Троицк, 2007 г.);

- международной научно-практической конференции «Ветеринарная медицина - теория, практика и обучение» (Санкт-Петербург, 2007 г.);

- международной научно-практической конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» (Белгород, 2007 г.);

- международной научно-практической конференции «Проблемы и перспективы развития аграрного производства» (Смоленск, 2007г.);

- международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы повышения эффективности агропромышленного комплекса» (Курск, 2007г.);

- международной научно-практической конференции «Трансферт инновационных технологий в животноводстве» (Орел, 2008г.);

- международной научно-практической конференции, посвященной 125-летию ветеринарии Курской области «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Курск, 2008г.);

- Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства Российской Федерации в номинации «Ветеринарные науки» (Белгород, 2008 г.).

- научных конференциях профессорско-преподавательского состава Курской государственной сельскохозяйственной академии имени И.И. Иванова (2005 - 2008гг.);

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК РФ.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Паюхина, Марина Александровна

4. ВЫВОДЫ

3. Интенсивность апоптоза в клетках гранулезы свиней связана с функциональной активностью аденогипофиза и яичников. У свинок с относительно высоким содержанием в крови гонадотропных гормонов и эстрадиола-17[3 индекс апоптоза был меньше (1,60±0,7 - 1,65±0,5), чем у животных с низким содержанием гормонов (1,85±0,3 — 2,0±0,7).

4. Апоптоз клеток гранулезы является характерным признаком атре-зии фолликулов: у

- в фолликулах находящихся на первой стадии атрезии апоптотиче-ских клеток мало и они обнаруживаются преимущественно по перефе-рии гранулезы;

- на третьей стадии атрезии большинство клеток яйценостного бугорка подвержены апоптозу и выявляются лишь единичные клетки, не имеющие признаков гибели;

5. Маркеры апоптоза в клетках гранулезы Ьс1-2 и р53 являются показателями дальнейшего развития фолликула. При увеличении экспрессии белка Ьс1-2 процессы апоптоза блокируются, и фолликул достигает пре-овуляторного состояния, при увеличении экспрессии р53 дальнейшее развитие фолликула идет по атретическому пути.

- пролиферативный индекс на 3 и 5 сутки после введения препарата «Фоллимаг» соответственно составил 49,2±3,2% и 52,5±2,0%, что было больше, чем в контроле (47,3±1,5%), а индекс апоптоза, наоборот, в это время уменьшился соответственно до 2,5±0,2% и 2,0±0,2% по сравнению с контролем (3,1±0,3%).

7. Синтетический люлиберин изменяет интенсивность апоптотиче-ских процессов в клетках гранулезы фолликулов в яичниках свиней. Через 6 часов после введения препарата «Сурфагон» экспрессия белка Ьс1-2 повысилась на 2,5% и уменьшился индекс апоптоза на 1,0% по сравнению с контролем.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

• Полученные интерьерные показатели у ремонтных свинок крупной белой породы как физиологические нормативы могут быть использованы при разработке новых способов и средств биологической стимуляции репродуктивной функции свиноматок, а также в клинической практике и в учебных целях при подготовке специалистов зооветеринарного профиля.

• Выявленные свойства люлиберина и гонадотропных гормонов оказывать влияние на течение апоптоза в клетках гранулезы, можно использовать при изыскании эффективных путей регуляции программированной гибели клеток, контроля их роста и дифференцировки, с целью предотвращения возникновения различных патологических состояний.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Паюхина, Марина Александровна, Курск

1. Анохин П.К. Очерки по физиологии функциональных систем / П.К. Анохин. М.: Медицина, 1975.- 447с.

2. Аруин Л.И. Апоптоз при патологических процессах в органах пищеварения / Л. И. Аруин // Клин. мед. 2000. - Т.78. - № 1. - С.5-10.

3. Арушанян Э. Б. Модуляторные свойства эпифизарного мелатонина / Э. Б. Арушанян, Л. Г. Арушанян // Проблемы эндокринологии. 1991. - Т.37. - С.68.

4. Бабичев В.Н. Зависимость секреции ФСГ от уровня рецепторов половых гормонов в гипофизе и активности катехоламинергических систем ЦНС / В.Н. Бабичев, Т.А. Перышкова, Е.И. Адамская // Проблемы эндокринологии. 1990.-№3 - С.53.

5. Бабичев В.Н. Нейроэндокринология пола / В.Н. Бабичев. М.: Наука, 1981.-221с.

6. Барышников А.Ю. Коэкспрессия антигена CD34 ранних гемопоэти-ческих предшественников и антигена FAS/APO-1 (CD95), опосредующего апоптоз / А.Ю. Барышников, Т.Н. Заботина, Н.П. Седяхина и др. // Экспериментальная онкология. 1994. - №4. - С.343-345.

7. Белушкина И.И. Молекулярные основы патологии апоптоза / И.И. Белушкина, С.Е. Северин // Арх.пат. 2001. - Т.63. - №1. - С.51-60.

8. Бра М. Митохондрии в программированной гибели клетки: различные механизмы гибели / М. Бра, Б. Квинан, С.А. Сузин // Биохимия. 2005. -Т.70. - №2. - С.284-293.

9. Братусь В.В. Оксид азота как регулятор защитных и гомеостатиче-ских реакций организма / В.В. Братусь // Укр. ревматол. журн. 2003. -№4(14). - С.3-10

10. Брейд Д.Т. Яичник. / Д.Т. Брейд // Гормональная регуляция размножения у млекопитающих. М.: Мир. - 1987. - С. 118-144.

11. Васильев Ю.М. Клетка как архитектурное чудо: 4.2. Цитоскелет,способный чувствовать и помнить // Ю.М. Васильев // СОЖ. — 1997. №4. -с. 17-22.

12. Владимирская Е.Б. Механизмы апоптотической смерти клеток / Е.Б. Владимирская // Гематология и трансфузиология. 2002. - Т.47. - № 2 - С.35-40.

13. Волкова О.В. Современные представления о морфологии овуляци-онного процесса / О.В. Волкова, Н.С. Миловидова, М.Д. Донскова // Тр. Кромского мед. ин-та. 1983. - Т. 101. - С. 12-13.

14. Вундер П.А. Эндокринология пола / П.А. Вундер. М.: Наука, 1980. - 253с.

15. Гилберт С. Биология развития / С. Гилберт. М.: Мир, 1993. - 235с.

16. Грига Э.Н. Функциональные особенности желтого тела полового цикла / Э.Н. Грига // Вестн. вет. 2000. - №15. - С.11.

17. Давыдовский И.В. К столетию "целлюлярной патологии" Рудольфа Вирхова / И.В. Давыдовский // Архив патологии. 1956. - Т. 18. - № 5. - С.6.

18. Демин A.A. Терапевтическая эффективность дезоксирибонуклеазы • при инфекционном мононуклеозе / A.A. Демин, Р.И. Салганин // Сов. медицина. -1983. С.91-92.

19. Дудич Е.И. Изучение апоптоза раковых клеток, индуцированного а-фетопроте-ином / Е.И. Дудич, J1.H. Семенкова, И.В. Дудич и др. // Бюлл. экс-перим. биол. и мед. 2000. Т.130. - №12. - С.604-612.

20. Жукова О.Б. Молекулярные механизмы нарушения апоптоза лимфоцитов при хронической вирусной инфекции / О.Б. Жукова // Бюллетень сибирской медицины. — 2006. № 3. - Т. 5. - С.19-25.

21. Зайнуллин В.Г. Современные аспекты радиобиологии Drosophila melanogaster. Апоптоз и старение / В.Г. Зайнуллин, A.A. Москалев, М.В. Шапошников, А.И. Таскаев // Радиационная биология. Радиоэкология. 1999. -Т.39. - N 1. - С.49-57

22. Залесский В.Н. Апоптоз при ишемии и реперфузии миокарда / В.Н. Залесский, Т.И. Гавриленко // Врач. дело. 2002. - №1. - С.8-15.

23. Залесский В.Н. Механизмы апоптоза при заболеваниях печени /

24. B.Н. Залесский, Н.В. Великая // Совр. проблемы токсикологии. -2002. -№4.1. C.27-32.

25. Залесский В.Н. Методы ранней диагностики апоптоза in vitro и in vivo для оценки хронических эффектов токсикантов / В.Н. Залесский, Н.В. Великая // Современные проблемы токсикологии: Науч.- практ. журн. 2006.- N1. С.78-82.

26. Клинсьсий Ю.Д. Методы гормональной регуляции функции воспроизведения сельскохозяйственных животных при промышленной технологии / Ю.Д. Клинский, Е.Д. Башкеев, В.Е. Даровских, Г.Ф. Жирков // Гормоны в животноводстве. М.: Колос, 1977. - С. 112-125.

27. Корхов В.В. Простагландины в акушерстве / В.В. Корхов, М.Н. Мац // Акушерство и гинекология. 1994. - №1. - С.6-8.

28. Коршунов A.M., Преображенская И.С. Программированная смерть клеток (апоптоз)//Неврологический журнал. 1998. - №1. — С. 40-47

29. Коун А. Лактация. Гормональная регуляция размножения у млекопитающих / А. Коун. М.: Мир. - 1986. - С.215-289.

30. Левин К. Л. Физиология и патология воспроизводства свиней / К. Л. Левин. -М.: Росагропромиздат, 1990. С.254.

31. Линкольн Д.А. Эпифиз / Д.А. Линкольн // Гормональная регуляцияразмножения у млекопитающих.- М.: Мир, 1987. С.71-99.

32. Лушников Е.Ф. Гибель клетки (апоптоз) / Е.Ф. Лушников, А.Ю. Абросимов. М.: Медицина, 2001. - 192с.

33. Минеев В.Н. Апоптоз и активность рибосомальных цистронов клеток периферической крови при бронхиальной астме / В.Н. Минеев И.И. Не-стерович, Е.С. Оранская и А.Л. Тафеев // Журнал Аллергология. 2003 - №1. - С.15-19.

34. Мойбенко A.A. Ферментативные механизмы апоптоза / A.A. Мой-бенко, В.Е. Досенко, B.C. Нагибин // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. -2005. №3. - С. 17-26.

35. Мушецяну К. Роль феномена ядерной фрагментации моноцитов в диагностике атипичных форм инфекционного мононуклеоза / К. Мушецяну,

36. B. Мушецяну, Д. Вишнеску // Проблемы гематологии и переливания крови. -1965. Т.10. - №2. - С.35-36.

37. Новиков B.C. Программированная клеточная гибель / B.C. Новиков, Д.В. Булавин, А.Т. Марьянович, Е.Ю. Пахомов. СПб.: Наука, - 1996. - 276с.

38. Носов Д.А. Механизмы регуляции внутриклеточной передачи сигнала и апаптоза: успехи и неудачи целенаправленной терапии / Д.А. Носов // Сборник трудов VIII Российского онкологического конгресса. 2004.1. C.61-65.

39. Погорелов В.М. Морфология апоптоза при нормальном и патологическом гемопоэзе / В.М. Погорелов, Г.И. Козинец // Гематология и трансфу-зиология. 1995. - Т.40. - №5. - С.21-25.

40. Полосухина Е. Р. Получение и характеристика моноклональных антител ICO-160 против антигена CD95(FAS/APO-l), опосредующего апоптоз /

41. Е.Р. Полосухина, Т.Н. Заботина, Ю.В. Шишкин и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1998. - Т. 125. - №6. - С.670-673.

42. Портнов В.А. Структурно-функциональная характеристика вилоч-ковой железы оренбургской пуховой козы в норме и при патологии / В.А. Портнов: автореф. дис. канд. биолог, наук. Оренбург, 2006. - С.22.

43. Прокофьев М.И. Регуляция половой функции у коров в послеотель-ный период / М.И. Прокофьев, Ю.М. Букреев, В.В. Долгов // Зоотехния. -2002. №9. С.22-25.

44. Прокофьев М.И. Регуляция размножения сельскохозяйственных ротных / М.И. Прокофьев. Л.: Наука, 1983. - С.264.

45. Райхлин Н.Т. Апоптоз и его роль в механизмах регуляции роста опухолевых клеток с множественной лекарственной устойчивостью / Н.Т. Райхлин, Е.А. Смирнова, А.Г. Перевощиков //Арх. пат. 1996. - Т.58. - №2. -С.3-8.

46. Розен В.Б. Рецепторы и стероидные гормоны / В.Б. Розен, А.Н. Смирнов. М.: Изд-во МГУ, 1981. - 310с.

47. Розен В.Б. Цитозомрецепторы в молекулярных механизмах действия гормонов / В.Б. Розен // Проблемы эндокринологии. 1985. - Т.31. - № 6 -С.21-27.

48. Рыжов C.B. Современные представления о механизмах апоптоза / C.B. Рыжов, В.В. Новиков // Российский биотерапевтический журнал. 2002. - Т.1. - № 3. - С.5-11.

49. Светлаков A.B. Апоптоз в преимплантационном эмбриогенезе / A.B. Светлаков, М.В. Яманова, А.Б. Салмина // Проблемы репродукции. -2002. № 5. - С.15-17.

50. Сеин О.Б. Физиологические особенности становления половой функции у свиней / О.Б. Сеин: автореф. доктор, диссер. Белгород, 1996. -С.34.

51. Серебров В.Ю. Эндокринная функция тимуса / В.Ю. Серебров, C.JI. Стуканов, Томск.: изд-во Томского университета, 1993 - 123с.

52. Смирнов А.Н. Влияние эстрогенов на концентрацию рецепторов к эстрадиолу в матке, почке и печени крыс / А.Н. Смирнов, О.В. Смирнова, Т.А. Сенаторова, В.Б. Розен. // Проблемы эндокринологии. 1975. - Т.21. -№2 - С.73-78.

53. Смирнов А.Н. Некоторые свойства эстрогенных рецепторов в ядрах клеток различных органов крыс / А.Н. Смирнов, О.В. Смирнова, В.Б. Розен // Проблемы эндокринологии. 1976. - Т.22. - № 4. - С.87-92.

54. Софронов И.И. Технология производства продуктов животноводства на промышленной основе / И.И. Софронов, A.A. Зима. Новосибирск. -1985.-С.117-122.

55. Ткаченко Н.М. О нейрогормональном контроле овуляции / Н.М. Ткаченко // Акушерство и гинекология. 1978. - № 3. - С. 1-5.

56. Тронов В.А. Механизм радиационной гибели лимфоцитов перефе-рической крови человека, оцениваемой методом ДНК-комет / В.А. Тронов, Д.Г. Терещенко, М.А. Конопляников // Биофизика. 1998. - Т.43. - №6. -С.115-124.

57. Ушакова Т.А. Механизм и роль апоптоза при патологии: актуальность исследования в комбустиологии (обзор литературы) / Т.А. Ушакова, A.A. Карелин, А.Г. Глоба // Комбустиология, электронная версия, 2004. N 14.

58. Фанченко Н.Д. Характеристика эстрогенрецепторной системы яйцеводов морских свинок / Н.Д. Фанченко, Р.Н. Щедрина, JI.C. Милана, Е.А. Новиков // Бюл. экспериментальной биологии и медицины. 1978. - Т.85. -№1 - С.75-79.

59. Фильченков А. А., Стойка Р. С. Апоптоз и рак. — К.: Морион, 1999. 190с.

60. Фильченков A.A. Апоптоз кортикальных нейронов при развитии ишемических инсультов / A.A. Фильченков, В.Н. Залесский // Нейрофизиология. 2002. - Т.34. - №6. - С.468-484.

61. Фильченков А. А. Апоптомодуляторы / А. А. Фильченков // Биомедицинская химия : научн.-практич. журнал НИИ биомедиц. химии РАМН. -2003. Т.49. — №4 . - С.333-359.

62. Фомина О.П. Морфология желтых тел яичников крупного рогатого скота / О.П. Фомина // Нов. подходы в естеств. исслед. экол, биол, с.-х. науки.- 2001. С.72-75.

63. Фред Д.Н. Гипоталамус и передняя доля гипофиза / Д.Н. Фред // Гормональная регуляция размножения у млекопитающих. М.: Мир. -1987 -С.8-31.

64. Фридлянская И.И. Индукция апоптоза в клетках мышиной миеломы NSO/1, трансформированной геном основного белка теплового шока / И.И. Фридлянская, О.Н. Демидов, М.М. Булатова // Цитология. 2000. - Т.42. -№11. - С.1053-1509.

65. Хавинсон В.Х. Пептидные биорегуляторы ингибируют апоптоз /

66. B.Х. Хавинсон, И.М. Кветной // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 2000. - Т. 130.- №12. С.657-659.

67. Хавинсон В.Х. Влияние эпиталона на кинетику роста и функциональную морфологию саркомы М. 1 / В.Х. Хавинсон, В.В. Южаков, И.М. Кветной, В.В. Малинин / Вопр. онкол. 2001. - Т.47. - №4. - С.461-466.

68. Хип Р. Беременность / Р. Хип, А. Флинт // Гормональная регуляция размножение у млекопитающих. М.: Мир. - 1987. - С. 193-241.

69. Шаповалов В.Д. Апоптоз и ультраструктурные изменения плазматических клеток собственно слизистой оболочки десны больных парадонтозом / В.Д. Шаповалов, JT.M. Михалева // Иммунология. 2002. - Т.23. -№2.1. C.83-86.

70. Ярилин A.A. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме / A.A. Ярилин // Пат. физиол. 1998. - №2. - С.38-48.

71. Ярилин А.А. Апоптоз: природа феномена и его роль в норме и при патологии / А.А. Ярилин // Актуальные проблемы патофизиологии. -М.Медицина, 2001. С. 13-56.

72. Adams N. R. Measurement of estrogen receptors in the ova-riectomized ewe is affected by body condition and secondary binding sites / N.R. Adams, A J. Ritar // Biol. Reprod. 1986. - Vol.35. - № 4. - P.828-832.

73. Antonsson B. The Bel 2 protein family / B. Antonsson, J.C. Martinou // Exp. Cell. Research. 2000. - Vol.256. - P.50-57.

74. Basnakian A.G. A rapid and sensitive assay for the detection of DNA fragmentation during early phases of apoptosis / A.G. Basnakian and S.J. James // Nucleic Acids Res. 1994. - Vol.22. - P.2714-5.

75. Basnakian A.G. Activity of topoisomerase I and endonucleases in cells transfected by a ras oncogene / A.G. Basnakian, L.Z. Topol, I.D. Kirsanova, I.I. Votrin et al / Mol.Biol.(Mosk). 1989. - Vol.23(3). - P.750-755.

76. Bauer G. Reactive oxygen and nitrogen species: Efficient, selective, and interactive signals during intercellular induction of apoptosis / G. Bauer // Anticancer Res. 2000. - Vol.20. - P.4115-4139.

77. Bellomo G. Tumor necrosis factor alpha induces apoptosis in mammary adenocarcinoma cells by an increase in intranuclear free Ca~ concentration and DNA fragmentation / G. Bellomo, M. Perotti, F. Taddei et al. / Cancer Res.- 1992.-Vol.52. P.1342-1346.

78. Bergland R.M. Neuroendocrine control of reproduction / R.M. Bergland, R.B. Page // J.Reprod. Fertil. 1980. - Vol.58. - P.493-554.

79. Bertho A.L. Flow cytometry in the study of cell death / A.L. Bertho, M.A. Santiago, S.G. Coutinho / Mem Inst Oswaldo Cruz. 2000.- Vol.95 - Vol.3. - P.429-33.

80. Blankenberg F.G. Radionuclide imaging of acute lung transplant rejection with annexin V / F.G. Blankenberg, R.C. Robbins, J.H. Stoot J.H. et al. // Chest, 2000. Vol. 117. - P.834-840.

81. Bristow M.R. Tumor necrosis factor and cardimyopathy / M.R. Bristow // Circulation. 1999. - Vol.97. - P.1340.

82. Brooks R.I. Steroid hormone pathways in the pig, with special emphasis on boar odor: a review / R.I. Brooks, A.M. Pearson // J. Anim. Sci. 1986. -Vol.62.-№3.-P.632-645.

83. Brown D. Dexamethasone-induced apoptosis involves cleavage of DNA to large fragments prior to internucleosomal fragmentation / D. Brown, X.M. Sun, G. Cohen // Journal of Biological Chemistry. 1993 - Vol.268(15). - P.3037-3039.

84. Cervos-Navarro J. Pitfalls in the evaluation of apoptosis using TUNEL / J. Cervos-Navarro, Т.Е. Schubert // Brain Pathol/ 1996. - Vol.6. - P.347-348.

85. Chen Dan-Ying. Изменение кертина во время апоптоза клеток почек свиней (ITC-15)/Chen Dan-Ying, Gao yun-Fei, LiLi-Xia, Zhai Zhong-he//Dongwu xuebao Acta zool.sin. 2002. - Vol.48. - №l.-.P.50-52

86. Chipuk J.E. Pharmacologic activation of p53 elicits Bax-dependentapoptosis in the absence of transcription / J.E. Chipuk, U. Maurer, D.R. Green, M. Schuler // Cancer Cell. 2003. - Nov.4(5). - P.371-381.

87. Christensen M.D. Chronic central pain after spinal cord injury / M.D. Christensen, S.C. Supowit, D.J. DiPetter, C.E. Halsebosch // J Neurotrauma. -1997. Vol.l4(8). P.517-537.

88. Clayton R. N. Hypothalamic releasing-hormone receptors / R.N. Clayton //Endarinol. 1983. - Vol.12. - N1. - P. 175-189.

89. Cohen J.J. Apoptosis / J.J. Cohen // Imunol. Today. 1993. - Vol.14. - P. 126-130.

90. Colucci W.S. Apoptosis in the heart / W.S. Colucci //New Engl J Med. -1996.-Vol.335.-P.1224-6.

91. Cume W.D. Fluctuation in responsiveness of LH and lack of responsiveness of FSH to prolonged infusion of morphine and naloxone in the ewe / W.D. Currie, N.C. Rawlings // Reprod. Fertil. 1989. - P.359-366.

92. Czarnota G.J. Ultrasound imaging of apoptosis: high-resolution noninvasive monitoring of programmed cell death in vitro, in situ and in vivo / G.J. Czarnota, M.C. Kolios, J. Abraham et al. // Br. J. Cancer. 1999. - Vol.81. - N3. -P.520-527.

93. Darzynkiewicz Z. Analysis of apoptotic cells by flow and laser scanning cytometry / Z. Darzynkiewicz, E. Bedner // Methods Enzymol. 2000.- Vol.322. -P.18-39.

94. Darzynkiewicz Z. Increased mitochondrial uptake of rhodamine 123 during lymphocyte stimulation / Z. Darzynkiewicz, L. Staiano-Coico et al. //Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1981. - Vol.76. - P.2383-2387.

95. Moissac D. Caspase activation and mitochondrial cytochrome C release during hypoxia-mediated apoptosis of adult ventricular myocytes / D. De Moissac, R.M. Guervich, H. Zheng et al. // J. Mol. Cell. Cardiol. 2000. - Vol.32. - N 1. -P.53-63.

96. De Romero I.R. Prostaglandins and "in vitro" ovulation in the toad bufo orenarun / I.R. De Romero, J. Decort, M.B. De Atenor, A. Legname // Jornada cient. Soc. Biol., Tucuman. 1992. - Vol.10. - №14. - P.359.

97. Dememieva M. M. The European Association of Gynaecoloeists and Obstetricians (EAGO) / M.M. Dememieva, V.P. Smetnik, G.E. Tchemukha et al. // Congress. 13th: Abstracts. Israel, 1998. - P.31.

98. Derecka K. Ontogeny of LH receptor gene expression in the pig reproductive tract / K. Derecka, P.P.Zhang, A J. Ziecik, I. Huhtaniemr // J. Reprod, and Fen. 1999. - Vol.115. - N2. - P.365-372.

99. Di Leonardo A. DNA damage triggers a prolonged p53-dependent Gl arrest and long-term induction of Cipl in nonnal human fibroblasts / A. Di Leonardo, S.P. Linke, K. Clarkin, G.M. Wahl // Genes Dev. 1994. - Vol.8. - P.2540-2551

100. Di Vito M. 'H-NMR-visible mobile lipid domains correlate with cytoplasmic lipid bodies in apoptic T-lymphoblastoid cells / M. Di Vito, L. Lenti, A. Kuijn et al. // Biochem. Biophys Acta. 2001. - Vol.153. -N.2. - P.47-66.

101. Donat H. Immunoglobulingehalt das zerviko-sekret / H. Donat, S. Schiller // Gynak. 1977. - Vol.99. - N.17. - P.1055-1059.

102. Doran E. Cytochrome c release from isolated rat liver mitochondria can occur independently of outer-membrane rupture: possible role of contact sites / E. Doran, A.P. Halestrap // Biochem J. 2000. - Vol.348. - N.l. - P.343-50.

103. Dorandeu F.X. Effect of number and diameter of follicles on plasma concentrations of inhibin and FSH in mares / F.X. Dorandeu, O.J. Ginther // Reproduction. 2001 - Vol.121. -N.6. - P.89.

104. Dusza L. Prolactyna, wydzielanie rola rozrodzie swini / L. Dusza // Rocz. Nauk rol. 1987. - N 211. - P.7-8.

105. Earnshaw W.C. Nuclear changes in apoptosis / W.C. Earnshaw // Curr. Opin. Cell Biol. 1995. - Vol.7 - P.337-343.

106. Ebadi M. Regulation of the synthesis of melatonin and its significance to neuroendocrinology / M. Ebadi // The Pineal Gland. -New York. 1984. - P. 1-3 7.

107. Fadok V.A. Exposure of phosphatidilserine on the surface of apoptotic lymphocytes triggered specific recognition and removal by macrophages / V.A. Fadok, D.R. Voelker, P.A. Champbel el al. // J. Immunol. 1992. - 48. - N.15. -P.2207—2216.

108. Fahmi H.A. Effect of estrual stage on complement activity in bovine follicular fluid / H.A. Fahmi, A.Y. Hunter // J. Dairy Sei. 1985. - Vol.68. -P.3318-3322.

109. Fisch B. Effects of oestrogen on progestin sintesis and arach.domc acid metabolism in human luteal cells / B. Fisch, M.P. Rose, M.G. Elder, R.M. Winston et al. //Clin. Endocrinol. 1994. - 40. -N.l. - P.21-32.

110. Fisher T.C. Bcl-2 modulation of apoptosis induced by anticancer drugs / T.C. Fisher, A.E. Milner, C.D. Gregory et al. / Cancer Res 1993. Vol.53. -P.3321-3326.

111. Flint A.P.F. Secretion of oxytocin by the corpus luteum in sheep / A.P.F. Flint, E.L. Sheldnck // New York. 1983. - P.521-530.

112. Furuya T. Laser scanning cytometry allows detection of cell death with morphological features of apoptosis cells stained with PI / T. Furuya, T. Kamada, T. Murakami et al. // Cytometry. 1997. - Vol.29. - N.3. -. P. 173-177.

113. Gabai V.L. Resistance of Ehrlich tumor cells to apoptosis can be due to accumulation of heat shock proteins / V.L. Gabai, I.V. Zamulaeva, A.F. Mosin et al. //FEBS Lett. 1995. -N.13. - Vol.375(l-2). - P.21-6.

114. Gavrieli Y. Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation / Y. Gavrieli, Y. Sherman, S.A. Ben-Sasson // J. Cell Biol. 1992. - Vol.119. - P.493-501.

115. Green A.M. Monitoring apoptosis in real time / A.M. Green, N.D. Steinmetz // Cancer J. 2002. - Vol.8. - N.6. - P. 82-92.

116. Gu Z.Z. Gene expression and apoptosis in the spinal cord neurons after sciatic nerve injury / Z.Z. Gu, Y.C. Pan, J.K. Cui, M.J. Klebuc et al. // Neurochem Int. 1997 Vol.30(4-5). — P.417-26.

117. Gurtu V. Fluorometric and colorometric detection of caspase activity associated with apoptosis / V. Gurtu, S.R. Kain, G. Zhang // Ann. Biochem. -1997. Vol.251. - N 4. - P.98-102.

118. Haag M. Die effekte van melatonien op molekulere vlak / M. Haag, I.I. Theron S.A. Tydskrif// Natuurwetenskap Tegnol. 1992. - Vol.11. - N 1. - P. 1519.

119. Hacker G. The morphology of apoptosis cell / G. Hacker // Tissue Res. -2000. Vol.301. -N1. - P.5-17.

120. Hockenbery D.M. Bcl-2 functions in an antioxidant pathway to prevent apoptosis / D.M. Hockenbery, Z.N. Oltvai, X-M. Yin et al. // Cell. 1993. -Vol.75. -P.241-251.

121. Holtz W. Induction of estrus in prepu-beral gilts / W. Holtz, C. Welp, R. Schmidt-Baulain // Congress proceeding. 1988. - Vol.1. - P.438.

122. Hu X. Transforming growth factor: signal transduction pathways, cell cycle mediation, and ef fects on hematopoiesis / X. Hu, K.S. Zuckerman // J. He-matotherapy Stem Cell Resear. 2001. - Vol.10. - P.67-74.

123. Huhn U. Biotechnical control of reproduction in pigs / U. Huhn, I.Konig / Pig News Inform. 1989. -Vol.10.-N.2. - P. 173-176.

124. Ishizaki M. The relationship between serum gamma-glutamyl transpeptidase levels and hypertension: common in drinkers and nondrinkers / M. Ishizaki, Y. Yamada, E. Ikai et al. // Hypertens Res. 1995 - Vol. 18(4) - P.295-301.

125. Ivell R. Regulation of the oxytocin receptor in bovine reproductive tissues and the role of steroids / R. Ivell, A.R. Fuchs, G. Tillmann, T. Kimura // Re-prod. Domest. Anim. 2000. - Vol.35. -N.34. -P.134-141.

126. James S.J. Presence and consequence of uracil in preneoplastic DNA from folate/methyl-deficient rats / S.J. James, I.P. Pogribny, L. Muskhelishvili, B.J. Miller//Carcinogenesis. 1997-N.18(11). - P.2071-6.

127. Kalra S. Cateholamine involvement in preovulatory LH release: reassessment of the role of epinenhrine / S. Kalra // Neuroendocrinology. 1985. —1. Vol.40.-N.2. -P.139-144.

128. Kamimura Shinichi. Distnbution of FR in the bovine dominant follicle and corpus luteum / Kamimura Shinichi, Ando Takaaki, Hamana Katsumi // Mem. Fac. Agr. Kagoshima Univ. 2004.- Vol.39. - P.37-44.

129. Kerr J.F. Apoptosis. Its significance in cancer and cancer therapy / J.F. Kerr, C.M. Winterford, B.V. Harmon // Cancer. 1994. - Vol.73. - P.2013-26.

130. Kerr J.F.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wideranging implications in tissue kinetics / J.F.R. Kerr, A.H. Wyllie, A.R. Currie // Brit. J. lancer. 1972. - Vol.26. - P.239-257.

131. Kerr J.F.R. Apoptosis: its nature and kinetic role / J.F.R. Kerr, J. Searle // In: Radiation Biology in Cancer Research, 32nd Ann. Symp. Fundament. Cancer Res. New York: Raven Press. - 1980. - P.367-384.

132. Kesner J.S. Negative feedback as an obligatory an.eceden. to the estra-diol-indused luteinizing hormone surge in ovariectomized pigs /J.S. Kesner, E.A. Price-Taras, R. R. Kraeling // Biol. Reprod. 1989. - Vol.41. N.3. - P.409-413.

133. Khodarev N.N. An inducible lymphocyte nuclear Ca/Mg-dependent endonuclease associated with apoptosis / N.N. Khodarev and J.D. Ashwell // J. Immunol. 1996. - Vol.156. - P.922-31.

134. Kinoshita M. Etiological significance of humoral nerve factors in congestive heart failure / M. Kinoshita, N. Tsutamoto // Nippon Naika Gakkai Zasshi. 1995 - Vol.84(9). - P. 1454-8.

135. Kochx M. Apoptosis in the ateroma / M. Kochx // Arteriosclerosis, Tromb. and Vase. Biol. 1998. - Vol.18. - P.l 519-1522.

136. Kolesnick R. The therapeutic potential of modulating the ceramide -sphingomyelin pathway / R. Kolesnick // J. Clin. Invest. 2002. - Vol.110. - N.l. -P.3-8.

137. Kolios M.C. Ultrasonic spectral parameter characterization of apoptosis / M.C. Kolios, G.J. Czarnota, M. Lee et al. // Ultrasound Med. Biol. 2002. -Vol.28. — N 12. - P.589-597.

138. Koziorowski M. The unoccupied and occupied oestradiol receptorslevel in the mesosalpinx and oviduct in the cycling gilts / M. Koziorowski // Biol, et immul. reprod. 1985.-N 11.-P.18-20.

139. Krueger E. Multiple forms of endonuclease activity linked with radiation induced apoptosis in C4-1 cervical carcinoma cells / E. Krueger, I. Sokolova, M. Kamradt et al. // Anticancer Res. 1998. - Vol. 18(2). - P.983-8.

140. Kruip T. A. M., Dieleman S. J. Steroid hormone concentrationsin the flued of bovine follickes relative to size, guality and stage of the oestrus cycle / T. A. M. Kruip, S.J. Dieleman //Theriogenology. 1985. - Vol.24. -N 4. - P.394-408.

141. Levade T. Sphingolipid mediators in cardiovascular cell biology and pathology / T. Levade, N. Auge, R.J. Veldman et al. // Circ Res. 2001 -Vol.89(l 1). - P.957-68.

142. Li L.Y. Endonuclease G is an apoptotic DNase when released from mitochondria / L.Y. Li, X. Luo, X. Wang // Nature. 2001. - Vol.412(6842). - P.95-99.

143. Li P.S. Catecholamins inhibition of luteinizing hormone secretion in isolated pig pituitary cells / P.S. Li // Biol. Reprod. 1989. - Vol.40. - N 5. -P.914-919.

144. Lieberthal W. Mechanisms of apoptosis and its potential role in renal tubular epithelial cell injuri / W. Lieberthal and S. Jerrold // Am. J. Physiol. 271 (Renal Fluid Electrolyte Physiol. 40). 1996. - P.477-488.

145. Liu X.S. DFF, a heterodimeric protein that functions downstream of caspase-3 / X.S. Liu, H. Zou // Cell. 1997. - Vol.89. - P. 175.

146. Longsdon M.D. Apoptosis and BcI-2 gene family patterns of expression and prognostic value in stage I and II follicular center lymphoma / M.D. Longsdon, R.E. Meyn, P.S. Besa et al. // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 1999. -Vol.44.-N2. -P. 19-29.

147. Lowe S.W. p53 is required for radiation-induced apoptosis in mouse thymocytes / S.W. Lowe, E.M. Schmitt, S.W. Smith et al. // Nature. 1993. -Vol.362. - P.847-849.

148. Macho A. Chloromethyl-X-Rodamine is an aldegyde-fixable potentialsensitive fluorochrome for the detection of early apoptosis / A. Macho, D. Decan-din, M. Castedo et al. // Cytometry. 1996. - Vol.25. - N 6. - P.335-340.

149. Maftah A. 10-N nonyl-acridine orange: a fluorescent probe which stains mitochondria independently of their energetic state / A. Maftah J.M. Petit, M.H. Ratinaud, R. Julien // Biochem Biophys Res Commun. 1989. - N 16. -Vol. 164(1).-P. 185-190.

150. Majno G. Apoptosis, oncosis, and necrosis: an overview of cell death / G. Majno and I. Joris // Am. J. Pathol. 1995. - Vol.146. - P.3-15.

151. Masood S. Estrogen and progesterone receptors in cytology: A comprehensive review / S. Masood // Diagn. Cytopathol. 1992. - Vol.8. - N 5. - P.475-491.

152. McComcey D.J. Apoptosis-molecular mechanisms and biomedical implications / D.J. McComcey, B. Zhivotovsky, S. Orrenius // Molec. Aspects Med. -1996,-Vol.17.-P.l-110.

153. Meikle A. Regulation by gonadal steroids of estrogen and receptors along the reproductive tract in femal lambs / A. Meikle, E.G. Garofalo, M. Rodri-gues-pilin, et al.// Acta vet. Scand. 2001.-42.-N 1. - P. 161-169.

154. Merritt A.J. The Role of p53 in Spontaneous and Radiation-induced Apoptosis in the Gastrointestinal Tract of Normal and p53-deficient / J. Merritt Anita, S. Christopher, J. Christopher Kemp, et al. // Mice Cancer Research. 1994. - Vol.54.-P.614-617.

155. Metivier D. Cytofluorometric detection of mitochondrial alterations in early CD95 / Fas/ Apo 1-triggered apoptosis / D. Metivier, B. Dalaporta, N. Zamzami et al. // Immunol. Lett. 1998. - Vol.61. -N 9. - P. 157-163.

156. Migliorati G. Glucocorti-coid-mduced DNA fratimenUition: role of protein-kinase C nc-tivuv / G. Migliorati, M.C. Pagliacci, D'Adam to F. et al. //

157. Pharmacol. Res. 1992. - Vol.26. -N 2. - P.5-9.

158. Mihm M. Follicle wave growth in cattle / M. Mihm, M.A. Growe, P.G. Knight, E.J. Austin // Reprod. Domest. Anim. 2002. - Vol.37 -N 4. - P. 191-200.

159. Moser B. Silver stain for the detection of apoptosis at the light microscopy / B. Moser // Micr. Anat. 1995. - Vol. -N 37. P.27-29.

160. Nagata S. Apoptosis by death factor / S. Nagata // Cell. 1997. -Vol.88.-P.355-365.

161. Nakae H. Soluble Fas and soluble Fas ligand levels in patients with acute hepatic failure / H. Nakae, K. Narita, S. Endo // J Crit Care. 2001. -Vol.l6(2). - P.59-63.

162. Nandi S. Biochemical composition of ovine follicular fluid in relation to follicle size / Nandi S. Kumar V. Girish Manjunatha B. M. Gupta P. S. P. // Der. Growth and Differ. 2007. - Vol.49. - N 1. - P.61-66.

163. Nielsen A.H. Angiotensin coiwerting enzyme in bovine ovarian follicular fluid and its relationship with oestradiol and progesterone / A.H. Nielsen, K.N. Schauser, B. Svenstrup, K. Pouisen // Reprod. Domest Anim. 2002 - Vol.37 - № 2. - P.81-85.

164. Oehm A. Purification and molecular cloning of the APO-1 cell surface antigen, a member of the tumor necrosis factor/nerve growth factor receptor super-family / A. Oehm, I. Behrmann, W. Falk et al. // J. Biol. Chem. 1992. - Vol.267. -P.10709-15.

165. Ohtsuki K. "mTc-HYNIC annexin V: a radiopharmaceutical for the in vivo detection of apoptosis / K. Ohtsuki, K. Akashi, Y. AoKa et al. // Eur. J. Nucl. Med. 1999. - Vol.26. - P. 1251-1258.

166. Okano Akira. Oxytocin receptors in the porcinc myometrium during the cstrous cycle and early pregnancy / Okano Akira, Okuda Kiyoshi // Nihon chiku-san gakkaiho Anim. Sci. and Tcchnol. 1996. - Vol.67 - N 1. - P. 102-103.

167. Olivetti G. Apoptosis in failling human heart / G. Olivetti, R. Abbi, F. Quaini et al. //New Engl. J. Med. 1997. - Vol.336. - P. 1131-41

168. Oltvai Z. Checkpoints of dueling dimers foil death wishes / Z. Oltvai, S.

169. Ormerod M.G. Increased membrane permeability of apoptotic thymocytes: a flow cytometric study / M.G. Ormerod, X.M. Sun, R.T. Snowden et al. // Cytometry. 1993. Vol. 14(6). - P.595-602.

170. Ormerod M.G. The role of apoptosis in cell killing by cisplatin: a flow cytometric study / M.G. Ormerod, R.M. Orr, J.H. Peacock // Br. J. Cancer. 1994 - Vol.69(1). — P.93-100.

171. Panagou P. BCL-2 expression in asthma: Analysis of sputum induction samples / P. Panagou, S. Karameris, S. Tspira et al. // In: Abstracts of Annual Congress of European respiratory society. Berlin. 1997. - P.2066.

172. Peluso J. J. Surface Ultrastructural Changes in Granulosa Cells of Atretic Follicles / J. J. Peluso, R. W. Steger, E. S. E. Hafez // Biology of Reproduction. Vol.16. - P.600-604.

173. Peng L. Detection of B lymphoma cells undergoing apoptosis by An-nexin-V assay / L. Peng, H. Jiang, C. Bradely // Chin Med Sci J. 2002.- Vol.17. -N1. - P.17-21.

174. Peters A. R. Hormonal control of the bovine oestrous cycle. The natural cycle / A.R. Peters // Brit. Vet. J. 1985 - 141 - N6. - P.564-575.

175. Petrovic S. Luteoloiticki efekat i rezultati jednokratne primeneoestro-phna kod krava / S. Petrovic //Nauka u pracsi. 1987. - Vol.17. - P. 1-2.

176. Petterborg L.I. Effect of melatonin administration on the neuroendocrine reproductive axis of the White - footed mouse / L.I. Petterborg //Adv. in the b.o-sciences. - 1984. - Vol.53. - P.133-138.

177. PlesnilaN. BID mediates neuronal cell death after oxygen/glucose deprivation and focal cerebral ischemia / N. Plesnila, S. Zinkel, D.A. Le et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. - Vol.98. - P. 15318-15323.

178. Pravdenkova S.V. DNA fragmentation and nuclear endonuclease activity in rat brain after severe closed head injury / S.V. Pravdenkova, A.G. Basnakian, S.J. James, B.J. Andersen // Brain Res. 1996 - Vol.729(2). - P. 151-5.

179. Putltalakath H. The proapoptotic activity of the Bcl-2 family member Bim / H. Putltalakath, D. Huang, L O'Reily et al. // Mol. Cell. 1999. - Vol.3. -P.287-296.

180. Quirk S.M. Fas antigen-mediated apoptosis in human granulosa luteal cells / S.M. Quirk, R.G. Cowan, S.G. Joshi, K.P. // Henrikson Biol Reprod. 1995. Vol.52(2). - P.279-87.

181. Rathmell J.C. The central effectors of cell death in the immune system / J.C. Rathmell C.B. Thompson // Annu.Rev.Immunol. 1999. - Vol.17. - P.781-828.

182. Robertson W. R. Gonadotrophs bioassay and immunoassay / W.R. Robertson // J. Endocrinol. 1993. - Vol.137. - P.22.

183. Rosas P. Sex difference in the weiqhi of the thimus in adult mice / P. Rosas, R. De Paz, V. Hernander-Ehlers el al. // Med. Sei. Res. 1992. - Vol.20. - N 14.-P.509-510.

184. Ruoslahti E. Isolation of high-affinity peptide antagonists of 14-3-3 proteins by phage display / E. Ruoslahti, B. Wang, H. Yang et al. // Biochemistry. -1999 Vol.38(38). - P.12499-504.

185. Sanders E.J. Ultrastructural identification of apoptotic nuclei using the TUNEL technique / E.J. Sanders, M.A. Wride // Histochem J. 1996. - Vol.28. -N4.-P.275-281.

186. Scaramuzzi R.J. The source of ovarian oestradiol and androstenedione in the sheep during the luteal phase / RJ. Scaramuzzi, D.T. Baird // Acta Endocrinol (Copenh). 1976. - Vol.83(2). - P.402-9.

187. Scaramuzzi B.I. The source of ovarian oestradiol and androstenedione in the sheep during the luteal phase / B.I. Scaramuzzi, D.T. Baird, R.J. Scaramuzzi et al. Acta Endocrinol (Copenh). 1976 - Vol.83(2). - P.402-9.

188. Schoenemann H. Pituitary Itemizing hormone-releasing in ovariec-tomized cows after chelledge with ovarian steroids / H. Schoenemann, W.D. Humphrey, M.E. Crowder // Biol. Reprod. 1985. - Vol.32. - N 3. - P.574-583.

189. Siskind L.J. Ceramide channels increase the permeability of the mitochondrial outer membrane to small proteins / L.J. Siskind, R.N. Kolesnick, M. Colombini // J. Biol. Chem. 2002. - Vol.277. -N 30. - P.26796-803.

190. Slomezynska M. Localization of androgen receptor and cytochrome P450 aromatase in the follicle and corpus luteum of the porcine ovary / M. Slomezynska // Anim. Reprod. Sci. 2001 - 65. - N 1-2. - P.127-134.

191. Stanchev P. Receptors for estrogens and progesterone in the parcine cervix / P. Stanchev, A. Kunavongkrit, L.E. Edgvist, H. Eriksson // Theriogenol-ogy. 1984. -Vol.21. - N 5. - P.757-766.

192. Star-Lack J.M. 1-H MR spectroscopy of human head and neck lymph node metastasis and comparison with oxygen tension measurement / J.M. Star1.ck, E. Abalsteinsson, M.F. Adam // Am. J. Neuroradiol. 2000. - Vol.21. -N 5. - P.183-193.

193. Steller H. Mechanisms and genes of cellular suicide / H. Steller // Science. 1995. - Vol.267. - P. 1445-1449.

194. Stenniche H.R. Properties of caspases / H.R. Stenniche, G.S. Salvesen // Biochim. BiophysActa. 1998. - Vol.1387. - P.17-31.

195. Thilander W. Progesterone and oestradiol -17(3 receptors in the Porcine Myometrium During the oestrous cycle / W. Thilander, H. Eriksson, I. E. Edgvist, Rodriguez-Martinez // Vet. Med. 1990. - Vol.37. - N 5. - P.321-328.

196. Thompson C.B. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of diseas / C.B. Thompson // Science. 1995. - Vol.267. - P. 1456-1462.

197. Thornberry N.A. Caspases: enemies within / N.A. Thorberry, Y. Lazebnik // Science. 1998. - Vol. 281. - P. 12-16.

198. Tokita N., Hasegawa S., Maruyama K. et al. 99mTc-Hynic-annexin V imaging to evaluate inflammation and apoptosis in rats with autoimmune myocarditis / N. Tokita, S. Hasegawa, K. Maruyama et al. // Eur. J. Nucl. Med. 2003.1. Vol.30. P.232-238.

199. Van Den Broeck W. Cell-specific distribution of oestrogen receptor-alpha in the bovine ovary / W. Van Den Broeck, M. Coryn, P. Simoens, H. Lau-wers // Reprod. Domest. Anim. 2002 - Vol.37 - N 5. - P.291-293.

200. Waidhauser F. The pineal gland and its involvment in human puberty / F. Waidhauser // Neuroendocr. Lett. 1985. - Vol.7 - N 3. - P. 134-137.

201. Walczak H. The CD95 (APO-l/Fas) and the TRAIL (APO-2L) Apoptosis Systems / H. Walczak, P.H. Krammer // Exp.Cell Res. 2000. - Vol.256. - P.58-66.

202. Walker P.R. Detection of DNA fragmentation and endonucleases in apoptosis / P.R. Walker, J. Leblanc, B. Smith et al. // Methods. 1999. -Vol.17(4). -P.329-38.

203. Weiner R.I. Changes in Serum Luteinizing Hormone Following Intraventricular and Intravenous Injections of Luteinizing Hormone-Releasing Hormone in the Rat / R.I. Weiner // Neuroendocrinology. 1972. - Vol.10. - N 5. -P.123-125.

204. Wijsman J.H. A new method to detect apoptosis in paraffin sections: in situ end labeling of fragmented DNA / J.H. Wijsman, R.R. Jonker, R. Keijzer et al. // J. Histochem. Cytochem. 1993. - Vol.41. - P.7-12.

205. Wyllie A.H. Cell death: the significance of apoptosis / A.H. Wyllie, J.F.R. Kerr, A.R. Currie // Int. Rev. Cytol. 1980. - Vol.68. - P.251-306.

206. Wyllie A.H. Cell death / A.H. Wyllie // Int. Rev. Cytol. 1987. - Vol.17 (suppl. )-P. 755-785.

207. Yamada Y; Mizuho A., Misaidzu.Y. Control of forrowing time in swine with prostaglandin / New strategies for iraprowing animal production for human welfare // 1984. Vol.2. - P.263-264.

208. Yamoto M. Effect of oestrogrn on prolactin receptors in Porcine granulosa cells / M. Yamoto, R. Nakano // Exp. and Clin. Endocrinol. 1986. - Vol. 88. - N 1. -P.45-49.

209. Yaoita H. Attenuation of ischemia/reperfused injury in rats by caspase inhibitors / H. Yaoita, K. Ogawa, K. Maehara, Y. Maruyma // Circulation 1998. -Vol.97.-P.276-81.

210. Yue T.L. Apoptosis: a potential target for discovering novel therapies for cardiovascular diseases / T.L.Yue, E.H. Ohlstein, R.R. Ruffolo // Current opinion in chemical biology. 1999. - Vol.3. - P.474-80.

211. Zaoral J. Radioimmunologie v chovu skotu. Vyzrum chovu skotu / J. Zaoral // Rapotin. 1987. - Vol.29. - N 2. - P.60-62.

212. Zeleznic A.J. Angiogenesis and ovarian function / A.J. Zeleznic // J. Endocrinol. 1993. - Vol.137. - P.8.

213. Zeleznik A.J. Administration of IGF-I to rhesus monkeys does not augment gonadotropin-stimulated steroidogenesis / A.J. Zeleznik, L.L. Ihrig, S.G. Bassett // Ibid. 1989. - Vol.125. - P.2218-2220.

214. Zhao M. Non-invasive detection of apoptosis using magnetic resonance imaging and target contrast agent / M. Zhao, D.A. Beauregard, L. Loizon et al. // Nat. Med. 2001. - Vol.7. -N 12. - P.1241-1244.

215. Zitny J. Quantification of the ovarian follicular growth in rabbits / J. Zitny, P. Massanyi, A. Trakovicka et al. // Bull. Vet. Inst. Pulawy. 2004. - Vol.48. - N 1- P 37-40.

Информация о работе

Паюхина, Марина Александровна
кандидата биологических наук
Курск, 2009
ВАК 03.00.13

Диссертация

Особенности апоптоза клеток гранулезы фолликулов в яичниках свиней и его взаимосвязь с функциональной активностью гипофизарно-овариальной системы - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы