Морфофункциональные изменения в клетках иммунной системы при нарушении светового режима и иммунопатологии.

Литвиненко, Галина Ивановна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфофункциональные изменения в клетках иммунной системы при нарушении светового режима и иммунопатологии.
ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональные изменения в клетках иммунной системы при нарушении светового режима и иммунопатологии."

ЛИТВИНЕНКО ГАЛИНА ИВАНОВНА

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В КЛЕТКАХ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ПРИ НАРУШЕНИИ СВЕТОВОГОРЕЖИМА И ИММУНОПАТОЛОГИИ

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология 14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора медицинских наук

Новосибирск - 2011

4851807

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте клинической и экспериментальной лимфологии Сибирского отделения РАМН (г. Новосибирск)

Научные консультанты

доктор медицинских наук, академик РАМН доктор медицинских наук, профессор Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, доцент доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Алтайский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (г. Барнаул)

Защита диссертации состоится « 11 г. в ■/О часов на

заседании диссертационного совета Д 208.062.05 при Новосибирском государственном медицинском университете (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52; (383) 229-10-83)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирского государственного медицинского университета (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52)

Автореферат разослан « {^ 2011 г.

Труфакин Валерий Алексеевич Шурлыгина Анна Вениаминовна

Залавина Светлана Васильевна Логвинов Сергей Валентинович Колесникова Ольга Петровна

Учёный секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

А. В. Волков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Особенностью биологии

иммунокомпетентных клеток является чрезвычайная динамичность за счет постоянно идущих процессов пролиферации, дифференцировки, миграции, кооперации, апоптоза [Труфакин В. А., 1980; Бородин Ю. И. с соавт., 1992; Труфакин В. А. с соавт., 1996], что обуславливает необходимость ее рассмотрения в пространственно-временном аспекте. Этот «внутренний временной порядок», по-видимому, обуславливает оптимальный уровень функционирования системы в каждый данный момент времени [Бородин Ю. И. с соавт., 1992; Труфакин В. А. с соавт, 1996].

Различным заболеваниям, которые сопровождаются иммунными нарушениями, сопутствует или предшествует рассогласование суточных ритмов функционирования клеток иммунной системы [Лозовой В. П. с соавт., 1979; Махонова JI. А. с соавт., 1979; Труфакин В. А., 1980; Туаев В. С. с соавт., 1981; Martini Е. et al., 1988; Fei G. H. et al., 2004]. Нарушается также и синтез гормона эпифиза мелатонина, который обеспечивает сохранность биологических ритмов всего организма, в том числе и иммунной системы, на протяжении суток [Анисимов В. Н. с соавт., 1990; Кветная Т. В. с соавт., 2004; Schwarz W. et al., 1988; West S. К. et al., 1992].

В литературе очень мало сведений о суточных колебаниях морфофункционального состояния иммунокомпетентных клеток при иммунопатологии и о попытках восстановления нормального циркадианного биологического ритма функционирования иммунной системы при искусственно вызванном десинхронозе и при заболеваниях иммунопатологического генеза - при бронхиальной астме и атопическом дерматите. Поэтому актуальным является изучение циркадианных ритмов функционирования клеток иммунной системы при нарушениях светового режима и при заболеваниях, в патогенезе которых ведущую роль играют иммунологические дисфункции - при бронхиальной астме, атопическом дерматите, хроническом воспалении. Важной задачей является и исследование

возможности их медикаментозной коррекции препаратами мелатонина (мелаксен, мелатонин) и индукторами его синтеза, так как основная роль этого гормона - хронотропная [Арушанян Э. Б. с соавт., 2003].

В тесной связи с целями хронопатологических исследований находятся задачи хронокоррекции нарушенных функций иммунокомпетентных клеток. Наличие выраженной цикличности чувствительности иммунной системы к внешним воздействиям открывает перспективы для хронотерапии в иммунопатологии [Труфакин В. А. с соавт., 1991; Шурлыгина А. В., Труфакин В. А., 1993; Halberg F., 1988; Femandes G„ 1989]. Показано, что существуют суточные вариации чувствительности лимфоцитов к некоторым иммуномодуляторам, цитокинам [Шурлыгина А. В. с соавт., 1998; 1999; 2000; Труфакин В. А. с соавт., 2002]. Однако в литературе существуют лишь немногочисленные сведения о хронобиологических режимах применения лекарств, оказывающих влияние на клетки иммунной системы [Шурлыгина А. В', с соавт.,1993; 2000; Труфакин В. А., с соат., 2001; KemenyM. М. et al., 1992; Masera R. G. et al., 1994; Perpoint B. et al., 1995]. Поскольку в клинике иммунопатологии всё большее внимание уделяется цитокинотерапии, представляется актуальным изучение хронобиологических эффектов индуктора синтеза интерферона ридостина при вторичных иммунодефицитных состояниях (воспалительные гинекологические заболевания).

Цель исследования. Исследовать морфофункциональное состояние клеток иммунной системы в разное время суток при нормальном и нарушенном световых режимах и при развитии иммунопатологии. Разработать оптимизированные методы хроноиммунокоррекции.

Задачи исследования

1. Изучить колебания на протяжении суток количества и субпопуляционного состава, энергетического метаболизма лимфоцитов периферической крови и лимфоидных органов у интактных крыс Wistar и мышей линии СВА.

2. Определить динамику в течение суток количества и субпопуляционного состава, энергетического метаболизма лимфоцитов периферической крови и лимфоидных органов у крыс \Vistar и мышей линии СВА при экспериментальном десинхронозе.

3. Исследовать влияние фармакологической стимуляции функции эпифиза амитриптилином и мелатонином на динамику в течение суток количества и субпопуляционного состава, энергетического метаболизма лимфоцитов периферической крови и лимфоидных органов у крыс \Vistar и мышей линии СВА с экспериментальным десинхронозом.

4. Определить динамику в течение суток морфофункциональных параметров иммунокомпетентных клеток периферической крови и уровня мелатонина в слюне и в сыворотке крови у здоровых людей.

5. Выявить изменения на протяжении суток морфофункциональных параметров иммунокомпетентных клеток периферической крови и уровня мелатонина в сыворотке крови у людей с нарушениями иммунного статуса: при бронхиальной астме, при атопическом дерматите.

6. Изучить влияние синтетического аналога мелатонина (мелаксена) на динамику в течение суток морфофункциональных параметров иммунокомпетентных клеток периферической крови при заболеваниях, сопровождающихся нарушением иммунного статуса у людей (бронхиальная астма, атопический дерматит).

7. Исследовать хроноэффективность применения индуктора синтеза интерферона ридостина на клетки иммунной системы у людей с иммунодефицитным состоянием (неспецифические воспалительные гинекологические заболевания).

Научная новизна. Впервые показано, что при постоянном освещении нарушается суточная динамика морфоцитохимических параметров клеток иммунной системы: общее количество клеточных элементов, соотношение их субпопуляций, активность дегидрогеназ в лимфоцитах периферической крови и органах иммунной системы. Впервые выявлено синхронизирующее влияние

гормона эпифиза мелатонина и индуктора его синтеза амитриптилина на клетки иммунной системы животных с экспериментальным десинхронозом, вызванным постоянным освещением.

Впервые выявлено, что у здоровых людей взаимоотношения между иммунологическими показателями и уровнем мелатонина неодинаковы в различное время суток.

Впервые обнаружены нарушения суточной динамики субпопуляциоиного состава лимфоцитов периферической крови, уровня мелатонина и цитокинов в крови у больных бронхиальной астмой и атопическим дерматитом и определена воможность использования в их лечении корректора циркадианных ритмов синтетического аналога мелатонина мелаксена.

Впервые охарактеризованы суточные вариации чувствительности дегидрогеназ лимфоцитов периферической крови к индуктору продукции интерферонов ридостину.

Научно-практическая значимость работы. Результаты работы расширяют знания о гистофизиологии лимфоидной ткани в условиях нормального светового режима, при десинхронозе, иммунопатологии, о механизмах регуляции функций иммунокомпетентных клеток с позиций структурно-временной организации иммунной системы. Показан хронокоррегирующий и иммуномодулирующий эффект амитриптилина и мелатонина при экспериментальном десинхронозе у животных. В этом отношении исследование вносит значительный вклад в развитие нового направления - изучение хронобиологических закономерностей функционирования иммунокомпетентных клеток.

К практическим результатам относятся также данные о хронокорригирующем и иммуномодулирующем эффекте синтетического аналога мелатонина мелаксена при бронхиальной астме и атопическом дерматите.

Результаты исследования показывают эффективность применения биоритмологического подхода для использования иммуномодулирующих

препаратов в лечении вторичных иммунодефицитных состояний. Разработаны хронотерапевтические схемы применения ридостина при неспецифических воспалительных гинекологических заболеваниях.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Под влиянием постоянного освещения изменяется динамика в течение суток субпопуляционного состава лимфоцитов лимфоидных органов и активности ферментов окислительно-восстановительного метаболизма лимфоцитов животных.

2. Мелатонин и амитриптилин частично восстанавливают суточную динамику субпопуляционного состава лимфоцитов лимфоидных органов и активности ферментов окислительно-восстановительного метаболизма лимфоцитов животных, после их содержания в условиях круглосуточного освещения.

3. У здоровых людей выраженность и характер взаимоотношений между морфофункциональными параметрами иммунокомпетентных клеток и мелатонином индивидуальны и зависят от фазы суточного цикла.

4. У людей при заболеваниях, сопровождающихся нарушениями иммунного статуса (при бронхиальной астме, при атопическом дерматите), изменены суточные колебания субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови, активности их окислительно-восстановительных ферментов, снижен уровень мелатонина в плазме крови. Применение мелаксена в комплексном лечении заболеваний (бронхиальная астма, атопический дерматит) оказывает иммуномодулирующий эффект, вызывает перестройку суточной динамики субпопуляционного состава и окислительно-восстановительного метаболизма лимфоцитов периферической крови, повышает клиническую эффективность лечения.

5. Хронотерапевтический принцип применения индуктора синтеза интерферона ридостина при хронических неспецифических воспалительных гинекологических заболеваниях повышает клиническую эффективность лечения и приводит к более полному восстановлению морфофункциональных

характеристик клеток иммунной системы.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на I Сибирском съезде лимфологов с международным участием (Новосибирск, 2006), на VII отчётной конференции ГУ НИИКИ СО РАМН «Иммунопатогенез и иммунотерапия основных заболеваний человека: от эксперимента к клинике» (Новосибирск, 2006), на Международной конференции «Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии» (Новосибирск, 2008), на X Конгрессе Международной ассоциации морфологов (Ярославль, 2010), на Межрегиональном форуме «Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии - междисциплинарные проблемы» (Санкт-Петербург, 2010), на заседании проблемной комиссии «Морфология» Научного совета № 56 по медицинским проблемам Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера Новосибирского отделения Всероссийского общества анатомов, гистологов и эмбриологов (Новосибирск, 2011г.).

Внедрение. Результаты диссертационной работы используются в лечении пациентов, больных бронхиальной астмой, атопическим дерматитом в отделении аллергологии клиники иммунопатологии Государственного учреждения РАМН Научно-исследовательского института клинической иммунологии СО РАМН. Результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс кафедры внутренних болезней 5 курса Медицинского факультета НГУ в лекционный курс по дисциплине «Хрономедицина» с сентября 2010 г. Результаты диссертационной работы использованы в хронобиологическом подходе к планированию экспериментов и трактовке научных результатов в лабораториях Учреждения РАМН Научно-исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН.

Публикации. По теме диссертации опубликована 30 работа, из них-11 статей в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендуемых ВАК Минобрнауки России для публикаций основных результатов исследования.

Объём и структура работы. Диссертация написана в традиционном

стиле и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, иллюстрирована 35 таблицами и 30 рисунками. Список литературы включает 470 источников (267 отечественных и 203 зарубежных авторов). Диссертация изложена на 320 страницах машинописного текста.

Личный вклад автора. Эксперименты, обработка и анализ их результатов выполнены лично автором. Во всех совместных исследованиях автор принимала непосредственное участие. Совместные работы проводились с сотрудниками Научно-исследовательского института клинической иммунологии СО РАМН (г. Новосибирск). Диагностика заболеваний, обследование и клиническое наблюдение за больными проводились ведущим научным сотрудником Научно-исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН д.м.н., проф. Т. И. Дергачевой в городской клинической больнице № 2 и в медико-социальном центре «Наедине», врачами отделения аллергологии клиники иммунопатологии Научно-исследовательского института клинической иммунологии СО РАМН (директор - д. м. н., проф., акад. РАМН В. А. Козлов).

Автор искренне признателен за квалифицированную помощь научным консультантам - д.м.н., профессору, академику РАМН В. А. Труфакину, д.м.н., профессору А. В. Шурлыгиной, а также д.м.н., профессору В. С. Ширинскому, д.м.н., профессору В. С. Кожевникову, д.м.н., профессору Т. И. Дергачевой, д.м.н. И. В. Ширинскому, В. М. Непомнящих, инженеру по электронной технике И. Б. Белану, всем сотрудникам лаборатории иммуноморфологии.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование одобрено этическим комитетом Научно-исследовательского института клинической и экспериментальной лимфологии Сибирского отделения РАМН, протокол № 76 от 29.04.2011 (г. Новосибирск). Перед включением в исследование все пациенты подписали форму

добровольного информированного согласия.

Характеристика экспериментальных групп животных, отобранных для проведения исследования. 60 крыс \Vistar и 60 мышей линии СВА в возрасте 4-х месяцев, самцы (для того, чтобы гормональный фон их был одинаковым на протяжении всего исследования).

Животные забивались в 10.00 ч, 15.00 ч, и 20.00 ч по 5 особей на точку из каждой группы (рис. 1).

Рис. 1. Эксперимент по исследованию влияния амитриптилина и мелатонина на

иммунную систему

Характеристика группы доноров. Для группы пациенток, страдающих хроническими неспецифическими воспалительными гинекологическими заболеваниями, группой сравнения являлись 23 здоровые женщины в возрасте 22 - 30 лет. У всех доноров этой группы регистрировалась вторая фаза менструально-овариального цикла. Для групп пациентов, страдающих бронхиальной астмой или атопическим дерматитом, группой сравнения являлись 36 здоровых доноров (53 % мужчин и 47 % женщин) в возрасте 22 - 30 лет.

Общая характеристика больных. Под наблюдением в 2004 - 2005 гг. находилось 68 женщин в возрасте от 18 до 35 лет, страдающих хроническими неспецифическими воспалениями матки и придатков. Больные были разделены на две группы по 34 человека. Женщинам первой группы ридостин вводили без определения чувствительности к нему лимфоцитов крови; второй группе -назначали препарат во время наибольшей чувствительности к нему

лимфоцитов крови. Всем женщинам была проведена лимфотропная антибактериальная терапия [Дергачева Т. И., Анастасьева Н. В. с соавт., 2000], по показаниям физиолечение, витаминотерапия. Ридостин назначали 1 раз в сутки через день до 5 инъекций.

В работе анализировались результаты клинико-иммунологического обследования 248 пациентов с диагнозом бронхиальная астма, из них 161 со смешанным вариантом и 87 с атопическим вариантом, средний возраст обследованных - 32,6 ± 2,51 года, мужчины - 44 %, женщины - 56 %.

Пациентов с атопической и смешанной формами бронхиальной астмы набирали в одну группу, так как литературные данные в большинстве случаев свидетельствуют об отсутствии различий в иммунном статусе этих пациентов в фазу обострения заболевания [Смирнова С. В. с соавт., 2006], при атопической и смешанной формах бронхиальной астмы с тяжёлым течением в фазу обострения заболевания отсутствуют достоверные различия как в уровне цитокинов 1Ь-4 и ПТЧ-у, так и в сыворотке периферической крови, также при данных формах заболевания отсутствуют различия по данным корреляционного анализа ^Е, 11.-4, 1РЫ-у [Турдибеков X. И. с соавт., 2008]. Диагноз и степень тяжести бронхиальной астмы верифицировались согласно международным критериям Консенсуса по бронхиальной астме [«Бронхиальная астма. Глобальная стратегия», 1996].

С целью купирования обострения бронхиальной астмы использовалась стандартная терапия (ингаляционные глюкокортикостероиды, бронхолитшш). Группе пациентов с бронхиальной астмой, состоящей из 20 человек (8 мужчин, 12 женщин) назначался препарат мелатонина (Мелаксен, ишГагт, США) в дозе 0,003 г ежедневно в 21.00 ч в течение трёх недель в сочетании со стандартной терапией.

В работе анализировались результаты клинико-иммунологического обследования 146 пациентов с атопическим дерматитом (АД) с распространёнными проявлениями заболевания, средний возраст обследованных - 33,6 ±2,17 года (мужчины - 42 %, женщины - 58 %), индекс

SCORAD - 31,7-77,7 баллов (в среднем 44,64 баллов), что соответствует средней и тяжёлой степени течения заболевания у всех обследованных пациентов, без клинических и лабораторных проявлений паразитарной инфекции.

Диагноз атопического дерматита выставлялся на основании международных диагностических критериев, предложенных Hanifin и Rajka [Hanifin J. М., Rajka G., 1980] в модификации Leung и др. [Leung D. Y. et al., 1993], Согласительного документа Ассоциации детских аллергологов и иммунологов России (2004 г.) Уровень IgE в сыворотке периферической крови у 36 пациентов (у 25 %) был в пределах нормативных значений, а у 110 человек (у 75 %) повышен.

При статистическом сравнении данных иммунологических обследований пациентов с нормальным и с повышенным уровнем IgE достоверных различий не выявлено. Поэтому все пациенты с атопическим дерматитом до лечения были объединены в одну группу.

Группе пациентов из 28 человек (11 мужчин, 17 женщин) назначался препарат мелатонина (Мелаксен, Unifarm, США) в дозе 0,003 г ежедневно в 21.00 ч в течение трёх недель в сочетании со стандартной терапией. Под достижением клинической ремиссии у пациентов с атопическим дерматитом понимали снижение индекса SCORAD до 15 и меньше, разрешение клинических признаков и субъективных ощущений, характерных для атопического дерматита в стадии обострения.

Определение количества клеток в лимфоидных органах и периферической крови животных. В органах иммунной системы экспериментальных животных (тимусе, селезёнке, паховых лимфатических узлах) определялось абсолютное количество ядросодержащих клеток, в периферической крови подсчитывали количество лейкоцитов в 1,0 мл крови (Бородин Ю. И. с соавт., 1987).

Методы количественной и функциональной оценки субпопуляций лимфоидных клеток и моноцитов периферической крови. Оценка

иммунного статуса включала определение субпопуляционного состава Т- и -B-лимфоцитов, иммуноглобулинов, цитокинов, фагоцитарной активности моноцитов и нейтрофилов периферической крови (МнНПК). Идентификацию популяций лимфоцитов осуществляли с использованием моноклональных антител (CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD20+), количественный учёт проводился на иммуноцитометре FACS Calibur (Becton Diskinson, USA) в программе CellQuest (Becton Diskinson, USA). Стимуляцию продукции перекиси водорода выражали как показатель активации нейтрофилов (ПАН) в пробах с лейкоцитами и показатель активации моноцитов в пробах с мононуклеарами с помощью ИФА-ридера Multiscan MS (Labsystems, Финляндия). Функция МнНПК также оценивалась по фагоцитозу Fc-комплексов. Активность ГЗТ-эффекторных клеток в условиях стимуляции миграции клеток субоптимальной дозой митогена учитывали как индекс миграции (ИМ), ингибицию миграции оптимальной дозой митогена учитывали как индекс ингибиции миграции (ИИМ), интегральную активность ГЗТ-эффекторов учитывали как показатель эффекторных функций (ПЭФ) [Лозовой В. П., 1990]. Концентрацию сывороточных иммуноглобулинов IgA, IgM, IgG определяли методом скоростной нефелометрии на иммуноцитохимическом анализаторе (ICS II, Beckman, США). Концентрацию общего IgE в сыворотке крови определяли методом двухсайтового ИФА с использованием наборов реагентов ООО «Хема-Медика». Концентрацию в сыворотке крови IL-4 и IFN-Y определяли методом ИФА с помощью набора реагентов Вектор-БЕСТ (Россия) на ИФА-ридере Multiscan (Labsystems, Финляндия).

Определение субпопуляций лимфоцитов лимфоидных органов животных. Проводили обработку клеток моноклональными антителами (МАТ), меченными флюоресцеином-5-изотиоцинатом (ФИТЦ) к поверхностным лимфоцитарным антигенам CD3, CD4, CD8, и МАТ, мечеными фикоэритрином (ФЭ) к молекуле CD25 (Becton Dickinson). Анализ образцов проводили на проточном цитофлюориметре FACS Calibur (Becton Dickinson, USA).

Определение уровня мелатонина в слюне и сыворотке крови людей.

Уровень эндогенного мелатонина определялся в сыворотке крови, взятой в 09.00 ч и в 21.00 ч иммуноферментным методом с применением набора Melatonin - Elisa - Kit (ICN - Biomedicals, Inc.). Уровень мелатонина определяли в слюне, взятой в 09.00 ч и в 21.00 ч, иммуноферментным методом с применение набора Saliva Melatonin- Elisa- Kit (Buhlmann Laboratories AG).

Цитохимическое определение активности ферментов в лимфоцитах крови. Цитохимическое исследование активности дегидрогеназ лимфоцитов венозной крови проводили по методике Р. П. Нарциссова [Нарциссов Р. П., 1969; Меркурьева А. В. с соавт., 1982]. В лимфоцитах периферической крови определяли ферменты окислительно-восстановительного метаболизма -сукцинатдегидрогеназу (СДГ), лактатдегидрогеназу (ДДГ) и никотинамидинуклеотидфосфат-диафоразу (НАДФ-Д).

Определение хроночувствительности дегирогеназ лимфоцитов периферической крови к ридостину. Для определения оптимального времени введения ридостина пациенткам, страдающим воспалительными неспецифическими заболеваниями придатков матки, исследовалась хроночувствительность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) лимфоцитов периферической крови к данному препарату. Чувствительность лимфоцитов крови к ридостину определяли по изменению активности СДГ после инкубации крови с препаратом in vitro в разведении 1 : 100 в течение 15 мин при 37°С.

Статистическая обработка результатов. Для статистической обработки результатов использовался пакет прикладных программ для ПК «Statistica 5». Достоверность различий между группами оценивали по непараметрическому критерию Манна-Уитни, Крускалла-Уоллеса (ANOVA) и с применением многомерного дисперсионного анализа (MANOVA) при 95 % уровня значимости [Гублер Е. В., 1978, Урбах В. Ю., 1963]. Проводился также корреляционный анализ с вычислением коэффициента корреляции Спирмена и анализ по методу х2- Параметры суточного ритма физиологических функций (период, амплитуда, акрофаза, мезор) вычислялись по методу регрессионно-

периодического анализа с элементами Косинор-анализа по программе 8МБ, разработанной д.м.н., проф. А. Ю. Летягиным и ведущим инженером лаборатории иммуноморфологии ГУ НИИКиЭЛ И. Б. Беланом [Бородин Ю. И. с соавт., 1992].

Количество клеток и их морфоцитохимические показатели в периферической крови и в лимфоидных органах крыс \Vistar в зависимости от времени суток, режимов освещения и введения индуктора синтеза мелатонина амитриптилина. Постоянное освещение привело к сглаживанию суточных колебаний всех исследованных показателей. Восстановление циркадианных вариаций клеточного состава после стимуляции синтеза мелатонина в ночное время (введение амитриптилина) наблюдалось только в тимусе и лимфатических узлах. В селезёнке эффект амитриптилина не отличался от эффекта инъекционного стресса - и то, и другое воздействие приводили к усилению циркадианных колебаний количества клеток в органе (рис. 2, 3,4).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

7000

Постоянное

6000

Нормальное Постоянное освещение+фи-

освещение оеве щ ен ие.................зиояогиче с кий -

раствор

Постоянное освещение

5000

Млн.кл

2000

4000

3000

1000

Примечание: *-р<0,05от 10.00 ч; **-р<0,05от 15.00 ч.

Рис. 2. Динамика в течение суток общего количества клеток в тимусе при различных режимах освещения и медикаментозного воздействия

3500

3000

2500

2000 Мл н.

1500

1000 500

...............Нормальное п&ст&нноё освещение освещение ..............Постоянное.................................................................................... Постоянное ос вещ ение+фи- „ освещение

* зйологический + аллитриптилин раствор

Т .. ............................................................X..................t..............................................................._......

! / .....................................................................w......................>х.....

; 4 ж

Примечания: *-р < 0,05 от 10.00 ч; ** - р<0,05 от 15.00 ч.

Рис. 3. Динамика в течение суток общего количества клеток в селезёнке при различных режимах освещения и медикаментозного воздействия

л. <«>

4SV"

••f>>" >4> »?>

Примечания: * -р< 0,05 от 10.00 ч; **-р<0,05 от 15.00 ч.

Рис. 4. Динамика в течение суток общего количества клеток в лимфатических узлах у крыс при различных режимах освещения и медикаментозного воздействия

Восстановление циркадианных вариаций клеточного состава тимуса и лимфатических узлов под влиянием амитриптилина, являющегося индуктором синтеза мелатонина объясняется тем, что суточные биоритмы клеток тимуса, лимфатических узлов в большей степени находятся под влиянием мелатонина [Арушанян Э. Б. с соавт., 2006; A. Martin-Cacao et al., 1992; Maestroni G. J. M. et al, 1986].

Амитриптилин оказывает синхронизирующее влияние на окислительно-восстановительный метаболизм лимфоцитов (рис. 5), под его влиянием нормализуется утренняя активность ЛДГ, восстанавливается характер суточных вариаций НАДФ-диафоразы.

лдг

-V

V* +

Постоянное Постоянное

Гз'мйтри п т й/Тй'н.....

13 1 111 111 111

НАДФ-Д

Нормальное

ос вещ еиио

ГТо с то я н н оё освещение

постоянное"" осисщеннс амитриптилин

ос исщ с иис

зиологичес кий растиор

. <5> •;<> • <> ->> -г'

Примечания: * - р < 0,05 от 10.00 ч;

<■0

-р <0,05 от 15.00 ч.

•г^-

Рис. 5. Динамика в течение суток активности дегидрогеназ лимфоцитов при при различных режимах освещения и медикаментозного воздействия Субпопуляционный состав иммунокомпетентных клеток в

лимфоидных органах мышей линии СВА в различное время суток в

зависимости от режима освещения и введения мелатонина. Влияние

постоянного освещения на тимус мышей линии СВА заключается в повышении

процента незрелых тимоцитов с фенотипом СВ4+8+ в 10.00 часов и

абсолютного количества СП4+ в 10.00 ч и в 15.00 часов, с 15.00 ч до 20.00 часов

исчезает динамика процентного содержания СБ4+ и абсолютного содержания

СЭ8+ клеток, что может свидетельствовать о сглаживании суточного ритма

клеточного состава органа (рис. 6).

После введения мелатонина появляются достоверные различия

процентного содержания СБ4+ и СБ4+8+ лимфоцитов в зависимости от времени

суток, форма суточной кривой для процентного содержания СБ4+8+

приближается к таковой интактных животных, а форма суточной кривой для процентного содержания С08+ клеток нормализуется (рис. 6).

С Р8 +

Постоянное, ос вещ ение

Постоянное

ос,ве..ш,.е.ние.± фи-зио-логический

р.а.с.хе..а.р......

Постоянное ос вещ ение + мелатонин

..«>

у ф-

«.о <«■

С 04+

35 ■ 30 25 20 15 10 5 0

Н орма льное

Постоянное

освещение

/ 1—}:

.<$!' ф'

,<$> <5 кр- Ф' 'Р"

>$>- Ф' ••{>■

С 04+8+

освещ ение+фи-30 Нормальное Постоянное. зиологический

Постоянное освещение + мелатонин

'].....................освещение................... освещение раствор

Ф' 4>- ^ Ф- 4> ф- ф 4> >$>■ Ф' #

Примечание: * - р < 0,05 от 10.00 ч; ** - р < 0,05 от 15.00 ч

Рис. 6. Динамика в течение суток клеточного состава тимуса в зависимости от режима освещения, введения физиологического раствора или мелатонина

Постоянное

______освещение

+ физиологический раствор

Постоянное освещение

Постоянное освещение вызывает повышение в лимфатических узлах вечернего уровня абсолютного содержания СВ4' лимфоцитов, введение мелатонина нормализует суточную динамику этих клеток (рис. 7).

Примечание: * - р < 0,05 от 10.00 ч; ** - р < 0,05 от 15.00 ч

Рис. 7. Динамика в течение суток абсолютного содержания СБ4+ лимфоцитов в лимфатических узлах в зависимости от режима освещения, инъекционного стресса и введения мелатонина

Таким образом, под влиянием мелатонина перестраивается характер вариаций в течение суток клеточного состава тимуса и лимфатических узлов мышей, находящихся в условиях нарушенного светового режима, причём по некоторым параметрам они приближаются к интактным животным.

Содержание мелатонина в слюне и иммунокомиетентных клеток в

периферической крови у здоровых людей в различное время суток.

Характер суточных вариаций концентрации мелатонина в слюне имел

индивидуальные особенности. У половины обследованных (у 50 %)

максимальная концентрация мелатонина в слюне отмечалась вечером (1 тип

суточной динамики). У части доноров (31 %) не выявлено различий между

утренним и вечерним уровнем гормона (2 тип суточной динамики), а у части -

утренние значения данного показателя превышали вечерние (у 19 %) (3 тип

суточной динамики). По уровню утреннего и вечернего мелатонина оказалось

возможным разделить всех обследованных на группы: 1В - с высоким

(80 мкг/мл), 2В - со средним (13-21 мкг/мл), ЗВ - с низким уровнем вечернего

мелатонина (0-5 мкг/мл); 1У - со средним (10-20 мкг/мл), 2У - с низким

уровнем утреннего мелатонина (0-5,5 мкг/мл). В утреннее время ни у одного

донора не было обнаружено высокого уровня мелатонина. В группе 1В по сравнению с группами 2В и ЗВ оказались сниженными среднесуточные значения фагоцитарной активности гранулоцитов, процент НЬА-БЯ+ моноцитов и процент С016+, но было повышено соотношение С047СБ84 (табл. 1). В группе 1У по сравнению с группой 2У были повышены среднесуточный процент НЬА-ОЯ1 моноцитов, процент СБ16+ и соотношение С047С08\ но снижены среднесуточные проценты СБЗ+, СБ8+, СБ20г клеток (табл. 1). В группе со средним утренним уровнем мелатонина отмечается снижение активности ЛДГ в лимфоцитах крови (р < 0,05) (табл. 1).

Таблица 1

Среднесуточные показатели клеток иммунной системы и активность дегидрогеназ лимфоцитов крови у людей с различными вечерним и _утренним уровнями мелатонина в слюне (М ± БЕ)_

Показатель Уровень мелатонина слюны, пкг/мл

Вечерний Утренний

0-5 13-21 80 0-5,5 14-20

(ЗВ) (2В) (1В) (2У) (1У)

% СОЗ+ 65,9 64,25 68,75 67,46 58,83

±2,4 ± 1,6 ±2,5 ±4,8 ±3,6**

% С04+ 35,65 36,88 38,25 36,85 58,83

±0,76 ±2,9 ±2,4 ±3,5 ±4,1

Соотношение С04'/С08' 1,43 1,73 1,75 1,47 1,88

±0,01 ±0,6 ±0,5 * ±0,4 ± 0,06**

%С016+ 12,7 12,0 5,75 9,65 20,33

±0,59 ±3,0 ±0,9* ±2,1 ± 2,9**

% С020+ 13,6 12,0 12,25 13,12 12,67

±1,3 ±1,6 ± 1,3 ± 1,4 ± 1,7**

% Н1_А-ОЯг моноцитов 86,13 85,13 73,75 81,45 93,67

±2,1 ±6,1 ±2,5* ±5,4 ±7,5**

% фагоцитирующих 78,05 75,75 71,25 76,69 76,33

гранулоцитов ±5,8 ±6,2 ±4,3 * ±5,9 ±5,9

ЛДГ (гранул/лимфоцит) 14,9 12,4 16,8 15,5 10,9

±0,5 ±2,4 ±0,05 ±2,4 ±4,6 **

Примечания: * - р < 0,05 по сравнению с группами с минимальным и средним вечерним уровнем мелатонина; ** - р < 0,05 - по сравнению с группой с минимальным утренним уровнем мелатонина, М-средняя арифметическая, БЕ-ошибка средней арифметической.

Корреляционные связи мелатонина с иммунологическими показателями

наблюдаются только при суточных вариациях гормона 1-го типа: вечерняя концентрация мелатонина находится в отрицательной корреляционной связи с утренним процентным содержанием СО 16* клеток и в положительной - с процентным содержанием активированных моноцитов (НЬА-1Ж+моноциты). Утренняя концентрация мелатонина находится в положительной корреляционной связи с утренним уровнем НЬА-ВЯ+ экспрессии на моноцитах и вечерним процентным содержанием С020+ лимфоцитов.

Таким образом, установлено, что взаимоотношения эндогенного мелатонина с показателями иммунной системы у здоровых людей неодинаковы в разное время суток. Его суточные вариации отражаются на характеристиках иммунокомпетентных клеток и являются индивидуальными, что необходимо учитывать в клинической практике при хроноиммунокоррекцпи.

Морфофункциональные показатели клеток иммунной системы и содержание мелатонина в сыворотке крови у пациентов с атопическим дерматитом в различное время суток до и после лечения по общепринятой схеме и после добавления к лечению мелаксена. У пациентов с атопическим дерматитом до лечения утренние и вечерние показатели морфофункционального состояния клеток иммунной системы не отличаются друг от друга (табл. 2). У здоровых же утренне-вечерние различия характерны для общего количества лимфоцитов, абсолютного содержания СБЗ+ и СБ4+ клеток, их количество более высокого уровня достигает в утреннее время. У больных до лечения по сравнению со здоровыми в утреннее время статистически значимо увеличение общего ^Е, 5-кратное увеличение уровня 1Ь-4 в сыворотке крови, которое характерно для патогенеза данного заболевания [Скрипкина Л. А. с соавт., 2008; Ыакагаша М., 1999]. В вечернее время у больных в отличие от здоровых повышено общее количество лимфоцитов, процентное содержание СИ20+ клеток, что характеризует гиперактивацию гуморального звена иммунитета [Бережная Н. М., 1997] (табл. 2), абсолютные уровни СЭ8+ и С020", а проценты СБЗ+ и СБ4+ лимфоцитов и иммунорегуляторный индекс снижены. И в 09.00, и в 21.00 ч

отмечено также снижение активности всех исследованных дегидрогеназ лимфоцитов, что свидетельствует о снижении энергетических и синтетических процессов в клетках [Прохоренков В. И., 2000], большей напряжённости обменных процессов [Быков О. С. с соавт, 1992], снижении функциональной активности лимфоцитов [Зарецкая Ю. М., 1983].

Таблица 2

Различия в морфоцитохичических показателях иммунокомпетентных

клеток, в уровне мелатонина у здоровых и больных с атопическим __дерматитом до лечения (М ± БЕ)__

Показатель Время суток

09.00 ч

Здоровые Больные

Количество лимфоцитов/мм3 2146,2 ±655,5 2082,0 ± 1011,1

1Ь-4 (пкг/мл) 20,7 ± 7,6 109,0 ± 21,0 #

1ёЕ (ЕД/л) 313,1 ±41,1 516,88 ± 39446 #

СДГ (гранул/лимфоцит) 14,4 ± 1,52 11,9± 1,58 #

ЛДГ (гранул/лимфоцит) 16,0 ±2,0 11,4± 1,49 #

НАДФ-Д (гранул/лимфоцит) 14,4 ± 2,40 11,6 ± 1,39 #

Мелатонин (пкг/мл) 66,57 ±41,0 28,66 ±6,41

Показатель Время суток

21.00 ч

Количество лимфоцитов/мм3 1614,5 ±306,0* 3395,0 ± 2390,6 #

% С020+ 13,59 ±4,79 33,0 ± 5,90 #

% СЭЗ+ 65,85 ± 7,24 38,04 ± 22,28 #

% С04+ 36,85 ± 5,59 24,78 ± 14,41 #

ИРИ (соотношение С04+/С08+) 1,48 ±0,31 0,94 ±0,23 #

СДГ (гранул/лимфоцит) 15,3 ±2,69 11,24 ± 1,58 #

ЛДГ (гранул/лимфоцит) 14,3 ±2,52 10,9 ± 1,60 #

НАДФ-Д (гранул/лимфоцит) 14,4 ±2,68 12,0 ± 1,68 #

Мелатонин (пкг/мл) 115,3 ±21,7 * 25,68 ± 4,73 #

Примечания: # - р < 0,05 часов от здоровых в соответствующее время суток; * - р < 0,05 в 21.00 ч от 09.00 ч

В отличие от здоровых вечерний уровень мелатонина в сыворотке крови снижен и отсутствуют его суточные вариации, что говорит о состоянии десинхроноза (табл. 2), сопровождающего любое заболевание и проявляющегося в рассогласовании эндогенных биологических ритмов в

организме [Лозовой В. П. с соавт., 1979; Туаев B.C. с соавт., 1981; Рахимова О. Ю„ 2009; Martini Е. et al„ 1988; Fei G. H. et al., 2004].

Корреляционный анализ показал, что наличие связей между характеристиками иммунокомпетентных клеток и уровнем цитокинов в крови может свидетельствовать о важной роли y-IFN и IL-4 в иммунопатогенезе атопического дерматита.

После стандартного лечения увеличилось процентное содержание Т- и -В-клеток, количество фагоцитирующих гранулоцитов, соотношение CD4+/CD+8, свидетельствующее о нарушении взаимодействия субпопуляций Т-лимфоцитов [Баранова Н. И., Костина Е. М., 2009], повысился уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), персистенция ЦИК ведёт к сенсебилизации организма и дисфункции Т-хелперов [Трофимов И. Б. с соавт, 2001]. И в утреннее и в вечернее время у больных остаётся сниженной активность дегидрогеназ лимфоцитов. Утренне-вечерние различия характерны только для процента фагоцитирующих моноцитов (табл. 3). После лечения, так же как и до лечения, у больных сохраняется сниженным, по сравнению со здоровыми, вечерний уровень мелатонина, и отсутствуют утренне-вечерние различия в его содержании (табл. 3).

После лечения по обычной схеме исчезают корреляционные связи между показателями иммунокомпетентных клеток и концентрацией цитокинов в крови, то есть можно предполагать, что в процессе лечения идут изменения либо цитокинпродуцирующей функции иммунокомпетентных клеток, либо ответа клеток на цитокиновые стимулы.

Можно сделать заключение, что после общепринятой терапии у пациентов с атопическим дерматитом сохраняются негативные изменения в характеристиках клеток иммунной системы, что стимулирует поиск более эффективных методов иммунокоррекции. Отсутствие положительной динамики концентрации мелатонина в сыворотке крови обосновывает целесообразность введения в схему лечения препарата мелаксен, который является синтетическим аналогом мелатонина.

Характеристика иммунокомпетентных клеток и уровня мелатонина в сыворотке крови у больных с атопическим дерматитом (М ± БЕ)

Показатель До лечения 09.00 ч После лечения 09.00 ч

% СБ20+ 15,21 ±6,04 16,71 ± 1,02 *

% фагоцитирующих 54,52 ± 11,49 65,50 ±3,76*

гранулоцитов

ЦИК, усл.ед. 18,5 ±3,53 23,15 ±5,89*

Показатель До лечения 21.00 ч После лечения 21.00 ч

% СОЗ+ 38,04 ± 9,32 66,0 ± 4,93 *

% С04+ 24,78 ± 14,41 37,66 ±4,92*

Соотношение СВ4ЛС08+ 0,94 ± 0,23 1,61 ±0,54*

% фагоцитирующих 70,61 ± 16,85 79,0 ± 10,6 *

гранулоцитов

Показатель Здоровые 09.00 ч После лечения 09.00 ч

СДГ (гранул\лимфоцит) 14,4 ± 1,52 10,4 ± 1,13 #

ЛДГ (гранул\лимфоцит) 16,0 ±2,00 11,6 ± 2,89 **#

НАДФ-Д (гранул\лимфоцит) 14,4 ± 2,4 11,2 ±2,31 #

% фагоцитирующих 74,33 ± 14,23 65,05 ± 8,14 #

гранулоцитов

% НЬА-ОЯ+ моноцитов 87,36 ± 8,53 92,43 ± 3,07 #

Мелатонин (пкг\мл) 66,57 ±41,0 25,75 ± 9,02

Показатель Здоровые 21.00 ч После лечения 21.00 ч

% СБ4+ 36,85 ± 5,59 37,66 ± 4,92#

Соотношение СВ4+\СБ8+ 1,48 ±0,31 1,61 ±0,54 #

% фагоцитирующих 66,76 ±17,85 79,0 ± 10,6 #

гранулоцитов

СДГ (гранул\лимфоцит) 14,3 ±2,52 11,3 ± 1,27 #

ЛДГ (гранул\лимфоцит) 15,3 ±2,69 11,6 ± 1,54 #

НАДФ-Д (гранул\лимфоцит) 14,4 ±2,68 9,9 ± 1,62 #

Мелатонин (пкг\мл) 115,3 ±21,7** 28,32 ± 10,87 #

Примечания: # - р < 0,05 от здоровых; * - р < 0,05 от до лечения; ** - р < 0,05 в 21.00 ч от 09.00 ч.

После лечения с мелаксеном в утреннее время на фоне увеличения

количества всех лимфоцитов повысилось относительное содержание СЭ8+ лимфоцитов, 1§М, процентное содержание фагоцитирующих моноцитов и гранулоцитов. При этом снизился показатель эффекторных функций (ПЭФ) и абсолютное содержание СЭ2(Г. Уровни 1цЕ, 1Ь-4 в сыворотке крови также уменьшились, а содержание у-ШИ не претерпело изменений, однако, отмечается отчётливая тенденция к повышению его уровня в вечернее время суток. Вечером же снизился процент СЭ4+ лимфоцитов (табл. 4).

Таблица 4

Различия в морфоцитохимических показателях иммунокомпетентных

клеток у больных с атопическим дерматитом до и после лечения с _мелаксеном (М ± 8Е)__

Показатель Время суток (ч) До лечения После лечения с мелаксеном

Количество лимфоцитов/ммЗ 09.00 2082,0±1011,1 2700,5±131,4 *

% СОВ+ 09.00 25,16±5,89 38,71±1,45 *

% фагоцитирующих 09.00 61,77±1249 77,51±1,82 *

гранулоцитов

% фагоцитирующих моноцитов 09.00 54,52±11,49 67,21±7,21 *

^М (г\л) 09.00 1,17±0,84 2,73±0,23 *

СДГ (гранул/лимфоцит) 09.00 11,4±1,49 12,4±1,80 *

ПЭФ 09.00 5,14±0,11 2,94±0,93 *

1Ь-4 (пг/мл) 09.00 109,0±21,0 41,3±17,9 *

^Е (Ки/1) 09.00 516,88±394,46 466,94±430,3 *

% СМ+ 21.00 24,78±14,41 20,81±2,03 *

№N-7 (пг\мл) 21.00 14,5±1,3 19,8±4,3

ЛДГ (гранул\лимфоцит) 21.00 11,24±1,58 12,4±1,01 *

Примечание: * - р < 0,05 в сравнении с показателем до лечения.

Следует отметить, что у пациентов, пролеченных с мелаксеном, после завершения лечения изменения в иммунном статусе более выраженные. Так как при аллергической форме атопического дерматита доминируют цитокины, продуцируемые ТЪ-2 клетками, в частности 11-4, вызывающий повышение синтеза 1§Е В-лимфоцитами [АксНв М. й а1., 1997]. Поэтому снижение уровня

11-4 обуславливает и снижение содержания ^Е. ПЭФ - является маркёром иерсистенции аллергического воспаления, снижение ПЭФ это благоприятный признак для прогноза наступупления ремиссии заболевания [Курамшина Д. В., 2003]. Только после лечения с мелаксеном наблюдалось увеличение активности СДГ и ЛДГ, свидетельствующее о повышении энергообеспеченности лимфоцитов и их функциональной активности [Куртасова Л. М. с соавт., 2001] (табл. 4).

Таким образом, обычное лечение и лечение с добавлением мелаксена оказало различное влияние на иммунный статус больных с атопическим дерматитом. После лечения с мелаксеном для некоторых показателей иммунного статуса обнаружены достоверные суточные вариации. Процентное содержание Т-лимфоцитов (СБЗ ), Т-лимфоцитов хелперов (С04+), Т-лимфоцитов-эффекторов (С08+), фагоцитирующих моноцитов, активность СДГ в лимфоцитах оказались достоверно выше в утреннее время, а общее количество лимфоцитов, процентное содержание СБ20+, С016*, активность ЛДГ в лимфоцитах, содержание у-ШИ в сыворотке крови более высокого уровня достигают в вечернее время.

По результатам корреляционного анализа концентрация у -ИТЧ в крови начинает коррелировать с процентным содержанием СБЗ+, СВ4* лимфоцитов, что может свидетельствовать об активации цитокинпродуцирующей функции ТЫ. Появляются корреляции уровня у-ШЧ с функциональными показателями иммунокомпетентных клеток (НИМ, ^А). Концентрация 1Ь-4 коррелирует только с уровнем Возросшее количество корреляционных взаимосвязей может свидетельствовать об усилении синхронизации между параметрами клеток иммунной системы.

В обеих группах после завершения лечения зарегистрирован положительный клинический эффект. Однако в группе с мелаксеном он был статистически значимо выше - интенсивность и распространенность кожных проявлений по шкале БСОНАБ уменьшилась на 84 %, тогда как в группе пациентов, пролеченных без мелаксена, - на 60 %. Положительный эффект

лечения в группе пациентов без мелаксена зарегистрирован у 70 % больных, а у получавших мелаксен - у 88 %. В группе пациентов, получавших мелаксен, на 7-8 дней быстрее претерпели положительную динамику такие клинические составляющие индекса ЗССЖАЭ, как нарушение сна и кожный зуд. Следовательно, положительные изменения в иммунном статусе сочетаются с более выраженным клиническим эффектом от лечения с добавлением мелаксена. Немаловажную роль в повышении эффективности лечения, по-видимому, играет синхронизирующее действие препарата на суточную ритмику морфофункционального состояния клеток иммунной системы.

Морфофункцнональные показатели клеток иммунной системы и содержание мелатонина в сыворотке крови у пациентов с бронхиальной астмой в различное время суток до и после лечения по общепринятой схеме и после добавления к лечению мелаксена. В 09.00 часов у больных по сравнению со здоровыми снижены процент Т-лимфоцитов (СБЗ+), процент фагоцитирующих гранулоцитов и моноцитов, а процент ЗЧК-клеток (С01б+), В-лимфоцитов (СБ20+), активированных моноцитов (1(ЬА-1Ж+) повышены (у здоровых - 87,36 ±8,53; у больных - 90,49 ±6,23). В 21.00 час процент Т-лимфоцитов (СОЗ+), Т-лимфоцитов хелперов (СБ4+), соотношение С047С08+, процент фагоцитирующих гранулоцитов и моноцитов ниже аналогичных показателей здоровых людей (табл. 5). Таким образом, у больных с бронхиальной астмой отмечается угнетение Т-клеточного и фагоцитарного звеньев иммунной системы и в утреннее и вечернее время суток, что является патогномоничным для данного заболевания [Рябова Л. В. с соавт., 2004; Шамова Д. В. с соавт., 2003]. А повышенный уровень В-лимфоцитов в утреннее время свидетельствует об активации гуморальных иммунных реакций, что также характерно для атопии [Порядин Г. В. с соавт., 2002].

У больных имеются утренне-вечерние различия в показателях клеток иммунной системы. В вечернее время отмечается повышение общего количества лимфоцитов, а процентное содержание лимфоцитов с фенотипами СОЗ+, С04+, а также иммунорегуляторный индекс и процент активированных

Т-лимфоцитов хелперов (НЬА-ОЯ' С04+) снижается (табл. 5). У здоровых же в утренне-вечерние различия характерны для общего количества лимфоцитов, для абсолютного содержания СОЗ+ и С04+, их количество выше в 09.00 ч (табл. 5).

После стандартного лечения в утреннее время наблюдается снижение процента фагоцитирующих гранулоцитов и повышение уровня СБ4+ клеток, количество активированных Т-хелперов (НЬА-011+СВ4+) снизилось, а так как НЬЛ-БЯ является маркёром поздней активации лимфоцитов, то это свидетельствует о снижении потенциальных возможностей Т-лимфоцитов [Цибулькин А. П. с соавт., 2004]. Увеличилось также соотношение С04+/С08+, а в вечернее время более высоких цифр достигает общее количество лимфоцитов. После лечения значительно меньшее количество показателей иммунограммы стало иметь утренне-вечерние различия (они наблюдаются только у СБ16+ клеток). До лечения и после стандартного лечения содержание мелатонина в сыворотке крови также не имеет утренне-вечерних различий. И его уровень в вечернее время остаётся сниженным по сравнению со здоровыми (табл. 5).

После лечения с мелаксеном перестало отличаться от нормальных величин доноров соотношение СБ4+/СВ8+ (табл. 5),что свидетельствует о нормализации взаимодействия субпопуляций Т-лимфоцитов [Баранова Н. И. с соавт., 2009].

После лечения с мелаксеном нормолизовались процентное содержание СБЗ+, СБ4+, СЭ20+, СБ16+ клеток, фагоцитирующих моноцитов, общее количество лимфоцитов, абсолютное количество СБ20+. Процентное содержание СЭ8+ лимфоцитов стало выше, чем после стандартной терапии, то есть лечение с мелаксеном оказало влияние на процесс регуляции антителообразования, так как сниженный уровень этих клеток патогенетически связан с нарушением синтеза антител [Потекаев Н. С. с соавт., 1991; Калюжная Л. Д. с соавт.,1994]. Утренне-вечерние различия стали характерны только для процента фагоцитирующих гранулоцитов (табл. 5).

Различия в содержании клеток иммунной системы у здоровых и у больных с бронхиальной астмой __до и после лечения (М ± 8Е)_

Время суток

Показатель 09.00 час 21.00 час

Здоровые До лечения После лечения После лечения с мелаксеном Здоровые До лечения После лечения После лечения с мелаксен ом

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Количество 2146,2 2280,6 2306,9 1771,9 1614,5 2402,3 4114,7 3725,0

лимфоцитов / ммЗ ± 655,5 ± 1096,0 ± 1342,2 ±693,6 ±306,0 *** ±335,7 #, *** ±2449,8 #, *** ±2278,4

% СОЗ+ 66,51 60,25 65,88 62,66 65,85 51,86 69,25 56,5

±6,94 ± 10,71 # ±8,31 ** ± 13,70 ±7,24 ±12,76 #, *** ±8,17 ** ±5,31 #,***

% С04+ 36,41 36,7 40,05 34,83 36,85 32,12 40,62 34,83

±5,49 ±9,86 ±8,25 **,# ±9,77 ±5,59 ± 9,63 #, *** ± 6,6 ** ±8,68

% С016+ 11,0 15,70 12,17 14,18 13,25 15,08 15,12 11,5

±5,78 ± 10,1# ±6,92 ** ±6,43 ±7,4 ±7,89 ±8,8 ±7,86

% С020+ 12,65 16,85 12,94 12,5 13,59 16,23 10,87 12,83

±5,4 ± 6,99 # ±7,83 ** ±5,33 ** ±4,7 ±6,88 ±4,1 ** ±7,44

Продолжение Таблицы 5

1 2 3 4 5 6 7 8 9

% СИ8+ 26,03 ±5,67 24,0 ±6,73 24,07 ±6,26 28,58 ± 4,52 **, 25,77 ±4,67 28,5 ± 14,40 28,25 ±5,54 28,33 ± 11,11

ИРИ (соотношение С04+/С08+) 1,48 ±0,38 1,68 ±0,81 1,75 ± 0,52 * 1,27 ± 0,57 **** 1,48 ±0,31 1,41 ± 1,37 ***, # 1,49 ±0,39 1,46 ±0,76

% НЬА-ОК СВ41 - - 2,32 ± 1,19 1,24 ±0,19 *** 1,07 ±0,36 **

% фагоцитрующих гранулоцитов 74,37 ± 14,23 57,04 ± 13,75 # 64,90 ± 13,07 **, # 63,75 ± 8,86 # 66,76 ± 17,85 63,33 ± 10,35 # 68,28 ±5,87 77,66 ±11,23 ***

% фагоцитрующих моноцитов 56,53 ± 16,55 52,29 ± 13,20# 57,03 ± 12,06 57,33 ± 10,05 61,44 ±9,00 55,41 ±8,0# 55,28 ±8,55 65,0 ± 12,76

Мелатонин (пкг\мл) 66,57 ±41,0 20,88 ±5,72 44,61 ±21,9 115,33 ±21,7 *** 41,93 ± 20,5 # 33,2 ± 16,2#

Примечания: # - р < 0,05 от здоровых;** - р < 0,05 от до лечения; *** - р < 0,05 от 09.00 ч; **** - р < 0.05 лечение с мелаксеном от стандартного лечения, М-средняя арифметическая, ЭЕ-ошибка средней арифметической.

При корреляционном анализе выявлено, что связи между цитокииами становятся более сильными (IFN-y и IL-4) и появляются их корреляции с активированными моноцитами.

Показателем эффективности лечения могут служить данные спирографического исследования функции внешнего дыхания. После стандартного лечения достоверно увеличился процент имеющейся жизненной ёмкости лёгких от должностной (до лечения - 91,50 ±6,74; после лечения -104,10 ± 11,56). После лечения с добавлением мелаксена увеличился объём форсированного выдоха за 1-ю секунду (до лечения - 1,96 ± 0,02; после лечения - 2,38 ± 0,46), этот показатель наиболее полно отражает состояние дыхательной системы при бронхиальной астме [Айсанов 3. Р., с соавт., 2007]. Отмечается тенденция к увеличению фактической жизненной ёмкости лёгких. После лечения с мелаксеном у значительно большего процента пациентов улучшилась функция внешнего дыхания - увеличилась ЖЕЛ, ОФВ1. Можно заключить, что влияние лечения с мелаксеном на вентиляционную функцию лёгких эффективнее стандартной терапии.

Таким образом, после лечения с мелаксеном отмечается нормализация значительно большего числа показателей иммунокомпетентных клеток. Это ассоциируется с более выраженным клиническим эффектом. Однако произошло уменьшение корреляционных связей между исследованными показателями и нивелирование утренне-вечерних различий между ними. Объяснением этому может быть разрушение патологических ритмов, которое должно предшествовать формированию нормальной временной организации [Арушанян Э. Б., 1999].

Хронотерапевтический режим применения ридостина у пациенток с хроническими неспецифическими воспалительными гинекологическими заболеваниями. У пациенток до лечения обнаружено повышение количества натуральных киллерных клеток - С016+-лимфоцитов, снижена активация моноцитарно-макрофагального звена иммунной системы - HLA-DR4-моноцигов, снижена среднесуточная активность СДГ и ЛДГ (табл. 6).

Характеристика клеток иммунной системы здоровых и больных с ХНВГЗ

до и после различных видов лечения ридостином (М ± БЕ)

Показатель Время суток Здоровые До лечения После лечения

Без учета чувствительност и к ридостину С учетом чувствительност и к ридостину

1 2 3 4 5 6

% СБЗ+ 09.00 65,5 ±1,26 64,4 ±2,8 71,1 ±2,2 # 70,4 ± 1,7 #

% СЭ4+ 09.00 36,7 ±0,81 32,3 ± 3,0 41,4 ± 1,5 # 38,6 ± 1,6

% С08+ 09.00 26,2 ± 1,78 30,2 ± 2,0 34,8 ± 1,9 # 25,5 ± 0,9

% СШ6+ 09.00 9,3 + 1,59 14,9 ± 2,0# 6,6± 1,1 # ** 8,1 ± 1,1 **

% С020' 09.00 11,4 + 0,62 8,9 ± 1,7 7,2 ± 0,7 # 8,4 ± 0,6 #

сдг Среднесут. 14,5 ± 2,4 11,6 ± 1,5 # 10,7+ 1,8 # 22,1 + 3,2

СДГ 09.00 16,7 ±2,1 11,2 ±0,9 * 10,3 +1,1 # 23,4 ± 3,9

сдг 21.00 18,3 + 2,5 10,4 ± 1,2 # 14,1 +1,7 # 24,0 ± 4,9

ЛДГ Среднесут. 15,7 ±1,7 11,5 +0,9 # 10,9+ 1,2 # 15,8 ±2,4

ЛДГ 09.00 14,2 ±2,4 10,7+ 1,8 # 12,3 +3,2 # 14,8 + 2,7

ЛДГ 21.00 16,1 ±2,8 12,3 +1,7 # 11,5+ 1,4 # 16,5 ± 2,4

Примечания: *# - р < 0,05 от группы «здоровы; ** - р < 0,05 от группы «до лечения; *** - р < 0,05 от группы «после лечения без учета чувствительности».

Эти изменения в иммунном статусе свидетельствует о дефектах фагоцитарного звена иммунной системы при частых и длительных бактериальных инфекциях. [Трунова Л. А. с соавт., 2001]. После стандартного лечения отмечено повышение относительного количества СБЗ+, СБ4+, СЭ8+ клеток, снижение процентного содержания СЭ20+ и СБ16+ и активированных моноцитов (табл. 6).

После хронотерапии ридостином увеличилось относительное количество СОЗ+, процентное содержание натуральных киллеров (СБ16+) снизилось до контрольных показателей, а процент активированных моноцитов, хоть и остался сниженным по сравнению с его уровнем у здоровых, стал выше, чем после обычной схемы назначения препарата, повысилась активность и СДГ и ЛДГ.

У пациенток до лечения и после обычного лечения значительно реже встречались достоверные суточные вариации активности дегидрогеназ, что свидетельствует о наличии состояния десинхроноза. После хронотерапии ридостином процент пациенток с достоверными различиями между утренней и вечерней активностью дегидрогеназ становится значительно выше.

Процент пациенток с хорошим эффектом после хронотерапии (50 %) выше, чем пролеченных ридостином по обычной схеме (16,7 %). Частичный эффект от лечения отмечался в обеих группах у 50 % пациенток. У 33,3 % пациенток эффект от лечения отсутствовал, и это наблюдалось только в группе, которой ридостин вводили без учёта времени чувствительности к нему СДГ лимфоцитов.

Итак, десинхронизация суточных биоритмов функционирования иммунной системы может являться как причиной, так и следствием нарушения функций иммунокомпетентных клеток и развития иммунопатологических процессов. В нашем исследовании, проведенном на животных, выявлено десинхронизирующее влияние постоянного освещения на суточные колебания количества лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови, общего количества клеток тимуса, селезёнки и лимфатических узлов, субпопуляционного состава лимфоцитов тимуса, лимфатических узлов, окислительно-восстановительного метаболизма лимфоцитов. При введении животным, находившимся при постоянном освещении, мелатонина или амитриптилина наблюдалось восстановление суточных вариаций морфофункциональных показателей, клеточного состава тимуса и лимфатических узлов, окислительно-восстановительного метаболизма лимфоцитов.

Установлено, что у практически здоровых людей связи эндогенного мелатонина с показателями клеточных элементов иммунной системы неодинаковы в разное время суток, а характер суточных вариаций мелатонина отражается на его взаимоотношениях с иммунологическими параметрами.

Мелатонин с одной стороны является ведущим синхронизатором

циркадианных ритмов у млекопитающих и человека, а с другой - эффективным иммуномодулятором. Известно, что любое заболевание сопровождается рассогласованием эндогенных биологических ритмов организма. Такое рассогласование обозначается понятием "десинхроноз". У пациентов с атопическим дерматитом и с бронхиальной астмой выявлено снижение уровня мелатонина в сыворотке периферической крови и отсутствие его суточных вариаций, это свидетельствует о нарушении центральной регуляции циркадианной ритмичности функционирования клеток иммунной системы и о десинхронозе. Включение мелаксена в комплексную терапию больных с атопическим дерматитом и с бронхиальной астмой привело к более выраженному клинико-иммунологическому эффекту, вероятно, за счёт его иммунопотенцирующего и синхронизирующего действия на структуру и функциональную активность пула иммунокомпетентных клеток.

В настящей работе было проведено изучение феномена хроночувствительности иммунокомпетентных клеток больных хроническими неспецифическими воспалительными заболеваними внутренних женских половых органов к ридостину (индуктору интерфероногенеза) и оценка клинико-иммунологической эффективности его хронотерапевтических схем. После включения в курс лечения ридостина по хронотерапевтической схеме отмечается нормализация содержания естественных киллерных клеток и активированных моноцитов. Это сочетается с большей клинической эффективностью хронотерапии, сокращением длительности лечения и снижением дозы препарата.

Таким образом, хроночувствительность клеточных элементов иммунной системы к модулирующим воздействиям является одним из основных компонентов временной организации регуляции иммунных функций. Этот феномен может быть связан с биоритмами метаболического потенциала и рецепторного аппарата иммунокомпетентных клеток и имеет большое значение для разработки оптимизированных хронотерапевтических схем коррекции нарушений морфофункционального состояния иммунокомпетентных клеток.

выводы

1. У крыс \Vistar и у мышей линии СВА после содержания животных при постоянном освещении сглаживаются имеющиеся при нормальном режиме освещения суточные колебания количества лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови, общего количества клеток тимуса, селезёнки и паховых лимфатических узлов, субпопуляционного состава лимфоцитов тимуса и паховых лимфатических узлов. Повышается утренняя активность НАДФ-диафоразы и ЛДГ в лимфоцитах крови, её максимальная активность смещается с вечернего на утреннее время.

2. Мелатонин восстанавливает изменённые суточные вариации клеточного и субпопуляционного состава тимуса. Амитриптилин восстанавливает нарушенные суточные вариации клеточного состава тимуса и паховых лимфатических узлов. Препараты оказывают синхронизирующее влияние на окислительно-восстановительный метаболизм лимфоцитов животных в условиях постоянного освещения.

3. У здоровых людей суточные вариации концентрации мелатонина в слюне индивидуальны и отражают его взаимоотношения с иммунокомпетентными клетками (при высоком вечернем уровне мелатонина снижены среднесуточный процент фагоцитарующих гранулоцитов, процент НЬА-011+ моноцитов и СО 16' лимфоцитов, а соотношение СВ4+/СБ8+ повышено. При средним утреннем уровне мелатонина повышено среднесуточное содержание в крови НЬА-ОЯ+ моноцитов, СБ16+ лимфоцитов и соотношение С04\'СП8~, но снижены среднесуточные уровни процента СОЗ+ и СИ8+ лимфоцитов).

4. У больных с атопическим дерматитом и с бронхиальной астмой, в отличие от здоровых, отсутствуют суточные вариации уровня мелатонина в крови, снижена вечерняя концентрация гормона. У больных с атопическим дерматитом отсутствуют корреляционные связи концентрации мелатонина в крови с показателями иммупокомпетентных клеток.

5. При лечении больных с атопическим дерматитом с введением мелаксена происходят изменения иммунного статуса, имеющего положительное прогностическое значение (появляются суточные колебания субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток, снижается процент Т-хелперов (СБ4+), увеличивается относительное содержание Т-эффекторов (СБ8+), повышается процент фагоцитирующих моноцитов и гранулоцитов, снижается показатель эффекторных функций, снижается содержание в сыворотке крови Г§Е и 1Ь-4, повышается активность окислительно-восстановительных ферментов в лимфоцитах крови). Это сочетается с большей клинической эффективностью данного метода лечения по сравнению с общепринятой терапией (более низкий балл по шкале ЗССЖАО).

6. Лечение больных с бронхиальной астмой с добавлением мелаксена более эффективно по сравнению со стандартным курсом, о чём свидетельствует увеличение: фактической жизненной ёмкости лёгких, процента жизненной ёмкости лёгких к должностной, объёма форсированного выдоха за 1-ю секунду, процента объёма форсированного выдоха за 1-ю секунду к должностному. Наблюдается нормализация процентного содержания СБЗ+, СГ)4\ СБ8+, СЭ20+, СЭ1б+ лимфоцитов, соотношения С047СБ8^. Изменяются параметры суточных ритмов физиологических показателей: снижается мезор частоты дыхания, смещаются на более раннее время суток акрофазы частоты дыхания, длительности индивидуальной минуты и тревожности.

7. Лечение пациенток с хроническими неспецифическими воспалительными заболеваними с назначением ридостина по хронотерапевтической схеме увеличивает в 3 раза количество пациенток с хорошим эффектом от лечения. Количество пациенток с частичным эффектом от лечения не изменяется.

чувствительности к нему лимфоцитов крови приводит к дальнейшему нарушению показателей клеток иммунной системы: еще больше снижается процент HLA-DR+ моноцитов, содержание B-лимфоцитов, натуральных киллерных клеток (CD16+), повышается процент лимфоцитов с фенотипом Т-хелперов (CD4+) и Т-супрессоров/киллеров (CD8+).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Труфакин В.А., Шурлыгина A.B., Дергачева Т.Н., Литвиненко Г. И., Вербицкая Л. В. Хронобиология иммунной системы // Вестник Российской академии медицинских наук. -1999. - № 4.-С. 40 - 43, автора - 0,08 п.л.

2. Литвиненко Г. И., Вербицкая Л. В., Тараданова Л. В., Мельникова Е. В., Тендитник М. В., Шурлыгина А. В., Труфакин В. А. Влияние амитриптилина на суточные колебания клеточного состава органов иммунной системы крыс при экспериментальном десинхронозе // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2000.-№11.-С. 589-592, автора - 0,05 п.л.

3. Литвиненко Г. И., Шурлыгина А. В., Труфакин В. А. Влияние амитриптилина на колебания активности ферментов окислительно-восстановительного метаболизма лимфоцитов крыс в течении суток при экспериментальном десинхронозе // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2001. - № 5. - С. 577 - 579, автора - 0,08 п.л.

4. Литвиненко Г. И., Нимаев В. В., Хабаров Д. В., Шурлыгина А. В., Труфакин В. А. Суточные вариации чувствительности дегидрогеназ лимфоцитов крови больных лимфедемой к перфузату ксеноселезёнки in vitro // Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. - 2001. - № 4. - С. 108 - 109, автора - 0,05 п.л.

5. Литвиненко Г. И., Шурлыгина А. В., Малышева О. А., Кудаева О. Т., Ширинский В. С., Козлов В. А., Труфакин В. А. Изучение суточных вариаций

содержания мелатонина в слюне и иммунокомпетентных клеток в крови у здоровых людей // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2002. - № 5. - С. 578 - 581, автора - 0,05 п.л.

6. Литвиненко Г. И., Шурлыгина А. В., Дергачева Т. И., Мельникова Е. В., Вербицкая Л. В., Кречетова Е. В., Труфакин В. А. Хронотерапевтический режим применения ридостина в целях коррекции нарушений иммунного статуса у пациенток с хроническими неспецифическими воспалительными гинекологическими заболеваниями // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2004. - Т.4, №6 - С. 12 -15, автора - 0,07 п.л.

7. Литвиненко Г. И., Шурлыгина А. В., Вербицкая Л. В., Пантелеева Н. Г., Мельникова Е. В., Труфакин В. А. Суточная динамика клеточного состава тимуса и лимфоузлов мышей в норме, при постоянном освещении и при введении мелатонина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2005. - Т. 140, № 8. - С. 181 - 185, автора - 0,10 п.л.

8. Литвиненко Г. И., Шурлыгина А. В., Ширинский В. С., Непомнящих В. М., Леонова М. И., Круглеева О. Л., Григорьева А. Е., Козлов В. А., Труфакин В. А. Суточные вариации иммунного статуса и содержания мелатонина в сыворотке крови у пациентов с бронхиальной астмой // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2006. - Т, 142, № 11. - С. 553 - 556, автора - 0,05 п.л.

9. Ширинский В. С., Непомнящих В. М., Леонова М. И., Круглеева О. Л., Кожевников В. С., Соловьёва Н. Ю., Шурлыгина А. В., Литвиненко Г. И., Ширинский И. В., Малышева О. А. Эффективность и безопасность применения мелатонина у больных атопическим дерматитом // Медицинская иммунология. - 2006. - Т.8, № 5-6. - С. 707 - 714, автора - 0,10 п.л.

10. Шурлыгина А. В., Литвиненко Г. И., Дергачёва Т. И., Ковшик И. Г.,

Абдалова А. М., Пантелеева Н. Г., Мельникова Е. В., Труфакин В. А.

Хроноэффективность экзогенных цитокинов // Российский

иммунологический журнал. - 2008. - Т. 2 (11), № 2-3. - С. 138, автора - 0,03

11. Литвиненко Г. И. Хронофармакологические свойства мелатонина // Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. - 2010. - Том 30, № 6. - С. 82 - 88, автора - 0,8 п.л.

12. Литвиненко Г. И., Вербицкая Л. В., Шурлыгина А. В. Возможности коррекции экспериментального десинхроноза в лимфоидной системе путем фармакологического воздействия на синтез мелатонина в эпифизе // Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфологии : труды НИИКиЭЛ СО РАМН. - Новосибирск, 2000. - С. 173 - 174, автора - 0,08п.л.

13. Литвиненко Г. И., Шурлыгина А. В., Труфакин В. А. Влияние амитриптилина на суточные колебания морфоцитохимических показателей органов иммунной системы крыс при экспериментальном десинхронозе // Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии: тезисы докладов 4-го Конгресса РААКИ. - Москва, 2001. - Т.2. - С. 285, автора - 0,04 п.л.

14. Литвиненко Г. И., Шурлыгина А. В., Ширинский В. С., Труфакин В. А. Взаимоотношения суточных вариаций эндогенного мелатонина с показателями иммунного статуса у здоровых людей // Материалы 4 съезда физиологов Сибири. - Новосибирск, 2002. - С. 156 - 157, автора - 0,06 п.л.

15. Труфакин В. А., Шурлыгина А. В., Дергачёва Т. И., Литвиненко Г. И. Биоритмы цитокиновой иммунорегуляции // Материалы 4 съезда физиологов Сибири, 2002. - С. 279, автора - 0,03п.л.

16. Литвиненко Г. И., Шурлыгина A.B., Дергачёва Т.Н., Мельникова Е. В. Хронотерапевтический режим применения ридостина в целях коррекции нарушений иммунного статуса у пациенток с хроническими неспецифическими воспалительными гинекологическими заболеваниями // Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфологии : материалы научной конференции с международным участием. - Новосибирск, 2002. -С. 230 - 232, автора - 0,09 п.л.

17. Труфакин В. А., Шурлыгина A.B., Ширинский B.C., Литвиненко Г. И., Кудаева О. Т., Козлов В. А. Суточный ритм эндогенного мелатонина как фактор, влияющий на показатели иммунного статуса у здоровых людей//Аллергология и иммунология : матер. 5-го Съезда иммунологов и аллергологов СНГ. - 2003. - Т. 4, №2. - С.70, автора - 0,02 п.л.

18. Дергачева Т.Н., Литвиненко Г. И., Мельникова Е. В., Вербицкая Л. В., Кречетова Е. В., Шурлыгина А. В., Труфакин В. А. Иммунокорригирующая хронотерапия пациенток с хроническими неспецифическими воспалительными гинекологическими заболеваниями II Проблемы лимфологии и интерстициального массопереноса : материалы научной конференции с международным участием - Новосибирск, 2004. - Т. 10 (1). - С.245-248, автора - 0,07 п.л.

19. Дергачева Т. И., Кречетова Е. В., Шурлыгина A.B., Литвиненко Г. И., Мельникова Е. В., Вербицкая Л. В. Коррекция нарушений иммунного статуса у пациенток с воспалительными заболеваниями матки и придатков // Актуальные вопросы современной медицины : материалы XYI научно-практической конференции. - Новосибирск. 2004. - С. 4-5, автора -0,04 п.л.

20. Литвиненко Г. И., Шурлыгина А. В., Мельникова Е. В., Труфакин В. А. Суточные вариации клеточного состава тимуса и лимфоузлов мышей в норме, при постоянном освещении и при введении мелатонина//Проблемы лимфологии и интерстициального массопереноса : материалы научной конференции с международным участием. - Новосибирск, 2004. - Т. 10(1). - С. 245 - 248, автора - 0,13 п.л.

21. Шурлыгина A.B., Литвиненко Г. И.,Мельникова Е. В., Труфакин В. А. Суточные вариации эндогенного мелатонина и морфофункциональные показатели лейкоцитов крови у здоровых людей // Проблемы лимфологии и интерстициального массопереноса : материалы

научной конференции с международным участием. - Новосибирск, 2004. -Т. 10(1). - С. 209 - 212, автора - 0,16 п.л.

22. Литвиненко Г. И., Шурлыгина А. В., Труфакин В. А., Кудаева О. Т., Ширинский В. С., Козлов В. А. Взаимоотношения мелатонина и иммунного статуса в течении суток у здоровых людей // Физиология иммунной системы, перспективные подходы к диагностике и терапии иммунопатологий и аллергических заболеваний : материалы V симпозиума. - Москва, 2006. -С. 43- 44, автора - 0,04 п.л.

23. Литвиненко Г. И., Шурлыгина А. В., Ширинский В. С., Непомнящих В. М., Труфакин В. А., Козлов В. А. Сравнительная динамика иммунного статуса на протяжении суток у пациентов с атопическим дерматитом до и после лечения без мелаксена и с мелаксеном // 1 -й Сибирский съезд лимфологов с международным участием. - Новосибирск, 2006. - С. 185 -187, автора - 0, 08 п.л.

24. Ширинский В. С., Непомнящих В. М., Круглеева О. Л., Ширинский И. В., Шурлыгина А. В., Шурлыгина А. В., Козлов В. А. Применение мелатонина у больных атопическим дерматитом // V Всемирный конгресс по иммунопатологии и аллерглогии : материалы конгресса - Москва, 2007. - 27, автора - 0,02 п.л.

25. Ширинский В. С., Непомнящих В. М., Леонова М. И., Круглеева О. Л., Шурлыгина А. В., Литвиненко Г. И., Кожевников В. С., Ширинский И. В., Малышева О. А. Эффективность и безопасность применения мелатонина у больных атопическим дерматитом // Иммунопатогенез и иммунотерапия основных заболеваний человека: от эксперимента к клинике : материалы 7-й отчётной конференции ГУ НИИКИ СО РАМН. - Новосибирск. - 2006. - С. 285 - 286, автора - 0,03 п.л.

26. Ширинский В. С., Непомнящих В. М., Леонова М. И.,

Шурлыгина А. В., Литвиненко Г. И., Кожевников В. С., Ширинский И. В.,

Малышева О. А. Изучение суточных вариаций иммунокомпетентных клеток

крови при ТЬ-1 и ТЬ-2 опосредованных заболеваниях // Иммунопатогенез и иммунотерапия основных заболеваний человека: от эксперимента к клинике : материалы 7-й отчётной конференции ГУ НИИКИ СО РАМН. - Новосибирск, 2006. - С. 244 - 247, автора - 0,06 п.л.

27. Литвиненко Г. И., Шурлыгина А. В., Труфакин В. А., Вербицкая Л. В., Мельникова Е. В., Пантелеева Н. Г., Тендитник М. В., Тараданова Л. В. Коррекция амитриптилином десинхронизирующего влияния постоянного освещения на клеточный состав органов иммунной системы крыс // Морфология и хирургия : сборник научных трудов. Выпуск 6. / Под ред. проф. В. А.Головнева и проф. А. В.Волкова. - Новосибирск: Сибмедиздат НГМУ, 2007. - С.86-90, автора - 0,06п.л.

28. Ширинский В. С., Непомнящих В. М., Леонова М. И., Круглеева О. Л., Кожевников В. С., Соловьёва Н. Ю., Шурлыгина А. В., Литвиненко Г. И., Ширинский И. В., Малышева О. А. Иммунофармакодинамика и эффективность гормона мелатонина у больных атопическим дерматитом// Тезисы форума. Российский иммунологический журнал. - 2008. - Т. 2(11), № 2-3.-С. 221, автора-0,01 п.л.

29. Шурлыгина А. В., Мичурина С. В., Вербицкая Л. В., Литвиненко Г. И., Ковшик И. Г., Пантелеева Н. Г., Мельникова Е. В., Труфакин В. А. Нарушение циркадных ритмов как фактор, вызывающий дестабилизацию функций иммунной системы// Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии : материалы Международной научной конференции. - Новосибирск, 2008. - С. 219-220, автора - 0,03 п.л.

30. Бородин Ю. И., Литвиненко Г. И., Шурлыгина А. В. Зависимость субпопуляционного состава клеток тимуса от времени суток, режима освещения и введения мелатонина // Морфология. X Конгресс Международной Ассоциации лимфологов. - 2010. - Т. 137, №4 - С.39, автора - 0,04 п.л.

Отпечатано в типографии Новосибирского Государственного технического университета 630092, г.Новосибирск, пр. К. Маркса, 20, Тел./факс (383) 346-08-57 Формат 60 х 84/16. Объем 1,75 п.л. Тираж 100 экз. Заказ 390. Подписано в печать 04.07.2011 г.

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Литвиненко, Галина Ивановна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Структурно-временная организация иммунной системы в норме и при патологии.

1.2. Влияние мелатонина на клетки иммунной системы.

1.3. Ферментный статус лимфоцитов в норме, при активации и патологии.

1.4. Роль морфофункциональных нарушений клеток иммунной системы при бронхиальной астме и атопическом дерматите.

1.5. Роль морфофункциональных нарушений клеток иммунной системы в патогенезе неспецифических воспалительных заболеваниях придатков и матки.

Глава 2. Материалы и методы исследования.,.

Глава 3. Результаты собственных исследований.

3.1. Количество клеток и их морфоцитохимические показатели в периферической крови и в органах иммунной системы крыс \Vistar в зависимости от времени суток, режимов освещения и введения индуктора синтеза мелатонина амитриптилина.

3.1.1. Количество клеток в крови и в органах иммунной системы крыс в различное время суток при нормальном режиме освещения.

3.1.2. Активность дегидрогеназ лимфоцитов крови крыс \Vistar в различное время суток при нормальном режиме освещения.

3.1.3. Количество клеток в крови и в органах иммунной системы крыс в различное время суток после 14-ти суточного постоянного освещения.

3.1.4. Активность дегидрогеназ лимфоцитов крови крыс Wistar в различное время суток после 14-суточного постоянного освещения.

3.1.5. Количество клеток в крови и в органах иммунной системы крыс Wistar в различное время суток после 14-ти суточного постоянного освещения с последующим введением амитриптилина.

3.1.6. Активность дегидрогеназ лимфоцитов крови крыс Wistar в различное время суток после 14-суточного постоянного освещения с последующим введением амитриптилина.

3.2. Субпопуляционный состав иммунокомпетентных клеток в лимфоидных органах мышей линии СВА в различное время суток в зависимости от режима освещения и введения мелатонина.

3.2.1. Субпопуляционный состав иммунокомпетентных клеток в лимфоидных органах, мышей линии СВА в различное время суток при нормальном режиме освещения.

3.2.2. Субпопуляционный состав иммунокомпетентных клеток в лимфоидных органах мышей линии СВА в различное время суток при постоянном режиме освещения.

3.2.3. Субпопуляционный состав иммунокомпетентных клеток в лимфоидных органах мышей линии СВА в различное время суток при постоянном режиме освещения с последующим введением мелатонина.

3.3. Содержания мелатонина в слюне и иммунокомпетентных клеток в периферической крови у здоровых людей в различное время суток.

3.4. Морфофункциональные показатели клеток иммунной системы и содержание мелатонина в сыворотке крови у пациентов с атопическим дерматитом в различное время суток.

3.4.1. Морфофункциональные показатели клеток иммунной системы и содержание мелатонина в сыворотке крови у пациентов с атопическим дерматитом различное время суток до лечения.

3.4.2. Морфофункциональные показатели клеток иммунной системы и содержание мелатонина в сыворотке крови у пациентов с атопическим дерматитом различное время суток после лечения по общепринятой схеме.

3.4.3. Морфофункциональные показатели клеток иммунной системы и содержание мелатонина в сыворотке крови у пациентов с атопическим дерматитом различное время суток после добавления к лечению мелаксена.Л

3.5. Морфофункциональные показатели клеток иммунной системы и содержание мелатонина в сыворотке крови у пациентов с бронхиальной астмой в различное время суток.

3.5.1. Морфофункциональные показатели клеток иммунной системы и содержание мелатонина в сыворотке крови у пациентов с бронхиальной астмой различное время суток до лечения.

3.5.2. Морфофункциональные показатели клеток иммунной системы и содержание*мелатонина в сыворотке крови у пациентов с бронхиальной астмой различное время суток после лечения по общепринятой схеме.

3.5.3. Морфофункциональные показатели клеток иммунной- системы, и содержание мелатонина в^сыворотке крови у пациентов с,бронхиальной астмой различное время суток после лечения с добавлением мелаксена.

3.6. Хронотерапевтический режим применения ридостина в целях коррекции нарушений иммунного статуса у пациенток с хроническими неспецифическими воспалительными гинекологическими заболеваниями

3.6.1. Характеристика морфоцитохимических параметров клеток иммунной системы пациенток, больных хроническими неспецифическими воспалительными гинекологическими заболеваниями до лечения.

3.6.2. Характеристика клеток иммунной системы пациенток, больных хроническими неспецифическими воспалительными гинекологическими заболеваниями, пролеченных ридостином без учёта чувствительности лимфоцитов к препарату.

3.6.3. Характеристика клеток иммунной системы у пациенток, больных хроническими неспецифическими воспалительными гинекологическими заболеваниями, после лечения ридостином с учётом хроночувствительности к нему лимфоцитов.

Обсуждение результатов исследования.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфофункциональные изменения в клетках иммунной системы при нарушении светового режима и иммунопатологии."

Актуальность проблемы.

Особенностью биологии иммунокомпетентных клеток является чрезвычайная динамичность за счет постоянно идущих процессов пролиферации, дифференцировки, миграции, кооперации, апоптоза [Труфакин В.А., 1980; Бородин Ю.И. с соавт., 1992; Труфакин В.А. с соавт., 1996], что обусловливает необходимость ее рассмотрения в'пространственно-временном аспекте.

Организация во времени является таким же неотъемлемым свойством живых систем, как и их упорядоченное пространственное строение [Халберг Ф., 1964; Алякринский E.G., 1975; Reinberg А. et al., 1978; Goldshcneider J. et al., 1981; Ciappi G. et al., 1982; Rose S.R. et al., 1989]. Биоритмологическая, программа иммунной' системы - это составная часть общей биоритмологической программы организма [Лебедев К.А. с соавт., 1990; Баженов Л.Г. с соавт., 1991; Fernandes G., 1989]. Характер структурно-временной организации иммунной- системы, определяемый* выраженностью и направленностью, внутри- и межсистемных связей между биоритмами-отдельных параметров, по-видимому, является генетически детерминированным и отражает ее функциональное состояние. Структурно-временная организация иммунной системы представлена комплексом биоритмов основных динамических процессов — пролиферации, дифференцировки, миграции, метаболизма и гибели иммунокомпетентных клеток, находящихся между собой в определенных фазовых взаимоотношениях. Этот «внутренний временной-, порядок», по-видимому, обусловливает оптимальный уровень функционирования системы в каждый данный момент времени [Бородин Ю.И. с соавт., 1992; Труфакин В.А. с соавт, 1996].

Различным заболеваниям, которые сопровождаются иммунными нарушениями, сопутствует или предшествует рассогласование суточных ритмов функционирования клеток иммунной системы [Лозовой В.П. с соавт., 1979; Махонова JI.A. с соавт., 1979; Труфакин В.А., 1980; Туаев B.C. с соавт., 1981; Martini Е. et al., 1988; Fei G.H. et al., 2004]. Нарушается также и синтез гормона эпифиза мелатонина, который обеспечивает сохранность биологических ритмов всего организма, в том числе и иммунной системы, на протяжении суток [Анисимов В.Н. с соавт., 1990; Кветная Т.В. с соавт., 2004; Schwarz W. et al., 1988; West S.K. et al., 1992].

При нарушении циркадианных ритмов иммунной системы в эксперименте у животных и при различных заболеваниях у человека наблюдаются расстройства функций иммунокомпетентных клеток, выражающиеся в иммунодефицитных, аутоиммунных, аллергических состояниях [Труфакин В.А., 1980; Бородин Ю.И. с соавт., 1992].

В' литературе очень мало сведений о суточных колебаниях морфофункционального состояния иммунокомпетентных клеток при иммунопатологии и о попытках восстановления^ нормального циркадианного биологического ритма, ' функционирования иммунной' системы при искусственно вызванном десинхронозе и при заболеваниях иммунопатологического генеза - при бронхиальной астме и атопическом дерматите.

Поэтому актуальным является изучение циркадианных ритмов функционирования клеток иммунной системы при нарушениях светового режима и при заболеваниях, в патогенезе которых ведущую роль играют иммунологические дисфункции - при бронхиальной астме, атопическом дерматите, хроническом воспалении. Важной задачей является и исследование возможности их медикаментозной коррекции препаратами мелатонина (мелаксен, мелатонин) и индукторами его синтеза. Так как основная роль этого гормона - хронотропная, которая сводится к синхронизации колебательных процессов в организме, формированию более чёткого циркадианного периодизма. Между тем его дезорганизацию в виде устойчивого десинхроноза следует ожидать при различных формах хронической патологии [Арушанян Э.Б. с соавт., 2003].

В тесной связи с целями хронопатологических исследований находятся ч задачи хронокоррекции нарушенных функций иммунокомпетентных клеток. Наличие выраженной цикличности чувствительности иммунной системы к внешним воздействиям открывает перспективы для хронотерапии в иммунопатологии [Труфакин В.А. с соавт., 1991; Шурлыгина A.Bi, Труфакин В.А., 1993; Halberg F., 1988; Fernandes G., 1989]. Базой для хронофармакологии являются биоритмологические исследования, результаты которых позволяют не только назначать лекарственные средства в оптимальном- режиме (максимум концентрации лекарства в кровотоке должен совпадать с. акрофазой ритма того параметра, на который направлено» воздействие)^ но- й< уменьшать дозу лекарства, сохраняя при этом максимальный, эффект [Комаров Ф.И. с соавт., 2005].

Согласно общей концепции хронотерапии Е. Haus (1974),. при обычной терапии равномерно повторяемое одинаковое лекарственное воздействие каждый раз вызывает разный эффект вплоть до развития побочных реакций. При хронотерапии, когда препарат назначается в разных дозах на протяжении суток в зависимости от фаз биоритмов чувствительности к нему органов и клеток-мишеней, можно получить одинаковую желаемую реакцию без риска развития побочных эффектов. Показано, что существуют суточные вариации чувствительности лимфоцитов к. некоторым иммуномодуляторам, цитокинам [Шурлыгина А.В:, Ковшик И.Г., Вербицкая Л.В.,. Труфакин В.А., 1999; Шурлыгина A.B., Ковшик И.Г. с соавт., 2000; ЛитвиненкоГ.И., Нимаев В.В. с соавт., 2001; Труфакин В.А., Шурлыгина A.B., Дергачёва Т.И., Литвиненко Г.И., 2002]. Использование принципов иммунокорригирующей хронотерапии в лечении пациенток, больных воспалительными гинекологическими заболеваниями, в частности, применение препаратов тимуса во время наличия реакции на них дегидрогеназ лимфоцитов крови позволило повысить эффективность лечения с 45% до 75% и снизить дозу препаратов в 2 раза [Шурлыгина АВ. с соавт., 1998].

Однако в литературе существуют лишь немногочисленные сведения о хронобиологических режимах применения лекарств, оказывающих влияние на клетки иммунной системы [Шурлыгина А.В., Труфакин В.А., 1993; Шурлыгина А.В., Ковшик И.Г., Вербицкая JI.B., Труфакин В.А., 2000; Труфакин В.А., Шурлыгина А.В., 2001; Kemeny М.М. et al., 1992; Masera R.G. et al., 1994; Perpoint B. et al., 1995]. Поскольку в клинике иммунопатологии всё большее внимание уделяется цитокинотерапии, представляется- актуальным изучение хронобиологических эффектов индуктора синтеза интерферона ридостина при вторичных иммунодефицитных состояниях (воспалительные гинекологические заболевания (ВГЗ).

Цель работы. Исследовать морфофункциональное состояние клеток иммунной системы в разное время суток при нормальном и нарушенном световых режимах и при развитии иммунопатологии в эксперименте и клинике. Разработать оптимизированные методы хроноиммунокоррекции:

Задачи исследования.

2. Определить динамику в течение суток количества и субпопуляционного состава, энергетического метаболизма лимфоцитов периферической крови и лимфоидных органов у крыс Wistar и мышей линии СВА при экспериментальном десинхронозе.

3. Исследовать влияние фармакологической стимуляции функции эпифиза амитриптилином и мелатонином на динамику в течение суток количества и субпопуляционного состава, энергетического метаболизма лимфоцитов периферической крови и лимфоидных органов у крыс и мышей линии СВА с экспериментальным десинхронозом.

6. Изучить влияние синтетического аналога мелатонина (мелаксена) на динамику в течение суток морфофункциональных параметров иммунокомпетентных клеток периферической крови при заболеваниях, сопровождающихся- нарушением иммунного статуса у людей (бронхиальная астма, атопический дерматит).

7. Исследовать хроноэффективность применения индуктора синтеза интерферона ридостина- на клетки иммунной системы у людей с иммунодефицитным состоянием (неспецифические- воспалительные гинекологические заболевания).

Впервые выявлено синхронизирующее влияние гормона эпифиза мелатонина и индуктора его синтеза амитриптилина на клетки иммунной системы животных с экспериментальным десинхронозом, вызванным постоянным освещением.

Впервые обнаружены нарушения суточной динамики субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови, уровня мелатонина и цитокинов в крови у больных бронхиальной астмой и атопическим дерматитом и определена воможность использования в их лечений корректора циркадианных ритмов мелатонина.

Научно-практическая значимость работы. Результаты работы расширяют знания, о*- гистофизиологии лимфоидной ткани в условиях нормального светового режима, при? десинхронозе, иммунопатологии, о механизмах регуляции функций иммунокомпетентных клеток с позиций структурно-временной организации. иммунной системы. Показан хронокорригирующий и иммуномодулирующий эффект амитриптилина и мелатонина при экспериментальном» десинхронозе у животных. В' этом-' отношении исследование вносит значительный вклад в развитие нового направления — изучение хронобиологических закономерностей функционирования иммунокомпетентных клеток.

Результаты исследования показывают эффективность применения биоритмологического подхода для использования иммуномодулирующих препаратов в лечении вторичных иммунодефицитных состояний. Разработаны хронотерапевтические схемы применения ридостина при неспецифических воспалительных гинекологических заболеваниях.

Основные положения, выносимые на защиту:

4. У людей при заболеваниях, сопровождающихся нарушениями иммунного статуса1 (при бронхиальной астме, при атопическом дерматите) изменены суточные колебания» субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови, активности их окислительно-восстановительных ферментов и снижен уровень мелатонина в сыворотке крови. Применение мелаксена в комплексном лечении бронхиальной астмы, атопического дерматита оказывает иммуномодулирующий эффект, перестраевает суточноую динамику субпопуляционного состава и окислительно-восстановительного метаболизма лимфоцитов периферической крови, повышает клиническую эффективность лечения.

5. Хронотерапевтический принцип применения ридостина при хронических неспецифических воспалительных гинекологических заболеваниях повышает клиническую эффективность лечения и приводит к более полному восстановлению морфофункциональных характеристик клеток иммунной системы.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены и обсуждены на: съезде физиологов России (Казань, 2001), 4 конгрессе РААКИ «Современные проблемы аллергологии и иммунофармакологии» (Москва, 2001), 4 съезде физиологов Сибири (Новосибирск, 2002), научной конференции с международным участием «Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфологии» (Новосибирск, 2002), 5съезде иммунологов и аллергологов СНГ «Аллергология и иммунология» (Москва,

2003), научной конференции «Проблемы лимфологии и интерстициального массопереноса» (Новосибирск, 2004), 16 научно-практической конференции «Актуальные вопросы современной медицины» (Новосибирск, 2004), 2 международном симпозиуме «Проблемы ритмов в естествознании»'-(Москва,

2004), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной памяти профессора М.Я. Субботина (Новосибирск, 2004), конгрессе «Иммунитет и болезни: от теории к практике» (Москва, 2005), 5 симпозиуме «Физиология^ иммунной системы, перспективные подходы к диагностике и терапии иммунопатологий и аллергических заболеваний» (Москва, 2006), 1 Сибирском съезде лимфологов с международным участием (Новосибирск, 2006), 7 отчётной конференции ГУ НИИКИ СО РАМН «Иммунопатогенез и иммунотерапия основных заболеваний человека: от эксперимента к клинике» (Новосибирск, 2006), международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 2007), Международном конгрессе «Эндоэкологическая медицина» (Новосибирск, 2007), международной конференции «Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии» (Новосибирск, 2008), 10 Конгрессе Международной ассоциации морфологов (Ярославль, 2010), межрегиональном форуме «Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии — междисциплинарные проблемы» (Санкт-Петербург, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 30 печатных работ, в том числе 11 статей в изданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикации результатов диссертационных исследований.

Объём и структура работы. Диссертация написана в традиционном стиле и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, списка литературы, иллюстрирована 35 таблицами и 31 рисунком. Список литературы включает 470 источников (267 отечественных и 203 зарубежных авторов). Диссертация изложена на 319 страницах машинописного текста.

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Литвиненко, Галина Ивановна

ВЫВОДЫ.

1. У крыс Wistar и у мышей линии СВА после содержания животных при постоянном освещении сглаживаются имеющиеся при нормальном режиме освещения суточные колебания количества лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови, обшего количества клеток тимуса, селезёнки и паховых лимфатических узлов, субпопуляционного состава лимфоцитов тимуса и паховых лимфатических узлов. Повышается утренняя активность НАДФ-диафоразы и ЛДГ в лимфоцитах крови, её максимальная активность смещается с вечернего на утреннее время.

3. У здоровых людей суточные вариации концентрации мелатонина в слюне индивидуальны и отражают его1 взаимоотношения с иммунокомпетентными клетками (при высоком вечернем уровне мелатонина снижены среднесуточный процент фагоцитарующих гранулоцитов, процент НЬА-011+ моноцитов и СБ16+ лимфоцитов, а соотношение СБ4+/С08+ повышено. При средним утреннем уровне мелатонина повышено среднесуточное содержание в крови НЬА-ОК+ моноцитов, СВ16+ лимфоцитов и соотношение СВ4+/С08+, но снижены среднесуточные уровни процента СБЗ+ и СВ8+ лимфоцитов).

5. При лечении больных с атопическим дерматитом с введением мелаксена происходят изменения иммунного статуса, имеющего положительное прогностическое значение (появляются суточные колебания субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток, снижается процент Т-хелперов (CD4+), увеличивается относительное содержание Т-эффекторов (CD8+), повышается процент фагоцитирующих моноцитов и гранулоцитов, снижается показатель эффекторных функций, снижается* содержание в сыворотке крови IgE и IL-4, повышается активность окислительно-восстановительных ферментов в-лимфоцитах крови). Этс сочетается с большей клинической эффективностью данного метода лечения по сравнению с общепринятой терапией (более низкий балл по шкале-SCORAD).

6. Лечение больных с бронхиальной астмой- с добавлением мелаксена более эффективно по сравнению со стандартным курсом-, о чём свидетельствует увеличение: фактической* жизненной ёмкости лёгких, процента, жизненной ёмкости^ лёгких к должностной, объёма, форсированного «выдоха за- 1-ю секунду, процента объёма форсированного выдоха за 1-ю секунду к должностному. Наблюдается нормализация процентного содержания CD3+, CD4+, CD8+, CD20+, CD16+ лимфоцитов, соотношения CD4+/CD8+. Изменяются параметры суточных ритмов, физиологических показателей: снижается мезор частоты дыхания, смещаются на более раннее время суток акрофазы частоты дыхания, длительности индивидуальной минуты и тревожности.

8. Хронотерапевтическое назначение ридостина нормализует количество естественных киллерных клеток и активированных моноцитов крови, повышает активности СДГ и ЛДГ лимфоцитов. Лечение ридостином без учета чувствительности к нему лимфоцитов крови приводит к дальнейшему нарушению показателей клеток иммунной системы: еще больше снижается процент НЬА-ВЯ+ моноцитов, содержание В-лимфоцитов, натуральных киллерных клеток (С016+), повышается процент лимфоцитов с фенотипом Т-хелперов (СБ4+) и Т-супрессоров/киллеров (СВ8+).

Заключение.

Десинхронизация суточных биоритмов функционирования иммунной системы может являться как причиной, так и следствием нарушения функций исследованных иммунокомпетентных клеток и развития иммунопатологических процессов. В нашем исследовании, проведенном на животных, выявлено десинхронизирующее влияние постоянного освещения на суточные колебания количества лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови, общего количества клеток тимуса, селезёнки и лимфатических узлов, субпопуляционного состава лимфоцитов тимуса, лимфатических узлов, окислительно-восстановительного метаболизма лимфоцитов. При введении животным, находившимся при постоянном* освещении, мелатонина или амитриптилина наблюдалось восстановление суточных вариаций морфофункциональных показателей, клеточного- состава тимуса и лимфатических узлов, окислительно-восстановительного метаболизма лимфоцитов.

Установлено, что у практически здоровых людей связи' эндогенного мелатонина с показателями клеточных элементов иммунной* системы, неодинаковы в разное время- суток, а» характер суточных вариаций мелатонина отражается на его взаимоотношениях с иммунологическими параметрами.

Достигнутый прогресс в понимании многофакторных механизмов формирования персистирующего воспаления кожи при атопическом дерматите и бронхов при бронхиальной астме, несомненно, способствовали совершенствованию комплексного лечения больных. Однако это пока не привело к появлению новых методов лечения, основанных на глубоком понимании ключевого звена патогенеза этих заболеваний - иммунных нарушений, которые могли бы не только эффективно помогать в период обострения, но и профилактировать их рецидивы, контролируя течение воспалительного процесса. Одним из подходов к разработке новых методов лечения могут быть «точечные» вмешательства, подобные анти-ТЫБ, анти-1Ь-1 терапии ревматоидного артрита, других аутоиммунных заболеваний, используемые ввиде монотерапии или в сочетании с другими локальными, системными противовоспалительными средствами. Другой подход связан с применением соединений, в том числе, эндогенного присхождения, обладающих широким спектром биологической и иммуномодулирующей активности. К числу таких соединений относится мелатонин, который с одной стороны является ведущим синхронизатором циркадианных ритмов у млекопитающих и человека, а с другой - эффективным иммуномодулятором. Известно, что любое заболевание сопровождается- рассогласованием эндогенных биологических ритмов организма. Такое рассогласование обозначается понятием "десинхроноз". У пациентов с атопическим дерматитом и бронхиальной астмой выявлено снижение уровня мелатонина в сыворотке периферической крови и отсутствие его суточных вариаций. А любые изменения продукции мелатонина, выходящие за рамки нормальных физиологических колебаний, способны привести к рассогласованию как собственных биологических ритмов организма между собой; так и ритмов организма с ритмами окружающей среды. Как внутренний, так и внешний десинхроноз может являться причиной различных патологических состояний и сопровождать заболевания внутренних органов. Таким образом, отсутствующие суточные вариации содержания мелатонина в периферической крови свидетельствует о нарушении центральной регуляции циркадианной ритмичности функционирования клеток иммунной системы и десинхроноза, который является одним из патогенетических звеньев заболевания. Включение мелаксена в комплексную терапию больных атопическим дерматитом и бронхиальной астмой привело к более выраженному клинико-иммунологическому эффекту, вероятно, за счёт его иммунопотенцирующего и синхронизирующего действия на структуру и функциональную активность пула иммунокомпетентных клеток.

Хронотерапия подразумевает не только коррекцию биоритмов, но и применение лекарственных препаратов с учётом фаз суточного, сезонного и других биологических ритмов системы, на которую направлено коррегирующее воздействие. В настящей работе было проведено изучение феномена хроночувствительности иммунокомпетентных клеток больных хроническими неспецифическими воспалительными заболеваними внутренних женских половых органов к ридостину (индуктору интерфероногенеза) и оценка клинико-иммунологической эффективности хронотерапевтических схем использования данного препарата в лечении хронических неспецифических воспалительных гинекологических заболеваний. После включения в курс лечения ридостина по хронотерапевтической схеме отмечается нормализация содержания естественных, киллерных клеток и активированных моноцитов. Это сочетается» с большей, клинической- эффективностью хронотерапии, сокращением длительности-лечения и, снижением дозы препарата. Применение ридостина'без учета чувствительности к нему СДГ лимфоцитов крови приводит к дальнейшей разбалансировке показателей иммунного статуса. Таким образом, хроночувствительность клеточных элементов иммунной системы, к модулирующим воздействиям, является одним- из основных- компонентов временной организации регуляции иммунных функций. Этот феномен может быть связан с биоритмами метаболического потенциала и рецепторного аппарата иммунокомпетентных клеток и- имеет большое значение для разработки оптимизированных хронотерапевтических схем коррекции нарушений морфофункционального состояния иммунокомпетентных клеток.

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Литвиненко, Галина Ивановна, Новосибирск

1. Авдеева M.F., Мельник F.H., Лебедев В.В;, Шубич М.Г. Взаимосвязь цитохимической активности лейкоцитов с динамикой иммунного ответа при инфекционном процессе //Клинич: лаб. диагностика. 1993. - №5. - С. 22-24.

2. Адо А.Д. О взаимодействии нервной и иммунной систем (к механизмам влияния нервной системы на лимфоциты) //Вестник РАМН. 1993; - №7. - С. 48-51.

3. Айсанов З.Р., Черняк А.В., Калманова Е.Н., Чикина^С.КШ, Неклюдова Г.В. Функциональные методы исследования //Респираторная медицина: Руководство. /Под ред. академика РАМН А.Г. Чучалина. Т. 1. - М.:ГЭОТАР-Медиа, 2007. - С. 352 - 355.

4. Акмаев И.Г. Нейроиммуноэндокринные взаимодействия: их роль в дизрегуляторной патологии; //Патологическая- физиология? и эксперим; терапия: — 2001.—№4. —С. 3-10.

5. Алякринский Б.С. Биологические ритмы и организация жизни:человека в космосе. М.: Наука, 1983. - 284 с.

6. Алякринский? Б.С. Десинхроноз-компоненг общего адаптационного; синдрома4//Стресс и его патогенетические механизмы. Кишинёв, 1973 . - С. 9 -11.

7. Алякринский Б.С. Основы научной организации труда и отдыха, космонавтов. М.: Медицина, 1975. - 208 с.

8. Алякринский Б.С. Современное состояние космической биоритмологии //Космич. Биология и авиакосм. Медицина. 1977. - Т. 11, №2. — С. 3 - 12.

9. Арушанян Э.Б. Антистрессорные свойства мелатонина //Эксперим. и клинич. фармакология. — 1992. №5. - С. 72-77.

10. Арушанян Э:Б. Гормон эпифиза мелатонин новое ноотропное средство //Эксперим. и клинич. фармакология. - 2005. - Т. 68, №3. - С. 74 - 79.

11. Арушанян Э.Б. Мелатонин: некоторые итоги и перспективы изучения // Эксперим. и клинич. фармакол. — 1999. — Т. 62, №2. — С. 73-74.

12. Арушанян Э.Б. Новые тенденции в хронофармакологии //Экспериментальная и клиническая фармакология. 1999. - Т.62, №1. - С. 3-5.

13. Арушанян Э.Б. Роль суточного периодизма в действии психомоторных стимуляторов //Экспериментальная и клиническая фармакология. 2004. - Т. 67, №1.- С. 54-60.

14. Арушанян Э.Б. Стимуляторы психических процессов. Ставрополь: СтГМА, 2003. - 303 с.

15. Арушанян Э.Б. Участие эпифиза в антистрессорной защите мозга //Успехи физиол. наук. 1996. - Т. 27, №3. - С. 31 - 50.

16. Арушанян Э.Б., Аль-Абси Дж.М., Чебаторёв В.В. Лечебные возможности мелатонина и его влияние на иммунологические показатели у больных экземой //Эксперим. и клинич. фармакология. — 2003. Т. 66, №3. — С. 59 — 61.

17. Арушанян Э.Б., Арушанян- Л.Г. «Эпифизарный мелатонин как антистрессорный агент //Эксперим: и клинич. фармакол. 1997. - Т. 60, №6. -С. 71-77.

18. Арушанян Э.Б., Бейер Э:В. Иммунотропные свойства эпифизарного мелатонина //Эксперим. и клинич. фармакология. 2002. - №5. - С. 73-80.

19. Арушанян Э.Б., Бейер Э.В. Мелатонин и система крови //Эксперим. и клинич. фармакология. 2006. - Т.69, №3. — С. 74 — 79.

20. Арушанян Э.Б., Бейер Э.В: Хронобиологическое сходство специфического действия анксиолитических и антидепрессивных средств //Эксперим. и клинич. фармакология. 2007. - Т.70, №5. - С. 52 - 58.

21. Арушанян Э.Б., Попов А.В. Тофизопам и мелатонин ослабляют перестройку ритма суточной подвижности крыс при инъекционном стрессе

22. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2006. - Т. 69, №2. - С 14 — 17.

23. Арушанян Э.Б., Попов A.B. Хронотропная активность семакса //Экспериментальная и клиническая фармакология. — 2008. — Т. 71, №2. С. 14 -16

24. Атопический дерматит: рекомендации для практических врачей (Российский согласительный документ по АД). Москва: «Фармарус Принт», 2002. 192 с.

25. Базарова Р.И., Лалаева Н.Ф. Исследование лактатдегидрогеназы в слизистой оболочке пищевода больных различными эзофагитами //Лабораторное дело. 1990. -Ш. - С. 20-22.

26. Балаболкин И.И. Бронхиальная астма у детей. М.: Медицина, 2003.29: Балаболкин И.И., Смирнов' И.Е., Булгакова В.А. и др. Современная концепция патогенеза бронхиальной астмы у детей //Иммунология, аллергология, инфектология — 2006. №1. - С. 26 — 35.

27. Баранова Н.И., Костина Е.М. Характеристика иммунного статуса больных аллергическими заболеваниями дыхательных путей с бактериальной сенсибилизацией //Клиническая лабораторная диагностика. 2009. - №8. - С. 21-23.

28. Батурин В.А., Арушанян Э.Б. Хронотропные свойства мелатонина //Журнал высшей нервной деятельности — 1990. №4. - С. 681-687.

29. Бережная Н.М. B-лимфоциты и патогенез атопических заболеваний //Intern. J. Immunorehab. 1997. - Vol.6. - Р. 101-108.

30. Биологические ритмы. Т 1-2. Под ред. Ю.Ашоффа. — М.: Мир, 1984.h &

31. Бондаренко JI.A. Современные представления о физиологии эпифиза //Нейрофизиология. 1997. - Т. 29, №3. - С. 212 - 237.

32. Бондаренко JI.A., Анисимов В.Н., Хавинсон В.Х. Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма. М.: Наука, СПб, 1996. - С. 27-28.

33. Бородин Ю.И., Труфакин В.А., Летягин А.Ю., Шурлыгина A.B. Циркадианные биоритмы иммунной системы. Новосибирск: РИПЭЛ, 1992. -207 с.

34. Бронхиальная астма. Глобальная стратегия //Пульмонология /Приложение к журналу. — 1996. 196 с.)

35. Бронхиальная астма. Глобальная1 стратегия. Совместный доклад НИЗ (США) и ВОЗ (1993). Пульмонология. 1996.

36. Бутенко З.А., Глузман Д.Ф., Зак К.П., Филатова P.C., Шляховенко В.А. Цитохимия и электронная микроскопия клеток крови и кроветворных органов. -Киев: Наукова думка, 1974. С. 75 - 76.

37. Быков О.С., Кондаков А.Е., Саржевский В.В. Энзиматические особенности лейкоцитов периферической крови в динамике развития хронического бронхита у жителей Заполярья //Бюлл. СО РАМН.-1992.-№3. — С. 47-50.

38. Васильева О.В. Цитохимический статус лимфоцитов, эозинофилов и тромбоцитов крови при бронхиальной астме у детей (клинико-экспериментальное исследование): автореф. дис. . канд. мед. наук. СПб., 1981.-26 с.

39. Виноградов А.Д. Биохимия. М.: Медицина, 1986, т. 5, с 1944 1973.

40. Гавриш T.B. Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови у подростков, больных бронхиальной астмой //Аллергология. 2001. - №2. - С. 43 - 44.

41. Галактионов В.Г. Как работает иммунная система //Соровский образовательный журнал. 1997. - №12. - С. 6 — 8.

42. Гамалея Н.Ф., Шишко Е.П., Косинская Н.П., Черный А.П. Суточные ритмы Е-розеткообразующей способности лимфоцитов человека //Иммунология. 1990. - № 1. - С. 21 - 22.

43. Геворкян О.В., Оспельникова Т.П. Показатели-интерферонового статуса у пациентов с атопическим дерматитом //Медицинская иммунология. 2009. - Т. 11,№4-5.-С. 350.

44. Гехт Б.М., Комаров Ф.И. Теоретические предпосылки и методы хронотерапии //Хронобиология и хрономедицина. Под ред. Ф:И.Комарова. — М. :Медицина, 1989.-С. 184-199.

45. Гилязутдинов И.А. Мелатонин — как биологический модификатор. //Современные методы диагностики и лечения: Матер, регион, научно-практ. конф. Тетюши. - 11 - 12 июня. - 1993. — Казань. - С. 70 - 71.

46. Глобальная стратегия лечения и профилактики бронхиальной астмы. Пересмотр 2002 г. М.: Атмосфера, 2002,- 157 с.

47. Голубева H.H., Константинова Т.Н., Комисарова И.А. Изменение цитохимической активности лимфоцитов при антигенном воздействии //Микробиология 1978. - №9. - С. 86 - 90.

48. Голубева H.H., Цуцаева JI.A., Маркосян K.M. и соавт. Изменение плазматических мембран и метаболической активности лимфоцитов при антигенном воздействии //Иммунология. — 1982. — №2. — С. 25.

49. Гордиенко С.М. Современные методические подходы к изучению фагоцитарной активности лейкоцитов //Лабораторное дело. 1984. - № 5. - С. 285-289.

50. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. М.: Медицина, 1978. - 296 с.

51. Дергачева Т.И., Анастасьева Н.В., Труфакин В.А. и др. Способ комплексной терапии больных хроническим аднекситом, инфекционно-токсический вариант, неспецифической этиологии. Патент № 214589: Новосибирск. 2000. 4.

52. Деркач В.В., Просекова Е.В., Сергиенко И.С. Цитокиновый профиль при атопическом дерматите у детей //Цитокины и воспаление. 2005. - Т. 4, № 2. -С. 91-92.

53. Деряпа Н.Р., Мошкин М.П., Поеный B.C. Проблемы медицинской биоритмологии. М.: Медицина, 1985. - 175 с.

54. Джапаров А.Г., Рузыбакиев P.M. Сезонная динамика иммунного статуса у больных хроническим бронхитом и у практически здоровых лиц в условиях Ташкента //Иммунология. 1996: - №2. — С. 53 - 54.

55. Доскин В.А. Хронобиологические основы гигиенической оптимизации деятельности детей и подростков: автореф. дис. . докт. мед. наук. СПб., 1985.-42 с.

56. Доскин В.А., Лаврентьева; И.С. Периоды максимальной работоспособности и суточный ритм физиологических функций //Советская медицина. 1974. - Т.37, №8. - С. 140 - 145.

57. Доскин В.А., Лаврентьева Н.А. Ритмы жизни. М.: Медицина, 1980. -112 с.

58. Дубров А.П. Симметрия биоритмов и реактивности. Гл. 3.3.3. Биохронотопология. М.: Медицина, 1987. - С. 101-108.

59. Духова З.Н. Изменение энзиматической активности лимфоцитов в различных органах под воздействием гипоксического фактора: автореф. дис. . канд. биол. наук. СПб., 1976. - 24 с.

60. Евсюкова Е.В., Федосеев Г .Б., Петрищев H.H., Хавинсон В.Х. Патогенез, диагностика и эффективное лечение пептидами эпифиза аспириновой бронхиальной астмы //Пульмонология. — 2003. — №6. — С. 57-63.

61. Евтушенко С.К., Свечкин О.В., Самсоненко P.A. О взаимосвязи уровня мелатонина и недостаточности Т-и-В — звеньев иммунитета у детей с острыми вирусными нейроинфекциями //Педиатрия. 1990. - №12. - С. 19-21.

62. Емельянов A.B., Федосеев Г.Б., Сергеева Г.Р.и др. Распространенность бронхиальной астмы и аллергического ринита среди взрослого населения Санкт-Петербурга //Аллергология: 2002. - №2. - С. 10-15.

63. Емельянова A.B., Черняк Б.А., Княжевская Н.П., Потапова М.О., Белевский A.C. Бронхиальная астма //Респираторная медицина. /Под ред. акад. РАМН Чучалина А.Г. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - Т. Г. - G.665 - 687.

64. Ершов Ф.И. Антивирусные препараты. М., 2006: - 258 с.

65. Залавина C.B. Лимфоидные органы и миокард в системе мать-плод при вибрации, воздействии кадмием и в условиях коррекции: автореф. дис. . докт. мед. наук. Новосибирск. — 2009.

66. Зарецкая Ю.М. Клиническая иммуногенетика. М.: Медицина, 1983. -207 с.

67. Заславская P.M. Хронобиологические аспекты клинической фармакологии и терапии //Хронобиология и хрономедицина. Под ред. Ф.И.Комарова. М.: Медицина, 1989. - С. 199 - 213.

68. Заславская P.M., Петрухова Е.Ю., Кулкаева Ж.Д. Хронотерапия ишемической болезни сердца. М.: Медицина, 1997. - 176 с.

69. Заславская P.M., Щербань Э.А., Логвиненко С.И. Мелатонин в комплексном лечении больных стабильной стенокардией и артериальной гипертонией //Клиническая медицина. 2008. - №9. - С. 64 — 67.

70. Захарова Л.Б., Манчук В.Т., Нагирная Л.А. Метаболизм иммунокомпетентных клеток жителей Севера в онтогенезе. Новосибирск, 1999. - 143 с.

71. Захарова Л.Б., Полонская М:Г., Савченко A.A., Смирнова Е.В. Оценка антропоэкологического напряжения пришлого населения. Красноярск, 1994. — 187 с.

72. Зимин Ю:И., Хаитов P.M. Миграция Т-лимфоцитов в костный мозг в начальный период стресс-реакции //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 1975. - Т. 80, №12. - С. 68 - 70

73. Иванова. И:П., Непомнящих В.М:, Ширинский B.C., Кожевников B.C., Коненкова Л.П., Козлов В.А. Нормобарическая гипокситерапия больных бронхиальной астмой //Клиническая медицина. 2001.- №9.- С. 36-39.

74. Иванова Л.А. Цитохимическое изучение дегидрогеназ и кислой фосфатазы в лимфоцитах крови у больных силикозом и силикотуберкулёзом: автореф. дис. . канд. мед. наук. СПб., 1971. - 24 с.

75. Игнатьева С.Н., Кубасов Р.В. Особенности изменения ферментного статуса лейкоцитов студентов в течение года //Клиническая лабораторная диагностика. 2009. - №1. - С. 36 - 39.

76. Иммунотерапия аллергических, аутоиммунных и других заболеваний. Методическое руководство под ред. академика РАМН, профессора В.А. Козлова. Новосибирск: Агро-Сибирь, 2004. - 127 с.$

Информация о работе

Литвиненко, Галина Ивановна
доктора медицинских наук
Новосибирск, 2011
ВАК 03.03.04

Диссертация

Морфофункциональные изменения в клетках иммунной системы при нарушении светового режима и иммунопатологии. - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы