Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфология воспаления и реакции органов иммунной системы при инфицировании мышей разных линий Aeromonas hydrophila

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Хомякова, Татьяна Ивановна

введение.<г

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.Бактерия АеготопаБ куйгорЬИа и ее свойства.

2.Иммунная система человека и инфекционные процессы.

3.Роль различных звеньев иммунитета в развитии иммунного ответа на инфицирование бактериальным агентом.

4.Гранулематозное воспаление как морфологический субстрат инфекционных заболеваний.

5.Патоморфология инфекционного процесса, вызванного А куйгоркИа.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.3[/

1. Общая характеристика материала.

2. Методы исследования.

2.1. Микробиологические методы.

2.1.1. Выделение культуры бактерий А.Иус1горИНа из медицинской пиявки.

2.1.2. Идентификация бактерий.

2.1.3.Исследование степени полиморфизма бактерий в популяции при подготовке инфицирующей суспензии.

2.1.4. Определение ДНК-азной активности бактерий.

2.1.5.Исследование чувствительности исследуемых штаммов к препаратам противомикробного действия.

2.1.6. Исследование вирулентных свойств бактерий методом биоиробы.

2.1.7. Заражение животных для морфологических исследований.42'

2. 2. Молекулярно-генетические методы.

2.2.1. Выделение и очистка плазмидной ДНК.

2.2.2. Электрофорез ДНК.

2.2.3. Полимеразная цепная реакция.

2.3. Иммунологические методы.

2.3.1. Определение продукции термолабильного токсина у А.ку<1горЫ1а 342-2.

2.4. Культуральпые методы.

2.4.1.Исследование вирулентных свойств бактерий А. ЬуйгоркИа в отношении культуры энтероцитов человека Сасо-2.45,

2.4.1.1. Культивирование клеток культуры Сасо-2.

2.4.1.2.Исследования повреждающего действия бактериальной суспензии.

2.5. Гистологические методы.4о

2.6.Гистохимические методы.46

2.7.Бактериоскопические методы.

2.8.Морфометрические методы.

2.9.Гематологические методы.

2.10. Статистические методы.

3. Обоснование выбора модели исследования и условий эксперимента.

3.1. Выбор штамма возбудителя.

3.2. Выбор условий культивирования возбудителя.

3.3. Выбор способа инфицирования животных.48,

3.4. Выбор инфицирующей дозы.4 Я

3.5. Выбор режима исследования.

3.6. Выбор экспериментальных животных.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

1. Выделение, идентификация и сравнительная оценка вирулентных свойств различных штаммов А. куйгорЬИа.

1.1. Выделение и идентификация бактерий.

1.2.Исследование степени полиморфизма бактерий в популяции при подготовке инфицирующей суспензии.

1.3. Оценка вирулентных свойств различных штаммов А. куйгоркИа.

1.3.1.Оценка вирулентных свойств бактерии А. ЬуйгорЬИа"методом постановки биопробы на белых беспородных мышах.

1.3.2.Исследование ферментативной активности ДНК-азы различных штаммов А. Иус1горШ1а.

1.3.3. Исследование чувствительности исследуемых штаммов к препаратам противомикробного действия.

1.3.4. Исследование генома бактерий А. ЬуйгорКйа методом электрофореза в агарозном геле и визуализация плазмидной ДНК.

1.3.5. Определение продукции факторов вирулентности у бактерии А.Иус1горИИа 342-2.

1.3.6. Исследование повреждающего действие бактерий А. куйгорКйа 342-2 на культуру энтероцитов кишечника человека Сасо-2.*.

2. Морфологические изменения органов белых беспородных мышей, вызванные подкожным введением бактерии А. Иу&орЫ1а 342

2.1. Результаты микробиологических исследований.

2.2. Результаты морфологических исследований.

2.2.1.Морфологические изменения внутренних органов белых беспородных мышей при подкожном инфицировании A. hydrophila 342-2.

2.2.2. Морфологические изменения органов иммунной системы белых беспородных мышей при подкожном инфицировании A.hydrophila 342-2.

3. Морфологические изменения внутренних органов и иммунной системы мышей линий

Balb/C и С57В1/6 при подкожном инфицировании A. hydrophila 342-2.

3.1 .Результатымикробиологических исследований.

3.2. Динамика лейкоцитарной реакции у мышей линий Balb/C и С57/В16.

3.3. Результаты морфологических исследований.11 ■

3.3.1.Исследование морфологических изменений внутренних органов мышей Balb/C и С57/В16 при подкожном инфицировании A. hydrophila 342-2.

3.3.2. Морфофункциональные изменения органов иммунной системы мышей Balb/C и С57/В16 при подкожном инфицировании A. hydrophila 342-2.

3.3.2.1. Морфологическая и морфометрическая характеристика тимуса мышей контрольных и экспериментальных групп линий Balb/C и С57/В16 при подкожном инфицировании A.hydrophila 342-2.

3.3.2.2.Морфологическая и морфометрическая характеристика селезенки мышей контрольных и экспериментальных групп линий Balb/C и C57/BI6 при подкожного инфицировании A.hydrophila 342-2.1100 ^

3.3.2.3.Морфологическая характеристика регионарных лимфатических узлов мышей контрольных и экспериментальных групп линий Balb/C и С5В1/6 при подкожном инфицировании A.hydrophila 342-2.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфология воспаления и реакции органов иммунной системы при инфицировании мышей разных линий Aeromonas hydrophila"

Актуальность проблемы. Грамотрицательная бактерия Aeromonas hydrophilci широко распространена в окружающей среде и способна вызывать инфекционный процесс как у рыб, черепах и моллюсков, так и у человека [Munoz P. et al., 1994; MandeH G.et al., 2000, Ribardo D. A., 2002; Llopis F. et al., 2004]. A hydrophilci вызывает геморрагическую бактериемию у рыб семейства карповых, при этом гибель поголовья в рыбных хозяйствах достигает 90% [Pullium J.K.et al., 1999; Rehulka J., 2002; Mauel M.J. et al., 2002]. Инфицирование человека бактерией A. hydrophda приводит к развитию воспалительных заболеваний, включая энтероколит [Buchanan R.L. et al., 1985], менингит [Parras F et al., 1993], пневмонию [Ender P.T. et al., 1996], сепсис [Llopis F et al., 2004], иногда с летальным исходом [Boman H.G., 2000; Lin S.N. et al, 2001]. В последние год;л значительно возрос интерес к этому микроорганизму; он внесен в список возбудителей новых инфекций человека, имеющих тенденцию к распространению [Супотницкий М.В., 2000].

В современных условиях отмечается повышение частоты обнаружения Л. hydrophilci не только в открытых водоемах [Mandell G. et al., 2000; Chacon M.R. et al.; 2003], но и в бутилированной воде [Edberg S.C. et al., 1996], системе центрального водоснабжения крупных городов мира [Clarke J. A. et al., 1982; Edge J. С. et al., 1987; Power K.N, 1999], морепродуктах [Krovachek К. et al., 1995, Altwegg M.et al., 1991; Hanninen M.L. et al., 1997] и продуктах быстрого приготовления, так называемых «фаст-фуд» [Villari P. et al., 2000]. В настоящее время этот возбудитель распространен повсеместно, включая США, страны Европы и Россию.

Патогенные свойства A. hydrophilci определяются продукцией большого количества факторов вирулентности, включая поверхностные антигены и экстрацеллюлярные продукты [Gonzales-Serrano C.J. et al., 2002]. Интенсивность образования факторов вирулентности и их спектр определяются условиями окружающей среды [Богдан В.В. ç соавт., 2001], в том числе, состоянием инфицированного макроорганизма. В ряде случаев отмечается длительное персистирование этого возбудителя в организме человека без каких либо клинических проявлений [Супотницкий М.В., 2000]. Механизмы развития инфекционного процесса при заболеваниях, вызванных A. hydrophilci, недостаточно изучены. Модели инфекционного процесса, вызванного A. hydrophda у теплокровных животных, не разработаны [Chopra A.et al., 1996].

В литературе до настоящего времени нет достаточно обоснованного и полного » ответа на вопрос о различиях свойств вирулентных и авирулентпых штаммов А. hydrophila, наличии антигенных детерминант и других факторов, позволяющих 'оценить степень патогенности конкретного штамма для человека [Богдан В.В. с соавт., 2001]. С этой точки зрения исследование вирулентных свойств различных штаммов позволит определить подходы к разработке критериев вирулентности.

Повышение интереса к А. hydrophila связано также с распространением в России и странах СНГ гирудотерапии, поскольку эта бактерия является симбионтом медицинской пиявки [Savv>er R.T., 2001]. Распространенное осложнение гирудотерапии, называемое приставочной реакцией, характеризуется развитием очага воспаления в зоне постановки пиявок, регионарным или генерализованным лимфаденитом, лихорадкой, интоксикационным синдромом. Некоторые авторы [Сулим Н.И.,2003; Баскова И.П.,1986] связывают развитие этой реакции с бактериальным инфицированием во время гирудотерапевтичеекой процедуры. Однако этот вопрос является недостаточно изученным и представляет большой интерес, как с научной, так и с практической точки зрения.

По данным литературы, тяжесть, распространенность и исход инфекционно-воспалительного процесса определяются не только свойствами возбудителя, по и иммуногеиотипическими особенностями макроорганизма, в частности, преобладанием клеточного (Th-1) или гуморального (Th-2) типа иммунного ответа. Известно, что мыши Balb/C с преобладанием Th-2 и С57В1/6 с преобладанием Th-1 типом характеризуются разной чувствительностью к лейшманиям [Железникова Г.Ф., 2005; Каркищенко H.H., 2004] и микобактериям [Михайлова Л.П. с соавт., 2005]. Данные, касающиеся чувствительности мышей указанных линий к А. hydrophila, отсутствуют. Все вышеизложенное диктует необходимость изучения особенностей инфекционно-воспалительного процесса и реакции иммунной системы при инфицировании А hydrophilU. мышей в зависимости от иммуногенотипа.

Цель исследования: изучение иммуногенотипически обусловленных морфологических особенностей воспалительного процесса и реакции органов иммунной системы при инфицировании бактерией А. hydrophila

Задачи исследования

1. Выделить, идентифицировать и провести сравнительную оценку вирулентных свойств различных штаммов А. hydrophila с целью выбора слабовирулентного;

2. Исследовать в динамике морфологические изменения " в органах71 белых беспородных мышей при инфицировании слабовирулентным штаммом А.

I * hydrophila; ''

3. Провести морфологическое исследование внутренних органов мышей линий Balb/c и С57В1/6 при инфицировании слабовирулентным штаммом A. hydrophila; 4 Провести морфологическое и морфометрическое исследование органов иммунной; системы мышей линий Balb/C и С57В1/6 в разные сроки после инфицирования их слабовирулентным штаммом A. hydrophila.

Научная новизна. В работе впервые па мышах разных линий выявлены генотипически обусловленные особенности воспалительного процесса, вызванного слабовирулентным штаммом A. hydrophila.

Установлено, что слабовирулентный штамм A. hydrophila 342-2, не продуцирующий термолабилыюго токсина и сериновой протеазы, оказывает in vitro повреждающее действие на культуру энтероцитов человека Сасо-2. Показано, что инфекционно-воспалительный процесс, вызванный A. hydrophila342-2, характеризуете»; t развитием местного очага гнойного воспаления в зоне введения инфекционного агента, кратковременной бактериемией, лейкоцитозом, регионарным лимфаденитом и гранулематозным гепатитом, более выраженным у мышей С57В1/6.

Установлено, что реакция органов иммунной системы у беспородных и инбредных мышей Balb/C и С57В1/6, развивающаяся в ответ на подкожное инфицирование слабовирулентным штаммом A, hydrophila 342-2, морфологически проявляется развитием регионарного лимфаденита, акцидентальной инволюции тимуса и гиперплазии В- и Т-зон селезенки. При преобладании клеточного типа иммунного ответа у мышей С57В1/6 морфологические изменения органов иммунной системы более выражены и сохраняются более длительное время.

Научно-практическая значимость. Данные, полученные в работе, представляют теоретический интерес для понимания механизмов развития инфекционного процесса, вызванного условно-патогенной флорой, в частности, слабовирулентным штаммом A.hydrophila 342-2. Полученные результаты могут быть использованы п курсе преподавания гистологии, цитологии и клеточной биологии, патологической анатомии, инфекционных болезней и микробиологии в медицинских высших учебных заведениях.

На основании проведенных исследований разработаны рекомендации по содержанию медицинских пиявок и манипуляциям с ними в условиях биофабрики и в гнрудотерапевтических кабинетах, которые были представлены на VIII конференши*

Ассоциации гирудологов России и стран СНГ в 2003 г (Москва) (Приложение 1),

Результаты работы внедрены в учебный процесс кафедры патологической анатомии г

Московского государственного медико-стоматологического университета.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.Бактерия Aeromonas hydrophila и ее свойства

В 1980-2000-х годах отмечалось возрастание интереса как исследователей, так и врачей- инфекционистов к широко распространенному в окружающей среде микроорганизму Aeromonas hydrophila. Этому возбудителю, свойственным ему факторам вирулентности, а также вызываемым им заболеваниям посвящено большое количество публикаций, количество которых возрастает с каждым годом.

Бактерия A. hydrophila относится к группе 5 подгруппе 2 рода Aeromonas. В 1994 году A.hydrophila были выделены из семейства Vibrionaceae в собственное семейство Aeromonadaceae [Joseph SW et al., 1994], в котором по морфологическим, биохимическими и культуральпым свойствам выделяется семь различных видов [Janda J.M. et al., 1995; Kirov SM., 1997], а но генотипическим признакам - десять генотипов [Kirov SM., 1997, Huys G, 1994].

A.hydrophila является неспорообразующей Грамотрицательной факультативно анаэробной бактерией, широко распространенной в окружающей среде, в том числе т, почве, морской и пресной воде, включая природные водоемы и бассейны [Mandell G. et al., v5

2000; Pianetti A. et al., 2004]. A.hydrophila выделяется с поверхности предметов домашней обстановки [Demarta A. et al., 2000], из пищевых продуктов [Krovachek К. et al., 1995; Buchanan R.L et al., 1985], в том числе морепродуктов, продуктов быстрого приготовления и готовых к употреблению [Villari P. et al., 2000]. При исследовании морепродуктов 37% из 514 проб оказались контамшшрованными A.hydrophila [Thayumanavan Т. et al., 2003]. Штаммы A.hydrophila с различной степенью вирулентности выделяются из пресной [Vadivelu J. et al.,1995] и морской воды, - естественных водоемов или прудов и садков рыбных хозяйств [Юхименко Л.Н. с соавт., 2000], при этом гибель рыбы & садках достигает 90% [Конопаткии А. 1984]. Большую проблему представляет зараженность л бактерией A.hydrophila водопроводной воды крупных городов [Power K.N, 1999; Clarke J. A., 1982; Edge J. С., 1987].

Особый интерес к A. hydrophila в России связан с ее ролью в жизнедеятельности медицинской пиявки Hirndo medicinalis [Савинов В.А., 2004; Сулим Н.И.,2003]. Известно, что эта бактерия является симбионтом пиявки, определяющей как ее жизнедеятельность, так и функциональную активность [Jennings J.В. et al., 1967; Lent C.M. et al.,1986; Sawyer R.,2001], Распространение и успехи трудотерапии в России и странах СНГ обуславливают возрастание интереса исследователей к физиологии этого животного и механизмам действия пиявок на больных людей. В процессе гирудотерапевтического воздействия примерно у 30% пациентов развивается так называемая «приставочная реакция», выражающаяся в местных (отек, покраснение, зуд, регионарный лимфаденит) и общих (генерализованный лимфаденит, лихорадка) проявлениях, «Приставочная реакция» считается осложнением при гирудотерапевтическом воздействии [Сулим Н., -2003; Баскова И.П., 2003]. Причина этого осложнения не установлена, некоторые авторы склонны считать его иеспецифической реакцией организма на биологически активные вещества, поступающие в ткани и кровь больного при укусе пиявки [Каменев Ю.Я., 2001], однако исследований механизмов развития «приставочной реакции» не проводилось. Возможной причиной развития этого осложнения является инфицирование пациента А. hydrophila, в связи с чем представляется актуальным изучение реакции организма да попадание бактерии через поврежденные кожные покровы.

Этот путь инфицирования часто становится причиной серьезных нарушений здоровья у людей [Valley Н. et al., 2004; Kelly К. et al., 1993]. При попадании воды или почвы, контамшшрованных вирулентными штаммами A. hydrophila, в повреждения кожи человека происходит быстрое развитие остро протекающих инфекционных процессов, сопровождающихся бактериемией и токсинемией [Semel J. et al., 1990]: отмечено обширное поражение мягких тканей [Klashe S. et al., 1996; Merino S. et al.,1997; Semel J. et al., 1990], кожи [Collier D.N. 2002] и конечностей [Vally H. et al., 2004] иногда с

I 4» клинической картиной газовой гангрены [Vadivelu J. et al., 1995, Xing-Jing X. et ai., 1997]. При пероральном инфицировании A. hydrophila может персистнровать в кишечникр носителя в течение недель и даже месяцев [Супотницкий М.В., 2000]. При снижении ъ иммунитета хозяина A. hydrophila часто вызывает энтероколит и гастроэнтерит [Bulger R.J. et al., 1966; Ferguson M. et al., 1995; Naidu A. et al., 1997; Albert M.J. et al 1999; Sha J. et al., 2002], а также связанную с ними гипергликемию [Dumontet S. et al., 2003], поэтому в клинической практике общепринятым является отнесение A. spp. в группу пищевых токсикоипфекций, то есть острых кратковременных заболеваний, вызываемых условно-натогенньши бактериями, способными продуцировать экзотоксины вне организма человека (в продуктах питания) и протекающие с симптомами поражения верхних отделов желудочно-кишечного тракта и нарушениями водно-солевого обмена. При аэрозольном заражении этот возбудитель может вызывать пневмонию и множественный абсцесс легких [Hur Т. et al., 1995]. Бактериемия приводит к инфицированию желчного пузыр/, развитию гемолитического уремического синдрома, менингита [Altvvegg М et al., 1989; Janda J. et al., 1991] и генерализованного сепсиса [Brumlik M. et al., 1997; Kelly K.A. et al.,1993].

Большинство авторов связывает развитие летального исхода у 1{]одей с септицемией [Haburchak D.R., 1996; Schiavano G.F. et al., 1998]. Способность А. hydrophila подавлять развитие других видов бактерий в кишечнике пациентов [Messi P. et al., 2003, Epple H. J. et al., 2004], и по мнению этих авторов, приводит к септицемии íi быстрому ухудшению состояния больных вплоть до гибели. Вместе с тем, разнообразие клинических проявлений, отмечаемых при инфицировании A.hydrophila, не имеет удовлетворительного объяснения.

С точки зрения взаимодействия экологических систем [Шувалова Е.П. с соавт. 2001] существуют три среды обитания микроорганизмов; организм человека, организм животного и абиотическая среда, соответственно эти авторы выделяют антропонозные, зоонозные и сапронозные инфекции. С учетом возможностей ряда микроорганизмов развиваться как в неживой природе, так и в организме животных, в том числе домашних и синантропных, появился термин «сапрозоонозы». К этим инфекциям можно отнестд сибирскую язву, лептоспироз, иерснниоз, листериоз и пр. По этой классификации бактерия A.hydrophila может быть отнесена в группу сапрозоонозов.

По классификации JI.B. Громашевского (1941 г.), разделившего инфекционные болезни по механизму передачи возбудителя и его локализации в организме хозяина, существуют кишечные инфекции (фекально-оральный механизм передачи), инфекции дыхательных путей (аэрозольный тип заражения), кровяные трансмиссивные инфекции, а также инфекции наружных покровов (контактные) [Шувалова Е.П. с соавт., 1980]. Отнесение A. hydrophila в какую либо группу весьма затруднительна, поскольку показаны, по крайней мере, три из упомянутых путей заражения, при этом возможность Гровяной трансмиссивной инфекции через пиявку также не исключена.

Поскольку, в большинстве случаев заболевания, вызванные A. hydrophila, развиваются на фоне первичных (например, при апластической анемии) или вторичных' иммунодефицитных состояний, в том числе возрастного иммунодефицита [Dumontet S. et al., 2003], а также вызванных гемодиализом, лечением дефероксамином [Lin S.H. et al 1996], трансплантацией костного мозга [Merino S. et al 1997], можно предположить, что первичным звеном распространения инфекции является нарушение местных и общих неспецифических иммунных реакций. Однако какой вклад в этот ответ вносят гуморальное и клеточное звено - неизвестно.

Показано, что ряд пациентов, наблюдавшихся по поводу диареи, вызванной А. hydrophila, страдали новообразованиями различных органов либо имели выраженную хроническую патологию печени и нарушения в желчевыводящей системы [Lau S.M. et aj ; 2000; Llopis F. et al., 2004]. При анализе 75 случаев бактериемии, вызванной бактериями ч' рода Aeromonas, заболевание было связано с полом (72% больных были мужчинами), возрастом (48% больных были старше 65 лет), наличием хронических заболеваний печени

36%) и новообразованиями (33%). При этом летальность в течение 30 суток отмечалась в 36% случаев, что позволило сделать заключение о важности и серьезности заболеваний, вызванных аэромонадами [Llopis F. et al., 2004]. В связи с этим лейкемия и заболевание печени считаются факторами риска развития аэромонадной инфекции [Davis W.A. et al., 1978], однако данных, касающихся роли печени в элиминации A.hydrophila, нет. »

Вместе с тем, в литературе описаны случаи тяжелого клинического поражения у больных, не имевших каких-либо заболеваний либо нарушений иммунитета [Ilur T. et al., 1995]. Массовые пищевые отравления у клинически здоровых людей могут быть вызваны пищей, содержащей A.hydrophila в концентрации 106 —107 микробных тел на грамм-пищи [Krovachek К. et al., 1995]. В 2002 году был описан случай массового заражения 26 практически здоровых людей при игре в грязевой футбол в Западной Австралии [Vally PL et al., 2004]. Было установлено, что к заражению привело использование речной ьоды для приготовления поля за месяц до соревнований. Наибольшее количество клинических проявлений в этом случае было связано с нарушением кожных покровов (100%). В этом случае 85% больных имели симптомы общего инфекционного поражения (тошнота, рвотй, боли в мышцах, горле и ухе, лихорадка, головная боль). Во всех описанных случаях щ крови, фекальных масс и больных органов был выделен этот возбудитель [Lin S et al., 1996; McCardel B.A., et al., 1995; Lau S.M,. et al., 2000; Llopis F et al., 2004].

Таким образом, представления об A. hydrophila как условно патогенном возбудителе, не представляющем серьезной опасности для здоровья человека [Хоулт Дж. С соавт., 1997] в настоящее время изменилось. Данная бактерия внесена в список г новых» бактериальных инфекций, имеющих тенденцию к распространению [Супотницкий М.В., 2000] и угрожающих жизни и здоровью человека. # *

Грамотрицательная палочка A. hydrophila является факультативным анаэробом: Этот оксидаза-положительный хемоорганотроф с дыхательным и бродильным типами метаболизма способен к формированию биопленок и переходу в некультивируемое состояние при действии неблагоприятных факторов. Несмотря на отличие от Enterobacteriaceae, генетический анализ показывает эволюционное единство семейств Vibrionaceae, Enterobacteriaceae и Aeromonadacea, что определяет большую общность их свойств [Imbert M. et al., 2003].

Морфологически бактерия представляет собой толстую, с округлыми концами, короткую, подвижную, утолщенную посередине палочку размерами 0.3-1.0 х 1.0-3.5мкм, з которой определяются зернистые включения, исчезающие при культивировании на плотных питательных средах [Sawyer R.T.,1986.]. На фиксированных мазках наблюдаются как одиночные бактерии, так и короткие цепочки. На плотных питательных средах типа ГРМ (гидролизат рыбной муки) образует круглые желтоватые или цвета среды слегка флюоресцирующие, на среде Риппея и Кабелли, Гиммлера- Шоттс - оранжево желтые, на среде Пашкова - малиновые колонии [Юхименко J1.II. с соавт., 1987], которые легко снимаются петлей и растираются по поверхности плотной питательной среды. В жидких питательных средах бактерии легко суспендируются, подвижны, в отсутствие перемешивания бактерия формирует па поверхности среды биопленку, при длительном культивировании образует осадок, который при встряхивании дает хлопья [Merino S. et ah, 1996; Francki K.T. et al., 1994]. В молодых культурах на жидких средах у бактерий формируются неритрихиальные жгутики, которые при культивировании на плотной питательной среде исчезают. Показано, что наличие жгутиков и подвижность бактерий коррелирует со способностью к адгезии и инвазии у патогенных штаммов [Merino S et al., 1997, Trower C.J. et al., 2000]. Отмечаемый всеми авторами полиморфизм отдельных колоний, различия в размерах и форме бактерий, а также наличие зернистых включений и мембранных пилей не находит должного объяснения. Предполагается существование связи между наличием пилей у A.hydrophila и их способностью к формированию биопленок [Vivas J. et al., 2004].

Морфология бактерий и степень проявления их вирулентности изменяется в различных условиях культивирования [Jennings J. et al., 1967], в том числе, в зависимости от температуры культивирования [Ralph IIW et al., 1990; Imbert M.et al., 2003; Kirov SM; et al., 1993]. Исследование белкового состава мембраны A.hydrophila 7966 при культивировании на одной и той же синтетической среде, но в различном температурном режиме от 30 до 5°С позволило обнаружить феномен адаптивной продукции и сверхэкспрессии некоторых белков (MB 7.5-11 КДа), которые отнесли к белкам холодового шока [Imbert М. et al 2003].Тем не менее, продукция цитотоксина, гемолизина и лецитиназы сохранялась при культивировании в широком диапазоне температур: от 15 до 37°С. 83% штаммов из окружающей среды продуцировали клеточный цитотоксин, и • другие факторы вирулентности даже при 4° С [Haque Q,. et al., 1996]. A. hydrophila растет в широком диапазоне температур (5-65°С), большинство авторов полагает, что бактерии погибает при нагреве до 70°С и прекращает рост и затем погибает при температуре ниже 5°С. Однако данные, касающиеся устойчивости бактерии к изменению температуры, составу и кислотности среды, противоречивы. Показано, что постепенное снижение температуры и длительное хранение A.hydrophnila при температуре 5°С, особенно на бедной питательной среде, приводит к переходу бактерии в некультивируемое, VBNC — состояние ("viable-but-nonculturable" - «жизнеспособные, по некультивируемые») [Oliver, J. D. 1993, Kaprelyants A.S. et al., 1993, Wai S.N. et al 2000], то есть такое состояние, iirîî котором сохраняется ее жизнеспособность, но она не может быть культивируема на стандартных для данного возбудителя средах. Этот переход происходит постепенно: при культивировании A. hydrophila АТСС 7966 в течение 50-55 дней в фильтрованной стерилизованной морской воде, бактерии переходили в промежуточное состояние с изменением формы клеток, однако вслед за повышением температуры от 5 до 23°С биологическая активность клеток A. hydrophila восстанавливалась, включая патогенные свойства. [Maalej S., et al., 2004]. Мутации в различных генах приводят к изменениям вирулентных свойств и способности этого возбудителя к обратимому переходу в VNBC [Vivas J. et al., 2004], что позволяет предположить различную способность к переходу в

VNBC для штаммов A.hydrophila, различных по вирулентности. При переходе в i/ некультивируемое состояние в результате действия низких температур (4°С в течение 45 дней) [Maalej S., 2004] или голодания бактерия способна восстанавливаться на жидкой и* твердой питательных средах, содержащих каталазу или пируват натрия [Wai S.N.et al., 2000], Возможность существования A. hydrophila в VNBC-состоянии в организме человека пе исследована.

Считается, что наиболее активный рост наблюдается при 22-28°С и значении рН 5.5-5.8 [Aguilar A. et al., 1997], а культуры, изолированные из фекалий, крови и тканей больных людей культивировали при 35-37°С [Vally H. et al., 2004, Epple H. J. et al., 2004;

Wai S.N. et al., 2000]. Повышение и понижение значений рН также снижает скорость роста «■ » в питательной среде вплоть до прекращения его при рН < 6 [Doherty A. et al 1996, Gill C.O.et al., 1997, Pin С. et al., 2004]. В ряде работ в качестве оптимальной считается диапазон рН 7,2-8 [Imbert M., 2003, Guimaraes M. S. Et al., 2002].

Данные, касающиеся вирулентных свойств A. hydrophila получены, в основном , ш vitro, в том числе, на культурах различных тканей. Большое количество литературы посвящено влиянию присутствия отдельных веществ органической или неорганической природы на жизнедеятельность бактерий и токсннопродукцию. Показано, что важным для жизнедеятельности этих бактерий элементом является железо[ЕЬапкБ R.O. et al.,200; Lin S.H. et al., 1996]. При повышении концентрации Fe2+ в среде количество микробных тел в культуре A hydrophila AlVIVXl снижалось [Kersters I. et al., 1996]. Присутствие Zn2+ повышает вирулентность штамма АЕ-036, при этом изменяется также активность ц стабильность металло-Р-лактамазы [Filici A. et al., 1997]. Присутствие Mg2+ в среде влияет на степень адгезии бактерий in vitro и повышает экспрессию гена mgtE, кодирующего транспортные системы, в частности транспорт ионов [Merino S. et al.,2001]. Достоверно показана зависимость вирулентности штамма от наличия и концентрации кислорода «в среде и атмосфере культивирования. Увеличение концентрации 0¿ повышает продукцию токсинов [Tsai G. et al., 1996, 1997; McMahon M.A. et al., 2000]. При высоких концентрациях СОг (50-100%) протеолитическая и гемолитическая активности бактерий отсутствовали. На свойства A.hydrophila также влияют сера, серосодержащие препарат^ [Filici A. et al., 1997], осмотическое давление [Aguilar A. et al., 1997], а также сочетание этих факторов При содержании в среде NaCl в концентрации 200тМ или более культура обладает более высокой чувствительностью к влиянию кислотности среды (pH 4.0). Инкубация в среде, содержащей NaCl в течение 5 минут снижала устойчивость бактерий к действию низких pH (выживаемость 0.06% против 40% в контроле). Аналогичным действием обладали остальные одновалентные анионы и катионы [Parvis A. et al., 1996].

Однако, эти данные не могут дать понимания патогенеза инфекционного процесса, происходящего in vivo и не могут заменить экспериментальных исследований с использованием в качестве биомоделей животных, чувствительных к данному возбудителю. В качестве такой модели могут выступать лабораторные мыши.

В настоящее время помимо классических микробиологических методов идентификации, разработана ПЦР-диагностика A. spp, позволяющая быстро идентифицировать бактерию до вида [Abdullah A.I. et al., 2003, Figueras M.J. et al., 2000]. Разработан ряд праймеров, позволяющих определять гены 168-рибосомальной РНК и другие гены A.hydrophila, [Peng X., 2001, Abdullah A.I., 2003], в результате чего стало возможным качественное определение бактерии в природных и клинических образцах даже в относительно небольшой ее концентрации.

Однако, с точки зрения феномена VNBS-состояния, возможности «гипердиагностики» и относительной дороговизны ПЦР - диагностики, в„ России клинические исследования проводятся по традиционным правилам микробиологии й большая часть лабораторных микробиологических исследований касается только «привычных» возбудителей кишечных инфекций типа возбудителя дизентерии или сальмонелл, относя остальные случаи в группу «диарей неизвестной этиологии» и лечится назначением антибиотиков широкого спектра действия. В связи с этим, истинная доля участия A.hydrophila в развитии инфекционных процессов в России неизвестна.

Лечение заболеваний, вызванных A.hydrophila затруднено тем, что клинические проявления сходны с таковыми при стрептококковом или стафилококковом поражении мягких тканей, в связи с чем больным назначается стандартная противомикробная терапия, применяемая при раневых поражениях этими патогенами. Однако, в отличие от стафилококка и стрептококка эта бактерия устойчива по отношению к большинству антибиотиков, причем степень устойчивости бактерий варьирует для разных штаммов.

При изучении чувствительности A. hydrophila к антибиотикам, используемым в терапии инфекционных заболеваний различных штаммов, выделенных от больных людей и из проб речной воды, было показано, что они одинаково устойчивы к пенициллину, карбенициллину, ампициллину и цетилииридипхлориду, цефазолину [Vally Н. et ¿sj., 2004], но обладают различной чувствительностью к палидиксовой кислоте, цефепаму и многим ^

3-лактамовым антибиотикам [Benassi F.O. et al., 2001; Goni-Urriza M. et al., 2000]. Штаммы, выделенные из морепродуктов в Южной Индии, обладали чувствительностью к хлорамфениколу и были устойчивы к действию бацитрацииа [Thayumanavan Т., 2003]. Большинство диких штаммов обладают множественной антибиотикоустойчивостыо. Например, штамм A. hydrophilaAHll обладает устойчивостью в отношении стрептомицина, тетрациклина и эритромицина [Son R et al., 1997]. Показано, что некоторые штаммы A. hydrophila продуцируют металло-[3-лактамазу, расщепляющую лактамовую группу антибиотиков [3-лактамового ряда, при этом существует зависимость активности и стабильности фермента металло-р-лактамазы штамма A. hydrophila ДЕОЗб от присутствия ионов Zn2*' [Valladares М. et al., 1997]. Высокую эффективность по отношению к A. hydrophila in vivo и in vilro обнаружило совместное применение цефотаксима и мнноциклина [Ко W.C. et al., 2001]. Большинство штаммов чувствительна к триметоирнм - сульфометаксозолину и флуорхинолонам [Gilbert D.N. et al., 2000], действию котримоксазола, эффективно также назначение цефотаксима, цефтриаксона или ципрофлоксацнна [Vally Н. et al., 2004]. При поражении кожи, вызванном A. hydrophila в настоящее время для лиц, не имеющих нарушений иммунитета и при отсутствии сепсиса принято хирургическое иссечение, дренаж и удаление пораженной ткани с последующим лечением флуорхинолонами и триметоприм-сульфаметоксазолом [Gilbert D.N. et al., 2000]. v

Патогенность штаммов A.hydrophila, выделенных из кишечника пиявок по отношению к белым мышам была обнаружена еще в 1946 году М.Б Голькины^, исследовавшим различные клинические свойства пиявки. При введении эмульсии суточной культуры бактерий, выделенных из кишечника медицинской пиявки в брюшную полость

Ю9КОЕ) мыши погибали на следующий день при явлениях сепсиса. В пробах крови, взятой из хвостовой вены и из сердца после гибели животных обнаруживалось большое количество бактерий. Дальнейшие исследования патогенных свойств этой бактерии в отношении мышей не проводились до настоящего времени. В связи с тем, что бактерия обладает широкой вариабельностью вирулентных свойств, а также в свете

Т1 данных о наличии большого количества продуцируемой ею факторов вирулентности представлялось интересным сравнение патогенных свойств различных штаммов бактерий, выделенных из различных источников, в отношении теплокровных (мышей).

Бактериостатические свойства A hydrophila, а также фильтрата культуры но отношению к ряду Грам-положительных и Грамотрицательных бактерий, также обнаруженные Голькиным М.Б. [1946], были изучены различными исследователями и-в последующие годы. При исследовании бактерицидной активности 30 утаммов A.hydrophila, выделенных из природных водоемов в большей или меньшей степени были обнаружены антибактериальные свойства в отношении филогенетически не связанных .видов или родов бактерий, в том числе против ряда листерий и стафилококков. Более слабую бактерицидную активность аэромонады проявляли в отношении стрептококков и Ч лактобактерий. Повышение бактерицидных свойств коррелировало с уровнем продукции гемолизина, который обычно связывают со степенью вирулентности [Messi P. et al., 2003]. Роль бактерицидного действия в процессе развития симбиотических отношений A.hydrophila и Hiriulo medicinalis и их совместной жизнедеятельности предполагается, но не исследована. Роль бактерицидных свойств в персистировании и распространении этого возбудителя в организме хозяина не исследована. С другой стороны, при сравнении стимулирующего и иигибирующего действия газообразных метаболитов, выделяемых различными почвенными бактериями, было обнаружено, что наибольшую стимулирующую рост колоний Listeria monocytogenes и Yersinia pseudotuberculosis

Л/ оказывали метаболиты бактерий рода A.hydrophila, при этом в составе этих метаболитов определялась наибольшая но сравнению с другими бактериями концентрация метанола' Кроме того, было показано наличие ацетальдегида и этанола, которые также могут влиять на рост колоний [Бузолева J1.C. с соавт., 2005].

Распространенность данного возбудителя в водоемах представляет большую опасность для человека и наносит большой ущерб рыбоводческим хозяйствам [Filici A. et al., 1997]. Патогенные штаммы A. hydrophila вызывают аэромонадную септицемию у рыб, инфекционное поражение покровов и мышц, показана способность A. hydrophila существовать в организме хозяина как внутриклеточный паразит [Tan Е. et„il.,1998, Rahman М.Н. et al., 2000].

При изучении генетических особенностей штаммов, полученных от больных рыб',' обычно идентифицируется большее число генов, связанных с вирулентностью, чем ох авирулеитиых штаммов, в том числе Ыу А, гистоноподобный белок и олигопетидаза [Zhang Y. et al., 2000]. Однако и в данном случае неясным остается вопрос о возможных механизмах распространения и развития инфекции. В ихтиопатологии считается доказанной возможность передачи инфекции через пиявок и мелких ракообразных Argulus foliaceus,паразитирующих на коже и жабрах рыб. Предполагается также, что заражение рыб может происходить путем употребления в пищу простейших или рачков, содержащих вирулентные формы бактерии [Сайтаниди В.Н., 1996]. С этой точки зрения представляет интерес сравнительное исследование вирулентных свойств A.hydrophila в отношении рыб и теплокровных животных.

Возрастает количество публикаций, посвященных как эпидемиологии и клиническими проявлениям аэромонадной инфекции, так и факторам вирулентности, присущим этому микроорганизму, в том числе его токсинам. Однако морфологические изменения в органах теплокровных, в том числе в органах иммунной системы, возникающие при инфицировании этим возбудителем, не изучены. Неясны^ также остается вопрос о специфичности поражения при различных путях попадания А. hydrophila в организм.

Любая патогенная бактерия продуцирует широкий крут факторов, которые обеспечивают их способность к внедрению в хозяина, распространению в его организме и выдерживает защитную реакцию • организма. Эти молекулы, которые предложено называть «модулины» [Henderson В. et al., 1996], могут быть сгруппированы в четыре класса: здгезины, иивазины (иитегрины), агрессины и импедины. Действие факторов вирулентности основано на противодействии защитным силам макроорганизма или инвазии в ткани и органы, что обеспечивает благоприятные условия для репликации и развития бактерий. [Fernandes-Prada С.М. et al., 1997]. Показано, что многие штаммы А, * Л Ч hydrophila способны к продукции адгезинов, которые обеспечивают прикрепление бактерий к любому плотному субстрату, в том числе мембранам эритроцитов, эгштелиоцитов кишечника, клеток культуры тканей в эксперименте in vitro [Inghman A.B. et al., 1995a; Merino S. et al., 1999; Llanos J. et al., 2000]. 10% штаммов A.hydrophila, выделенных из пищевых продуктов, были способны к адгезии к клеткам культуры Нер-2 и о эритроцитам человека при 37 и 5 С. Эти способные к адгезии штаммы продуцировали экзотоксины, в том числе гемолизины, цитотоксины, эптеротоксины, протеазы, лейкоцидин, фосфолипазы, эндотоксин, молекулы адгезии и белки внешней мембраны [Kirov S., 1997]. Доказано участие генистеипа [Tan Е. et al.,1998] и стауроспорина [Inghman A.B. et al., 1995], в адгезии и интернализация бактерий на клетке.

Результатом. успешного осуществления адгезии и колонизации в срС-де и в организме хозяина является формирование биопленки на поверхности субстрата или

4* «г ' тканей хозяина. Доказана способность A. spp. к образованию биопленки [Merino S., 1996, Francki К.Т. et al., 1994] при этом фактором, способствующим этому процессу, являются* присутствие большого количества полярно или латерально расположенных пилей IV типа [Rabaan А.А., 2001, Bechet М., 2003]. В результате анализа такой бактериальной культуры отмечается повышенная подвижность бактерий и повышенное содержание экзополисахаридов [Kirov S.M., 2002]. При успешной адгезии A.hydrophila включаются механизмы синтеза и активации интегринов - протеаз, амилаз и липаз [Chang C.Y. et al.°, 1997, Chang T.M. et al 1997], позволяющих внедриться и перейти к внутриклеточному, паразптированию. Наиболее изученной группой бактериальных модулинов являются агрессины, или бактериальные токсины, которым в литературе, посвященной А. hydrophila, уделяется большое внимание.

Характерной особенностью A.hydrophila является широкий диапазон продукции агрессинов [Busing К.-Н., 1952; Thayumanavan Т., 2003; Esteve С., 2004]. В настоящее ч. время в этой группе факторов вирулентности A.hydrophila известны два гемолитических токсина (кодируемые генами аегА и hlyA) [Wong C.Y. et al., 1998; Heuzenroeder M.W., 1999], термостабильный цитотонический энтеротоксин (Ast) [Albert M.J. et af., 2000], термолабильный цитотонический энтеротоксин (Alt) [Chopra А.К. et al., 1996; Ferguson M^, et al., 1995; Trower C.J. et al.,1999], цитолитический энтеротоксин (Act/AHCYTOEN) [Ferguson M.R. et al., 1997; Tsai G. et al., 1997; Xu X.J. et al., 1998; Buckley J.T et al., 1999; Trower C.J. et al., 2000; Chopra A.K. et al., 2000; Sha J. et al, 2000; Galindo C.L. et al., 2003]. Гомология Act и аэролизина (АегА) позволила разработать ПЦР - диагностику для определения генов цитолитического энтеротоксина (цитотоксина) и аэролизина [Kingombe C.I. et al., 1999], при том что ряд авторов полагает, что р-гемолизии, аэролизин и цитолитический энтеротоксин - названия одного и того же токсина [0rmen О., 2003]. Исследование аминокислотной последовательности установило 64% гомологию Р-гемолизнна и аэролизина [Epple Н. J., 2004]. Аэролизин A.hydrophila, относится к токсинам, повреждающим клеточную мембрану путем связывания с гликофорином мембраны с последующим порообразованием [Шмитт К.К. с соавт., 1999]. 78,4% ц'з штаммов A.hydrophila, выделенных из морепродуктов, продуцировали гемолизиц [Thayumanavan Т., 2003], при этом максимальная продукция гемолизина отмечалась в логарифмической фазе роста [Esteve С., 2004]. Вопросы продукции агрессинов еще требуют тщательного исследования, в настоящее время они находятся на стадии накопления феноменологических данных. Известно, что вирулентные штаммы A.hydrophila, выделенные из клинических изолятов, продуцируют цитотоксин и гемолизин, примерно треть из них продуцирует Act [Andre-Fountaine G. et al., 1995]. Всеми штаммами A.hydrophila, выделенными от больных [Krovachek К et al., 1995;

Vadivelu J. et al., 1995; Pepe C.M. et al., 1996; Trower C.J. et al., 2000] и большинством » штаммов, полученных из других источников, продуцируются протеазы, адгезины, инвазины и ряд других факторов. В меньшей степени изучены слабовируле'итные штаммы, вьщеляемые из воды, продуктов питания и почвы. Мало изучены различия между вирулентными и авирулентными штаммами. При сравнении генетических особенностей штаммов A. Hydrophila с разной вирулентностью были обнаружены существенные отличия. У бактерий непатогенного штамма отсутствовало 69 геномных областей. Были изучены нуклеотидные последовательности этих регионов у патогенного л штамма. 16 веществ, кодируемых 23 из этих фрагментов, обнаружили высокую гомологию с известными белками, продуцируемыми другими бактериями. Белки^ кодируемые остальными 46 участками, были идентифицированы как новые протеины, присущие штаммму A. hydrophila PPD134/91, поскольку не имели значительной гомологии ни с одним из известных микробных белков. Среди этих PPD134/91-специфичиых генов 22 фрагмента ДНК были представлены и в других 8 вирулентных штаммов. Одновременно они отсутствовали в 7 других авирулентных штаммах, в связи с чем авторы этого исследования предположили, что именно они являются «генами вирулентности» A.hydrophila. 5 из этих участков определяют синтез таких известных факторов вирулентности, как гемолизин, олигопентидаза А, белок внешней мембраны, белок множественной резистентности к лекарственным препаратам, и гистоноподобнцЛ протеин. Бактерии A. hydrophila свойственна геномная гетерогенность, [Zhang Y.L. et'al4 2000J. Такие участки генома A.hydrophila являются «островками иатогенности» данной бактерии. Присутствие «островков патогенности» позволяет говорить о высокой вероятности генетического обмена между фрагментами ДНК, входящими в эти участки, между бактериями различных видов и соответствующего изменения их патогенности [Мавзютов А.Р., 2002; Бондаренко В.М. с соавт., 1997]. «Островки патогенности» обнаруживаются как на хромосомах, так и на плазмидах. У бактерий, традиционно относимых к группе условно патогенных, наличие таких «островков» говорит о возможности вызывать острый инфекционный процесс у «хозяина». Присутствие* илазмиды у бактерии также связывается с возможностью горизонтального генного j переноса внутри вида и между видами, однако достоверных сведений, подтверждающих возможность такого генетического обмена A. hydrophila с другими бактериями нет. В* исследованиях Andre-Fountaine G. et al., (1995) у 18 патогенных штаммов была обнаружена экстрахромосомальная ДНК, 16 из 18 штаммов имели плазмиду (3,6-5.1 мДа). Эта плазмида может элиминироваться при изменении условий культивирования. Повышение температуры культивирования бактерий до 25°С приводило к утрате илазмиды, неспособности синтезировать токсин и снижению вирулентности пр отношению к рыбам [Stuber К et al., 2003].В другом случае у бактерии рода Aeromonaz было обнаружено и описано три малых критических плазмиды (5.2-5.6 kb) две из которых содержали пары генов «токсин-антитоксин»[Воус1 J. et al., 2003]. В связи с этим можно предположить, что наличие внехромосомного материала у бактерий может рассматриваться как маркер способности вызывать инфекционное заболевание.

Фенотипическое выражение генов, ответственных за вирулентные свойства бактерии, определяется условиями культивирования [Tsai G.J. et al., 1997], составом атмосферы и т. д. Возможность изменения вирулентных свойств бактерии при попадании в специфическую экологическую нишу, например, при фагоцитозе ее макрофагом или npw персистировании в клетках кишечника не исследована.

При исследовании свойств A.hydrophila было обнаружено, что активность %

V. продукции экстрацеллюлярных ферментов, - протеаз, липаз, хитипазы,- коррелирует со степенью вирулентности изучаемого штамма [Lovvey G et al., 1993; Chuang Y.C. et al., 1997; Lan X.et al., 2004; Razquin B.E.2004] и, одновременно, зависит от условий культивирования бактерий. У вирулентных штаммов бактерий протеазная активность в 3.5 раза выше,"чем у авирулентных н меньше зависит от pH среды [Boman H.G., 2000; Богдан В.В. с соавт. 2001]. Обнаружено также, что мутации в генах, связанных с продукцией соответствующей протеазы, приводят к значительным изменениям в патогенезе развития заболевания, вызванного A. hydrophila [Cascon A. et al., 2000; Esteve С. et al., 2004]. Вместе с тем) вопрос о роли протеаз в патогенезе инфекционных заболеваний остается неясным. Возможно, присутствие протеаз в среде культивирования является лишь индикатором функционирования систем жизнедеятельности бактерий. Внеклеточные ферменты обеспечивают потребность бактерии в питательных веществах таким образом, что белки, находящиеся в окружающей среде, распадаются до олигопептидов, способных проникать в бактерию [Bieth J.G, 2001]. Вместе с тем, внеклеточные протеазы, наряду с другими экстрацеллюлярнымн продуктами, определяют антигенные свойства вакцинного штамма. [Vivas J., 2004]. Таким образом, роль протеаз в повреждающем действии и вызываемом им воспалении, а также в стимулировании органов иммунной системы не доказана, Гены, кодирующие синтез сериновой протеазы, глицерофосфолипид-холестеролацилтрансферазы и липазы определяются практически у большинства штаммов, независимо от источника из выделения [Chacon M.R.,2003, Abdullah A.I. et al., 2003]. С точки зренид неспецифической защиты, возможность бактерий способность A.hydrophila продуцировать эластазу позволяет возбудителю персистировать в организме теплокровных [Cascon A. et al., 2000]. Продукция эластазы была отмечена у всех вирулентных и многих авирулентных штаммов. Эластаза способна расщеплять лизоцим на три фрагмента с потерей его бактериолитической активности [Jacquot J. et al., 1985] чем обусловлена способность бактерий инактивировать лизоцим, встречающаяся преимущественно у Грам < отрицательных бактерий (в 88-100% для различных видов). В связи с этим способность к продукции эластазы может являться маркером персистенции бактерий, способных к внутриклеточному иаразитированию [Бухарин, 1990]. Механизм внутриклеточного переживания бактерий в организме при бактерионосительстве или хронической инфекции связаны с нейтрализацией катионных белков и лизосомальных ферментов [Войно-Ясенецкий М.В., 1981], при этом лизоцим является катионным белком и лизосомальным ферментом клетки хозяина, в связи с чем можно предположить, что эластаза участвует з персистировании AJtydrophila в организме теплокровных и, в частности человека.

В адгезии бактерии на мембране эритроцита или эпителиальной клетки участвует капсульный лииополисахарид, который поэтому также может рассматриваться как фактор вирулентности. Состав ЛПС, входящих в состав поверхностных слоев мембраны бактерии связан с вирулентностью штамма [Богдан В.В. с соавт., 2001]. Образование ЛПС идет, наиболее активно при температуре 20° С и не происходит при 37° С [Merino S. et al., 1996]. Практически из каждого патогенного штамма выделяется специфический капсульный ЛПС, присутствие которого может служить критерием вирулентности штамма. Наличие серогрупп 0:11 [Okitsu T., et al., 2000], 0:19 [Thomas S.R. et al.,1995], 034 [Taton D. et al., 1995; ínghman A.B. et al., 1995b; Khashe S., 1996; Merino S. et al., 1996] считается достоверным подтверждением вирулентности штамма.]. О-ЛПС представляет собой белковые субъединицы, пронизывающие цитоплазматическую мембрану, » периплазму и внешнюю мембрану вплоть до поверхности клетки бактерии, где онп г объединяются и составляют S-слои, будучи связанными с клеткой [Thomas S.R. et aL

V )'

1995]. S-слой A. hydropliila способен связывать вещества, выделяемые организмом хозяина»- такие, как фибропектин, ламинин, витропектин, обеспечивая, как полагают^ таким образом защиту от действия гуморального иммунитета и пищеварительных ферментов кишечника «хозяина». Уменьшение способности образовывать S-слои снижает вирулентность бактерии [Noonan В. et al 1997]. Уровень эндонуклеаз также коррелирует с вирулентностью штамма, что позволяет предположить, что они также являются факторами вирулентности [Santos Y. et al 1987].

Способность бактерий внедряться в клетки хозяина и диссименировать практически в любой орган через кровеносное русло, а также персистировать.у них в течение долгого времени обуславливает возрастающую распространенность этих v заболеваний в мире [Chopra А.,1999]. Эпидемиологический риск также связан''с повышением частоты употребления пищевых продуктов и питьевой воды.контаминированной этим возбудителем [Riley P.A., 1996], а также с общеизвестным снижением иммунитета у человека в целом. Фенотипическая изменчивость этой бактерии, широкое распространение и высокая ее способность к выживаемости привело к У помещению этого возбудителя в разряд «новых» инфекций. Недостаточность и противоречивость данных, касающихся как самого возбудителя и факторов егр вирулентности, так и процессов, вызываемых им, делают задачу исследования морфологических изменений в инфицированном A.hydrophila макроорганизме особенно актуальной.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Хомякова, Татьяна Ивановна

выводы

1. Выделенные из различных источников штаммы Aeromonas hydrophila, независимо от их вирулентных свойств, способны вызывать развитие инфекционного процесса у мышей разных линий. ""

2. Слабовирулентный штамм Aeromonas hydrophila 342-2, не обладающий основными факторами патогепности, оказывает in vitro повреждающее действие на культуру энтероцитов человека Сасо-2.

3. Слабовирулентный штамм Aeromonas hydrophila 342-2 вызывает у беспородных и инбредных мышей Balb/C и С57В1/6 развитие инфекционного процесса, характеризующегося кратковременной бактериемией, развитием" очага гнойного воспаления в месте введения, регионарным лимфаденитом и лейкоцитарной реакцией, более выраженной у мышей С57В1/6.

4. Подкожное инфицирование слабовирулентным штаммом Aeromonas hydrophila 342-2 вызывает у беспородных и инбредных мышей Balb/C С57В1/6 развитие дистрофических изменений в печени, выраженность которых снижается на 21-28 сут эксперимента. На 7-28 сут. после инфицирования у белых беспородных мышей, а также мышей линии С57В1/6 в печени выявляются макрофагальнб-. эпителиоидноклеточные гранулемы. Гранулематозная реакция более выражена и длительна у мышей С57В1/6.

5. Инфицирование слабовирулентным штаммом A. hydrophila 342-2 вызывает у мышей разных линий независимо от иммуногенотипа реакцию иммунной системы: акцидентальную инволюцию тимуса и гиперплазию В- и Т- зон селезенки. Наиболее выраженная и длительная реакция органов иммунной системы отмечена у мышей линии С57В1/6 с преобладанием клеточного иммунного ответа. с

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Хомякова, Татьяна Ивановна, Москва

1. Автандилов Г,Г. Морфометрия в патологии. М.Медицина, 1973, 247 с,

2. Адельман Д, Кесарвала X., Фишер Г. Введение в иммунологию. В кп. Клиническаяиммунология и аллергология, под ред. JTaropa Г. М.Практика, 2000, 807с,

3. Баскова И.П. Биологически-активные вещества, продуцированные медицинской пиявкой имеханизмы их действия : Автореф. дисс. на соиск.д.б.н.М, 1986, 31 с.

4. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методамисследования. М Медицина, 1982, 461с,

5. Богдан В.В., Смирнов Л.П., Немова H.H. с соавт. Сравнительное изучение различныхбиохимических параметров патогенных и непатогенных штаммов A.hydrophila. Известгя Российской Академии Наук, серия Биология, Вып. 5, 533-537, 2001

6. Бойко A.B. Микробиологические и экологические аспекты паразитизма вибриофлоры иаэромонад: Автореф. дисс. на соиск.д.м.н.Челябинск, 1998

7. Бондаренко В.М. Общий анализ представлений о патогенных и условно патогенныхбактериях,-ЖМЭИ, 1997, №4, с.20-26

8. Бузолева Л.С., Сидоренко М.Л. Влияние газообразных метаболитов почвенных бактерий наразмножение Ljsteria monocytogenes и Yersinia pseudotuberculosis,-ЖМЭИ, 2005, 2,с.7-11

9. Бухарин О.В. Механизмы бактериальной персиетенции. В кн. Персистепция бактерий, подред. О.В.Бухарина, Куйбышев, 1990, с.5-14

10. Бухарин О.В., Гинцбург А.Л., Романова Ю.М., Эль-Регистан Г.И. Механизмы выживания бактерий М. Медицина , 2005, 367с,- «у

11. Владимирская Е.Б. Механизмы апоптоза клеток крови,- Лаб.медицина, 2001, №4, С.47-54

12. Войно-Ясенецкий М.В. Биология и патология инфекционных процессов. М. Медицина, 1981,207с,

13. Войно-Ясенецкий В.Ф. Очерки гнойной хирургии, 1934, М. Медицина

14. Вуду Г.А. Изменения печени при генерализованном микоплазмозе. В сб. Актуальные вопросы патологической анатомии детского возраста. Изд. Саратовского университета, 1980, 111 с,

15. Галактионов В.Г. Иммунология., М.Академия., 2004., 528 с,

16. Герхардт Ф. Методы общей бактериологии т.1. М. Мир, 1983, 536с,

17. Гусев Е.Ю. Взаимоотношение клеточно-опосредоваиного и гуморального иммунного ответа на уровне целостного организма. Автореф.дисс.ДМН, Пермь, 1998

18. Гусман Б.С., Сорокин А.Ф. Морфология иммунной системы при инфекционных заболеваниях у детей. В сб. Актуальные вопросы патологической анатомии детского возраста. Изд. Саратовского университета, 1980, 111 с,

19. Давыдовский И.В. Патологическая анатомия и патогенез болезней человека. Медгиз,1938, 612с

20. Дик Дж. Иммунологические аспекты инфекционных заболеваний. М., Медицина,-1982, 573 с,

21. Душкин В.А. Характеристика чувствительности мышей инбредных линий к S.typhimuriani * Материалы конф. По биологии лабораторных животных. 1967, с. 27-29

22. Жежера В.Н. Морфологическое изучение вспышки герпетической инфекции в одном из детских отделений Киева. В сб. Актуальные вопросы патологической анатомии детского возраста. Изд. Саратовского университета, 1980, 111 с,

23. Железиикова Г.Ф. Резистентность к возбудителю инфекции и иммунный ответ. ЖМЭИ, 2005, №2, c.104 111

24. Зайратьянц О.В. Патология вилочковой железы и аутоиммунные болезни. Автореф. дисс. дмн, М. 1992, 34 с,

25. Западнюк И.П., Западнюк В.И. Захария Е.А., Западнкж Б.В. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. Киев., Вища школа, 1983^ 383 с,

26. Ивановская Т.Е., Цинзерлинг A.B. Патологическая анатомия. М. Медицина, 1976, 431 с,- /?

27. Каменев Ю.Я. Гирудотерапия в системе натуропатии. В сб.Практическая и экспериментальная гирудология: итоги за десятилетие (1991-2001), Материалы 7-й научно-практической конференции, г,Люберцы, 2001, с.47-61., 2001

28. Каркищенко H.H. Основы биомоделирования. М.Межакадемическое издательство ВПК, 2004., 608 с,

29. Кипарисова Е.Л. Морфология современного пупочного сепсиса. В сб. Актуальные вопросы патологической анатомии детского возраста. Изд. Саратовского университета, 1980, 111 с,

30. Лабинская A.C. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М. Медицина, 1978, 289 с

31. Литвинов В.И., Гергерт В.Я., Мороз А.М с соавт. Иммунология туберкулеза: соьременное состояние проблемы. Вести РАМН, 1999, т.7б с. 8-11*

32. Мавзютов А.Р. Фиалкина C.B., Бондаренко В.М. «Острова» патогенности условпо-патогепных энтеробактерий, Микробиология, 2002, №6, с. 5-9

33. Малеев В.В. Актуальные вопросы терапии и профилактики в условиях эволюции инфекционных заболеваний, //в сб. Лекции для практикующих врачей, XII РНК «Человек и лекарство», М., 2006. с.235-244

34. Медуницын Н.В. Вакцинология., М, Триада-Х. 1999, 272 с,35. «Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований сиспользованием животных», МЗ СССР, Москва, 1985

35. Меньшиков В.В. Руководство по клинической лабораторной диагностике. М. Медицина, 1982,576с,

36. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники. М. Медгиз, 1961, 340 с,

37. Михайлова Л.П., Трунова Г.В., Диатроптов М.Е., Макарова О.В. Сравнительная -характеристика органов иммунной системы и цитокинового профиля мышей С57В1/6 и

38. Balb/C. Тезисы докладовУП Конгресса международной ассоциации морфологов, Казань, Морфология, 2004, №4, с.80

39. Михайлова Л.П., Макарова О.В. Сравнительная характеристика цитокинового профиля и морфологических проявлений гранулематозного воспаления у мышей С57В1/6 и Balb/C,-Иммунология, 2005, №2, с.95-98t *

40. Морозова В.Т., Луговская С.А. Лимфатические узлы. Цитологическая диагностика. М.20СЗ. 70 с- ;

41. Нетрусов А.И. Практикум по микробиологии. M.Academia 2005, 608 с,

42. Носов С.Д. Инфекционные болезни, вызванные условно-патогенной бактериальной микрофлорой. Советская медицина, 1982, №9, с.72-74

43. Остерман Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. М., Наука, 1983, 304 с,

44. Патологическая анатомия болезней плода и ребенка./ Под ред. Ивановской Т.Е., Гусман Б.С., М. Медицина, 1981, т1,375 с,

45. Пауков B.C., Даабуль С.А., Беляева НЛО. Роль макрофагов в патогенезе ограниченного воспаления,- Архив патологии, 2005, №4, с.3-10

46. Пивоваров Ю.П., Королик В.В. Санитарно-значимые микроорганизмы. М. ИКАР, 2000, ?и8 с,

47. Положение о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании, утвержденное постановлением Правительства РФ №554 от 24.07.00.

48. Приказ МЗ СССР №720 «Об улучшении медицинской помощи больным с гнойными хирургическими заболеваниями и усилении мероприятий по борьбе с внутрибольничной инфекцией» от 31.07.1978

49. Приказ МЗ РФ №267 «Об утверждении правил лабораторной практики» от 19.06.2003.

50. Приказ МЗ СССР №1179 «Об утверждении нормативов затрат кормов» от 10.10 1983

51. Приказ МЗ РФ №220 «О мерах по развитию и совершенствованию инфекционной службы в РФ» от 17.09.1993

52. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология, М. Мир. 2000, 592 с,- „

53. Романова Ю.М., Гинцбург А.Л. Цитокины возможные активаторы роста патогенных•íбактерий. Вестник РАМН , 2001, с.7-13

54. Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника. М. Советская наука,1957, 468 с,

55. Руденская И.Н. Патология печени при бактериальной инфекции. Вопросы охраны материнства и детства. №9, 1980, 29-33

56. Савинов В.А. Гирудотерапия. М. Медицина 2004, с.430

57. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. М. Медгиз., 1960,254 с,

58. Серов В.В., Пауков B.C. Воспаление. Руководство для врачей. М. Медицина 1995., 640 с,

59. Соловьева И.П., Брауде В.И.Дифференциальная диагностика гранулекматозного заболевания легких. Методические рекомендации. М.,1989.

60. Сохин А.А. Парадокс инфекционного иммунитета,- ЖМЭИ,.1988, т.1, с.73-79

61. Старикова Э.А., Киселева Е.П., Фрейдлин И.С. Гетерогенность мононуклеарных фагоцитов: субпопуляции или проявления пластичности ,- успехи современной биологии, 2005, т. 125., №5, с.466-477

62. Струков А.И., Кауфман О.Я. Гранулематозное воспаление и гранулематозные болезни. М. Медицина., 1989,180 с,

63. Сулим Н.И. Классификация осложнений после присасывания пиявок. Материалы VIiI Конференции Ассоциации гирудологов России и стран СНГ. М. 2003.с.60-62. ,

64. Супотницкий М.В. Микроорганизмы, токсины и эпидемии. М. Вузовская книга, с.289-90, 2000

65. Фролов А.В. Зарицкий A.M., Фельдман Ю.М. Новые принципы и критерии оценки патогенных и условно патогенных микроорганизмов,- ЖМЭИ, 1986, №9, с.93-96

66. Тотолян А.А., Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы. СПб. Наука, 2000, т.1, 2, 231 с.

67. Хаитов P.M., Алексеев Л.П. Физиологическая роль главного комплекса гистосовместимости человека,- Иммунология, 2001, т.З, с.4-11

68. Харченко В.П., Саркисов Д.С., Ветшев П. С., Галил-Олглы Т.А., Зайратьянц О.В. Болезни вилочковой железы,- М. Триада, 1998., 230 с,

69. Хоулт Дж., Криг Н., Снит П., Стейли Дж., Уильяме С. Определитель бактерий Берджи.9 изд. М.Мир, 1997

70. Хромова С.С., Ефимов Б.А., Тарабрина Н.П. и др. Иммунорегуляция в системе микрофлора-интестинальный тракт,- Аллергология и иммунология, 2004, т.5, №2, с.265-271

71. Шмитт К. К., Мейсик К.С.,0'Браэн А.Д. Бактериальные токсины: друзья или враги? -Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия, 2005 т.2б с.4-15

72. Шувалова Е.П., Змушко Е.И. Синдромная диагностика инфекционных заболеваний. Ст,-Петербург., Питер., 2001. 310 С,

73. Юхименко Л.Н. Методические указания по определению патогенности аэромонад по степени ДНКазной активности от 09. 12.1997. Министерство СХ и продовольствия РФ.Деп. Ветеринария

74. Юхименко Л.Н., Гусева Н.В. Биологические свойства аэромонад, их изменчивость и влияние на развитие инфекционного процесса,- Сб. Паразиты и болезни рыб, 2000, М., Изд. ВНИРО, с 152-156

75. Abdullah A.I., Hart С.А., Winstanley С.Molecular characterization and distribution of virulence-associated genes amongst Aeromonas isolates from Libia,-J. of applied microbiology, 2003, v.95, p.1001-1007

76. Abrami L., Fivas M., Decroly E. The pore- forming toxin proaerolysin is activated by furin,- J. Biol. Chem., 1998a, v. 273, p.32656-32661

77. Abrami L., Fivas M., Glauser P.E. A pore-forming toxin interacts with a GPI-anchored protein and causes of the endoplasmic reticulum,- L. Cell. Biol., 1998b, v.140, p.525-40t

78. Abrami L., Fivas M., van der Goot F.G. Adventures of a pore-forming toxin at the target eel' surface. Trends Microbiol,, 2000, v.8, p. 168-72

79. Adams D.O. The structure of mononuclear phagocytes differentation "in vivo". Sequencial fine and histological studies of the effect of Bacillus Calmette-Guerin,-Amer.J.Pathol., 1974,v.76., p. 17-48

80. Agarwal R.K., Kapoor K.N. Virulence factors of Aeromonas an emerging food borne pathogen problem.J. Commun. Dis. 1998, v.30, p.71-78

81. Aguilar A., Merino S., Rubires X. Influence of osmolarity on lipopolysaccarides and virulence of Aeromonas hydrophila serotype 0;34 strains grown at 37 degrees C,- Infect immunok 1997,v.2, p.1245-50

82. Altwegg M., Martinetti L.G., Luthy-Hottenstein J., Rohrbach M., Aeromonas-assoz\a\%& gastroenteritis after consumption of contaminated shrimp, Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 1991, v. 10, p. 44-45.

83. Andre-Fountaine G., Monfort P., Buggin -Daubie M., . Fatal disease mimicking in a dog, caused by Aeromonas hydrophila ,-Comp Immunol Microbiol Dis, 1995, v. 156, p.69-72

84. Baumann S., Krueger A., Kirchhoff S., Krammer P.H. Regulation of T cell apoptosis during the immune response. Curr. Mol. Med.,2002,v.2, p.257-272

85. Baumgarth N., Egerton M, Kelso A. Activated T-cells from draining lymph nodes and effector site differ in their responses to TCR stimulation,-J.Immunol., 1997, v. 159 (3), p.l 182-5435

86. Benassi F.O., Vergara M., von Specht M.N. Beta-lactam antibiotic sensitivity in Aeromonas spp ofit"clinical, animal and environmental origin,- Revue Argent Microbiol, 2001, v.33, p.47-51

87. Bieth J.G. Les elastases,- J.Soc.Biol., 2001, v.l 1195, p.173-179

88. Birnboim H.C, Doly J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA. Nucleic Acids Res. 1979,v.7,p.l 513-1523.

89. Bocchino M.L., Zembala M., Colizzi V. Apoptosis of human monocytes/macrophages in M. tuberculosis infection. J. Pathol, 1997, v.181, p.31-38

90. Boman H.G. Innate immunity and the normal microflora,- Immunol Rev., 2000, v.173, p.5-16

91. Boros D., Warren K. The bentonite granuloma: characterization of a model system for infections and foreign body granulomatous inflammation using soluble mycobacterial, histoplasma and shistosoma antigens,- Immunology, 1973, v.24, p.511-529

92. Boyd J, Williams J., Curtis B et al. Three small , cryptic plasmids from Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida A449,-Plasmid, 2003, v.50, p.131-144

93. Brumlik M., Buckley J.T., Identification of the cataliytic triad of the lipase/acyltransferase from Aeromonas hydrophila,-J Bacteriol., 1997, v. 179, p. 2060-2064

94. Brumlik M.J., van der Goot F.G., Wong K.R. The disulphide bond in the Aeromonas hydrophilji lipase/acyltransferase stabilizes the structure but is not required for secretion or acrtivity,-J. Bacrteriol, 1997, v.179, p.13116-13121

95. Buckley J.T. The comprehensive sourcebook of bacterial protein toxins In The channel-forming toxin aerolysin,- Academic Press Limited , London, 362-72, 1999 r

96. Buckley J.T., Howard S.P. The cytotoxic enterotoxin of Aeromonas hydrophila is aerolysin,-Infect. Immun.,1999, v.67, p.466-467

97. Buchanan R.L., Palumbo S.A., Aeromonas hydrophila and Aeromonas sobria as potential food poisoning species: a review,- J. Food Safety, 1985, v.76, p. 15-29

98. Bulger R.J., Sherris J.C. The clinical significance of Aeromnas hydrophila :report of two cases,-Arch.Intern.Med.,1966,v.l 18,p.562-564

99. Busing K,-H. Peudomonas hirudinis, ein bakterieller Darmsymbiont des Blutegcls (Hirudo officinalis),-Zentrallblat fur bakteriologie parasitenkunde infektionskrankheiten und Hygiene,1952, v. 157, p.478-484

100. Cascon A., Yugeros J., Temprano A. A major secreted elastase is essential for pato^enicity of Aeromonas hydrophila,-Infect immunol., 2001, v.68, p.3233-3241a

101. Chacon M.R., Figueras M.J., Castro-Escapulli G. Distribution of virulence genes in clinical c-iid ; environmental isolates of Aeromonas spp,- Antonie van Leeuwenhoek, 2003, v.84, p.269-278

102. Chang C.Y,,Thompson H., Rodman N., . Pathogenic analysis of Aeromonas hydrophila septicemia,- Ann Clin Lab. Sci, 1997, v.179, p.254-259

103. Chensue S., Boros D. Modulation of granulomatous hypersensitivity. Characterization of T-Iymphocytes, involved in the adoptive suppression in Shistosoma mamoni-infected mice.,-J.Immunol., 1979, v.123, p.1409-1414

104. Cheng J., Zhou T. Protection from Fas-mediated apoptosis by a soluble form of Fas-molecuIc,-Science, 1994, v.263, p. 1759-1762

105. Ching J.C.Y., Jones N.L., Ceponis P.J.M., Karmal, M.A., Sherman P.M. Escherichia coli Shiga-like toxins induces apoptosis and cleavage of poly(ADP-ribose) polymerase via in vitro activation of caspases,-Infect. Immun., 2002, v. 70, p.4669-4677

106. Chopra A. K., Peterson J.W., Xu X.J., et al. Molecular and biochemical characterization of a heat-labile catatonic enterotoxin from Aeromonas hydrophila,- Microb Pathog., 1996, v. 179, p.357-377

107. Chopra A.K., Xu X., Ribardo D. The cytotoxic enterotoxin of Aeromonas hydrophila induces proinflammatory cytokine and activates arachidonic acid metabolism in macrophages,-Infect Immunol, 2000, v.68, p.2808-2818

108. Chuang Y.C., Chiou S.F., Su J.H. Molecular analysis and expression of the extracellular lipase .of A. hydrophila,-Microbiology,1997, v. 2, p.803-122

109. Collier D.N. Cutaneous infections from coastal and marine bacteria,-Dermatologic therapy, 2002,v.15, p.1-9

110. Davis W.A.,Kane J.G., Garagusi V.F. Human Aeromonas infections; a review of the literature and a case report of endocarditis,-Medicine,1978,v.57, p.267-277

111. Demarta A., Tonolla M., Caminada A. Epidemiological relationships between Aeromonas strains isolated from symptomatic children and household environments as determined by ribotyping,-Eur J. Epidemiol, 2000, v. 16, p.447-453

112. Dhabhar F.S.Acute stress enhances while chronic stress suppress skin immunity. Ann.NY.Acad.Sci.1998., v.917, p.876-890

113. Dockrell D.H. Apoptotic cell death in the pathogenesis of infectious diseases. J. Ir.ipct. 2001, v.42, p.227-234M

114. Doherty A., Sheridan J.J, Allen P. Survival and growth of Aeromonas hydrophila on modified atmosphere packaged normal and high pH lamb,- Int.J.Food Microbiol.,1996, v.199, p.3379-3392,

115. Dumontet S., Pasquale V., Mancino M. Incidence and characterization of Aeromonas spp. in environmental and human samples in Southern Italy,-Microbiologica, 2003, v.26, p.215-225

116. Ebanks R.O., Dacanay A., Goduen M. Differential proteomic analysis of Aeromonas salmonicida outer membrane in response to low iron and in vivo growth conditions,- Proteomics, 2004, v.4, p.1074-1085

117. Edberg S.C., Gallo P. Analysis of the virulence characteristics of bacteria, isolated from bottled , water cooler and tap water,-Microbial Ecology, 1996, v.9, p.67-77

118. Ender P.T., Dolan M.J., Dolan D.Near-drowning -associated Aeromonas pneumonia. — J.Emerg.Med., 1996, v. 14, p.737-741

119. Epple H. J, Mankertz J., Ignatius R. Aeromonas hydrophila beta-hemolysin induces active chloride secretion in colon epithelial cells (HT-29/B6),- Infection and immunity, 2004, v.72, p. 4848-4858

120. Erb K., Kirman J., Delahunt B et al. Infection of mice with Mycobacterium bovis -BCG-induced both Thland Th2 immune responses in the absence of IFN-y signaling. Eur.Cytokine Netw., 1999, v.2, p. 147-154

121. Esteve C., Birkbeck T.H. Secretion of haemolysins and proteases by Aeromonas hydrophila E063: separation and characterization of the serine protease (caseinase) and the metalloproteinase (elastase) -J. of Appl. Microbiol., 2004, v.96, p.994-1001

122. Falcon R.M., Calvalhgo H.F., Joazeiro P.P. Induction of apoptosis in HT29 human intestinal epithelial cells by the cytotoxic enterotoxin of Aeromonas hydrophila -Biochem. Cell. Bio'., 2001v.79, p.525-31

123. FEMS microbiology letters, 1999, v.l80,p. 123-131

124. Ferguson M., Xu X.J., Houston C.W. . Amino-acid residues involved in biological functions of the cytolytic enterotoxin from Aeromonas hydrophila,- Gene, 1995, v.156, p.79-83

125. Ferguson M., Xu X.J., Houston C.W. . Hyperproduction, purification and mechanism of actica of the cytotoxic enterotoxin by Aeromonas hydrophila,-Infect Immunol., 1997, v.65, p.4299-430S,

126. Fernandes-Prada C.M., Hoover D.L., Tail B.D., . Human monocyte-derived macrophages infected with virulent Shigella flexeri in vitro undergo a rapid catholic event similar to oncosis blit not apoptosis,- Infect. Immunol., 1997, v.65, p.1486-1496

127. Fettucciari K., Rosati, E., Scaringi, L. . Group B Streptococcus induces apoptosis in macrophages. J. Immunol., 2000. v.165, p.3923-3933.

128. Figueroa-Arredondo P., Heuser J.E., Akopyants N.S., . Cell vacuolation caused by Vibrio cholerae hemolysin. Infect. Immun., 2001, v.69,p.1613-1624.

129. Filici A., Amicosante G., Kinetic analysis of extension of substrate specificity with Xanthomonas maltophilia , Aeromonas hydrophila and Bacillus cereus metallo-beta lactamases,-Antimicrob Agents Chemother, 1997, v. 156, p.192-195

130. Fivas M., Abrami L., Tsitrin Y. . Not as simple as just punching a hole. -Toxocon, 2001, v.39, p. 163 7-1645

131. Foreman-Wykert A.K., Miller J.F. Hypervirulence and pathogen fitness,- Immunology and MqJ. Gen., 2003, v.6, p. 36-38

132. Francki K.T., Chang B.J. Variable expression of O-antigene and the role of lipopolysacharide as an adhesin in Aeromonas sobria,- FEMS Microbiology Letters, 1994, v.122, p.97-101

133. Galindo C., Sha J., Ribardo D.A Identification of Aeromonas hydrophila cytotoxic enterotoxin -induce genes in macrophages using microarrays,-The J. of Biological Chemistry, 2003, v.278, N41, p.40198-40212

134. Gilbert D.N., Moellering R.C., Sante M.A. the Sanford guide to antimicrobial therapy., 30th ed., Hyde Park, VT: Antimicrobial Therapy, 2000, 650p,

135. Gill C,0., Greer G.G., Dilts B.D. The aerobic growth of Aeromonas hydrophila and Listeria monocytogenes in broths and porc,-Int J Food Microbiol., 1997, v.2, p.67-74

136. Goni-Urriza M., Pineau L., Capdepuy M. Antimicrobial resistance of mesophilic Aeromonas spp. isolated from two European rivers,- J. Antimicrob Chemother., 2000, v.46, p.297-301

137. Gonzales-Serrano C.J., Santos J.A., Garcia Lopes M.L. . Virulence markers in Aeromonas hydrophila and Aeromonas veronii biovar sobria isolates from freshwater fish and from a diarrhea case,-J.Appl.Microbiol., 2002, v.93, p.414-419

138. Graf J. Symbiosis of Aeromonas veronii biovar sobria and Hirudo medicinalis, the medicinal leech: a novel model for digestive tract associations,-Infect. Immun., 1999, v.67,p. 1—7.

139. Guery J., Galbiati F., Smiroldo S et al, Non-MHC-linked Th2 cell development induced by soluble protein administration predict susceptibility to Leishmania major infection,- Ibid, 1997, v. 159, p.2147-2153

140. Guimaraes M. S., Andrade J. R.C., Freitas-Almeida A. C. et al. Aeromonas hydrophija vacuolating activity in the Caco-2 human enterocyte cell line as a putative virulence factor,- FEMS Microbiology Letters, 2002, v.207, p.127-131

141. Haburchak D.R. Aeromonas hydrophila an underappreciated danger to fisherman,- Infect.Med., 1996, v.13, p.893-896

142. Halton C. Those Amazing Leeches.//Macmillan Publishing Co. New York City. Available from Carolina Biological Supplies. 1989, 132pp,s

143. Handfield M., Simard P., Letarte R. Differential media for quantitative recovery of waterbome Aeromonas hydrophila,-Appl Environ Microbiol. ,1996, v.179, p.3544-3547

144. Hanninen M.L., Oivanen P., Hirvcla-Koski V., Aeromonas species in fish, fish-eggs, shrimp and freshwater, Inter. J. Food Microbiol., 1997, v.34, p.17-26.

145. Haque Q., Hague Q.M., Sugiyama A. Characterization of Aeromonas hydrophila: a comparative study of strains isolated from diarrheal feces and the environment,-Southeast Asian J Trop Med Public Health, 1996, v.2, pl32-138

146. Henderson B., Poole S., Wilson M. Bacterial modulins: a novel class of virulence factors which cause host tissue pathology by inducing cytokine synthesis,- Microbiological reviews, ' 1996, v. 6 p. 316-341 ;;

147. Hernandes-Valladares M., Felici A., Weber G., Adolph H.W. . Zn(II) dependence of the Aeromonas hydrophila AE036 metallobetalactamase activity and stability,-Biochemistry, 19$'7, v.36,p.l 1534-11541*

148. Hirst R.G., Olds R.J. Corynebacterium kutscheri and its alleged avirulent variant in mice. J.Hyg, 19978v.80, p.349-356

149. Holmes B.,Quie P.G., Windhorst D.B., Good R.A. Fatal granulomatous disease of childhood. An inborn abnormality of phagocytic function Lancet,-1966- P.1225

150. Hur T.C., Cheng K.C., Hsieh J.M. Aeromonas hydrophila lung abscess in a previously healthy man,- Scand J Infect Dis 1995, v.39, p.295-296

151. Icemoto K., Pollard R., Kukumoto T., Morimatsu M, Small amount of exogenous IL-4 increase the severity of encephalitis induced in mice by the intranasal infection of HSV type-I,-Ibid,1995, v.l55(3), p.1326-1333 '

152. Imbert M., Gancel F. Effect of Different Temperature Downshifts on Protein Synthesis by Aeromonas hydrophila,- Microbial Pathogenesis 2003,v.35, p. 189—196

153. Inghman A.B., Pemberton J.M. A lipase of Aeromonas hydrophila showing nonhemolytic phospholipase C activity,-Curr. Microbiol., 1995, v.l56,p.28-33

154. Inghman A.B., Pemberton J.M. The presence of capsular polysaccharide in mesophilic Aeromionas hydrophila serotypes 0:11 and 0:34,-FEMS Microbiol. Lett., 1995, v. 156, p.69-73

155. Izumi T. Pathogenesis of granulomatous lung disease. -Kekkaku, 2002, v.61, p.83-93

156. Jacquot J., Tournier J., Puchelle E. In vitro evidence that human airway lysozyme is cleaved and inactivated by Pseudomonas aerorinosa elastase and not by human leucocyte elastase,- Infect immunol.1985, v.47, p.555-560

157. Janda J.M. Recent advances in the study of the taxonomy, pathogenecity and*infectious syndromes associated with the genus Aeromonas. Clin Microbiol Rev., 1991, v.4, p.397-4I0

158. Jennings J.B., van der Lande V.M., Hystochemical and bacteriological studies on digestion in nine species of leeches (Annelida, Hirudinea),-Biol Bulletein, 1967, v.133, p.166-183

159. Kaprelyants A.S., Gottschal J.C., Kell D.B. Dormancy in non-sporulating bacteria,-FEMS Microbiol. Rev.,1993,v.104, p.271-286

160. Kaufman M.R., Jia J., Zeng L. . Pseudomonas aeruginosa mediated apoptosis requires the ADP-ribosylating activity of Exos.,- Microbiology, 2000,v. 146,p. 2531-2541

161. Kelly K.A., Koehler J.M., Ashdown L.R. Spectrum of extraintestinal disease due to Aeromonas species in tropical Queensland, Australia,-Clin.Infect.Dis., 1993, v.I6, p.574-579

162. Kersters I.,Verstraete W. Inactivation of Aeromonas hydrophila by Fe(II)-related -radical generation in oxidizing groundwaters,- Appl Environ Microbiol., 1996, v.179, p.3277-3283

163. Kirov S.M., Tassell B.C., Semmler A.B. Lateral flagella and swarming motility in Aeromonas species,- J. of bacteriology, 2002, v.184, p.932-937

164. Kirov SM, Ardestani EK, Hayward LJ, The growth and expression of virulence factors at refrigeration temperature by Aeromonas strains isolated from foods,- Int J Food Microbiol, 1993, v.20,p.l59-168

165. Kierszenbaum A.L., Histology and cell biology., Mosby, 2002, 619 p,

166. Klashe S., Hill W., Janda J.M. Characterization of Aeromonas hydrophila strains of clinical, animal, and environmental origin expressing the 0:34 antigen,- Curr Microbiol, 1996, v. 19, p. 104108

167. Ko W.C., Lee H.C., Chuang Y.C. In vitro and in vivo combination of cefotaxime and minocycline against Aeromonas hydrophila,--Antimicrob. Agents Chemother, 20ft 1, v. 45, p.l 1281-11283-1

168. Krovachek K., Dumontet S., Eriksson E. . Isolation and virulence profile of Aeromonas hydrophila. Implicated in an outbreak of food poisoning in Sweden,-Microbiol Immunol., 1995, v.39, p.655-661

169. Kwon B., Hazlett L. Association of CD4+T cell dependent keratitis with genetic ssusceptibility to Pseudomonas aerugenosa infection. Ibid., 1997, v.12, p.6283-6290.

170. Lan X., Ozawa N., Nishiwaki N.Purification, cloning and sequence analysis of P-N-acetylglucosaminidase from the chitinolytic bacterium Aeromonas hydrophila Strain SUWA-9,-Biosci.Biotechnol.Biochem, 2004, v.68, p.1082-1090f.

171. Lau S.M., Peng M.Y., Chang F.Y.Outcomes of Aeromonas bacteremia in patients with different types of underlying disease,- J. Microbiol. Immunol. Infect., 2000,v.33, p.241-247

172. Launois P, Ohteki T., Swihart K. In susceptible mice, Leishmania major induce very rapid IL-4 production by CD4+T cells wich are NK1/1- -Eur.J. of Immunol., 1995,v.25, p.3298-3307 "

173. Lent C.M., Dickinson, M.H. The Neurobiology of Feeding in Leeches,-Scientific American, 1988 (June), p 98

174. Lin S.N., Shieh S.D., Lin Y.E. Fatal Aeromonas hydrophola bacteremia in a hemodialysis patient treated with deferoxamine,- Am J Kidney Dis, 1996, v. 19, p.733-735

175. Lisanti M.P., Caras I.W., Davits M.A. A glycophospholipid membrane anchor acts as an apical targeting signal in polarized epithelial cells,- J.Cell. Biol., 2003, v.36, No 1-2, p. 41-45

176. Llanos J., Garsia Tello P. Role and behavior of the hydrophobic conditions in bacterial adhesion to incurrent siphon in a bivalve mollusc,-Acta Microbiol Pol, 2000, v.49, l,p.75-82,

177. Llopis F. Grau I., Tubau F.E., Cisnal M., Pallares R. Epidemiological and clinical characteristics of bacteriaemia caused by Aeromonas spp. as compared with Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa,-Scand J. Infect Dis, 2004, v.36, p.335-341

178. Lovvey A.G., Santer U.B., Wieczorec M., . Purification and characterization of a Novel Zinc-Proteinase from Cultures of Aeromonas hydrophila,-. Biol. Chemistry, 1993, v.268, 4, p.9071-7908

179. Lowry.T., Smith S. A. Mycobacterium sp. Infection in Cultured Cobia (Rachycenlrcn canadum),- Proceedings of the 30th Easter Fish health workshop, 2005, P. 1-2 f

180. Mandell G.L., Douglas R.G., Bennett J.E., eds Mandell, Douglas, and Bennett's principles and practice of infectious diseases 5th ed. PhiladelphiatChurchhill Livingstone, 2000

181. Maniatis T., Fritsh E.F., Sambrook J., Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory, NY

182. Marconi, P., Group B Streptococcus induces apoptosis in macrophages.,-J. Immunol, 2000,v. 165,p. 3923-3933

183. Mariano M. The experimental granuloma. A hypothesis to explain the persistence of liie lesion,-Rev.Inst. Med.Trop.Sao.Paulo, 1995, v.37, p.161-176

184. Mauel M.J., Miller D.L., Frazire K.S. . Bacterial pathogens isolated from cultured bull frogs (Rana castesbeiana),-J.Vet.Diagn.Invest., 2002, v. 14, p.431-433 ^

185. McCardell D.A., Madden J.M., Kothary M.H.Purification and characterization of a CIIO eell-elongating toxin produced by Aeromonas hydrophila, -Microb Pathog,1995, v.39, p. 1-9

186. McMahon M.A. The expression of proteinases and haemolysins by Aeromonas hydrophila under modified atmospheres,-J.Appl. Microbiol, 2000, v.89, p.415-422

187. Merino S., Gavin R., Altarriba M.The MgtE Mg2+ transport protein is involved in Aeromonas hydrophila adherence,- FEMS Microbiol Lett, 2001, v.198, p.l 89-195 ^

188. Merino S., Rubires X., Aguillar A. The role of flagella and motility in the adherence and invasion to fish cell lines to Aeromonas hydrophila serogroup 0:34 strain,-FEMS Microbiol Lett. 1997, v.36, p.213-217

189. Merino S., Rubires X., Aguillar A. The role of the O-antigen lipopolysaccaride on the colonization in vivo of the germfrce chicken gut by Aeromonas hydrophila serogroup 0-34,-Microb Pathol, 1996, v.19, p.35-33

190. Messi P., Guerrieri E., Bondi M. Bacteriocin-like substance (BLS) production in Aeromonas hydrophila water isolates,- FEMS Microb.Lett., 2003, v.220, p.121-125

191. Mevorach D., Mascarenhas Jo., Gershov D., Elkon K. Complement- dependent clearance of apoptotic cells by human macrophages.//J.Exp.Med,-1998, v.l 88, p.2313-2320

192. Mims C.A. The Pathogenesis of Infectious Diseases (3rd Ed.). London, Academic Press, 1987, 987 p.

193. Monack D.M., Mecsas J., Ghori N. Yersinia signals macrophages to undergo apoptosis and YopJ is necessary for this cell death. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 1997, v.94, p. 10385- 10390

194. Monack D.M., Raupach B., Hromockyj A.E. Salmonella typhimurium invasion induced apoptosis in infected macrophages. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A, 1996, v.93, p. 9833-9838.

195. Morgan J.G. Johnson P.C. Lack of correlation between known virulence properties of Aeromonas hydrophila and enteropathogenecity for human,- Infect. Immun, 1985, v.50, p.62-65

196. Moss J.A., AliprantisA.O., Zychlinssky A. The regulation of apoptosis by microbial pathogens. Int. Rev.Cytol, 1999, v.187, p.203-259 b

197. Munoz P., Fernandez-Baca V., Pelaez T. , Aeromonas peritonitis,- Clin Infect Dis., 1994, v. 18, p.32-37

198. Naidu A., Yadav M. Influence of iron, growth temperature and plasmids on sideropho:<£ production in Aeromonas hydrophila,- J.Med Microbiol., 1997, v.144, p.8333-8338

199. Noonan B., Trust T.J. The synthesis, secretion and role in virulence of the paracristalline surface protein layers of Aeromonas hydrophila and A. salmonieida,-FEMS Microbiol Lett. ,1997, v.179, p. 1-7

200. Okitsu T., Suzuki R., Sata S.Isolation of Aeromonas species from patients with sporadic diarrhea and characterization of Aeromonas hydrophila,- Kansenshogaku Zashi, 2000, v.74, p. 155-161

201. Oliver J. D., Bockian R. In vivo resuscitation, and virulence towards mice, of viable but nonculturable cells of Vibrio vulnificus,- Appl Env Microbiol, 1995, v. 61, p.2620-2623,,

202. Ormen O., Regue M.Q., Tomas J.M. Studies of aerolysin promoters from different Aeromonas spp,-Microbial Pathogenesis, 2003, v.35, p.189-196

203. Pai R., Sasaki E. , Tarnawski, A.S. Helicobacter pylori vacuolating cytotoxin (VacA) alters cytoskeleton-associated proteins and interferes with re-epithelialization of wounded gastric epithelial monolayers. Cell Biol. Int, 2000, v. 24, P.291-301.

204. Parras F., Diaz M.D., Reina J.Meningitis due to Aeromonas species :case report and review -Clin. Infect.Dis. 1993, v. 17, p.474-475 *

205. Parvis A., Majibur R., Shakhawat B.Acid sensitivity as affected by physico-chemical stresses in Aeromonas hydrophila,--Jpn J Med Sci Biol ,1996, v.2, p.95-102

206. Peng X., Zhang J., Wang S. Immuno-capture PCR for detection of Aeromonas hydrophila,-i. Jf Microbiol methods, 2002, v.49, p.335-338

207. Percy D.E., Barthold S.W. Pathology of Laboratory Rodents and Rabbits. 2nd edition, Iowa State University Press, Ames, 2001 p.987

208. Pianetti A., Sabatini L., Bruscolini F. , Faecal contamination indicator, Salmonella, Vibrio and Aeromonas in water used for the irrigation of agricultural products. Epidemiol. Infect., 2003, v.132, p. 231-238

209. Pin C., Velasco de Diego R., George S. , Analysis and validation of a protective model fqr growth and death of Aeromonas hydrophila under modified atmospheres at refrigeration temperature,-Applied and environmental microbiology. 2004, v.7, p.3925-3932

210. Porat R.M, Yanov M.A., Clark S.M., . Enhancement of the growth of virulent strains of E.coli by interleukin-1,- Science, 1992, v.254, p.430-432

211. Price P., Oliver S., Gilbous A. Caracterisation of thymus involution induced by murine cytomegalovirus infection,- Immunol. Cell.Biol., 1993, v.73, p.155-165

212. Pullium J.K., Dillehay A.J., Webb S. High mortality in Zebrafish (Danio rerio). -Contemp. Top. Am. Ass.Lab.Anal.Sci., 1999, v.38, p.80-83

213. Rabaan A.A., Gryllos I. Motility and the polar flagellum are required for Aeromonas caviae adherence to HEP-2 cells,- Infection and immunity, 2001, v.69, p.4257-4267 ., +

214. Rahman M.H., Kawai K. Outer membrane of Aeromonas hydrophila induce protective immunity in goldfish ,-Fish Shellfish Immunol. ,2000, v. 10, p.747-752 !

215. Ralph HW, Schubert W, Matzinov D., Temperature as an environmental factor influencing the pathogenicity of Aeromonas hydrophila,- Zbl Bakt ,1990,v. 273, p. 327-331

216. Rathmell, J.C., Thompson, C.B. Pathways of apoptosis in lymphocyte development, homeostasis, and disease. Cell, 2002, v. 109, p.97- 107

217. Rehulka J. Aeromonas causes severe skin lesions in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss): clinical pathology, haematology and biochemistry,-Acta Vet.Brno, 2002, v.12, p.345-350

218. Riera J., Barb'e J. Cloning, sequence and regulation of the lexA gene of Aeromonas hydrophila,-Gene,1995, v.154, p.71-75

219. Rogers H.W., Callery M.P., Deck B., Unanue E.R., Listeria monocytogenes induces apoptosis of infected hepatocytes. J. Immunol., 1996, v. 156, p.679-684.

220. Ruckdeschel K., Roggenkamp A., Lafont V. Interaction of Yersinia enterocojjtica with macrophages leads to macrophage cell death through apoptosis. Infect. Immun, 1997, v.65, p.4813-4821

221. Santos Y., Toranzo A.E., Dopazo C.P. Relationships among virulence for fish enterotoxigcnicity, and phenotypic characteristics of motile Aeromonas,-A<\\\ac\A\\irs,, v.67, p.29-39

222. Sawyer R. T. Leech biology and behavior, Volume II Feeding, Biology, Ecology and Systematics, NewWork, 2001

223. Schattner E.J., Apoptosis in lymphocytic leukemias and lymphomas. Cancer Investig. 2002, v.20, p. 737-748

224. Sears C.L., Kaper J.B. Enteric Bacterial Toxins: Mechanisms of Action and Linkage to Intestinal Secretion,- Microbiological reviews, 1996, v.3, p.167-215

225. Semel J., Trenholme G. Aeromonas hydrophila water-associated traumatic wound infection: a review,-J.Trauma, 1990,v.30, p.324-327

226. Seto K., Hayashi-Kuwabara Y., Yoneta T. et al Vacuolation induced by cytotoxin fropi Helicobacter pylori is mediated by the EGF receptor in HeLa cells. FEBS Lett. 1998, v.431, p.347-350

227. Shao J., Liu J., Xiang L. Aeromonas hydrophila induces apoptosis in Carassius auratus lymphocytes in vitro,- Aquaculture,2004,v. 229, p.l 1 -23

228. Shehl S., Ruby J. The growth of Mycobacterium leprae in Nude mice,- Lepr. Rev., i983, v.54, p.283-304 ,,

229. Shibuya K., Robinson D., Jonin F. et al. IL-la and TNF-a are required for IL-12 induced development of Th-lcells producing high level of IFN-y in BALB/c but not C57B1/6,- J.ImmunQL, 1998, v.160, p.1708-1716

230. Smith H. The mounting interest in bactcrial and viral pathogenicity. Ann.Rev.Microbiol., 1989, v.43., p. 1-22

231. Son R., Rusul G., Sahilah A.M., Zainuri A., Raha A.R., Salmah I.Antibiotic resistance and plasmid profile of Aeromonas hydrophila isolated from cultured fish Telapia (Telapia mosambica),-Lett Appl Microbiol, 1997, v.36, p.479-482

232. Spellberg B., Edwards J. Typel/Type2 immunity in infectious diseases,- Immunity in Infection, 2001, v.32, p.76-91

233. Steciw A., Colodny S.M. Empyema due to Aeromonas hydrophila,-Clin.Infect Dis.,1994, v.18, p.474-475

234. Stent G.S., Weisblat, D.A. The Development of a Simple Nervous System,-Scientific America , 1982,v.l, p.136

235. Stevenson R.M.W.,. Vaccination against Aeromonas hydrophila. In: Ellis, A.E. (Ed.), Fish Vaccination.Academic Press, London, pp. 112- 123, 19881. Ji

236. Stuart L., Hughes J., Apoptosis and autoimmunity. Nephrol. Dial. Transplant. 2002, v. 17, p. 697700

237. Stuber K., Burr S.E., Braun M. Type III secretion genes in Aeromonas salmonicida subsp, salmonieida are located on a large thermolabile virulence plasmid. -J.Clin.Microb., 2003, v.8, p.3854-3856

238. Swanson J. The pick of the nibbled bits,-Nature, 2006, v.6., p.750-751

239. Tan E., Low K.W., Wong W.S., Leung K.Y. Internalization of Aeromonas hydrophila by fish epithelial cells can be inhibited with a tyrosine kinase inhibitor,-Mierobio!ogy,1998, v. 144, p.299-307

240. Thaymanavan T., Incidence of haemolysin positive and drug resistant Aeromonas hydrophila in freshly caught finfish and prawn collected from major commercial fishes of coastal South India-FEMS immunology and Medical Microbiology, 2003, v. 36, p. 41

241. Thomas S.R., Trust T.J., Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Aeromonas hydrophila serogroup 0:19. FEMS Microbiol Lett. V179,12,123-9,1997

242. Todt J., Sonstain J., Polak T et al Repeated intratracheal challenge with particulate antigen modulates murine lung cytokines,- Ibid, 2000, v.164, p.4037-4047

243. Trower C.J., Abo S. . Production of an enterotoxin by a gastro-enteritis -associated Aeromonas strain,- J.Med.Microbiol., 2000, v.49, p.121-126

244. Tsai G., Tsai F.C., Kong Z.L. Effects of temperature , medium composition, pH, salt and dissolved oxygen on haemoysin and cytotoxin production by Aeromonas hydrophila isolated from oyster,- Int J Food Microbiol, 1997, v.179, p.ll 1-116

245. Tsen H.Y., Jian L.Z., Chi W.R., Use of a multiplex PCR system for the simultaneous detection of heat labile toxin I and heat stable toxin II genes of enterotoxigenic Escherichia coli in skim milk and porcine stool//Food Prot,-1998,V.61, p.141-145

246. Vadivelu J., Putcucheary S.D., Phipps M. Possible virulence factors involved in bacterial pathogens,- Annu Rev., Microbiol,1995, v.53, p.155-187

247. Vally H., Whittle A., Cameron S. . Outbreak of Aeromonas hydrophila wound infections associated with mud football,-Clin.Inf. Dis., 2004, v.38,p.000-000

248. Villari P., Crispino M. . Prevalence and molecular characterization of Aeromonas spp.ready-to-eat foods in Italy,- J Food Prot, ,2000, v.63, p.1754-1757

249. Vivas J., Carracedo B., Riano J . Behavior of an Aeriomonas hydrophila aroA live vaccine in water microcosms. -Appllied and Environmental Microbiology, 2004, v.5, p.2702-2708

250. Vivas J., Riano J. Carracedo B. The auxotrophic aroA mutant of Aeromonas hydrophila as a live attenuated vaccine against A. salmonicida infections in rainbow trout,-Fish&Shellfish Immunology, 2004, v. 16, p. 193-206

251. Wai S.N., Mizunoe Y., Takade A., Yoshida Sh. A comparison of solid and liquid media for resuscitation of starvation and low-temperature induced nonculturable cells of Aeromonas hydrophila,-Arch. Microbiol., 2000, v.173, p.307-310

252. Winslow G. M., Yager E., Shilo K. et al. Infection of the Laboratory Mouse with the Intracellular Pathogen Ehrlichia chaffeensis Infect Immun, 1998, v. 66, N 8 p. 3892-3899r *

253. Wong C.Y., Heuzenroeder M.W. Inactivation of two hemolytic toxin genes in Aeromonas hydrophila attenuates virulence in a suckling mouse model,-Microbiology, 1998, v. 144, p.291-293

254. Xing-Jing X., Ferguson M.P. Role of a cytotoxic enterotoxin in Aeromonas mediated infections: development of transposon and isogenic mutants,-Infect. Immunol.,1997, v.66, p.3501* 3509

255. Zhang Y.U., Ong C.T., Leung K.Y. Molecular analysis of genetic differences between viruleni and avirulent strains of Aeromonas hydrophila isolated from diseases fish. -Micribiology, 200(| v.l 46, p.999-1009

256. Zychlinsky A., Prevost M.C., Sansonetti P.J., Shigella flexneri induces apoptosis in infected macrophages. Nature, 1992, v. 358, p.167- 169 r