Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфологические преобразования в миометрии крыс во время беременности и в раннем послеродовом периоде

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфологические преобразования в миометрии крыс во время беременности и в раннем послеродовом периоде"

На правахрукописи

Дубинин Евгений Викторович

Морфологические преобразования в миометрии крыс во время беременности и в раннем послеродовом периоде

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск - 2005

Работа выполнена в Научном центре клинической и экспериментальной медицины СО РАМН.

(630117, г. Новосибирск, ул. академика Тимакова, 2)

Научный руководитель:

Заслуженный деятель науки РФ, член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор

Шкурупий Вячеслав Алексеевич

Бгатова Наталья Петровна

Цирельников Николай Иванович

Ведущая организация:

Новосибирский государственный университет (г. Новосибирск)

-9 "

Защита диссертации состоится ОД1с 2005 г. на заседании

диссертационного совета Д 208.062.05 при Новосибирской государственной медицинской академии (630091, Новосибирск, Красный проспект, 52).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Новосибирской государственной медицинской академии (630091, Новосибирск, Красный проспект, 52).

Автореферат диссертации разослан

С " <ЛнАорА-

2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

А. В. Волков

Общая характеристика работы

Актуальность темы.

Физиологическая регенерация эпителиальных тканей обеспечивается активным обновлением клеток и межклеточного вещества (Шубникова Е. А., 1996). Пул активно функционирующих клеток пополняется за счет деления малодифференцированных клеток и их дифференцировки, в то же время избыток клеток элиминируется. В норме эти процессы хорошо сбалансированы, и общее количество клеток поддерживается на постоянном уровне. В других тканях активное обновление может запускаться специальными факторами. Например, в интактной дефинитивной гладкомышечной ткани крайне редко удается обнаружить миоциты, находящиеся в состоянии митоза. Однако при увеличении функциональной нагрузки в ней проявляются значительные пролиферативные возможности (Данилов Р. К., Быков В. Л., 2001). Регенерация осуществляется за счет мобилизации малодифференцированных гладкомышечных клеток (ГМК), обладающих способностью вступать в ми-тотический цикл, их деления и последующей дифференцировки.

Важным компонентом этого приспособительного механизма гладкой мускулатуры на тканевом уровне является динамичное изменение структуры популяции миоцитов (соотношения различных функциональных подтипов), обусловленное их различной пролиферативной активностью и неодинаковой чувствительностью к повреждающим и, возможно, регуляторным факторам.

С позиций современных представлений о компенсаторно-приспособительных механизмах, в частности, физиологической регенерации чрезвычайно интересны примеры масштабных преобразований, происходящих в отдельном органе взрослого животного в физиологических условиях, например, увеличение размеров матки во время беременности, а также уникально высокая скорость ее послеродовой инволюции.

Значительное количество работ, направленных на изучение структурных изменений в матке во время беременности и после родов, посвящено изучению эндометрия и коллагена матки. Существенно меньше исследований было посвящено миометрию. Отдельные морфологические и биохимические исследования (Maibenco Н. С, 1960, Dessouky D. А., 1971, Henell F. et al., 1983, Inouye S. et al., 1983, Morton A. J., Goldspink D. F., 1986) не формируют целостного представления о процессах в миометрии, приводящих к быстрому восстановлению первоначальных (до начала беременности) размеров матки. Никто из вышеуказанных авторов не делал попытки провести морфо-функциональную классификацию миоцитов в миометрии, не были рассмотрены в сравнительном аспекте зоны миометрия по месту плацентации и вне его. Кроме того, вопрос об отсутствии воспалительной реакции в связи с процессом отторжения плаценты в физиологических условиях остается до сих пор открытым, так как результаты исследований противоречивы. В некоторых из них подтверждается наличие воспаления в связи с обнаружением в

тканях матки клеток воспаления (Padykula H. А., 1976, Mackler A. M. et al., 1999, Thomson A. J. et al., 1999, Mackler A. M. et al., 2000), результаты других исследований свидетельствуют об отсутствии типичной воспалительной реакции (Maibenco H. G., 1960, Montfort I., Perez-Tamayo R., 1961, Butterworth В. H. et al., 1991, Brandon J. M, 1994, Nilsen-Hamilton M. et al., 2003). Вместе с тем, деструкция клеток, что имеет место при отторжении плаценты, рассматривается в качестве пускового механизма воспаления вне связи с его этиологией и механизмом, исключая апоптоз.

В связи с вышеизложенным определена цель исследования: изучить особенности структурных преобразований в миометрии крыс во время беременности и в ранний послеродовый период.

В соответствии с целью были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить вероятную морфо-функциональную вариабельность миоцитов на светооптическом и электронномикроскопическом уровнях; исследовать динамику их соотношений в процессе беременности и в ранний послеродовый период.

2. Изучить особенности клеточных преобразований миометрия до и после родов; сравнить их проявления в плацентарной и межплацентарной зонах матки.

3. Изучить клеточный состав инфильтрата в миометрии до и после родов.

4. Выяснить, сохраняются ли морфологические проявления инволютивных процессов к моменту, когда масса матки возвращается к добеременному уровню.

Научная новизна.

Впервые проведена морфо-функциональная классификация паренхиматозных элементов миометрия. Впервые показано, что структурные преобразования в миометрии, проявляющиеся уменьшением размеров и гибелью миоцитов, имеют место задолго до родов (по меньшей мере, в первой половине беременности). Найдены несколько ведущих клеточных механизмов, обеспечивающих уменьшение массы миометрия: клазматоз, апоптоз и дистрофические изменения миоцитов, проведен количественный анализ их соотношения. Приведены свидетельства массовой гибели гладкомышечных клеток в послеродовый период, при этом, как показано, не происходит развития типичной воспалительной реакции. Проведен сравнительный анализ соотношения различных типов миоцитов в двух функциональных зонах миометрия во время беременности и в ранний послеродовый период. Впервые показано, что гибнущие миоциты образуют в миометрии группы («ин-терстициальные конгломераты») между пучками функционирующих клеток. Это явление имело место в дородовый период и резко увеличивалось по масштабу в послеродовый период. Получены свидетельства о том, что на момент возвращения массы матки к добеременному уровню инволютивные процессы в миометрии проявляются все еще достаточно интенсивно.

Теоретическое и практическое значение.

Данное исследование углубило понимание сути «подготовительных» процессов в дородовый и инволютивных процессов, происходящих в мио-метрии в послеродовый периоды. Получены свидетельства того, что чрезвычайно активный процесс снижения массы мышечной оболочки матки является по сути физиологической атрофией органа, направленной, очевидно, на восстановление структурного гомеостаза при отмене функционального запроса на повышенную и иную, чем в норме, функцию, но реализующего это в полной мере в связи с утратой части миоцитов. Результаты работы могут быть использованы как основа для изучения процессов гомеостазирования в физиологических условиях, изучения особенностей репаративных процессов в сочетании с физиологической атрофией органа для изучения ряда патологических состояний в процессе родов и в послеродовом периоде при повторных родах.

Положения, выносимые на защиту:

1. Ведущие механизмы, обеспечивающие быстрое уменьшение массы мио-метрия после родов, - апоптоз, клазматоз, баллонная дистрофия миоцитов. Структурные преобразования, происходящие в миометрии в первой половине беременности, имеют сходство с таковыми в период инволюции после родов.

2. В обеих исследованных зонах миометрия (прилежащей к плаценте и межплацентарной) во время беременности и после родов происходят сходные по проявлениям и последовательности, но различные по интенсивности структурные преобразования (апоптоз, клазматоз, баллонная дистрофия миоцитов, более выраженные в месте плацентации).

3. Степень васкуляризации миометрия уменьшается во время беременности и имеет сильную обратную связь с появлением вакуолизированных и дистрофически измененных миоцитов. Такие измененные гладкомышечные клетки, завершившие жизненный цикл, во время послеродовой инволюции объединяются в специфические «интерстициальные конгломераты».

4. Массовые повреждения миоцитов по механизму баллонной дистрофии не вызывают развития типичной воспалительной реакции, при этом инволю-тивные процессы, протекающие на момент восстановления исходной массы матки, остаются достаточно выраженными на 5-е сутки послеродового периода.

Апробация работы.

Материалы работы доложены на VII Конгрессе Ассоциации морфологов (Казань, 2004 г.), V Съезде анатомов, гистологов и эмбриологов с международным участием (Казань, 2004 г.), научной конференции «Проблемы лим-фологии и интерстициального массопереноса» с международным участием (Новосибирск, 2004 г.) и Всероссийской научно-лрактической конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные, экологические и клинические аспекты» (Новосибирск, 2004 г.).

Публикации.

По теме работы опубликовано 4 работы. Объем работы.

Работа изложена на 149 страницах машинописного текста, содержит 23 микрофотографии, 33 электронограммы, 11 таблиц, 21 график, 3 схемы и 4 приложения. Список литературы содержит 37 русскоязычных и 174 иностранных источника.

Содержание работы Материалы и методы исследования

В соответствии с целью и сформированными задачами объектом исследования служила матка крыс породы Вистар.

Для получения материала по методике, описанной Кабак Я.М. (1968), были отобраны 55 здоровых половозрелых, самок массой 160-180 г. Животных содержали на стандартной лабораторной диете. Самок на стадии пред-течки или течки помещали на ночь к самцам. Срок беременности у крыс определяли со дня обнаружения спермиев в вагинальном мазке. Участки маточных рогов забирали у животных в период беременности (на 10 и 21 сутки) и послеродовой инволюции (на 1-5 сутки после родов). Выбор этого периода обусловлен тем, что в матке после родов, в нормальных для организма условиях, стремительно протекают процессы инволюции. Они приводят к быстрому уменьшению до исходных (до беременности) размеров органа. Контролем служили матки небеременных крыс. Забирали фрагменты, участвующие в процессе плацентации (плацентарная зона), и расположенные между плацентами соседних плодов (межплацентарная зона). Количество изученных животных в каждой группе представлено в табл. 1.

Таблица 1. Объем исследованного материала._

Состояние Количество животных

контроль (небеременные) 7

беременность 10-е сутки 6

беременность 21-е сутки 6

послеродовый период 1 -е сутки 8

послеродовый период 2-е сутки 7

послеродовый период 3-е сутки 7

послеродовый период 4-е сутки 7

послеродовый период 5-е сутки 7

ВСЕГО: 55 животных

Светооптический метод исследования

Для гистологического исследования фиксацию материала проводили в 10%-ном растворе нейтрального формалина, затем обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации, заключали в парафин и готовили срезы толщи-

ной 5-6 мкм (Волкова О.В., Елецкий Ю.К., 1987). Для изучения общей морфологической картины и дифференцировки соединительной и гладкомы-шечной тканей применяли окраску по методу ван Гизона (Пирс Э., 1962; Лилли Р., 1969).

Метод электр он ной микроскопии

Фиксацию материала для электронной микроскопии проводили в 1%-ном растворе OSO4 на фосфатном буфере (рН=7.4) (Millonig G., 1961), дегидратировали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в эпон (Уикли Б., 1975; Миронов А.А. и др., 1994). Полимеризовали при комнатной температуре, затем в термостате при 60° С.

Из образцов плацентарной и межплацентарной зон матки каждого животного изготавливали по 5 блоков. Полутонкие срезы толщиной около 1 мкм получали на ультратоме LKB 8800, для ориентации на блоке и светооп-тического исследования окрашивали их 1%-ным раствором толуидинового синего в 1%-ном растворе буры при температуре 74° С (Шкурупий В.А. и др., 1984).

Из этих же блоков на ультратоме LKB 8800 готовили ультратонкие срезы толщиной 35-45 нм, контрастировали их насыщенным водным раствором уранилацетата (Уикли Б., 1975) и цитратом свинца (Reunolds E.S., 1963). Затем их напыляли углеродом путем его испарения в вакууме и изучали в электронном микроскопе JEM-1010 S.

Метод морфометрии

Для объективной оценки изменений, происходящих в миоцитах во время беременности и период послеродовой инволюции, был проведен мор-фометрический анализ. В его основу были положены рекомендации и принципы, изложенные в работах отечественных и зарубежных исследователей (Автандилов Г. Г., 1980, Непомнящих Л. М. и др., 1984, Лейсли А., 1992).

Используя открытую тестовую систему, состоящую из 289 регулярно расположенных точек, на парафиновых срезах миометрия при конечном увеличении в 630 раз подсчитывали объемную плотность миоцитов и интерсти-циального пространства. В составе интерстициального пространства выделяли рыхлую волокнистую соединительную ткань, кровеносные сосуды и «ин-терстициальные вакуоли». В связи с тем, что часть миоцитов содержала внутриклеточные вакуоли, определяли объемную плотность «вакуолизиро-ванных» и неизмененных клеток. В каждом сроке эксперимента в анализ брали не менее 70 полей зрения, результаты выражали в процентах.

Подсчитывали соотношение различных морфо-функциональных типов миоцитов на срезах в каждом сроке для каждой зоны (плацентарной и межплацентарной). На каждую точку было проанализировано 50-70 полей зрения; в каждом поле изучали от 65 до 120 клеток в зависимости от их размеров.

Общую объемную плотность миоцитов, находившихся на заключительных стадиях деструкции (клетки 4 и 5 типов, объединенные в «интер-стициальные конгломераты»), подсчитывали при помощи открытой тестовой системы из 64 точек при конечном увеличении в 630 раз.

Размеры миоцитов 1 типа и их ядер определяли, используя тестовую решетку из 289 точек и конечное увеличение в 630 раз, как среднее число тестовых точек, приходящихся на одну клетку и на одно ядро соответственно. При этом увеличении одна тестовая точка соответствовала площади 24,1 мкм2.

Численную плотность клеток, участвующих в развитии воспалительных реакций организма (нейтрофилов, макрофагов и лимфоцитов), а также апоптозных телец определяли в поле зрения при конечном увеличении в 630 раз (что соответствует площади 0,0097 мм2), затем производили пересчет на 1 мм2 среза миометрия. На каждый исследованный срок в анализ брали не менее 70 таких полей зрения.

Для электронномикроскопического изучения миоциты и эндотелиоци-ты кровеносных капилляров миометрия фотографировали при увеличении в 3000 раз. Со срезов образцов тканей животного одной группы изучали не менее 30 гладкомышечных клеток. Фотографии с негативов печатали при увеличении в 8 000-12 000 раз.

Полученный цифровой материал подвергали статистической обработке с помощью встроенных формул программы Microsoft Excel 98. Результаты выражали в виде X ± sx, где X - среднеарифметическое значение, sx - стандартная ошибка среднего. Вероятность достоверности различий сравниваемых средних величин определяли на основании критерия Стьюдента (Петри А., Сэбин К., 2003). Различия между средними величинами считали достоверными при уровне значимости р<0,05. Существующую вероятность достоверности различий обозначали в тексте, таблицах и на графиках следующими символами: *-р<0,05, **-р<0,01, *** -р<0,001

Результаты исследования и их обсуждение

При светооптическом исследовании миометрия было установлено, что миоциты неоднородны по своим морфологическим проявлениям и, вероятно, находятся в различных функциональных состояниях. Изучив морфологические и ультраструктурные особенности различных типов миоцитов, а также приняв во внимание данные литературы, предложили следующую морфо-функциональную классификацию для групп гладкомышечных клеток:

Клетками 1-го типа считали миоциты с ядрами, содержащими большое количество диффузного хроматина, и неизмененной структурой цитоплазмы. Они представляют собой наиболее распространенный вид мио-цитов. Приняли, что это дифференцированные, активно функционирующие ГМК.

• Клетки 2-го типа имели в ядре большое количество компактного хроматина и неизмененную цитоплазму. Возможно, эта группа представляет собой пул покоящихся клеток.

• Клетки 3-го типа независимо от состояния ядра содержали в цитоплазме многочисленные светлые вакуоли. По данным Авцына А. П. и Шахламова В. А. (1979) усиленное везикулообразование, формирование и отщепление цитоплазматических отростков (клазмацитоз) могут являться характерными структурными проявлениями гипоксии.

• Для клеток 4-го типа были характерны небольшие размеры, гиперхром-ные ядра, оттесненные на периферию, и светлая цитоплазма,. Приведенные морфологические особенности ГМК соответствуют баллонной дистрофии, при которой клетка превращается в огромную вакуоль, заполненную жидкостью.

• Клетки 5-го типа имели округлую форму, мелкие размеры, гиперхромные ядра, окруженные ободком светлой цитоплазмы. С функциональных позиций они, вероятно, представляют собой одну из завершающих стадий апоптоза - апоптозные тельца (AT).

Кроме того, клетки 4 и 5 типов зачастую образовывали четко отграниченные группы («интерстициальные конгломераты») между пучками миоци-тов 1,2 и 3 типов.

Все вышеперечисленные виды ГМК в различном соотношении представлены в миометрии всех групп исследованных, включая контрольных (небеременных), животных.

Результаты морфологического исследования миометрияживотных контрольной группы.

Миометрий животных контрольной группы (небеременных) представлен двумя слоями гладких миоцитов и разделяющей их рыхлой соединительной тканью. Клетки наружного слоя миометрия имели косопродольное, а внутреннего - циркулярное направление. Между слоями хорошо выражены артерии мышечного типа.

Большинство миоцитов имело веретеновидную форму и светлые вытянутые ядра (клетки 1-го типа). На их долю приходится 84,0 + 0,7% миоцитов миометрия. Клетки с темными ядрами, названные миоцитами 2-го типа составляли 12,2 ± 0,7%. Содержание других типов ГМК у животных контрольной группы незначительное. Необходимо отметить, что в миометрии присутствуют единичные клетки 5-го типа (1,11 ± 0,20 %). Наличие их в группе контрольных животных согласуется с ранее приведенными данными (Saunders J. W., 1966; Wu X. et al., 2000).

По данным электронномикроскопического исследования цитоплазма большинства миоцитов имеет электронноплотный матрикс. Большую часть цитоплазмы занимают миофибриллы. Органоиды группируются преимущественно в околоядерной области. В значительном количестве представлены

митохондрии, имеющие хорошо выраженные кристы. Гранулярный ретику-лум содержит большое количество прикрепленных рибосом. В ядрах выявляются ядрышки. По краю ядер узким ободком располагается гетерохрома-тин.

По данным морфометрического исследования наиболее представленными компонентами интерстициального пространства миометрия являются рыхлая соединительная ткань (объемная плотность 5,26 ± 1,11%) и кровеносные сосуды (объемная плотность 3,04 ± 0.20%). 0,42 ± 0,20 % миометрия приходилось на светлые вакуолеподобные структуры, содержащиеся в ин-терстициальном пространстве.

Таким образом, в миометрии небеременных животных обнаруживали различные по структурной организации гладкомышечные клетки. Среди них преобладали активно функционирующие. Присутствие деструктивно измененных гладкомышечных клеток (типы 4 и 5), видимо, связано с развивающимися в миометрии небеременных животных процессами физиологической инволюции.

Данные морфологического исследования миометрия животных в процессе физиологической беременности.

На 10-е сутки беременности по сравнению с контрольной группой мышечная оболочка выглядит более рыхлой, что, вероятно, связано с увеличением размеров миоцитов. К 21-м суткам миометрий максимально гипертрофирован, в обеих исследованных зонах отмечается увеличение размеров ГМК на срезе (с 69,3+5,5 мкм2 в контроле до 217±19 мкм2 в плацентарной и до 204±18 мкм2 в межплацентарной) и незначительное изменение их ядер (с 26,5±2,6 мкм2 в контроле до 34,5±4,0 мкм2 в плацентарной и до 33,1±4,8 мкм2 в межплацентарной зонах). При этом эндометрий образует многочисленные выпячивания в полость матки, а периметрий с прилежащей мышечной оболочкой - глубокие инвагинации в миометриий.

Анализ изменений представительства миоцитов различных типов в миометрии позволяет сделать, предположение, что к 10-м суткам беременности часть неактивных миоцитов (2-го типа) переходит в активное состояние (1-ый тип): доля неактивных миоцитов с 12,2 ± 0,7% в контроле к 10-ым суткам беременности снижалась до 7,26 ± 0,56% в плацентарной зоне и до 7,00 ± 0,42% в межплацентарной, а доля активных, наоборот, возрастала с 84,0 ± 0,7% до 88,4 ± 0,7% в плацентарной и до 88,5 ± 0,5% в межплацентарной зонах. Доля вакуолизированных (3 тип) клеток во время беременности возрастала с 0,3 ± 0,1% в плацентарной зоне до 20,2 ± 0,9%, а в межплацентарной области до 15,4 ± 0,9%. Возможно, в условиях беременности значительная часть активных ГМК подвергается вакуолизации, и они переходят в 3-ю структурно-функциональную группу.

В течение беременности происходило снижение объемной плотности кровеносных сосудов миометрия с 3,04 ± 0,20% в контроле до 0,52 ± 0,32% в межплацентарной зоне и до 0,21 ± 0,14% в плацентарной, что указывает на ухудшение трофики клеток и создание условий для развития гипоксии. Недостаточное снабжение гладкомышечных клеток кислородом может объяснять развитие процессов клазмацитоза, который на светомикроскопическом уровне проявлялся вакуолизацией миоцитов. Вакуоли в интерстиции миометрия становились хорошо заметными к моменту родов.

С помощью электронномикроскопического исследования на 10 сутки беременности в цитоплазме ряда миоцитов выявляли вакуолеподобные образования, а незадолго до родов также отмечали признаки клазматоза: отщепление части периферического цитоплазматического материала и фрагментов миоцитов в окружающий интерстиций.

Особенностью интерстиция матки в исследованные периоды беременности были группы многочисленных плотно расположенных разрушающихся ГМК ("интерстициальные клеточные конгломераты"). Выявленные в их составе миоциты находились на завершающих фазах гибели - чаще всего это были мелкие клетки с гиперхромными ядрами и значительно вакуолизиро-ванной цитоплазмой (4 тип), либо апоптозные тельца (5 тип). Их объемная плотность возрастала с 1,22±0,43% в контроле до 4,62±0,95% в межплацентарной зоне и до 8,84+1,65% в плацентарной на 21 сутки беременности. При этом численная плотность апоптозных телец во время беременности в обеих исследованных зонах миометрия оставалась на уровне контрольных величин (рис. 1).

Анализируя состояние миометрия на заключительном этапе беременности, нельзя не отметить серьезный парадокс. К моменту родов матка набирала максимальную массу, в частности, за счет гипертрофии миометрия, так как она должна быть готова к выполнению физической нагрузки в процессе родов. Тем не менее, в миометрии наблюдали масштабный переход миоци-тов в нефункциональное состояние (предположительно, дистрофические изменения) и массовую гибель ГМК. Создается впечатление, что основа для интенсивных инволютивных преобразований в послеродовой матке подготавливается заранее, еще во время беременности. Это касается ликвидации погибших паренхиматозных клеточных элементов как макрофагами, так механизмом апоптоза также с участием фагоцитов.

Таким образом, во время беременности в исследованные периоды происходило увеличение размеров большей части миоцитов, снижение объемной плотности кровеносных сосудов, возрастала доля миоцитов, незначительно представленных в миометрии контрольных животных (клетки 3, 4 и 5-го типов). В ряде клеток наблюдали явления клазматоза, а в интерстиции -многочисленные вакуолеподобные структуры и конгломераты разрушающихся миоцитов. Все отмеченные преобразования проявлялись сходным об-

Звездочками обозначена соответствующая степень достоверности отличий от контроля. Условные обозначения для оси абсцисс к рис. 1,2,3: Б10, Б21 - соответствующий день беременности Р1 - Р5 - соответствующий день после родов

разом в обеих исследованных зонах беременной матки - плацентарной и межплацентарной, но были выражены в большей мере в плацентарной зоне.

Результаты морфологического исследования миометрияживотных в раннем послеродовом периоде.

По данным электронномикроскопического исследования для миоцитов в период инволюции был также характерен значительный полиморфизм. В большинстве клеток (миоциты 1 типа) органоиды располагались вблизи ядра. Вся свободная от органоидов цитоплазма была занята миофибриллами. Сами ядра, часто лопастные, с высоким содержанием эухроматина. Ровные глубокие инвагинации ядерной мембраны могут объясняться давлением на ядро миофибрилл, находящихся в сокращенном состоянии. В ряде клеток (3 тип) отмечали клазматоз и отделение фрагментов цитоплазмы в интерсти-ций. Одновременно выявляли клетки с «пустотами» в цитоплазме (практически без органоидов), которые соответствовали 4-му клеточному типу миоцитов. Вероятно, эти пустоты являлись бесструктурными гидратированными участками клетки в состоянии баллонной дистрофии.

С помощью морфометрического исследования было обнаружено, что за 5 суток послеродовой инволюции уменьшаются размеры миоцитов 1 типа (с 258+16 мкм2 до 85,6±7,5 мкм2 в плацентарной и с 236±17 мкм2 до 105±6 мкм2 в межплацентарной зонах) и их ядер (с 64,9±6,1 мкм2 до 27,9±7,5 мкм2 в плацентарной зоне и с 62,2±3,7 мкм2 до 30,2±3,1 мкм2 в межплацентарной зонах).

При исследовании динамики соотношения разных (пяти) типов глад-комышечных клеток обнаружили, что в период с 21-х суток беременности до 1-х суток после родов суммарная доля клеток, находящихся на различных стадиях деструкции (3, 4 и 5 тип), в обеих исследованных зонах изменялась незначительно (рис. 2), происходило лишь их перераспределение внутри этой сборной группы. Можно предположить, что сразу после родов большая часть вакуолизированных миоцитов (3-го типа) переходит в 4-й тип с признаками баллонной дистрофии, либо подвергается апоптозу и накапливается в тканях в виде апоптозных телец (5-й тип). Суммарная доля разрушающихся ГМК, увеличившись за время беременности (рис. 2), остается на высоком уровне (свыше 30% клеток) на 5-е сутки после родов. Это свидетельствует о продолжении инволютивных процессов в конце исследованного периода, когда масса матки практически возвращается к контрольным величинам.

В миометрии на 5-ые суткам после родов отмечали дальнейшее увеличение объемной плотности «интерстициальных клеточных конгломератов» до 15,1±1.5% в межплацентарной и до 18,9±2,2% в плацентарной областях. В конце исследованного периода такие конгломераты клеток выявляли в мио-метрии повсеместно. Положительная динамика в послеродовом миометрии отмечена также для АТ (рис. 1), их численная плотность на 5-е сутки после родов превосходила контрольные величины в обеих зонах почти в 6 раз. Это

подтверждает значимую роль апоптоза в элиминации ГМК в послеродовом миометрии.

Особый интерес в связи с поставленными в работе задачами представляет динамика численной плотности клеток гематогенного происхождения, участвующих в развитии воспалительной реакции, квалифицированной нами так в связи с документированными процессами деструкции (баллонная дистрофия). Изучаемый параметр для лимфоцитов достоверно (р<0,01) снижался на 47,5% во время беременности и возвращался к контрольным величинам на 3-й сутки после родов. Аналогичную тенденцию во время беременности отмечали для нейтрофилов, однако после родов их численная плотность оставалась достаточно низкой (рис. 3). Нельзя не отметить сходную картину изменений объемной плотности кровеносных сосудов в миометрии и численной плотности нейтрофилов (коэффициент корреляции 0.95 для плацентарной зоны и 0.86 для межплацентарной). Такое сходство дает основание предположить, что именно степень васкуляризации миометрия является одним из факторов, ограничивающих приток нейтрофилов, которым отводится центральная роль в запуске воспалительной реакции (Струков А. И. и др., 1990).

Численная плотность макрофагов на единицу площади среза во все исследованные временные промежутки сохранялась постоянной и соответствовала аналогичному показателю для небеременных животных (55,6±8,9 мм"2). Стабильность этого показателя свидетельствует о том, что объемная плотность кровеносных сосудов не ограничивает поступления макрофагов из крови в миометрий, и что в миометрии отсутствуют медиаторы воспаления, обеспечивающие усиленный приток макрофагов.

Заключение

В период ранней послеродовой инволюции матки в части миоцитов миометрия интенсивно развивается клазматоз, который, возможно, завершается апоптозом либо баллонной дистрофией ГМК, также не исключающей последующее развитие апоптоза. Несмотря на появление в период инволюции многочисленных гибнущих клеток, в миометрии отсутствуют признаки «классического» воспаления, на что указывают величины численной плотности гематогенных клеток воспаления. Уменьшение пула активно функционирующих ГМК, очевидно, ставит вопрос о его пополнении при каждых последующих родах, что чрезвычайно важно в связи с проблемой слабости родовых сил при повторных беременностях.

Выводы:

1. Послеродовая инволюции миометрия у крыс осуществляется несколькими одновременно протекающими механизмами, среди которых наиболее выражены апоптоз, клазматоз И дистрофические изменения миоцитов.

2. Все обнаруженные механизмы инволюции миометрия матки у крыс (апоптоз, клазматоз и дистрофические изменения) имеют место уже в первой половине беременности. Они усиливаются к моменту родов, но с наибольшей интенсивностью проявляются в послеродовый период.

3. Структурные преобразования матки во время беременности и в послеродовый период затрагивают не только плацентарную, но и межплацентарную зоны и протекают в них сходным образом. Скорость и масштаб таких преобразований в плацентарной зоне несколько выше, чем в межплацентарной.

4. Объемная плотность кровеносных сосудов в обеих зонах миометрия снижается во время беременности и незначительно увеличивается в ранний послеродовый период, оставаясь на пятые сутки после родов значимо меньшей, чем до беременности.

4.1. Снижение объемной плотности сосудов имеет сильную обратную связь с увеличением доли вакуолизированных миоцитов и интер-стициальных вакуолей.

4.2. Изменения численной плотности нейтрофилов в миометрии прямо коррелируют с изменениями величин объемной плотности сосудов - она значительно снижается относительно контроля во время беременности, затем увеличивается к пятым суткам после родов.

5. Явление массовой гибели миоцитов во время инволюции матки не приводит к развитию типичной воспалительной реакции, численная плотность нейтрофилов и лимфоцитов снижается к моменту родов. Исключение составляют макрофаги, численная плотность которых остается постоянной на протяжении всего исследованного периода, обеспечивая элиминацию продуктов процессов апоптоза и клазматоза, а также дистрофически измененных гладкомышечных клеток.

6. Миоциты, завершившие жизненный цикл, накапливаются в интерстици-альных пространствах в виде «интерстициальных клеточных конгломератов», которые содержат дистрофически измененные клетки.

7. У крыс к пятым суткам после родов, когда масса матки близка к состоянию небеременной, процессы дистрофии и апоптоза клеток в миометрии протекают все еще достаточно интенсивно. Возвращение массы матки к добеременному уровню не является свидетельством завершения в ней ин-волютивных преобразований.

Практические рекомендации

1. Полученные данные могут быть рекомендованы к внедрению в учебный процесс кафедр гистологиии, морфологии и биологии.

2. Результаты исследования механизмов инволюции матки крыс необходимо учитывать в экспериментальной работе по изучению гистострук-турной организации миометрия во время беременности и в послеродовый период.

Список печатных работ Дубинина Е. В. по теме диссертации

1. Дубинин Е. В. Апоптоз миоцитов как один из возможных механизмов послеродовой инволюции матки / Е. В. Дубинин, Н. Н. Дубинина, В. А. Шкурупий // Материалы II Всероссийской научно-практической конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные, экологические и клинические аспекты». Тезисы докл. - Новосибирск, 2004. - С. 25-26.

2. Дубинин Е. В. Структурные изменения различных отделов миометрия крысы в ранний период послеродовой инволюции // Материалы V съезда анатомов, гистологов и эмбриологов с международным участием. Тезисы докл. - Казань, 2004. - С. 35.

3. Дубинин Е. В. Морфологическая организация миометрия крысы во время физиологической беременности и в период послеродовой инволюции / Е. В. Дубинин, Н. II. Дубинина, В. А. Шкурупий // Материалы VII конгресса ассоциации морфологов. Казань, 2004. — Морфология. -2004.-Т. 126.-№4.-С. 43.

4. Дубинин Е. В. Особенности интерстиция матки крыс во время беременности и в период послеродовой инволюции. / Е. В. Дубинин, Н. Н. Дубинина, В. А. Шкурупий // Материалы конференции «Проблемы лимфологии и интерстициального массопереноса». Тезисы докл. — Новосибирск, 2004. - С. 158-160.

Подписано к печати 30.12.2004 г. Формат 60x84 - 1 печатный лист. Тираж- 100 экз.

Отпечатано с оригинал-макета Оригинал-макет подготовлен в типографии ООО «Бухгалтер плюс» Заказ № 11390

Типография ООО «БУХГАЛГЕРплюс» г. Новосибирск, ул. Авиастроителей, 5 8 (3832) 65-80-39

DÍ\¿ \

/ V

o-

Ü(#

í

16 ФЕЗ ZOgM

Hi ¿/

1541

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Дубинин, Евгений Викторович

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Строение миометрия. Морфо-функциональные особенности гладкой мышечной ткани матки.

1.2 Особенности строения миометрия во время беременности и после родов.

1.2.1 Изменение миометрия во время беременности.

1.2.2 Изменение миометрия в послеродовом периоде.

1.3 Влияние половых гормонов на структуру миометрия.

1.4 Механизмы преобразований, происходящих в матке во время беременности и после родов.

1.5 Роль коллагена в формообразовательных процессах в матке во время беременности и после родов.

1.6 Апоптоз.

1.6.1 Определение апоптоза и его биологическое значение.

1.6.2 Регуляция апоптоза.

1.6.3 Стадии апоптоза, его морфологические и биохимические проявления.

1.6.4 Молекулярные механизмы апоптоза.

1.6.5 Апоптоз в матке и его гормональная регуляция.

И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объект исследования.

2.2 Светооптический метод исследования.

2.3 Метод электронной микроскопии.

2.4 Метод морфометрии.

III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Результаты морфологического исследования миометрия животных контрольной группы.

3.2 Данные морфологического исследования миометрия животных в процессе физиологической беременности.

3.3 Результаты морфологического исследования миометрия животных в раннем послеродовом периоде.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфологические преобразования в миометрии крыс во время беременности и в раннем послеродовом периоде"

Проблема нормального роста и дифференцировки клеток и тканей -одна из наиболее успешно решаемых проблем гистологии.

Согласно гистогенетической концепции (Клишов А. А., 1984) репара-тивная регенерация реализуется теми же механизмами, что и процессы физиологической регенерации.

В ряде тканей, в частности, эпителиальных (Шубникова Е. А., 1996), имеет место активное обновление клеток. Пул активно функционирующих клеток пополняется за счет деления малодифференцированных клеток и их дифференцировки, в то же время избыток клеток элиминируется. В норме эти процессы хорошо сбалансированы, и общее количество клеток поддерживается на постоянном уровне. В других тканях активное обновление может запускаться специальными факторами. Например, в интактной дефинитивной гладкомышечной ткани крайне редко удается обнаружить миоциты, находящиеся в состоянии митоза. Однако при увеличении функциональной нагрузки в ней проявляются значительные пролиферативные возможности (Данилов Р. К., Быков В. Л., 2001). Регенерация осуществляется за счет мобилизации малодифференцированных гладкомышечных клеток, обладающих способностью вступать в митотический цикл, их деления и последующей дифференцировки.

Важным компонентом этого приспособительного механизма гладкой мускулатуры на тканевом уровне является динамичное изменение структуры популяции миоцитов (соотношения различных функциональных подтипов), обусловленное их различной пролиферативной активностью и неодинаковой чувствительностью к повреждающим и, возможно, регуляторным факторам.

С позиций современных представлений о компенсаторно-приспособительных механизмах, в частности, физиологической регенерации чрезвычайно интересны примеры масштабных преобразований, происходящих в отдельном органе взрослого животного в физиологических условиях, например, увеличение размеров матки во время беременности, а также уникально высокая скорость ее послеродовой инволюции.

Суть процессов, обеспечивающих увеличение массы матки во время беременности, изучена в ряде исследований (Schaub М. С., 1964, Woessner J. F., 1965, Halme J., Jaaskelainen M., 1970, Shaikh A. A., 1971, Kelly R. E., Ver-hage H. G., 1985, Morton A.J., Goldspink D. F., 1986, Goldspink D. F., Douglas A. J., 1988, Thilander G., Rodriguez-Martinez H., 1989, Nishinaka K., Fukuda Y., 1991, T assell W. e t a 1., 2 ООО). Зна чительное количество работ, касающихся структурных изменений в матке во время беременности и после родов, посвящено изучению эндометрия (Telfer V. F., Hisaw F. L., 1957, Banon P. et al., 1964, Miyoshi K. et al., 1990, Ritter J, Philippe E., 1990, Otsuki Y., 2001). Достаточно полно изучен коллаген матки: его количественное содержание в тканях (Sharrow L. et al., 1989, Kaidi R. et al., 1991), механизмы разрушения, ферменты (Anton E. et al., 1969, GalambosJ.T. et al., 1976, Woessner J. F., 19 76, Woessner J. F., Ryan J. N., 1980, Milwidsky A. et al., 1982, Henell F. et al., 1983, Shimizu K., 1983, Shimizu K, Maekawa K., 1983, Blair H. C. et al., 1986, Shimizu K., Hokano M., 1988, Balbin M. et al., 1998, Рывняк В. В., 2001) и внутриклеточные структуры (Roth М. et al., 1981, Bienkowski R. S., 1985, Everts V. et al., 1996, Рывняк В. В., Дулгиеру О. Ф., 2003), обеспечивающие его элиминацию после родов. Инволюционные процессы в миометрии после родов изучены в значительно меньшей степени. Отдельные морфологические и биохимические исследования, касающиеся собственно миоцитов, не формируют целостного представления о процессах в миометрии, приводящих к быстрому восстановлению первоначальных (до начала беременности) размеров матки (Maibenco Н. G., 1960, Dessouky D. А., 1971, Henell F. et al., 1983, Inouye S. et al., 1983, Morton A. J., Goldspink D. F., 1986). Никто из вышеуказанных авторов не делал попытки провести морфо-функциональную классификацию миоцитов в послеродовом миометрии, не были рассмотрены в сравнительном аспекте зоны миометрия по месту плацентации и вне его. Кроме того, вопрос об отсутствии воспалительной реакции в связи с процессом отторжения плаценты в физиологических условиях остается до сих пор открытым, так как результаты исследований противоречивы. В некоторых из них подтверждается наличие воспаления в связи с обнаружением в тканях матки клеток воспаления (Padykula Н. А., 1976, Mackler А. М. et al., 1999, Thomson A. J. et al., 1999, Mackler A. M. et al., 2000), результаты других исследований свидетельствуют об отсутствии типичной воспалительной реакции (Maibenco Н. G., 1960, Montfort I., Perez-Tamayo R., 1961, Butterworth В. H. et al., 1991, Brandon J. M., 1994, Nilsen-Hamilton M. et al., 2003). Вместе с тем, деструкция клеток, которая имеет место при отторжении плаценты, рассматривается в качестве пускового механизма воспаления вне связи с его этиологией и механизмом, исключая апоптоз.

В связи с вышеизложенным определена цель исследования: изучить особенности структурных преобразований в миометрии крыс во время беременности и в ранний послеродовый период.

В соответствии с целью были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить вероятную морфо-функциональную вариабельность миоцитов на светооптическом и электронномикроскопическом уровнях; исследовать динамику их соотношений в процессе беременности и в ранний послеродовый период.

2. Изучить особенности клеточных преобразований миометрия до и после родов; сравнить их проявления в плацентарной и межплацентарной зонах матки.

3. Изучить клеточный состав инфильтрата в миометрии до и после родов.

4. Выяснить, сохраняются ли морфологические проявления инволютивных процессов к моменту, когда масса матки возвращается к добеременному уровню.

Научная новизна.

Впервые проведена морфо-функциональная классификация паренхиматозных элементов миометрия. Впервые показано, что структурные преобразования в миометрии, проявляющиеся уменьшением размеров и гибелью миоцитов, имеют место задолго до родов (по меньшей мере, в первой половине беременности). Найдены несколько ведущих клеточных механизмов, обеспечивающих уменьшение массы миометрия: клазматоз, апоптоз и дистрофические изменения миоцитов, проведен количественный анализ их соотношения. Приведены свидетельства массовой гибели гладкомышечных клеток в послеродовый период, при этом, как показано, не происходит развития типичной воспалительной реакции. Проведен сравнительный анализ соотношения различных типов миоцитов в двух функциональных зонах миометрия во время беременности и в ранний послеродовый период. Впервые показано, что гибнущие миоциты образуют в миометрии группы («интерсти-циальные конгломераты») между пучками функционирующих клеток. Это явление имело место в дородовый период и резко увеличивалось по масштабу в послеродовый период. Получены свидетельства о том, что на момент возвращения массы матки к добеременному уровню инволютивные процессы в миометрии проявляются все еще достаточно интенсивно.

Теоретическое и практическое значение.

Данное исследование углубило понимание сути «подготовительных» процессов в дородовый и инволютивных процессов, происходящих в миометрии, в послеродовый периоды. Получены свидетельства того, что чрезвычайно активный процесс снижения массы мышечной оболочки матки является по сути физиологической атрофией органа, направленной, очевидно, на восстановление структурного гомеостаза при отмене функционального запроса на повышенную и иную, чем в норме, функцию, но реализующего это в полной мере в связи с утратой части миоцитов. Результаты работы могут быть использованы как основа для изучения процессов гомеостазирования в физиологических условиях, изучения особенностей репаративных процессов в сочетании с физиологической атрофией органа для изучения ряда патологических состояний в процессе родов и в послеродовом периоде при повторных родах.

Положения, выносимые на защиту:

1. Ведущие механизмы, обеспечивающие быстрое уменьшение массы мио-метрия после родов, - апоптоз, клазматоз, баллонная дистрофия миоцитов. Структурные преобразования, происходящие в миометрии в первой половине беременности, имеют сходство с таковыми в период инволюции после родов.

2. В обеих исследованных зонах миометрия (прилежащей к плаценте и межплацентарной) во время беременности и после родов происходят сходные по проявлениям и последовательности, но различные по интенсивности структурные преобразования (апоптоз, клазматоз, баллонная дистрофия миоцитов, более выраженные в месте плацентации).

3. Степень васкуляризации миометрия уменьшается во время беременности и имеет сильную обратную связь с появлением вакуолизированных и дистрофически измененных миоцитов. Такие измененные гладкомышечные клетки, завершившие жизненный цикл, во время послеродовой инволюции объединяются в специфические «интерстициальные конгломераты».

4. Массовые повреждения миоцитов по механизму баллонной дистрофии не вызывают развития типичной воспалительной реакции, при этом инволю-тивные процессы, протекающие на момент восстановления исходной массы матки, остаются достаточно выраженными на 5-е сутки послеродового периода.

Апробация работы.

Материалы работы доложены на VII Конгрессе Ассоциации морфологов (Казань, 2004 г.), V Съезде анатомов, гистологов и эмбриологов с международным участием (Казань, 2004 г.), научной конференции «Проблемы лимфологии и интерстициального массопереноса» с международным участием (Новосибирск, 2004 г.) и Всероссийской научно-практической конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные, экологические и клинические аспекты» (Новосибирск, 2004 г.).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 4 работы.

Объем работы.

Работа изложена на 149 страницах машинописного текста, содержит 23 микрофотографии, 33 электронограммы, 11 таблиц, 21 график, 3 схемы и 4 приложений. Список литературы содержит 37 русскоязычных и 174 иностранных источника.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Дубинин, Евгений Викторович

выводы

1. Послеродовая инволюции миометрия у крыс осуществляется несколькими одновременно протекающими механизмами, среди которых наиболее выражены апоптоз, клазматоз и дистрофические изменения миоцитов.

2. Все обнаруженные механизмы инволюции миометрия матки у крыс (апоптоз, клазматоз и дистрофические изменения) имеют место уже в первой половине беременности. Они усиливаются к моменту родов, но с наибольшей интенсивностью проявляются в послеродовый период.

3. Структурные преобразования матки во время беременности и в послеродовый период затрагивают не только плацентарную, но и межплацентарную зоны и протекают в них сходным образом. Скорость и масштаб таких преобразований в плацентарной зоне несколько выше, чем в межплацентарной.

4. Объемная плотность кровеносных сосудов в обеих зонах миометрия снижается во время беременности и незначительно увеличивается в ранний послеродовый период, оставаясь на пятые сутки после родов значимо меньшей, чем до беременности.

4.1. Снижение объемной плотности сосудов имеет сильную обратную связь с увеличением доли вакуолизированных миоцитов и интер-стициальных вакуолей.

4.2. Изменения численной плотности нейтрофилов в миометрии прямо коррелируют с изменениями величин объемной плотности сосудов - она значительно снижается относительно контроля во время беременности, затем увеличивается к пятым суткам после родов.

5. Явление массовой гибели миоцитов во время инволюции матки не приводит к развитию типичной воспалительной реакции, численная плотность нейтрофилов и лимфоцитов снижается к моменту родов. Исключение составляют макрофаги, численная плотность которых остается постоянной на протяжении всего исследованного периода, обеспечивая элиминацию продуктов процессов апоптоза и клазматоза, а также дистрофически измененных гладкомышечных клеток.

6. Миоциты, завершившие жизненный цикл, накапливаются в интерстици-альных пространствах в виде «интерстициальных клеточных конгломератов», которые содержат дистрофически измененные клетки.

7. У крыс к пятым суткам после родов, когда масса матки близка к состоянию небеременной, процессы дистрофии и апоптоза клеток в миометрии протекают все еще достаточно интенсивно. Возвращение массы матки к добеременному уровню не является свидетельством завершения в ней ин-волютивных преобразований.

3.4. Заключение.

Общая схема изменений в гладкомышечных клетках миометрия, которые, на наш взгляд, имеют место во время беременности и в период послеродовой инволюции, представлена на рис. 80.

Нельзя не отметить, тем не менее, что принципиально важные общебиологические вопросы остались открытыми:

• Чем объясняется увеличение общего количества ДНК в миометрии за время беременности — увеличением ли количества нормальных (диплоидных) клеток, либо появлением многоядерных, либо полиплоидных клеток? Почему не удалось обнаружить картин обычного митотическо-го деления клеток в миометрии?

• Существует ли какой-либо «судьбоносный» для миоцитов порядок, заставляющей их вступать на путь гибели во время послеродовой инволюции; касается ли это появившихся во время беременности клеток, или, наоборот, «старых», или, например, полиплоидных? Каково соотношение ГМК, гибнущих путем апоптоза и дистрофии?

• И, пожалуй, самый серьезный вопрос: восстанавливается ли в результате цикла «беременность - послеродовая инволюция» общее количество миоцитов миометрия до прежнего, добеременного уровня, или имеет место гиперинволюция? Если справедливо второе, миометрий с каждой последующей беременностью и родами должен содержать все меньше и меньше работоспособных клеток, и, соответственно, стано- ■ виться с каждыми родами менее функциональным. N v

Рис. 80. Схема преобразований миоцитов во время беременности и в период послеродовой инволюции.

Миоцит 2-го типа (покоящаяся клетка)

Миоцит 1-го типа (активно функционирующая клетка)

Миоцит 1-го типа (гипертрофированный)

Миоциты 5-го типа (апоптозиые гельна)

Миоциты 4-го типа (состояние баллонной дистрофии)

Миоцит 3-го типа (вакуолизированная клетка)

Миоцит 3-го типа олизнрованмая клетка)

Миоциты 5-го типа (апоптозные тельца)

Миоциты 4-го тина (состояние баллонной дистрофии)

Миоиит 1-го типа (активно функционирующая клетка)

Цифрами на рис. 80 обозначены следующие процессы:

1. Обратимый переход активно функционирующих гладкомышечных клеток (1 тип) в неактивное, покоящееся состояние (2 тип), которое проявляется на светооптическом уровне в уменьшении размеров клеток, уплотнении цитоплазмы и ядра.

2. Элиминация небольшой доли миоцитов через механизм апоптоза, образование апоптозных телец (5 тип), которые поглощаются макрофагами либо соседними гладкомышечными клетками.

3. Развитие в части ГМК морфологических проявлений дистрофии (4 тип), приводящих к их гибели. Баллонная дистрофия может объясняется нарушением механизмов трансмембранного транспорта. Дистрофически измененные клетки элиминируются макрофагами. Возможно, воспалительная реакция не развивается, так как целостность мембран миоцитов не нарушается.

Вышеуказанные процессы обеспечивают непрерывное удаление паренхиматозных клеток в миометрии в контроле (небеременном состоянии), то есть одну из сторон физиологической регенерации.

4. Увеличение ГМК в размерах во время беременности.

5. Видимые на светомикроскопическом уровне вакуолизированные ГМК (3 тип) подвержены активному клазматозу, который объясняется недостаточным снабжением миоцитов кислородом из-за значительного снижения объемной плотности кровеносных сосудов в миометрии во время беременности. При ультраструктурном исследовании в этих клетках заметны выпячивания цитоплазмы, а изредка также отшнуровка окруженных мембраной фрагментов.

6. Уменьшение размеров миоцитов после отделения многочисленных участков цитоплазмы. Фрагменты цитоплазмы образуют интерстициальные вакуоли, также хорошо заметные на светомикроскопическом уровне. Эти вакуоли поглощаются как макрофагами и фибробластами, так, возможно, и прилежащими гладкомышечными клетками. Процесс вакуолизации цитоплазмы развивается еще во время беременности. Процесс уменьшения массы миоцитов за счет образования и отщепления цитоплазматических вакуолей может завершаться гибелью значительной доли клеток путем дистрофических преобразований (7) или, как и до беременности, по механизму апоптоза (8). Клетки, которые справились с активным процессом потери массы, предположительно, формируют стабильную клеточную популяцию (9).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Дубинин, Евгений Викторович, Новосибирск

1. Автандилов Г. Г. Введение в количественную патологическую морфологию. М.: Медицина, 1980. - 216 с.

2. Авцын А. П., Шахламов В. А. Ультраструктурные основы патологии клетки М.: Медицина, 1979. - 320 с.

3. Альберте Б., Брей Д., Льюис Д. и др. Молекулярная биология клетки: В 3-х т. Т 2. -М.: Мир, 1994.-541 с.

4. Белушкина Н. Н., Северин С. Е. Молекулярные основы патологии апоптоза//Арх. Патол. 2001. - №1. - С. 51-60.

5. Вакулин Г.М., Марченко В. Г., Прутовых Н. И., Якобсон Г. С. Изменения ультраструктуры и функциональных параметров клеток коры надпочечников во время репаративной регенерации // Бюлл. Экспер. Биол. 1978. - Т. 85. - №4. - С. 495-500.

6. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. М.: Медицина, 1982. - 304 с.

7. Глаголев А. А. Геометрические методы количественного анализа агрегатов под микроскопом. M.-JL: Государственное издание комитета по делам геологии при СНК СССР, 1941. - 317 с.

8. Зашихин A. JI. Некоторые аспекты гистогенеза и реактивности висцеральной гладкой мышечной ткани // Труды военно-медицинской академии / Под ред. Р. К. Данилова. СПб.: Изд-во Военно-Медицинской Академии, 2004. - Т. 257. - С. 138-142.

9. Кабак Я.М. Практикум по эндокринологии М.: Изд-во МГУ, 1968. -275 с.

10. Калашникова М.М., Рубецкой J1. С. Электронномикроскопическое исследование обратимости склеротических изменений в печени // Арх. Патол. 1974. - Т. 36. - №3. - С. 51-56.

11. Калашникова М.М., Рубецкой J1. С., Журавлева М. В. Электронномик-роскопические и гистохимические характеристики гепатом, вызванных длительным введением тетрахлорметана // Бюлл. Экспер. Биол. — 1980. -Т. 39. С. 744-747.

12. Калимуллина JI. Б. К вопросу о "темных" и "светлых" клетках // Морфология. 2002. - Т122. - №4. - С. 75-80.

13. Клишов А. А. Гистогенез и регенерация тканей Л.: Медицина, 1984. -232 с.

14. Коган Е. А. Морфологические аспекты апоптоза / Материалы симпозиума "Апоптоз и эссенциальные фосфолипиды". Москва, 18-21 ноября 2002 г. - С. 8-11.

15. Крыжановский Г. Н. Процесс дистрофии (некоторые аспекты проблемы) // Арх. Пат. 1974. - Т. 36, вып. 5. - С. 3-12.

16. Лейсли А. Световая микроскопия в биологии. Методы. М.: Мир, 1992. - 462 с.

17. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия М.: Мир, 1969.-645 с.

18. Лушников Е. Ф., Загребин В. М. Клеточный апоптоз: морфология, биологическая роль и механизмы развития // Арх. Патол. 1987. - Т. 49. -№2. - С. 84-89.

19. Миронов А. А., Комиссарчик Я. Ю., Миронов В.А. Методы электронной микроскопии в биологии и медицине. СПб.: Наука, 1994. - 400 с.

20. Непомнящих Л. М., Лушникова Е. Л., Колесникова Л. В., Семенов Д. Е., Чернокалова М. Г., Абуладзе 3. С., Ерисковская Н. К. Морфометриче-ский и стереологический анализ миокарда Новосибирск: Изд-во АМН СССР, 1984.- 160 с.

21. Общая патология человека. Руководство для врачей: В 2-х т. Т. 1. / Под ред. А. И. Струкова, В. В. Серова, Д. С. Саркисова М.: Медицина, 1990.-448 с.

22. Петри А. Наглядная статистика в медицине / А. Петри, К. Сэбин. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. - 144 с.

23. Пирс Э. Гистохимия М.: Иностранная литература, 1962. - 963 с.

24. Программированная клеточная гибель / Под ред. В. С. Новикова. -СПб.: Наука, 1996.-276 с.

25. Розен В. Б. Основы эндокринологии М.: Высшая школа, 1984. - 336 с.

26. Руководство по гистологии: В 2-х т. Т. 1 / Под ред. Р. К. Данилова, В. Л. Быкова. СПб.: СпецЛит, 2001. - 496 с.

27. Рывняк В.В., Гудумак B.C., Рыбакова М.А., Грумеза О.Ф., Пелин А.В. Внеклеточная и внутриклеточная резорбция коллагена гладкомышеч-ными клетками при послеродовой инволюции матки // Бюлл. Эксп. Биол. Мед.- 1999.-№1.-С. 106-108.

28. Рывняк В. В., Дулгиеру О. Ф. Участие эластазы во внеклеточной и внутриклеточной деградации коллагена при послеродовой инволюции матки // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. 2003. - №8. - С. 235-237

29. Рывняк В. В. Механизмы резорбции коллагена при послеродовой инволюции матки//Арх. патол.-2001. -№1. С. 32-35.

30. Серов В. В., Шехтер А. Б. Соединительная ткань М.: Медицина, 1981. -317с.

31. Скулачев В. П. Старение — специфичная биологическая функция, а не результат накопления ошибок в сложных живых системах: биохимическое подтверждение гипотезы Вайсманна // Биохимия. 1997. - Т. 62. -С. 1191-1195.

32. Струков А. И., Серов В. В. Патологическая анатомия М.: Медицина, 1985.-656 с.

33. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих. М.: Мир, 1975. -328 с.

34. Хлопин Н. Г. Общебиологические и экспериментальные основы гистологии М.: Изд-во АН СССР, 1946. - 491 с.

35. Шехтер А. Б., Николаев А. В., Берченко Г. Н. Заживление ран как саморегулирующийся процесс // Арх. Патол. 1977. - Т. 39. - №5 - С. 25-32.

36. Шкурупий В.А., Гаврилин В.Н., Ковригина Т.Г. Ультраструктурные аспекты гипертрофии клеток печени при экспериментальных воздействиях. // В кн.: Ультраструктурная патология печени. Рига.: Зинатне, 1984. -С. 148-152.

37. Шубникова Е. А., Юрина Н. А., Гусев Н. Б., Балезина О. П., Большакова Г. Б. Мышечные ткани М.: Медицина, 2001. - 236 с.

38. Afting Е. G., Becker М. L., Elce J. S. Proteinase and proteinase-inhibitor activities of rat uterine myometrium during pregnancy and involution // Bio-chem. J.- 1979.-Vol. 177.-№1. P. 99-106.

39. Afting E. G., Elce J. S. DNA in the rat uterus myometrium during pregnancy and postpartum involution. Measurement of DNA in small pieces of mammalian tissue // Analyt. Biochem. 1978. - Vol. 86. - № 1. - P. 90-99.

40. Albina J. E., Reichner J. S. Role of nitric oxide in mediation of macrophage cytotoxicity and apoptosis // Cancer and Metastasis Rev. 1998. - Vol. 17. -P. 39-53.

41. Anderson Т. J., Ferguson D. J., Raab G. M. Cell turnover in the resting human breast: influence of parity, contraceptive pill, age and literality // Br. J. Cancer. 1982. - Vol. 46. - P. 376-382.

42. Anton E., Brandes D., Barnard S. Lysosomes in uterine involution: distribution of acid hydrolases in luminal epithelium // Anat. Rec. 1969. -Vol. 164.-P. 231-251.

43. Arends M. J., Wyllie A. H. Apoptosis: mechanisms and roles in pathology // Int. Rev. Exp. Pathol. 1991. - Vol. 32. - P. 223-254.

44. Banon P., Brandes D., Frost J. K. Lysosomal enzymes in the rat ovary and endometrium during the estrous cycle // Acta Cytol. 1964. - Vol. 8. - P. 416-425.

45. Beltran В., Mathur A., Duchen M.R., Erusalimsky J.D., Moncada S. The effect of nitric oxide on cell respiration: a key to understanding its role in cell survival or death // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2000 - Vol. 97. - P. 14602-14607.

46. Benedetti, Jezequel A. M., Orlandi F. Preferential distribution of apoptotic bodies in acinar zone 3 of the normal human and rat liver // J. Hepatol. -1988.-Vol. 7.-P. 319-324.

47. Berg R. A., Schwartz M. L., Crystal R. G. Regulation of the production of secretory proteins: intracellular degradation of newly synthesized "defective" collagen // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1980. - Vol. 77. - P. 4746-4750.

48. Berg R. A., Schwartz M. L., Rome L. H., Crystal R. G. Lysosomal function in the degradation of defective collagen in cultured lung fibroblasts // Biochem. 1984. - Vol. 23. - P. 2134-2138.

49. Bienkowski R. S. Collagen degradation in human lung fibroblasts: extent of degradation, role of lysosomal proteases, and evaluation of an alternate hypothesis // J. Cell. Physiol. 1984. - Vol. 121. - P. 152-158.

50. Bienkowski R. S. Intracellular degradation of newly synthesized collagen // Prog. Clin. Biol. Res. 1985. - Vol. 180. - P. 565-572.

51. Bienkowski R. S. Intracellular degradation of newly synthesized secretory proteins // Biochem. J. 1983. - Vol. 214. - P. 1-10.

52. Bienkowski R. S., Curran S. F., Berg R. A. Kinetics of intracellular degradation of newly synthesized collagen // Biochemistry. 1986. - Vol. 25. - P. 2455-2459.

53. Billing R. J., Barbiroli В., Smellie R. M. S. The mode of action of oestradiol. II. The synthesis of RNA // Biochem. Biophys. Acta. 1969. - Vol. 190. - P. 60-65.

54. Blair H. C., Teitelbaum S. L., Ehlich L. S., Jeffrey J. J. Collagenase production by smooth muscle: correlation of immunoreactive with functional enzyme in the myometrium // J. Cell Physiol. 1986. - Vol. 129. - P. 111-123.

55. Borel I. P. Uterine collagens. General review // Rev. Fr. Gynecol. Obstet. -1991. Vol. 86. -№12. - P. 715-722.

56. Bortner D. C., Oldenburg В. E., Cidlowski A. J. The role of DNA fragmentation in apoptosis // Trends Biol. Sci. 1995. - Vol. 5. - P. 21-26.

57. Brandes D., Anton E. An electron microscopic cytochemical study of macrophages during uterine involution // J. Cell Biol. 1969. - Vol. 41. - №2. -P. 450-461. a

58. Brandes D., Anton E. Lysosomes in uterine involution: intracytoplasmic degradation of myofilaments and collagen // J. Gerontol. 1969. - Vol. 24. -№1.-P. 55-69. b

59. Brody S. Hormonal influence on the nucleic acid and protein contents of the human myometrium // Exp. Cell Res. 1958. - Vol. 14. - P. 149-159.

60. Brown D. G., Sun X. M., Cohen G. M. Dexametasone-induced apoptosis involves cleavage of DNA to large fragments prior to internucleosomal fragmentation // J. Biol. Chem. 1993. - Vol. 268. - P. 3037-3039.

61. Burleigh M. C., Barret A. I., Lazarus G. S. Cathepsin Bl. A lysosomal enzyme that degrades native collagen // Biochem. J., 1979. Vol. 137. - №2. -P. 387-398.

62. Butterworth B.H., Greer I.A., Liston W. A. Immunocytochemical localization of n eutrophil e lastase in term placenta, decidua and myometrium in pregnancy-induced hypertension // Br. J. Obstet. Gynaecol. 1991. - Vol. 98. -P. 929-933.

63. Cadenas E., Davies K. J. Mitochondrial free radical generation, oxidative stress, and aging // Free Radic. Biol. Med. 2000. - Vol. 29. - P. 222-230.

64. Cohen G. M., Sun X-M., Snowden R. Т., Dinsdale D., Skilleter D. N. Key morphological features of apoptosis m ay о ccur i n t he a bsence о f i nternu-cleosomal DNA fragmentation // Biochem. J. 1992. - Vol. 286. - P. 331— 334.

65. Cohen J. J., Duke R. C. Glucocorticoid activation of a calcium-dependent endonuclease in thymocyte nuclei leads to cell death // J. Immunol. 1984. -Vol. 132.-P. 38-42.

66. Dessouky D. A. Electron microscopic studies of the myometrium of the guinea pig. The smooth muscle cell of the myometrium before and during pregnancy// Am. J. Obstet. Gynecol. 1968. - Vol. 100. - P. 30-41.

67. Dessouky D. A. Fine structural changes of the uterine smooth muscle cell boundary during gestation // Am. J. Obstet. Gynecol. 1969. - Vol. 103. - P. 1117-1124.

68. Dessouky D. A. Myometrical changes in postpartum uterine involution // Am. J. Obstet-. Gynecol. 1971. - Vol. 110. - P. 318-329.

69. Devireddy L. R., Teodoro F. A., Richard N. Induction of apoptosis by a secreted lipocalin that is transcriptionally regulated by IL-3 deprivation // Science. 2001.-Vol. 293. - P. 829-834.

70. Dranfield I., Stock S. C., Haslett C. Regulation of cell adhesion molecule expression and function associated with neutrophil apoptosis // Blood. -1995. Vol. 85. - P. 3264-3273.

71. Ellis R. E., Yuan J. Y., Horvitz H. R. Mechanisms and functions of cell death // Annu. Rev. Cell Biol. 1991. - Vol. 7. - P. 663-698.

72. Etherington D. J. Collagenolytic-cathepsin and acid-proteinase activities in the rat uterus during postpartum involution // Eur. J. Biochem. 1973. -Vol. 32.-P. 126-128.

73. Everts V., Van der Zee E., Creemers L., Beertsen W. Phagocytosis and intracellular digestion of collagen, its role in turnover and remodelling // Histo-chem. J. 1996. - Vol. 28. - P. 229-245.

74. Fang Y. P., Lepont J., F assett С. S ignaling b etween t he p lacenta a nd t he uterus involving the mitogen-regulated protein/proliferin // Endocrinology. 1999. Vol. 140. - P. 5239-5274.

75. Fawthrop D. J., Boobis A. R., Davies D. S. Mechanisms of cell death // Arch. Toxicol. 1991. - Vol. 65. - P. 431-444.

76. Fimia G. M., Gottifredi V., Passananti C., Maione R. Double-stranded inter-nucleosomal cleavage of apoptotic DNA is dependent on the degree of differentiation in muscle cells // J. Biol. Chem. 1996. - Vol. 271. - P. 1557515579.

77. Fisher G. H., Rosenberg F. J., Straus S. E. Dominant interfering Fas gene mutations impare apoptosis in a hume autoimmune lymphoproliferative syndrome // Cell. 1995. - Vol. 81. - P. 935-946.

78. Fuchs A.R. Hormonal control of myometrial function during pregnancy and parturition // Acta Endocrinol. (Suppl.) 1978. - Vol. 221. - P. 1-70.

79. Fulks R. M., Li J. В., Goldberg A. L. Effects of insulin, glucose, and amino acids on protein turnover in rat diaphragm // J. Biol. Chem. 1975. Vol. 250. P. 290-298.

80. Galambos J. Т., Dale E., Binkley F. Plasma concentrations of connective tissue compounds: I. the effect of uterine involution // Proc. Soc. Exp. Biol. Med-1976.-Vol. 151. P. 366-367.

81. Gavrieli Y., Sherman Y., Ben-Sasson S. A. Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation // J. Cell Biol.- 1992.-Vol. 119. P. 493-501.

82. Geyer H., Afting E.-G., Muller U. Biochemical studies on hypotrophy and hypoplasia in the post partum uterus of the rat // Arch. Gynecol. 1977. -Vol. 222.-P. 231-238.

83. Goldspink D.F., Douglas A.J. Protein turnover in gravid and nongravid horns of uterus in pregnant rats // Am. J. Physiol. 1988. - Vol. 254. - P. 549-554.

84. Goldspink D.F., Morton A.J. Changes in uterine growth and proteine turnover in rat during and after pregnancy // J. Physiol. 1985. - Vol. 361. - P. 41.

85. Gosden R., Spears N. Programmed cell death in the reproductive system // Br. Med. Bull. 1997. - Vol. 53. - P. 644-661.

86. Grant R. A. Chemical changes in the uterus of the rat during late pregnancy and postpartum involution. Effects of lactation and hormone treatment // J. Reprod. Fert. 1965. - Vol. 9. - P 285-299.

87. Green D. R., Kroemer G. The central executioners of apoptosis: caspases or mitochondria? // Trends Cell Biol. 1998. - Vol. 8. - P. 267-271.

88. Green D. R., Reed J. C. Mitochondria and apoptosis // Science. 1998. -Vol. 281.-P. 1309-1312.

89. Halme J, Jaaskelainen M. Protocollagen proline hydroxylase of the mouse uterus during pregnancy and post-partum involution // Biochem. J. 1970. -Vol. 116.-P. 367-369.

90. Halme J., Woessner J.F. Effect of progesterone on collagen breakdown and tissue collagenolytic activity in the involuting rat uterus // J. Endocrinol. -1975. P.357-362.

91. Harkness M. L. R., Harkness R. D. The collagen content of the reproductive tract of the rat during pregnancy and lactation // J. Physiol. 1954. - Vol. 123.-P. 492-500.

92. Harkness R. D., Moralee В. E. The time course and route of loss of collagen from the rat's uterus during postpartum involution // J. Physiol. 1956. - Vol. 132.-P. 502-508.

93. Henell F., Ericsson J.L., Glaumann H. An electron microscopic study of the post-partum involution of the rat uterus. With a note on apparent crinophagy of collagen // Virchows Arch. B. Cell Pathol. Incl. Mol. Pathol. 1983. -Vol. 42.-Vol. 271-287.

94. Hengartner О. M. The biochemistry of apoptosis // Nature. 2000. - Vol. 407.-P. 770-771.

95. Hockenbery D. Defining apoptosis // Am. J. Pathol. 1995. - Vol. 146. - P. 16-19.

96. Inouye S, Iyama K, Araki C, Usuku G. Phagocytosis of Cytoplasmic blebs derived from smooth muscle cells by fibroblast-like cells and macrophages in the post-partum rat uterus // Virchows Arch. B. Cell Pathol. 1983. - Vol. 42. - P. 235-242.

97. James T. N. Normal and abnormal consequences of apoptosis in the human heart. From post natal morphogenesis to paroxysmal arrhythmias // Circulation. 1994. - Vol. 90. - P. 556-571.

98. Jeffrey J. J., Gross J. Collagenase from rat uterus. Isolation and partial characterization // Biochemistry. 1970. - Vol. 9. - P. 268-273.

99. Jurukova Z., Milenkov C. Involvement of smooth muscle cells in collagen degradation in the postpartum uterus // Virchows Arch. B. 1981. - Vol. 37.- P. 237-244.

100. Kelly R.E., Verhage H.G. Structural changes in contractile apparatus of the myometrium during estrus end pregnancy // J. Submicrosc. Cytol. 1985. -Vol. 17.-P. 1-10.

101. Kerr J. F. Shrincage necrosis: a distinct mode of cellular death // J. Pathol. 1971.-Vol. 105.-P. 13-20.

102. Kerr J. F. Some lysosome functions in liver cells reacting to sublethal injury // In: Lisosomes in biology and pathology. Amsterdam, 1971. - P. 106-111.

103. Kerr J. F., Searle J. The digestion of cellular fragments within phagolysosomes in carcinoma cells // J. Pathol. 1972. - Vol. 108. - P. 55-58.

104. Kerr J. F., Wyllie A. H., Currie A. R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics // Br J Cancer. 1972.- Vol. 26. P. 239-257.

105. Kerwar S. S., Nolan J. C., Ridge S. C., Oronsky A. L., Slakey L. L. Properties of a collagenase inhibitor from cultures of smooth muscle cells // Biochem. Biophys. Acta. 1980. - Vol. 632. - P. 183-191.

106. Kiess W., Gallaher B. Hormonal control of programmed cell death/apoptosis //Eur. J. Endorinol.- 1998. -Vol. 138. P. 482^91.

107. Kishikawa T. Alteration in the properties of the rat myometrium during gestation and post partum // Jap. J. Physiol. 1981. - Vol. 31. - P. 515-536.

108. Kohen J. J., Duke К. C. Glucocorticoid activation of a calcium-dependent endonuclease in thymocyte nuclei leads to cell death // J. Immunol. 1984. -Vol. 132. - P. 38-42.

109. Koob T. J., Jeffrey J. J. Hormonal regulation of collagen degradation in the uterus: inhibition of collagenase expression by progesterone and cyclic AMP // Biochim. Biophys. Acta. 1974. - Vol. 354. - P. 61-70.

110. Korsmeyer S. J. Regulators of cell death // Trends Genet. 1995. - Vol. 11.-P. 101-105.

111. Kroemer G., Dallaporta В., Resche-Rigon M. The mitochondrial death/life regulator in apoptosis and necrosis // Ann. Rev. Physiol. 1998. - Vol. 60. -P. 619-642.

112. Leppert P. C. Proliferation and apoptosis of fibroblasts and smooth muscle cells in rat uterine cervix throughout gestation and the effect of the antipro-gesterone onapristone // Am. J. Obstet. Gynecol. 1998. - Vol. 178. - P. 713-725.

113. Li P., Nijhawan D., Budihardjo I., Srinivasula S.M. Cytochrome С and dATP-dependent formation of Apaf-l/caspase-9 complex initiates an apop-totic protease cascade // Cell. 1997. - Vol. 91. - P. 479-489.

114. Lobel B. L., Deane H. W. Enzymatic activity associated with postpartum involution of the uterus and with its regression after hormone withdrawal in the rat // Endocrinology. 1962. - Vol. 70. - P. 567-578.

115. Mackler A. M., Green L. M., McMillan P. J., Yellon S. M. Distribution and activation of uterine mononuclear phagocytes in peripartum endometrium and myometrium of the mouse // Biol. Reprod. 2000., - Vol. 62, - P. 11931200.

116. Mackler A. M., Lezza G., Akin M. R., McMillan P. J., Yellon S. M. Macrophage trafficking in the uterus and cervix precedes parturition in the mouse // Biol. Reprod. 1999. - Vol. 61. - P. 879-883.

117. Maibenco H. G. Connective tissue changes in postpartum uterine involution in the albino rat // Anat. Rec. 1960. - Vol. 136. - P. 59-71.

118. Marsters S. A., Sheridan J. P., Pitti R. M. Identification of a ligand for the death-domain-containing receptor АроЗ // Curr. Biol. 1998. - Vol. 8. - P. 525-528.

119. Martimbeau S., Tilly J. L. Physiological cell death in endocrine-dependent tissues: an ovarian perspective // Clin. Endocrinol. 1997. Vol. 46. - P. 241— 254.

120. Menkes В., Sandor S., Ilies A. Cell death in teratogenesis // Advances in Teratology. 1970. - Vol. 4. - P. 169.

121. Millonig G. Advantages of phosphate buffer for OsC>4 solution in fixation // J. Appl. Physiol. 1961. - Vol. 32. -N 3. - p. 1637-1639.

122. Milwidsky A., Beller U., Palti Z., Mayer M. Protease and protease inhibitory activity in pregnant and postpartum involuting uterus // Am. J. Obstet. Gynecol. 1982.-Vol. 143. - P. 906-911.

123. Miyoshi K, Shimizu К., Hokano M. Collagen degradation and mucosal mast cell in endometrium of mouse uterus during early postpartum period // Acta Anat. (Basel). 1990. - Vol. 137. - P. 86-92.

124. Montfort I., Perez-Tamayo R. Studies on uterine collagen during pregnancy and puerperum // Lab Invest. 1961. - Vol. 10. - P. 1240-1258

125. Montfort I., Perez-Tamayo R. The distribution of collagenase in the rat uterus during postpartum involution. An immunohistochemical study // Conn. Tiss. Res. 1975. - Vol. 3. - P. 245-252.

126. Morrione T. G., Zairu M. Z. Injury influence on resorption of uterine collagen // Arch. Path. 1964. - Vol. 78. - P. 591-600.

127. Morton A.J., Goldspink D.F. Changes in protein turnover in rat uterus during pregnancy // Am. J. Physiol. 1986. - Vol. 250. - P. 114-120.

128. Mueller G. C., Herranen A. M., Jervell K. F. Studies on the mechanism of action of estrogens // Recent Prog. Horm. Res. 1958. - Vol. 14. - P. 95139.

129. Nilsen-Hamilton M, Liu Q., Ryon J., Bendickson L., Lepont P., Chang Q. Tissue involution and the acute phase response // Ann. N. Y. Acad. Sci. — 2003.-Vol. 995.-P. 94-108.

130. Nishinaka K, Fukuda Y. Changes in extracellular matrix materials in the uterine myometrium of rats during pregnancy and postparturition // Acta Pathol. Jpn.- 1991.-Vol.41.-P. 122-132.

131. Nolan J. C., Bridge S. C., Oronsky A. L., Kerwar S.S. Purification and properties of collagenase inhibitor from cultures of bovine aorta // Atherosclerosis. 1980. - Vol. 53. - P. 93-102.

132. Otsuki Y. Apoptosis in human endometrium: apoptotic detection m ethods and signaling // Med. Electron. Microsc. 2001. - Vol. 34. - P. 166-73.

133. Owen J. J., Jenkinson E. J. Apoptosis and T-cell repertoire selection in the thymus // Ann. N.Y.Acad. Sci. 1992. - Vol. 663. - P. 305-310.

134. Padykula H.A. Cellular mechanisms involved in cyclic stroma renewal of the uterus. III. Cells of the immune response. // Anat. Rec. 1976. - Vol. 184. -P. 49-71.

135. Padykula H.A., Campbell A.G. Cellular mechanisms involved in cyclic stromal renewal of the uterus. II. The albino rat // Anat. Rec. 1976. - Vol. 184.- P. 27-4S.

136. Paik W.K., Cohen P.P. Biochemical studies on amphibian metamorphosis.

137. The effect of thyroxine on protein synthesis in the tadpole // J. Gen. Physiol. 1960. - Vol. 43. - P. 683-696.

138. Parakkal P.F. Involvement of macrophages in collagen resorption. // J. Cell Biol. 1969. - Vol. 41. - P. 345-354.

139. Parakkal P.F. Macrophages: the time course and sequence of their distribution in the postpartum uterus // J. Ultrastruct. Res. 1972. - Vol. 40. - P. 284-291.

140. Pollack M., Phaneuf S., Dirks A., Leeuwenburgh C. The Role of Apoptosis in the Normal Aging Brain, Skeletal Muscle, and Heart // Ann. N.Y. Acad. Sci.- 2002. Vol. 959. - P. 93-107.

141. Pollard J. W., Pacey J., Cheng S. Vol., Jordan E. G. Estrogens and cell death in murine uterine luminal epithelium // Cell Tissue Res. 1987. - Vol. 249. -P. 533-540.

142. Prindull G. Apoptosis in the embryo and tumorogenesis // Eur. J. Cancer. -1995.-Vol. 31A.-P. 116-123.

143. Raff M. C. Social control on cell survival and cell death // Nature. 1992. -Vol. 356. - P. 397^00.

144. Reunolds E. S. The use of lead citrate at high pH as an electronopaque stain in electron microscopy. // J. Cell Biol. 1963. - Vol. 17. - P. 208-212.

145. Riemer R. К., Roberts J. M. Endocrine modulation of myometrial response / In: The physiology and biochemistry of the uterus in pregnancy and labor. -CRC Press. Boka Raton, 1986. P. 54-73.

146. Ritter J, Philippe E. Endometrial involution // Am. J. Obstet. Gynecol. -1990.-Vol. 162.-P. 1360-1361.

147. Ross R., Klebanoff S. J. The smooth muscle cell. I. In vivo synthesis of connective tissue proteins // J. Cell Biol. -1971.- Vol. 50. P. 159-171.

148. Rotello R. J., Hocker M. В., Gerschenson L. E. Biochemical evidence for programmed cell death in rabbit uterine epithelium // Am. J. Pathol. 1989. -Vol. 134-P. 491-495.

149. Roth M, Hoechst M, Afting E. G. Controlled intracellular proteolysis during postpartal involution of the uterus: characterization and regulation of an alkaline proteinase // Acta Biol. Med. Ger. 1981. - Vol. 40 - P. 1357-1363.

150. Ryan J.N., Woessner J.F. Oestradiol inhibition of collagenase role in uterine involution // Nature. 1974. - Vol. 248. - P. 526-528.

151. Sandford N. L., Searle J. W., Kerr J. F. Successive waves of apoptosis in the rat prostate after repeated withdrawal of testosterone stimulation // Patology. 1984. - Vol. 16. - P. 406-410.

152. Sandow B. A., West N. В., Normon R. L., Brenner R. M. Hormonal control of apoptosis in hamster uterine luminal epithelium // Am. J. Anat. 1979. — Vol. 156.-P. 15-36.

153. Sanvito F., Herrera P. L., Huarte J., Nichols A., Montesano R., Orci L., Va-sali J. D. TGF-beta influences the relative development of the exocrine and endocrine pancreas in vitro // Development. 1994. - Vol. 120. - P. 34513462.

154. Saunders J. W. Death in embryonic systems // Science. 1966. - Vol. 154. -P. 604-612.

155. Schaub M. C. Distribution and variation of a collagen-degrading enzyme in the uterus of pregnant rats // Experientia. 1964. - Vol. 20. - P. 675-676.

156. Schulze-Osthoff К., Walezak H., Droge W., Krammer P. H. Cell nucleus and DNA fragmentation are not required for apoptosis // J. Cell Biol. 1994. -Vol. 75. - P. 229-240.

157. Schwartzman R. A., Cidlowski A. Apoptosis: the biochemistry and molecular biology of programmed cell death // Endocrine Rev. 1993. - Vol. 14. -P. 133-150.

158. Shaikh A. A. Estrone and estradiol levels in the ovarian venous blood from rats during the estrus cycle and pregnancy // Biology of Reproduction. -1971.-Vol. 5.-P. 297-308.

159. Shea J. D., Hay M. F., Cran D. G. Ultrastructural changes in the theca interna during follicular atresia in sheep // J. Reprod. Fert. 1978. - Vol. 54. - P. 183-187.

160. Shimizu K., Furuya Т., Takeo Y., Shirama K., Maekawa K. Clearance of materials from breakdown of uterine collagen in mice during postpartum involution//Acta Anat (Basel).-1983.-Vol. 116.-P. 10-13.

161. Shimizu K., Hokano M. Removal of collagen bundles in murine uterus during postpartum involution // Anat. Rec. 1988. - Vol. 220. - P. 138-142.

162. Shimizu K., Maekawa K. Collagen degradation in the mouse uterus during postpartum involution: extracellular pathway // Acta Anat. (Basel). 1983. -Vol. 117.-P. 257-260.

163. Skulachev Vol.P. Programmed death phenomena: from organelle to organism //Ann. N.Y. Acad. Sci. -2002. Vol. 959. - P. 214-237.

164. Smith R., Van Frank R. The use of amino acid derivatives of 4-methoxy-beta-naphthylamine for the assay and subcellular localization of tissue proteinases // Front. Biol. 1975. - Vol. 43. - P. 193-249.

165. Steller H. Mechanisms and genes of cellular suicide // Science. 1995. - Vol. 267.-P. 1445-1449.

166. Sterle M., Pipan N. Analysis of the cell death in the mucoid epithelium of mouse stomach // Folia Histochem. Cytobiol. 1994. - Vol. 32. — P. 155160.

167. Strauss G. Histoplanimetric studies on the human uterus // Arch. Gynecol., 1969. Vol. 207. - p. 572-600.

168. Susin S. A., Zamzami N., Kroemer G. Mitochondria as regulators of apoptosis: doubt no more // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - Vol. 1366. - P. 151-165.

169. Szabo G., Boldog F., Wikonkal N. Disassembly of chromatin into approximately equal to 50 kb units by detergent // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990.-Vol. 169.- P. 706-712.

170. Tansey T. R., Padykula H. A. Cellular responses to experimental inhibition of collagen degradation in the postpartum rat uterus // Anat. Rec. 1978. - Vol. 191.-P. 287-309.

171. Tassell W., Slater M., Barden J.A., Murphy C.R. Endometrial cell death during early pregnancy in the rat // Histochem. J. 2000. - Vol. 32. - P. 373379.

172. Taya K., Greenwald G. S. In vivo and in vitro ovarian steroidogenesis in the pregnant rat // Biol. Reprod. 1981. - Vol. 25. - P. 683-691.

173. Telfer V. F., Hisaw F. L. Biochemical responses of the rabbit endometrium and myometrium to oestradiol and progesterone // Acta Endocrinol. 1957. -Vol. 23. - P. 390-404.

174. Terada N., Yamamoto R., Takada Т., Terakawa N., Wakimoto H., Matsumoto K. Inhibitory effect of progesterone on cell death of mouce uterine epithelium //J. Steroid. Biochem. 1989.-Vol. 33.-P. 1091-1096.

175. Thilander G., Rodriguez-Martinez H. Ultrastructure of the porcine myometrium during pregnancy // Acta Anat. (Basel). 1989. - Vol. 136. - P. 99116.

176. Thompson E. B. Apoptosis and steroid hormones // Mol. Endocrinol. 1994. -Vol. 8.-P. 665-673.

177. Thomson A. J., TelferJ. F., Young A., Campbell S., Norman J. E. Leukocytes infiltrate the myometrium during human parturition: further evidence that labour is an inflammatory process // Hum Reprod. 1999. - Vol. 14. - P. 229236.

178. Trump B. F., Berezesky I. K., Chang S. H., Phelps P. C. The pathways of cell death: oncosis, apoptosis, and necrosis // Toxicol. Pathol. 1997. - Vol. 25. -P. 82-88.

179. Vinatier D, Dufour P, Subtil D. Apoptosis: a programmed cell death involved in ovarian and uterine physiology // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. -1996.-Vol. 67.-P. 85-102.

180. Wagner R., Gabbert H., Hohn P. The mechanism of epithelial shedding after ischemic damage to the small intestinal mucosa. A light and electron microscopic investigation // Virchows Arch. Cell Pathol.. 1979. - Vol. 30. - P. 25-31.

181. Walker N. I., Benett R. E., Kerr J. F. Cell death by apoptosis during involution of the lactating breast in mice and rats // Am. J. Anat. 1989. - Vol. 185. -P. 19-32.

182. Warner H. R. Aging and regulation of apoptosis // Curr. Top Cell Regul. -1997.-Vol. 35.-P. 107-121.

183. Warner H. R. Apoptosis: a two-edged sword in aging // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1999.-Vol. 887.-P. 1-11.

184. Warren B. A., Khan S. The ultrastructure of the lysis of fibrin by endothelium in vitro // Br. J. Exp. Pathol. 1974. - Vol. 55. - P. 138-148.

185. Wijsman J.H., Jonker R.R., Keijzer R., van de Velde C.J., Cornelisse C.J., van Dierendonck J.H. A new method to detect apoptosis in paraffin sections: in situ end-labeling of fragmented DNA // J. Histochem. Cytochem. 1993. -Vol. 41.-P. 7-12.

186. Wilcox B. D., Rydeleck-Fitzgerald L., Jeffrey J. J. Regulation of collagenase gene expression by serotonin and progesterone in rat uterine smooth muscle cells // J. Biol. Chem. 1992. - Vol. 267. - P. 20752-20757.

187. Williams J. R., Little J. В., Shipley W. U. Association of mammalian cell death with a specific endonucleolytic degradation of DNA // Nature. 1974. -Vol. 252.-P. 754-755.

188. Woessner J.F. Acid hydrolases of the rat uterus in relation to pregnancy, post-partum involution and collagen b reakdown//Bi ochem. J . 1 965.-Vol. 97. - P. 855-866.

189. Woessner J.F. / In: Treatise on Collagen. N.Y.: Pt. B. Biology of Collagen., 1968.-P. 253-330.

190. Woessner J.F. Inhibition by oestrogen of collagen breakdown in the involuting rat uterus // Biochem. J. 1969. - Vol. 112. - №5. - P. 637-645.

191. Woessner J.F. Effect of oestrogen antagonist, CI-628, and oestradiol on postpartum involution and collagen breakdown of the rat uterus // J. Endocrinol. -1976.-Vol. 70.-P. 157-158.

192. Woessner J.F. A latent form of collagenase in the involuting rat uterus and its activation by a serine proteinase // Biochem. J. 1977. - Vol. 161. - P. 535542.

193. Woessner J.F. Total, latent and active collagenase during the course of postpartum involution of the rat uterus. Effect of oestradiol // Biochem. J. 1979. -Vol. 180.-№1.-P. 95-102.

194. Woessner J.F. / In: Collagenase in Normal and Pathological Connective Tissue. N.Y., 1980. - P. 223-239.

195. Woessner J.F., Ryan J.N. Effect of oestradiol on the post-partum rat uterus: peroxidase activity and collagen breakdown // J Endocr. 1980 - p. 387-91

196. Wyllie A. H. Glucocorticoid-induced thymocyte apoptosis is associated with endogenous endonuclease activation // Nature. 1980. - Vol. 284. - P. 555556.

197. Wyllie A. H., Kerr J. F., Currie A. R. Cell death: the significance of apoptosis // Int. Rev. Cytol. 1980. - Vol. 68. - P. 251-306.

198. Wyllie A. H., Kerr J. F., Macaskill I. A., Currie A. R. Adrenocortical cell deletion: the role of ACTH // J. Pathol. 1973. - Vol. 111. - P. 85-94.

199. Wyllie A. H., M orris R. G. H ormone-induced с ell d eath: p urification and properties of thymocytes undergoing apoptosis after glucocorticoid tretment // Am. J. Pathol. 1982. - Vol. 109. - P. 78-87.

200. Yu S. Y., Tozzi C. A., Babiarz J., Leppert P. C. Collagen changes in rat cervix in pregnancy polarized light microscopic and electron microscopic studies // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1995. - Vol. 209. - P. 360-368.

201. Zorn M. Т., Bijovsky Т., Bevilasqua E. M,, Abrahamsohn P. A. Phagocytosis of collagen by mouse decidual cell // Anat. Rec. 1989. - Vol. 255. - P. 96100.