Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфологические особенности клещей рода Chorioptes, совершенствование диагностики и мер борьбы

ВАК РФ 03.02.11, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Морфологические особенности клещей рода Chorioptes, совершенствование диагностики и мер борьбы"

На правах рукописи

У

Пузанова Евгения Владимировна

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КЛЕЩЕЙ РОДА СНОШОРТЕБ, СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ДИАГНОСТИКИ И МЕР

БОРЬБЫ

03.02.11 - паразитология

б и:он ¿013

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2013

005060849

005060849

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор, академик Россельхозакадемии Василевич Федор Иванович

Официальные оппоненты:

Заблоцкий Вячеслав Титович - доктор биологических наук, профессор, ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии, заведующий лабораторией Косминков Николай Евгеньевич - доктор ветеринарных наук, профессор кафедры инфекционных и паразитарных болезней Московского государственного университета пищевых производств

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина» (ГНУ ВИГИС Россельхозакадемии)

Защита состоится « »2013 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 006.033.01 при ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии по адресу: 109428, г. Москва, Рязанский проспект, д. 24, корп.1, ВИЭВ, тел.(495)970-03-69

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии

Автореферат разослан » ¿-^¿¿^З^/7 2013г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Ездакова И.Ю.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Хориоптоз животных - широко распространенное сезонное заболевание, вызываемое клещами рода Chorioptes, сем. Psoroptidae, отр. Acariformes. Болезнь протекает остро, подостро или хронически. Характеризуются воспалением кожи, зудом в местах поражения, образованием кожных экземоподобных изменений, аллопециями, приводящими к истощению, снижению продуктивности и резистентности организма животного (Абуладзе К.И., 1975; Богданов H.H., 1930; Гаврилова H.A., Пашкин П.Н., 1997; Садчиков С.Ю.,2001 и др.).

Несмотря на большие успехи ветеринарной науки и практики в ликвидации хориоптоза, следует признать, что данное заболевание имеет значительное распространение в настоящее время: существуют стационарно неблагополучные по хориоптозу крупного рогатого скота хозяйства (Шустрова М.В. и др.,2002). Генетический потенциал в молочном скотоводстве в настоящее время составляет более 4000 кг молока в год на корову. Его реализация возможна при создании оптимальных кормовых условий, применения научных достижений в практике кормления скота, предотвращения воздействия факторов, снижающих молочную продуктивность, таких, как инвазионные болезни, вызываемые паразитированием членистоногих.

Несмотря на то, что существует много инсектоакарицидов, проблема ака-розов в сельском хозяйстве и по сей день остаётся актуальной. Акарозы наносят серьезный ущерб сельскохозяйственной отрасли (Гаврилова H.A., Пашкин П.Н.,1997).

В данной ситуации особенно актуальны вопросы совершенствования методов диагностики данного заболевания, расширения ассортимента ака-рицидных средств, снижения трудоемкости лечебных процедур (Митасов H.A., 1994; Дубинин В.Б., 1954). Своевременная и точная постановка диагноза, знание биологии и особенности развития отдельных фаз возбудителя лежат в основе мероприятий по борьбе с хориоптозом. К сожалению, не-

смотря на то, что саркоптоидозы, в том числе и рассматриваемый в данной работе хориоптоз, известны как нозологические единицы более ста лет и широко распространены по всему миру, подробных данных о валидности видов и морфологических особенностей клещей рода СЬопор1ез получено пока недостаточно (Дубинин В.Б., 1954).

Цель и задачи исследований. Основная цель работы - изучить морфологические особенности клещей рода СИопор1ез на разных стадиях развития для совершенствования видовой диагностики, мер борьбы с хори-оптозом и расширения ассортимента акарицидных средств.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить особенности клинического проявления хориоптоза у крупного рогатого скота;

2. Изучить морфологические особенности клещей рода СЬопор1е5 на электронном сканирующем микроскопе;

3. Изучить выживаемость клещей вне тела хозяина и видовую специфичность клещей рода СЬогк^ез;

4. Апробировать новый комплексный инсектоакарицид Фенокси-фен в лабораторных условиях и в условиях фермы на животных.

Научная новизна. Впервые в РФ были получены и систематизированы данные по морфологии видов клещей рода СЬопор1ез, тем самым усовершенствована межвидовая диагностика данного заболевания с учетом вида возбудителя. Получены данные о выживаемости клещей рода СЬопор1ез вне тела хозяина, изучены распространение и сезонная динамика зараженности крупного рогатого скота клещами рода СЬопор1ез. В условиях Московской области хориоптоз встречается у крупного рогатого скота повсеместно. Показано преимущество применения контактного перитроида Фе-ноксифена, обладающего губительным действием на имаго и яйца клещей.

Практическое значение работы. Предложен для борьбы с хори-оптозом крупного рогатого скота препарат Феноксифен. Разработаны мето-

дические положения: «Морфологические особенности клещей рода СЬопор1ез. Методика исследования клещей рода СИопор1ез в сканирующем электронном микроскопе», рассмотрены и одобрены секцией «Инвазионных болезней животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН от 27.09.2012 г., протокол №3.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены на научных конференциях «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» секции «Инвазионные болезни животных» отделение ветеринарной медицины РАСХН г. Москва 2009 и 2011 годов.

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 5 работы, три из которых входят в перечень изданий, рекомендованных ВАК РФ.

Личный вклад. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно, участие соавторов отражено в совместно изданных статьях и в учебных пособиях. Автором лично проведены биохимические исследования крови больных хориоптозом животных, подготовка и исследования валидных видов клещей в камере сканирующего электронного микроскопа, выживаемость клещей вне тела хозяина в различных условиях, проведена оценка акарицидной и овоцидной активностей нового контактного перитро-ида Феноксифена.

Автор приносит глубокую благодарность научному руководителю академику РАСХН, доктору ветеринарных наук, профессору Ф.И. Василевичу, который оказывал научно-методическую помощь в проведении исследований и анализе полученных результатов. Автор также благодарна соавторам совместно изданных статей В.П. Кротенкову, Т.А. Белугиной, В.Р. Криста-линскому, за оказание научно-методической помощи ведущему инженеру группы «Морфологические адаптации наружных покровов» института проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН Т.Н. Целиковой.

Основные положения, выносимые на защиту.

- Особенности клинического проявления хориоптоза;

- Гематологические и биохимические показатели крови крупного рогатого скота при хориоптозе;

- Выживаемость клещей вне тела хозяина в различных условиях;

- Морфологические особенности валидных видов, усовершенствование видовой диагностики клещей рода СЬопор1ез;

- Результаты испытаний нового контактного перитроида Феноксифе-на, доза и кратность его применения.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 121 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, сведений о практическом использовании результатов исследований, списка литературы, включающего 127 источника, в том числе 46 иностранных авторов и приложения. Работа иллюстрирована 23 таблицами и 26 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Диссертационная работа выполнена по тематическим планам Московской Государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина в 2008-2011 годах на кафедре паразитологии и инвазионных болезней сельскохозяйственных животных.

В производственных условиях исследования проводились в хозяйствах ООО «Колхоз имени Владимира Ильича» Ленинского района и «Лео-новское» Воскресенского района Московской области.

Изучение данного заболевания велось по нескольким направлениям: обследование животных в хозяйстве, взятие и исследование проб-соскобов с помощью электронной микроскопии и анализ данных ветеринарной отчетности обследованных хозяйств (журналы для регистрации больных животных, отчетов о заразных болезнях животных).

В хозяйстве ООО «Колхоз имени Владимира Ильича» Ленинского района Московской области, где проводили исследования, изучили основные зоотехнические параметры, а также состав рациона, его сбалансирован-

ность по жизненно необходимым питательным и биологически активным веществам.

Для непосредственного установления текущей экстенсивности и интенсивности инвазии эпизоотическую ситуацию по хориоптозу в ООО «Колхоз имени Владимира Ильича» 10 апреля 2008 года был проведен диагностический осмотр восприимчивого поголовья на ферме. Были осмотрены 440 голов. В учхозе «Леоновское» Воскресенского района Московской области в 2009-2010 годах при этом обследовали животных 2-4 летнего возраста в октябре 2009 года, январе и июне 2010 года.

Для выявления больных животных пользовались методов осмотра. Осматривали у каждого животного места возможного поражения кожного покрова вследствие паразитирования клещей - корень хвоста, молочное зеркало и область седалищных бугров. При изучении клинических признаков наряду с обнаружением мест поражения определяли индекс подсчета степени зуда. Ежедневно в течение 10 дней, затем еженедельно в течение 40 дней осматривали в течение 20 минут больных животных (п=20), записывали каждый случай потирания и почесывания. Сумму случаев делили на количество больных животных.

Диагноз подтверждали микроскопическим исследованием проб, взятых с пораженных участков кожного покрова в условиях. Для этого соскобы кожи брали острым скальпелем в количестве не менее 0,5- 1 смЗ с пораженных участков и со старых очагов, но на границе со здоровым участком кожи. Материал собирали в плотно закрывающиеся бюксы. Соскобы от каждого животного этикетировали и нумеровали.

Для изучения гематологических и биохимических показателей были подобраны контрольные и подопытные группы коров, в количестве 7 каждая. Материалом служила сыворотка крови и цельная кровь. Сыворотку крови получали общепринятым методом A.A. Покровского. Общий белок определяли биуретовым методом. Белковые фракции методом электрофореза в ПААГ. Определяли: активность аминотрансфераз, альдолазы, лактатде-

гидрогеназы, щелочной фосфатазы, а также содержание церулоплазмина, глюкозы, билирубина, мочевины и креатинина. Показатели определяли на автоматическом селективном анализаторе CSA-11.

Для морфологических исследований клещей рода Chorioptes их извлекали различными способами из патологического материала, переносили в каплю жидкости на предметном стекле, накрывали покровным стеклом и исследовали при малом с помощью бинокулярной лупы МБС-9 и светового микроскопа.

Четкой и цельной методики отбора, очистки и консервирования клещей рода Chorioptes от микробного разложения для исследования в СЭМ в литературе мы не нашли, исходя из этого подробное описание приводим в разделе результатов исследований. В работе использовали чешский электронный сканирующей микроскоп Tescan Vega.

Выживаемость клещей во внешней среде была изучена при разных температурных режимах в условиях лаборатории. Активных клещей, которых переносили препаровальной иглой на заранее подготовленные полоски черной бумаги, вложенные в пробирки Флоринского. Пробирки закрывали ватным тампоном и помещали в холодильник или термостат, или оставляли в лабораторной комнате. При оценке физиологического состояния клещей мы использовали микроскоп типа МБС-9, исследуя клещей под увеличением в 18-20 раз. Относительную влажность воздуха определяли с помощью гигрометра МВК 52 01-38-62.

В качестве лечебного препарата при хориоптозе крупного рогатого скота применялся новый комплексный инсектоакарицид контактного действия Феноксифен. Эксперимент по испытанию акарицидной активности препарата ставили на больных животных с явно выраженными клиническими признаками и на клещах в условиях лаборатории в чашках Петри.

Для проведения опытов отбор клещей и их яиц, испытания активности новых акарицидных препаратов использовали «Методику отбора клещей семейства PSOROPTIDAE и их яиц для лабораторных опытов и оценка

акарицидной и овоцидной активности новых веществ и препаратов на них», разработанную доктором ветеринарных наук, профессором А.Н. Давлетши-ным.

Растворы готовились по препарату. Затем отбирались по 10 особей активно двигающихся имаго клещей на тканевую салфетку размером 10x10 см. Салфетку с клещами помещали в чашку Петри и наносят 1 мл испытуемого раствора Феноксифена. Использовались следующие концентрации испытуемого препарата, исходя из его составляющих: 0.003%, 0.006%, 0.012%, 0.024%, 0.048%. Опыт проводился в трёх повторностях. После полного впитывания раствора салфеткой края ее собирали в узел и крепко завязывали ниткой .Затем клещей помещали в термостат при температуре 27°С и относительно влажности 90%. Для контроля в аналогичных условиях содержали клещей, обработанных водой. Учет результатов опытов проводился через 24 часа.

Овоцидную активность Феноксифена определяли следующим образом. Корочки, из которых предварительно были удалены паразиты на всех фазах жизни и оставлены только их яйца. Корочки подвергались микроскопии, а затем проводилось разделение их на равные части размером: 0.5 X 0.5 см. Далее производился подсчёт яиц в каждом образце, их количество составило 15 штук. Данные образцы корочек помещали в чашки Петри, дно которых было закрыто фильтровальной бумагой. Проводили разведение испытуемого препарата до нужных нам концентраций: 0,003%, 0,006%, 0,012%, 0,024% и 0,048%. Обрабатывали образцы из расчета 0,5мл на 0,5см образца в трехкратном повторении. Также были поставлены три чашки Петри для контроля. Все образцы были поставлены в термостат при температуре 27°С. Учет результатов проводился на 3, 5 и 7 сутки.

Исходя из полученных лабораторных данных, далее проводилась обработка животных зараженных хориоптозом в условиях фермы.

Для этого, ранее выявленных, заражённых хориоптозом животных в количестве 16 особей крупного рогатого скота, так как остальные 4 находи-

лись на момент обработки в родильном отделении, обработали аэрозольным баллоном поражённые области для подтверждения экспериментальных данных раствором 0.024% (одна особь из 16 обрабатывалась дистиллированной водой для контроля результатов). После чего спустя 10 дней для выявления целесообразности проведения второй обработки взяли соскобы и микроскопировали их.

Статистическую обработку полученных экспериментальных данных проводили с использованием общепринятых методов математического анализа с вычислением средних арифметических ошибок.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Хориоптоз крупного рогатого скота распространен во всех природно-климатических зонах Российской Федерации. Анализ журналов для регистрации больных животных показал, что хориоптоз крупного рогатого скота встречается в ООО «Колхоз имени Владимира Ильича» Ленинского района и учхозе «Леоновское» Воскресенского района Московской области во все сезоны года. Пик заболеваемости наблюдается в феврале, экстенсивность инвазии составляет 8,13%. Данная динамика свидетельствует о том, что в конце зимы - начале весны экстенсивность инвазии наибольшая. Для непосредственного установления текущей экстенсивности и интенсивности инвазии в ООО «Колхоз имени Владимира Ильича» 10 апреля 2008 года был проведен диагностический осмотр восприимчивого поголовья на ферме. Были осмотрены 440 голов крупного рогатого скота. Результаты исследований представлены в таблице 1. Осматривали у каждого животного места возможного поражения кожного покрова вследствие паразитирования клещей. Таким образом, выявляли подозрительных по заболеванию животных в количестве 26. Все коровы в возрасте от 2 до 4 лет. Диагноз был подтвержден для 20-ти коров.

При изучении клинических признаков наряду с обнаружением мест поражения определяли индекс подсчета степени зуда. В первой стадии в

области корня хвоста обнаруживают шелушение кожи в виде тонких отрубе-видных чешуек. Индекс составил 0,77. При этом интенсивность инвазии составляла 2-3 клеща в поле зрения. Во второй стадии область поражения кожи увеличивается, на коже отчетливо были видны струпья и корки, выпадала шерсть. Индекс степени зуда составлял-1,75. Интенсивность инвазии 5-7 клещей в поле зрения. Наиболее тяжелой является третьей стадия. Она длилась 3-4 недели, отмечались обширные поражения участков кожи не только в области задних конечностей, но и на холке и шее. Индекс степени зуда составлял -3,85. Интенсивность инвазии 12-15 клещей в поле зрения.

Таким образом, полученные нами данные позволяют сказать, что в течении хориоптоза имеет место стадийность. Тяжесть заболевания прямо пропорциональна интенсивности инвазии.

Причины стационарного неблагополучия ООО «Колхоз имени

Владимира Ильича» по хориоптозу крупного рогатого скота

Роль в распространении хориоптоза сыграла поточно-цеховая система содержания. Стойловое содержание и отсутствие выпаса также усугубляет течение хориоптоза. Источником возбудителя инвазии хориоптоза в хозяйстве являются больные животные. Заражение происходит контактным путем и через предметы ухода. К факторам, способствующим распространению болезни в хозяйстве следует отнести несбалансированное кормление, отсутствие санитарных обработок помещений, индивидуальных предметов ухода.

Тем не менее, основной причиной распространения инвазии в ООО «Колхоз имени Владимира Ильича» следует считать несвоевременное проведение диагностических исследований животных и отсутствие длительное время обработок больных животных с применением высокоэффективных препаратов.

Таблица 1

Экстенсивность и интенсивность инвазии хориоптозом крупного рогатого скота в ООО «Колхоз имени Владимира Ильича» в апреле 2008 г.

Месяц, год обелелова- Н11Я 1 1 ег £ о "¿ОШ S -- - ; " tS> Выявлено < клиническими при знаками .............. Животные с под! верж 1СНШ.1Ч 111.11 IIOÍIIM • И. ТМф "и ИИ, клешей ч со- скобе

апрель 2008 г. 440 2-4 26 20 4.5 30 и более

Гематологические и биохимические показатели крови крупного рогатого скота инвазированного хориоптозом

Результаты исследований представлены в таблице № 2,3,4. Анализ гематологических исследований позволил выявить некоторые количественные изменения в составе крови при хориоптозе.

Так, количество лейкоцитов при сильной степени инвазии увеличилось на 21%, количество эритроцитов по сравнению с контролем снизилось на 33,8 %, а гемоглобин на 24,5%. В лейкоцитарной формуле наблюдали моно-цитоз, эозинофилию, лимфоцитопению и появление плазматических клеток, синтезирующих иммуноглобулины. Увеличение количества эозинофилов во второй группе в 11 раз в сравнении с контрольной группой говорит о воздействии продуктов жизнедеятельности клещей в местах их локализации как аллергенов на организм животного.

Из таблицы 3 видно, что снижение общего белка происходило за счет низкомолекулярных форм. Так, у животных заражение хориоптозом в сильной степени, концентрация альбуминов снизилась на 39 %, постальбуминов на 23,9%. Количество (3- альбуминов уменьшилось на 33,6%, что свидетельствует о их интенсивном вовлечении в катаболитические процессы. Содер-

жание трансфериновой фракции, церулоплазмина и иммуноглобулинов увеличивалось пропорционально степени поражения животных. При этом определяли: активность аминотрансфераз, альдолазы, лактатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы, а также содержание церулоплазмина, глюкозы, мочевины, креатинина и билирубина.

Данные таблицы 4 показывают, что степень и длительность повышения ферментативной активности в крови зависит от ее исходного уровня в тканях, субклеточной локализации ферментов, скорости их высвобождения и удаления из кровотока, а также от тяжести, продолжительности и характера течения хориоптоза.

Биология клещей

Клещи рода СЬогюр1ез имеют тонкую эластичную кутикулу, плохо удерживающую влагу. В естественных условиях они живут на коже животного в атмосфере, насыщенной парами естественных жидкостей тела животного-хозяина. После гибели клещи в комнатных условиях быстро высыхают и сильно деформируются, что затрудняет их исследование.

Наружное строение хризалидной особи не отличается от строения подвижной стадии клеща данной возрастной фазы.

Для исследования устойчивости клещей к высыханию при комнатной температуре (+20-22°С) и относительной влажности 50 %■ а также при температуре +4°С (камера бытового холодильника) мы выбирали из свежего со-скоба подвижных и хризалидных клещей всех фаз развития, в том числе по-ловозре лых самцов и самок, погружали их на 5 минут в хлороформ,где они

погибали, а затем переносили на листок фильтровальной бумаги в чашку Петри. Чашки закрывали крышкой и оставляли одну при комнатной температуре на столе, другую ставили в холодильник под морозильную камеру.

Таблица 2

Морфологический состав крови и лейкограмма при хориоптозе крупного рогатого скота (*Р<0,005;**Р<0,01;***Р<0,001)

Группа животных п=7 П Показатели Лейкоцит арна фо рмула

¡1|Ш1Ш(1:1|1|Ш111 V ___ ■ •ж -/ - -. ж. ■в, А "V £ у& ■ " : » * . . (■¡В « Л ъ * 11 ВвиЕ^ВЕ ; ; ; <- швшшя ШШщШ 1 » •в-ж -е- 2 С № ш/щ Е I шШШ ? % I ' 1 ; : .

25 я" ч и ж » 5 6,7 ± 2,5* 89,0 ± 12,1* 8,7 ±2.75* 4±0,5** 39±0,4** 4±0,8* 0±0,2* 46±1,6* 7±0,3* 0±0,1*

5 4/>±2,1* 78,0 А 1,75* 3*0,1*

Контроль 5 6,4 ± 2,75* 91,0± 10,5* 8,3 ±3.15* 2±0,2* 33±0,1** 2±0,1** 0±0,6* 59±0,3* 4±0,2* 0±0,6"

Через 3,6,12 и каждые 24 часа клещей осматривали и учитывали их состояние. Опыты показали, что клещи рода СЬопоргеэ, убитые в активной стадии, высыхали при комнатной температуре через 3 часа; а в условиях холодильника через -12 часов, при этом они сильно деформировались.Тогда как их хризалидные стадии сохраняли свои естественные формы при комнатной температуре в течение 6 дней, а в условиях холодильника до 20 дней.

Таким образом, для морфологических исследований клешей рода СЬоп-ор1еБ в СЭМ из соскобов следует выбирать хризалидных особей, а из числа подвижных клещей - особей более старшего возраста с плотной эластичной кутикулой. Чтобы сохранить клещей от действия вышеуказанных нежела-

тельных факторов до момента их исследования в СЭМ (15-20 суток) из испытанных методов более простыми в исполнении оказались способы,

Таблица 3

Содержание белка и белковых фракций в сыворотке крови при хориоптозе крупного рогатого скота

Г-- 1 Е' И": 1 | »С Белковые фракции

•е о. ■ ~ ' 3 § - . ' ' '' ! 82» — — е* - ■ 1 = 1 41 1"

Контроль х±ш 85,92± 0,23 40,32= 0,24 7,52± 0,04 '8*09± 0,01 2,42х 0,04 р—— 0,03 7,11± 0,03 9,92± 0,04 6,05± 0,07

Слабая И.И. 82,23 30,11 5,95 10,14 3,29 5,21 9,35 12,92 5,05

±ш 0,32 0,17 0,08 0,02 0,05 0,03 0,04 0,07 0,10

% 95,70 74,68 79,16 125,40 136,20 108,20 131,43 125,20 83,40

Р 0,001 0,02 0,001 0,001 0,001 0,001 0,001 0,001 0,001

Сильная И.И. 82,31 24,51 5,72 10,81 4,04 6,44 17,71 15,10 4,72

±ш 0,43 0,08 0,05 0,03 0,09 0,01 0,07 0,10 0,11

% 95,79 60,79 76,09 133,60 167,30 133,74 178,66 152,29 77,95

Р 0,001 0,001 0,001 0,001 0,001 0,001 0,001 0,02 0,001

в которых в качестве консервантов использовали холод в сочетании с атмосферой, насыщенной парами этилового спирта. Очищенных от артефактов клещей наклеивают на подложки, различая фазы развития. В пробирку Фло-ринского помещали на дно рыхлый кусочек ваты, смоченный 50° этиловым спиртом. Подложки с клещами переносят в пробирку и герметически закрывают резиновой пробкой. После этого пробирку помещают в холодильник под морозильную камеру и хранят там до исследования в СЭМ.

Перед микроскопическим исследованием подложки с клещами извлекают из пробирок, выдерживают 5-7 минут при комнатной температуре

Таблица 4

Биохимические показатели крови крупного рогатого скота при хориоптозе

Активность фер- 41-1111111 ШШШШШшшйШш ^........................ шш 111111III ИНК к; т 7 Ж 5 ' « -* 5 Я "Й = 'Ж

и Г Г'| т ФЛН ::::................. ■ АЛТ К/л ! шш Я ^ | и г РДД^И « К = 7 - 1 и

Контроль х±ш 71,30 ± 21,70 172,40± 24,70 17,40± 3,80 18,70± 4,20 2297± 418 1,81± 0,09 2,10± 0,45 4,15± 0,55 116,70 ±10,85

Слабая И.И. 70,15 168,50 18,20 20,50 2185 1,48 2,80 6,45 110,50

±ш 19,75 23,85 3,12 3,25 395 0,06 0,55 0,75 12,40

% 98,40 104,60 109,60 92,70 98 109,30 133,50 155,40 97,70

Сильная И.И. 145,50 325,50 38,40 25,80 38,50 3,58 5,13 8,45 172,80

± т 25,70 5,12 4,18 412 28,70 0,06 0,45 0,88 12,40

% 204,10 200,0 137,90 165,50 188,80 197,80 244,30 203,60 148,07

для просыхания. Подготовленных для микроскопирования клещей на подложках закрепляют специальным маникюрным лаком на столике, вводят в вакуумную камеру микроскопа и исследуют в потоке вторичных электронов при ускоряющем напряжении 20-25 кВ. Полученные данные микрометрии представлены нами в таблице 5.

Сравнительная характеристика морфологических особенностей клещей рода СЬопор1е8

У взрослых самцов на заднем крае спинной стороны туловища расположены два крупных плоских выроста треугольной формы, по краю которых расположены 5 волосовидных щетинок. Две центральные щетинки-толстые, длинные, три боковые - короткие (рис. 1,2). Опистосомальные ло-

пасти, выросты идиосомы, имеющиеся у всех половозрелых самцов семейства Psoroptidae.

Одной из целей нашей работы являлось в полной мере отразить фенотипические различия длины щетинок опистосомальных лопастей взрослых клещей представителей двух валидных видов Chorioptes bovis и Chorioptes texanus. Не проводя генетических исследований, судить о принадлежности к тому или иному виду клещей, взятых из соскобов-проб, можно, исследовав форму опистосомальных лопастей, измерив длину и расположение щетинок опистосомальных лопастей взрослых самцов данной популяции с помощью СЭМ. Оба этих вида в своих стадиях развития практически не имеют морфологических различий. Опистосомальные лопасти квадратные, разделены треугольной щелью.

Каждая из них несет по 5 длинных щетинок (рис 1,2), две из которых плоские, расширенные. Опистосомальные лопасти имаго самцов клеща Chorioptes texanus почти квадратные, состоят из главной, более крупной, и малой добавочной (внешней) лопастей, тогда как у представителей имаго самцов клеща Chorioptes bovis такового деления не наблюдается.

Центрально на конце опистосомальная лопасть Chorioptes texanus несет длинные щетинки в количестве трех с центральной самой длинной из них(213±15,1мкм), тогда как две соседствующие с ней лопатовидные щетинки, сужающиеся дистально, Ch.texanus почти в двое больше (172,3±8,9 мкм) таковых у Ch. bovis. «Утонченная» щетинка внешнего угла каждой опистосомальной лопасти у Ch.texanus заметно короче (61,1± 8,0 мкм) чем ее аналог у Ch. bovis, которая длиннее таковой в 4 раза. Тогда как внешняя лопатовидная щетинка у Ch. bovis имеет заметный крутой изгиб по направлению к основанию, опистосомальным лопастям, у Ch.texanus он отсутствует.

Результаты наших исследований и сравнительная характеристика представлена в таблицах 6,7.

Таблица 5

Морфологические параметры стадий развития Chorioptes texanus

(в мкм)

Морфологический параметр Яйцо Личинка Нимфа Имаго

самка

Длина тела 153-189 152-209 170-295 172-312 220-265 327-441

М±ш 172,8±6,4 184,6±11,4 232,0±38,5 235,6±26,6 239,0±14,6 393±22,7

Ширина it' in 63-108 100-153 130-205 135-240 185-220 113-300

Mim 85±7,8 172,4± 14 181,3-25,5 198,8±8.4 239,6^42.4

Дорсальная длина 102-165 135-24» 138-270 175-212 255-380

М±т 137±10,9 201,6±20,6 190,(>±33,1 193,2±18,9 315,5±34,2

Продосомяльная ,______1 33-90 1 38-63 | 36-68 1 40-70 [ 70-90 с U«- 1 1 1 : .:-.'•:

Mim .....ЩИаИ 47.4Ü2.S 50 0 52x5,8 58,3±8,5 82,1 ±5,9 66-91

Продосомальная ширина ---- — 30-55 38-65 47-69 48-73

М±т 39,4±6,2 53,9±6,8 56,8±3,8 61,5±7,0 80,4±5,2

Ширина 1 Ii 11 мы 30-48 38-58 -С-Ы 50-63 63-80

Mim >8.0-5,4 -s5-vj 54,8±3.5 53,513.1 71,4±7,1

Выживаемость клещей рода СЬопор1е8 во внешней среде

Основными факторами, определяющими выживаемость клещей рода СЬопс^ев во внешней среде, являются температура и влажность воздуха.

В каждом опыте использовали несколько пробирок Флоринского с клещами, одину или две из которых периодически осматривали, а других -только при полной гибели клещей в предшествующих тестах.

Результаты исследований показали, что продолжительность жизни клещей рода СЬоноргеБ вне тела животного варьирует в больших интервалах и зависит от условий, в которых они находятся.

Продолжительнее всего клещи оставались жизнеспособными 24 суток при температуре в интервале от +8 до +11°С и относительной влажности 68-78 %. Такие параметры были созданы в помещении в третьей серии опытов.

Таблица 6

Размеры щетинок сегментов опистосомы самцов Chorioptes texanus и Chorioptes bovis

№ щетин-ки(локализация) Длина щетинок (мкм)

Ch. w\.mu» (KPl .1

1 на сегменте опистосомы <100 мкм 123-145 >100 мкм 37-69

М±ш 133,2±4,0 52,2±6,0

2 на cei менте опистосомы 206-270 145-185

М±т 232,2x11.0 98,4±34.5

3 на сегменте опистосомы 41-68 13-32

М±т 53,8±4,7 21 ±3,4

4 на i:i 1 нем кран) i ела 19~з г 1 ¡¡jg щ

\1±т 25.X--2.fi

5 на лапке Зей пары ног 13-32 8-40

М±т 21,6±3,8 23,6±6,4

При наиболее высоких температурах и резких её колебаниях продолжительность жизни клещей сокращалась. В затемненном помещении клещи сохраняли жизнеспособность дольше, чем при той же температуре в освещенном помещении. Минусовая температура действовала на клещей губительно. В условиях постоянной температуры в опытах 1,2,3 серия первая (созданы в условиях холодильной камеры) -3,4,5 гибель клещей наступала че-

рез 5,3 и 2 суток. В четвертой серии в опыте № 18 клещей содержали в пробирках, на дне которых находилась вода. Продолжительность жизни в данных условиях составила 5 дней, в то время как в первой серии опыта №2 в схожих температурных условиях клещи оставались живыми 24 дня. При постоянных параметрах относительной влажности во второй серии опытов продолжительность жизни клещей была выше при более низких температурах.

Таблица 7

Длина опистосомальных щетинок самцов Chorioptes 1ехапи8

№ щетинки Длина щетинки в мкм

Канада -Сев.олень (Зч'еа^ап С.К.,1958)

Длина 66-98 193-235 27-39 23-27 14-29

М±т 80=Ь7 5 216i 10 2 25±1,4 18±3,3

Число II1МО-рений 20 20 2 ; 20 20

Щвеция КРС (НеэМк С.,гаЫег-Шп(1ег М.,2007)

Длина 37-69 145-18^ 13-32 16-32 - 8-40

М±т 54.2±7,3 164±8 24.3±5,4 24.9±3,9 18.3±7,2

Число взме-рений щш 40 31

Корея КРС (вик-Нуип виЬ, ТаКУош^ Ниг,2009)

Длина 35-75 160-201) 15-37,5 7,5-40

М ±т 61,1±8 172.3:8» 26,4±5,8 2h.fi 4.8 1...................шт...... .'.0.3 ■ 7.5

Число II (Мере II и и 20 1 Щ 20 20 20

Россия КРС (Пузанова Е.В.,2011) Р<0,05

Длина >4-78 153-220 13-38 18-35 7.5-38

М±т 1 80.6-12,6

Число измерений -20 "г:г1 20 2() 1 20 ■ 20

SEM MAG: 1.00 kx HV: 20.0 kV SM: RESOLUTION

View fielci: 432.00 um I_I_

Device: TS5130MM 200 um DET: SE Detector

Рис.1 Chorioptes texanus, пара - самец и телеоннмфа самки с дорсальной стороны (фото Пузановой Е.В.)

1- щетинка внешнего угла 61,1 ±8,0 мкм, у Ch. bovis длинна больше в 4 раза;

2- лопатовидные щетинки 172,3 ± 8,9 мкм, сужающиеся к концу, у Ch. Bovis короче в 2 раза;

3- центральная щетинка 213,0 ± 15,1 мкм;

4- щетинка на теле клеща(№ 4 по Sweatman) 26,6 ± 4,8 мкм, у Ch. bovis длиннее в 3 раза;

5- щетинка внутреннего угла (№ 3 по Sweatman) 26,4 ± 5,8 мкм, у Ch. bovis длиннее в 4 раза;

6- опистосомальные лопасти, почти делящиеся на две каждая.

Рис.2 Опистосомальные лопасти Chorioptes bovis (фото Пузановой Е.В.)

1-шетинка внешнего угла, превышающая длину лопатовидных щетинок,

больше длины подобной щетинки у Chorioptes texanus в 4 раза;

2- лопатовидные щетинки.

Так, с повышением температуры на каждые 2-4 градуса продолжительность жизни клещей сокращалась на 3-4 суток. Устойчивость клещей рода Chorioptes вне тела хозяина максимальна (24 суток) в условиях высокой относительной влажности воздуха и оптимальной температуры +8-11 °С.

Испытание нового отечественного инсектоакарицида Феноксифена против хориоптоза крупного рогатого скота

Феноксифен- комплексный инсектоакарицид, контактного действия. Входящий в него эсфенвалерат относится к группе перитроидов, обладает поражающим, репеллентным и парализующим действием. Феноксиэтанол - органический спирт, разрушающий оболочку яйца, делая её уязвимой для проникновения эсфенвалерата внутрь.

Оценка акарицидной и овоцидной активностей Феноксифена

Использовались следующие концентрации испытуемого препарата, исходя из его составляющих (по эсфенвалерату): 0.003%, 0.006%, 0.012%, 0.024%, 0.048%. Опыт проводился в трёх повторностях. Учет результатов

опытов проводился через 24 часа. Гибель 100% клещей наблюдалась при концентрации препарата 0.048%, СК50 при концентрации 0.012 %, и низшая концентрация препарата, при которой гибель клещей не наблюдалась, составила 0.003%. Следующим этапом была оценка овоцидной активности. Корочки, из которых предварительно были удалены паразиты на всех фазах жизни и оставлены только их яйца. Корочки подвергались микроскопии, а затем проводилось разделение их на равные части размером: 0.5 X 0.5 см. Количество яиц в образцах составляло 15 штук. Данные образцы корочек помещали в чашки Петри, дно которых было закрыто фильтровальной бумагой. Проводили разведение испытуемого препарата до нужных нам концентраций: 0,003%, 0,006%, 0,012%, 0,024% и 0,048%. Обработку образцов производили в трехкратном повторении. Учет результатов проводился на 3, 5 и 7 сутки. После первого учета результатов, т.е. на 3 сутки в образцах, обработанных 0.012%- деформация 8 яиц(53,3%), 0.024%- 80% что составило 12 яиц, 0.048%-деформация 15 яиц(100%)- изменили свою форму, сплюснуты с боков. Остальные образцы, обработанные концентрациями 0.003% и 0.006% без изменений.

На 5 сутки - расплод в контроле (12 особей- 80%). Остальные образцы без изменений. На 7 сутки - расплод из недеформированных яиц в образцах: при 0.003%- выплод 53.3%-из 8 яиц, при концентрации 0.006%- выплод составил 40.0%-из 6 яиц, при концентрации 0.012%- выплод из 3-37.5%, при концентрации 0.024% и при 0.048%- выплод не происходит, в контроле выплод составил 93.3%.

Следовательно, наиболее оптимальная концентрация данного препарата, имеющая овоцидное действие, - 0,024%. Далее проводилась обработка животных зараженных хориоптозом в условиях фермы.

Ранее выявленным заражённым хориоптозом животным в количестве 16 особей также обработали аэрозольным баллоном поражённые области раствором 0.024% (одна особь из 16 обрабатывалась дистиллированной водой для контроля результатов). После чего спустя 10 дней для выявления це-

лесообразности проведения второй обработки взяли соскобы и микроскопи-ровали их. В поле зрения микроскопа в соскобах обнаруживали 2-3 клеща, в контроле же в поле зрения находилось не менее 10 клещей.

При 0,024% концетрации полного терапевтического результата в условиях хозяйства не удаётся достигнуть, что указывает на необходимость повторной обработки животных. Спустя 3 дня, после второй обработки, яркой клинической картины уже не наблюдалось, животные вели себя спокойно, угнетение отсутствовало. Через месяц после обработки наблюдалось восстановление шерстного покрова на ранее поражённых местах.

Выводы

1. Получены и систематизированы данные по морфологии валидных видов клещей рода Chorioptes, приведена их дифференциация. Представлены и отражены на фотографиях фенотипические различия длин щетинок описто-сомальных лопастей взрослых клещей представителей двух валидных видов Chorioptes bovis и Chorioptes texanus. Не проводя генетических исследований судить о принадлежности к тому или иному виду клещей взятых из соско-бов-проб, можно, исследовав форму опистосомальных лопастей, измерив длину и расположение щетинок опистосомальных лопастей взрослых самцов данной популяции с помощью СЭМ;

2. Сравнение длин опистосомальных щетинок самцов Chorioptes texanus,описанных авторами из Швеции, Кореи и Канады и нашими исследованиями, показало динамику увеличения значений длин опистосомальных щетинок в зависимости от климатической зоны обитания клеща. Виды паразитирующие южнее обладают более короткими щетинками опистосомальных лопастей. Фиксирующая функция, тем самым длина щетинок опистосомы, клещей данного вида прямо пропорционально длине шерстного покрова животного-хозяина.

3. Получены данные о выживаемости клещей рода СЬопор1е5 вне тела хозяина. Устойчивость вне тела хозяина максимальна, составляет 24 суток, в условиях высокой относительной влажности воздуха- 68-78% и оптимальной температуры +8-11° С;

4. Индекс расчесывания характеризует степень зуда у больных хори-оптозом животных, что позволяет судить о течении патологического процесса. При клиническом обследовании животного установлено, что заболевание протекает стадийно. Наиболее тяжелой является третья стадия, она длиться 2-3 недели с индексом расчесывания 3,85, при интенсивности инвазии 12-15 клещей в поле зрения;

5. В основе патогенеза хориоптоза лежат морфо-функциональные изменения кожи, приводящие к нарушению биохимического гомеостаза, о чем свидетельствует изменения в морфологическом составе крови, лейкоцитарной формуле, изменения содержание белка и белковых фракций в сыворотке крови и биохимических показателей крови. Инвазия непосредственно связана с появлением клещей на животном сопровождается ответной реакцией, местной и общей. Питаясь межтканевой и клеточной жидкостью, клещи отравляют организм животного продуктами своей жизнедеятельности - слюной, экскрементами. Тем самым, постоянный «тканевой спрос» моноцитов и эозинофилов обуславливает их высокий уровень в крови, пораженных хори-оптозом животных. Степень и длительность повышения ферментативной активности в крови зависит от ее исходного уровня в тканях, субклеточной локализации ферментов, скорости их высвобождения и удаления из кровотока, а также от тяжести, продолжительности и характера течения хориоптоза.

6. Препарат Феноксифен в концентрации 0,024% обладает акарицидны-ми, овицидными свойствами в отношении клещей рода СЬопор1ез, практичен и безопасен;

7. Экономическая эффективность Феноксифена в ООО « Колхоз имени Владимира Ильича» оправдано. Экономический эффект на 1 руб. затрат составил 3,04 руб.

Сведения о практическом использовании научных результатов

1. Материалы диссертационной работы используются при чтении курса лекций по паразитологии и инвазионным болезням студентам очного и заочного отделений факультета ветеринарной медицины МГАВМиБ им. К.И. Скрябина;

2. Разработаны методические положения: «Морфологические особенности клещей рода СЬог1ор1еБ. Методика исследования клещей данного рода в сканирующем электронном микроскопе». Методические положения рассмотрены, одобрены секцией «Инвазионных болезней животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН от 27.09.2012 г., протокол № 3;

3. Основные материалы диссертации доложены на научных конференциях «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» секции «Инвазионные болезни животных» отделение ветеринарной медицины РАСХН г. Москва 2009 и 2011 годов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Горохова Е.В. Хориоптоз крупного рогатого скота. /Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И. СкрябинаУ/М.:ВИГИС.- 2009.-вып 10.-С.131-137.

2. Пузанова Е.В. Сравнительная характеристика морфологических особенностей клещей рода Chorioptes. /Труды Всероссийского института гельминтологии имени К.И. Скрябина// М.:ВИГИС.-2011,- вып 12.-С.409-411.

3. Горохова Е.В. Изучение морфологии Chorioptes bovis с помощью сканирующего электронного микроскопа.// Ветеринария.-2010.- №11.- с.34-36.

4. Кротенков В.П., Белугина Т.А., Кристалинский В.Р., Горохова Е.В. Биологические объекты и их микрометрия.// Ветеринария.-2009,- № 3.- С.20-21.

5. Пузанова Е.В. Сравнительная характеристика морфологических особенностей клещей рода СЬопор1ез.//Ветеринарная патология.-2012.- № 4.-том 38.-С.137-138.

Подписано в печать: 25.05.2013г. Тираж: 100 экз. Заказ №95 Объем: 1 усл.п.л. Отпечатано в типографии «Реглет» . Москва ул. Новослободская, д.20,стр.4 8(495)971-77-88, www.reglet.ru

Текст научной работыДиссертация по биологии, кандидата биологических наук, Пузанова, Евгения Владимировна, Москва

На правах рукописи

04201358568

ПУЗАНОВА ЕВГЕНИЯ ВЛАДИМИРОВНА

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КЛЕЩЕЙ РОДА СНОМОРТЕ8,СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ДИАГНОСТИКИ И МЕР

БОРЬБЫ

03.02.11 - паразитология

ДИССЕРТАЦИЯ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: академик РАСХН, доктор ветеринарных наук,

профессор ВАСИЛЕВИЧ Ф. И.

МОСКВА-2013

Содержание:

Введение...................................................................................стр.4

1. Обзор литературы...........................................................................8

1.1 Характеристика возбудителя................................................8

1.2 Биология возбудителя.......................................................11

1.3 Эпизоотические данные....................................................12

1.4 Патогенез......................................................................15

1.5 Клиническая картина........................................................20

1.6 Диагностика...................................................................22

1.7 Дифференциальная диагностика..........................................26

1.8 Лечение и профилактика...................................................30

2 Собственные исследования............................................................35

2.1 Материалы и методы.........................................................35

2.2 Результаты исследований..................................................40

2.2.1 Организационно-экономическая характеристика хозяйства и состояние животноводства...................................................40

2.2.2 Микроклимат в животноводческих помещениях..............43

2.2.3 Кормовая база и организация кормления животных в хозяйстве.........................................................................43

2.2.4 Эпизоотическая ситуация с хориоптозом крупного рогатого скота в ООО «Колхоз имени Владимира Ильича»......................44

2.2.5 Причины стационарного неблагополучия ООО «Колхоз имени Владимира Ильича» по хориоптозу крупного рогатого скота...............................................................................51

2.2.6 Гематологические и биохимические показатели крови крупного рогатого скота при хориоптозе...................................52

2.3 К вопросу биологии клещей рода СЬопор1ез..........................58

2.3.1 Методы отбора и очистки клещей для изучения в светооптическом и электронном микроскопах, апробирование новых препаратов в условиях лаборатории................................64

2.3.2 Микрометрия стадий развития Chorioptes texanus.............74

2.3.3 Сравнительная характеристика морфологических особенностей клещей рода Chorioptes.....................................81

2.3.4 Выживаемость клещей Chorioptes texanus во внешней среде..............................................................................86

2.4 Испытание нового отечественного инсектоакарицида Феноксифена против хориоптоза крупного рогатого скота.................................89

2.4.1 Оценка акарицидной и овоцидной активностей Феноксифена....................................................................89

2.4.2 Санитарная оценка мероприятий при хориоптозе.................94

2.4.3 Определение экономической эффективности проведенных мероприятий....................................................................95

3. Обсуждение результатов исследований..............................................100

4. Выводы....................................................................................105

5. Практические предложения.............................................................107

Список литературы..........................................................................108

Приложение.................................................................................119

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность. Хориоптоз животных - широко распространенное сезонное заболевание, вызываемое клещами рода Chorioptes, сем. Psoroptidae, отр. Acariformes. Болезнь протекает остро, подостро или хронически. Характеризуются воспалением кожи, зудом в местах поражения, образованием кожных экземоподобных изменений, аллопециями, приводящими к истощению, снижению продуктивности и резистентности организма животного (Абуладзе К.И., 1975; Богданов H.H., 1930; Гаврилова H.A., Пашкин П.Н.,1997; Садчиков С.Ю.,2001 и др.).

Несмотря на большие успехи ветеринарной науки и практики в ликвидации хориоптоза, следует признать, что данное заболевание имеет значительное распространение в настоящее время: существуют стационарно неблагополучные по хориоптозу крупного рогатого скота хозяйства (Шустрова М.В. и др.,2002). Генетический потенциал в молочном скотоводстве в настоящее время составляет более 4000 кг молока в год на корову. Его реализация возможна при создании оптимальных кормовых условий, применения научных достижений в практике кормления скота, предотвращения воздействия факторов, снижающих молочную

продуктивность, таких, как инвазионные болезни, вызываемые паразитированием членистоногих.

Несмотря на то, что существует много инсектоакарицидов проблема акарозов в сельском хозяйстве и по сей день остаётся актуальной. Акарозы наносят серьезный ущерб сельскохозяйственной отрасли (Гаврилова H.A., Пашкин П.Н.,1997).

В данной ситуации особенно актуальны вопросы совершенствования методов диагностики данного заболевания, расширения ассортимента акарицидных средств, снижения трудоемкости лечебных процедур (Митасов H.A., 1994; Дубинин В.Б., 1954). Своевременная и точная постановка диагноза, знание биологии и особенности развития отдельных фаз возбудителя лежат в основе мероприятий по борьбе с хориоптозом. К сожалению, несмотря на то,

что саркоптоидозы, в том числе и рассматриваемый в данной работе хориоптоз, известны как нозологические единицы более ста лет и широко распространены по всему миру, но подробных данных о валидности видов и морфологических особенностей клещей рода СЬопор1е8 получено пока недостаточно (Дубинин В.Б., 1954).

Цель и задачи исследований. Основная цель работы - изучить морфологические особенности клещей рода СЬопор1е8 на разных стадиях развития для совершенствования видовой диагностики, мер борьбы с хориоптозом и расширения ассортимента акарицидных средств. Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить особенности клинического проявления хориоптоза у крупного рогатого скота;

2. Изучить морфологические особенности клещей рода Оюпор1е8 на электронном сканирующем микроскопе;

3. Изучить выживаемость клещей вне тела хозяина и видовую специфичность клещей рода Оюпор1е8;

4. Апробировать новый комплексный инсектоакарицид Феноксифен в лабораторных условиях и в условиях фермы на животных.

Научная новизна. Впервые в РФ были получены и систематизированы данные по морфологии видов клещей рода СЬопор1е8,тем самым усовершенствована межвидовая диагностика данного заболевания с учетом вида возбудителя. Получены данные о выживаемости клещей рода СЬопор1е8 вне тела хозяина, изучены распространение и сезонная динамика зараженности крупного рогатого скота клещами рода С1югюр1е8. В условиях Московской области хориоптоз встречается у крупного рогатого скота повсеместно. Показано преимущество применения контактного перитроида Феноксифена, обладающего губительным действием на имаго и яйца клещей.

Практическое значение работы. Предложен для борьбы с хориоптозом крупного рогатого скота препарат Феноксифен. Разработаны методические положения: «Морфологические особенности клещей рода С1югюр1е5.

Методика исследования клещей рода СЬопор1е8 в сканирующем электронном микроскопе», рассмотрены и одобрены секцией «Инвазионных болезней животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН от 27.09.2012 г., протокол №3.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены на научных конференциях «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» секции «Инвазионные болезни животных» отделение ветеринарной медицины РАСХН г.Москва 2009 и 2011 годов.

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 5 работы, три из которых входят в перечень изданий, рекомендованных ВАК РФ.

Личный вклад: Личный вклад. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно, участие соавторов отражено в совместно изданных статьях и в учебных пособиях. Автором лично проведены биохимические исследования крови больных хориоптозом животных, подготовка и исследования валидных видов клещей в камере сканирующего электронного микроскопа, выживаемость клещей вне тела хозяина в различных условиях, проведена оценка акарицидной и овоцидной активностей нового контактного перитроида Феноксифена.

Автор приносит глубокую благодарность научному руководителю академику РАСХН, доктору ветеринарных наук, профессору Ф.И. Василевичу, который оказывал научно-методическую помощь в проведении исследований и анализе полученных результатов. Автор также благодарна соавторам совместно изданных статей В.П. Кротенкову, Т.А. Белугиной, В.Р. Кристалинскому, за оказание научно-методической помощи ведущему инженеру группы «Морфологические адаптации наружных покровов» института проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН Т.Н. Целиковой.

Основные положения, выносимые на защиту:

-Особенности клинического проявления хориоптоза;

-Гематологические и биохимические показатели крови крупного рогатого скота при хориоптозе;

-Выживаемость клещей вне тела хозяина в различных условиях; -Морфологические особенности валидных видов, усовершенствование видовой диагностики клещей рода СЬопор1е8;

-Результаты испытаний нового контактного перитроида Феноксифена, доза и кратность его применения.

Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 121 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, сведений о практическом использовании результатов исследований, списка литературы, включающего 127 источника, в том числе 46 иностранных авторов и приложения. Работа иллюстрирована 23 таблицами и 26 рисунками.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Возбудителями заболевания являются клещи, относящиеся к отряду Acariformes, подотряду Sarcoptiformes , надсемейству Sarcoptoidea, семейству Psoroptidae, роду Chorioptes [Ganestrini,1894]. По морфологическому строению клещи рода Chorioptes занимают промежуточное положение между накожниками (род Psoroptes) и зуднями (род Sarcoptes) [Кербабаев, Василевич,2000]. Большое количество клещей рода Chorioptes, паразитирующих на млекопитающих и претендующих на специфичную принадлежность определенному виду хозяина не являются самостоятельными единицами ни морфологически, ни генетически [Садчиков,2001]. Признание возможного перехода клещей с одного вида животных на другой обосновывает необходимость проведения мероприятий, направленных на предотвращение распространения болезни среди других видов животных при заболевании одного из них. В первую очередь это касается химиопрофилактики [Дьяконов, 1985].

Впервые в 1957 году Свитман опубликовал обзорную статью, в основном, посвященную морфологии, циклу развития и систематике [Sweatman,1951], Автор отрицал видовую специфичность и считал возможным переход клещей рода Chorioptes с одного вида хозяина на другой. Клещи данного рода, отобранные автором, с лошадей, крупного рогатого скота, коз, овец и лам не только оставались жизнеспособными на других видах хозяев, но и вызывали клинические признаки заболевания. К данному роду в настоящее время относят предполагаемых 5 видов - возбудителей хориоптоза диких и домашних млекопитающих. Три вида- Chorioptes crewei [Lavoipierre 1958], С. mydaus [Fain 1975] и C.panda [Fain and Leclerc 1975] , найденных y диких млекопитающих, мало изучены и пока не могут считаться валидными. Но Chorioptes bovis и Chorioptes texanus первоначально взятых от домашних млекопитающих прошли тщательное генетическое исследование и являются отдельными самостоятельными генетически различимыми видами [Hestvik,

Zahler-Rinder, Gavier-Widen, 2007; Zahler, Hendrikx,2001]. Ch.bovis и Ch. texanus морфологически идентичны на всех стадиях развития.

В строении тела выделяют два отдела: головной (гнатосома, или хоботок), несущий ротовой аппарат, и туловищный, или идиосома, несущий по четыре пары конечностей. Эти два отдела хорошо различимы. Идиосома явно разделена поперечной бороздой-сеюгальной, на передний отдел, называемый продосомой, и задний отдел - гистеросому. Каждый из этих отделов несет по две пары ног. Покровы тела состоят из гиподермы - одного слоя эпителиальных клеток и кутикулы. Гнатосома широкая, короткая, грызущего типа, почти квадратная. Хелицеры не выступают за вершину пальп. Проподосомальный щит очень узкий, слегка трапециевидно расширяющийся на заднем конце, занимает почти всю среднюю часть проподосомы. [Кербабаев, Василевич,2000].

На идиосоме имаго клещей имеется 4 пары конечностей, у личинок же три пары. Конечности шестичлениковые, из них основной членник, именуемый базальным, сливается с телом клеща и называется коксой, или тазиком. Отличительным признаком акарифирмных клещей является строение коксы в виде двух дугообразных склеритов - передние склериты кокс называются эпимерами, а задние - эпимеритами. К тазику прикрепляется пятичленниковая конечность. Вертлуг, бедро, голень и лапка подвижны в сочленениях. Лапки чаще всего заканчиваются предлапкой. Предлапка конечностей несёт пару хорошо развитых коготков и по одной нежной прозрачной присоске на коротких, нечленистых у клещей рода Chorioptes, стерженьках - амбулакральный аппарат. Данные клещи не имеют трахей и стигм. Половой диморфизм хорошо различим.

Величина самки - 0,35-0,39 мм (400um). Яйцевыводное отверстие очень большое, помещается в основании эпимер 2-й пары конечностей, его передний край укреплен хорошо развитым эпигинием. В закрытом состоянии имеет форму поперечной щели. Яйцевыводное отверстие располагается на конце короткой эластичной яйцевыводной трубки, которая при прохождении яйца

выворачивается из яйцевыводной щели наружу и вперед, а после откладывания яйца снова втягивается внутрь.

Самец меньше самки на четверть - размер 0,26-0,33 мм, также мельче и нимфы и личинки самцов. Гистеросомальный щит хорошо очерчен, начинается на уровне 3-й пары ног и достигает заднего края тела. Половой аппарат компактный, окружен хорошо выраженным генитальным щитком. Также на заднем конце туловища, ближе к вентральной поверхности, располагается анальное отверстие, имеющее вид продольной щели с крупными полулунными створками анального клапана. Такое расположение и форму имеют личинки, нимфы и взрослые самки. У самцов анальное отверстие расположено на ветральной стороне идиосомы, на уровне тазиков ног 3 и 4 пары и входит в состав анально-полового комплекса. Анальные копулятивные присоски очень крупные, помещаются посередине брюшной стороны опистосомы [Василевич,1986]. Анально-половой конус в спокойном состоянии ввернут внутрь идиосомы и прикрывается сверху склеротизированными пластинками.

У взрослых самцов на заднем крае спинной стороны туловища расположены два крупных плоских выроста треугольной формы-опистосомальные лопасти. Опистосомальные лопасти имеются у всех половозрелых самцов семейства Psoroptidae [Ильященко,1992].

Опистосомальные лопасти разделены треугольной щелью. Каждая из них несет по 5 длинных щетинок, две из которых плоские, расширенные [Кербабаев, Василевич, 2000]. Опистосомальные лопасти Ch. bovis имеют прямоугольные края, щетинка внешнего угла длинная в форме кнута, и две лопатовидные щетинки умеренно короче(115 ¡im или 115 мкм) и шире. Щетинка внешнего угла в виде крючка. Опистосомальные лопасти же Ch.texanus более угловатые, почти двухлопастные с короткой похожей на волосок щетинкой внешнего угла, которая в два раза короче лопатовидных щетинок суженных к основанию [Sweatman,1958]. Под опистосомальными лопастями терминально расположены две крупные копулятивные присоски

цилиндрической формы, которые могут выдвигаться из туловища или прижиматься к нему [Essig, Rinder, 1999]. В стенке верхней части присоски имеется кольцевая мышца. При образовании копулятивной пары самец захватывает присосками копулятивные бугры женской нимфы, кольцевая мышца присоски сжимается и нимфа фиксируется в нужном положении. У взрослых самок на одной из створок анального клапана, в его верхней части, распологается копулятивный сосок конусовидной формы с копулятивным отверстием на вершине. После осеменения копулятивное отверстие закрывается пробкой секрета [Sweatman,1957]. Расположение копулятивного соска на створках анального клапана может быть различным. Он может находиться либо на левой, либо на правой створке. Конечности четвертой пары в три раза мельче ног третьей пары. Длина волосовидных щетинок лапок третьей пары превышает половину длины тела [Кербабаев, Василевич,2000].

Трахеи, стигмы, глаза у клещей рода Chorioptes отсутствуют. Дорзальная и вентральная поверхности идиосомы имеют редкие волосовидные щетинки.

1.2. БИОЛОГИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ

Развитие клещей происходит по бинимфальному типу. В морфогенезе клещей различают фазы яйца, личинки, протонимфы, телеонимфы и имаго (рис.1). Период времени, равный четырем суткам, требуется затратить для появления личинки из яйца клеща. Переход из одной фазы в другую происходит через покоящуюся фазу хризалиды после очередной линьки. Самцы соединяются в пары с протонимфами, которые в парах становятся телеонимфами самок (рис.1), далее самками, копулирующими с самцами и использующими половой продукт самца для кладки яиц. После каждой кладки самка живёт от 2 до 4 недель. Продолжительно�