Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфологические изменения в органах мышей при использовании этоксидола на фоне химиотерапии адрибластином и вепезидом

ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Морфологические изменения в органах мышей при использовании этоксидола на фоне химиотерапии адрибластином и вепезидом"

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНИНИЯ В ОРГАНАХ МЫШЕЙ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ЭТОКСИДОЛА НА ФОНЕ ХИМИОТЕРАПИИ АДРИБЛАСТИНОМ И ВЕПЕЗИДОМ

03.03.04 - гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

3 0 СЕН 2(110

Саранск 2010

004609711

Работа выполнена на кафедре цитологии, гистологии и эмбриологии ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Владимир Павлович Балашов

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Ангелина Владимировна Зорькина

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Ольга Сергеевна Шубина

Ведущая организация: ГОУВПО «Первый Московский государственный медицинский университет».

Зашита состоится «15» октября 2010г. в 16.00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.117.01 при ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П.Огарева» по адресу: 430005, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

Автореферат диссертации опубликован на официальном сайте ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П.Огарева» www.mrsu.ru E-mail: dsovet@mrsu.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. НЛХОгарева»

Автореферат разослан .2010 года.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор

Инчина В.И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В структуре смертности РФ злокачественные новообразования занимают второе место после сердечно-сосудистой патологии. Проблема лечения онкологических заболеваний на сегодняшний день является одной из нерешенных и наиболее острых в современной медицине. Согласно прогнозу ВОЗ к 2020 году в России число заболевших раком может достичь 20 миллионов человек (Гришкин П.С., 2008).

Одним из основных методов лечения онкологических больных является химиотерапия цитостатическими и цитотоксическими препаратами. Химиотерапия является очень агрессивным и не редко единственным методом лечения онкологической патологии (Hudson M.M. et al., 1998). По существу, нет ни одного цитостатика, который был бы совершенно безопасен, даже в рекомендуемых дозах. Многие пациенты, не имея иного выбора лечения, вынуждены смириться с осложнениями химиотерапии, которые нередко ухудшают качество их жизни и приводят к гибели. В связи с этим проблема фармакологической коррекции токсических эффектов противоопухолевой терапии -одно из приоритетных направлений различных направлений экспериментальной и практической медицины.

В последние годы ведется активная разработка способов снижения побочного действия противоопухолевой терапии и защиты жизненно важных органов и тканей от токсического действия противоопухолевых препаратов без ослабления их специфической активности (Гершанович M.JI., 1997, 1999). В качестве перспективных корректоров побочных эффектов цитоста-тиков в отечественной литературе часто рассматривают природные и синтетические антиоксиданты, в том числе производные 3-оксипиридина (Сипров A.B., 2008). Важным аргументом в пользу обоснования применения антиок-сидантов в качестве антитоксических модификаторов противоопухолевой терапии является тот факт, что побочные эффекты противоопухолевых средств во многом связаны с образованием супероксидных радикалов (Галенко-Ярошевский В. П. с соавт., 2005; Глушков С.И. с соавт., 2005; Вишняков С.С. с соавт., 2008). Активная генерация активных форм кислорода оказывает не только токсическое действие на опухолевые клетки, но и является мощным повреждающим фактором для здоровых клеток тканей организма.

Среди производных 3-оксипиридина наше внимание привлек препарат этоксидол, являющийся близким аналогом мексидола. Представляет интерес углубленное исследование этоксидола в качестве протектора побочных эффектов цитостатиков, поскольку подобные свойства ранее описаны для мексидола (Сипров A.B., 2004, 2008). Однако, несмотря на достаточно убедительное теоретическое обоснование и многочисленные экспериментальные и клинические работы, подобные исследования не всегда содержат данные морфологии, что снижает их доказательную ценность и объективность. Кроме того, в проанализированной нами литературе практически не изучались

отсроченные эффекты антиоксидантов, что оставляет много вопросов о продолжительности фармакологического эффекта 3-оксипиридинов в рамках данной экспериментальной и клинической ситуации (Ордуханян З.С. с соавт., 2000; Степовая Е.А. с соавт., 2004; Митрохин Н.М. с соавт., 2008; Сернов Л.Н. с соавт., 2008; Фатеева Е.И. с соавт., 2008; Рубцов А.А. с соавт., 2009).

Цель исследования: изучить морфологические изменения в некоторых органах подопытных животных на разных сроках терапии этоксидолом в качестве корректора побочных эффектов комбинации адрибластина и вепезида.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать некоторые биохимические показатели сыворотки крови и структуру некоторых органов желудочно-кишечного тракта (желудка, тощей кишки, печени), легких и почек мышей, получавших комбинацию адрибластина и вепезида.

2. Изучить в динамике влияние этоксидола на некоторые биохимические показатели сыворотки крови мышей при введении цитостати-ков.

3. Исследовать морфологические изменения органов мышей на разных сроках терапии этоксидолом в условиях модельной «химиотерапии».

Научная новизна работы. В работе впервые дана морфологическая оценка эффективности применения этоксидола в качестве цитопротектора при моделировании противоопухолевой «терапии» адрибластином и вепези-дом используемых в клинической практике в лечении злокачественных опухолей.

Впервые изучены морфологические изменения желудка, тощей кишки, печени, легких, почек при введении среднетерапевтической дозы этоксидола в условиях '^терапии" цитостатиками и дан сравнительный временной морфологический и биохимический анализ протекции побочных эффектов вепезида и адрибластина этоксидолом.

Показано, что этоксидол обладает относительно слабым и кратковременным гепатопротекторным эффектом. Этоксидол проявляет частичный, но более длительный корригирующий эффект в отношении негативного действия вепезида и адрибластина на структуры желудка, тощей кишки и почек. Наиболее заметное (быстрое и продолжительное) протекторное действие этоксидола в условиях выбранной экспериментальной модели проявляется в отношении морфологических изменений в легких.

Научно-практическая ценность

Данные полученные при проведении работы могут стать основой для дальнейшего исследования активности яблочно-кислой соли З-гидрокси-6-метил-2-этилпиридина в качестве средства профилактики и коррекции токсических эффектов противоопухолевых препаратов. Основные результаты диссертационного исследования могут быть использованы специалистами, работающими в области химии и фармакологии производных 3-оксипиридинов. Материалы работы представляют интерес для практикую-

щих врачей онкологов. Основные выводы и положения диссертации могут быть использованы в учебном процессе медицинских, биологических и ветеринарных вузов, а также при написании учебных пособий.

Внедрение результатов работы. Результаты диссертационного исследования внедрены в научно-исследовательскую работу кафедры цитологии, гистологии и эмбриологии с курсом медицинской биологии и используются в учебном процессе на кафедре фармакологии Мордовского государственного университета имени Н.П. Огарева.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При модельной цитостатической «терапии» этоксидол корригирует отклонение от нормы активности АлАТ, уровня глюкозы и мочевины в сыворотке крови подопытных животных.

2. Этоксидол способствует быстрому и надежному устранению морфологических изменений вызванных адрибластином и вепезидом в легких. Менее выраженный и кратковременный эффект этоксидола проявляется в желудке, тощей кишке, почках и печени.

Основные сведения об апробации работы. Материалы, представленные в диссертации, докладывались и обсуждались на ежегодных Огаревских чтениях и конференциях молодых ученых Мордовского государственного университета (Саранск, 2007-2010 гг.); научно-практическая конференция с международным участием (Смоленск, 2009); VI Всероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Саратов, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы, в том числе одна в журнале, рекомендованном ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, заключение, выводы, практические рекомендации, список литературы и приложение. Список литературы включает 172 источников, из которых 97 отечественных и 75 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 72 рисунками, цифровой материал исследований представлен 8 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования.

В работе использовали 100 самок нелинейных белых мышей массой 20г. Для моделирования «химиотерапии» мы использовали широко применяемые в онкологии препараты адрибластин и вепезид. В качестве протектора их побочных эффектов исследовали - этоксидол - яблочнокислую соль 3-гидрокси-б-метил-2-этилпиридина. В работе использовали субстанцию этоксидола, полученную из ВНЦ БАВ (Старая Купавна).

Подопытные животные были разделены на три группы. В I группе мышам (п=20) внутрибрюшинно вводили изотонический раствор хлорида натрия. Во II группу вошли 40 животных, которые получали адрибластин в дозе 20,0 мг/кг и вепезид в дозе 100,0 мг/м2 площади тела. Препараты вводили с интервалом в 60 минут. III группе животных (п=40) вводили то же сочетание цитостатиков и назначали терапию этоксидолом в дозе 20 мг/кг. Этоксидол вводили через 30 мин после введения химиопрепаратов. Всем подопытным животным всех групп препараты вводили внутрибрюшинно, ежедневно, однократно, в течение 5 дней (Табл. 1).

Таблица 1

Дизайн исследования

Этоксидол Наблюдение

адрибластин + вепезид

1 сутки 2 сутки 3 сутки 4 сутки 5 сутки 6 сутки 7 сутки 8 сутки 9 сутки 10 сутки

По 20 животных из групп I, На, Illa были выведены из опыта на 6-е сутки от начала эксперимента. По 20 мышей в группах находились под наблюдением до истечения 10-х суток наблюдения (Ив и Шв), после чего их также выводили из эксперимента. Распределение животных по группам представлено в таблице 2.

Таблица 2

Распределение животных по группам _

№ п\п Условия эксперимента Группы животных Количество животных

1. Изотонический раствор хлорида натрия, внутрибрюшинно. I (интактные мыши) 20

2. Адрибластин 20,0 мг/кг + вепезид 100,0 мг/м2, внутрибрюшинно. IIa 20

Ив 20

3. Адрибластин 20,0 мг/кг + вепезид 100,0 мг/м2 + этоксидол 20 мг/кг, внутрибрюшинно. Ша 20

Шв 20

Итого: 100

Из опыта мышей выводили путем гильотинирования под ингаляционным эфирным наркозом, соблюдая требования приказа МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г. У животных, выведенных из опыта, на 6-е и 10-е сутки забирали кровь из пересеченных путем декапитации шейных вен для биохимического исследования и кусочки тканей (легкого, желудка, тощей кишки, печени, почек) для проведения морфологического исследования.

Биохимическое исследование.

В сыворотке крови определяли активность аланинаминотрансферазы эн-зиматическим кинетическим методом; концентрацию глюкозы определяли энзиматическим колориметрическим методом; концентрацию мочевины определяли по реакции с диацетилмонооксимом и содержание креатинина определяли псевдокинетическим двухточечным методом по реакции Яффе.

Морфологическое исследование.

Для гистологического исследования кусочки органов фиксировали в 10% нейтральном формалине в течение суток. После обезвоживания в спиртах восходящей концентрации производили заливку в парафин. На санном микротоме изготавливали срезы толщиной 5-7 мкм, которые окрашивали гематоксилином Эрлиха и эозином. Часть срезов желудка и тощей кишки окрашивали альциановым синим (Семченко В.В. с соавт., 2006).

Приготовленные микропрепараты изучали при помощи светового микроскопа Jenaval (Австрия). Использовали малое (10x10x1,25), среднее (10x20x1,25) и большое увеличение (10x40x1,25). Фотосъемку препаратов производили цифровой камерой САМ V 200 (Vision, Австрия) с последующей обработкой изображений в Adobe Photoshop 7.0. Морфометрическое исследование проводили при помощи программы Видеотест - Мастер Морфология (2005) или с помощью окуляр-микрометра. Показатель «площадь защиты» рассчитывали в % от площади кадра исследуемого препарата слизистой оболочки.

Все количественные данные подвергали статистической обработке. Достоверность различий сравниваемых показателей определяли с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты собственных исследований.

Результаты всех биохимических тестов представлены в таблице 3.

Таблица 3

Влияние этоксидола на активность AJIT, концентрацию глюкозы, мочевины,

креатинина в сыворотке крови белых мышей на фоне химиотерапии

Условия опыта (группы животных) АЛТ, МЕ/л глюкоза ммоль/л креатинин ммоль/л мочевина моль/л

Интактные (I) 59,97±1,01 4,85±0,89 56,77±3,34 2,96±0,18

Адрибла-стин + вепезид 6-е сутки наблюдения (На) 70,03±3,12 А 4,27±0,64 34,58±3,1А 3,36±0,38

10-е сутки наблюдения (Нв) 53,95±3,08 А 2,47±0,ЗА 33,84±8,06А 6,52±0,8А

Адрибла-стин + вепезид + этоксидол 6-е сутки наблюдения (Ша) 53,35±4,13 * 2,59±0,5* 19,31±1,4* 3,01±0,46

10-е сутки наблюдения (Шв) 47,84±4,75 * 5,64±0,5* 17,07±1,75* 3,42±0,30*

Примечание: А - отличия от интактных животных Р<0,05; * - отличия от животных контрольной группы получавших противоопухолевые цитостатики Р<0,05.

Установлено, что в контрольной группе животных на 6-е сутки эксперимента наблюдалось увеличение активности АлАТ до 70,03±3,12МЕ/л против 59,97±1,01МЕ/л у интактных животных, что вероятно свидетельствует о повреждении части гспатоцитов и выходе фермента в периферическую кровь. К концу периода наблюдения активность АлАТ снижается до 53,95±3,08МЕ/л, что отражает снижение синтетической активности гепато-цитов.

Этоксидол на 6-е сутки, проявляя свои корригирующие свойства, препятствует росту активности АлАТ при цитостатической терапии, сохраняя активность фермента на уровне, характерном для интактной группы. К концу периода наблюдения протекторный эффект этоксидола не проявлялся, что подтверждается прогрессированием отрицательной динамики активности АлАТ.

О некротических изменениях в органе свидетельствует также рост уровня мочевины у животных контрольной группы к 10-м суткам эксперимента. Видимо структурный белок гепатоцитов являлся дополнительным источником азота мочевины (Данилова Л.А., 2005). 3-оксипиридин успешно корригировал данный показатель, очевидно, в большей степени из-за частичного восстановления структуры почечных канальцев и скорости фильтрации.

Наиболее сложна, на наш взгляд, интерпретация полученных данных о динамике уровня креатинина у подопытных животных. Под воздействием цитостатиков концентрация креатинина снижалась как на 6-е, так и на 10-е сутки эксперимента и составила 34,58±3,1 и 33,84±8,06 ммоль/л, соответственно. Можно предположить, что это связано с умеренным угнетением энергетического обмена в скелетных и сердечной мышцах. Этоксидол не препятствовал снижению данного показателя. Напротив, под влиянием антиокси-данта уровень креатинина продолжал снижался во все периоды наблюдения и к 10-м суткам был равен 17,07±1,75 ммоль/л, относительно 33,84±8,06 ммоль/л Нв группы. Частично данный эффект можно объяснить депонированием креатина в мышцах и снижением его распада до креатинина, а также частично активным вовлечением креатина в регенерацию креатинфосфата и возможно усилением фильтрации креатинина в почках.

Концентрация глюкозы при моделировании цитостатической «терапии» на 6-е сутки не подверглась значительным изменениям, и была на уровне показателей у интактных мышей (I группа). На 10-е наблюдения у животных развивалась гипогликемия, со снижением уровня сахара крови до 2,47±0,33 ммоль/л, относительно 4,85±0,89 ммоль/л у животных интактной группы.

Терапия этоксидолом способствовала обратным изменениям уровня сахара в сыворотке крови подопытных животных. На 6-е сутки уровень глюкозы снижался до 2,59±0,58 ммоль/л. К 10-м суткам данный показатель возрастал до 5,64±0,51 ммоль/л и был сопоставим с концентрацией глюкозы у интактных животных.

Последующее морфологическое исследование ряда органов подтвердили основные предположения, сделанные нами на основании биохимической части работы.

На б-е сутки цитостатической «терапии» в печении наблюдался ряд характерных изменений. Оболочка гепатоцитов разрушалась, часть гепатоци-тов выглядела "пустыми". Клетки содержали большие вакуоли. Лишь небольшая часть печеночных клеток выглядела сохранной. Внутридольковые синусоидные капилляры спазмировались и плохо различались между печеночными трабекулами, их диметр был равен 0,40 ± 0,02 мкм, относительно 0,57 ± 0,07 мкм животных интактной группы (Табл. 4). Междольковые вены и часть желчных трактов триад имели участки повреждения стенки.

Таблица 4

Результаты морфометрического анализа некоторых сосудистых струк-

тур печени мышей на б-е и 10-е сутки эксперимента

Исследуемая характеристика Интактная группа Контроль Этоксидол в дозе 20 мг/кг

6 сутки 10 сутки 6 сутки 10 сутки

Диаметр синусоидных капилляров (мкм) 0,57 ± 0,07 0,40 ± 0,02А 0,37 ± 0.04А 0,42 ± 0,04* 0,53 ± 0,04*

Диаметр центральных печеночных вен (мкм) 1,90 ±0,22 1,59 ±0,17 2,03 ± 0,50А 1,87 ±0,19* 2,77 ± 0,32

Примечание: А - отличия от интактных животных Р<0,05; * - отличия от животных контрольной группы получавших противоопухолевые цитостатики Р<0,05.

Этоксидол на 6-е сутки эксперимента способствовал уменьшению зоны печеночных долек содержащих поврежденные клетки. Гепатоциты у животных группы Illa были более сохранными. Видимо этим объясняется снижение активности АлАТ, обнаруженное в биохимической части работы. Центральные вены под влиянием этоксидола несколько увеличили свой просвет, однако, как и у междольковых вен, в их стенке наблюдались участки истончения и разрушения (Табл. 4). Стенка желчных протоков в большинстве случаев не повреждалась. Стенка артерий выглядела неповрежденной. Просвет синусоидных капилляров несколько увеличивался.

На 10-е сутки после цитостатической «терапии» деструктивные изменения в органе нарастали. Увеличивалось количество разрушенных гепатоцитов на периферии дольки. Наблюдались пустые вены и сосуды со стазом. Эндотелий сосудов был частично поврежден. В желчных протоках отмечалось снижение высоты эпителия и частичное повреждение стенки.

Этоксидол к 10-м суткам не оказывал заметного цито- или гепатопро-текторного эффекта и не препятствовал прогрессированию повреждений некротического характера. Однако, следует отметить выраженный сосуди-

стый эффект. Данный вывод подтверждается низким уровнем активности АлАТ в указанные сроки у животных получавших этоксидол (табл. 3).

Таким образом, введение этоксидола к 6-м суткам цитостатической «терапии» приводило к некоторому гепатопротекторному эффекту, характеризующемуся улучшению сохранности клеток печени, уменьшением зон повреждения органа. Вероятно, протекторный эффект этоксидола от части, объясняется уменьшением количества спазмированных внутридольковых капилляров, что сопровождается усилением циркуляции крови в дольках и соответственно снижением интенсивности некротических изменений в гепато-цитах.

В слизистой желудка на 6-е сутки моделирования цитостатической «терапии» развивались эрозивные повреждения. Париетальные и в большей степени главные экзокриноциты фундальных желез окрашивались бледнее, что свидетельствовало о нарушении их функции. Слизеобразование поверхностным эпителием и шеечными мукоцитами заметно угнеталось (Табл. 5). Площадь слизистого барьера у мышей контрольной группы составила 0,4 ± 0,05%, относительно 5,68 ± 0,7% - у животных интактной группы. Резко спазмировапись капилляры собственной пластинки слизистой.

Таблица 5.

Результаты морфологического анализа слизеобразования желудка и тощей кишки мышей (% от площади кадра) при введении этоксидола на фоне «химиотерапии»

Исследуемая характеристика Интактные Контроль Этоксидол

6 сутки. 10 сутки 6 сутки. 10 сутки.

слизеобразование (желудок) 5,68 ± 0,7 0,1 ±0,05 А 0,2 ± 0,04А 0,4 ±0,02* 0,8 ±0,1*

Слизеобразование (тощая кишка) 5,64 ±0,6 6,5 ± 0,6 1,0± 0,02А 5,29 ±0,8 4,89 ±0,7*

Примечание: А - отличия от интактных животных Р<0,05; * - отличия от животных контрольной группы получавших противоопухолевые цитостатики Р<9,05.

Этоксидол способствовал уменьшению интенсивности эрозивного повреждения, препятствовал спазмированию капилляров собственной пластинки слизистой и в некоторой степени способствовал сохранности фундальных желез. Слизеобразование на 6-е сутки опыта увеличивалось статистически достоверно, но его интенсивность была относительно невелика (0,4 ± 0,02%).

На 10-е сутки в контрольной группе наблюдения деструктивные процессы в органе усиливались. Зоны повреждения покровного эпителия становились более многочисленными. Слизеобразование мукоцитами оставалось угнетенным. Площадь слизистого барьера составила 0,2 ± 0,04%. Часть секреторных отделов желез были резко расширены и более темно окрашены. Цитоплазма париетальных клеток практически утрачивала оксифильность. Их размер был несколько меньше, чем во На группе. Отмечались единичные клетки с пикнотическими ядрами. Усиливались деструктивные изменения

железистых клеток, наблюдались вакуолизированные и разрушающиеся клетки (главные экзокриноциты и часть гландулоцитов). Усиливалось спаз-мирование микрососудов слизистой.

Этоксидол к 10-м суткам наблюдения после цитостатической «терапии» предупреждал развитие наиболее грубых поражений органа. Уменьшалась площадь эрозивных дефектов слизистой оболочки, эпителий выглядел более сохранным, наблюдалось большое количество зон с неповрежденными клетками. Площадь слизистого барьера заметно увеличивалась (0,8 ± 0,1%). Строение желез было сравнимо с их структурой у интактных животных, Не наблюдалось и расширения секреторных отделов желез. Капилляры собственной пластинки слизистой выглядели несколько уже, чем у интактных мышей, но их спазма не наблюдалось.

В тощей кишке при моделировании цитостатической «терапии» на 6-е сутки также развивались дегенеративные изменения. На поверхности ворсинок отмечались эпителиоциты с поврежденной апикальной частью. Часть клеток были полностью разрушены. Интенсивность образования слизисто-бикарбонатного барьера не нарушалась. Капилляры слизистой оболочки часто выглядели расширенными и иногда имели частично разрушенную стенку.

Протекторное действие этоксидола на стенку тощей кишки плохо дифференцировалось, вероятно, в силу невыраженности исходных негативных изменений структуры органа. В целом к 6-м суткам после терапии этоксидо-лом слизистая оболочка характеризовалось большей сохранностью. Эпителий ворсинок содержал лишь единичные поврежденные клетки, отсутствовали полностью разрушенные эпителиоциты. Площадь слизистого барьера была на уровне интактных животных. Эпителий крипт не отличался от эпителия интактных животных. Капилляры имели обычную ширину просвета и лишь в некоторых ворсинках были расширены.

К 10-м суткам наблюдения в контрольной группе состояние стенки тощей кишки улучшалось, возможно, за счет активации механизмов физиологической регенерации. Отсутствовали участки с разрушенным эпителием, количество клеток с поврежденной апикальной частью становилось меньше. Наиболее значимым изменением в структуре органа явилось уменьшение площади слизистого барьера до 1,0 ± 0,02 % (Табл. 5).

Этоксидол не вносил существенных изменений в морфологическую картину, наблюдаемую на 10-е сутки в контрольной серии. Заметным эффектом антиоксиданта, явилась нормализация интенсивности слизеобразования бокаловидными клетками (Табл. 5).

В почках цитостатическая терапия уже на 6-сутки вызывала значительные изменения в мозговом веществе, тогда как структуры коркового вещества повреждались меньше. Наблюдались отдельные почечные тельца с поврежденной капсулой. Просвет капсулы юкстамедуллярных нефронов умеренно сужался до 0,07 ± 0,01мкм, относительно 0,13 ± 0,01мкм животных интакт-ной группы. Ширина просвета капсулы корковых нефронов оставалась на уровне ширины просвета капсулы интактных животных Строение сосудистого клубочка было подобно интактному. Диаметр почечных клубочков суще-

ственно не изменялся (Табл. 6). Эпителий проксимальных и дистальных канальцев повреждался мало.

Таблица 6.

Результаты морфометрического анализа некоторых структур почек мышей на 6-е и 10-е сутки эксперимента

Исследуемая характеристика Интактная группа Контроль Этоксидол

6 сутки 10 сутки 6 сутки 10 сутки

Ширина полости капсулы юкстамедуллярных нефронов (мкм) 0,13 ±0,01 0,07 ±0,01 А 0,23 ±0,01 А 0,11 ±0,02 0,13 ±0,02*

Ширина полости капсулы корковых нефронов (мкм) 0,15±0,01 0,2±0,01 0,17±0,02 0Д±0,02 0,13±0,01

Диаметр почечных клубочков (мкм) 1,0 ±0,05 0,85 ± 0,05 0,69 ± 0,04А 0,96 ±0,08 1,07±0,07*

Примечание: А - отличия от интактных животных Р<0,05; * - отличия от животных контрольной группы получавших противоопухолевые цитостатики Р<0,05.

В верхней части мозгового вещества происходили некротические изменения эпителиоцитов толстой и тонкой части петли нефрона. Значительная часть перетубулярных капилляров мозгового вещества были спазмированы.

Этоксидол на 6-е сутки оказывал защитное действие на эпителиальные компоненты капсулы почечных телец и канальцев коркового и мозгового вещества. Почечные тельца имели повреждения обоих листков капсулы, однако в среднем протяженность поврежденных участков визуально была меньше. Ширина полости капсулы юкстамедуллярных и корковых нефронов соответствовала ширине капсулы в интактной группе животных Стенка проксимальных и дистальных канальцев в разных участках коркового вещества имела разную степень сохранности. Наблюдались канальца с неповрежденным и с разрушающимся эпителием. Мозговое вещество также подвергалось реактивно - деструктивным изменениям. В верхней части мозгобого вещества канальца толстой части петли нефрона имели повреждения цитоплазмы эпителиоцитов, но не было клеток с разрушенными ядрами. В глубине мозгового вещества толстая часть петли достаточно редко содержала поврежденные эпителиоциты.

К 10-м суткам наблюдения в контрольной группе капиллярный клубочек почти всех телец был несколько спазмирован. его диаметр составил 0,69

± 0,04 мкм (Табл. 6). Полость капсулы юкстамедуллярных нефронов была обычной ширины или слегка расширена (до 0,23 ± 0,01 мкм), ширина полости капсулы корковых нефронов (0,17±0,02 мкм) также соответствовала ширине капсулы интактных животных. Сохранность эпителия стенки канальцев в разных участках коркового вещества варьировала от практически сохранного, до содержащего вакуолизированные эпителиоциты. В мозговом веществе органа уменьшалось количество канальцев с поврежденным эпителием, а также степень его повреждения. Количество спазмированных капилляров уменьшалось, что возможно связано с уменьшением степени интерстициаль-ного отека.

При протекции этоксидолом структура почечных телец к 10-м суткам наблюдения еще больше приближалась к интактной. Диаметр капиллярных клубочков (1,07±0,07мкм), как и ширина просвета капсулы юкстамедуллярных (0,13 ± 0,02 мкм) и корковых (0,13±0,01) нефронов были сопоставимы с таковыми у интактных животных. Только единичные капиллярные сети почечных телец были спазмированы. Проксимальные и дистальные канальцы коркового вещества имели типичное строение эпителия. Часть сосудов вторичной капиллярной сети коркового вещества были спазмированы, часть обычной ширины и часть резко расширены. Меньший протекторный эффект проявлялся в отношении канальцев мозгового вещества, среди которых встречались канальца с поврежденной стенкой и несколько расширенные. В сосудах перитубулярной сети мозгового вещества было намного меньше расширенных капилляров, стаз в них не наблюдался.

В легких при моделировании цитостатической «терапии» на 6-е сутки развивались деструктивные изменения. Частично повреждались мелкие бронхи и бронхиолы, в их адвентиции отмечалась умеренная лейкоцитарная инфильтрация. В респираторном отделе повреждалась эпителиальная выстилка. Часть септ истончалась и имела участки разрушенного эпителия.

Этоксидол уже на 6-е сутки оказывал защитное действие. В респираторных бронхиолах повреждения участков стенки с кубическим эпителием были незначительны. Септы были обычной толщины, их эпителий был мало поврежден. Капилляры имели обычный диаметр.

На 10-е сутки в контрольной группе в стенке воздухоносных путей, как в слизистой, так и в адвентиции усиливалась лейкоцитарная инфильтрация. Кубический эпителий в респираторных бронхиол и альвеолярных ходов повреждались мало, однако, усиливалась деструкция альвеолярного эпителия, отмечалось и разрушение соединительнотканной основы септ. В просвете альвеол визуализировались форменные элементы крови. Увеличивалось количество перегородок с расширенными капиллярами заполненными эритроцитами, усиливалась и лейкоцитарная инфильтрация септ.

К 10-м сутками протекции этоксидолом положительные изменения в органе усиливались. Не наблюдалось истонченных септ, капилляры имели нормальный или несколько расширенный диаметр. В просвете альвеол отсутствовали форменные элементы крови.

Таким образом, можно отметить, ряд общих черт действия цитостати-ков на структурные компоненты исследуемых органов. В первую очередь это угнетение физиологической регенерации эпителиальных компонентов, что сопровождается распространением дефектов на подлежащую соединительную ткань органов. Другим достаточно воспроизводимым эффектом цитоста-тического действия является спазмирование сосудов микроциркуляции. Механизм этого эффекта не вполне ясен, однако возникающая вследствие этого гипоксия усиливает повреждение тканевых структур. В печени этот эффект приводит к развитию даже некротического повреждения органа,

Этоксидол, как и другие 3-оксипиридины (Балашов В.П. с соавт., 2007; Колесникова С.Г., 2002.), проявляя свойства стимулятора митозов, эффективно поддерживает физиологическую регенерацию эпителиев и частично нейтрализует негативное действие адрибластина и вепезида. С другой стороны, проявляя вазодилятирующие свойства в отношении сосудов микроциркуляции он снимает спазм этих сосудов и оптимизирует кровоснабжение, предупреждая гипоксические изменения в органах.

В заключение хотелось бы отметить, что судя по полученным данным, этоксидол обладает рядом протекторных свойств, но его эффект является весьма непродолжительным и через 10 суток после отмены препарата защитное действие на структуры большинства органов, особенно печени - нивелируется.

ВЫВОДЫ

1. Этоксидол в дозе 20 мг/кг при «терапии» мышей вепезидом и адрибла-стином проявляет различные по интенсивности и продолжительности эффекты в отношении изученных органов животных.

2. Этоксидол оказывает лишь кратковременный гепатопротекторный эффект: на 6-е сутки отмечается уменьшение количества поврежденных гепатоцитов, доли спазмированных внутридольковых капилляров, что подтверждается относительной коррекцией активности аланинами-нотрансферазы; на 10-е сутки протекторный эффект этоксидола отсутствует и в органе прогрессивно развиваются некротические изменения, что подтверждается снижением активности аланинаминотрансферазы и уровня креатинина в сыворотке крови к 10-м суткам.

3. Этоксидол оказывает отсроченный гастропротекторный эффект: не влияя на структуру слизистой оболочки желудка в 6-е сутки после введения, к 10-м суткам опыта цитопротектор уменьшает степень деструктивных изменений покровного эпителия, фундальных желез, устраняет спазм капилляров собственной пластинки слизистой. В тощей кишке этоксидол надежно поддерживал изначально минимачьные повреждения целостности эпителиального пласта, усиливал слизеобразование и нормализовал просвет сосудов микроциркуляции.

4. Этоксидол оказывает умеренное и кратковременное нефропротектор-ное действие: через сутки после его введения отмечается уменьшение

количества поврежденных почечных телец, эпителиоцитов почечных канальцев и снижение степени их деструкции (особенно в мозговом веществе), способствует устранению спазмов капиллярной сети органа; на 10-е сутки опыта в силу высокой активности физиологической регенерации органа положительный эффект этоксидола был не различим. Улучшение структурно-функционального состояния фильтрационного барьера подтверждается нормализацией уровня мочевины в сыворотке крови животных.

5. Этоксидол оказывает пневмопротекторное действие на всем протяжении эксперимента, улучшая сохранность эпителиальной выстилки респираторного эпителия альвеол и способствуя расширению спазмиро-ванных мелких кровеносных сосудов.

Практические рекомендации.

Изучаемый 3-оксипиридин проявил достаточно выраженный пневмо-протекторный, кратковременные гепато- и нефропротекторные и отсроченные гастропротекгорные свойства, что является основанием для дальнейшего детального изучения механизма его действия на структуру и функцию органов организма.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ларина Н.Р. Влияние этоксвдола на побочные эффекты противоопухолевой терпи адрибластином и вепезидом / Н.Р. Ларина, В.П. Балашов // Применение протекторов метаболического действия в лечении соматических заболеваний: сборник научных работ / сост. A.B. Зорькина. - Саранск: ООО «Референт», 2008. - С. 78-79.

2. Балашов В.П. Строение печени мышей при введении цитоста-тиков и этоксидола // В.П. Балашов, В.Н. Абрамов, Н.Р. Ларина, H.A. Липатова // Морфология. -2009. - Т. 136. - №4. - С. 161Т

и. .....

3. Крыжановская Н.Р. Морфология слизистой оболочки желудка при действии цитосгатиков и коррекции этоксидолом / Н.Р. Крыжановская, В.П. Балашов, В.Н. Абрамов // Научно-практическая конференция с международным участием, посвященная 85-летию со дня рождения доктора медицинских наук, профессора Степанова П.Ф. - Смоленск. - 2009. - С. 58-59.

4. Ларина Н.Р. Изучение влияния этоксидола в качестве протектора при цитостатической интоксикации адрибластином и вепезидом на морфофункциональное состояние желудка / Н.Р. Ларина, В.Н. Абрамов, В.П. Балашов // Актуальные проблемы медицинской науки и образования: труды межрегиональной научной конференции. -Пенза: Информ. - изд. центр. ПензГУ, 2009. - С 142-143.

а

Бумага офсетная. Формах 60x84 1/16. Гарнитура Тайме. Печать способом ргоографии. Усл. печ. л. 1,07. Уч.- год. п. 0,86. Тираж 100 экз. Заказ № 68 от 13.09.2010г.

Отпечатано с оригинала-макета заказчика в ООО «Референт». 430000, г. Саранск, пр. Ленина, 21. Тел. (8342) 48-25-33.