МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОСОСУДИСТОГО ОКРУЖЕНИЯ ПРИ ВТОРИЧНОМ АНГИОГЕНЕЗЕ

Гурин, Ярослав Валерьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОСОСУДИСТОГО ОКРУЖЕНИЯ ПРИ ВТОРИЧНОМ АНГИОГЕНЕЗЕ
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОСОСУДИСТОГО ОКРУЖЕНИЯ ПРИ ВТОРИЧНОМ АНГИОГЕНЕЗЕ"

На правах рукописи

ГУРИН ЯРОСЛАВ ВАЛЕРЬЕВИЧ

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОСОСУДИСТОГО ОКРУЖЕНИЯ ПРИ ВТОРИЧНОМ АНГИОГЕНЕЗЕ

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

00348 1 1И <

Москва - 2009

003481187

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет имени Н.И. Пирогова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации»

Научный руководитель: Доктор медицинских наук,

профессор Павлович Евгений Ростиславович

ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет имени Н.И. Пирогова

Официальные оппоненты: Заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор Козлов Валентин Иванович

ГОУ ВПО Российский университет дружбы народов

Доктор медицинских наук,

профессор Карелина Наталья Рафаиловна

ГОУ ВПО Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медиг^инская академия

Ведущая организация:

ГОУ ВПО Московский государственный медико-стоматологический университет

Защита состоится 26 ноября 2009 г. В 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.08 медицинского факультета ГОУ ВПО Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, ул. Миклухо-Маклая, д.6.

Автореферат разослан '23' октября 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент

О.Б. Саврова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Сердечно-сосудистая система играет важнейшую роль в обеспечении нормального течения всех процессов жизнедеятельности организма. Это диктует необходимость обстоятельного изучения ангиогенеза и механизма переноса веществ через стенки сосудов. Данный процесс осуществляется обязательно при участии эндотелия, без учета состояния которого нельзя говорить с достоверностью о проницаемости сосудистых стенок. Кровеносные сосуды — не просто эластические трубки, или разнокалиберные шланги, индифферентные к жизнедеятельности органов и тканей. Они сложно устроены, активно участвуют в кровообращении, отвечают за циркуляторный гомеостаз (Жданов Д.А., 1964; Куприянов В.В. с соавт., 1975,1983; Козлов В.И., 1976, 1981; Караганов Я.Л. с соавт., 1982; Сапин М.Р.,1974, 1982; Чернух A.M. с соавт., 1975 и др.)

Основные фундаментальные данные об ультраструктурных изменениях, сопровождающих новообразование сосудов при регенерации и перестройку межклеточного вещества соединительной ткани были получены относительно давно (Серов, Шехтер 1985; Виноградов, 1981; Ross 1975, Турина с соавт., 1985).

С того момента сменилась научная парадигма, в частности - основная модель регенерации (Kirsner and Eaglstein, 1993; Linares, 1996; Sicard et al., 1998; Yannas, 2001; Schultz et al., 2003), появились работы о роли ангиогенеза в заживлении ран (М.Р. Сапин, 2005), получила распространение теория тканевой ниши (Gabbiani, 2004), миофибробластов (Chaponnier, 2006), расширились представления о роли стволовых клеток и клеток-предшественников, а так же обновилась теория дифферона для фибробластического ряда.

Работами школы академика В.В. Куприянова (1975) и его учеников: В.И. Козлова (1981, 1994) и Я.Л. Караганова (1981) установлено, что обменные процессы в органах зависят от деятельности трех компонентов системы микроциркуляции: транспортных потенций кровеносных микрососудов, наличия и состояния тканевых каналов в интерстиции и резорбирующих свойств лимфатических микрососудов (Карелина Н.Р. с соавт., 1984).

В связи с тем, что большая часть заболеваний человека сопровождается нарушением гомеостаза, связанного с нарушением транспортных потенций микрососудов из-за повреждения их стенок, изучение структуры вновь образованных сосудов на клеточном и субклеточном уровне является вполне обоснованным. А определение особенностей взаимодействия на ультраструктурном уровне растущих микрососудов с клетками окружающих тканей в аспекте формирования системы микроциркуляции с восстановлением исходного уровня обмена веществ является новым.

Изучение развития микрососудов при различных видах воздействий, в том числе - в эксперименте, на ультраструктурном уровне с применением электронномикроскопического исследования, является актуальным.

В настоящее время необходимо выяснить не только подробную ультраструктурную организацию мельчайших новообразованных сосудов и изменение окружающих клеток соединительной ткани, но и их влияние на этапы роста сосудов.

Работа посвящена решению актуальной задачи фундаментальной медицины - выяснению особенностей ультраструктурной организации растущих микрососудов в аспекте их взаимодействия с окружающими клетками и нормализацией тканевого гомеостаза.

В рамках выполнения работы методами световой и электронной микроскопии с применением морфометрии было произведено исследование структуры клеток соединительной ткани в норме и в эксперименте. В частности изучено пространственное расположение, темпы и характер роста новых сосудов.

Цель исследования

Изучение морфофункциональных характеристик различных клеток соединительной ткани при вторичном ангиогенезе и выяснение их роли в становлении барьерно-транспортных свойств вновь сформированных микрососудов.

Задачи исследования

1. Методами световой и электронной микроскопии изучить структуру клеток соединительной ткани вокруг материнских микрососудов области лимба глаза кролика.

2. Определить с применением электронномикроскопических методов структурно-функциональные характеристики клеток соединительной ткани на разных уровнях растущих новообразованных микрососудов при вторичном ангиогенезе.

3. Провести сравнительный анализ морфофункциональных характеристик клеток соединительной ткани и их роли в обеспечении роста микрососудов и восстановлении их транспортных свойств при вторичном ангиогенезе.

Научная новизна

Впервые выделены пять зон роста микрососудов при вторичном ангиогенезе в эксперименте, в зависимости не только от строения стенки сосуда, но и от клеточного окружения.

Новым является изучение характера и темпов роста сосудов на разных стадиях их роста и ремоделирования в зависимости от клеточного окружения.

Впервые описан состав клеточного микроокружения вокруг растущих микрососудов по зонам роста, установлен его полиморфизм в зависимости от зоны растущего микрососуда.

Изучена ультраструктура клеток и межклеточного вещества ткани вокруг растущих микрососудов.

Работа показывает возможные пути влияния на управление восстановлением дефектов соединительной ткани через воздействие на микроокружение растущих сосудов.

Определены: 1) зависимость барьерно-транспортных свойств эндотелиальной выстилки различных зон растущего микрососуда при вторичном ангиогенезе в эксперименте и 2) степень дифференцированности и зрелости эндотелиоцитов в зависимости от состава клеточного микроокружения вокруг растущих микрососудов.

Научно-практическая значимость

Проведенные исследования позволяют связать современные теории развития и строения вновь образованных микрососудов и соединительной ткани с их ультраструктурными изменениями в ходе основных этапов регенерации.

Сравнительный морфологический анализ структурно-функциональных характеристик клеток соединительной ткани, сопровождающих новообразованные сосуды на разных стадиях развития при вторичном ангиогенезе позволяет уточнить фундаментальные аспекты регенерации микрососудов и влияния на темпы их роста клеточного микроокружения.

Полученные в результате исследования данные позволят разработать способы влияния на восстановление нарушенного тканевого гомеостаза и воздействовать на его регуляцию при воспалении, гипоксии, некрозе и регенерации. Эти данные могут служить основой для терапии повреждений, сопряженных с восстановлением дефекта и явятся отправной точкой при разработке методов терапии для ускорения процессов новообразования микрососудов в соединительной ткани различной локализации.

Работа решает задачу качественной оценки управляемого восстановления дефектов соединительной ткани путем влияния на микроокружение растущих сосудов.

Результаты исследования являются оригинальным вкладом в развитие морфологии сосудов микроциркуляторного русла и внедрены в учебный процесс кафедры морфологии РГМУ, кафедры гистологии лечебного и кафедры гистологии педиатрического факультетов РГМУ, кафедры гистологии Смоленской государственной медицинской академии Росздрава.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В растущем микрососуде на 9 сутки роста выделено 5 различных зон:

- зона относительно дифференцированного эндотелия;

- зона переходного эндотелия от непрерывного к фенестрированному типу;

- зона фенестрированного эндотелия (максимального развития транспортных коммуникаций);

- зона недифференцированного эндотелия;

- зона эндотелиобласта (верхушки ростка).

2. Клеточный состав вокруг растущих микрососудов отличается полиморфизмом, в зависимости от зоны растущего микрососуда.

3. Барьерно-транспортные свойства эндотелиальной выстилки различных зон растущего микрососуда, а также степень дифференцированности и зрелости эндотелиоцитов зависят от микрососудистого окружения.

4. При асептическом воспалении в окружающие микрососуды ткани мигрируют клеточные элементы крови, которые изменяют структуру плотной соединительной ткани роговицы и ее матрикс, тем самым создавая условия для роста новых сосудов.

Апробация результатов

Результаты и основные положения диссертации доложены и обсуждены

на:

- Всероссийской научной конференции «Гистологическая наука России в начале 21 века: итоги, задачи, перспективы» - 22-24 октября 2003г., г. Москва;

- V международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» - 20-21 ноября 2008 г., Москва;

- Международном форуме «Интегративная медицина-2009», Москва, 5-7 июня 2009 г.;

- VI съезде анатомов, гистологов и эмбриологов России - Саратов, 23-25 сентября 2009 г.;

- совместном заседании кафедры морфологии медико-биологического факультета, кафедры гистологии лечебного факультета, кафедры гистологии педиатрического факультета, кафедры ЛОР болезней педиатрического факультета ГОУ ВПО Российского государственного медицинского университета им. Н.И. Пирогова и подразделений Российского кардиологического научно-производственного комплекса -Москва, 16 октября 2009 г.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 2 в центральной печати.

Объем и структура диссертации

Диссертация построена по традиционному плану и состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной материалам и методам исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов и списка литературы. Материалы диссертации изложены на 132 страницах машинописного текста. Работа содержит 1 таблицу, 2 диаграммы, иллюстрирована 31 рисунком, в том числе гистологическими и электронными микрофотографиями. Список литературы содержит 240 источников литературы (67 отечественных и 173 иностранных авторов).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования

Объектом исследования служили клетки соединительной ткани, окружающие материнские микрососуды области лимба глаза кроликов и клетки, расположенные вблизи новообразованных кровеносных микрососудов, врастающих в собственное вещество роговицы глаза после ее ожогового повреждения, на девятые сутки роста на всем протяжении ростка.

Исследование выполнено на 19 кроликах - самцах породы Шиншилла весом 1,5-2 кг, согласно этическим нормам (разрешение локального этического комитета РГМУ № 90). Были выделены две группы животных:

1. контрольная группа - 5 животных, у которых изучали клетки соединительной ткани, расположенные вблизи микрососудов лимба и их взаимосвязь и взаимоотношения со стенками кровеносных микрососудов. Эта группа включала три подгруппы: 1 животное - интактное - полный контроль; 2 кролика взяты для исследования после введения внутривенно маркера микрососудов - пероксидазы из хрена через 1 минуту и у 2 кроликов материал для исследования взят через 30 минут после введения этого же маркера;

2. экспериментальная группа-включала 14 животных, у которых проводили изучение клеточного окружения вокруг новообразованных микрососудов, врастающих в собственное вещество роговицы глаз кроликов на девятые сутки роста после нанесения ожога азотнокислым серебром на центр роговицы одного из глаз кроликов на всем протяжении ростка, второй глаз был контрольным. Эта группа состояла также из трех подгрупп, контрольная включала 2 животных и две подгруппы с внутривенным введением маркера - каждая по 6 животных. В одной подгруппе изучаемых животных введение растительной пероксидазы осуществляли за 1 минуту до забора материала, а во второй подгруппе животных - за 30 минут до энуклеации глаз. У каждого животного изучали обе роговицы, то есть был исследован материал 38 роговиц. В то же время каждую роговицу рассекали на 16 сегментов, в связи с чем общее число изученных кусочков тканей с сосудами составило 608 блоков. Распределение животных по группам исследования и видам воздействий представлено в таблице 1. Эксперимент: Все манипуляции с животными проводились под общей

анестезией Рометаром (Спофа) (2 мг препарата на 1 кг веса животного). На центр роговицы глаза кролика наносили ожог кристаллом азотнокислого серебра диаметром около 1 мм в течение 5 минут. Затем стерильным физиологическим раствором омывали глаз.

На девятые сутки после ожога под рометаровой анестезией в ушную вену кролика вводили растительную пероксидазу (25 мг на 100 г массы тела животного), для визуализации сосудов лимба или вросших в роговицу новообразованных кровеносных микрососудов.

Взятие материала было стандартизировано: под анестезией рометаром производили префиксацию роговицы in situ путем накалывания в течение трех минут охлажденного (t=4°C) 2,5% глютарового альдегида, приготовленного на 0,1 М фосфатном буфере с рН =7,4. Затем вводили шприцем в верхнее и нижнее веко, а также в заглазничное пространство тот же раствор после чего производили энуклеацию глаз. Животных забивали путем избыточного введения препарата Zoletil-100 (Virbac).

Таблица 1.

Распределение животных по видам воздействия

Группы животных Вид воздействия --- Контрольная Экспериментальная (ожог А§>Юз-9 сутки роста)

Контроль-интактные животные (без введения пероксидазы) 1 животное (2 роговицы) 2 животных (4 роговицы)

Введение растительной пероксидазы за 1 минуту до взятия материала 2 животных (4 роговицы) 6 животных (6 роговиц - с ожогом и 6 роговиц - контроль)

Введение растительной пероксидазы за 30 минут до взятия материала 2 животных (4 роговицы) 6 животных (6 роговиц - с ожогом и 6 роговиц - контроль)

Общее число животных 5 животных 14 животных

ИТОГО: 19 животных (608 блоков)

Методы исследования:

Световая микроскопия. После извлечения глаза вырезали роговицу с захватом 2 мм склеры и в таком виде фиксировали в растворе 2,5 % глютарового альдегида еще 1,5 часа. Затем рассекали роговицу на 16 сегментов, отступя от края лимба в сторону центра роговицы оставляли 4-5 мм ткани и кусочки роговицы с области лимба размером в длину до 6-7 мм и шириной 3-4 мм и в таком виде проводили дальнейшую обработку образцов.

Далее шла отмывка от фиксатора в 0,1 М растворе фосфатного буфера с рН=7,4 в течение часа, 4 раза меняли раствор через 15 минут. Затем образцы монтировали на столике замораживающего микротома и производили удаление поверхностного эпителия и заднего эпителия роговицы.

После получения кусочков роговицы толщиной 400-500 мкм осуществляли проведение реакции на выявление в сосудах лимба и новообразованных сосудах растительной пероксидазы, которая включала несколько этапов:

- преинкубацию при комнатной температуре 30 минут в растворе трис -НС1-диаминобензидин-тетрагидрохлорида с рН=7,4;

- инкубацию в термостате при 1=37° С в течение часа в том же растворе с добавлением нескольких капель 1% перекиси водорода;

- отмывку от инкубационной среды при комнатной температуре в дистиллированной воде в трех порциях по 5 минут в каждой.

После проведения реакции и визуализации сосудов лимба или вросших в роговицу новообразованных кровеносных микрососудов, проводили под лупой фоторегистрацию образцов и выделение кусочков ткани, содержащих 1-3 отдельных ростка или сегментов лимба с одной капиллярной петлей, при этом размер кусочков ткани уменьшался от 1-2 мм в ширину до 3-4 мм в длину.

Дальнейшая обработка материала включала: дофиксацию в течение часа в растворе четырехокиси осмия по методу G. Millonig (1962), отмывку от осмия в течение часа в четырех порциях 0,1 М раствора какодилатного буфера с рН=7,4; дополнительную пропитку в течение часа при комнатной температуре в 1% растворе таниновой кислоты на какодилатном буфере рН=7,4 (таниновая кислота дополнительно окрашивала материал базальных мембран, практически не видимый при обычной методике подготовки материала вокруг новообразованных сосудов, а также клеточные мембраны, позволяя изучать maculae et zonulae occludentes контактирующих клеток); отмывку от излишков таниновой кислоты в течение 5 минут в 1% растворе Na2S04, приготовленном на какодилатном буфере с рН=7,4; промывку в какодилатном буфере с рН=7,0 три раза по 5 минут; дегидратацию в спиртах восходящей концентрации и ацетоне; пропитку и заключение образцов в плоских блоках с полной смесью смол, содержащей Araldit «М» и Araldite «Hardener» в равных частях, с добавлением Araldite «Acselerator» 1/5 части от смеси смол и «Dibutilftalat» в пределах 1/10 части от смеси смол; с последующей полимеризацией в этой смеси в течение двух суток в термостате при t=56° С. Биопсийные образцы ориентированно размещали в капсулах для полимеризации. На микротоме Historange (ЛКБ, Швеция) с блоков получали полутонкие срезы толщиной 1-2 мкм и окрашивали их толуидиновым синим. Световая микроскопия осуществлена на лабораторном микроскопе (МБИ - 15У) укомплектованном окулярной морфометрической сеткой.

Метод топологического анализа. Нами был использован и усовершенствован метод топологического анализа, разработанный Э.А. Лебедевым с соавторами (1982) для изучения сосудов модулей микроциркуляторного русла. Мы применили указанный метод в изучении клеточного микроокружения вокруг дефинитивных (материнских) сосудов лимба глаза и вблизи новообразованных кровеносных микрососудов в роговице на всем протяжении ростков с четкой детализацией распределения клеток в зависимости от зоны изучаемого новообразованного сосуда.

Для этого на тотальных препаратах изучали визуализированные микрососуды лимба глаза и новообразованные микрососуды роговицы, выделяя участки ткани с 1 -2 растущими сосудами.

Далее при подготовке образцов для электронномикроскопического изучения, осуществляли под контролем полутонких срезов затачивание на ультрамикротоме LKB-1II пирамиды с растущим микрососудом, который изучали на всем протяжении с клеточным микроокружением: от места его

отхождения от материнского (родительского) микрососуда лимба до верхушки с шагом в 15-20 мкм.

На каждом уровне делали полутонкие срезы и затачивали пирамидку для получения серийных ультратонких срезов. Вначале снимали обзор растущего сосуда с окружающими клетками на малом увеличении, затем сам растущий сосуд и крупным планом клетки, его окружающие, а после этого детали строения эндотелиоцитов, выстилающих новообразованный микрососуд

Таким образом, наше усовершенствование топического (топологического) метода анализа заключается в последовательности рассмотрения одного растущего сосуда не только на всем его протяжении, но и в использовании изучения зон ростка последовательно на тотальном препарате, полутонких срезах, электронном микроскопировании на малых увеличениях с получением по сути полутонких срезов высокого качества и детальным исследованием особенностей ультраструктурной организации как самого новообразованного сосуда и всех компонентов его стенки, так и клеточного микроокружения и деталей их ультраструктурной организации.

Электронная микроскопия. С помощью топического метода на светооптическом уровне под лупой выделяется одна капиллярная петля лимба глаза кролика или один-два растущих в роговице кровеносных микрососуда, которые ориентируются и заливаются в смесь смол.

Затем подготовленный образец под контролем полутонких срезов, толщиной 1 мкм, полученных на пирамитоме LKB-III, затачивается в виде пирамиды и на ультрамикротоме изготавливаются ультратонкие срезы, которые монтируются на медные и палладиевые опорные сеточки.

Дальнейшая подготовка ультратонких срезов к исследованию - их двойное контрастирование при комнатной температуре в 5 % растворе уранил-ацетата не менее 20 минут и в растворе цитрата свинца не менее 5 минут по методу R. Reynolds (1963).

Просмотр подготовленных ультратонких срезов и их фоторегистрацию осуществляли на электронном микроскопе Hithachi - HU-12A при ускоряющем напряжении 75 кВ и электронном микроскопе Carl Zeiss LEO-912 AB.

Морфометрические методы изучения материала. Количественный анализ использовали в соответствии с алгоритмом, разработанным для количественной характеристики обменных микрососудов в лаборатории электронной микроскопии ЦНИЛ 2-го МОЛГМИ имени Н.И. Пирогова (Гурина О.Ю., Караганов Я.Л., 1984). Оценка достоверности полученных морфометрических показателей осуществлялась по t-критерию Стьюдента.

Среди многообразия критериев оценки ультраструктуры обменных микрососудов, нами были использованы следующие: определение площади просвета микрососуда (S1 = 16 х N1 К2), определение площади эндотелиальной выстилки (Se = 16 х Ne К2), определение площади поперечного сечения микрососуда (Sv = SI + Se), где N1 - число точек измерительной тест - решетки, приходящихся на просвет микрососуда; Ne - число точек измерительной тест -решетки, приходящихся на эндотелиальную выстилку микрососуда; К -

увеличение на экране электронного микроскопа или на фотопластинке в тысячах крат.

Использованная нами тест-решетка состояла из совокупности параллельных линий с нанесенными на них точками и была предложена Я.Л.Карагановым с соавторами (1976). Шаг решетки и расстояние между линиями составляли 10 мм. Для повышения точности измерение на одном контуре проводили трижды при повороте каждый раз тест - решетки на 120°.

Результаты исследования и их обсуждение.

Морфо-функциональная характеристика кровеносных микрососудов лимба и их клеточного окружения. Кровеносное микрососудистое русло лимба глаз кроликов образовано артериолами, прекапиллярами, капиллярами, посткапиллярами и венулами с типичным для этих микрососудов строением (Волосок Н.И., 1980; Турина О.Ю., 1985).

Электронномикроскопическое изучение микрососудистого русла лимба глаза показало, что капилляры в лимбе глаз кроликов представлены замкнутыми петлевидными формациями.

Это сосуды с эндотелием непрерывного типа, в которых транспорт веществ осуществляют в основном микровезикулы, при этом трансэндотелиальных каналов в виде соединенных микровезикул практически нет, межклеточные контакты между соседними эндотелиальными клетками плотные с наличием пятен и зон облитерации, в виде стыков, наложений, интердигитаций и в транспорте белков также не участвуют. Эти данные согласуются с исследованиями БИатеепа Ваке е1 а1., (2009), которые установили, что микрососуды и капилляры с эндотелием непрерывного типа в норме не проницаемы для белка, выход белка в интерстиций зависит от изменения функционального состояния эндотелия и изменения межэндотелиальных контактных комплексов.

Изучение интерстиция, окружающего кровеносные микрососуды лимба глаза кролика показало, что он образован рыхлой соединительной тканью, содержащей пересекающиеся пучки коллагеновых волокон, в меньшей степени присутствуют единичные эластические и ретикулярные волокна. Клеточный состав представлен фиброцитами, плазматическими, адвентициальными клетками. Вблизи посткапилляров и венул иногда встречаются тучные клетки. Необходимо отметить наличие плотных соединений между эндотелиоцитами и перицитами, отростки последних прободают базальную мембрану микрососудов, формируя контакты с эндотелиальными клетками. Именно наличие этих контактов ограничивает ангиогенные потенции микрососудов лимба глаза кролика. Подобные результаты получили Е. Пуапатеп е1 а1. (2009), которые установили, что подавление активности перицитов приводит к продолжению роста сосудов.

Моуфофункционапъная характеристика новообразованных сосудов роговииы глаз кроликов на девятые сутки роста и их микроокружения. Наше изучение ростков на всем их протяжении с изготовлением послойных серийных

полутонких и ультратонких срезов позволило выделить на протяжении ростка пять различных зон, характеризующихся отличием в строении эндотелия, формирующего стенку микрососуда, различным состоянием базальной мембраны, перицитов; барьерно-транспортных свойств сосудистой стенки и клеточного окружения вокруг новообразованных сосудов в различных зонах ростка. Качественные наблюдения были подтверждены количественными исследованиями.

Первая зона - зона относительно дифференцированного эндотелия занимает по протяженности от 120 до 150 мкм, является местом отхождения новообразованного сосуда от материнского сосуда области лимба.

Микрососуд этой области содержит эндотелий непрерывного типа и имеет практически такое же строение, что и материнский сосуд, то есть его стенка сформирована двумя-тремя эндотелиальными клетками.

Межклеточные контактные комплексы этой зоны ростка представлены плотными контактами, содержащими пятна облитерации, практическим отсутствием, по-сравнению с материнскими сосудами ,зон облитерации. В этой связи микрососуды содержат те же транспортные коммуникации, что и посткапилляр или венула материнского сосуда.

В эндотелиоцитах этой зоны транспорт белка осуществляют связанные и свободные микровезикулы, заполненные хлопьями пероксидазы, то есть барьерно-транспортные свойства этой зоны ростка не отличаются от транспортных свойств материнских сосудов лимба.

Микрососудистое окружение в этой зоне ростка также не отличается большим разнообразием и аналогично микрососудистому окружению в лимбе. Встречаются фибробласты, адвентициальные клетки и перициты, которые формируют контактные комплексы с эндотелием новообразованных сосудов.

Таким образом, наличие в этой зоне ростка перицито-эндотелиальных контактов приводит к полному ограничению ангиогенной активности эндотелия, несмотря на сохранение подвижности клеточной мебраны эндотелиоцитов, которая формирует выросты и с люменальной и с базальной поверхности. Полученные нами данные согласуются с исследованиями Crocker D. et al. (1970) о контактном торможении движения эндотелиальных клеток вследствие задержки периода интерфазы контактирующими перицитами.

Вторая зона - переходная зона от эндотелия непрерывного типа, формирующего капилляры в зоне относительно дифференцированного эндотелия, к фенестрированному эндотелию сосудов следующей зоны ростка.

Эта зона находится на расстоянии 150-220 мкм от материнского сосуда и занимает по протяженности от 70 до 100 мкм. Сосуд в этой зоне имеет две-три начинающие истончаться эндотелиальные клетки с уплощенной ядросодержащей зоной клеток, в которой ядро меньше выступает в просвет сосуда, также наблюдается заметное уменьшение органелл общего назначения в цитоплазме клеток, тогда как микрофиламенты формируют мощные пучки вокруг ядра. Базальная поверхность клеточной мембраны эндотелиальных клеток образует выросты, выступающие в окружающую ткань в местах

отсутствия базальной мембраны. Базальный слой микрососудов изменяется: базальная мембрана видна, как состоящая из одного электронноплотного слоя, второй электронноплотный слой прерывистый или отсутствует, перициты не всегда удается обнаружить и они практически не формируют контакты с эндотелиальной выстилкой.

В цитоплазме клеток появляются специфические эндотелиальные тельца Вейбеля-Паладе, которые окружены клеточной мембраной и в матриксе содержат микротрубочки. Чаще всего эти тельца расположены возле ядер эндотелиоцитов, но встречаются и рядом с транспортными коммуникациями эндотелиальных клеток - трансэндотелиальными каналами, и межклеточными контактными комплексами. Очевидно, что появление и увеличение содержания в цитоплазме эндотелиоцитов специфических эндотелиальных телец объясняется тем, что они выделяют в цитоплазму клеток гистамин, который взаимодействуя с цитоскелетом клеток, вызывает их сокращение и тем самым приводит к ослаблению связей между соседними эндотелиоцитами. В последующем это способствует повышению подвижности эндотелиоцитов и облегчает их миграцию в направлении стимулятора роста. На подобное действие гистамина указывали Aizawa S. et al. (1973), Kawamura J. et al., (1974), Maupin P. A. Pollard T. (1983), и в недавних исследованиях подтвердили Марченко А.В. с соавт. (2008), установив, что гистамин вызывает гиперпроницаемость микрососудов, активируя эндотелиальную киназу.

Транспортные каналы в эндотелиоцитах этой зоны по - сравнению с предыдущей зоной более разнообразны: встречаются трансэндотелиальные каналы, состоящие из слившихся двух, реже трех микровезикул; межэндотелиальные контактные комплексы практически все щелевидные, только иногда они содержат пятна облитерации. Таким образом, барьерно-транспортные функции растущего микрососуда в этой зоне более выражены, как за счет транспорта белка трансвезикулярными каналами, так и за счет выхода белка в интерстиций через щелевидные контактные комплексы не содержащие пятен слияния контактирующих мембран.

Заслуживает внимания тот факт, что именно в этой зоне мы наблюдали активный выход в интерстициальную ткань клеток крови: макрофагов, лимфоцитов, нейтрофилов, базофилов, эозинофилов.

Несмотря на это, микрососудистое окружение в этой зоне довольно скудно: наблюдаются в основном макрофаги, разрушающие интерстиций -коллагеновые волокна межклеточного вещества роговицы. В собственном веществе роговицы на некотором расстоянии от ростка мы наблюдали отростки фибробластов. Иногда стенка растущего микрососуда в этой зоне была окружена как муфтой эндотелиобластом, предохраняющим растущий новообразованный сосуд от повреждающих факторов. Редкое обнаружение тучных клеток, плазмоцитов, вокруг ростка этой зоны объясняется тем, что эти клетки мигрируют по ходу растущего сосуда к его верхушке.

Третья зона - зона фенестрированного эндотелия с истончением эндотелиальной выстилки и максимальным развитием всех транспортных коммуникаций.

Эта зона находится на расстоянии 220-320 мкм от материнского сосуда, достаточно протяженная и занимает от 350 до 600 мкм.

Сосудистая стенка в этой области ограничена, как правило, двумя сильно истонченными эндотелиальными клетками с многочисленными фенестрами, вначале единичными, затем переходящими в цепочки.

Трансвезикулярные каналы образованы только одной микровезикулой, из-за истончения эндотелиоцитов сосудистой стенки. В цитоплазме клеток значительно снижается содержание органелл общего назначения, тем не менее, довольно часто встречаются расширенные цистерны гранулярной эндоплазматической сети, что свидетельствует о повышенной секреторной активности эндотелиальных клеток этой зоны.

Межклеточные контакты между соседними эндотелиоцитами все щелевидные или открытые.

В отношении базального слоя картина зависит от метода окраски: при использовании таниновой кислоты при приготовлении препаратов не только клеточные мембраны лучше определяются на электроннограммах, но также видно, что в базальном слое есть два прерывистых элетронноплотных слоя. Характерно, что при любом способе приготовления препаратов наблюдается резкое истончение и прерывистость базальной мембраны в области расположения фенестр. Без использования таниновой кислоты видно, что базальная мембрана полностью прерывистая, двух листков нет, наблюдается нежный прерывистый хлопьевидный материал, особенно вблизи фенестр, который по структуре напоминает хлопья пероксидазы. В этой зоне вокруг эндотелиальных клеток практически отсутствуют перициты.

Барьерно-транспортные свойства в этой зоне выражены максимально: в транспорте белка принимают участие все транспортные коммуникации растущего микрососуда: открытые межклеточные контакты, микровезикулярные каналы, фенестры.

Микрососудистое окружение в зоне фенестрированного эндотелия отличается полиморфизмом. В непосредственной близости от эндотелиальных клеток растущего микрососуда, особенно в области формирования фенестр, чаще всего встречается эндотелиобласт, который в виде полумуфты прикрывает наиболее истонченную стенку растущего микрососуда. Он выполняет несколько функций по отношению к растущему микрососуду: защищает стенку растущего микрососуда, синтезирует белки, идущие на построение базального слоя. Макрофаг, находящийся поблизости, осуществляет фагоцитоз и лизис интерстиция с распадающимися коллагеновыми фибриллами. Поражает частота обнаружения в этой зоне тучных клеток, содержащих в своей цитоплазме гранулы разной степени дегрануляции. По мнению Fraser R. (1980), тучные клетки не только являются «одноклеточными железами», но и обладают мультипотентной секреторной

деятельностью. Полиморфизм гранул, наблюдаемых нами в тучных клетках, расположенных вдоль растущего капилляра подтверждает, что из них активно выделяются вещества, оказывающие влияние на проницаемость растущих сосудов, на подвижность их клеточной мембраны и, в конечном счете, на миграционные потенции растущего эндотелия. Вне всякого сомнения гепарин и гистамин, выделяемые тучными клетками, активируют как ферментативную систему эндотелиоцитов (Ширинский В. П., 2006) , так и воздействует на цитоскелет эндотелиальных клеток (Вс^а1сЬсуа М.У., 2007). Все это приводит к сокращению эндотелиоцитов, появлению открытых контактных комплексов. По мнению Сенатовой И.Д. (1974), согласующемуся с результатами БсЬауег Я. (1968), гистамин обладает сильным вазотропным эффектом, что, по-видимому, именно в этой зоне способствует появлению дополнительных транспортных коммуникаций в виде цепочек фенестр.

Характерно, что в этой зоне растущего микрососуда мы не наблюдали активных фибробластов, а также развитого синтетического аппарата в эндотелиоблатстах. Эти факторы объяснимы с точки зрения тормозного эффекта гистамина на фибриллогенез (воШеЬ АЛ. е1 а!., 1983) и действия тучных клеток как регуляторов тканевого гомеостаза малого радиуса действия.

Заслуживает обсуждения и то, что гистамин активирует тромбоциты крови, а последние продуцируют гепарин. Эффект гепарина тромбоцитов усиливает деятельностью гепарина, выделяемого тучными клетками, и их совместное действие приводит к значительному снижению вязкости крови и, соответственно, повышенной проницаемости растущего сосуда именно в этой зоне, что мы и наблюдали в нашем исследовании.

Наличие вокруг ростка в этой зоне значительной массы разрыхленного основного вещества, и по сути замены плотной соединительной ткани на рыхлую, за счет распада коллагеновых фибрилл и их лизиса макрофагами согласуется с данными исследований БоИсе Ь. (1970), который указывал, что тучные клетки также выделяют химазу, обладающую деполимеризирующим эффектом и стимулирующую фагоцитоз.

Таким образом, можно считать вполне доказанным, что трансформация эндотелия непрерывного типа лимба глаза в фенестрированный, повышение проницаемости микрососудов и замена плотной соединительной ткани на рыхлую связаны с действием химических веществ, выделяемых клетками крови, мигрировавшими в интерстиций, а именно: с тучными клетками, макрофагами, микрофагами, плазматическими клетками и клетками, заполнившими растущие сосуды - тромбоцитами и эритроцитами.

Несомненно, ведущая роль в активации микрососудистого окружения принадлежит изначально гистамину, выделяемому специфическими эндотелиальными тельцами Вейбеля-Паладе, численность которых, начиная с зоны переходного эндотелия возрастает, а в последующем усиливается химическими веществами, выделяемыми тучными клетками.

Четвертая зона — зона недифференцированного эндотелия. В этой зоне расположены утолщенные эндотелиальные клетки, у которых большую часть

занимает ядро, а периферическая часть и зона с органеллами почти отсутствуют. Эта зона находится на расстоянии 600-800 мкм от материнского сосуда и по протяженности составляет от 100 до 150 мкм. Стенка сосуда в этой зоне отграничена одной - двумя утолщенными, по сравнению с предыдущей зоной, эндотелиальными клетками. В цитоплазме эндотелиоцитов, на фоне снижения содержания всех органелл и особенно микровезикул, наблюдается значительное увеличение количества митохондрий. Фенестр нет, трансэндотелиальные каналы исчезают. По сути, эндотелий этой зоны напоминает эндотелий переходной зоны, различия между ними заключаются в резком снижении числа органелл специального назначения - микровезикул, а, следовательно, и значительном снижении транспортной активности эндотелия. Повышенное содержание митохондрий и расширенных цистерн эндоплазматической сети, по-видимому, характеризует активизацию синтетической активности эндотелия в этой зоне. Об этом свидетельствуют и мультивезикулярные тельца Вейбеля-Паладе, содержание которых в эндотелиоцитах продолжает оставаться высоким. Межклеточные контакты -плотные с наличием пятен и зон облитерации, в виде стыка, реже наложения.

Базальная мембрана находится в дезаггрегатном состоянии, ее нет при обычном исследовании и только применение дополнительного контрастирования таниновой кислотой позволяет выявить фрагментированную базальную мембрану. Перициты отсутствуют. Вокруг сосуда наблюдается распад соединительнотканных компонентов роговицы, коллагеновых фибрилл нет, только хлопьевидные массы собственного вещества.

В сравнении с предыдущей зоной, растущий капилляр в этой зоне практически полностью не проницаем для молекул белка, маркированных растительной пероксидазой.

Тем не менее, эндотелий в функциональном плане активен, неспокоен, так как в цитоплазме возрастает количество органелл синтетического аппарата клетки: расширенных цистерн гранулярной эндоплазматической сети и митохондрий.

В стенке растущих сосудов в этой зоне довольно постоянно мы наблюдали наползание клеток друг на друга с формированием дополнительного просвета или встречали огромные вакуоли, вероятно, это - вновь формирующиеся новые микрососуды.

Микрососудистое окружение в этой зоне представлено фибробластами, макрофагами, плазматическими клетками. Тучные клетки, по-сравнению с предыдущей зоной, встречаются реже и располагаются на достаточном расстоянии от растущего сосуда. На этом фоне вокруг растущих сосудов возрастает частота обнаружения бластных клеток: фибробластов, эндотелиобластов, плазмобластов.

Не исключено, что происходит переход из одной бластной формы в другую, либо возможно наличие полипотентной клетки, которая может перейти из одной формы в другую. На такую возможность указывал еще Ранвье (1865). Наблюдаемые нами на ультраструктурном уровне изменения микрососудистого

окружения по зонам ростка показывают, что возможны скорее трансформации фибробластов в перициты и их совместное участие вместе с эндотелиоцитами в формировании базальной мембраны. Такое заключение согласуется с результатами исследований Kones R.(1980) и Гуриной О.Ю. с соавт. (1985), которые наблюдали митотическое деление фибробластов и их трансформацию в перициты при химической провокации ангиогенеза.

Начиная с этой зоны - зоны малодифференцированного эндотелия в просвете растущего сосуда появляются эритроциты, которые заполняют весь просвет, чем ближе к верхушке ростка, тем чаще обнаружение эритроцитов в просвете сосуда. Очевидно, это связано с тем, что растущие сосуды имеют разный характер формирования. Наряду с процессами миграции и пролиферации эндотелиальных клеток, которые в конечном итоге дают остроконечные ростки, описанные еще Clark T.R. a.Clark E.L. (1939, 1940); возможен иной механизм развития ростков, описанный Illig I. (1961) и Cliff W.(1963) и сопровождающийся развитием мешотчатых структур. По нашему мнению, в начальных стадиях роста новых сосудов превалирует механизм пролиферации и миграции новых эндотелиоцитов. С момента установления перицитами контактов с эндотелиоцитами растущих микрососудов и включения контактного торможения движения, пролиферация замедляется, однако эндотелиоциты сохраняют подвижность своей мембраны и отдают цитоплазматические отростки, в которые заходят эритроциты. Такие данные были ранее получены в работах Гуриной О.Ю. с соавт. (1983) и Ausprunk D . (1977) с мечением тимидином эндотелиоцитов растущих сосудов. Они определили, что митотическая активность эндотелиоцитов на верхушке растущего сосуда минимальная, а возрастает по направлению к проксимальной части ростка.

Следовательно, изменения, наблюдаемые нами в изменении состава органелл эндотелиоцитов этой зоны, обуславливающие снижение основной функции эндотелиальных клеток - барьерно-транспортной, на фоне возрастания их синтетической свидетельствует об утрате эндотелием признаков дифференцированности и зрелости. Это напрямую согласуется с результатами исследований Palade G. (1961), который в качестве основного параметра дифференцированности и зрелости эндотелиоцитов указывал на содержание в них микропиноцитозных везикул.

Пятая зона - зона эндотелиобласта, находится в области верхушки ростка. Она расположена на расстоянии 850-950 мкм от материнского сосуда лимба, по протяженности самая коротка от 50 до 70 мкм.

Стенка сосуда в этой зоне значительно утолщена, просвет сосуда сформирован одной, реже двумя эндотелиальными клетками, в цитоплазме которых очень мало мелких микровезикул и слабо выражены все органеллы общего назначения. При этом в цитоплазме клеток возле ядер продолжают обнаруживаться специфические эндотелиальные тельца Вейбеля-Паладе, митохондрии и немногочисленные расширенные цистерны гранулярной эндоплазматической сети.

Межклеточные контакты не всегда наблюдаются. При наличии контактов - они плотные в виде стыка или небольшого по протяженности наложения с наличием пятен, пяте и зон облитерации контактирующих мембран. Довольно часто мы видели так называемый «бесшовный» эндотелий, то есть часто верхушка растущего капилляра образован всего одной клеткой, у которой даже нет никаких соединений. В просвете концевого отдела растущего сосуда, как правило, всегда находится эритроцит.

Очевидно из-за низкой пролиферативной активности эндотелиальных клеток в области верхушки ростка, происходит вытягивание отростка эндотелиоцита с накопленной цитоплазмой и в этот отросток протискивается эритроцит, который выступает в роли поршня, давящего на отросток и проталкивающего его в направлении стимуляторов роста (зоны ожогового поврежедния). Такое объяснение согласуется с гипотезой, предложенной Лесгафтом П.Ф. еще в 1922 году и подтверждено исследованиями Wolf J. Et al. (1972).

Базальная мембрана не видна, перицитов нет.

В непосредственной близости от недифференцированного эндотелия часто наблюдается скопление клеток, по структуре напоминающих эндотелиобласты или фибробласты. Часто растущий сосуд в этой зоне окружен муфтой из малодифференцированных клеток - эндотелиобластов, являющихся отростками клеток, формирующих просвет нового сосуда. При этом создается впечатление, что эндотелиобласты, прежде чем отпочковаться несколько раз окутывают растущий сосуд, как бы его защищая. Особенно четко это прослеживается при изучении серийных ультратонких срезов, где видно, что клетки, принимаемые за перицитоподобные или фибробласты оказываются связанными мостиками с эндотелиобластами, образующими стенку растущих сосудов. По-видимому, это можно объяснить «хрупкостью» растущих сосудов, о которой говорили Clark E.R. a. Clark E.L. (1939), Cliff W. (1963) и др. Наши данные свидетельствуют не о повышенном диапедезе клеток крови на протяжении всего ростка, что является признаком хрупкости растущего сосуда, по мнению указанных авторов, а о конкретной области растущего сосуда - переходной зоне, в которой наблюдается активный выход клеток крови в интерстиций. В области верхушки ростка выхода клеток крови в интерстиций мы не наблюдали и образование муфты из эндотелиобласта связано скорее с механизмом формирования самого ростка, а не со свойствами его стенки.

Мы не наблюдали транспорта веществ в этой зоне ростка, так как отсутствовали пути транспорта белка.

Возле верхушек растущих сосудов в непосредственной близости клеточное окружение достаточно скудно. Чаще всего наблюдается хлопьевидный материал лизированного собственного вещества роговицы. Иногда встречаются эритроциты, мигрировавшие из крови и частично окруженные цитолеммой эндотелиобласта.

Макрофаги, в цитоплазме которых находятся остаточные тельца с продуктами распада соединительнотканных компонентов роговицы мы

наблюдали крайне редко. В местах сохраненных коллагеновых волокон постоянно наблюдаются отростки фиброцитов.

В области верхушки ростка часто наблюдаются бластные клетки и разрыхленное основное вещество соединительной ткани.

Таким образом, полученные нами данные дают возможность констатировать, что площадь ростка на всем его протяжении изменяется незначительно, при этом основные изменения связаны с изменением площади эндотелиальной выстилки и сопряженной с ней площадью просвета сосуда. Это было подтверждено морфометрическими исследованиями (Рис. 1).

Рис. 1. Соотношение площади эндотелиоцитов и площади просвета сосуда к площади сосуда (8э/8с; Зп/Бс): М - материнский сосуд области лимба; 1 -5 -зоны новообразованного кровеносного микрососуда; Бэ - площадь эндотелиальной выстилки; Бп - площадь просвета сосуда; Бс - площадь сосуда.

■ Бэ^с

■ Бп/Бс

На рисунке четко прослеживается, что на большем протяжении ростка наблюдается увеличение просвета сосуда и его превалирование над эндотелиальной выстилкой, за исключением двух зон - верхушки ростка и прилежащей к нему зоны недифференцированного эндотелия. При этом максимальные колебания касаются зоны максимального истончения эндотелия и развития транспортных коммуникаций, где просвет сосуда в несколько раз превалирует над эндотелиальной выстилкой, тогда как совершенно иная зависимость наблюдается в зоне недифференцированного эндотелия на верхушке ростка и связана со значительным превалированием эндотелия над просветом сосуда. В 1 и 2 зонах новообразованного сосуда наблюдается незначительное превалирование площади просвета сосуда над площадью эндотелия, тогда как в четвертой зоне некоторое превалирование эндотелия над просветом сосуда связано с наличием многочисленных выростов эндотелиальных клеток, как с базальной, так и люменальной поверхности, и при этом повторяет подобную закономерность в материнском сосуде области лимба. У материнского сосуда эта закономерность объясняется наличием сосудов с эндотелием непрерывного типа.

В отношении сосудистого микроокружения можно заключить, что оно оказывает несомненное влияние на растущий сосуд. При этом наблюдаемый клеточный полиморфизм в зависимости от зоны растущего капилляра дает возможность сделать заключения и выводы о наличии корреляции между растущими сосудами и сосудистым микроокружением, определяющим не только темпы роста микрососудов, но и их барьерно-транспортные свойства и степень дифференцированности эндотелиальных клеток на протяжении растущего микрососуда.

ВЫВОДЫ

1. В растущем микрососуде на 9 сутки роста выделено 5 различных зон:

- зона относительно дифференцированного эндотелия;

- зона переходного эндотелия от непрерывного к фенестрированному типу;

- зона фенестрированного эндотелия (максимального развития транспортных коммуникаций);

- зона недифференцированного эндотелия;

- зона эндотелиобласта (верхушки ростка).

2. Клеточный состав вокруг растущих микрососудов отличается полиморфизмом, в зависимости от зоны растущего капилляра. Наиболее выражен клеточный полиморфизм в зоне фенестрированного эндотелия (максимального развития транспортных коммуникаций).

3. Барьерно-транспортные свойства эндотелиальной выстилки различных зон растущего микрососуда зависят от клеточного микроокружения и характеризуются отличием в строении транспортных каналов на протяжении ростка.

5. Изменения плотной соединительной ткани роговицы и ее трансформация в рыхлую соединительную ткань является обязательным условием роста и формирования новых сосудов. При этом одновременно идут два сопряженных процесса: лизис существующей ткани роговицы глаза и развитие на ее месте другой.

6. Степень дифференцированности и зрелости эндотелиоцитов, формирующих стенку растущего капилляра, зависит от микрососудистого окружения. Зрелость эндотелиальных клеток обусловлена формированием контактов с перицитами, а степень дифференцированности эндотелиоцитов определяется барьерно-траспортными свойствами растущего капилляра.

Практические рекомендации

1. Результаты исследования могут быть использованы в педагогическом процессе в курсе гистологии для студентов медицинских ВУЗов и при последипломном обучении морфологов и гистологов.

2. Полученные нами новые сведения о темпе и характере роста сосудов роговицы глаза должны учитываться при лечении ожоговых повреждений глаза.

3. Детальное ультраструктурное изучение роста микрососудов и клеточного окружения при вторичном ангиогенезе может быть экстраполировано на процессы регенерации микрососудов при различных нарушениях тканевого гомеостаза (воспалении, гипоксии, некрозе и регенерации).

Список научных работ

1. Турина О.Ю., Никишин P.A., Турин Я.В. Электронномикроскопическое изучение сосудов микроциркуляторного русла глаза крыс при электростимуляции // Материалы всероссийской научной конференции «Гистологическая наука России в начале 21 века: итоги, задачи, перспективы». - 22-24 октября 2003 г. - М. - Издательство РУДН. - С.98-99.

2. Гурин Я.В., Берулава O.A., Рукин Е.М., Турина О.Ю. Изучение микроциркуляторного русла кожи в рефлексогенных зонах при действии световых волн // Материалы III Конгресса с международным участием «Российский медицинский форум и V международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность». - 20-21 ноября 2008 г. - М. -С.41-42.

3. Турина О.Ю., Гурин Я.В., Павлович Е.Р., Федосеев В.А., Писцова Т.В. К вопросу о морфологии эндотелиальной выстилки сосудистой системы человека, как результата эволюции сосудистой системы // Сборник

научных трудов «Проблемы и перспективы современной науки». - Томск

2008 г..-Вып. 1.-С.31.

4. Турина О.Ю., Берулава O.A., Турин Я.В. Изучение клеточного

микроокружения растущих сосудов роговицы глаза кролика // Ж. Морфология. - 2009 г. - №4. - С.45.

5. Турина О.Ю., Турин Я.В., Берулава O.A., Павлович Е.Р. К вопросу изучения

регуляции процессов ангиогенеза путем воздействия на клеточные элементы, окружающие растущие сосуды // Сборник научных трудов на международном форуме «Интегративная медицина - 2009». - 5-7 июня

2009 г. - М. - Вып.4. - С.30-31.

6. Турин Я.В. Морфологический анализ новообразованных сосудов и

клеточного микроокружения // Ж. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2009 г. - Том 147. - №11. - С.593-596

7. Турин Я.В., Павлович Е.Р., Турина О.Ю. Морфо-функциональная характеристика клеток соединительной ткани при новообразовании сосудов в эксперименте // Материалы конференции, посвященной 85-летию со дня рождения профессора П.Ф.Степанова. - Смоленск. - 2009 г.-С.28-29.

Заказ № 121-а/08/09 Подписано в печать 22.10.2009 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1.5

^piN, ООО "Цифровичок", тел. (495) 649-83-30; (495) 778-22-20 www.cfr.ru ; e-mail:info@cfr.ru

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Гурин, Ярослав Валерьевич

Введение.

Перечень применяемых сокращений.

Глава I. ВТОРИЧНЫЙ АНГИОГЕНЕЗ И ФАКТОРЫ НА НЕГО ВЛИЯЮЩИЕ (обзор литературы).

1. I. Морфологические основы роста новых сосудов.

1.2. Механизмы регуляции вторичного ангиогепеза.

1.3. Роль внутриклеточных органелл эндотелиальных клеток в обеспечении роста новых сосудов.

1.4. Проницаемость сосудистого эндотелия новообразованных сосудов в аспекте стимуляции ангиогенеза.

1.5. Индукторы и ингибиторы ангиогенеза.

1.6. Микрососудистое окружение и его влияние на процессы ангионегеза.

1.7. Влияние на ангиогенез неклеточных структур иптерстиция.

1.8. Модели изучения вторичного ангиогенеза.

Глава II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

II. 1. Группы исследованных животных.

11.2. Дизайн исследования: постановка эксперимента и забор материала.

11.3. Применение топологического принципа изучения клеток вокруг новообразованных сосудов на всем протяжении ростка.

11.4. Этапы подготовки материала для электронно-микроскопического изучения.

11.5. Морфометрические методы изучения материала.

Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

III. 1. Морфо-функциональная характеристика кровеносных микрососудов лимба и их клеточного окружения.

111.2. Морфофункциональная характеристика новообразованных сосудов роговицы глаз кроликов на девятые сутки роста.

III.2.1. Морфо-функциональная характеристика эндотелиальной выстилки новообразованного сосуда по зонам на 9 сутки роста.

Ш.2.2. Морфо-фукциональная характеристика барьерно-гранспортных свойств новообразованных сосудов по зонам на 9 сутки роста.

111.3. Клеточное окружение вокруг новообразованных сосудов.

Глава IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

IV.I. Роль интерстиция в обеспечении вторичного ангиогснеза в роговице глаза кролика.

IV.II. Роль микрососудистого окружения в обеспечнии вторичного ангиогенеза в роговице глаза кролика.

IV.III.Становление барьерно-транспортиых свойств растущих микрососудов в зависимости от клеточного окружения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОСОСУДИСТОГО ОКРУЖЕНИЯ ПРИ ВТОРИЧНОМ АНГИОГЕНЕЗЕ"

Актуальность исследования

Сердечно-сосудистая система играет важнейшую роль в обеспечении нормального течения всех процессов жизнедеятельности организма. Это диктует необходимость обстоятельного изучения ангиогенеза и механизма переноса веществ через стенки сосудов. Данный процесс осуществляется обязательно при участии эндотелия, без учета состояния которого нельзя говорить с достоверностью о проницаемости сосудистых стенок. Кровеносные сосуды - не просто эластические трубки, или разнокалиберные шланги, индифферентные к жизнедеятельности органов и тканей. Они сложно устроены, активно участвуют в кровообращении, отвечают за циркуляторный гомеостаз [25, 31, 32, 35, 37, 38, 44, 45, 53, 62].

Основные фундаментальные данные об ультраструктурных изменениях, сопровождающих новообразование сосудов при регенерации, и перестройке межклеточного вещества соединительной ткани были получены относительно давно [6, 16, 21, 55, 188].

С того момента сменилась научная парадигма, в частности - основная модель регенерации [150, 160, 195, 202, 235], появились работы о роли ангиогенеза в заживлении ран [53], получила распространение теория тканевой ниши [119], миофибробластов [119], расширились представления о роли стволовых клеток и клеток-предшественников, а так же обновилась теория дифферона для фибробластического ряда.

Работами школы В.В. Куприянова [45] и его учеников: В.И.Козлова [37, 38] и Я.Л. Караганова [31, 32, 33] установлено, что обменные процессы в органах зависят от деятельности трех компонентов системы микроциркуляции: транспортных потенций кровеносных микрососудов, наличия и состояния тканевых каналов в интерстиции и резорбирующих свойств лимфоносных микрососудов [34]. 4

В связи с тем,« что большая часть заболеваний человека сопровождается нарушением в деятельности системы микроциркуляции и связанных с этими процессами структурных изменений сосудов микроциркуляторного русла, изучение строения вновь образованных сосудов на клеточном и субклеточном уровне является вполне обоснованным. А определение особенностей взаимодействия на ультраструктурном уровне растущих мирососудов с клетками окружающих тканей в аспекте формирования системы микроциркуляции с восстановлением исходного уровня обмена веществ является мало изученным.

Изучение развития микрососудов при различных видах воздействий, в том числе - в эксперименте, с применением электронномикроскопического исследования, является перспективным с позиции выяснения взаимодействий новообразованных сосудов с измененным окружающим интерстицием и клетками соединительной ткани, а также в определении влияния микрососудистого клеточного окружения на стадии роста сосудов.

Работ, посвященных решению задачи фундаментальной медицины -выяснению особенностей ультраструктурпой организации растущих микрососудов на всем их протяжении в аспекте взаимодействия растущих капилляров с окружающими клетками по зонам роста микрососудов, практически нет.

Остается не выясненной роль взаимодействия растущих капилляров с клеточным окружением вокруг них в аспекте нормализации тканевого гомеостаза при вторичном ангиогенезе на всем протяжении растущих микрососудов.

На основании всего выше изложенного нами была сформулирована

Цель исследования, которая состояла в изучении морфофупкциональпых характеристик различных клеток соединительной ткани при вторичном ангиогенезе и выяснении их роли в становлении барьерно-трапепортных свойств вновь сформированных микрососудов.

Для выполнения указанной цели исследования были поставлены 5

Задачи исследования

2. Методами морфологического анализа определить структурно-функциональные характеристики клеток соединительной ткани на разных уровнях растущих новообразованных микрососудов при вторичном ангиогенезе.

3. Провести сравнительный анализ морфофункциональных характеристик клеток соединительной ткани и их роли в обеспечении роста микрососудов и в становлении транспортных свойств эндотелиоцитов растущих капилляров при вторичном ангиогенезе.

Научная новизна

Впервые выделены пять зон роста микрососудов при вторичном-ангиогенезе в эксперименте, в зависимости не только от строения стенки сосуда, но и от клеточного окружения.

Изучена ультраструктура клеток и межклеточного вещества ткани вокруг растущих микрососудов по зонам растущего капилляра.

Работа показывает возможные пути влияния по управлению восстановлением дефектов соединительной ткани через воздействие на микроокружепие растущих сосудов.

Определены: 1) зависимость барьерно-транспортиых свойств эндотелиальной выстилки различных зон растущего микрососуда при б вторичном ангиогенезе в эксперименте и 2) степень дифференцированности и зрелости эндотелиоцитов в зависимости от состава клеточного микроокружения вокруг растущих микрососудов.

Паучно-ирактическая значимость

Проведенные исследования позволяют связать современные теории регенерации с этапами развития и строением вновь образованных микрососудов и прилежащими клетками соединительной ткани с их изменениями на ультраструктурном уровне в ходе процессов регенерации.

Сравнительный морфологический анализ структурно-функциональных характеристик клеток соединительной ткани, сопровождающих новообразованные сосуды на разных стадиях развития при вторичном ангиогенезе, позволяет уточнить фундаментальные аспекты регенерации микрососудов и выяснения их влияния па темпы роста капилляров.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В растущем микрососуде на 9 сутки роста выделено 5 различных зон:

- зона относительно дифференцированного эндотелия;

- зона переходного эндотелия от непрерывного к фенестрированному типу;

- зона фенестрированного эндотелия (максимального развития транспортных коммуникаций);

- зона недифференецированного эндотелия;

- зона эндотелиобласта (верхушки ростка).

Апробация результатов

Результаты и основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

- VI международной научно-практической конференции «Студенческая медицинская наука XXI века», 9-10 ноября 2006 г., г. Витебск;

- V международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» - 20-21 ноября 2008 г., г. Москва;

- Международном форуме «Интегративная медицина-2009», г. Москва, 5-7 июня 2009 г.;

- VI съезде анатомов, гистологов и эмбриологов России, г. Саратов, 2325 сентября 2009 г.;

- конференции, посвященной 85-летию со дня рождения профессора П.Ф.Степанова, г. Смоленск, 2009 г.

- совместном заседании кафедры морфологии медико-биологического факультета, кафедры гистологии лечебного факультета, кафедры гистологии педиатрического факультета, кафедры ЛОР болезней педиатрического факультета ГОУ ВПО Российского государственного медицинского университета им. Н.И.Пирогова и подразделений Российского кардиологического научно-производственного комплекса 16 октября 2009 г.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 2 в центральной печати.

Объем и структура диссертации

Диссертация построена по традиционному плану и состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной материалам и методам исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов и списка литературы. Материалы диссертации изложены на 132 страницах машинописного текста. Работа содержит 1 таблицу, 2 диаграммы, иллюстрирована 32 рисунками, в том числе гистологическими и электронными микрофотографиями. Список литературы содержит 240 источников литературы (67 отечественных и 173 иностранных авторов).

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Гурин, Ярослав Валерьевич

3. Детальное ультраструктурное изучение роста микрососудов и клеточного окружения при вторичном ангиогенезе может быть экстраполировано на исследование регенерации микрососудов при различных нарушениях тканевого гомеостаза (воспалении, гипоксии, некрозе и регенерации).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Гурин, Ярослав Валерьевич, Москва

1. Алов И.А. Цитофизиология и патология митоза // М., Медицина. — 1972.-263с.

2. Алов И.А., Аспиз М.Е., Старосветская H.A. Механизмы обратимости колхицинового митоза // Журнал общ. биол. 1974. - т.35, №6. - С. 895903.

3. Аминова Г.Г. Эндотелий и мускулатура артерий, капилляров и вен в функциональном освещении // Архив АГЭ. 1964. - №9. - С.39-48.

4. Баходияров Ф.Н. Основные закономерности преобразования стенок микрососудов регенерирующей печени // Морфология. 2008. - т. 133, № 2. - С.17.

5. Васильев Ю.М., Гельфанд И.М. Движение и морфогенетические реакции тканевых клеток в культуре // Движение немышечных клеток и их компонентов. Под ред. акад. Г.М. Франка. — JI. Наука. - 1977. - С.150-166.

6. Виноградов В.В., Воробьева Н.Ф. Тучные клетки // Новосибирск. -Наука. 1973.- 195 с.

7. Вирхов Р. Целлюлярная патология как учение, основанное нафизиологической и патологической гистологии // 2 изд. СПБ. - 1871. — 232с.

8. Волкова О.В., Юрьев Ю.П., Донскова М.Д. Ультраструктурные основы постнатального развития капилляров // Архив АГЭ. 1975. - т.69., №9. -С. 17-25.

9. Волосок Н.И. Таксономия микроангиологических изменений в конъюнктиве глаза // Архив АГЭ. М. - 1979. - №5. - С.27-31.

10. Гелашвили П. А., Гелашвили O.A., Юхимец С.Н. и др. Морфологический и , математический анализ развивающихся микрососудов скелетных мышц у плодов человека и при посттравматической регенерации и эксперименте // Морфология. 2008. -т. 133, № 2. -С.31.

11. Голубев А.Е. Материалы для анатомии, физиологии и истории развития волосных сосудов // Спб. — 1868. -С.5-15.

12. Турин Я.В. Морфологический анализ новообразованных сосудов и клеточного микроокружения // Ж. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2009 г.-Том 147 -№11. С.593-596

13. Турина О.Ю. Морфометрическое электронномикроскопическое изучение растущих кровеносных капилляров роговицы кролика // Количественные методы в изучении морфогенеза и регенерации. Тезисы докладов областной научной конференции ВрНОАГЭ, Иваново. 1984. -С.93.

14. Турина О.Ю., Берулава O.A., Гурин Я.В. Изучение клеточного микроокружения растущих сосудов роговицы глаза кролика // Ж. Морфология. 2009. - №4. - С.45.

15. Турина О.Ю., Караганов Я.Л. Строение новообразованных капилляров роговицы кролика (электронномикроскопическое исследование) // Архив АГЭ. 1984. - т.87,№8. - С.49-57.

16. Турина О.Ю., Куприянов В.В., Миронов A.A., Миронов В.А. Механизмы неоваскулогенеза и его регуляции во взрослом организме // Архив АГЭ. 1985. - Т.88, №1. - С.9-24.

17. Данилов Р.К., Одинцова И.А., Григорян Б.А. и др. Гистионная организация ткани в ходе регенерационного гистогенеза // Морфология. -2008. т. 133, №2. - С.43.

18. Дубовая Т.К., Цибулевский А.Ю., Деев А.И. Система сывороточных альбуминов при стрессовых состояниях // Морфология. 2009. - т. 136, №4. - С.53.

19. Жданов Д.А. К функциональной анатомии кровеносных илимфатических капилляров // Архив АГЭ. 1964. - №9. - С.3-13.115

20. Жданов Д.А., Шахламов В.А. Сравнительное электронно-микроскопическое исследование строения стенок кровеносных и лимфатических капилляров // Архив АГЭ. 1964. - т.47, №10.- С. 13-18.

21. Жуков A.B. Влияние щелочных пептидов, полученных в условиях травматического стресса на активность нейтрофильных гранулоцитов человека и коагуляционный гомеостаз // Морфология. — 2008. т. 133, №2. -С.48.

22. Караганов Я.Л., Алимов Г.А., Гусев С.А. Ультраструктурная морфометрия обменных микрососудов // Вопросы структурной организации и взаимодействия элементов в системе микроциркуляции. -М. 1976. - Вып.2. - С.7-26.

23. Караганов Я.Л., Банин В.В. Топологический принцип в изучении структурно-функциональных единиц микроциркуляции // Архив АГЭ. -1978. №9. - С.5-26.

24. Караганов Я.Л., Банин В.В., Донскова М.Д. Топический метод анализа транспорта макромолекул в микрососудах брюшины // Кн. Новые методы изучения нервной системы и микроциркуляции сердца и легких в норме и патологии. Куйбышев. - 1979. - С.65-71.

25. Караганов Я.Л., Кердиваренко Н.В., Левин В.Н. Микроангиология. Атлас // Кишинев. «Штилинца». - 1982. - 248с.

26. Караганов Я.Л., Козлов В.И. Модуль как структурно-функциональная единица микроциркуляции // Кн. Ультраструктура микроциркуторных путей в патологии. Львов. - 1974. - С.44-46.

27. Караганов Я.Л., Миронов В.А., Миронов A.A., Гусев С.А. Цитоскелет эндотелиальных клеток, его функциональная роль и методы исследования // Архив АГЭ. 1981. - №9. - С.5-26.

28. Карелина Н.Р., Камышова В.В. Транспортные свойства кровеносных капилляров ворсинок тонкой кишки крыс в раннем постнатальном онтогенезе // Тезисы доклада на 2 Всероссийском съезде анат. Л. - М. -1988.-С. 163.

29. Карелина Н.Р., Камышова В.В., Банин В.В. Топографические особенности организации лимфатических капилляров и резорбция липидов в ворсинке тонкой кишки белых крыс //Архив АГЭ. 1984 - т.87, №11.-С. 12-23.

30. Клосовский В.Н. Рост мозговых капилляров в нормальных условиях и при патологическом развитии мозга // Проблемы нервологии. — М. 1963. -С.3-16.

31. Козлов В.И., Мельман Е.П., Нейко Е.М., Шутка Б.В. Гистофизиология капилляров // С.-Петербург. Наука. - 1994. -243с.

32. Козлов В.И., Новиков И.И., Караганов Я.Л., Куликов В.В., Тихомиров А.Н. Основные направления в изучении общебиологических и функционально-морфологических основ системы микроциркуляции // Архив АГЭ. 1981. -Т.81.№12. - С.7-23.

33. Кругликов Г.Г., Пауков B.C., Суслов В.Б., Гармаш Т.И. Некоторые ультраструктурные особенности клеток при специфическом воспалении // Морфология. -2008. т. 133, №2.-С.69.

34. Куприянов В.В. Проблема микроциркуляции с морфологической точки зрения // Архив АГЭ. 1964. - №9. - С. 14-25.

35. Куприянов В.В. Пути микроциркуляции // Кишинев. — 1969. — 240с.

36. Куприянов В.В. Система микроциркуляции и микроцикруляторное русло // Архив АГЭ. 1972. - №3. - С. 14-24.

37. Микролимфология // М. Медицина. - 1983. - 287с.

38. Куприянов В.В., Караганов Я.Л., Козлов В.И. Микроциркуляторное русло // Медицина. М.1975.

39. Куприянов В.В., Миронов В.А., Миронов A.A., Турина О.Ю. Ангиогенез. Образование, рост и развитие кровеносных сосудов // М. — НИО «Квартет». 1993. -202с.

40. Лебедев Э.А., Банин В.В., Тищенко Л.С. Возможности количественного анализа транспорта белка в тканях с помощью растительной пероксидазы // Проблемы функциональной морфологии. — Новосибирск. 1982. - С.120-121.

41. Лебкова Н.П. Роль перицитов в репарации поврежденных капилляров // Кн. Морфофункциональные закономерности неспецифических защитных реакций организма. Научные труды ЦОЛИУВ. - 1980. - С.68-70.

42. Лесгафт П.Ф. Основы теоретической анатомии // Петроград. 1922. -Часть И, - 120с.

43. Ровенский Ю.А. Растровая электронная микроскопия нормальных и опухолевых клеток. М. - Медицина. — 1979. - 152с.

44. Романова Л.К. Цитологические механизмы регенерации легких // Цитологические механизмы гистогенезов. М. - Наука. - 1979. - С.232-234.

45. Сенатова И.Д. Изменение ультраструктуры эндотелия венул под влиянием гистамина // Архив пат. 1974. - №7. - С.60-65.

46. Серов В.В., Шехтер А.Б. Соединительная ткань // М. Медицина. -1981.-312с.

47. Симагин Э.И., Димитров Н.Т. Динамика развития кровеносных сосудов во вновь образованной соединительной ткани // Кн. Вопросы функциональной микроангиологии и микроциркуляции. — М. — 1972. — т.4, вып.1. С.85-89.

48. Соловьева О.Н. Гистологические особенности пиогенной гранулемы //- Морфология. 2008. - т. 133, №2. - С.126.

49. Старосветская H.A. Ультрасруктура митотического аппарата в делящихся клетках культуры ткани // Цитология. 1969.- Т.П,№10. -С.1228-1233.

50. Трусова О.П. О вторичном новообразовании кровеносных сосудов расщеплением предсуществующих в период внеутробного развития // Кн. Закономерности строения периферической нервной и сосудистой систем. -Краснодар. 1967.-С. 199-203.

51. Турдиева У.К., Базарова H.H., Темирова Н.Р. Возрастные особенности развития путей окольного кровотока в условиях ишемии и гнойной раны // Морфология.-2008. т. 133, №2.-С. 138.

52. Хлопин Н.Г. Экспериментально-гистологические исследования лейкоцитов, лимфатических узлов и эндотелия // Труды 6-го Всесоюзного съезда анат. Харьков. - 1961. - С.670-673.

53. Чернух A.M., Александров П.Н., Алексеев О.В. Микроциркуляция // М.- Медицина. 1975. - 432с.

54. Шевченко H.A. Эндотелий как ткань // Труды Ленинградского научного общества анат. 1971. -№3. - С. 178-189.

55. Шелкунов С.И. Прогрессивное и регрессивное развитие капилляров // Архив АГЭ. 1937.-т. 17, вып.1. -С.6-20.

56. Ширинский В. П. Роль киназы легких цепей миозина в барьерной функции эндотелия и перспективы использования ее ингибиторов при нарушениях сосудистой проницаемости // Кардиологический вестник. — 2006. — т.2 — С. 39-42.

57. Юрина Н.А., Радостина А.И. Макрофагическая система // М. -Медицина. 1978.-90с.

58. Юрина Н.А., Радостина А.И. Тучные клетки и их роль в организме // Медицина. -М. 1977.

59. Aberkrombie М. Contact inhibition in tissue culture // In Vitro. 1970. -Vol.6.-P.128-142.

60. Aloisi M., Schiaffino S. Growth of elementary blood vessels in diffusion chamber. Electron microscopy of capillary morphogenesis // Virch. Arch. Abt. Zellpath. 1971. - Vol.8. - P.328-341.

61. Anderson R.H., Zachariah K. On the structure, function and distribution of filament bundles in apothecial cells on the fundus Ascobolus stercorarius // J. Ultrastr. Res. 1974. - Vol.46. - P.375-392.

62. Archer D.B., Gardiner T.A. Electron microscopic futures of experimental choroidal neovascularisation // Amer. J. Ophthalmol. — 1981. Vol.91, №4 — P.433-457.

63. Ausprunk D.H. Effect of colchicine and cytochalasin «В» on the spreading of vascular endothelial cells in culture // Anat. Rec. 1979. - Vol.193, №3. -P.473.

64. Ausprunk D.H., Boundreau C.L., Helson D.A. Proteoglycans in the microvasculature. Histochemical localisation in proliferating capillaries of the rabbit cornea // Am. J. Pathol. 1981. - Vol.103. - P.367-375.

65. Ausprunk D.H., Folkman J. Migration and proliferation of endothelial cells in culture, performed and newly formed blood vessels during tumor angiogenesis // Microvasc. Res. 1977. - Vol. 14. - P.53-65.

66. Ausprunk D.H., Knighton D.R., Folkman J. Differentiation of vascular endothelium in the chick chorioallantois: A structural and autoradiographic study // Develop. Biol. 1974 - Vol.38. -P.237-248.

67. Bake Sh., Friedman J. A. and Sohrabji F. Reproductive age-related changes in the blood brain barrier: Expression of IgG and tight junction proteins // J. Microvascular research. -Vol 78(3). 2009. - P. 413-424.

68. Bar T., Wolf J.R. The formation of capillary basement membranes during internal vascularisation of the rats cerebral cortex // Z. Zellforach Mikrosk. Anat.- 1972.-Vol. 133. P.231-248.

69. Bariety J., Richer D., Appay M.D., Grossetete J., Callard P. Frequency of intra-endothelial virus-like particles: an electron microscopy study of 376 renal biopsies//J. Clin. Pathol. 1973.-Vol. 26.-P.21.

70. Bensch K.G., Deviaon P.M., Karasek M.A. Factors controlling the in vitro growth pattern of human microvascular endothelial cells // J. Ultrastr. Res. -1983.-Vol. 82. P.76-89.

71. Bibring T., Baxandall J. Selective extraction of isolated mitotic apparatus. Evidence that typical microtubule protein is extracted by organic mercurial // J. Cell. Biol. 1971. - Vol. 4. - P.324-339.

72. Billroth Th. Untersuchungen über die Entwicklung der Blutgefässe // Berlin.- 1856.-324p.

73. Birdwell C.R., Gospodarowics D., Hicolson C.L. Identification, localization and role of fibronictine in ocultured bovine endothelial cells // Proc. Nat. Acad Sei. USA. - 1974. - Vol. 75. - P.3273-3277.

74. Bloodgood M. Resorption of organelles containing microtubules // Citobios.- 1974.-Vol. 9.-P.143-161.

75. Borges M., De Brabander M. Microtubules and microtubules inhibitors // Amsterdam. North Holland. - 1975. - 252p.

76. Browns Levison W., Spudich J.A. Cytoskeletal elements of chick embryo fibroblasts revealed by detergent extraction // J. Supramol. Struct. 1976. -suppl. Vol. .-P.l 19-130.

77. Bungaard M., Moller M. Horseradish peroxidase and microperoxidase. Their purty and binding to serum proteins // J. Histochem. and Cytochem. 1981. -Vol. 29. - P.331-336.

78. Burger P.C., Chaudler D.B., Klintworth G. Corneal neovascisation as studied by scanning electron microscopy of vascular Casts. // Labor. Ivest. -1983. Vol. 48. - P.169-180.

79. Buzney S.M., Massicotte S.T., Hetu N., Zetter B.R. Retinal vascular endothelial cells and pericytes. Deferential growth charachteristics in vitro // Inv. Ophtalmol. Vsi. Sei. 1983. - Vol. 24. - P.470-480.

80. Carmeliet P. Mechanism of angiogenesis and arteriogenesis // Nat Med J. -2000. -Vol.6(4). P.389-395.

81. Chalkey H.W., Algire G.H., Morris H.P. Effect of the level of dietary protein on vascular repair in wounds // J. Nat. Cacer Inst. '1946. - Vol. 6. -P.363-373.

82. Charonis A.S., Wissig S.L. Anionic sites in basement membranes. Differences in their electrostatic properties in continuous and fenestrated capillaries // Microvasc. Res. 1983. - Vol. 25. - P.265-285.

83. Chashi Y., Nakagawa S., Nishida T., Suda T. et. al. Appearance of fibronectin in rabbit cornea after thermal burn // Japan. J. Ophthal. 1983. -Vol. 27. - P.547-555.

84. Clank R.A., Henson P.M The molecular and cellular biology of wound repair // New York and London. 1988. - P.359-371.

85. Clark E.R., Clark E.L. Microscopic observation on the growth of blood capillaries in the living mammae // Am. J. Anat. 1939. - Vol. 64. -P.251 301.

86. Clark E.R., Clark E.L. Microscopic studies of the new formation of rat in living adult rabbits // Am. J. Anat. 1940. - Vol. 67. - P.255-285.

87. Cliff W.J. Observation on healing tissues a combined light and electron microscopic investigation // Phil. Trans. R. Soc. 1963. - Vol. 246. - P.305-325.

88. Cogan D.G. Vascularisation of the cornea, its experimental induction by animal lesions and a new theory of its pathogenesis // Arch. Ophtal. New-York. - 1949.-Vol. 41.-P.406-416.

89. Collin H.B. A quantitative electron microscopic study of growing corneal lymphatic vessels //Exp. Eye Res. 1974. - Vol. 18. - P. 171-180.

90. Couchmen J.R., Rook M., Ress D.A., Timpl R. Adhesion, growth and matrix production by fibroblasts on laminin substrates // J. Cell. Biol. 1983. -Vol. 96. -P.177-183.

91. Crocker D.J., Murad T.M., Geer J.C. Role of the pericyte in wound healing. An ultrastructural study. // Exp. And Molec. Pathol. 1970. - Vol. 13. - P.51-65.

92. De Niro M., Alsmadi O. and Al-Mohanna F. Modulating the hypoxia-inducible factor signaling pathway as a therapeutic modality to regulate retinal angiogenesis // Experimental Eye Research. 2009. - Vol.89(5). - P.700-717.

93. Dudar Th.E., Jain R.K. Microcirculatory flow changes during tissue growth // Microvasc. Res. 1983. - Vol. 25. - P. 1-21.

94. Ericsson E., Zarem H.A. Growth and differentiation of blood vessels // Vascular endothelium and basement membranes. Ed. by Altura B.M. et al. -1980. - P.393-419. ,

95. Evans H.M. The development of the vascular system // Manual of human embryology. Ed. by Keibel F. and Mall F. - Philadelphia. - 1912 - Vol. 2. -P.507-709.

96. Faulkner J.A., Weiss S.W., Mc Geachie J.K. Revascularization of skeletal muscle transplanted into the hamster cheek pouch: intravital and light microscopy // Microvasc. Res. 1983.- Vol. 26. - P.49-64.

97. Fernandez-Sauze S., Grail D., Cseh B., Van Obberghen-Schilling E. Regulation of fibronectin matrix assembly and capillary morphogenesis in endothelial cells by Rho family GTPases // Experimental Cell Research. -2009.-Vol. 315 (12).-P. 2092-2104.

98. Ferrara N., Kerbel R.S. Angiogenesis as a therapeutic target.// Nature J. -2005 Vol.438. - P 947-974.

99. Ficrey H.W. Inflammation microscopical observations // General Pathology. . Philadelphia. - 1970. - P.40-123.

100. Florey H.W. Inflammation microscopical observations // General Pathology. Philadelphia. - W. Sanders. - 1970. - P.40-123.

101. Folkman J. Tumor angiogenesis: a possible control point in tumor growth // Ann. Intern. Med. 1975.-Vol. 82. - P.96-100.

102. Folkman J. Tumour angiogenesis. // In: Holland JF.et al., editors. Cancer Medicine. Ontario: Decker. - 2000. - P. 132-152.

103. Folkman J., Haudenschild Ch. Angiogenesis in vitro // Nature. 1980. -Vol. 11.- P.551-556.

104. Forer A. Characterization of the mitotic traction system and evidensce that birefringent spindle fibers neither produce nor transmit force for chromosome movement // Chromosome. 1966. - Vol. 19. - P.44-98.

105. Fox S.B. and Harris A.L Histological quantitation of tumor angiogenesis // APMIS J. 2004. - Vol.112(7-8). - P. 413-430.

106. Fraser R.A., Elmaslie W.H., Simpson J.G. The effect of vasoactive agents human endothelial cells growth in vitro // Microvasc. Res. 1981. - Vol. 22. -P.235.

107. Fujimoto S. Histamine determination of the endothelial specific granules // Electron Microscopy. 1982. - Vol.3. -P.561-562.

108. Gabibiani G. The myofibroblast in wound healing and fibrocontractive diseases // J. Pathol. 2003. - Vol. 200. - P.500-503.

109. Goodwin A. In vitro assays of angiogenesis for assessment of angiogenic and anti-angiogenic agents // Microvascular Research. — 2007. Vol. 74. - P. 172-183.

110. Goran T. Capillary neoformation in the heart and skeletal muscle during dipyridamole-treatment and exercise // Acta Pathol, et Immunol. Scand. 1982. -Vol. 90.-P.63.

111. Gospodarowics D., Moran J., Braun D.L. Control of proliferation of bovine endothelial cells//J. Cell. Biol. 1977. - Vol. 91. - P.377-386.

112. Gotlieb A.I., Submahmanyan L., Kalnins V.I. Microtubule-organizing centers and cell migration: effect of inhibition of migration and microtubule disruption in endothelial cells // J. Cell. Biol. 1983. - Vol. 96. - P. 1266-1272.

113. Guldner F.H., Wolf J.R. Seamless endothelia as indicators of capillaries developed from sprouts // Bibl. Amat. 1972. - Part II. - N.12. - P. 120-123.

114. Haudenschild C.C. Growth control of endothelial cells in atherogenesis and tumor angiogenesis // Adv. Microcirc. 1980. - Vol. 9. - P.226-251.

115. Haudenschild C.C., Schwartz S.M. Endothelial Regeneration. Restitution of endothelial continuity // Lab. Invest. 1979. - Vol. 41. - P.407-418.

116. Heimark R.L., Schwartz S.M. Endothelial cells in health and disease // New-York and London. 1988,- P.123-143.

117. Hinson J.P., Kapas S. and Smith D.M. Andrenomedullin, a multifunctional regulatory peptide.// Endocr.Rev. 2000.-Vol. 21. - P. 138-67.

118. Hippenstiel S., Witzenrath M., Schmeck B., Hocke A., Krisp M., Krull M., Seybold J., Seeger W., Rascher W., Schutte H. and Suttorp N. Andrenomedullin reduces endothelial hyperpermeability.//Circ. Res. 2002.-Vol. 91(7). - P.618-25.

119. Huang B., Pitelka D.R. The contractile process in the ciliate, anterior coeruleus. The role of microtubules and filaments // J. Cell. Biol. 1973. - Vol. 57. - P.704-728.

120. Hudlicka O. Growth of capillaries in skeletal and cardiac muscle // Circul. Res. 1982.-Vol. 50.-P.451-461.

121. Hudlicka O., Tyler K.R. Angiogenesis: The growth of the vascular system // London. Academic Press. 1986. Vol. 20. - P.480-490.

122. Hurwitz H., Febrenbacher L., Novotny W., et al. Bevacizumab plus irinotecan, fluorouracil, and leucovorin for metastatic colorectalcaancer.// New Engl J Med. 2004. - Vol. 350(23). - P.2353-42.

123. Ichev K. Ultrastructural parallels and differences between vessels in young individuals and newly-formed ones in adults // J. Ultrastr. Res. 1970. - Vol. 23. — P.1015-1018.

124. Iivanainen E., Lauttia S., Na Zhang et al. The EGFR inhibitor gefitinib suppresses recruitment of pericytes and bone marrow-derived perivascular cells into tumor vessels // J. Microvascular research. 2009. - Vol. 78(3). - P.278-285.

125. Illig L. The Terminate Strombahn. Kapillarbett und Microsirkulation // Springer. Berlin. - 1961. -232p.

126. Jakus M.A. Studies on the cornea: The fine structure of descement's membrane//J. Biophys. Biochem. Cytol. 1956.-Vol. 2. - P.243-250.

127. Jamagami I. Electronmicroscopic study on the cornea. The mechanism of experimental new vessels formation // Lapan. J. Ophthal. 1970. - Vol. 14. -P.41-58.

128. Jean-Jacwues H., Brigitte B., Raymond E. Electron microscopic study of developing capillaries of human brain // ActaNeuropathol. 1975. - Vol. 31. -P.229-242.

129. Kanada M., Nagasaka A. and Uyeda Taro Q.P. Stabilization of anaphase midzone microtubules is regulated by Rho during cytokinesis in human fibrosarcoma cells // Experimental Cell Research. 2009. - Vol. 315(16). -P.2705-2714.

130. Karnovsky M.J. The ultrastructure basis of capillary permeability studied with peroxidase as a tracer // J. Cell. Biol. 1967. - Vol. 35. - P.213-236.

131. Kaur H., Chaurasia S., Agrawal V., Suto Ch., Wilson S. Corneal myofibroblast viability: Opposing effects of IL-1 and TGF (31 // Experimental Eye Research. 2009. - Vol. 89 (2)-P. 152-158.

132. Kaye G.I., Pappas G.D. Studies on the cornea. The fine structure frog cornea and the uptake and transport of colloidal particles by the cornea in vitro // J. Cell. Biol. 1962. - Vol. 12. - P.457-479.

133. Kaye G.I., Sibbi R.C., Hoefle F.B. Recent studies on the nature and function of the corneal endothelial barrier// Exp. Eye Res. — 1973. Vol. 15. — P.585-613.

134. Kerbel R. and Folkman J. Clinical translation of angiogenesis inhibitors.// Nature Rev. Cancer. 2002. - Vol. 2(10) - P.737-739.

135. Kim J.H., Lee B. J., Kim J. H. et al. Anti-angiogenic effect of caffeic acid on retinal neovascularization // J. Vascular Pharmacology. 2009. - Vol.51(4). — P.262-267.

136. Kirsner RS, Pardes JB, Eaglstein WH, Falanga V. The clinical spectrum of lipodermatosclerosis // J. Am. Acad. Dermatol. 1993. - Vol. 28. - P.623-630.

137. Kitamura K., Kangawa K., Kawatomo M., Ichiki Y., Nakamura S., Matsuo H. and Eto T. Andrenomedullin: a novel hypotensive peptide isolated from human pheochromocytoma // Biochem. Biohys. Res. Commun. 1993 - Vol. 192(2).-P. 553-560.

138. Kleiman H.K., Klebe R.I., Martin G.R. Role of collageneus matrices in the adhesion and growth of cell //J. Cell. Biol. 1981. - Vol. 88. - P.473-485.

139. Kones R.I. Capillary ultrastructure in thermally stressed paired digital biopsies in man // Angyology. 1980. - Vol. 31. - P.472-480.

140. Kreutziger G.G. Lateral membrane morphology and gap junction structure in the rabbit corneal endothelium // Exp. Eye Res. 1976. - Vol. 23. - P.285-289.

141. Krogh A. The anatomy and physiology of capillaries. New-Haven. - 1922.

142. Leaf N., Zarem H.A. Microsurgical transplantation of the rabbit ear with nature transparent chamber // Plast. Reconstr. Surg. 1970. - Vol. 45. - P.332-340.

143. Leuenberger P.H. Lanthanum Hydroxide tracer studies on rat corneal endothelium//Exp. Eye Res. 1973.-Vol. 15.-P.85-91.

144. Li Sh.-D. and Huang L. Nanoparticles Evading The Reticuloendothelial System: Role of The Supported Bilayer // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) Biomembranes. - 2009. - Vol. 1788(10). - P.2259-2266.

145. Linares H.A. From wound to scar // Burns. 1996. - Vol. 22(5). - P.339-391.

146. Lipton B.H., Bensch K.G., Karasek M.A. Microvessel endothelial cell transdifferentiation: Phenotypic characterization // Differentiation. 1991. -Vol. 45. - P.l 17-133.

147. LobbR.R. at al.//Biochemictry. 1985. -Vol.24. -P 4969-4973.

148. Loewenstein W.R. Junctional intracellular communication and the control of growth // Biochem. Biophys. Acta. 1979. - Vol. 560. - P. 1-65.

149. Macadam F.R., Vettera J.M., Saikia N.K. A search for microtubular inclusions in endothelial cells in a variety of skin diseases // Brit. J. Dermathol. 1975.-Vol. 92. -P.175-182.

150. Marx J.L. Microtubules: versatile organelles // Science. 1973. - Vol. 181. -P. 1236-1237.

151. Medawar P.B. Size, shape and age. // Essays on growth and form Oxford: Clarendon Press. - 1945. - P.157-170.

152. Mehta D., Malik A. B. Signaling mechanisms regulating endothelial permeability. //Physiol. Rev. 86 (1): 279-367. 2006.

153. Millonig G. Further observation on f phosphate buffer for osmium solution // International congress in electron microscopy 5th. Philadelphia. - 1962. - Part 2.-P.8.

154. Minot-C.S. The development of the blood, the vascular system and the spleen. The origin of the angioblast and development of the blood // Manual human embryology. 1912. - Vol. 2. - P.448-534.

155. Myrhade R. Capillary growth in chronically stimulated adult skeletal muscle as studied by intravital microscopy and histological methods in rabbits and rats // Microvasc. Res 1978. - Vol. 16. - P.73-90.

156. Nilcitenlco L.L., Lloyd B.H., Rudland PhS. and Barraclough R. Localisationby in situ hybridization of S100A4 (p9Ka) mRNA in primary human breast tumour specimens // International Journal of Cancer. 2000. -Vol.86. -P.219-228.

157. Nikitenko L.L., Smith D.M., Bicknell R., Rees M.C.P. Transcriptional regulation of the CRLR gene in human microvascular endothelial cells by hypoxia.// The FASEB J. 2003. - Vol.7(l 1). - P. 1499-501.

158. Nishida T., Nakagawa S., Awata T., Ohashi Y. et al. Fibronectin process epithelial migration of cultured rabbit cornea in situ // J. Cell. Biol. 1983. -Vol. 97(1).-P.1653-1657.

159. Nishida T., Nakagawa S., Ohashi Y., Awata T., Manabe R. Fibronectin in corneal wound healing: appearance in cultured rabbit cornea // Japan. J. Ophthal. 1982. - Vol. 26. - P.410-415.

160. Ogawa Y. On the new formations of the blood capillaries in the skeletal and cardiac muscles due to endurance exercises // Proc. 10th Int. Congr. Anatomists. -Tokyo. 1975.-P.350.

161. Palade G.E. Blood capillaries of the heart and other organs // Circulation. -1961.-Vol. 24. — P.368-388.

162. Palade G.E., Bruns R.R. structural modulations of plasmalemmal vesicles // J. Cell. Biol. 1968. - Vol. 37. - P.633-649.

163. Prasain N., Stevens T. The actin cytoskeleton in endothelial cell phenotypes // Microvascular Research. 2009. - Vol. 77 (1). - P. 53-63.

164. Raju K. et al. Characterization of a chemoattractant for endothelium induced by angiogenesis effectors // Cancer Res. 1984. Vol.44. - P. 1579-1584

165. Reinard G., Faure J.-P., Pouliwuen Y. Research rabbit corneal endothelium by freeze-fracture techniques: optical and lateral junction // Exp. Eye Res. -1977.-Vol. 25. P.277-288.

166. Reinke Y., Zimmer K.P., Nairn H.Y. Toxic peptides in Frazer's fraction interact with the actin cytoskeleton and affect the targeting and function of intestinal proteins // Experimental Cell Research. 2009. - Vol.315(19) -P.3442-3452.

167. Renkin E.M., Curry f.E., Michel C.C. Failure of histamine, 5-hydroxytryptamine, or bradikinin to increase capillary permeability to plasma proteins in frogs: action of copound 48/80 // Microvasc. Res. 1974. - Vol. 8. -P.84-90.

168. Reynolds E.S. The use of lead citrate at high pH as electron microscopy // J. Cell. Biol. 1963.-Vol. 17. -P.208-213.

169. Risteli L., Risteli J. Basement membrane research // Med. Biol. 1981. -Vol. 59. - P.185-189.

170. Rogelj S. et al. Newly synthesized FGF2 is stored in the ECM from where it is released to induce long-term stimulation of target cells // J. Cell Biol. 1989. - Vol.109.-P.823-831.

171. Ross R., Odland G. Fine structure observations of human skin wounds and fibrogenesis // Repair and regenerations. New-York, Toronto, Sydney, London. - 1969.-P.105-115.

172. Ross U.-P. Fine structure of an organelle associated with the nucleus and cytoplasmia microtubules the cellular slime mould Polysplondylium violaceum //J. Cell Sci.- 1975.-Vol. 18.-P.315-326.

173. Sabesin S. Microtubules biological machines at the molecular level // Gastroenterology. - 1981.-Vol. 81. - P.810-813.

174. Sabin F.R. On the origin of cells of the blood // Physiol. Rev. 1922. - Vol. 2. - P.38-69.

175. Schahlamov V.A. Capillares//Medicine. Moscow. - 1971.-34lp.

176. Schayer R.W. Histamine and a possible unite of autonomus microcirculatory dilator responses // Med. Col. Virginia Quart. 1968.-Vol. 1. - P.101-106.

177. Schoefl G.I. Studies of inflammation. Growing capillaries: their structure and permeability // Virchows Arc. Path. Anat. 1963. - Vol. 337. - P.97-141.

178. Schoefl G.I., Majno G. Regeneration of blood vessels in wound healing // Adv. in the Biology of skin Wound Healing. New-York. - 1964. - Vol. 5. -P.173-193.

179. Schultz G. Corneal fibrotic wound repair // Br. J. Ophthalmol. 2003. -Vol.87.-P. 1200.

180. Schwarts S.M., Selden S.C. Growth control in aortic endothelium at wound edges // Horm. and Cell. Cult. Book-B. Cold Spring Harbor. - 1979. - P.593-610.

181. Selye H. The general adaptation syndrome // Clin. Endocrinol. 1946. -Vol. 6.-P. 117-224.

182. Shasby D.M., Shasby S.S., Sullivan J.M., Peach M.J. Role of endothelial cell cytoskeleton in control of endothelial permeability // Circulat. Res. 1982. -Vol. 51. - P.657-661.

183. Shindo T., Kuribara Y., Nishimatsu H., Moriyama N., Kakoki M., Wang Y., Imai Y., Ebihara A., Kuwaki T., Ju K.H. et al.Vascular abnormalities and elevated blood pressure in mice lacking adrenomedillin gene // Circulation J. -2001.-Vol.104.-P. 1964-71.

184. Sholley M.M., Cavalle T., Cotran R.S. Microcirculating as related to shock // Acad. Press, New-York, London. 1968. - Vol. 47. - P.51-61.

185. Sholley M.M., Gimbrone M.A., Cotran R.S. Celular migration and replication in endothelial regeneration. A study using irradiated endothelial cultures //Labor. Invest. 1977. - Vol. 36. - P. 18-25.

186. Sicard G; Feron F., Andrieu J.L., Holley A., Mackay-Sim A. Generation of neurons from a nonneuronal precursor in adult olfactory epithelium in vitro // Annals of the New York Academy of Sciences. 1998. - Vol.855. - P.223-228.

187. Silverman M.D., Babra B., YuzhenPan, Planck S.R., Rosenbaum J.T. Differential E-selectin expression by iris versus retina microvascular endothelial cells cultured from the same individuals // Microvascular Research.- 2005. Vol. 70 (1-2). - P. 32-42.

188. Simionescu N. Celular aspects of transcapillary exchange // J. Physiol. Rev.- 1983.-Vol. 63. P.1936-1979.

189. Simionescu N. et al. Endothelial.cells in health and desease // New York and London.- 1988.-P.123-143. '

190. Simpson J.G., Fraser R.A., Thompson W.D. Angiogenesis and angiogenesis factors//Prog. appl. Microcirc. 1983. - Vol. 1.-P.71-85.

191. Smelser G.R. New concept in anatomy and histology of the cornea // Two cornea world Congress. Bluttenwords. - London. - 1965. -P.20.

192. Soifer D. The biology of cytoplasmic microtubules // Ann. New-York Acad. Sci.- 1971. Vol. 253.-P.5-80.

193. Spagnoli L.G., Pietra-G.G., Villaschi S., Jehna L.W. Morphometric analysis of gap junction in regenerating arterial endothelium // Lab. Invest. 1982. -Vol. 46. - P.139-148.

194. Stossel T.F. Contraticle proteins in cell structure and function // Ann. Rev. Med: 1978. - Vol. 29. - P.427-457.

195. Takeshige Y., Fujumoto S. Ultrastructural modifications of endothelial cells- by changes of the vascular function // Recent. Adv.Clin. Microcircular. Res., Basel. 1977. - Part 2. - P.364-369.

196. Tashiro T. Electron microscopic studies on the aging changes of the blood capillaries of human bulbar conjunctiva with special references to their histometrical changes // Nihon. Univ. J. Med. 1972. - Vol. 14. - P.l-21.

197. Tilton R.G., Miller E.J., Kilo C., Willimson J.R. Pericyte form and distribution in rat retinal and uveal capillaries // Inv. Ophtalmol. Vis. Sci.1985. Vol. 26. - P.68-73.

198. Trump B.F., Arstile A.U. Pathology of cell membranes I I Acad. Press, New-York, London, Toronto, Sydney, San-Francisco. 1980 - Vol. 50. -P.451-461.

199. Tucker J.B. Cytoskeletal coordination intercellular signaling during metazoan embryogenesis // J. Embryol. And exp. Morphol. 1981. - Vol. 65. -P.1-25.

200. Uriuhara T., Movat H.Z. Allergic inflammation. The vascular changes during the development and progression of the direct active and passive arthus reactions//Lab. invest. 1964.-Vol. 13. - P. 1057-1079.

201. Vogt W. Korpereigene Wirksteffe, Mediatoran bei Abwehrreaktion des Organismus. 1972.-P. 157-176.

202. Wagner R.C., Casley-Smith J.R. Endothelial vesicles // Microvasc. Res. -1981.- Vol. 21.- P.267-298.

203. Wagner R.C., Robinson C.S. Tannic acid tracer analysis of permeability pathways in the capillaries of the rete mirabilis demonstration of the discreteness: of endothelial vesicles // J. Ultrasr. Res. 1982. - Vol. 81. - P.37-46.

204. Wakui S.5 Funsato M., Tanaka M. et. al. Endothelium and pericyte interdigitation: Pathway for epidermal growth factor? // Microvasc. Res. -1990. Vol. 40. - P.285-291.

205. Weibel E., Palade G. New cytoplasmic components in arterial endothelia // J.Cell. Biol. 1964.-Vol.23.-P.101-112.

206. Weibel E.R. Principles and Techniques of Electron Microscopy // Von Nostrand-Reinhold. New-York. - 1973. - P.237-296.

207. Weibel E.R. Stereological Methods: Theoretical Foundations // Academic Press. London. - 1980 - Vol. 2 - 287p.

208. Weisenberg R.C. Organized assembly of tubulin into aster-like structures in vitro // J. Cell. Biol. 1972. - Vol. 55. - P.277.

209. Weisenberg R.C., Rosenfeld A.C. In vitro polymerization of microtubules into asters and spindles in homogenates of surclam eggs // J. Cell Biol. 1975. -Vol. 64. - P.146-158.

210. Weiss C.B. Cellular pharmacology of lanthanum // Ann. Rev. Pharm. -1974. P.343-354.

211. Weiss J.B. et al. Angiogenesis. Prog. appl. Microcirc // Eds. F. Hammersen, O. Hudlicka. Basel et al. - 1984. - Vol.4. - P.76-87.

212. Weiss S.W., Faulkner J.A. revascularization of skeletal muscle transplanted into the hamster check pouch: electron microscopy // Microvasc. Res. 1983. -Vol. 26. - P.65-73.

213. Welt K., Scheller W., Schippel G., Schippel K. The postnatal development of capillaries in the triceps muscle of arm of the white rate. Light and electron microscopic study // Z. Mikzesk. Anat. Forach 1975. - Vol. 89. - P.327-339.

214. Wessels N.K. How living cells change shape // Sci. Amer. 1971. - Vol. 225. — P.77-82.

215. Wolf J.K., Morits A., Guldnr F.-H. 'Seamless' endothelia within fenestrated capillaries of duodenal vill (rat) // Angyology. 1972. - Vol. 9. - P. 11-14.

216. Wright A.J.A., Hudlicka O. Capillary growth and changes in heart performance induced by chronic bradycardial pacing in the rabbit // Circul. Res. 1981.-Vol. 49.-P.87-91.

217. Wright H.P. Endothelial injury and repair // Bibl. Anat. 1973. - Vol. 12. -P.87-91.

218. Yannas I.V. Tissue and Organ Regeneration in Adults // Springer. 1 edition.-2001.-383p.

219. Yen-Patton G.P. et al. Endothelial cell response to pulsed electromagnetic fields: Stimulation of growth rate and angiogenesis in vitro // J. Cell Physiol. -1988. -Vol. 134.- P.37-46.

220. Zawicki D.F., Jain R.R., Schmid-Schoenbein C. Dynamics of neovascularisation in normal tissue // Microvasc. Res. 1981. - Vol. 21. -P.27-47.

221. Семшн N9 7. Эпителий и соединительная ткань в нормальных иэкспериментальных условиях

222. Президент Всероссийского научно- Ректор ГОУ ВПО Саратовский ГМУ иммедицинского общества анатомов. В И Разумовского, член-корреспондентгистологов и эмбриологов, академик РАМН, профессор РАМН

223. Л.Л Колесников /// П.В Глыбочко23.25 сентябри 2009 гола г Саратов1 ■^-ЧШИШВМТЯЩИШШ

Информация о работе

Гурин, Ярослав Валерьевич
кандидата медицинских наук
Москва, 2009
ВАК 03.00.25

Диссертация

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРОСОСУДИСТОГО ОКРУЖЕНИЯ ПРИ ВТОРИЧНОМ АНГИОГЕНЕЗЕ - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы