Роль и специфические особенности ангиогенеза в патогенезе увеальной меланомы

Астахова, Светлана Евгеньевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Роль и специфические особенности ангиогенеза в патогенезе увеальной меланомы
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Роль и специфические особенности ангиогенеза в патогенезе увеальной меланомы"

На правах рукописи

АСТАХОВА СВЕТЛАНА ЕВГЕНЬЕВНА

Роль и специфические особенности ангиогенеза в патогенезе увеальной меланомы

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология 14.00.08 - глазные болезни

Автореферат Диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Рязань-2004

Работа выполнена в ГОУ ВПО «РЯЗАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ им. акад. И.П. ПАВЛОВА МИНЗДРАВА РОССИИ»

Научные руководители - Заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор, Юрий Иванович Ухов доктор медицинских наук Вера Геннадиевна Лихванцева

Официальные оппоненты - доктор медицинских наук, профессор,

Виталий Георгиевич Панков доктор медицинских наук Тамара Ильинична Ронкина

Ведущее научное учреждение - ГОУ ВПО «Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова Минздрава России»

Защита диссертации состоится «_ 2004г. в Я, часов на

заседании диссертационного Совета (Д 208.084.02) Рязанского медицинского университета им. акад. ИЛЛавлова (390026, Рязань, ул. Высоковольтная, Д.9).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Рязанского медицинского университета им. акад. ИЛЛавлова (390026, Рязань, ул. Шевченко, д.34).

Автореферат « разос.лан^^'^'^ 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессорМ.М. Лапкин

'2,00 5-4

349 М

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Изучение ангиогенеза является одной из фундаментальных проблем гистологии, эмбриологии и клеточной биологии, поскольку этот процесс необходим для роста, дифференцировки и функционирования органов и тканей в физиологических и патологических условиях.

Ангиогенез играет важную роль на всех этапах неопластического процесса, начиная с формирования первичного опухолевого узла и завершая развитием дистантных метастазов (А.Ю. Барышников, 2003). Опухоль и ее сосудистая сеть с позиции современных концептуальных представлений рассматриваются как «двухкомпонентная система», в которой опухолевые клетки стимулируют запуск ангиогенеза, а новообразованная сеть сосудов, в свою очередь, питает опухоль и экспрессирует факторы, способствующие её росту (Е.Б. Владимирская, 2001). При этом ангиогенез является для опухоли не только средством устранения кислородного и метаболического дефицита, но и способом усиления агрессивности и метастазирования (Н.П. Мертвецов, 1997; Ж. Дбар, 2003).

Установлено, что ангиогенез регулируется специфическими белками, получившими название ангиогенных маркеров (Е.А. Коган, 1997; ChistofaШ М, 2003). Уровень экспрессии этих белков определяет характер ангиогенеза и скорость роста опухоли одновременно. Поэтому не удивительно, что количественные способы оценки ангиогенных маркеров рассматриваются в аспекте прогноза клинического течения и исходов заболевания, а также чувствительности к противоопухолевой терапии. Эти сведения представляют собой фундаментальную базу для выработки стратегии противоопухолевой терапии (Е.В. Степанова, 2002, А.Ю. Барышников, 2003; Cristofori G., 1997).

Увеальная меланома (УМ), для которой гематогенный путь метастазирования - единственный, представляет собой идеальную модель опухоли человека для изучения механизмов гематогенного

диссеминирования. Отсутствие указанной информации по УМ обусловило актуальность работы.

Цель: изучить гистоморфологические и молекулярные особенности ангиогенеза в увеальной меланоме с определением их роли в патогенезе и в прогнозировании неопластического процесса.

Задачи:

1. Изучить особенности ангиогенеза в УМ различных гистологических типов, локализаций и стадий опухолевого роста с определением их роли в патогенезе и прогнозе с помощью традиционных гистоморфологических методов.

2. Исследовать молекулярные особенности ангиогенеза в УМ различных гистологических типов и стадий опухолевого роста с определением их роли в патогенезе и прогнозе с помощью иммуногистохимического метода и проангиогенных маркеров (VEGF, Flk, Fit).

3. Сопоставить результаты иммуногистохимическо1 о, гистоморфологического анализа с традиционными клиническими и морфологическими характеристиками опухоли для оценки возможного влияния показателей ангиогенеза на особенности развития опухоли.

4. Раскрыть возможности индивидуального или комбинированного использования показателей ангиогенеза в прогнозировании клинического течения УМ с оценкой их достоверности и информативности.

5. Разработать способы прогнозирования исходов заболевания на основе гистоморфологических и/или молекулярных показателей ангиогенеза в УМ.

6. Обосновать патогенетически ориентированные подходы к использованию антиангиогенных препаратов в комплексном лечении УМ на основе показателей экспрессии молекулярно-биологических маркеров.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

• Определены гистоморфологические особенности и пути ангиогенеза в УМ различных гистологических типов, локализаций и на различных стадиях опухолевого роста.

• Изучена панель молекулярно-биологических маркёров (VEGF, Flk-1, Flt-1), регулирующих ключевые этапы ангиогенеза в УМ.

• Установлены характер, а также индивидуальный и комплексный вклад ангиогенных маркёров в прогрессирование УМ.

• Научно обоснована необходимость антиангиогенной терапии с учетом специфических особенностей ангиогенеза в комплексном лечении УМ.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Разработаны и внедрены в практику тесты, позволяющие прогнозировать клиническое течение УМ на основе определения типа ангиогенеза (васкулогенез de novo, кооптирование предсуществующих сосудов и «васкулогенная мимикрия»), по количественной его оценке с помощью индекса плотности сосудов (ИПС) и/или по уровню экспрессии проангиогенных молекулярных маркёров (VEGF, Flk-1, Flt-1) и/или на особенностях их (Flt-1) распределения в опухолевой клетке.

Определены клинические, гистоморфологические и молекулярно-биологические критерии для отбора больных с УМ в группу высокого риска развития метастазов.

Представлены рекомендации по оптимизации эффективности лечения УМ, ориентированные на ангиогенез.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

Раскрытие ключевых стадий канцерогенеза УМ на основе расшифровки молекулярно-биологических механизмов ангиогенеза.

ОБЪЁМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертационная работа изложена на 142 страницах машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы, включающего 191 источник. Работа иллюстрирована 14 таблицами, 4 графиками, 24 рисунками.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные положения работы доложены на:

• юбилейной конференции, посвященной 100-летию глазных болезней Саратовского государственного университета «Офтальмология в начале XXI века» (г. Саратов, 2002 г.);

• 5-ом Конгрессе РААКИ "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммуиофармакологии" (г. Москва, 2002 г.);

• Всероссийской научной конференции «Реактивность и пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях», посвященной памяти член.-корр. АМН СССР, профессора Ф.М. Лазаренко (г. Оренбург, 2003 г.);

• VII Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (г. С-Петербург, 2003 г.);

• 11-ом Международном офтальмоонкологическом конгрессе (1СОО, Хайдарабад, Индия);

• Областной научно-практической конференции «Офтальмоонкология» (г. Рязань, 2004 г.).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ. Приоритетность исследований подтверждена 2 патентами на изобретение и 3 положительными решениями на выдачу патента.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Материалом для иммуногистохимических исследований служил архивный материал (блоки энуклеированных глаз с УМ) Рязанского областного онкологического диспансера и областной больницы им. Семашко, МНИИ глазных болезней им. Гельмгольца и НИИ глазных болезней РАМН (жители г.Рязани и Рязанской области).

В исследование вошли 97 больных УМ (женщин - 53, - мужчин - 44). Всем пациентам проводили хирургическое лечение в объёме: иридэктомии (7 случаев), иридоциклэктомии (4 случая), энуклеации (80 случаев) и экзентерации (6 случаев) между 1977-1997 гг. на базе Рязанской областной клинической больницы имени Семашко, областного онкодиспансера, МНИИ глазных болезней имени Гельмгольца, НИИ глазных болезней РАМН. Пациенты были прослежены на протяжении не менее 5 лет или до появления метастазов и смерти от метастатической болезни. Причина и дата смерти пациентов с летальным исходом подтверждены запросами ЦАБ и результатами аутопсии. Выжившие пациенты были обследованы окулистом и онкологом не позднее, чем за 2 месяца до проведения настоящего исследования.

Оценка стадийности заболевания определялась в соответствии с действующей классификацией ВОЗ (1983 г, Женева) по системе ТКМ.

В обследование вошли 31 человек с начальными стадиями в стадии 29 - в стадии и 14 человек в стадии генерализации.

У пациентов с генерализованной стадией метастатические узлы обнаружены одновременно с первичной опухолью в глазу (случаи позднего обращения).

Гистологическая верификация диагноза имела место у 97 человек (100 %). При определении типа клеточного строения использовали модифицированную классификацию СаЛепёег-ШЫег. Различали: эпителиоидную (п=25), веретеноклеточную (п=33), смешанноклеточную (п=35); и некротическую опухоли (п=4).

По возрасту больных распределяли на четыре возрастные группы:

• I группа состояла из больных от 20 до 35 лет включительно (п=19),

• II группа - от 36 до 45 лет включительно (п=23),

• III группа - от 46 до 60 лет включительно (п=33) и

• IV - из пациентов старше 60 лет (п=22).

Средний возраст пациентов с УМ составлял 55,2±1,2 года.

По локализации различали преэкваториальные опухоли (изолированная меланома радужки - 7, иридоцилиарная - 7; меланома цилиарного тела - 9, цилиохориоидальная - 13) и постэкваториальные (юкстапапиллярные - 15; хориоидальная - 10). В 36 случаях имели место обширные меланомы, распространяющиеся от ДЗН до цилиарного тела.

Методы исследования включали традиционные офтальмологические (визометрия, периметрия, тонография, биомикроскопия, офтальмоскопия, по показаниям - гониоскопия), ультразвуковые исследования глаза, компьютерную томографию органов брюшной полости и рентгенографию грудной клетки, гистоморфологические и иммуногистохимические методы. В случае генерализованных форм УМ для подтверждения диагноза использовали комбинацию из двух и более методов - ядерно-магнитного резонанса, компьютерной томографии, ультрасоно!рафии, спинтиграфии печени с технефитом.

Во всех случаях диагноз УМ был верифицирован двумя независимыми гистологами и подтвержден иммуногистохимическими исследованиями с маркерами НМ^М-5, тирозиназой. После подтверждения диагноза, уточнения её клеточного типа и морфологических особенностей исследовали особенности и роль ангиогенеза на световом и электронно-микроскопическом уровнях, проводили иммуногистохимический анализ экспрессии пептидов, регулирующих основные этапы ангиогенеза (УЕвИ, Ик-1, ИМ).

Исследования проводили в 4 этапа с помощью световой микроскопии, электронной микроскопии и иммуногистохимического анализа.

Парафиновые блоки с кусочками опухоли и срезы, толщиной 3-5 микрон, готовили по стандартной методике.

I этап. Производили окраску препаратов для световой микроскопии гематоксилин-эозином, маркировку HMW-45 и тирозиназой. Просмотр препаратов осуществляли под микроскопом "Opthon" при увеличении х40, х 125, х 1250, х1800. После гистоморфологической и иммуногистохимической верификации УМ на световом уровне переходили ко II этапу исследований.

П_ этап. Идентифицировали доминирующий вид ангиогенеза в тестируемой УМ по одному из трех типов (Van Hoef ME, 1999):

• Васкулогенез de novo;

• Кооптирование предшествующих сосудов;

• Формирование межклеточных микроциркуляторных каналов по типу «васкулогенной мимикрии».

/// этап Проводили количественную оценку ангиогенеза на световом уровне (увеличение х 40) путем подсчета сосудов в области их наивысшей плотности. Выделяли 3 степени ИПС; I степень присваивали опухоли, если при подсчете сосудов в зоне максимальной плотности их количество не превышало 5 в поле зрения, II степень, если показатель варьировал от 5 до 10 и III, если превышал 10.

IV этап. Парафиновые срезы толщиной 3-5 микрон готовили по стандартной методике: депарафинировали в ксилоле и дегидратировали в батарее спиртов. Для «демаскировки» антигенов (АГ) проводили тридцатиминутное прогревание срезов на водяной бане в предварительно нагретом до 95-99°С цитратном буфере ["DAKO", Дания]. Охлажденные при комнатной температуре в течение 15-20 мин стекла переносили в фосфатный буфер с рН 7,4-7,6. Для блокирования эндогенной пероксидазы срезы инкубировали в течение 20 мин в темноте с 3 % перекисью водорода, приготовленной на дистиллированной воде, а затем промывали 5 мин в фосфатном буфере с рН 7,4-7,6. Дня блокирования неспецифического связывания антител (AT) срезы инкубировали 15 мин с 1 % раствором

бычьего сывороточного альбумина. Инкубацию с первичными АТ проводили при I = 40С в течение ночи. После первичных АТ стекла промывали дважды по 5 мин в фосфатном буфере с рН 7,4-7,6. Инкубацию со вторичными АТ, связанными с биотипом ("Ь8АВ+кй", "БАКО", Дания), проводили при комнатной температуре в течение 20 мин, затем срезы промывали дважды по 5 мин. Инкубацию с АТ, связанными со стрептавидином ("Ь8АВ+кй", "БАКО", Дания), проводили при комнатной температуре в течение 20 мин, затем срезы промывали трижды по 5 мин. Для визуализации иммуногистохимической реакции использовали систему "БАКО" (Дания). Срезы докрашивали гематоксилином и заключали в бальзам.

В качестве первичных АТ использовали АТ к УБОР, И-1, Нк-1 (табл. 1).

Таблица 1.

Маркеры, используемые при иммуногистохимическом исследовании ангиогенеза увеальной меланомы

Маркер Клон моноклинальньх антител Рабочее разведение Фирма-производитель

Проангиогенные

VEGF С-1 1:100 Sania Quz Biotech

F1M Козьи поликлональные 1:100 Sania QTuz Biotech

Flk-1 Козьи поликлональные 1:100 Sania QTuz Biotech

Лабораторные исследования проводили на базах:

Кафедры гистологии, цитологии и клеточной биологии Рязанского государственного медицинского университета имени И.П. Павлова, отдела патологической анатомии и гистологии МНИИ ГБ им. Гельмгольца, лаборатории клеточной иммунологии НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей РАМН, лаборатории гистоморфологии и патологической анатомии МНИИ глазных болезней РАМН, лаборатории патологической анатомии и гистологии человека ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина.

Полученные данные сопоставляли с исходами заболевания, что позволило не только оценить роль отдельных показателей ангиогенеза и их комбинаций в патогенезе и прогнозе заболевания, но и выработать и обосновать подходы, а также стратегию антиангиогенной терапии УМ.

Статистический анализ проводили на базе лаборатории современных методов оценки здоровья в отделе биостатистики ГНЦ профилактической медицины НИИ Минздрава РФ в соответствии со стандартными алгоритмами программ SAS (Statistical Analysis System, version 6.09, USA). Связь между показателями определяли с помощью линейной корреляции. Достоверность различий вычисляли с помощью t-критерия Стьюдента и %2-критерия Фишера. Все данные анализировали тремя методами: многофакторным корреляционным анализом, многомерной пошаговой регрессии, регрессионного анализа Каплан-Мейера. Сравнение кривых выживаемости проводили с помощью Log-rank-критерия (С. Гланц, 1999). При оценке роли фактора локализации УМ в прогнозе использовали специальные приемы балльной оценки зон вовлечения в опухолевый процесс (В.А. Выгодин, В.Г. Лихванцева, 2001). Для оценки независимости признаков использовали модель регрессионного анализа Кокса.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Особенности клинического течения и исходы увеальной меланомы

При 10-летнем сроке наблюдения в анализируемой группе больных, генерализация произошла в 48 случаях (49,4 %). Всего за время наблюдения прогрессирование заболевания с развитием метастазов, а также прогрессирование уже развившихся метастазов УМ (энуклеация произведена в паллиативных целях на фоне развившегося болевого синдрома в стадии Тз-4N0M. у 14 человек) имело место в 62 случаях (63,9 %).

Как правило, основным и первым органом инвазии была печень - 55 человек (88,8 %), у 1-го пациента метастазы в легких появились раньше, чем в печени, у 4-х (8,1 %) они присоединились к метастазам в печени; селезенка

вовлекалась после печени в 4-х случаях, а одновременно с ней - в 5-ти (28,1 %). В 1-ом случае первым органом инвазии было сердце (1,9 %); метастазы в кожу выявлены у 7 человек (11,3 %). Лимфатическая система была поражена у 6 человек (11,5 %). Кожа и лимфатические узлы вовлекались в процесс, как правило, позже печени. У 1-го пациента обнаружены метастазы в мозг.

Метастазы развивались на любой стадии УМ (табл.2), но чаще на стадии чем на начальных стадиях

Таблица 2

Взаимосвязь метастатического процесса и стадии увеальной меланомы при сроке наблюдения —10 лет.

Стадия увеальной меланомы Число пациенто в Частота развития метастазов

Абс. %

Т^оМо 15 1 6,6

тмо 16 2 12,5

ТзЫоМо 23 18 78,3*

Т4Ы0М0 29 27 93,1**

Примечание: * - достоверность отличий от показателей на стадиях Т,Ы<,М0 р<0,01, ** - р<0,001

Продолжительность генерализации и/или скорость прогрессирования метастатического процесса зависела от стадии заболевания, на которой развились метастазы. При начальных стадиях она колебалась от 12

до 24 месяцев на стадии - от 5 до 24 месяцев

на стадии - от 3 до 16 месяцев

Вероятность развития метастазов зависела от возраста пациента. Чаще они развивались у пожилых людей, что позволяло причислить возраст >60 лет к факторам риска развития метастазов. Среднее время до их появления составляло 46+37 мес (медиана 36 мес, от 6 до 156 мес), а средняя продолжительность жизни пациентов - 50+30 мес. (медиана 42 мес, от 11 до 121 мес).

Как и по литературным данным, чаще метастазировали эпителиоидные и некротические меланомы (табл. 3) (В.В. Волков, 1985, А.Ф. Бровкина, 1985, 1998, А.В. Безруков, 1988, Callender, 1972, Wilder 1973, Shields, 1982).

Таблица 3

Частота метастазирования УМ различных гистологических типов при 10-летием сроке наблюдения.

Тип гистологического строения меланомы Частота метастазирования

Абс. %

Веретеноклеточная (п=33) 12 36,4

Смешанноклеточная (п=35) 16 45,7

Эпителиоидная (п=25) 21 84,0* .

Некротическая (п=4) 3 75

Всего: п=97 52 53,6

Примечание: ' — р<0,01 достоверность различий от аналогичного показателя при веретеноклеточной меланоме.

Достоверно чаще развивались метастазы при преэкваториальных УМ, а также обширных меланомах, распространявшихся от ДЗН до цилиарного тела (табл.4). Частота метастазирования анулярных меланом достигала - 28 % против 7,2% при меланомах радужки. Выявленный факт позволял отнести анулярные меланомы к факторам риска развития метастазов, а также позволял утверждать, что меланому радужки целесообразно удалять на раннем этапе, не дожидаясь её прорастания в угол передней камеры (В .Г. Лихванцева, 2001).

Гистоморфологические особенности ангиогенеза в увеальной меланоме

Количественная оценка ангиогенеза

Анализировали 30 агрессивных опухолей и 30 опухолей с низкой степенью злокачественности.

Проводили многофакторный корреляционный анализ ИПС с традиционными клиническими и гистоморфологическими характеристиками

УМ. По показателям ИПС все тестируемые УМ были разделены на 3 группы, различающиеся степенью васкуляризации (см. выше). В целом УМ, как злокачественная солидная опухоль, отличалась высокими средними показателями ИПС: медиана=8±3. Анализ топографии распределения высоко ангиогенных областей в опухоли показал, что они, как правило, локализуются на двух полярно противоположных областях: на периферии и на вершине УМ. Причем, показатели ИПС на периферии опухоли выше, чем в верхнем ее регионе.

Таблица 4

Частота метастазирования меланом различных локализаций при 10-летием сроке наблюдения.

Локализация опухоли Количество б-х (%) Частота метастазирова ния Абс. число (%)

Изолированные меланомы 7(7,2) -

радужки

Преэкваториальные: Иридоцилиарная Меланома цилиарного тела Цилиохориоидальная Постэкваториальные: Хориоидапьная меланома Юкстапапиллярная Обширные меланомы, 7(5,1) 9(9,2) 13 (13,4) 10 (10,3) 15(17,5) 36(37,1) 2(28) 4 (44,4) 7(53,8) 10(37) 6(22,2) 5(20,0) 29(80,5)*

распространяющиеся от ДЗН до

цилиарного тела, первичная

локализация не установлена

Всего: 97(100) 52 (53,6)

Примечание: * - р<0,05 достоверность различий ог аналогичного показателя при юкстапапиллярных меланомах

Ангиогенные зоны опухоли отличались не только высокими показателями ИПС, но и присутствием активно пролиферирующих клеток, размеры которых приближались к величине лимфоцитов и составляли 1/5 или 1/10 часть от размера предсуществующего клона клеток. Пролифераты из таких клеток окружали сосуды в виде кольца. Они обладали высокими

локомоционными и инвазивными свойствами: свободно мигрировали, просачивались сквозь стенки капилляров, прикреплялись к эритроцитам, формируя эмболы.

Выявлена прямая тесная связь между показателями ангиогенности опухоли и показателями 10-летней выживаемости пациентов с УМ (табл.5). Однако прогноз на выживаемость совпадал только в 76,6 % случаев.

Мы предположили, что существуют иные показатели ангиогенеза, ответственные за прогноз, не нашедшие отражение в ИПС. Они могли бьпь связаны с характером построения самой сети микроциркуляции или с ее типом. Это обосновало проведение исследований по идентификации типа ангиогенеза.

Таблица 5

Взаимосвязь показателя ангиогенности опухоли ИПС и выживаемости пациентов при увеальной меланоме.

Ангиогенность (I- III степень ИПС) Число умерших больных % Число выживших больных %

Высоко ангиогенные 23 76,6* 18 23,3

III степень ИПС: медиана ~ 13,2

Средне-ангиогенные 8 61,5 5 48,5

II степень ИПС: медиана = 6,7

Низко ангиогенные 1 15,6 5 84,4*

I степень ИПС: медиана = 3,6

Примечаний * -р (степень достоверности)<001 по сравнению с группой меюном низкой ангиогенности.

Идентификация типа ангиогенеза

В УМ условно выделяли три основных типа ангиогенеза:

• васкулогенез de novo с помощью ангиобластов (предшественников ЭК) в местах с ишемией и с дефицитом кровоснабжения;

• кооптирование сосудов с использованием уже существующих магистралей, которые вначале регрессируют, вызывая массивные некрозы, а затем реорганизуют новую сеть сосудов на периферии опухоли;

• развитие атипичной сети микроциркуляции с генерацией

межклеточных каналов, образованных ЭЦМ и базальными мембранами опухолевых клеток по типу «васкулогенной мимикрии».

Первые два типа ангиогенеза встречались одинаково часто при УМ различного клеточного строения и локализации. Иногда они сочетались, и тогда определяли преимущественный тип. «Васкулогенная мимикрия» ассоциировалась с эпителиоидным типом и с вовлечением цилиарного тела в опухолевый процесс. Этот тип ангиогенеза в УМ коррелировал с высокой частотой развития метастазов (к=0,87). При этом достоверность теста достигала 87%.

Мы предположили, что причины «васкулогенной мимикрии» лежат на молекулярном уровне. Это и обусловило проведение иммуногистохимических исследований.

Особенности экспрессии проангиогенных маркеров в УМ

Известно, что фактором выживания ЭК и некоторых типов опухолевых клеток и, одновременно, индуктором ангиогенеза является проангиогенный маркер VEGF и рецепторы к нему - Fit-1, Flk-1. Нарушение их экспрессии могло быть причиной отсутствия эндотелиальной выстилки в сосудах опухоли (Vermeulen PB, 1996) и определять тип ангиогенеза в опухоли.

Полученные данные позволяли считать, что VEGF - важный белок, участвующий в прогрессировании опухоли. Нами было установлено, что продуцентами VEGF в УМ являются как опухолевые, так и эндотелиальные клетки. Экспрессия VEGF выявляется в гипоксичных регионах опухоли: в зонах сосудистого застоя, паранекроза и параапоптоза (коэффициенты корреляции, соответственно,

Гиперэкспрессия VEGF развивалась в анаплазированных опухолевых клетках, расположенных по краям зоны гипоксии.

Выявлена обратная корреляционная связь между показателями ИПС и уровнем экспрессии VEGF (p=0,001). Пик продукции VEGF ассоциировался

с начальной стадией роста - TNMo и стадией T,NoMo. По-видимому, именно на этих стадиях развивалась гипоксия. Низкие уровни, напротив, сочетались со стадией TN^ и выходом опухоли за пределы оболочек глаза (T4N0M0), характеризующимися наивысшими показателями ИПС. Диссеминация (ITjNoM+) сопровождалась активизацией продукции VEGF.

Прогрессирование УМ коррелировало с рецепцией Fit и Flk в ЭК опухолевых сосудов. Запуск рецепции Fit совпадал с активной пролиферацией опухолевых клеток, достигая пика на T2NM0 стадии роста, а спада - на стадии T4N0M0.

Установлено, что тестируемые УМ отличаются не только уровнем, но и местом рецепции Fit в опухолевой клетке. Мы попытались выяснить роль этого биологического феномена в патогенезе УМ. Для этого мы рассматривали рецепцию Fit в ядре (Fit N) и в цитоплазме (Fit С) как два различных показателя. Кроме того, мы ввели индекс их соотношения и проследили динамику этих показа!елей на всех стадиях роста и при различных гистологических типах УМ и их связь с исходом процесса.

Так, на начальных стадиях УМ рецепция Fit имела место и в ядре и в цитоплазме и была на одном уровне. По мере прогрессирования опухоли (TiNoMo —* к T3N0M0) рецепция Fit усиливалась, а место синтеза перераспределялось: Fit чаще экспрессировался в цитоплазме. Динамика индекса Fit C/Flt N при прогрессировании УМ повторяла динамику каждого из составляющего индекс показателей. На поздних стадиях роста по значениям индекса пациенты делились на две группы: у одних индекс Fit C/Flt N снижался <1, у других, напротив, был > 3. Достоверно чаще случаи неблагоприятного исхода УМ развивались у пациентов с индексом Fit C/Flt N >3 (р<0,05)(табл.6). Это позволяло отнести показатель Fit C/Fit N >3 к факторам развития метастазов. Информативность и достоверность маркера достигали- 95%.

Рецепция Flk развивалась со стадии T2N0M0 Поскольку Flk является маркером новых активно растущих сосудов, a Fit - маркер «зрелых» базовых

сосудов, то полученные данные позволяли утверждать, что на первой стадии роста УМ происходит активизация старых базовых сосудов. Это подтверждала гиперэкспрессия Fit. Васкулогенез de novo начинался исключительно со второй стадии и затихал по мере роста опухоли. Об этом свидетельствовала динамика экспрессии Flk.

Таблица б

Взаимосвязь индекса Fit C/Flt N и клинического течения увеальной меланомы

Градации индекса FUC/FUN Метастазиров ание (%) Прогрессирова ние (%) Смертность (%) Всего

<1 12,50* 12,50* 12,50* 8

>1,0 но <3 29,3 29,3 24,39 41

>3 34,48 34,48 27,29 48

Примечание: * - р<р,02 достоверность различий е сравнении с градацией >3.

Экспрессия проангиогенных факторов в различных типах УМ различалась. Смешанноклеточные УМ характеризовались не только более высокой продукцией VEGF, но и селективной рецепцией Fit С. Агрессивные эпителиоидные УМ не только чаще, но и на более высоком уровне селективно экспрессировали FltN и практически не экспрессировали Flk. Разница в продукции ангиогенных факторов, по-видимому, отражала интенсивность и особенности ангиогенгзаразличных клеточных типов УМ.

Установлена корреляционная связь между интенсивностью синтеза FltN и индексом FltN/FHC с одной стороны и степенью пигментации, баллонной дистрофией, некрозами и геморрагиями в опухоли, с другой. Так, в густо пигментированных УМ чаще имела место гиперрецепция FltN. Учитывая известный факт, что баллонная дистрофия клеток - признак клеточной гипоксии, можно утверждать, что гипоксия усиливает рецепцию Fit. Поскольку при баллонной дистрофии страдают лизосомы, где идет синтез белков, то синтез Fit переносится в ядро клетки.

Рецепция Fit зависела от локализации опухоли. Так, в меланоме радужки рецепция Fit происходила в цитоплазме, a Flk отсутствовал. Таким образом, индекс соотношения Fit C/Flt N был <1. В быстро прогрессирующих преэкваториальных УМ этот показатель превышал 3. Этот факт мы объясняли диагностикой опухолей радужки на ранних стадиях, когда экспрессия Flk еще не началась.

Экспрессия проангиогенных маркеров в УМ носила цикличный характер. По мере завершения «витка» ангиогенеза снижалась продукция белков, регулирующих его, и усиливалась пролиферация опухолевых клеток. Наблюдали вертикальную фазу роста. Затем, «старая» сосудистая сеть компрессировалась пластом нового опухолевого пролиферата, облитерировалась с развитием гипоксии. Гипоксия тормозила пролиферацию, реинициировала очередной «виток» ангиогенеза. На каждом таком «витке», благодаря повышенной проницаемости сосудистой стенки, развивающейся из-за выброса VEGF, возникали условия, благоприятные для выхода ЭК в строму опухоли и миграции опухолевых клеток в кровяное русло, а, следовательно, условия для метастазирования. Это объясняло редкие случаи (5% по литературным и собственным данным) генерализации на ранних стадиях УМ.

Связь с прогнозом. При оценке роли каждого из проангиогенных маркеров в прогнозе, была установлена критическая точка, при которой развитие метастазов происходило чаще. Степень достоверности или информативности этих показателей существенно варьировали. Так, чаще развивались метастазы у пациентов с >20% Flk-позитивных клеток в УМ. При этом, информативность прогностического теста достигает 83 % (р=0,17).

Установлено, что показатели выживаемости в группе, где VEGF < 50 % позитивных опухолевых клеток выше, чем там, где VEGF > 50 % -позитивных клеток. Прогноз совпадает в группе риска в 90% случаев.

Анализ кривых выживаемости по Каплан-Мейеру обнаружил также сильную тенденцию к положительной связи между процентом VEGF-

позитивных клеток и смертностью. Разнила в показателях между группами больных УМ А и В, экспрессия в которых оценивалась на уровне >50 % и <50% -позитивных клеток, различалась в 2,5 раза (р=0,1).

Доказана тесная прямая связь между показателем FltN, с одной стороны, и смертностью, с другой. Отрезной точкой для ядерной Fit были 33%. Анализ графических кривых по Каплан-Мейеру показал, что процесс выбывания больных в группе В (>33% Fit N) идет достоверно медленнее, чем в группе А, где показатель экспрессии Fit в ядре <33% (граф. 1).

График J

Кривые выживаемости пациентов с увеалькой нвланомой при различных показателях Flt-1 в ядре (Kaplan-Meyer)

Survival Function Estimates в SDF |

ы l.o + »--*»

и в

Е 0.5

Ь 0.0 +

* -А* А* А*---В

АА—«АВ

А-А--А А-

0 20 40 60 80 100 120 140 160 ISO 200 220 240 ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ НАБЛЮДЕНИЯ в месяцах Контроль качества анализа для каждой страты

Рг >

Test Chi-Square DF Chi-Square Log-Rank 2.7438 1 0.0Э76 Wilcoxon 1.160Э 1 0.02813

RESULT: p < 0.05

Таким образом, данные позволяют прийти к выводу, что ангиогенез в опухоли - высоко программированный процесс, коррелирующий с этапами прогрессирования опухоли. Показателями, отражающими его, могут быть, например, тип ангиогенеза, индекс плотности сосудов, а также уровни экспрессии проангиогенных факторов - VEGF, Ш-1,

Раскрыты возможности использования, степень прогностической информативности и достоверности каждого из указанных показателей ангиогенеза,а также их комбинаций.

Представленные доказательства ключевой роли ангиогенеза в патогенезе УМ свидетельствуют о необходимости включения в комплексное лечение пациентов группы риска развития метастазов антиангиогенных препаратов, направленных на подавление экспрессии VEGF или блокирование его рецепторов: Flt-1, Flk-1. Вместе с тем, при выработке стратегии антиангиогенной терапии целесообразен поиск и идентификация молекулярных факторов «васкулогенной мимикрии».

Выводы

1. Ангиогенез играет важную роль в патогенезе УМ, заключающуюся в усилении пролиферации и метастатического потенциала опухоли, а, следовательно, в повышении риска развития метастазов.

2. Для УМ характерны три типа ангиогенеза, которые можно считать последовательными стадиями «анаплазии» сосудистой сети с переходом от исходно нормальных сосудов к патологическим, развивающимся по типу «васкулогенной мимикрии».

3. Ангиогенез УМ различных гистологических типов и локализаций имеет свои специфические особенности на гистологическом и молекулярном уровне, что может обусловливать их клинические проявления: для веретеноклеточных меланом радужки характерны низкая экспрессия VEGF и Fit С на фоне отсутствия Flk, а также васкулогенез de novo; для эпителиоидных меланом любых локализаций - высокая экспрессия всех трех маркеров; распространение опухоли на цилиарное тело ассоциируется с развитием межклеточных каналов микроциркуляции по типу «васкулогенной мимикрии».

4. Определены особенности экспрессии и соэкспрессии молекулярно-биологических проангиогенных маркеров на различных стадиях опухолевого роста Пик экспрессии VEGF, Fit и Flk в опухолевых клетках ассоциировался с начальными стадиями роста и развивающейся гипоксией. Прогрессирование опухоли сопровождалось снижением

рецепции Flk и Fit. Диссеминация (Тз^ЫоМьераг) протекала на фоне реэкспрессии Flk, гипоэкспрессии VEGF и селективной рецепции Fit в цитоплазме.

5. Установлены возможности использования, степень прогностической информативности и достоверность каждого из показателей ангиогенеза. Так, прогностически неблагоприятными являются: ИПС >13,2, наличие «васкулогенной мимикрии», >20% Flk-позитивных и >50 % VEGF-позитивных опухолевых клеток, >20% VEGF-позитивных эндотелиальных клеток, индекс Fit C/Flt N >3,0.

6. Наиболее часто прогностически неблагоприятные показатели (индекс соотношения Fit N/Flt С <1, рецепция Flk>20%, ИПС >13,2) встречаются в густо пигментированных, некротических меланомах, опухолях с балонно-клеточной дистрофией и кровоизлияниями, что позволяет отнести их к клинико-гистоморфологическим факторам риска развития метастазов.

7. Представленные данные о важной роли ангиогенеза в механизмах прогрессирования УМ являются теоретическим обоснованием для антиангиогенной терапии в комплексном лечении пациентов с УМ. Обосновано назначение препаратов, подавляющих экспрессию VEGF и рецепцию Flk, Fit или препаратов, блокирующих эти рецепторы.

Практические рекомендации.

I. Разработана и предложена 3-х уровневая система прогнозирования исходов УМ, позволяющая осуществить не только первичный отбор больных в группу высокого риска развития метастазов на основе клинико-морфологических факторов, но и повысить степень его надежности с помощью анализа структурных и молекулярных показателей ангиогенеза.

И. Представленные доказательства высокой коррелятивной связи показателей ангиогенности с исходами неопластического процесса

ориентируют на комплексный подход к лечению УМ с участием патогенетически направленных антиангиогенных препаратов, ингибирующих секрецию VEGF, рецепцию Flk и/или Fit или препаратов, блокирующих эти рецепторы.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Маркеры ангиогенеза в прогнозе увеальной меланомы//Мед. иммунология.-2003.-Т.5,№3-4.-С. 346.-(Соавт.: В.Г.Лихванцева, Ю.И.Ухов, Е.В.Степанова, М.В.Верещагина, АЮ.Сутулов).

2. Молекулярные механизмы действия ронколейкина при системном введении препарата у пациентов с увеальной меланомой//Мед. иммунология.-2003.-Т.5,№3-4.-С.461-462.-(Совм. с: А.Ю.Сутулов, В.Г.Лихванцева, М.В.Верещагина).

3. Особенности апоптоза в пигментных и амеланотичных меланомах хориоидеи//Морфология.-2003.-№5.-С.78.-(Совм. с: Ю.И.Ухов, В.Г.Лихванцева, Г.Г.Зиангирова, А.Ю.Сутулов).

4. Прогнозирование метастазирования меланом хориоидеи на основе биологических молекулярных маркеров//Морфология.-2003.-№5.-С76.-(Совм. с: Ю.И.Ухов, ВТ.Лихванцева, ГХ.Зиангирова, А.Ю.Сутулов).

5. Роль апоптоза в прогрессировании меланом хориоидеи//Морфология.-2003.-№5.-С.59.-(Совм. с: В.ГЛихванцева, Г.Г.Зиангирова, А.Ю.Сутулов, Ю.И.Ухов).

6. Способ прогнозирования клинического течения увеальной меланомы на основе маркеров апоптоза (р53): Пат. 2208789 РФ, МПК7 G01 №33/50 33/53. Лихванцева В.Г., Степанова Е.В., Сутулов А.Ю., Астахова СЕ. №2002128701/14; Заявл. 28.10.02; Опубл. 20.07.03, Бюл.№20.

7. Способ прогнозирования клинического течения увеальной меланомы на основе маркеров апоптоза (Вах): Пат. 2208790 РФ, МПК7 G01 №33/50

33/53. Лихванцева В.Г., Степанова Е.В., Сутулов А.Ю., Астахова СЕ. №2002128702/14; Заявл. 28.10.02; Опубл. 20.04.03, Бюл.№20.

8. Способ прогнозирования метастазирования увеальной меланомы на основе маркеров апоптоза и пролиферации (Bax/Ki-67): Положительное решение на выдачу патента от 01.04.2003/. Заявка на изобретение № 2003106293. Лихванцева В.Г., Степанова Е.В., Сутулов А.Ю., Астахова СЕ.

9. Способ прогнозирования метастазирования увеальной меланомы на основе маркеров апоптоза (Вах/Вс1-2): Положительное решение на выдачу патента от 11.06.2004/. Заявка на изобретение № 2003106294. Лихванцева В.Г., Степанова Е.В., Сутулов А.Ю., Астахова СЕ.

10. Способ прогнозирования метастазирования увеальной меланомы на основе маркеров апоптоза (Вах/Вс1-2): Положительное решение на выдачу патента от 25.09.2004/. Заявка на изобретение № 2003106295. Лихванцева В.Г., Степанова Е.В., Сутулов А.Ю., Астахова СЕ.

11. Характер нарушений апоптоза в увеальной меланоме//Морфология.-2003.-№5.С77.-(Совм. с: Ю.КУхов, В.Г.Лихванцева, Г.Г.Зиангирова, А.Ю.Сутулов).

12. Ангиогенез в солидных опухолях//Диагностика и лечение больных онкологического профиля: Межрегион, сб. науч. тр.-Рязань,2004.-С.240-249.-(Совм. с: Ю.И. Ухов, В.Г. Лихванцева).

13. Роль ангиогенеза в прогрессировании увеальной меланомы/ЛСлинико-экспериментальные аспекты общей патологии: Межрегион, сб. науч. тр.-Рязань,2004.-С80-85.-(Совм. с: Ю.И. Ухов, В.Г. Лихванцева).

14. Специфические особенности ангиогенеза в увеальной меланоме//Рос. медико-биол. вестн. им. акад. И.П.Павлова.-2004.-№ 1-2.-С.7-12(Совм. с: Ю.И. Ухов, Г.Г. Зиангирова, В.Г. Лихванцева).

Отпечатано в РК «Легион» г. Рязань, ул. Есениа 9, оф. 29 Заказ №458. Тираж 100 экз.

185e

РНБ Русский фонд

2005-4 20665

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Астахова, Светлана Евгеньевна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

Глава 2. Материал и методы исследования.

2.1. Специальные офтальмологические и онкологические методы 38 обследования больных с увеальной меланомой.

2.2. Методы гистоморфологического анализа тканей увеальной 40 меланомы.

2.3. Метод гистоморфологического анализа ангиогенеза.

2.4. Иммуногистохимические методы исследования.

2.5. Статистические методы анализа.

2.6. Характеристика клинического материала.

Глава 3. Гистоморфологические особенности ангиогенеза в увеальной меланоме.

3.1. Количественная оценка ангиогенеза.

3.2. Анализ типа ангиогенеза.

Глава 4. Иммуногистохимический анализ экспресии проангиогенных белков-регуляторов ангиогенеза в увеальной меланоме.

4.1. Исследование продукции VEGF в клетках опухоли.

4.2. Продукция VEGF в эндотелии сосудов опухоли.

4.3. Исследование продукции рецептора Fit-1.

4.4. Исследование продукции рецептора Flk-KDR-1. 98 Обсуждение результатов. 103 Выводы. 117 Список литературы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль и специфические особенности ангиогенеза в патогенезе увеальной меланомы"

Изучение ангиогенеза является одной из фундаментальных проблем гистологии, эмбриологии и клеточной биологии. Исследование этого процесса необходимо для глубокого проникновения в сущность происходящих в организме физиологических и патологических процессов, в том числе для изучения процессов роста и метастазирования опухолей.

Увеальная меланома (УМ) - составляет менее 1 % от всех типов злокачественных опухолей, 15 % среди меланом всех локализаций и 80 % среди внутриглазных опухолей. Заболеваемость УМ по различным регионам России колеблется от 1,18 до 6,23°/00оо [3, 7, 17]. В некоторых республиках бывшего СССР, например, Казахстане зафиксирован всплеск заболеваемости до 195,9°/оооо [!]•

Несмотря на постоянное совершенствование методов диагностики и лечения частота метастазирования УМ не снижается, и 5-летний период переживают только 50 % больных [3, 7, 17, 21]. Рост заболеваемости и высокая смертность свидетельствуют о недостаточной эффективности лечения, об отсутствии способов профилактики заболеваемости и метастазирования. Низкая эффективность лечения в свою очередь объясняется отсутствием фундаментальных сведений, необходимых при разработке принципов терапии, основанной на комплексном воздействии на ключевые этапы патогенеза, определяющие прогрессирование опухоли.

Между тем, за последнее десятилетие раскрыты многие аспекты молекулярной биологии опухолевой клетки. Расшифрованы механизмы прогрессирования многих опухолей. Доказано, что наиболее агрессивные опухоли генерируют свою собственную сеть сосудистых каналов, причем ангиогенез и родственные ему механизмы являются для опухоли не только средствами устранения кислородного и метаболического дефицита, но и способом усиления агрессивности и метастазирования [5, 44, 45, 54, 84]. Представлена молекулярная концепция ангиогенеза, согласно которой этот процесс контролируется специфическими белками, получившими название молекулярно-биологических ангиогенных маркеров [54]. Их экспрессия вносит существенный вклад в скорость роста опухоли, в усиление метастатического потенциала, а, следовательно, в развитие метастазов при многих типах рака. [44, 86, 99]. Поэтому не удивительно, что количественные способы оценки ангиогенеза рассматриваются в аспекте прогноза клинического течения и исходов заболевания, а также чувствительности к противоопухолевой терапии. Сведения о рычагах управления этим процессом раскрывают широкие возможности для изменения взглядов на стратегию лечения злокачественных опухолей [4, 23,31,53,60,71,76, 80,81,98, 106, 110, 130, 131, 151].

УМ, при которой гематогенный путь метастазирования - единственный, представляет собой идеальную модель опухоли человека для изучения механизмов гематогенного диссеминирования. Отсутствие указанной информации по увеальной меланоме обусловило актуальность работы.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Цель работы: изучить гистоморфологические и молекулярные особенности ангиогенеза в увеальной меланоме с определением их роли в патогенезе и в прогнозировании неопластического процесса.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3. Сопоставить результаты иммуногистохимического, гистоморфологического анализа с традиционными клиническими и морфологическими характеристиками опухоли для оценки возможного влияния показателей ангиогенеза на особенности развития опухоли.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Определены гистоморфологические особенности и пути ангиогенеза в УМ различных гистологических типов, локализаций и на различных стадиях опухолевого роста.

Изучена панель молекулярно-биологических маркёров (VEGF, Flk-1, Flt-1), регулирующих ключевые этапы ангиогенеза в УМ.

Установлены характер, а также индивидуальный и комплексный вклад ангиогенных маркёров в прогрессирование УМ. Научно обоснована необходимость антиангиогенной терапии с учетом специфических особенностей ангиогенеза в комплексном лечении УМ.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

Разработаны и внедрены в практику тесты, позволяющие прогнозировать клиническое течение УМ на основе определения типа ангиогенеза (васкулогенез de novo, кооптирование предсуществующих сосудов и «васкулогенная мимикрия»), по количественной его оценке с помощью ИПС, по уровню экспрессии проангиогенных молекулярных маркёров (VEGF, Flk-1, Fit-1) и/или на особенностях их (Flt-1) распределения в опухолевой клетке.

Представлены рекомендации по оптимизации эффективности лечения УМ, ориентированные на особенности ангиогенеза.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные положения работы доложены на: юбилейной конференции, посвященной 100-летию кафедры глазных болезней Саратовского государственного университета

Офтальмология в начале XXI века» (г. Саратов, 2002);

5-ом Конгрессе РААКИ "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии" (Москва, 2002 г).

VII Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (г. С-Петербург, 2003г)

Всероссийской научной конференции «Реактивность и пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях», посвященной памяти член.-корр. АМН СССР, профессора Ф.М. Лазаренко (Оренбург, 2003г.)

11-ом Международном офтальмоонкологическом конгрессе (1СОО, Хайдарабад, Индия, 2004).

Научно-практической конференции «Офтальмоонкология» (г.Рязань, 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ. Приоритетность исследований подтверждена 2 патентами на изобретение и 3 положительными решениями на выдачу патента на изобретение.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Астахова, Светлана Евгеньевна

Выводы

2. Для УМ характерны три типа ангиогенеза, которые можно считать последовательными стадиями «анаплазии» сосудистой сети с переходом исходно нормальных сосудов к патологическим, развивающимся по типу «васкулогенной мимикрии».

3. Ангиогенез УМ различных гистологических типов и локализаций имеет свои специфические особенности на гистологическом и молекулярном уровнях, что может обусловливать их клинические проявления: для веретеноклеточных меланом радужки характерны низкие уровни экспрессии VEGF и Fit С на фоне отсутствия Flk, а также васкулогенез de novo; для эпителиоидных меланом любых локализаций — высокая экспрессия всех трех маркеров; распространение опухоли на цилиарное тело ассоциируется с развитием межклеточных каналов микроциркуляции по типу «васкулогенной мимикрии».

4. Определены особенности экспрессии и соэкспрессии молекулярно-биологических проангиогенных маркеров на различных стадиях опухолевого роста. Пик экспрессии VEGF, Fit и Flk в опухолевых клетках ассоциировался с начальными стадиями роста и развивающейся гипоксией. Прогрессирование опухоли сопровождалось снижением рецепции Flk и Fit. Диссеминация (T34NoMhepar) протекала на фоне реэкспрессии Flk, гипоэкспрессии VEGF и селективной рецепции Fit в цитоплазме.

5. Установлены возможности использования, степень прогностической информативности и достоверности каждого из маркеров ангиогенеза. Прогностически неблагоприятными являются: обнаружение

ИПС >13,2, наличие «васкулогенной мимикрии», >20% Flk-позитивных и более 50 % VEGF-позитивных опухолевых клеток, >20% VEGF-позитивных эндотелиальных клеток, индекс Fit C/Flt N >3,0.

6. Наиболее часто прогностически неблагоприятные показатели -индекс соотношения FltN/FltC<l, >20% Flk-позитивных опухолевых клеток, а также ИПС>13,2 встречаются в густо пигментированных, некротических меланомах, опухолях с балонноклеточной дистрофией и кровоизлияниями, что позволяет отнести их к клинико-гистоморфологическим факторам риска развития метастазов.

7. Представленные данные о важной роли ангиогенеза в механизмах прогрессирования УМ являются теоретическим обоснованием для антиангиогенной терапии в комплексном лечении пациентов с УМ. Обосновано назначение препаратов, подавляющих экспрессию VEGF, рецепцию Flk, Fit или препаратов, блокирующих эти рецепторы.

Практические рекомендации.

II. Представленные доказательства высокой коррелятивной связи показателей ангиогенности и исходов неопластического процесса ориентируют на комплексный подход к лечению УМ с участием патогенетически направленных антиангиогенных препаратов, ингибирующих рецепцию Flk и/или Fit или препаратов, блокирующих эти рецепторы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Астахова, Светлана Евгеньевна, Рязань

1.B. Клинико-биологические особенности внутриглазных меланом и пути улучшения их лечения: Дис. . д-ра мед. наук / A.B. Балмуханова. — Алма-Ата, 2003.

2. Барышников А.Ю. Оценка ангиогенеза опухолей человека /

3. A.Ю.Барышников, Е.В.Степанова, М.Р. Личиницер // Усп. совр. биологии.-2000.-№ 6.-С.599-604.

4. Бровкина А.Ф. Офтальмоонкология: достижения и перспективы / А.Ф. Бровкина // Актуальные вопросы офтальмонкологии: Сб.науч.тр. к 170-летию МОКБ.-М., 1996.- С.159.

5. Владимирская Е.Б. Биологические основы противоопухолевой терапии / Е.Б.Владимирская.-М.,2001 .-110с.

6. Дбар Ж. Экспрессия ангиогенных факторов при раке яичников III-IV стадии: Дис. . канд. мед. наук /Ж.Дбар.-М., 2003.-154с.

7. Зербино Д.Д. Внутриопухолевая пролиферация сосудов / Д.Д. Зербино, И.М. Дмитрук // Арх. патологии-1983.-№4.-С.80-83.

8. Зиангирова Г.Г. Опухоли сосудистого тракта глаза / Г.Г.Зиангирова,

9. B.Г.Лихванцева .- М.: Последнее слово, 2003.-456с.

10. Ключевая роль апоптоза в прогрессировании увеальной меланомы / Г.Г. Зиангирова, В.Г. Лихванцева, Ю.И. Ухов, А.Ю. Сутулов// Изв. РАН.-2002.-№ 5.-С.329-333.

11. Карамышева А.Ф. Ангиогенез опухоли: механизмы, новые подходы / А.Ф.Карамышева // Канцерогенез / Под ред. Д.Г.Заридзе.-М., 2000.1. C.150-165.

12. Клесов A.A. Ангиогенин — белковый фактор кровоснабжения опухолевых клеток человека / А.А.Клесов // Усп. совр. биологии.-1988 — №2.-С.264-277.

13. Козлов A.M. Экспериментальное обоснование новых подходов к патогенетической профилактике и терапии метастазов злокачественных опухолей: Дис. . д-ра мед. наук / А.М.Козлов ~М., 1997—347с.

14. Козлов Д.В. Вторичный ангиогенез — одно из звеньев становления и прогрессии рака молочной железы / Д.В. Козлов, Н.А.Зорин, О.А.Голубев // Арх. патологии-1996.-№ 4.-С.72-75.

15. Комолова Г.С. Ангиогенин-индуцируемый ангиогенез, как мишень в терапии опухолей / Г.С. Комолова, Ю.Л. Рустамьян // Эксперим. и клинич. фармакология—1998—№5.-С.81-84.

16. Копнин Б.П. Неопластическая клетка: основные свойства и механизмы их возникновения / Б.П.Копнин // Практическая онкология—2002—№ 3(4).-С.229-235.

17. Котелянский Э.О. Практическое прогнозирование исхода лечения внутриглазных опухолей / Э.О. Котелянский, А.Е.Заславская //Тез. докл. VII съезда офтальмологов УССР.-Одесса,1984.-С.317-318.

18. Лихванцева В.Г. Роль цитокинов в патогенезе и прогнозе увеальной меланомы: Дис. . д-ра мед. наук / В.Г.Лихванцева.-М., 2001.-475с.

19. Лихтенштейн А.В Опухолевый рост: ткани, клетки, молекулы / A.B. Лихтенштейн, B.C. Шапот // Патол. физиология и эксперим. терапия.— 1998.-№3.-С.25-44.

20. Мертвецов Н.П. Ангиогенин и механизм ангиогенеза / Н.П. Мертвецов, Л.Е. Стефанович—Новосибирск: Наука, 1997—254с.

21. Пожарисский K.M. Значение иммуногистохимических методик для определения характера лечения и прогноза опухолевых заболеваний / K.M. Пожарисский, Е.Е.Лееман // Арх. патологии.-2000.-№ 5 .-С.3-11.

22. Руководство по офтальмоонкологии / Под ред. А.Ф. Бровкиной.-М.: Медицина, 2001.-354с.

23. Степанова Е.В. Молекулярно-биологические маркеры рака яичников / Е.В. Степанова, А.Ю.Барышников // Европейская школа по онкологии: Сб.тр.-М., 2001.-С.24.

24. Степанова Е.В. Экспрессия молекулярно-биологических маркеров при немелкоклеточном раке легкого: Автореф. дис. . канд. мед. наук / Е.В. Степанова.-М., 2001.-24с.

25. Степанова Е.В. Антиангиогенная терапия: новые возможности лечения злокачественных заболеваний / Степанова Е.В. // Практическая онкология.-2002.-№ 3(4).-С.246-252.

26. Сутулов А.Ю. Изучение молекулярно-биологических маркеров апоптоза при увеальной меланоме: Дис. . канд. мед. наук / А.Ю.Сутулов.-Рязань,2003.-127с.

27. Шушанов С.С. Исследование роли рецепторной тирозинкиназы Flt-4 и ее лиганда VEGF-C в опухолевом росте: Дис. . канд. Мед. наук / С.С. Шушанов.-М.,2000.-225с.

28. Aharonov О. The role of cytokines in angiogenesis / O.Aharonov, G.Maftzir, G.Ben // Ocular Immunol. Inflamm.-1993.-Vol.34.-P.3199-3206.

29. Alitalo K. Signaling angiogenesis and lymphangiogenesis / K. Alitalo, E.Korpelainen // Current Opinion in Cell Biology.-1998.-Vol.l0.-P.159-164.

30. Alon T. Vascular endothelial growth factor acts as a survival factor for newly formed retinal vessels and has implications for retinopathy of permaturity / T. Alon, I.Hemo, A.Itin //Nat. Med.-1995.-Vol.l.-P.1024-1028.

31. Apte R.S. Angiostatin produced by certain primary uveal melanoma cell lines impedes the development of liver metastases / R.S. Apte, J.Y. Niederkorn, E.Mayhew//Arch. Ophthalmol.-2001.-Vol.l9,№ 12.-P.1805-1809.

32. Arbiser J.L. Oncogenic H-ras stimulates tumor angiogenesis by two distinct pathways / J.L.Arbiser, M.A.Moses, C.A. Fernandez // Proc. Natl. Acad. Sci U S A.-1997—Vol .94,№4.-P.3861 -3866.

33. Asahara T. Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis / T.Asahara, T.Murohara, A.Sullivan // Science.-1997.-Vol.275.-P.964-967.

34. Atello L. P. Vascular endothelial growth tactor in ocular fluid of patients with diabetic retinopathy and other retinal disorders / L.P.Atello, RX.Avery, P.G. Arrigg // N. Engl. J. Med.-1994.-Vol.331 .-P. 1480-1487.

35. Baldi G. Prognostic factors for survial after enucleation for choroidal melanoma / G.Baldi, F. Baldi // Int. J. Oncol.-1998.-Vol.l3,№6.-P.1185-1189.

36. Barnhill R.L. Angiogenesis and regressing cutaneous malignant melanoma / R.L.Barnhill, M.C. Mihm // Lancet.-1992.-Vol.339.-P.991-992.

37. Basilico C. The FGF family of growth factors and oncogenes / C.Basilico, D.Moscatelli // Adv. Cancer Res.-1992.-Vol.59.-P.l 15-165.

38. Biancone L. Development of inflammatory angiogenesis by local stimulation of Fas in vivo / L.Biancone, A.De Martino, V.Orlandi // J. Exp. Med.-1997.-Vol.l.-P.147-152.

39. Bicknell R. Mechanistic insights into tumour angiogenesis / R.Bicknell, A.Bikfalvi, S.Klein // Tumour Angiogenesis / Ed. by Roy Bicknell.-Oxford: University Press, 1997.

40. Bikfalvi A. The role of proteases in angiogenesis / A.Bikfalvi, S.Klein, G.Pintucci // Tumour Angiogenesis / Ed. by Roy Bicknell.-Oxford: University Press, 1997.

41. Bissel M.J. Tumor plasticity allows vasculogenic mimicry, a novel form of angiogenic switch — a role by any other name? /M.J. Bissel // Am J. Pathol — 1999.-Vol.l55.-P.676-679.

42. Blechman J.M. The fourth immunoglobulin domain of the Stem Cell Factor receptor couples ligand binding to signal transduction / J.M.Blechman, S.Lev, J.Barg // Cell.-1995.-Vol.80.-P.103-113.

43. Boocock C.A. Expression of vascular endothelial growth factor and its receptors fit and KDR in ovarian carcinoma / C.A.Boocock, S.Charnock-Jones, A.M.Sharkey // J. Natl. Cancer Inst.-1995.-Vol.87.-P.506-516.

44. Bouck N. How tumors become angiogenic / N.Bouck, V.Stellmach, S.C.Hsu // Adv. Cancer Res.-1996.-Vol.69.-P. 135-174.

45. Brem S.S. Angiogenesis: a marker for neoplastic transformation of mammary papillary hyperplasia / S.S.Brem, P.M. Gullino, D.Medina // Science.—1997.— Vol.l95.-P.880-881.

46. Brown L.F. Increased expression of vascular permeability factor (vascular endothelial cells and its receptors in kidney and bladder carcinoma / L.F. Brown, B.Berse, R.WJackman // Am. J. Pathol.-1993.-Vol.143.-P.1255-1262.

47. Brown L.F. Expression of vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) and its receptors in breast cancer / L.F. Brown, B.Berse, RWJackman // Hum. Pathol.-1995.-Vol.26.-P.86-91.

48. Cao Y. Vascular endothelial growth factor C induces angiogenesis in vivo / Y.Cao, P.Linden, J.Farnebo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1998.-Vol.95.-P. 14389-14394.

49. Carmeliet P. Mechanisms of angiogenesis and arteriogenesis / P.Carmeliet // Nature Med.-2000.-Vol.6.-P.3 89-395.

50. Carnochan P. The vascularity of cutaneous melanoma: a quantitative histological study of lesions 0,85-1,25 mm in thickness / P.Carnochan, J.C. Briggs, G.Westbury // Br. J. Cancer.-199I.-Vol.67.-P.102-107.

51. Carter W.B. HER2 regulatory control of angiopoietin-2 in breast cancer / W.B.Carter, M.D.Ward // Surgery.-2000.-Vol.l28,№2.-P. 153-158.

52. Castle V.P. High level thrombospondin 1 expression in two NIH 3T3 cloned lines confers serum- and anchorage-independent growth / V.P.Castle, X.Ou, K.O'Rourke // J.Biol.Chem.-1993.-Vol.268.-P.2899-2903.

53. Cherrington M. New Paradigm for the treatment of Cancer: The role of anti-angiogenesis agents / M. Cherrington, M.Laura Strawn.-San Francisco (CA),1999.-P:138.

54. Chistofalli M. Angiogenesis modulation in cancer research: novel clinical approaches / M.Chistofalli, C.Charnsangavej, G.N.Hortobagyi // Nature t Reviews.-2002.-Vol. 1 .-P.415-426.

55. Christine A. Expression of vascular endothelial growth factor and its receptors Fit and KDR in Ovarian Carcinoma / A.Christine, D.Boocock, S. Charnock-Jones // J.of the National. Cancer Institute.-1995.-Vol.87.~P.506-516.

56. Christofori G. Molecular dissection of multi-stage tumorigenesis in transgenic mice / G.Christofori, D.Hanahan // Semin. Cancer Biol.-1994.-Vol.l,№5-P.3-12.

57. Cottam D.W. Cytokine modulation of gelatinase expression in a series of human melanoma sell lines / D.W.Cottam, I.G.Rennie, R.C.Rees // Cytokine.-1992.-Vol.3 ,№ 1 .-P.460-472.

58. Cristofori G. The role of fibroblast growth factors in tumour progression and angiogenesis / G. Cristofori // Tumour Angiogenesis / Ed. by Roy Bicknell.-Oxford: University Press, 1997.

59. Dameron K.M. Control of angiogenesis in fibroblasts by p53 regulation of thrombospondin-1 / K.M.Dameron, O.V.Volpert, M.A.Tainsky // Science-1994.-Vol.265.-P. 1582-1584.

60. Damsky C.H. Trophoblast pseudo-vasculogenesis: faking it with endothelial adhesion receptor / C.H.Damsky, S.J.Fisher // Curr. Opin. Cell Biol.-1998.-Vol.l9.-P.660-666.

61. Dan K. Plasminogen activators, tissue degradation and cancer / K.Dan, P.A. Andreasen, J.Grondahl-Hansen // Adv. Cancer Res.-1985.-Vol.44,№1.-P.155-161.

62. Danen E.H.J. Emergence of a5|31 fibronectin- and vitronectin-receptor expression in melanocytic tumor progression / E.HJ.Danen, P.J.M. Berge, G.N.P. van Muijen // Histopathology.-1994.-Vol.24.-P.249-256.

63. Daniels K J. Expression of type VI collagen in uveal melanoma: its role in pattern formation and tumor progression / K.J.Daniels, H.C.Boldt, J.A. Martin // Lab. Invest.-1996.-Vol.75,№l.-P.55-66.

64. Davis S. Isolation of angiopoietin-1, a ligand for the tie2 receptor, by secretion trap expression cloning / S.Davis, T.H. Aldrich, P.F. Jones // Cell.-1996.-Vol.87.-P.l 161-1169.

65. Davis S. The angiopoietins: Yin and Yang in angiogenesis / S.Davis, G.Yancopoulos // Curr. Top. Microbiol. Immunol.-1999.-Vol.237.-P.173-185.

66. De Jong J.S. Expression of growth factors, growth inhibiting factors and their receptors in invasive breast cancer I and II / J.S.De Jong, P.J.Van Diest, P.Van der Valk // J. Pathol.-1998.-Vol.184.-P. 44-57.

67. De Vries T.J. Components of plasminogen activation system in uveal melanoma a clinico-pathological study / T. J. De Vries, C.M. Mooy, M. R. VanBalken// J. Pathol.-1995.-Vol.175,№l.-P.59-67.

68. Dumont A.E. Factor Vlll-related antigen / A.E.Dumont // J. Natl. Cancer Inst.-1993.-Vol.85.-P.674.

69. Dumont D. Tek, a novel tyrosine kinase gene located on mouse chromosome 4, is expressed endothelial cells and their presumptive precursors / D.Dumont, T.Yamaguchi, R.Conlon // Oncogene.-1992.-Vol.7.-P.1471-1480.

70. Ellis L.M. Tumor Angiogenesis / L.M.Ellis // Horizons in Cancer Res.-2002.-Vol.3,№l .-P.4-22.

71. Fajardo L.F. Dual role of TNF in angiogenesis / L.F.Fajardo, H.H.Knan, V.Kawalski // Am. J. Pathol.-1992.-Vol.l40,№3.-P.539-544.

72. Ferrara N. Pituitary follicular cells secrete a novel heparin-binding growth factor specific for vascular endothelial cells / N.Ferrara, W.J.Henzel // Biochem. Biophys. Res. Commun.-1989.-Vol.l61.-P.851-858.

73. Fidler I.J. Interferon-mediated antiangiogenic therapy / I.J. Fidler, D.Bielenberg // Science.-1992.-Vol.34,№4.-P.4-9.

74. Folberg R. The morfologic characteristics of tumor blood vessels as a marker of tumor progression in primary human uveal melanoma a matched case-control study / R.Folberg, J.Pee'r, L.M.Gruman // Hum. Pathol-1992.-Vol.23 .-P. 1298-1305.

75. Folberg R. The prognostic value of tumor blood vessel morphology in primary uveal melanoma / R.FoIberg, V.Rummelt, R.Parys-Van Ginderdeuren // Ophthalmology.-1993 .-Vol. 100.-P. 13 89.

76. Folberg R. Tumor progression in ocular melanomas / R.Folberg // J. Invest. Dermatol.-1993.-Vol.l00.-P.3266-3336.

77. Folberg R. The microcirculation of choroidal and ciliary body melanomas / R.Folberg, M.Menaffey, M.Lynn Gardner // Eye.-1997.-Vol.ll.-P.227-238.

78. Folberg R. Vasculogenic mimicry and tumor angiogenesis / RFolberg, M.J. Hendrix // Am. J. of Pathology .-2000.-Vol. 156, № 2.-P.361-371.

79. Folkman J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications / J.Folkman // N. Eng. J. Med.-1971.-Vol.285.-P.l 182-1186.

80. Folkman J. Induction of angiogenesis during the transition from hyperplasia to neoplasia / J.Folkman, K.Waston, D.Ingber // Nature-1989—Vol.339-P.58-61.

81. Folkman J. Whats is evidens that tumours are angiogenesis dependent? / J.Folkman//J. Natl. Cancer. Inst.-1990.-Vol.82,№3.-P.4-6.

82. Folkman J. Angiogenesis inhibitors generated by tumors / J.Folkman // Mol. Med. Physiol—1991 .-Vol. 1 .-P. 120-122.

83. Folkman J. The role of angiogenesis in tumor growth / J.Folkman // Semin. Cancer. Biol.-1992.-Vol. 12,№2.-P.303-324.

84. Folkman J. Angiogenesis in breast cancer / J.Folkman // J. Clin. Oncol.-1994.-Vol. 12,№ 1 .-P.441-443.

85. Folkman J. Tumor angiogenesis / J.Folkman // Cancer Medicine.-Baltimore, MD: Williams and Wilkins, 1997.-P. 181-204.

86. Foss A.J. Microvessel count survival in uveal melanoma / A.J.Foss, RA.Alexander, L.W.Jafferies // Cancer Res.-1996.-Vol.56,№13.-P.29000-2903.

87. Fox S.B. High levels of uPA and PAI-I arc associated with highly angiogenicbreast carcinoma / SB.Fox, N.Stuart, KSmith // J. Pathol.-1993.-Vol.170.-P.388.

88. Fraizier W. Thrombospondin / W.Fraizier, C.Prater, D.Jaye // J. Pathol.-1994.-P.91.

89. Fujimoto J. Expression of platelet-derived endothelial cell growth factor and its mRNA in ovarian cancers / J.Fujimoto, S.Ichigo, H.Sakaguchi // Cancer Lett.-1998.-Vol. 126,№1 .-P.83-88.

90. Furukawa T. Angiogenic factor / T.Furukawa, A.Yoshimura, T.Sumizawa // Nature.-1992.-Vol.356.-P.668.

91. Gasparini G. Quantification of intratumoral vascularization predicts metastasis in human invasive solid tumours / G.Gasparini // Oncol.Rep.— 1994.-Vol.L-P.7-12.

92. Gasparini G. Clinical significance of the determination of angiogenesis in human breast cancer. Update of the biological background and overview of the Vicenza studies / G.Gasparini // Eur.J. Cancer-1996.-Vol.32A.-P.2485-2493.

93. Anastassiou G. Expression of VLA-2, VLA-3, and av integrin receptors in uveal melanoma: association with microvascular architecture of the tumour and prognostic value / G. Anastassiou, H. Schilling // Br. J. Ophthalmol.-2000.-Vol.84.-P.899-902.

94. Graeber T.G. Hypoxia-mediated selection of cells with diminished apoptotic potential in solid tumours / T.G.Graeber, C.Osmanian, T.Jacks // Nature— 1996.-Vol.379.-P.88-91.

95. Gragoudas E.S. Survival of patients with metastases from uveal melanoma / E.S.Gragoudas, K.M.Egan, J.M.Seddon // Ophthalmology.-1991.-Vol.98,№7.-P.383-3 89.

96. Grugel S. Stimulate expression of the vascular endothelial growth factor in NIH 3T3 cells / S .Grugel, G.Finkenzeller, K Weindel // J. Biol. Chem.-1995 .-Vol.270,№43 .-P.25915-2599.

97. Hammerson F. The fine structure of tumor blood vessels. I. Participation of non endothelial cells in tumor angiogenesis / F.Hammerson, B.Endrich, K.Messmer // Int. J. Microcirc. Cli. Exp.-1985.-Vol.4.-P.41-43.

98. Hanahan D. Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic swich during tumorigenesis / D.Hanahan, J.Folkman // Cell—1996.-Vol.86.-P.353-364.

99. Hanahan D. Signaling vascular morphogenesis and maintenance /I

100. D.Hanahan // Science. Washington DC.-1997.-Vol.277.-P.48-50.

101. Himelstein B.P. Transcriptional activation of the matrix metalloproteinase-9 gene in an H-ras and v-myc transformed rat embryo cell line / B.P.Himelstein, EJ.Lee, H.Sato // Oncogene.-1997.-Vol.l6,№14.-P.1995-1998.

102. Hiraoka N. Matrix metalloproteinases regulate neovascularization by acting as pericellular fibrinolysins / N.Hiraoka// Cell-1998—Vol.91.-P.365-377.

103. Holash J. New model of tumor angiogenesis: dynamic balance between vessel regression and growth mediated by angiopoetins and VEGF / J.Holash, S.J.Wiegand, G.D.Yancopoulos // Oncogene.-l999-Vol. 18.-P.5356-5362.

104. Holash J. Vessel cooption, regression, and growth in tumors mediated by angiopoietins and VEGF / J.Holash, P.Maisonpierre, D.Compton // Science.-Washington DC.-1999.-Vol.284.-P. 1994-1998.

105. Ingberg D. Extracellular matrix and cell shape: potential control point for inhibition of angiogenesis / D.Ingberg // J. Cell. Biochem—1991—Vol.116.— P.236-241.

106. Ishitsuka H. Capecitabine: an orally available fluoropyrimidine with tumor selectivity / H.Ishitsuka, M.Miwa, T.Ishikawa // Proc. Am. Assoc. Cancer Res.-1995.-Vol.36.-P.2426.

107. Jan G. Rennie Uveal melanoma: tumour phenotype and metastatic potential / G.Jan // Eye.-1997.-Vol.l 1.-P.239-242.

108. Kath R. Prognosis and treatmant of disseminated uveal melanoma / R.Kath, J. Haungs // Cancer.-1993 .-Vol.72,№4.-P.2219-2223.

109. Keck P. J. Vascular permeability factor, an endothelial cell mitogen related to PDGF / P. J.Keck, S. D.Hauser, G. Krivi // Science.-1989-Vol. 13.—P.2345-2351.

110. Kerbel R Clinical translation of angiogenesis inhibitors / RKerbel, J.Folkman //Nature Reviews.-2002.-Vol.2.-P.727-739.

111. Klein S. Basic fibroblast growth factor modulates intrgrin expression in microvascular endothelial cells / S.Klein, FG.Giancotti, M.Presta // Mol. Biol. Cell-1993 —Vol.4—P.973-982.

112. Koblizek T. Angiopoietin-1 induces sprouting angiogenesis in vitro / T.Koblizek, C.Weiss, G.Yancopoulos // Curr. Biol.-1998.-Vol.8.-P.529-532.

113. Kodama J. Thrombospondin-1 and -2 messenger RNA expression in epithelial ovarian tumor / J.Kodama, I.Hashimoto, N.Seki // Anticancer Res-2001.-Vol.21,№ 4.-P.2983-2987.

114. Konerding M.A. Impact of fibroblast growth factor-2 on tumor microvascular architecture: atridimensional morphometric study / M.A. Konerding, E.Fait, C.Dimitropolou // Am J. Pathol.-1998.-Vol.152.-P.1607-1616.

115. Kvanta A. Expression of vascular endothelial growth factor in retinoblastoma but not in posterior uveal melanoma / A.Kvanta, B.Steen, S. Seregard // Exp. Eye. Res.-1996.-Vol.63,№5.-P.511-518.

116. Lane A.M. An evaluation of tumor vascularity as a prognostic indicator in uveal melanoma / A.M.Lane, K.M.Egan, R.S.Gradoudas // Melanoma Res.— 1997.-Vol.7.-P.237-242.

117. Liotta L.A. Quantitative relationships of intravascular tumor cells, tumor vessels, and pulmonary metastases following tumor implantation / L.A.Liotta, J.Kleinerman, G.M.Saidel // Cancer Res-1974.-Vol.34.-P.997-1004.

118. Liu B. Melanoma cell lines express VEGF receptor KDR and respond to exogenously added VEGF / B.Liu, H.M.Earl, D.Baban // Biochem. Biophys. Res. Commun—1995.-Vol.217.-P.721 -727.

119. Maisonpierre P.C. Angiopoietin-2 a natural antagonist for Tie 2 that disrupts in vivo angiogenesis / P.C.Maisonpierre, C.Suri, P.FJones // Science.- 1999.-Vol.277.-P.55-60.

120. Maniotis A J. Vascular channel formation by human melanoma cells in vivo and in vitro: vasculogenic mimicry / A .J.Maniotis, R.Folberg, A.Hess // Am J. Pathol.-1999.-Vol.l55.-P.739-752.

121. McCawley L.J. Matrix metalloproteinases: multifunctional contributors to tumor progression / L.J.McCawley, L.M.Matrisian // Mol. Medicine Today.-2000.-Vol.6.-P.149-156.

122. Meade-Tollin L. Differential expression of matrix metalloproteinases in activated c-ras-Ha-transfected immortalized human keratinocytes / L.Meade-Tollin, P.Boukamp, N.Fusenig // Br. J. Cancer.-1998.-Vol.77,№5.-P.724-730.

123. Millauer B. High affinity VEGF binding and developmental expression suggest Flk-1 as a major regulator of vasculogenesis and angiogenesis / 1 B.Millauer, S.Wizigmann-Voos, H.Schnurch // Cell.-1993.-Vol.72.-P.835846.

124. Miller J. Vascular endothelial growth factor/vascular permeability factor is temporally and spatially correlated with ocular angiogenesis in a primate model / J.Miller, A.Adamis, S. Dhima // Am. J. Patol.-1994.-Vol.145.-P.574-584.

125. Minchenko A. Hypoxic stimulation of vascular endothelial growth factor expression in vitro and in vivo / A. Minchenko, T.Bauer, S. Salceda // Lab. Invest-1994.-Vol.71 .-P.3 74-3 79.

126. Moghaddam A. Thymidine phosphorylase/platelet-derived endothelial cell growth factor: an angiogenic enzyme in tumour Angiogenesis / A.Moghaddam, R.Choudhuri, R.Bicknell // Tumour Angiogenesis / Ed. by Roy Bicknell.-Oxford: University Press, 1997.

127. Mukhopadhyay D. Hypoxic induction of human vascular endothelial growth factor expression through c-Src activation / D.Mukhopadhyay, L.Tsiokas, V.P. Sukhatme // Cancer Res.-1995.-Vol.55.-P.6161-6165.

128. Neufeld G. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors / G.Neufeld, T.Cohen, S.Gengrinovitch // FASEB J.-1999.-Vol.l3.-P.9-22.

129. O'Reilly M.S. Angiostatin: A novel angiogenesis inhibitor that mediated -the supression of metastasis by a Lewis lung carcinoma / M.S.O'Reilly, L.Holmgren // Cell.-1994.-Vol.79,№7.-P.315-328.

130. O'Reilly M.S. Endostatin: an endogeneous inhibitor of angiogenesis and tumor growth. / M.S.O'Reilly // Cell.-1994.-Vol.88.-P.277-285.

131. Olson T.A. Vascular permeability factor gene expression in normal and neoplastic human ovaries / T.A.Olson, D.Mohanraj, L.F.Carson // Cancer Res.-1994.-Vol.54.-P.276—280.

132. Paley P. Vascular endothelial growth factor expression early stage ovarian carcinoma / P.Paley, K.Staskus, K.Gebhard // Cancer.-1997.-Vol.80.-P.98-106.

133. Park J.E. The vascular endothelial growth factor (VEGF) isoforms: differential deposition into the subepithelial extracellular matrix andbioactivity of ECM-bound VEGF / J.E.Park, G.A.Keller, N.Ferrara // Mol. Biol.Cell.-1993Vol.4.-P. 1317-1326.

134. Pe'er J. Hypoxia-induced expression of vascular endothelial growth factor by retinal cells is a common factor in neovascularizing ocular diseases / J. Pe'er, D.Shweiki, D.Itin // Lab. Invest.-2002.-Vol.72.-P.63 8-645.

135. Peters K.G. Expression of Tie2/Tek in breast tumor vasculature provides a new marker for evaluation of tumor angiogenesis / K.G. Peters, A.Coogan, D.Berry // Br. J. Cancer-1998—Vol.77.-P.51—56.

136. Pierce E. Vascular endothelial growth factor/ vascular permeability factor expression in a mouse model of retinal neovascularization / E.Pierce, R. Avery, E.Foley//Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1994.-V.92.-P.905-909.

137. Plate K.H. Vascular endothelial growth factor is a potential tumour angiogenesis factor in human gliomas in vivo / K.H.Plate, G.Breier, H.A. Weich // Nature.-1992.-Vol.359.—P.845-848.

138. Plouet J. Maintenance of the angiogenic phenotype of retinal capillary endothelial cells by VEGF / J.Plouet, H.Hutchings, H. Krassimira // XIII ICER: Abstr. Book.-1998.-Abstr.315.-P.91.

139. Pratt D.A. Thrombospondin in malignant and non-malignant breast tissue / D.A.Pratt, W.R.Miller, J.Dawes // Europ. J. Cancer Clin. Oncol.-1989-Vol.25.-P.343.

140. Qin Y. Angiopoietin-2 Is Implicated in the Regulation of Tumor Angiogenesis / Y.Qin, I. Stamenkovic // American Journal of Pathology — 2001.-Vol.158,№ 2.-P.563-570.

141. QuinnT.P. Fetal liver kinase 1 is a receptor for vascular endothelial growth factor and is selectively expressed in vascular endothelium / T.P. Quinn// Proc. Natl. Acad. Sei USA.-1993.-Vol.90.-P.7533-7537.

142. Rak J. Mutant ras oncogenes upregulate VEGF/VPF expression: implications for induction and inhibition of tumor angiogenesis / J.Rak, Y.Mitsuhashi, L.Bayko // Cancer Res.-1995.-Vol.55,№ 20.-P.4575-4580.

143. Roberts D.D. Platelet thrombospondin mediates attachment and spreading of human melanoma cells / D.D.Roberts, J.A.Sherwood, V.Ginsburg // J. Cell Biol.-1987—Vol.104.—P. 131.

144. Rummelt V. Microcirculation architecture of melanocytic nevi and malignant melanomas of the ciliary body and choroid: a comparative histologic and ultrastructural study / V.Rummelt, L.M. Gardner, R.Folberg // Ophthalmology.-1994.-Vol. 101 .-P.718-727.

145. Mesiano S. Role of Vascular Endothelial Growth Factor in Ovarian Cancer / S.Mesiano, N.Ferrara, R.B.Jaffe // American Journal of Pathology.— 1998.-Vol.153.-P. 1249-1256.

146. Shima D.T. Hypoxic induction of endothelial cell growth factors in retinal cells: identification and characterization of vascular endothelial growth factor as a mitogen / D.T.Shima, A.P.Adamis, N.Ferrara // Mol. Med—1995-Vol.1.-P. 182-193.

147. Shweiki D. Patterns of expression of vascular endothelial growth factor and VEGF receptors in mice suggest a role in hormonally regulatedangiogenesis / D.Shweiki, A.Itin, G.Neufeld // J. Clin. Invest.-1993.-Vol.91.-P.2235-2243.

148. Shweiki D. Vascular endothelial growth factor induced by hypoxia may mediate hypoxiainitiated angiogenesis / D.Shweiki, A.Itin, D.Soffer // Nature.-1992.-Vol.359.-P.843-845.

149. Sidky Y.A. Inhibition of angiogenesis by interferons: effect on tumor- and lymphocyte-induced vascular responses / Y.A.Sidky, E.C.Borden // Cancer Res.-1987.-Vol.47.-P.5155-5161.

150. Srivastava A. The prognostic significance of tumor vascularity in intermediate-thickness (0.76-4.0 mm thick) skin melanoma. A quantitative histologic study / A.Srivastava, P.Laidler // Am. J. Pathol.-1988.-Vol. 133.-P.419-423.

151. Stitt A. Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors is regulated in eyes with intra-ocular tumours / A.Stitt, D.Simpson, C.Boocock // J. Pathol.-1998.-Vol.l86,№ 3.-P.306-312.

152. Stone J. Development of retinal vasculature is mediated by hypoxia-induced endothelial growth factor expression by neuroglia / J.Stone, A.Itin, T.Alon // J. Neurosci.-1995.-Vol. 15.-P.4738-4747.

153. Stratmann A. Cell-type specific expression of angiopoietin-1 and angiopoietin-2 suggests a role in glioblastoma angiogenesis / A.Stratmann, W.Risau, K Plate // Am J. Pathol.-1998.-Vol.l53.-P.1459-1466.

154. Suri C. Requisite role of angiopoietin-1, a ligand for the tie2 receptor, during embryonic angiogenesis / C.Suri, P.Jones, S.Patan // Cell.-1996 — Vol.87.-P.l 171-1180.

155. Toi M. Tumor angiogenesis is an independent prognostic indicator inprimary breast carcinoma / M.Toi, J.Kashitani, T.Tominaga // Int. J. Cancer-1993.-Vol.55.-P.371—374.

156. Toi M. Tumor angiogenesis in breast cancer: its importance as a prognostic indicator and the association with vascular endothelial growth factor expression / M.Toi, K.Inada, H.Suzuki // Breast Cancer Res. Treatment.-1995—Vol.36.-P.193-204.

157. Tolentino M.J. Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate / M.J.Tolentino, J.W.Miller, E.S.Gragoudas // Arch. Ophthalmol.-1996.-Vol.l 14—P.964-970.

158. Tolsma S. Peptides derived from two separate domains of the matrix protein thrombospondin-1 have anti-angiogenic activity / S.Tolsma, O.Volpert, D.Good //J.Cel. Biol.-1993.-Vol.122.-P.497.

159. Tomozawa S. Cyclooxygenase-2 overexpression correlates with tumor recurrence,especially haematogenous metastasis of colorectal cancer / S. Tomozawa//Br. J. Cancer.-2000.-Vol.83 -P.324-328.

160. Tsuji M. Alterations in cellular adhesion and apoptosis in in epithelial cells overexpressing prostaglandin endoperoxide synthase 2 / M.Tsuji, R.N.DuBois // Cell.-l 995.-Vol.83.-P.493-501.

161. Tsuyoshi E. Angiopoietin-2 Is Related to Tumor Angiogenesis in Gastric Carcinoma: Possible in Vivo Regulation via Induction of Proteases / E.Tsuyoshi, I.Hiroshi, T.Shinji // Cancer. Res.-2001.-Vol.61.-P.2145-2153.

162. Tuszynski G.P. Thrombospondin, a potentiator of tumor cell metastasis / G.P.Tuszynski, T.B.Gasic, V.L.Rothman / Cancer Res.-1987.-Vol.47.-P.4130.

163. Van Hoef M.E. Assessment of tumour vascularity as a prognostic factor in lymph node negative invasive breast cancer / M.E.Van Hoef, W.F.Knox, S.S.Dhesi // Eur. J. Cancer.-1993.-Vol.29A.-P.l 141-1145.

164. Varani J. Thrombospondin-induced attachment and spreading of human squamous carcinoma cells / J.Varani, V.M.Dixit, S.E.Fligel // Exper. Cell. Res.-1986.-Vol.105.-P.376.

165. Vermeulen P.B. Quantification of angiogenesis in solid human tumours: An international consensus on the methodology and criteria of evaluation / P.B.Vermeulen, G.Gasparini, S.B.Fox / Eur. J. Cancer.-1996.-Vol.32A-P.2474-2484.

166. Vinores S.A. Blood ocular barrier breakdown in eyes with ocular melanoma A potential for vascular endothelial growth factor/vascular permeability factor / S.A.Vinores, M.Kuchle, J.Mahlow // Am. J. Pathol.-1995.-Vol. 147,№5.-P. 1289-1297.

167. VolpertO.V. Inducer-stimulated Fas targets activated endothelium for destruction by anti-angiogenic thrombospondin-1 and pigment epithelium-derived factor /O.V.Volpert, T.Zaichuk, W.Zhou // Nat. Med.-2002.-Vol. 8.-P.349-357.

168. Volpert O.V. Sequential development of an angiogenic phenotype by human fibroblasts progressing to tumorigenicity / O.V.Volpert, K.M.Dameron, N.Bouck // Oncogene.-1997.-Vol.l4.-P.1495-1502.

169. Wang JM. Breast carcinoma: comparative study of tumor vasculature using two endothelial cell markers / J.M.Wang, S.Kumar, D.Pye // J. Natl. Cancer. Inst.-l994.-Vol.86.-P.386-388.

170. Wang J.M. A monoclonal antibody detects heterogeneity in vascularendothelium of tumours and normal tissues / J.M.Wang, S. Kumar, D. Pye // Int. J. Cancer.-l 993 .-Vol.54.—P.363-3 70.

171. Warren B.A. The vascular morphology of tumours / B.A.Warren. // Tumour blood circulation: angiogenesis, vascular morphology and blood flow of experimental tumours / red. H. I. Peterson.-CRC Press, Boca Raton,1995.-P.1-7.

172. Warren R. S. Regulation of vascular endothelial growth factor of human colon cancer tumorigenesis in a mouse model of experimental liver metastasis / R. S.Warren, H.Yuan, M.R.Malti // J. Clin. Invest.-1995.-Vol.95.-P. 1789-1997.

173. Weidner N. Tumour angiogenesis correlates with metastasis in invasive prostate carcinoma / N. Weidner, P.R.Carrol, J.Flaz // Amer. J. Pathol.-1993.-Vol. 143 ,№5.-P.401-409.

174. Weidner N. Factor VHI-related antigen / N. Weidner // J. Natl. Cancer. Inst.-1993.-Vol.85.-P.674-675.

175. Weidner N. Intratumoral microvessel density as a prognostic factor in cance / N. Weidner // Am. J. Pathol.-1995.-Vol.147.-P.l-l 1.

176. Weidner N. Tumoral vascularity as a prognostic factor in cancer patients-the evidence continues to grow / N. Weidner // J. Pathol.-1998.-Vol. 184,-P.l 19-122.

177. Wight T.N. Light microscopic immunolocation of thrombospondin in human tissues / T.N.Wight, G.J.Raugi, S.Mumby // J. Histochem. Cytochem.-1985 .-Vol.33 .-P.295.

178. Witzenbichler B. Chemotactic properties of angiopoietin-1 and -2, ligands for the endothelial-specific receptor tyrosine kinase Tie 2 / B.Witzenbichler,

179. P.C.Maisonpierre, P Jones // J. Biol. Chem.-1998.-Vol.273-P. 1851418521.

180. Wong A.L. Tie2 expression, and phosphorylation in angiogenic, and quiescent adult tissues / A.L.Wong, Z.A.Haroon, S.Werner // Circ. Res — 1997.-VoI.81 -P.567-574.

181. Yancopoulos G.D. Vascular-specific growth factors and blood vessel formation / G.D.Yancopoulos, S.Davis, N.W.Gale // Nature.-2000.-Vol.407.-P.242-248.

182. Yuan H.T. Hypoxia up-regulates angiopoietin-2, a Tie-2 ligand, in mouse mesangial cell / H.T.Yuan, S.P.Yang, A.S.Woolf // Kidney Int.-2000-Vol.58,№5.-P. 1912-1919.

183. Yokoyama Y. Synergy between Angiostatin and Endostatin: Inhibition of Ovarian Cancer Growth / Y. Yokoyama, D.Mohanraj, W.Arjan // Cancer Res.-2000.-Vol.60.-P.2190-2196.

184. Zagzag D. In situ expression of angiopoietins in astrocytomas identifies angiopoietin-2 as an early marker of tumor angiogenesis / D.Zagzag, A.Hooper, D. R.Friedlander // Exp.Neurol.-1999.-Vol.159.-P.391-400.

185. Zhou Y. Human cytotrophoblasts adopt a vascular phenotype as they differentiate. A strategy for successful endovascular invasion? / Y.Zhou, C.H. Damsky, S.J.Fisher//J. Clin .Invest.-1997.-Vol.99.-P.2139-2151.

Информация о работе

Астахова, Светлана Евгеньевна
кандидата медицинских наук
Рязань, 2004
ВАК 03.00.25

Диссертация

Роль и специфические особенности ангиогенеза в патогенезе увеальной меланомы - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы