Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Морфологическая характеристика иммунной системы птиц при заражении токсигенными бактериями Yersinia pseudotuberculosis

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Морфологическая характеристика иммунной системы птиц при заражении токсигенными бактериями Yersinia pseudotuberculosis"

ИБРАГИМОВА КАРИНА АХМЕДОВНА

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ПТИЦ ПРИ ЗАРАЖЕНИИ ТОКСИГЕННЫМИ БАКТЕРИЯМИ Yersinia pseudotuberculosis

06.02.02 — Ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ 5 И 2013

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

МОСКВА 2013

005541876

Работа выполнена на кафедре «Инфекционные и паразитарные болезни» ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» Министерства образования и науки РФ

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Ленченко Екатерина Михаиловна

Официальные оппоненты: Селезнев Сергей Борисович,

доктор ветеринарных наук, профессор ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» профессор кафедры «Клиническая ветеринария»

Капустин Андрей Владимирович,

кандидат ветеринарных наук, доцент, зав. лабораторией качества и стандартизации бактерийных лекарственных средств для ветеринарного применения ФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ВГНКИ)

Ведущая организация: Государственное научное учреждение

«Научно-исследовательский институт птицеперерабатывающей промышленности» Россельхозакадемии РФ (ГНУ «ВНИИПП»)

Защита состоится « г. в «ЛЛ^ часов на заседании

диссертационного совета Д 212.148.09 при ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» (109316, Москва, ул. Талалихина, 33), ауд. 290.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО

«Московский государственный университет пищевых производств».

—

Автореферат разослан

>5 2013 г.

Автореферат размещен на официальном сайте

Министерства образования и науки РФ http://vak.ed.ru/ и ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» mgupp.ru ^

Ученый секретарь диссертационного совета, I / /у__>

доктор ветеринарных наук, профессор ■^Уу' / Андрианова Т.Г.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Микроорганизмы Yersinia pseudotuberculosis (возбудители псевдотуберкулеза), в соответствии с классификацией «Bergy's manual... 1984-1989», включены в род Yersinia. Генотип патогенных штаммов Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica содержит хромосомные и плазмидные детерминанты, называемые «плазмидой вирулентности иерсиний» -«plasmidasociated with Yersinia virulence» (pYV) (Езепчук Ю.В., 1977; Полоцкий Ю.Е., 1981; Пашин А.Ю. и соавт., 1984; Дайтер А.Б. и соавт., 1987; Тимченко Н.Ф., 1989; 2004; Ценева Г.Я., 1997; Балахонов С.В., 1988; Исачкова Л.М. и соавт., 1993; Мавзютов А.Р., 2001., Шурыгина И.А., 2004; Светоч Т.Э., 2012; Kaneuchi С., 1989; Haydshidani II., 1994; Singh S„ 1994; Brubaker R.R., 1983; Kapperud G. et al„ 1987; Robins-BrowneR-M. et al, 1993; China B. et al., 1994; Cornelis G. et al., 1994; Czemomysy-Furowicz, D. 1996; Bond M. et al. 2009; OkworiA. et al., 2007; Thisted Lambertz S. et al., 2008; Long C. et al., 2010; Price et al, 2012).

Псевдотуберкулез у птиц (куры, индейки, фазаны, серые куропатки, утки, голуби, канарейки) протекает остро, подостро, хронически, латентно (Душук P.D., 1989; Конопаткин А.А. и соавт., 1993; Сидоров М.А. и соавт., 1995; Скородумов Д.И. и соавт., 2005; Бессарабов Б.Ф. и соавт., 2007). При исследовании 1200 проб иатматериала птицы было выделено 184 культуры микроорганизмов, из числа которых 2,1 % составили Y. pseudotuberculosis. Указанные бактерии были выделены с поверхности и из тушек птицы, яиц и продуктов, приготовленных из мяса птицы, а также с упаковочной тары (Каландадзе Е. П., 1991; Зон М.Г., 2001; Bond М. et al., 2009). При бессимптомной персистенции иерсиний в организме бактерионосителей может происходить контаминация пищевого сырья, что обусловливает социальную значимость профилактических мероприятий в начале «пищевой цепи» (в птицеводстве и перерабатывающей промышленности) (Санитарные правила. 3.1.094-96; Ветеринарные правила 13.3.1318-96).

При организации профилактических мероприятий и изыскании средств борьбы с инфекционными болезнями приоритетной задачей является раскрытие механизмов взаимодействия в системе «возбудитель-макроорганизм», с последующей практической реализацией полученных знаний для разработки эффективных методов диагностики. При индикации и идентификации Y. pseudotuberculosis следует учитывать, что культивирование иерсиний при температуре свыше 28 °С вызывает диссоциацию однородной популяции на S и R-формы, при изменении формы и снижении метаболизма бактериальной клетки наблюдается переход популяции в «некультивируемое состояние», что существенно осложняет бактериологическую диагностику, характеризующуюся длительностью исследования до 14 суток (Ющенко Г.В., 1972; Литвин В.Ю., 1989; Пушкарева В.И., 1990; Ефремов B.C., 1995; Ленченко Е.М. и соавт., 1998; Каврук Л.С., 2000; Шумилов К.Н., Мельниченко Л.П., 2001; Астахова Т.С., 2002; Скляров О.Д., Кузьмина В.Б., 2002; Павлова И.Б. и соавт., 2007; Colwell., 1985; Kapperud G. et al., 1987; Robins-BrowneR.M. et al., 1993; China B. et al.,

1994). Учитывая, недостаточную изученность патогенетических аспектов псевдотуберкулеза целесообразным является изучение влияния токсигенных бактерий Y^pseudotuberculosis на динамику развития патологических процессов в тканях и органах иммунной системы птиц, что и определило актуальность темы диссертационной работы.

Цель исследований: изучить диссеминацию микроорганизмов в ткани и органы, динамику морфологических изменений иммунной системы птиц при заражении токсигенными бактериями Yersinia pseudotuberculosis

Задачи исследований:

- изучить морфологические, культуральные, ферментативные свойства У.,pseudotuberculosis;

- изучить факторы патогенности S-R-форм колоний Y. pseudotuberculosis;

изучить сравнительные характеристики дифференциально-диагностических сред для индикации и идентификации Y. pseudotuberculosis;

- изучить диссеминацию микроорганизмов Y. pseudotuberculosis в ткани и органы птиц;

- изучить динамику морфологических изменений иммунной системы птиц при заражении токсигенными бактериями Y. pseudotuberculosis

Научная новизна. Научно обосновано и экспериментально подтверждено применение схемы бактериологической диагностики псевдотуберкулеза с применением жидкой и плотной селективной среды «CIN-agar», специфичность среды для идентификации К pseudotuberculosis — 86,44 %. Установлено, что средний показатель адгезии S-форм - 4,49±0,24, R-форм -1,37±0,1; индекс фагоцитоза S-форм - 31,16±0,16, R-форм - 59,22±1,24; токсигенность S-форм - 16,33±4,72, R-форм - 4,37±2,14. Установлено, что индекс дилатации (ИД) кишечника птиц через 24-32 ч при заражении токсигенными бактериями У. pseudotuberculosis составляет 0,057±0,009-0,072±0,005, через 48-72 ч - 0,115±0,005-0,125±0,007. Динамика патологических процессов при псевдотуберкулезе птиц характеризуется гиперплазией селезенки, атрофией фабрициевой бурсы, сочетанием общей сосудистой реакции с дистрофическими и некротическими изменениями в паренхиматозных органах, увеличением количества межэпителиальных лимфоцитов, скоплением плазматических клеток и экссудативно-инфильтративными процессами органов иммунной системы.

Практическая значимость работы. На основе изучения популяционной изменчивости микроорганизмов модифицирована методика микроскопического исследования S-R-форм колоний бактерий и разработаны «Методические рекомендации по подготовке препаратов для микроскопического исследования S-R-форм бактерий Y.enterocolitica», утвержденные секцией «Ветеринарная санитария, гигиена и экология» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 8 от 22 октября 2012 года). Результаты исследований используются в учебном процессе на ветеринарно-санитарном факультете ФГБОУ ВПО «МГУПГ1» по дисциплинам: «Цитология, гистология, эмбриология»; «Эпизоотология».

Апробация материалов диссертации. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях кафедры «Инфекционные и паразитарные болезни» ФГБОУ ВПО «МГУПП» (Москва, 2009-2013 ГГ.); на VII, VIII Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения», «Экологически безопасные ресурсосберегающие технологии и переработки сельскохозяйственного сырья и производства продуктов питания» (М., 2008; М., 2009; М., 2010).

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты изучения популяционной изменчивости, факторов патогенности и фенотипических признаков Y.pseudotuberculosis, связанных с плазмидой вирулентности;

- результаты изучения сравнительных характеристик диагностических сред для индикации и идентификации Yersinia pseudotuberculosis;

- результаты изучения диссеминации микроорганизмов в ткани и органы птиц;

- результаты изучения динамики морфологических изменений иммунной системы птиц при заражении токсигенными бактериями Yersinia pseudotuberculosis

Публикация результатов исследовании. По материалам диссертационной работы опубликовано 6 научных работ, в том числе 3 в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, библиографии, приложений. Работа изложена на 112 страницах компьютерного текста, содержит 10 таблиц, 12 рисунков. Библиографический список включает 190 источник, из них 90 иностранных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена с 2009 но 2013 гг. на кафедре «Инфекционные и паразитарные болезни» ФГБОУ ВПО «МГУПП». В опытах были использованы паспортизированные штаммы микроорганизмов: Yersinia pseudotuberculosis № 290; Yersinia enterocolitica 09 S- и R-формы №383; Escherichia coli 078 №320; Klebsiella pneumonia №24; Salmonella enteritidis Ns 5715; Staphylococcus aureus Ns 123. полученные из коллекции ФГБУ «ВГНКИ».

Сравнительное изучение дифференциально-диагностических свойств питательных сред проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по организации и проведению контроля качества питательных сред для ветеринарных лабораторий» (М., 2011). Бактериологические исследования проводили в соответствии с инструкцией «Эпидемиология, лабораторная диагностика иерсиниозов, организация и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий» (М., 30 октября 1990); «Методические указания по лабораторной диагностике иерсиниоза

животных и обнаружению возбудителя болезни в мясном сырье, молоке и растительных кормах» (М., 3 октября, 2005). Идентификацию выделенных культур микроорганизмов проводили, в соответствии с классификационной системой «Bergy' smanual... 1984-1989», используя общепринятые методы исследований (Герхардт Ф. и соавт., 1984; Сидоров М.А. и соавт., 1995; Скородумов Д.И. и соавт., 2005). В экспериментах использовали питательные среды «Среда с бромтимоловым синим» (Оболенск), «Yersinia Selective Enrichment Broth», «Yersinia selective agar» {«Merck»). Биохимические свойства микроорганизмов изучали с использованием сред Гиса, СИБ (Н. Новгородский НИИ экспериментальной микробиологии). При изучении факторов патогенности Y. pseudotuberculosis оценивали средний показатель адгезии (СПА); устойчивость к фагоцитозу; токсигенные свойства микроорганизмов (Вартанян Ю.П. и соавт., 1978; Романенкова Н.И. и соавт., 1980; Кондрахин И.П. и соавт., 1985; Брилис В.И. и соавт., 1986; Павлова И.Б., Ленченко Е.М., 1999). При изучении фенотипических признаков Y. pseudotuberculosis, связанных с наличием плазмиды вирулентности, оценивали зависимость бактериального роста от концентрации кальция в среде при 37° С, зависимость размеров колоний от температуры культивирования (Ценева Г.Я. и соавт., 1986). Патогенные свойства микроорганизмов оценивали с применением лабораторных моделей: куриные эмбрионы породы «Белый леггорн» (п=15); цыплята породы «Белый леггорн» (п=40); утята породы «Пекинская» (п=30); морские свинки породы «.Self» (п=24), белые беспородные мыши (п=10), используя общепринятые методы исследований (Биргер М.О., 1973). Клиничекие принаки болезни, патологоанатомические изменения, гематологические и иммунологические показатели изучали общепринятыми методами (Автандилов Г.Г., 1972; Бессарабов Б.Ф., 1980; Жаров А. В., 1981; Федоров Ю.Н.,1989; Сидорчук А. А. и соавт., 2005; Макаров В. В. и соавт., 2009; Стрельников А.П., 2007; Селезнев С.Б., 2000; Сулейманов С.М., 2002). Гематологические и биохимические показатели крови и сыворотки крови птицы определяли на анализаторе «Chem Well 2900 (Т)» (USA). Для гистологических исследований материал фиксировали 10,0 % формалином и заключали в парафин, срезы окрашивали гематоксилином и эозином; по Ван Гизону; Крантцу; Лейшману; гемосидерин -по Перлсу (Волкова О.В., Елецкий Ю.К., 1971). Результаты опытов подвергали статистической обработке общепринятыми методами (Ашмарин И.П., Воробьев Л.А., 1962; Садовский Н.В., 1975; Шмойлова Р.А., 2006).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Результаты изучения морфологических, культуральпых, ферментативных свойств Y.pseudotuberculosis

При оптической микроскопии в мазках, окрашенных по Граму, в S-формах колонии иерсиний преобладали располагающиеся одиночно кокковидные и овоидные бактерии. В R-формах преобладали бактерии, располагающиеся в виде цепочки. При росте микроорганизмов на скошенном

МПА, S-формы колоний иерсиний росли в виде бледно-серого налета с ровными краями, R-формы колоний - массивный сплошной налет с извилистыми краями. При росте в МПБ S-формы иерсиний давали равномерное помутнение, при росте R-форм отмечали наличие хлопьевидного осадка.

При оценке дифференциально-диагностических свойств сред «СБТС» (Среда с бромтимоловым синим) «CIN-agar» (Yerinia selective agar) в опытах использовали культуры микроорганизмов Y.pseiidotubercidosis;Y.enterocoütica; E.coli; K.pneumonia; S. enteritidis; Р. aeruginosa, S.aureiis. На среде «СБТС» через 18 часов культивирования уреаза «+» иерсинии (гидролизирукмцие мочевину), формировали сине-зеленые колонии, при этом голубого цвета сред не изменялся. Уреаза «-» бактерии не гидролизирующие мочевину, формировали желтые колонии с изменением голубого цвета среды в желтый цвет. На среде «CIN-agar» через 18 часов культивирования иерсинии, ферментирующие маннит, формировали розового цвета колон™ с четко очерченным центром и прозрачными краями. За счет наличия цефсулодина, триклозана, новобиоцина подавлялся рост сальмонелл и эшерихий (табл. 1).

Таблица 1

Дифференциальные признаки колоний бактерий

Среды Характеристика колоний (37 "С, 18 ч)

У.[)5еи(1о(и1югси1о«1« У.еШегосоНйса S. enteritidis Е. coli K.pneumonia P.acruginosa S. aureus

«СБТС» 1,0-2,0 мм уреаза «+» сине-зеленые, среда голубого цвета 1,9-3,1мм уреаза «-» желтые; среда желтого цвета 1,8-2,3 мм уреаза «-» желтые; среда желтого цвета

«CIN-agar» 2,0-4,0 мм манит «+» красные с очерченным центром и прозрачными краями; среда розового цвета «-» «-»

Условные обозначения: «-» - нет роста микроорганизмов

При изучении биохимических свойств микроорганизмов установили, что дифференциальными признаками }'.р.';еп(]о1иЬегси1о$1$, У.еМвгосоПИса являлись способность ферментировать глюкозу, лактозу, маннит, мальтозу, рамнозу. сахарозу. Способность утилизировать уреазу позволяло дифференцировать иерсинии от таксономически сходных видов энтеробактерий.

Для изучения фенотипических признаков иерсиний, связанных с наличием плазмиды вирулентности, учитывая данные литературы, оценивали зависимость бактериального роста от концентрации ионов кальция в среде при 37 °С, зависимость размеров колоний от температуры культивирования.

Для изучения зависимости бактериального роста от концентрации ионов кальция в питательной среде использовали культуру, выросшую при температуре 22 °С на среде Кларка, которую в одинаковой дозе 100-500 м.к./мл равномерно распределяли по поверхности кальций дефицитной среды в чашках Петри. Посевы культивировали при 22 и 37 °С в течение 48 ч. При положительном результате колонии, выросшие при температуре 37 °С были в 1,5-3,0 раза мельче, чем при 22 °С. В то время как отрицательный результат характеризовался ростом однотипных колоний при двух температурах. По результатам исследования зависимости роста иерсиний (слабый или отсутствие роста) от низкой концентрации ионов кальций в среде и температуры культивирования 37 °С были получены следующие результаты: культуры микроорганизмов У.рБеисктЬегсШоз^, У.етегосоШка 09 Б-форма, 09 Н-форма, при указанных условиях через 24 ч либо не давали видимого роста, либо формировали точечные колонии менее 1,0 мм в диаметре. Через 48 ч колонии несколько увеличивались в размере, однако оставались значительно мельче колоний, выросших на той же среде при 22 °С. При. определении зависимости размеров колоний от температуры в качестве плотной среды использовали среду АГВ, посевы культивировали при 37 °С, и при 22 °С в течение 48 ч. Диаметр колоний измеряли с помощью окуляр-микрометра. Учет результатов: при температуре 37 °С иерсинии формировали колонии в 1,5-3,0 раза мельче колоний, выросших при 22 °С - эти колонии были крупнее, более плоские, голубоватые. Для изучения морфологии колоний иерсиний культуры изучаемых микроорганизмов культивировали при 4 °С, 28 °С, 37 °С, 42 °С. При изучении морфологии колоний готовили препараты «агаровая пленка» («микрокультура»), для этого на предметное стекло стерильной пипеткой наносили 0,2-0,3 мл горячей (50-60 °С) среды МПА, и распределяли по всей поверхности стекла для получения тонкой агаровой пленки. Затем на поверхность агаровой пленки стерильной нрепаровальной иглой наносили суспензию исследуемых бактерий. Препараты помещали в чашку Петри и культивировали в течение 24-48 ч. Установлено, что через 48 ч культивирования диаметр колоний иерсиний составлял от 0,6-1,1 мм до 1,21,8 мм 0с1 >4,6; р=0,01) (табл. 2).

Таблица 2

Результаты изучения морфологии колоний У.р^еш1о1иЬегси1ох1х

Культуры микроорганизмов Количество колоний

4 °С 28 °С 37 °С 42 "С

У.рзеис1ошЬегси1о5(5 Э-форма - 9,42±0,19 62,67+0,89 75,33+0,2

Я-форма - 5,28±0,23 45,72±0,38 68,49±0,27

У. егИегосо1Шса Э-форма 2,33*0,31 11,26±0,36 74,33+0,24 84,52±0,29

Я-форма - 9,38±0,27 52,46±0,76 73,00±0,43

Изученные культуры микроорганизмов формировали колонии двух типов: 8-форма (с!<1,0 мм) прозрачные округлой формы с ровными краями, Я-форма (<£>1,0 мм) бугристой формы колонии с изрезанными краями (рис. 1).

Рис. 1. Морфология колоний иерсиний

Для изучения морфологии колоний препараты фиксировали в парах 1,0 % раствора осмиевой кислоты в течение 15-20 с, после обработки колонии приобретали темно-коричневый цвет, что позволяло подсчитать даже очень мелкие колонии (<1,0 мм) Кроме того, можно было изучать морфологические изменения в бактериальной популяции и измерять диаметр колоний с помощью окуляр-микрометра. При оптической микроскопии S-формы колоний (d<l,0 мм) прозрачные округлой формы колонии имели слегка приподнятый интенсивно окрашенный центр, радиальную исчерченность по периферии, ровные края, клетки располагались упорядоченно, плотно примыкая, друг к другу. R-формы колоний (d>l,5 мм) имели темный цвет, сухую поверхность, были бугристыми, имели плотный центр с периферическим валиком, изрезанные края. В R-формах колоний бактериальные клетки располагались беспорядочно, не примыкали друг к другу.

На основе изучения популяционной изменчивости микроорганизмов нами модифицирована методика микроскопического исследования S-R-форм колоний, бактерий и разработаны «Методические рекомендации по подготовке препаратов для микроскопического исследования S-R-форм бактерий», утвержденные секцией «Ветеринарная санитария, гигиена и экология» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 8 0т 22 октября 2012 года).

3. 2. Результаты изучения факторов патогенности Y. pseudotuberculosis

При учете адгезивных свойств бактерий определяли средний показатель адгезии (СПА). При СПА от 0 до 1,00 микроорганизмы считали неадгезивными; от 1,01 до 2,00 - низкоадгезивными; от 2,01 до 4,00 - среднеадгезивными и от 4,01 и более - высокоадгезивными. В опыте использовали суспензию эритроцитов птиц и млекопитающих. В мазках, окрашенных по Май-Грюнвальду, ядра клеток крови птиц и бактериальные клетки окрашивались в фиолетовый цвет, цитоплазма клеток крови окрашивалась в более тёмные оттенки, чем при окраске азуром И и эозином по Романовскому (рис.2).

>1 V -

Рис. 2. Мазки крови птиц: а - контроль; б, в, г - опыт: адгезия бактерий к эритроцитам. Ок. 10, об. 90

Установлено, что средний показатель адгезии (СПА) Y. pseudotuberculosis составлял: S-форм - 2,23 ±0,25; R-форм - 1,37±0,22 (табл. 3).

Таблица 3

Адгезивные свойства и устойчивость к фагоцитозу иерсиний

Культура микроорганизмов Средний показатель адгезии Индекс фагоцитоза

Высокий | Средний | Низкий

Эритроциты млекопитающих

Y.pseudotuberculosis S-форма 3,41 ±0,14 2,23+0,25 - 27,21+1,24

R-форма - - 1,37+0,22 32,42+0,12

Эритроциты птиц

Y.enterocolitica 09 S-форма - 2.01+0,16 - 31,16+0,16

R-форма - 1,21+0,18 43,27+1,21

При изучении устойчивости микроорганизмов к фагоцитозу в пробирку помещали 1 мл исследуемой пробы крови птиц и 0,5 мл бактериальной взвеси (500 млн. клеток в 1 мл), полученную взвесь перемешивали и помещали в термостат при 37 °С. Через 18 ч готовили мазки крови общепринятым методом и окрашивали по Май-Грюнвальду, результаты учитывали при оптической микроскопии (Х90, иммерсия). При этом определяли абсолютный показатель фагоцитоза, фагоцитарный индекс, фагоцитарное число, учитывая морфологию клеток крови. При определении показателей фагоцитарной активности клеток крови активность фагоцитоза и индекс фагоцитоза клеток крови птицы составили 67,42+3,23 и 8,82+0,71 %. Индекс фагоцитоза S-форм - 27,21±1,24, R-форм -32,42±0,12 (см табл. 3).

Патогенные свойства бактерий, учитывая данные литературы о восприимчивости к возбудителю псевдотуберкулеза лабораторных моделей, определяли, заражая внутрибрюшинно белых беспородных мышей (ш=14-16 г) и морских свинок Self (m=200-250 г) по 0,5 см3 взвесью микроорганизмов в концентрации 1 млрд/см3 бактериальных клеток Yersinia pseudotuberculosis (опыт). Аналогичным группам животных вводили стерильный раствор 0,9 % NaCl (контроль). Установлено, что при экспериментальном заражении Y.pseudotuberculosis отмечались мелкоточечные кровоизлияния в

паренхиматозных органах, наблюдались признаки гиперплазии печени, почек, селезенки.

Для изучения токсигенных свойств, проводили исследования с применением лабораторных моделей: «эмбрионы птиц», «кератоконъюктивальная проба», «кожнореактивный фактор», «плантарный тест», «тест дилатации кишечника». Исследуемые ¿'-формы культуры микроорганизмов У.рзеийоШЬегсиЬз^я №290, У.егПегосоППса 09 №383 культивировали в жидкой среде Хоттингера при 37°С в течение 24 ч, затем культуры микроорганизмов центрифугировали при 6000 об/мин, в течение 30 мин. Полученную надосадочную жидкость использовали для определения токсигенных свойств бактерий (опыт), в качестве контроля использовали стерильный бульон Хоттингера.

При оценке токсигенных свойств, с применением модели «эмбрионы птиц» 0,2 мл исследуемой надосадочной жидкости вводили в аллантоисную оболочку 15-суточных эмбрионов кур «Белый леггорн» и помещали при 37 °С в течение 24 - 48 ч. Учет результатов проводили, оценивая жизнеспособность эмбрионов в овоскопе, при вскрытии эмбрионов патологоанатомические изменения оценивали по 4-х балльной системе: 0 баллов (отсутствие изменений) - нетоксигенные штаммы; 1,0 - 1,5 балла (поражение органов дыхания, умеренный перикардит, перигепатит) - слаботоксигенные штаммы; 1,5 - 2,0 балла (перикардит, перигепатит, энтерит) - умеренно токсигенные штаммы; 2,5 - 3,0 балла (фибринозный перикардит, перигепатит, энтерит) -высокотоксигенные штаммы.

Для оценки токсигенных свойств с применением

«кератокштаоктивалыюй пробы» в конъюнктивальную полость глаз морских свинок массой 200-300 г вводили 0,1 мл исследуемой надоосадочной жидкости. В течение недели ежесуточно оценивали изменения слизистой оболочки глаза путем осмотра состояния конъюнктивы (век, склеры, свода), роговицы и регистрировали выраженность признаков конъюнктивита (гиперемия конъюнктивы, отек век, наличие и характер отделяемого конъюнктива) и состояние роговицы. Через 24 ч учитывали результаты исследования, оценивали показатели: 0 баллов (отсутствие изменений) - нетоксигенные штаммы; 1,0-1,5 балла - прозрачное скудное отделяемое конъюнктивы на веках и в углу глаз; слаботоксигенные; 1,5-2,0 балла - гиперемия конъюнктивы с инъекцией сосудов - умеренно токсигенный штамм; 2,0-2,5 - покраснение конъюнктивы с серозно-гнойными отделениями на веках и в углу глаза, помутнение роговицы - высокотоксигенные штаммы.

При оценки токсигенных свойств с применением лабораторных моделей: «эмбрионы птиц», «кератоконъюнктивальная проба» установлено, что микроорганизмы У.ркеис1о1иЬегсч1ох1х, вызывающий патологические изменения 1,5-2,0 балла - умеренно токсигенный штамм. У.еп1егосо1Шса 09 слаботоксигенный штамм, вызывающий патологические изменения 1,0-1,5 балла (табл. 4).

Таблица 4

Результаты изучения токсигенных свойств микроорганизмов

Лабораторная модель Культуры микроорганизмов

Y.pseudotuberculosis Y.enterocolitica

«Эмбрионы птиц» (баллы) 1,5-2,0 1,0-1,5

«Кератоконъюнктивальная проба» (баллы): 1,5-2,0 1,0-1,5

«Кожнореактивный фактор» (мм) 1,9+2,3 1,7+2,2

«Плантарный тест» (мг) 7,87+4,32 6,66+4,41

«Тест дилатации кишечника» (мг) 0,135+0,005 0,097+0,006

При оценке токсигенных свойств Y.pseudotuberculosis с применением лабораторной модели «кожнореактивный фактор» у морских свинок породы «Seife) (п=24) массой 200-250 г, за 24 ч до начала опыта на спине выстригали волосы. Затем в участки депиляции (размеры 1,0 см ) внутрикожно шприцом с тонкой иглой срезом вверх под острым углом вводили испытуемый материал в объеме 0,1 мл, через 24 ч учитывали результаты изменений кожного покрова.

Для оценки токсигенных свойств с применением лабораторной модели «плантарный тест» надосадочную жидкость вводили двум опытным группам белых беспородных мышей (п=10) в область плантарной поверхности лапы в дозе 0,1 мл. В качестве контроля использовали исходную среду, которую вводили параллельно в другую лапу в той же дозе. Учет результатов проводили через 24 ч, величину отека определяли по разности массы лапок мышей в контроле (5,69+3,32) и опыте (6,66+4,417,87+4,32).

При определении токсигенности энтеробактерий с использованием лабораторной модели «тест дилатации кишечника» белым мышам-сосункам per rectum вводили надосадочную жидкость в объеме 0,2 см3. Средние показатели коэффициента (К) расширения тонкого кишечника находились в пределах от 0,070+0,009 до 0,116±0,005.

Коэффициеш- корреляции результатов исследований токсигенных свойств микроорганизмов, определенных с применением лабораторных моделей определяли по формуле: г=1 - , где: h- порядковый

номер, в зависимости от абсолютной величины показателя; 02-квадрат разности порядковых номеров двух тестов. В целом, при оценке токсигенных свойств микроорганизмов Y.pseudotuberculosis установлена прямая коррелятивная зависимость результатов исследований, с применением «теста дилатации кишечника», «кожнореактивпого фактора», «плантарного теста» (г=0,6).

3. 3. Результаты изучения динамнки развития болезни при экспериментальном воспроизведении псевдотуберкулеза птиц

Для изучения динамики развития экспериментального псевдотуберкулеза были проведены исследования на лабораторных моделях: цыплята породы «Белый леггорн» (п=30); утята породы «Пекинская» (п=30) 5-ти; 10-ти; 15-ти суточного постинкубациошюго онтогенеза. Перед проведением опытов по принципу аналогов разделили на группы:

I группа (5-ти сут)

II группа (10-ти сут)

III группа (15-ти сут)

IV группа (5-ти сут)

V группа (10-ти сут)

VI группа (15-ти сут)

VII группа (5-ти сут)

VIII группа (10-ти сут)

IX группа (15-ти сут)

X группа (5-ти сут)

XI группа (10-ти сут)

XII группа (15-ти сут)

контроль (п=15): интраназалыюе введение 0,5 см3 0,9 % раствора МаС1 цыплятам породы «Белый леггорн»

опьгг (п=15): интраназальное заражение У.р5еи<1оШЬегси1о51з № 290 в дозе 0,5 м3 в концентрации 1 млрд./ см3 цыплят породы «Белый леггорн» контроль (п=15): интраназалыюе введение 0,5 см' 0,9 % раствора ШС1 утятам породы «Пекинская»

опыт (п=15): интраназальное заражение У.рзеи^иЬегси^э № 290 в дозе 0,5 м3 в концентрации 1 млрд./ cмJ утят породы «Пекинская»

При воспроизведении экспериментального псевдотуоеркулеза клинические признаки болезни (продолжительность эксперимента 25 суток) у цыплят и утят были сходными, наблюдались через 48-96 ч (табл. 5).

Таблица 5

Результаты исследований при заражении птиц токсигенными бактериями Y. pseudotuberculosis

Группа птпц Течение болезни Заболеваемость Летальность

Птиц Острое Подост! зое

Абс. % Абс. % Абс. % Абс. %

Цыплята породы «Белый леггорн»

5-ти сут. 1 20 1 20 3 60 1 20

10-ти сут. - 2 40 2 40 - -

15-ти сут. - - 4 80 1 20 - -

Утята поооды «Пекинская»

5-ти сут. 1 20 1 20 2 40 - -

10-ти сут. - - 3 60 3 60 1 20

15-ти сут. - - 3 60 2 40 - -

При остром течении через 48-72 часа после заражения клинические проявления болезни проявлялись в виде поражения центральной нервной системы, выражающиеся судорогами, парезами, параличами конечностей, возбуждением или заторможенностью, дыхание напряженное, с влажными хрипами. При подостром течении через 3-4 суток после заражения клинические признаки болезни проявлялись в виде общей вялости, из

носовых отверстий и клюва выделялась пенистая слизь, испражнения были водянистыми беловато-серого цвета, с примесью слизи и крови. Птицы становились вялыми, сидели с опущенными крыльями, оперение взъерошено. Птицы погибали на фоне нарастающей слабости, адинамии, нарушения сердечной деятельности, дегидратации.

Динамика изменений показателей крови и сыворотки крови птиц (15 суток эксперимента) характеризовалась увеличением общего числа лейкоцитов (17,8*3,5-35,6*3,6), общего белка (26,24,3-48,54,3), мочевины (1,66*0,411,6*0.4). глюкозы (5,9*0,4-14,5*0,3), активности щелочной фосфатазы (619,1*0,4-666,3*0,4), гемоглобина (13,1*0,53-72,6*0,56), общего билирубина (2,2*0,04-4,9*0,03); понижением бактерицидной (56,8*0,8-71,1*1,2) и лизоцимной активности сыворотки крови (13,4*0,7-21,1*0,33) (табл. 6).

Таблица 6

Результаты исследований показателей крови и сыворотки крови птиц

Показатели кров» п сыворотки крови Результаты исследований (М+т)

Цыплята (п=10) Утята (п=10)

Опыт Контроль Опыт Контроль

Эритроциты, млн/л 7,01*0,36 4,4* 0,6 6,53*0,23 4,7- 0,6

Гемоглобин, г/% 15,6*0,56 12,3*0,1 13,1-0,53 11,9*0,24

Лейкоциты, тыс./мкл 37,8*3,5 24,4*0,3 35,6 *3,6 25,6-0,44

Эозинофилы, тыс./мкл 5,11* 0,4 2,6*0,23 4,13*0,23 2,3* 0,3

Псевдоэозилофилы, тыс./мкл 10,26*0,58 7,95*0,54 9,66*0,58 7,5* 0,61

Нейтрофилы, % 19,55*0,5 37,9* 0,6 18,66*0,5 35,70460

Лимфоциты, % 14,8* 0,63 12,3* 0,43 15,1*0,67 11,9*0,58

Общий белок, г/ л 28,5* 0,3 32,2*0,2 26,2 * 0.3 37,5* 0,2

Билирубин общий, мкмоль/л 3,9*0,03 0,6* 0,03 2,2* 0,04 0,9* 0,03

Креатшган, мкмоль/л 28,9* 0,03 19,6*0,02 30.2*0,04 18.9*0,03

Мочевина, ммоль/л 1.6* 0,4 1,3*0,11 1,66*0,4 1,6*0,12

Глюкоза, ммоль/л 15,944 17,5*0,3 14,543 18,9*0,4

Аланинаминотрансфераза, ед/л 3,83*0,3 1,9*0,2 3,41*0,2 1,8*0,3

Аспартатаминотрансфераза, ед/л 225,8*0,3 432,(Я),21 295,2*0,3 325,2*0,3

Лактатдегидрогеназа, ед/л 226,3*1,4 178,2*0,6 247,9*0.3 147,3*0,4

Амилаза, ед/л 187,5*0,6 317,3*0,4 177,6*0,6 287,546

Щелочная фосфатаза, ед/л 666,3*0,4 740,3*0,3 619,144 775,3*0,4

Калий, ммоль.л 26,9*0,3 14,9*0,31 21,5 *0,33 18,9*0,3

Натрий, ммоль.л 131,3* 1,14 121,0*1,12 134,7*0,69 124,3*1,14

Кальций, ммоль,л 5,8* 0,45 2,3* 0,27 6,4* 0.43 5,8*0,45

Хлориды, ммоль.л 122,7*0.26 104.0*0,25 119,0* 0,27 102,7*0,26

Бактерицидная активность, % 61,1*1,2 75,2*0,84 56,848 62,4*1,53

Лизоцимиая активность, % 19,4*0,7 19,1*0,4 21,1433 23,6*0,62

Примечание р<0,05

3.4. Результаты изучения диссеминации К pseudotuberculosis в ткани и органы птиц

На первом этапе исследовали; действие микрофлоры естественных микробиоценозов желудочно-кишечного тракта птицы на рост иерсиний * тканевый гомогенат печени, мясо птицы, фарш из мяса птицы экспериментально контаминировали взвесью культур микроорганизмов К pseudotuberculosis; Y.enterocolitica; E.coli; ¡Cpneumonia; S. enteritidis; P. aeruginosa, S.aureus. Материал исследовали с применением дифференциально-диагностических сред «СБТС» (Среда с бромтнмоловым синим) «CIN-agar» (Yersinia selective agar). Микроорганизмы Y. pseudotuberculosis были выделены в 82,4-87,6 % случаев.

Следующим этапом исследований явилось определения диссеминации У. pseudotuberculosis в ткани и органы птиц при экспериментальном заражении птицы возбудителем псевдотуберкулеза. Для этого исследовали патматериал (сердце, легкие, селезенка, печень, тонкий кишечник) павших или убитых с диагностической целью птиц. Исследуемый материал массой не менее 25 г растирали в ступках и вносили в колбы с жидкой селективной средой обогащения «Yersinia Selective Enrichment Broth» в соотношении 1:5 (вес/объем), культивировали при 37 °С. Через 24 часа из верхней трети слоя среды (не встряхивая содержимое колбы) бактериологической петлей делали посевы и исследовали по схеме:

> схема I - селективная среда обогащения i-> среда «СБТС»

> схема II - селективная среда обогащения <-> «CIN-agar»

При определении диссеминации микроорганизмов ткани и органы птиц на 7-10 сутки эксперимента Y. pseudotuberculosis выделялись из легких, тонкого кишечника, на 13 сутки - из крови, селезенки, печени, на 17 сутки - селезенки. При индикации иерсиний по схеме I - из 48 типичных колоний были идентифицированы 27 культур микроорганизмов иерсиний, специфичность среды 56,25 %; по схеме II - из 59 типичных колоний идентифицировано 51 культур микроорганизмов, специфичность среды - 86,44 %. Результаты исследований позволяют рекомендовать для выделения У. pseudotuberculosis из патматериала птиц схему бактериологического исследования с применением жидкой и плотной селективной среды «CIN-agar», специфичность среды для идентификации Y. pseudotuberculosis - 86,44 %.

3. 5. Результаты изучения морфологических изменений в тканях и органах иммунной системы птиц при заражении токсигенными бактериями К pseudotuberculosis

Патоморфологические изменения у зараженных птиц выявлялись признаками вздутия петель кишечника и скоплением жидкости в просвете желудочно-кишечного тракта. У большинства птиц обнаруживались изменения в легких, сердце, органах иммуннитета, выявлялись геморрагии в слизистой оболочке желудка, кишечника, паренхиматозных органах, печень, как правило,

была темно-коричневого цвета с закругленными краями, желчный пузырь был заполнен темно-зеленым содержимым. В целом, при гистологическом исследовании гемоциркуляторные изменения вышеуказанных органов проявлялись в виде полнокровия сосудов микроциркуляторного русла, в просвете артериол и венул были видны агрегация эритроцитов и нити фибрина, отмечались значительные геморрагии и повышение проницаемости оболочек сосудов мышечного типа. В легких изменения выражались скоплением серозно-геморрагического экссудата и серозно-клеточного выпота в альвеолах, дистрофией и слушиванием эпителиального слоя бронхов и парабронхов, в междольковой соединительной ткани наблюдалась гиперемия и лейкоцитарная инфильтрация, пролиферация фибробластов периваскулярной соединительной ткани, наблюдали истончение и снижение количества клеток в межальвеолярных прослойках соединительной ткани. В сердце обнаружены токсическая миокардиодистрофия, мелко- и крупноочаговый кардиомиоцитолиз, определялись отек и умеренное полнокровие коронарных сосудов, нечеткость поперечной исчерченности и участки гомогенности структурной организации кардиомиоцитов, что сопровождалось очаговой лимфоидно-лейкоцитарной воспалительной инфильтрацией. При исследовании органов пищеварительной системы макроскопические изменения отмечались в желудке и на всем протяжении тонкого отдела кишечника. В железистом желудке выявили слизистую дистрофию железистого эпителия, деструкцию трубчатых желез, инфильтрацию соединительной ткани, слизистой оболочки клеточными элементами. Слизистая, мышечная, серозная оболочки на всем протяжении желудочно-кишечного тракта были растянутыми, имели дряблую консистенцию, выявлялись многочисленные участки мелкоточечных кровоизлияний. В слизистой оболочке желудка, тонкого отдела кишечника отмечали разрастание рыхлой волокнистой соединительной ткани, окрашивающейся при окраске по Ван-Гизону в красный цвет. Установлено, что при заражении Yersinia pseudotuberculosis индекс дилатации (ИД) - отношение объема жидкости к длине кишечника птиц через 24-32 ч составлял 0,057±0,009-0,072±0,005. В течение 48-72 ч реакция слизистой оболочки тонкого отдела кишечника усиливалась, наблюдалось скопление значительного количества серозно-геморрагического экссудата в просвете кишки, ИД - 0,115±0,005-0,125±0,007 (рис. 3).

б

а

Рис. 3. Индекс дилатации кишечника птиц при заражении У.рзеш/о/иЬегси/оэй: а — цыплята; б - утята

На начальном этапе экспериментальных исследований (24-32 ч) наблюдались, преимущественно явления серозного отека однослойного каемчатаго эпителия и рыхлой волокнистой соединительной ткани собственного слоя слизистой оболочки, с лимфоидной инфильтрацией стромы ворсинок. Патологические изменения в тонком отделе кишечника проявлялись гидропической дистрофией эцтероцитов, что обусловлено избыточным накоплением воды в эпителиальных клетках. Отечные изменения тонкого отдела кишечника постепенно усиливались, через 48-72 ч развивались признаки различной степени деструктивно-некротических изменений, сосудистые и инфильтративные нарушения собственного слоя слизистой оболочки, что было связано с постепенным формированием очагов мелкоточечных кровоизлияний, экссудат постепенно приобретал геморрагический характер. В однослойном каемчатом эпителии и собственной пластинке тонкого отдела эпителий и собственную пластину слизистой оболочки и сопровождались интенсивной инфильтрацией мононуклеарными и полиморфноядерными лейкоцитами. В сохранивших структуру ворсинках в составе рыхлой волокнистой соединительной ткани собственной пластинки были видны скопления бактериальных клеток, окрашенных по Крантцу и Лейшману, На всем протяжении кишечника, как правило во всех оболочках, наблюдалась резкая гиперимия, выраженный отек в рыхлой волокнсистой соединительной ткани подслизистой основы, множественные кровоизлияния, инфильтрация мононуклеарами и псевдоэозшюфилами, диффузная лимфодная иролифирация.

В печепи через 24-32 ч после заражения, выявляли расширение и полнокровие сосудов портальных трактов и центральных вен долек печени. Как правило в расширенных сунусоидных капиллярах выявлялись скопления гиалиноподобной массой, и немногочисленные зерна гемосидерина. В кровеносных сосудах через 48-72 ч вдоль эндотелиального слоя выявлялось пограничное расположение лейкоцитов. Как правило, в паренхиме органа выявлялись мелкие скопления макрофагальных и лимфоидных клеток в виде узелков. Определялись многочисленные некротические очажки, имеющие овальную форму и густо инфильтрированные полиморфноядерными лейкоцитами с примесью макрофагов.

При исследовании органов иммунной системы птиц выявлена коррелятивная зависимость степени выраженности морфологических изменений, развивающихся в тимусе, фабрициевой бурсы, селезенки, Гардеровой железе, лимфоидном дивертикуле Меккеля. Как правило, в органах иммунной системы цыплят и утят патологические процессы протекали сходным образом, наблюдался массовый распад лимфоцитов в лимфоидных органах по типу кариорексиса и кариопикноза, набладалась макрофагальная реакция, отмечали также отек рыхлой соединительной ткани с инфильтрацией мононуклеарными лейкоцитами и псевдоэозинофилами.

В тимусе обнаруживали экссудативно-инфильтративные процессы, через 24-32 ч после заражения дольки тимуса имели однородную структуру, в отдельных случаях наблюдали незначительное уменьшение количества лимфоцитов, прежде всего, в корковом веществе, что выражалось разряжением

пространства между лимфоцитами. В отдельных дольках мозговая зона не дифференцировалась или выявлялись незначительные участки, часть долек были заполнены жировыми клетками. Через 96-120 ч эксперимента, в большинстве случаях отмечали уменьшение числа малых лимфоцитов в корковом веществе долек, наблюдали увеличение числа псевдоэозинофилов, которые локализовались вокруг эпителиальных телец Гассаля. полнокровие, незначительный отек междольковой соединительной ткани. К концу экспериментальных исследований наблюдалось резкое снижение лимфоцитов и разрешенная структура коркового слоя. Вместе с тем наблюдалось увеличение диаметра мозгового слоя, в участках локализации телец Гассаля отмечались кровоизлияния и наличие псевдоэозинофилов, кроме того, увеличивались участки ретикулоэндотелиальной ткани, пропитанные эритроцитами. Как правило, на всем протяжении эксперимента отмечали отек междольковой рыхлой волокнистой соединительной ткани с инфильтрацией мононуклеарными лейкоцитами и псевдоэозинофилами.

При исследовании фабрициевой бурсы на слизистой оболочке фабрициевой бурсы обнаруживали многочисленные очаги кровоизлияния, в собственной пластинке слизистой оболочке органа отмечали скопление плазматических клеток, по ходу сосудов микроциркудяторного русла выявляли повышенное количество псевдоэозинофильных лейкоцитов. Клеточный состав коркового и мозгового слоев через 24-32 ч после заражения был однородным, в корковом слое преобладали клетки, имеющие по ядерно-плазменному соотношению морфологическую характеристику малых лимфоцитов, в мозговом слое выявляли средние и большие лимфоциты. Через 96-120 ч эксперимента отмечали набухание многорядного призматического эпителия складок органа, как правило, корковое вещество фолликулов, имеющее более темную окраску по сравнению со светлым мозговым веществом (контроль) было истончено и выявлялись просветленные участки (опыт). При большом увеличении микроскопа в таких участках коркового вещества обнаруживались редко расположенные лимфоциты. Как правило, не выявлялось четкой границы между темным корковым и светлым мозговым веществом, что связано с нарушением целостности кортико-медуллярного эпителиального слоя, имеющего разрыхленную структуру.

По мере развития патологических процессов к концу эксперимента постепенно диаметр мозгового вещества, в котором располагались клетки, имеющие морфологическую характеристику средних и больших лимфоцитов, увеличивался, наблюдалось значительное увеличение числа макрофагальных элементов, имеющих крупные ядра и базофильную цитоплазму. Как правило, в мозговом веществе выявлялись очаги деструкции и лизиса лимфоцитов, находящихся на различных стадиях разрушения и имеющих к концу экспериментальных исследований вид неравномерно окрашенной бесструктурной массы. При исследовании междольковой соединительной ткани выявляли незначительную отечность в начале эксперимента, через 96-120 ч эксперимента, как правило, наблюдали повышенное количество псевдоэозинофильных лейкоцитов, выявляли признаки разрастания рыхлой

волокнистой соединительной ткани, коллагеновые и эластичные волокна, окрашивающейся при окраске по Ван-Гизону в красный цвет, в просвете сосудов мышечного типа выявлялись скопления эритроцитов.

Селезенка птиц была увеличена (по сравнению с контролем) в несколько раз, темно-вишневого цвета, наблюдался отек и частичное разволокнение капсулы селезенки, выявлялись признаки кровенаполнения органа. На поверхности органа часто выявляли мелкие множественные очаги некроза. Основной признак резкое полнокровие и депонирование крови в красной пульпе, наблюдался пикноз и кариорексис лимфоцитов, количество гемосидерина увеличивалось (рис. 4).

Рис. 4. Патоморфологические изменения селезенки птиц при заражении У.

pseudotuberculosis', а - контроль; б, в —опыт. Гематоксилин и эозин. Ок. 10, об. 10

В белой пульпе вокруг центральной артерии не выявлялось формирование плотного кольца из лимфоцитов, располагающихся рыхло, слои оболочек артерий были разволокненные и утолщены, в центрах размножения наблюдалась пролиферация лимфоцитов. Распад ядер по типу рексиса морфологически имел ту же характеристику, что и в других лимфоидных органах. В отдельных участках селезенки наблюдались опустошения пульпы, как результат нарушения структурных связей элементов, выявлялись гигантские макрофаги. В некоторых случаях выявлялась первичная периваскулярная ретикулоэндотелиальная гиперплазия и некроз в зародышевых центрах, размеры лимфоидных фолликулов были значительно увеличены по сравнению с контролем (рис. 5).

1234 1234

а 6

Рис. 5. Морфометрические показатели селезенки: а - IH.1M.TH i; б - утят

В Гардеровой железе через 24-48 ч иммунные реакции были малозаметные. Через 48-72 ч наблюдали главным образом увеличение макрофагов, происходило усиленное накопление плазмоцитов, кроме того, выявлялись участки некроза плазматичеких клеток.

В лимфоидных фолликулах дивертикула (Меккеля) отмечали наличие клеток, имеющих крупное базофильное ядро и отчетливо выраженную базофильную цитоплазму, оставшееся пространство заполняли, как правило, клеточные элементы, имеющие морфологическую структуру характерную для средних лимфоцитов периферической крови. Фолликулы были окружены тонким слоем рыхлой волокнистой соединительной ткани, с преобладанием коллагеновых волокон и адвентициальных клеток, имеющих веретеновидную форму. В железистом эпителии крипт, эпителиоциты были набухшие, апикальные полюса содержали ацидофильную массу. Как правило, у эпителиальных клеток наблюдали изменения ядер в виде пикноза, рексиса и лизиса. Среди эпителиальных клеток располагались небольшие группы лейкоцитов, как правило, лимфоциты и псевдоэозинофилы.

В целом, микроорганизмы Y pseudotuberculosis оказывали цитопатическое действие на ткани и органы иммунной системы птиц с преобладанием дистрофических и некротических процессов, присоединение клеточно-тканевой реакции гиперчувствительности замедленного типа. В органах иммунной системы (тимус, фабрициева бурса, селезенка, Гардеровой железы, лимфоидный дивертикул Меккеля) наблюдали распад лимфоцитов по типу кариорексиса и кариопикноза, наблюдались признаки макрофагальных реакций с последующим заполнением мозгового вещества лимфоидных фолликулов псевдоэозинофильными лейкоцитами.

Динамика патологических процессов при заражении токсигенными бактериями Y. pseudotuberculosis характеризовалась гиперплазией селезенки, атрофией фабрициевой бурсы, сочетанием общей сосудистой реакции с дистрофическими и некротическими изменениями в паренхиматозных органах, увеличением количества межэпителиальных лимфоцитов, скоплением плазматических клеток и экссудативно-инфильтративными процессами органов иммунной системы.

ВЫВОДЫ

1. При изучении факторов патогенности У. pseudotuberculosis установлено, что средний показатель адгезии S-форм колоний составляет 4,49±0,24, R-форм - 1,37±0,1; индекс фагоцитоза S-форм -31,16±0,16, R-форм - 59,22±1,24; токсигенность S-форм - 16,33±4,72, К-форм-4,37±2,14.

2. При идентификации Y.pseudotuberculosis, выделенных из патматериала птиц установлена эффективность применения схемы бактериологической диагностики с применением жидкой и плотной селективной среды «CIN-agar», специфичность среды «CIN-agar» для идентификации Y. pseudotuberculosis — 86,44 %.

3. Установлено, что индекс дилатации (ИД) кишечника птиц через 24-32 ч при заражении токсигенными бактериями У. pseudotuberculosis составляет 0,057±0,00<М),072±0,005, через 48-72 ч - 0,115±0,005-0,125±0,007.

4. При определении диссеминации микроорганизмов в ткани и органы птиц установлено, что на 7-10 сутки эксперимента У. pseudotuberculosis выделялись из легких, тонкого кишечника, на 13 сутки - из крови, селезенки, печени, на 17 сутки - селезенки.

5. Установлено, что при псевдотуберкулезе динамика изменений показателей крови и сыворотки крови характеризовалась увеличением общего числа лейкоцитов (24,4*0,3-37,8*3,5), общего белка (26,2*0.337,5*0,2). мочевины (1,3411-1,¿±0,4), глюкозы (14,5*0,3-18,9*0,4), активности щелочной фосфатазы (619,1*0,4-666,3*0,4): гемоглобина (11,9*0, 24-15,6*0, 56), общего билирубина (2,2±0,04-4,9±0,03); понижением бактерицидной (56,8*0, 8-71,1*1,2) и лизоцимной активности сыворотки крови (19,4*0,7-21,1*0,33).

6. Динамика патологических процессов при заражении токсигенными бактериями У. pseudotuberculosis характеризовалась гиперплазией селезенки, атрофией фабрициевой бурсы, сочетанием общей сосудистой реакции с дистрофическими и некротическими изменениями в паренхиматозных органах, увеличением количества межэпителиальных лимфоцитов, скоплением плазматических клеток и экссудативно-инфильтративными процессами органов иммунной системы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

• Для использовашы в лабораториях и научно-исследовательских учреждениях на основе изучения популяционной изменчивости микроорганизмов модифицирована методика микроскопического исследования S-R-форм колоний иерсиний и разработаны «Методические рекомендации по подготовке препаратов для микроскопического исследования S-R-форм бактерий», утвержденные секцией «Ветеринарная санитария, гигиена и экология» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 8 от 22 октября 2012 года).

• При идентификации Y.pseudotuberculosis, выделенных из патматериала птиц рекомендуется схема бактериологического исследования с применением жидкой и плотной селективной среды «CIN-agar», специфичность среды для идентификации У. pseudotuberculosis составляет 86,44 %.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Ибрагимова К.А. Влияние факторов внешней среды на популяционную изменчивость иерсиний // Живые системы и биологическая безопасность населения: Материалы VII международной научной конференции студентов и молодых ученых,- М.: МГУПБ, 2008.- С.262-263.

2. Ибрагимова К. А. ,Ветеринарно-санитарная характеристика мяса птицы при иерсиниозе // Экологически безопасные ресурсосберегающие технологии и средства переработки сельскохозяйственного сырья и производства продуктов питания: Материалы международной научной конференции студентов и молодых ученых. - М.: МГУПБ, 2009,- С. 229-230.

3. Ибрагимова К.А. Сравнительная характеристика методов индикации и идентификации бактерий Salmonella spp. Материалы VIII международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» М, МГУПБ, 2010.- С. 295-297.

4. Ибрагимова К.А. Характеристика диагностических сред для индикации Yersinia pseudotuberculosis и Yersinia enterocolitica / К.А. Ибрагимова // Российский журнал «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии».- 2011-№1(5). - С. 57-59.

5. Ленченко Е.М. Оценка вирулентности и фенотипических признаков Yersinia pseudotubercidosis и Yersinia enterocolitica / Е.М. Ленченко, К.А. Ибрагимова, Д.С. Зверев // Аграрная наука - 2012- №11. - С. 29-30.

6. Ленченко Е.М. Морфологическая характеристика органов иммунитета птиц при заражении токсигенным штаммом Yersinia pseudotuberculosis / Е.М. Ленченко, К.А. Ибрагимова // Аграрная наука - 2013- №6. - С. 30-32.

Отпечатано в типографии ООО "Франтера" Подписано кпечати21.11.2013г. Формат 60x84/16, Бумага "Офсетная №1" 80г/м2. Печать трафаретная. Усл.печ.л. 1,30. Тираж 100. Заказ 654

WWW.FRANTERA.COM

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Ибрагимова, Карина Ахмедовна, Москва

На правах рукописи

ИБРАГИМОВА КАРИНА АХМЕДОВНА

04201453713

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ПТИЦ ПРИ ЗАРАЖЕНИИ ТОКСИГЕННЫМИ БАКТЕРИЯМИ Yersinia pseudotuberculosis

06.02.02 - Ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, профессор

Ленченко Е.М.

МОСКВА 2013

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ..................................................................................................................................................................................................................................3

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ........................................................................................................................................................................................7

1.1. Таксономическое положение и история изучения бактерий Yersinia 7 pseudotuberculosis.............................................................................

1.2. Дифференциально-диагностические свойства Yersinia pseudotuberculosis............9

1.3. Факторы патогенности Yersinia pseudotuberculosis......................................................................12

1.4. Патогенез, диагностика и иммунитет при псевдотуберкулезе................................................17

Заключение по обзору литературы....................................................................................................................24

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ....................................................................................................................................25

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ......................................................................................................................................................................25

2.1. Клинико-морфологические методы исследований..............................................................................................27

2.2. Гематологические и иммунологические методы исследований........................................30

2.3. Бактериологические методы исследований............................................................................................33

2.4. Методы оценки патогенных и токсигенных свойств............................................................................36

2.5. Методы изучения фенотипических признаков Y pseudotuberculosis..............................38

2.6. Методы статистической обработки результатов исследований..........................................39

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ..............................................................................................................................................40

3.1. Результаты изучения морфологических, культуральных, ферментативных свойств Y.pseudotuberculosis........................................................................................................................................................40

3.2. Результаты изучения факторов патогенности Y.pseudotuberculosis..................................47

3.3. Результаты изучения динамики развития болезни при экспериментальном воспроизведении псевдотуберкулеза птиц..........................................................................................57

3.4. Результаты изучения диссеминации Ypseudotuberculosis в ткани и органы

птиц............................................................................................................................................................................................61

3.5. Результаты изучения морфологических изменений в тканях и органах иммунной системы птиц при заражении токсигенными бактериями

Y. pseudotuberculosis....................................................................................................................................................................^

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ..............................................................................................................................................................................................................87

ВЫВОДЫ..........................................................................................................................................................................................................................................................................................92

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ................................................................................................................................................................................................94

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ......................................................................................................................................................................................................................................94

ПРИЛОЖЕНИЕ..............................................................................................................................................................................................................113

ВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Микроорганизмы Yersinia pseudotuberculosis (возбудители псевдотуберкулеза), в соответствии с эмпирическим принципом классификации «Bergy^s manual... 1984-1989», включены в род Yersinia, уровень гомологии ДНК с возбудителем зооантропонозной чумы (Особо Опасной Инфекции) - Yersinia pestis составляет - 87,9 - 90,0 % (Балахонов С,В., 1988; Шурыгина И.А., 2004; Светоч Т.Э., 2012; Price et al., 2012). Генотип патогенных штаммов Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica содержит хромосомные и плазмидные детерминанты, называемые «плазмидой вирулентности иерсиний» - «plasmidasociated with Yersinia virulence» (pYV) (Езепчук Ю.В., 1977; Полоцкий Ю.Е., 1981; Пашин А.Ю. и соавт., 1984; Дайтер А.Б. и соавт., 1987; Тимченко Н.Ф., 1989; 2004; Исачкова Л.М. и соавт., 1993; Мавзютов А.Р., 2001., 1980; Ценева Г.Я., 1997; Kaneuchi С., 1989; Hayashidani Н., 1994; Singh S., 1994; Brubaker R.R., 1983; Cornells G. et al., 1994; Czernomysy-Furowicz, D. 1996; Okwori A. et al., 2007; BonciM. et al. 2009; Thisted Lambertz S. et al., 2008; Long C. et al., 2010).

Псевдотуберкулез у птиц (куры, индейки, фазаны, серые куропатки, утки, голуби, канарейки) протекает остро, подостро, хронически, латентно (Душук Р.В., 1989; Конопаткин А.А. и соавт., 1993; Сидоров М.А. и соавт., 1995; Скородумов Д.И., и соавт., 2005; Бессарабов Б.Ф. и соавт., 2007). При исследовании 1200 проб патматериала птицы идентифицировано 184 культур микроорганизмов, из числа которых 2,1 % составили Г. pseudotuberculosis, указанные бактерии были выделены, также с поверхности и из тушек птицы, яиц и продуктов, приготовленных из мяса птицы, а также с упаковочной тары (Каландадзе Е. П., 1991; Зон М.Г., 2001). При бессимптомной персистенции иерсиний в теплокровном организме бактерионосителей может происходить контаминация пищевого сырья, что обусловливает социальную значимость профилактических мероприятий в начале «пищевой цепи» (в птицеводстве и

перерабатывающей промышленности) (Санитарные правила. 3.1.094-96; Ветеринарные правила 13.3.1318-96).

При организации профилактических мероприятий и изыскании средств борьбы с инфекционными болезнями приоритетной задачей является раскрытие механизмов развития взаимодействия в системе «возбудитель-макроорганизм» с последующей практической реализацией полученных знаний для разработки эффективных методов диагностики. Следует учитывать, что цитотоксическое влияние бактерий Y pseudotuberculosis на клетки млекопитающих, как in vitro, так in vivo к настоящему времени достаточно изучено, менее изученными являются патогенетические аспекты псевдотуберкулеза птиц. Культивирование иерсиний при температуре свыше 28° С вызывает диссоциацию однородной популяции на S-R-формы (Ющенко Г.В., 1972; Ленченко Е.М. и соавт., 1998; Пушкарева В.И., 1999; Бондаренко В.М., 1999; Литвин В.Ю., 1999; Каврук Л.С., 2000; Скляров О.Д., Мельниченко Л.П., 2001; Павлова И.Б. и соавт., 2007; Colwell R., 1985; Kapperud G. et al., 1987; Robins-BrowneR.M. et al., 1993; China B. et al., 1994). Изменение формы, снижение метаболизма бактерий способствуют переходу в «некультивируемое состояние», что определяет целесообразность апробации и подбора эффективных схем бактериологической диагностики, учитывая, мало исследованность следует изучить влияние токсигенных бактерий Ypseudotuberculosis на динамику развития патологических процессов в органах иммунитета птиц, что и определило актуальность темы диссертационной работы.

Цель исследований: изучить диссеминацию микроорганизмов в ткани и органы, динамику морфологических изменений иммунной системы птиц при заражении токсигенными бактериями Yersinia pseudotuberculosis

Задачи исследований:

- изучить морфологические, культуральные, ферментативные свойства Y.pseudotuberculosis;

- изучить феиотипические признаки Y.pseudotubérculos is, связанные с плазмидой вирулентности;

изучить факторы патогенности З'-Я-форм колоний Y. pseudotuberculosis;

- изучить эффективность схем бактериологического исследования на наличие микроорганизмов Yersinia pseudotuberculosis;

- изучить диссеминацию микроорганизмов в ткани и органы птиц;

- изучить динамику морфологических изменений иммунной системы птиц при заражении токсигенными бактериями Yersinia pseudotuberculosis

Научная новизна. Научно обосновано и экспериментально подтверждено применение схемы бактериологической диагностики псевдотуберкулеза с применением жидкой и плотной селективной среды, специфичность среды «CIN-agar» для идентификации Y pseudotuberculosis составляет 86,44 %. Установлено, что средний показатель адгезии S-форм -4,49±0,24, R-форм - 1,37±0,1; индекс фагоцитоза S-форм - 31,16±0,16, R-форм - 59,22±1,24; токсигенность S-форм - 16,33±4,72, R-форм - 4,37+2,14. Установлена прямая коррелятивная зависимость (г=0,6) результатов исследований токсигенных свойств Y pseudotuberculosis, с применением лабораторных моделей «Кожнореактивный фактор» (6,66+4,41) и «Дилатация кишечника» (0,076+0,006). Через 24-32 ч после заражения индекс дилатации (отношение объема жидкости к длине кишечника) составляет 0,057+0,009 до 0,072+0,005. В течение 16-18 часов реакция слизистой оболочки тонкого отдела кишечника усиливалась, наблюдалось скопление значительного количества серозно-геморрагического экссудата в просвете кишки 0,115+0,005 до 0,125+0,007. Динамика патологических процессов при псевдотуберкулезе характеризуется признаками энтеросорбции, увеличением количества межэпителиальных лимфоцитов, скоплением плазматических клеток, наличием экссудативно-инфильтративных процессов.

Практическая значимость работы. На основе изучения

популяционной изменчивости микроорганизмов модифицирована методика

э

микроскопического исследования S-R-форм колоний Y. pseudotuberculosis, Y.enterocolitica и разработаны «Методические рекомендации по подготовке препаратов для микроскопического исследования S-R-форм бактерий», утвержденные секцией «Ветеринарная санитария, гигиена и экология» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол № 8 от 22 октября 2012 года). Результаты исследований используются в учебном процессе на ветеринарно-санитарном факультете ФГБОУ ВПО «МГУ 1111» по дисциплинам: «Цитология, гистология, эмбриология»; «Эпизоотология».

Апробация материалов диссертации. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях кафедры «Инфекционные и паразитарные болезни» ФГБОУ ВПО «МГУПП» (Москва, 2009-2013 гг.); на VII, VIII Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения», «Экологически безопасные ресурсосберегающие технологии и переработки сельскохозяйственного сырья и производства продуктов питания» (М., 2008; М., 2009; М.,2010).

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты изучения популяционной изменчивости, факторов патогенности и фенотипических признаков Y.pseudotuberculosis, связанных с плазмидой вирулентности;

- результаты изучения эффективности схем бактериологического исследования на наличие микроорганизмов Yersinia pseudotuberculosis;

- результаты изучения диссеминации микроорганизмов в ткани и органы птиц;

- результаты изучения динамики морфологических изменений иммунной системы птиц при заражении токсигенными бактериями Yersinia pseudotuberculosis

Публикация результатов исследований. По материалам диссертационной работы опубликовано 6 научных работ, в том числе 3 в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Глава 1.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Таксономическое положение и история изучения бактерий Yersinia pseudotuberculosis

Микроорганизмы Y. pseudotuberculosis - возбудители пищевых токсикоинфекций, в соответствии с "Определителем бактерий Берджи", занимают следующее положение:

Часть - 8. Грамотрицательные факультативно -

анаэробные палочки Семейство - I. Enterobacteriaceae Триба - IV. Yersiniae

Род - XI. Yersiniae [Van Loghem J.J., 1944]

В «Определителе зоопатогенных микроорганизмов» (Сидоров М.А. и др., 1995) врод Yersinia, включены 7 видов:Y. pestis, Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica, Y. frederiksenii, Y. intermedia, Y. kristensenii, Y. ruckeri и один вид Y. philomiragia, с неустановленным систематическим положением.

Y. pseudotuberculosis - возбудитель псевдотуберкулеза (син. розентиоз, ложный туберкулез), природно-очаговой болезни животных, характеризующейся узелковыми поражениями паренхиматозных органов. Распространены повсеместно. Y. pseudotuberculosis у животных многих видов. Достаточно часто встречается у птиц (кур, фазанов, уток , голубей), грызунов (зайцев, крыс, мышей, хомяков, бобров). Из 1004 трупов кроликов, вскрытых в Центральной исследовательской лаборатории в Париже, 26,68 % оказались зараженными, а в ФРГ доля зараженных кроликов составила 60,0 %. Возбудитель также обнаруживался у кошек, реже у овец, коз, свиней, лошадей и крупного рогатого скота (Гордейко В. А., 1990; Каландадзе Е. П., 1991; Каврук Л.С., 1994; Кононенко А.Б., 1997; Етобаев И. В., 1998; Зон М. Г., 2001).

До 1970 года возбудитель псевдотуберкулеза и сходные с этим видом микроорганизмы относили к семейству Brucellaceae, роду Pasteurella. Однако,

учитывая сходство возбудителя псевдотуберкулеза с возбудителем

зооантропонозной чумы и значительные отличия этих микроорганизмов от

других пастерелл, J.J.van Loghem (1944) предложил отнести бактерии к новому

роду Yersinia, названному так в честь микробиолога A. Yersin,

первооткрывателя возбудителя чумы. Alexander Yersin впервые в 1894 году в

Гонконге выделил бактерии, известные ныне как Yersinia pestis. Brenner и соавт.

(1969) выявили, что Y. enterocolitica на 40-60% родственен Y.

pseudotuberculosis. В дальнейшем проведенные генетические, серологические и

биохимические исследования подтвердили правильность отнесения рода Yersinia

к семейству Enterobacteriaceae (Васюренко З.П., Знаменский В.А., 1980).

Рациональность исключения Y pestis, Y. pseudotuberculosis, Y enterocolitica из

рода Pasteurella подтвердилась в исследованиях с применением числовой

таксономии гибридизации ДНК (KnappW., WeberA., 1982). Возбудитель

псевдотуберкулеза был выделен сто лет назад во Франции. В 1883 г MallassezL.,

Vignal W. впервые изолировали возбудитель из органов морской свинки,

зараженной взвесью ткани лимфатического узла ребенка, погибшего от

"туберкулезного" менингита. Термин "псевдотуберкулез" ввел Eberth С. (1885)

и описал морфологические изменения, которые развивались в пораженных тканях

и заметил сходство этих изменений с таковыми при туберкулезе: специфические

гранулемы отличались от туберкулезных тем, что они, как правило, не

обызвестлялись, казеозное перерождение, их наступало значительно быстрее, в

окружении гранулем не были заметны гигантские клетки. Эти изменения назвали

псевдотуберкулезом. В 1889 г Pfeiffer детально изучил свойства культур

микроорганизмов, выделенных Malassez, Vignal, и дал ему название Bacterium

pseudotuberculosis rodentium. До начала 50-х годов нашего столетия в литературе

встречались лишь единичные сообщения о случаях псевдотуберкулеза у

животных. Оценка роли возбудителя в патологии человека изменилась, когда

Masshof W. (1953), Knapp W., Masshoff W. (1954) выделили из обширной

группы мезентериальных лимфаденитов абсцедирующий лимфаденит, часто

сопровождающийся аппендикулярным синдромом. Этиологическим агентом его

8

оказался псевдотуберкулезный микроорганизм. Исследования авторов привлекли внимание других ученых к этой инфекции, в результате чего псевдотуберкулез стали выявлять значительно чаще. Так, уже в 1962 г сообщалось о регистрации в странах Европы 400 случаев псевдотуберкулезного мезентериального аденита (Mollaret Н., 1962). Успешные результаты по выделению возбудителя псевдотуберкулеза были получены благодаря применению принципиально новой методики "холодового обогащения", предложенной в 1963 г Paterson J., Cook R. Согласно предложенной методике посевы выращивали при 4°С на фосфатно-буферном растворе. В России единичные случаи этой клинической формы псевдотуберкулеза впервые были описаны в 1963 г Ющенко Г.В., и Кузмайте Р.И. У птиц псевдотуберкулез протекает часто латентно. При проведении бактериологических исследований в птицеводческих хозяйствах среди кур в 28,2 % случаев были выделены от птиц с признаками диареи. На Томилинской птицефабрике при выделении из патматериала птиц, павших от болезней с невыясненной этиологией, частота выделения иерсиний составила 10,4 %. Достаточно часто иерсинии были выделены из содержимого кишечника - 20,0 %, пищевода - 15,0 %, печени и селезенки - 11,0 % (Сомов Г.П. и др.,1990; Каландадзе Е.П., 1991; Зон М.Г., и соавт., 2001).

1.2. Дифференциально-диагностические свойства Yersinia pseudotuberculosis

Yersinia pseudotuberculosis - грамотрицательные, полиморфные палочки с закругленными концами, шириной 0,5-0,8 мкм, длиной 0,8-1,2 мкм, спор не образуют, имеют перитрихиальные жгутики, которые, как правило, обнаруживаются у бактерий при культивировании при 18-25°С (Сидоров М., и др., 1995). В мазках из бульонных культур Y.pseudotuberculosis образуют цепочки. В мазках из агаровых культур обнаруживаются чаще кокковидные формы бактерий, реже овоидные (Ющенко Г.В., 1983). Yersinia pseudotuberculosis - факультативные анаэробы, растут на обычных питательных

средах (МПА, агар Хоттингера, МПБ) при рН 6,0-9,0 и температуре от 4 до 42° С. На агаре в чашках бактерии формируют S-формы колоний круглые умеренно выпуклые, прозрачные в виде росинок. Довольно характерным для иерсиний является полиморфизм колоний как по размеру, форме, так и по цвету, особенно при культивировании при 37°С. В этом случае наряду с вышеописанными гладкими колониями можно наблюдать образование R-форм колоний, они имеют бугристую форму с изрезанными краями, коричнево - желтоватого цвета. При росте в жидкой питательной среде диссоциированные культуры иерсиний образуют хлопьевидный осадок, а гладкие вызывают равномерное помутнение среды. Важной особенностью является психротрофность иерсиний - свойство довольно редкое для патогенных бактер