Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфофункциональные аспекты повышения эффективности экстракорпорального оплодотворения
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология
Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональные аспекты повышения эффективности экстракорпорального оплодотворения"
САМОЙЛОВА АЛЛА ВЛАДИМИРОВНА
□□3466339
МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ АСПЕКТЫ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОГО ОПЛОДОТВОРЕНИЯ
03.00.25- гистология, цитология, клеточная биология 14.00.01- акушерство и гинекология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
САРАНСК 2009
003466339
Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Чувашский государственный университет им. И.Н.Ульянова»
Научные консультанты:
доктор биологических наук, профессор Любовцева Любовь Алексеевна доктор медицинских наук, профессор Шарапова Ольга Викторовна
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор академик РАМН
доктор медицинских наук, профессор академик РАМН
доктор биологических наук, профессор
Волкова Ольга Васильевна
Адамян Лейла Владимировна Кругляков Павел Павлович
Ведущая организация: ГУ НИИ морфологии человека РАМН
Защита состоится в_часов на заседании
диссертационного совета Д 212.117.01 при ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П.Огарёва» по адресу: 430000, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68. С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П.Огарёва».
Автореферат разослан « »2009 г.
Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор
Балашов В.П.
АКТУАЛЬНОСТЬ РАБОТЫ. В настоящее время демографическая ситуация в России оценивается как критическая, что обусловлено значительным снижением рождаемости, ростом общей смертности (Шарапова О.В., 2007; Кулаков В.И., 2008). При этом продолжает оставаться высокой частота бесплодных браков (Корсак B.C., 2007; Аншина М.Б., 2008). В Чувашии этот показатель колеблется около 18% (Суслонова Н.В., 2008).
Наиболее эффективным методом преодоления бесплодия сегодня является метод вспомогательной репродуктивной технологии - экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) (Калинина Е.А., 2005; Радзинский В. Е., 2006). Однако, несмотря на внешнюю простоту выполнения процедуры ЭКО, частота наступления беременности при применении данного метода лечения не превышает 35-39 % (Краснопольская К.В., 2003; Калинина Е. А., 2005). Предложения многочисленных исследователей повышения эффективности ЭКО в основном основывались на совершенствовании клинических лечебно-диагностических мероприятий (Светланов АЛ. с соавт., 2002, Смольникова В. Ю., 2002; Калинина Е. А., 2005; Кострова Е. В., 2007; Rossin-Amar В., 2006; Myers E.R. et al., 2008). Изучению тонких молеку-лярно-биохимических механизмов оплодотворения in vitro, имплантации и наступлению беременности посвящено необоснованно мало работ.
Безусловно результативность экстракорпорального оплодотворения во многом зависит от успешной имплантации и от качества получаемых для оплодотворения яйцеклеток (Светланов А.В. с соавт., 2002; Ильина А.И. с соавт., 2008). Поэтому изучение способов оценки качества эндометрия, позволяющих составить прогноз возможного исхода ЭКО, а в конечном итоге воздействовать на повышение результативности ЭКО, на сегодня имеет очень важное научно-практическое значение (Ольховская М.А., 2007).
В настоящее время доказано, что решающую роль в имплантации играет рецептивность эндометрия, т.е. количество функционально полноценных рецепторов ткани эндометрия к соответствующим стероидным гормонам (Судома И. А., 2006; Кострова Е. В., 2007; Lecce G. et al., 2001).
Важное значение в процессе имплантации играет сосудистый и гемостазиологический статус как в целом организме, так и, в особенности, в области формирования плацентарной площадки. Известно, что стимуляция суперовуляции в процессе экстракорпорального оплодотворения сопровождается явлениями гиперкоагуляции и активацией внутрисосудистого свертывания (Джинджгава Ж.Г., Бицадзе В.О., 2005). В этой связи представляется весьма актуальным изучение развернутой картины системы гемостаза с точки зрения влияния этой системы на результативность программы экстракорпорального оплодотворения (Долгов В.В., Свирин П.В., 2005; Голованова С.Ю., Сабирова Ф.М., 2007; Di Simone N. et al., 2007).
Ещё одним важным компонентом процесса имплантации, безусловно, являются оплодотворенные эмбрионы (Воробьева О. А., 2001; Светлаков А.В. с соавт., 2002; Ali A. et al., 2006). Огромное значение для оценки функциональной активности гамет имеет фолликулярная жидкость. Изучались многие параметры фолликулярной жидкости - ингибин,
гомоцистеин, лептин, микроэлементы медь и цинк, биологически активные вещества гистамин, серотонин и катехоламины, альфа-2-микроглобулин фертильности (АМГФ), хорионический гонадотропин (ХГЧ) (Любовцева Е.В., 2005; Долгова И.Ю., 2006; Ильина A.A. с соавт., 2008; Hill M.J., Honolulu H.I., 2007; Takahashi С., 2007). Однако все эти работы имеют односторонний характер и не дают полного и однозначного ответа на вопрос о значении биохимического состава фолликулярной жидкости в процессе имплантации.
При одновременной оценке таких механизмов, как клеточная дифференцировка (созревание яйцеклеток и состояние рецепторного аппарата), клеточный иммунитет (процессы отторжения и реакции немедленного и замедленного типа), состояние микрососудистого гомеостаза, представляется очень важным определить роль биологически активных веществ гистамина, серотонина и катехоламинов (Любовцева Л.А., 1993; Хромых Л.М. с соавт., 2001; Lalitkumar P.G.L. et al., 1998; Sozen I. et al., 2002). Роль каждого из них в вышеуказанных процессах бесспорна, однако, сведения о значимости их в результативности экстракорпорального оплодотворения практически отсутствуют.
Таким образом, изучение новых механизмов имплантации в процессе экстракорпорального оплодотворения на тонком морфологическом и молекулярно-биохимическом уровнях может позволить сделать ещё один шаг в повышении эффективности данного метода лечения бесплодия.
Исходя из этого целью настоящей работы явилось:
Выявление морфофункциональных механизмов повышения эффективности экстракорпорального оплодотворения.
Задачи исследования:
1. Изучить морфологическую картину и рецепторный статус эндометрия у женщин с различными результатами лечения бесплодия методом ЭКО и провести корреляционный анализ взаимодействия рецепторного статуса с уровнем половых стероидных гормонов в периферической крови.
2. Выявить влияние нейромедиаторов: гистамина, серотонина и катехоламинов, содержащихся в фолликулярной жидкости и в периферической крови на результативность лечения бесплодия методом ЭКО. Провести корреляционный анализ взаимного влияния гистамина и серотонина периферической крови и фолликулярной жидкости на результативность ЭКО.
3. Исследовать гемостазиологический статус у женщин с различными результатами лечения методом ЭКО и провести корреляционный анализ показателей гемостаза с уровнем серотонина и гистамина в периферической крови.
4. Оценить изменения уровней альфа-2-микроглобулина фертильности, хорионического гонадотропина, микроэлементов меди и цинка в фолликулярной жидкости у женщин с различными результатами лечения методом ЭКО и провести корреляционный анализ их взаимного влияния на результативность данного метода лечения бесплодия.
5. В эксперименте исследовать общую морфологию и пролиферативные процессы в матке мышей при сочетанном хроническом воздействии экзогенных эстрогенов, пролактина и глюкокортикоидов.
6. Исследовать состояние эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в матке мышей при сочетанном хроническом воздействии экзогенных эстрогенов, пролактина и глюкокортикоидов.
7. Выявить группу клинико-анамнестических факторов, оказывающих существенное влияние на результативность программы экстракорпорального оплодотворения.
Научная новизна. Впервые выявлена различная экспрессия стероидных рецепторов эндометрия в течение менструального цикла у женщин с различными исходами экстракорпорального оплодотворения. Установлена корреляционная взаимосвязь между уровнем стероидных рецепторов эндометрия и концентрацией стероидных и гонадотропных гормонов в периферической крови у пациенток программы экстракорпорального оплодотворения.
Впервые доказано положительное влияние повышенной концентрации гистамина и пониженной концентрации серотонина в фолликулярной жидкости и периферической крови на результат экстракорпорального оплодотворения
Впервые выявлена корреляционная взаимосвязь гиперагрегационного состояния периферической крови у женщин с различными исходами экстракорпорального оплодотворения с уровнем гистамина и серотонина в периферической крови.
Впервые установлено отрицательное воздействие повышенной концентрации меди в фолликулярной жидкости на исход экстракорпорального оплодотворения. Доказана корреляционная взаимосвязь микроэлементного состава и концентрации альфа-2-микроглобулина фертильности в фолликулярной жидкости.
В проведенных исследованиях выявлены изменения пролиферативных процессов и морфологического строения матки мышей при сочетанном хроническом воздействии экзогенных эстрогенов, пролактина и глюкокортикоидов в сравнении с действием только эстрогенов.
Впервые изучены особенности экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов матки мышей при сочетанном хроническом воздействии экзогенных эстрогенов, пролактина и глюкокортикоидов.
Практическая значимость. Выявленные морфофункциональные механизмы, влияющие на результат экстракорпорального оплодотворения, позволили сформировать группы непредотвратимых и условно-предотвратимых факторов, воздействие на которые позволит повысить эффективность лечения бесплодия. Внедрение в повседневную практику перед включением в программу лечения методом ЭКО лабораторного исследования рецепторного статуса эндометрия, биоаминного состава периферической крови и гемостазиограммы позволяют дифференцированно
подходить к назначению соответствующего лечения с целью повышения конечной эффективности экстракорпорального оплодотворения.
Положения, выносимые на защиту:
1. Выявленное повышенное содержание прогестероновых и эстрогеновых рецепторов в эпителии желёз и клетках стромы эндометрия в позднюю стадию фазы пролиферации и сниженное число этих рецепторов в клетках стромы эндометрия в среднюю и позднюю стадии фазы секреции является источником формирования истинной недостаточности лютеиновой фазы менструального цикла и является прогностически неблагоприятным фактором, влияющим на наступление беременности у женщин в процессе лечения методом экстракорпорального оплодотворения.
2. Коррекция повышенных концентраций серотонина, меди и альфа-2-микроглобулина фертильности в фолликулярной жидкости и периферической крови способствуют повышению эффективности экстракорпорального оплодотворения.
3. Выявленное повышение экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в эпителиальных и стромальных клетках матки мышей при введении экзогенного эстрадиола и дексаметазона и снижение экспрессии этих же рецепторов при введении пролактина доказывает непосредственное воздействие повышенных доз эстрогенов на экспрессию стероидных гормонов в матке. Эстроген-индуцированные морфологические реакции в матке овариоэктомированных мышей претерпевают изменения под воздействием экзогенного пролактина и глюкокортикоида дексаметазона, и проявляются снижением пролиферативной активности во всех структурах матки, снижением гиперплазии эндометрия, потенцируемой повышенными дозами эстрогенов.
4. Существенное отрицательное воздействие на результативность экстракорпорального оплодотворения имеет совокупное влияние шестнадцати клинико-анамнестических данных: наличие эндометрита и эндоцервицита в анамнезе, инфицированность хламидиями, уреаплазмами, микоплазмами, вирусом простого герпеса и цитомегаловирусом, наличие в анамнезе кист и резекции яичников, миомэктомии и спаечного процесса в малом тазу, номер попытки, а также пониженный уровень ингибина В, тироксина и эстрадиола и повышенный уровень альфа-2-микроглобулина фертильности.
Апробация работы и публикации. По результатам работы опубликовано 50 работ, в том числе 12 в изданиях, рецензируемых ВАК РФ. Издана монография «Современные методы диагностики и лечения бесплодного брака» (Чебоксары 2006), издано учебное пособие для студентов, курсантов и практикующих врачей «Лабораторная диагностика бесплодия в браке» (Чебоксары 2006). Материалы работы использовались при написании раздела «Применение высокотехнологичных методов лечения бесплодия в
браке» республиканской целевой программы Минздравсоцразвития Чувашии на 2006-2008 годы «Дети Чувашии» (Чебоксары 2005).
Результаты работы доложены на ХУ-ХУШ международных научно-практических конференциях Российской ассоциации Репродукции человека «Репродуктивные технологии сегодня и завтра» (Чебоксары, 2005; Ростов-на-Дону, 2006; Казань, 2007; Самара, 2008), первом международном конгрессе по репродуктивной медицине «Репродуктивное здоровье семьи» (Москва, 2006), на научно-практической конференции, посвященной 60-летию Республиканской клинической больницы № 1 (Чебоксары, 2007), на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Информационные технологии в профессиональной деятельности и научной работе» (Йошкар-Ола, 2008), на 2-м региональном научном форуме «Мать и дитя» (Сочи, 2008), на IV съезде акушеров-гинекологов России (Москва, 2008), в научно-практическом симпозиуме «Лабораторная медицина: инновационные технологии в аналитике, диагностике, образовании, организации» (Москва, 2008).
Основные положения диссертационной работы доложены на объединённом заседании кафедр гистологии, цитологии и эмбриологии, нормальной физиологии, патологической физиологии, биологии и кафедры акушерства и гинекологии ФГОУ ВПО «Чувашского государственного университета им. И.Н.Ульянова» и кафедры акушерства и гинекологии ГОУ «Институт усовершенствования врачей».
Внедрение результатов работы. Результаты работы внедрены в протоколы обследования пациенток перед включением в программу лечения пациенток методом ЭКО в амбулаторном отделении ГУЗ «Президентский перинатальный центр» Минздравсоцразвития Чувашской республики, в протоколы морфологического исследования биоптатов эндометрия ГУЗ «Патологоанатомическое бюро» Минздравсоцразвития Чувашской республики. Организована совместная гистохимическая лаборатория ГУЗ «Президентский перинатальный центр», ГУЗ «Патологоанатомическое бюро» Минздравсоцразвития Чувашской республики и кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии Чувашского госуниверситета. Внедрена в практическую деятельность разработанная автором прикладная программа для ЭВМ «Алгоритм ведения бесплодных супружеских пар» (Свидетельство РФ № 2005611629, 03.05.2005). Результаты работы используются в учебном процессе на кафедрах акушерства и гинекологии ФГОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И.Н.Ульянова» и ГОУ «Институт усовершенствования врачей», кафедрах гистологии, цитологии и эмбриологии, биологии и патологической физиологии ФГОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И.Н.Ульянова».
Объём и структура диссертации. Работа изложена на 264 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы материалов и методов, главы собственных исследований и обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. В работе
содержится 68 рисунков, 61 таблица. Список литературы включает 330 работ, в том числе 145 отечественных и 185 зарубежных источников.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования.
Для выполнения поставленных задач исследования работа была разделена на этапы с разработкой программы исследования (таб. 1). На первом этапе проведен ретроспективный анализ результатов обследования в амбулаторном отделении ГУ3 «Президентский перинатальный центр» 1912 женщин, которым было выполнено экстракорпоральное оплодотворение за период 1999-2007 гг. Все обследованные пациентки были разделены на две группы в зависимости от исходов лечения методом экстракорпорального оплодотворения: I группа - пациентки с наступившей беременностью (положительный результат лечения ЭКО); П группа - пациентки с нена-ступившей беременностью (отрицательный результат лечения ЭКО).
В целях оптимизации методов диагностики и лечения, сокращения сроков обследования супружеских пар разработана индивидуальная карта и алгоритм обследования пациентов (Свидетельство РФ № 2005611629). В аналитической карте было подвергнуто многофакторному анализу 58 клинических параметров анамнестических данных, результатов лабораторного и инструментального обследования пациенток и результатов лечения методом экстракорпорального оплодотворения.
На втором этапе сформированы репрезентативные выборки для проведения лабораторных исследований: морфологического строения и рецепторного статуса эндометрия, биоаминного состава периферической крови и фолликулярной жидкости, биохимического, гистохимического и микроэлементного состава фолликулярной жидкости,
гемостазиологического статуса периферической крови (табл. 1). Методы исследования:
• морфологические методы исследования соскобов эндометрия (окраска гематоксилин-эозином);
• иммуногистохимические методы выявления рецепторов к эстрадиолу и прогестерону в эндометрии с использованием мышиных моноклональных антител к эстрогеновым рецепторам (клон 1D5) и прогестероновым рецепторам (клон PgR 636) фирмы DakoCytomation. Для визуализации иммунологической реакции применяли систему LSAB2, в качестве хромогена использовали DAB (Dako).
• люминесцентно-гистохимические методы выявления тканевого гистамина - газовый люминесцентно-гистохимический метод Кросса с соавт. (1971) и выявления катехоламинов и серотонина - люминесцентно-гистохимический метод Фалька-Хилларпа в модификации Е.М. Крохиной, П.П. Александрова (1969).
• иммуноферментные методы определения в периферической крови концентрации гистамина - наборы «Histamine ELISA» (LDN, Германия) и серотонина - наборы «Serotonin ELISA» (LDN, Германия);
Таблица 1
Программа исследования__
Наименование исследований Группа I Группа 11
1. Клинико-статистический анализ анамнеза и данных клинического обследования женщин, включённых в программу ЭКО (п = 1912) 668 1244
2. Изучение особенностей рецепторного статуса эндометрия у женщин программы ЭКО 144 128
3. Определение гистамина, серотонина и катехоламинов в мазках фолликулярной жидкости 146 169
4. Определение содержания гистамина и серотонина в периферической крови 178 158
5. Изучение особенностей гемостазиологического статуса периферической крови 140 160
6. Определение АМГФ и ХГЧ в фолликулярной жидкости 86 112
7. Определение содержания катионов меди и цинка в фолликулярной жидкости 88 98
8. Математическая обработка полученных результатов (п = 1912) 668 1244
• диагностика гемостазиологического статуса сыворотки крови, состояние коагуляционного гемостаза оценивалось клотгинговыми методами на механическом коагулометре «Start 4» («Diagnostica Stago», Франция) наборами фирмы «Технология-Стандарт» (г. Барнаул). В качестве молекулярного фактора тромбофилии исследовали концентрацию гомоцистеина в сыворотке крови с помощью иммуноферментного анализатора «Униплан» тест-системой «Axis Homocysteine EIA» («Axis-Shield», Норвегия). Для лабораторной диагностики антифосфолипидного синдрома (АФС) проводили определение антифосфолипидных антител (АФА): волчаночный антикоагулянт (ВА) в плазме крови наборами фирмы «Технология-Стандарт» (Россия);
• содержание катионов меди и катионов цинка в фолликулярной жидкости пациенток определяли на атомно-абсорбционном спектрофотометре С-115.
• количественное определение альфа-2-микроглобулина фертильности в фолликулярной жидкости проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием диагностического набора
«АМГФ - ФЕРТИТЕСТ - М», на основании моноклональных антител к АМГФ. Количественное определение хорионического гонадотропина в фолликулярной жидкости проводили иммуноферментным методом с помощью тест-систем производства ЗАО «Алкор Био» (г. Санкт -Петербург, Россия).
• общеклинические и лабораторные методы обследования;
• инструментальные и эндоскопические методы диагностики (гистеросапьпингография, ультразвуковое исследование; гистероскопия, лапароскопия);
• статистический анализ выполнен на персональном компьютере ШМ PC/AT с применением разработанных для этого класса вычислительной техники статистических программ в среде Exel 97.0 и Statistica for Windows 6.0. Экспериментальный этап работы выполнен на лабораторных
половозрелых мышах CFW. Модель десентизации яичников в программе ЭКО в эксперименте достигали овариэктомией. Затем животным в течение 30 дней вводили подкожно раствор эстрадиола дипропионата в дозе 2 мкг/100 г 1 раз в неделю (п=21), эстрадиола дипропионата и овечьего пролактина в разведении 0,15 М раствора натрия хлорида подкожно 1 раз в сутки в дозе 0,25 мг/100 г в течение 1 мес. (п=21), эстрадиола дипропионата и дексаметазон в питьевой воде в дозе 2 мг/л в течение 30 дней (п=25), эстрадиола дипропионата и синтетического АКТГ продлённого действия в дозе 10 мкг на 100 г ежедневно 30 дней (п=25). После окончания медикаментозного воздействия через 48 часов после последней инъекции эстрадиола у животных под глубоким эфирным наркозом забирали матку и готовили поперечные гистологические срезы. Гистологические препараты окрашивали железным гематоксилином для выявления морфологических изменений. Для иммуногистохимического выявления рецепторов к эстрадиолу и прогестерону использовали кроличьи поликлональные антитела к прогестероновым и эстрогеновым рецепторам («Santa Cruz Biotechnology» США). Выявление бромдезоксиуридин-положительных клеток осуществлялось стрептавидин-иммуногистохимческим методом с последующим подсчётом процента положительно окрашенных клеток.
В результате проведённого исследования были изучены механизмы комплексного влияния морфофункциональных факторов на процессы имплантации и наступление беременности при лечении женского бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения. Все эти параметры рассматривались во-первых, с точки зрения их отдельного самостоятельного или совокупного влияния на результативность ЭКО, а, во-вторых, с точки зрения возможного воздействия на изученные факторы с целью повышения результативности ЭКО. В конечном итоге были сформированы группы предотвратимых и условно-предотвратимых причин, влияющих на исход экстракорпорального оплодотворения.
Для оценки клинико-анамнестических данных была применена специально разработанная карта анализа причин бесплодного брака
(Свидетельство РФ № 2005611629). Из 58 параметров результатов клинического, специального гинекологического, лабораторного, инструментального методов обследования различия между группами разной степени достоверности были выявлены по 32 показателям (т.е. в 55, 2 % случаев). Однако выявлено, что лишь 16 факторов имеют важное совокупное влияние на результат ЭКО (табл. 2). Каждый из этих 16 факторов по отдельности имеет несильно выраженные коэффициенты корреляции, а коэффициент совокупной множественной корреляции и коэффициент множественной детерминации имеют очень высокие показатели: соответственно 11=0,97 и Я" = 0,95.
Таблица 2
Факторы, наиболее существенно влияющие на результативность ЭКО_
№п\п Наименование параметров Группа I беременность есть Группа II беременности нет коэффициент корреляции г
1 Номер попытки 1.46 1,69 0,475167
2 Эндометрит в анамнезе 26,67% 34,25% -0,364966
3 Эндоцервицит в анамнезе 30,00% 26,03% -0,4945549
4 Хламидиоз в анамнезе 14.17% 15,75% -0,534017
5 Уреаплазмоз в анамнезе 12,50% 12,33% -0,4594398
6 Микоплазмоз в анамнезе 5,83% 5,48% 0,3844549
7 Цитомегаловирусная инфекция 78,33% 80,14% 0,8100318
8 Инфицированность вирусом простого герпеса в анамнезе 82,5% 76,03% 0,3880397
9 Резекция яичников в анамнезе 31,67% 23,97% 0,3349441
10 Миомэктомия в анамнезе 6,67% 5,48% 0,44366274
11 Киста яичника в анамнезе 20,83% 30,14% -0,34012445
12 Спаечный процесс в малом тазу 40,83 % 37,67% 0,45329561
13 Ингибин В, нг/мл 102,65 71,74 -0,40512589
14 Эстрадиол, пг/мл 49,76 56,78 -0,4669633
15 Тироксин, пмоль/л 32,03 31,44 -0,38688287
16 Альфа-2-микроглобулин фертильности, мкг/л 104,71 115,91 0,15060387
На основании математического моделирования разработана прогностическая многофакторная модель:
у= -1607,692*Х,+272,967*Х2- 36,203*Хз- 309,619*Х4+75,113*Х5- 392,781*Х6--87,053*Х,- 36,034*Х8+1,828*Х9+286,900*Х10 - 0,082»Х,,+83,020*Х,2- 12,146*Х13+75,363»Х,4+ +118,607*Х,5-0,304«Х,6
Переменные данной модели представляют 16 факторов существенного совокупного влияния на исход ЭКО (таб. 2). Коэффициент множественной детерминации II2 констатирует, что факторы, учтенные в модели, объясняют 95,5% дисперсии результативного признака (у), а на долю неучтённых факторов приходится лишь 4,5% её дисперсии. Статистический критерий Фишера: ¥т5л= 232,09, Ркр,п=Р(1;175;0,05)= 3,89 подтверждает значимость модели в целом.
На рис. 1 приведена графическая интерпретация математического моделирования исходных данных и построенной математической
многофакторной модели прогностических данных. Ряд 1 представляет графическое отображение математического анализа влияния изученных параметров на результативность ЭКО в течение 12 месяцев наблюдения. Ряд 2 отображает прогностическую модель возможного результата ЭКО при совокупном учитывании изученных признаков. На рисунке отчётливо видно полное совпадение ретроспективного и проспективного анализа в восьми из двенадцати месяцев. Это доказывает, что построенная математическая многофакторная модель действительно отражает существенное влияние совокупности изученных признаков на результативность ЭКО.
Поскольку все клинико-анамнестические данные являются уже имеющимися факторами на момент включения пациенток в программу лечения ЭКО, нет возможности изменить существующий факт. Следовательно, данные факторы могут быть отнесены в группу непредотвратимых, которые неизбежно оказывают влияние на исход ЭКО.
Рис. 1. Исходная и прогностическая математическая модель влияния клинико-анамнестических данных на результат ЭКО. Примечание: Ряд 1 - исходные данные,
Ряд 2 построенная математическая многофакторная модель.
Результаты иммуногистохимического исследования рецепторного статуса эндометрия.
В ходе исследования было установлено, что у пациенток с различным исходом программы ЭКО ретроспективно выявляется различная экспрессия рецепторов стероидных гормонов (рис. 2 а-с1). Наблюдается преобладание эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в фазе пролиферации, особенно в позднюю стадию, по сравнению с фазой секреции (таб. 3). Это совпадает с данными других исследователей (Му1опаэ I. й а1., 2000).
При этом выявлено, что у пациенток I группы экспрессия эстрогеновых рецепторов в эндометрии максимальна в среднюю стадию фазы пролиферации в эпителии желез, в последующем снижается в секреторной фазе (рис. 2а, За). Это вполне согласуется с концепцией роста концентрации
эстрогеновых рецепторов в периовуляторный период (Побединский Н.М. с соавт., 2000, ОеЫег М.К. е1 а1., 2000). Концентрация эстрогеновых рецепторов в строме у пациенток этой же группы постепенно снижается от фазы пролиферации к фазе секреции и повышается в поздней стадии фазы секреции.
Во II группе с отрицательным результатом лечения наблюдается достоверное увеличение эстрогеновых рецепторов в эпителии желез эндометрия в ранней и поздней стадии фазы пролиферации и достоверное увеличение концентрации эстрогеновых рецепторов в клетках стромы по сравнению с таковыми показателями у женщин с положительным результатом лечения. Достоверно ниже концентрация эстрогеновых рецепторов в клетках стромы эндометрия в средней и поздней стадии фазы секреции у пациенток с отрицательным исходом ЭКО. Это может объяснять истинную недостаточность лютеиновой фазы цикла у женщин данной группы, поскольку эстрогеновые рецепторы рассматриваются как источник образования прогестероновых рецепторов. А с другой стороны, можно предположить недостаточное влияние эстрогеновых рецепторов стромы в данной группе на процессы ангиогенеза, которые особенно характерны для средней и поздней стадии фазы секреции. Именно в этот период предполагаются процессы имплантации оплодотворенных яйцеклеток.
Прогестероновые рецепторы в ядрах эпителиальных клеток желез в обеих группах пациенток были подвержены одинаковым колебаниям в течение цикла при отсутствии достоверных различий в концентрации за исключением поздней стадии фазы секреции, где достоверно меньше выявлялось прогестероновых рецепторов у женщин с положительным результатом лечения (рис. 2 Ь, 2ё). Экспрессия прогестероновых рецепторов в клетках стромы у женщин с положительным результатом лечения постепенно повышается в ранней и средней стадии пролиферации, снижается в поздней пролиферативной фазе и значительно увеличивается в средней и, особенно, в поздней стадии фазы секреции (рис. 2(1, ЗЬ).
У женщин с отрицательным результатом лечения экспрессия прогестероновых рецепторов в клетках стромы достоверно повышается в поздней пролиферативной и средней секреторной фазах. Но остаётся достоверно ниже экспрессии прогестероновых рецепторов в клетках стромы в средней и поздней стадиях фазы секреции у женщин I группы (рис. 3(1).
По данным ряда авторов максимальное содержание прогестероновых рецепторов в неизмененном эндометрии должно наблюдаться в позднюю стадию фазы пролиферации и раннюю стадию фазы секреции (Феськов А.М., 1999; Яманова М.В. с соавт., 2003). Однако в нашем исследовании было вьивлено максимальное повышение экспрессии прогестероновых рецепторов в клетках стромы эндометрия в средней и поздней стадии фазы секреции у пациенток с последующим положительным исходом ЭКО.
Основываясь на современных представлениях о взаимной связи уровня половых стероидов и экспрессии рецепторов стероидных гормонов, причиной низкой концентрации прогестероновых рецепторов в фазу секреции могут быть недостаточное количество эстрогенов или избыток прогестерона.
Результаты гормональных исследований пациенток сравниваемых групп позволяют нам .считать причиной недостаточности прогестероновых рецепторов эндометрия в секреторной стадии у пациенток II группы униженный базальный уровень эстрадиола (52,5 + 2,3 пг/мл).
Таблица 3
Гистологический диагноз биоптата Интенсивность окрашивания ядер (А1) Соотносительный
Эстрогеновые рецепторы (ЭР) Прогестероновые рецепторы (ПР) коэф( реце СТ] шциент содержания пторов в железах и роме эндометрия
Железы (Ж) Строма (С) Железы (Ж) Строма (С) ЭР Ж/С ПР Ж/С ЭР- ж/ ПР- ж ЭР- с/ ПР- с
Ранняя пролиферация I группа (п=18) 0,23± 0,03 0,2 8± 0,04 0,29± 0,02 0,36± 0,03 0,83 ± 0,02 0,82 ± 0,03 0,80 ± 0,11 0,77 ± 0,11
II группа (п=8) 0,33± 0,04* 0,25± 0,006 0,31± 0,04 0,34± 0,04 1,33 ± 0,14 *»* 0,87 ± 0,03 1,11 ± 0,02 0,78 ± 0,07
Средняя пролиферация I группа (п=20) 0,30± 0,04 0,31± 0,04 0,33± 0,03 0,39± 0,04 0,95 ± 0,04 0,86 ± 0,02 0,90 ± 0,07 0,81 0,05
II группа (п=20) 0,30± 0,02 0,31± 0,02 0,38± 0,03 0,42± 0,04 1,0± 0,03 0,89 ± 0,02 0,85 ± 0,05 0,79 ± 0,07
Поздняя пролиферация I группа (п=18) 0,26± 0,02 0,17± 0,01 0,32± 0,04 0,31± 0,03 1,53 ± 0,13 1,0± 0,04 0,85 ± 0,07 0,6± 0,09
П группа (п=14) 0,34± 0,04* 0,22± 0,03* 0,36± 0,04 0,43± 0,05* 1,62 ± 0,13 0,92 ± 0,07 0,94 ± 0,06 0,55 ± 0,04
Ранняя секреция I группа (г>=40) 0,26± 0,04 0,19± 0,02 0,29± 0,04 0,33=ь 0,03 1,4± 0,13 0,87 ± 0,05 0,92 ± 0,06 0,62 ± 0,06
II группа (л =34) 0Д4± 0,02 0,18± 0,01 0,31± 0,02 0,34± 0,03 1,54 ± 0,21 0,96 ± 0,02 0,83 ± 0,07 0,63 ± 0,06
Средняя секреция I группа (п=32) 0,23± 0,04 0,25± 0,03 0,23± 0,03 0,5 5± 0,04 0,94 ± 0,09 0,43 ± 0,05 1,02 ± 0,11 0,49 ± 0,07
П группа (п=24) 0,19± 0,01 0,19± 0,01* 0,21± 0,02 0,49± 0,04 1,04 ± 0,05 0,47 ± 0,04 1,06 ± 0,09 0,44 =ь 0,04
Поздняя секреция I группа (п=16) 0,19± 0,02 0,3 5± 0,05 0,11± 0,006 0,57± 0,02 0,59 ± 0,04 0,19 ± 0,02 1,91 ± 0,25 0,59 ± 0,06
II группа (п=28) 0,19± 0,01 0,204 0,01** 0,18± 0,02*** 0,37± 0,03*** 0,97 ± 0,04 ** 0,58 ± 0,07 ** 1,22 ± 0,12 * 0,62 ± 0,06
Примечания: различи между показателями сравниваемых групп достоверны при *** - р< 0,001, ** - р<0,01, * - р<0,05
-I фуппа
■II ГП\/ППЯ
0,35 +
0,25
0,15 --
Рис. 2а. Эстрогеновые рецепторы в эпителии желез эндометрия
0,4
0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1
0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 -0,1 --
I группа
—I-1-
РС СС ПС
-♦—II группа
Рис. 2Ь. Эстрогеновые рецепторы в клетках стромы эндометрия
0,6 0,55 0,5 0,45 0,4 0,35 0,3 0,25 -0,2 -I-1-1-1-1-
РП СП ПП РС СС ПС
группа —♦— II группа —■—I группа —II группа
Рис. 2с. Прогестероновые Рис. 26. Прогестероновые
рецепторы в эпителии желез рецепторы в клетках стромы
эндометрия эндометрия
Примечание: РП - ранняя пролиферативная фаза менструального цикла СП - средняя пролиферативная фаза менструального цикла ПП - поздняя пролиферативная фаза менструального цикла РС - ранняя секреторная фаза менструального цикла СС - средняя секреторная фаза менструального цикла ПС - поздняя секреторная фаза менструального цикла
. п. ». ' .- а. •
Ш *
а Л \ Щ
«з V
%
ыш* '¿у
и «
'а' М,- .::©.
«И Д
Рис. За. Экспрессия эстрогеновых Рис. ЗЬ. Экспрессия прогестероновых
рецепторов в эндометрии матки в среднюю рецепторов в эндометрии матки в среднюю
стадию фазы пролиферации у пациенток стадию фазы пролиферации у пациенток
с удачной попыткой ЭКО (моноклоналъные с неудачной попыткой ЭКО
антитела «Оако», микроскоп №соп ЕсНрв (моноклональные антитела «Оако»,
Е200, ув. 10x40)
микроскоп Ы1соп ЕсПрэ Е200, ув. 10x40)
ж
'. : 1 ч' &ВК
< ^
•а V ^«¡п 'Щь V4
Рис. Зс. Экспрессия эстрогеновых Рис. Зё. Экспрессия прогестероновых
рецепторов в эндометрии матки в раннюю рецепторов в эндометрии матки в раннюю
стадию фазы секреции у пациенток с стадию фазы секреции у пациенток с
удачной попыткой ЭКО (моноклональные неудачной попыткой ЭКО
антитела «Оако», микроскоп №соп ЕсНрз (моноклональные антитела «Оако»,
Е200, ув. 10x40) микроскоп Ыюоп ЕсЦрв Е200, ув. 10x40)
Примечание: ЭР-Ж эстрогеновые рецепторы в желазах эндометрия
ЭР-С эстрогеновые рецепторы в клетках стромы эндометрия ПР-Ж пргестероповые рецепторы в железах эндометрия ПР-С прогестероиовые рецепторы в клетках стромы эндометрия
Полученные в ходе нашего исследования данные по экспрессии рецепторов в ядрах эпителиальных клеток желёз и в ядрах клеток стромы свидетельствуют о различном соотношении рецепторов в железах и в строме в различные фазы цикла. Преобладание эстрогеновых рецепторов в эпителии желез выявлено в ранней и поздней пролиферативной стадии у пациенток П группы. Прогестероновые рецепторы преобладают в клетках стромы над рецепторами в эпителии желез практически на протяжении всего менструального цикла у пациенток обеих групп (рис. 2). Можно предположить, что клетки стромы более чувствительны к содержанию прогестерона.
Известно, что эстрадиол усиливает синтез собственных рецепторов и рецепторов прогестерона (Fung H.Y. et al., 1994). Прогестерон же не усиливает синтез собственных рецепторов, а подавляет его так же, как и синтез рецепторов эстрадиола. Следовательно, количество определенного вида рецепторов зависит, как от содержания соответствующего активного гормона в крови, так и от концентрации стероидов другого класса (Побединский Н.М. и др., 2000; Bression D. et al., 1986).
Перед нами стояла задача определить наличие зависимости экспрессии рецепторов стероидных гормонов в различные фазы менструального цикла от базального уровня эстрадиола, фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов сыворотки крови, взятой на 2-3-й день менструального цикла и уровня прогестерона в средней стадии фазы секреции (20-22-й день цикла). Выявленные нами высокие отрицательные коррелятивные взаимоотношения между базальным уровнем гормонов свидетельствует о наличии у пациенток программы ЭКО истинной лютеиновой недостаточности. Это позволило нам с большей уверенностью рекомендовать для поддержки секреторной фазы после переноса эмбриона применять не прогестерон и его аналоги, а стимулятор выработки эндогенного прогестерона - хорионический гонадотропин.
Таким образом, проведённые исследования свидетельствуют о наличии в группе с отрицательным результатом экстракорпорального оплодотворения истинной недостаточности лютеиновой фазы цикла ещё до включения в программу лечения.
Рассматривая рецепторный статус с точки зрения предотвратимое™ или возможной его коррекции для повышения эффективности ЭКО, его можно отнести к условно-предотвратимому фактору, поскольку, основываясь на полученных данных, можно корректировать лечение с прогнозом на повышение результативности ЭКО.
При исследовании нейромедиаторного состава было выявлено, что в группе женщин с положительным исходом ЭКО в фолликулярной жидкости наблюдалось достоверно большее содержание гистамина по сравнению с группой с отрицательным результатом ЭКО (табл. 4). Во II группе, наоборот, определяется большее содержание серотонина по сравнению с I группой. Доказана высокая коррелятивная связь содержания серотонина и гистамина в фолликулярной жидкости с их содержанием в плазме крови.
Выявлено, что важное значение имеют не столько абсолютные величины концентрации биологически активных веществ, сколько соотносительные коэффициенты их содержания между группами (таб. 4).
Таким образом, суммарное содержание гистамина в фолликулярной жидкости и плазме крови в группе женщин с положительным результатом ЭКО в 1,25 - 1,27 раз больше, чем в группе женщин с отрицательным исходом. А суммарное содержание серотонина как в фолликулярной жидкости, так и в плазме крови у пациенток с положительным результатом лечения составляет 0,73-0,76 от его суммарного содержания у пациенток с отрицательным результатом ЭКО (табл. 4).
Данное заключение позволяет предложить в качестве прогностического диагностического маркера исследовать уровень гистамина и серотонина в периферической крови до включения женщины в программу лечения методом .экстракорпорального оплодотворения.
Таблица 4
Содержание нейромедиаторов в фолликулярной жидкости (ФЖ) и в плазме
крови (ПК) (М±т)
Наименование параметров Группа I Группа П Коэф. 1Я1
Фоллик. жидк. Гистамин (усл. ед.) 6,5 ± 0,1 5? и с 5,2 ±0,5* п =169 1,25
Серотонин (усл. ед.) 3,3 ± 0,5 4,5 ± 0,2* 0,73
Плазма крови Гистамин (нг/мл) 1,37 ±0,12 со II с 1,08 ±0,08* 00 1г> II С 1,27
Серотонин (нг/мл) 167,0 ±21,3 220,6 ± 15,8* 0,76
Коэф( мин £ ФЖ >. корреляции гиста-ПК к гистамину в 0,917 0,887
Коэфф. корреляции серото-нин в ПК к серотонину в ФЖ 0,897 0,936
Примечание: * - различия между группами достоверны при р <0,05
Рассматривая механизм влияния нейромедиаторов на исход оплодотворения, имплантации и наступление беременности, можно предположить, что повышенное содержание серотонина в периферической крови и фолликулярной жидкости вызывает повышенное тромбообразование за счёт усиления агрегации тромбоцитов в области плацентарной площадки, что препятствует нормальному процессу имплантации и наступлению беременности. Эти данные, с другой стороны, полностью согласуются с
результатами исследования гемостазиологического статуса женщин с отрицательным результатом ЭКО. Высокая коррелятивная связь содержания серотонина и гистамина в периферической крови с показателями гемостазиограммы, характеризующей гиперагрегационное состояние у женщин с отрицательным результатом лечения, определяет важную роль данных нарушений в процессах имплантации и наступлении беременности. Кроме того, по данным Л.А. Любовцевой (1993) и Е.В. Любовцевой (2005) серотонин является супрессором и задерживает дифференцировку клеток на ранних этапах развития. Это может сказаться на дроблении зиготы, не давая ей развиваться дальше.
С другой стороны повышенное содержание гистамина в периферической крови и в фолликулярной жидкости у женщин с наступившей беременностью может указывать на непосредственное участие гистамина в процессах успешной имплантации. Очевидно, это связано с возможностью гистамина повышать проницаемость капилляров в матке в месте имплантации и способностью воздействовать на освобождение бластоцисты от блестящей оболочки (Любовцева Е.В., 2005). Действуя вместе с простагландином Е, гистамин оказывает в месте имплантации неспецифическое иммуно-супрессивное действие, защищая зародыш (Светлаков А.В. с соавт., 2002).
При оценке гемостазиологического статуса при анализе тромбоцитарных показателей крови (табл. 5) выявлено, что показатель дисперсии распределения тромбоцитов по объему (РБ\¥) у женщин с отрицательным результатом программы ЭКО увеличен на 3,8%; средний объём тромбоцитов (МРУ) в этой же группе повышен на 3,2%, а процент молодых тромбоцитов (Р-ЬБК) достоверно увеличен (р<0,05) на 16,6% в сравнении с группой пациенток с положительным результатом ЭКО. Соответственно сочетание повышенных значений РБ\У и МРУ отражает нарастание числа макротромбоцитов, что является признаком усиления продукции тромбоцитов в костном мозге в ответ на их потребление.
При оценке интенсивности светопропускания отмечено незначительное повышение у пациенток II группы по сравнению с I группой агрегации тромбоцитов при стимуляции с АДФ, рястом ицином, адреналином и снижение - с коллагеном. При оценке среднего размера агрегатов отмечено незначительное повышение у женщин II группы по сравнению с I группой: при стимуляции с ристомицином - на 7,2%, с адреналином - на 15,3%, с АДФ - на 34,2%. Гиперагрегационный синдром обнаружен у 17,6% женщин II группы.
При исследовании корреляционных взаимосвязей между показателями сосудисто-тромбоцитарного гемостаза и содержанием серотонина в периферической крови были выявлены положительные коэффициенты корреляции в I группе женщин между серотонином и агрегацией тромбоцитов, стимуллированной коллагеном и адреналином (г=0,53 и г=0,29), а в группе небеременных женщин положительные корреляционные взаимосвязи выявлены между уровнем серотонина и числом молодых тромбоцитов (г=0,24),
спонтанной агрегацией тромбоцитов (г=0,35) и агрегацией тромбоцитов, стимулированной ристомйцином (г=0,28).
Таблица 5
Показатели сосудисто-тромбоцитарного гемостаза у обследуемых женщин
(М*т)
Показатель Группа I п=140 Группа Н п=160
Тромбоциты, 109/л 223,29±12,31 222,70±9,70
РБ\У - ширина распределения тромбоцитов по объему, Я 11,09*0,46 11,52±0,27
МРУ - средний объем тромбоцитов в крови, А 9,84±0,28 10,16±0,20
Р-ЬБЯ - % больших (молодых) тромбоцитов 23,64±1,5 27,56±1,18*
Содержание фактора фон Виллебранда, % 94,54±4,65 90,60±4,80
Спонтанная агрегация тромбоцитов, отн. ед. 1,33±0,09 1,26±0,04
Агрегация тромбоцитов стимулированная:
ристомицином Ср. размер агрегатов, отн. ед. 6,91±0,44 7,17±0,34
Светопропускание, % 75,08±8,91 80,54±3,65
коллагеном Ср. размер агрегатов, отн. ед. 5,74±0,47 5,54±0,32
Светопропускание, % 59,11±8,70 55,04±4,68
адреналином Ср. размер агрегатов, отн. ед. 5,78±0,35 6,6 7±0,27*
Светопропускание, % 37,59±9,48 37,15±4,85
АДФ Ср. размер агрегатов, отн. ед. 7,61±0,75 10,21±1,06*
Светопропускание, % 48,96±9,21 50,79±4,61
Примечание: * - различия между группами достоверны при р <0,05
При исследовании корреляционных взаимосвязей между уровнем гистамина и показателями сосудисто-тромбоцитарного гемостаза выявлены положительные корреляционные связи между содержанием гистамина в периферической крови и объёмом тромбоцитов (г=0,65), % молодых тромбоцитов (г=0,41) и агрегацией тромбоцитов, стимулированной АДФ (г=0,27), и отрицательные корреляционные связи - с уровнем фактора фон Виллебранда (г=-0,65) и спонтанной агрегацией тромбоцитов (г=-0,63).
При оценке совокупного влияния гистамина и серотонина и показателей сосудисто-тромбоцитарного гемостаза на процессы имплантации было выявлено, что в 55,7 % случаев имеются положительные коррелятивные связи. Это свидетельствует о высокой степени их совместного влияния на результативность имплантации, а в конечном итоге на наступление беременности.
По показателям коагуляционного гемостаза также было выявлено гиперагрегационное состояние у пациенток обеих групп, выраженное более значительно у пациенток с отрицательным результатом - выше про-тромбиновый индекс, удлинено тромбиновое время (табл. 6). При этом
важным представляется факт выявленных корреляционных взаимоотношений между уровнем серотонина и гистамина в периферической крови и показателями коагуляционного гемостаза. Были выявлены корреляционные взаимосвязи по 13 из 28 показателей (46,4 %). В I группе беременных женщин выявлены отрицательные корреляционные взаимоотношения между уровнем серотонина и уровнем фибриногена (г=-0,8), ПТИ (г=-0,22), АЧТВ (г=-0,27), тромбиновым временем (г=-0,29), уровнем фактора VIII (г=-0,34) и уровнем фактора IX (г=-0,43), между уровнем гистамина и ПТИ (г=-0,33). Между уровнем гистамина и АЧТВ, РФМК выявлены положительные корреляционные коэффициенты (г=0,37 и г=0,28). Во II группе небеременных женщин выявлена положительная корреляция уровня серотонина с АЧТВ (г=0,41) и отрицательная с тромбиновым временем и уровнем фактора IX (г=-0,25 и г=-0,22), между уровнем гистамина выявлена отрицательная корреляционная взаимозависимость только с фактором VIII (г=-0,26).
Таблица 6
Показатели коагуляционного гемостаза у женщин обследуемых групп (М±ш)
Показатель Группа 1 п=140 Группа II п=160
Фибриноген, г/л 3,56±0,27 3,09±0,13
Протромбиновый индекс (ПТИ), % 94,65±0,96 98,40±0,80*
Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), сек. 25,32±1,06 26,33±0,67
Тромбиновое время (ТВ), сек. 16,35±0,85 16,59±0,31
Активность фактора VIII, % 108,45±8,48 110,80±5,40
Активность фактора IX, % 107,73±7,30 98,50±4,50
Примечание: * - различия между группами достоверны при р <0,05 Таблица Показатели противосвёртывающей и фибринолитической системы крови у обследуемых женщин (М±ш)
Показатель Группа I п=140 Группа II п=160
Активность антитромбина III, % 95,36±5,80 101,10±3,20
Скрининг нарушений в системе протеинов С и 8, НО 0,91±0,12 1,04±0,06
Уровень Р-димера, мг/л 0,10±0,00 0,11 ±0,005
01и-плазминоген, мкг/мл 155,27±13,91 187,50± 11,00*
Примечание: * - различия между группами достоверны при р <0,05
Высокая частота корреляционных взаимосвязей между уровнем серотонина и гистамина и показателями коагуляционного гемостаза, также как и
при сосудисто-тромбоцитарном гемостазе, свидетельствует об их совместном влиянии на процессы имплантации и наступление беременности в программе ЭКО.
При изучении фибринолитической системы крови выявлено увеличение уровня П-димера во II группе, что свидетельствует о большей активации фибринолитической системы у женщин II группы. Уровень 01и-плазминогена у женщин II группы был также достоверно выше по сравнению с I группой (табл. 7).
Таблица 8
Показатели антифосфолипидных антител у женщин обследуемых групп
(М±ш)
Показатель Группа I п=140 Группа II п=160
Волчаночный антикоагулянт (N10 1,03±0,04 1,00±0,03
Антитела к Рггликопротеину I (Е/мл) 1§М 3,75±0,43 4,8б±0,40*
180 8,21± 1,44 7,39±0,64
Антитела к тромбину (Е/мл) 1бМ 4,47±0,87 8,21±1,72*
1вО 3,48±0,59 7,79±1,65*
Антитела к протромбину (Ед/мл) 1ВМ 4,63±0,62 4,64±0,44
5,41±0,92 5,04±0,17
Антитела к кардиолипину (Е/мл) 1ёМ 3,81±0,76 3,62±0,56
180 5,66±0,98 5,30±0,33
Антитела к аннексину V (Ед/мл) ЫМ 5,78±0,61 5,07±0,37
3,97±0,25 5,06±0,52*
Антитела к фосфатидилсерину (Ед/мл) 1&М 3,76±0,29 4,43±0,20*
4,62±0,67 4,83±0,35
Антитела к фосфатидилинозитолу (Ед/мл) 1£М 5,17±0,51 7,07±0,91*
12с 6,88±1,68 6,02±0,50
Антитела к фосфатидиловой кислоте (Ед/мл) 6,62±1,14 6,87±0,84
1§0 3,88±0,69 4,56±0,33
Антитела к фосфатидилэтаноламину (Е/мл) 8,93±1,41 13,77±2,27*
7,91±1,48 8,05±1,34
Антитела к фосфатидилхолину (Е/мл) 7,05±1,48 7,84±0,84
8,41± 1,92 8,77±1,68
Примечание: * - различия между группами достоверны при р <0,05
По литературным данным (Джинджгава Ж.Г., Бицадзе В.О., 2005), важным фактором, влияющим на результаты ЭКО, является антифосфолипидный синдром (АФС), диагностированный у каждой третьей
пациентки с ЭКО, не завершившимся развитием беременности. Критериями диагностики АФС общепризнано являются анамнестические данные и определение антител к кардиолипину или волчаночного антикоагулянта. Однако, в нашем исследовании было показано, что классическое определение анитфосфолипидного синдрома по выявлению волчаночного антикоагулянта или антител к кардиолипину у женщин в программе ЭКО не даёт полноценной картины для оценки всех гемостазиологических нарушений. Поэтому мы провели анализ расширенного исследования антифосфолипидных антител (АФА).
В нашей работе было показано, что у пациенток II группы по сравнению с I группой в 1,2 раза выше антитела ^М к фосфатидилсерину и фосфатидиловой кислоте; в 1,3 раза выше антитела к р2-гликопротеину I и к аннексину V; в 1,4 раза достоверно выше антитела 1§М к фосфатидилинозитолу; в 1,5 раз достоверно выше суммарные антитела к фосфатидилэтаноламину (табл. 8). Достоверно чаще выявляются антитела к тромбину у пациенток с отрицательным результатом ЭКО. По нашим данным частота случаев выявляемости АФА в исследуемой группе оказалась достаточно высокой - 64,7%.
Нами выявлена высокая положительная коррелятивная связь между уровнем серотонина и гистамина в периферической крови и содержанием АФА у женщин с различными результатами ЭКО. Коррелятивные взаимосвязи наблюдаются в 41,6% показателей антифосфолипидного синдрома с уровнем гистамина и серотонина. В I группе положительные коррелятивные связи вывлены между уровнями серотонина и 1§М антител к гликопротеину (г=037), антител к протромбину (г=0,36), антител к фосфатидилсерину (г=0,32), ^М антител к фосфатидилинозитолу (г=0,35); между уровнями гистамина и антител к аннексину V (г=0,31), антител к фосфатидилсерину (г=0,5). В этой же группе отрицательные корреляционные связи были выявлены между уровнем серотонина и волчаночным антикоагулянтом (г=-0,38), уровнем 15*М и антител к фосфатидилэтаноламину (г=-0,21 и г=-0,31), антител к
фосфатидилхолину (г=-0,37); между уровнем гистамина и волчаночным антикоагулянтом (г=-0,21), уровнем антител к гликопротеину (г=-0,37), 1{>М и антител к тромбину (г=-0,26 и г=-0,24), IgM антител к аннексину V (г=-0,39), 1|»М и антител к фосфатидилинозитолу (г=-0,22 и г=-0,2б), и антител к фосфатидиловой кислоте (г=-0,31 и г=-0,29), антител к фосфатидилэтаноламину (г=-0,38), ^М и ^О антител к фосфатидилхолину (г=-0,23 и г=-0,56).
Во II группе наблюдаются слабые положительные корреляционные взаимосвязи между уровнями серотонина и антител к протромбину
(г=0,27 и г=0,25), антител к тромбину (г=0,28), ДО антител к аннексину V (г=0,28), между уровнями гистамина и антител к гликопротеину (г=0,30), 1§М антител к тромбину (г=0,26), ^М и ^О антител к протромбину (г=0,23 и г=0,30), ^М антител к кардиолипину (г=0,29), антител к фосфатидиловой кислоте (г=0,27).
Таким образом, среди обследованных женщин выявлен не только повышенный уровень антифосфолипидных антител, отрицательно влияющих на реологические процессы в месте имплантации, но и показана высокая частота корреляционных взаимодействий повышенного уровня АФА с содержанием гистамина и серотонина в периферической крови. Тем самым нами показано их совместное взаимное влияние на механизмы имплантации и результативность ЭКО.
Проведенные исследования свидетельствуют о том, что у женщин П группы нарушение системы гемостаза проявляется сдвигом гемокоагуляционного потенциала в сторону гиперкоагуляции. Учитывая общую закономерность отклонений в системе свертывания крови, следует предположить, что у пациенток П группы формируется тромбофилическое состояние. Выявленные гиперагрегационные состояния можно успешно корректировать с помощью медикаментозной терапии. В связи с этим данные факторы отнесены в группу условно-предотвратимых.
Изучая влияние различных факторов на процессы имплантации, мы оценили воздействие белка, общепризнанно являющегося маркером имплантации - альфа-2-микроглобулина фертильности (АМГФ) на исход ЭКО. Время попадания бластоцисты в полость матки совпадает с началом синтеза и секреции АМГФ. Это подтверждает гипотезу, согласно которой АМГФ играет важную роль в имплантации эмбриона, защищая, как локальный иммуносупрессор, развивающийся зародыш от иммунного ответа материнского организма (Татаринов Ю.С. с-соавт., 1998).
В нашей работе мы изучили уровень АМГФ в фолликулярной жидкости, предполагая, что именно от его концентрации в биологической среде развития яйцеклетки напрямую должна зависеть результативность ЭКО. Было выявлено, что в фолликулярной жидкости пациенток с неудачной попыткой ЭКО уровень АМГФ был выше, чем его уровень у женщин с положительным результатом лечения (табл. 9).
Таблица 9
Содержание альфа-2-микроглобулина фертильности (АМГФ) и
хорионического гонадотропина (ХГЧ) в фолликулярной жидкости (М±т)
№ п\п Наименование параметров Группа I п =86 Группа II п =112
1. АМГФ (мкг/л) 1,18 ±0,12 1,73 ±0,18*
2. ХГЧ (МЕ/л) 114,7 ±12,9 115,8 ±8,7
3. АМГФ/ХГЧ (хЮО) 1,02 ±0,05 1,49 ± 0,20
Примечание: * - различия между группами достоверны при р <0,05
Трудно представить важную роль АМГФ в процессах имплантации изолированно от влияния других молекулярно-биохимических факторов. И в этой связи мы оценили содержание в фолликулярной жидкости гормона, тесно связанного с АМГФ - хорионического гонадотропина (ХГЧ). Именно ХГЧ применяется в программе ЭКО в качестве «триггера» для индукции овуляции. В связи с этим мы оценивали совместную роль содержания
АМГФ и ХГЧ в фолликулярной жидкости. Однако, полученные данные свидетельствуют об отсутствии значимых результатов в содержании ХГЧ в фолликулярной жидкости при положительном или отрицательном результате ЭКО.
При исследовании соотносительных коэффициентов содержания АМГФ, ХГЧ и нейромедиаторов гистамина, серотонина и катехоламинов в фолликулярной жидкости было выявлено, что абсолютное содержание АМГФ и серотонина достоверно выше в группе с отрицательным результатом ЭКО, однако соотносительные коэффициенты практически не различаются в зависимости от исхода лечения (табл. 10).
Соотносительный коэффициент содержания АМГФ к уровню гистамина в группе женщин с положительным результатом ЭКО составил 0,18, а в группе женщин с отрицательным результатом - в 1,83 раза выше. При оценке соотносительного коэффициента содержания ХГЧ и уровня серотонина в фолликулярной жидкости (ХГЧ/серотонин) выявлено большее его значение в I группе - в 1,35 раза по сравнению со II группой (табл. 10). Соотносительный коэффициент содержания ХГЧ и гистамина в фолликулярной жидкости (ХГЧ/гистамин) выше во 11 группе в 1,26 раза по сравнению с I группой.
Таблица 10
Соотносительные коэффициенты содержания альфа-2-микроглобулина
фертильности (АМГФ), хорионического гонадотропина (ХГЧ) и _нейромедиаторов в фолликулярной жидкости _
Соотносимые признаки Группа 1 п =86 Группа II п =112
1. АМГФ/серотонин 0,35 ± 0,02 0,38 ± 0,06
2. АМГФ/гистамин 0,18 ±0,08 0,33 ± 0,06*
3. АМГФ/катехоламины 0,33 ± 0,06 0,51 ±0,09
4. ХГЧ/серотонин 34,75 ± 0,28 25,73 ±0,34*
5. ХГЧ/гистамин 17,64 ±0,32 22,26 ± 1,08*
6. ХГЧ/катехоламины 32,77± 1,14 34,01 ± 1,56
Примечание: * - различия между группами достоверны при р <0,05
Известно, что важное значение в гомеостазе человеческого организма принадлежит микроэлементному составу биологических жидкостей (Авцын А.П., 1991). Поэтому в своей работе мы выясняли влияние катионов меди и цинка, содержащихся в фолликулярной жидкости, на процессы имплантации и результативность ЭКО. Выбор данных катионов был не случайным. Рядом исследователей было показано, что ионы меди способствуют торможению процессов овуляции и нарушают процесс оплодотворения (Долгова И.Ю., 2006; Прилепская В.Н., 2006).
При сравнительном исследование катионов меди в фолликулярной жидкости пациенток программы ЭКО было выявлено достоверно меньшее содержание катионов меди у пациенток с положительным результатом лечения (табл. 11). Следовательно, катионы меди, определяемые в фоллику-
лярной жидкости, могут оказывать непосредственное влияние на процессы овуляции и имплантации.
Таблица 11
Содержание катионов меди и цинка в фолликулярной жидкости
№ п\п Наименование параметров Группа I п = 88 Группа II п =98
1. Ионы Си в фолликулярной жидкости 7,09 ±0,57 9,49 ± 0,88*
2. Ионы Ъа в фолликулярной жидкости 5,01 ± 0,3 5,44 ±0,2
3. Си272п2 г в фолликулярной жидкости 1,50 ±0,15 1,87 ±0,11*
Примечание: * - различия между группами достоверны при р <0,05
При оценке взаимосвязанного влияния меди и цинка важным представляется оценка не столько абсолютных их значений, сколько оценка их относительных коэффициентов (Долгова И.Ю., 2006). Оказалось, что в группе женщин с отрицательным результатом ЭКО соотносительный коэффициент Си2+/гп2+ в 1,2 раза выше, чем в группе с положительным результатом (табл. 11).
Таким образом, оптимальной концентрацией катионов меди в фолликулярной жидкости (ФЖ) является ее уровень - 7,09 ±0,57 мкг/100 мл. Содержание катионов цинка в фолликулярной жидкости существенного влияния на оплодотворение методом ЭКО не оказывает. Однако, на возникновение беременности имеют влияние соотносительные коэффициенты Си27гп2+- наибольший процент оплодотворения возникает при меньшей величине данного соотношения.
Таким образом, в результате комплексного исследования морфофункциональных факторов, влияющих на механизмы имплантации и наступление беременности в программе экстракорпорального оплодотворения было выявлено, что отрицательное значение на исход ЭКО имеют:
• формирующаяся истинная недостаточность лютеиновой фазы цикла, ретроспективно выявляемая у пациенток в результате оценки рецепторного статуса эндометрия в циклах, предшествующих лечебному циклу программы ЭКО;
• сниженный уровень гистамина и повышенный уровень серотонина в фолликулярной жидкости и периферической крови;
• наиболее выраженная картина гиперкоагуляции по всем показателям сосудисто-тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза
• повышенное содержание альфа-2-микроглобулина фертильности в фолликулярной жидкости
• повышенный уровень меди в фолликулярной жидкости
Выявленные нами достоверные корреляционные взаимосвязи между перечисленными параметрами свидетельствуют о высокой степени их комплексного влияния на результативность ЭКО.
Результаты изучения морфологических изменений в матке мышей.
Для изучения действия высоких доз эстрогеновых гормонов на морфофункциональные изменения в эндометрии была создана экспериментальная модель на лабораторных белых мышах.
Овариэктомия у мышей создавала модель десентизации яичников, которая при экстракорпоральном оплодотворении достигается введением агонистов гонадотропных гормонов. Введение эстрадиола формировало гиперэстрогеновый фон, который в программе ЭКО создается стимуляцией яичников гонадотропинами. Тем самым создана экспериментальная модель влияния гормонов на морфофункциональные изменения в матке. Поскольку при исследовании корреляционных взаимодействий экспрессии стероидных гормонов эндометрия женщин с базальным уровнем гормонов были выявлены высокие коэффициенты корреляции с уровнем эстрадиола и пролактина в качестве экспериментального воздействия были выбраны эстрадиол и пролактин. Поскольку в качестве препарата, снижающего проявления гиперкоагуляции в программе ЭКО используются глюкокортикоиды в качестве экспериментальной модели было выбрано введение дексаметазона и АКТГ.
В эксперименте на лабораторных половозрелых мышах линии СР\¥ было выявлено, что при длительном введении эстрадиола дипропионата в матках мышей стимулируются гиперпластические процессы - увеличивается количество желёз, железистый эпителий становится многорядным или с элементами атипии, формируются дочерние железы и конгломераты желёз (рис. 4а); наблюдается повышенная экспрессия эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в покровном эпителии, эпителии желёз, клетках стромы и в миоцитах матки мышей (рис. 4с,6). Активизация пролиферативных процессов подтверждается повышением экспрессии бромдезоксиуридинположительных клеток в эпителиальных клетках матки мышей (рис. 4Ь). При одновременном введении эстрадиола дипропионата и пролактина все вышеперечисленные изменения выражены значительно слабее, что свидетельствует о блокирующей роли пролактина на развитие гиперпластических процессов и на повышение экспрессии стероидных рецепторов в матке мышей.
При одновременном введении мышам дексаметазона и эстрадиола наблюдается повышение экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов во всех структурах матки мышей, а при введении совместно с эстрадиолом АКТГ наблюдается повышение экспрессии лишь прогестероновых рецепторов в эпителиальных клетках и клетках стромы матки мышей.
Таким образом было доказано гиперпластическое влияние повышенных доз эстрогеновых гормонов на пролиферативные процессы в матке мышей. При этом наблюдается повышение экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов. Пролактин, дексаметазон и АКТГ нивелируют действия повышенных доз эстрогеновых гормонов.
Рис. 4а. Морфологическая структура матки мышей при введении эстрадиола. (Окраска железным гематоксилином). Микроскоп OLYMPUS. Увеличение 200. Ж-железы, С-строма, Э-покровный эпителий.
Рис. 4Ь. Бромдезоксиуридинположитель-ные клетки в структурах матки мышей при введении эстрадиола. Микроскоп OLYMPUS. Увеличение 200.
г. > >jt% *
ФШР *
* У "-л? ^ **
Рис. 4с. Экспрессия эстрогеновых рецепторов в матке мышей при введении эстрадиола. (Поликлональные антитела «Santa Cruz Biotechnology» США) Микроскоп OLYMPUS. Увеличение 200.
Рис. 4d. Экспрессия прогестероне вых рецепторов в матке мышей при введении эстрадиола. (Поликлональные антитела «Santa Cruz Biotechnology» США) Микроскоп OLYMPUS Увеличение 200.
Таким образом, оценивая изученные морфофункциональные аспекты с точки зрения возможной коррекции их с целью повышения результативности ЭКО, мы отнесли их в группу условно-предотвратимых факторов, поскольку
все из вышеперечисленных факторов подвержены различным способам коррекции:
медикаментозные (назначение ХГЧ для поддержки лютеиновой фазы цикла, дезагрегантов и низкомолекулярного гепарина для коррекции гиперкоагуляции, диеты и витаминов, обогащенных цинком для коррекции повышенного уровня меди);
организационные (замораживание и перенос эмбрионов в других циклах лечения ЭКО после нормализации уровня биологически активных веществ и АМГФ).
Изученные клинико-анамнестические данные составили группу непредотвратимых факторов, на которые в момент включения в программу лечения ЭКО уже повлиять невозможно.
ВЫВОДЫ
1. Содержание прогестероновых и эстрогеновых рецепторов в эпителии желёз и клетках стромы эндометрия выше в позднюю стадию фазы пролиферации и ниже в клетках стромы эндометрия в среднюю и позднюю стадии фазы секреции у пациенток с отрицательным результатом ЭКО, по сравнению с пациентками с положительным результатом лечения. Это является источником формирования истинной недостаточности лютеиновой фазы менструального цикла и является прогностически неблагоприятным фактором, влияющим на наступление беременности у женщин в процессе лечения методом экстракорпорального оплодотворения.
2. Выявлена сильная обратная корреляционная зависимость между уровнем экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в средней стадии фазы секреции от базального уровня прогестерона в периферической крови г=-0,56 для эпителия желез и г=-0,64 для клеток стромы у женщин с отрицательным результатом лечения бесплодия методом ЭКО. Это свидетельствует об истинной недостаточности лютеиновой фазы цикла у этих женщин.
3. У женщин с положительным результатом лечения методом ЭКО достоверно выше содержание гистамина и ниже содержание серотонина в плазме крови и фолликулярной жидкости по сравнению с аналогичными показателями у женщин с отрицательным результатом лечения.
4. У женщин с отрицательным результатом лечения бесплодия методом ЭКО гемостазиограмма характеризуется значительно большим проявлением гиперкоагуляционного состояния по сравнению с группой женщин с положительным исходом лечения. В этой группе достоверно выше содержание О-димера, больше антител к тромбину, аннексину, фосфатидилсерину, фосфатидилэтаноламину, фосфатидилинизитолу.
5. Наблюдается высокая корреляционная взаимосвязь между уровнем серотонина и показателями гемостазиограммы, характеризующими гиперкоагуляционные состояния у женщин с различным исходом лечения методом ЭКО. Выявлена положительная корреляционная связь между
уровнем гистамина и гомоцистеина, антителами к тромбину, протромбину, кардиолипину и к фосфатидиловой кислоте.
6. У женщин с положительным результатом лечения методом ЭКО в фолликулярной жидкости достоверно ниже уровень альфа-2-микроглобулина фертильности. Уровень хорионического гонадотропина достоверно не различается в группах с различным исходом лечения.
7. В фолликулярной жидкости в группе женщин с положительным результатом ЭКО достоверно ниже содержание катионов меди. Содержание цинка в фолликулярной жидкости достоверно не различается у женщин с положительным и отрицательным результатами ЭКО. Однако, имеют значение соотносительные коэффициенты содержания меди и цинка. У женщин с положительным результатом лечения этот коэффициент равен 1,5 по сравнению с 1,87 у женщин с отрицательным результатом лечения.
8. Высокие дозы эстрадиола вызывают развитие гиперпластических процессов в матке мышей. Пролактин снижает продиферативный эффект повышенных доз эстрадиола и вызывает меньшее увеличение экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в матке мышей.
9. Дексаметазон совместно с эстрадиолом вызывает повышение экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в матках мышей. Воздействие экзогенного АКТГ вызывает увеличение экспрессии лишь прогестероновых рецепторов. Экзогенно введенные глюкокортикоиды значительно снижают избыточные пролиферативные процессы в матке, вызванные эстрогенами.
10. Многофакторный анализ влияния различных клинико-анамнестических данных на результативность экстракорпорального оплодотворения выявил достоверное отрицательное влияние на положительный исход ЭКО 16 факторов: номер попытки, наличие эндометрита и эндоцервицита, наличие хламидиоза, уреаплазмоза, микоплазмоза, инфицированность вирусом простого герпеса и цитомегаловирусом, наличие резекции яичников, миомэктомии, кисты яичника и спаечного процесса в малом тазу, уровень ингибина В, тироксина, эстрадиола и альфа-2-микроглобулина фертильности.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1.Всем пациенткам перед проведением экстракорпорального оплодотворения необходимо проводить морфологическое и иммуногистохимическое исследование эндометрия с целью выявления патологических изменений рецепторного статуса эндометрия.
2.Полученные результаты биохимического состава фолликулярной жидкости можно использовать в качестве прогностического критерия в программах замораживания эмбрионов и их последующего использования в программах ЭКО.
3.Выявление повышенного уровня серотонина в периферической крови у женщин перед включением в программу ЭКО может прогнозировать неудачный результат ЭКО. Возможная коррекция повышенного уровня
серотонина позволит повысить эффективность экстракорпорального оплодотворения.
4.Необходимо внедрить в перечень обследования женщин перед программой ЭКО расширенный анализ гемостазнологических нарушений. Выявленные гиперагрегационные состояния необходимо своевременно корректировать с целью повышения эффективности ЭКО.
5.У женщин программы ЭКО необходимо рассматривать расширенный спектр антител к мембранным фосфолипидам, а также антител к связанным с этими фосфолипидами белками-кофакторами, включая тест на антитромбиновые антитела в качестве скринингового метода обследования.
6.Учитывая негативное влияние повышенных концентраций меди на результативность метода ЭКО возможно применение в качестве профилактических мер диеты с богатым содержанием цинка, витаминов, обогащённых микроэлементами, а также возможно рекомендовать применение белковых препаратов, обладающих медьсвязывающими свойствами.
7.С целью повышения эффективности лечения бесплодия методом ЭКО необходимо максимально сократить сроки обследования и лечения женщин консервативными методами на этапе женских консультаций и как можно раньше отправлять их на эффективное лечение в условиях специализированных центров.
Список работ, опубликованных по теме диссертации
1. Самойлова A.B. Верификация диагноза гиперпластических процессов в эндометрии по данным УЗ, гистероскопического и гистологического исследования / A.B. Самойлова, Е.В. Кострова // Современные вопросы сохранения репродуктивного здоровья женщины: Матер. 6-й Поволжской науч.-практ. конф. акушеров-гинекологов. - Волгоград, 2000. -С.183-187.
2. Самойлова A.B. 10 лет центру «Семья» / A.B. Самойлова //10 лет центру «Семья»: Тез. докл. науч.- пракг. конф. - Чебоксары, 2002. - С. 4-8.
3. Самойлова A.B. Результаты применения ранней восстановительной физиотерапии после эндоскопических операций в гинекологическом отделении / A.B. Самойлова, E.H. Будевич, Л.А. Ларюхин //10 лет центру «Семья»: Матер, науч.-практ. конф. - Чебоксары, 2002. - С. 10-12.
4. Самойлова A.B. Алгоритм диагностики и лечения бесплодия в браке. / A.B. Самойлова, О.В. Шарапова, Л.В.Чебанева / Охрана репродуктивного здоровья женщин - Чебоксары, 2004.- С.151-177.
5. Самойлова A.B. Биогенные амины фолликулярной жидкости и спермы при экстракорпоральном оплодотворении / A.B. Самойлова, Е.В. Любовцева, Л.А. Любовцева // Охрана репродуктивного здоровья женщин - Чебоксары, 2004.- С.183-185.
6. Самойлова A.B. Возможные причины неэффективности лечения бесплодного брака / A.B. Самойлова, Л.И. Герасимова, Т.Г.Арзуманян //
Охрана репродуктивного здоровья женщин - Чебоксары, 2004.- С.188-191.
7. Самойлова A.B. Лабораторная диагностика бесплодия: Конспект лекций / A.B. Самойлова, И.Ю. Долгова II ГОУ «Институт усовершенствования врачей» МЗ 4P. - Чебоксары, 2004. - 74 с.
8. Самойлова A.B. Толщина эндометрия как прогностический фактор при лечении бесплодия методами вспомогательной репродукции / A.B. Самойлова, Е.В. Кострова // Актуальные вопросы клинической медицины: Матер, науч-практ. конф. - Чебоксары, 2004. - С.22-25.
9. Самойлова A.B. Медико-социальные аспекты бесплодного брака в Чувашской Республике / А.В, Самойлова, Т.Г. Арзуманян, Л.И.Герасимова//Здравоохранение Чувашии. - 2004.-№ 3. - С.23-27.
10. Самойлова A.B. Алгоритм ведения бесплодных супружеских пар / A.B. Самойлова, Т.Г. Арзуманян, С.Г. Князев // Свидетельство РФ. - 2004. -№2005611629.
11. Самойлова A.B. Особенности рецепторного статуса эндометрия у женщин с бесплодием / A.B. Самойлова, Е.В. Кострова // Современные технологии в медицине (к 10-летию со дня открытия РМЦ МЗ 4P): Сб. науч. тр. - Чебоксары. - 2005. - С.59.
12. Самойлова A.B. Рецепторный статус эндометрия у женщин с бесплодием / A.B. Самойлова, Е.В. Кострова, Л.А. Любовцева // Репродуктивные технологии сегодня и завтра: Матер. XV междунар. науч.-пракг. конф. -Чебоксары, 2005. - С.11-13.
13. Самойлова A.B. Определение уровня меди и цинка в фоллликулярной жидкости у женщин с бесплодием / A.B. Самойлова, И.Ю. Долгова, Л.А. Любовцева // Репродуктивные технологии сегодня и завтра: Матер. XV междунар. науч.-практ. конф. - Чебоксары, 2005.- С.32-34.
14. Самойлова A.B. Особенности гиперпластических процессов эндометрия у женщин с бесплодием / A.B. Самойлова, Е.В. Кострова, Л.А.Любовцева // Некоторые вопросы теоретической и клинической медицины: Межвуз. сб. науч. тр. - Саранск, 2005. - С.11-13.
15. Самойлова A.B. Рецепторный статус эндометрия при гиперпластических процессах у женщин с бесплодием / A.B. Самойлова, Е.В. Кострова, Л.А. Любовцева // Некоторые вопросы теоретической и клинической медицины: Межвуз. сб. науч. тр. - Саранск, 2005. - С.43-46.
16. Самойлова A.B. Диагностика и профилактика мужского бесплодия / A.B. Самойлова, A.B. Афанасьев // Методические рекомендации. -Чебоксары, 2005. - 20 с.
17. Самойлова A.B. Сравнительное значение комплексного исследования АМГФ и ХГЧ в фолликулярной жидкости пациенток России и Чувашии при лечении бесплодия по программе экстракорпорального оплодотворения / A.B. Самойлова, И.Ю. Долгова, Л.А. Любовцева // Вестник Чувашского государственного педагогического университета имени И.Я. Яковлева. - 2005. - № 4(47). - С. 122-126.
18. Самойлова A.B. Сравнительная характеристика клинико-медицинских параметров женщин РФ и 4P при лечении бесплодия методом ЭКО / A.B. Самойлова, И.Ю. Долгова // Современные технологии в медицине: Сб. науч. тр. (к 10-летию со дня открытия РМЦ МЗ 4P). - Чебоксары,
2005. - С. 127-128.
19. Самойлова A.B. Диагностическое и прогностическое значение гистероскопии // A.B. Самойлова, А.Д. Сидоров, Л.А. Ларюхин // Репродуктивные технологии сегодня и завтра: Матер. XV междунар. науч.-практ. конф. - Чебоксары, 2005. - С. 10-11.
20. Самойлова A.B. Клинические аспекты витрификации эмбрионов человека / A.B. Самойлова, В.В. Заева, М.Е.Потапов // Репродуктивные технологии сегодня и завтра: Матер. XV междунар. науч.-практ. конф. -, Чебоксары, 2005. - С. 24-26.
21. Самойлова A.B. Альфа-2-микроглобулин фертильности как критерий морфофункциональной полноценности эндометрия у женщин с бесплодием / A.B. Самойлова, Е.В. Кузнецова, Н.Г. Рыскова // Репродуктивные технологии сегодня и завтра: Матер. XV международной науч.-практ. конф. -, Чебоксары, 2005. - С. 5-6.
22. Самойлова A.B. Диагностика и лечение бесплодия на современном этапе / A.B. Самойлова // Монография. - Изд-во ГОУ "Институт усовершенствования врачей" Минздравсоцразвития Чувашии Чебоксары, - 2006. - 232 с.
23. Самойлова A.B. Сравнительное комплексное исследование катионов меди и цинка в фолликулярной жидкости пациенток из Чувашии и других регионов России при применении метода экстракорпорального оплодотворения / A.B. Самойлова, И.Ю. Долгова, Л.А.Любовцева, Е.В. Любовцева // Пути совершенствования подготовки научно-педагогических кадров по естественно научным дисциплинам в современных условиях: Мат. регион, науч.- практ. конф. - Чебоксары,
2006.- С.134-140.
24. Самойлова A.B. Сравнительное исследование гормонального статуса у женщин Чувашии и других регионов России в программе экстракорпорального оплодотворения / A.B. Самойлова, И.Ю. Долгова, Л.А. Любовцева // ГОУ "Институт усовершенствования врачей" Минздравсоцразвития Чувашии, г. Чебоксары. Депонировано в ВИНИТИ, 2006. - №847-В2006.
25. Самойлова A.B. Особенности применения функциональных и морфологических методов диагностики гиперпластических процессов эндометрия / А.В.Самойлова, Е.В. Кострова // Матер, первого междунар. конгресса по репродуктивной медицине. - М., 2006. - С. 46.
26. Самойлова A.B. Особенности рецегггорного статуса эндометрия при хроническом эндометрите у женщин с бесплодием / A.B. Самойлова, Е.В. Кострова, Л.А. Любовцева // Матер, первого междунар. конгресса по репродуктивной медицине. - М., 2006. - С. 113.
27.' Самойлова А.В. Медико-социальные аспекты дифференцированного подхода к охране репродуктивного здоровья женщин / А.В.Самойлова, Т.Г. Денисова, Т.Н Охотина, С.С. Жамлихаюва // Руководство для врачей / ГОУ «Институт усовершенствования врачей» Минздравсоцразвития Чувашии - Чебоксары, 2006. - 28 с.
28. Самойлова АВ. Гормональный статус женщин с гиперпластическими процессами эндометрия / А.В. Самойлова, Шарапова О.В., А.А. Осипова, В.А. Матвеева // Проблемы репродукции. - 2006. - Т.12, № 3. - С. 3136.
29. Samoilova A.V. Hormonal status of women with benign endometrial hyperplastic lésions H A.V. Samoilova, A.A. Osipova, V.A. Matveeva, A.G. Gunin // Endocrine Abstracts of 8th European Congress of Endocrinology. -Glasgow, 2006. - Vol. 11. - P. 646.
30. Самойлова А.В. Особенности психосексуального статуса у бесплодных супружеских пар / А.В. Самойлова, Т.Г. Денисова, Е.В. Кострова // Ремедиум Приволжье - Н.Новгород: ООО «ЭР ЭМ БИ СИ Поволжье», 2006.-С. 13-14.
31. Самойлова А.В. Особенности рецепторного аппарата матки при нарушении репродуктивной функции / А.В. Самойлова, Т.Г. Денисова, Г.М.Воронцова, Л.И.Герасимова, Е,В. Кострова // Семья в России. -2006. - №2. - С.96-103.
32. Самойлова А.В. Пролактин в реализации пролиферативного и морфогенетического действия эстрадиола на матку / А.В. Самойлова, В.А. Матвеева, А.А.Осипова, К.Л.Винокур, Э.А.Мноян, А.Г Гунин // Проблемы репродукции. - 2007. - Т. 13, № 1. - С. 45-50.
33. Самойлова А.В. Воспалительный процесс в этиологии и патогенезе рака эндометрия / А.В. Самойлова, Л.В. Адамян. Д.С. Глякин, А.Г. Гунин // Проблемы репродукции. - 2007. - Т.13, №1. - С.21-25.
34. Самойлова А.В. Современные медико-технологические аспекты диагностики нарушений репродуктивной функции / А.В. Самойлова, Л.И.Герасимова, Т.Г. Денисова, Е.В. Кострова // Общественное здоровье и здравоохранение. - 2007. - №2. - С.30-34.
35. Самойлова А.В. Нарушения репродуктивной функции как медико-социальная проблема / А.В. Самойлова, Л.И. Герасимова, Т.Г. Денисова // Общественное здоровье и здравоохранение - 2007. - №3. - С.21-24.
36. Самойлова А.В. Инсулинзависимая система в реализации пролиферативного и морфогенетического действия эстрадиола на матку / А.В. Самойлова, А.Г. Гунин, А.А. Осипова, К.Л. Винокур, И.Н. Капитова // Проблемы репродукции. - 2008. - Т.14, № 1. - С. 46-51.
37. Самойлова А.В. Бесплодие и антифосфолипидный синдром / А.В. Самойлова, А.А. Осипова, Э.А. Мноян, В.А. Матвеева, А.Г. Гунин // Материалы IV съезда акушеров-гинекологов России, 2008 - С. 224.
38. Самойлова А.В. Анализ факторов, обуславливающих эффективность ЭКО / А.В. Самойлова, С.Г. Милаев, Э.А. Мноян, А.Г. Гунин //Репродуктивные технологии сегодня и завтра: Матер. XVIII междунар.
конф. Российской Ассоциации Репродукции Человека. - Самара, 2008. -С.17-18.
39. Самойлова A.B. Бесплодие и антифосфолипидный синдром / A.B. Самойлова, A.A. Осипова, Э.А. Мноян, С.Г. Милаев, В.А. Матвеева, А.Г. Гунин // Репродуктивные технологии сегодня и завтра: Матер. XVIII междунар. конф. Российской Ассоциации Репродукции Человека. -Самара, 2008. -С.51-52.
40. Долгова И.Ю. Значение выявляемое™ антител к тромбину при синдроме потери плода / И.Ю. Долгова, A.B. Самойлова, Н.Ю. Добровольская, С.А. Зефирова, Н.П. Прищепа, В.В. Назарова // Матер, докл. науч.-практ. симпозиума «Лабораторная медицина: инновационные технологии в аналитике, диагностике, образовании, организации». - Клиническая лабораторная диагностика. - 2008. - №9. - С.7.
41. Самойлова A.B. Использование информационных технологий в диагностике бесплодия / A.B. Самойлова, Е.В. Кострова // Информационные технологии в профессиональной деятельности и научной работе: Сб. матер, всероссийской науч-практ. конф. с междунар. участием. - Часть. 1. - Йошкар-Ола, 2008. - С.158-159.
42. Емельянов В.Ю. Влияние хронического воздействия экзогенных и эндогенных глюкортикоидов на экспрессию эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в матке / В.Ю. Емельянов, A.A. Осипова, A.B. Самойлова, В.А. Матвеева, К.Л. Винокур, C.B. Лаврентьев, АХ. Гунин // Проблемы репродукции - 2008. - Т. 14, №2. - С.36-39.
43. Самойлова A.B. Антифосфолипидный синдром в структуре бесплодия / A.B. Самойлова, A.A. Осипова, Э.А. Мноян, В.А. Матвеева, AT. Гунин // Проблемы репродукции - 2008. - Т.14, №3. - С.37-39.
44. Гунин А.Г. Морфогенетические эффекты эстрадиола в матке в условиях блокады фосфатидилинозитол-3-киназы / А.Г. Гунин, A.A. Осипова, A.B. Самойлова, К.Л. Винокур // Проблемы репродукции - 2008. -Т.14, №4. - С.50-55.
45. Самойлова A.B. Лабораторная диагностика тромбофилий у женщин с синдромом потери плода / A.B. Самойлова, И.Ю. Долгова, Н.Ю. Добровольская, С.А. Зефирова // Проблемы репродукции - 2008. -Т.14, №4. - С.78-84.
46. Долгова И.Ю. Значение определения антител к ß2 - гликопротеину I у женщин с синдром потери плода / И.Ю. Долгова, Н.Ю. Добровольская, С.А. Зефирова, A.B. Самойлова, Н.В. Гордеева, Н.П. Прищепа // Актуальные вопросы клиники, лечения и диагностики внутренних болезней в многопрофильном лечебном учреждении: Матер, городской науч.-практ. конф. МУЗ « Городская клиническая больница №1». -Чебоксары, 2008. - С.43-44.
47. Долгова И.Ю. Уровень гомоцистеина у женщин с синдромом потери плода / И.Ю. Долгова, A.B. Самойлова, Н.Ю. Добровольская, В.В. Назарова, С.А. Зефирова, O.A. Юркина // Вопросы клинической
медицины (к 60-летию ГУЗ «Республиканская клиническая больница» МЗ и СР 4P): Сб. науч. тр. - Чебоксары, 2008. - С.69-70.
48. Долгова И.Ю. Характеристика сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза у женщин с синдромом потери плода / И.Ю. Долгова, A.B. Самойлова, Н.Ю. Добровольская, С.А. Зефирова, Н.П. Прищепа, O.A. Юркина // Вопросы клинической медицины (к 60-летию ГУЗ «Республиканская клиническая больница» МЗ и СР 4P): Сб. науч. тр. -Чебоксары, 2008. - С.70-72.
49. Долгова И.Ю. Изучение активности ХШ фактора у пациенток с синдромом потери плода / И.Ю. Долгова, Н.Ю. Добровольская, A.B. Самойлова, С.А. Зефирова, В.В. Назарова, Н.П. Прищепа // Вопросы клинической медицины (к 60-летию ГУЗ «Республиканская клиническая больница» МЗ и СР 4P): Сб. науч. тр. - Чебоксары, 2008. - С.72-73.
50. Долгова И.Ю. Особенности показателей антикоагулянтной системы у женщин с синдромом потери плода / И.Ю. Долгова, Н.Ю. Добровольская, С.А. Зефирова, A.B. Самойлова, В.В. Назарова, Н.П. Прищепа И Вопросы клинической медицины (к 60-летию ГУЗ «Республиканская клиническая больница» МЗ и СР 4P): Сб. науч. тр. -4ебоксары, 2008. - С.73-74.
Изготовлено в полиграфической компании «Листок» Формат 21x30/9. Бумага офсетная. Подписано к печати 26.02.2009. Тираж 150 экз. Гарнитура Times New Roman. Заказ № 40099
Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Самойлова, Алла Владимировна
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1.1. Морфологическое строение и рецепторный статус эндометрия.
1.1.2. Структурно-функциональные изменения эндометрия в период имплантации.
1.1.3. Влияние повышенных доз эстрогеновых гормонов на морфофун-кциональные процессы в эндометрии.
1.2. Роль биологически активных веществ гистамина, серотонина и катехоламинов в репродуктивной функции женщин.
1.3. Влияние гемостазиологических нарушений на репродуктивную функцию женщин.411.4. Роль АМГФ и ХГЧ в репродуктивной функции женщин.
1.5. Роль микроэлементов меди и цинка в репродуктивной функции женщин.48'
1.6; Экстракорпоральное оплодотворение - один из наиболее эффективных способов лечения женского бесплодия.
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИКО-АНАМНЕСТИЧЕСКОГО
ОБСЛЕДОВАНИЯ ПАЦИЕНТОК ПРОГРАММЫ ЭКО.
ГЛАВА IV. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ РЕЦЕПТОРНОГО СТАТУСА ЭНДОМЕТРИЯ ПАЦИЕНТОК С РАЗЛИЧНЫМ ИСХОДОМ ЭКО.
4.1. Особенности морфологического состояния эндометрия у пациенток программы ЭКО.
4.2. Иммуногистохимическое исследование стероидных рецепторов эндометрия.
4.3; Динамика содержания* стероидных рецепторов эндометрия в различные фазы менструального цикла.'.
4.4. Корреляционный анализ между концентрацией стероидных рецепторов^ эндометрия и концентрацией стероидных и гонадотропных гормонов , в периферической крови.;.
ГЛАВА V. РЕЗУЛЬТАТЫ МОЛЕКУЛЯРНО-БИОХИМИЧЕСКОШ ИССЛЕДОВАНИЯ ФОЛЛИКУЛЯРНОЙ ЖИДКОСТИ И ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПАЦИЕНТОК С РАЗЛИЧНЫМ ИСХОДОМ ЭКО. 'V 5.1. Исследование содержания биологически. активных веществ.гистамина, серотонина и катехоламинов в; фолликулярной жидкости у пациенток программы ЭКО..:.
•5.2; Исследование содержания биологически активных веществ .гистамина; серотонина и катехоламинов в . периферической, крови у пациенток программы ЭКО:.-.'.'.;. . . .•.••.-.:.1'40/
5.3. Корреляционный, анализ' между содержанием серотонина и гистамина в периферической крови и в фолликулярной жидкости.:.
5.4:1. Исследование гемостазиологического статуса у пациенток. программы ЭКО.'.
5.4.2 Корреляционный анализ между показателями гемостазиограммы и уровнем гистамина и серотонина в периферической крови у пациенток программы ЭКО.
5.5.1. Исследование, содержания альфаг2-микроглобулина фертильности и хорионического гонадотропина в фолликулярной жидкости пациенток программы ЭКО.16СЬ
5.5.2. Исследование соотносительных коэффициентов содержания АМГФ и ХГЧ . и биологически активных веществ гистамина- серотонина и катехоламинов в фолликулярной жидкости.162!
5.6.1.; Исследование; содержания микроэлементов; меди и; цинка- в фолликулярной;жидкости пациенток программы ЭКО.
5.6.2. Исследование соотносительных коэффициентов содержания АМГФ и ХГЧ и микроэлементов меди и цинка в фолликулярной жидкости.
ГЛАВА VI. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ МОРФОФУНКЦИ-ОНАЛЬНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ МАТКИ МЫШЕЙ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ
ЭСТРАДИОЛА, ПРОЛАКТИНА И ГЛЮКОКОРТИКОИДОВ
6.1. Морфофункциональные изменения в матке мышей при введении эстрадиола и пролактина.
6.2. Морфофункциональные изменения в матке мышей при введении эстрадиола и глюкокортикоидов.
ГЛАВА VII. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфофункциональные аспекты повышения эффективности экстракорпорального оплодотворения"
В настоящее время демографическая ситуация в России оценивается как критическая, что обусловлено значительным снижением рождаемости, ростом общей смертности населения [5, 47, 138]. При этом продолжает оставаться высокой частота бесплодных браков [30, 69, 73, 74, 94]. По заключению экспертов Всемирной организации здравоохранения частота бесплодия более 15 % может рассматриваться как демографический кризис [14, 65, 164]. По данным различных авторов частота бесплодия в России составляет от 17 до 20 % [47, 62, 65, 69; 138]. В Чувашии этот показатель колеблется около 18 % [39].
Общепризнанно наиболее эффективным методом преодоления бесплодия сегодня является-, метод вспомогательной репродуктивной, технологии — экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) [45, 57, 69,' 109]. Однако, несмотря на внешнюю простоту выполнения процедуры ЭКО, остается очень много неизученных и нерешённых проблем [10, 23, 53]. До настоящего времени частота наступления беременности при применении данного метода лечения не превышает 35-39 % [69, 73, 74]. Предложения многочисленных исследователей повышения эффективности ЭКО в основном основывались на совершенствовании клинических лечебно-диагностических мероприятий [57, 64, 72, 76, 273, 301]. А изучению тонких моле-кулярно-биохимических механизмов оплодотворения in vitro, имплантации и наступлению беременности посвящено необоснованно мало работ.
Безусловно, важное значение в результативности экстракорпорального оплодотворения играют как процесс имплантации, так и качество получаемых для оплодотворения яйцеклеток [25, 115, 287]. При этом трудно представить успешную нидацию оплодотворённой яйцеклетки в неподготовленный эндометрий. Поэтому изучение способов оценки качества эндометрия, позволяющих составить прогноз возможного исхода ЭКО, а в конечном итоге воздействовать на повышение результативности ЭКО, на сегодня имеет очень важное научно-практическое.значение.
Структурная и функциональная зрелость эндометрия формируется во время менструального цикла в условиях динамических колебаний уровня стероидных гормонов яичников — эстрогенов и прогестерона [146, 284, 285]. Нормальное развитие эндометрия и его изменения в течение лютеиновой фазы менструального цикла являются жизненно важными для успешной имплантации и наступления беременности [121, 122, 205, 239, 242, 255]. В настоящее время доказано, что решающую роль в имплантации играют не столько абсолютное содержание стероидных гормонов, действующих на ткани мишени органов репродуктивной системы, и морфологическая структура эндометрия, сколько его рецептивность, т.е. количество функционально1 полноценных рецепторов ткани эндометрия! к соответствующим стероидным гормонам [100, 115, 129, 157, 200, 253].
Помимо рецептивности эндометрия важное значение в процессе имплантации играет сосудистый и гемостазиологический> статус, как в целом организме, так и, в частности, в области формирования плацентарной площадки. Известно, что в процессе имплантации наблюдается нарушение целостности сосудов эндометрия [86, 87], а присоединяющиеся при этом гемостазиологические отклонения от нормы способны приводить к нарушению процессов плацентации [40], что ведёт к невынашиванию [122], неразвивающейся беременности, развитию различных патологических отклонений в развитии плода и, в конечном итоге, к бесплодию [36, 85]. Известно, что стимуляция суперовуляции в процессе экстракорпорального оплодотворения сопровождается явлениями гиперкоагуляции и активацией внутрисосудистого свертывания [36]. В этой связи представляется весьма актуальным изучение развернутой картины системы гемостаза с точки зрения влияния этой системы на результативность программы экстракорпорального оплодотворения [28, 38].
Ещё одним важным компонентом процесса имплантации, безусловно, являются оплодотворенные ооциты или эмбрионы [25, 26, 115]. От их качества, жизнеспособности во многом зависит исход процесса экстракорпорального оплодотворения. Качество эмбрионов в свою очередь зависит от исходного состояния гамет — яйцеклеток и сперматозоидов. Огромное значение для оценки функциональной активности гамет имеет фолликулярная жидкость. Изучение её биохимического состава может дать ответы на многие тайные вопросы процесса имплантации. Изучались многие параметры фолликулярной жидкости — микроэлементы медь и цинк, биологически активные вещества гистамин, серотонин и катехоламины, альфа-2-микроглобулин фертильности (АМГФ), содержание хорионического гонадотропина (ХГЧ), ингибина-В [39, 57, 81, 91]. Однако, все эти работы, имели односторонний характер и не смогли дать полного и однозначного! ответа на вопрос о значении биохимического состава фолликулярной жидкости в процессе имплантации.
Оценивая столь многогранный процесс экстракорпорального оплодотворения, представляется очень важным определить степень влияния каждого фактора и, по-возможности, найти коррелятивную связь между ними.
При одновременной оценке таких механизмов, как клеточная диф-ференцировка (созревание яйцеклеток и состояние рецепторного аппарата), клеточный иммунитет (процессы отторжения и реакции немедленного и замедленного типа), состояние микрососудистого гомеостаза, представляется очень важным определить роль биологически активных веществ гистамина, серотонина и катехоламинов [82, 124, 127, 139, 144, 245, 308, 328]. Роль каждого из них в вышеуказанных процессах бесспорна, однако, сведения' об участии их в процессах экстракорпорального оплодотворения, особенно, в комплексной оценке, работ практически не существует.
Таким образом, изучение новых механизмов" имплантации в процессе экстракорпорального оплодотворения на тонком морфологическом, молекулярном и биохимическом уровнях может сделать ещё один шаг в повышении эффективности данного метода.
Исходя из этого целью настоящей работы явилось:
Выявление морфофункциональных механизмов повышения эффективности экстракорпорального оплодотворения.
Задачи исследования:
1. Изучить морфологическую картину и рецепторный статус эндометрия у женщин с различными результатами лечения бесплодия методом ЭКО и провести корреляционный анализ взаимодействия рецепторного статуса с уровнем половых стероидных гормонов в периферической крови.
2. Выявить влияние нейромедиаторов: гистамина, серотонина и катехоламинов, содержащихся в фолликулярной жидкости и в периферической крови на результативность лечения бесплодия методом ЭКО. Провести корреляционный анализ* взаимного влияния гистамина, серотонина периферической крови и фолликулярной жидкости на результативность ЭКО.
3. Исследовать гемостазиологический статус у женщин с различными результатами лечения методом ЭКО и провести корреляционный анализ показателей гемостаза с уровнем серотонина и гистамина в периферической крови.
4. Оценить изменения уровней альфа-2-микроглобулина фертильности, хорионического гонадотропина, микроэлементов меди и цинка в фолликулярной жидкости у женщин с различными результатами лечения методом ЭКО и провести корреляционный анализ их взаимного влияния на результативность данного метода лечения бесплодия.
5. В эксперименте исследовать общую морфологию и пролиферативные процессы в матке мышей при сочетанном хроническом воздействии экзогенных эстрогенов, пролактина и глюкокортикоидов.
6. Исследовать состояние эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в матке мышей при сочетанном хроническом воздействии экзогенных эстрогенов, пролактина и глюкокортикоидов.
7. Выявить группу клинико-анамнестических факторов, оказывающих существенное влияние на результативность программы экстракорпорального оплодотворения.
Научная новизна. Впервые выявлена различная экспрессия стероидных рецепторов эндометрия в течение менструального цикла у женщин с различными исходами экстракорпорального оплодотворения. Установлена корреляционная взаимосвязь между уровнем стероидных рецепторов эндометрия и концентрацией стероидных и гонадотропных гормонов* в периферической крови у пациенток программы экстракорпорального оплодотворения.
Впервые доказано положительное влияние повышенной концентрации гистамина и пониженной концентрации серотонина в фолликулярной, жидкости и периферической крови на результат экстракорпорального оплодотворения
Впервые выявлена корреляционная взаимосвязь гиперагрегационного состояния периферической крови у женщин с различными исходами экстракорпорального оплодотворения с уровнем гистамина и серотонина в периферической крови.
Впервые установлено отрицательное воздействие повышенной концентрации меди в фолликулярной жидкости на исход экстракорпорального оплодотворения. Доказана корреляционная взаимосвязь микроэлементного состава и концентрации альфа-2-микроглобулина фертильности в» фолликулярной жидкости.
В проведенных исследованиях выявлены изменения пролиферативных процессов и морфологического строения матки мышей при сочетанном хроническом воздействии экзогенных эстрогенов, пролактина и глюкокортикоидов в сравнении с действием только эстрогенов.
Впервые изучены особенности экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов матки мышей при сочетанном хроническом воздействии экзогенных эстрогенов, пролактина и глюкокортикоидов.
Практическая1 значимость. Выявленные морфофункциональные механизмы, влияющие на результат экстракорпорального оплодотворения, позволили сформировать группы непредотвратимых и условно-предотвратимых факторов, воздействие на которые позволит повысить эффективность, лечения бесплодия. Внедрение в повседневную практику перед включением в программу* лечения методом ЭКО лабораторного исследования рецепторного статуса эндометрия, биоаминного состава периферической крови и гемостазиограммы позволяют дифференцированно подходить к назначению» соответствующего лечения с целью повышения конечной эффективности экстракорпорального оплодотворения.
Положения, выносимые на защиту:
1. Выявленное повышенное содержание прогестероновых и эстрогеновых рецепторов в эпителии желёз и клетках стромы эндометрия в позднюю стадию фазы пролиферации и сниженное число этих рецепторов в клетках стромы эндометрия в среднюю и позднюю стадии фазы секреции-является источником формирования истинной недостаточности лютеиновой фазы менструального цикла и является прогностически неблагоприятным фактором, влияющим на наступление беременности у женщин в процессе лечения методом экстракорпорального оплодотворения.
2. Коррекция повышенных концентраций серотонина, меди и альфа-2-микроглобулина фертильности в фолликулярной жидкости и периферической крови способствуют повышению, эффективности экстракорпорального оплодотворения:
3. Выявленное повышение экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в эпителиальных и стромальных клетках матки мышей, при введении; экзогенного эстрадиола-и дексаметазона и снижение экспрессии этих же рецепторов при. введении пролактина доказывает непосредственное воздействие повышенных доз эстрогенов на экспрессию стероидных рецепторов в матке. Эстроген-индуцированные морфологические реакции в. матке овариоэктомированных мышей претерпевают изменения1 под воздействием экзогенного пролактина и глюкокортикоида дексаметазона, и; проявляются снижением; пролиферативной; активности во всех; структурах маткщ снижением; гиперплазии1 эндометрия, потенцируемой повышенными; дозами эстрогенов;. ,
4. Существенное отрицательное: воздействие на результативность экстракорпорального оплодотворения; имеет совокупное влияние; шестнадцати клинико-анамнестических данных: наличие эндометрита и< эндоцервицита в анамнезе, инфицированность хламидиями, уреаплазмами, микоплазмами, вирусом простого- герпеса и цитомегаловирусом, наличие в анамнезе кист и резекции яичников, миомэктомии и спаечного процесса в. малом тазу, номер попытки, а также пониженный уровень ингибина В, тироксина и эстрадиола и повышенный уровень альфа-2-микроглобулина фертильности.
Апробация работы и публикации. По результатам работы опубликовано 50 работ, в том числе 12 в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ. Издана^ монография'«Современные ;методы диагностики? и лечения бесплодного .брака» (Чебоксары; 2003),. издано учебное' пособие, для; студентов, курсантов' и практикующих врачей «Лабораторная, диагностика; бесплодия; в браке» (Чебоксары 2006). Материалы, работы использовались при написании раздела «Применение высокотехнологичных: методов лечения: бесплодия- в браке» республиканской целевой программы минздравсоцразвития Чувашии на 2006-2008 годы «Дети Чувашии» (Чебоксары 2005).
Результаты работы: доложены на ХУ-ХУШ международных , научно-практических конференциях Российской ассоциации, Репродукции человека «Репродуктивные технологии сегодня и завтра» (Чебоксары, 2005; Ростов-на-Дону, 2006; Казань, 2007; Самара; 2008), первом международном конгрессе по репродуктивной медицине «Репродуктивное: здоровье семьи»: (Москва, 2006); на научно-практическот конференции; посвященной1 60-летию Республиканской клинической больницы 1 (Чебоксары, 2007), на Всероссийской: научно-практической конференции? с международным--участием «Информационные технологии в профессиональной деятельности и научной работе» (Йошкар-Ола, 2008); на12-м; региональномшаучномгфоруме; «Мать и дитя» (Сочи, 2008), на IV съезде акушеров-гинекологов России (Москва, 2008), в научно-практическом симпозиуме «Лабораторная медицина: инновационные технологии' в- аналитике, диагностике, образовании, организации» (Москва, 2008).
Основные положения диссертационной^ работы доложены на объединённом заседании кафедр гистологии,. цитологии и эмбриологии, нормальной физиологии,, патологической физиологии, биологии и: кафедры акушерства и гинекологии ФГОУ ВПО «Чувашского государственного университета им. И.Н.Ульянова» и кафедры акушерства и гинекологии ГОУ «Институт усовершенствования врачей».
Внедрение результатов работы. Результаты работы внедрены, в протоколы обследования пациенток перед включением в программу лечения пациенток методом ЭКО в амбулаторном отделении ГУЗ «Президентский перинатальный центр» минздравсоцразвития Чувашской' республики, в протоколы морфологического исследования биоптатов эндометрия ГУЗ «Патологоанатомическое бюро» минздравсоцразвития Чувашской республики. Организована совместная гистохимическая лаборатория ГУЗ «Президентский перинатальный центр», ГУЗ «Патологоанатомическое бюро» минздравсоцразвития Чувашской республики и кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии Чувашского госуниверситета. Внедрена в практическую деятельность разработанная автором прикладная программа для ЭВМ «Алгоритм ведения бесплодных супружеских пар» (Свидетельство РФ № 2005611629, 03.05.2005). Результаты работы используются в учебном процессе на кафедрах акушерства и гинекологии ФГОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И.Н.Ульянова» и ГОУ «Институт усовершенствования врачей» и на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии, биологии и патологической физиологии ФГОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И.Н.Ульянова».
Объём и структура диссертации. Работа изложена на 264 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы материалов и методов, 4 глав собственных исследований и обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. В работе содержится 68 рисунков, 61 таблица. Список литературы включает 330 работ, в том числе 145 отечественных и 185 зарубежных источников.
Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Самойлова, Алла Владимировна
выводы
1. У пациенток с отрицательным результатом лечения бесплодия методом экстракорпорального оплодотворенияс на фоне сниженного базального уровня эстрадиола выявлена истинная недостаточность лютеиновой фазы цикла, характеризующаяся уменьшением экспрессии прогестероновых рецепторов в среднюю стадию фазы секреции.
2. В поздней стадии фазы пролиферации в группе женщин с отрицательным результатом ЭКО достоверно выше содержание прогестероновых рецепторов в клетках стромы эндометрия. У женщин с отрицательным результатом лечения достоверно больше содержание эстрогеновых рецепторов в ядрах эпителиальных клеток желез и в клетках стромы эндометрия в поздней стадии фазы пролиферации.
3. В поздней стадии фазы секреции достоверно выше содержание эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в клетках стромы эндометрия в группе с положительным исходом ЭКО, а прогестероновых рецепторов в ядрах клеток желез достоверно выше в группе с отрицательным результатом ЭКО.
4. Выявлена обратная корреляционная зависимость между уровнем экспрессии эстрогеновых и прогестероновых рецепторов в средней стадии фазы секреции от базального уровня прогестерона в периферической крови г=-0,56 для эпителия желез и г=-0,64 для клеток стромы у женщин с отрицательным результатом лечения бесплодия методом ЭКО. Это свидетельствует об истинной недостаточности лютеиновой фазы цикла у этих женщин.
5. У женщин с отрицательным результатом лечения методом ЭКО достоверно выше содержание серотонина и меньше содержание гистамина в периферической крови и в фолликулярной жидкости по сравнению с аналогичными показателями у женщин с положительным результатом лечения.
6. У женщин с отрицательным результатом лечения бесплодия методом ЭКО гемостазиограмма характеризуется значительно большим проявлением гиперкоагуляционного состояния по сравнению с группой женщин с положительным исходом лечения. В этой группе достоверно больше содержание гомоцистеина, меньше АЧТВ; больше антител к тромбину, фосфатидилхолину, фосфатидилэтаноламину, фосфатидилинизитолу. 7. Наблюдается высокая корреляционная взаимосвязь между уровнем серотонина и показателями гемостазиограммы, характеризующими гиперкоагуляционные состояния у женщин с различным исходом лечения методом ЭКО. Выявлена положительная корреляционная связь между уровнем гистамина и гомоцистеина, антителами к тромбину, протромбину, кардиолипину и к фосфатидиловой'кислоте.
8: У женщин с отрицательным результатом лечения методом ЭКО! в фолликулярной жидкости достоверно выше уровень АМГФ. Уровень Х17Ч достоверно не различается*в.группах с различным исходом-лечения:
9. В фолликулярной- жидкости в группе женщин с отрицательным' результатом ЭКО достоверно выше содержание катионов.меди. Содержание цинка в фолликулярной жидкости достоверно не различается у женщин с положительным и отрицательным результатами ЭКО. Однако, имеют значение соотносительные коэффициенты содержания меди и цинка. У женщин с положительным результатом лечения этот коэффициент 1,5 по сравнению с 1,87 у женщин с отрицательным результатом лечения.
10. Многофакторный анализ влияния различных клинико-анамнестических данных на результативность экстракорпорального оплодотворения выявил достоверное отрицательное влияние на положительный исход ЭКО 16 факторов: номер попытки, наличие эндометрита и эндоцервицита, наличие хлами-диоза, уреаплазмоза, микоплазмоза, инфицированность вирусом простого герпеса и цитомегаловирусом, наличие резекции яичников, миомэктомии, кисты яичника и спаечного процесса в малом тазу, уровень ингибина В, тироксина, эстрадиола и альфа-2-микроглобулина фертильности.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Всем пациенткам :перед . проведением экстракорпорального оплодотворения необходимо проводить морфологическое и иммуногистохимическое исследование эндометрия с целью выявления патологических изменений рецепторного статуса эндометрия:
2. Полученные: результаты биохимического состава, фолликулярной жидкости можно использовать в качестве прогностического критерия в; программах замораживания эмбрионов и их последующего) использования в программах ВРТ.
3. Выявление повышенного уровня серотонина в периферической крови у женщин/перед, включением в программу ЭКО' может прогнозировать, неудачный результат ЭКО: Возможная коррекция повышенного уровня; серотонина позволит повысить эффективность, экстракорпорального оплодотворения: '■'■''•'" . '
4. Необходимо внедрить в перечень, обследования- женщин, перед/ программой ЭКО расширенный анализ гемостазологических нарушений. Выявленные, гиперагрегационные состояния необходимо своевременно корректировать с. целью повышения эффективности ЭКО.
5. У женщин программы ЭКО необходимо рассматривать , расширенный спектр антител к мембранным фосфолипидам, а также антител к связанным с этими фосфолипидами белками-кофакторами* включая: тест на антитромбиновые антитела в качестве скринингового метода обследования.
6. Учитывая негативное влияние повышенных, концентраций, меди: на результативность метода ЭКО возможно применение в качестве профилактических мер диеты, с богатым содержанием цинка*, витаминов* обогащенных микроэлементами* а также возможно? рекомендовать применение белковых препаратов, обладающих медьсвязывающими свойствами.
7. С целью повышения эффективности лечения бесплодия методом ЭКО необходимо максимально сократить сроки обследования и лечения женщин консервативными методами на этапе женских консультаций и как можно раньше отправлять их на эффективное лечение в условия специализированных центров.
Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Самойлова, Алла Владимировна, Саранск
1. Авцын А.П. Микроэлементозы человека / А.П. Авцын, A.A. Жаворонков, A.M. Риш, Л.С. Строчкова. М.: Медицина, 1991. -496 с.
2. Агаджанова A.A. Ведение беременностей, наступивших после экстракорпорального оплодотворения у женщин с привычным невынашиванием, обусловленным иммунологическими нарушениями /
3. A.A. Агаджанова, Н.К. Тетруашвили, В.М. Сидельникова и др.. // Гинекология. 2006. - Т. 8., №5. - С.
4. Адамян Л. В. Клинико-генетические аспекты аденомиоза / Л.В. Адамян, Л.В. Андреева // Акушерство и гинекология. 1999. - №3. - С.38-43.
5. Айламазян Э.К. Первый банк доноров ооцитов и реализация программы «Донорство ооцитов» / Э.К. Айламазян, Э.В. Исакова,
6. B.C. Корсак и др. // Проблемы репродукции. 2000. - Т. 6, №6.1. C.50-55.
7. Аксененко В. А. Состояние репродуктивного здоровья и профилактика рецидивов у больных с воспалительными заболеваниями придатков матки: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М. - 2001. - С. 14-16.
8. Алексеева М.Л. Стероид-рецепторные системы в эндометрии и эндометриоидных гетеротопиях ретроцервикальной локализации / М.Л. Алексеева, Л.В. Адамян, Н.И. Кондриков и др. // Акушерство и гинекология. 1989. - №2. - С.69-71.
9. Алексеева М.Л. Методы оценки эндокринной физиологии репродуктивной системы / М.Л. Алексеева, Л.С. Минина М., 1986. -С.60-77.
10. Алиева Э.А. Результаты терапии эндокринного бесплодия / Э.А. Алиева, Т.Я. Пшеничникова, Н.И. Волков // Акушерство и гинекология. 1987.-№9. - С. 11-13.
11. Аншина М.Б. Дефицит прогестерона, способы его оценки и коррекция с помощью препарата дюфастон (клиническая лекция) / М.Б. Аншина, P.A. Нерсесян // Проблемы репродукции. — 2003. №4. — С.23 -26.
12. Аншина М.Б. ЭКО в естественных циклах //Проблемы репродукции. 2008. - № 3. - С.47—52.
13. Апресян СВ. Оптимизация восстановления фертильности у женщин с трубно-перитонеальным бесплодием: Автореф. дис. .канд. мед. наук. -М., 2003. 24с.
14. Бабенко Г. А. Применение микроэлементов в медицине / Г.А. Бабенко, Л.П. Решеткина- Киев: Здоров'я, 1971.— 220 с.
15. Бани Одех Е.Ю. Репродуктивное здоровье пациенток после хирургического лечения трубной беременности: Автореф. дис. .канд. мед. наук. М. - 2003. - 23с.
16. Баркалина Н.В. 23-я ежегодная встреча ESHRE (репортаж Н.В.Баркалиной) // Проблемы репродукции. 2008. - №1. — С.30-36.
17. Бассалык Л.С. Рецепторы стероидных гормонов в опухолях человека / Л.С. Бассалык, Н.И. Кузьмина, Н.И. Муравьева и др.; под ред. Л.С. Бассалык. М.: Медицина, 1987. - 224 с.
18. Беженарь В.Ф. Трубно-перитонеальное бесплодие. Проблемы и перспективы / В.Ф. Беженарь, A.C. Максимов // Журналъ акушерства и женских болезней. 1999. -№3. -С.48- 55.
19. Болтовская М.Н. Роль эндометриальных белков и клеток-продуцентов в репродукции человека: Автореф. дис. .д-ра биолог, наук. -М.-2001.-41с.
20. Бохман Я.В. Руководство по онкогинекологии / Я.В. Бохман Л.: Медицина, 1989. - 464 с.
21. Быков B.JI. Цитология и общая гистология. / B.JI. Быков — СПб.: СОТИС, 2007. 520 с.
22. Вавилова Т.В. Антитромботическая терапия и методы ее лабораторного контроля (лекция) / Вавилова Т.В. // Клиническая лабораторная диагностика 2004. - № 12. - С. 21 - 32.
23. Вайсфельд И.Л. Гистамин в биохимии и физиологии / И.Л. Вайсфельд, Т.Н. Кассиль. М.: Наука, 1981. - 277 с.
24. Витязева И.И. Течение, ведение и исход беременности после лечения бесплодия методами вспомогательной репродукции: Автореф. дис. .канд. мед. наук. М.,1999. - 20с.
25. Вихляева Е.М. Руководство по эндокринной гинекологии / Е.М. Вихляева, Б.И. Железнов, В.Н. Запорожан и др.; под ред. Е.М. Вихляевой. М.: Мед. информ. агентство, 1997. - 768 с.
26. Воробьева О. А. Особенности оплодотворения ооцитов и доимплантационного развития эмбрионов человека в зависимости от показателей гаметогенеза: Автореф. дис. .д-ра биолог, наук.-СПб., 2001.- 34с.
27. Воробьева O.A. Особенности оплодотворения ооцитов и развития эмбрионов в культуре у женщин с недостаточностью яичников / O.A. Воробьева, A.A. Кирсанов, В.В. Потин // Проблемы репродукции. -1999. №4.-С. 17-21.
28. Гаспаров A.C. Трубно-перитонеальное бесплодие у женщин / A.C. Гаспаров, Н.И. Волков, Р.Г. Гатаулина и др. // Проблемы репродукции. 1999. - № 2,- С.43-44.
29. Голованова С.Ю. Мониторинг системы гемостаза у женщин в программе ЭКО / С.Ю. Голованова, Ф.М. Сабирова // Материалы XVIIмеждународной- конференции РАРЧ «Репродуктивные технологии сегодня и завтра». 2007. - С. 24 — 25.
30. Гольдберг Е.Д. Характеристика кроветворения у бестимусных мышей Нуде / Е.Д. Гольдберг, Г.В. Карпова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1977. - № 4. - С. 463-468.
31. Грищенко В.И. Научные основы регулирования рождаемости / В.И. Грищенко-Киев: Здоров'я, 1988. 179 с.
32. Гузов И.И. Введение в медицину репродукции. Зачатие у человека. Стероидные гормоны и другие медиаторы имплантации. Введение в рецепторологию. // http:/www.cironline.ru
33. Дамиров М.М. Морфобиохимическая концепция патогенеза аденомиоза / М.М. Дамиров, A.M. Шабанов, H.H. Слюсарь и др. // Российский вестник акушера-гинеколога. 2002.- Том 2, №3.- С15-17.
34. Девойно JI.B. Моноаминергические системы в регуляции иммунных реакций (серотонин, дофамин) / JI.B. Девойно, Р.Ю. Ильюченок. Новосибирск: Наука. Сибирское отделение, 1983. -232 с.
35. Джинджгава Ж.Г. Неудачи ЭКО и материнская тромбофилия / Ж.Г. Джинджгава, В.О. Бицадзе // Проблемы репродукции. 2005. - № 5. -С. 41-43.
36. Доброхотова Ю.Э. Некоторые аспекты профилактики и лечения тромботических осложнений в акушерстве (клиническая лекция) / Ю.Э. Доброхотова, А.Д. Ли // Проблемы репродукции. 2006. - № 2. -С. 79-84.
37. Долгов В.В. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза / В.В. Долгов, П.В. Свирин. М.: ООО «Издательство «Триада», 2005. -227 с.
38. Долгова И.Ю. Особенности физиологического статуса женщин и мужчин при экстракорпоральном оплодотворении: Дисс. . канд. биол. наук. Чебоксары. - 2006. - 139 с.
39. Дуглас Н.И. Ранняя диагностика и профилактика недостаточности плаценты и её ложа у женщин с репродуктивными потерями в анамнезе: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М. - 2004. - 24с.
40. Дюговская Л. А. Роль гистамина в функции супрессорной активности тимоцитов. / Л.А. Дюговская // Актуальные проблемы современной патофизиологии. Киев, 1981. - С. 126 - 127.
41. Евдоченко И. И. Эспрессия рецепторов стероидных гормонов эндометрия и состочние локального иммунного статуса при эндокринном бесплодии у женщин: Автореф. дис. канд. мед. наук. -Томск, 2004. -20 с.
42. Елисеева Л.С. Развитие иммунного ответа на белковый антиген в условиях повышеного уровня серотонина: Автореф. дис. д-ра биол. наук.-М. 1974.-34 с.
43. Жаворонков A.A. Микроэлементы и естественная киллерная активность / Жаворонков A.A., A.B. Кудрин // Архив патологии. 1999. - Т.58, №3. -С.65-70.
44. Здановский В.М. Современные подходы к лечению бесплодного брака: Дис. . д-ра мед. наук, в форме научного доклада. М., 2000. — 76 с.
45. Здоровье населения России и деятельность учреждений здравоохранения в 2001 году. Статистические материалы. // Здравоохранение РФ. 2003.- №6.-С. 41-44.
46. Зеленова И.Г. Адренергические структуры лимфоидных органов млекопитающих в разные периоды постэмбрионального развития / И.Г. Зеленова // Макро- и микроструктура тканей в норме, патологии и эксперименте. Чебоксары, 1978. - С. 8-11.
47. Земцовский Э.В. Соединительнотканные дисплазии сердца / Э.В. Земцовский. СПб.: ТОО «'Политекст-Норд-Вест», 2000. - 115с.
48. Зосимовский А.Ю. Влияние иммуноморфологических факторов на эффективность ЭКО: Дис. . канд. мед. наук. М., 1997.
49. Иванова О.М. Анатомический и молекулярный принципы в новых технологиях исследования типового патологического процесса ишемической болезни сердца и сопровождающих ее расстройств функциональных систем: Автореф. дис. .канд. мед. наук. М., 200124 с.
50. Иванец Т.Ю. Диагностическая значимость исследования системы гемостаза в репродуктивной медицине / Т.Ю. Иванец // Лаборатория. -2004.-№3.-С.
51. Ильина A.A. Фолликулярная жидкость как среда, определяющая качество ооцита и исход программ ВРТ (обзор литературы) / А.А.Ильина, И.И.Калинина, Т.Г.Трошина и др.// Проблемы репродукции. 2008. - Том 14 - № 4. - С. 27 - 38.
52. Кудрин A.B. Иммунофармакология микроэлементов / A.B. Кудрин, A.B. Скальный, A.A. Жаворонков и др. М., Изд-во КМК, 2000. - 537 с.
53. Кайнова A.C. Биогенные амины в клинике / A.C. Кайнова, А.И. Квятковская, И.Н. Михайлова. М., Медицина, 1970.
54. Калашникова Е.А. Альфа-микроглобулин фертильности (гликоделин-s) как возможный иммунодепрессивный фактор антиспермального иммунитета / Е.А. Калашникова, С.Н. Кокаровцева, М.И. Маршицкая и др. // Проблемы репродукции. 2004. - Том 10 -№5.-С. 37-41.
55. Калинина Е. А. Резервы повышения< эффективности экстракорпорального оплодотворения при лечении бесплодия у женщин с гинекологическими заболеваниями: Дис. . д-ра мед. наук. М., 2005.
56. Калинина Е.А. а" микроглобулин фертильности (АМГФ) как ранний критерий имплантации после ЭКО / Е.А. Калинина, В.А. Лукин, И.И. Калинина и др. // Проблемы репродукции. - 1999. - № 6. -С. 47-50.
57. Карась С.И. / С.И. Карась, Е.В. Макарова, A.B. Данилец // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1993. - Т. 115,j3.- С.249-251.
58. Кира Е.Ф. Инфекции и репродуктивное здоровье (часть 1) / Е.Ф. Кира // Журналъ акушерства и женских болезней. 1999. - № 2.-С.71-78.
59. Клименко H.A. Механизмы модулирующего влияния тучных клеток на лейкоцитарную реакцию при воспалении / H.A. Клименко, Г.Ю. Пышнов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1993.-Т. 115. №1.-С. 29-30.
60. Корнева Е.А. Гормоны и иммунная система / Е.А. Корнева, Э.К. Шхинек // Л.: Наука, 1988. 250 с.
61. Корнеева И.Е. Современная концепция диагностики и лечения бесплодия в браке: Автореф. дис. д-ра мед. наук. М., 2003. - 38с.
62. Корнеева И. Е. Современная концепция диагностики и лечения бесплодия в браке. Дис. на соиск. учен. степ, д-ра мед. наук. Код спец. 14.00.01. Корнеева И. Е.-2003
63. Корнеева И.Е. Синдром гиперстимуляции яичников: профилактика, диагностика, лечение (обзор литературы) / И.Е. Корнеева, A.B. Иванова, Н.В. Баркалина // Проблемы репродукции. -2004. -№>1.-С. 43-50.
64. Корсак B.C. Регистр центров ВРТ России. Отчет за 2005 год. //Проблемы репродукции. 2007. - № 6. - С. 2-12.
65. Кострова Е. В. Рецепторный статус эндометрия у женщин с различными формами бесплодия: Дис. . канд. мед. наук. — Чебоксары, 2007.- 130 с.
66. Краснопольская K.B. Экстракорпоральное оплодотворение в комплексном лечении женского бесплодия: Автореф. дис. .д-ра мед. наук. -М., 2003.-34 с.
67. Кузьмичев JI.H. Роль TORCH-инфекции в программе экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов / JI.H. Кузьмичев // Акушерство и гинекология 1998.-№1.-С.16-19.
68. Кулаков В.И. Бесплодный брак / В.И.Кулаков М.«ГЭОТАР-Медиа». 2005 — 216 с.
69. Кулаков В.И. Лечение женского и мужского бесплодия / В.И.Кулаков, Б.В.Леонов, Л.Н.Кузьмичёв М.МИА. 2008 - 592 с.
70. Лакин Г.Ф. Биометрия / М.: Высш. шк. — 1990 — 352 с.
71. Леонов Б.В. Состояние проблемы экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов (ЭКО и ПЭ) в России / Б.В. Леонов, В.И. Кулаков // Акушерство и гинекология 1998. -С.4-5.
72. Левченко Р.Г. Рецепция эстрадиола и прогестерона в эндометрии у женщин с различными клиническими формами лютеиновой недостаточности / Р.Г. Левченко, Н.И. Бескровная, О.Н. Савченко, H.A. Арутюнян // Акушерство и гинекология. 1989. -№4.-С. 18-21.
73. Лейси А. Под ред. Световая микроскопия в биологии. Методы / Пер с англ./ М.: Мир. — 1992. — 464 с.
74. Липатова H.A. Лабораторные критерии фертильности эякулята (обзор литературы) / H.A. Липатова // Клиническая лабораторная диагностика.- 1998.- №5.- С.11-15.
75. Липшиц Р.У. Освобождение гистамина и серотонина и проницаемость сосудов в очаге острого асептического воспаления / Р.У. Липшиц, H.A. Клименко // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1977. -Т.38., № 8. С. 3-14.
76. Любовцева Е.В. Люминесцентно-гистохимические исследованиябиоаминного обеспечения репродуктивной функции мужчин и женщин в условиях экстракорпорального оплодотворения. Дис. . канд.мед. наук.- М.,2005.
77. Любовцева Л.А. Функциональная активность аминосодержащих структур костного мозга, тимуса и крови при действии нейромедиаторов и антигенов. Чебоксары. 1993. 121 с.
78. Макацария» А.Д. Тромбофилические состояния в акушерской практике / А.Д. Макацария/ В.О. Бицадзе. -М): «РУССО», 2001. 704 с.
79. Макацария А.Д. Тромбофилии и противотромботическая терапия в акушерской практике / А.Д. Макацария, В.О. Бицадзе. М.: «Триада-X», 2003.-904 с.
80. Макацария А.Д., Бицадзе В.О. Антифосфолипидный синдром, генетические тромбофилии в патогенезе основных форм акушерской патологии / А.Д.Макацария, В.О.Бицадзе // Российский медицинский журнал. 2006; специальный выпуск. С.2—10.
81. Машковский М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский.-М., Медицина, 1994. Т.1.- С.344-365.
82. Назаренко Т.А. Ингибин В как маркёр овариального резерва у женщин с, различными формами бесплодия / Т.А. Назаренко, Н.Г. Мишиева, Н.Г. Соловьёва и др. // Проблемы репродукции. — 2005,- №3.-С. 15-19.
83. Овсянникова Т.В. Бесплодный брак / Т.В. Овсянникова;, И.Е. Корнеева // Акушерство и гинекология 1998ir №1. С.32-36.
84. Оразмурадов А. А. Особенности плацентарного ложа* матки при осложнениях беременности и экстрагенитальных заболеваниях: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 2003. - 47с.
85. Осмоналиева Р.К. Диагностика и лечение недостаточности лютеиновой фазы цикла: Автореф. дис. .канд. мед. наук. Д., 1990. — 26 с.
86. Побединский Н;М. Стероидные рецепторы нормального эндометрия / HIM. Побединский, О.И. Балтуцкая, А.И Омельяненко // Акушерство и гинекология. 2000. - №3! - С.5 - 8.
87. Погасов А.Г. Эффективность хирургического; лечения миомы матки в сочетании с аденомиозом: Автореф. дис. .канд. мед. наук1. М.,1998. — 21 с.
88. Попов Г.Д. Некоторые аспекты неразвивающейся беременности после ЭКО / Г.Д. Попов, C.JI. Кузнецов, Т.А. Старостина // Современные подходы к лечению бесплодия: сб. науч. труд. Екатеринбург, 2002. -С. 142-143.
89. Пивченко П.К. Провизорные органы продукции катехоламинов в эмбриогенезе человека / П.К. Пивченко // II съезд физиологов Сибири и Дальнего Востока. Часть 2.- Новосибирск, 1995.- С.347.
90. Посисеева JI.B. Реабилитация репродуктивного здоровья / JI.B. Посисеева, Е.А. Бойко, Н.Ю. Борзова, А.И Ширинова // Вестник Российской ассоциации акушеров- гинекологов. 1995. - № 4. — С. 42 -46.
91. Посисеева JI.B. Способ определения фертильности мужчин / JI.B. Посисеева, Ю.С. Татаринов, В.Н. Городков и др. // Авторское свидетельство на изобретение №1389758 от 23.12.1987.
92. Посисеева JI.B. Иммунный статус перитонеальной жидкости у женщин с наружным эндометриозом, страдающих бесплодием / JI.B. Посисеева, A.M. Герасимов, A.JI. Шор // Акушерство и гинекология. 2000. - № 6. - С.27- 30.
93. Посисеева JT.B. Нарушение продукции плацентарных белков (ТБГ, ПАМГ-2) как фактор бесплодия у женщин с наружным генитальным эндометриозом / Л.В. Посисеева, А.О. Назарова // Проблемы репродукции. 1999. - №3. - С.48-51.
94. Прилепская В.Н. Контрацептивные и лечебные аспекты современных методов контрацепции / В.Н. Прилепская, Е.А. Межевитинова // М.: Медпресс, 2006. 128 с.
95. Радзинский В.Е. Эндометриоз / В.Е. Радзинский, А.И. Гус, С.Д. Семятов и др.. М.: Изд-во РУДН, 2002. - 59с.
96. Радзинский В. Е. Бесплодие и экстракорпоральное оплодотворение в свете контраверсий 2006 / В. Е. Радзинский // Акушерство и гинекология. - 2006. - № 1. - С. 60-62.
97. Регистр центров ВРТ России. Отчёт за 2005 г. // Проблемы репродукции. 2007. - №6. - С. 7-19.
98. Розен Б.В. Рецепторы стероидных гормонов / Б.В. Розен, А.Н. Смирнов. -М.: Изд-во МГУ, 1981. 310 с.
99. Руденко C.B. Артефакты традиционной агрегометрии / C.B. Руденко // Клиническая лабораторная диагностика — № 7. —2005. -С. 41 -46.
100. Савицкий Г.А. Миома матки (проблемы патогенеза и патогенетической терапии) / Г.А. Савицкий, А.Г. Савицкий // СПб.: ЭЛБИ, 2000.-235 с.
101. Светлаков A.B. Вероятность наступления имплантации у женщин с разными формами бесплодия при лечении методом ЭКО / A.B. Светлаков, М.В. Яманова, А.Б. Салмина и др. // Проблемы репродукции. 2002. - №3. - С.61-67.
102. Светлаков A.B. Молекулярно-биологические аспекты имплантации у человека и животных / A.B. Светлаков, М.В. Яманова,
103. A.Б. Егорова, C.B. Михуткина // Проблемы репродукции. — 2002. -№3. С. 16-28.
104. Сергеев П.В. Прогестерон: рецепторный механизм действия в норме и при опухолевом росте / П.В. Сергеев, Н.Ю.Ткачева, E.H. Карева, М.М. Высоцкий // Акушерство и гинекология. 1994. - №5. - С.6-8.
105. Сергеева В.Е. Люминесцентная морфология и адренергическая иннервация вилочковой железы: Автореф. дис. . канд.биол.наук. М. 1976.
106. Серебров А.И. Рак матки / А.И. Серебров. изд.2-е. - Л.: Медицина, 1968.-326 с.
107. Серов В.Н. Руководство по охране репродуктивного здоровья /
108. B.Н. Серов // М.:«ТриадаХ», 2001. 568 с.
109. Сидельникова В.М. Неполноценная лютеиновая фаза — тактика ведения пациенток с привычной потерей беременности / В.М. Сидельникова // Гинекология. 2002. - Т.4, №4. - С.45-48.
110. Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности / В.М. Сидельникова М.: Триада-Х, 2002. - 304 с.
111. Силенко С.Г. Гинекологическое здоровье женщин с доброкачественными заболеваниями молочных желез в пременопаузе: Автореф. дис. . канд. мед. наук.- М., 2004. 27с.
112. Смирнов В.М. Гипотеза о серотонинергической иннервации желудка и кишечника / В.М. Смирнов // Тез. междун. конф., посвящ. 150-летию акад. И.П. Павлова СПб., 1999. - С.7.
113. Смольникова В. Ю. Экстракорпоральное оплодотворение иперенос эмбрионов в полость матки в лечении бесплодия, обусловленного генитальным эндометриозом (клинические и эмбриологические аспекты): Автореф. дис. . д-ра мед. наук. 2002
114. Смольникова В. Ю. Экстракорпоральное оплодотворение и его новые направления в лечении женского и мужского бесплодия / В. Ю. Смольникова 2000.
115. Смородченко А.Т. Лимфатические узлы в норме и при антигенном воздействии: учебное пособие / Смородченко А.Т. // ЧТУ, Чебоксары, 1996.-76 с.
116. Сухих Г.Т. О функциональной роли а-2-микроглобулина фертильности / Г.Т. Сухих, Д. Д. Петрунин, В.В Малайцев, И.М. Богданова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1998. — № 126 (10).-С. 364-373.
117. Татаринов Ю.С. Специфический а-2-микроглобулин (гликоделин) репродуктивной системы человека / Ю.С. Татаринов, Л.В. Посисеева, Д.Д. Петрунин Иваново, 1998.-123с.
118. Татаринов Ю.С. Специфический альфа-2 микроглобулин (гликоделин) репродуктивной системы человека: 20 лет отфундаментальных исследований до внедрения в клиническую практику / Ю.С. Татаринов, Г.А. Олифиренко, Д.Д. Петрунин // М.: Иваново, 1998. 127 с.
119. Тишкевич O.JI. Невынашивание беременности после ЭКО и ЭКО/ИКСИ / О.Л. Тишкевич, C.B. Жуковская, С.Б.Шелег и др. // Проблемы репродукции. 1998. - №6. - С.34-36.
120. Фанченко Н.Д. Состояние эстроген- и проегстеронрецепторных сиситем эндометрия при доброкачественных опухолях матки и яичников / Н.Д. Фанченко, Л.В.Адамян // Акушерство и гинекология. — 1987. — №7. с.26-27.
121. Феськов A.M. Индукция овуляции и морфологическая структура эндометрия у женщина ановуляторным бесплодием / A.M. Феськов // Украшський медичний часопис. -1999. T. III/IV, №2 - С.156-158.
122. Фахрутдинова Э.Х. Репродуктивное здоровье женщин после консервативной миомэктомии: Дис. .канд. мед .наук. М., 2004. -143 с.
123. Филлипов О.С. Бесплодный брак в Западной Сибири: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 1999. - 32 с.
124. Чернобаева И.Д. Тучные и энтерохромафиноподобные клеткислизистой оболочки- желудка. 7 И.Д. Чернобаева, РФ. Калинка, А;Р. Далмане // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1977 -№12. - С. 72-78. '
125. Шевченко В.В ." Клиническое значение белков, ассоциированных с беременностью, при лечении методом экстракорпорального оплодотворения: Автореф. дис. .канд. мед. наук. -М:, 1996. 27 с.
126. Юсин В.А. Влияние серотонина на дифференцировку клеток тимико- лимфатической системы / В .А. Юсин* Н.Г. Сахарова-// Здравохранение Туркменистана. 1990: - №9. - С.
127. Яманова М.В. Особенности регуляции циклических- изменений эндометрия у женщин* страдающих эндокринным бесплодием / М.В. Яманова, А.В. Светлаков, А.Б. Салмина и др.' // Проблемы репродукции. 2003. - №4. - С.64 -70.
128. Abuzeid М. The association of endometriosis and uterine septum / M. Abuzeid, K. Sakhel, M. Khedr et al. // Hum; Reprod. 2004. - Vol. 19; ,-Suppl. 1. - P. 207.
129. Ali A. In-vitro maturation of oocytes: biological aspects. / A.Ali, M.Benkhalifa, P.Miron //Reprod Biomed Online. 2006.- №13. - P. 437446.
130. Alper M. Is your IVF programme good? / M. Alper, P. Brinsden, R. Fischer et al. // Human Reproduction. 2002. - Vol. 17. - N1. - P.8-10.
131. Amant F. Endometrial cancer/ F.Amant, P.Moerman, P.Neven, et.al. // Lancet.- 2005. № 366. - P. 491—505.
132. Archer DF. Neoplasia of the female reproductive tract: effects of hormone therapy // Endocrine. 2004. - № 24. - P. 259—263.
133. Arnaud J. Cooper. // Internat.J.Vit.Nutr.Res.,1993, Vol.63.№4, P.308-311.
134. Atkinson S. Adrenal glands alter the concentration of oestradiol-17 beta and its receptor in the uterus of ovariectomized ewes / S.Atkinson, N.R.Adams // J Endocrinol.- 1988. -№ 118. P. 375—380.
135. Asherson R.A. The catastrophic antiphospholipid syndrome: A review of pathogenesis clinical features and treatment / R.A .Asherson, R. Cervera // J. AMI. 2002. - Vol.2 - P. 268 - 273.
136. Barnes A.E. Association of a prolactin-secreting pituitary microadenoma and endometrial carcinoma. / A.E.Barnes, J.D.Crissman, R.S.Azoury, D.P.Schneider // Obst. Gynecol. 1981. - № 58. - P. 391— 394.
137. Beato M. Transcriptional control by nuclear receptors / M. Beato // FASEB J. 1991. - Vol.5. - N7. - P.2044-2051.
138. Bell S.C. Immunochtmical detection and levels of pregnancy-as endometrial a2-globulin (a2-PEG) in seminal plasma of men / S.C. Bell, S.R. Patel // J Reprod Fertil. 1985. - Vol. 1. - P. 31 - 42.
139. Bigsby RM. Control of growth and differentiation of theendometrium: the role of tissue interactions // Ann N Y Acad Sci. 2002. -№955.-P. 110—117.
140. Bolton A.E. Identification of placental protein 14 as an immunosuppressive factor in human reproduction / A.E. Bolton, A.G. Pockley, K. J. Clough et al. // Lancet. 1987. - N 8533. - P.593-595.
141. Bonhoff A. Morphometric characteristics of endometrial biopsies after different types of ovarian stimulation for infertility treatment / A. Bonhoff, O. Naether, E .Johannisson et al. // Fertil. Steril. 1993. - Vol.59. - N3. -P.560-566.
142. Booth G. Preventive health care, 2000 update: screening and management of hyperhomocysteinemia for the prevention of coronary artery disease events / G. Booth, E. Wang // CMAJ. 2000. - Vol. 163. - N. - P. 21-29.
143. Beran M. Assisted procreation and sexual difficulties preventing conception / M. Beran, M. Emery, J. Darwiche et al. // Human Reproduction. 2004. - Vol. 19. Suppl. 1. - P. 31.
144. Born F. // Steroids. 1986. -Vol. 28, №5/- P.669-698.
145. Berger M. An idiopatic infertility with oocytes metaphase 1 maturation block / M. Berger, R.Lombroso, M. Goumbault et al. // Human Reproduction. 2001. - Vol.16. - N10. - P.2136-2138.
146. Bression D. Evidence for a specific estradiol binding site on rat pituitary membranes / D. Bression, M. Michard, M. Le Dafniet et al. // Endocrinology. 1986.-Vol. 119.-N3. - P. 1048-1051.
147. Bromer J.G. Pretreatments before the induction of ovulation in assisted reproduction technologies: evidence-based medicine in 2007. /
148. J.G.Bromer, M.B.Cetinkaya, A.Arici // Ann N Y Acad Sci 2008. - № 1127. - P. 31—40.
149. Brooks W.A. Zinc for severe pneumonia in very young children: double-blind placebo-controlled trial / W.A. Brooks, M. Yunus, M. Santosham et al. //Lancet. 2004. - Vol. 363. -N 9422. - P. 1683.
150. Carlberg M. Elevated expression of tumor necrosis factor-alpha in cultured granulosa cells from women with endometriosis / M. Carlberg, J. Nejaty, B. Froysa et al. // Hum. Reprod. 2000. - Vol.15. - N 6. - P. 12501255.
151. Carp H.J.A. Anti-phospholipid antibodies and infertility Clinic Rev / H.J.A.Carp, Y.Shoenfeld // Allerg Immunol. 2007. - № 32. -P. 159—161.
152. Carpenter K.D. Potential biological functions emerging from the different estrogen receptors/ K.D.Carpenter, K.S.Korach //Ann NY Acad Sci. 2006.-№ 1092.-P. 361—373.
153. Chen L. Endometrial cancer: recent developments in evaluation and treatment / L. Chen, K. Gonigle, J. Berek // Oncology (Huntingt). 1999; Vol.13.-P. 1665-1682.
154. Cho D.J. Endometriosis may adversely affects endometrial differentiation in human: evidences from study of biochemical markers / D.J. Cho, S.K. Kim, D.W. Park et al. // XIV European Congress of Gynecologists and Obstetricians, Granada, -1999. P.48.
155. Clare J.H. Heterogeneity of estrogen binding sites: relationship to estrogen receptors and estrogen responses / J.H. Clark, B. Markaverich, S. Upchurch et al. // Recent Progr. Horm. Res. 1980. - Vol.36. - P.89-134.
156. Clare J.H. Nuclear binding and retention of the receptor estrogen complex: relation to the agonistic and antagonistic properties of estriol / J.H. Clare, Z. Paszko, E.J. Jr. Peck // Endocrinology. 1977. -Vol.100. - N1. -P.91-96.
157. Couse JF Estrogen receptor null mice: what have we learned and where will they lead us? / JF.Couse, KS.Korach //Endocr Rev. 1999. -№ 20.-P. 358—417.
158. Cross S.A.M. A Stindi of the methods available for the cytochem: cal localization of histamine by fluorescence induced with o-phthalaldehyde or acetaldehude / S.A.M, Cross, S.W.B.Ewen, E.W.D. Rost // J.Histochem. -1971.-Vol. 6. P.471-476.
159. Davies S. Gene regulation profiles by progesterone and dexamethasone in human endometrial cancer Ishikawa H cells./ S.Davies, D.Dai, G.Pickett et al. // Gynecol Oncol. 2006. - № 101. - P.62—70.
160. Dahlstrom A. Site of action of reser-pine. / A.Dahlstrom, K. Fuxe, N. Hillarp // Acta Pharmacol. Et. Toxicol. 1965. - Vol. - P.277-292.
161. Dalton C.F. Endometrial protein PP 14 and Ca 125 in recurrent miscarriage patients correlation with pregnancy outcome / C.F. Dalton, S.M. Laird, S.E. Estadale et al. // Hum Reprod. 1998. - Vol. 13. - N11. -P.3197 - 3202.
162. Deligdisch L. Hormonal pathology of the endometrium //Mod Pathol. 2000. - № 13. - P. 285—294.
163. Delvigne A. Rosenberg S. Epidemiology and prevention of ovarian hyperstimulation syndrome (OHSS): a review / A. Delvigne // Human Reproduction Update. 2002. - Vol.8. -N6. - P.559-577.
164. Dexeus S. Hyperprolactinemia: an inductor of neoplastic changes in endometrium? A report of two cases / S.Dexeus, P.N.Barri //Gynecol Endocrinol. 1998. - № 12. - P.273—275.
165. Di Simone N. Pregnancies complicated with antiphospholipid syndrome: the pathogenic mechanism of antiphospholipid antibodies: a review of the literature/ N.Di Simone, M.P.Luigi, D.Marco et al. // Ann N YAcadSci. 2007.-№ 1108.-P. 505—514. •
166. Dutta B. Cloning, expression, purification, and immunocharacterization of placental protein 14 / B. Dutta, D. Mukhopadhyay, N. Roy et al. // Protein Expr. Purif. 1998. -Vol.14. -N 3. - P.327-334.
167. Egbase P.E. Antiphospholipid antibodies in infertile couples with two consecutive miscarriages after in-vitro fertilization and embryo transfer / P.E. Egbase, M. Sharhan et al. // Hum Reprod. 1999. -Vol. 14. - N6.- P. 1483 -1486.
168. Emons G. Hormonal interactions in endometrial cancer / G.Emons, G.Fleckenstein, B.Hinney et al. // Endocrine Relat'Cancer. 2000. - № 7. - P.227—242.
169. Falsetti L. Profiles and endocrine correlations in endometrial carcinoma. / L.Falsetti, U.Omodei, D.Dordoni et al. //Eur J Gynaecol Oncol. 1983. - № 4. - P. 30—34.
170. Farhi J. Effects of uterine leiomyomata on the results of in vitro fertilization treatment / J. Farhi // Hum. Reprod. 1995. - Vol.10. - N 10. - P. 2576-2578.
171. Fatemi H.M. An update of luteal phase support in stimulated IVF cycles / H.M.Fatemi, B.Popovic-Todorovic, E.Papanikolaou et al. // Hum Reprod Update. 2007. - № 13. P.581—590.
172. Fedele L. Superovulation with human menopausal gonadotrophines in the treatment of infertility associated'with minimal or mild endometriosis: a controlled randomized study / L. Fedele, Bianchi S., Machini et al. // Fertil.
173. Steril. 1992. - N.58. - P.28-31.
174. Fleming H., Gupride E. Available estradiol receptors in nuclei from human endometrium / H. Fleming, E. Gurpide // J. Steroid Biochem. -1980.-Vol. 13.-N1.-P. 3-11.
175. Fujimoto J. Expressions of E-cadherin and alpha- and beta-catenin mRNAs in uterine endometrial cancers / J.Fujimoto, S.Ichigo, M.Hori et al. // Eur J Gynaecol Oncol. 1998. - № 19. P.78—81.
176. Fujishita A. Laparoscopic salpingotomy for tubal pregnancy: comparison of linear salpingotomy with and without suturing / A. Fujishita, H.Masuzaki, K. Khan et al. // Hum. Reprod. 2004. - Vol. 19. - N5. - P. 1195-1200.
177. Garrido N. Follicular hormonal environment and embrio quality in women with endometriosis / N. Garrido, J. Navarro, J. Remohi et al. // Hum. Reprod. 2000. - Vol.6. - N1.- P. 67-74.
178. Garrido N. The endometrium versus embrionic quality in endometriosis related infertility / N. Garrido, J. Navarro, J. Garcia-Velasco et al. // Hum. Reprod. Update. - 2001. - Vol.8. - N1. - P. 95-103.
179. Genz T. Endocrine regulation of the endometrium throughout the menstrual cycle (author's transi) / T. Genz , J. Eiletz , G. Kreuzer et al. // Geburtshilfe Frauenheilkd. 1980. - Bd 40. - N11. - S. 990-999.
180. Giudice L.C. Potential biochemical markers of uterine receptivity / L.C. Giudice // Hum. Reprod. 1999. -Vol.14. - N2.- P.3-16.
181. Goldberg J.M., Falcone T., Attaran M. In vitro fertilization update / J.M.Goldberg, T.Falcone, M.Attaran // Cleve Clin J Med. 2007. - № 74. -P. 329—338.
182. Gorski J. Hormone receptors: studies on the interaction of estrogen with the uterus / J. Gorski, D. Toft, G. Shyamala et al. // Recent Prog. Horm. Res. 1968. - Vol.24. - P.45-80.
183. Granot I. Is hydrosalpinx fluid cytotoxic /1. Granot, N. Dekel, I. Segal et al. // Hum. Reprod. 1998. - Vol. 13. - N6. - P. 1620-1624.
184. Gregory L. Ovarian markers of implantation, potential in assisted reproduction / L. Gregory // Hum. Reprod. 1998. -Vol.13. - N4. -P.117-132.
185. Gunin A. Realization of estradiol effects in the uterus of ovariec-tomized rats under acute stress // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod Biol. — 1995.-Vol. 60.-P. 69-74.
186. Gunin A. The role of prolactin in realization of estradiol action in the uterus of ovariectomized rats // Eur J Obst Gynecol Reprod Biol. 1996. -№64. -P. 119—127.
187. Gunin A. Influence of growth hormone on the uterine response to oestradiol in rats // J. Reprod. Fertil. 1997. - Vol. 110. - P. 299-306.
188. Gunin A.G. Effect of heparin on oestradiol-induced cell growth and proliferation in the uterus of ovariectomized rats // J. Endocrinol. 1997 — Vol. 154.-P. 441-448.
189. Gunin A. Effect of long-term glucocorticoid treatment on; oestradiol-induced proliferation in the uterus of ovariectomized rats // J Endocrinol. -1998. -Vol. 157. P.481--488.
190. Gunin A.G. Role of mast cells in oestradiol effects in the uterus of ovariectomized rats / A.G:Gunin, A.A.Sharov // J; Reprod. Fertil. — 1998. -Vol. 113.-P. 61-68.
191. Gunin, A.G; Estrogen changes mitosis orientation in the uterine epithelia // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod; Biol. 2001. - Vol. 97, N 1. -P. 85-89.
192. Gunin A.G. Effect of prolactin and dopaminergic drugs on uterine; response to chronic estrogen exposure / A.G.Gunin, V.U.Emelianov, A.S.Tolmachev et al.// J. Endocrinol. 2002. - Vol. 172: -P. 61-69.
193. Gunin A.G. Uterine response to estradiol under action of chorionic, gonadotropin in mice:/ A.G.Gunin, V.U.Emelianov, I.U.Mironkin et ah. // Int. J. Gynecol. Cancer. 2003. - Vol. 13, N4. - P. 485-496.
194. A.G.Gunin, I.N.Kapitova, N.V.Suslonova // J. Endocrinol. 2005. - Vol. 185, N3.-P. 539-549.
195. Hernandez D.E. Effect of administration of dopaminergic agonists on the uterine responsiveness to oestrogen in maturing rats / D.E.Hernandez, E.O. Alvarez // J Endocrinol. 1980. - № 86. - P.383—386.
196. Homburg R. Polycystic ovary syndrome. / R. Homburg // 2001. 214 P
197. Horn L.C. Hormone replacement therapy (HRT) and endometrial5 morphology under consideration of the different molecular pathways in endometrial carcinogenesis / LC Horn, M.Dietel, J.Einenkel // Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2005. - 122. - P. 4—12
198. Hadcock J.R. Regulation of receptor expression by agonists: transcriptional and post-transcriptional control / J.R. Hadcock, C.C. Malbon // Trends Neurosci. 1991. -Vol.14. - N6. - P.242-247.
199. Ho C.K. Regulation of 1 lbeta-hydroxysteroid dehydrogenase isoforms and glucocorticoid receptor gene expression in the rat uterus / C.K.Ho, M.Tetsuka, S.G.Hillier // J Endocrinol. 1999. - Vol.163. - P. 425—431.
200. Hudock J. A. / J. A. Hudoc, C.A. Hanai, R.Christen et al. // Diagn. Cytopathol. 1996. - Vol.15. -Nl. -P.78-83.
201. Imai A. Prolactin binds to human endometrial fibroblasts and inhibits mitogenicity of an endometrial carcinoma extract / A.Imai, T.Furui, T.Ohno et al. // Proc Soc Exp Biol Med. 1993. - Vol. 203. - P. 117—122.
202. Inage Z. Supressor T-lymphocyte dysfunction in MCNS: Role of the H2 histamine receptor- bearing supressor N-lymphocytes / Z. Inage, N.Wade, M. Iname et al. // Clin. Nephrol. 1990. - Vol. 333. - N1. - P. 20-24.
203. Ing N.H. Estradiol up-regulates estrogen receptor-alpha messenger ribonucleic acid in sheep endometrium by increasing its stability / N.H.Ing, T.L.Ott //Biol Reprod. 1999. - Vol. 60. - P. 134—149.
204. Inoue T. Progesterone stimulates the induction of human endometrial CD56+ lymphocytes in an in vitro culture system / T. Inoue, H. Kanzaki, K. Imai et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1996. - Vol. 81. - N4. - 15021507.
205. Issar M. Differences in the glucocorticoid to progesterone receptor selectivity of inhaled glucocorticoids / M.Issar, S.Sahasranaman, P. Buchwald et al. // Eur Respir J. 2006. - Vol.27. -P.511—516.
206. Jungblut P.W. Subcellular distribution, properties and interrelationship of oestrogen receptors in endometrium and other target tissues / P.W. Jungblut, N. Hekin, H.H. Mayer et al. // J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1983. - Vol.21. - N8. - P.473- 480.
207. Julkunen M. Human fallopian tube contains placental protein 14 / M. Julkunen, T. Wahlstrom, M. Seppala // Amer. J. Obstet.Gynecol. 1986. -Vol.154. - N5. - P.1076-1079.
208. Kanki S. Cyclic changes in steroid hormone concentration and steroid hormone receptor in the human endometrium / S. Kanki // Nippon Sanka Fujinka Gakkai Zasshi. 1982. - Vol.34. -N12. - P.2177-2184.
209. Kauli R. Delayed puberty and hypoplastic uterus associated with hyperprolactinemia: successful treatment with bromocriptine / R.Kauli, A.Schoenfeld, Y.Ovadia, et al. // Horm Res. 1985. - Vol.22. - P. 68— 73.
210. Kauma S.W. Cytokines in implantation / Kauma S.W. // J. Reprod. Fertil. Suppl. 2000. - Vol.55. - P.31-42.
211. Kelly M.A. Pituitary lactotroph hyperplasia and chronic hyperprolactinemia in dopamine D2 receptor-deficient mice / M.A.Kelly, M.Rubinstein, S.L.Asa et al. //Neuron 1997; 19: 103—113.
212. Kiss R. Effect of prolactin and estradiol on cell proliferation in the uterus and the MXT mouse mammary neoplasm / R.Kiss, Y.de Launoit,
213. M.L'Hermite Baleriaux et al. // J Natl Cancer Inst. 1987. - Vol.78. - P. 993—998.
214. Kistner R.W. Estrogens and endometrial carcinoma / R.W. Kistner // Obstet. Gynaec. 1976. - Vol. 48. - P.479-482.
215. Klentzeris L.D. The role of endometrium in implantation / L.D. Klentzeris //Hum. Reprod. 1997. - Vol.12. - Nil Suppl 1. - P. 170-175.
216. Kimura J. Growth promotion of human endometrial adenocarcinoma cell line HHUA by prolactin / J.Kimura, Y.Kato, T.Hirose et al. // Nippon SankaFujinka Gakkai Zassh. 1986. - Vol.38 . - P. 1779—1780.
217. King W. J. Monoclonal antibodies localize oestrogen receptor in the nuclei of target cells / W. J. King, G.L. Greene // Nature. -1984. Vol.307. -N5953. -P.745-747.
218. Klevay L.M. Lack of recommended dietary allowance for copper may be hazardous to your health / L.M. Klevay // J. Am. Coll. Nutr. 1998. - N8. -P.322 - 326.
219. Koninckx P.R. Endometriotic disease: the role of peritoneal fluid / P.R. Koninckx, S.H. Kennedy, D.H. Barlow // Hum. Reprod. Update. 1998. -Vol.4. -N5. -P.741-751.
220. Kopin I.J. Storage and metabolism of catecholamines:therole of monoamine oxidase / I.J. Kopin // Pharmacol. Revs. 1964. - Vol.16. -P. 91.
221. Krishnamoorthy M.S. In.L'histamine cerebrale: essais de mise en evidence de voies histaminergigues cerebralesches le rat / M.S. Krishnamoorthy // Paris 1973. - P.95.
222. Kuch B. Association between Homocysteine and coagulation factors -a cross-sectional study in two populations of Central Europe / B. Kuch, M. Bobak, M. Fobker et al. // Atherosclerosis 2001. Vol.103. -N4. - P. 265273.
223. Kurl R.N. Progesterone receptors in human endometrium / R.N. Kurl, N.U. Borthwick // Eur. J. Obstet. Gynaec. 1982. - Vol. 13. - N5. - P.293-301.
224. Kutteh W.H. Association of anticardiolipin antibodies and pregnancy loss in women with systemic lupus erythematosus / W.H. Kutteh, E.C. Lyda, S.M. Abraham, M.C. Wacholtz // Fértil Steril. 1993. - Vol.60. - N3. -P. 449 - 455.
225. Lambalk C.B. Role of age and ovary status in ovulation induction / C.B. Lambalk, C. Koning, M. Meer et al. // Ovulation induction. The proceedings of the 2nd world conference on ovulation induction. 1998. -P.29-36.
226. Lecce G. Presence of estrogen receptorb in the human endometrium through the cycle: expression in glandular, stromal, and vascular cells / G. Lecce, G. Meduri, M. Ancelin et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2001. -Vol.86.-N3.-P.1379-1386.
227. Lee R. Immunoglobulin A anti-beta glycoprotein antibodies in women who experience unexplained recurrent spontaneous abortion and fetal death / R Lee et al. // Am. J. Obstetr. Gynecol. 2001. 185. 3.
228. Lessey B.A. The role of the endometrium during embryo implantation / B.A. Lessey // Hum. Reprod. 2000. - Vol. 15. - N 6. - P.39-50.
229. Levy C. Unoccupied nuclear oestradiol-receptor sites in normal human endometrium / C. Levy, R. Mortel, B. Eychenne et al. // Biochem. J.- 1980.-Vol. 185.- N.3.-P. 733-738.
230. Lim A.S. Age-related decline in fertility: a link to degenerative oocytes? / A.S. Lim, M.F. Tsakok // Fértil. Steril. 1997. - Vol.68. - P.265-271.
231. Lipsett M.B. Hormones, medications, and cancer // Cancer. 1983. -Vol.51.-P.2426—2429.
232. Lucas W.E. A study of endocrine and metabolic variables in postmenopausal women with endometrial carcinoma / W.E.Lucas, S.S.Yen //Am J Obstet Gynecol. 1979.- Vol.134.-P.180—186.
233. Martin J.D. The effect of estrogen receptor status on survival in patients with endometrial cancer / J.D.Martin, R.Hahnel, A.J.McCartney, et al. // Am J Obstet Gynecol: 1983. - Vol.147. - P.322.
234. Maestroni G.I.M Sympathetic regulation of hemopoisis. Direct noradrenrgic modulation of myelocyte and lymphocyte progenitor cells in mouse bone marrow / G.I.M. Maestroni, A. Conti, E. Pedrinic // Acta Med. Rom. 1991 .-Vol.29. - N3. - P.295 - 310.
235. Majewska M.D. Binding of pregnenolone sulfate to rat brain membranes suggests multiple sites of steroid action at the GABAa receptor / M.D. Majewska, S. Demirgoren, E.D. London // Eur. J. Pharmacol. 1990*. -Vol. 189.- N4-5. - P.307-315.
236. Malmfore T. Studies an adrenergik nerves / T. Malmfore // Acta Physiol. Scand. 1965. - Vol.64. - P.248.1-93.
237. Maquire N.C. Detection of Chlamydia trachomatis in cervical smears from pregnant population / N.C. Maquire, A.G. Jordan, H. Ehya // Arch. Pathol. Lab. Med. 1990. - Vol.114. -N2. - P.204-207.
238. Mandler R.N. Progesterone but not estrogen depolarizes natural killer cells / R.N. Mandler, L.C. Seamer, M.D. Domalewski et al. // Nat. Immun. -1993.-Vol.12.-N3.-P. 128-135.
239. Marchesoni D. Hormonal profile following total abdominal hysterectomy and bilateral salpingo-oophorectomy in post-menopausalendometrial carcinoma / D.Marchesoni, M.Gangemi, T.Maggino et al. // Clin Exp Obstet Gynecol. 1982. - Vol.9. - P.238—242.
240. Martin L. Hypertrophy and hyperplasia in the mouse uterus after oestrogen treatment: an autoradiographic study / L.Martin, C.A.Finn, G.Trinder//J Endocrinol. 1973.- Vol.56.-P.133—144.
241. Mericskay M. Wnt5a is required for proper epithelial-mesenchymal interactions in the uterus / M.Mericskay, J.Kitajewski, D.Sassoon // Development. 2004.- Vol.131.-P.2061—2072.
242. Miller R.E. A receptor for the lipocalin placental protein 14 on human monocytes / R.E. Miller, J.D. Fayen, S. Chakraborty et al. // FEBS Lett. -1998. Vol.436. - N3. - P.455-460.
243. Meyer W.R. Hydrosalpinges adversely affect markers off endometrial receptivity / W.R. Meyer, A.J. Castelbaum, S. Somkuti et al. // Hum. Reprod. 1997. - Vol. 12. - N 7. - . 1393-1398.
244. McDonnell D.P. Analysis of the molecular pharmacology of estrogen receptor agonists and antagonists provides insights into the mechanism of action of estrogen in bone / D.P. McDonnell, J.D. Norris // Osteoporos. Int.- 1997.-Vol.7 Suppl. 1. P.29-34.
245. Murakami T. Endometrial steroid receptor during normal menstrual cycle and physiopathology of nidation / T. Murakami // Nippon Sanka Fujinka Gakkai Zasshi. 1984.-Vol. 36. -Nl.-P.85-93.
246. Murangi M. Puwiazania czynnosc ciowe miedzy a kladem neurohormohalnym a immunologic Zhym / M. Murangi // Neuropatol.Pol. -1985.-Vol. 23. N1. - P.1-21.
247. Myers E.R. Effectiveness of assisted reproductive technology (ART) / E.R.Myers, D.C.McCrory, A.A.Mills et al. // Evid Rep Technol Assess.- 2008. Vol. 167. - P. 1—195.
248. Nakajiama S.T. Clinical evaluation of luteal function / S.T. Nakajiama, M.H. Molloy, R.H. Oi et al. // Obst. Gynecol. 1994. -Vol. 84. -N2.-P. 219-221.
249. Negami A.I. Effects of prolactin on cultured human endometrial cells / A.I.Negami, T.Tominaga // Horm Re. 1991. - Vol.35. Suppl 1. - P. 50— 57.
250. Nephew K.P. Effect of estradiol on estrogen receptor expression in rat uterine cell types / K.P.Nephew, X.Long, E.Osborne et al. // Biol Reprod. 2000. - Vol.62: - P. 168—177.
251. Newmaan M.E. Bioch. Pharmacol.-1994.-V.48,№9.-P. 1677-1682.-UHTHpyeT no:http:// pamology.medic.donetsk.ua/Lectures/Blood.
252. Nikas G. Endometrial receptivity: changes in cell-surface morphology / G. Nikas.// Sem. Reprod. Med. 2000. - Vol.18. - N3. - P.229-235.
253. Nulsen J.C. A randomized and longitudinal study of human menopausal gonadotrophin with intrauterine insemination in the treatment of infertility / J.C. Nulsen, S. Walsh, S. Dumez // Obstet.Gynecol. 1993. -Vol.82. - P.780-786.
254. Nunobiki O. Significance of hormone receptor status and tumor vessels in normal, hyperplastic and neoplastic endometrium. / O.Nunobiki, E.Taniguchi, A.Ishii et al. // Pathol In. 2003. - Vol.53. - P. 846—852.
255. Nylund L. Placental protein 14 in human in-vitro fertilization early pregnancies / L. Nylund, O. Gustafson, B. Lindblom et al. // Hum. Reprod. -1992. Vol. 7. - N 1. - P. 128-130.
256. Oehler M.K. Steroids and the endometrium / M.K. Oehler, M.C. Rees, R. Bicknell // Curr. Med. Chem. 2000. - Vol.7. - N5. - P.543-560.
257. Oehninger S. Factor affecting fertilization / S. Oehninger, C.C. Coddinton, G.D. Hodgen et al. // Fertil.Steril. 1995. - Vol.63. - P.377-383.
258. Ohno Y. Studies on the interaction of prolactin and estrogen in rabbit ovary and uterus // Nippon Sanka Fujinka Gakkai Zasshi. 1982. - Vol. 34. - P. 252—260.
259. Perrier d'Hauterive S. Dialogue between blastocyst hCG and endometrial LH/hCG receptor: which role in implantation? / S.Perrier d'Hauterive, S.Berndt et al. // Gynecol Obstet Invest. 2007. - Vol.64. -P. 156—160.
260. Pietras R.J. Specific binding sites for oestrogen at the outer surfaces of isolated endometrial cells / R.J. Pietras, C.M. Szego // Nature. -1977. Vol. 265.-N5589.-P. 69-72.
261. Pierro E. Stromal-epithelial interactions modulate estrogen responsiveness in normal human endometrium / E. Pierro, F. Minici, O. Alesiani et al. //Biol. Reprod. -2001. -Vol.64. -N3. -P.831-838.
262. Prasad A.S. Zinlc supplemention and growth in sichel cell disease / A.S. Prasad, T.C. Zatrallak // Ann. Int. Med. 1984. - Vol. 100. - P. 367 - 371.
263. Prat J. Endometrial carcinoma: pathology and genetics / J.Prat, A.Gallardo, M.Cuatrecasas et al. // Pathology. 2007. - Vol. 39. - P.72— 87.
264. Press M.F. Localization of progesterone receptor with monoclonal antibodies to the human progestin receptor / M.F. Press, G.L. Greene // Endocrinology. 1988.-Vol. 122.-N3. - P.l 165-1175.
265. Rachmilewitz J. Placental protein 14 functions as a direct T-cell inhibitor / J. Rachmilewitz, G.J. Riely, M.L. Tykosinsky // Cell Immunol.-1999,- Vol.191. N1. - P.26-33.
266. Raynaud J.P. Receptors in breast cancer: an introduction / J.P. Raynaud // Progress in Cancer Research and Therapy. New York, 1977— P.9-11.
267. Remohi J. Endometrial thickness and serum oestradiol concentrations as predictors of outcome in oocyte donation / J. Remohi, G. Ardiles, J.A. Garcia-Velasco et al. // Hum. Reprod. 1997. -Vol.12. -N10. -P.2271-2276.
268. Rhen T. Dexamethasone blocks the rapid biological effects of 17beta-estradiol in the rat uterus without antagonizing its global genomic actions / T.Rhen, S.Grissom, C.Afshari et al. // FASEB . 2003. - Vol.17. -P.1849—1870.
269. Riittinen L. Time resolved immunofluorometric assay of placental protein 14 / L.Riittinen, U.H. Stenman, H. Alfthan et al. // Clin. Chim. Acta. 1989.-Vol.183.-P.l 15-124.
270. Ristic P.I. Endometrial adenocarcinoma associated with drug-induced hyperprolactinemia / P.I.Ristic, S.J.Ory, J.R.Lurain // Obstet Gynecol. -1986.- Vol.67.-P.86S—88S.
271. Romer T. Value of serum placental protein 14 determination in differential diagnosis of abnormal early pregnancy / T. Romer, W. Straube, M. Meisel et al. // Geburtshilfe Frauenheikd. 1995. - Vol.55. - N9. -P.490-492.
272. Rose J. Role of ovarian steroids in development of uterine binding sites for prolactin in the ferret / J.Rose, J.L.Huang, R.A.Mead // Biol Reprod. 1993. - Vol.48. P.1266—1273.
273. Rossin-Amar B. How to improve IVF results from a clinical point of view?// Gynecol Obstet Ferti. 2006. - Vol.34. - P.774—780.
274. Ryan A.J. Endometrial cancer / A.J.Ryan, B.Susil, T.W.Jobling et al. // Cell Tissue Res. 2005. - Vol.322. -P.53—61.
275. Scully R.E. Typing of Female Genital Tract Tumours / R.E.Scully,. T.A.Bonfiglio, R.J.Kurman et al.// International Histological Classification of Tumours, Geneva: WHO. 1994. -N. 2. - P; 13-18;
276. Sorbo J. Mast-cell histamine; is, angiogenic through receptors for histamine 1 and histamine 2 / J. Sorbo* A. Jacobsson; K. Norrby // Int. J. Exp. 1994.-Vol.75.-P.43-50.
277. Sozen I. Interactions of cytokines, grows factors, and the extracellular: matrix in the cellular biologi of uterine leiomyomata / I. Sozen, A. Arici* // Fertil. Steril. 2002. - Vol.3,JVb78. - P.l-12.
278. Singtripop T. Development of uterine adenomyosis after treatment with dopamine antagonists in. mice / T.Singtripop,: T.Mori, M.K.Park et al.//Life Sci. 1991.- Vol.49.-P.201—206.
279. Speroff L. Clinical Gynecological Endocrinology / L. Speroff, R.H. Glass et al. Baltimore, 1995.
280. Swasdio K. The association of Chlamydia trachomatis/gonococcal infection and tubal factor infertility / K. Swasdio, S. Rugpao, T. Tansathit et al. // J. Obstet. Gynecol. Res. 1996. - Vol.22. - N 4.- P.331-340.
281. Taga M. Cell adhesion and reproduction. An overview / M. Taga, H. Suginami // Horm. Res. 1998. -Vol.50. - Suppl'.2. - P.2-6.
282. Tesarik J. Nongenomic effects of 17b-estradiol on maturing human oocytes: relationship to oocyte developmental potential / J. Tesarik, C. Mendoza // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1995. -Vol.80. - N4. - P. 14381443.
283. Tolino A. The role of prolactin in endometrial lesions / A.Tolino, C.Di Serio, G.B.Caracciolo et al.// Minerva Ginecol. 1998. - Vol.43. -P.495—497.
284. Toro I, Roulich P., Vigah Sz.// J. Anat. Res. 1969.3.S. 329-341.
285. Tseng L. Regulation of progesterone receptor messenger ribonucleic acid by progestin in human endometrial stromal cells / L.Tseng, H.H. Zhu // Biol. Reprod.- 1997.-Vol. 57. N6. - P.1360-1366.
286. Underwood E.G. Trace elements in human and animal nutrition / E.G. Underwood. Y-rd Ed. N.Y.: // Acad Press, 1977. - P. 402.
287. Vedeckis W.V. Nuclear receptors, transcriptional regulation, and oncogenesis / W.V. Vedeckis // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1992. -Vol.199. - N1. - P.l-12Walsh B. W., Kuller L.H., Wild R.A. et al. // J.A.M.A.- 1998.
288. Walsh B. W., Kuller L.H., Wild R.A. et al. // J.A.M.A. 1998.
289. Wathes D.C. Regulation of oxytocin, oestradiol and progesterone receptor concentrations in different uterine regions by oestradiol, progesterone and oxytocin in ovariectomized ewes / D.C.Wathes,
290. G.E.Mann, J.H.Payne et al.// J Endocrinol. 1996. - Vol. 151. - P. 375— 393.
291. Welshons W.V. Nuclear localization of unoccupied oestrogen receptors / W.V. Welshons, M.E. Lieberman, J. Gorsky // Nature. 1984. -Vol.307. -N 5953. - P.747-749.
292. Willingham M.C. Endocytosis and membrane traffic in cultured cells / M.C. Willingham, I. Pastan // Recent Progr. Horm. Res. 1984. - Vol. 40. -P.569 -587.
293. Wilcox M.H. Combined cervical swab and urine specimens for PCR diagnosis of genital Chlamydia trachomatis infection / M.H. Wilcox, M.T. Reynolds // Sex. Transm. Infect. 2000. - Vol. 76. - N3. - P. 177-178.
294. Ylikorkala O. Pituitary gonadotrophins and prolactin in patients with endometrial cancer, fibroids or ovarian tumours / O.Ylikorkala, A.Kauppila, T.Rajala // Br J Obstet Gynaecol. 1979. - Vol.86. - P. 901—904.
295. Yoshioka Mitsuhiro, Saito Hideya. Рецепторы серотонина и функция моз// Tanpakushitsu kakusan kosoAProtein, Nucl. Acid and Enzyme.-1995.-V.4№6-P.700-708.
296. Zachariah N.Y. Stability of estrogen- and progesterone-receptor concentrations in human uterus tissue / N.Y. Zachariah, Z.H. Chakmakjian // Clin. Chem. 1983. -Vol. 29. -N6. - P. 1070-1072.
297. Zamorano P. Effect of 5-alpha-dihydrotestosterone and dexamethasone on estrogen receptors of the anterior pituitary and uterus / P.Zamorano, J.Steinsapir, V.B. Mahesh // Steroids. 1992. - Vol.57. -P. 18—26.
-
Самойлова, Алла Владимировна
-
доктора медицинских наук
-
Саранск, 2009
-
ВАК 03.00.25
- Влияние стереоизомерии женского организма на репродуктивную функцию при нормальной и сниженной фертильности
- Морфологические варианты комплекса ооцит-кумулус, зигот, эмбрионов человека и критерии прогноза успешности экстракорпорального оплодотворения
- Цитогенетические и биохимические аспекты мейоза и оплодотворения ооцитов коров in vitro
- Мейотические преобразования хромосом при культивировании ооцитов коров с клетками гранулезы
- Особенности физиологического статуса женщин и мужчин при экстракорпоральном оплодотворении
