Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфофункциональное состояние клеток отделяемого шейки матки и влагалища у больных с эктопией на фоне различных методов лечения

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональное состояние клеток отделяемого шейки матки и влагалища у больных с эктопией на фоне различных методов лечения"

На правах рукописи

ГАВРИЛЕНКО ЕЛЕНА ВИКТОРОВНА

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ КЛЕТОК ОТДЕЛЯЕМОГО ШЕЙКИ МАТКИ И ВЛАГАЛИЩА У БОЛЬНЫХ С ЭКТОПИЕЙ НА ФОНЕ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ ЛЕЧЕНИЯ

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

74325

Томск-2009

003474325

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и в Учреждении Российской академии наук НИИАГП СО РАМН

Научные руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Красноженов Евгений Павлович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Ильинских Николай Николаевич

кандидат медицинских наук Чечина Ольга Евгеньевна

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение

высшего профессионального образования «Кемеровская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится «_»_2009 г. в_часов на заседании диссертационного совета Д 208.096.03 при ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет Росздрава» (643050, г. Томск, ул. Московский тракт, 2).

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке ГОУ ВПО Сибирский государственный медицинский университет Росздрава.

Автореферат разослан «_» 2009

Ученый секретарь диссертационного совета

А.В. Герасимов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Известно, что кожа и слизистые оболочки формируют физиологический барьер, который препятствует проникновению патологических агентов внутрь организма. При этом общая площадь поверхности слизистых оболочек организма намного превосходит поверхность кожи. Наиболее важное значение в формировании барьера между клетками организма и внешней средой имеют слизистые оболочки желудочно-кишечного, респираторного и урогенитального трактов. Защитные механизмы слизистых оболочек включают в себя много факторов и являются продуктами совместной деятельности макроорганизма и нормальной микрофлоры (Воробьев А.А., Лыков Е.А., 1999). Сюда входят как неспецифические защитные факторы (рН, ре-докс-потенциал, вязкость, низкомолекулярные метаболиты микрофлоры, ли-зоцим), так и специфические (секреторный иммуноглобулин А, фагоциты). В целом, формируется колонизационная резистентность - совокупность защитных факторов организма и индигенной микрофлоры, предотвращающих колонизацию слизистых оболочек посторонними, в том числе патогенными микроорганизмами (Телешева Л.Ф. и соавт., 1998; Долгушина В.Ф. и соавт., 1991).

Шейка матки и влагалище относятся к органам, находящимися на границе внутренней среды женщины и неблагоприятных факторов внешней среды. Защиту слизистых оболочек репродуктивного тракта женщин обеспечивают лимфоидные структуры и макрофаги стромальных тканей шейки матки, их продукты - 1§А, лизоцим, а также нормальная микрофлора влагалища. Имеется предположение, что именно клеточное звено местного иммунитета слизистых оболочек участвует в реализации морфогенетической функции, обеспечивая передачу регенерационной информации камбиальным элементам покровного эпителиального пласта (ВгапсИгаед Р., е1 а1., 1999).

Представляется очевидным, что возникновение и развитие инфекционно-воспалительных заболеваний шейки матки и влагалища зависит от состояния местного иммунитета. Клеточные и гуморальные показатели колонизационной резистентности слизистых оболочек шейки и матки влагалища после проведенной противовоспалительной терапии могут служить критериями эффективности лечения.

Учитывая высокую частоту заболевания эктопией шейки матки и широкое использование для её лечения методов электрокоагуляции и криодеструк-ции (Костава М.Н. и соавт., 1999; Легков В.А. и соавт., 2004; Коломейцева А.Г. и соавт., 2003), разрабатываемая тема представляется актуальной и перспективной как в теоретическом так и в практическом аспектах.

Цель исследования: изучить морфологическую характеристику и функциональную активность эукариотических и прокариотических клеток отделяемого шейки матки и влагалища у больных с эктопией шейки матки в условиях лечения методами электрокоагуляции и криодеструкции. Задачи исследования:

1. Оценить содержание эпителиальных клеток в отделяемом влагалища и шейке матки и изучить их морфофункциональнаю характеристику у больных с эктопией шейки матки до и после лечения.

2. Изучить морфофункциональное состояние лейкоцитарных клеток отделяемого влагалища и шейки матки у больных с эктопией шейки матки до и после лечения.

3. Определить количественное содержание грибка Candida в отделяемом влагалища у женщин с эктопией шейки матки до и после лечения.

4. Изучить морфофункциональное состояние прокариотических клеток биопленки влагалища и шейки матки при эктопии до и после лечения.

5. Провести сравнительную оценку влияния электрокоагуляции и криодеструкции на состояние колонизационной резистентности слизистой оболочки репродуктивного тракта у больных эктопией.

Научная новизна и практическая значимость. Впервые исследован один из главных компонентов противоинфекционной защиты - колонизационная резистентность приэпителиального слоя репродуктивного тракта у больных эктопией шейки матки после лечения методами электрокоагуляции и криодеструкции. Показано, что электрокоагуляция и криодеструкция, проведенные больным эктопией способствуют восстановлению морфофункцио-нальных параметров эукариотических клеток, играющих важную роль в местной противоинфекционной защите. Комплексный подход к изучению проблемы позволил выявить уменьшение деструктивности эпителиоцитов слизистой влагалища и шейки матки, активацию функциональных свойств лейкоцитов, увеличение содержания лизоцима и slgA в отделяемом влагалища. Установлено, что биопленка влагалища больных эктопией после лечения характеризуется нормализацией состава прокариотических клеток, снижением степени микробной обсемененности, замещением грибов Candida и кокковой группы, несущей признаки патогенности и вирулентности, представителями индигенной микрофлоры.

Полученные данные позволяют утверждать, что используемые методы лечения способствуют биокорреции и иммуностимуляции колонизационной резистентности репродуктивного тракта, что является важным в профилактике и терапии у больных эктопией шейки матки инфекционных осложнений.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Для больных эктопией шейки матки характерны нарушения морфофунк-ционального состояния эукариотических и прокариотических клеток отделяемого шейки матки и влагалища. Изменения морфофункциональных свойств эукариотических клеток выражаются в повышении в исследуемом материале количества эпителиоцитов с высокой степенью деструкции и низком содержании в них гликогена, увеличении числа сегментоя-дерных нейтрофилов и угнетении их фагоцитарной активности. Указанные явления сопровождаются низкими значениями содержания макрофагов и лимфоцитов и их продуктов: лизоцима и секреторного иммуноглобулина А, а также увеличении высеваемости грибка Candida.

2. Изменения в составе прокариотических клеток выражаются в снижении высеваемости из содержимого влагалища лактобактерий и увеличении встречаемости кокковой флоры с признаками вирулентности. Данные явления сопровождаются повышением рН и уменьшением содержания молочной кислоты во влагалищной жидкости.

3. Электрокоагуляция и криодеструкция, проведенные больным с целью лечения эктопии шейки матки способствуют восстановлению морфофунк-ционального статуса клеток с длительностью эффекта до 40 суток после завершения процедур, что способствует восстановлению показателей местной противоинфекционной защиты.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на VIII конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2007), научно-практической конференции «Актуальные вопросы лучевой, функциональной и лабораторной диагностики» (Северск, 2007), Всероссийской научно-практической конференции «Девочка, девушка, женщина» (Томск, 2008).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 6 работ, из них - 2 в журнале, рекомендованном перечнем ВАК.

Объем н структура работы. Диссертация изложена на 116 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4-х глав, выводов и списка использованной литературы, включающего 170 источ!Шков, из которых 137 отечественных и 33 иностранных. Работа иллюстрирована 18 рисунками и 20 таблицами.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проводились на базе женской консультации Муниципального лечебно-профилактического учереждения Родильного дома № 4 и на кафедре микробиологии и вирусологии Сибирского государственного медицинского университета. Обследовано 45 женщин в возрасте 18-45 лет.

В группу больных включены 30 пациенток с морфологически верифицированным диагнозом: эктопия шейки матки, находившиеся на диспансерном учете в женской консультации Родильного дома № 4. У всех обследованных лиц были исключены инфекционные заболевания, обострение хронических воспалительных процессов, аллергические, наследственные и психические заболевания, а также злоупотребление алкоголем и наркотическая зависимость. В качестве контроля использовали группу из 15 практически здоровых пациенток с аналогичными характеристиками по возрасту.

Распределение обследованных лиц по группам наблюдения представлены в таблице 1.

Таблица 1

Распределение обследованных лиц по группам наблюдения

Группы наблюдения Количество человек

Здоровые женщины ( группа сравнения) 15

Больные женщины с эктопией шейки матки до проведения лечения 30

Больные женщины с эктопией шейки матки после электрокоагуляции на 21 сутки 18

Больные женщины с эктопией шейки матки после крио-деструкции на 21 сутки 12

Больные женщины с эктопией шейки матки после электрокоагуляции на 30 - 40 сутки 18

Больные женщины с эктопией шейки матки после крио-деструкции на 30 - 40 сутки 12

Материалом для исследования явилось отделяемое слизистых оболочек влагалища и шейки матки.

Определение кислотности отделяемого влагалища и шейки матки проводили с помощью рН-метра 673М (Россия).

Из отделяемого влагалища и шейки матки брали мазки стерильными ватными шариками, фиксировали и окрашивали по методу Романовского-Гимзе в течении 3-5 мин. Микроскопически вели учет клеточного состава.

Степень деструкции эпителиальных клеток оценивали с учетом морфологических критериев: структуры ядра и цитоплазмы.

Определение количества гликогена в эпителиальных клетках оценивали при окраске мазков реактивом Шиффа, полуколичественный метод, основанный на степени интенсивности специфической окраски.

Оценку фагоцитарной активности нейтрофильных лейкоцитов определяли количественно при совместной инкубации клеток влагалищной жидкости с микробной тест-культурой. После инкубации в термостате окрашивали по Ро-мановскому-Гимзе и определяли фагоцитарный показатель, фагоцитарное число и показатель завершенности фагоцитоза.

Функциональную активность фагоцитов оценивали с помощью стандартного НСТ-теста в спонтанном варианте.

Пероксидазную активность нейтрофилов определяли в мазках взятых с помощью стерильных ватных шариков со стенок влагалища и шейки матки, окрашивали реактивом Грэхема-Кнолля, полуколичественный метод, основанный на степени интенсивности специфической окраски.

Активность лизоцима в отделяемом влагалища и шейки матки оценивали с использованием бактериальной суспензии культуры микрококка. Степень лизиса микрококка определяли фотоколориметрически.

Содержание секреторного иммуноглобулина А во влагалищной жидкости определяли иммуноферментным методом.

Качественное и количественное исследование микрофлоры проводилось согласно методическим рекомендациям МЗ СССР (Приказ № 535, 1985). Для определения микрофлоры влагалища и шейки матки забор отделяемого производили сухим стерильным тампоном с помощью наборов стандартных питательных сред: кровяной, желточно-солевой агары, среды Эндо и Сабуро. Идентификацию микроорганизмов проводили по морфологическим, тинктори-альным и биохимическим свойствам согласно методическим рекомендациям. При изучении биологических свойств флоры определяли гемолитическую активность, плазмокоагулазную, лецитиназную. Оценку плазмокоагулазы проводили с плазмой кролика по общепринятой методике, лецитиназу изучали на желточно-солевом агаре, гемолитическую активность исследовали путем посева односуточной культуры на агар с 5% дефибринированной кровью.

Оценку полученных результатов проводили методами статистического описания и проверки статистических гипотез. При анализе имеющихся выборок данных использовали гипотезу нормальности распределения (критерий Колмогорова-Смирнова). Для нормального распределения выборок вычесляли средневыборочные характеристики: среднее арифметическое (X), среднее

s

квадратическое отклонение (5), ошибка среднего (ш). С целью попарного сравнению показателей в исследованных группах применяли критерий Манна-Уитни для независимых групп. Различие двух сравниваемых величин считали достоверными при уровне значимости р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Эпителию слизистой оболочки шейки матки и влагалища принадлежит важная роль в реализации ряда защитных механизмов. Интегральность эпителиальных клеток и поддержание плотных межклеточных соединений существенны для защиты от бактерильных и вирусных патогенов. Эпителиальные клетки слизистых оболочек половых путей продуцируют спектр антимикробных молекул: лизоцим - фермент, разрушающий пептидогликан клеточных стенок бактерий, и комплемент, способствующий фагоцитозу и разрушению микроорганизмов (Сухих Г.Т., 2006). Огромную роль играет высокая ферментативная активность, наличие в эпителии большого количества гликогена, высокая интенсивность обменных процессов и их способность к быстрой перестройке. В структуре слизистой оболочки заложены компоненты иммунной системы и ярко выражены регенеративные процессы (Зиновьев A.C., 1994). При этом в норме клетки плоского эпителия находятся в разных стадиях деструкции.

Полученные нами при исследовании результаты, показали, что в группе больных с эктопией шейки матки число эпителиальных клеток с 0,1 классами деструкции отличается более низким значением (р<0,05), чем у здоровых женщин (женщины с эктопией 0 класс - 86%, I класс - 3% и здоровые женщины - 90%, 5% - соответственно). При этом наблюдается усиление деструкции клеток плоского эпителия в отделяемом влагалища и шейки матки, которое проявляется в увеличении содержания клеток со II, III и IV классов деструкции (р<0,05) (рис. 1). Известно, что эпителиальная ткань обладает повышенной пролиферативной реакцией на повреждающие факторы. При хронизации процесса классические и наиболее яркие признаки воспаления, в частности развернутая картина экссудативного компонента, в определенной степени нивелируется, на первый план выступают изменения клеточного обновления и усиленное слизеобразование (Кононов A.B., 1993). Длительные воспалительные процессы на слизистых, имеющие хроническое течение, приводят к усилению синтеза и секреции эпителиоцитами влагалища и шейки матки различного рода ферментов. Эти ферменты помимо прямого цитостатического действия играют роль хемоаттрактантов. Они вызывают цитолиз не только микроорганизмов, но и клеток собственных тканей, в частности, эпителиальных. В условиях

хронического воспаления усиливаются процессы перекисного окисления ли-пидов в эпителии слизистой оболочки, а также наблюдается функциональная недостаточность антиокислительных систем организма, что способствует усилению деструктивных процессов на уровне эпителиального пласта (Кудрявцева С.Э., 2001).

К клеточным факторам защитной системы слизистой оболочки шейки маткн и влагалища относятся также гранулоциты. В подслизистом слое влагалища, шейки матки и матки имеются скопления плазматических клеток, лимфоцитов, тканевых макрофагов, нейтрофилов. Последние функционально полноценны, обладают высокой ФА, мощным лизосомным аппаратом, механизмом кислородзависимой цитотаксичности. Нейтрофилы выходят на поверхность слизистых, встречаются с представителями нормофлоры репродуктивного тракта женщин, при этом активируются и секретируют бактерицидные вещества, которые избирательно действуют на патогенные, условно-патогенные и непатогенные микроорганизмы (Долгушин И.И., 2005), обеспечивая распознавание и элиминацию микробных агентов за счет своей способности к адгезии, хемотаксису и фагоцитозу В результате исследования в группе здоровых женщин до лечения нами было обнаружено достоверное (р<0,05) увеличение количества лейкоцитов в отделяемом влагалища и шейки матки на фоне снижения их жизнеспособности и адгезивной способности по сравнению с контрольной группой женщин (рис. 2).

Увеличение количества лейкоцитов, мигрировавших в слизистую влагалища и шейку матки, является, вероятно, адаптивной реакцией системы неспецифической резистентности на нарушение целостности эпителиальных барьеров в условиях хронического воспаления (Бодяжина В.И., 1989). При нарушении покровного эпителия быстро развивается неспецифическая реакция, внедряются чужеродные элементы, например бактерии, вызывая каскад иммуных механизмов, в частности активацию альтернативного пути комплемента. Освобождение различных фрагментов - хемоаттрактантов, которыми являются продукты, выделяемые микроорганизмами и активированными клетками в очаге воспаления, ИЛ-8, продукты расщепления компонентов комплемента, С-реактивный белок, нейропептиды, фрагменты иммуноглобулинов, являющиеся хемотаксичными для нейтрофилов и макрофагов, привлекает их в место воспаления. Усиление миграции лейкоцитов на поверхности слизистой оболочки влагалища и шейки матки на фоне снижения их жизнеспособности следует расценивать как компенсаторную реакцию организма, которая количественно восполняет нарушение функциональной активности клеточного звена защитной системы (Пальцев М.А., 1995).

100% ■ 80% -60% -40% ■ 20% ■ 0% ■

лчч-

лчу

. ЛЧЧ~ АЧЧ« ЛЧЧ^ ЛЧЧ' • ' . чЧЧЧ • ' чЧЧЧ' • * чЧЧ\'

лчч-."

г-гт-

-ГТПта--

0 класс

1 класс

11 класс

III класс

IV класс

□ здоровые женщины шейка матки □ здоровые женщины влагалище

□ женщины до лечения шейка матки ЕЗ здоровые женщины влагалище

Рис. 1. Степень деструкции эпителиальных клеток у здоровых женщин и женщин с эктопией шейки матки до лечения

Примечание: достоверные отличия по сравнению с контролем (р<0,05).

Лейкоциты являются генераторами активных метаболитов кислорода. Ключевую роль в реализации эффекта этого играет НАДФН-оксидаза, катализирующая восстановление кислорода до супероксидного радикала, обладающего высокой токсичностью в отношении микробных антигенов и служащего индуктором образования перекиси водорода, гидроксильного радикала кислорода. Физиологическим активатором НАДФН-оксидазы являются фагоцитированные бактерии, опсонизированные частицы, иммунные комплексы, компоненты комплемента, а ингибиторами - любые стресс - индуцированные агенты (Маянский А.Н., 1989).

Результаты спонтанного НСТ - теста у больных женщин с эктопией шейки матки свидетельствует о существенном угнетении системы кислородза-висимой микробицвдности нейтрофилов, мигрировавших на поверхность слизистой репродуктивного тракта (рис.3).

Одним из гуморальных факторов местной противоинфекционной защиты слизистых является б^А, который синтезируется плазмоцитами слизистых оболочек и железистых органов.

Иммуноглобулин имеет в своем составе секреторный компонент, синтезируемый эпителиальными клетками. Секреторный ¡¿А обладает важным свойством, заключающимся в блокаде взаимодействия микробов, токсинов и аллергенов с эпителием слизистых оболочек, что препятствует их проникновению во внутреннюю среду организма (1апе\уау С.А., 1997).

45% 40% 35% 30% 25% 20% 15% 10% 5% 0%

О здоровые женщины □ женщины до лечения

Рис. 2. Показатели поглотительной и переваривающей способности сегмен-тоядерных нейтрофилов в отделяемом влагалища у здоровых женщин и женщин с эктопией шейки матки.

Примечание: -4"- достоверные отличия по сравнению с контролем (р<0,05).

Антиадгезивный механизм лежит в основе антибактериальных, антивирусных и антиаллергенных свойств иммуноглобулина, имеются четкие экспериментальные доказательства ведущей роли роли бТцА в защите слизистых от инфекции.По нашим данным мы получили достоверное (р<0,05) снижение этого показателя у больных женщин эктопией шейки матки (0,044 г/л). Длительный воспалительный процесс эпителиального покрова слизистой оболочки приводит к вторичному местному дефициту я^А. Этот дефицит возникает за счет нарушения дифференцировки клеток эпителия нарушается сборка и синтез его секреторного компонента, длительное антигенное раздражение служит пусковым моментом для подавления пролиферации клона продуцирующих клеток.

В нашем исследовании показано, что у больных женщин с эктопией снижается количество лизоцима в отделяемом шейки матки (3,21мкг/мл). Местная продукция этого фермента обусловлена как клетками эпителия, так и нейтро-фильными лейкоцитами. Лизоцим является ферментом разрушающим пепти-догликан клеточных стенок бактерий и помимо непосредственного бактерицидного действия он усиливает ФА нейтрофилов цервикального секрета. Можно предположить, что одной из причин уменьшения содержания лизоцима является снижение способности лейкоцитов и эпителиальных клеток синтезировать данный фактор резистентности в результате истощения их функциональных возможностей (Маянский А.Н., 1993).

—

—

---

40% 35% 30% 25% 20% 15% 10% 5% 0%

количество лейкоцитов НСТ-тсст псроксидазиая активность

|Ш здоровые женщины □ женщины до лечения

Рис. 3. Функциональное состояние сегментоядерных нейтрофилов в отделяемом влагалища у здоровых женщин и женщин с эктопией шейки матки. Примечание: достоверные отличия по сравнению с контролем (р<0,05).

В генезе эктопии шейки матки наряду с нарушением гормонального баланса, воспалением, травмой, существенное значение имеет нарушение местного иммунитета. Важную роль в антиинфекционной резистентности репродуктивного тракта играет нормальная микрофлора. Её защитный эффект обусловлен антагонистическим действием на патогенную флору, стимуляцией лимфоидного аппарата репродуктивного тракта, созданием оптимальной среды, продукцией витаминов и других биологически активных веществ, влияющих на общую и местную реактивность организма. Устойчивость нормальной микрофлоры обеспечивается скоординированным взаимодействием гормональной, нервной и иммунной систем. Нарушение функции одной из систем, как правило, приводит к дисбалансу всего комплекса, что проявляется замещением представителей нормальной микрофлоры условно-патогенными и/или патогенными микроорганизмами (Орлова B.C., 2007).

Известно, что в отделяемом влагалища и шейки матки к основной микрофлоре относят грамположительные лакто- и бифидобактерии, которые составляют 87% микробиоценоза. Сопутствующая микрофлора представлена в основном аэробными, факультативно-анаэробными и строгими анаэробными микроорганизмами. Они являются синэргистами основной влагалищной микрофлоры, их удельный вес в общем биоценозе влагалища не превышает 13%. Результаты, полученные нами при обследовании группы здоровых женщин, показали, что в процентном соотношении количество лактобактерий в содержимом влагалища составляет 78% от всех высеваемых в этом биотопе микро-

ч-

Y

т

организмов. Коринобактерии занимают 32%, на долю стрептококков приходится до 20%, грибов - 11,8% и только 8% занимают стафилококки, что находит отражение в литературе. При исследовании микрофлоры репродуктивного тракта у больных женщин с эктопией шейки матки еще до начала лечения нами был выявлен дисбаланс в составе биоценоза (рис.4). В процентом соотношении количество лактобактерий было снижено до 44%, но выше высевае-мость условно-патогенной флоры - стафилококки выделялось до 15%, грибов -до 16,5%, часто высевались коринобактерии и стрептококки. Высеваемые стафилококки имели признаки патогенности. Изменение количественного и качественного соотношения высеваемых микроорганизмов у больных женщин с эктопией шейки матки частично связанно со снижением функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов, изменением pH влагалищной жидкости и в следствие этого снижении количества молочной кислоты в отделяемом влагалища и шейки матки. Патологические изменения эпителия, дефицит slgA во влагалищном отделяемом создают благоприятные условия для колонизации грибами.

В ходе исследования у больных женщин с эктопией шейки матки после лечения на 21 сутки обнаружено достоверное (р<0,05) снижение числа эпителиальных клеток с 0 и IV классом деструкции (после криодеструкции 0 класс -78% и IV класс - 1%, после электрокоагуляции 0 - 80%, IV - 1% . При этом увеличилась степень деструкции I, II, III классов. Выявленные изменения свидетельствуют о восстановлении процессов регенерации слизистых оболочек репродуктивного тракта женщин с усилением деструктивных процессов (рис.5). Это можно объяснить тем, что лечение приводит к структурным изменениям слизистой оболочки, сущность которого сводиться к обновлению фаз клеточного деления и замещению неполноценных клеток нормальными эпите-лиоцитами. Кроме того, любой из представленных методов лечения повреждает стимуляцией регенеративных свойств тканей (Шехтер А.Б., 1991).

После лечения эктопии шейки матки на 21 сутки любым из представленных методов достоверно увеличивалось (р<0,05) общее количество лейкоцитов в отделяемом влагалища и шейки матки. Повышение количества лейкоцитов связано с воспалительной реакцией на хирургическое вмешательство, в результате которого наступила гибель клеток, в которых были длительно парализованы все процессы жизнедеятельности. Заживление раны (в частности, скорость очищения, воспалительная и пролиферативная фазы) зависят от иммунитета. В ранних фазах воспаления важнейшую роль в клеточном ансамбле играют тучные клетки, нейтрофилы и макрофаги которые взаимодействуют между собой. Эти клеточные взаимодействия оказывают регулирующее (индуктивное или ингибирующее) влияние на хемотаксис, размножение и функ-

цию клеток инфильтрата. Гистохимически и ультраструктурно во время взаимодействия клеток, в том числе контактного, отмечаются признаки активации как секреторной (экзоцитоз, клазматоз и др.), так и фагоцитарной функции клеток. При остром воспалении усиливается ФА клеток, увеличивается их поглотительная и переваривающая способности (Фредлин И.С., 1986).

^-----f

лактобактерии стрептококки стафилококки грибы Candida Дедерлейиа

В здоровые женщины □ женщины до лечения

Рис. 4. Количественный состав микроорганизмов отделяемого репродуктивного тракта у здоровых женщин и у женщин с эктопией шейки матки. Примечание: - достоверные отличия по сравнению с контролем (р<0,05).

Нами было установлено, что у больных женщин с эктопией шейки матки до проведения лечения выявляются изменения в поглотительной и переваривающей способности лейкоцитов. После проведения лечения представленными методами на 21 сутки выявлено значительное повышение этих показателей (рис. 6), а на 30-40 сутки после оперативного вмешательства показатели поглотительные и переваривающие способности лейкоцитов приближаются к показателям в группе здоровых женщин (р<0,05).

В ходе исследования у больных женщин с эктопией шейки матки после лечения на 21 сутки установлено повышение процента активных нейтрофилов в НСТ - тесте. Что указывает на высокую степень их ФА. По данным литературы состояние микробицидных систем нейтрофильных гранулоцитов зависит от интенсивности реакции организма на хирургическое вмешательство и отражает функциональные резервные возможности нейтрофилов (Маянский А.Н., 1989). Полученные нами результаты позволяют предположить, что ФА повышается в связи с возникающим иммуностимулирующим эффектом после повреждения ткани.

20 -18 16 -14 -12 -10 -8 -6 -4 -2 -0 -

90% ■ 80% ■ 70% 60% ■ 50% 40% 30% ■ 20% 10% 0% ■

I—"'-'Ш

'т

0 класс

I класс

II класс

III класс

IV класс

01 женщины до лечения

□ женщины после электрокоагуяции на 21 сут 12 женщины после криодеструкции на 21 сут.

Рис. 5. Степень деструкции эпителиальных клеток у женщин с эктопией шейки матки до лечения и после лечения на 21 сутки.

Примечание: -^-достоверные отличия параметров по сравнению с группой до лечения (р<0,05).

Исследование качественного состава микрофлоры из отделяемого влагалища и шейки матки после лечения на 21 сутки показало, что доминирующее положение в биоценозе занимают лактобактерни, они составляют 46% после электрокоагуляции, и 64% после криодеструкции от всех высеваемых микроорганизмов. Значительно возростает высеваемость грибов. После лечения на 30-40 сутки количество лактобактерий Дедерлейна продолжает увеличиваться и достигает показателей контрольной группы женщин. Высеваемость условно-патогенной флоры снижается. По все вероятности это связано с тем, что колонизируя эпителиоциты, лактобактериии препятствуют контаминации слизистых экзогенными микроорганизмами и ограничивают рост присутствующих во влагалище бактерий других видов. Образование молочной кислоты за счет расщепления гликогена лактобактериями позволяет поддерживать кислый рН, продукцию перекиси водорода, что подавляет рост других микроорганизмов.

В наших исследованиях мы обнаружили низкие значения содержания А у женщин с эктопией шейки матки на 21 сутки после лечения. Можно предположить, что при изменении эпителиального покрова слизистой оболочки шейки матки и дифференцировки клеток покровного эпителия нарушается сборка А и синтез его секреторного компонента и только к 30 - 40 суткам

этот показатель достигает уровня характерного для здоровых женщин (0,056г/л)(р<0,05).

В наших исследованиях мы обнаружили низкие значения уровня лизо-цима у женщин с эктопией шейки матки на 21 сутки после крио- и электрокоагуляции. Патогенный или условно-патогенный микроорганизм, взаимодействуя с основными иммунокомпетентными клетками (нейтрофилами и мононук-лерами), проходит антигенную идентификацию путем фагоцитоза. При этом из лизосом погибших иммунных клеток высвобождается значительное количество бактерицидных продуктов, таких как лизоцим, миелопероксидаза и лак-тоферрин. Являясь бактериолитическими ферментами, они разрушают поли-сахаридные стенки бактерий, вызывая их гибель. Возможно на 21 сутки после хирургического лечения процесс активации мембраны фагоцитов не наступает и полного высвобождения бактерицидных продуктов, одним из которых и является лизоцим не происходит. На 30-40 сутки лизоцим приближается к показателям здоровых женщин.

количество фагоцитарный фагоцитарное число показатель

лейкоцитов показатель завершенности

фагоцитоза

Ш женщины до лечения О женщины после электрокоагуляции на 21 сут Н женщины после криодеструкции на 21 сут _

Рис. 6. Показатели поглотительной и переваривающей способности сегмен-тоядерных нейтрофилов в отделяемом влагалища у женщин с эктопией шейки матки до и после лечения на 21 сутки.

Примечание: -ф-- достоверные отличия параметров по сравнению с группой до лечения (р<0,05).

В настоящее время практическое здравоохранение располагает различными методами лечения доброкачественных заболеваний шейки матки. Наиболее эффективными и распространенными являются способы, в основе которых лежит использование в качестве лечебного воздействия методов электро-, диатермогоагуляции и криодеструкции. Вместе с тем клиническая практика

свидетельствует об определенных отрицательных свойствах каждого из этих методов (Прилепская В.Н., 2006).

Нами проведен анализ влияния различных методов лечения на показатели местной противоинфекционной защиты. Выявлены достоверные различия в группах больных при изучении состояния эпителиальных клеток из отделяемого шейки матки, а также при исследовании общего количества лейкоцитов и их функциональной активности.

Известно, что в результате криогенного воздействия происходят сложные физические, химические и биологические процессы в клетках. Этот метод основан на кристаллизации внутриклеточной и межклеточной воды; под действием низких температур разрушаются клеточные структуры, нарушается микроциркуляция, что приводит к ишемии ткани и возникает крионекроз (Грищенко В.И., 1996). Одно из положительных свойств криовоздействия связано с возникающим иммуностимулирующим эффектом. При воздействии происходит девитализации патологически измененной ткани, которая остается в контакте с целостным организмом, следствием этого является специфический иммунный ответ (КоставаМ.Н., 1999). Механизм специфической иммунной стимуляции происходит за счет нарушения денатурации патологических белков и нуклеиновых кислот. Неизмененные нативные патологические белки выступают в качестве антигена, стимулируя в составе нежизнеспособной, уже чужеродной организму разрушенной холодом ткани. Как следствие этого, происходит выделение в кровеносное русло специфических антител, активизируется фагоцитоз, направленный против подвергнутых криодеструкцией патологических элементов (Качалина Т.С., 2006). Таким же действие на факторы местного иммунитета обладает и электрокоагуляции, но в основе этого лечения лежит использование высокочастотного тока, которое вызывает термическое расплавление тканей, при этом в электрическую цепь включается организм человека и генерация тепла происходит непосредственно в ткани шейки матки, вызывая необратимую коагуляцию белка.

Таким образом, у больных женщин с эктопией шейки матки после лечения повышается деструкция эпителиоцитов, изменяется функциональное состояние лейкоцитов отделяемого влагалища и шейки матки: повышается их содержание, снижается их жизнеспособность, кислородзависимая и кислород-независимая бактерицидность. Изменяется качественный'состав микрофлоры: снижается количество резидентных микроорганизмов и повышается содержание условно-патогенных микроорганизмов. На фоне применения криодеструк-ции и электрокоагуляции нормализуются характеристики эукариотических и прокариотических клеток - компонентов колонизационной резистентности слизистых оболочек шейки матки и влагалища у больных с эктопией. Более щадящим действие на слизистую шейки матки отмечено действие жидкого азота.

18

ВЫВОДЫ

1. Для женщин с эктопией шейки матки характерны нарушения целостности эпителиальных клеток слизистой оболочки шейки матки и влагалища, изменения морфофункционального состояния лейкоцитарных клеток и дисбаланс в составе резидентной микрофлоры.

2. Изменения морфофункциональных свойств эукариотических клеток выражаются в повышении в исследуемом материале количества эпителиоцитов с высокой степенью деструкции и низком содержании в них гликогена, увеличения числа сегментоадерных нейтрофилов и угнетение их фагоцитарной активности.

3. Угнетение фагоцитарной активности лейкоцитов наблюдается со стороны их поглотительной и переваривающей способности и обусловлено снижением как кислородзависимой так и кислороднезависимой бактерицидности.

4. Снижение функциональной способности лейкоцитарных клеток сопровождается низким значением содержания макрофагов и лимфоцитов и их секреторных компонентов: лизоцима и секреторного иммуноглобулина А, а также увеличением высеваемости гриба Candida.

5. Изменения в клеточном составе прокариотических клеток выражаются в снижении высеваемости из содержимого влагалища лактобактерий и увеличении встречаемости кокковой флоры и признаками вирулентности. Данные явление сопровождаются повышением рН и уменьшением содержания молочной кислоты во влагалищной жидкости.

6. Электрокоагуляция и криодеструкция, проведенные больным с эктопией шейки матки способствует восстановлению морфофункционального статуса клеток и нормализации микробного статуса с длительностью эффекта до 40 суток исследования. Отмечено равнозначное позитивное влияние электрокоагуляции и криодеструкции на изучаемые клеточные показатели местной противоинфекционной резистентности. Однако, более щадящее и выраженное нормализующее действие на слизистую оболочку шейки матки зарегистрировано при использовании жидкого азота.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Изменения микрофлоры влагалища у женщин при хирургическом лечении миомы матки / М.А. Домашенко, О.П. Бочкарева, Е.П. Красноженов, Е.В. Гавриленко // Сборник статей V Всероссийской университетской научно-практической конференции молодых ученых и студентов по медицине. -Тула,2006.-С. 85-86.

2. Бактериологические и биохимический изменения в составе влагалищной жидкости у больных с миомой матки на фоне хирургического лечения / О.П. Бочкарева, М.А. Домашенко, Е.В. Гавриленко, Е.В. Романова // Науки о человеке : материалы VIII Международного конгресса молодых ученых и специалистов. - Томск, 2007. - С. 144-145.

3. Морфофункциональное состояние приэпителиального слоя слизистых оболочек репродуктивного тракта у женщин с эктопией шейки матки / Е.В. Гавриленко, Е.В. Романова, О.П. Бочкарева, М.А. Домашенко // Науки о человеке : материалы VIII Международного конгресса молодых ученых и специалистов. - Томск, 2007. - С. 145-146.

4. Гавриленко, Е.В. Изменения бактериологических и биохимических показателей влагалищной жидкости у женщин при лечении эктопии шейки матки методом электрокоагуляции./ Е.В. Гавриленко, О.П. Бочкарева, Н.Г. Белова // Науки о человеке : материалы IX Международного конгресса молодых ученых и специалистов. — Томск, 2008. - С. 66.

5. Изменение бактериологических и биохимических показателей влагалищной жидкости при лечении эктопии шейки матки методом криодеструкции / Е.В. Гавриленко, Е.П. Красноженов, JI.A. Агаркова, Н.Г. Белова // Сибирский медицинский журнал. - 2008. - № 4. - С. 47-48.

6. Изменение местной противоинфекционной защиты репродуктивного тракта у женщин с эктопией шейки матки / Е.В. Гавриленко, Е.П. Красноженов, JI.A. Агаркова, Н.Г. Белова // Сибирский медицинский журнал. - 2008. -№4.-С. 48-50.

Условные сокращения

ЭЗ - эпителий влагалища

ЭШМ - эпителий шейки матки

СЦК - средний цитохимический коэффицент

НСТ - нитросиний тетразоль

sLg А - секреторный иммуноглобулин

КР - колонизационная резистентность

ЦК - цервикальный канал

ФА - фагоцитарная активность

Тираж 100 экз. Отпечатано в КЦ «Позитив» 634050 г. Томск, пр. Ленина 34а