Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфофункциональное исследование биогенных аминов структур кожи после введения препаратов гиалуроновой кислоты

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональное исследование биогенных аминов структур кожи после введения препаратов гиалуроновой кислоты"

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ЧУВАШСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им И Н Ульянова»

Экз №

На правах рукописи

ЖИРНОВА НИНА СТАНИСЛАВОВНА

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БИОГЕННЫХ АМИНОВ СТРУКТУР КОЖИ ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ

03 00 25 — гистология, цитология, эмбриология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

□0315Э4Т4

003159474

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ЧУВАШСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им И Н Ульянова»

Экз №

На правах рукописи

ЖИРНОВА НИНА СТАНИСЛАВОВНА

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ БИОГЕННЫХ АМИНОВ СТРУКТУР КОЖИ ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ

03 00 25 — гистология, цитология, эмбриология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Работа выполнена на кафедре гистологии, цитологии, эмбриологии Чувашского государственного университета им И Н Ульянова

Научный руководитель -

заслуженный работник высшей школы ЧР,

доктор биологических наук, профессор Л А Любовцева

Официальные оппоненты

заслуженный деятель науки РФ,

академик РАЕН, доктор медицинских наук,

профессор В Н Швалев

генеральный директор ФГУП «Институт пластической хирургии и косметологии»,

доктор медицинских наук, профессор В А Виссарионов

Ведущая организация Московский медико-стоматологический

университет, г Москва

Защита диссертации состоится 25 октября 2007 года в часов на заседании диссертационного совета Д 212 203 08 Российского университета дружбы народов по адресу 117198, Москва, ул Миклухо-Маклая, дом 8

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу. 117198, Москва, ул Миклухо-Маклая, дом 6

Автореферат разослан » сентября_2007г

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук У^Р О Б Саврова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

Начало нового тысячелетия характеризуется изменением менталитета люди стремятся выглядеть моложе своего биологического возраста, больше заботятся о внешности, стараясь замедлить процесс старения Соответственно, бурными темпами начинает развиваться косметология, предлагая все новые и новые методики для коррекции возрастных атро-фических изменений мягких тканей лица и тела Один из самых перспективных методов - контурная пластика с применением гелевых инъекционных материалов на основе стабилизированной гиалуроновой кислоты неживотного происхождения Инъекционные импланты представляют собой самодостаточную нехирургическую альтернативу в коррекции поверхностных дефектов кожного профиля, устранения морщин, изменения формы губ, заполнения атрофических рубцов Естественно, такого рода материалы должны быть безопасными и эффективными, следовательно, отвечать ряду требований биосовместимость, отсутствие антигенных свойств, отсутствие пирогенности, токсичности, не провоцировать воспалительные процессы, обладать достаточной длительностью действия Фирмы - производители, как правило, декларируют безопасность данных препаратов для пациентов, однако периодически появляются публикации о возникновении осложнений после введения гелей

В последние десятилетия получены убедительные данные о том, что кожа является активным нейроэндокринным органом Различные клетки эпидермиса и дермы при определенных условиях способны вырабатывать гормоны и нейропептиды, идентичные таковым в центральной нервной и эндокринной системах К настоящему времени при обычных гистохимических окрасках строение кожи изучено довольно подробно Однако многие аспекты строения, функции, взаимодействия между клеточными структурами кожи остаются неисследованными По данным литературы известно, что местную регуляторную функцию органов выполняют биогенные амины, являясь или менеджерами, или трансмиттерами Биогенные амины регулируют большое число процессов, происходящих в организме, поэтому нарушение их синтеза и секреции может сказаться на состоянии кожи лица и обменных процессов в ней, вызывая или преждевременное старение кожи, или его задержку

Однако, до настоящего времени не изучены механизмы регуляции синтеза и инактивации биогенных аминов после введения гелей гиалуро- \

новой кислоты Нет убедительных данных о том, изменяется ли аллергический фон окружающих тканей в зонах введения гелей гиалуроновой кислоты, возникает ли кратковременное асептическое воспаление

Следовательно, исследование морфофункциональной организации кожи и биогенных аминов в структурах кожи в области век можно рассматривать как важную научную задачу современной косметологии и восстановительной медицины, имеющей прикладное значение

Настоящее исследование является частью комплексной темы «Гистохимия биогенных аминов в морфофункциональном состоянии органов и тканей в норме и эксперименте» и входит в координационный план РАМН (0197007431 - номер государственной регистрации)

ПРЕДМЕТ ИССЛЕДОВАНИЯ

Предметом исследования является изучение влияния внутридермаль-ных инъекций геля на основе стабилизированной гиалуроновой кислоты на гистохимические процессы, происходящие в тканях верхнего века человека, изучение морфофункциональных особенностей структуры века, отличия в строении от остальных зон лица, которые необходимо учитывать в практике врачей эстетической медицины, в частности, при проведении гелевой контурной пластики лица Исходя из вышеизложенного,

ЦЕЛЬЮ настоящего исследования является изучение влияния внут-ридермального введения геля стабилизированной гиалуроновой кислоты (ГСГК) на биоаминсодержащие структуры кожи век

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

В основу исследований положено решение следующих задач

1 Изучение особенностей морфологии кожи век человека в норме и распределения в них гистамина (Г), катехоламинов (КА), серотонина (С), гепарина, моноаминоксидазы (МАО) и сукцинатдегидрогеназы (СДГ) в аминосодержащих структурах

2 Исследование влияния внутридермального введения геля стабилизированной гиалуроновой кислоты на структуры кожи век и динамику их изменений на различных сроках после коррекции

3 Проведение корреляционного анализа между разными биоаминсо-держащими структурами кожи век на различных сроках после введения геля стабилизированной гиалуроновой кислоты

4 Разработка технологии введения с созданием «ребер жесткости» для

улучшения эстетической коррекции внешности и пролонгации срока

резорбции препарата из тканей

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые изучена реакция окружающих тканей на введение гелей-филеров на основе стабилизированной гиалуроновой кислоты на уровне биогенных аминов С помощью люминесцентно-гистохимических методов Кросса и Фалька-Хилларпа описаны и количественно охарактеризованы биоаминосодержащие структуры кожи в области век человека в норме, в интактных зонах и после введения стабилизированной гиалуроновой кислоты в виде препарата «Рестилайн» на различных сроках после коррекции Выявлены морфологические и гистохимические особенности строения кожи верхних век человека, определяющие характер возрастных изменений

Впервые выявлено влияние стабилизированной гиалуроновой кислоты на распределение ферментов СДГ, МАО и гепарина на разных сроках после введения

Впервые изучена корреляционная взаимосвязь между биоаминосо-держащими структурами кожи век человека после введения гликозоами-ногликаносодержащих препаратов, использующихся в косметологии на разных сроках после введения Прослежено изменение содержание ней-ромедиаторов на клеточном уровне Показано, что препараты гиалуроновой кислоты затрагивают механизмы регуляции структур кожи и влияют на иммунные процессы в области введения этих веществ

Впервые разработан и обоснован с позиции теории сопротивления материалов метод введения препаратов стабилизированной гиалуроновой кислоты с созданием дополнительных «ребер жесткости», применяемый для коррекции атрофических рубцов, морщин, устранения возрастного птоза мягких тканей лица и шеи, изменения формы губ

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Результаты исследования существенно расширяют представления о воздействии препаратов гиалуроновой кислоты на восстановительные особенности эпителия и соединительной ткани в области введения Кроме того, выявляют возможные механизмы функционирования нейроэндок-ринной и иммунной систем после введения препаратов гиалуроновой кислоты

Установлено, что ферменты в основных биоаминсодержащих струк-

турах участвуют в количественной регуляции биогенных аминов кожи, уменьшая или увеличивая их поступление в межтканевую среду, влияя на процессы обмена и старения кожи

Доказано, что применение разработанного метода введения геля позволяет удлинить срок биодеградации ГСГК в тканях, следовательно, удлиняется срок косметической коррекции и улучшается эстетический эффект Технология более восьми лет применяется в практике Центра диагностики и лечения «Санитас» (г Чебоксары), косметологической клиники «Биодерма» (г Н Новгород)

Полученные результаты используются в лекциях, читаемых на кафедрах дерматологии, цитологии, эмбриологии, гистологии медицинского института при Чувашском государственном университете, институте усовершенствования врачей Минздрава ЧР, курсах усовершенствования врачей в Москве, Санкт-Петербурге, семинарах для косметологов и пластических хирургов

ПОЛОЖЕНИЯ ДИССЕРТАЦИИ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1 Кожа век человека имеет отличительные морфологические особенности в строении и распределении биоаминсодержащих веществ, что необходимо учитывать при эстетической коррекции дефектов внешности Основными биоаминсодержащими структурами в ней являются нервные волокна, гранулярные люминесцирующие клетки, тучные клетки, расположенные в виде цепочки под эпителием и в виде скоплений на границе с гиподермой, в области потовых желез и волосяных луковиц

2 Введение геля стабилизированной гиалуроновой кислоты «Рестилайн» вызывает изменение содержания биогенных аминов во всех биоаминсодержащих структурах кожи век Пик максимального их увеличения приходится на третьи сутки после введения геля наблюдается поглощение биоаминов нейтральными волосяными луковицами, изменение структуры потовых и сальных желез, изменение фазности поглощения биоаминов тучными клетками

3 Введение геля стабилизированной гиалуроновой кислоты вызывает изменение корреляционных связей между всеми исследуемыми структурами кожи век, смену взаимоотношений между биогенными аминами в этих структурах и изменение направления серотонинового индекса

4 Разработанный собственный метод введения препарата позволяет удлинить время резорбции стабилизированной гиалуроновой кислоты в коже и улучшить эстетический эффект, при этом существенно не нарушая механизма саморегуляции в окружающих тканях

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Материалы исследований доложены на ежегодных итоговых научных конференциях Чувашского государственного университета (Чебоксары, 1978-1983, 2004-2007), Всесоюзных научно-практических конференциях КГУ (Киев, 1981) и УжГУ (Ужгород, 1982), Всесоюзной конференции по люминесцентному анализу в биологии и медицине (г Рига, 1985), II Национальном конгрессе эстетической медицины ( Москва, 2002), V Всероссийской конференции «Бабухинские чтения» г Орел, 2006, конференции «Современные аспекты гистогенеза» (Москва, 2007), V Всемирном конгрессе по имммунопатологии (Москва, 2007)

Основные положения диссертации отражены в 11 опубликованных статьях, в т ч 2- в изданиях, рекомендованных ВАК, подана заявка на рационализаторское предложение

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертационный материал изложен на 122 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и списка цитируемой литературы, содержащего 189 источников, из них 124-отечественных и 65- зарубежных Диссертация иллюстрирована 9 таблицами, 36 рисунками и диаграммами

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалом для исследования явилась кожа верхних век 50 пациенток в возрасте 45-50 лет, взятая во время пластических операций на веках (блефаропластики) Препарат на основе стабилизированной гиалуроновой кислоты «Рестилайн» (Q-MED, Щвеция, per удост Минздрава ФС № 2005М308 от 13 09 2005г ) вводился 40 пациенткам после местной накожной анестезии однократно в среднюю часть дермы иглой №30 длиной 14 мм из расчета 0,1 мл /см линейной техникой- на обратном ходе иглы гель заполнял туннель Введение производилось в область правого верхнего века, левое веко оставалось интактным Взятие образцов кожи для исследования производилось во время операций под местной анестезией 2% раствором лидокаина и внутривенным введением фентанила Размер исследуемых фрагментов 0,2x0,5см- в области верхнего века Материал брался у этих пациенток одновременно и с левой интактной стороны, и с правой, захватывая ткани с ранее введенным ГСГК, через различные интервалы времени после введения геля через 6 часов, через одни, трое и

десять суток В качестве нормы исследовались фрагменты верхнего века у 10 пациенток, которым до блефаропластики гель не вводился Всего было исследовано 90 образцов кожи

Таблица 1

Название Локализация Срок с Количество материалов

объекта исследуемого момента Правое Левое веко Норма

материала введения ГСГК веко ( с ГСГК ) (интактное)

6 часов 10 10

Кожа 1 сутки 10 10

человека Верхнее веко 3 суток 10 10 10

10 суток 10 10

Итого 40 40

Применялись следующие методы исследования

1 Окраска гематоксилин-эозином использовалась для оценки характера и глубины изменения кожи после действия ГСГК

2 Люминесцентно-гистохимическим методом Кросса, Евена, Роста

[1971] выявлялся тканевый гистамин

3 Для избирательного выявления нервных и ненервных аминосодер-жащих структур кожи применялся люминесцентно-гистохимический метод Фалька-Хилларпа [1967] в модификации Е M Крохиной

4 Количественно концентрации гистамина (Г), катехоламинов (КА) и серотонина (С) в структурах кожи оценивались с помощью цитоспек-трофлуориметрии, осуществляемой на люминесцентном микроскопе с применением микрофлуориметрической насадки ФМЭЛ-1А Наблюдение велось на вольтметре при напряжении 800 вольт с зондом 0,5 Для определения Г использовали интерференционный фильтр «7» с длиной волны 515 нм, для КА - использовали фильтр «6» с длиной волны 480 нм, для С - «8» с длиной волны 525 нм Замер интенсивности свечения производился в единицах флуоресценции (условные единицы (у е ) по шкале регистрирующего прибора-усилителя)

5 Окраска на моноаминоксидазу (МАО) проводилась по Гленнеру

6 Сукцинатдегидрогеназу, фермент аэробного окисления, исследовали с помощью метода Ллойда.

7 Гепарин и гликозоаминогликаны, вещества, инактивирующие химическим путем биогенные амины, определяли путем окраски препарата

полихромным толуидиновым синим по Унна Структуры, имеющие синее окрашивание, содержат малосульфатированный гепарин, эта окраска называется ортохромной Среднесульфатированный гепарин окрашивается в фиолетовый цвет, и эта окраска называется бета- метахроматич-ной 4-5 сульфатированный гепарин имеет сиреневую окраску, называемую гамма- метахроматичной

8 Количественное распределение тучных и гранулярных клеток проводилось методом подсчета их в 5 полях зрения микроскопа при увеличении об 90, ок 10 Статистическую достоверность определяли критерием Стьюдента (О

9 Корреляционный анализ применялся для выявления взаимосвязи между показателями интенсивности люминесценции Г, КА и С в изучаемых структурах кожи Методом корреляционного анализа нами были изучены следующие пары нейромедиаторных биогенных аминов КА и Г, КА и С, С и Г между структурами кожи в области век на разных сроках после введения ГСГК, Данные корреляционного анализа позволяют ответить на вопрос, как взаимодействуют БА в изучаемой структуре Сильная положительная корреляционная связь ( более 0,5) свидетельствует о повышении концентрации определенного биоамина в корреляционной паре

10 Вычисление серотонинового индекса осуществлялось для выявления ведущей роли определенного биагенного амина в конкретной ситуации Соотношение серотонина и КА принято называть серотониновым индексом (Ъ) Влияние того или иного амина на общий процесс не всегда совпадает с величиной содержания этого амина в структуре Даже при нарастании концентрации этого амина влияние его на интегральную био-аминную обеспеченность структур может уменьшаться Когда серотони-новый индекс больше единицы, можно говорить о преобладании в структуре серотонина Если серотониновый индекс меньше единицы, то в структуре преобладают катехоламины

11 Метод введения геля стабилизированной гиалуроновой кислоты «Рестилайн».

«Рестилайн» вводился медленно однократно в среднюю часть дермы иглой № 30 длиной 14 мм после местного обезболивания Применялась линейная техника введения на обратном ходе иглы вводился гель, равномерно заполняя морщину Срок действия препарата равнялся 6-8 месяцев Однако у пациентов с активной мимикой, особенно при сниженном тургоре, начинали закладываться новые морщины, располагающиеся параллельно морщинам, заполненным гелем Кроме того, иногда возникала

необходимость провести коррекцию большей площади, не увеличивая объем препарата, желательно было подольше сохранить эстетический эффект Исходя из этого, возникла необходимость модификации метода Модифицированный метод введения геля с созданием т.н. «ребер жесткости»: после линейного заполнения основной морщины ГСГК, перпендикулярно к ней в том же дермальном слое делается несколько параллельных, с интервалом 2-3 мм и длиной от 5 до 14 мм туннелей, выполняющих функцию «ребер жесткости, заполняемых гелем на обратном ходе иглы в значительно меньшем объеме, чем в корректируемой морщине Уколы могут проходить под разными углами, в разных плоскостях «веером», «решеткой», «антенной», «бутербродом», т е проводится своеобразное армирование кожи в зоне коррекции. 12. Статистическая обработка.

Полученные цифровые данные обрабатывались статистически по программе «Статистика» на персональном компьютере с привлечением пакета программ Microsoft office (Word и Excel) В работе приводятся следующие показатели M - медиана, m - ошибка средней Статистическую достоверность определяли непараметрическими методами Вилкок-сона и Манна-Уитни

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ Распределение биогенных аминов в области наружной трети верхнего века человека в норме.

Люминесцентно-гистохимическое исследование показало, что основными аминосодержащими структурами кожи в области наружной трети верхнего века человека являются в первую очередь гранулярные лю-минесцирующие (макрофаги и АПУД-клетки) и тучные клетки, а также эпителий, волосяные фолликулы, эластические волокна сетчатого слоя В коже верхнего века базальная мембрана сглажена, число эпителиальных слоев невелико, не всегда выявляется блестящий слой Наиболее интенсивно люминесцирует эпителий, где содержание гистамина, КА и серо-тонина в наибольшем количестве имеется в базальном слое

Под базальной мембраной в виде цепочки в небольшом количестве содержатся слабо светящиеся мелкие, ветвистые, имеющие вытянутую форму тучные клетки, содержащие все три амина По базальной мембране проходят изумрудно-зеленые адренергические нервные волокна, имеющие вид прерывистой цепи и заходящие в слои эпителия, в которых

обнаруживается КА и серотонин В сосочковом слое структуры люми-несцируют очень слабо за исключением тучных клеток В сетчатом слое люминесцируют ядра фибробластов, эластические волокна Тучные клетки свободно расположены группами до 5-7 клеток при окраске на гиста-мин, до 3 - 4 - при окраске на КА и серотонин Тучные клетки определяются около сосудов, образуя здесь плотную цепочку, около волосяных фолликулов, на границе с гиподермой и в самой гиподерме, около потовых и сальных желез Вместе с тучными клетками находятся в виде скоплений гранулярные люминесцирующие клетки В сетчатом слое определяются волосяные луковицы с ярким зеленым свечением На границе дермы и гиподермы определяются артерии и вены среднего и крупного калибра, в стенках которых содержатся биоамины Нервные волокна определяются по адвентиции сосудов и в гиподерме, где оплетают группы жировых клеток Редкие сальные железы определяются в виде темных образований, содержащих слабо люминесцирующие мембраны жировых клеток Между жировыми клетками также определяются мелкие, овальные или веретеновидной формы тучные клетки

Содержание биогенных аминов через 6 часов после введения ГСГК.

Содержание гистамина, КА и серотонина в эпителии кожи, в основном, в базальном слое повысилось не только в области введения, но и в коже интактного века, что, вероятно, связано с операционным стрессом Но в структурах кожи в области введения «Рестилайна» содержание гистамина преобладает Базальный слой эпителия является ростковым [Афанасьев ЮИ, Юрина НА, 1997], увеличение содержания гистамина по данным Л А Любовцевой (1993), С А Агафонкина (2005), ведет к задержке дифференцировки бластных клеток и ускорению созревания полустволовых клеток Этот факт позволяет предположить, что гиалуроно-вая кислота задерживает дифференцировку клеток Увеличение содержания КА в нервных волокнах, возможно, говорит об активации вегетативного звена нервной системы Число тучных клеток под базальной мембраной уменьшилось Сосочки эпителия почти выпрямились Появляются большие пространства, люминесцирующие едва заметным темно- оранжевым цветом, располагающиеся между сосочковым и сетчатым слоем Предположительно, так люминесцирует введенный препарат В сетчатом слое ярче люминесцируют ядра фибробластов, эластические волокна, стенки сосудов Увеличивается число тучных клеток за счет дегранули-рованных форм Видимо, ГСГК способствует ускоренному созреванию,

сульфатации этих клеток Повысилось содержание гистамина более, чем в 3 раза в волосяных луковицах не только в области введения ГСГК, но и на интактной стороне

Повышается содержание изучаемых аминов в фибробластах, что теоретически способствует увеличению массы коллагеновых и эластино-вых волокон Однако, активация фибробластов кратковременна, т к уже через сутки содержание аминов в них вновь снижается В гиподерме содержание биоаминов имеет тенденцию к уменьшению Среди жировых клеток не во всех полях зрения определяются крупные округлой и вере-теновидной формы, имеющие сливное свечение тучные клетки Нервные волокна здесь редки, люминесцируют тускло, имеют диффузное свечение. ГЛК не определяются

Содержание биогенных аминов через 1 сутки после введения ГСГК.

Содержание биогенных аминов уменьшилось (см табл 2-4), ярче люминесцируют базальный и шиповатый слои В базальную мембрану врастает соединительная ткань Слой эпителия увеличился в 1,5 раза Лучше выявляются адренергические нервные волокна, содержание КА в них имеет тенденцию к нормализации Между сетчатым и сосочковым слоем определяются нелюминесцируюшие пространства, заполненные однородной массой Число подэпителиальных гистаминсодержащих тучных клеток увеличилось по сравнению с предыдущим сроком наблюдения В коже интактного века число этих клеток полностью восстановилась Количество моноамигнсодержащих тучных клеток незначительно, они расположены небольшими группами, в состав которых входят 1 -2 цельные тучные клетки и 1-2 тотально дегранулированные В сетчатом слое ярче люминесцируют ядра фибробластов Эластические волокна светятся ярче, они увеличились в размерах и в количестве Очевидно, имеется тенденция к образованию новых эластических волокон под влиянием введенного ГСГК, а значит, к повышению упругости кожи Тучные клетки расположены группами до 12 клеток на поле зрения при малом увеличении, происходит их дегрануляция Волосяные луковицы люминесцируют слабо В гиподерме определяются ярко люминесцирующие тучные клетки Вновь появляются редкие ГЛК К суточному сроку возрастает содержание всех биогенных аминов, излишки их берет на себя гиподерма, образуются новые популяции тучных клеток, что очевидно связано с адаптацией кожи на введенный препарат

Содержание биоаминов через 3 суток после введения препарата.

Эпителий стал еще толще Увеличилось содержание биогенных аминов в роговых чешуйках, а в ростковых слоях их содержание понизилось (см табл 2-4) Наблюдается врастание соединительной ткани в эпителий, т е появляются сосочки на смену сглаженной поверхности Увеличилось число тучных клеток с преобладанием дегранулировавших форм, в результате их распада повысилось содержание биогенных аминов под эпителием В сетчатом и сосочковом слоях дермы биогенные амины выявляются в эластиновых волокнах, являющихся адсорбентом этого диамина, и в ядрах фибробластов В сетчатом слое число моноаминсо-держащих тучных клеток остается повышенным, наблюдается тотальная дегрануляция большей их части Количество КА увеличилось в 1,9 раза В области введения препарата содержание гистамина в ядрах тучных клеток увеличилось Число тучных клеток в сетчатом слое резко снизилось, определяются их оголившиеся ядра с единичными люминесцирующими гранулами в виде разреженного «облачка» Увеличилось число люминес-цирующих волосяных луковиц

Введение гелей стабилизированной гиалуроновой кислоты вызывает изменения и сосудистой сети Через 6 часов после введения геля сосуды локально расширяются и находятся в таком состоянии в течение трех суток По сравнению с интактной зоной в месте инъекции геля выявляется более разветвленная капиллярная сеть Эти сосудистые изменения связаны с тем, что клетки адвентиции и эндотелий набирают биогенные амины, способствуя в дальнейшем формированию около них популяции тучных клеток с гамма-метахромазией Такая картина может сохраняться до десяти суток Клинически мы наблюдаем выраженный отек тканей и признаки асептического воспаления в первые сутки, что соответствует гистологическим изменениям

В гиподерме образовалась новая популяция клеток, предыдущая же дегранулировала путем тотального распада Ярко люминесцируют фиб-робласты сетчатого слоя Содержание в них катехоламинов имеет тенденцию к понижению Появились ГЛК в сетчатом слое и в гиподерме Их мало 1-2 клетки на поле зрения Гиподерма светится очень тускло, число нервных волокон в ней остается сниженным Содержание серотонина увеличилось по сравнению с нормой в тучных клетках сосочкового слоя и в гиподерме Можно предположить, что в результате тотальной деграну-ляции тучных клеток сетчатого слоя их функцию временно взяли на себя тучные клетки гиподермы

Содержание биогенных аминов в коже век через 10 суток после введения препарата практически восстановилось

Толщина эпителия в месте введения препарата увеличена в 2 раза Наблюдается врастание соединительной ткани в эпителий, что свидетельствует об активизации пролиферативных процессов Под эпителием нарушена цепочка из тучных клеток, которые здесь выполняют двоякую функцию Они являются барьером к проникновению излишков биогенных аминов с одной стороны и регулируют восстановление эпителия - с другой На этом сроке они располагаются группами, не изменяя формы Увеличена масса эластических волокон и число выявляемых на люминесценцию фибробластов Эластические волокна могут располагаться почти под углом в 90 градусов и иметь штопорообразный ход Выявляемых по этому методу тучных клеток больше, чем в интактной зоне до 5 на одно поле зрения Они имеют чаще всего ветвистую форму, мелкую желтоватую зернистость и располагаются в виде групп Часть волосяных фолликулов вновь не люминесцируют Между липоцитами определяются вере-теновидные тучные клетки и ГЛК ГЛК - единичны (табл 2- 4) Состояние ГЛК, обычно учитываемое при изучении иммунологического ответа организма, в наших исследованиях не информативно, большее значение имеют изменения тучных клеток

Таблица 2

Количественные показатели содержания гистамина в структурах кожи

Структуры кожи Норма Срок с момента введения ГСГК

6 часов 1 сутки 3 суток 10 суток

Эпителий Без ГСГК 10,0±1,2 21,4±1,98 5,6±0,35 8,5±0,83 7,0±0,67

С ГСГК 24,2+1,89 6,6±0,67 6,1+0,65 9,5+0,82

Сосочковый слой Без ГСГК 4,0+0,3 3,8±0,41 4,0+0,45 4,8±0,45 5,5+0,65

С ГСГК 4,0+0,46 6,4+0,65 5,5+0,49 7,1+0,67

Сетчатый слой Без ГСГК 8,0+0,7 14,6+1,52 10,0+1,2 7,0+0,8 8,0+0,81

С ГСГК 12,2+1,13 13,5±1,43 14,0±1,5 15,0±1,35

Гиподерма Без ГСГК 4,0±0,45 4,0±0,39 5,0±0,45 6,0±0,67 5,0±0,45

С ГСГК 3,0+0,2 6,0±0,5 8,0±0,8 4,0±0,4

Волосяной фолликул Без ГСГК 12,0±1,3 16,3+2,0 10,0±1,1 10,0±1,3 10,0±0,8

С ГСГК 25,5+3,0 14,0±1,5 9,0±1,1 8,0±1,0

Тучные клетки под эпителием Без ГСГК 14,0±1,34 7,0±0,8 14,0+1,5 14,0+1,3 12,0+1,1

С ГСГК 9,0+0,8 9,0+0,9 20,0+1,9 18,0+1,6

Тучные клетки в сетчатом слое Без ГСГК 14,0+1,29 12,0+1,3 14,0+1,3 16,0+1,7

С ГСГК 14,0+1,5 20,0+2,1 33,0±3,4 40,0±4,5

Тучные клетки около сальных желез Без ГСГК 16,0+1,35

С ГСГК 23,1+2,4 16,0+1,7 10,0+0,8 10,0±0,8

Таблица 3

Количественные показатели содержания катехоламинов в структурах _кожи век после введения ГСГК (в у е ), р <0,05_

Структуры кожи Норма Срок с момента введения ГСГК

6 часов 1 сутки 3 суток 10 суток

Эпителий Без ГСГК 17,7±1,6 18,2±1,4 16,4±1,2 16,3±1,2 17,1±1,5

С ГСГК 22,4±1,3 10,4±0,9 9,8±0,7 18,2±1,4

Сосочковый слой Без ГСГК 11,3±0,9 6,7±0,5 11,1±0,8 10,8±0,7 11,1±0,9

С ГСГК 22,8±1,5 11,5±0,7 10,5±0,8 11,5+1,0

Сетчатый слой Без ГСГК 15,3±1,1 10,3±0,8 15,0±1,2 16,2±1,4 8,0±0,6

С ГСГК 8,2±0,1 16,2±1,1 16,3±1,5 15,1±1,3

Гиподерма Без ГСГК 3,2±0,2 4,0±0,2 4,3±0,3 6,5±0,5 5,3±0,4

С ГСГК 4,2±0,2 4,5±0,2 7,7±0,4 4,1±0,3

Волосяной фолликул Без ГСГК 25,6±1,8 24,4+1,6 11,1±0,9 14,2±1,1 24,3±2Д

С ГСГК 20,0±1,6 14,4±1,2 19,4±1,3 25,2±1,9

Тучные клетки под эпителием Без ГСГК 13,4±1,1 7,7±0,6 14,1±1,1 16,3+1,4 12,4+0,9

С ГСГК 11,1±0,8 11,8±0,1 24,2±1,9 16,1±1,2

Тучные клетки в сетчатом слое Без ГСГК 7,2±0,6 8Д±0,5 7,4+0,4 7,5±0,4

С ГСГК 4,3±0,3 7,4±0,3 12,3±1,1

ГЛК в сетчатом слое Без ГСГК 12,1±0,9 16,6±1,2

С ГСГК 2,3±0,1 2,8±0,2 2,6±0,2 18,5+1,5

Таблица 4

Количественные показатели содержания серотонина в структурах кожи век после введения ГСГК (в у е ), р <0,05 __

Структуры кожи Норма 6 часов 1 сутки 3 суток 10 суток

Эпителий 36,8±1,5 41,0±3,2 9,3+0,4 8,0±0,5 8,7±0,6

Сосочковый слой 34,0±2,4 12,0+0,5 10,0±0,6 10,0±0,4 14,9±0,5

Сетчатый слой(фибробласты) 6,4±0,3 20±1,3 8,3±0,6 8,0±0,4 7,3±0,6

Гиподерма 12,0±0,8 6,0±0,3 6,0±0,5 16,0±0,9 7,0+0,4

Волосяной фолликул 32,0±2,3 45,0±ЗД 18,0±1,6 21,0±1,8 28,0+1,9

Тучные клетки под эпителием 9,6±0,8 6,6±0,2 7,6±0,4 10,2±0,9 10,7±0,7

Тучные клетки в сетчатом слое 12,0±0,9 8,8±0,3 9,1 ±0,3 23,2±1,3 24,8±1,8

Тучные около волос фолликула 16,0±1,1 14,8+1,2 19,0±1,4 15,3+1,1

Тучные клетки около сальн желез 11,2±0,8 7,4±0,5 6,8±0,3 13,0±0,9 15,2±1,2

ГЖ 16,0+1,2 17,0+1,3 7,8+0,5 16,0+1,2

Примечание содержание серотонина в интактном веке и в норме практически одинаково, поэтому данные объединены

Корреляционные взаимоотношения по катехоламинам между структурами кожи и тучными клетками в области верхних век.

Между эпителием и подэпитеальными тучными клетками существуют сильные коррелляционные связи по КА После введения препарата через 6 часов эта связь не изменяется, а уже к первым суткам становится сильной отрицательной, в Дальнейшем укрепляясь Между тучными клетками волосяных фолликулов и тучными клетками сетчатого слоя существует очень слабая связь по КА, после введения геля она полностью нарушается Между тучными клетками сетчатого слоя и тучными клетками сальных желез в интактных веках связи нет, однако, после введения препарата на третьи сутки возникает очень сильная связь (0,9), далее она снова исчезает Точно такой же процесс происходит между тучными клетками сетчатого слоя и гиподермой, тучными клетками сетчатого слоя и ГЛК

Корреляционные взаимоотношения по серотонииу между структурами кожи и тучными клетками в области верхних век.

Между эпителием и подэпитеальными тучными клетками существуют сильные коррелляционные связи по серотонину После введения препарата через б часов они становятся отрицательными, но уже к первым суткам эта связь восстанавливается и в дальнейшем не изменяется Между тучными клетками волосяных фолликулов и тучными клетками сетчатого слоя также существует очень сильная связь по серотонину, через 6 часов после воздействия она ослабевает, с 1 суток полностью нарушается и восстанавливается только к 10 суткам Между тучными клетками сетчатого слоя и тучными клетками около сальных желез в интактных веках связи нет, однако, после введения препарата через 6 часов возникает очень сильная связь, на третьи сутки связь исчезает и более не возобновляется Между тучными клетками сетчатого слоя и гиподермой существует слабая коррелляционнная связь, которая остается на всем протяжении Между тучными клетками сетчатого слоя и ГЛК связь отрицательная, таковой остается и через 6 часов Через сутки ГЛК не выявляются, появляясь с 3-х суток, вновь возникает очень сильная связь (0,9) Таким образом, по серотониновым корреляционным взаимоотношениям можно заключить, что введение препаратов гиалуроновой кислоты воздействует на разрыв всех связей между изучаемыми структурами на ранних сроках после введения, и не всегда эта связь восстанавливается к 10 суткам эксперимента

Корреляционные взаимоотношения по гистамину между структурами кожи и тучными клетками в области верхних век.

Между эпителием и подэпитеальными тучными клетками существуют сильные корреляционные связи и сохраняются в течение 6 часов, далее эта связь ослабевает и к 10 суткам становится отрицательной Между тучными клетками волосяных фолликулов и тучными клетками сетчатого слоя также существует очень сильная связь, через 6 часов после воздействия она становится отрицательной, с 1 суток снова усиливается, затем ослабевает до конца эксперимента Между тучными клетками сетчатого слоя и тучными клетками сальных желез связь очень слабая, на третьи сутки становится отрицательной и к 10 суткам исчезает полностью Между тучными клетками сетчатого слоя и гиподермой существует слабая коррелляционнная связь, которая остается на всем протяжении Между тучными клетками сетчатого слоя и ГЛК связь сильная Таким образом, по гистамину между всеми изучаемыми структурами кожи существует связь Введенный препарат или разрывает эту связь, или ослабляет ее, причем первоначальный статус не не восстанавливается и к 10 суткам эксперимента

Сильная положительная корреляционная связь (более 0,5), означает повышение концентрации каждого БА в корреляционой паре, по-видимому, связанное с определенным естественным фактором регуляции Отрицательная корреляционная связь также обусловлена регуляторным фактором, но при этом условии содержание одного БА возрастает при убывании другого

Серотоииновый индекс в норме в эпителии, волосяных фолликулах кожи век выше единицы, ведущим медиатором в этом случае является се-ротонин В остальных изучаемых структурах ведущим медиатором являются катехоламины Через 6 часов после введения препарата в паре эпителий и подэпителиальные тучные клетки ведущим медиатором становится серотонин, в этом случае влияние ГСГК на эпителий слабое Однако, уже через сутки после введения препарата в эпителии ведущим медиатором становятся КА и остаются на этой позиции до конца эксперимента Как показал серотониновый индекс, наиболее сильные изменения в подэпителиальных тучных клетках происходят к 3-м суткам эксперимента Введенный препарат не затрагивает волосяные фолликулы, где ведущим медиатором является серотонин, а в тучных клетках волосяных фолликулов к 3-м суткам ведущим медиатором становятся КА и таковы-

ми остаются до конца эксперимента В гиподерме также к 3-м суткам происходит смена ведущего медиатора с катехоламинов на серотонин

Таким образом, введенный препарат влияет на смену медиаторных взаимодействий в структурах кожи века Изменение ведущего медиатора с серотонина на катехоламины в основных задействованных структурах кожи расценивается как адаптационный ответ на введение геля с вовлечением вегетативной нервной системы

Исследование кожи век на гликозоаминогликаны после введения

ГСГК.

Через 6 часов после введения препарата в эпителии появляется зрелый гепарин, особенно в его верхних слоях Под эпителием образуются большие пространства, дающие реакцию на гликозоаминогликаны и окрашивающиеся слабо метахроматично

В части тучных клеток под эпителием выявляется несульфатирован-ный гепарин, что свидетельствует об образовании новой популяции Другая часть находится в состоянии дегрануляции, создавая под эпителием поле из гамма-метахроматичных мелких гранул Обе группы клеток образуют прерывистую цепочку под эпителием В некоторых местах определяются клетки, расположенные вторым рядом и имеющие большие размеры В сетчатом слое выявляется большое число сосудов и волосяных фолликулов, около которых видны разной формы и величины орто- и бе-та-метахроматичные ТК Около фолликулов, на границе сетчатого и со-сочкового слоев и на границе с гиподермой ТК образуют скопления, содержащие до 25 клеток В нижней трети сетчатого слоя определяются де-гранулирующие ТК в виде больших полей с метахроматичными гранулами Очевидно, что введение ГСГК ускоряет созревание тучных клеток в задействованных структурах и способствует образованию их новой популяции

Через 1 сутки после введения геля эпителий в некоторых местах утолщен Под эпителием увеличилось число гамма-метахроматичных тучных клеток Большинство их тотально дегранулированы, под эпителием около базальной мембраны создается поле из гамма-метахроматичных мелких гранул Число клеток - до 30 в одном поле зрения В некоторых местах определяются клетки, расположенные вторым рядом и имеющие большие размеры, они также дегранулированы В сетчатом слое выявляется большое число сосудов и волосяных фолликулов, около которых видны разной формы и величины орто- и бета- метахроматичные ТК Определяются клетки, имеющую иную природу окрашивания зеленые, чего

ранее никогда не наблюдалось, с гранулами, имеющими не углеводное, а белковое покрытие Появляются измененные волосяные луковицы, сальные железы, около которых располагаются ядра и гранулы гамма-метахроматичных тучных клеток. В гиподерме увеличивается число одиночных ТК, плотно прилегающих к липоцитам Таким образом, через 1 сутки увеличивается число ТК, усиливается их дегрануляция, появляются белковые лаброциты

Через 3 суток после введения препарата в коже век в эпителии местами уменьшается роговой слой, наблюдается внедрение эпителия в сосочковый слой, появляются тучные клетки с несозревшим гепарином В 1,5 раза увеличилось число фибробластов, в некоторых из них обнаруживаются митозы (шиповатый слой эпителия приобретает гамма-метахромазию) Обнаруживаются сплетения из кровеносных, лимфатических и нервных волокон, в которых наблюдается увеличение количества ТК до 34 в поле зрения Метахромазия появляется в соединительной ткани Около сосудов определяются клетки воспалительного характера- макрофаги и нейтрофилы Около всех структур резко увеличивается число дегранулированных гамма-метахроматичных ТК самых разнообразных форм Выявляются клетки с неокрашенными гранулами и гранулами с зеленой окраской

Через 10 суток после введения препарата наблюдаемая картина аналогична таковой в норме за исключением того, что количество окрашенных волосяных луковиц остается увеличенным, сальные железы гипертрофированы и имеют необычную, несколько измененную форму с неровными краями Количество ТК около них повышено первый ряд имеет ортохромную окраску и небольшие размеры, клетки второго ряда гамма-метахроматичны и частично дегранулированы

Исходя из полученных результатов, можно заключить, что введение ГСГК приводит к ускоренному созреванию гепарина в гранулах тучных клеток Необходимо это для дальнейшей инактивации повышенного количества биогенных аминов По данным Лукашина Б П (1976), одна молекула гепарина связывает химически двести молекул С и столько же молекул Г и КА Такое ускоренное созревание блокирует развитие аллергической реакции и асептического воспаления

Исследование моноаминоксидазы (МАО) в области века.

При исследовании на МАО слабо положительными оказываются эпителий, часть тучных клеток, нервные волокна

Положительные на МАО единичные тучные клетки, расположенные в сосочках эпителия, имеют хорошую реакцию Нервные волокна обнаруживаются как в премембранном слое эпителия, так и в более глубоком, где идут перпендикулярно поверхостному слою эпителия МАО- положительные нервные волокна лишь обозначают свой ход Реакция средне-положительная

На всех сроках исследования содержание МАО в коже века изменяется мало Эти изменения касаются ТК под эпителием и около волосяных фолликулов, где содержание этого фермента увеличивается к третьим суткам, затем приходит к норме Это свидетельствует о том, что синтез биоаминов остается на прежнем уровне, колебания их количества происходят за счет вытеснения из депо Кратковременное увеличение уровня МАО на третьи сутки можно расценивать как адаптационную реакцию на введение ГСГК

Исследование сукцинатдегидрогеназы (СДГ) в области века.

При исследовании на фермент аэробного окисления - СДГ выявлено, что наибольшая насыщенность определяется в базальном, меньшая - в шиповатом слоях эпителия, в части тучных клеток (в одной из четырех), в эндотелии сосудов, по ходу нервных волокон Через 6 часов после введения препарата увеличилась выявляемость СДГ в тучных клетках около сосудов, фолликулов и сальных желез Через 1 сутки после введения реакция на СДГ снижена Через 3-е суток фермент аэробного окисления остается сниженным (до 10-х суток наблюдения), что позволяет предположить, что после введения ГСГК наблюдается временная локальная гипоксия тканей

Сравнительное исследование сроков резорбции ГСГК в тканях при использовании различных технологий введения.

В исследовании участвовало 80 женщин в возрасте от 35 до 60 лет с признаками атрофических изменений мягких тканей лица, которые были разделены на три возрастные группы (рис 1) Проводилась коррекция морщин, образующихся в углах глаз 30 пациенткам ГСГК вводился стандартной линейной методикой по всей длине морщины, 50 - усовершенствованной методикой с созданием «ребер жесткости», описанной выше

Установлено, что у второй группы коррекция была более полной с лучшим эстетическим эффектом (по оценке и врача, и пациента), срок резорбции препарата из тканей составлял, в среднем, 12-16 месяцев В группе пациентов, где коррекция проводилась стандартной методикой,

срок резорбции геля составлял 9-11 месяцев, что соответствовало сроку, декларированному фирмой-производителем. Таким образом, применение усовершенствованной технологии введения ГСГК позволяет пролонгировать полученный эстетический эффект, в среднем, па 40 %.

месяцы

36-45 лет 40-50 лет 50-60 лет

■ Традиционное введение материала

■ Введение усовершенствованным методом

Рис. 1. Увеличение срока действия ГСТК в коже пациентов разных возрастных групп.

ВЫВОДЫ

1. Кожа век имеет сглаженную базальную мембрану, эпителий, толщина которого в два раза меньше, чем на других участках лица, небольшое число ГЛК, размерами вдвое меньше стандартных, большое число тучных клеток, находящихся около всех структур кожи, способных к размножению и дифференцировке, значительно меньшее число волосяных луковиц, часть из которых не содержит амины, хорошо выраженный слой гиподермы, часть клеток которого также не содержит амины.

2. Введение геля стабилизированной гиалуроновой кислоты «Рести-лайн» способствует увеличению содержания биогенных аминов во всех структурах кожи в течение первых двух-трех суток после инъекции. Наблюдается накопление биоаминов в неактивных волосяных фолликулах, изменение формы потовых желез.

Увеличивается популяция тучных клеток в иод эпителиальном слое, около волосяных фолликулов, около сальных и потовых желез, в гиподерме. Происходит ускоренное созревание гепарина и досрочная дегра-нуляция тучных клеток. Введение «РестилаЙна» создает условия для увеличения Числа митозов в фибробластах, тем самым стимулируя рост кассы и измененение структуры коллагеновых и эластиновых волокон, способствуя качественному омоложению кожи и стимулируя ее регенерацию, что наблюдается в клинической практике.

3 Имплантация ГСГК способствует снижению или полному разрушению корреляционных связей между биогенными аминами по всем исследуемым структурам, которые не всегда восстанавливаются к 10 суткам эксперимента Происходит смена медиаторных взаимодействий в структурах кожи века к третьим суткам после введения препарата

4 Использование видоизменененной нами технологии введения гелей - филеров на основе стабилизированной гиалуроновой кислоты с созданием «ребер жесткости» позволяет провести более полную эстетическую коррекцию внешности без дополнительных затрат препарата и пролонгировать срок резорбции геля из тканей

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Поскольку введение ГСГК приводит в тканях к массивному выбросу биогенных аминов, провоцирующих развитие отека, гиперемии, повышению проницаемости сосудистой стенки, необходимо рекомендовать пациентам в первые десять суток после процедуры избегать воздействий, усугубляющих эти процессы - инсоляции, посещения сауны, приема антикоагулянтов, спиртных напитков

2 Нежелательно вводить ГСГК пациентам с отягощенным аллерго-логическим анамнезом, т к выявленные в ходе исследований изменения биоаминного статуса могут способствовать развитию у них тяжелых аллергических реакций

3 Для предупреждения развития отека и гиперемии кожи после коррекции морщин ГСГК можно рекомендовать пациентам в первые трое суток использовать антигистаминные препараты для перорального и накожного применения

4 Видоизмененную нами технологию введения ГСГК целесообразно использовать в практике врачей эстетической медицины в случаях, когда требуется коррекция большой площади и пролонгация эстетического эффекта

Список работ, опубликованных по теме диссертации Жирновой Н.С.

1 Раков Н А , Зеленова И Г, Карпова (Жирнова) Н С Динамика биогенных аминов в области перелома и возможности прогнозирования его заживления // Люминесцентный анализ в медицине и биологии и его аппаратурное обеспечение, Рига, РМИД985 - С 119-120

2 Жирнова Н С , Жирнов А А Усовершенствованный метод введения препарата «Рестилайн» // Тезисы II Национального конгресса по эстетической медицине, г Москва, 2002,

3 Жирнова Н С , Жирнов А А Обоснование применения дополни-

тельной техники «ребра жесткости» при коррекции возрастных изменений кожи препаратами группы «Рестилайн» // Информационный вестник «УаПехЬше», 2006 - № 1, С 7-8

4 Гурьянова Е А , Жирнова Н С , Любовцева Л А Исследование структур кожи лица у человека» // Материалы V Всероссийской конференции «Бабухинские чтения в Орле», Орел, 2006 -Вып 24 - С 120-122)

5 Жирнова Н С , Жирнов А А , Любовцев В Б Применение усовершенствованного метода контурной пластики препаратами стабилизированной гиалуроновой кислоты для реабилитации возрастной атрофии тканей лица // Здравоохранение Чувашии, 2006 -№ 4 -С 46-50

6 Жирнова Н С , Жирнов А А Комбинированный метод применения серии «Суджидерм» при коррекции возрастной атрофии мягких тканей лица // Вестник эстетической медицины, 2006 - № 4 - С 18-21

7 Гурьянова Е А , Жирнова Н С , Любовцева Л А Гистамин в структурах кожи лица при введении «Рестилайна» в область акупунктурной точки ТЯ 17 // Материалы конференции « Современные аспекты гистогенеза и вопросы преподавания гистологии в вузе», Москва, 2007

8 Гурьянова Е А , Жирнова Н С , Любовцева Л А Изучение структурных особенностей кожи лица человека // Материалы V Всемирного конгресса по иммунопатологии, Москва, 2007

9 Жирнова Н С , Гурьянова Е А Сравнительный анализ биоаминсо-держащих структур кожи лица // Естествознание и гуманизм, Томск, 2007

10 Жирнова Н С , Любовцева Л А , Гурьянова Е А Люминесцентно-гистохимическое изучение гистамина в структурах кожи после введения препаратов гиалуроновой кислоты //Российский журнал кожных и венерических болезней, 2007 - № 6 - С 57-59

11 Жирнова Н С , Любовцева Л А , Гурьянова Е А , Жирнов С А Изменение биоаминного статуса кожи лица после введения гелей стабилизированной гиалуроновой кислоты

//Вестник Оренбургского государственного университета, 2007 - № 6-С 92-99

Подписано в печать 30 августа 2007 года Формат 60x90, 1/16 Объем 1,5 п л Заказ 590 Тираж 100 экз Отпечатано в типографии «Принт-люкс» г Чебоксары, пр-т М Горького, 26

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Жирнова, Нина Станиславовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Общие сведения о строении и функции кожи.

1.1.1. Развитие и строение кожи.

1.1.2. Кровоснабжение кожи.

1.1.3. Иннервация кожи.

1.1.4. Строение и функция желез.

1.1.5. Характеристика популяции тучных клеток кожи.

1.1.6. Гранулярные люминесцирующие клетки.

1.2. Современные представления о свойствах и метаболизме биогенных аминов и гепарина.

1.3. Гиалуроновая кислота и её производные, используемые в эстетической медицине.

1.4. Морфофункциональные аспекты старения кожи.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Особенности морфологии и люминесцентной гистохимии кожи в области наружной трети верхнего века человека.

3.1.1. Содержание гистамина без введения ГСГК.

3.1.2. Содержание гистамина через 6 часов после введения ГСГК.

3.1.3. Содержание гистамина через 1 сутки после введения ГСГК.

3.1.4. Содержание гистамина через 3 суток после введения ГСГК.

3.1.5. Содержание гистамина в коже век через 10 суток.

3.2. Содержание катехоламинов и серотонина в области наружной трети верхнего века человека.

3.2.1. Содержание катехоламинов и серотонина в коже интактного века.

3.2.2. Содержание катехоламинов и серотонина в коже век через 6 часов после введения ГСГК.

3.2.3. Содержание катехоламинов и серотонина в коже век через 1 сутки после введения ГСГК.

3.2.4. Содержание катехоламинов и серотонина в коже век через 3 суток после введения ГСГК.

3.2.5. Содержание катехоламинов и серотонина в коже век на 10 сутки после введения ГСГК.

3.2.6. Корреляционные взаимоотношения между биогенными аминами в структурах кожи человека в области верхних век.

3.2.7. Серотониновый индекс.

3.3. Исследование кожи век на гликозоаминогликаны после введения

ГСГК.

3.3.1. Содержание сложных углеводов в коже интактного века.

3.3.2. Локализация сложных углеводов в коже век через 6 часов после введения ГСГК.

3.3.3. Локализация сложных углеводов в коже век через 1 сутки после введения ГСГК.

3.3.4. Локализация сложных углеводов в коже век через 3 суток после введения ГСГК.

3.3.5. Локализация сложных углеводов в коже век через 10 суток после введения ГСГК.

3.4. Исследование моноаминоксидазы (МАО) в области наружной трети верхнего века.

3.4.1. Исследование МАО в колее века через 6 часов после введения ГСГК.

3.4.2. Исследование МАО в коже через 1 сутки после введения ГСГК.

3.5. Исследование сукцинатдегидрогеназы (СДГ) в области наружной трети верхнего века человека.

3.5.1. Исследование СДГ через 6 часов после введения ГСГК.

3.5.2. Исследование СДГ через 1 сутки после введения ГСГК.

3.6. Модифицированная технология контурной пластики поверхностных дефектов кожи введением геля стабилизированной гиалуроновой кислоты (ГСГК).:.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфофункциональное исследование биогенных аминов структур кожи после введения препаратов гиалуроновой кислоты"

Настоящее исследование является частью комплексной темы «Гистохимия биогенных аминов в морфофункциональном состоянии органов и тканей в норме и эксперименте» и входит в координационный план РАМН (0197007431 - номер государственной регистрации).

В последние годы получены убедительные данные о том, что кожа является активным нейроэндокринным органом. Различные клетки эпидермиса и дермы при определенных условиях способны вырабатывать гормоны и нейро-пептиды, идентичные таковым в центральной нервной и эндокринной системах. К настоящему времени при обычных гистохимических окрасках строение кожи изучено довольно подробно (Пирс Э.,1962; Михайлов И.Н.,1979; Крохина Е.М., 1980; Хэм А., 1983; Бочкарев В.А., 1988; Гурьянова Е.А., 2003)

Однако многие аспекты строения, функции, взаимодействия между клеточными структурами кожи остаются не исследованными. Очевидно, что старение кожи (хронологическое и индуцированное ультрафиолетовым облучением) сопровождается значимыми изменениями локальных нейроэндокринных взаимодействий. Однако, их изучению уделяется пока недостаточное внимание. Между тем, интерес к этим вопросам возрастает в связи с изменением менталитета: люди стараются выглядеть моложе своего биологического возраста, приостановить процесс старения. Соответственно, бурными темпами начинает развиваться косметология, предлагая все новые и новые методики для коррекции возрастных атрофических изменений мягких тканей лица и тела. Один из самых перспективных методов - контурная пластика с применением инъекционных материалов на основе стабилизированной гиалуроновой кислоты.

Инъекционные импланты представляют собой самодостаточную нехирургическую альтернативу в коррекции дефектов кожного профиля, но такого рода материалы должны быть безопасными и эффективными, следовательно, отвечать ряду требований: биосовместимость, отсутствие антигенных свойств, отсутствие пирогенности, токсичности, не провоцировать воспалительные процессы, обладать достаточной длительностью действия, но быть биорезорбируе-мыми. Идеальными для этого являются гели на основе стабилизированной гиа-луроновой кислоты неживотного происхождения («Рестилайн», «Сурджидерм». «Джувидерм»), применяемые особенно активно в течение последних десяти лет для коррекции морщин, атрофических рубцов, изменения формы губ. Естественно, возникает вопрос: настолько ли безопасны гели для пациента, как их декларируют фирмы-производители? Тем более, периодически появляются сообщения негативного характера о возникновении осложнений после введения гелей в виде образования гранулем, развития воспалительных процессов, аллергических реакций ^епЬегд А., 1997; КаиИп С., 2000; Шугинина Е.И., 2002; Мишеельс П., 2003; Карпова Е.И., 2005; Странд. А., 2005). Поэтому чрезвычайно важным явилось изучение реакции структур кожи лица человека после внутридермального введения в них препаратов стабилизированной гиалуроно-вой кислоты, их влияние на механизмы регуляции и обмен веществ в коже.

По данным литературы (Гордон Д.С., 1986; Яглов В.В., 1989; Райхлин Н.Т., 1989; Мяделец О.Д., 1997; Афанасьев Ю.И., 2002) известно, что местную регуляторную функцию органов выполняют биогенные амины, являясь или своеобразными менеджерами, или осуществляя дистантную передачу информации на клеточные рецепторы через передатчики цАМФ или цГАМФ. Спектр биологических эффектов биогенных аминов весьма обширен. Они регулируют большое число процессов, происходящих в организме, поэтому нарушение синтеза и секреции биогенных аминов может сказаться на состоянии кожи лица и обменных процессах в ней, вызывая или досрочное старение кожи, или его задержку.

В настоящее время не изучены механизмы регуляции синтеза и инактивации биогенных аминов при введении гелей гиалуроновой кислоты. Неизвестно, позволяет ли улучшение упруго-эластических свойств кожи за счет увеличения внутридермальной концентрации гиалуроновой кислоты затормозить процессы старения, измененяя обменные процессы в основных структурах кожи. Практически не изучено, повышается ли аллергический фон окружающих тканей в зонах введения ГСГК, возникает ли кратковременное асептическое воспаление.

Исходя из вышеизложенного,

ЦЕЛЬЮ настоящего исследования является изучение влияния внутри-дермального введения геля стабилизированной гиалуроновой кислоты на био-аминсодержащие структуры кожи век.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

В основу исследований положено решение следующих задач:

1. Изучение особенностей морфологии кожи век человека в норме и распределения в них гистамина (Г), катехоламинов (К), серотонина (С), гепарина, моноаминооксидазы (МАО) и сукцинатдегидрогеназы ( СДГ) в аминосо-держащих структурах.

2. Исследование влияния внутридермального введения геля стабилизированной гиалуроновой кислоты (ГСГК) на структуры кожи век и динамику изменений изучаемых веществ в них на различных сроках после коррекции.

3. Проведение корреляционного анализа между разными биоаминсодержа-щими структурами кожи век после введения геля стабилизированной гиалуроновой кислоты на различных сроках после коррекции .

4. Разработка технологии введения ГСГК с созданием «ребер жесткости» для повышения эффективности эстетической коррекции внешности и пролонгации срока резорбции препарата из тканей.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые изучена реакция окружающих тканей на введение гелей-филеров на основе стабилизированной гиалуроновой кислоты на уровне биогенных аминов. С помощью люминесцентно-гистохимических методов Кросса и Фалька-Хилларпа описаны и количественно охарактеризованы биоаминосо-держащие структуры кожи в области век в интактных зонах и после введения ГСГК у человека на различных сроках после коррекции. Прослежены в динамике происходящие здесь после воздействия качественные и количественные изменения, дана их интерпретация и с гистологической, и с клинической точек точек зрения. Выявлены морфологические и гистохимические особенности строения кожи верхних век человека, определяющие характер возрастных изменений.

Впервые изучена корреляционная взаимосвязь между биоаминосодержа-щими структурами кожи век человека после введения гликозоаминогликаносо-держащих веществ, использующихся в косметологии. Прослежено изменение содержания нейромедиаторов на клеточном уровне. Показано, что препараты гиалуроновой кислоты затрагивают механизмы регуляции структур кожи и влияют на иммунные процессы в области введения этих веществ.

Впервые выявлено влияние стабилизированной гиалуроновой кислоты на распределение гепарина и ферментов СДГ, МАО на различных сроках после введения геля.

Впервые разработан и обоснован с позиции теории сопротивления материалов метод введения препаратов стабилизированной гиалуроновой кислоты с созданием дополнительных «ребер жесткости», применяемый для коррекции атрофических рубцов, морщин, устранения возрастного птоза мягких тканей лица и шеи, изменения формы губ, доказана его эффективность.

ПОЛОЖЕНИЯ ДИССЕРТАЦИИ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Кожа век человека имеет отличительные морфологические особенности в строении и распределении биоаминсодержащих веществ, что необходимо учитывать при эстетической коррекции дефектов внешности. Основными биоаминсодержащими структурами в ней являются нервные волокна, гранулярные люминес-цирующие клетки, тучные клетки, расположенные в виде цепочки под эпителием и в виде скоплений на границе с гиподермой, в области потовых желез и волосяных луковиц.

2. Введение геля стабилизированной гиалуроновой кислоты «Рес-тилайн» вызывает изменение содержания биогенных аминов во всех биоаминсодержащих структурах кожи век. Пик максимального их увеличения приходится на третьи сутки после введения геля: наблюдается накопление биоаминов нейтральными волосяными луковицами, изменение формы потовых и сальных желез, ускорение сульфатированности тучных клеток.

3. Введение геля стабилизированной гиалуроновой кислоты вызывает изменение корреляционных связей между всеми исследуемыми структурами кожи век, смену взаимоотношений между биогенными аминами в этих структурах и изменение направления серотонинового индекса.

4. Разработанная технология введения препарата позволяет удлинить время резорбции стабилизированной гиалуроновой кислоты в коже и улучшить эстетический эффект, при этом существенно не нарушая механизма саморегуляции в окружающих тканях.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Результаты исследования существенно расширяют представления о воздействии препаратов гиалуроновой кислоты на репаративные процессы в эпителии и соединительной ткани корректируемых зон, выявляя возможные механизмы функционирования систем, обуславливающих клиническую картину, наблюдаемую после инъекции. Полученные данные позволяют судить о степени безопасности препарата и прогнозировать вероятность развития осложнений.

Показано, что ферменты в основных биоаминсодержащих структурах участвуют в количественной регуляции биогенных аминов кожи, уменьшая или увеличивая их поступление в межтканевую среду, тем самым играя важную роль в процессах обмена и старения кожи.

Впервые доказано, что применение разработанной технологии введения ГСГК позволяет удлинить срок биодеградации геля в тканях, следствием чего является увеличение срока косметической коррекции, улучшение эстетического эффекта.

Полученные результаты используются в практике врачей эстетической медицины, освещены в лекциях, читаемых на кафедрах дерматологии; цитологии, эмбриологии, гистологии медицинского института при Чувашском государственном университете; институте усовершенствования врачей Минздрава ЧР, курсах усовершенствования врачей в Москве, Санкг - Петербурге; семинарах для косметологов и пластических хирургов.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Материалы промежуточных исследований доложены на ежегодных итоговых научно-практических конференциях Чувашского государственного университета (Чебоксары, 1978-1983, 2007), студенческих научно-практических конференциях КГУ (Киев, 1981) и УжГУ (Ужгород, 1982), П Национальном конгрессе эстетической медицины (Москва, 2002), V Всероссийской конференции «Бабухинские чтения» (Орел, 2006), конференции «Современные аспекты гистогенеза и вопросы преподавания гистологии в вузе» (Москва, 2007), V Всемирном конгрессе по иммунопатологии (Москва, 2007).

Основные положения диссертации отражены в 11 статьях, опубликованных в центральной печати, из них 3 - в изданиях, рекомендованных ВАК; подана заявка на рационализаторское предложение (2005).

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертационный материал изложен на 122 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и списка цитируемой литературы, содержащего 183 источника, из них 120-отечественных и 63-зарубежных. Диссертация иллюстрирована 9 таблицами, 37 рисунками и диаграммами.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Жирнова, Нина Станиславовна

ВЫВОДЫ

1. Кожа век имеет сглаженную базальную мембрану, эпителий, толщина которого в два раза меньше, чем на других участках лица, небольшое число ГЛК, размерами вдвое меньше стандартных (15 мкм вместо 30 мкм), большое число тучных клеток, находящихся около всех структур кожи, значительно меньшее число волосяных луковиц (1-2 вместо 3-4 на пять полей зрения), часть из которых не содержат амины, нервные терминали, хорошо выраженный слой гиподермы, часть клеток которого также не содержит амины.

2. Введение геля стабилизированной гиалуроновой кислоты «Рести-лайн» способствует увеличению содержания биогенных аминов во всех структурах кожи в течение первых двух-трех суток после инъекции. Наблюдается накопление биоаминов в неактивных волосяных фолликулах, изменение формы потовых желез. Увеличивается популяция тучных клеток в подэпителиаль-ном слое, около волосяных фолликулов, около сальных и потовых желез, в гиподерме. Происходит ускоренное созревание гепарина и досрочная дегрануля-ция тучных клеток. Введение «Рестилайна» создает условия для увеличения-числа митозов в фибробластах, тем самым стимулируя рост массы и изменение структуры коллагеновых и эластиновых волокон, способствуя качественному омоложению кожи и стимулируя ее регенерацию, что наблюдается в клинической практике.

3. Имплантация геля стабилизированной гиалуроновой кислоты способствует ослаблению или полному разрушению коррелляционных связей между биогенными аминами по всем исследуемым структурам, которые не всегда восстанавливаются к 10 суткам наблюдения. К третьим суткам после введения препарата происходит смена медиаторных взаимодействий в структурах кожи века.

4. Использование видоизмененной нами технологии введения гелей -филеров на основе стабилизированной гиалироновой кислоты с созданием «ребер жесткости» позволяет провести более полную эстетическую коррекцию внешности без дополнительных затрат препарата и пролонгировать срок резорбции геля из тканей, в среднем, на 40 %.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Поскольку введение ГСГК приводит в тканях к массивному выбросу биогенных аминов, провоцирующих развитие отека, гиперемии, повышению проницаемости сосудистой стенки, необходимо рекомендовать пациентам в первые десять суток после процедуры избегать воздействий, усугубляющих эти процессы - инсоляции, посещения сауны, приема антикоагулянтов, спиртных напитков.

2. Нежелательно вводить ГСГК пациентам с отягощенным аллергологиче-ским анамнезом, т.к. выявленные в ходе исследований изменения биоаминного статуса могут способствовать развитию у них тяжелых аллергических реакций.

3. Для предупреждения развития отека и гиперемии кожи после коррекции морщин ГСГК можно рекомендовать пациентам в первые трое суток использовать антигистаминные препараты для перорального и накожного применения.

4. Видоизмененную нами технологию введения ГСГК целесообразно использовать в практике врачей эстетической медицины в случаях, когда требуется коррекция большой площади и пролонгация косметического эффекта.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Жирнова, Нина Станиславовна, Москва

1. Лукашин Б.П., Ненарокова Л.И. Изменения процессов пролиферации и дифференцировки клеток костного мозга белых мышей под влиянием гепарина // Бюллетень эксперим. биологии и медицины.- 1977.-№ 6,- С. 736.

2. Учебное пособие // Омск, Омская гос. мед. академия, 2005.70 . Обрубов С.А., Виссарионов В.А. Эстетическая блефаропластика. // М.:

3. Фисенко Г.И., Бурылина О.М., Паркаева Л.В., Ермолаев В.К. с соавт. Эстетические недостатки кожи / Под ред. проф. В.А. Виссарионова .- М.: Издательство Бином.- 2006.- С. 18-23.

4. Фитцпатрик Д.Е. Дерматология: атлас-справочник.-Пер. с англ./Под ред. Е.П, Тимофеевой//М.: Практика, 1999.-1088 с.102 . Фитцпатрик Д.Е., Эллинг Д.Л. Секреты дерматологии: пер с англ. // М,

5. Швалев В.Н., Татарский Н.А., Шуклин А.В., Миролюбов Л.М. Новое в представлениях об онтогенезе вегетативной нервной системы. // Материалы V Всероссийской конференции «Бабухинские чтения в Орле»; Москва, 2006.- С.60-63.

6. Шехтер А.Б., Берченко Г.Н. Фибробласты и развитие соединительной ткани: ультраструктурные аспекты биосинтеза, фибриллогенеза и катаболизма коллагена // Архив патологии, 1978.-№8.- С. 70-80.

7. Шугинина Е. Инъекционные импланты- за и против // LNE, 2002.-№1С. 68-70116 .Шутова С.,Суслина И. Возраст и кожа, результаты морфофункциональ-ных исследований // LNE, 2006,- Т.6, №1 .-С. 16-19

8. Эрнандес Е. Биоинженерия в дерматологии и косметологии : методы исследования, перспективы. //Косметика и медицина, 2003.- Т.4.-С. 48-59.

9. Surgery. 2003. - 4(2). - P. 89-93126 • Bousquet M.-Th. and Agerup, B.// Lip Implantation: European Experience.

10. De Lorenzi C., Weinberg M., Solish N., Swift A. A multicenter study of the efficacy and safety of subcutaneous Restylane in aesthetic facial contouring: an interim report // Accecepted for publication in Dermatologic Syrgery. -2005

11. Maytin E., Child H., Seetharaman U. Hyaluronan participates in the epidermal responce to disruption of the permeability darrier in vivo // Am. J. Pathol., 2004.-№165.-P. 1331-1341.

12. Micheels P. Human anti hyaluronic acid antibodies: is it possible ?// Dermatol.Surg. 2001. - 27. - P. 185-191.

13. Aust J Biotechnol. 1990. - 4(1). - P. 38-43.180 • Wilkes Gl., Brown J., Widnauer R. The biomechanical properties of skin //