Морфофункциональная характеристика метаэпифизарного хряща большеберцовой кости после общего внешнего воздействия γ-излучения в среднелетальной дозе

Ирьянова, Татьяна Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Морфофункциональная характеристика метаэпифизарного хряща большеберцовой кости после общего внешнего воздействия γ-излучения в среднелетальной дозе
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Морфофункциональная характеристика метаэпифизарного хряща большеберцовой кости после общего внешнего воздействия γ-излучения в среднелетальной дозе"

На правах рукописи

Ирьянова Татьяна Юрьевна

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТАЭПИФИЗАРНОГО ХРЯЩА БОЛЬШЕБЕРЦОВОЙ КОСТИ ПОСЛЕ ОБЩЕГО ВНЕШНЕГО ВОЗДЕЙСТВИЯ У - ИЗЛУЧЕНИЯ В СРЕДНЕЛЕТАЛЬНОЙ ДОЗЕ (экспериментально-морфологическое исследование)

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

003452750

Саранск-2008

003452750

Работа выполнена в научном экспериментально-клиническом отделе морфологических исследований Федерального государственного учреждения «Российский научный центр «Восстановительная травматология и ортопедия» имени академика Г. А. Илизарова Росмедтехнологий», г. Курган

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Кирьянов Николай Александрович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Валиуллин Виктор Владимирович

доктор медицинских наук, профессор Янин Владимир Леонидович

Ведущее учреждение: ГОУВПО "Самарский государственный

медицинский университет "

Защита диссертации состоится «_5_» декабря 2008 г. в «_» часов

на заседании диссертационного совета Д. 212.117.01 при ГОУВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» по адресу: 430000, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» Автореферат диссертации опубликован на официальном сайте Мордовского государственного университета WWW.mrsu.ru Е-таЛгскоуеКа),mrsu.ru

Автореферат разослан «_»_2008 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор

Балашов В. П.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Проблема радиационных поражений приобрела за последние десятилетия особую актуальность во всем мире. Это связано с широким использованием ядерной энергии и радиоактивных веществ, как в военных целях, так и в промышленности, сельском хозяйстве, медицине, научно-исследовательских учреждениях (А. В. Аверьянова и др., 1992, В. А. Шевченко, 1996, Е. Ф. Романцев, 1996, В. Б. Нестеренко, 1997, А. Н. Стожаров и др., 2002, С. П. Ярмоненко, 1997, 2004, Г. М. Батян, 2005) Массовые поражения людей высокими дозами ионизирующей радиации происходят при проведении испытательных взрывов новых видов ядерного оружия, а также в результате аварий на АЭС. Радиационные катастрофы приводят к загрязнению окружающей среды. В результате чернобыльской катастрофы пострадали значительные территории, на которых проживает сотни тысяч человек (Ю. Б. Кудряшов, 2000, Л. М. Мажуль, 2000, А. Б. Кутузова, 2002, Я. В. Поровский и др., 2005). Особенно чувствительны к действию радиации растущие организмы, у которых облучение может замедлить или полностью остановить рост костей, вызвать аномалии развития скелета. (П. И. Лобко, 1992, В. Б. Нестеренко, 1997, С. МоЛекШ, 2002).

Известно, что рост костей обеспечивает метаэпифизарный хрящ. (Ю. И. Афанасьев и др., 1999, В. В. Семченко и др. 1999) Особенности репродукции и метаболизма хондроцитов метаэпифизарного хряща предопределяют интенсивность и продолжительность роста костей (В. Н. Павлова и др.,1988).

Анализ литературных данных свидетельствует, что вопросы морфогенеза лучевых поражений метаэпифизарного хряща практически не исследованы. В связи с этим, проведение настоящих исследований актуально и необходимо для решения ряда задач, имеющих не только фундаментально-теоретическое, но и практическое значение, в частности, для изучения механизмов радиационного воздействия на ростковые зоны костей и научного обоснования путей направленной стимуляции процессов восстановления пострадиационных сдвигов в организме

Цель исследования

Анализ морфофункциональных особенностей метаэпифизарного хряща болыиеберцовой кости крыс после общего внешнего воздействия у-излучения в среднелетальной дозе.

Задачи исследования

1. Провести клинико-физиологические исследования экспериментальных животных в различные периоды после воздействия у-излучения, выявить и проанализировать влияние у-излучения на рост болыпеберцовых костей.

2. Изучить морфометрические показатели и особенности строения ме-таэпифизарного хряща после воздействия у-излучения.

3. Изучить гистохимические показатели метаэпифизарного хряща после воздействия у-излучения.

4. Изучить особенности минерального состава метаэпифизарного хряща после воздействия у-излучения.

Научная новизна работы Впервые с помощью методов остеометрии, световой микроскопии, сканирующей электронной микроскопии, гистохимического, гисто-морфометрического и рентгеновского электронно-зондового микроанализа дана качественная и количественная характеристика морфогенеза лучевых повреждений метаэпифизарного хряща большеберцовой кости крыс, патологических и восстановительных процессов в метаэпифизар-ном хряще после острого лучевого поражения. Впервые показано, что общее воздействие у-излучения в среднелетальной дозе замедляет рост болыпеберцовых костей крыс, снижает темп увеличения их продольных размеров, объема, массы и плотности, что сопровождается изменением мофометрических показателей, строения и функции всех морфофункцио-нальных зон метаэпифизарного хряща. Впервые установлено, что толщина зон покоящегося, пролиферирующего и созревающего хряща значительно снижается, уменьшается численная плотность хондроцитов в них вследствие гибели части облученных клеток. Нарушается пролифератив-ная и биосинтетическая деятельность хондроцитов. Возрастает протяженность зоны кальцифицированного хряща, что связано с замедлением темпов минерализации хрящевого и костного матрикса. Впервые показано, что изменения химического состава метаэпифизарного хряща большеберцовой кости крыс после воздействия у-излучения характеризуются тем, что на начальном этапе лучевого поражения (1-5 суток после облучении) снижается содержание гиалуроновой кислоты, нуклеиновых кислот, серы и сульфатированных гликозаминогликанов, возрастает концентрация кальция и фосфора. В середине и конце экспериментального периода (15-30 суток после облучения) содержание кальция и фосфора в хряще снижается, увеличивается концентрация серы, сульфатированных гликозаминогликанов, гиалуроновой кислоты и нуклеиновых кислот, что

свидетельствует о репаративно-восстановительных процессах.

Приоритетность результатов проведенного исследования защищена охраноспособными документами - патентами на полезные модели: «Держатель образца для сканирующего электронного микроскопа и элек-тронно-зондового микроанализатора». Патент на полезную модель № 58027. Заявл. 04.07.2006; опубл. 10.11.2006. Бюл. № 31; «Предметный столик для замораживания образца к охлаждающему устройству для вакуумного напылителя». Патент на полезную модель № 72050. Заявл. 02.05.2007; опубл. 27.03.2008. Бюл. № 9. Разработаны усовершенствованные медицинские технологии:

«Гистологическая техника и методы окрашивания полутонких срезов костной ткани»; «Подготовка образца кости к исследованию в сканирующем электронном микроскопе».

Теоретическая и практическая значимость работы

1. Полученные новые знания о строении, функции, химическом составе и процессах минерализации метаэпифизарного хряща дополняют современные представления о его значении в формообразовательных процессах, в том числе и в условиях лучевого поражения и могут быть рекомендованы в учебные планы на биологических факультетах университетов, медицинских и ветеринарных академий, а также в учебные программы средней школы, например, по экологии.

2. Проведенные экспериментальные исследования метаэпифизарного хряща - уникальной самообновляющейся клеточной системы, нормально функционирующей в условиях тканевой и клеточной гипоксии, позволили установить перспективность этого научного направления в области фундаментальной и прикладной радиобиологии и более подробно изучить механизмы радиационного поражения ростковых зон костей и репарационные возможности хрящевой ткани с целью научного обоснования путей направленной стимуляции процессов коррекции пострадиационных сдвигов в гомеостазе организма.

3. Результаты проведенного исследования могут быть использованы в научно-исследовательской работе в морфологических и патомор-фологических лабораториях, как основа для осуществления дальнейших экспериментов по разработке новых методов диагностики и терапевтического воздействия при острой лучевой болезни, а также стимуляции процессов формообразования и регенерации при лучевых поражениях.

электронного микроскопа и электронно-зондового микроанализатора», «Предметный столик для замораживания образца к охлаждающему устройству для вакуумного напылителя» и усовершенствованные медицинские технологии: «Гистологическая техника и методы окрашивания полутонких срезов костной ткани», «Подготовка образца кости к исследованию в сканирующем электронном микроскопе», которые будут способствовать повышению эффективности научного процесса при проведении экспериментально-морфологических исследований. Актуально применение методик количественного анализа гистохимических препаратов при помощи рентгеновского электронно-зондового микроанализатора.

Основные положения, выносимые на защиту

1 .Общее внешнее воздействие у-излучения в среднелетальной дозе замедляет рост большеберцовых костей крыс, снижает темп увеличения их продольных размеров, объема, массы и плотности, что сопровождается изменением мофометрических показателей, строения и функции всех морфофункциональных зон метаэпифизарного хряща, нарушением пролиферативной и биосинтетической деятельности хондроцитов.

2. Общее внешнее воздействие у-излучения в среднелетальной дозе изменяет химический состав органического и минерального компонентов метаэпифизарного хряща большеберцовых костей крыс, что проявляется на начальном этапе лучевого поражения уменьшением содержания гиалуроновой и нуклеиновых кислот, серы и сульфатированных гликоза-миногликанов, увеличением концентрация кальция и фосфора, а в середине и конце экспериментального периода - увеличением концентрация серы, сульфатированных гликозаминогликанов, гиалуроновой и нуклеиновых кислот и снижением содержания кальция и фосфора.

Апробация работы

Апробация работы проведена в научном экспериментально-клиническом отделе морфологических исследований и на проблемной комиссии ФГУ «РНЦ «ВТО» им. акад. Г. А. Илизарова Росмедтехноло-гий». Основные положения и материалы диссертации доложены на 13 научных форумах: конференции с международным участием «Новые технологии в медицине», Курган, 2000; научно-практической конференции молодых ученых «Медицина в XXI веке: эстафета поколений», Курган, 2001; международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных», Троицк, 2001; международной дистанционной научно-

практической конференции «Современные информационные технологии в диагностических исследованиях», СИДТИ, Днепропетровск, 2002; XIII Российском симпозиуме по растровой электронной микроскопии и аналитическим методам исследования твердых тел, Черноголовка, 2003; Всероссийской научной конференции «Реактивность и пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях», Оренбург, 2003; научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы гистологии. Гистогенез и регенерация тканей», Санкт-Петербург, 2004; «Морфологические науки - практической медицине», Омск, 2004; XV Российском симпозиуме по растровой электронной микроскопии и аналитическим методам исследования твердых тел (РЭМ-2007), Черноголовка, 2007; Всероссийской научно-практической конференции «Клиника, диагностика и лечение больных с врожденными аномалиями развития», Курган, 2007; Всероссийской научно-практической конференции «Клеточные и нанотехнологии в биологии и медицине», Курган, 2007; международной гистологической конференции «Морфогенезы в эволюции, индивидуальном развитии и эксперименте», Тюмень, 2008; Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы экспериментальной биологии и медицины», Курган, 2008.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 28 работ, получены 2 патента на полезные модели.

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты работы используются при выполнении морфологических исследований в научном экспериментально-клиническом отделе морфологических исследований ФГУ «РНЦ «ВТО» им. академика Г. А. Илизарова Росмедтехнологий», включены в учебный план кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии Ижевской государственной медицинской академии. Диссертационная работа является частью комплексного исследования, проводимого по основному плану НИР ФГУ «РНЦ «ВТО» им. акад. Г. А. Илизарова Росмедтехнологий» на тему «Разработка методов стимуляции процессов формообразования и регенерации при лучевом поражении» № 35/1. Соглашение 06/1027 от 13.07. 2006 г., № гос. регистрации 0120.0 802850. Материалы работы включены в 2 заключительных отчета НИР ФГУ «РНЦ «ВТО» им. академика Г.А. Илизаров Росмедтехнологий»: «Разработка способов и устройств для создания в организме дополнительных очагов кроветворения». - Курган, 2000. - 36 с. № гос.

регистрации 01.9.800.04838; «Разработка способа стимуляции кроветворения и исследование функциональной морфологии костеобразования после лучевого поражения». - Курган, 2005. - 59 с. Подготовлены 2 усовершенствованные медицинские технологии: «Гистологическая техника и методы окрашивания полутонких срезов костной ткани», «Подготовка образца кости для сканирующей электронной микроскопии, которые используются в научном экспериментально-клиническом отделе морфологических исследований ФГУ «РНЦ «ВТО» им. академика Г. А. Илизарова Росмедтехнологий».

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, заключение, выводы, практические рекомендации, список литературы и приложение. Список литературы включает 249 источников, из которых 156 отечественных и 93 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 45 рисунками, цифровой материал исследований представлен 15 таблицами. Диссертационная работа выполнена по основному плану НИР ФГУ «РНЦ «ВТО» им. акад. Г. А. Илизарова Росмедтехнологий». № гос. регистрации 0120.0 02850.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования

В работе использовали 90 крыс-самцов линии Вистар в возрасте 4 и 5 месяцев с исходной массой тела 230 - 240 г., которые были распределены на две группы: контрольная и опытная. Контрольная группа состояла из 30 интактных крыс в возрасте 4 месяца (12 животных) и 5 месяцев (18 животных). В опытную группу входили 60 облученных крыс в возрасте 4 месяца. Распределение животных по срокам эксперимента представлено в таблице.

Таблица

Распределение животных по срокам эксперимента _

Период исследования, сутки после облучения 1 3 5 10 15 20 30

Количество животных 8 7 9 11 7 7 11

Общее внешнее воздействие у-излучения осуществляли при помощи лучевой терапевтической установке АГАТ-PI, с использованием источника излучения 60Со, в дозе 7,0 Гр и мощностью дозы 0,78 Гр/мин. Крыс опытной группы, выживших после облучения, эвтаназировали через 1,3, 5, 10, 15, 20 и 30 суток после воздействия у-излучения. В случае гибели животных фиксировали время, прошедшее после облучения и определяли среднюю продолжительность жизни облученных животных. Определяли прирост массы тела, измеряли температуру тела электронным термометром DT-635 (Япония). Из хвостовой вены забирали кровь для гематологических исследований и определяли содержание в крови форменных элементов: эритроцитов, ретикулоцитов, лейкоцитов, лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов, сегментоядерных и палочкоядерных нейтрофилов. Мазки крови окрашивали по Романовскому-Гимзе, бриллиантовым кре-зиловым синим для выявления ретикулоцитов. Количество лейкоцитов определяли в камере Горяева, содержание эритроцитов - при помощи фотоэлектрического эритрогемометра типа КФК-3.

Крыс эвтаназировали передозировкой эфирного ингаляционного наркоза, соблюдая требования приказа МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г. Болыиеберцовые кости вычленяли в коленном и голеностопном суставах, определяли их длину, массу, объем и плотность, фиксировали и заливали в аралдит и парафин. На микротоме Gistorange microtome (LKB «Bromma-2218», Швеция) изготавливали парафиновые срезы проксимальных мета-эпифизов, ориентированные параллельно длинной оси кости в сагиттальной плоскости. Парафиновые срезы окрашивали: 1) - гематоксилином-эозином (обзорная методика); 2) - по Ван-Гизону (выявление коллагено-вых структур); 3) - по методу ШИК-реакция - альциановый синий (цветная дифференцировка костной и хрящевой тканей, выявление гликопро-теинов и гликозаминогликанов); 4) - альциановым синим при рН 2,5 (выявление несульфатированных гликозаминогликанов (гиалуроновой кислоты); 5) - альциановым синим при рН 1,0 (выявление сульфатирован-ных гликозаминогликанов; 6) - галлоцианин-хромалауном при рН 1,5 -1,7 - на нуклеиновые кислоты; 7) - амидо-черным 10Б (выявление суммарных белков).

Содержание гликозаминогликанов и нуклеиновых кислот в гистохимических препаратах оценивали, используя рентгеновский электронно-зондовый микроанализатор INCA-200 (Англия), установленный на сканирующем электронном микроскопе JSM-840 (Япония). В метаэпифизар-ном хряще при помощи электронно-зондового микроанализатора определяли концентрацию химических элементов: фосфора, серы, и кальция.

Получали также изображения различных участков образца в характеристическом рентгеновском излучении кальция (карты электронно-зондового микроанализа) с результатами линейного сканирования.

Световую микроскопию гистологических препаратов осуществляли при помощи светового микроскопа BIOLAR (Польша). Микрофотографирование препаратов производили при помощи цифровой камеры-окуляра Digital Camera for Microscope DCM 300 (USB 2,0) и цифровой веб-камеры Mustek при увеличениях 300 и 600. Цито- и фиброархитекто-нику метаэпифизарного хряща исследовали при помощи сканирующего электронного микроскопа JSM-840 (Япония). При помощи проекционного микроскопа Visopan Reichert Jung (Австрия) производили следующие измерения: определяли общую толщину метаэпифизарного хряща и всех четырех его морфологических зон (покоящегося, пролиферирующего, созревающего и кальцифицированного хряща), численную плотность хондроцитов (количество хондроцитов на единице площади 2500 мкм2) в зонах покоящегося, пролиферирующего и созревающего хряща, численную плотность колонок пролиферирующих хондроцитов и максимальный диаметр лакун гипертрофированных хондроцитов в зоне кальцифицированного хряща.

Количественные данные подвергали статистической обработке. Достоверность различий сравниваемых параметров рассчитывали с использованием t - критерия Стьюдента. Расчеты производили на персональном компьютере IBM PC, при помощи пакета статистических программ «Microsoft Office Excel 2003.

Результаты собственных исследований.

Установлено, что летальность у облученных животных составила 52,2%, прирост массы тела через 30 суток составил 17,06±0,9 г, или 9,6±0,4 %, что почти в 2 раза меньше по сравнению с контролем (Р<0,001). Температура тела у облученных животных на следующие сутки после облучения незначительно повышалась (рис. 1). На 2-3-и сутки наступала фаза мнимого клинического благополучия, и температура тела нормализовалась. Через 5 суток наступала фаза разгара острого лучевого поражения, которая продолжалась до 10 - 15 суток. Температура тела повышалась до 38,2.° У выживших животных через 20-30 суток после облучения наступала фаза восстановления. Температура постепенно нормализовалась.

Рис. 1. Динамика изменений температуры тела облученных животных. • - достоверные изменения, о - недостоверные изменения

20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0

Количество клеток

• * ^ Ретикулоцить

У -- . 0,5%.

* у

-О- * * . - _г? Лейкоциты

____6 ----— Ю'ТпГ

Эритроциты

V«- -•-т-«— - -1»

»--- — —" 10,2/л.

3 10 20 Время после облучения, сутки; • - достоверные изменения;

О - недостоверные

Рис. 2. Динамика изменений основных гематологических показателей у облученных животных

Характерная динамика основных гематологических показателей у облученных животных (рис. 2) свидетельствует о развитии острого лучевого поражения. Установлено резкое, почти в 3 раза снижение численности лейкоцитов через 3 и 10 суток после облучения. Обнаружено постепенное снижение количества эритроцитов, особенно - на 20-е и 30-е сутки после облучения. Отмечается резкое увеличение количества ретику-лоцитов на 20-е сутки после облучения. Сканирующая электронная микроскопия красного костного мозга в метафизах выявила клеточное опустошение и замещение кроветворной ткани жировой у облученных животных, что указывает на развитие костномозгового синдрома острого лучевого поражения.

Остеометрические исследования показали, что у облученных животных снижаются значения длины, объема, массы и плотности костей по сравнению с аналогичными показателями у интактных животных. Длина костей в опыте составляет 90,9%, масса - 82,9%, объем - 68,2%, плотность - 91,2 % показателей в контроле (рис. 3). У облученных животных темпы прироста длины костей составляют 38,5%, массы - 47%, объема -27,6%, плотности - 20% контрольных показателей (рис. 4). Таким образом, установлено, что воздействие общего у-излучения в среднелетальной дозе замедляет рост болынеберцовых костей.

а б в г

Рис. 3. Изменение длины (а), массы (б), объема (в) и плотности (г) болынеберцовых костей облученных крыс по сравнению с контролем

О .................-----------------------------~---Г........-................,--------------

а 6 в г

Рис. 4. Изменение месячных темпов прироста длины (а), массы (б), объема (в) и плотности (г) болыпеберцовых костей облученных крыс по сравнению

с контролем

Гистологическими исследованиями установлено, что под воздействием у-излучения наблюдаются существенные изменения морфометри-ческих показателей метаэпифизарного хряща, которые отмечаются на протяжении всех сроков исследования, протекают неравномерно, волнообразно и носят в основном однотипный характер, свидетельствующий о развивающихся деструктивных и гипопластических процессах.

Общая толщина метаэпифизарного хряща уже на ранних этапах лучевого поражения достоверно снижается (рис. 5, 6). Минимальных значений этот показатель достигает через 5 и 15 суток после облучения. Уменьшается толщина трех из четырех его морфологических зон (рис. 7). Толщина зоны кальцифицированного хряща через 1 сутки после облучения снижается, затем существенно увеличивается, через 15 суток вновь снижается и через 30 суток значительно возрастает.

Рис. 5. Метаэпифизарный хрящ большеберцовых костей кзрыс в контроле (а) и через 1 сутки после воздействия у-излучения (б). Значительное сокращение толщины хряща. Контур границы между эпифизарной костью и хрящом приобретает у облученных животных фестончатую форму (стрелки). Окраска альциановым

синим-ШИК. Об. 20, ок. 15

о 500 О-

£ 98

2 а

II-

52 X & О I—

„

X та 5- а:

3 х

С $0 то

О 40

Контроль

♦—

1 3

15 20

Время после облучения, сути» • -достоверны« шм«нения. о - недостоверные ишенения

Рис. 6. Динамика изменений общей толщины метаэпифизарного хряща большеберцовых костей крыс после воздействия у-излучения

х »80

Я-

ч о:

9-й

1§,го я -С

1 / Контроль

** . V ------- — А 1V.

ч-

х«

Времягтосле облучения, сутки 9 - достоверные и!гл«иения. о -недостоверные ишенения

Рис. 7. Динамика изменений толщины зон метаэпифизарного хряща большеберцовых костей крыс после воздействия у-излучения: 1 - зона покоящегося хряща; 2 — зона пролиферирующего хряща; 3 - зона созревающего хряща; 4 - зона кальцифицированного хряща В период 3, 5 суток после воздействия у-излучения общая толщина метаэпифизарного хряща составляет 54-55 % от контрольных показателей (Р<0,01). Толщина зон покоящегося, пролиферирующего и созревающего хряща варьирует от 36 % до 56 % контрольных значений (Р<0,01). Толщина зоны кальцифицированного хряща через 5 суток после облучения возрастает до 112,5 % от значений в контрольной группе (Р<0,05).

Проведенные исследования показали постепенное, волнообразное, сокращение доли покоящегося хряща и увеличение кальцифицированного хряща. К концу эксперимента эти показатели отличаются от кон-

трольных значений в 2-3 раза. Менее значительно изменяется доля созревающего хряща, которая максимально сокращается через 3, 10 и 30 суток эксперимента. В то же время доля пролиферативной зоны практически не изменяется по сравнению с контролем, что свидетельствует о сохранении способности метаэпифизарного хряща облученных животных к росту.

ее

100

с; 30 л о

г". 80

о Ь £ 3

т о 50 № о

I = «о

ш з-

^ о 30 о О.

= а га

X 10 0

\ Контроль

\\ р

........." —.'ей*"" - #« "л-"*

1 2

10 15 20

за

Время после облучения, сутки Ф -достоверныеизменения, о •недоетоверныеимиенемия

Рис. 8. Динамика изменений численной плотности хондроцитов в зонах метаэпифизарного хряща болынеберцовых костей крыс после воздействия у-излучения: 1 - зона покоящегося хряща; 2 - зона пролиферирующего

хряща; 3 - зона созревающего хряща У облученных животных обнаружена характерная динамика изменений численной плотности хондроцитов в зонах покоящегося, пролиферирующего и созревающего хряща (рис. 8). В начальном периоде лучевого поражения, через 1 и 3 суток после облучения происходит резкое, в 2-3 раза снижение этих показателей, вследствие гибели части хондроцитов. после чего показатели возрастают г'орез 5 и 10 суток, но остаются ниже контрольных значений. Еще более резкое снижение отмечается через 15 суток после облучения. Затем численная плотность хондроцитов постепенно восстанавливается, хотя и остается ниже контрольных значений. Аналогичным образом изменяется и численная плотность колонок хондроцитов в зоне пролиферации. После воздействия у-излучения через 1 и 3 суток наблюдается тенденция к увеличению максимального диаметра лакун гипертрофированных хондроцитов, а через 5-20 суток сдвиги этого параметра приобретают достоверный характер, свидетельствуя об увеличение продолжительности периода жизнедеятельности гипертрофированных хондроцитов, появлении после облучения гигантских клеток и развитии регенерационных процессов, направленных на стимуляцию ин-терстициального роста хряща.

У облученных животных нарушается цитоархитектоника проли-

феративной зоны. Сокращается протяженность колонок клеток, изменяется их ориентация. Отмечается гибель части пролиферирующих и созревающих хондроцитов. При этом формируется клеточный детрит, который обнаруживается в бесклеточных лакунах эллипсоидной и щелевидной формы (рис. 9 а). Доминирующим компонентом детрита являются округлые остатки клеточных тел, окруженные колагеновыми волокнами и фибриллами территориального матрикса. После воздействия гамма-излучения граница зоны покоящегося хряща с эпифизарной костью приобретает фестончатую форму, появляются очаговые деструктивные повреждения хряща. Они представлены разломами и расщеплениями хряща на границе с эпифизарной костью (рис. 10 а). Отмечается разволокнение и расщепление пучков коллагеновых волокон (рис. 10 б).

Рис. 9. Метаэпифизарный хрящ большеберцовых костей крыс через 1 сутки после воздействия у-излучения. а - бесклеточные лакуны (черные стрелки) и остатки клеточных тел (черная стрелка), б - экстравазальные эритроциты (стрелки). Электронные сканограммы

Рис. 10. Метаэпифизарный хрящ большеберцовых костей крыс через 3-е суток после воздействия у-излучения. а - очаговые повреждения матрикса (стрелки) на границе с эпифизарной костью; б - расщепление пучков коллагеновых волокон.

Электронные сканограммы

В матриксе хряща, вблизи очагов деструкции, выявляются участки микрогеморрагий в виде одиночных, свободно лежащих экстравазаль-ных эритроцитов (рис. 9 б). Через 20 и 30 суток после воздействия у-излучения выявляются признаки репаративно-восстановительных процессов в зонах покоящегося, пролиферирующего и созревающего хряща, о чем свидетельствует появление очагов пролиферации хондроцитов на границах с эпифизарной и метафизарной костью, и формирование колбо-образных разрастаний хряща в эпифиз и метафиз.

В зоне пролиферации хряща после облучения появляются единичные многоядерные гигантские клетки, которые тесно прилегают друг к другу. Ядра клеток выглядят пикнотичными, ядрышки в них не обнаруживаются. Исследования, выполненные при помощи сканирующей электронной микроскопии, выявили в поврежденных хондроцитах облученных животных ряд ультраструктурных особенностей, свидетельствующих о нарушениях биосинтетических и секреторных процессов. Хроматин в ядрах поврежденных хондроцитов конденсируется в виде глыбок функционально не активного гетерохроматина, ядерная мембрана уплотнена и фрагментирована. Отмечается вакуолеподобное расширение цистерн гранулярного эндоплазматического ретикулума и структур ком-лекса Гольджи, что свидетельствует о снижении активности секреторных процессов в хондроцитах. Через 20 и 30 суток после облучения появляются участки синостозов, где костная ткань эпифиза соединяется с костными трабекулами метафиза, что свидетельствует о процессах ускоренного радиационного старения хряща (рис. 11).

Гистохимические исследования показали, что после воздействия гамма-излучения резко сокращается содержание гиалуроновой кислоты в метаэпифизарном хряще и особенно на начальном этапе лучевого поражения. Уменьшение концентрации гиалуроновой кислоты после облучения отмечается в зонах покоящегося и пролиферирующего хряща, что обусловлено резким клеточным опустошением этих участков и деполимеризацией гиалуроновой кислоты. Через 1 сутки после облучения содержание гиалуроновой кислоты в метаэпифизарном хряще снижается более чем в три раза - до 28,6 % контрольных значений. Особенно значительное снижение наблюдается через 3 суток, когда этот показатель достигает минимальных значений - 19,6 % от контроля. Затем содержание гиалуроновой кислоты постепенно увеличивается и через 30 суток достоверно не отличается от контроля.

количество импульсов

1 500шт 1 СаКа'

Рис. 11. Распределение кальция в метаэпифизарном хряще большеберцовой кости крысы через 30 суток после воздействия у-излучения. Стрелками отмечен участок синостоза. Изображение в характеристическом рентгеновском излучении кальция с результатами линейного сканирования

Уже на ранних этапах лучевого поражения отмечается изменение содержания сульфатированных гликозаминогликанов в метаэпифизарном хряще (рис. 12). В течение эксперимента этот показатель изменяется волнообразно. На начальном этапе отмечается резкое снижение, затем постепенное увеличение и через 10-30 суток - вновь резкое увеличение содержания сульфатированных гликозаминогликанов. Через 1 сутки после облучения содержание сульфатированных гликозаминогликанов уменьшается до 47,1 % от контрольных значений. Через 3 и 5 суток этот показатель несколько увеличивается, а через 10, 15, 20 и 30 суток возрастает более чем вдвое по сравнению с контролем.

г£ з

5 О. р- .

& з: з

13$

Контроль

3 5 I» 15

Время после облучения, сутки

Рис. 12. Динамика изменений содержания сульфатированных гликозаминогликанов в метаэпифизарном хряще большеберцовых костей крыс после воздействия у-излучения

Содержание нуклеиновых кислот в метаэпифизарном хряще (рис. 13) через 1 сутки после облучения уменьшается более чем в два раза - на 69,2 % контрольных значений, что является следствием уменьшения численной плотности хондроцитов и уровня их биосинтетической активности. Через 3 и 5 суток после облучения наблюдается дальнейшее снижение содержания нуклеиновых кислот, через 10 суток отмечается увеличение, а через 15 суток - резкое падение этого показателя. Через 20-30 суток содержание нуклеиновых кислот восстанавливается практически до контрольного уровня и даже несколько превосходит его.

_ SSits

Ol»

с g ; У й §100 й *

а S^ es

S 5 %

Е?3 я

с ™ *

5.S-P SS

saä

§.с 3- 25 <" iS 5

Ш10

и 1 у Л

Г Контроль У

\ /

•

\ ^ /

V— . ... , . __«

1 г 5 10 15 20

Время после облучения, сутки • - достоверные тменения. о- недостоверные мшснения

Рис. 13. Динамика изменений содержания нуклеиновых кислот в зонах пролиферации и созревания метаэпифизарного хряща большеберцовых костей крыс после воздействия у-излучения Результаты рентгеновского электронно-зондового микроанализа метаэпифизарного хряща свидетельствуют, что под воздействием у-излучения происходят значительные изменения в содержании и распределении кальция, фосфора (рис. 14) и серы. На начальных этапах эксперимента (1-5 сутки после облучения) наблюдается декальцинация кальцифицированного слоя зоны покоящегося хряща, аккумуляция кальция и фосфора в остальных зонах хряща и резкое снижение содержания в них серы. С 10 суток после воздействия у-излучения снижается содержание кальция и фосфора в хряще и резко увеличивается концентрация серы. Эти изменения нарастают к 30-м суткам.

Величина показателя Са/Р, указывающая на качественный состав апатита, т.е на соотношение доли растворимого кальцийфосфата и доли нерастворимого гидроксиапатита, в метаэпифизарном хряще в опыте сохраняется на уровне контроля в начальной фазе лучевого поражения, в течение первых 3-х суток. Затем, начиная с 5-х суток после облучения, этот показатель снижается, достигая 82,6±4,2 % контрольного уровня на 20-30-е сутки эксперимента, что свидетельствует о повышении доли растворимого кальцийфосфата и уменьшении доли нерастворимого гидроксиапатита.

Время после облучения, сутки • - достоверные ишмнвния. о •нсдвствидишскпюишм

Рис. 14. Динамика изменений содержания кальция, фосфора и соотношения кальция и фосфора в метаэпифизарном хряще после воздействия у-излучения: 1 - кальций; 2 - фосфор; 3 - кальций/фосфор

ВЫВОДЫ

1. Доза 7,0 Гр общего внешнего у-излучения является среднеле-тальной дозой для крыс-самцов линии Вистар, вызывает развитие костномозгового синдрома острого лучевого поражения вследствие повреждения кроветворных и стромальных клеток красного костного мозга, замедляет рост большеберцовых костей и снижает темп прироста их продольных размеров, объема, массы и плотности.

2. В результате воздействия общего у-излучения в среднелеталь-ной дозе мофометрические показатели метаэпифизарного хряща больше-берцовой кости крыс претерпевают изменения, свидетельствующие о нарушении его строения и функции: а) толщина зон покоящегося, пролифе-рирующего и созревающего хряща снижается, уменьшается численная плотность хондроцитов вследствие гибели части облученных клеток; б) увеличивается протяженность зоны кальцифицированного хряща, что связано с замедлением темпов минерализации; в) в матриксе хряща появляются экстравазальные эритроциты и очаги повреждений; г) пучки кол-лагеновых волокон расщепляются на отдельные коллагеновые волокна и фибриллы; д) изменяется цитоархитектоника пролиферативной зоны, нарушаются биосинтетические и секреторные процессы в хондроцитах; е) через 20-30 суток после облучения появляются очаги пролиферации хондроцитов на границе с эпифизарной и метафизарной костью и формируются врастания хряща в эпифиз и метафиз.

3. После воздействия общего у-излучения в среднелетальной дозе

происходят изменения химического состава органических компонентов метаэпифизарного хряща большеберцовой кости крыс, которые осуществляются волнообразно: а) на начальном этапе лучевого поражения (1-5 суток после облучения) снижается содержание сульфатированных глико-заминогликанов, гиалуроновой и нуклеиновых кислот; б) в середине и конце экспериментального периода (15-30 суток после облучения) в результате репаративно-восстановительных процессов увеличивается концентрация сульфатированных гликозаминогликанов, гиалуроновой и нуклеиновых кислот. Снижение концентрации гиалуроновой кислоты является одним из факторов, обусловливающих нарушение надмолекулярной структуры коллагеновых комплексов матрикса метаэпифизарного хряща большеберцовой кости крыс после облучения.

4. Под воздействием общего у-излучения в среднелетальной дозе в метаэпифизарном хряще большеберцовой кости крыс происходят изменения в содержании и распределении кальция, фосфора и серы: а) на 1-5 сутки после облучения наблюдается декальцинация кальцифицированно-го слоя зоны покоящегося хряща, увеличение концентрации кальция и фосфора в остальных зонах и снижение содержания в них серы; б) с 10-х суток после облучения содержание кальция и фосфора в метаэпифизарном хряще большеберцовой кости крыс уменьшается, при этом повышается доля растворимого кальцийфосфата, увеличивается концентрация серы, что свидетельствует о торможении процессов минерализации метаэпифизарного хряща после облучения; в) к концу эксперимента (30 суток после облучения) содержание кальция и фосфора в метаэпифизарном хряще большеберцовой кости крыс приближается к контрольным значениям, а концентрация серы более чем вдвое превосходит его.

Практические рекомендации

1. Разработанная методика использования лучевой терапевтической установки АГАТ-Р1 для осуществления общего внешнего воздействия у-излучения на крыс перспективна при проведении различных экспериментальных исследований в области радиобиологии.

2. Проведение экспериментальных исследований, с использованием метаэпифизарного хряща - уникальной самообновляющейся клеточной системы, нормально функционирующей в условиях тканевой и клеточной гипоксии, является перспективным научным направлением в области фундаментальной и прикладной радиобиологии и позволит более подробно изучить репарационные возможности хрящевой ткани и механизмы лучевого поражения ростковых зон костей и модифицирующего влияния кислорода.

3. Разработанный метод рентгеновского электронно-зондового микроанализа парафиновых срезов, окрашенных гистохимическими красителями, позволяет осуществлять количественные гистохимические исследования и может быть предложен к использованию для оценки уровня метаболической активности различных тканей и клеток организма в клинике и эксперименте.

4. Разработанные в ходе выполнения диссертационной работы новые устройства: 1) «Держатель образца для сканирующего электронного микроскопа и электронно-зондового микроанализа» (Патент № 58027) и 2) «Предметный столик для замораживания образца к охлаждающему устройству для вакуумного напылителя» (Патент № 72050) могут быть рекомендованы для использования при проведении научно-исследовательских экспериментально-морфологических работ.

5. Разработанные усовершенствованные медицинские технологии: «Гистологическая техника и методы окрашивания полутонких срезов костной ткани», «Подготовка образцов кости к исследованию в сканирующем электронном микроскопе» предназначены для врачей и научных работников - медиков и биологов различных специальностей и могут быть использованы в научно-исследовательской работе и в диагностической практике в морфологических и патоморфологических лабораториях и в бюро судебной медицины.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ирьяиова Т. Ю. Устройство и способ для создания в организме дополнительных очагов кроветворения // Новые направления в клинической медицине: материалы Всероссийской конференции. - Ленинск-Кузнецкий, 2000. - С. 143-144. (соавт. Ирьянов Ю. М., Петровская Н. В).

2. Ирьянова Т. Ю. Устройство для биопсии костной ткани // Гений ортопедии. - 2001. - № 4. - С. 112-113. (соавт. Ирьянов Ю. М., Наумов Е. А., Горбач Е. Н., Силантьева Т. А.).

3. Ирьянова Т. Ю. Устройство для внутрикостных инъекций // Свидетельство на полезную модель № 20834. Российская Федерация МКП7 А 61 В 17/34. № 2002226877/20; заявл. 14.06.2001, опубл. 10.12.2001, Бюл. № 34. (соавт. Ирьянов Ю. М., Наумов Е. А., Очеретина И. Г.).

4. Ирьянова Т. Ю. Устройство для внутрикостных инъекций // Гений ортопедии. - 2002. - № 1. - С. 141. (соавт. Ирьянов Ю. М., Наумов Е. А., Очеретина И. Г.).

5. Ирьянова Т. Ю. Компьютерные программы, электронно-зондовый микроанализ и электронная микроскопия при исследовании дистракци-онных регенератов; в кн.: Современные информационные технологии в диагностических исследованиях: международная конференция Днепропетровск, 2002, С. 121-125. (соавт. Ирьянов Ю. М.).

6. Ирьянова Т. Ю Ультраструктурные маркеры остеогенных клеток // Морфологические ведомости. -2003. - № 1-2. - С. 16-18. (соавт. Ирьянов Ю. М.)

7. Ирьянова Т. Ю. Применение компьютерных программ для анализа изображений в морфологических исследованиях // Информационные технологии в кибернетике на службе здравоохранения: Днепропетровск, ИПК ИнКомЦентра УГХТУ, 2003. - С. 55-58. (соавт. Ирьянов Ю. М„ Силантьева Т. А., Горбач Е. Н., Осипова Е. В.).

8. Ирьянова Т. Ю. Особенности проведения радиобиологических экспериментов на крысах линии «Август» // Актуальные вопросы ветеринарной медицины мелких домашних животных: материалы VI Всероссийской конференции. - Екатеринбург, 2004. Вып. 6. - С. 106-110. (соавт. Шевцов В. И., Ирьянов Ю. М., Петровская Н. В., Изотова С. П., Чепелева М. В.).

9. Ирьянова Т.Ю. Устройство для ротационной остеоклазии. Патент на полезную модель № 39061. Заявка № 2004104064. Приоритет полезной модели 11 февраля 2004 г. Зарегистрировано в Государственном реестре полезных моделей Российской Федерации 20 июля 2004 г. Заявл. 11.02.2004; опубл. 20.07.2004. Бюл. № 20. (соавт. Ирьянов Ю.М., Наумов Е. А.).

10. Ирьянова Т. Ю. Методика моделирования острой лучевой болезни у крыс линии Август // Современные наукоемкие технологии. - 2004. - № 1. - С. 95. (соавт. Шевцов В. И., Ирьянов Ю. М., Петровская Н. В., Мигал-кин Н. С., Очеретина Р. Ю.).

11. Ирьянова Т. Ю. Обработка и анализ изображений в гистологических исследованиях с применением стандартных компьютерных программ // Морфологические ведомости. - 2004. - № 1-2. - С. 11-13. (соавт. Ирьянов Ю. М., Силантьева Т. А., Горбач Е. Н., Осипова Е. В.).

12. Ирьянова Т. Ю. Выживаемость и особенности роста крыс при острой лучевой болезни после повреждений берцовых костей // Морфофункцио-нальные аспекты регенерации и адаптационной перестройки структурных компонентов опорно-двигательного аппарата в условиях механических воздействий: материалы международной научно-практической конференции. - Курган, 2004 г. - С. 127-130. (соавт. Шевцов В. И., Ирьянов Ю. М., Петровская И. В.).

13. Ирьянова Т. Ю. Рекомендации по разведению крыс линии Август в условиях вивария РНЦ «ВТО» // Успехи современного естествознания. -2004. - № 1. - С. 59. (соавт. Ирьянов Ю. М., Очеретина Р. Ю., Петровская Н. В.).

14. Ирьянова Т. Ю. Переносной аппаратно-программный комплекс и возможности его применения в гистологических исследованиях // Гений ортопедии. - 2004 - № 3. С. 96-98. (соавт. Ирьянов Ю. М., Силантьева Т. А., Горбач Е. Н.).

15. Ирьянова Т. Ю. Влияние гамма-излучения на минерализацию длинных трубчатых костей у крыс // Морфологические ведомости. - 2005. - № 3-4. - С. 38-40. (соавт. Ирьянов Ю. М.).

16. Ирьянова Т. Ю. Рост костей при острой лучевой болезни // Журнал Российской ассоциации по спортивной медицине и реабилитации больных и инвалидов. - М., 2005. - № 3 (16). - С. 23.

17. Ирьянова Т. Ю. Морфофункциональная характеристика ростковых зон длинных трубчатых костей крыс после общего гамма-облучения // Морфологические ведомости. - 2006. - № 1-2. - С. 112-114. (соавт. Ирьянов Ю. М.).

18. Ирьянова Т. Ю. Держатель образца для сканирующего электронного микроскопа и электронно-зондового микроанализатора. Патент на полезную модель № 58027. Заявка № 2006123916. Приоритет полезной модели 04 июля 2006 г. Зарегистрировано в Государственном реестре полезных моделей Российской Федерации 10 ноября 2006 г. Заявл. 04.07.2006; опубл. 10.11.2006. Бюл. № 31. (соавт. Ирьянов Ю. М., Наумов Е. А.).

19. Ирьянова Т. Ю. Морфофункциональная характеристика ростковых зон костей крыс в раннем восстановительном периоде при острой лучевой болезни // Морфологические ведомости. - 2007. - № 1-2. - С. 60-62. (соавт. Ирьянов Ю. М., Изотова С. Н.).

20. Ирьянова Т. Ю. Ультраструктурное и гистохимическое исследование процесса минерализации метаэпифизарного хряща при острой лучевой болезни // Клеточные и нанотехнологии в биологии и медицине: материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Курган, 2007. (соавт. Ирьянов Ю. М.).

21. Ирьянова Т. Ю. Функциональная морфология ростковых зон длинных трубчатых костей крыс в период восстановления после острой лучевой болезни // Клиника, диагностика и лечение больных с врожденными аномалиями развития: материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Курган, 2007. - С. 85. (соавт. Ирьянов Ю. М., Изотова С. П.).

22. Ирьянова Т. Ю. Морфологический анализ субстрата, обеспечивающего напряжение растяжения и формообразовательные процессы в ростковых зонах длинных трубчатых костей у крыс // Клиника, диагностика и лечение больных с врожденными аномалиями развития: материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Курган, 2007. - С. 84. (соавт. Ирьянов Ю. М.).

23. Ирьянова Т. Ю. Стереоультраструктурная характеристика и элек-тронно-зондовый микроанализ хрящевого матрикса метаэпифизарной пластинки роста у крыс // Морфологические ведомости. - 2007. - № 3-4. -С. 20-23. (соавт. Ирьянов Ю. М.).

24. Ирьянова Т. Ю. Морфометрические показатели метаэпифизарной хрящевой пластинки роста на ранних этапах лучевого поражения // Морфологические ведомости. - 2007. - № 3-4. - С. 23-24 (соавт. Ирьянов Ю. М.).

25. Ирьянова Т. Ю Предметный столик для замораживания образца к охлаждающему устройству для вакуумного напылителя. Патент на полезную модель № 72050. Заявка № 2007116564/22 от 02.05.2007. Приоритет полезной модели 02 мая 2007 г. Зарегистрировано в Государственном реестре полезных моделей Российской Федерации 27 марта 2008 г. Заявл. 02.05.2007; опубл. 27.03.2008. Бюл. № 9. (соавт. Ирьянов Ю. М., Наумов Е. А.).

26. Ирьянова Т. Ю. Влияние общего гамма-облучения на процессы косте-образования // Морфология. - 2008. - т. 133. - № 3. - С. 49-50.

27. Ирьянова Т. Ю. Влияние общего внешнего воздействия гамма-излучения в средней летальной дозе на остеометрические показатели

большеберцовых костей // Актуальные вопросы экспериментальной биологии и медицины : Материалы II съезда травматологов-ортопедов Уральского федерального округа. - Курган, 2008. - С. 35. 28. Ирьянова Т. Ю. Ультраструктурное и гистохимическое исследование процесса минерализации метаэпифизарного хряща при острой лучевой болезни // Гений ортопедии. - 2008. - № 1. - С. 104-105. (соавт. Ирьянов Ю. М.).

Отпечатано в ФГУ «РНЦ «ВТО» им. академика Г. А. Илизарова Росмедтехнологий». Тираж 100 экз. 640014, г. Курган, ул. М. Ульяновой, 6

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ирьянова, Татьяна Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Радиоактивность и виды ядерных излучений.

1.2. Физическое взаимодействие ионизирующих излучений с веществом.

1.3. Первичный и вторичный радиобиологический эффект.

1.4. Прямое и косвенное действие ионизирующего излучения на биологические объекты.

1.5. Общие закономерности и механизмы биологического действия ионизирующих излучений.

1.6. Действие ионизирующих излучений на клетку.

1.7. Действие ионизирующих излучений на ткани и системы организма.

1.8. Клиническая картина лучевых поражений у млекопитающих.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Материал исследования.

2.2. Методика общего внешнего воздействия на крыс у-излучения.

2.3. Методы исследования.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Результаты клинико-физиологических исследований.

3.2. Результаты остеометрии болыиеберцовых костей.

3.3. Результаты морфометрического анализа метаэпифизарного хряща.

3.4. Строение метаэпифизарного хряща после воздействия у-излучения.

3.5. Результаты гистохимического исследования метаэпифизарного хряща.

3.6. Результаты рентгеновского электронно-зондового микроанализа метаэпифизарного хряща.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1. Характеристика лучевого поражения у экспериментальных животных.

4.2. Влияние воздействия у-излучения на строение, функцию и химический состав метаэпифизарного хряща.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфофункциональная характеристика метаэпифизарного хряща большеберцовой кости после общего внешнего воздействия γ-излучения в среднелетальной дозе"

Проблема биологического действия ионизирующих излучений и радиационных поражений приобрела за последние десятилетия особую актуальность во всем мире [6, 14, 17, 22, 175, 176]. Это связано с широким использованием ядерной энергии и радиоактивных веществ, как в военных целях, так и во многих отраслях народного хозяйства - в промышленности, сельском хозяйстве, медицине, научно-исследовательских учреждениях [111, 125, 149, 152, 154, 177, 185]. В результате все большее количество людей подвергается вредному воздействию ионизирующих излучений, приводящему нередко к тяжелым и необратимым последствиям. [75, 77, 108, 129, 136, 232, 247].

Массовые поражения людей высокими дозами ионизирующей радиации происходят при проведении испытательных взрывов новых видов ядерного оружия, а также в результате аварий на АЭС. Радиационные катастрофы приводят к облучению большого количества людей и загрязнению окружающей среды. В результате чернобыльской катастрофы пострадали значительные территории, на которых проживают сотни тысяч человек [16, 68, 102, 103, 141, 144]. Таким образом, в настоящее время возникла острая необходимость выполнения дальнейших исследований в области радиобиологии и радиационной экологии, а также поиск новых средств защиты от радиационного поражения [70, 76, 95, 145, 156,166, 218].

Известно, что особенно чувствительны к действию радиации растущие организмы. В частности, организм эмбриона и плода обладает крайне высокой радиочувствительностью. В этот период даже незначительные дозы около 0,1 Гр могут вызвать тератогенный эффект [31, 49, 54, 61, 71, 84, 226], замедлить или полностью остановить рост костей, индуцировать аномалии развития скелета и ряд других патологий костной системы [23, 43, 63, 69, 82, 89, 112].

Ионизирующее излучение способно замедлить рост и развитие животных и человека, вследствие общих, глубоких нарушений в нормальной жизнедеятельности организма и поражений, приводящих к морфологическим и функциональным изменениям различных органов [19, 25, 28, 59, 74, 80, 180]. Эти изменения могут быть обнаружены через некоторый, иногда достаточно длительный промежуток времени после облучения: несколько дней или недель [34, 36, 57, 92, 104, 146, 187]. Процессы регенерации также значительно замедлены после облучения [24, 41, 64, 68, 85, 129].

Работами последних лет выявлены существенные пострадиационные изменения в системе метаболизма кости [55, 60, 81]. Установлено, что кость обладает значительной радиочувствительностью и консерватизмом в проявлении и сохранении пострадиационных эффектов даже в отдаленные сроки после облучения [112, 249]. Имеются сведения о различной степени радиочувствительности костной ткани в зависимости от возраста организма. При лечении злокачественных опухолей тканей конечностей методами лучевой терапии в зоне облучения могут оказаться и кости, расположенные в непосредственной близости от новообразований, что может привести к развитию у них лучевых повреждений [46, 53, 128, 191,217].

Известно, что рост костей обеспечивает метаэпифизарный хрящ (метаэпифизарная хрящевая пластинка роста) - провизорная структура длинных трубчатых костей высших позвоночных [9, 26, 37, 38, 39, 138]. Особенности репродукции и метаболизма хондроцитов метаэпифизарного хряща предопределяют интенсивность и продолжительность роста костей [11,44, 58, 136, 207, 220].

Литературные данные свидетельствует, что вопросы морфогенеза лучевых поражений растущей хрящевой ткани остаются мало изученными. В связи с этим, проведение морфофункциональных исследований метаэпифизарного хряща после общего внешнего воздействия у-излучения актуально и необходимо для решения ряда задач, имеющих не только фундаментально-теоретическое, но и практическое значение, в частности, для изучения механизмов радиационного поражения ростковых зон костей, оценки терапевтического эффекта лекарственных препаратов, прогноза при острой лучевой болезни и научного обоснования путей направленной стимуляции процессов восстановления пострадиационных сдвигов в гомеостазе организма.

Цель работы

Анализ морфофункциональных особенностей метаэпифизарного хряща болыпеберцовой кости крыс после общего внешнего воздействия у-излучения в среднелетальной дозе.

Для реализации цели были поставлены следующие конкретные задачи:

Задачи исследования

2. Изучить морфометрические показатели и особенности строения метаэпифизарного хряща после воздействия у-излучения.

3. Изучить гистохимические показатели метаэпифизарного хряща после воздействия у-излучения.

4. Изучить особенности минерального состава метаэпифизарного хряща после воздействия у-излучения.

Научная новизна работы Впервые с помощью методов остеометрии, световой микроскопии, сканирующей электронной микроскопии, гистохимического, гистоморфометрического и рентгеновского электронно-зондового микроанализа дана качественная и количественная характеристика морфогенеза лучевых повреждений метаэпифизарного хряща болыпеберцовой кости крыс, патологических и восстановительных процессов в метаэпифизарном хряще после острого лучевого поражения.

Впервые показано, что общее воздействие у-излучения в среднелетальной дозе замедляет рост большеберцовых костей крыс, снижает темп увеличения их продольных размеров, объема, массы и плотности, что сопровождается изменением мофометрических показателей, строения и функции всех морфофункциональных зон метаэпифизарного хряща. Впервые установлено, что толщина зон покоящегося, пролиферирующего и созревающего хряща значительно снижается, уменьшается численная плотность хондроцитов вследствие гибели части облученных клеток. Нарушается пролиферативная и биосинтетическая деятельность хондроцитов. Возрастает протяженность зоны кальцифицированного хряща, что связано с замедлением темпов минерализации хрящевого и костного матрикса. Впервые показано, что изменения химического состава метаэпифизарного хряща болынеберцовой кости крыс после воздействия у-излучения характеризуются тем, что на начальном этапе лучевого поражения (1-5 суток после облучении) снижается содержание гиалуроновой кислоты, нуклеиновых кислот, серы и сульфатированных гликозаминогликанов, возрастает концентрация кальция и фосфора. В середине и конце экспериментального периода (15-30 суток после облучения) содержание кальция и фосфора в метаэпифизарногм хряще болынеберцовой кости крыс снижается, увеличивается концентрация серы, сульфатированных гликозаминогликанов, гиалуроновой кислоты и нуклеиновых кислот, что свидетельствует о репаративно-восстановительных процессах.

Приоритетность результатов проведенного исследования защищена охраноспособными документами - патентами на полезные модели: 1. «Держатель образца для сканирующего электронного микроскопа и электронно-зондового микроанализатора». Патент на полезную модель № 58027. Заявка № 2006123916. Приоритет полезной модели 04 июля 2006 г. Зарегистрировано в Государственном реестре полезных моделей Российской Федерации 10 ноября 2006 г. Заявл. 04.07.2006; опубл. 10.11.2006. Бюл. № 31.

2. «Предметный столик для замораживания образца к охлаждающему устройству для вакуумного напылителя». Патент на полезную модель № 72050. Заявка № 2007116564/22 от 02.05.2007. Приоритет полезной модели 02 мая 2007 г. Зарегистрировано в Государственном реестре полезных моделей Российской Федерации 27 марта 2008 г. Заявл. 02.05.2007; опубл. 27.03.2008. Бюл. № 9. Разработаны усовершенствованные медицинские технологии: 1. «Гистологическая техника и методы окрашивания полутонких срезов костной ткани»; 2. «Подготовка образца кости к исследованию в сканирующем электронном микроскопе».

Теоретическая и практическая значимость работы

1. Полученные новые знания о строении, функции, химическом составе и процессах минерализации метаэпифизарного хряща расширяют современные представления о его значении в формообразующих процессах, в том числе и в условиях лучевого поражения и могут быть рекомендованы в учебные планы на биологических факультетах университетов, медицинских и ветеринарных академий, а также в учебные программы средней школы, например, по экологии.

3. Результаты проведенного исследования могут быть использованы в научно-исследовательской работе в морфологических и патоморфологических лабораториях, как основа для осуществления дальнейших экспериментов по разработке новых методов диагностики и терапевтического воздействия при острой лучевой болезни, а также стимуляции процессов формообразования и регенерации при лучевых поражениях.

4. В лабораториях морфологического и патоморфологического профиля могут быть использованы разработанные в рамках настоящего исследования полезные модели: «Держатель образца -для сканирующего электронного микроскопа и электронно-зондового микроанализатора», «Предметный столик для замораживания образца к охлаждающему устройству для вакуумного напылителя» и усовершенствованные медицинские технологии: «Гистологическая техника и методы окрашивания полутонких срезов костной ткани», «Подготовка образца кости к исследованию в сканирующем электронном микроскопе», которые будут способствовать повышению эффективности научного процесса при проведении экспериментально-морфологических исследований. Актуально применение методик количественного анализа гистохимических препаратов при помощи рентгеновского электронно-зондового микроанализатора.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Общее внешнее воздействие у-излучения в среднелетальной дозе замедляет рост большеберцовых костей крыс, снижает темп увеличения их продольных размеров, объема, массы и плотности, что сопровождается изменением морфометрических показателей, строения и функции всех морфофункциональных зон метаэпифизарного хряща, нарушением пролиферативной и биосинтетической деятельности хондроцитов.

2. Общее внешнее воздействие у-излучения в среднелетальной дозе изменяет химический состав органического и минерального компонентов метаэпифизарного хряща большеберцовых костей крыс, что проявляется на начальном этапе лучевого поражения уменьшением содержания гиалуроновой и нуклеиновых кислот, серы и сульфатированных гликозаминогликанов, увеличением концентрации кальция и фосфора, а в середине и конце экспериментального периода - увеличением концентрации серы, сульфатированных гликозаминогликанов, гиалуроновой и нуклеиновых кислот и снижением содержания кальция и фосфора.

Внедрение результатов исследования в практику

На основании проведенных исследований обоснованы и внедрены в научный процесс в научном экспериментально-клиническом отделе морфологических исследований ФГУ «РНЦ «ВТО» им. академика Г. А, Илизарова Росмедтехнологий» новые способы окрашивания гистологических срезов, метод количественного анализа гистохимических препаратов, устройства, полезные модели: «Держатель образца для сканирующего электронного микроскопа и электронно-зондового микроанализатора», «Предметный столик для замораживания образца к охлаждающему устройству для вакуумного напылителя» и усовершенствованные медицинские технологии: «Гистологическая техника и методы окрашивания полутонких срезов костной ткани», «Подготовка образца кости для сканирующей электронной микроскопии. Результаты исследований включены в учебный план и используются при проведении практических занятий и лекций на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии Ижевской государственной медицинской академии.

Диссертационная работа является частью комплексного исследования, проводимого по основному плану НИР ФГУ «РНЦ «ВТО» им. акад. Г. А. Илизарова Росмедтехнологий» на тему «Разработка методов стимуляции процессов формообразования и регенерации при лучевом поражении» № 35/1. Соглашение 06/1027 от 13.06. 2006 г. № гос. регистрации 0120.0 802850.

Материалы работы включены в 2 заключительных отчета по темам основного плана НИР ФГУ «РНЦ «ВТО» им. академика Г.А. Илизаров Росмедтехнологий»: 1. Разработка способов и устройств для создания в организме дополнительных очагов кроветворения. Отчет о НИР (заключ.) /

РНЦ «ВТО» им. акад. Г. А. Илизарова; рук. В. И. Шевцов, Ю. М. Ирьянов; исполн. : Ю. М. Ирьянов [и др.]. - Курган, 2000. — 36 с. № гос. регистрации 01.9.800.04838; инв. № 02.20.0002984. 2. Разработка способа стимуляции кроветворения и исследование функциональной морфологии костеобразования после лучевого поражения. Отчет о НИР (заключ.) / РНЦ «ВТО» им. акад. Г. А. Илизарова; рук. В. И. Шевцов, Ю. М. Ирьянов; исполн. : Ю. М. Ирьянов [и др.]. - Курган, 2005. - 59 с.

Апробация работы

Основные положения и материалы диссертации доложены на 13 научных форумах: научно-практической конференции с международным участием «Новые технологии в медицине», Курган, 2000; научно-практической конференции молодых ученых «Медицина в XXI веке: эстафета поколений», Курган, 2001; международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных», Троицк, 2001; международной дистанционной научно-практической конференции «Современные информационные технологии в диагностических исследованиях», СИДТИ, Днепропетровск, 2002; XIII Российском симпозиуме по растровой электронной микроскопии и аналитическим методам исследования твердых тел, Черноголовка, 2003; Всероссийской научной конференции «Реактивность и пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях», Оренбург, 2003; научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы гистологии. Гистогенез и регенерация тканей», Санкт-Петербург, 2004; «Морфологические науки — практической медицине», Омск, 2004; XV Российском симпозиуме по растровой электронной микроскопии и аналитическим методам исследования твердых тел (РЭМ-2007), Черноголовка, 2007; Всероссийской научно-практической конференции «Клиника, диагностика и лечение больных с врожденными аномалиями развития», Курган, 2007; Всероссийской научно-практической конференции «Клеточные и нанотехнологии в биологии и медицине», Курган, 2007; международной гистологической конференции «Морфогенезы в эволюции, индивидуальном развитии и эксперименте», Тюмень, 2008; Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы экспериментальной биологии и медицины», Курган, 2008.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 28 работ, в том числе 8 в ведущих журналах морфологического профиля, получены 2 патента на полезные модели.

Объем и структура работы

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Ирьянова, Татьяна Юрьевна

ВЫВОДЫ:

1. Доза 7,0 Гр общего внешнего у-излучения является среднелетальной дозой для крыс-самцов линии Вистар, вызывает развитие костномозгового синдрома острого лучевого поражения вследствие повреждения кроветворных и стромальных клеток красного костного мозга, замедляет рост болыпеберцовых костей и снижает темп прироста их продольных размеров, объема, массы и плотности.

2. В результате воздействия общего у-излучения в среднелетальной дозе мофометрические показатели метаэпифизарного хряща болынеберцовой кости крыс претерпевают изменения, свидетельствующие о нарушении его строения и функции: а) толщина зон покоящегося, пролиферирующего и созревающего хряща снижается, уменьшается численная плотность хондроцитов вследствие гибели части облученных клеток; б) увеличивается протяженность зоны кальцифицированного хряща, что связано с замедлением темпов минерализации; в) в матриксе хряща появляются экстравазальные эритроциты и очаги повреждений; г) пучки коллагеновых волокон расщепляются на отдельные коллагеновые волокна и фибриллы; д) изменяется цитоархитектоника пролиферативной зоны, нарушаются биосинтетические и секреторные процессы в хондроцитах; е) через 20-30 суток после облучения появляются очаги пролиферации хондроцитов на границе с эпифизарной и метафизарной костью и формируются врастания хряща в эпифиз и метафиз.

3. После воздействия общего у-излучения в среднелетальной дозе происходят изменения химического состава органических компонентов метаэпифизарного хряща болынеберцовой кости крыс, которые осуществляются волнообразно: а) на начальном этапе лучевого поражения (1 - 5 суток после облучения) снижается содержание сульфатированных гликозаминогликанов, гиалуроновой и нуклеиновых кислот; б) в середине и конце экспериментального периода (15 — 30 суток после облучения) в результате репаративно-воестановительных процессов увеличивается концентрация сульфатированных гликозаминогликанов, гиалуроновой и нуклеиновых кислот. Снижение концентрации гиалуроновой кислоты является одним из факторов, обусловливающих нарушение надмолекулярной структуры коллагеновых комплексов матрикса метаэпифизарного хряща болыпеберцовой кости крыс после облучения.

4. Под воздействием у-излучения в метаэпифизарном хряще болыпеберцовой кости крыс происходят изменения в содержании и распределении кальция, фосфора и серы: а) на 1-5 сутки после облучения наблюдается декальцинация кальцифицированного слоя зоны покоящегося хряща, увеличение концентрации кальция и фосфора в остальных зонах и снижение содержания^ в них серы; б) с 10 -х суток после облучения содержание кальция и фосфора в метаэпифизарном хряще больбшеберцовой кости крыс уменьшается, при этом повышается доля растворимого кальцийфосфата, увеличивается концентрация серы, что свидетельствует о торможении процессов минерализации хряща после облучения; в) к концу эксперимента (30 суток после облучения) содержание кальция и. фосфора в метаэпифизарном хряще болыпеберцовой кости крыс приближается к контрольным значениям, а концентрация серы более чем вдвое превосходит его.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ирьянова, Татьяна Юрьевна, Курган

1. Аверьянова, А. В. Что нужно знать о радиации / А. В. Аверьянова, В. П. Луговский, И. М. Русак. - Мн. : 1992. - 235 с.

2. Автандилов, Г. Г. Медицинская морфометрия. Руководство. / Г. Г. Автандилов. М. : Медицина, 1990. - 384 с.

3. Агол, В. И. Генетически запрограммированная смерть клетки / В. И. Агол // Энциклопедия. Современное естествознание. Общая биология. М. : Наука-Флинта, 1999. 2т. - С. 185-188.

4. Альфредович, А. А. Действие малых доз гамма-излучения на клетки млекопитающих / А. А Альфредович, В. Я. Готлиб, А. А. Конрадов, Е. Ф. Конопля, И. И. Пелевина. // Изв. Акад. наук СССР, сер. биол., 1992. № 1,- С. 127-130.

5. Анализ заболеваемости и смертности населения, пострадавшего вследствие катастрофы на ЧАЭС. Статистический сборник Минздрава Беларуси за 1993-2000 гг. // Минск : БЕЛЦМТ, 2001. С. 186.

6. Антонов, С. Г. Влияние физических нагрузок на состояние метаэпифизарного хряща бедренных костей и на рост этих костей в длину / С. Г. Антонов // Архив анатомии. 1979. - № 5. - С. 75-80.

7. Артишевский, А. А. Гистология с техникой гистологических исследований / А. А. Артишевский, В. С. Гайдук, А. С. Леонтюк, Б. А. Слука. Мн. : Вышэйш. щк., 1999. - 236 с.

8. Артишевский, А. А. Гистология в вопросах и ответах / А. А. Артишевский, А. С. Леонтюк, Б. А. Слука. Мн. : Изд-во МГМИ, 1997. - 198 с.

9. Асфандияров, Р. И. Гликозаминогликаны на ранних стадиях остеогенеза длинных трубчатых костей человека / Р. И. Асфандияров, А. Е. Лазько // Архив анатомии, гистол. и эмбриол. 1989. - 96т. - № 1. - С. 82-86.

10. Афанасьев, Ю. И. Лабораторные занятия по курсу гистологии, цитологии и эмбриологии / Ю. И. Афанасьев и др.. М. : Высш. шк., 1990. - 399 с.

11. Афонин, В. Ю. Влияние ионизирующего облучения на гибель клеток в селезенке лягушек. / В. Ю. Афонин, А. М. Войтович // Весщ HAH Беларусь Сер. был. навук. 1998. - № 4.- С. 153-154.

12. Бабаев, Н. С. Ядерная энергетика, человек и окружающая среда / Н. С. Бабаев, В. Ф. Демин, Л. Л. Ильин / под. ред. А.П. Александрова М. : Энергоиздат, 1984. - 296 с.

13. Баграташвили, В. Н. Механизмы лазерно-индуцированной релаксации напряжений и управляемого изменения формы хрящевой ткани / В. Н. Баграташвили, А. П. Свиридов, Э. Н. Соболь // Сборников трудов ИПЛИТ РАН.-2006.-С. 166-173.

14. Барабанова, А. В. Зависимость тяжести поражений кожи от глубинного распределения дозы ß-излучения у пострадавших при аварии на Чернобыльской АЭС / А. В. Барабанова, Д. П. Осанов // Мед. радиология. -1993.-38т,- С. 28-31.

15. Барабой, В. А. Ионизирующая радиация в нашей жизни / В. А. Барабой. М. : Наука, 1991.- С. 66-67.

16. Батян, Г. М. Радиационные поражения: учебное пособие / Г. М. Батян, С. И. Судник, Л. Г. Капустина. Мн. : БГУ, 2005. - 20 с.

17. Безлепкин, В. Г. Индуцированная нестабильность генома половых клеток по мини- и микросателлитным последовательностям / В. Г. Безлепкин, А. И.

18. Газиев // Радиационная биология. Радиоэкология. 2001. 41т.- № 5. - С. 475488.

19. Белушкина, Н. Н. Молекулярные основы апоптоза / Н. Н Белушкина, Хасан Хамад Али, С. Б. Северин // Вопросы биол. мед. и фарм. химии. -1998.-№4.- С. 15-23.

20. Белоусова, О. И. Радиация и система крови / О. И. Белоусова, П. Д. Горизонтов, М. И. Федотова. М. : Атомиздат, 1979. - 128 с.

21. Булатов, В. И. Россия радиоактивная / В. И. Булатов. Новосибирск : ЦЭРИС, 1996. - 272 с.

22. Булдаков, Л. А. Радиоактивные вещества и человек / Л. А. Булдаков. М. : Энергоатомиздат, 1990. - 160 с.

23. Бутомо, Н. В. Основы медицинской радиобиологии / Н. В. Бутомо и др..- СПб.: Медицина, 2004. 384 с.

24. Бурлакова, Е. Б. Действие сверхмалых доз / Е. Б. Бурлакова // Вестн. РАН., 1994. 64т. - С. 425-431.

25. Быков, В. Л. Цитология и общая гистология / В. Л. Быков. Спб. : Sotis, 1998.-519 с.

26. Бычковская, И. Б. Некоторые новые аспекты проблемы радиочувствительности малообновляющихся тканей / И. Б. Бычковская, Р. П. Степанов, О. В Кирик // Мед. радиология, и радиац. безопасность, 2003. 48т.- № 6. С. 5-17.

27. Веленчик, М. М. Нестабильность ДНК и отдаленные последствия воздействия излучения / М. М. Веленчик. М. : Энергоиздат, 1987. - 192 с.

28. Виноградова, Е. В. Морфофункциональная характеристика хондроцитов / Е. В. Виноградова, И. Н. Михайлов // Физиология и патология соединительной ткани. Новосибирск, 1980. - 1т. - С. 133 - 135.

29. Виноградова, Е. В. Возрастные особенности ультраструктурной организации хрящевой ткани человека и ее протеогликанового компнента / Е. В. Виноградова, И. Н. Михайлов // Деструкция суставов : материалы

30. Симпозиума Е80А. Сочи, 1987. - С. 179 - 179.

31. Витаминный статус и сперматогенез крыс в поздние сроки после облучения разными дозами / В. В. Евдокимов и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1999. — 128т. - № 7. - С. 42-44.

32. Владимирская, Е. Б. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста / Е. Б. Владимирская, А. А Масчан., А.Г Румянцев // Гематол. трансфузиол. -1997.-№5.-С. 4-9.

33. Влияние убихинона-10 на систему крови при радиационном облучении крыс / А. С. Корягин и др. // Бюл. экспер. биол. и мед. 2002. - № 6. - С. 650-652.

34. Воробьев, Е. Н. Ионизирующее излучение и кровеносные сосуды / Е. Н. Воробьев, Р. П. Степанов. М. : Энергоатомиздат, 1985. - 296 с.

35. Гайдышев, И. П. Анализ и обработка данных: специальный справочник / И. П. Гайдышев. СПб : Питер, 2001. - 752 с.

36. Генетические и соматические эффекты ионизирующего излучения / Доклад НКДАР. Изд. ООН, 1986. с. 18-34.

37. Гистология (введение в патологию) : учеб. для вузов / под ред. Э. Г Улумбекова, Ю. А. Челышева. -М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1998. 947 с.

38. Гистология : учеб. для вузов / под ред. Ю. И. Афанасьева, Н. А. Юриной. М.: Медицина, 1999. - 744 с.

39. Гистология, цитология и эбриология : атлас / под ред. О. В. Волковой, Ю. К. Елецкого. М.: Медицина, 1996. - 543 с.

40. Гоулдстейн, Дж. Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ / Дж. Гоулдстейн и др.. М.: Мир, 1984. - 340 с.

41. Гогин, Е. Е. Сочетанные радиационные поражения: клинические синдромы, динамика кожных ожогов, возможные элементы патогенеза / Е. Е. Гогин // Тер. арх. 2001. - № 7. - С. 72-76.

42. Груздев, К. Мыши и крысы / К. Груздев, Л. Груздев. — М. : Дельта М, 2000. 94 с.

43. Гускова, А. К. Лучевая болезнь человека / А. К. Гускова, Г. Д Байсоголов. М. : Медицина, 1971. - 256 с.

44. Денисенко, О. П. Сосудисто-нервные каналы метаэпифиза длинных костей новорожденных детей / О. П. Денисенко, О. С. Сотников // Морфология. 2000. - 117т. - № 3. - С. 40.

45. Диплом № 355 (СССР) Общебиологическое свойство тканей отвечать на дозированное растяжение ростом и регенерацией (Эффект Илизарова) / Г. А. Илизаров. № ОТ. - 11271 ; заявл. 25.12.85 ; опубл. 23.04.89, Бюл. № 15. - 1 с. (Приоритет от 24.11.70).

46. Дэвидсон, Г. О. Биологические последствия общего гамма-излучения человека : пер. с англ. / под ред. М. Ф. Полевой. М. : Атомиздат, 1960. - 340 с.

47. Жилкин, Б. А. Взаимосвязь пузырьков матрикса с пространственным распределением минерального компонента волокнистого и гиалинового хряща / Б. А. Жилкин, А. А. Докторов, Ю. И. Денисов-Никольский // Морфология. 2004. - 126 т. - № 5. - С. 60-64.

48. Житников, А. Я. Формирование эпифизарных хрящей в онтогенезе и постнатальный рост скелета у наземных позвоночных / А. Я. Житников // Ортопедия, травматология и протезирование 2000. - № 2. - С. 105-106.

49. Жукова, И. А. Реакция эндотелиоцитов кровеносных капилляров некоторых эндокринных органов крысы на облучение в эмбриогенезе / И. А. Жукова, О. Н. Аблековская, С. А. Жадан, А. П. Амвросьев // Морфология. -2002.- 121т.-№2-3. С. 54.

50. Заварзин А. А. Основы сравнительной гистологии / А. А. Заварзин Л. : Изд-во Ленингр. ун-та, 1985. - 40 с.

51. Зайдман, А. М. Структурно-функциональные особенности пластинки роста тела позвонка в критические периоды роста / А. М. Зайдман, А. В. Корель // Хирургия позвоночника. Научно-практический журнал. 2004. - № 1.-С. 113-119.

52. Зирне, Р. А. Гистологическая, гистохимическая и ультраструктурная характеристика индуцированного эктопического хондрогенеза / Р. А. Зирне, Т. В. Аршавская // Морфология. 1995. - № 1. - С. 39-43.

53. Иванов, А. Е. Патологическая анатомия лучевой болезни / А. Е. Иванов, Н. Н. Куршакова, В. В. Шиходыров. М. : Медицина, 1981. - 303 с.

54. Иванов, Б. П. Атомный взрыв у поселка Тоцкое / Б. П. Иванов // Военно-исторический журнал. 1994. - № 12. - С. 79-80.

55. Ирьянов, Ю. М. Влияние гамма-излучения на минерализацию длинных трубчатых костей у крыс / Ю. М. Ирьянов, Т. Ю. Ирьянова // Морфологические ведомости. 2005. - № 3-4. - С. 38-40.

56. Ирьянов, Ю. М. Ультраструктурное и гистохимическое исследование процесса минерализации метаэпифизарного хряща при острой лучевой болезни / Ю. М. Ирьянов, Т. Ю. Ирьянова // Гений ортопедии. 2008. - № 1. -С. 104-105.

57. Клиническая радиобиология / под ред. С. П. Ярмоненко, А. Г. Конопляникова, А. А. Вайсона. М. : Медицина, 1992. - 320 с.

58. Клишов, А. А. Гистология человека / А. А. Клишов JL : Изд-во BMA, 1989.-383 с.

59. Коггл, Дж. Биологические эффекты радиации / Дж. Коггл. М. : Мир, 1986.- 184 с.

60. Ковешников, В. Г. Особенности влияния излучения гелий-неонового лазера и рентгеновского излучения на кости / В. Г. Ковешников, В. В. Маврич, Н. Ф. Недоступ // Морфология. 2000. - 117т. - № 3. - С. 58-59.

61. Конопляников, А. Г. Радиобиология стволовых клеток / А. Г. Конопляников. М.: Энергоатомиздат, 1984,- 120 с.

62. Королев, В. И. Костномозговые тканевые дозы при различных видах радиационного воздействия / В. И. Королев, Б. В. Мурашов, Л. Г. Фейгин // Мед. радиология. 1991. - 36т. - № 9. - С. 6-8.

63. Коргодин, В. И. Проблемы пострадиационного восстановления / В. И. Коргодин. М, 1966. - 392 с.

64. Коржевский, Д. Э. Краткое изложение основ гистологической техники для врачей и лаборантов-гистологов / Д. Э. Коржевский. СПб, 2005. - 48 с.

65. Косягин, Д. В. Концентрация гликозаминогликанов в неизменном и дегенеративно измененном суставном хряще людей разного возраста / Д. В. Косягин // Вопр. мед. химии. 1986. - № 3. - С. 73-76.

66. Кудряшов, Ю. Б. Лучевое поражение / Ю. Б Кудряшов. М. У., 1987. - С. 48-60.

67. Кудряшов, Ю. Б. Радиационная биофизика (ионизирующие излучения)./ Ю. Б. Кудряшов. М. : Высшая школа, 2004. - 348 с.

68. Кудряшов, Ю. Б. Радиобиология /Ю. Б. Кудряшов. М. : Высшая школа, 1992. - 423 с.

69. Кудряшов, Ю. Б. Основные принципы в радиобиологии 11 Радиац. биология. Радиоэкология. 2001. 41т. - № 5. - С. 531-547.

70. Кудряшов, Ю. Б. Химическая защита от лучевого поражения / Ю. Б. Кудряшов // Соросовский образовательный журнал. 2000. - 6т. - № 6. - С. 21-26.

71. Кудряшов, Ю. Б. Лучевой стресс / Ю. Б Кудряшов, Е. Н Гончаренко // Москва Чернобылю. Книга II. - М.: Воениздат, 1998. - С. 197-204.

72. Кузин, А. М. Природный радиоактивный фон и его значение для биосферы Земли / А. М. Кузин. М. : Наука, 1991. - 116 с.

73. Кузин, А. М. Роль природного радиоактивного фона и вторичного биогенного излучения в явлении жизни / А. М. Кузин. М. : Наука, 2002. - 80 с.

74. Куна, П. Химическая радиозащита : монография / П. Куна. М. : Медицина, 1995.-255 с.

75. Кутузова, А. Б. Состояние сердца у лиц, подвергшихся воздействию ионизирующего излучения / А. Б. Кутузова, В. Г. Лелюк, А. К. Гуськова // Мед. радиология и радиац. безопасность. 2002. - 47т. № 3. С. - 66-79.

76. Леонтюк, А. С. Основы возрастной гистологии / А. С. Леонтюк, Б. А. Слука. Мн.: Вышэйш. шк., 2000. — 416 с.

77. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / Р. Лилли. М. : Мир, 1969. - 643 с.

78. Лобко, П. И. Строение органов и систем под влиянием ионизирующей радиации / П. И. Лобко. — Минск : Мед. Ин-т., 1992. 99 с.

79. Лузин, В. И. Реакция скелета белых крыс на облучение электромагнитными волнами крайне высокой частоты / В. И. Лузин // Морфология. 2000. - 117т. - № 3. - 69 с.

80. Лушников, Е. Ф. Апоптоз клеток: морфология, биологическая роль, механизмы развития / Е. Ф. Лушников, В. М. Загребин // Архив патологии. -1987.-49т.-С. 84-89.

81. Мажуль, Л. М. Возрастные особенности влияния сочетанного радиационного воздействия на перекисное окисление липидов в крови крыс / Л. М. Мажуль, В. Е. Волыхина, Г. Г Гацко. // Весщ HAH Беларусь Сер. б1ял. навук. 2000. - № 1. - С. 68-69.

82. Меркулов, Г. А. Курс патогистологической техники / Г. А. Меркулов. -Л. : Медицина, 1969. 423 с.

83. Методика моделирования острой лучевой болезни у крыс линии Август /

84. B. И. Шевцов, Ю. М. Ирьянов, Н. В. Петровская, Т. Ю. Ирьянова, Н. С. Мигалкин, Р. Ю. Очеретина // Современные наукоемкие технологии. 2004. -№ 1.-С. 95.

85. Микроскопическая техника : рук. для врачей и лаборантов / под ред. Д.

86. C. Саркисова, Ю. Л. Петрова. М.: Медицина, 1996. - 544 с.

87. Михайлова, Л. Н. Ультраструктурные изменения суставного хряща в возрастном аспекте по данным растровой электронной микроскопии / Л. Н. Михайлова, А. Е. Берман // Деструкция суставов : материалы Симпозиума ЕБОА. Сочи, 1987. - С. 100-101.

88. Модяев, В. П. О наличии гликозаминогликанов в местах минерализации скелетных тканей / В. П. Модяев // Физиология и патология соединительной ткани. Новосибирск, 1980, 1т. - С. 150 - 151.

89. Москалев, Ю. И. Современные представления о действии ионизирующего излучения на млекопитающих и проблемы нормирования / Ю. И. Москалев //Медицинская радиобиология. 1985. - № 6. - С. 66-72.

90. Москалев, Ю. И. Отдаленные последствия ионизирующего излучении / Ю. И. Москалев. М. : Медицина, 1991. - 464 с.

91. Мяделец, О. Д. Основы цитологии, эмбриологии и общей гистологии / О. Д. Мяделец. М.: Медицинская книга, Н. Новгород НГМА, 2002. - 367 с.

92. Незнакомцева, Е. П. Микро- и ультраструктурная организация минерализованного хряща лобкового симфиза человека / Е. П. Незнакомцева,

93. Ю. Г. Ломов // Морфология. 1993. - 104т. - № 5-6. - С. 90-100.

94. Нестеренко, В. Б. Радиационная защита населения / В. Б. Нестеренко Мн., 1997. 32 с.

95. Новиков, В. Д. Словарь по гистологии / В. Д. Новиков, Г. Д. Правоторов, В. С. Труфакин. Новосибирск, 1998. - 149 с.

96. Об утверждении Нормативов кормов для лабораторных животных в учреждениях здравоохранения : приказ МЗ РСФСР от 10.10.1983 № 1179.

97. Омельяненко, Н. П. Особенности ультраструктурной организации хрящей носа и ушной раковины / Н. П. Омельяненко, Л. Д. Жеребцов // Арх. анат. 1983. - № 8. - С. 43-50.

98. Павлова, В. Н. Проблемы и перспективы современной хондрологии, ч. 1 / В. Н. Павлова, Г. Г. Павлов // Ревматология. 1984. - № 3. - С. 3-9.

99. Павлова, В. Н. Проблемы и перспективы современной хондрологии, ч. 2 / В. Н. Павлова, Г. Г. Павлов // Ревматология. 1984. - № 4. - С. 4-10.

100. Повожева, Т. И. Ультраструктура межпозвоночных дисков у детей" и подростков / Т. И. Повожева // Арх. анат. 1982. - № 7. - С. 46-54.

101. Поливода, Б. И. Биофизические аспекты радиационного поражения мембран / Б. И. Поливода, В. В. Конев, Г. А. Попов. М. : Энергоатомиздат, 1990.-155 с.

102. Поровский, Я. В. Отдаленные морфофункциональные изменения в коже ликвидаторов аварии на Чернобыльской АЭС / Я. В. Поровский, А. И. Рыжов, Ф. Ф. Тетенев // Радиац. биология. Радиоэкология. 2005. - 45т. - № 1. -С. 119-123.

103. Поровский, Я. В. Изменения микроциркуляторного русла у участников ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС в отдаленные сроки / Я. В. Поровский // Бюллетень сибирской медицины. 2005. - № 4. - С. 123130.

104. Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных : приказ МЗ СССР от 12.08.77 № 755

105. Программированная гибель клетки / под. ред. B.C. Новикова. Спб. : Наука, 1986.-240 с.

106. Программированная клеточная гибель / А. П. Новожилова и др. -Санкт-Петербург : Наука, 1996. 276 с.

107. Пшеничников, Б. В. Введение в теорию радиационного поражения человека. Лекция / Б. В. Пшеничников // Экология человека в постчернобыльский период : материалы X Международной науч.-практ. конф. Минск, 2002. - С. 328-338.

108. Радиация. Дозы, эффекты, риск : пер. с англ. / Обзор НКДАР при ООН -М. 1990. - 79 с.

109. Радиационные поражения : учебное пособие / под ред. Г. М. Батян, С. И. Судник, Л. Г. Капустина. Минск : БГУ. - 2005. - 20 с.

110. Радиационная медицина / Стожаров А.Н. и др.. Минск : Изд. БГМУ, 2000. - 155 с.

111. Радиобиология костной ткани / Л. А. Френкель, Л. 3. Калмыков, А. И. Ланько, П. А. Михайлов, Д. Л. Дун, М. Г. Яковенко; под ред. В. И. Шантыря. М. : Энергоатомиздат, 1986. - 136 с.

112. Райхлин, Н. Т. Апоптоз и его роль в механизмах регуляции роста опухолевых клеток с множественной лекарственной устойчивостью / Н. Т. Райхлин, Е. А. Смирнова, А. Г. Перевощиков // Архив патологии. 1996. - № 2.-С. 3-8.

113. Рекомендации по разведению крыс линии «Август» в условиях вивария РНЦ «ВТО». / Ю. М. Ирьянов, Р. Ю. Очеретина, Н. В. Петровская, Т. Ю. Ирьянова // Успехи современного естествознания. 2004. - № 1. — С. 59.

114. Риггз, Б. Л. Остеопороз / Б. Л. Риггз, Л. Дж. Мелтон. : пер. с англ. СПб. : ЗАО «Издательство БИНОМ», Невский диалект», 2000. - 560 с.

115. Родионова, Н. В. Функциональная морфология клеток в остеогенезе / Н. В. Родионова. Киев : Наук, думка, 1989. - 192 с.

116. Роль процессов апоптоза и пролиферации эпителиоцитов в морфогенезе

117. Helicobacter ру1ои-ассоциированного гастрита / E. А. Коган и др. // Архив патологии. 2003. - т.65. - № 6. - С. 22-26.

118. Романцев, Е. Ф. Радиация и химическая защита. (Изд. 3-е, переработ, и доп.) /Е. Ф. Романцев. М. : Атомиздат, 1996. - 248 с.

119. Романенко, А. М. Апоптоз и рак /А. М. Романенко // Архив патологии. — 1996.-№3.-С. 18-22.

120. Романцев, Б. Микроскопическая техника. : пер. с нем. / Б. Романцев. -М.: Издательство иностранной литературы, 1954. — 718 с.

121. Самуилов, В. Д. Биохимия программированной клеточной смерти (апоптоза) у животных / В. Д. Самуилов // Соросовский образовательный журнал. 2001. - 7т. - № 10 (71). - С. 18-25.

122. Самуилов, В. Д. Программируемая клетчная смерть / В. Д. Самуилов, А. В. Олескин, Е. М. Лагунова // Биохимия, 2000. 65т. - Вып. 8. - С. 1029-1046.

123. Серов, В. В. Соединительная ткань / В. В Серов, А. Б. Шехтер. М. : Медицина, 1981.-312с.

124. Сивинцев, Ю. В. Радиация и человек / Ю. В. Сивинцев М. : Знание, 1987.-235 с.

125. Скулачев, В. П. Активные формы кислорода и явления запрограммированной смерти: от органеллы до организма / В. П. Скулачев // Биоантиоксидант : материалы VI Международной конференции. М.: Изд-во Ун-та Дружбы народов, 2002. - С. 523-524.

126. Слуцкий, JI. И. Современные представления о коллагеновых компонентах хрящевой ткани (обзор) / JI. И. Слуцкий // Вопр. мед. химии, 1985. -№3. С. 10-17.

127. Стожаров, А. Н. Радиационная медицина / А. Н. Стожаров. Минск : БГМУ, 2000.- 155 с.

128. Стрелин, Г. С. Регенерационные процессы в развитии и ликвидации лучевого повреждения / Г. С. Стрелин. М. : Медицина, 1978. - 208 с.

129. Трахенберг, И. М. Показатели нормы у лабораторных животных в токсилогическом эксперименте / И. М. Трахенберг, Ф. Е. Сова, В. О. Шефтель, Ф. А. Онкиенко М. : Медицина, 1998. - 128 с.

130. Уманский, С. Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы / С. Р. Уманский // Молекулярная биология, 1996. 30т. -. Вып. 3. - С. 487-502.

131. Фещенко, С. П. Изучение компонентов протеогликановых агрегатов гиалинового хряща человека / С. П. Фещенко, К. Д. Краснопольская, С. С. Шишкин // Биохимия, 1984. № 10. - С. 1679-1685.

132. Фильченков, А. А. Апоптоз и рак /А. А Фильченков, Р. С. Стойка. -Киев : Морион, 1999. 184 с.

133. Фильченков, А. А. Апоптоз в патогенезе заболеваний человека / А. А. Фильченков, И. В. Абраменко. Киев : ДИА, 2001. - 324 с.

134. Хансон, К. П. Программированная клеточная гибель (Апоптоз): молекулярные механизмы и роль в биологии и медицине / К. П. Хансон // Вопросы медицинской химии. 1997. - № 5. - .43т. - С. 402-415.

135. Холл, Э. Дж. Радиация и жизнь : пер. с англ / Э. Холл; под ред. Л. И. Ильина. М.: Медицина, 1989. - 256 с.

136. Хрусталева, Н. В. Возрастные изменения суставных и метафизарных хрящей в условиях гиподинамии / Н. В. Хрусталева, Б. В. Криштофорова // Деструкция суставов : материалы Симпозиума ЕБОА. -Сочи, 1987. С. 69-69.

137. Хрящ / В. Н. Павлова, Т. Н. Копьева, Л. И. Слуцкий, Г. Г. Павлов. М. : Медицина, 1988. - 320 с.

138. Хэм, А. Гистология : пер с англ / А. Хэм, Д. Кормак. М.: Мир, 1983. -Зт. - 293 с.

139. Цурко, В. В. Строение и функция суставного хряща. Роль цитокинов впатогенезе остеоартроза / В. В. Цурко // Клин. Геронтол. 2001. - № 12. - С. 63-69.

140. Чернобыль. Вчера. Сегодня. Завтра / под ред. С. П. Ярмоненко. М., 1994. - С. 35-38, 39-40, 81-83.

141. Чизмаджев, Ю. А. Как сливаются биологические мембраны / Ю. А. Чизмаджев // Соросовский образовательный журнал. 2001. 7т. - № 5 (66). -С. 4-9.

142. Шарпатый, В. А. Проблемы радиационной химии белковых молекул / В. А. Шарпатый // Химия высоких энергий, 1995. 29т. - № 2. - С. 85-100.

143. Шевченко, В. А. Последствия Чернобыльской катастрофы: Здоровье человека / В. А. Шевченко. М., 1996. - 342 с.

144. Шевченко, В. А. Оценка генетического риска облучения популяции человека / В. А. Шевченко; под ред. Е. Б. Бурлаковой // Последствия Чернобыльской катастрофы: Здоровье человека. М., 1996. - С. 50-67.

145. Шишкина, JI. Н. Роль антиоксидантного статуса в формировании последствий биологического действия излучения в малой дозе / JI. Н. Шишкина, и др.. // Радиационная биология. Радиоэкология, 2000. 40т. - № 2. - С. 162-167.

146. Эвтаназия экспериментальных животных : методические рекомендации по выведении животных из эксперимента. М., 1985. — 32 с.

147. Эйдус, JI. X. Интерфазная гибель облученных тимоцитов результат эффекта свидетеля? / Л. X. Эйдус // Радиационная биология. Радиоэкология. -2002. - 42т. - № 3. С. 284-286.

148. Эйдус, Л. X. О механизме инициации малых доз / Л. X. Эйдус // Мед. радиология и радиац. безопасность. 1999. - 44т. - № 5. - С. 12-15.

149. Эйдус, Л. X. Роль межклеточного взаимодействия в инициации радиационной гибели тимоцитов и проблема апоптоза / Л. X. Эйдус // Известия РАН, сер. биол. 1998. № 1. С. 204-212.

150. Юрина Н. А. Гистология / Н. А. Юрина, А. И. Радостина. М. :1. Медицина, 1995.-255 с.

151. Ядерные испытания СССР. (Цели. Общая характеристика. Испытание ядерного оружия и ядерные взрывы в мирных целях (1949 1990 гг.). Первые ядерные испытания). - М., 1997. - 394 с.

152. Ярилин, А. А. Апоптоз и его место в иммунных процессах /А. А. Ярилин // Иммунология. 1996. - 6т. - С. 10-23.

153. Ярилин, А. А. Радиация и иммунитет. Вмешательство ионизирующих излучений в ключевые иммунные процессы / А. А. Ярилин // Радиац. биология. Радиоэкология. 1999. - 39т. - № 1. - С. 181-189.

154. Ярмоненко, С. П. Радиобиология человека и животных / С. П. Ярмоненко, А. А. Вайсон. М.: Высшая школа, 2004. - 548 с.

155. Ярмоненко, С. П. Противолучевая защита организма / С. П. Ярмоненко. М. : Атомиздат, 1997. - 195 с.

156. Abastado, J. P. Apoptosis: function and regulation of cell death / J. P Abastado // Res.Immunol. 1996. - v. 147. - P. 443-456.

157. Abukawa, H. Reconstruction of mandibular defects with autologous tissue-engineered bone / H. Abukawa, M. Shin, W. B. Williams et al. // J. Oral,. Maxiilofac. Surg. 2004. - v.62 - P. 601-606.

158. Adenovirus-mediated overexpression of the transcription factor E2F-1 induces apoptosis in human breast and ovarian carcinoma cell lines and does not require p53 / К. K. Hunt, J. Deng , T. J. Liu et al. // Cancer Res. 1997. - 57. -21.-P. 4722-4726.

159. Apoptosis, intrinsic radiosensitivity and prediction of radiotherapy response in cervical carcinoma / E. L. Levine, A. Renehan, R. Gossiel et al. // Radiother Oncol.-1995.-37.-1.-P. 1-9.

160. Arends, M. J. Apoptosis. Mechanism and role in patology / M. J. Arends, A. H. Wyllie // Intern.Rev.Exp.Pathol., 1991. v.32. - P . 223-254.

161. Ballock, T. R. The biology of growth plate / T. R. Ballock, and R. J. O'Keefe // J. Bone Joint Surg. Am. 2003. - v.85(A). - № 4. - P. 715-726.

162. Balmain, N. Aspects ultrastructurauk du cartilage de croissance chez le eat rachitique par carence en vitamine / N. Balmain, P. Cuisinier-Gleizes, H. D. Mathieu // Biol. Cell. 1982. - v.44. 37a. - P. 28-32.

163. Bell, C. G. H. Apoptosis in T and B lymphocytes life cycles / C. G. H. Bell // Biochim Soc Trans. 1995. - 23. - 2. - P. 214.

164. Biological Effects of Low Radiation Doses Models, Mechanisms and Uncertainties : report to the General Assambley, 48 Session of UNSCEAR. : Vienna. - 1999.

165. Boyde, A. Morphological observations conserning the pattern of mineralization of the normal and the rachitic chick growth cartilage / A. Boyde, M. Shapiro Irving // Anat. and Embryol. 1987. - v.175- № 4. - P. 457 - 466.

166. Bouwmeester, R. Histological and biochemical evaluation of perichondrial transplants of human articular cartilage defects / R. Bouwmeester // J. Orthop. Res.- 1999. v. 17- № 6. - P. 843-849.

167. Bowen, C. Retinoblastoma protein-mediated apoptosis after gammairradiation / C Bowen, M. Birrer, E. Gelmann // J. Biol. Chem. 2002. - 227 (47).- P. 44969-44979.

168. Boyde, A. Scanning electron microscopic studies of the formation of mineralized tissue / A. Boyde and S. J. Jones // In: Developmental aspects of oral biology. N. Y.: Academic Press, 1972. - P. 243-274.

169. Brozman, M. Morphology of implanted perichondrium and its gradual restructurity into articular cartilage / M. Brozman // Acta Chir. Plast. 1988, v.30. -№ 3. - P. 147-166.

170. Bruns, J. Cartilage flow phenomenon and evidence for it in perichondrial grafting / J. Bruns // Arch. Orthop. Traum. Surg. - 1997 - v. 116, № 1-2. - P. 66-70.

171. Buckwalter, J. A. Articular cartilage. Part I: Tissue design and chondrocyte-matnx interaction / J. A. Buckwalter and H. J. Mankin // J. Bone feint Surg. Am. -1997.-v.79.-P. 600-611.

172. Bush, J. W. A proclamation by President of the United States of America / J. W. Bush // J. Bone Joint Surg. 2002. - v.84A. - № 8. - P. 1297-1298.

173. Burlakova, E. B. Lovf doses of radiation: are they dangerous? / E. B. Burlakova // Hungtington, New York : Nova Science Pubis., Inc., 2000.- Ch. 11.-P. 141-154.

174. Calabrese, E. J. Radiation hormesis: its historical foundation as a biological hypothesis / E. J. Calabrese, L. A. Baldwin // BELLE Newsletter, 1999. v.8. - P. 2-37.

175. Calabrese, E. J. Hormesis: changing view of the dose-response, a personal account of the history and current status / E. J. Calabrese // Mutat. Res., 2002. v.511.-P. 181-189.

176. Christoffersen, J. A. Contribution with review to the description of mineralisation of bone and other calcified tissue in vivo / J. A. Christoffersen, W. J. Landis // Anat. Rec., 1991. v.230. - № 4. - P. 435-450.

177. Corwell, C. W. Articular cartilage repair. Editorial comment / C. W. Corwell, D. Derril, D. D. Lima, M. Lots // Clin. Orthoped. Rel. Res., 2001. № 391. -Suppl. 10.-P. 2-6.

178. Craig A. T. Combiner Vitragonic and gamma-irradiation of E.Coli / A. T. Craig, J. M. R. Tuler //1 bid., 1997. v.22. - № 15. - P. 415-430.

179. Dangerfield, P. Growth, development and puberty indicators on spinal growth / P. Dangerfield // Stud. Health Technol. Inform., 2002. v.91. - P. 305308.

180. Dell'Orbo, C. The role of proteoglycans al the beginning of the calcification process / C. Dell'Orbo, D. Quacct, U. Pazzaglia // Basic and Appl. Histochem : histochemical and ultrastructural observations. 1982. - v.26. - № 1. - P. 35-46.

181. Dounchis, J. S. Cartilage repair with autogenic perichondrium cell andpolylactic acid grafts / J. S. Dounchis // Clin, Orthoped. Rel. Res., 2001, № 377. -P. 248-266.

182. Eggli, Peter S. Matrix compartments in the growth plate of the proximal tibia of rats / Peter S Eggli, Herrmann Wolfgang, Ernst B. Hunziker, Robert K. Schenk // Anat. Rec., 1985. v.211. - № 3. - P 246-257.

183. Eidus, L. Kh. The mechanism of radiation-induced interphase death of lymphoid cells: a new hypothesis / L. Kh. Eidus, Yu. N. Korystov, O. R. Dobrovinskaya, V. V Shaposhnikova // Radiat. Res., 1990. v. 123. - P. 17-21.

184. Frankel, E. N. Lipid oxidation / E.N. Frankel // Progr. Lipid Res., 1980. -v.19. -№> 1-2.-P. 1-22.

185. Frankel, E. N. Secondary product of lipid peroxidation / E. N. Frankel // Chem. Phys. of Lipids, 1987. v.44. № 2-4.- P. 73-83.

186. Gangji, V. Abnormalities in the replicative capacity of osteoblastic cells in the proximal femur of patients with osteonecrosis of the femoral head / V. Gangji et al. // J. Rheumatol., 2003. v.30. - P. 348-351.

187. Gao, J. Immunolocalization of types I, II, and X collagen in the tibial Insertion sites of the medial meniscus / J. Gao // Knee Surgery, Sports Traumatology, Arthroscopy, 2000. v.8. -№ 1. - P. 61-65.

188. Gazdzik, T. Struktura i fiinkcja chrzastki nasadowej / T. Gazdzik, H. Grzybek, B. Panz, M. Gazdzik // Chir. narz. ruchu i ortop. pol., 1984. v.49. - № 5. -P. 409-413.

189. Gille, J. J. Biological signification of oxygen toxicity: an introduction / J. J. Gille, H, Joenji // Membrane Lipid oxidation v.3. / Ed. C. Vigo-Perfley. Boca Raton, Ann Arbor, Boston, 1991. P. 1-32.

190. Gutteridge, J. M. C. The measurement and mechanism of lipid peroxidation in biological systems / J. M. C. Gutteridge, A. Hallivell // TIBS., 1990. v. 15. - P. 129-135.

191. Hohling, H. J. Quantitative electron microscopic investigation of mineral nucleation in collagen / H. J. Hohling, B. A. Ashton, H. D. Koster // Cell Tiss. Res., 1974. v. 148. - № 2. - P. 11-26.

192. Hohling, H. J. Structural relationcship between the primary crystal formations and the matrix macromolecules in different hard tissues. Discussion of a general principle. Connect / H. J. Hohling et al. // Tiss. Res., 1995. v.33.- № 1-3.-P. 171-178.

193. Hunter, W. On the structure and disease of articular cartilage / W. Hunter // Classic (1743). Clin. Orthoped. Rel. Res., 1995. № 317. - P. 3-7.

194. Homere, A. Immunolocalisation of vascular endothelial growth factor (VEGF) in human neonatal growth plate cartilage / A. Homere et al. // J. Anat. -1999. 194. - № 4. - P. 519-524.

195. Ikushima, T. Chromosomal responses to ionizing radiation reminiscent of an adaptive response in culture Chinese humster cells / T. Ikushima // Mutat. Res., 1987. -v.180.- P. 215-221.

196. Kagan, V. E. Oxidative signaling pathway for externalization of plasma membrane phosphatidilserine during apoptosis / V. E. Kaganet al. // FEES Letters, 2000. v 477. - P. 1-7.

197. Kerr, J. F. R. Apoptosis: a basis biological phenomenon with wide-ranging implication in tissue kinetics / J .F. R. Kerr, A. H. Wyllie, A. R. Curne // Br. J.Cancer.- 1972. 26 (2). - P. 239-257.

198. Kirsch, T. Regulated production of mineralization-competent matrix vesicles in hypertrophic chondrocytes / T. Kirsch et al. // J. Cell Biol., 1997. 137. - № 5. -P. 1149-1160.

199. Kirsck, T. Matrix Vesicles Mediate Mineralization of Human Thyroid

200. Cartilage. / T. Kirsck and H. Claassen // Calcif. Tiss. Int., 2000. v.66. - № 4. - P. 292-297.

201. Kocher, R. A. The chondroblast and chondrocyte / R. A. Kocher In : Cartilage. N. Y., Acad. Press. 1983. - v. 1. - P. 58-85.

202. Krefiting, E. R. Electroprobe x-ray microanalysis of epiphyseal growth plate cartilage: calcium and potassium distribution at the mineralization front / E. R Krefting // EUREUM : Proc. 9th Eur. Congr. Electron Microsc. 1998. - P. 581582.

203. Kristiansen, P. Effect modification by inorganic lead in the dominant lethal assay / P. Kristiansen, S. Eilertsen, E. Einarsdottir // Mutat.Res., 1993. v.302. - № l.-P. 33-38.

204. Landis, N. S. A study of calcification in the leg tendons from the domestic turkey / N. S. Landis // J. Ultrastruct. Mol. Struct. Res. 1986. - v.94. - № 3. - P. 217-238.

205. Lash, J. W. Glycosaminogiicans of cartilage / J. W. Lash, N. S. Vasan // In : Cartilage. N. Y., Acad. Press. 1983. - v.l. - P. 576-648.

206. Lehnert, B. E. Extracellular factor(s) following exposure to alpha particle can cause sister chromatid exchanges in normal human cells / B. E. Lehnert, E. H. Goodvin // Cancer Res. 1997. - v.57. - P. 2164-2171.

207. Leonarduzzi, G. Lipid oxidation products in cell signaling / G. Leonarduzzi, M. C. Arcan // Free Radical Biology and Medicine. 2000. - v.28. - P. 1370-1378.

208. Lester, K. S. Scanning electron microscopy of mineralized cartilage in rat mandibular condyle / K. S. Lester, M. M. Ash // J. Ultrastruct. Res. 1980,72. - № 2.-P. 141-150.

209. Lozzo, R. V. M. Ultrastructural localization of the major proteoglycan and type II procollagen in organelles and extracellular matrix of the cultured chondroblasts / R. V. Lozzo, M. Pacific // Histochemistry. 1986. - v.86. - P. 113122.

210. Luckey, T. D. Ionizing radiation promotes protozoan reproduction / T. D. Luckey // Radiat. Res. 1986. - v. 108. - P. 215-221.

211. Magno, G. Apoptosis, oncosis, necrosis / G. Magno, I. Joris // Amer. J.Pathol. 1995. - v. 146. - № 1. - P. 3-15.

212. Mazhuga, P. M. Mechanisms of the mammalian skeleton / P. M. Mazhuga // Acta biol. hung. 1994. - 35. - № 2-4. - P. 219-226.

213. Marathe, W. K. Bioactive phospholipid oxidation products / W.K. Marathe, K. A. Harrison // Free Radical Biol. Med. 2000. v.28. - P. 1762-1770.

214. Marnett, L. J. Oxyradicals and DNA damage / L. J Marnett // Carcinogenesis. 2000. - v.21. - Jfs 3.- P. 361-370.

215. Mazhuga, P. M. Mechanisms of cartilage precursor replacement by bone in the mammalian skeleton / P. M. Mazhuga // Acta biol. hung. 1984. 35. - № 2-4. -P. 219-226.

216. McManus, J. F. A. Staining methods / J. F. A McManus, R.W. Mowry // Histologic and histochemical. N.Y. London : Harper & Row. - 1963. - 423 p.

217. Mitchell, N. S. Electron microscopic evaluation of the occurrence of matrix vesicles in cartilage / N. S. Mitchell and N. L. Shepard // Anat. Rec.- 1990. -v.227. № 4. - P. 397-404.

218. Mothersill, С. Relevance of radiation-induced bystander effects for environmental risk assessment / C. Mothersill, K. O'Malley, С. B. Seymour // Радиационная биология. Радиоэкология. 2002. т.42. - №- 6. - P. 585-587.

219. Muier, H. Proteoglycans as organizer of the intercellular matrix // H. Muier // Biochem. Soc. France, 1983. - № 6. - v.13. - P. 613-622.

220. Newman, Bill. Coordinated expression of matrix Gla hrotein is required during endochondral ossificaiton for chondrocyte survival / Bill Newman, Laure L Gigout, Laure Sudte Michael, E Grant // J. Cell Biol. 2001. - 154. - № 3. - P. 659666.

221. Oberbaum, M. Hormesis: Dose-Dependent Reverse Effect of Low and Very Low Doses / M. Oberbaum, J. Kambar // Ultra High Dilution. Physiology and Physics. / Ed. P. S. Endler, J. Shulte. Boston, Dordrecht, London : Kluwer Academic, 1994. 321 p.

222. Pan, H. Apoptosis and cancer mechanisms / H. Pan, C. Yin, T.V. Dyke // Cancer Surveys. 1997. - v.29. - P. 305-327

223. Perka, C. Tissue engineering cartilage repair using cryopre-served and noncryopreserved chondrocytes / C. Perka // Clin. Orthoped. Rel. Res. 2000. - № 378.-P. 245-255.

224. Petersen, W. Insertion of autologous tendon grafts to the bone: a histological and immunohistochemical study of hamstring and patellar tendon grafts / W. Petersen, H. Laprell // Knee Surg., Sports Traumatol., Arthrosc. 2000. - v.8. - № l.-P. 26-31.

225. Petersen, W. Structure and vascularization of the cruciate ligaments of the human knee joint / W. Petersen, B. Tillmann // Anat. Embryol. 1999.- v.200. - № 3.-P. 325-334.

226. Petkau, A. Radiation affection of model phospholipid membranes / A. Petkau // Acta Physiol. Scand. 1980. - v.492. - P. 81-90.

227. Plate, U. Early mineralization of matrix vesicles in the epiphyseal growth plate / U. Plate, T. Tkotz, H. P. Wiesmann // J. Microsc. 1996. - v. 183. - № 3. - P. 102-107.

228. Poole, A. R. Association of an extracellular protein (Chendrocalcin) with the calcification of cartilage in endochondral bone formation / A. R Poole, I. Pidou, A. Reiner//J. Cell Biol. 1984.-98. - № 1. - P. 54-65.

229. Reinhart, E. Hormesis und die Bewertung kleinster Dosen von Wirkstoffen. //Biol. Med. 1998, v.27. - X- 2. - P. 51-54.

230. Sarraf, C. E. Kinetic studies on a murine sarcoma and an analysis of apoptosis / C. E. Sarraf, I. D. Bowen // Br. J Cancer. 1986. - 54. - P. 989-998.

231. Skoog, T. The formation of articular cartilage from the perichondrial grafts / T. Skoog and S. H. Johansson // Plast. Reconstr. Surg. 1976. - v.51. - № 1. - P. 1-6.

232. Sumii, H. Ultrastructure and X-ray microanalysis of epiphyseal growth cartilage of femoral head processed by rapid-freezing and freeze-substitution / H. Sumii, H. Inoue // Acta Med. Okajama. 1993. - v.47. - № 2. - P. 95-102.

233. Takagi, Minora. Ultrastructural cytochemistry of proteoglycans associated with calcification of shark cartilage / Minora Takagi, Richard T. Parmley, R. Denys Francis, Hiroshi Yagasaki // Anat. Rec. 1984. - 208. - № 2. - P. 149-158.

234. Tellone, C. I. The role of glycosaminoglycans and proteoglycans in the onset of calcification / C. I. Tellone, D. M. Kochhar // Teratology. 1983. - 27. - № 2. -P. 79-80.

235. The control of apoptosis and drug resistance in ovarian cancer: influence ofp53 and bcl-2 / A. G. Eliopoulos, D. J. Kerr, J. Herod et a. // Oncogene. 1995. -11.-7.-P. 1217-1228.

236. Tool, B. P. Glycosaminogiicans in morphogenesis / B. P/ Tool // Cell biology of extracellular matrix : New York, 1983. P. 259-293.

237. Towhead, T. E. Current status of glucosamine therapy in osteoartritis / T. E. Towhead // Arthritis Care & Research. 2001. - v.49. - № 4. - P. 601-604.

238. Trippel, S. B. Growth factor as therapeutic agents / S. B/ Trippel, R. D/ Coutts, T. A. Einhorn // J. Bone Joint Surg. Am. 1996. - v.78 (A). - № 8. - P. 1272-1284.

239. Vannereau, Henri. Disposition des fibres de collagene dans 1' epiphyse des os longs de Vertebres / Henri Vannereau, Luc Teof, Jean-Gabriel Pous // C. R. Acad. Sei. 1995. - Ser. 3. - 301 - № 16.- P. 721-726.

240. Wikstrom, Bo. Morphological studies of the epiphyseal growth zone in the brachymorphic (bm/bm) mouse / Bo Wikstrom, Renate Gay, Steffen Gay // Virchows Arch. 1984. - B47. - № 2. - P. 167-176.

241. Zeidler, H. Epidemiology of muskuloskeietal conditions in the geriatric population /H. Zeidler // Eur. 1 Rheumatol., Inflamm. 1994. - 14(1). - P. 3-6.

Информация о работе

Ирьянова, Татьяна Юрьевна
кандидата биологических наук
Курган, 2008
ВАК 03.00.25

Диссертация

Морфофункциональная характеристика метаэпифизарного хряща большеберцовой кости после общего внешнего воздействия γ-излучения в среднелетальной дозе - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы