Молекулярно-генетическое исследование наследственной компоненты подверженности к инсульту у населения г. Томска

Фролова, Светлана Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Молекулярно-генетическое исследование наследственной компоненты подверженности к инсульту у населения г. Томска
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Молекулярно-генетическое исследование наследственной компоненты подверженности к инсульту у населения г. Томска"

На правах рукописи

ФРОЛОВА СВЕТЛАНА ЮРЬЕВНА

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НАСЛЕДСТВЕННОЙ КОМПОНЕНТЫ ПОДВЕРЖЕННОСТИ К ИНСУЛЬТУ У НАСЕЛЕНИЯ г.ТОМСКА

03.00.15 - генетика 14.00.13 - нервные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ТОМСК - 2005

Работа выполнена в ГУ НИИ медицинской генетики Томского научного центра Сибирского отделения РАМН, г. Томск и ГОУ ВПО «Сибирский Государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научные руководители: академик РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Пузырёв Валерий Павлович

доктор медицинских наук, профессор Алнфирова Валентина Михайловна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Мирютова Наталья Фёдоровна

кандидат биологических наук Одинокова Ольга Николаевна

Ведущая организация: Институт цитологии и генетики

СО РАН, Новосибирск

Защита состоится <</^>> июня 2005 года в час^-^мин. на заседании

диссертационного совета К 001.045.01 при ГУ НИИ медицинской генетики Томского научного центра СО РАМН по адресу: 634050 г. Томск, Набережная р. У шайки, д. 10

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН, г. Томск.

Автореферат разослан » « 2005 г.

Учёный секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

Кучер А.Н.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы.

Цереброваскулярная патология занимает второе место среди главных причин смертности и является ведущей причиной инвалидизации населения в экономически развитых странах, что определяет ей как одну из важнейших медицинских и социальных проблем [Беленков и др., 2003; Гусев и др., 2004; Скворцова и др., 2003]. Обсуждается более 100 гуморальных факторов патологических процессов, наследственно-конституциональных аномалий, относимых к факторам риска (ФР).

Исследования отечественных и зарубежных учёных позволили сделать вывод о том, что семейная предрасположенность является самостоятельным фактором риска развития инсульта [Давиденкова и др., 1979; Скворцова и др., 2003]. Известно, что отягощённость одновременно по отцовской и материнской линиям намного больше увеличивает риск развития инсульта, чем наследование по одной из них. Наследование по материнской линии является «независимым» фактором риска развития инсульта [Булеца, 1990; Wel in et al.,1987; Killy et al., 1993; Jousilahti et al., 1997]. В близнецовых исследованиях показано, что конкордантность по риску развития ишемического инсульта у монозиготных близнецов составила 17,7%, у дизиготных - 3,6% [Bras et al., 1992].

Одним из подходов в изучении генетической предрасположенности к возникновению инсульта является использование полиморфных маркёров различных генов для анализа сцепления и/или ассоциаций с болезнями или их клиническими проявлениями. Гены, потенциально «задействованные» в развитии ишемического инсульта, относятся к разным генетическим системам: гены ренин-ангиотензиновой системы (РАС), системы гемостаза, гены синта-зы окиси азота (М?5-гены), гены кодирующие метаболизм гомоцистеина и липидов, гены апоптоза и другие [Скворцова и др., 2003].

Выбор генов-кандидатов проводился на основании анализа метаболических нарушений, характерных для данной патологии. По данным литературы известно, что мутация Лейдена (Gl691 А) ассоциирована с ишемическим инсультом [Margaglione et al., 1999; Casas et al., 2004], венозными тромбозами [Kosch, 2002], инфарктом миокарда [Middendorf et al., 2004]. Установлено, что мутация гена протромбина FII (G20210) часто встречается вместе с лейденской мутацией, повышая риск развития тромбозов и инфарктов [Doggen et al., 1998]. Показано, что PLA2 полиморфизм гена GPIIIa является фактором риска поражения крупных сосудов при инсульте у мужчин [Slowik et al., 2004], может вносить вклад в развитие инфаркта миокарда и коронарного атеросклероза и ассоциирован с развитием инсульта у молодых женщин европеоидной расы.

СЯицбпгоОд I

о» I

ме (ЦНС) гиперпродукция NO играет роль в развитии эпилепсий и инсультов. NO, вырабатывается эндотелиальной синтазой оксида азота — eNOS, кодируемой геном NOS3, является самым мощным из известных эндогенных вазо-дилятаторов [Ванин, 1998; Гомазков, 2000; Wilcox et al., 1997] и его связь с сердечно-сосудистой патологией, не вызывает сомнений [Степанов и др., 1998; Чистяков и др., 2000; Пузырёв, 1999; Ковалев, 2001; Косянкова, 2002; Макеева, 2004; Sessa, 1994; Warpeha et al., 1999; Hingorani et al., 1999; Guzic et al., 2001; Colombo et al., 2003; Casas et al., 2004]. Однако, анализ литературы показывает множество пробелов в наших современных знаниях по исследованиям роли гена NOS3 в патогенезе инсульта

Для эффективного определения характера генетических изменений, лежащих в основе инсульта, и для дальнейшего развития представлений о механизмах его развития целесообразно проведение популяционно-генетического исследования. Такой подход может служить основой в оценке общей подверженности популяции к развитию цереброваскулярной патологии. Таким образом, анализ генетической компоненты в этиологии и патогенезе развития инсульта представляется весьма актуальным.

Цель исследования: Установить факторы риска инсультов и значимость аллельных вариантов генов NOS3, FV, FII, GPIIIa в развитии острых нарушений мозгового кровообращения у русских жителей города Томска.

Задачи исследования:

1. Изучить основные факторы риска развития инсульта у жителей г. Томска.

2. Оценить частоты аллелей и генотипов по полиморфным вариантам генов-кандидатов подверженности к инсульту: гена эндотелиальной синтазы оксида азота (NOS3), гена пятого фактора свертываемости крови (FV), гена протромбина (FII) и гена рецептора интегринов (GPIIIa) в Томской популяции.

3. Изучить ассоциации полиморфных вариантов генов NOS3, FV, FII, GPIIIa с факторами риска развития инсульта и его клиническими проявлениями.

4. Определить связь генов NOS3, FV, FII, GPIIIa с количественными, патогенетически значимыми для инсульта признаками.

Научная новизна: Впервые проведено исследование генетической изменчивости полиморфных вариантов VNTR, С774Т, G894T, С-691Т гена эндотелиальной синтазы оксида азота (NOS3'); G1691A, A4070G гена пятого фактора свертываемости крови (FV), полиморфизма G20210A гена протромбина (FII) и варианта Т196С гена рецепторов интегринов (GPIIIa) у жителей г. Томска, перенесших мозговой инсульт. Получены новые сведения о вкладе полиморфных вариантов генов NOS3, FV, FII, GPIIIa в предрасположенность к инсульту. Показано, что полиморфизмы VNTR и С774Т гена NOS3 могут быть факторами риска развития инсульта и служить генетическими маркёрами при тестировании данной патологии.

Впервые оценена роль генов NOS3, FV, FII, GPIIIa в изменчивости комплекса количественных патогенетически значимых признаков при инсульте. Показано, что полиморфные варианты гена NOS3 ассоциированы с показате-

лями уровня липидов и свёртывающей системы крови (VNTR полиморфизм гена NOS3 с показателями уровня триглицсридов; полиморфизм G894T с уровнем общего фибриногена; аллельные варианты полиморфизма С-691Т с показателями холестерина в составе липопротеидов высокой плотности и идексом атерогенности). Полиморфизм Т196С гена GPIIIa связан показателями свёртывающей системы крови (уровнем общего фибриногена, активированным тромбопластиновым временем).

Практическая значимость: Сведения о значимости артериальной гипертонии как фактора риска инсульта у лиц с отягощённым семейным анамнезом позволяют обратить внимание на более активную профилактику инсульта не только на популяционном, но и на индивидуальном уровне, направленном на максимально раннее выявление лиц с заболеваниями и патологическими процессами, повышающими риск развития острых нарушений мозгового кровообращения (ОНМК). Полученные данные о вкладе молекулярно-генетических маркёров в формирование клинического полиморфизма инсульта могут быть учтены при формировании групп риска и организации профилактических мероприятий, стать основой для осуществления молекулярно-генетического тестирования подверженности к данной патологии в семьях, служить ориентиром в выборе лекарственной терапии (генотип-специфическая терапия). Полученная информация о распространении частот аллелей и генотипов полиморфизма генов NOS3, FV, FII, GPIIIa может быть использована в области генетической эпидемиологии, в популяционной и эволюционной генетике для углублённого описания генофондов народонаселения.

Положения, выносимые на защиту:

1. Ведущий фактор риска развития инсульта - артериальная гипертония - ассоциирован с полиморфизмами (VNTR, С774Т, G894T, С-691Т) гена эндо-телиальной синтазы оксида азота (NOS3)

2. Аллельные варианты гена NOS3 связаны с показателями уровня липидов и свёртывающей системы крови (VNTR полиморфизм с показателями уровня триглицеридов; полиморфизм G894T с уровнем общего фибриногена; С-691Т с показателями холестерина в составе липопротеидов высокой плотности и идексом атерогенности).

3. Наличие мутации Лейдена /•V(G1691A) является фактором риска более тяжёлого течения инсульта.

4. Полиморфизм Т196С гена GPIIIa ассоциирован с показателями свёртывающей системы крови (уровнем общего фибриногена, активированным тромбопластиновым временем), а также с нарушением ритма сердца у пациентов, перенесших инсульт.

Апробация работы: Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на межлабораторном научном семинаре ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН (Томск, 2005г.); IV и V конгрессах молодых учёных «Науки о человеке» (Томск, 2003; 2004); на V Конгрессе с международным участием «Паллиативная медицина и реабилитация в здраво-

охранении» (Афины, 2003г.); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвящённой 300-летию Санкт-Петербурга «Актуальные проблемы современной неврологии, психиатрии и нейрохирургии» (Санкт-Петербург, 2003г.); Международной конференции «Современные подходы к диагностике, профилактике и лечению нейродегенеративных заболеваний (деменции, инсульта и болезни Паркинсона)» (Новосибирск, 2003г.); Международном европейском конгрессе по генетике человека (Мюнхен, Германия, 2004г.); научно-практической конференции, посвящённой 25-летнему юбилею факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки специалистов (Томск, 2004г.), Российском национальном конгрессе кардиологов (Томск, 2004), VII научной конференции «Актуальные проблемы клинической генетики» (Томск, 2004г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ.

Структура и объём диссертации: Диссертационная работа изложена на 181 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов и их обсуждения, заключения и выводов, практических рекомендаций. Данные проиллюстрированы 47 таблицами, 16 рисунками. Библиографический указатель включает 229 источников, из них 88 работ отечественных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для оценки вклада полиморфных вариантов генов NOS3(VNTR, С774Т, G894T, С-691Т), FK(G1691 A, A4070G), F//(G20210A), GP!/Ia(T\96C) в развитие инсульта обследовано 114 пациентов, перенесших инсульт. Из них 66 мужчин и 48 женщин. Средний возраст пациентов составил 55,6±8,1 лет. Все больные были подразделены на 2 группы. Первая группа: больные с ишеми-ческим инсультом (ИИ), п=98 (85,9%) человек, 2-я группа: больные с геморрагическим инсультом (ГИ), п=16 (14,0%) человек.

Контрольную группу (п=110) составили лица, не имевшие клинических признаков сердечно-сосудистых нарушений, что подтверждалось данными опросника клинического обследования, и электрокардиографии, средний возраст 41,9±7,9 лет. Группа сформирована из выборки, использованной в эпидемиологическом исследовании факторов риска ИБС в г. Томске, проводимом кафедрой факультетской терапии СибГМУ.

Клинико-биохимические методы исследования. Диагноз инсульта устанавливался на основании общепринятых критериев в соответствии с международной классификацией болезней и проблем, связанных со здоровьем (МКБ-10, ВОЗ, 1992г). Неврологический статус исследовался по общепринятой схеме. Объективная оценка степени выраженности неврологического дефицита состояния больного оценивалась по шкале американского института неврологических расстройств и инсульта (шкала National Institutes of Health -National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NIH- NINDS)) [Goldstein, В artels, Davis, 1989].

Диагноз подтверждён нейровизуапизационными методами исследования в 88,59% случаев. МР-томография головного мозга проводилась на базе МРТ-лаборатории НИИ кардиологии ТНЦ СО РАМН, КТ-исследование - в лаборатории клиник СибГМУ. Всем пациентам определялось артериальное давление (АД). Расчитывались среднеарифметические значения САД и ДАД и показатель среднего артериального давления (среднее АД), который вычислялся по формуле:

АД среднее = (САД - ДАД):3 + ДАД.

Исследование показателей свёртывающей системы крови (ССК) (про-тромбиновый индекс (ПТИ), активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), определение фибриногена в плазме крови, определение растворимых фибрин-мономерных комплексов в плазме крови (РФМК)) проводилось на базе биохимической лаборатории клиник СибГМУ г. Томска. Ли-пидный спектр (определение содержание общего холестерина (ОХС) и триг-лицеридов (ТГ), холестерина липопротеидов высокой плотности (ХС-ЛПВП), липопротеиды низкой плотности (ЛПНП) и индекса атерогенности (ИА)) на базе биохимической лаборатории НИИ кардиологии ТНЦ СО РАМН.

Молекулярно-генетические методы анализа. Исследовались полиморфные варианты генов NOS3(VNTR, С774Т, G894T, С-691Т), FK(G1691A, A4070G), Fil (G20210A), GPlIla(T196C). При поступлении образцов крови больных инсультами выделение ДНК проводили по стандартной неэнзимати-ческой методике [Маниатис, Фрич, 1984; Lahiri, 1992]. Полиморфные варианты исследуемых генов исследовали с помощью амплификации соответствующих участков генома методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), используя структуру праймеров и параметры температурных циклов, описанных в геномной базе данных (GDB) и литературе [Радзинский и др., 2001; Wang et al., 1996; Aveu et al., 2000; Guzic et al., 2001].

Генотипирование полиморфизмов осуществляли путём ПДРФ-анализа продуктов амплификации соответствующими рестриктазами и последующим разделением продуктов рестрикции в 3% агарозном или 6% полиакриламид-ном гелях. Фрагменты ДНК окрашивали бромистым этвдием и визуализировали в УФ-свете с применением компьютерной видеосъемки на приборе "UV-VIS Imager-II "(США).

Статистические методы анализа данных. Основным методом статистического анализа являлся непараметрический метод (U-тест Манна-Уитни). Для изучения взаимосвязи основных факторов риска развития инсульта с клиническими и лабораторными признаками использовался корреляционный анализ с использованием гамма (7) статистики. При описании генетической структуры использовали: тестирование на соответствие распределения генотипов равновесию Харди-Вайнберга (РХВ) и сравнение частот аллелей и генотипов проводили с использованием критерия х2 с поправкой Йейтса на непрерывность и точным тестом Фишера [Вейр, 1995]; определение теоретической и ожидаемой гетерозиготности рассчитывали по методу Nei [1987]. Для оценки ассоциаций полиморфных вариантов генов с патологическим феноти-

пом рассчитывали относительный риск (RR) [Allison, 1997]. Обсуждение величин RR проводили при уровне значимости не более 5%. Анализ ассоциаций изучаемых полиморфных вариантов генов с количественными патогенетическими значимыми для инсульта признаками был выполнен с помощью одно-факторного дисперсионного анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Результаты клинического исследования больных

Среди факторов риска наиболее часто встречающимися оказались в группе ИИ: артериальная гипертония (92,8%), стресс (42,8%), курение (41,8%), ОНМК в анамнезе (17,3%). В группе ГИ: артериальная гипертония наблюдалась в 100,0% случаев, стресс, метеочувствительность, употребление острой и солёной пищи у 62,5% пациентов, курение у 31,2%, ОНМК в анамнезе - у 25,0%, стенокардия - у 25,0% обследованных.

При опросе самих пациентов и их родственников выявлено, что отягощенный наследственный анамнез наблюдался в группе ИИ у 75(76,5%) больных, а в группе ГИ - у 11(68,8%) пациентов. В группе больных, перенесших ИИ, инсульты по материнской линии, у матери пробанда были отмечены в 33,6% наблюдений, в 40,8 % случаев они страдали АГ, а в 8,1% случаев перенесли инфаркт миокарда (ИМ). По отцовской линии количество инсультов и ИМ оказалось равным и составило 14,3% случаев. Сибсы - сёстры страдали АГ в 22,4% наблюдений, у братьев АГ была установлена в 11,2% семей. В группе ГИ отягощенный семейный анамнез также отмечался по обеим родительским линиям. По отцовской линии в 25,0% случаев имели место инсульт и артериальная гипертония, по линии матери в 31,2% наблюдений были зарегистрированы инсульты и в 18,7% АГ. При анализе перенесенных заболеваний у сестёр в 12,5% случаев отмечалась АГ, а у братьев в 18,7% инфаркт миокарда и в 6,2% АГ.

Степень тяжести инсульта определялась в соответствии с классификацией, предложенной Е. И. Гусевым и соавт. (1996 г.). В группе ИИ преобладала средняя степень тяжести у 72(73,4%) обследованных. В группе ГИ тяжёлая степень преобладала у 9(56,2%) пациентов, что объяснялось характером инсульта и наличием отёка головного мозга.

Одновременно была проведена оценка степени выраженности неврологического дефицита согласно шкале NIH-NINDS и объективным данным [Goldstein et al., 1989]. Среди пациентов, перенесших ИИ, преобладали лица (52,04%) со средней степенью неврологических нарушений (суммарный балл по шкале NIH-NINDS составил 7,64±1,45 балла), в неврологическом статусе которых преобладала более выраженная очаговая симптоматика. В случае ГИ в первую группу с лёгкими нарушениями вошло 5(31,2%) пациентов (суммарный балл по шкале NIH-NINDS - 3,0±1,6 балла), вторую группу составили 5 (31,2%) больных со средней степенью выраженности неврологического дефицита (суммарный балл по шкале NIH-NINDS - 8,6±0,8 балла) и третью

группу - лица (суммарный балл по шкале NIH-NINDS - 15,Ot3,4 балла), (37,5%) с тяжёлыми клиническими проявлениями.

В обеих группах установлена взаимосвязь тяжести клинических проявлений инсульта от уровня среднего АД: чем выше определялся уровень среднего АД, тем тяжелее протекал инсульт.

Обнаружена взаимосвязь показателей АЧТВ с возрастом у пациентов с ИИ (т=-017; р=0,01) и со стрессом в группе больных, перенесших ГИ (т=0,63; р=0,01). Установлено, что больные, перенесшие ИИ, и имеющие высокие , цифры фибриногена, были особенно метеочувствительны (7=0,2; р=0,01). Чем

выше был уровень фибриногена, тем более увеличенным обнаруживался показатель РФМК и индекс атерогенности (у=0,25; р=0,005; 7=0,16; р=0,024). Повышение уровня ТГ коррелировало с ИМ (т=0,38; р=0,022), мерцательной аритмией (т=0,33; р=0,03), со степенью ГБ (т=0,33; р=0,001). В группе ИИ уровень ТГ коррелировал со степенью ГБ (у=0,22; р=0,007), а в группе ГИ с показателями САД (7= 0,43; р=0,025). Повышение уровня ХС-ЛПНП в общей группе и в группе ИИ коррелировало со стрессом. (7=0,28; р=0,003; 7=0,29; р=0,001). Снижение уровня ХС-ЛПВП в общей группе взаимосвязано с курением (т=-0,36; р=0,00002), с риском возникновения ИМ (т=-0,25; р=0,04), и с повышением уровня среднего АД (у=-0,14; р=0,02). Показатели среднего АД оказались связаны с такими факторами риска как злоупотребление алкоголем (7=0,140; р=0,032), степенью и продолжительностью АГ (т=0,53; р=0,03; 7=0,36; р=1х10^) и перенесёнными ОНМК (7=0,33; р=0,03). Уровень ср. САД ассоциировался с возрастом (т=0,16; р=0,008), стенокардией (т=0,205; р=0,03), степенью АГ (7=0,51; р=1х10"5), её продолжительностью (7= 0,41; р=1х10"5), показателями ср. ДАД (т=0,76; р=1 х!О-6) и среднего АД (7=0,84; р=1х10"5) и степенью неврологических нарушений при инсульте (7=0,51; р=1х10"5).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что в развитии инсульта играют роль не только АГ и атеросклероз, но также отягощенная наследственность и факторы внешней среды (курение, алкоголь, стрессовые ситуации, употребление в пищу острого и солёного). Изменения биохимических показа-1 телей крови и показателей системной гемодинамики, взаимосвязанные с фак-

> торами риска, могут влиять на степень неврологических нарушений при ин-

сульте.

Оценка частот аллелей и генотипов по полиморфизмам генов NOS3, FV, Fil, GPIIla у жителей г. Томска

Для всех полиморфизмов генов NOS3, FV, FII, GPIIla распределение генотипов соответствовало ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга (РХВ) (табл. 1). Значения гетерозиготности для полиморфизмов гена NOS3 варьировали в пределах от 22,7% (для VNTR) до 45,8% (для G894T). Среди генов гемостаза наименьшие значения гетерозиготности были получены для гена протромбина (2,0%), наибольшие - для гена GpIIIa (25,0%).

Таблица 1

Распределение генотипов и частот аллелей полиморфных вариантов генов NOS3, FV, FII, GpIIIa в контрольной выборке

Ген Полиморфизм Генотип NO. N.E. x2 d.f.=l Частота аллеля (%) hobs h«p

C774T CC CT TT 74 31 7 71,3 35,9 4,5 2,13 p=0,99 C=79,9 T=20,l 0,277 0,394

NOS3 G894T GG GT TT 57 55 8 59,5 50,0 10,5 1,20 p=0,53 G=70,4 T=29,6 0,458 0,417

C-691T CC CT TT 76 43 1 79,2 36,5 4,2 3,72 p=0,16 C=81,3 T=18,7 0,358 0,305

VNTR AA AB BB 4 27 88 2,5 29,8 86,5 1,08 p=0,21 B=85,3 A=14,7 0,227 0,250

FV G1691A GG GA AA 113 5 0 113,0 4,8 0,05 - G=97,9 A=2,l 0,042 0,041

A4070G AA AG GG 78 13 2 76,7 15,4 0,7 2,33 p=0,12 A=90,8 G=9,2 0,139 0,166

FII G20210A GG AG AA 103 2 0 103,0 1,9 0,01 - G-99,0 A=1,0 0,019 0,019

GpIIIa T196C PLA1/1 PLA1/2 PLA2/2 85 29 0 86,8 25,3 1,8 0,07 p=0,79 PLA1=85,8 PLA2=14,2 0,250 0,244

Примечание. N.O. -наблюдаемая и N.E. - ожидаемая численность генотипов соответственно; критерий %2 использован для оценки соответствия наблюдаемого распределения генотипов ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга; d.f. - число степеней свободы; Ь^ и hcxp - соответственно наблюдаемая и ожидаемая гетерозиготность.

Изученные варианты гена NOS3 отличались большим уровнем полиморфизма, чем варианты генов свертываемости крови (табл. 1). Полиморфные варианты гена NOS3 достаточно широко изучены в различных популяциях, в том числе и в России. Наиболее полно в литературе представлены данные по частотам аллелей гена NOS3 [Степанов и др., 1998; Косянкова, 2001; Пузырёв К. В. и др., 2002; Hingorani et al., 1998; Hibi et al., 1998; Miyahara et a!., 1994], особенно полиморфизма VNTR.

Частота аллеля «С» варианта С-691Т в контрольной группе составила 81,3%. По данным литературы, его встречаемость колеблется от 48% у бурят до 94% у якутов, а у татар, проживающих на территории Томской области, составляет 83% [Сеитова, 2004]. В настоящем исследовании частота аллеля «G» полиморфизма G894T составила 70,4%. Частота аллеля «С» полиморфизма С774Т также соответствовала данным литературы и составила 79,9%. В исследованиях сибирских популяций показано, что частота данного аллеля варьирует от 69% у якутов до 74% у тувинцев и бурят [Косянкова, 2002]. Его частота у американцев составляет 74% [Novoradovsky et al., 1999].

Таким образом, исследованные ДНК-полиморфизмы у русских г. Томска по частотам аллелей и генотипов не отличаются от данных, представленных в мировой литературе.

Характеристика полиморфных вариантов генов NOS3, FV, Fil, GPJIIa у больных инсультом

Для полиморфизмов гена NOS3 в группе больных минимальное и максимальное значения гетерозиготности были отмечены для маркеров С-691Т и С774Т, которые составили 23,8% и 43,5% соответственно (табл. 2). У больных инсультом и в контрольной группе выявлено различие по вариантам С-691Т и VNTR за счет понижения уровня гетерозиготности у больных в первом случае (р=0,057) и повышения - во втором (р=0,053). Это позволяет предполагать, что, гетерозиготный генотип по данным маркерам может иметь прогностическое значение. Среди генов гемостаза в группе больных инсультом минимальные и максимальные значения гетерозиготности, так же как и в контрольной группе, были получены для гена протромбина (0,9%), для гена GpIIIa (20,6 %).

При сравнении частот аллелей полиморфных вариантов генов NOS3, FV, FII у больных инсультом не было выявлено существенных отличий от таковых в сравнении с другими сосудистыми заболеваниями. Частота аллеля С691 среди больных инсультом, составила 84,3% (табл. 2). По данным литературы, частота этого кллеля находится на уровне 85% у больных коронарным атеросклерозом (КА), 60% у больных с нарушением проводимости сердца (НПС), 65% у пациентов с ЭГ и 78% у пациентов с кардиомиопатией (ГКМП) [Косянкова, 2002; Макеева, 2004].

У больных инсультом частота аллеля G894 гена NOS3 составила 73%. Частота аллеля «С» полиморфизма С774Т - 74,5%, а аллеля 4b VNTR полиморфизма гена NOS3 у больных инсультом - 77,3% (табл. 2). Среди других заболеваний частота этого аллеля находится на уровне 84% у больных коронарным атеросклерозом (КА), 85% у больных с (НПС), 80% у пациентов с ЭГ и 74% у пациентов с кардиомиопатией [Косянкова, 2001; Макеева, 2004].

Частота мутации Лейдена 1691А гена пятого фактора свертывания крови и мутации 20210А гена протромбина у больных инсультом в настоящем исследовании была равна 3,3% и 0,5% соответственно. Эти оценки находятся в пределах величин, описанных в литературе, как для здоровых, так и для боль-

ных с различными формами сосудистых нарушений, включая инсульт, церебральный венозный громбоз, коронарный атеросклероз, ИМ [Madonna et al., 2002; Margaglione et al., 1999; Kenet et al., 2000; Longstreth et al., 1998; Redondo et al., 1999; Doggen et а!., 1998].

Таблица 2

Распределение генотипов и частот аллелей полиморфных вариантов

генов NOS3, FV, FII, GpIIIa в группе больных инсультом

Ген Полиморфизм Генотип N.O. N.E. x2 d.f.=l Частота аллеля (%) hota h«P

NOS3 С774Т СС CT TT 57 47 4 60,0 41,0 7,0 1,014 p=0,31 C=74,5 T=25,5 0,435 0,380

G894T GG GT TT 57 46 6 58,7 42,5 7,7 0,147 p=0,70 G=73,0 T=27,0 0,422 0,391

С691Т cc СУ 'IT 76 25 4 74,5 27,8 2,5 0,299 p=0,58 C=84,3 T=15,7 0,238 0,265

VNTR AA AB BB 6 37 65 5,5 37,8 64,5 0,001 p=0,97 B=77,3 A=22,7 0,343 0,351

FV G1691A GG GA AA 100 5 1 99,1 6,7 0,1 - G=96,7 А = 3,3 0,047 0,064

A4070G AA AG GG 82 21 1 82,2 20,4 1,2 0,073 p=0,78 A=88,9 G=11,1 0,202 0,197

FII G20210A GG AG AA 107 1 0 107,0 1,0 0,0 - G=99,5 А = 0,5 0,009 0,009

GpIIIa Т196С PLA1/1 PLA1/2 PLA2/2 85 22 0 86,1 19,7 1,1 1,405 p=0,23 PLA 1=89,7 PLA2=10,3 0,206 0,185

Примечание. Обозначения см. табл. 1.

Полученная в данном исследовании частота аллеля PLA2 гена GPIJIa для больных инсультом 10,3% ниже значений, описанных в литературе: в Англии частота данного аллеля у больных инсультом составила - 30% [Angela et al., 1999], в США - 50% [Kathryn <-t al., 1998], среди других заболеваний частота

аллеля PLA2 находится на уровне 32,9% у пациентов с коронарным тромбозом [Mirrelson et al., 1999].

В целом, исследованные варианты гена NOS3 в группе больных инсультом, так же как и в контроле, отличались большим уровнем полиморфизма, чем маркеры генов свертываемости крови.

Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов NOS3, FV, FII, GPIIIa

с инсультом

Об ассоциации генотипов с предрасположенностью к инсульту и его клиническими особенностями судили по величине относительного риска шансов (RR). В случае достижения значимых отличий по частотам аллелей в сравниваемых группах, значения RR>1 указывают на возможную положительную ассоциацию аллеля с заболеванием. Обсуждение величин относительного риска проводили при уровне значимости не более 5%.

Не было показано различий между больными инсультом и контрольной группой по частотам аллелей и генотипов полиморфных вариантов G894T; С-691Т гена NOS3 и изученных генов гемостаза (табл. 3). Положительная ассоциация была показана для больных инсультом по аллелю «A» VNTR полиморфизма (х2=4,26; р=0,038; RR=1,54), что указывает на возможную патологическую роль данного полиморфизма в развитии этого заболевания. Установлено различие в частотах генотипов полиморфного варианта С774Т гена NOS3 между исследуемыми группами.

Получены достоверные различия по частотам генотипов по VNTR-полиморфизму гена NOS3, в зависимости от типа инсульта. В подгруппе больных ГИ выявлено отклонение от РХВ 0^=4,6; d.f=l; р=0,03) и недостаток гетерозигот на уровне 53,6%. В этой же подгруппе было выявлено увеличение частоты генотипа «АА» по сравнению с больными ИИ (р=0,04) и контрольной группой (р=0,03). В подгруппе больных ИИ наблюдается повышение частоты гетерозигот «АВ» VNTR полиморфизма по сравнению с контролем (р=0,03).

В природных популяциях давлению отбора подвергаются носители определенных генотипов, различным вкладом которых определяется приспособленность популяции в целом. Полученные в настоящем исследовании данные позволяют предположить, что носители генотипов «АА» и «АВ» VNTR полиморфизма имеют предрасположенность к развитию различных форм инсульта.

Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов NOS3, FV, FII, GPIIIa с некоторыми факторами риска

При исследовании полиморфных вариантов генов NOS3 (VNTR, С774Т, G894T, С-691Т), FV (G1691A, A4070G), FII (G20210A), GPIIIa (T196C) в различных возрастных группах больных инсультом не выявлено статистически значимых отличий по частотам аллелей и генотипов.

Таблица 3

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфизмов гена N053 П1, врШа

Группы У1ЧТ11 С774Т

генотипы п (%) аллели п (%) генотипы п (%) аллели п (%)

АА АВ ВВ А I В СС СТ ТТ С Т

Контроль 4(3,4) 27(22,7) 88(73,9) 35(14,7) 203(85,3) 74(66,1) 31(27,7) 7(6,2) 179(79,9) 45(20,1)

Инсульт 6(6,0) 37(34,0) 65(60,0) 49(22,7) 167(77,3) 57(52,8) 47(43,5) 4(3,7) 161(74,5) 55(25,5)

Г (Р) 4,89(0,08) 4,26(0,038) 6,23(0,04) 1,51(0,21)

ЯК 1,54 1,26

в894Т С-691Т

Контроль Ой вт ТТ в Т СС СТ ТТ С Т

57(47,5) 55(45,8) 8(6,7) 169(70,4) 71(29,6) 76(63,4) 43(35,8) 1(0,8) 195(81,3) 45(18,7)

Инсульт 57 (52,3) 46 (42,2) 6 (5,5) 160(73,0) 58(27,0) 76 (72,4) 25 (23,8) 4(3,8) 177(84,3) 33(15,7)

х2 (Р) 0,56(0,76) 0,36(0,546) 5,58(0,06) 0,52(0,47)

ЯЛ 0,86 0,81

тпб91А РУ А4070С

Контроль во вА АА А АА Ав во А в

113(95,8) 5(4,2) 0(0) 231(97,9) 5(2,1) 78(83,8) 13(14) 2(3,2) 169(90,8) 17(9,2)

Инсульт 100 (94,3) 5 (4,7) 1 (1,0) 205(96,7) 7(3,3) 82 (78,8) 21(20,2) 1 (1,0) 185(88,9) 23(11,1)

Х2(р) 0,74* 0,231(0,63) 0,44* 0,213(0.64)

яя 1,57 1,236

ИЮ20210А в рШа Т196С

Контроль ОА АА А Р1Л1/1 РЬА1/2 РЬА2/2 РЬА1 РЬА2

103(98,1) 2(1,9) 0 208(99,0) 2(1,0) 85(73,3) 29(25,0) 2(1,7) 199(85,8) 33(14,2)

Инсульт 107(99,1) 1(0,9) 0 215(99,5) 1(0,5) 85(79,4) 22(20,6) 0(0) 192(89,7) 22(10,3)

х2 (р) 0,61* 0,61* 0,33* 1,25(0,26)

яя 0,48 0,69

Примечание. ИИ - относительный риск; р - уровень значимости: критерий х - использован для сравнения частот аллелей и генотипов; * - уровень значимости, полученный точным тестом Фишера.

Для сравнения изучаемых полиморфных вариантов генов и степени АГ все больные были подразделены на две группы. Первую группу (I) составили пациенты с нормальной и пограничной степенью гипертонии АД= от 120/80 до 140/90 мм. рт. ст., (п=53) вторую (II) составили пациенты с мягкой, средней и тяжелой степенью гипертонии АД=159/99-180/110 (п=55); третья группа (III) - контроль (п=120). При сравнении частот аллелей и генотипов в группах больных с различной степенью АГ и контрольной группой не было выявлено различий по полиморфизмам генов FV (G1691A, A4070G), FII (G20210A), GPÍIIa (TI96C) (табл. 4). Отмечено постепенное накопление алле-ля «А» полиморфизма VNTR гена NOS3 от 14,7% в контрольной группе до 20,8% у пациентов I группы и 24,5% у больных II группы (табл. 4).

При исследовании частот генотипов полиморфных вариантов С774Т и С-69IT получены достоверные отличия между пациентами I группы и контролем (р=0,01; р-0,01) (табл.4). У пациентов I группы отмечается отклонение распределения генотипов от РХВ по полиморфном варианту С774Т 0^=4,21; d.f.=l; р=0,04) и накопление носителей генотипов «CT» и «TT» по сравнению с контрольной группой (х=4,60; р=0,032). Кроме этого, пациенты I группы характеризуются отклонением распределения генотипов от РХВ по полиморфному варианту С-691Т 0^=4,48; d.f.=l; рЮ,034) и, кроме этого, значимым недостатком гетерозигот «CT» по сравнению с контрольной группой (X?=4,77;p=0,029).

Обнаружено постепенное снижение частоты гетерозигот «GT» полиморфизма G894T гена NOS3 от 45 % в контрольной группе до 40,6% с пограничной степенью и 37% у больных мягкой, средней и тяжелой степенью АГ. Достоверные отличия в распределении генотипов были получены между больными I и II групп (^=4,47; р=0,034). В литературе имеются сообщения о связи VNTR полиморфизма гена NOS3 с эссенциальной гипертонией (ЭГ) [Степанов и др., 1998; Benjafield, Morris, 2000; Fernandez et al., 2004], острой коронарной недостаточностью [Park et al., 2004] с ЭГ в популяции Японии [Naka-уаша, 1997], с ГЛЖ при ЭГ в популяции г. Томска [Косянкова, Пузырев, 2002, 2003].

Полученные результаты свидетельствуют о взаимосвязи полиморфизмов VNTR, С774Т, С-691Т и G894T гена NOS3 со степенью артериальной гипертонии при инсульте. Данные полиморфизмы могут служить генетическими маркёрами при тестировании подверженности к данной патологии, особенно у лиц с гипертонией.

Выявлены значимые отличия по частотам генотипов полиморфизма С774Т гена NOS3 между группой больных инсультом, перенесших инфарктом миокарда и контрольной группой (р=0,01). Таким образом, у пациентов с инсультом, особенно сочетающиеся с инфарктом миокарда преобладают генотипы «CT» и «TT» полиморфизма С774Т.

Таблица 4

Частота аллелей и генотипов полиморфных вариантов гена NОБЗ у больных инсультом с различной степенью АГ и здоровых лиц

Группы \мк С774Т

генотипы п(%) аллели п(%) генотипы п(%) аллели п(%)

АА АВ ВВ А В СС СТ ТТ С Т

I 1(1,9) 20(37,7) 32(60,4) 27(20,8) 84(79,2) 25(52,7) 27(39,8) 1(7,5) 77(72,6) 29,4(27,4)

II 5(9,1) 17(30,9) 33(60,0) 27(24,5) 83(75,5) 32(58,2) 20(36,4) 3(5,4) 84(76,4) 26(23,6)

III 4(3,4) 27(22,7) 88(73,9) 35(14,7) 203(85,3) 74(66,1) 31(27,7) 7(6,2) 179(79,9) 45(20,1)

I, III 0,12* 4,16( 0,04) 0,01* 1,79(0,18)

11, III 0,117* 4,33(0,03) 0,51* 0,36(0,54)

Группы в894Т С-691Т

генотипы п(%) аллели п(%) генотипы п(%) аллели п(%)

СТ тт в Т СС СТ ТТ С Т

I 24(51,4) 28(40,6) 1(8,0) 76(71,7) 30(28,3) 39(72,7) 9(25,1) 3(2,2) 87(85,3) 159(14,7)

II 33(57,0) 17(37,0) 5(6,0) 83(75,5) 27(24,5) 37(68,5) 16(29,6) 1(1,9) 90(83,3) 18(16,7)

III 57(47,5) 55(45,8) 8(6,7) 169(70,4) 71(29,6) 76(63,4) 43(35,8) 1(0,8) 195(81,3) 45(18,7)

1,111 0,406* 0,01(0,91) 0,01* 0,553(0,46)

II, III 0,171* 0,716(0,39) 0,53* 0,101(0,75)

Примечание. Обозначения см. таб. 3.

Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов NOS3, FV, FU, GPIIIa с некоторыми клиническими признаками инсульта

В настоящем исследовании изучены взаимоотношения полиморфных вариантов NOS3, FV, Fil, GPIlla с некоторыми клиническими признаками инсульта: степенью тяжести (шкала NIH), показателями ЭКГ (ритм, гипертрофия левого желудочка (ГЛЖ), изменениями миокарда (желудочков и/или предсердий), изменениями глазного дна (гипертензивная ангиопатия сетчатки (ГАПС), артериолосклероз сетчатки (АС)).

Несмотря на то, что не было выявлено различий в частотах аллелей полиморфизма С774Т гена NOS3 у больных с различной степенью тяжести инсульта и в контрольной группе, обнаружены значимые различия в распределении генотипов между группой больных со средней степенью заболевания и контрольной группой (р=0,01). У первых наблюдается повышение частоты гетерозигот «CT» до 56,3% по сравнению с контрольной группой, где частота их составила 27,7% (р=0,03) (рис. 1). Показано накопление аллеля «А» полиморфизма G1691А гена FV в группе больных с наибольшей степенью тяжести заболевания (группа III) (р=0,02) и различия в распределении генотипов между группой III и контролем (х* = 7,603; р=0,02) (рис. 1).

В группах больных с лёгкой и тяжелой степенью инсульта частота «патологического» аллеля «А» полиморфизма VNTR гена NOS3 составила 25,4% и 31,2% соответственно, тогда как в контрольной группе его частота находилась на уровне 14,7% (рис. 1). Кроме того, что у больных с тяжелой степенью инсульта имеет место накопление «патологического» аллеля «А», у них выявлено также повышение частоты гомозиготных носителей данного аллеля (рис.1). Так как I группу по тяжести заболевания составили пациенты с пограничной степенью АГ (146-147/92-94), а III группу - со средней и тяжёлой степенью АГ (153-175/96-103), то данный результат является закономерным, поскольку нами установлена связь полиморфизма VNTR и степенью АГ.

Полученные результаты свидетельствуют, что некоторые полиморфные варианты гена NOS3 могут вносить вклад в предрасположенность к развитию инсульта и дают возможность прогнозировать тяжесть течения заболевания. Наличие мутации Лейдена может являться фактором риска тяжелого течения инсульта.

Отмечено достоверное увеличение патологического аллеля PLA2 (16,7%) гена GpIIIa в группе больных инсультом с нарушениями сердечного ритма на ЭКГ (группа 1) по сравнению с группой обследованных без таковых (группа 2) (р=0,03; р=0,02). Статистически значимыми были огличия по частотам генотипов (х^З.95; р=0,04) в данных группах. Также показаны статистически достоверные отличия по частотам аллелей и генотипов полиморфного варианта VNTR гена NOS3 и различия в распределении генотипов С774Т в группе больных инсультом с изменениями миокарда на ЭКГ и контрольной группой (р=0,01; р=0,01) (р=0,04). Данные результаты могут свидетельствовать о связи VNTR полиморфизма гена NOS3 с клиническими проявлениями со стороны сердечно-сосудистой системы при инсульте.

Частота аллеля «А» полиморфизма С1691А гена ГУ. Частота генотипов и аллеля «А»У1УТК полиморфизма

гена N083

/ 5,25 в >25 |

/ В 4,2

/ 2.4

/ Г_ги

/ / _ — т-

<5А АА А

10) Инсульт(тяжелая степень) □ Контроль

АВ | АА | умтя

0 Легкая Ш) Тяжелая Э Контроль

Частота генотипов полиморфизма С774Т гена N083

Ш Легкая В Средняя ЕЗ Контроль

Рис.1. Частоты генотипов и аллелей полиморфизмов С1691А гена ГУ, и VNTR, С774Т гена N083 у больных с различной степенью тяжести инсульта и контрольной группой

Связь полиморфных вариантов генов NOS3, FV, Fil, GPllla с патогенетически значимыми количественными признаками инсульта

Следующим этапом нашей работы была оценка функциональной значимости генов fT(G1691A, A4070G), F//(G20210A), Gpllla{ Т196С), M9£?(VNTR, C774T, G894T, C-691T) в фенотипической изменчивости количественных признаков, таких как: показатели ССК, липидного спектра, и среднего артериального давления. В контрольной группе не показано связи генов NOS с количественными патогенетически значимыми признаками, возможно, в силу сбалансированного функционирования физиологических систем у здоровых индивидов. Иная ситуация наблюдается в группе больных.

С помощью однофакторного дисперсионного анализа оценена зависимость распределения значений вышеперечисленных показателей от пола и возраста. Не было обнаружено зависимости от пола. Показатели АЧТВ и ХС-ЛПВП показали зависимость от возраста. Уровень АЧТВ показал обратную зависимость (коэффициент корреляции г=-0,1877, р-0,05), уровень ХС-ЛПВП- прямую (г=0,2668, р=0,005). Для выполнения анализа ассоциаций генотипов с количественными признаками, необходимо было ввести поправку на возраст значений уровня ХС-ЛПВП После введения данной поправки, не было обнаружено зависимости данных показателей от возраста.

С помощью однофакторного дисперсионного анализа показано, что с полиморфными вариантами гена NOS3 у больных инсультом ассоциированы следующие патогенетически значимые признаки: VNTR - с показателями уровня триглицеридов (ТГ); G894T-C уровнем общего фибриногена (ОФ); ал-лельные варианты полиморфизма С-691Т с показателями ХС-ЛПВП, и индексом атерогенности (ИА) (табл 5). Функциональные механизмы полученных ассоциаций до конца не ясны и, вероятно, связаны с продемонстрированным в данном исследовании вкладом полиморфизмов генов NOS в детерминацию изменчивости спектра количественных факторов риска и клинических признаков инсульта. Продукты экспрессии изученных генов включены в контроль сосудистого тонуса и других процессов, поэтому их молекулярные изменения могут привести к патологическим последствиям.

В настоящем исследовании выявлена ассоциация между аллелем PLA2 гена Gplfla с уровнем общего фибриногена в крови, что является неблагоприятным прогностическим фактором течения заболевания (табл. 5). Кроме того, получена ассоциация между наличием патологического аллеля PLA2 и уровнем АЧТВ При инсульте повышается уровень ОФ, а показатели АЧТВ укорачиваются вследствие гиперкоагуляции С одной стороны, в присутствии аллеля PLA2 тромбоциты способны связывать меньшее количество фибриногена, что может отрицательно сказываться на образовании микро- и макроагрегатов при повреждении сосудистой стенки.

С другой стороны, показана ассоцииация аллеля PL.A2 с повышенной агрегацией тромбоцитов, которая в данном случае возможна за счёт повышения уровня фибриногена, так же ассоциированного с наличием аллеля PLA2 Таким образом, выявленная ассоциация патологического аллеля PLA2 гена

СрШа с уровнем ОФ и АЧТВ предполагает возможную прогностическую значимость данного полиморфизма относительно течения заболевания.

Таблица 5

Связь полиморфизма гена СРШа (Т196С) и полиморфизмов гена N033 с количественными патогенетически значимыми признаками

Признаки | генотипы | М ±8.0. ] Р ) р

Полиморфизм Т196С гена (7р///я

АЧТВ РЬА1(п=86) 33,3±0,6б 3,64 0,05

РЬА1/2(п=22) 30,3± 1,57

Общий фибриноген РЬА1(п=86) 3,48±0,08 6,797 0,01

РЬА 1/2(п=22) 4,01±0,21

Полиморфизм \TSTR гена N053

триглицериды ЬЬ(п=65) 1,59±0,37 5,605 0,04

аЬ(п=37) 1,66±0,08

аа(п=б) 2,46±0,62

Полиморфизм С894Т гена N053

Общий фибриноген 8В(п=57) 3,82±0,12 4,746 0,01

#(п=46) 3,36±0,12

П(п=6) 3,12±0,28

Полиморфизм С-691Т гена N083

ХС-ЛПВП сс(п=76) 1,02±0,02 4,55 0,012

сф=25) 0,83±0,04

«(п=4) 1,10±0,08

Индекс атеро-генности сс(п=76) 3,64±0,13 3,26 0,042

й(п=25) 4,37±0,41

П(п=4) 3,00±0,17

Примечание. Р- статистика Фишера-Снедекора для однофакторного дисперсионного анализа, р - уровень значимости; ХС-ЛПВП-холестерин в составе липопротеидов высокой плотности; АЧВТ-акгивированное частичное тром-бопластиновое время.

Суммируя полученные результаты нужно отметить следующее: очевидно, что полиморфные варианты генов N083 (УШИ, 0894Т, С-691Т), СрШа (Т196С) вносят определённый вклад в возникновение и развитие инсульта, определяя характер клинических проявлений, и могут иметь прогностическое значение.

ВЫВОДЫ

1. Наиболее распространённым фактором риска инсульта у жителей г. Томска является артериальная гипертония. Тяжесть инсульта зависит от уровня среднего артериального давления. Наследственная отягощённость - второй по значимости (после артериальной гипертонии) фактор риска и наблюдается у пациентов с ишемическими инсультами в 76,53% случаев, а с геморрагическими - в 68,78 %.

2. Установлено, что полиморфные варианты УКЛ* и С774Т гена N083 вносят вклад в предрасположенность к развитию инсульта и являются важными для прогнозирования тяжести течения и типа заболевания: выявлено накопление аллеля «А» УЫТИ полиморфизма у больных по сравнению с контрольной группой и по мере нарастания тяжести заболевания. Больные геморрагическим инсультом имеют более высокую частоту генотипа «АА» по сравнению с больными ишемическим инсультом и контрольной группой. Носители гетерозиготного генотипа «СТ» полиморфного варианта С774Т имеют повышенный риск развития инсульта, характеризующегося средней степенью тяжести неврологических нарушений.

3. Мутация Лейдена /<Т (в 1691 А) является фактором риска тяжелого течения инсульта. Частота «патологического» аллеля «А» у больных с тяжелой степенью заболевания находится на уровне 9,4%, что превышает значения, полученные аля контрольной группы 2,1% (р=0,05).

4. Выявлена ассоциация полиморфного варианта Т196С гена СРШа с нарушениями сердечного ритма при инсульте. У больных инсультом с нарушением сердечного ритма на ЭКГ установлена более высокая частота «патологического» аллеля РЬА2 (16,7%) и его гетерозиготных носителей (33,3%) по сравнению с группой больных без нарушений сердечного ритма (7%) (х2 =3,95; р=0,046) и (13,9%) (/=4,46; р=0,034) соответственно.

5. Для полиморфных вариантов гена N083 и Т196С гена СРШа получены ассоциации с параметрами липидного спектра и свёртывающей системы крови. УЫТЯ полиморфизм гена N083 ассоциирован с показателями уровня триглицеридов; полиморфизм С894Т - с уровнем общего фибриногена; ал-лельные варианты полиморфизма С-691Т - с показателями холестерина в составе липопротеидов высокой плотности и индексом атерогенности. Полиморфизм Т196С гена СРШа связан с показателями свёртывающей системы крови (уровнем общего фибриногена и активированным тромбопла-стиновым временем).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Выявление высокой значимости артериальной гипертонии - как фактора риска инсульта, у лиц с отягощённой предрасположенностью, позволяет обратить внимание на более активную популяиионную и индивидуальную профилактику инсульта, направленную на максимально раннее выявление лиц с заболеваниями и патологическими процессами, повышающими риск развития острых нарушений мозгового кровообращения. При планирова-

нии мероприятий по профилактике инсультов, особое внимание необходимо уделять контролю АД, лечению артериальной гипертензии, сердечнососудистых заболеваний.

2. Обратить внимание на развитие инсульта у лиц с наследственной предрасположенностью на фоне пограничной и умеренной АГ, а также на низкий процент больных, получающих адекватное лечение.

3. Необходимо продолжить исследование инсульта и его факторов риска в открытой популяции г. Томска для более достоверной и углублённой информации о динамике эпидемиологических показателей, роли генетических факторов.

4. Полученная информация о распространении частот аллелей и генотипов полиморфизма генов NOS3, FV, FII, GPíIIa может быть использована в эволюционной геномике, популяционной генетике и генетической эпидемиологии широко распространённых заболеваний. Сведения о вкладе мо-лекулярно-генетических маркёров в формирование клинического полиморфизма инсульта могут учитываться при формировании групп риска и организации профилактических мероприятий.

6. Анализ прогностической значимости полиморфных вариантов генов в семьях, может являться основой для осуществления молекулярно-генетического тестирования к данной патологии, служить ориентиром в выборе вида лекарственной терапии (генотип-специфическая терапия).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Фролова С.Ю., Асмус И.А. Изучение факторов риска развития инсультов / Пятый конгресс с международным участием «Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении». Сборник научных работ. - Москва, 2003. - № 2. - С. 57.

2. Фролова С.Ю., Асмус И.А. Роль наследственности в развитии инсультов / Четвёртый конгресс молодых учёных и специалистов «Науки о человеке». Сборник статей / Под ред. Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевича. - Томск, СГМУ.-2003.-С. 28-29.

3. Фролова С.Ю., Алифирова В.М., Полещук Н.В. Инсульт: факторы риска / Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвящённой 300-летию Санкт-Петербурга «Актуальные проблемы современной неврологии, психиатрии и нейрохирургии». 27 - 28 ноября 2003 г., Санкт-Петербург. - Спб., 2003.- С. 338-339.

4. Goncharova I.A., Frolova S.Y., Kosyankova T.V., Rudko A.A., Puzyrev V.P., Aliphirova V.M. A study of the hemostatic system genes and NO syntase genes contribution into stroke development / Eur. J. Hum. Genet. Abstracts. - 2004. -V. 12. -№. l.-P. 277-278.

5. ФроловаС.Ю., Гончарова И.А., Косянкова T.B., Рудко A.A. Анализ полиморфных вариантов генов синтаз оксида азота и системы гемостаза в развитие инсульта / Пятого кошресса молодых учёных и специалистов «Науки

о человеке». Сборник статей / Под ред. J1.M. Огородовой, JI.B. Капилевича. - Томск: СибГМУ, 2004. - С. 227-228.

6. Фролова С.Ю., Гончарова И.А., Косянкова Т.В., Рудко A.A. Изучение вклада генов синтазы оксида азота и генов системы гемостаза в развитие инсульта / «25 лет факультету повышения квалификации и профессиональной перерподготовки специалистов»: Сборник научных трудов / Под ред. JI.M. Огородовой, В.М. Алифировой - Томск: «Печатная мануфактура», 2004. -С. 43-48.

7. Фролова С.Ю., Алифирова В.М., Гончарова И.А., Косянкова Т.В., Рудко A.A. Вклад генов синтазы оксида азота и генов системы гемостаза в развитие инсульта / Российский национальный конгресс кардиологов. «Российская кардиология: от центра к регионам». Материалы конгресса. Томск.-2004. (Приложение 2 к журналу «Кардиоваскулярная терапия и профилактика»), - Т. 3. - № 4. - С. 501.

8 Гончарова И.А., Фролова С Ю., Пузырёв В.П., Алифирова В.М., Цимбалюк И.В. Вклад полиморфного варианта Т196С гена третьего субсемеймтаа ин-тегринов GpIIIa в предрасположенность к инсульту / Генетика человека и патология. Сборник научных трудов / Под ред. В. П. Пузырёва. Вып. 7. Томск: «Печатная мануфактура». 2004. С. 44-50.

»-8238

РНБ Русский фонд

2006-4 5636

Тираж 100. Заказ 336. Томский государственный университет систем управления и радиоэлектроники. 634050, г. Томск, пр. Ленина, 40.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Фролова, Светлана Юрьевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Современные представления об этиологии и патогенезе, классификации и факторах риска инсульта.

1.2. Клинико-эпидемиологические исследования как основа формирования групп риска.

1.3. Характеристика основных генов-кандидатов подверженности к инсульту.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Общая характеристика обследованных лиц.

2.2. Клинико-биохимические методы исследования.

2.3. Молекулярно-генетические методы анализа полиморфизма генов.

2.4. Статистические методы анализа данных.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Результаты клинического исследования больных инсультом.

3.1.1. Клинические проявления и факторы риска у лиц, перенесших ишемический инсульт.

3.1.2. Клинические проявления и факторы риска у больных с геморрагическими инсультами.

3.1.3. Сравнительная оценка биохимических показателей и параметров системной гемодинамики и их взаимосвязь с факторами риска у больных инсультом.

3.2. Оценка частот аллелей и генотипов по полиморфизмам генов N053, ГУ, КII, СРШа у жителей г.Томска.

3.3. Полиморфизмы генов N053, КIIСРШа у больных инсультом.

3.4. Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов N083, РУ, РП, СРШа с инсультом.

3.5. Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов N083, РУ, РП, СРШа с некоторыми факторами риска инсульта.

3.6. Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов N083, РУ, РП, СРШа с клиническими признаками инсульта.

3.7. Связь полиморфных вариантов генов N083, РУ, РП, СРШа с патогенетически значимыми количественными для инсульта признаками.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетическое исследование наследственной компоненты подверженности к инсульту у населения г. Томска"

Актуальность. Цереброваскулярная патология занимает второе место среди главных причин смертности и является ведущей причиной инвалидизации населения в экономически развитых странах, что определяет её как одну из важнейших медицинских и социальных проблем [Беленков, и др., 2003]. Смертность от цереброваскулярных заболеваний в России — одна из самых высоких в мире: в 2000г. стандартизированный показатель смертности составил 319,8 на 100 000 населения [Верещагин и др., 2001]. Наряду с высокой смертностью, социально значимыми являются и последствия инсультов: развитие стойкой инвалидности с потерей трудоспособности, высокий риск повторных нарушений мозгового кровообращения, сосудистой деменции [Виленский, 2002].

В течение последних 20 лет в литературе обсуждается более 100 гуморальных факторов, патологических процессов, наследственно-конституциональных аномалий и социально-экономических параметров, относимых к факторам риска. К наиболее значимым факторам риска относят возраст, артериальную гипертонию, атеросклероз, нарушения ритма сердца, сахарный диабет, курение, алкоголизм [Виленский, 2002]. Россия по числу случаев инсультов значительно опережает такие страны, как Китай, Венгрия, Португалия и др. Инсульты в России у больных с артериальной гипертензией возникают в 4 раза чаще, чем в США и других развитых странах. Ежегодно только острые нарушения мозгового кровообращения диагностируются у 1,7-5,4 человек на 1000 населения всех возрастных групп. При этом статистика показывает, что четверть всех больных с острой недостаточностью мозгового кровообращения умирают в течение первых суток [Скворцова, 2001].

Исследования отечественных и зарубежных учёных позволили сделать вывод о том, что семейная предрасположенность является фактором риска развития инсульта [Давиденкова и др., 1979; Brass et al., 1992; Скворцова и др., 2003]. Было показано, что в семьях больных с атеротромботическим инсультом достоверно чаще, чем в контрольной группе, встречаются такие факторы риска как артериальная гипертония, гипертрофия миокарда, гиперлипидемия, гипергликемия и, как следствие, ишемические инсульты и транзиторные ишемические атаки (ТИА).

Крупномасштабные исследования, включавшие тысячи человек, продемонстрировали, что отягощённость одновременно по отцовской и материнской линиям намного больше увеличивает риск развития инсульта, чем наследование по одной из них. По данным популяционного исследования в Финляндии, положительный семейный анамнез увеличивает риск развития инсульта, как у мужчин, так и у женщин, причём связь между семейным и индивидуальным риском гораздо выше для возрастной когорты от 25-49 лет [Jousilahti, Rastenyte et al., 1997]. J. Diaz и соавт. (1986) пришли к выводу, что у сибсов пациентов с ишемическими инсультами или ТИА регистрируется гораздо больше факторов риска развития цереброваскулярных заболеваний, чем у сибсов из контрольной группы. Важное значение в уточнении роли генетических факторов в развитии той или иной патологии имеет метод близнецового анализа. Так, L. М. Bras и соавт. (1992) установили, что конкордантность по риску развития ишемического инсульта у монозиготных близнецов составила 17,7%, а у дизиготных - 3,6%.

Ряд исследователей установили зависимость риска развития инсульта от линии наследования. L. Welin и соавт. (1987) показали, что наследование инсульта по материнской линии является фактором риска, не зависимым от артериальной гипертензии, ожирения и уровня фибриногена в крови.

В других наблюдениях не прослеживалась связь между индивидуальным и семейным риском развития инсульта [Boysen et al., 1998; Herman et al., 1983]. Такие неоднозначные результаты и выводы объясняются использованием разных методов исследования, проводимых в различных популяциях, а также некоторыми трудностями при сборе семейного анамнеза, особенно у лиц старшего поколения. Различия могут возникать из-за разных подходов к формированию выборок, а также по причине неоднородности самого инсульта, который по сути является не заболеванием, а синдромом с широким разнообразием фенотипических проявлений, факторов риска и генетических систем, задействованных в его развитии [Скворцова и др., 2003].

Одним из подходов в изучении генетической предрасположенности к возникновению инсульта является использование полиморфных маркёров различных генов для анализа сцепления и/или ассоциаций с болезнями или их клиническими проявлениями. Гены, потенциально «задействованные» в развитии ишемического инсульта, относятся к разным генетическим системам: гены ренин-ангиотензиновой системы (РАС), системы гемостаза, гены синтазы окиси азота (NOS-гспы), гены, кодирующие метаболизм гомоцистеина и липидов, гены программированной клеточной гибели [Скворцова и др., 2003].

Для поиска генетических факторов риска развития инсульта, были проанализированы литературные данные и выбраны гены-кандидаты, определенные аллельные варианты которых могли бы вносить вклад в развитие заболевания. Выбор генов-кандидатов проводился на основании анализа метаболических нарушений, характерных для данной патологии. Известно, что высокая активность тромбообразования и высокий уровень плазменного фибриногена ассоциирован с повышенным риском развития инфаркта миокарда [Redondo et al., 1999], коронарного атеросклероза и инсульта [Margaglione et al., 1999]. Пятый фактор свертываемости крови в комплексе с активированным протеином С, который является антикоагулянтом, участвует в осуществлении баланса прокоагуляционных и антикоагуляционных механизмов. Мутации в гене пятого фактора

FF(G1691A) приводят к резистентности фактора свертываемости к активированному протеину С (АПС-резистентность), нарушению баланса между факторами свертывания крови и антикоагулянтами, тем самым определяя генетическую предрасположенность к тромбообразованию. По данным литературы известно, что мутация Лейдена (Gl691 А) ассоциирована с развитием различных патологических состояний таких как ишемический инсульт [Margaglione et al. 1999; Casas et al. 2004], венозные тромбозы [Kosch, 2002], инфаркт миокарда [Middendorf et al. 2004]. Также установлено, что мутация гена протромбина FII (G20210) часто встречается вместе с лейденской мутацией и данное сочетание повышает риск развития тромбозов и инфарктов [Doggen, et al. 1998]. Показано, что PLA2 полиморфизм гена GPIIIa является фактором риска поражения крупных сосудов при инсульте у мужчин [Slowik et al. 2004], может вносить вклад в развитие инфаркта миокарда и коронарного атеросклероза и ассоциируется с развитием инсульта у молодых женщин европеоидной расы, а аллель PLA1 ассоциирован со смертельным исходом инсульта [Carter et al., 1999; Wangner et al., 1999; Feng et al., 1999].

В последнее время большое число публикаций посвящено изучению функциональной роли молекулы оксида азота (NO) в организме человека [Снайдер, 1992; Башкатова и др., 1998; Зенков, 2000; Cooke, 1992; Demple, 1992; Gelis, 1998]. Установлено, что в центральной нервной системе (ЦНС) гиперпродукция NO играет роль в развитии эпилепсии и инсультов. Что касается сердечно-сосудистой системы, то избыток NO увеличивает проницаемость сосудов, способствует отёку тканей, оказывает прямое кардиотоксическое действие, приводит к генерализованной вазодилятации и глубокому снижению артериального давления (АД) [Giagliano et al., 1995]. Более того, NO подавляет реакцию сосудов на констрикторные стимулы, и гипотензия может стать необратимой. Это явление было описано при септическом, геморрагическом, травматическом, анафилактическом, тепловом и кардиогенном шоке [Стокле и др., 1998].

N0, вырабатывается эндотелиальной синтазой оксида азота - eNOS, кодируемой геном NOS3, является самым мощным из известных эндогенных вазодилятаторов [Ванин, 1998; Гомазков, 2000; Wilcox et al., 1997] и его связь с сердечно-сосудистой патологией, не вызывает сомнений [Степанов и др., 1998; Чистяков и др., 2000; Пузырёв К.В., 1999; Ковалев, 2001; Косянкова, 2002; Sessa, 1994; Warpeha et al., 1999; Hingorani et al., 1999; Guzic et al., 2001; Colombo et al. 2003; Casas et al. 2004]. Однако анализ литературы показывает множество пробелов в наших современных знаниях по исследованиям роли гена NOS3 в патогенезе инсульта.

Проблема инсульта является актуальной в связи с его широкой распространённостью. Инсульт, являясь мультифакториальным заболеванием, требует изучения распространённости этиологических факторов (факторов риска) в конкретной популяции. Для эффективного определения характера генетических изменений, лежащих в основе этой патологии, а также для дальнейшего развития представлений о механизмах развития инсульта целесообразно проведение популяционно-генетического исследования. Такой подход может служить основой в оценке общей подверженности популяции к развитию цереброваскулярной патологии и, в частности, ишемического и геморрагического инсульта.

Таким образом, анализ генетической компоненты в этиологии и патогенезе развития инсульта представляется весьма актуальным.

Цель исследования:

Установить факторы риска инсультов и значимость аллельных вариантов генов ИОБЗ, РУ, П1, ОРШа в развитии острых нарушений мозгового кровообращения у русских жителей города Томска.

Задачи исследования:

1. Изучить основные факторы риска развития инсульта у больных г. Томска.

2. Оценить частоты аллелей и генотипов по полиморфным вариантам генов-кандидатов подверженности к инсульту: гена эндотелиальной синтазы оксида азота (N083), гена пятого фактора свертываемости крови (РУ), гена протромбина (РП) и гена рецептора интегринов (ОРШа) в Томской популяции.

3. Изучить ассоциации полиморфных вариантов генов N033, РУ, РП, ОРШа с факторами риска развития инсульта и его клиническими проявлениями.

4. Определить связь генов N083, РУ, РП, ОРШа с количественными патогенетически значимыми признаками для инсульта признаками. Новизна исследования:

Впервые проведено исследование генетической изменчивости полиморфных вариантов УШИ, С774Т, 0894Т, С-691Т гена эндотелиальной синтазы оксида азота (N053); 01691 А, А407(Ю гена пятого фактора свертываемости крови (РУ), полиморфизма 020210А гена протромбина (Р11) и варианта Т196С гена рецепторов интегринов (ОРШа) у жителей г. Томска, перенесших мозговой инсульт. Получены новые сведения о вкладе полиморфных вариантов генов N083, РУ, Р11, ОРШа в предрасположенность к инсульту. Показано, что полиморфизмы УШИ и С774Т гена N053 могут быть факторами риска развития инсульта и служить генетическими маркёрами при тестировании данной патологии.

Впервые оценена роль генов N083, ГУ, П1, СРШа в изменчивости комплекса количественных патогенетически значимых признаков, при инсульте. Показано, что полиморфные варианты гена N083 ассоциированы с показателями уровня липидов и свёртывающей системы крови (УЫТЯ полиморфизм гена N083 с показателями уровня триглицеридов; полиморфизм 0894Т с уровнем общего фибриногена; аллельные варианты полиморфизма С-691Т с показателями холестерина в составе липопротеидов высокой плотности, и идексом атерогенности). Полиморфизм Т196С гена СРШа связан с показателями свёртывающей системы крови (уровнем общего фибриногена, активированным тромбопластиновым временем). Практическая значимость:

Сведения о значимости артериальной гипертонии как фактора риска инсульта, у лиц с отягощенным семейным анамнезом, позволяют обратить внимание на более активную профилактику инсульта не только на популяционном, но и индивидуальном уровне, направленном на максимально раннее выявление лиц с заболеваниями и патологическими процессами, повышающими риск развития острых нарушений мозгового кровообращения (ОНМК).

Полученные данные о вкладе молекулярно-генетических маркёров в формирование клинического полиморфизма инсульта могут быть учтены при формировании групп риска и организации профилактических мероприятий, стать основой для осуществления молекулярно-генетического тестирования подверженности к данной патологии в семьях, служить ориентиром в выборе лекарственной терапии (генотип-специфическая терапия).

Полученная информация о распространении частот аллелей и генотипов полиморфизма генов N083, ГУ, П1, СРШа может быть использована в области генетической эпидемиологии, патологии человека, а также в популяционной и эволюционной генетике для углублённого описания генофондов народонаселения. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Ведущий фактор риска развития инсульта - артериальная гипертония -ассоциирован с полиморфизмами (УШ11, С774Т, в894Т, С-691Т) гена эндотелиальной синтазы оксида азота (N033).

2. Аллельные варианты гена N083 связаны с уровня липидов и свёртывающей системы крови (УЫТЯ полиморфизм с показателями уровня триглицеридов; полиморфизм в894Т с уровнем общего фибриногена; С-691Т с показателями холестерина в составе липопротеидов высокой плотности и идексом атерогенности).

3. Наличие мутации Лейдена 691 А) является фактором риска тяжёлого течения инсульта.

4. Полиморфизм Т196С гена СРШа ассоциирован с показателями свёртывающей системы крови (уровнем общего фибриногена, активированным тромбопластиновым временем), а также с нарушением ритма сердца у пациентов, перенесших инсульт. Апробация работы:

Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на межлабораторном научном семинаре ГУ НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН (Томск, 2005г.); IV и V конгрессах молодых учёных и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2003; 2004); на V Конгрессе с международным участием «Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении» (Афины, 2003г.); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвящённой 300-летию Санкт-Петербурга «Актуальные проблемы современной неврологии, психиатрии и нейрохирургии» (Санкт-Петербург, 2003г.); Международной конференции «Современные подходы к диагностике, профилактике и лечению нейродегенеративных заболеваний (деменции, инсульта и болезни Паркинсона)» (Новосибирск, 2003г.); Международном европейском конгрессе по генетике человека (Мюнхен, Германия, 2004г.); научно-практической конференции, посвященной 25-летнему юбилею факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки специалистов (Томск, 2004г.), Российском национальном конгрессе кардиологов (Томск, 2004), VII научной конференции «Актуальные проблемы клинической генетики» (Томск, 2004г.)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ, из них 2 статьи в сборниках и 6 тезисов в материалах конференций различного уровня.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Фролова, Светлана Юрьевна

ВЫВОДЫ

2. Установлено, что полиморфные варианты VNTR и С774Т гена NOS3 вносят вклад в предрасположенность к развитию инсульта и являются важными для прогнозирования тяжести течения и типа заболевания: выявлено значимое накопление аллеля «A» VNTR полиморфизма по сравнению с контрольной группой и по мере нарастания тяжести заболевания. Больные геморрагическим инсультом имеют более высокую частоту генотипа «АА» по сравнению с больными ишемическим инсультом и контрольной группой. Носители гетерозиготного генотипа «СТ» полиморфного варианта С774Т имеют повышенный риск развития инсульта характеризующегося средней степенью тяжести неврологических нарушений.

3. Мутация Лейдена FV{G1691 А) является фактором риска тяжелого течения инсульта. Частота «патологического» аллеля «А» у больных с тяжелой степенью заболевания находится на уровне 9,4%, что превышает значения, полученные для контрольной группы 2,1%; р=0,05.

4. Выявлена ассоциация полиморфного варианта Т196С гена GPIIIa с нарушениями седечного ритма при инсульте. У больных инсультом с нарушением сердечного ритма на ЭКГ установлена более высокая частота «патологического» аллеля PLA2(16,7%) и его гетерозиготных носителей (33,3%) по сравнению с группой больных инсультом без нарушений сердечного ритма (7%) (%2=3,95; р=0,046) и (13,9%) (х2=4,46; р=0,034) соответственно).

5. Для полиморфных вариантов гена N033 и Т196С гена СРШа получены ассоциации с параметрами липидного спектра и свёртывающей системы крови больных. Установлено, что УМТЯ полиморфизм гена N033 связан с уровнем триглицеридов в крови. У больных с генотипом «вв» полиморфизма С894Т гена N033 отмечено повышение уровня общего фибриногена. Аллельные варианты полиморфизма С-691Т гена N033 связаны с показателями холестерина в составе липопротеидов высокой плотности и индексом атерогенности. Полиморфизм Т196С гена СРШа связан с показателями свёртывающей системы крови: повышением уровня общего фибриногена и снижением показателей активированного частичного тромбопластинового времени.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:

1. Выявление высокой значимости артериальной гипертонии - как фактора риска инсульта, у лиц с отягощённой предрасположенностью, позволяет обратить внимание на более активную популяционную и индивидуальную профилактику инсульта, направленную на максимально раннее выявление лиц с заболеваниями и патологическими процессами, повышающими риск развития острых нарушений мозгового кровообращения. При планировании мероприятий по профилактике инсультов, особое внимание уделять контролю АД, лечению артериальной гипертензии, сердечнососудистых заболеваний.

4. Полученная информация о распространении частот аллелей и генотипов полиморфизма генов ЫОБЗ, ГУ, П1, СРШа может быть использована в эволюционной геномике, популяционной генетике и генетической эпидемиологии широко распространённых заболеваний. Сведения о вкладе молекулярно-генетических маркёров в формирование клинического полиморфизма инсульта могут учитываться при формировании групп риска и организации профилактических мероприятий.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Фролова, Светлана Юрьевна, Томск

1. Акимов Г. А. Начальные проявления сосудистых заболеваний головного мозга. JL: Медицина, 1983. - 224 с.

2. Аносов Г. А. Значение феномена «обкрадывания» мозгового кровообращения в патогенезе инфаркта мозга // Журн. невропатол. и психиатрии. 1972. - № 9. - С. 1287-1292.

3. Аносов Г. А., Виленский Б. С. Ишемический инсульт. JL: Медицина, 1963.-400 с.

4. Башкатова В. Г., Вицкова Г. Ю., Наркевич В. Б. и др. Возможная роль оксида азота в патогенезе модельных судорожных состояний различной природы // Бюлл. эксперимент, биологии и медицины. 1998. - Т. 125. - № 1.-С. 26-30.

5. Беленков Ю. Н., Мартынов А. И., Оганов Р. Г. и др. Рекомендации по вторичной профилактике инсульта (по результатам исследования PROGRESS) // Consilium Medicum. 2003. - Спец. вып. - С. 3-4.

6. Бритов А. Н. Современные проблемы профилактики сердечно-сосудистых заболеваний // Кардиология. 1996. - № 3. - С. 18-22.

7. Булеца Б. А. Семейная предрасположенность к мозговому инсульту при гипертонической болезни // Неврологический журн. 1990. - № 3. - С. 2526.

8. Бурцев Е. М., Шпрах В. В., Осипова Н. Ф. Факторы риска острого и хронического течения церебральных ишемий // Неврологический журн. -1990.-№7.- С. 16-20.

9. Ванин А. Ф. Оксид азота в биологии: история, состояние и перспективы исследований // Биохимия. 1998. - Т. 63, № 7. - С. 867-869.

10. Ванин А.Ф. Лауреаты нобелевской премии по медицине за 1998 год // Биохимия. 1998. - Т. 63, № 5. - С. 121-123.

11. Верещагин Н. В., Варакин Ю. Я. Профилактика острых нарушений мозгового кровообращения // Журн. неврологии и психиатрии. — 1996. № 5.-С. 5-9.

12. Верещагин II. В. Гетерогенность инсульта: взгляд с позиции клинициста // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». 2003. - № 9. - С. 89.

13. Верещагин Н. В., Варакин Ю. Я. Регистры инсульта в России: результаты и методологические аспекты проблемы // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». 2001. - № 1. — С. 34-40.

14. Верещагин Н. В., Пирадов М. А., Суслина 3. А. Инсульт. Принципы диагностики, лечения и профилактики: Краткое руководство для врачей / Под ред. Н. В. Верещагина, М. А. Пирадова, 3. А. Суслиной. М.: Интермедика, 2002. - 208 с.

15. Виберс Д. О., Фейгин В. Л., Браун Р. Д. Руководство по цереброваскулярным заболеваниям. — М.: ЗАО «Издательство БИНОМ» 1999. 677с.

16. Виленский Б. С. Инсульт: профилактика, диагностика и лечение. — СПб.: Фолиант, 2002. 397 с.

17. Виленский Б. С. Осложнения инсульта: профилактика и лечение. СПб.: Фолиант, 2000.-388 с.

18. Виленский Б. С., Аносов Н. Н. Инсульт. Трудности и ошибки при диагностике и лечении. Л.: Медицина, 1980. - 272 с.

19. Воропай Н. Г., Доронин Б. М. Пример воздействия стресса на рост заболеваемости ишемическим инсультом // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». — 2003. № 8. — С. 128.

20. Ганнушкина И.В., Конорова И.Л., Антелава А.Л. и др. Некоторые механизмы отрицательного влияния эмоционального стресса на течение ишемии мозга // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». — 2003. -№ 8.-С. 128.

21. Гафаров В. В., Виноградова Т. Е., Воевода М. И. и др. Эпидемиологическое изучение ишемической болезни сердца, сосудистых заболеваний мозга, их факторов риска в открытой популяции 25-64 лет Новосибирска//Тер. архив. 1991. - Т. 63, №9.-С. 80-83.

22. Герасимова М. М., Жданов Г. Н. Участие антител К ДНК в механизмах ишемического повреждения головного мозга // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». 2001. - № 4. - С. 45-48.

23. Гланц С. Медико-биологическая статистика: Пер. с англ. М.: Практика, 1998.-459 с.

24. Голубовский М.Д. Век генетики: эволюция идей и понятий. СПб.: Борей Арт, 2000. - 262 с.

25. Гомазков О. А. Эндотелий эндокринное дерево // Природа. - 2000. - № 5. - С. 38-46.

26. Горбачёв В. И., Ковалёв В. В. Роль оксида азота в патогенезе поражений центральной нервной системы // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». 2002. - № 7. - С. 9-16.

27. Гузеева В. И., Чухловина М. Л., Меркулова А. В. и др. Генетические аспекты ишемического инсульта у лиц молодого возраста // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». 2003. - № 9. - С. 113-114.

28. Гусев Е. И., Гехт А. Б. Возможности вторичной профилактики инсульта: значение антигипертензивной и антиагрегантной терапии // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». — 2002. № 5. - С. 43-49.

29. Гусев Е. И., Скворцова В. И. Ишемия головного мозга. М.: Медицина, 2001.- 125 с.

30. Гусев Е. И., Скворцова В. И., Стаховская Л. В. Эпидемиология инсульта в России // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». 2003. - № 8.-С. 4-9.

31. Гусев Е. И., Скворцова В. И., Чекнева Н. С. Лечение острого мозгового инсульта (диагностические и терапевтические алгоритмы) // Журнал неврологии и психиатрии. 1997. - № 5. - С. 34-36.

32. Давиденкова Е. Ф., Колосова Н. П., Либерман И. С. Медико-генетическое консультирование в системе профилактики ишемической болезни сердца и инсультов. Л.: Медицина, 1979. - 199 с.

33. Деев А. С., Захарушкина И. В. Причинные факторы, течение и исходы ишемического инсульта у лиц молодого возраста // Неврологический журн. 1999. - № 6. - С. 28-31.

34. Евлоева Д. А., Посохов С. И., Табеева Г. Р. Особенности клинических проявлений острого и восстановительного периодов у больных разного пола с инсультами // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». -2002.-№6.-С. 32-35.

35. Животовский Л. А. Статистические методы анализа частот генов в природных популяциях / Итоги науки и техники. Серия Общая генетика. -Т. 8. Теоретическая и популяционная генетика. М.: ВИНИТИ. - 1983. — С. 76-104.

36. Зенков II. К., Меньшикова Е. Б., Реутов В. П. >Ю-синтетазы в норме и при патологии различного генеза. // Вестник РАМН. 2000. - № 4. - С. 30-34.

37. Ким Дж. О., Мьюллер Ч. У. Факторный анализ: статистические методы и практические вопросы // Факторный, дискриминантный и кластерный анализ. - М.: Финансы и статистика. - 1989. - Гл. 1.— С. 5-77.

38. Кобалава Ж. Д. Международные стандарты по артериальной гипертонии: согласованные и несогласованные позиции // Кардиология. 1999. - № 11. -С. 78-91.

39. Ковалев И. А. Клинико-функциональные и иммунно-биохимические аспекты атерогенеза в семьях с отягощенной по атеросклерозу наследственностью: Автореф. дис.докт. мед. наук. — Томск, 2001. — 48 с.

40. Кондратьева Е. И., Кравец Е. Б., Косянкова Т. В. и др. Анализ УИТЯ полиморфизма гена N083 у больных сахарным диабетом 1 типа. // Бюлл. эксперемент. Биологии и медицины. 2001, приложение 1. - С.60-62.

41. Коробейникова Э. Н. Сравнительный анализ наборов реактивов по определению холестерина в сыворотке крови // «Клиническая и лабораторная диагностика». -2000. -№ 11.- С. 14.

42. Косянкова Т. В., Пузырёв К. В. Полиморфизм генов синтаз оксида азота: исследование в сибирских популяциях и у больных с сердечно-сосудистой патологией // Бюл. СО РАМН. 2003. - № 1. - С. 6-11.

43. Косянкова Т.В. Гены синтаз оксида азота: полиморфизмы в сибирских популяциях и их функциональное значение: Автореф. дис.канд. биол. наук. Томск, 2002. — 22с.

44. Кравцов Ю. И., Богданов А. Н. Эпидемиология и факторы риска ишемического инсульта в Среднем Приобье // Неврологический журн. -1991.-№4. -С. 6-9.

45. Леонов В. П. Обработка экспериментальных данных на программируемых микрокалькуляторах. Томск: Изд-во Томского Ун-та, 1990. - 376 с.

46. Лильин Е. Т., Трубников В. И., Ванюков М. М. Введение в современную фармакогенетику. М.: Медицина, 1984. - 160 с.

47. Макеева O.A. Структурно-функциональная организация наследственной компоненты подверженности к гипертрофии миокарда у человека // Автореф. дис. . канд. биол. наук. Томск. - 2004. -25с.

48. Манвелов Л. С., Варакин Ю. Я., Смирнов В. Е. и др. Профилактика сосудистых заболеваний головного мозга // Журнал неврологии и психиатрии. 1998. - № 12. - С.44-47.

49. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1984. - 480 с.

50. Оганов Р. Г. Проблемы контроля артериальной гипертонии среди населения // Кардиология. 1994. - № 10. - С. 4-7.

51. Оганов Р. Г. Факторы риска и профилактика сердечно-сосудистых заболеваний // Новый мед. журн. 1996. - № 5-6. - С. 3-7.

52. Ольбинская Л. И. Лечение артериальной гипертензии и профилактика инсульта // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». — 2001. -№ 2. С. 45-47.

53. Парфёнов В. А Артериальная гипертония и инсульт // Неврологический журнал. 2001. - № 6. - С. 4-7.

54. Пузырёв В. П. Состояние и перспективы геномных исследований в генетической кардиологии // Вестн. РАМН. 2000. - № 7. - С. 28-33.

55. Пузырев В. П., Карпов Р. С., Павлюкова Е. Н. и др. Генетические факторы в этиологии и патогенезе эссенциальной гипертензии // Генетика человекаи патология / Под ред. В.П. Пузырева Томск: Изд-во Томского ун-та, 1997.-Вып. 4.-С. 25-30.

56. Пузырёв В.П., Степанов В. А. Патологическая анатомия генома человека. Новосибирск: Наука, 1997. - 224с.

57. Пузырёв К. В., Павлюкова Е. Н., Степанов В. А., Карпов Р. С. и др. Молекулярно-генетические маркёры подверженности к развитию гипертрофии миокарда левого желудочка // Рос. национальный конгр. кардиологов. Москва, 2000. - С. 244.

58. Пузырёв К.В. Клинико-генетическое исследование факторов предрасположенности к эссенциальной гипертензии и идиопатической гипертрофической кардиомиопатии // Автореф. дисс. .канд. биол. наук. -Томск, 1999.-25 с.

59. Радзинский В. Е., Иткес А. В., Галина Т. В. Корреляция различных форм гестоза с генотипом по гену СрШа Р-цепи интегрина // Акушерство и гинекология. 2001. - № 6. - С. 53-56.

60. Сеитова Г.Н. Анализ взаимосвязи генов кандидатов хронической обструктивной болезни лёгких с клиническими проявлениями болезни у татар и русских Западной Сибири //Автор.'дис. .канд. мед. наук. - Томск, 2004.-22 с.

61. Скворцова В. И, Лимборская С. А., Сломинский П. А. и др. Генетика ишемического инсульта // Журн. неврологии и психиатрии. 2001. - № 4. -С. 10-18.

62. Скворцова В. И. Ишемический инсульт: патогенез ишемии, терапевтические подходы // Неврологический журнал. 2001. - № 3. - С. 4-9.

63. Скворцова В. И. Механизмы повреждающего действия церебральной ишемии и новые терапевтические стратегии // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». 2003. № 9. - С. 20-25.

64. Скворцова В. И., Лимборская С. А., Сломинский П. А. и др. Полиморфизм гена ангиотензин превращающего фермента у больных с ишемической болезнью головного мозга // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». -2001. № 3. - С. 21-27.

65. Скворцова В. И., Насонов Е. А., Журавлёва Е. Ю. Клинико-иммунобиохимический мониторинг факторов локального воспаления в остром периоде полушарного ишемического инсульта // Журн. неврологии и психиатрии. 1999. - № 5. - С. 27-31.

66. Смирнов В. Е., Манвелов Л. С. Распространённость факторов риска и смертность от инсульта в разных географических регионах // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». 2001. - № 2. - С. 19-25.

67. Снайдер С., Бредт Д. Биологическая роль окиси азота // В мире науки. -1992.-№7.-С. 16-24.

68. Спирин Н. Н., Пизова Н. В., Огородник С.Д. и др. Экологические факторы и острые нарушения мозгового кровообращения в Ярославле // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». -2003. № 8. - С. 137.

69. Стокле Ж.-К., Мюлле Б. Гиперпродукция оксида азота в патофизиологии кровеносных сосудов. Обзор. // Биохимия. -1998. Т. 63. - № 7. - С. 976983.

70. Суслина 3. А. Значение кардиогенных факторов в патогенезе ишемического инсульта // Ишемия мозга: Тез. междунар. симп.1— СПб., 1997. С. 161-163.

71. Суслина 3. А., Гераскина Л. А., Фонякин А. В.,. Особенности антигипертензивной терапии при цереброваскулярных заболеваниях // Клин, фармакология и терапия. 2002. - № 11.- С. 1-5.

72. Тарасова Л. Н., Владимирова С. Г., Савиных Е. Ю. и др. Показатели качества метода Квика при использовании реагентов в ручном и аппаратном исполнении // «Клиническая и лабораторная диагностика». — 2000.-№3,-С. 24-42.

73. Трусов В. В., Демидова Т. Ю., Аметов А. С. Престариум в коррекции микроциркуляторных нарушений у больных сахарным диабетом II типа с артериальной гипертензией // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». 2001. - № 4. - С. 53-56.

74. Чазов Е. И. Лечение гипертонической болезни как основа профилактики инсульта // Инсульт: Прил. к «Журн. неврологии и психиатрии». 2003. -№9.-С. 79-80.

75. Чистяков Д. А., Воронько О. Е., Савостьянов Г. В. Полиморфные маркеры генов эндотелиальной NO-синтазы и сосудистого рецептора ангиотензина II и предрасположенность к ишемической болезни сердца // Генетика. — 2000.-Т. 36, № 12.-С. 1707-1711.

76. Чистяков Д. А., Туракулов Р. И. Генетические маркеры гипертонической болезни // Генетика 1999. - Т. 35, № 5. - С. 565-573.

77. Шальнова С. А. Факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний и показатели ожидаемой продолжительности жизни населения России: Автореф. дис. докт. мед. наук. Москва, 1999. - 27 с.

78. Шмидт Е. В. Классификация сосудистых поражений головного и спинного мозга // Журн. невропатол. и психиатрии. — 1985. № 9. - С. 1281-1288.

79. Шмидт Е. В. Сосудистые заболевания нервной системы. М.: Медицина, 1975.-662с.

80. Шмырёв В. И., Мартынов А. И., Степура О. В. и др. Поражение головного мозга у молодых больных с идиопатическим пролапсом митральгного клапана // Неврологический журн. 1997. - № 6. - С. 29-30.

81. Aalto-Setana К., Palomaki Н. Genetic risk factors and ischemic cerebrovascular disease: role of common variation of the genes encoding apolipoproteins and angiotensin-converting enzyme // Ann. Med. 1998. - N 30.-P. 224-233.

82. Adler H., Freeh В., Thony M. Inducible nitric oxided synthase in cattle // J. of Immunol. 1995.-Vol. 154, N3.-P. 4710-4718.

83. Alberts M. J. Genetic aspects of cerebrovascular desease // Stroke. -1991. N 22.-P. 276-280.

84. Alhenc-Gelas M., Nicaud V., Gandrille S., et al. The factor V gene A4070G mutation and risk of venous thrombosis // Thromb Haemost. 1999. - V.81. -№2. - P. 193-197.

85. Allison D. B. Transmission/Disequilibrium Tests for quantitative traits // Am. J. Hum. Genet. 1997. - Vol. 60, N 6. - P. 676-690.

86. Alvarez J., Matias-Guiu J., Sumalla J. et al. Ischemic stroke in young adults. Analysis of the etiological subgroups // Acta neurol. scand. 1989. - Vol.80, N l.-P. 28-34.

87. Avcu F., Akar E., Demirkilic U. et al. The role prothrombotic mutations in patients whith Buerger's disease // Thromb. Res. 2000. -Vol. 100, N3. -P.143-147.

88. Barnett II. Aspirin Dose in Stroke Prevetntion // Stroke. 1996. - N 4. - P. 558-592.

89. Barnett H. Therapy of carotid arteriosclerosis // Am. Rev. Med. 1994. - Vol. 45, N3.-P. 53-69.

90. Benjafield A.V., Morris B. J. Association analyses of endothelial nitric oxide synthase gene polymorphisms in essential hypertension // Am. J. Hypertens. — 2000.-Vol. 13,N9.- P.994-998.

91. Bernandi F., Faioni E. M., Castoldi E. et al. A Factor V Genetic Cjmponent Differing From Factor V R506Q Contributes to the Activated Protein C Resistance Phenotype///Blood. 1997. - Vol. 90,N4.-P. 1552-1557.

92. Bloch K. D., Worlfram J. R., Brown D. M. Three members of the nitric oxide synthase II gene family (NOS2A, NOS2B, NOS2C) colocalisation to human chromosome 17//Genomics. 1995.-N27.-P. 526-530.

93. Boeri D., Maiello M., Lorenzi M. Increased Prevalence of Microthromboses in Retinal Capillaries of Diabetic Individuals // Diabetes. 2001. - Vol. 50, N 23. -P. 1432-1439.

94. Bonita R., Beaglehole R. Monitoring stroke. An international challenge // Stroke. 1995. - N 26. - P. 989-982.

95. Boysen G., Nyboe J. Stroke incidence and risk factors for stroke in Copenhagen (Denmark) // Stroke. 1988. -N 19. - P. 1345-1353.

96. Brass L. M., Isaacsohn J. L., Merikangas K. R. et al. A study of Twins and Stroke // Stroke. 1992. -N 23. - P. 221-223.

97. Brown M. S., Goldstein J. L. The metabolic basis of inherited disease // 5th ed. New York: McGraw-Hill, 1983. - 21 Op.

98. Burt V. L., Cutler J. A., Higgins M. et al. Trends in the prevalence, awareness, treatment and control of hypertension in the US adult population: data from the health examination surveys 1960-1991 // Hypertension. 1995. -N 26. - P. 6069.

99. Carter A. M., Catto A. J., Bamford J. M. et al. Association of the Platelet Glycoprotein lib HPA-3 Polymorphism With Survival After Acute Ischemic Stroke // Stroke. 1999. - N 30. - P. 2606-2611.

100. Casas G.P., Bautista L.E., Humphries S.E. e. al. Endothelial Nitric Oxide Synthase Genotype and Ischemic Heart Disease. Meta-Analysis of 26 Studies Involving 23028 Subjects // Circulation. 2004. Vol.109. P. 1359-1365.

101. Casas J.P., Hingorani A.D., Bautista L.E. et al. Meta-analysis of genetic studies in ischemic stroke //Arch.Neurol. 2004. Vol. 61, N 3. - P. 1652-1662.

102. Caulfield M., Lavender P., Farral M. et al. Linkage of the angiotensinogen gene to essential hypertension // New Engl. J. Med. 1994. - Vol. 330, N 23. - P. 1629-1633.

103. Chiang F. T., Hsu K. L., Tseng C. D. et al. Association of the renin gene polymorphism with essential hypertension in a Chinese population // Clin. Genet. 1997. - Vol. 51, N 7. - P.370-374.

104. Chopp M., Li Y. Apoptosis and focal cerebral ischemia // Acta Neurosurg. -1996.-N66.-P. 21-26.

105. Chopp M., Li Y., Zhang Z. et al. P53 expression in brain after middle cerebral artery occlusion in the rat // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. -Vol. 182,N3.-P. 1201-1207.

106. Clifford C. P., Nunez D. J. R. Racial differences in the frequency of restriction site polymorphism of the angiotensin converting enzyme (ACE) gene // 16th

107. Sci. Meeting Internat. Soc. Hypertension: Abstracts. Glasgow, 1996. — N 3. — P. 1598.

108. Colombo M.G., Paradossi U., Andreassi M.G., et al. Endothelial Nitric Oxide Synthase Gene Polymorphisms and Risk of Coronary Artery Disease // Clinical Chemistry. 2003. - Vol. 49, N. 3. - P.389 - 395.

109. Cooke J. P., Dzau V. J. Nitric oxide synthase: role in the genesis of vascular disease // Ann. Rev. Med. 1997. - Vol. 48, N 3. - P. 489-509.

110. Cooke J.P., Tsao P. Cellular mechanisms of atherogenesis and the effects of nitric oxide // Curr. Opin. Cardiol. 1992. - V. 7. - P. 799-804.

111. Dyker A. Risk Factor of Stroke // Joint. 3-rd Word Stroke Congress: Abstracts. -Munich, 1996.-N478.

112. Elbaz A., Mallet C. Association between the ACE 4656 (CT) 2/3 polymorphism and plasma ACE level with Lacunar stroke in the GENIC study // Cerebrovasc. Dis. 1998. -N. 8, Suppl.4.-P. 13.

113. Feng D., Lindpaintner K., Larson M. G. et al. Increased Platelet Aggregability Associated With Platelet GPIlla PIA2 Polymorphism The Framingham

114. Offspring Study // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1999. - N 19. - P. 11421147.

115. Fernandez M. L., Ruiz R., Gonzalez M. A. et al. Association of NOS3 gene with metabolic syndrome in hypertensive patients // Thromb. Haemost. 2004. - Vol. 92, N2. - P. 413- 418.

116. Fischmann T. O., Hruza A., Niu X. D. et al. Structural characterization of nitric oxide synthase isoforms reveals striking active-site conservation // Nat. Struct. Biol. 1999. - N 6. - P. 233-242.

117. Fornage M., Turner S. T., Sing C. F. et al. Variation at the M 235T locus of the angiotensinogen gene and essential hypertension: a population-based case-control study from Rochester, Vinnesota // Hum. Genet. 1995. - Vol. 96, N 4. -P. 295-301.

118. Fostermann U., Boissel J. P., Kleinert H. Expressional control of the "constitutive" isoforms of nitric oxide synthase (.NOSI and NOSIII) II The FASEB Journal. - 1998.-Vol.1, N 12.-P. 773-790.

119. Fried K., Beer S., Vure E. et al. Autosomal recessive sudden unexpected death in children probably caused by a cardiomyopathy associated with myopathy // J. Med. Genet. 1979. - Vol. 16, N 14. - P. 341-346.

120. Gelic D.A., Billiar T. Molecular biology of nitric oxide synthases. // Cancer and Metastasis Rewiews. 1998. - № 17. - P. 7-23.

121. Giagliano D., Ceriello A., Paolisso C. Diabetes mellitus, hypertension and cardiovascular diseases: wich role for oxidative stress // Metabolism. — 1995. -Vol. 44, N3.-P. 363-368.

122. Goldstein L. B., Bertels C., Davis J. N. Interrater reability of the NIH stroke scale // Arch. Neurol. 1989. - N 46. - P.660-662.

123. Gopel W., Ludwig M., Kohlmann J. T. e. al. Selection pressure for the factor-V-Leiden mutation and embryo implantation // Lancet. 2001. - Vol. 13, N 9287.

124. Grasemann H., Yandava C.N., Drazen J.M. Neuronal NO synthase (NOS 1) is a major candidate gene for asthma // Clinical and Experimental Allergy. 1999. -Vol. 29, N4.-P. 39-41.

125. Haheim L. L., Holme I., Hjerman I. et al. Smoking habits and risk of fatal stroke in the 18-years follow-up study // J. Epidemiol. Commun. Health. -1996.-N50.-P. 621-624.

126. Hassan A., Markus U. Genetics and ischemic stroke // Brain. 2000. V.123. P. 1784-1812

127. Hausladen A., Stamler J. S. Nitric oxide in plant immunity // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - Vol. 95, N 27. - P. 10345-10347.

128. Haut M. J., Cowan D. H. Risk Factor of Ischemic Stroke // Am. J. Med. 1974. -Vol. 56, N23.-P. 22-23.

129. Hehrholz K., Hess W. Patophysiologie der Zerebralen Ischemie in vivo Untersuchungen mit P. E. T. // Zerebrale Erkangkungen. - Stuttgert, 1992. - S. 19-32.

130. Herman B., Schmitz P. I. et al. Multivariate logistic analysis of risk factors for stroke in Tiburg (The Nttherlands) // Am. J. Epidemiol. 1983. -N 118. - P. 514-525.

131. Hibi K., Ishigami T., Tamura K. et al. Endothelial nitric oxide synthase gene polymorphism and acute myocardial infarction // Hypertension. 1998. - Vol. 32,N6.-P. 521-526.

132. Hingorani A. D., Liang C. F., Fatibene J. et al. A common variant of the endotelial nitric oxide synthase (Glu (298)-Asp) is a major risk factor for coronary artery disease in the UK // Circulation. 1999. - Vol. 100, N 5. - P. 1515-1520.

133. Hixon J. E., Powers P. K. Detection and characterization of new mutation in the human angiotensinogen gene (AGT) II Hum. Genet. 1995. -Vol. 96, N 16. -P. 110-112.

134. Hoit B. D. Two faces of nitric oxide // Circ. Res. 2001. - Vol. 89, N 32. - P. 289-291.

135. Huraux C., Makila T., Kurz S. et al. Superoxide production, risk factors, and endothelium-dependent relaxations in human internal mammary aneries. // Circulation 1999. - Vol. 99, N 5. - P. 53-59.

136. Iniesta J. A., González-Conejero R., Piqueras C. Platelet GP Ilia Polymorphism HPA-1 (PIA) Protects Against Subarachnoid Hemorrhage //Stroke. 2004. - N 35. - P. 2282.

137. Isa M. N., Boyd E., Morrison N. et al. Assignment of the human angiotensinogen gene to chromosome Iq42-q43 by nonisotopic in situ hybridization // Genomics. 1990. -Vol. 8, N 19. - P. 598-600.

138. Iwai N., Shimoike H., Ohmichi N. et al. Angiotensinogen gene and blood pressure in the Japanese population // Hypertension. — 1995. Vol. 25, N 13. -P. 688-693.

139. Jeunemaitre X., Rigat B., Charru A. et al. Sib-pair linkage analysis of renin gene haplotypes in human essential hypertension // Hum. Genet. -1992. Vol. 88, N 9. - P.301-306.

140. Jeunemaitre X., Soubrier F., Kotelevtsev Y. V. et al. Molecular basics of human hypertension: role of angiotensinogen // Cell. 1992. -Vol. 71, N 32. - P. 169180.

141. Jousilahti P., Rastenyte D. Parental history of cardiovascular disease and risk of stroke. A prospective follow-up of 14 371 middle-aged men and women in Finland//Stroke. 1997.-N28.-P. 1361-1366.

142. Kato N., Sugiyama T., Morita H. et al. Lack of evidence for association between the endothelial nitric oride synthase gene and hypertension. // Hypertension. 1999. - Vol. 33, N 28. - P. 933-936.

143. Kay A. B. Allergy and allergic diseases. Oxford: Blackwell Science, 1997. -Vol. 1.-794 p.

144. Kelly C. J., Gold D. P. Nitric oxide in interstitial nephritis and other autoimmune diseases. // Semin Nephrol. 1999. -N 19. - P. 288-295.

145. Kenet G., Sadetzki S., Murad H. et al. Factor V Leiden and Antiphospholipid Antibodies Are Significant Risk Factors for Ischemic Stroke in Children // Stroke.-2000.-N31.-P. 1283- 1288.

146. Khaw K., Barrett-Connor E. Family history of stroke as an independent predictor of ischemic heart disease in men and stroke in women // Am. J. Epidemiol. 1986. - N 123. - P. 59-66.

147. Killy D. K., Wolf P. A., Cupples L. A. et al.Familial aggregation of stroke the Framingham study // Stroke. 1993. -N 24. - P. 29.

148. Kotelevtsev Y. V., Clauser E., Corvol P. et al. Dinucleotide repeat polymorphism in the human angiotensinogen gene // Nucl. Acids. Res. — 1991. -Vol. 19, N7.-P. 6978.

149. Kutz T. W., Spence M. A. Genetics of essential hypertension. // Am. J. Med. — 1993.-N 94. P. 77-84.

150. Lacolley P., Gautier S., Poirier O. et al. Nitric oxide synthase gene polymorphisms, blood pressure and aortic stiffhess in normotensive and hypertensive subjects. //J. Hypertens. 1998. - Vol. 16, N 27. - P. 31-35.

151. Lahiri D. K., Bye S., Nunberg J. I. et al. A non-organic and non-enzymatic extraction method gives higher yields of genomic DNA from whole-blood samples than do nine other methods used // J. Biochem. Biophis. Meth. — 1992. Vol. 25, N 12.-P. 193-205.

152. Landegren U., Nilsson M., Kwok P-Y. Reading Bits of Genetic Information: Methods for Single-Nucleotide Polymorphism Analysis // Genome Research. — 1998.-N 8.-P. 769-776.

153. Lee B. R., Kin E. Y., Paik J. E. et al. Association analysis of a T235 allele of the angiotensinogen gene with essential hypertension and preeclampsia in

154. Korean // 16th Sci. Meeting Internat. Soc. Of Hypertension: Abstracts. -Glasgow, 1996. N 3. - Abstract P0090.

155. Lee J. M., Zipfel G. J., Choi D.W. Mechanism of brain damage // Nature. — 1999.-N399.-P. 7-14.

156. Lifton R. P. Genetic determinants of human hypertension // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. - Vol. 92, N 35. - P. 8545-8551.

157. Ludemann P., Nabavi D. G., Junker R. et al. Factor V Leiden Mutation Is a Risk factor for Cerebral Venosus Trombosis: A Case-control Study of 55 Patients // Stroke. 1998. - N 29. - P. 2507-2510.

158. Lundberg J.O.N., Weitzberg E., Lundberg J. M. et al. Nitric oxide in exhaled air // Eur. Respir. J. 1996. - N 9. - P. 2671 -2680.

159. Luscher T. F., Noll G. Is it all in the genes.? Nitric oxide synthase and coronary vasospasm // Circulation. 1999. - Vol. 99, N 4. - P. 2855-2857.

160. Margaglione M., Andrea G. D, Giuliani N. et. al. Inherited Protrombotic Cjnditions and Premature Ischemic Stroke Sex Difference in the Association With Factor V Leiden // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1999. -N 19. - P. 1751-1756.

161. Markus S.H., Ruigrok Y., Ali N. et al. Endotelial nitric oxide synthase exon 7 polymorphism, ischemic cerebrovascular disease, and carotid ahteroma // Stroke. 1998. - Vol. 29, N 1. - P. 1908-1911.

162. Masharani U., Frossard P. M. Mbol RELP at the human renin (REN) gene locus // Nucl. Acids. Res. 1998. - Vol. 16, N 18. - P. 2357.

163. Mattei M-G., Hubert C., Alhenc-Gelas F. Angiotensin cjnverting enzyme gene is on chromosome 17 // Cytogenet. Cell. Genet. -1989. Vol. 51, N 22. - P. 1041.

164. McConnkey D. J., Orrenius S. J. Role of apoptosis in ischemia // Biol. -1996. -N59.-P. 775-783.

165. McGill J. R., Chirgwin J. M., Moore C. M. Chromosome localization of the human renin gene (REN) by in situ hybridization // Cytogenet. Cell. Genet. -1987. Vol. 45, N 18. - P. 55-57.

166. Miyahara K., Kuwamoto T., Sase K. et al. Cloning and structural characterization of the human endothelial nitric oxide synthase gene // Eur. J. Biochem. 1994. - Vol. 223, N 2. - P. 719-726.

167. Nakata Y., Katsuya T. Polymorphism of angiotensin converting enzyme, angiotensinogen, and apolipoprotein E genes in Japanese population with cerebrovascular disease // Am. J. Hypertens. 1997. - N 10. - P. 1391-1395.

168. Nakayama T., Soma M., Takahashi Y. Association analysis of CA repeat Polymorphism of the endothelial nitric oxide synthase gene with essential hypertension in Japanes. // Clin. Genet. 1997. - Vol. 51, N 37. -N 1 - P. 2630.

169. Neal B., MacMahon S. The PROGRESS Study: rationale and design //Am. J. Hypertens.- 1995.-N 13.-P. 1869-1873.

170. Nei M. Molecular population genetics and evolution // New York: North-Holland publishing company; Amsterdam: Oxford American Elsevier publishing company, 1975. 288 p.

171. Nickerson C., Drago R. Antiatherogenic effect of captopril in the Watanabe heritable hyperlipidemic rabbit // Hypertension. 1990. - N 15. - P. 327-331.

172. Nishiuma S., Kario K., Kayaba K. et al. Effect of the angiotensinogen gene Met235-»Thr variant on blood pressure and other cardiovascular risk factors in two Japanese population//J. Hypertens.- 1995.-Vol. 13, N 14.-P. 717-722.

173. Novoradovsky A., Brantly M. L., Waclawiw M. A. Endothelial Nitric Oxide Synthase as a Potential Susceptibility Gene in the Pathogenesis of Emphysema in 1-Antitrypsin Deficiency // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1999. - Vol. 20, N7.-P. 441-447.

174. Nussler A. K., Billiar T. R. Inflammation, immunoregulation, and inducible nitric oxide synthase//J. Leukoc. Biol. 1993. - Vol. 54,N 5. - P. 171-178.

175. Okura T., Kitami Y., Wakamiya R. et al. Renin gene restriction fragment length polymorphisms in Japanese families with a high incidence of essential hypertension // Clin. Exptl. Pharmacol. Physiol. 1992. - Vol. 20, Suppl. - P. 17-19.

176. Ouvina S.M., La Greca R.D., Zanaro N.L. et al. Endotelial dysfunction, nitric oxide and platelet acvation in hypertensive and diabetic type II // Thromb. Res. -2001.-Vol. 102.-P.107-114.

177. Park K.W., You K.H., Oh S. et al. Association of endothelial constitutive nitric oxide synthase gene polymorphism with acute coronary syndrome in Koreans // Heart. 2004. - Vol.90, N 12. - P. 282-285.

178. Pearce N. What does the odds ratio estimate in a case-control study? // International Journal of Epidemiology. 1993. - Vol. 22, N 5. - P. 1189-1192.

179. Peltonen L., McKusick V. Dissecting Human Disease in the Postgenomic Era // Scince. 2001. - Vol. 291, N 5. - P. 1224-1229.

180. Poirier O., Mao C., Mallet C. et. al. Polymorphism of the endotelial nitric oxide synthase gene no consistent association with myocardial infarction in the ECTIM stady // Eur. J. Clin. Invest. - 1999. - Vol. 29, N 18. - P. 284-290.

181. Pramil N., Linasted S., Linasted K. Body mass and 26-yaer risk of mortality from specific disease among women who never smoked // Epidemiology. — 1998.-N3.-P. 246-254.

182. Prandini M. H., Denarier E., Frachet P. et al. Isolation of the human platelet glycoprotein lib gene and characterization of the 5-prime flanking region // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1988. -N 156. - P. 595-601.

183. Rastenite D. Risk Factor for Death From Stroke in Middleaged Lituanian Men // Stroke. 1996. - N 4. - P. 672-676.

184. Rigat B., Corvol C., Soubrier F. PCR detection of the insertion/deletion polymorphism of the human angiotensin cjnverting enzyme gene (DCPI) (dipeptidyl-carboxypeptidase 1) // Nucl. Acids. Res. 1992. - Vol. 20, N 2. -P.1433.

185. Sam F., Sawyer B. D., Xie Z. Mice lacking inducible nitric oxide synthase have improved left ventricular contractile function znd reduced apoptotic cell death late after myocardial infarction // Circ. Res. 2001. - Vol. 89, N 5. - P. 351356.

186. Sans S., Kesteloof H., Kromhout D. et al. The burden of cardiovascular diseases mortality in Europe // Eur. Heart. 1997. - N 18. - P. 1231-1248.

187. Seisjo B. K., Bengtsson F. J. Cerebral Blood Flow Metabolism // Nature. -1989.-N 9.-127-140.

188. Sessa W. The Nitric Oxide Synthase Family of Proteins // J. Vase. Res. 1994. -N31.-P. 131-143.

189. Shimasaki Y., Yasue H., Yoshimura M. et al. Association of the missense Glu284Asp variant of the endotelial nitric oxide synthase gene with myocardial infarction // J. Am. Coll. Cardiol. 1998. - Vol. 31, N 8. - P. 1506-1510.

190. Shinton R., Sagar G., Beevers G. Body fat and stroke: nonsmoking the hazards of over weight and obesity // J. Epidemiol. Commun. Health. 1995. — N 49. -P. 259-264.

191. Simon D. B., Karet F. E. Genetic heterogenety of Bartter's syndrome revealed by mutations in the K+ channel!, ROMK // Nat. Genet. 1996. - Vol. 14, N 4. -P. 152-156.

192. Slowik A., Dziedzic T., Turaj W. et al. A2 Alelle of GpIIIa Gene Is a Risk Factor for Stroke Caused by Large-Vessel Disease in Males //Stroke. 2004. -N. 35.-P. 1589.

193. Soubrier F., Bonnardeaux A. Role and identification of the genes involved in human hypertension // J. Hum. Hypertens. 1994. -N 8. -P.579-585.

194. Spitsin S. V., Koprowski H., Michaels F. H. Characterisation and functional analysis of the human inducible nitric oxide synthase gene promoter // Mol. Med. 1996. -N 2. - P. 226-235.

195. Stefano A. D., Martinelli I., Mannucciomannucci P. e. al. The risk of recurrent deep venous thrombosis among heterozygous carriers of both Factor V Leiden and the G20210A prothrombin mutation // New Engl. J. Med. 1999. - N 341. -P. 801-806.

196. Stroke Prenention // Stroke clinical updates. 1990. - Vol. 2. - P. 1-4.

197. Stroke Prevention: the importance of risk factors // Stroke clinical updates. — 1991.-Vol. l.-P. 17-20.

198. Suslina S. // Joint 3-rd Word Stroke Congress and 5-th European Stroke Conference: Abstraction. Munich, 1996. - N 779.

199. Taylor B. S., Geller D. A. Molecular regulation of the human inducible nitric oxide synthase (iNOS) gene // SHOCK. 2000. -Vol. 13, N 6. - P. 413-424.

200. The Six Report of the Joint National Committee on Prevention, Detection, Evaluation and Treatment of High Blood Pressure // Arch. Intern. Med. 1997. - Vol. 157, N 23. - P. 2413-2446.

201. Thompson G., Esposito M. S. The genetics of complex diseases // Trends Genet. 1999. - Millennium Issue. - P. 17-20.

202. Tuomilehto Y., Rastenyte D., Jousilahti P. e. al. Diadetes Mellitus as a Risk Factor for Death from Stroke // Stroke. 1996. - N 27. - P. 210-215.

203. Vallance P., Chan N. Endothelial function and nitric oxide: clinical relevance // Heart.-2001.-N85.-P. 342-350.

204. Wagner K. R., Giles W. H., Johnson C. J. e. al. Platelet Glycoprotein Receptor Ilia Polymorphism PlA2and Ischemic Stroke Risk The Stroke Prevention in Young Women Study // Stroke. 1998. -N 29. - P.581-585.

205. Wang J. S., Tseng H. H., Shih D. F. et al. Expression of inducible nitric oxide synthase and apoptosis in human lupus nephritis. //Nephron. 1997. - N 77. -P. 404-411.

206. Wang X. L., Sim A. S., Badenhop R. F. et al. A smoking-dependent risk of, coronary artery disease associated with a polymorphism of the endothelial nitic oxide synthase gene // Nat. Med. 1996. - N 2. - P. 41-45.

207. Warpeha K. M., Xu W., Liu L. et al. Genotyping and functional analysis of a polymorphic (CCTTT) (n) repeat of NOS2A in diabetic retinopathy. // FASEB J. 1999.-N 13.-P. 1825-1832.

208. Weiss E. J., Bray P.F., Tayback M. et al. A polymorphism of a platelet glycoprotein receptor as an inherited risk factor for coronary thrombosis // N. Engl. J. Med. 1996.-N334.-P. 1090-1094.

209. Welin L., Tibblin G. Analisis of risk factors for stroke in a cohort of men born in 1913 // New Engl. J. Med. 1987. - N 317. - P. 521 -526.

210. Wiessner C., Vogel P. Mechanisms of secondary Brain Damage in Cerebral Ischemia and Trauma. New York, 1996. - 245 p.

211. Wilcox J. N., Subramanian R. R., Sundell C. L. et al. Expression of Multiple isoforms of nitric oxide synthase in normal and atherosclerotic vassels // Atheroscler. Thromb. Vase. Biol. 1997. - Vol. 17, N 17. - P. 2479-2488.

212. Zee R. Y. Prospective evaluation of the angiotensin-converting enzyme insertion/deletion polymorphism and the risk of stroke / R. Y. Zee, P. M. Ridker // Circulation. 1999. - N 99. - P. 340-343.

213. Zulch K. Patterns of cerebral infarct / K. Zulch, V.Hosman // Handbook of Clinical Neurologie. 1998. - Vol. 53, N. 1. -P. 175-199.

Информация о работе

Фролова, Светлана Юрьевна
кандидата медицинских наук
Томск, 2005
ВАК 03.00.15

Диссертация

Молекулярно-генетическое исследование наследственной компоненты подверженности к инсульту у населения г. Томска - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы