Молекулярно-генетический анализ эндогенных ретровирусов у некоторых пород свиней и диких кабанов

Айтназаров, Руслан Бейшеналиевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Молекулярно-генетический анализ эндогенных ретровирусов у некоторых пород свиней и диких кабанов
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Молекулярно-генетический анализ эндогенных ретровирусов у некоторых пород свиней и диких кабанов"

На правах рукописи

УДК: 575.1:577.27:578.828:636.4

Айтназаров Руслан Бейшеналиевич

Молекулярно-генетический анализ эндогенных ретровирусов у некоторых пород домашних свиней и диких

кабанов

03.00.15 - генетика 03.00.03 - молекулярная биоло! ия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

НОВОСИБИРСК 2006

Работа выполнена в лабораториях разведения экспериментальных животных и молекулярных основ генетики животных Института цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск.

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор биологических наук Виктор Иванович Ермолаев Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск кандидат биологических наук Николай Серафимович Юдин Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

доктор биологических наук, профессор Илья Кузьмич Захаров Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск доктор биологических наук, Валентина Семеновна Деева СибНИПТИЖ СО РАСХН, г. Краснообск

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор», Кольцове, Новосибирская область

Защита диссертации состоится « Ц» ССТЯЯЪЯ 2006 года на заседании диссертационного совета позапцгге диссертаций на^сбискание ученой степени доктора наук (Д-003.011.01) в Институте цитологии и генетики СО РАН в конференц-зале Института по адресу: 630090, Новосибирск-90, проспект акад. Лаврентьева, 10, тел/фак: (383) 331278, е-таН: dissov@bionet.nsc.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Институте цитологии и генетики СО РАН.

Автореферат разослан « У » семтА^рУ2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук -^¿¿¿^---А.Д. Груздев

£оо£ А

41310

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Одной из основных проблем медицины является недостаток органов для пересадки человеку, в связи с чем в практику вошла пересадка органов от животных к человеку (ксенотрансплантация) (Patience et al., 1997; Кристофер, 2001; Lee et al., 2002; Scobie et al., 2004; Niebert, Tonjes, 2005). Свинья является главным претендентом на роль донора органов при ксенотрансплантации, так как её органы более всего сходны с человеческими по размеру и физиологическим параметрам. Однако, присутствие в клетках свиньи эндогенных ретровирусов, которые являются составной частью генома, ставит серьезные проблемы перед медициной. Существует вероятность, что, находясь в латентной форме, эндогенные ретровирусы при пересадке органа от животного-донора, могут активизироваться и вызвать заболевания у человека, в том числе, онкологические (Шумаков, 1995). Эндогенные ретровирусы свиней, передающиеся при межвидовой трансплантации, могут стать причиной эпидемий, подобных эпидемии СПИДа. При ксенотрансплантации искусственно создаются условия для рекомбинаций патогенных близкородственных вирусов человека и животно! о, появления новых инфекций, адаптации к организму человека вирусов, репродуцирующихся в организме живогных. Чтобы избежать, риска возникновения вирусной инфекции при проведении манипуляций с органами и тканями животных, необходимо тщательное обследование животного-донора.

Эндогенные ретровирусы у свиней (porcine endogenous retroviruses, PERV) впервые были выявлены путем электронной микроскопии культур клеток (Breese et al., 1970; Альтштейн и др., 1972). В последствие были выделены три типа ретровирусов PERV (А, В и С), которые различаются по последовательности нуклеотидов гена env и своим биологическим свойствам (Takeuchi et al., 1998). Обнаружены рекомбинантные вирусы PERV А/С, которые могут существовать как экзогенные вирусы, т.е. передаваться вертикально по наследству и/или горизонтально между животными (Oldmixon et al., 2002). Показано, что PERV способны инфицировать клетки человека in vitro (Martin et al., 1998). Известно, что геномы свиней, в зависимости от породы животного, содержат разные типы PERV (Jin et al., 2000).

В настоящее время за рубежом выведены многочисленные породы лабораторных мини-свинсй специально для медико-биологических исследований и нужд ксенотрансплантации. Первое стадо отечественных лабораторных миниатюрных свиней «Минисибс» было создано в Институте цитологии и генетики СО РАН (г. Новосибирск) при скрещивании свиней вьетнамский черной и пятнистой пород, шведского ландраса, а также кабанов европейского и среднеазиатского подвидов (Тихонов, 1990). Впервые сердечные клапаны мини-свиней для пересадки человеку были использованы в Кемеровском кардиологическом центре (Тихонов, 2000; Горелов и др., 2001). Несколько лет успешного использования клапанов свиных сердец в качестве биопротезов показали, что в отличие от зарубежных аналогов, они

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА (¡.-Петербург оя

гораздо дешевле и более надежны. В Институте патологии кровообращения им. Мешалкина МЗ РФ проводятся исследования по трансплантации сердца, клапанов, кровеносных сосудов и других тканей у мини-свиней. В Новосибирском научно-исследовательском институте травматологии и ортопедии МЗ РФ на мини-свиньях ведутся исследования по коррекции сколиоза.

Перечисленные проблемы обусловливают актуальность изучения эндогенных ретровирусов РЕЮ/ типов А, В и С у лабораторных мини-свиней, созданных для медико-биологических исследований в ИЦиГ СО РАН, а также у некоторых родоначальных пород домашних свиней и диких кабанов. >

Цель и задачи исследования. Целью исследования является выявление эндогенных ретровирусов типов А, В и С в геномах лабораторных мини-свиней и их некоторых родоначальных пород, а также изучение факторов, влияющих на частоту встречаемости РЕКУ. В задачи исследования входило:

1. Изучить частоту встречаемости эндогенных ретровирусов разных типов у нескольких пород домашних свиней и диких кабанов.

2. Оценить влияния средовых (условия содержания и обитания) и генетических факторов (породы и подвиды) на наличие разных типов ретровирусов в геноме домашних и диких свиней.

3. Провести анализ ассоциаций различных типов эндогенных ретровирусов между собой и традиционными генетическими маркерами, использовавшимися при селекции свиней.

Научная новизна и практическая ценность. Впервые изучена порода лабораторных сибирских мини-свиней на наличие эндогенных ретровирусов РЕИУ типов А, В, С. Показано, что эндогенные ретровирусы типа А, В и С широко распространены у лабораторных миниатюрных свиней. Обогащенность геномов животных этой породы ретровирусами, вероятно, обусловлена внесением их от пород-основателей. В то же время среди пород-основателей (диких и домашних свиней) имеются животные, свободные от некоторых типов эндогенных ретровирусов. Поскольку существует опасность активации эндогенных ретровирусов свиней при ксенотрансплантации, необходимо учитывать, что частота встречаемости эндогенных ретровирусов в некоторых выборках домашних и диких свиней существенна. На наличие эндогенных ретровирусов разных типов в популяциях свиней оказывает влияние не только порода (подвид), но и условия содержания(обитания). При селекции и разведении свиней для медико-биологических исследований необходимо строгое соблюдение зоогигиенических норм. В ходе работы выявлены ассоциации эндогенных ретровирусов свиней с разными генетическими маркерами и полом животного, которые могут быть использованы в дальнейших научных исследованиях и при селекции.

Положения, выносимые на защиту. 1. Изучение влияния генотипа (породы и подвиды животных) на уровень встречаемости у свиней эндогенных ретровирусов РЕЯУ показало

статистически значимые различия частот носителей различных типов ретровируса (А, В и С) как внутри популяций одной породы, гак и между различными породами, а также у диких кабанов Южной Украины и Средней Азии.

2. Метод однофакторного дисперсионного анализа, кластеризация методом двух главных компонент и семейный анализ пометов свиньи крупной белой породы, показали достоверное влияние факторов среды (условия содержания и обитания) на частоту носителей PERV в популяциях домашних и диких свиней.

3. Выявлены ассоциации ретровируса PERV типа А с локусами эритроцитарных антигенов ЕАЕ, ЕАК, липопротеином LP В и полом животных, а также ассоциации ретровируса PERV типа В с локусами аМ, ЕАЕ и LPB у разных подвидов диких кабанов и домашних пород свиней. Показана ассоциация между PERV типов А и В у некоторых пород свиней,

4. Высказана гипотеза о возможности, кроме вертикальной передачи эндогенных ретровирусов свиней всех трех типов по наследству от родителей потомкам, горизонтальной передачи от особи к особи, при которой PERV могут выступать в качестве инфекционного вируса.

Апробация работы. Материалы исследования были представлены на XII Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Ялта-Гурзуф, 2004); на международном конгрессе "Progress in Fundamental and Applied Sciences for Human Health" (Ukraine, 2004); на международной научно-практической конференции молодых ученых СО РАСХН «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых учёных» (Новосибирск, 2004); на Сибирском международном ветеринарном конгрессе ^Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2005); на отчетной конференции «Динамика генофондов растений, животных и человека» (Москва, 2005); на отчетной сессии ИЦиГ СО РАН (Новосибирск, 2006).

Публикации. По геме диссертации опубликовано 11 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация содержит 158 страницы машинописного текста, иллюстрирована 23 таблицами и 17 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, списка литературы. Указатель литературы содержит 256 работ, из которых 159 зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалом исследования послужили образцы крови из девяти выборок диких и домашних свиней (всего 471 особь), представляющих контрастные по происхождению и морфологическим признакам формы. Во-первых, это лабораторные мини-свиньи «Минисибс», разводимые в Экспериментальном хозяйстве (ЭХ) СО РАН. Во-вторых, это четыре заводские породы: ландрас ЭХ СО РАН и племфермы ОАО "Кудряшовское", дюрок ОАО "Кудряшовское", два внутрипородных типа крупной белой

породы - новосибирский и ачинский тип из ЗАО АПК «Иня», свиньи скороспелой мясной породы СМ-1 из учхоза «Тулинское».

Дикие кабаны представлены двумя популяциями: среднеазиатской (Чуйская долина и Сары-Челекский заповедник, Киргизия) и южноукраинской (окрестности г. Мелитополь).

Методы исследования. Взятие крови для исследований у свиней осуществляли из сердца или же прижизненно из передней полой вены. Для выделения ДНК кровь собирали в стерильные пробирки без консерванта и хранили при температуре -20°С. Выделение ДНК из образцов крови проводили методом фенол-хлороформной экстракции по модифицированной методике (Смит и др., 1990). Генотипирование выполняли типо-специфичными праймерами дам эндогенных ретровирусов свиней РНИУ методом ПЦР (Ье "^¡ег й а1., 1997; АЫуовЫ й а1. 1998; ТакеисЫ е1 а1., 1998). Продукты амплификации оценивали электрофорезом в 4% ПААГ, окрашивание проводили бромистым этидием, длину фрагмента определяли сравнением с ДНК маркерами («СибЭнзим», г. Новосибирск) (рис. 1).

Рис. 1. Электрофореграммы амплицированных фрагментов ДНК, епу-А, еиу-В и еяу-С эндогенных ретровирусов свиней в 4% полиакриламидном геле Примечание: М-ДНК маркер, длина в п.н. показана стрелками; РЕКУ с положительным еот-А, ет-В и ет-С; К-контроль ПЦР.

Для проведение аллотипирования кровь собирали в пробирки с консервантом. Сыворотку отделяли центрифугированием при 4 тыс. об/мин, консервировали азидом натрия (0,01%) и хранили при -20°С (Баранов, Савина, 1988). Аллотипы сывороточных белков исследуемых животных определяли стандартными методами, описанными в литературе (Беляев и др., 1974; Баранов, 1981; Князев и др., 1982). Для установления электрофоретической подвижности белков, маркированных аллотипами, проводили иммуноэлектрофорез в агаровом геле. В популяции свиней крупной белой породы новосибирского типа был определен иммуногенетический статус и по группам крови 8 генетических систем. Данные типирования по группам крови были любезно предоставлены Лабораторией биотехнологии СибНИПТИЖ СО РАСХН (зав. лабораторией Г. М. Гончаренко).

Статистическую обработку экспериментального материала проводили стандартными методами (Плохинский, 1960; Лакин, 1990). Анализ влияния породной принадлежности и условий среды на частоту носителей РЕЯУ проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа. По компонентам факториальной девиаты рассчитывали дисперсию и силу

мм в СМ

влияния (tj2) каждой из компонент и оценивали статистическую значимость фактора.

Для определения взаимоотношений изучаемых популяций строили карту в пространстве двух главных компонент. Генетические дистанции для построения карты в системе двух главных компонент определяли по

формуле:= -<7;)2, (евклидова дистанция) где m - число фенотипов, р,

и q¡ - частоты фенотипов в сравниваемых группах (Вейр, 1995). Для вычислений использовали компьютерную программу MGA-dist. (http://mga.bionet.nsc.ru/MGA-dist/MGA-dist.htm'). Наличие и силу ассоциации различных типов ретровирусов с генетическими маркерами определяли с помощью коэффициента ассоциации гА (Лакин, 1990) по формуле

гл = Ьс—- Достоверность коэффициента ассоциации

4(a + b)(c + d)(a + c)(b + d)

оценивали критерием х~ (Живсповский, 1991) по формуле %2 -r]N, где N -объём выборки.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Наличие эндогенных ретровирусов разных типов в популяциях домашних свиней и диких кабанов.

Данные по содержанию трех типов эндогенных ретровирусов (env А, env В и env С) у домашних свиней разных пород и двух подвидов диких кабанов в зависимое™ от условий их содержания и обитания приведены в таблице 1. Анализ распределения частот носителей PERV у диких и домашних свиней показал, что в целом по виду Sus scrofa, а так же для дикой и домашней формы, имеют место статистически значимые различия частот носителей разных типов ретровируса. Наиболее часто встречаются носители PERV env А, с несколько меньшей частотой - носители env В, самую низкую частоту имеют носители env С. Дикая и домашняя формы вида Sus scrofa весьма существенно различаются как по частотам носителей PERV, так и по выраженности различий между этими частотами: частоты носителей выше у домашних свиней, а выраженность различий типов PERV - у диких кабанов. Пределы, в которых варьируют выборочные частоты носителей PERV, различны для разных типов ретровируса. Для носителей эндогенного ретровируса типа env А в целом по виду 50-100%, для диких кабанов 5074.2%, у домашних свиней 80-100%. Таким образом, области вариа1щи частот носителей этого тина у дикой и домашней формы не перекрываются. Для носителей env В в целом по виду 25-100%, из них для диких кабанов 2567.7%, у домашних свиней 40-100%, то есть области вариации перекрываются. PERV С в целом по виду у диких кабанов 12.9-100%, а у домашних свиней 17.2-98.8%. То есть в последнем случае область вариации выборочных частот у домашних свиней лежит внутри области вариации диких кабанов. Таким образом, имеет место достоверное отличие домашней и дикой

Таблица 1. Наличие эндогенных ретровирусов разных типов в популяциях домашних свиней и диких кабанов.______

Порода (подвид) Хозяйство и место обитания Объём выборки env А+ env В+ env С+

число % число % число %

Мини-свиньи СО РАН 160 158 98,75 157 98,13 158 98,75

Ландрас СО РАН 30 29 96,67 29 96,67 25 83,33

Ландрас Кудряшевский 15 12 80,00j 10 66,67 3 20,00

Дюрок Кудряшевский 10 8 80,00 4 40,00 2 20,00

КБ, новосибирский гип Иня 99 92 92,93 83 83,84 17 17,17

КБ,ачинский тип Иня 101 93 92,08 100 99,01 40 39,60

СМ-1 Тулинский 21 21 100 21 100 16 76,19

Кабан Юга Украины Украина 31 23 74,20 21 67,70 4 12,90

Среднеазиатский кабан Киргизия 4 2 50,00 1 25,00 4 100

Всего 471 438 92,99 426 90,45 269 57,11

Домашние свиньи 436 413 94,70 404 92,70 261 59,90

Дикие кабаны 35 25 71,40 22 62,90 8 22,90

%2 (дикая и домашняя форма) 26,99 33,30 18,11

Примечание. КБ - крупная белая порода, СМ-1 - скороспелой мясной породы

формы свиней по встречаемости у них ретровирусов разных типов.

Карта, построенная в пространстве двух главных компонент по частотам носителей различных типов PERV в выборках диких и домашних свиней (рис. 2), позволяет выделить четыре кластера:

I. среднеазиатский кабан;

И. кабан Южной Украины, свиньи пород ландрас и дюрок ОАО "Кудряшовское" и новосибирский тип крупной белой породы из ЗАО АПК "Иня";

III. ачинский гип крупной белой породы из ЗАО АПК "Иня";

IV. лабораторные мини-свиньи «Минисибс» и ландрасы из ЭХ СО РАН и скороспелая мясная порода из учхоза "Тулинское".

Если разделить карту по диагонали, можно выделить две группы: в первую ipynny входит только Кластер I, в который вошел среднеазиатский кабан, во вторую - все остальные выборки. Очевидно, это связано с тем, что выборке среднеазиатского кабана присуще своеобразное соотношение частот носителей различных типов PERV. Во вторую группу вошли кластеры И, III и IV, включающие представителей пород европейского происхождения и дикого кабана Южной Украины. Кластер II - включает кабанов Южной Украины, домашних свиней пород ландрас, дюрок ОАО "Кудряшовское" и

свиней крупной белой породы новосибирского типа из ЗАО АПК "Иня". Кластер III включает только ачинский тип крупной белой породы из ЗАО АПК "Иня" и занимает промежуточное положение между кластерами И и IV. Кластер IV - это лабораторные мини-свиньи «Минисибс» и ландрасы, содержащиеся в одинаковых условиях ЭХ СО РАН, а также скороспелая

so *оо 1Я гю из зао зга «га <зо ню

] Лабораторные миниатюрные свиньи, ЭХ СО РАН,

2 Ландрас, ЭХ СО РАН,

3. Ландрас, племферма ОАО "Кудряшовское";

4. Дюрок, атемферма ОАО "Кудряшовское";

5 Крупная белая, новосибирский тип, ЗАО АПК "Иня";

6 Крупная белая, ачинский тип, ЗАО АПК "Иня";

7 Скороспелая мясная (СМ-1), учхоз "Тулинское",

8. Кабан Юга Украины;

9. Среднеазиатский кабан;

Рисунок 2. Карта взаимного расположения выборок из популяций домашних и диких свиней, живущих в различных условиях окружающей среды, построенная в пространстве двух главных компонент по встречаемости всех типов PERV.

Обозначения: белая штрих-линия - кластеры, выделенные на основании сходства; белое поле, ограниченное сплошной чёрной линией - выборки, входящие в одну генеральную совокупность; черпая жирная линия соединяет выборки одной породы.

мясная порода из учхоза "Тулинское". Последний кластер объединяет животных, обладающих наиболее высокой частотой носителей всех типов ретровирусов.

По-видимому, на формирование этих кластеров оказало влияние не только генетическое родство популяций, но и сходство условий содержания/обитания. Отметим, что выборки из пород, представленных в кластере II, оказались в кластере III и IV. На карте видно, что с одной стороны, выборки одной и той же породы (ландрас, крупная белая) попали в разные кластеры, с другой, в одном кластере (IV) оказались неродственные между собой породы (ландрас, СМ-1) (рис. 2).

2. Влияние генотипа и среды на частоту носителей различных типов PERV у диких и домашних свиней.

Построенная нами карта показала, что выборки одной породы, живущие в разных условиях, оказались в разных кластерах, в то время как свиньи разных пород вошли в один кластер. Чтобы подтвердить возможное

влияние генотипа и среды на встречаемость ретровирусов различных типов, была проведена оценка влияния факторов наследственности и среды на формирование частоты носителей РЕЛУ в популяциях свиней. Анализ влияния породной принадлежности и условий среды на частоту носителей РЕКУ проводили с помощью системы из трёх однофакторных дисперсионных комплексов (Лакин, 1990). В первом из них градациями фактора выступают выборки как таковые. Таким образом, подразделение массива данных максимально и включает в себя одновременно подразделение по генетической (порода) и средовой (условия содержания) компонентам изменчивости. Во втором комплексе градациями фактора являются породы. Таким образом, подразделение проведено по генетической компоненте изменчивости. В третьем комплексе осуществлено подразделение но условиям окружающей среды (хозяйствам), то есть по средовой компоненте изменчивости (рис. 3).

Наибольшее влияние факторов наблюдается на вариацию встречаемости эндогенного ретровируса типа ет С, что очевидно связано с его низкой, по сравнению с другими, частотой в популяциях. Влияние породной принадлежности и условий содержания (обитания) на вариацию частоты ретровирусов и общее разнообразие приблизительно одинаковы.

РЕЯУ А РНЯУ В РЕКУ С

Рисунок 3. Сила влияния (г]2) выборки, породы и условий содержания на частоту носителей эндогенных ретровирусов разных типов по данным однофакторного дисперсионного анализа.

Наименьшее влияние изучаемые факторы оказывают на частоту тииа ет А, встречаемость которого в выборках максимальна; тип ет В занимает промежуточное положение. Влияние выборки, т.е. совместного влияния генотипа и среды на встречаемость ет В было преобладающим; отдельное влияние породной принадлежности и условий содержания (обитания) на вариацию частоты эндогенного ретровируса типов А и В приблизительно одинаково.

Результаты анализа показывают равное участие наследственности и окружающей среды в формировании частот носителей разных типов РЕЯУ. Частота особей, позитивных по тому или иному типу РЕЛУ в выборке, определяется суммарным эффектом факторов среды и наследственности.

Поэтому, при подразделении массива данных на выборки (градации, включающие в себя одновременно подразделение по генетическому фактору, так и подразделение по фактору среды) мы имеем наиболее высокие значения г}2 (силы влияния фактора). Влияние собственно наследственности (подразделение массива данных по породам/подвидам) и собственно среды (подразделение по месту и условиям обитания) приблизительно одинаковы.

На основании полученных результатов можно сделать вывод, что влияние генотипа и среды на частоту носителей различных типов PERV у диких и домашних свиней высокодостоверно. Полученные статистические оценки хорошо согласуются с влиянием породы на частоту носительства PERV разных типов по данным других авторов (Jin et al., 2000). Известно, что эндогенные ретровирусы мыши способны передаваться горизонтально между взрослыми животными (Portis et al., 1987). Также показано, что передача вируса лейкемии кошек происходит через насекомых (D'Haese et al., 2003). По-видимому, влияние условий среды (содержания или местообитания) на частоту носителей разных типов PERV в наших исследованиях можно объяснить особенностями поведения животных, в частности, проявлением антагонизма между особями (Новицкий, 1981).

3. Отцовский и материнский эффект на частоту PERV у потомков.

Было сделано предположение, что у свиней, кроме передачи эндогенных ретровирусов по наследству от родителей потомкам, возможна и передача от особи к особи. Для подтверждения существования механизма передачи от особи к особи эндогенного ретровируса было проведено исследование по выяснению влияния мат ери (и совместного пребывания однопомётников в нре- и постнатальный период) и отца на частоты носителей типов эндогенных ретровирусов потомков с помощью однофакгорного дисперсионного анализа на десяш помётах крупной белой породы.

При вертикальной передаче эндогенного ретровируса от родителей к потомкам влияние матери и отца на частоту потомков - носителей ретровируса должно быть одинаковым. Если имеет место i оризонтальный путь передачи от особи к особи, то благодаря более тесному контакту матери и потомков в пре - и ранний постнатальный период, а так же благодаря контактам между однопомётниками в эти же периоды, материнское влияние на частоту PERV у потомков будет сильнее, чем отцовское. На рисунке 4 представлена сила влияния (rj) матери/отца на частоты встречаемости эндогенных ретровирусов трех типов в пометах. Результаты дисперсионного анализа показали, что на частоту встречаемости ретровируса типа А влияние матери выше, чем отца, влияние каждого из родителей достоверно. В случае эндогенных ретровирусов типа В и С, по сравнению с типом А, влияние отца было ниже, но отцовское влияние в случае типа В недостоверно. Таким образом, это различие минимально для эндогенных ретровирусов типа env А, но для типов env В и env С влияние матери и принадлежности к одному помёту почти в два раза больше отцовского.

0,5

Н материнское влияние ■ отцовское влияние

^-достоверное

■лиоип»

§ 0,1 -

PERVA

PERVB

PERVC

Рисунок 4. Сила влияния (г}2) матери (и совместного пребывания однопомётников в пре- и постнатальный период) и отца на частоты носителей трёх типов эндогенных ретровирусов у потомков по данным однофакторного дисперсионного анализа.

В целом, семейный анализ подтвердил предположение о возможности горизонтального переноса эндогенною ретровируса свиней: материнское (мать+помёт) влияние оказалось сильнее, чем отцовское для всех типов PERV, а для типа В влияние отца статистически недостоверно.

4. Иммуногенетическое изучение полиморфизма сывороточных белков у домашних и диких свиней.

Изучение полиморфизма сывороточных аллотипов способствует расширению спектра 1енетических маркеров и тем самым - углублению исследований общетеоретических проблем филогенеза и породообразования многообразных форм диких и домашних свиней как политипического вида, поскольку географическое распределение маркеров связано с выяснением вопросов геногеографии, а ткже проблемами центров происхождения домашних пород свиней (Горелов, Савина, 1991).

Все изученные выборки домашних и диких свиней (340 особей) были аллотипированы по 12 аллотипам нескольких иммуногенетических систем: альфа-макроглобулинов (аМ), липопротеина высокой плотности (Lpr), липопротеинов низкой плотности {Lpb), иммуноглобулинов класса G ([IgG), других белков с недостаточно полно идентифицированными свойствами (Igl, Ig2 и Lp3, Lp9 и Lp) (Ермолаев и др., 1990). Результаты аллотипирования показали, что изучаемые популяции домашних и диких свиней различались по частотам аллотипов. У диких свиней наблюдался мономорфизм и незначительный полиморфизм мношх генетических систем. У домашних свиней выявлен обширный иммуногенетический полиморфизм: аллотип Lpb 12 системы липопротеинов низкой плотности имел очень высокую частоту у всех домашних свиней, а аллотип Ig2 системы глобулинов и аллотип Lp системы липопротеинов встречались очень редко.

Для оценки гетерогенности популяций использовали однофакторный дисперсионный анализ, в котором в качестве градаций фактора выступают породы, а в качестве результативного признака - численность особей,

позитивных по каждому соответствующему анализируемому аллотипу. Из рисунка 5 следует, что межпородное разнообразие по всем двенадцати аллотипам оказалось статистически достоверным.

Наиболее высока межгрупповая изменчивость популяций по частоте аллотипа ЬрЫ2 системы липопротеинов низкой плотности. В меньшей степени межпопуляционные различия выражены для аллотипов 1§2 системы глобулинов и Ьр системы липопротеинов.

й аллотипы Ер, в том числе липопротеинов низкой и высокой плотности Ц аллотипы íg, в том числе иммуноглобулинов ^ аллотипы аМ (1,2,5)

Lp Lpd Lp3 Lpb3 Lpr1 Lpb12 Ig2 Ig1 lgG2b aMS aM2 aMI

Рисунок 5. Степень влияния {t}2) принадлежности к разным популяциям домашних и диких свиней на наличие изученных аллотипов белков сыворотки крови (по данным однофакторного дисперсионного анализа).

Исследование полиморфизма домашних и диких свиней по сывороточным аллотипам было проведено нами для маркирования животных с последующим изучением у них наличия эндогенных ретровирусов свиней.

5. Изучение ассоциаций различных типов эндогенных ретровирусов с аллотипами сыворотки крови и полом животных в популяциях домашних и диких свиней.

Коэффициент ассоциации «тип ретровируса - маркер» вычисляли для 111 пар, включающих маркеры аллотипов сыворотки крови у животных четырех исследованных популяций (крупная белая порода двух типов: новосибирский и ачинский, ландрас, кабан Южной Украины), и для 33 пар, включающих маркеры систем групп крови у животных крупной белой породы новосибирского типа. При этом для 39 пар гА не был определен ввиду отсутствия в популяциях полиморфизма по маркеру. В целом, была проведена оценка коэффициента ассоциации в общей сложности для 105 пар - «тип ретровируса - маркер», среди которых 14 значений коэффициентов оказались статистически достоверными. Поскольку первый порог достоверности результатов предполагает 5% вероятность случайного получения статистически значимых оценок, в нашем исследовании ожидаемое число достоверно ассоциированных нар в результате случайной ошибки должно

составить 105x0,05=5,25; что статистически значимо меньше фактического их числа (х2 = 15,35; Р < 0,001), т.е. 14 пар.

Для того, чтобы выделить ассоциации, существование которых наиболее вероятно, дополнительно была проведена оценка ассоциаций отдельных типов ретровирусов PERV с изученными полиаллельными локусами в целом и (или) при объединении выборок из популяций с помощью суммарного критерия %2 (табл. 2 и 3).

Наиболее интересными нам представляются следующие ассоциации. Положительная ассоциация локуса LPB одновременно с типами А и В эндогенных ретровирусов PERV (табл. 2). Данную ассоциацию можно объяснить двумя причинами - либо сайты инсерции обоих ретровирусов находятся на одной хромосоме рядом с локусом LPB, либо вблизи этого локуса встроен рекомбинантный вариант ретровируса (Lee et al., 2002), содержащий в составе амплифицируемого фрагмента ДНК последовательность нуклеотидов, гомологичную обоим типам вирусов. Ассоциации локусов двух систем групп крови ЕАЕ и ЕАК, локализованных на хромосоме 9, с PERV А (табл. 2). В этом случае с большой вероятностью можно говорить о двух различных сцепленных локусах, поскольку расстояние между локусами ЕАЕ и ЕАК, очень далеко отстоящими друг от друга на генетической карте, составляет не менее 140 сМ (Ruvinsky, Rotschild, 1998). Кроме перечисленных выше ассоциаций, по-видимому, имеет место также ассоциация локуса аМ с PERV В. Из-за отрицательного значения коэффициента ассоциации можно полагать, что этот тип ретровируса находится в "фазе отталкивания" с аллелями аМ12'3 и аМ2'3, кодирующими аллогипы а-макроглобулина (аМ1, аМ2 и аМЗ) (табл. 2). Вероятно, копия PERV А локализована на Х-хромосоме. Это предположение следует из отрицательного значения коэффициента ассоциации (гА= -0,28; табл. 2), вычисленном для особей мужского фенотипа (с Y-хромосомой). Наблюдаемую ассоциацию локуса EAG, локализованного на хромосоме 15, с ретровирусом PERV С, мы рассматриваем пока как артефакт до детального выяснения причин данного явления.

Помимо связи с генетическими маркерами, имели место ассоциации между разными типами эндогенных ретровирусов свиней. В таблице 3 показана ассоциация между тремя типами эндогенного ретровируса для четырех исследованных популяций.

Анализ ассоциации между типами эндогенных ретровирусов показал, что ретровирус типа А встречается достоверно чаще с типом В. Существование связи между типами В и С и типами А и С было статистически недостоверно. Наличие связи между типами ретровирусов можно объяснить возникновением рекомбинантов между типами ertv А и env В (Lee et al., 2002).

Таблица 2. Оценка ассоциаций аутосомных генешческих маркеров и пола с эндогенными ретровирусами разных типов.

Iенетический маркер Локус Локализация на хромосоме' Тип РЕЯУ Суммарный X1 Ш-)

а-макроглобулин2, аМ Р1Р1 5 А В С 2,60 (6) 16,26* (6) 9,41 (6)

Иммуноглобулин класса О2, ЮНО 7 А В С 5,02 (9) 12,45 (9) 8,65 (9)

Липопротеин низкой плотности2, ЬрЬ ЬРВ 9 А В С 15,65** (5) 13,03* (5) 8,20 (5)

Липопротеин высокой плотности3, Ьрг 1РК 9 А В С 2,88 (2) 0,87 (2) 2,12(2)

Пол3 - У А В С 6,14* (2) 0,87 (2) 2,67 (2)

.... . | эритроцигарные антигены О КАП 12 А В С 1,06(1) 3,41 (1) 1,37(1)

Е4 ЕЛЕ 9 А В С 33,97*** (4) 9,80* (4) 4,17(4)

О4 ЕЛО 15 А В С 2,53 (2) 4,09 (2) 11,77** (2)

Ь4 ЕА1 4 А В С 4,09 (3) 7,19(3) 2,42 (3)

К ЕЛК 9 А В С 4,26* (1) 0,50(1) 0,37(1)

Примечание: Сведения взяты из работы (ЯцуивКу, ЯоксЫИ, 1998); Суммирование по выборкам и по всем маркерам локуса; Суммирование по выборкам; Суммирование по всем маркерам локуса. *р<0,05; ** р<0,01; *** р<0,001.

Тип ет Тип ет х2

ет А ет В 16,31**

ет А ет С 4,14

епу В ет С 7,02

Таблица 3. Выявленные ассоциации между типами эндогенных ретровирусов свиней. Приведен суммарный критерий для четырех исследованных выборок (крупная белая новосибирского и ачинского типов, ландрас, дикий кабан Южной Украины).

В целом, проведённое исследование показало, что встречаемость эндогенных ретровирусов всех трех типов у домашних свиней как внутри породы, так и между породами значительно различается. Наблюдались также различия встречаемости всех трех типов ретровирусов у домашних и диких свиней Статистические исследования выявили достоверное влияние генотипа (породы и подвиды животных) и среды (условия содержания/обитания) на уровень встречаемости эндогенных ретровирусов у домашних и диких свиней. Кластеризация выборок домашних и диких свиней по частотам носителей PERV различных типов отражает их филогенетические взаимоотношения, а также влияние условий внешней среды. Оценка влияния матери и отца на частоту PERV у потомков домашних свиней дает основание для предположения о том, что у свиньи возможна передача PERV от особи к особи.

Выводы:

1. Встречаемость эндогенных ретровирусов всех грех типов у домашних свиней как внутри породы, так и между породами значительно различается. Показано достоверное влияние генотипа на встречаемость различных типов эндогенного ретровируса (А, В и С) у домашних пород свиней.

2. Выявлены статистически значимые различия встречаемости всех трех типов ретровирусов между домашними и дикими свиньями (Р<0.001для всех типов env PERV).

3. Впервые выявлено достоверное (/'<0.001) влияние среды (условия содержания и обитания) на встречаемость вссх типов PERV у диких и домашних свиней. Данный феномен подтверждают результаты кластеризации методом двух главных компонент.

4. Использование сывороточных аллотипов в качестве иммуно-генетических маркеров подтвердило обнаруженный раннее высокий иммуногенетический полиморфизм у культурных пород и мономорфизм или незначительный полиморфизм многих генетических систем у диких свиней.

5. Установлены ассоциации ретровируса PERV А с локусами эритроцитарных антигенов ЕЛЕ (/><0,001.), ЕАК (Р<0,05), липопротеина LP В (Р<0,01) и полом животных, а также ретровируса PERV В с локусами аМ {Р <0,05), ЕЛЕ (Р< 0,05) и LP В (Р<0,05), причем у разных подвидов диких кабанов и домашних пород свиней эти ассоциации могут присутствовать либо отсутствовать. Показана ассоциация между частотой встречаемости PERV типов А и В (Р <0,01) у некоторых пород свиней и диких кабанов.

6. Оценка влияния матери и отца на частоту PERV у потомков дает основание для предположения о том, что у свиньи возможна передача PERV от особи к особи. Для всех трех типов PERV влияние матери оказалось сильнее, чем влияние отца. Это различие минимально для env А, а для env В и env С влияние матери на помёт почти в два раза превышает отцовское.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Поскольку существует опасность активации эндогенных ретровирусов свиней при ксенотрансплантации, а также способность к рекомбинации с эндогенными ретровирусами человека, в качестве доноров необходимо выбирать особей, свободных от PERV с учетом того факта, что частота носителей эндогенных ретровирусов трех типов (PERV А, В, С) в изученных выборках домашних свиней очень высока.

2. Выявленные ассоциации эндогенных ретровирусов свиней с рядом генетических маркеров и полом животного могут быть использованы в научных исследованиях и при селекции свиней, свободных от PERV. Такие животные должны гарантировать снижение риска инфекции PERV у реципиентов ксенотрансплантантов.

СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Айтназаров Р.Б.. Жунушов А.Т.. Горелов И.Г., Савина М.А., Ермолаев В.И. Иммуно-генетический анализ среднеазиатского дикого кабана // Наука и новые технологии. Бишкек. 2003. № 3. С. 48-52.

2. Айтназаров Р.Б. Проблемы использования внутренних органов сельско-хозяйственных животных // Био (журнал для специалистов птицеводческих и животноводческих хозяйств), Екатеринбург. 2003. № 12. (39). С. 2-4.

3. Айтназаров Р.Б.. Юдин Н.С., Савина М.А., Ермолаев В.И. Эндогенные ретровирусы сибирских миниатюрных свиней // Материалы XII Междунар. конф. «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии». - Украина. Крым. Ялта-Гурзуф. 31 мая-9 июня 2004 г. // Успехи современного естествознания. - 2004. Т. 1. № 6 (Приложение № 1). С. 131-132.

4. Aitnazarov R.B. Yudin N.S., Kobzev V.F., Savina M.A., Ermolaev V.l. Identification of endogenous retroviruses in the genomes of the founder breed and miniature swines used for xenotransplantation <7 Intern Congress '"Progress in Fundamental and Applied Sciences for Human Health". - Sudak. Crimea. Ukraine. June 10-21.2004. P. 68-69.

5. Айтназаров Р.Б.. Юдин H.C., Савина M.A., Ермолаев В.И. Идентификация эндогенных ретровирусов в популяции мини-свиней и их основателей с помощью ПЦР // Труды международной научно-практической конференции молодых ученных СО РАСХН «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых учёных». (15-16 ноября 2004 г., пос. Краснообск). - Новосибирск. 2004. С. 112-117.

6. Айтназаров Р.Б., Юдин Н.С., Савина М.А., Никитин C.B., Ермолаев В.И., Князев С.П., Бекенев В.А., Ромащенко А.Г. Встречаемость эндогенных ретровирусов различных типов в популяциях домашних и диких свиней. // Материалы сибирского международного ветеринарного конгресса

«Актуальные вопросы ветеринарной медицины». 3-4 марта 2005 г. Новосибирск. Россия. С. 114-115.

7. Князев С.П., Никитин C.B., Кириченко A.B., Николаев А.Г., Волох

A.M., Савина М.А., Данильченко Н.В., Айтназаров Р.Б.. Ермолаев В.И., Юдина О.П. Дифференциация диких и домашних свиней по аллотипам белков сыворотки крови // С.-х. биология. 2005. № 6. С. 100-105.

8. Айтназаров Р.Б., Ермолаев В.И., Никитин C.B., Савина М.А., Кобзев

B.Ф., Князев С.П., Гончаренко Г.М., Бекенев В.А., Юдин Н.С. Ассоциации эндогенных ретровирусов разных типов с генетическими маркерами в популяциях домашних и диких свиней // Доклады Россельхозакадемии. 2006. № 4. (в печати).

9. Никитин C.B., Князев С. П., Николаев А.Г., Волох A.M., Кириченко A.B., Савина М.А., Ермолаев В.И., Юдина О.П., Бекенёв В.А., Айтназаров Р.Б. Разнообразие популяций диких и домашних свиней по комплексу аллотипов сыворотки крови // Генетика. 2006. № 3. Г. 42. С 403-413. (Nikitin S.V., Knyazev S.P., Nikolaev A.G., Voloch A.M., Kirichenko A.V., Savina M.A., Yermolaev V.l., Yudina O.P., Bekenev V.A., Aytnazarov R.B. Diversity of wild and domestic pig populations estimated by a set of serum allotypes // Russian Journal of Genetics. 2006. V. 42. N 3. P 317-326).

10. Юдин H.C., Васильева Л.А., Нефедова M.B., Потапова Т.А., Найкова Т.М., Кузнецова Т.Н, Куликов И.В., Максимов В.Н., Ишатьева Е.В., Ощепков Д.Ю., Айтназаров Р.Б., Никитин C.B., Ермолаев В.И., Кобзев В.Ф., Ромащенко А.Г. Характеристика генофондов Российских пород крупного рогатого скота и свиней по полиморфизмам генов врожденной резистентности к инфекционным заболеванием // Отчетная конференция «Динамика генофондов растений, животных и человека». Москва. 2005. С. 99-101.

11. Никитин C.B., Юдин H С., Айтназаров Р.Б., Ермолаев В.И., Кириченко A.B., Князев С.П. Кластеризация популяций Sus scrofa на основании частот носителей эндогенных ретровирусов (PERV) // Отчетная сессия института цитологии и генетики СО РАН. Новосибирск. 1-10 февраля. 2006. С. 16-17.

Подписано к печати 30.06.2006 г.

Формат бумаги 60 х 90'Лб. Печ. л. 1. Уч. изд. л. 0,7.

Тираж 100 экз. Заказ 76.

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН 630090, Новосибирск, пр.ак. Лаврентьева, 10.

aooG А

Ц73 10

t i

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Айтназаров, Руслан Бейшеналиевич

Список сокращений.

Введение

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Происхождение и эволюция домашних свиней.

1.1.1. Систематика свиней.

1.1. 2. Дикий кабан.

1.1. 3. Домашние свиньи.

1. 2. Исследованные в работе популяции домашних свиней.

1. 2.1. Из истории создания отечественных мини-свиней.

1. 3. Использование иммуногенетических показателей крови в качестве генетических маркеров.

1. 3.1. Иммуногенетические системы сывороточных аллотипов свиньи.

1. 3. 2. Общие сведения о строении, функции, классах и биосинтезе липопротеинов сыворотки крови.

1. 3. 3. Структура и функции а-макроглобулинов.

1. 3. 4. Иммуногенетическая система аллотипов сывороточных иммуноглобулинов.

1.4. Картирование генома свиньи.

1. 4.1. Генетическая карта свиньи.

1. 5. Ретровирусы. Общая характеристика ретровирусов.

1. 5.1. Эндогенные ретровирусы свиней (PERV) и проблемы ксенотрансплантации.

1. 5. 2. Молекулярная характеристика PERV.

1. 5. 3. Филогенетический анализ PERV.

1. 5. 4. Разработка диагностических методов для контроля за экспрессией и передачей PERV.

1. 5. 5. Экспрессия и выделение PERV клетками свиньи.

1. 5. 6. Тропизм PERV к клеткам человека.

1. 5. 7. Ретроспективные исследования на больных, при лечении которых использовали биологический трансплантационный материал от свиньи.

1. 5. 8. Использование некоторых видов мелких животных в качестве биологической модели.

1. 5. 9. Использование приматов в качестве модели.

1. 5.10. Патогенный потенциал PERV.

1. 5.11. Данные о картировании и локализации PERV.

Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Материалы исследований

2.1.1. Характеристика исследуемых животных.

2.1. 2. Получение и хранение биологического материала.

2.1. 3. Характеристика аллоантисывороток.

2.2. Методы исследований

2. 2.1. Выделение ДНК.

2. 2. 2. Праймеры.

2. 2. 3. ПЦР-анализ./.

2. 2. 4. Определение аллотипов сывороточных белков.

2.3. Статистическая обработка результатов.

2. 4. Компьютерные базы данных.

Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Генотипирование PERV разных популяций домашних свиней и диких кабанов.

3.1.1. Наличие PERV разных типов в популяциях домашних свиней и диких кабанов.

3.1. 2. Влияние генотипа и среды на частоту носителей различных типов PERV у диких кабанов и домашних свиней

3.1. 3. Попарное сравнение выборок по частотам носителей различных типов PERV.

3.1. 4. Отцовский и материнский эффект на частоту PERV у потомков.

3. 2. Иммуногенетическое изучение полиморфизма сывороточных белков у домашних свиней и диких кабанов.

3.2.1. Иммуногенетический анализ среднеазиатского дикого кабана.

3. 3. Изучение ассоциаций различных типов PERV с аллотипами сыворотки крови и полом животных в популяциях домашних свиней и диких кабанов.

3. 4. Изучение ассоциаций между наличием различных типов

PERV в геномах домашних свиней и диких кабанов.

Глава IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

4.1. PERV разных типов в популяциях домашних свиней и диких кабанов.

4. 2. Разнообразие популяций диких и домашних свиней по комплексу аллотипов сыворотки крови.

4.3. Ассоциации PERV разных типов с генетическими маркерами в популяциях домашних и диких свиней.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетический анализ эндогенных ретровирусов у некоторых пород свиней и диких кабанов"

Актуальность проблемы

Ретровирусы - вирусы с необычным способом репликации генетического материала. Для цикла репродукции этого большого семейства вирусов характерен обратный поток генетической информации: вместо обычной транскрипции ДНК в РНК, как это происходит в клетке, их геномная РНК транскрибируется в ДНК. Эта особенность репродукции ретровирусов отражена в названии: «ретро», что значит «обратный». Следующая за обратной транскрипцией стадия интеграции ДНК-копии в геном хозяина необходима для размножения нового поколения ретровируса (Temin, Mizutani, 1970). В геноме человека выявлены многочисленные повторяющиеся элементы, которые напоминают интегрированную форму инфекционных ретровирусов, которые получили название эндогенных ретровирусов человека. Предполагается, что эндогенные ретровирусы являются латентной «молчащей» формой экзогенных вирусов. В то же время эндогенные ретровирусы способны активироваться и продуцировать инфекционные частицы, индуцируя болезнь (Petropoulos, 1997; Vobis et al., 2003). Члены семейства ретровирусов вызывают ряд тяжелых заболеваний животных и человека. К наиболее изученным ретровирусам относятся вирусы лейкемии птиц, мышей, кошек и приматов, а также вирусы иммунодефицита кошек, обезьян и человека (Coffin, 1996).

В последнее время, все большую остроту приобретает проблема исследования взаимодействия генома ретровируса с геномом человека. Развитие современной науки предполагает использование ретровирусов в качестве молекулярного инструмента для генотерапии, адресной доставки биорегуляторов, создание вакцин нового поколения. Изучение ретровирусов оказало больше влияние на разные области биологии и медицины, на молекулярную генетику, на изучение контроля за ростом клетки и канцерогенеза, а так же на биотехнологию (Temin, 1992). Способность ретровирусных векторов осуществлять перенос генов только в делящиеся клетки была использована при развитии методов генотерапии аутоиммунных заболеваний, таких как ревматоидный артрит и рассеянный склероз (Кристофер, 2001). Ретровирусные системы переноса и экспрессии генов являются удобным и эффективным инструментом исследования во многих фундаментальных областях биологической науки. Уже сейчас они с успехом применяются для развития совершенно новых подходов к лечению наследственных, онкологических и некоторых вирусных заболеваний, составляющих основу нового направления биомедицины - генной терапии (Прасолов, Иванов, 2000).

Присутствие в геномах млекопитающих множества эндогенных ретровирусов ставит серьезные проблемы перед медициной. Одним из возможных негативных последствий искусственного ретровирусного заражения может быть нарушение взаимоотношений организма с эндогенными ретровирусами, неконтролируемая активация последних или возникновение патогенных рекомбинантов. Вопросы безопасности, связанные с наличием эндогенных реторвирусов, приобретают особую остроту для ксенотрансплантации, при которой органы животного пересаживают человеку (Patience et al., 1997; Кристофер, 2001; Lee et al., 2002; Айтназаров, 2003; Scobie et al, 2004; Niebert, Tonjes, 2005).

Из-за дефицита донорских органов в нашей стране лишь около 30% пациентов из сниска ожидания доживают до трансплантации. В развитых странах летальные цифры укладываются примерно в 10%. В США ежегодно получают около 20 тыс. донорских органов. В России доноры обеспечивают менее 10%) необходимого количества органов для пересадки. В России развитие клинической трансплантологии сопряжено со значительными трудностями. Одной из таких трудностей является недостаточное количество трансплантационных центров, их неравномерное расположение на территории Российской Федерации. Другая трудность - неготовность к констатации смерти человека на основании диагноза смерти мозга из-за низкой технической оснащенности реанимационных отделений интенсивной терапии, поскольку отсутствует необходимая диагностическая аппаратура. Существуют также этические проблемы, связанные с констатацией смерти человека по критериям смерти мозга.

Длительное время отсутствовало правовое регулирование в данной области, в том числе в отношении заготовки донорских органов. Ее правовая база была заложена в России лишь в 1992 г. с принятием Закона Российской Федерации "О трансплантации органов и (или) тканей человека" от 22.12.1992 г.

Существуют три основных пути решения проблемы нехватки органов для пересадки: 1) создание качественных искусственных органов длительного действия, 2) ксенотрансплантация (пересадка человеку органов животных) и 3) клонирование органов, предназначенных для трансплантации (Шумаков и др. 1995).

Одним из преимуществ ксенотрансплантации перед аллотрансплантацией (внутривидовая пересадка органов и тканей) является возможность более детального обследования донора, так как многие инфекции передаются при гемотрансфузии и аллотрансплантации: вирусы иммунодефицита человека, гепатита В и С, герпеса, а также туберкулез; всего этого можно избежать при использовании ксеногенных тканей (Weiss, 1999). При проведении манипуляций с органами и тканями животных необходимо тщательное обследование животного-донора, чтобы избежать риска возникновения вирусной инфекции. Более того, при ксенотрансплантации искусственно создаются условия, которые не могли возникнуть в природе. Поэтому нельзя исключить вероятности рекомбинации близкородственных вирусов человека и животного и адаптации к организму человека вирусов, репродуцирующихся в организме животных (Fox, 1997; Brown et al., 1998). Развитие этого направления медицины ставит новые задачи перед селекционерами, биотехнологами и ветеринарами.

Ксенотрансплантация органов от свиньи человеку связана с потенциальной опасностью заражения реципиента эндогенными ретровирусами (porcine endogenous retrovirus PERV), которые являются составной частью генома свиньи. Показано, что PERV способны инфицировать клетки человека in vitro (Martin et al., 1998). Внедренный эндогенный ретровирус навсегда остается в составе ДНК клеток хозяина и превращается в новый генетический элемент его генома (Wilson et al., 2000; Wood et al., 2004). Были выделены три типа ретровирусов PERV (А, В и С), которые различаются по последовательности нуклеотидов гена env и своим биологическим свойствам (Takeuchi et al., 1998).

Находясь в латентной форме, ретровирусы, тем не менее, с некой вероятностью, могут вызывать заболевания у человека, в том числе, онкологические, если они активируются при пересадке органа от животного-донора (Шумаков, 1995). Кроме того, существует опасность активации эндогенных ретровирусов животного в клетках человека и появление нового типа вируса за счет рекомбинаций эндогенных ретровирусов животного и человека (Свердлов, 1999). Эндогенный ретровирус свиней, передающийся при межвидовой трансплантации, может являться причиной эпидемий, подобных эпидемии СПИДа.

Свинья является главным претендентом на роль донора органов при ксенотрансплантации, так как её органы более всего сходны с человеческими по размеру и физиологическим параметрам. Для таких целей в настоящее время за рубежом созданы и используются специальные породы лабораторных свиней (геттингентские мини-свиньи, юкатанские мини-свиниьи и т.д.).

В Институте цитологии и генетики СО РАН создано и широко использовалось для многих медико-биологических исследований стадо первых отечественных лабораторных миниатюрных свиней «Минисибс» (Тихонов, 2000).

Сибирские мини-свиньи апробированы в ряде медицинских и биологических институтов Сибири для моделирования атеросклероза, механизма взаимодействия гетерогенных тканей в плаценте, патогенеза язвы желудка и двенадцатиперстной кишки, влияния стресса при трансплантации кожи и сосудов (Тихонов, 1990; Горелов и др., 2001).

Впервые сердечные клапаны мини-свиней для пересадки человеку были использованы в Кемеровском кардиологическом центре (Тихонов, 2000; Горелов и др., 2001). Несколько лет успешного использования клапанов свиных сердец в качестве биопротезов показали, что в отличие от зарубежных аналогов, они гораздо дешевле и более надежны. В Институте патологии кровообращения им. Мешалкина МЗ РФ проводятся исследования по трансплантации сердца, клапанов, кровеносных сосудов и других тканей у мини-свиней. В Новосибирском научно-исследовательском институте травматологии и ортопедии МЗ РФ на мини-свиньях ведутся исследования по коррекции сколиоза.

Перечисленные проблемы обусловливают актуальность изучения эндогенных ретровирусов PERV типов А, В и С у лабораторных мини-свиней, созданных для медико-биологических исследований в ИЦиГ СО РАН, а также у некоторых родоначальных пород домашних свиней и диких кабанов.

Цель и задачи исследования

Целью исследования является выявление эндогенных ретровирусов типов А, В и С в геномах лабораторных мини-свиней и их некоторых родоначальных пород, а также изучение факторов, влияющих на частоту встречаемости PERV. В задачи исследования входило:

Научная новизна и практическая ценность

Впервые изучена порода лабораторных сибирских мини-свиней на наличие эндогенных ретровирусов PERV типов А, В, С. Показано, что эндогенные ретровирусы типа А, В и С широко распространены у лабораторных миниатюрных свиней. Обогащенность геномов животных этой породы ретровирусами, вероятно, обусловлена внесением их от пород-основателей. В то же время среди пород-основателей (диких и домашних свиней) имеются животные, свободные от некоторых типов эндогенных ретровирусов. Поскольку существует опасность активации эндогенных ретровирусов свиней при ксенотрансплантации, необходимо учитывать, что частота встречаемости эндогенных ретровирусов в некоторых выборках домашних и диких свиней существенна. На наличие эндогенных ретровирусов разных типов в популяциях свиней оказывает влияние не только порода (подвид), но и условия содержания (обитания). При селекции и разведении свиней для медико-биологических исследований необходимо строгое соблюдение зоогигиенических норм. В ходе работы выявлены ассоциации эндогенных ретровирусов свиней с разными генетическими маркерами и полом животного, которые могут быть использованы в дальнейших научных исследованиях и при селекции. Положения, выносимые на защиту

1. Изучение влияния генотипа (породы и подвиды животных) на уровень встречаемости у свиней эндогенных ретровирусов PERV показало статистически значимые различия частот носителей различных типов ретровируса (А, В и С) как внутри популяций одной породы, так и между различными породами, а также у диких кабанов Южной Украины и Средней Азии.

3. Выявлены ассоциации ретровируса PERV типа А с локусами эритроцитарных антигенов ЕЛЕ, ЕАК, липопротеином LPB и полом животных, а также ассоциации ретровируса PERV типа В с локусами аМ, ЕАЕ и LPB у разных подвидов диких кабанов и домашних пород свиней. Показана ассоциация между PERV типов А и В у некоторых пород свиней.

Материалы исследования были представлены на XII Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Ялта-Гурзуф, 2004); на международном конгрессе "Progress in Fundamental and Applied Sciences for Human Health" (Ukraine, 2004); на международной научно-практической конференции молодых ученых СО РАСХН «Новейшие направления развития аграрной науки в работах молодых учёных» (Новосибирск, 2004); на Сибирском международном ветеринарном конгрессе «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2005); на отчетной конференции «Динамика генофондов растений, животных и человека» (Москва, 2005); на отчетной сессии ИЦиГ СО РАН (Новосибирск, 2006). Публикации

По теме диссертации опубликовано 11 работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация содержит 158 страницы машинописного текста, иллюстрирована 23 таблицами и 17 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, списка литературы. Указатель литературы содержит 256 работ, из которых 159 зарубежных авторов. Благодарности

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Айтназаров, Руслан Бейшеналиевич

128 Выводы:

1. Встречаемость эндогенных ретровирусов всех трех типов у домашних свиней как внутри породы, так и между породами значительно различается. Показано достоверное влияние генотипа на встречаемость различных типов эндогенного ретровируса (А, В и С) у домашних пород свиней.

2. Выявлены статистически значимые различия встречаемости всех трех типов ретровирусов между домашними и дикими свиньями (/><0.001 для всех типов env PERV).

3. Впервые выявлено достоверное (Р<0.001) влияние среды (условия содержания и обитания) на встречаемость всех типов PERV у диких и домашних свиней. Данный феномен подтверждают результаты кластеризации методом двух главных компонент.

5. Установлены ассоциации ретровируса PERV А с локусами эритроцитарных антигенов ЕЛЕ (Р<0,001.), ЕАК (Р<0,05), липопротеина LP В (Р<0,01) и полом животных, а также ретровируса PERV В с локусами аМ{Р <0,05), ЕАЕ (Р<0,05) и LPB (Р<0,05), причем у разных подвидов диких кабанов и домашних пород свиней эти ассоциации могут присутствовать либо отсутствовать. Показана ассоциация между частотой встречаемости PERV типов А и В (Р <0,01) у некоторых пород свиней и диких кабанов.

Практические рекомендации

Поскольку существует опасность активации эндогенных ретровирусов свиней при ксенотрансплантации, а также способность к рекомбинации с эндогенными ретровирусами человека, в качестве доноров необходимо выбирать особей, свободных от PERV с учетом того факта, что частота носителей эндогенных ретровирусов трех типов (PERV А, В, С) в изученных выборках домашних свиней очень высока.

Выявленные ассоциации эндогенных ретровирусов свиней с рядом генетических маркеров и полом животного могут быть использованы в научных исследованиях и при селекции свиней, свободных от PERV. Такие животные должны гарантировать снижение риска инфекции PERV у реципиентов ксенотрансплантантов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Айтназаров, Руслан Бейшеналиевич, Новосибирск

1. Айтназаров Р.Б. Проблемы использования внутренних органов сельскохозяйственных животных // Био (журнал для специалистов птицеводческих и животноводческих хозяйств). Екатеринбург. 2003. № 12. (39). С. 2-4.

2. Баранов О. К. Эволюционная иммуногенетика сывороточных белков животных // Новосибирск: Наука. 1981. 224 стр.

3. Баранов О. К., Савина М. А. Иммуногенетика липопротеинов.-Новосибирск: Наука. 1988. 126 стр.

4. Беляев Д.К, Баранов О.К, Савина М.А. и др. Идентификация пяти аллотипов сывороточных а2-липопротейинов эстераз американской норки (Mustela vison) // Генетика. 1974. Т. 10. № 1. С. 62-70.

5. Бекенев В.А. Селекция свиней. Новосибирск. 1997. 183 стр.

6. Боголюбский С.Н. Происхождение и преобразование домашних животных. М.: Сов. Наука. 1959. 592 стр.

7. Ю.Борисенко JL Г. и Рындич А. Б. Эндогенные ретровирусы птиц: структура, экспрессия и эволюция // Биополимери и клетки. 2002. Т. 18. № 1.С. 37-47.

8. П.Вавилов Н.И. Закон гомологических рядов в наследственной изменчивости // Труды III Всерос. съезда по селекции и семеноводству. Саратов. 1920. С. 41-56.

9. Вейр Б. Анализ генетических данных. Москва: Мир, 1995. 400 с.

10. Веремеенко К.Н, Семенюта О.С, Кизим А.И, Лобунец К.А. а-2-Макроглобулин: структура, свойства и физиологическая роль // Укр. биох. журнал. 1983. Т. 55. № 2. С. 218-233.

11. Волкова О.Ю, Фомичева И.И, Белоусов Е.С. и др. Иммуногенетическое исследование легких (L) цепей иммуноглобулинов норки // Труды V Всесоюзной межуниверстетской конференции «Биология клетки». Тбилиси. 1987. Ч. 2. С. 795-797.

12. Горелов И.Г. Цитоиммуногенетическое изучение систем групп крови А и Н, связанных со стресс-синдромом свиней // Тез. Докл. I Всесоюз. конф. По цитогентике сельскохозяйственных животных. Москва. 1985. С. 16-17.

13. Горелов И.Г, Савина М.А. Генетика и геногеография некоторых аллотипов у диких свиней // Экологическая генетика растений, животных, человека: Тез. IV Всесоюз. науч. конф. Кишинев. 20-21 ноября. 1991. Кишинев: Штиинца. 1991. 452 стр.

14. Горелов И.Г. Биология сибирского кабана. Новосибирске: Ротапринт ИЦиГ СО РАН. 1994. 72 стр.

15. Горелов И. Г., Никитин С. В., Орлова Г. В., Хижняк А. А., Савина М.

16. A., Ермолаев В. И. Взаимодействие полиморфных систем в популяции свиней семиреченской породы // Генетика. 2000 . Т. 36. № 5. С. 688692.

17. Горелов И.Г., Савина М.А., Ермолаев В.И. Сибирские миниатюрные свиньи новая биомодель для медико-биологических исследований // Сиб. вестн. с.-х. науки. 2001. № 3-4. С. 81-87.

18. Горелов И.Г., Савина М.А., Новиков А.А., Юдина О.Ю., Ермолаев

19. B.И. Иммуноцитогенетика и биоразнообразие домашних и диких свиней // Аграрная Россия (научно-производственный журнал). Москва. 2002.- № 5,- С. 33-38.

20. Горин В.Т., Еськов П.А., Тихонов И.Т. и др. Новая специализированная мясная порода свиней (СМ-1) и основные направления ее разведения // РАСХН. М.: Колос. 1993. 104 стр.

21. Громова В.И. Подотряд SUIFORMES. Свинообразные // Основы палеонтологии. Справочник для палеонтологов и геологов СССР. Млекопитающие. Гос. научно-техническое изд-во литературы по геологии и охране недр. 1.962. С. 343-356.

22. Гудков А.В., Тихоненко А.Т. Ретровирусоподобные элементы и геном человека // Итоги науки и техники (вирусология). 1988. Т. 16. С. 5- 45.

23. Гудилин И.И. Выведение, совершенствование, использование кемеровской и скороспелой мясной породы свиней в Сибири. Дис. . д-ра с.-х. наук в виде науч. докл. Новосибирск. 1995. 37стр.

24. Гудилин И.И. Методы создания и совершенствования пород свиней в Сибири // Проблемы селекции сельскохозяйственных животных. Новосибирск: Наука. СП РАН, 1997. С. 172-188.

25. Данилкин А.А. Свиные (Suidae) // Серия «Млекопитающие России и сопредельных регионов» М.: Геос. 2002. 309 стр.

26. Дарвин Ч., 1951. Изменения домашних животных и культурных растений. М.-Л.: Изд-во АН СССР. Т. 4. 320 стр.

27. Ермолаев В.И. Иммуногенетическое изучение Lpm системы аллотипов американской норки // Дисс. канд. биол. наук. Новосибирск: ИЦиГ СО АН СССР. 1984. 178 стр.

28. Ермолаев В.И., Мирцхулова Э.Г., Митичашвили Р.С. и др. О результатах международного сравнительного испытания реагентов к аллотипам сывороточных белков свиньи, проведенного в 1987-1988 годах //Генетика. 1990. Т. 26. № 5. С. 956-957.

29. Ермолаев В.И., Мирцхулова Э.Г., Савина М.А., Горелов И.Г., Митичашвили Р.С., Баранов O.K. О гомологии Lpm-системы алоотипов американской норки и Gp-системы аллотипов домашней свиньи // Генетика. 1991. Т. 27. 2. С. 304-315.

30. Ермолаев В.И. Иммуногенетическое изучение семейства альфа-макроглобулинов американской норки (Mustek vison) и некоторых других видов млекопитающих // Дисс. доктор, биол. наук. Новосибирск: ИЦиГ СО РАН. 1997. 281 стр.

31. Животовский JI.A. Популяционная биометрия. Москва: Наука. 1991. 272 стр.

32. Заболотная А.А. Пути совершенствования продуктивности свиней сибирских типов крупной белой породы: Авторефер. дис. канд. с.-х. наук. СибНИПТИЖ СО РАСХН. Новосибирск. 2004. 22 стр.

33. Закон РФ «О трансплантации органов и (или) тканей человека» от 22.12.1992 г. // Ведомости Съезда народных депутатов РФ и Верховного Совета РФ. 1993. № 2. 62. стр.

34. Кольчик О.А. и др. Миниатюрная свинья в медико-биологических исследованиях / В кн.: Лабораторные животные в медицинских исследованиях. -М.: АМН СССР. 1974. С. 188-190.

35. Князев С. П. Анализ процесса отдаленной гибридизации свиней по краниологическим параметрам и аллотипам сыворотки крови // Дисс. канд. биол. наук. НСХИ. Новосибирск. 1982. 182 стр.

36. Князев С.П. Анализ процесса отдаленной гибридизации свиней по краниологическим параметрам и аллотипам сыворотки крови. Дисс. канд. биол. наук Новосибирск. 1983. 182 стр.

37. Князев С.П. Тихонов В.Н., Сузуки С., Куросава И., Танака К. Генетические особенности диких и домашних свиней (Suidae) Евразии по сывороточным полиморфным системам // Зоологический журнал. 1985. Т. 64. №10. С. 1563-1568.

38. Князев С. П., Никитин С. В., Горелов И. Г., Ермолаев В. И., Орлова Г. В., Савина М. А., Жучаев К. В., Папшев С. П., Кабаненко Е. В. Ассоциации генетических маркеров в двух родственных породах свиней // Генетика. 1999. Т. 35. № 5. С. 674-680.

39. Князев С.П. и Никитин С.В. Филогенез и Таксономические взаимоотношения внутривидовой форм свиней Sus scrofa (Suidae) // Зоол. журн. 2004. Т.83. №1. С. 105-118.

40. Князев С.П., Никитин С.В., Савина М.А., Ермолаев В.И., Горелов И.Г., Юдина О.П., Данильченко Н.В., Фадеева Н.С. Дрейф генов как фактор дифференциации внутрипородных популяций свиней // Доклады Росс. Акад. сельхоз. наук 2004. № 2. С. 35-38.

41. Кристофер П. Поражение нервной системы ретровирусами: патологическая реакция хозяина или нейровирулентность какрезультат действия вирусных генов? // Международный Медицинский Журнал. 2001. № 6. С. 534-539.

42. Ладан П.Е., Козловский В.Г., Степанов В.И. Свиноводство. М: «Колос» 1978. С. 60-100.

43. Ладан П.Е. Межвидовой гибридизация в свиноводстве. Тр. Новочеркас. Зоовет. ин-та. 1960. вып. 12.

44. Лакин Г.Ф. 1990. Биометрия. Москва: Наука. 352 стр.

45. Лебедев Ю.Б. Эндогенные ретровирусы: Возможная роль в функционировании клеток человека // Молекулярная биология. 2000. Т. 34. № 4. С. 635-645.

46. Лебедев Ю.Б. Эндогенные ретровирусы человека: структурно-эволюционный анализ. Авторефер. дисс. д-ра. биол. наук. Москва: Инс. биорг. химии им. акад. М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН. 2004. 49 стр.

47. Майнхарт X. Моя жизнь среди кабанов. Москва: Лесная промышленность. 1983. 128 стр.

48. Мальцева Н.А., Баранов В.И., Олийник Е.И., Животов А.А. Лейкоз крупного рогатого скота-пути решения проблемы // Электронный журнал «Исследовано в России» (http://zhurnal.ape.relarn.ru/articles /2000/102.pdf).

49. Мирцхулова Э.Г. Сравнительное исследование иммуногенетических систем альфа-макроглобулинов свиньи и норки. Дис. канд. биол. наук. Новосибирск: ИЦиГ СО АН СССР. 1989. 140 стр.

50. Митичашвили Р.С., Кочлашвили Т.И., Мирцхулова Э.Г. и др. Исследование аллотипов сывороточных белков свиней // Генетика. 1988. Т. 24. №9. С. 1665-1670.

51. Новицкий Б. Поведение селькохозяственных животных. Москва: «Колос». 1981. 185 стр.

52. Овсянников А.И. Происхождение и эволюция домашних свиней // Ред. Доброхотов Г.Н. Свиноводство. М.: Сельхозгиз. 1974. С. 72-83.

53. Орлянкин Б.Г. Классификация и номенклатура РНК-содержащих вирусов позвоночных // С.-х. биол. 1996. № 2. С. 3-24.

54. Петухов B.JL, Тихонов В.Н., Желтиков А.И. и др. Генофонд скороспелой мясной породы свиней. Новосибирск: Изд-во. «Юпитер». 2005. 631 стр.

55. Плохинский Н.А. Дисперсионный анализ. Новосибирск: из-во. СО АН СССР. 1960. 114 стр.

56. Познахирев П.Р. Минисвиньи, как объект биомедицинских экспериментов на животных. М.: Изд-во АМН СССР. 1979. С. 32-40.

57. Понд УДж., Хаупт К.А. Биология свиньи. М.: Колос. 1983. 334 стр.

58. Прасолов B.C., Иванов Д.С. Ретровирусные векторы в генной терапии // Вопросы медицинской химии. 2000. № 3. С. 207-225.

59. Свердлов Е.Д. Ретровирусы регуляторы экспрессии генов в геноме человека как возможные факторы его эволюции // Биоорг. хим. 1999. Т. 25. №11. С. 821-827.

60. Семак М. С. Аллотипы сывороточных белков крови свиней и их использование в селекции // Автореферат канд. биол. наук. Лесные Поляны. 1996. 21 стр.

61. Сердюк Г.Н. Иммуногенетические маркеры и их использование для повышения эффективности селекции свиней: Автореферат диссертации докт. биол. наук. Л: ВНИИГРЖ. 2000. 58 стр.

62. Сердюк Г.Н. Иммуногенетика свиней: теория и практика. Санкт-Петербург. 2002. 390 стр.

63. Смит К, Клко С, Кантор Ч. Пульс-электрофорез и методы работы с большими молекулами ДНК // Анализ генома. Под ред. К. Дейвиса. М.:Мир. 1990. С. 58-94.

64. Слудский А.А. Кабан: Экология и хозяственное значение. Алма-Ата: Изд-во АН Каз. ССР. 1956.

65. Соколов В.Е. Систематика млекопитающих. М.: Высш. школа. 1979. 528 стр.

66. Соколов И.И, 1959. Фауна СССР. Млекопитающие. Копытные звери. М.-Л.: Изд-во АН СССР. Т. 1. вып. 3. С. 87-88.

67. Сухова Н. О, Бурлак 3. К, Дмитриева Г. Л. Использование иммуногенетического анализа в племенном свиноводстве // Новосибирск: ВАСХНИЛ. 1981. 58 стр.

68. Тихонов В.Н. Использование групп крови для иммуногенетического контроля при племенной работе // Животноводство. 1963. № 7. С. 4045.

69. Тихонов В.Н. Генетические системы групп крови животных. Новосибирск: Наука. 1965. 116 стр.

70. Тихонов В.Н. Иммуногенетический анализ полиморфизма по группам крови в связи с некоторыми вопросами селекции: Автореф. дис. д-ра биол. наук. Новосибирск: Со АН СССР. 1966. 62 стр.

71. Тихонов В.Н. Использование групп крови при селекции животных. М.: Колос. 1967. 391 стр.

72. Тихонов В.Н. Мини-свиньи новый вид лабораторных животных // Свиноводство. М. Колос. 1977. С. 38-39.

73. Тихонов В.Н. Генетика мини-свиней. Новосибирск. 1990. 208 стр.

74. Тихонов В.Н. Иммуногенетика и биохимический полиморфизм домашних и диких свиней. Новосибирск: «Наука». Сибирское отделение. 1991. 304 стр.

75. Тихонов В.Н. Формирование генофонда миниатюрных сибирских свиней «Минисибс» и их использование в медико-генетических исследованиях // Генетика. 2000. Т. 36. № 6. С. 829-836.

76. Тихонов В.Н. Микроэволюционный мониторинг породообразователь-ного процесса у сельскохозяйственных животных // С.-х. биол. 2002. № 6. С. 8-22.

77. Тихонов В.Н. Формирование генофонда при микроэволюции sus scrofa и роль гетерозиготности в процессе породообразования // Генетика. 2005. Т. 41. №4. С. 566-576.

78. Тихонов В.Н., Бобович В.Е. Создание минисибс для ветеринарных, селекционно-генетических и медицинских исследований // Ветеринария Сибири. 2002. № 7/8. С. 3-7.

79. Тихонов В.Н., Горелов И.Г., Бобович В.Е. Иммуногенетические особенности некоторых форм диких свиней Европы, Азии, Африки и Америки. Морфология и генетика кабана. М.: Наука. 1985. 279 стр.

80. Тихонов В.Н., Никитин С.В. Картирование локуса системы G групп крови на идентифицированной хромосоме домашних и диких свиней // Генетика. 1983. Т. 272. № 1. С. 214-216.

81. Тихонов В.Н., Никитин С.В., Горелов И.Г., Трошина А.И., Бобович В.Е., Астахова Н.М. Картирование локусов систем G и Н групп крови на хромосоме 15 диких и домашних свиней // Генетика. 1984. Т. 20. № 4. С. 662-670.

82. Тихонов В.Н., Трошин А.И., Горелов И.Г., Попов В.И., Никитин С.В., Бобович В.Е., Травушкин В.А., Князев С.П. Создание ландрас-кабаньих гибридов для промышленных свинокомплексов. Новосибирск. 1981. 24 стр.

83. Топиха В., Герасименко В., Волков А. и др. Иммуногенетические параметры свиней пород дюрок украинской селекции и крупной белой // Свиноводство. 2003. № 1. С. 6-8.

84. Трошина А.И., Тихонов В.Н. Цитогенетическпе особенности некоторых диких свиней Европы, Азии, Африки и Америки // Морфология и генетика кабана. М.: Наука. 1985. С. 17-28.

85. Филиппенко Ю.А. Краниологические исследования диких видов свиньи // Тр. Лаборатории генетики АН СССР. 1933. Вып. 1. С. 157184.

86. Флайшман Д.Б., Дейви Д.М. Иммуноглобулины: аллотипы и идиотипы //Иммунология. М.: 1982. Т. 1. С. 313-336.

87. Фомичева И.И., Волкова О.Ю., Мечетина Л.М., Наякшин A.M. Иммуноглобулины американской норки: генетика, экспрессия, эволюция. Н.: Наука. 1992. 155 стр.

88. Цветков B.C. Иммуноэлектрофорез и препаративный электрофорез в агаре // В кн.: Иммунохимических анализ. Москва: Медицина. 1968. С. 120-142.

89. Шумаков В.И., Блюмкин В.Н., Сколецкий Н.Н. и соавт. Трансплантация островковых клеток поджелудочной железы. М.: Изд-во «Канон». 1995. 383 стр.

90. Шумаков В.И. Трансплантология. М.: Изд-во «Канон». 1995. С.17-20.

91. Юдина О.П. Комплексная оценка генетического статуса и продуктивные качества свиней на индивидуальном и популяционном уровнях: Автореферат диссертации канд. биол. наук. Москва. Лесные поляны: ВНИИплем. 2002. 21 стр.

92. Яник А., Рыхлик Т., Ожеховска Б., Камычек М., Парыс А. Генетическое расстояние между породами свиней, разводимых в Польше // Roczniki Navkowe Zootechniki. Krakow. 1996. Т. 23. Z. 3. С. 916.

93. Akiyoshi D.E., Denaro M., Zhu H., Greenstein J.L., Banerjee P., Fishman J.A. Identification of a full-length cDNA for an endogenous retrovirus of miniature swine // J. Virol. 1998. V. 72. № 5. P. 4503-7.

94. Alexander L.J, Smith T.P, Beattie C.W, Broom M.F. Construction and characterization of a large insert porcine YAC library // Mamm. Genome. 1997. V. 8.№ 1.Р. 50-51.

95. Alomran A, Shenton B, Donnely P, Francis D. Isolation and characterization of suppressive peptide from a2M-protease interaction // Electrophof s 83: Adv. Meth. Bioch. and Glin. Appl. Proc. Int. Conf. 8. 1984. P. 387-390.

96. Archibald A.L, Haley C.S, Brown J.F, Couperwhite S, McQueen H.A, Nicholson D, Coppieters W, Van de Weghe A, Stratil A, Wintero A.K, et al. The PiGMaP consortium linkage map of the pig (Sus scrofa) // Mamm. Genome. 1995. V. 6. №3. P. 157-175.

97. Armstrong J.A, Porterfield J.S, De Madrid A.T. C-type virus particles in pig kidney cell lines // J. Gen. Virol. 1971. V.10. №2. P. 195198.

98. Auchincloss H. Jr., Sachs D.H. Xenogeneic transplantation // Annu. Rev. Immunol. 1998. V. 16. P. 433-470.

99. Belyaev D.K, Pomicheva I.I, Taranin A.V, Baranov O.K. Genetic polymorphism of IgG in mink. I. Identification of 8 allotypes // Exp. Clin. Immunogen. 1986. V.3. №1. P.10-19.

100. Birmingham K. FDA subcommittee finds no evidence of PERV transmission //Nat. Med. 1999. V. 5. №8. P. 855.

101. Blusch J.H, Roos C, Nitschko H. A polymerase chain reaction-based protocol for the detection of transmission of pig endogenous retroviruses in pig to human xenotransplantation // Transplantation. 2000. V. 69. №10. P. 2167-2172.

102. Blusch J.H., Patience С., Takeuchi Y., Templin C., Roos C., Von Der Helm K., Steinhoff G., Martin U. Infection of nonhuman primate cells by pig endogenous retrovirus // J. Virol. 2000. V. 74. №16. P. 7687-7690.

103. Blusch J.H., Patience C., Martin U. Pig endogenous retroviruses and xenotransplantation // Xenotransplantation. 2002. V. 9. №4. P. 242-251.

104. Bokhout B.A., Van Asten-Noordijk J.J.L., Stok W. Porcine IgG. Isolation of two subclasses and anti-IgG-class and subclassspecific antibodies // Mol. Immunol. 1986. V. 23. №6. P. 675-683.

105. Bosch S., Arnauld C., Jestin A. Study of full-length porcine endogenous retrovirus genomes with envelope gene polymorphism in a specific-pathogen-free Large White swine herd // J. Virol. 2000. V. 74. №18. P. 8575-8581.

106. Bouillant A.M., Greig A.S. Type С virus production by a continuous line of pig oviduct cells (PFT) // J. Gen. Virol. 1975. V. 27. №2. P. 173-180.

107. Braciak T.A., Northermann W., Hudson G.O., Shiels B.R., Gehring M.R. Seguence and acut phase regulation of rat a 1-inhibitor III Messenger RNA// J. Biol. Chem. 1988. V 236. №8. P. 3999-4012.

108. Breese S.S. J.R. Virus-like particles occurring in cultures of stable pig kidney cell lines. Brief report // Arch. Gesamte Virusforsch. 1970. V. 30. №4. P. 401-404.

109. Brown J., Matthews A.L., Sandstrom P.A., Chap-man L.E. Xenotransplantation and the risk of retroviral zoonosis. // Trends Microbiol. 1998. V. 6. P. 411-415.

110. Buckley D.J., Gray J.I. Asghar A. et al. effects of dietary antioxidants and oxidized oil on membranal lipid stability and pork product quality // J. Food. Sci. 1989. V. 54. P. 1193-1197.

111. Coffin J.M. Retroviridae and their replication // In Virology. 1996. (ed. B.N. Fields et al.) Raven Press. New York. P. 1767-1848.

112. Charman H.P., Kim N., White M., Gilden R.V. Failure to detect, in human sera, antibodies cross-reactive with group-specific antigens of murine leukemia virus // J. Natl. Cancer Inst. 1974. V. 52. №5. P. 1409-1413.

113. Cornetta K., Moen R.C., Culver K., Morgan R.A., McLachlin J.R., Sturm S., Selegue J., London W., Blaese R.M., Anderson W.F. Amphotropic murine leukemia retrovirus is not an acute pathogen for primates // Hum. Gene Ther. 1990. V. 1. №1. P. 15-30.

114. Cornetta K., Morgan R.A., Gillio A., Sturm S., Baltrucki L., O'Reilly R., Anderson W.F. No retroviremia or pathology in long-term follow-up of monkeys exposed to a murine amphotropic retrovirus // Hum. Gene Ther. 1991. V. 2. №3. P. 215-219.

115. Costa C., Zhao L., Decesare S., Fodor W.L. Comparative analysis of three genetic modifications designed to inhibit human serum-mediated cytolysis // Xenotransplantation. 1999. V. 6. №1. P. 6-16.

116. Czauderna F., Fischer N., Boiler K., Kurth R., Tonjes R.R. Establishment and characterization of molecular clones of porcine endogenous retroviruses replicating on human cells // J. Virol. 2000. V. 7. №9. P. 4028-4038.

117. Delassus S., Sonigo P., Wain-Hobson S. Genetic organization of gibbon ape leukemia virus//Virology. 1989. V. 173. №1. P. 205-213.

118. Deng Y.M., Tuch B.E., Rawlinson W.D. Transmission of porcine endogenous retroviruses in severe combined immunodeficient mice xenotransplanted with fetal porcine pancreatic cells // Transplantation. 2000. V. 70. №7. P. 1010-1016.

119. Denner J. Immunosuppression by retroviruses: implications for xenotransplantation // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1998. V. 862. P. 75-86.

120. Dinsmore J.H., Manhart C., Raineri R., Jacoby D.B., Moore A. No evidence for infection of human cells with porcine endogenous retrovirus (PERV) after exposure to porcine fetal neuronal cells // Transplantation. 2000. V. 70. №9. P. 1382-1389.

121. Dorling A, Riesbeck K, Warrens A, Lechler R. Clinical xenotransplantation of solid organs // Lancet. 1997. V. 349. №9055. P. 867871.

122. Epstein H. The origin of the domestic animals of Africa. Leipzig. 1971. V. 2. P. 311-362.

123. Ericsson T, Oldmixon B, Blomberg J, Rosa M, Patience C, Andersson G. Identification of novel porcine endogenous betaretrovirus sequences in miniature swine // J. Virol. 2001. V. 75. №6. P. 2765-2770.

124. Fahrenkrug S.C, Rohrer G.A, Freking B.A, Smith T.P, Osoegawa K, Shu C.L, Catanese J.J, de Jong P.J. A porcine ВАС library with tenfold genome coverage: a resource for physical and genetic map integration // Mamm. Genome. 2001. V. 12. №6. P. 472-474.

125. Feldman S.R, Gonias S.L, Pisso S.V. Model of a2-macroglobulin structure and function // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1985. V. 82. №17. P. 5700-5704.

126. Fox J.L. FDA seeks "comfort factor" befor removing hold on porcine xenotransplantation trails //Nature Biotechnol. 1997. V. 16. P.224.

127. Francki R.I.B., Fauquet C.M., Knudson D.L. et al. Classification and nomenclature of viruses. Fifth Rep. Int.Ctte. Taxonomy Viruses. Arch. Virol. 1991. №2. suppl. p. 250.

128. Gehring M.K., Northermann W., Shiels B.R., de Bruijn M.H.L., Kan C.-C., Chain A.C., Noonan D.J., Fey G.H. Seguence of rat liver a2 -macroglobulin and acut phase control of it's messenger RNA // J. Biol. Chem. 1987. V. 262. № 1. P. 446- 454.

129. Gellin J., Brown S., Marshall Graves J.A., Rothschild M., Schook L., Womack J., Yerle M. Comparative gene mapping workshop: progress in agriculturally important animals // Mamm Genome. 2000. V. 11. №2. P. 140-144.

130. Genov P.V. A review of the cranial characteristics of the Wild Boar (Sus scrofa Linnaeus 1758) with systematic conclusions // Mammal. Rev. 1999. V. 29. №4. P. 205-238.

131. Hall P.K., Nelles L.P., Travis J., Roberts R.C. Proteolytic cleavage on a2-macroglobulin resulting in proteinase binding are different for trypsin and Staphylococcus aureus V-8 proteinase // Bioch. Biophys. Res. Commun. 1981. V. 100. №1. P. 420-425.

132. Hanger J.J., Bromham L.D., McKee J.J., O'Brien T.M., Robinson W.F. The nucleotide sequence of koala (Phascolarctos cinereus) retrovirus: a novel type С endogenous virus related to Gibbon ape leukemia virus // J. Virol. 2000. V. 74. №9. P. 4264-4272.

133. Hardjasamita, H. S. Taxonomy and phylogeny of the Suidae (Mammalia) in Indonesia // Scripta. Geol. 1987. V. 85. P. 1-68.

134. Hecht, S. J., Stedman, К. E., Carlson, J. O., DeMartini, J. C. Distribution of endogenous type В and type D sheep retrovirus sequences inungulates and other mammals // Proc. of the Natl. Acad, of Sci. USA. 1996. V. 93. №8. P. 3297-3302.

135. Herniou E., Martin J., Miller K., Cook J., Wilkinson M., Tristem M. Retroviral diversity and distribution in vertebrates // J. Virol. 1998. V. 72. P. 5955-5966.

136. Herring C., Cunningham D.A., Whittam A.J., Fernandez-Suarez X.M., Langford G.A. Monitoring xenotransplant recipients for infection by PERV // Clin. Biochem. 2001. V. 34. №1. P. 23-27.

137. Heumann D. Burger D., Vischer Т., de Colmenares M., Bouvier J., Bordier C. Molecular interaction of Leishmania promastigene surface protease with human a-2-macroglobulin // Mol. Biocht. Parasitol. 1989. V. 33. № 1. P. 67-72.

138. Heumann D., Vischer T.L. Immunomodulation by a-2-macroglobulin and a-2- macroglobulin-protemase complexes: the effect on human T-lymphocyte response // Eur. J. Immunol. 1988. V. 18. № 5. P. 755-760.

139. Hoh J, Ott J. Mathematical multi-locus approaches to localizing complex human trait genes // Natl. Rev. Genet. 2003. V. 4. № 9. P. 701-709.

140. Hojny J.A. A contribution to the study of pig allotypes // Proc. 16-th Intern. Conf. Anim. Blood Groups Bioch. Polymorph. Leningrad. 1978. V. 3.P. 141-148.

141. Imlah P. Evidence for the TF locus being associated with an early lethal factor in a strain of pigs // Anim. Blood Groups Biochem. Genet. 1970. V. l.P. 5-13.

142. International Human Genome Sequencing Consortium. Initial sequencing and analysis of the human genome // Nature. 2001. V. 409. P. 860-921.

143. Janik A., Hojny J., Duniec M. Allotype polymorphism of serum globulins (Gp-system) in pigs // Anim. Blood Groups Biochem. Genet. 1983. V. 14. 2.P. 63-70.

144. Jin H., Inoshima Y., Wu D., Morooka A., Sentsui H. Expression of porcine endogenous retrovirus in peripheral blood leukocytes from ten different breeds // Transpl. Infect. Dis. 2000. V. 2. P. 11-14.

145. Kawakami T.G., Kollias G.V. Jr., Holmberg C. Oncogenicity of gibbon type-C myelogenous leukemia virus // Int. J. Cancer. 1980. V. 25. №5. P. 641-646.

146. Krach U., Fischer N., Czauderna F., Kurth R., Tonjes R.R. Generation and testing of a highly specific anti-serum directed against porcine endogenous retrovirus nucleocapsid // Xenotransplantation. 2000. V. 7. №3. P. 221-229.

147. Krach U., Fischer N., Czauderna F., Tonjes R.R. Comparison of replication-competent molecular clones of porcine endogenous retrovirus class A and class В derived from pig and human cells // J. Virol. 2001. V. 75. № 12. P. 5465-5472.

148. Langford G.A., Galbraith D., Whittam A.J., McEwan P., Fernandez-Suarez X.M., Black J., Shepherd A., Onions D. in vivo analysis of porcineendogenous retrovirus expression in transgenic pigs // Transplantation. 2001. V. 72. № 12. P. 1865-1866.

149. Le Tissier P., Stoye J.P., Takeuchi Y., Patience C., Weiss R.A. Two sets of human-tropic pig retrovirus // Nature. 1997. V. 389. № 6652. P. 681682.

150. Lee J.H. Characterizing and mapping porcine endogenous retroviruses // Degree of Doctor of Philosophy. (The University of Sydney) Australia. 2000. P. 1-260.

151. Lee J.H., Webb G.C., Allen R.D.M., Moran C. Characterizing and mapping porcine endogenous retroviruses in westran pigs // J. Virol. 2002. V.76.№ 11. 340-348.

152. Leib-Mosch C., Seifarth W. //Virus Genes. 1996. V. 11. P. 133-145.

153. Lieber M.M, Sherr C.J, Benveniste R.E, Todaro G.J. Biologic and immunologic properties of porcine type С viruses // Virology. 1975. V. 66. №2. P. 616-619.

154. Lonberg-Holm K., Reed D.L., Roberts R.C, Hebert R.R., Hilman M.C., Kutney R.M. Three high molecular weight protease inhibitore of rat plasma. Isolation, characterization and acute phase changes // J. Biol. Chem. 1987.V.262. № l.P. 435-445.

155. Mang R, Goudsmit J, van der Kuyl A.C. Novel endogenous type С retrovirus in baboons: complete sequence, providing evidence for baboon endogenous virus gag-pol ancestry // J. Virol. 1999. V. 73. № 8. P. 70217026.

156. Martin U, Kiessig V, Blusch J.H, Haverich A, von der Helm K, Herden T, Steinhoff G. Expression of pig endogenous retrovirus by primary porcine endothelial cells and infection of human cells // Lancet. 1998. V. 352. №9129. P. 692-694.

157. Matthews A.L, Brown J, Switzer W, Folks T.M, Heneine W, Sandstrom P. A. Development and validation of a Western immunoblot assay for detection of antibodies to porcine endogenous retrovirus // Transplantation. 1999. V. 67. № 7. P. 939-943.

158. Miller A.D, Bonham L, Alfano J, Kiem H.P, Reynolds T, Wolgamot G. A novel murine retrovirus identified during testing for helper virus in human gene transfer trials // J. Virol. 1996. V. 70. № 3. P. 18041809.

159. Moennig V, Frank H, Hunsmann G, Ohms P, Schwarz H, Schafer W. C-type particles produced by a permanent cell line from a leukemic pig. II. Physical, chemical, and serological characterization of the particles // Virology. 1974. V. 57. № 1. P. 179-188.

160. Murphy F. A, Fauquet С. M, Bishop D. H. L, Ghabrial S. A, Jarvis A.W, Martelli G. P, Mayo M. A, and Summers M. D. Virus taxonomy: Sixth Report of the International Committee on the Taxonomy of Viruses. Springer Verlag. New York. 1995.

161. Nagase D.N, Itoh Y, Binner S. Interaction of alpha 2-macroglobulin with matrix metalloproteinases and its use for identification of their active forms // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1994. V. 737. P. 294-302.

162. Niebert M., Tonjes R. R. Evolutionary Spread and Recombination of Porcine Endogenous Retroviruses in the Suiformes II J. Virol. 2005. V. 79. №. l.P. 649-654.

163. Nielsen P.B. Isoantigenes of the Immunoglobulins in pigs // Pigs. Acta. Vet. Scand. 1972. V. 13. P. 143-145.

164. Nikitin S.V. Knyazev S.P. Orlova G.V. Phylogenetic reconstruction of the multiple allelism of the E Blood group system in pig // Biodiversity and Dynamics of Ecosystems in North Eurasia. 2000. V. 5. Part 3. Novosibirsk. P. 65-67.

165. Oliver W.L.R. Taxonomy and conservation status of the suiformes -an overview // IBEX J. M. E. 1995. V. 3. P. 3-5

166. Onishi A., Iwamoto M., Akita Т., Mikawa S., Takeda K., Awata Т., Hanada H., Perry A.C. Pig cloning by microinjection of fetal fibroblast nuclei // Science. 2000. V. 289. № 5482. P. 1188-1190.

167. Osako Т., Sasaki Т., Ikai A. Purification and characterization alpha-macroglobulin and ovomacroglobulin of Green Turtle (Chelonia Mudas Japonica) // J. Bioch. 1988. V. 103. № 2. P. 212-217.

168. Parks W.P., Scolnick E.M., Noon M.C., Watson C.J., Kawakami T.G. Radioimmunoassay of mammalian type-C polypeptides. IV. Characterization of woolly monkey and gibbon viral antigens // Int. J. Cancer. 1973.V. 12. № 1. P. 129-137.

169. Patience C., Takeuchi Y., Weiss R.A. Infection of human cells by an endogenous retrovirus of pigs // Nat Med. 1997. V. 3. № 3. P. 282-286.

170. Patience C., Patton G.S., Takeuchi Y., Weiss R.A., McClure M.O., Rydberg L., Breimer M.E. No evidence of pig DNA or retroviral infection in patients with short-term extracorporeal connection to pig kidneys // Lancet. 1998. V. 352. № 9129. P. 699-701.

171. Patience C., Switzer W.M., Takeuchi Y., Griffiths D.J., Goward M.E, Heneine W, Stoye J.P, Weiss R.A. Multiple groups of novel retroviral genomes in pigs and related species // J. Virol. 2001. V. 75. № 6. P. 27712775.

172. Petropoulos, C. Appendix 2, Retroviral taxonomy, protein structure, sequences and genetic maps in: Retroviruses (J. M. Coffin, S. H. Hughes and H. E. Varmus, eds.). Cold Sprong Harbor Laboratory Press. New York. 1997. P. 757-805.

173. Pitkin Z, Mullon C. Evidence of absence of porcine endogenous retrovirus (PERV) infection in patients treated with a bioartificial liver support system // Artif. Organs. 1999. V. 23. № 9. P. 829-833.

174. Polejaeva I.A, Chen S.H, Vaught T.D, Page R.L, Mullins J, Ball S, Dai Y, Boone J, Walker S, Ayares D.L, Colman A, Campbell K.H. Cloned pigs produced by nuclear transfer from adult somatic cells // Nature. 2000. V. 407. № 6800. P. 86-90.

175. Qari S.H., Magre S., Garcia-Lerma J.G., Hussain A.I., Takeuchi Y., Patience C., Weiss R.A., Heneine W. Susceptibility of the porcine endogenous retrovirus to reverse transcriptase and protease inhibitors // J Virol. 2001. V. 75. № 2. P. 1048-1053.

176. Rapacz J. Lipoprotein immunogenetic and atherosclerosis // Am. J. Med. Genet. 1978. V. 1. № 4. P. 377-405.

177. Rapacz J., Hasler Rapacz J. Immunogenetic studies on polimorphism, postnatal passive acguision and development of immunoglobulin gamma (IgG) in swine // Рос. 2nd World Cong, on Genet. Appl. To Livestok Prod. Madrid. 1982.P. 601-606.

178. Rasmusen B.A. Isoantigenes of gamma globulins in pigs // Science. 1965. V. 148. № 3678. P. 1742-1743.

179. Reed D.J., Lin X., Thomas T.D., Birks C.W., Tang J., Rother R.P. Alteration of glycosylation renders HIV sensitive to inactivation by normal human serum // J. Immunol. 1997. V. 159. № 9. P. 4356-4361.

180. Roberts R.C., Alpha-2-macroglobulin // J. Med. 1985. V. 16. № 1,2,3. P. 129-219.

181. Rogel-Gaillard C., Bourgeaux N., Billault A., Vaiman M., Chardon P. Construction of a swine ВАС library: application to the characterization and mapping of porcine type С endoviral elements // Cytogenet. Cell Genet. 1999. V. 85. №3.4. p. 205-211.

182. Rohrer G.A., Alexander L.J., Hu Z., Smith T.P., Keele J.W., Beattie C.W. A comprehensive map of the porcine genome // Genome Res. 1996. V. 6. №5. P. 371-391.

183. Rohrer G.A., Vogeli P., Stranzinger G., Alexander L.J., Beattie C.W. Mapping 28 erythrocyte antigen, plasma protein and enzyme polymorphisms using an efficient genomic scan of the porcine genome // Anim. Genet. 1997. V. 28. №5. P. 323-330.

184. Rother R.P., Squinto S.P. The alpha-galactosyl epitope: a sugar coating that makes viruses and cells unpalatable // Cell. 1996. V. 86. № 2. P. 185-188.

185. Ruvinsky A., Rotschild M. Systematics and evolution of the pig // The Genetics of the Pig. Wallingford: CAB INTERNATIONAL. 1998. P. 1-16.

186. Sedivy J.M., Dutriaux A. Gene targeting and somatic cell genetics—a rebirth or a coming of age? // Trends Genet. 1999. V. 15. № 3. p. 88-90.

187. Silver J, Maudru T, Fujita K, Repaske R. An RT-PCR assay for the enzyme activity of reverse transcriptase capable of detecting single virions // Nucleic. Acids. Res. 1993. V. 21. № 15. P. 3593-3594.

188. Sommerfelt M.A, Weiss R.A. Receptor interference groups of 20 retroviruses plating on human cells // Virology. 1990. V. 176. № 1. P. 58-69.

189. Sottrup-Jensen L, Stepanik T.M, Kristensen T, Wier-zbicki D.W, Jones C.M, Lonblad P.B, Magnusson S., Petersen Т.Е. Primary structure of Human a2-macroglobulin. V. The complet structure // J. Biol. Chem. 1984. V. 259. № 13. P. 8318-8327.

190. Sottrup-Jensen L, Birkedal Hansen H. Human fibroblast collegenase-a-macroglobulin interaction. Localization of cleavage sites in the bait regions of five mammalian a-macroglobulin // J. Biol. Chem. 1989. V. 264. № l.P. 393-401.

191. Specke V, Tacke S.J, Boiler K, Schwendemann J, Denner J. Porcine endogenous retroviruses: in vitro host range and attempts to establish small animal models // J. Gen. Virol. 2001. V. 82. № Pt 4. P. 837844.

192. Specke V, Rubant S, Denner J. Productive infection of human primary cells and cell lines with porcine endogenous retroviruses // Virology. 2001. V. 285. № 2. P. 177-180.

193. Suzuka I, Sekiguchi K, Kodama M. Some characteristics of a porcine retrovirus from a cell line derived from swine malignant lymphomas //FEBSLett. 1985. V. 183. № l.P. 124-128.

194. Suzuka I, Shimizu N, Sekiguchi K, Hoshino H, Kodama M, Shimotohno K. Molecular cloning of unintegrated closed circular DNA of porcine retrovirus // FEBS Lett. 1986. V. 198. № 2. P. 339-343.

195. Tacke S.J., Kurth R., Denner J. Porcine endogenous retroviruses inhibit human immune cell function: risk for xenotransplantation? // Virology. 2000. V. 268. № 1. P. 87-93.

196. Tacke S.J., Bodusch K., Berg A., Denner J. Sensitive and specific immunological detection methods for porcine endogenous retroviruses applicable to experimental and clinical xenotransplantation // Xenotransplantation. 2001. V. 8. № 2. P. 125-135.

197. Tailor, C.S. and Kabat, D. Variable regions A and В in the envelope glycoproteins of feline leukemia virus subgroup В and amphotropic murine leukemia virus interact with discrete receptor domains // J. Virol. 1997. V. 71. P. 9383-9391.

198. Takefman D.M., Wong S., Maudru T, Peden K., Wilson C.A. Detection and characterization of porcine endogenous retrovirus in porcine plasma and porcine factor VIII // J. Virol. 2001. V. 75. № 10. P. 4551-4557.

199. Takeuchi Y., Porter C.D., Strahan K.M., Preece A.F., Gustafsson K., Cosset F.L., Weiss R.A., Collins MK. Sensitization of cells and retroviruses to human serum by (alpha 1-3) galactosyltransferase //Nature. 1996. V. 379. № 6560. P. 85-88.

200. Takeuchi Y, Patience C, Magre S, Weiss R.A, Banerjee P.T, Le Tissier P, Stoye J.P. Host range and interference studies of three classes of pig endogenous retrovirus // J. Virol. 1998. V. 72. № 12. P. 9986-9991.

201. Temin H.M, Rubin H. Characteristics of an assay for Rous sarcoma virus and Rous sarcoma cells in tissue culture // Virology. 1958. V. 6. P. 669.

202. Temin H.M. The control of cellular morphology in embryonic cells infected with Rous sarcoma virus in vitro II Virology. 1960. V. 10. P. 182.

203. Temin H.M. The nature of the provirus of Rous sarcoma // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1964. V. 52. P. 323.

204. Temin H.M. and Mizutani S. RNA-directed DNA polymerase in virions of Rous sarcoma virus. //Nature. 1970. V. 226. P. 1211-1213.

205. Temin H.M. Why are there so many leukemia viruses? // Leukemia. 1992. V. 6. № 3. P.4-5.

206. Tikhonov V.N. The Siberian miniature pig, its development, genetics, and use in biomedical research // Advances in Swine in Biomedical Research / Eds. M.E. Tumbleson. L.B. Schook. N.Y.-L. 1996.V. 2. P. 693707.

207. Tonjes R.R, Niebert M. Relative Age of Proviral Porcine Endogenous Retrovirus Sequences in Sus scrofa Based on the Molecular Clock Hypothesis // J Virol. 2003. V. 77. № 22. P. 12363-12368.

208. Van der Laan L.J, Lockey C, Griffeth B.C., Frasier F.S, Wilson

209. C.A, Onions D.E, Hering B.J, Long Z, Otto E, Torbett B.E, Salomon

210. D.R. Infection by porcine endogenous retrovirus after islet xenotransplantation in SCID mice // Nature. 2000. V. 407. № 6800. P. 9094.

211. Van Zaane D, Hulst M. M. Monoclonal antibodies against porcine immunoglobulin isotypes // Vet. Immunol. Immunopatol. 1987. V. 16. № 1. P. 23-36.

212. Vila C, Seddon J. and Ellegren H. Genes of domestic mammals augmented by backcrossing with wild ancestors // Trends in Genetics. 2005. V.21.№4.P. 216-221.

213. Vobis M, Haese D.J, Mehlhorn H, Mencke N. The feline leukemia virus (FeLV) and the cat flea (Ctenocephalides felis) II Parasitol. Res. 2003. V. 90. P. 132-134.

214. Von Schoults B, Stigbrund T. Characterization of "pregnancy zone protein" in relation to other a2-globulins of pregnancy // Bioch. Bioph. Acta. 1974. V. 359. №4. P. 303-310.

215. Weiss R. A. Transgenic pigs and virus adaptation // Nature. 1998. V. 391. P. 327.

216. Weiss R.A. Xenografts and Retroviruses // Science. 1999. V. 285. P.1221-1222.

217. Wilson C.A, Wong S, Muller J, Davidson C.E, Rose T.M, Burd P. Type С retrovirus released from porcine primary peripheral blood mononuclear cells infects human cells // J. Virol. 1998. V. 72. № 4. P. 30823087.

218. Wilson C.A, Wong S, VanBrocklin M, Federspiel M.J. Extended analysis of the in vitro tropism of porcine endogenous retrovirus // J. Virol. 2000. V. 74. № l.p. 49-56.

219. Wilson C. A, Laeeq S, Ritzhaupt A, Colon-Moran W. and Yoshimura F. K. Sequence analysis of porcine endogenous retrovirus longterminal repeats and identification of transcriptional regulatory regions // J. Virol. 2003. V. 77. P. 142-149.

220. Wolgamot G., Bonham L., Miller A.D. Sequence analysis of Mus dunni endogenous virus reveals a hybrid VL30/gibbon ape leukemia viruslike structure and a distinct envelope // J. Virol. 1998. V. 72. № 9. P. 74597466.

221. Zijlstra C., Bosma A.A., de Haan N.A., Mellink C. Construction of a cytogenetically characterized porcine somatic cell hybrid panel and its use as a mapping tool // Mamm. Genome. 1996. V. 7. № 4. P. 280-284.

Информация о работе

Айтназаров, Руслан Бейшеналиевич
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2006
ВАК 03.00.15

Диссертация

Молекулярно-генетический анализ эндогенных ретровирусов у некоторых пород свиней и диких кабанов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы