Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Молекулярно-генетические маркеры риска генерализованного пародонтита и их применение в диагностике
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология
Автореферат диссертации по теме "Молекулярно-генетические маркеры риска генерализованного пародонтита и их применение в диагностике"
На правах рукописи УДК 616. 314. 17 -008.1:579
НИКОЛАЕВА ЕЛЕНА НИКОЛАЕВНА
□□3453310
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ РИСКА ГЕНЕРАЛИЗОВАННОГО ПАРОДОНТИТА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В
ДИАГНОСТИКЕ
03.00.07. - микробиология 14.00.36. - аллергология и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
Москва - 2008
Работа выполнена в ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет Росздрава»
Научные консультанты:
Доктор медицинских наук, профессор ЦАРЕВ Виктор Николаевич
Заслуженный врач РФ, доктор медицинских наук, профессор ЯНУШЕВИЧ Олег Олегович
Официальные оппоненты:
Лауреат Государственной премии РФ, доктор медицинских наук, профессор ПАШКОВ Евгений Петрович
Заслуженный деятель науки РФ, Академик РАЕН, доктор медицинских наук, профессор ЯРИ ЛИН Александр Александрович
Почетный работник высшего профессионального образования, доктор медицинских наук, профессор РОМАНОВ Виталий Александрович
Ведущая организация: ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет Росздрава».
Защита состоится £ К&УутЛ^ 2008 года в W часов на заседании Диссертационного Совета Д.208.040.08 при ГОУ ВПО «Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова» по адресу: 119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д.8, стр.2.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, 49.
/МсЖ
Автореферат разослан у года
¿pll
Ученый секретарь диссертационного совета
доктор медицинских наук, профессор Миронов
Андрей Юрьевич
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы.
Среди важнейших проблем современной стоматологии воспалительные заболевания пародонта занимают одно из ведущих мест. Главной причиной потери зубов в средней и старшей возрастных группах населения нашей страны является пародонтит (Барер Г.М., .Немецкая Т.И., 2001; Баррер Г.М. и др., 2006; Безрукова И.В., Грудянов А.И., 2002).
Проявление и прогрессирование признаков пародонтита зависит от многих факторов и детерминант, включая индивидуальные особенности субъекта, социальные, поведенческие, системные, генетические факторы, изменения на уровне зубов, микробный состав зубного налета, и другие индикаторы и факторы риска (Hughes F J. et al., 2006; Kinane D.F. et al., 2006). В связи с большим количеством признаков, влияющих на развитие и прогрессирование пародонтита, трудно понять, в результате каких процессов происходит инициирование и прогрессирование заболевания. Не всегда понятно, какие из этих терминов применяют в стоматологической литературе, каким образом клиницисты используют такую информацию. Однако, в зависимости от результатов оценки факторов, связанных с началом и прогрессированием заболеваний пародонта, выбирают дизайн исследования и уровень значимости результатов измерения, определяющих силу ассоциаций каждого индикатора риска и их использование для принятия клинического решения (Pihkstrom B.L., 2001; Ronderos М., Ryder M.I., 2004; Velden van der U., 2006). В настоящее время не существует специфических и чувствительных диагностических тестов определения возможного прогрессирования заболевания на уровне индивидуума (Heitz-Mayfield L.J.A., 2005; Kornman K.S., 2005).
Ведущая роль в формировании воспалительного процесса в полости рта принадлежит резидентной облигатной анаэробной и микроаэрофильной микрофлоре. К агентам, индуцирующим длительное воспаление и разрушение тканей десны и альвеолярного отростка, обычно относят экзо- и эндотоксины па-
родонтопатогенных бактерий Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Actinobacillus actinomycetemcomitans), Tanner ella forsythensis (Bacteroides forsythus), Treponema denticola, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia и др. (Дунязина T.M., Bauermeister C.D., 2001; Царев B.H. и др. 2005; Ezzo P.J., Christopher W.C., 2003; Feng Z., Weinberg A., 2006; Tanner A.C.R. et al., 2006). В связи с этим основной целью терапии заболеваний пародонта является уничтожение его возбудителей и устранение отрицательных последствий их воздействия на окружающие ткани. Трудности лечения воспалительных процессов в тканях пародонта связаны с наличием, так называемых, торпидных или устойчивых к терапии форм пародонтита, которые в определенной степени связаны с длительной персистенцией пародонтопатогенных видов микробов. Ранее в нашей стране диагностика данных видов бактерий не проводилась из-за отсутствия соответствующих методов их выявления. В настоящее время в достаточной степени не установлена роль вирусной инфекции в этиологии генерализованного пародонтита. Остается также открытым вопрос о характере изменений иммунного статуса у больных пародонтитом при персистенции вирусов. Дальнейшей разработки требуют методы диагностики и лечения этого заболевания.
Исход и течение инфекционного процесса в пародонте могут быть предопределены не только вирулентностью микробов, но и генетическим полиморфизмом организма человека (Hodge P., Michalowicz В., 2001; Kornman K.S., 2006; Takashiba S., Naruishi К., 2006). Исследование полиморфизма генов HLA и IL - 1 (Kornman K.S. et al., 1997,1998; Николаева E.H. и др., 2003; D'Auito F. et al., 2004; Kornman K.S., 2006) может играть важную роль для выявления предрасположенности и прогнозирования течения воспалительных заболеваний пародонта. Однако полученные к настоящему времени результаты во многом противоречивы и неоднозначны, что требует дальнейшего более детального изучения данной проблемы. В нашей стране подобные исследования ранее не проводили. Современное развитие науки позволило разработать и внедрить в диагностическую практику более совершенные, информативные и достовер-
ные методы исследований, позволяющие по-новому оценить этиологию и патогенез воспаления, уточнить некоторые неясные до недавнего времени этио-патогенетические механизмы. Поэтому представляется необходимым разработать и внедрить в практику отечественные наборы реактивов для выявления генетических маркеров пародонтопатогенов с помощью полимеразной цепной реакции. Актуальным является более пристальное и всестороннее изучение микробиологических и иммуногенетических маркеров риска пародонтита и их использование в многофакторном анализе.
Цель исследования
Целью диссертационной работы являлось повышение эффективности диагностики генерализованного пародонтита на основании разработки микробиологических и иммуногенетических критериев.
Задачи исследования
. 1. Разработать тест - систему (набор реактивов) для идентификации основных пародонтопатогенов (Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Bacteroides forsythus, Actinobacillus actinomycetemcomitans и Treponema denticola) с помощью молекулярно-генетических методов.
2. Оценить информативность использования молекулярно-генетических маркеров для диагностики и контроля лечения воспалительных заболеваний пародонта, вызванных анаэробными микробами.
3. Изучить видовой состав основных пародонтопатогенов (Р. gingivalis, Р. intermedia, В. forsythus, А. actinomycetemcomitans и Т. denticola) с помощью новой отечественной тест-системы "Мультидент - 5" и их ассоциаций с клиническими параметрами у больных хроническим генерализованным пародонтитом и лиц со здоровым пародонтом.
4. Исследовать роль вирусов семейства Herpesviridae (HSV 1 и HSV 2 типов, EBV и CMV) в этиопатогенезе генерализованного пародонтита.
5. Определить с помощью высокоразрешающего метода ДНК - типирова-ния особенности аллельного полиморфизма генов HLA класса II (DRB1, DQA1, DQB1), характерные для представителей смешанной популяции г. Москвы, чувствительных и резистентных к пародонтиту.
6. Оценить полиморфизм генов IL - 1а и IL - lß у больных генерализованным пародонтитом тяжелой степени в различных возрастных группах и людей со здоровым пародонтом с помощью молекулярно-генетических методов исследований (полимеразной цепной реакции и обратной гибридизации).
7. Обосновать критерии определения микробиологических и иммуногене-тических индикаторов риска генерализованного пародонтита для оптимизации диагностики и прогнозирования характера течения воспалительных заболеваний пародонта с помощью однофакторных и многофакторных методов статистического анализа.
8. Разработать алгоритм прогнозирования глубины пародонталыюго кармана у пациентов на основе линейной ре1рессионной модели, включающей данные выявления основных пародонтопатогенных бактерий, вирусов и параметров иммуногенетического статуса пациента.
9. Разработать алгоритм диагностики степени тяжести хронического генерализованного пародонтита, основанный на построении полиномиальной логистической регрессии с упорядоченным откликом, включающей в качестве предикторов микробиологические и иммуногенетические показатели пациента.
10. Разработать алгоритм диагностики поражений тканей пародонта, ассоциированных с герпесвирусной инфекцией, на основе комплексной оценки данных иммуноферментного определения антител к вирусам и обнаружения ДНК пародонтопатогенов и вирусов молекулярно-биологическим методом.
Научная новизна
В представленной работе впервые в Российской Федерации:
1) разработан и всесторонне апробирован набор реактивов для молеку-лярно-генетического выявления ДНК пяти основных пародонтопатогенных бактерий - А. actinomycetemcomitans, Р. gingivalis, Р. intermedia, В. forsythus и Т. denticola;
2) уточнена этиологическая роль перечисленных выше и некоторых других видов микроорганизмов и установлена степень их участия в развитии острого и хронического воспаления тканей пародонта; выявлены маркеры ДНК вирусов герпеса 1 и 2 типов, вируса Эпштейна - Барр и цитомегаловирусов в содержимом пародонтальных карманов у больных хроническим генерализованным пародонтитом с помощью полимеразной цепной реакции и определена относительная частота их выявления;
3) с помощью молекулярно - генетических методов исследований изучена взаимосвязь аллелыюго полиморфизма генов HLA класса II (DRB1, DQA1, DQB1) и генов IL - 1а и IL - lß у представителей смешанной популяции г. Москвы, чувствительных и резистентных к пародонтиту, с особенностями течения воспалительного процесса и предрасположенностью к развитию генерализованного пародонтита;
4) определена диагностическая ценность факторов и индикаторов риска для оптимизации диагностики и прогнозирования характера течения воспалительных заболеваний пародонта;
5) определены наиболее значимые диагностические и прогностические критерии осложненного характера течения воспалительного процесса на основании анализа микробиологических и иммуногенетических показателей;
6) разработаны алгоритмы комплексной клинико - лабораторной, имму-ногенетической и микробиологической диагностики генерализованного пародонтита, позволяющие обосновать и уточнить этиопатогенетический диагноз заболевания, назначать адекватную антимикробную терапию, направленную на
элиминацию патогенов, создать оптимальные условия для последующего хирургического или ортопедического лечения, контролировать стабильность наступившей ремиссии и своевременно прогнозировать возможные рецидивы заболевания.
Практическая значимость
Улучшение квалифицированной помощи пациентам с хроническими воспалительными заболеваниями пародонта за счет более совершенной диагностики и более глубоких теоретических знаний особенностей развития и течения воспалительных процессов в пародонте.
Предложен новый отечественный набор реактивов для диагностики и контроля эффективности лечения воспалительных заболеваний пародонта с использованием молекулярно-генетических методов исследований.
Определен исходный микробиологический статус населения в различных возрастных группах и выявлены группы людей с риском развития воспалительных заболеваний пародонта, что позволяет провести профилактику повторного заражения членов семьи больного. Полученный массив данных может быть использован в качестве контроля для дальнейших исследований данной проблемы.
Установлена взаимосвязь аллельного полиморфизма генов НЬА класса II (ОЯВ1, 0(ЗА1, ОрВ1), 11, - 1а и 1Ь - 10 у представителей смешанной популяции г. Москвы, чувствительных и резистентных к пародонтиту, с особенностями течения воспалительного процесса и предрасположенностью к развитию пародонтита и может быть использована в исследованиях по проблеме "НЬА и болезни".
Разработаны новые критерии на основании микробиологических и имму-ногенетических показателей для постановки правильного диагноза и выбора
соответствующего способа лечения, получения объективных данных об эффективности проводимого лечения.
Обосновано применение молекулярно - биологических и иммунофер-
ментных методов для диагностики и контроля эффективности лечения герпес-
вирусной инфекции у больных хроническим генерализованным пародонтитом.
Предложен соответствующий диагностический алгоритм.
Положения, выносимые на защиту
1. Новая отечественная тест - система "Мультидент - 5" позволяет определять ДНК пародонтопатогенных микробов Prevotella intermedia sensu stricto, Bacteroides forsythus, Treponema denticola, Actinobacillus actinomy-cetemcomitans, Porphyromonas gingivalis с помощью мультиплексной по-лимеразной цепной реакции и предназначена для использования в диагностике и контроле лечения воспалительных заболеваний пародонта, вызванных анаэробными микробами.
2. Факторами риска хронического генерализованного пародонтита являются P. gingivalis или комбинации В. forsythus и Т. denticola; P. intermedia, В. forsythus и P. gingivalis; P. intermedia, В. forsythus, Т. denticola и Р. gingivalis; P. intermedia, В. forsythus, Т. denticola, P. gingivalis и A. acti-nomycetemcomitans.
3. Индикаторами риска развития и прогрессирования хронического генерализованного пародонтита являются пародонтопатогенные виды бактерий P. intermedia, В. forsythus, Т. denticola и A. actinomycetemcomitans; вирусы семейства Herpesviridae: HSV 1 и HSV 2 типов, EBV и CMV, специфичность DRB1 *04 и аллель DQA1 *0301 генов HLA класса II.
4. Аллели генов HLA - DRB1 *01 и HLA - DQA1 *0101 ассоциированы с устойчивостью к различным формам генерализованного пародонтита.
5. Специфичность HLA - DRB1 *04 и аллель DQA1 *0301 являются маркерами риска хронического генерализованного пародонтита, ассоциирован-
ного с вирусами семейства Негре8У1пс1ае, "протективными" свойствами обладают специфичность НЬА - 1ЖВ1 *01, аллель локуса О0»А1 *0501 и БдВ1 *0501.
6. Предрасположенность к развитию агрессивной формы хронического генерализованного пародонтита у лиц молодого возраста европеоидного происхождения в смешанной популяции г. Москвы ассоциирована с полиморфизмом гена 1Ь - 1а, локализованного в позиции -899, и гена 1Ь - 1(3 - в позиции +3953.
7. Алгоритмы лабораторной диагностики пародонтита на основе статистических моделей (линейной и полиномиальной логистической регрессии с упорядоченным откликом) включают микробиологические и иммуноге-нетические показатели риска генерализованного пародонтита.
8. Алгоритм диагностики поражений тканей пародонта, ассоциированных с герпесвирусной инфекцией, основан на комплексной оценке данных им-муноферментного определения антител к вирусам (определение стадии ГВИ) и обнаружения ДНК пародонтопатогенов и вирусов молекулярно-биологическим методом (окончательный диагноз).
Внедрение результатов исследования
Разработана новая медицинская технология № ФС-2006/043 - У "Диагностика и прогнозирование течения заболеваний пародонта с применением мо-лекулярно-биологических и иммуноферментных систем".
Результаты исследования внедрены в практику работы кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии; кафедры стоматологии общей практики и подготовки зубных техников №2 ФУВС, лаборатории молекулярно - биологических исследований НИМСИ и Клинико - диагностического центра ГОУ ВПО МГМСУ Росздрава.
Материалы диссертации используются в процессе обучения студентов, интернов, клинических ординаторов и аспирантов на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии и кафедрах стоматологического профиля ГОУ ВПО МГМСУ Росздрава.
Разработан и внедрен в практику кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии МГМСУ набор реактивов для выявления пяти видов пародонто-патогенов с помощью молекулярно - генетических методов исследований.
Апробация работы
Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: Всероссийской конференции "Профилактика основных стоматологических заболеваний" (г. Москва, 2003); Российско - норвежском симпозиуме "Заболевания пародонта - актуальные проблемы" (г. Москва, 2004); X и XI Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (г. Москва, 2003, 2004 гг); Втором съезде общества биотехнологов России (г. Москва, 2004); Всероссийском симпозиуме "Актуальные проблемы стоматологии" Всероссийского конгресса "Современные методы профилактики и лечения заболеваний пародонта" (г. Уфа, 2004); Всероссийской научно-практической конференции Первого Всероссийского стоматологического форума "Дентал Ревю" (г. Москва, 2004); II Всероссийской научно-практической конференции "Образование, наука и практика в стоматологии" (г. Москва, 2005); Второй и третьей научно-практической конференции "Актуальные проблемы медицинской биотехнологии" (г. Анапа, 2005, 2006); III Всероссийской научно-практической конференции "Образование, наука и практика в стоматологии" (г. Москва, 2006); Четвертом съезде общества биотехнологов России (Москва, 2006); VIII международном конгрессе MAKMAX/ASM по антимикробной терапии (г. Москва, 2006); IV Всероссийской научно-практической конференции "Образование, наука и практика в стоматологии" (г. Москва, 2007); совместном совещании кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии; лаборатории молекулярно - биологических иссле-
дований, лаборатории иммунологии НИМСИ ГОУ ВПО МГМСУ Росздрава и кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава (протокол № 7 от 13 мая 2008 г.).
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 57 научных работ, в том числе 14 -в научных изданиях, рекомендованных ВАК МО РФ, учебные пособия - 4, руководство для студентов - 1, методические рекомендации МЗ и СР для врачей - 1; получен 1 патент РФ на изобретение; зарегистрирована медицинская технология № ФС-2006/043 - У.
Структура и объем диссертации
Диссертация построена по традиционному плану и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, трех глав собственных исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Материалы диссертации изложены на 385 страницах машинописного текста. Работа иллюстрирована 94 рисунками и содержит 80 таблиц. Список литературы включает 72 отечественных и 350 иностранных источников.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования
В период с 2002 по 2007 годы нами проведено комплексное обследование 684 человек, обратившихся в пародонтологические отделения консультативно-диагностических центров при Московском государственном медико-стоматологическом университете. Из них 122 человека со здоровым пародон-том и 562 больных хроническим генерализованным пародонтитом (ХГП) в ста-
дии обострения, в возрасте от 18 до 72 лет (360 женщин и 324 мужчины) и давностью заболевания от 3 до 10 лет. На основании эпидемиологических, клини-ко-анамнестических и лабораторных данных были выделены 4 основные группы:
1- пациенты с легкой степенью ХГП (77 человек),
2- больные со средней степенью тяжести заболевания (281 человек),
3- больные с тяжёлой степенью заболевания (204 человека), контрольная группа -122 человека со здоровым пародонтом.
По данным анамнеза, анкетирования и заключений общих специалистов у 473 (84 %) из 562 человек с ХГП выявлены сопутствующие заболевания. Сто девяносто (34 %) пациентов указали на наличие в анамнезе инфекций, вызываемых вирусами семейства Herpesviridae. Все обследованные люди не имели системных заболеваний (ревматоидного артрита, миастении gravis, шизофрении), ассоциированных с полиморфизмом генов IL - la, IL - 1р и HLA - системы.
Методическую основу работы составляло выявление в исследуемом материале из пародонтальных карманов больных ХГП и зубодесневой борозды людей со здоровым пародонтом некоторых представителей пародонтопатогенных видов бактерий и вирусов семейства Herpesviridae молекулярно-генетическими и бактериологическими методами, а также изучение полиморфизма генов IL -1 и HLA - системы у обследованных людей. В качестве исследуемого материала при иммуногенетических исследованиях использовали эпителиальные клетки со слизистой щеки. ДНК выделяли из соскобов по методу Higuchi R. Н. и Erlich Н. (1989) с некоторыми модификациями. Реакции амплификации проводили на амплификаторе "Терцик МС2" («НПФ ДНК - технология», Россия) по программам, рекомендованным производителем набора. Маркерные пародонтопа-тогенные виды бактерий выявляли с помощью набора реактивов "Мультидент -5", разработанного нами совместно с сотрудниками фирмы ООО «НПФ "Ген-лаб"», для идентификации ДНК пяти видов пародонтопатогенов с помощью ПЦР и электрофореза в 1,6 % агарозном геле; тест-системы Micro DentR ("Hain
Diagnostica", Германия), позволяющей проводить мультиплексную ПЦР, с последующей регистрацией синтезированных ампликонов методом обратной гибридизации; и классического бактериологического исследования в анаэробных условиях (анаэростат «Himedia», Великобритания, газовая смесь - 80 % азота, 10 % углекислого газа, 10 % водорода). Идентификацию выделенных штаммов проводили на основании комплекса морфологических, кулмуральных и биохимических признаков. В частности, использовали тест-систему API An 20 (Франция).
Идентификацию ДНК Herpes simplex virus 1 и 2 типов (HSV 1,2), Human cytomegalovirus (CMV) и Epstein - Barr virus (EBV) проводили с помощью ПЦР, используя мультипраймерный набор реагентов "МультиГер - 3", и набор реагентов для определения ДНК вируса простого герпеса 2 типа (ООО «НПФ "Генлаб"», Москва). Предварительно проводили иммуноферментное определение видоспецифических антител к цитомегаловирусу, вирусу простого герпеса 1, 2 и ядерному белку EBNA-1 р72 в сыворотке периферической крови твёрдо-фазным методом иммуноферментного анализа (ИФА) с помощью тест-систем Вектор-Бест (РФ). Исследование полиморфизма генов IL - 1а и IL - 1(3 проводили с помощью GenoTypeR PRT теста ("Hain Diagnostica", Германия). Принцип метода основан на DNA-STRIP технологии, позволяющей осуществлять комбинированный анализ основного состава и сочетание аллелей в локусе -889 IL -1а и +3953 IL - ip генов человека с помощью молекулярно-генетических методов.
Изучение полиморфизма генов HLA класса II (DRB1, DQA1, DQB1) проводили с помощью высокоразрешающего метода ДНК - типирования. Для этого применяли наборы реактивов HLA-ДМК-Тех («НПФ ДНК - технология», Россия), позволяющие выявлять 13 специфичностей гена HLA - DRB1, 8 аллелей гена HLA - DQA1 и 11 аллелей гена HLA - DQB1. Детекцию продуктов амплификации проводили в ультрафиолетовом свете после электрофореза в 3 % - ном арагозном геле. Распределение аллельных частот и генотипов вычисляли из
процентного соотношения числа индивидуумов, обладающих определенным аллелем или генотипом, к общему числу индивидуумов в выборке.
Для определения частоты аллелей исследованных генов и их гаплотипов методом максимального правдоподобия использовали компьютерную программу "Арлекин" версия 2.1 (URL:http:/antro.unige.ch/arlequin). Достоверность различий в частоте встречаемости аллелей и гаплотипов рассчитывали с помощью критерия х2 с поправкой Йетса на непрерывность выборки. В необходимых случаях, когда в группе сравнения было менее 5 наблюдений, использовали двусторонний критерий Фишера. Наличие ассоциаций заболевания с генотипом оценивали по величине относительного риска (RR) с расчетом для него 95 % доверительного интервала (ДИ) и проверкой на достоверность (р) отличия RR по точному двустороннему тесту Фишера для четырехпольных таблиц с поправкой на количество выявленных аллелей (рсог) по методу Бонферони (Живо-товский JI.A., 1991).
Клиническое обследование включало выявление жалоб пациентов на болезненность и отёчность дёсен, неприятный запах изо рта, кровоточивость дёсен, оголение шейки зуба, расшатывание и выпадение зубов. Оценку состояния тканей пародонта проводили, используя упрощенный гигиенический индекс УИГ - OHI-S (Green J.C., Vermilion J.R., 1960); индекс кровоточивости десневой борозды ИК - SBI (Mühleman H.R., Son S., 1971); пародонтальный индекс ПИ -PI (Rüssel А., 1956). Глубину пародонтального кармана измеряли с помощью градуированного пуговчатого пародонтального зонда. Для уточнения клинического анализа всем больным назначали рентгенологическое исследование (Гри-горьян А. С. и др., 2004).
В исследовании были использованы следующие статистические методы и критерии: критерий хи-квадрат для проверки независимости признаков на основе таблицы сопряженности; метод главных компонент и факторный анализ для агрегирования исследуемых признаков; модель линейной регрессии для описания зависимости отклика Z от предикторов X, Y, ... в виде линейной функции: Z = а + ЬХ + cY + ...; модель полиномиальной логистической регрес-
сии с упорядоченным откликом для прогнозирования отклика, который принимает только целые значения, причем эти значения измеряются в порядковой шкале (Лагутин М. Б., 2007). Все расчеты проводили с помощью пакетов SPSS vl5 for Windows и STATISTICA 7.0.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Как следствие поставленных задач нами совместно с «НПФ ООО "Ген-лаб"» был разработан набор реагентов "Мультидент - 5" для определения ДНК пародонтопатогенных микробов Prevotella intermedia sensu stricto, Bacteroides forsythus, Treponema denticola, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyro-monas gingivalis при помощи мультиплексной полимеразной цепной реакции.1 Предложенный набор включает комплект реагентов для пробоподготовки; комплект для амплификации, содержащий буфер, 5 прямые и 2 обратные прайме-ры, дезоксинуклеозидтрифосфаты, ДНК - полимеразу, положительный и отрицательный контрольные образцы, и комплект для анализа продуктов ПЦР. Принцип действия набора основан на выделении ДНК пародонтопатогенов с помощью комплекта I, амплификации фрагментов хромосомной ДНК (комплект II) и детекции продуктов ПЦР методом электрофореза в агарозном геле (комплект III). На этапе амплификации используют прямой олигонуклеотидный праймер (затравку), специфичный для фрагмента генома P. intermedia, прямой олигонуклеотидный праймер, специфичный для фрагмента генома В. forsythus, прямой олигонуклеотидный праймер, специфичный для фрагмента генома А. actinomycetemcomitans, прямой олигонуклеотидный праймер, специфичный для фрагмента генома P. gingivalis, общий для ДНК P. gingivalis, P. intermedia, А. actinomycetemcomitans и В. forsythus обратный олигонуклеотидный праймер, два олигонуклеотидных праймера, фланкирующие участок ДНК, специфичный для генома Т. denticola. Положительный контрольный образец ДНК состоит из ДНК рекомбинантной плазмиды с клонированным фрагментом размером
1 - Патент РФ № 2306341, опубл. 20.09.2007 Бюл. "Изобретения, полезные модели". - 2007. -№26.
1 ООО п. н. генома Р. intermedia sensu stricto, ДНК рекомбинантной плазмиды с клонированным фрагментом размером 745 п. н. генома В. forsythus, ДНК рекомбинантной плазмиды с клонированным фрагментом размером 512 п. н. генома Т. denticola, ДНК рекомбинантной плазмиды с клонированным фрагментом размером 360 п. н. генома А. actinomycetemcomitans, ДНК рекомбинантной плазмиды с клонированным фрагментом размером 197 п. н. генома Porphyro-monas gingivalis.
Чувствительность набора составляет не более 104 копий/мл для каждого возбудителя, что обеспечивает возможность выявления бактерий в количествах, характерных для участков с риском развития или прогрессирования пародонти-та, и снижение расхода реагентов для амплификации. Специфичность набора была доказана экспериментально и проверена на клинических образцах.
В результате последующих исследований было показано, что предложенный набор реактивов позволяет одновременно, быстро, просто и точно идентифицировать в одной пробе 5 видов пародонтопатогенов, в том числе трудно культивируемые, с помощью одноступенчатой мультиплексной ПЦР (рис. 1).
Примечание: К+ - положительный контроль, М — маркеры молекулярного веса ДНК. 1 - 6, 8 - положительные пробы, 7 - отрицательная проба.
Рис. 1 Электрофореграмма продуктов ПЦР в 1,6 % агарозном геле.
При изучении состава пародонтопатогенной микрофлоры у больных ХГП с помощью набора реактивов "Мультидент - 5", тест - системы Micro DentR (Hain Diagnostica) и классическим культуральным методом было показано, что частота встречаемости разных видов пародонтопатогенных бактерий у больных с генерализованной формой пародонтита существенно различалась. В ассоциациях доминировали представители видов - Р. intermedia, Р. gingivalis, В. forsythus, Fusobacterium nucleatum, A. actinomycetemcomitans, Т. denticoia, Actinomyces naeslundii, A. israelii, Streptococcus intermedius, Peptostreptococcus micros. При этом можно было выявить существование нескольких этиологически разнородных вариантов пародонтита, не имеющих различий в клинической картине. Мы также апробировали "Мультидент - 5" при изучении видового состава микробов в исследуемом материале, полученном у пациентов с различными воспалительными заболеваниями ротовой полости и челюстно - лицевой области.
Получив новое диагностическое средство мы изучили видовой состав основных пародонтопатогенов и их ассоциаций с клиническими параметрами у больных ХГП и лиц со здоровым пародонтом. Только в контрольной группе обследованных нами людей был отмечен оптимальный уровень гигиены. При этом у 5 (4 %) из 122 человек со здоровым пародонтом была выявлена ДНК А. actinomycetemcomitans, у 1 (0,8 %) человека - Р. intermedia, 4 (3 %) - В. forsythus, 2 (1,6 %) - Т. denticoia. Р. gingivalis в норме не выявляли (рис. 2). У 209 (37 %) из 562 больных ХГП выявили A. actinomycetemcomitans (ОШ = 14; ДИ: 23; 70), у 326 (58 %) - Р. gingivalis (ОШ = 168; ДИ: 12; 330), у 263 (47 %) -Р. intermedia (ОШ = 106; ДИ: 15; 220), у 352 (63 %) - В. forsythus (ОШ = 49; ДИ: 18;76), Т. denticoia - у 289 (51 %) пациентов (ОШ = 63; ДИ: 16; 260). Частота выявления всех пяти изученных нами видов микробов возрастала в зависимости от степени тяжести пародонтита от 40 раз у пациентов 1-й группы до 70 раз у пациентов 3-й группы по сравнению с контролем, р = 0,0001. Таким образом, шанс появления любого из данных пародонтопатогенов у пациентов с
легкой, средней или тяжелой степенями XI11 значительно выше шанса их определения у представителей контрольной группы.
Рл. В.£ ТЛ. А.а. Р.ё. пародонтопатогены
□ контроль Эпародонтит
Рис. 2. Относительная частота выявления Д1Ж пародонтопатогенов в области зубодесневой борозды у больных ХГП и людей со здоровым пародонтом.
Следует отметить, что частота определения каждого из пяти изучаемых нами видов микробов была значительно ниже у пациентов с ХГП легкой степени, чем у больных со средней и тяжелой степенью заболевания. Разница в частоте выявления каждого из них у пациентов со средней и тяжелой степенями ХГП была статистически не достоверна. Тем не менее, отношения шансов для 3-й и 1-й групп варьировали в пределах от 1,9 до 2,6 при р < 0,05.
Всех пациентов можно было разделить на 31 подгруппу по наличию у них пародонтопатогенов (от полного отсутствия до одновременного выявления всех 5 видов микробов), в которые входили от 3 (0,5 %) до 62 (11 %) человек. Только у 54 из 562 (9,6 %) обследованных нами пациентов с ХГП не было выявлено ни одного вида микробов, тогда как в контрольной группе - у 112 (92 %)
человек (рсог= 0,00031). Таким образом, вероятность отсутствия у больных ХГП изучаемых нами пародонтопатогенов в 10 раз ниже, чем у здоровых людей. Очень редко у пациентов с ХГП выявляли один вид пародонтопатогенов. Только Р. gingivalis определили у 35 (6 %) человек с пародонтитом, при этом разница с контрольной группой была статистически достоверной при р = 0,0047 (ОШ = 8,4; ДИ: 1,2; 25). У 62 (11 %) пациентов с ХГП были одновременно выявлены 4 вида микробов - Р. intermedia, В. forsythus, Т. denticola и Р. gingivalis (рсог = 0,0031), у 61 (10,9 %) - все 5 видов пародонтопатогенов (рсог= 0,00031). У 8 (6,6 %) человек контрольной группы в области зубодесневой борозды был выявлен один вид микробов и только у 2 (1,4 %) человек - два вида пародонтопатогенов.
Разницы в частоте выявления пародонтопатогенов у мужчин и женщин с ХГП не обнаружено. У курящих пациентов все изучаемые нами виды пародонтопатогенов выявляли в 1,4 - 1,7 раза чаще, чем у некурящих, р = 0,001.
В результате изучения связи некоторых ассоциаций пародонтопатогенов с пародонтальными индексами было установлено, что присутствие в области зубодесневой борозды В. forsythus или ассоциаций бактерий Т. denticola и В. forsythus; Р. intermedia, В. forsythus и Р. gingivalis; Р. intermedia, В. forsythus, Т. denticola и Р. gingivalis или всех 5 видов бактерий статистически значимо связано с увеличением индекса ПМА на 3 - 7 %, глубины пародонтального кармана на 0,2 - 0,6 мм, пародонтального индекса - на 0,11 - 0,15 баллов, индекса кровоточивости на 6 - 8 %, р = 0,001.
Одновременное присутствие в содержимом пародонтальных карманов Р. intermedia, В. forsythus и Р. gingivalis было связано с наибольшим увеличением средних значений пародонтального индекса у пациентов с ХГП с легкой, средней и тяжелой степенями заболевания. Наибольший прирост глубины пародонтальных карманов наблюдали у пациентов со средней степенью тяжести ХГП. Самое большое увеличение индекса ПМА было связано с наличием пяти видов пародонтопатогенов. Прирост средних значений был равен 8,4%, р — 0,001.
Увеличение индекса кровоточивости на 6,3 % связано с появлением В. forsythus, р = 0,001.
Одним из наиболее важных признаков наличия у человека вторичного иммунодефицита является присутствие в организме ГВ.
С помощью иммуноферментного анализа было установлено, что у 533 (95 %) обследованных больных, страдающих пародонтитом, в сыворотке крови содержались антитела класса IgG к HSV 1 или 2 типов, в 483 (86 %) случаев -антитела IgG класса к CMV и только у 29 (5 %) пациентов - антитела IgM класса к CMV. Немногим более, чем у половины больных XIII были выявлены антитела к ядерному белку EBNA-1 р72, являющегося маркером пастинфек-ции, в относительно небольших количествах: 2,19 у.е./мл (от 0 до 7,06 у.е./мл), что в 4 раза выше, чем у представителей контрольной группы - 0,51 у.е./мл (от 0 до 2,3 у.е./мл), pm..u. = 0,0013. Причем у женщин их уровень был почти в 2 раза статистически значимо выше, чем у мужчин, а также у пациентов со средней и тяжелой степенями тяжести заболевания по сравнению с контролем. Полученные результаты указывали на наличие латентной полиинфекции и возможность реактивации ипфекционных агентов у иммунокомпрометированных пациентов, с которьми может быть связано прогрессирование пародонтита.
С помощью ПЦР ДНК HSV 1 типа была выявлена у 91 (16 %), HSV 2 типа - 23 (4 %), CMV - 40 (7,1 %), EBV - 101 (18 %) пациента. В тоже время у здоровых людей в области зубодесневой борозды был выявлен генетический материал только HSV 1 типа в 3 (2,6 %) случаев и CMV - у 2 (1,7 %) обследованных индивидуумов. ДНК HSV 2 типа и EBV не выявлена ни у одного человека (рис.3).
При этом значения отношения шансов были выше "4,5" для всех вирусов. Относительная частота выявления вирусов в пародонтальных карманах возрастала в зависимости от тяжести заболевания. Так, генетические маркеры HSV 1 типа были выявлены у 6 (8 %) пациентов с легкой, 42 (15 %) человек со средней и 45 (22 %) человек с тяжелой стадиями ХГП. Маркеры CMV выявили у 5 (6,5 %) пациентов 1-й группы, 14 (5,2 %) - 2-й и 21 (10,3 %) человека 3-й груп-
пы. Чаще всего в пародонтальных карманах выявляли EBV. Его определили у 10 (13 %) пациентов 1-й группы, 40 (14 %) - 2-й и 51 (25 %) пациента 3-й группы. Однако у большинства пациентов (от 74 % в 1-й до 52 % в 3-й группе) вирусы не были выявлены. Одновременно два типа вирусов выявили не более, чем у 10 % пациентов. При этом относительная частота одновременного присутствия двух типов вирусов у пациентов 3-й группы статистически достоверно превышала частоту как у пациентов 1-й группы (р = 0,017), так и пациентов 2-й группы (р = 0,009).
вирусы семейства Herpesviridae
В контрольная группа Ш пародонтит
Рис. 3. Относительная частота выявления вирусов в пародонтальных карманах больных XI11 и людей со здоровым пародонтом.
Частота выявления EBV была в 1,8 раза выше у пациентов младшей возрастной группы, чем в старшей группе (рСог = 0,044; ОШ=2,9; ДИ: 1,6; 4,2); у мужчин в 1,5 раза чаще, чем у женщин (рсог = 0,02; 0111=2,6; ДИ: 1,4; 3,8). У курящих пациентов все изучаемые нами типы вирусов выявляли в 1,2 - 1,8 раза чаще, чем у некурящих пациентов, хотя статистически значимые отличия наблюдались только в частоте обнаружения EBV (р = 0,037). Отмечена тенденция
увеличения вероятности нахождения HSV 1 типа в пародонтальных карманах курящих пациентов в 1,5 раза по сравнению с не курящими пациентами на уровне 5,6 %.
Мы также установили, что между частотой обнаружения в содержимом пародонтальных карманов пациентов с ХГП Р. gingivalis и вирусов HSV 1 и HSV 2 типов, а также А. actinomycetemcomitans и HSV 2 типа существует статистически значимая зависимость. У пациентов 3-й группы с тяжелой степенью заболевания была установлена статистически значимая связь между частотой обнаружения Т. denticola и CMV, а = 0,047.
Присутствие любого из четырех изучаемых нами типов вирусов семейства Herpesviridae было статистически значимо связано с увеличением индекса ПМА, соответственно на 5,3 %, 8,5 % 3,3 % и 3,6 %, Наличие HSV 1, HSV 2 типов и EBV статистически значимо связано с увеличением глубины пародонтальных карманов на 0,6, 0,9 и 0,4 мм. CMV не влиял на этот показатель. Увеличение значений пародонтального индекса на 0,28 балла у людей с ХГП средней степени тяжести статистически значимо связано с присутствием в содержимом пародонтальных карманов HSV 2 типа, а у пациентов с ХГП тяжелой степени - с любым из 4 типов изучаемых нами вирусов на 0,05 - 0,14 баллов. Присутствие вирусов HSV 1 и HSV 2 типов, но не CMV и EBV, в пародонтальных карманах пациентов с ХГП было статистически значимо связано с увеличением индекса кровоточивости (ИК), соответственно на 3,9 % и 8,4 %.
Kornman K.S. с соавторами (1997) описали специфический генотип кластера генов интерлейкина-1 (IL - 1), ассоциированный с тяжестью течения па-родонтита. Полиморфизм гена IL - 1а локализован в позиции -899, гена IL - lß - в позиции +3953. В обоих случаях аллель 1 содержит цитозин (С), тогда как аллель 2 - тимин (Т) в соответствующих позициях. Аллель 2 в позиции +3953 гена IL - lß обусловливает изменение функций белков, что проявляется в избыточной продукции IL - lß.
Мы изучили полиморфизм генов IL - 1а и IL - lß у 95 человек европеоидной расы в возрасте от 18 до 65 лет, проживающих в г. Москве: 35 пациентов в
возрасте до 35 лет с устойчивым не поддающимся лечению ХГП тяжелой степени (1-я группа), 40 больных ХГП тяжелой степени старше 50 лет (2-я группа) и 20 здоровых людей в возрасте от 41 до 64 лет без видимых заболеваний па-родонта (контрольная группа). Все обследованные люди не имели системных заболеваний (ревматоидного артрита, миастении gravis, шизофрении), ассоциированных с полиморфизмом генов IL - 1а или IL - 1(3. Все образцы, обладающие, по крайней мере, одной копией аллеля 2 в обоих локусах считали GenoTypeR PRT - "положительными". Гомозиготные аллели по обоим локусам или гетерозиготные, хотя бы по одному локусу аллеля 1 относили к "отрицательному" генотипу. Было установлено, что наблюдаемое распределение частот аллелей, как в локусе -899 гена IL - 1а (%2 = 2,54, р > 0,05), так и гена IL - ip +3953 (у~ = 0,90, р > 0,05) в контрольной группе соответствовало теоретически ожидаемым частотам, рассчитанным по закону Харди - Вайнберга.
Тридцать семь (38,9 %) из обследованных людей были гомозиготными по аллелю 1 (1/1) в локусе -899 гена IL - 1а, 54 (56,8 %) человека являлись ге-терозиготами (1/2) и 4 (4,2%) человека - гомозиготами по мутантному аллелю 2 (2/2). Гомозиготами по аллелю 1 (1/1) гена IL - ip +3953 были 43 (45,3 %) человека, по аллелю 2 (2/2) - 9 (9,4 %) человек, а гетерозиготами (1/2) - 43 (45,3 %) человека. Частоты аллельных вариантов локусов IL - 1а -899 и IL - ip +3953 у больных пародонтитом и в контроле значительно различались. Так, среди пациентов 1 группы (моложе 35 лет) гомозиготные варианты аллеля 1 (1/1) в локусе -899 гена IL - 1а были выявлены у 5 (14 %) из 35 человек и ни у одного пациента в локусе +3953 гена IL - ip. Во 2 - й группе больных (старше 50 лет) частота гомозиготных аллелей 1/1 была наибольшей, соответственно, 20 (50 %) из 40 в локусе -899 гена IL - 1а и 28 (70 %) из 40 в локусе +3953 гена IL - 1р (табл. 1).
Максимальная частота - 30 (86 %) из 35 гетерозиготных вариантов аллелей 1/2 обоих генов была выявлена у пациентов 1-й группы. Гомозиготные аллели 2/2 в обоих локусах были определены у 4 (10 %) из 40 пациентов 2-й
Распределение аллельных частот локусов 1Ь - 1а -899,- 1р +3953 у пациентов с пародонтитом и в контрольной группе, п (частота)
Группа 1Ь- 1а-899 1Ь- 1Р+3953 N
1/1 1/2 2/2 1/1 1/2 2/2
Контроль 12* (0,60)** 8 (0,40) 0 (0,00) 15 (0,75) 5 (0,25) 0 20
До 35 лет 5 (0,14) 30 (0,86) 0 (0,00) 0 (0,00) 30 (0,86) 5 (0,14) 35
Старше 50 лет 20 (0,50) 16 (0,40) 4 (0,10) 28 (0,70) 8 (0,20) 4 (0,10) 40
Всего 37 (0,389) 54 (0,568) 4 (0, 453) 43 (0,453) 43 (0,179) 9 (0,095) 95
группы и у 5 (14 %) пациентов 1-й группы в локусе +3953 гена 1Ь - 1р. большинство людей в контрольной группе 9 (45 %) обладали генотипом 1/1 по обоим изученным локусам генов ГЬ -1.
Генотипом с одним мутантным аллелем в локусе 1Ь - 1а -899 (1/2, 1/1) обладали 6 (30 %) людей контрольной группы. Еще трое (15 %) людей имели генотип (1/1, 1/2) с мутантным аллелем в локусе 1Ь - 1Р +3953. Генотипом 1/2, 1/2 по обоим изученным локусам генов 1Ь -1 обладали всего 2 (10 %) человека из группы людей со здоровым пародонтом. Ни один человек этой группы не обладал генотипом с сочетанием мутантных аллелей в гомозиготном состоянии. Частота комбинированного генотипа 1/2, 1/2 у пациентов 1-й группы была значительно выше - 25/35 (71 %), чем в контрольной группе людей со здоровым пародонтом - 2/20 (10 %), р = 0,0001. Она также была статистически достоверно выше по сравнению с частотой "положительного" генотипа 1/2,1/2 - 8/40 (20 %) у пациентов 2-й группы, р = 0,0001. Частота генотипа 1/2, 1/2 у пациентов 2-й группы отличалась незначительно от показателей контрольной группы, р = 0,540. Кроме этого генотип 1/2, 2/2 выявлен еще у 5 (14 %) пациентов 1-й группы, а генотип 2/2, 2/2 - у 4 (10 %) пациентов 2-й группы. У пациентов с "положительным" генотипом ГЬ - 1 наблюдалось увеличение часто-
ты выявления в содержимом пародонтальных карманов Р. intermedia - 29 (69 %) в 1,5 раза по сравнению с частотой - 15 (45 %) у пациентов с "отрицательным" генотипом (рткФ = 0,034). Частота идентификации Т. denticola у пациентов с "положительным" генотипом EL - 1 - 24 (58 %) также была в 1,5 раза выше, чем у пациентов с "отрицательным" генотипом - 13 (39 %), рте® = 0,047. Статистически значимые различия были также выявлены и для Р. gingivalis: 33 (79 %) и 14 (42 %), соответственно (ргк® = 0,001). С "положительным" генотипом IL - 1 было также связано повышенное содержание вирусов семейства Herpesviridae в пародонтальных карманах больных ХГП. Так частота выявления HSV 1 типа у 13 (31 %) пациентов с "положительным" генотипом была в 2,6 раза выше, чем у 4 (12 %) больных с "отрицательным" генотипом (рткф = 0,019), а EBV в 4,7 раза, соответственно у 12 (29 %) и 2 (6 %) пациентов, рте® = 0,006. Связь генотипа IL - 1 с курением не выявлена (ргк<ь = 0,437).
Итак, в обследованной нами группе людей частота генотипов 1/2, 1/2, 1/2, 2/2 и 2/2,2/2 локусов IL - 1а -899 и IL - Iß +3953 составила 46,3 %, что соответствует показателям, характерным для жителей Северной Европы. Мы считаем, что пациенты с данным генотипом относятся к группе риска заболевания тяжелыми формами пародонтита в более молодом возрасте по сравнению с лицами, имеющими "отрицательный" генотип.
У 171 человека: 48 пациентов в возрасте до 35 лет с устойчивым не поддающимся лечению ХГП тяжелой степени (1-я группа), 69 больных ХГП тяжелой степени старше 38 лет (2-я группа) и 54 здоровых человека в возрасте от 20 до 64 лет без видимых заболеваний пародонта (контрольная группа) проведено исследование аллельного полиморфизма генов HLA класса II (DRB1, DQA1, DQB1). Наиболее частыми специфичностями гена DRB1 у представителей контрольной группы были специфичности *01 (28,7 %), *15 (12,9 %), *11 (12,0 %), *03 (8,3 %); аллели локуса DQA1*0101 (30,6 %), *0501 (25,9 %), *0102 (17,6 %) и *0301 (9,3 %); DQB1 *0501 и *0602-8 (каждый 21,3 %), *0301 (20,4 %), *0201 (10,2%). У больных пародонтитом чаще всего выявляли специфичности *04
(17,9 %), *15 (15,8 %), *07 (12,4 %), *11 (11,5 %), *13 (7,7 %) и *01 (8,9 %); аллели локуса БОА1*0301 (21,8 %), *0102 (20,1 %), »0501 (18,4 %) и *0101 (11,1 %); 0<ЗВ1*0301 (20,9 %), *0602-8 (17,9 %), *0201 (14,9 %) и *0302 (12,4 %).
Установлено, что у больных пародонтитом наблюдалось снижение частоты специфичности 011В1 *01 и аллеля DQA1 *0101 (рс< 0,05) как в целом, так и в группах с различным течением заболевания. По-видимому, эти специфичности можно отнести к "протективным". У больных ХГП старше 38 лет (2-я группа) наблюдалось увеличение частоты специфичности Р1Ш1 *04 и аллеля БС>А1 *0301 (р сог < 0,05). Выявлены положительные ассоциации данной формы паро-донтита с этими показателями (Ш1 > 2). За счет высокой частоты встречаемости специфичности БИВ1 *04 и аллеля В<ЗА1 *0301 у пациентов 2-й группы наблюдалась тенденция к увеличению их частоты в целом у обследованных больных пародонтитом.
Нами также были выявлены некоторые различия в системе НЬА у пациентов с различными формами пародонтита в зависимости от пола индивидуума. Причем у женщин, страдающих пародонтитом, но не у мужчин, различия были более значимыми.
Анализ распределения частот трехлокусных гаплотипов показал большую вариабельность, чем отдельных генов НЬА. При этом было показано, что характер распределения трехлокусных гаплотипов В11В1-ВС)А1-ВС®1 у обследованных нами представителей населения г. Москвы, в целом, соответствует таковому для представителей европеоидпой расы. Выявлено 26 наиболее часто встречающихся сочетаний гаплотипов у представителей контрольной группы, составляющих 84 % из всех определенных у них гаплотипов, 23 (73 %) варианта - у пациентов 1-й и 22 (93 %) —у пациентов 2-й группы. У пациентов, резистентных к пародонтиту, с наибольшей частотой (17,6 %) определяли гаплотип 011В1*01- БС>А1*0101 - 0<ЗВ1*0501. Отмечена тенденция к снижению его встречаемости до 6,3 % у пациентов 1-й группы (р = 0,024) и 8,7 % - у пациентов 2-й группы'(р = 0,052). Наиболее сильные отклонения были показаны для гаплотипа 011В1*04 - БС)А1*0301 - БС®1*0302, частота встречаемости которо-
го у пациентов 2-й группы была больше в 5,4 раза, чем в контрольной группе (Peor= 0,052) и 3,2 раза, чем в 1-й группе (р = 0,009, рСОг = 0,52).
Кроме этого нами были выявлены различия в распределении частот спе-цифичностей локуса HLA - DRB1 у пациентов с ХГП при наличии (1-я группа) или отсутствии (2-я группа) в пародонталышх карманах генетических маркеров герпесвирусов.
Относительная частота выявления "протективной" специфичности DRB1* 01 у пациентов 2-й группы (11 %) была меньше, чем у здоровых людей (29 %) более, чем в два раза, а у пациентов 1-й группы (4,3 %) - в 6,7 раза (р = 0,0001, рСОг- 0,0013). Положительные ассоциации специфичности DRB1* 04 с клиническими проявлениями пародонтита были выявлены только у пациентов 1-й группы. Так, частота выявления этой специфичности у людей со здоровьм пародонтом составляла 7 %, у пациентов, не инфицированных ГВ - 12 %, а у пациентов с идентифицированными вирусами - 31 % (рСОт:= 0,012). Разница частот выявления других специфичностей локуса DRB1 у пациентов обследованных групп была статистически не достоверной.
Увеличение частоты аллеля DQA1 *0301 у пациентов с ХГП было обусловлено в большей степени частотой его определения у пациентов 1-й группы (31,4 %), чем у пациентов 2-й группы (17,7 %), по сравнению со здоровьми людьми (11 %). Разница частот выявления аллеля DQA1 *0301 у пациентов обследованных групп была статистически достоверной (р = 0,03, RR = 2,13, ДИ: 1,12; 3,6). Ни у одного пациента 1-й группы не был выявлен аллель DQA1 *0401, в тоже время у пациентов 2-й группы его выявили с частотой 5,5 %, р = 0,08. Статистически достоверные различия в частоте аллелей локуса HLA -DQB1 у пациентов разных групп не были выявлены, хотя и была установлена тенденция увеличения частоты аллеля DQB1 *0302 у пациентов 1-й группы (22,8 %) по сравнению с пациентами 2-й группы (9,7 %), р = 0,017, рсог= 0,204. Частота аллеля DQB1 *0501 у пациентов 1-й группы составила 5,7 %, у представителей контрольной группы - 21,3 %, а у пациентов 2-й группы - 17 %, то
есть была, соответственно ниже в 3,7 раза (р = 0,019, рсог= 0,220) и 3 раза (р = 0,03, рсог= 0,36).
Таким образом, из полученных нами результатов следует, что специфичность НЬА-ГЖВ] *04 и аллель В(2А1 *0301 могут являться "маркерами риска" ХГП, ассоциированного с вирусами семейства Негреяутске, а "протективны-ми" свойствами, обладают специфичность НЬА-БВД51 *01, аллель локуса БС)А1 *0501 и Б(ЗВ1 *0501. В связи с этим, можно предположить, что выявленные ассоциации специфичности Б11В1*04 с ХГП, возможно, связаны с доклиническими проявлениями аутоиммунных процессов, индуцированных вирусами.
Чтобы обосновать критерии определения микробиологических и иммуно-генетических индикаторов риска генерализованного пародонтита, необходимых для оптимизации диагностики и прогнозирования характера течения воспалительных заболеваний пародонта, мы провели исследования с помощью методов статистического моделирования. С этой целью мы выделили предикторы - переменные, на основе которых можно было бы предсказывать интересующие нас признаки, в частности, глубину пародонтального кармана (ПК) или степень тяжести пародонтита. В первоначальный список предикторов включили 20 микробиологических и иммуногенетических показателей, имеющих наиболее высокие значения при пародонтите (оценены с помощью критерия хи - квадрат и ОШ), возможно, влияющих на изменение глубины ПК и клинический диагноз. Для этих признаков была вычислена корреляционная матрица, из которой следовало, что многие из предикоторов значимо коррелировали между собой, особенно бактерии с бактериями и генетические показатели с генетическими. Так, были выявлены корреляционные связи каждого вида пародонтопатогенов с десятью - двенадцатью, а Р. gingivalis - со всеми показателями. С вирусами коррелировали пять - семь показателей, с иммуногенетическими признаками - восемь - пятнадцать показателей. Чтобы избежать неустойчивости результатов мы
агрегировали предикторы с помощью метода главных компонент и факторного анализа, которые позволяют большое число переменных свести к меньшему количеству независимых влияющих величин, называемых факторами. При этом в один фактор объединяются переменные, сильно коррелирующие между собой. Переменные из разных факторов слабо коррелируют между собой.
После применения метода главных компонент и вращения факторов были выделены 4 общих фактора, которые могли бы объяснить связи между наблюдаемыми признаками. Были введены 4 новые переменные: 1. -"Бактерии", 2. — "Предрасп.", 3. - "Протект.", 4. - "Вирусы", которым присвоили коды от 0 (при отсутствии признака) до 3 (при наличии всех признаков).
Для изучения взаимосвязи глубины пародонтального кармана и определенных выше факторов использовали модель линейной регрессии, которую рассчитывали исходя из того, что глубина пародонтального кармана (ПК) является откликом, а "Бактерии", "Вирусы", "Протект.", "Предрасп." - предикторами агрегированных переменных. Статистический анализ показал, что рассчитанная регрессия являлась значимой на уровне 0,001. При этом все предикторы также были значимыми на уровне 0,05.
■ На основе стандартизированных коэффициентов (бета), указывающих на важность независимых переменных, вовлеченных в регрессионное уравнение, было сделано заключение, что три фактора - "Бактерии", "Вирусы" и "Предрасп" (гены, ассоциированные с пародонтитом) значимо связаны с увеличением глубины пародонтального кармана. При этом сильнее всего на этот показатель влиял предиктор "Бактерии", несколько менее - предиктор "Вирусы" и еще меньше - фактор "Предрасп". Отрицательные регрессионные коэффициенты фактора "Протект" - 0,162 (В) и - 0,134 (бета) свидетельствовали о том, что данный фактор может способствовать уменьшению глубины пародонтального кармана (табл. 2).
Коэффициенты линейной регрессии зависимой переменной - глубины пародонтального кармана
Модель Нестандартизи-ровашше коэффициенты Стандартизированные коэффициенты t значимость
В стандартная ошибка бета
1 (константа) 3,040 0,239 12,454 0,000
Бактерии 0,848 0,145 0,392 5,863 0,000
Вирусы 0,935 0,235 0,264 3,976 0,000
Протект -0,162 0,083 -0,134 -1,949 0,033
Предрасп 0,243 0,090 0,182 2,701 0,008
Таким образом, на основании проведенного анализа мы пришли к выводу, что линейная регрессионная модель:
ПК (мм) = 3,04 + 0,848*Бакт. + 0,935*Вирусы - 0,162*Протект. + 0,243*Предрасп.
достаточно хорошо описывает зависимость отклика ПК от предикторов, поэтому с ее помощью можно рассчитать предполагаемую глубину пародонтального кармана (мм) в участке обследования.
С целью изучения зависимости степени тяжести заболевания ("Диагноз") от агрегированных предикторов мы использовали модель полиномиальной логистической регрессии с упорядоченным откликом (ordinal regression): "Диагноз" - отклик, а "Бактерии", "Вирусы", "Протект.", "Предрасп." - предикторы. В качестве предикторов использовали микробиологические и иммуногенетиче-ские показатели 160 пациентов с XI11. Приближение регрессионной модели оценивали при помощи функции максимального правдоподобия, которая оказалась статистически значимой на уровне 0,001.
Отклик "Диагноз" принимал следующие значения: 0 - здоровый пародонт (контрольная группа), 1 - легкая степень заболевания, 2 - средняя степень заболевания, 3 — тяжелая степень заболевания. Были рассчитаны оценки параметров регрессии (табл. 3). Каждой категории зависимых переменных и каждой категории факторов сопоставлена оценка параметра регрессии, причём оценки для соответствующих категорий высших порядков являются дублирующими и поэтому приравнены к нулю. Оценки параметров регрессии для зависимой переменной являются пороговыми оценками, которые для факторов называются оценками положения. Оценки положения дают возможность толковать влияние факторов и указывают на степень этого влияния. Было показано, что значимое на уровне 5 % влияние оказывали следующие предикторы: "Бактерии" на уровне 0, "Вирусы" на уровнях 0 и 1, "Протект." на уровне 1, "Предрасп." на уровнях 0, 1,2. Поэтому все данные показатели мы могли использовать при дальнейших расчетах. При этом знак оценки регрессионного коэффициента предиктора "Протект." отличался от знака остальных, значимо отличных от нуля, оценок коэффициентов. Это могло свидетельствовать о том, что наличие у человека данного признака может препятствовать развитию пародонтита.
Значения предсказанной степени тяжести заболевания и вероятности прогноза для всех 160 случаев были внесены в исходную базу данных, и на их основе была вычислена таблица сопряженности признаков прогнозируемых и наблюдаемых категорий диагноза. Категория 0 (здоровый пародонт) была правильно предсказана в 47 (92 %) из 51 случаев, но в 4 (8 %) случаях люди со здоровым пародонтом были отнесены в группу пациентов со средней степенью тяжести XI11. Легкая степень заболевания (категория 1) была правильно диагностирована в 10 (55,5 %) го 18 случаев, 3 (17 %) человека были отнесены к здоровым людям, 2 (11 %) пациентам был поставлен неправильный диагноз ХГП средней степени и 3 (44 %) - XI11 тяжелой степени. Категория 2 (средняя степень заболевания) была правильно предсказана в 24 (54,5 %) случаев, 8 (18 %) человек были отнесены к здоровым, а 12 (27 %) - в группу людей, страдаю-
Оценки параметров регрессии
Оценки регрессионных коэффициентов Ст. Ош. Статистика Вальда Зна-чи-мо-сть 95 % доверительный интервал
Нижний предел Верхний предел
и Диагпоз = 0,00 в. д Диагноз = 1,00 Диагноз = 2,00 -25,700 1,596 259,364 1 0,000 - 28,836 - 22,579
-25,309 1,589 259,723 1 0,000 -28,424 -22,195
-23,383 1,542 229,933 1 0,000 - 26,406 - 20,361
Бактерии = 0,00 Бактерии = 1,00 Бактерии = 2,00 и 3 Бактерии = 3,00 <5 | Вирусы = 0,00 д Вирусы = 1,00 Вирусы = 2,00 Вирусы = 3,00 - 2,459 0,661 13,818 1 0,000 -3,755 -1,162
0,074 0,707 0,011 1 0,916 -1,311 1,460
- 0,409 0,829 0,244 1 0,621 - 2,033 1,214
0" 0
- 22,557 1,319 292,407 1 0,000 - 25,142 -19,972
-21,656 1,353 256,214 1 0,000 -24,307 -19,004
-19,859 0,000 1 -19,859 -19,859
О1 0
Протек = 0,00 Протек = 1,00 Протек = 2,00 Протек = 3,00 Протек = 4,00 Предрасп = 0,00 Предрасп = 1,00 Предрасп = 2,00 Предрасп = 3,00 Предрасп = 4,00 0,543 0,417 1,700 1 0,192 -0,273 1,360
1,782 0,916 3,783 1 0,052 - 0,014 3,577
0,861 0,664 1,681 1 0,195 - 0,440 2,102
-1,195 1,058 1,274 1 0,259 -3,269 0,879
0" 0
-1,517 0,512 8,780 1 0,003 -2,520 -0,514
-1,635 0,731 4,997 1 0,025 -3,068 - 0,201
-2,244 1,036 4,690 1 0,030 -4,274 - 0,213
-0,453 0,733 0,382 1 0,536 -1,890 0,983
0" 0
Связывающая функция: Логит.
Примечание: а - данный параметр обнуляется, так как он является дублирующим. Ст. Ош. - стандартная ошибка.
щих ХГП тяжелой степени. Категория 3 (тяжелая степень заболевания) была правильно предсказана в 34 (75,5 %) из 45 случаев; в контрольную группу попали 2 (4 %), 1-ю (легкая степень) - 4 (9 %) и 2-ю (средняя степень) - 5 (11 %) пациентов.
Таким образом, полиномиальная логистическая регрессия с упорядоченным откликом позволяет достаточно хорошо предсказывать категории 0 (здоровый пародонт) и 3 (тяжелая степень) и удовлетворительно - категории 1 (легкая степень) и 2 (средняя степень). Скорее всего, это можно объяснить не достаточным количеством данных: в частности, в категории 1 (легкая степень) было только 18 человек.
На практике эту модель можно использовать для определения вероятности постановки диагноза ХГП или его отсутствия на основе микробиологических и иммуногенетических показателей с помощью вычисленных оценок параметров логистической полиномиальной регрессии с упорядоченным откликом. Математическое значение оценок параметров регрессии заключается в том, что на них основе могут быть вычислены кумулятивные (суммарные) вероятности для категорий независимых переменных.
Применение этих моделей может служить хорошим дополнительным лабораторным показателем, позволяющим повысить эффективность диагностики воспалительных заболеваний полости рта, которая в настоящее время проводится врачами-стоматологами не всегда в полном объеме и с невысокой точностью.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В результате проведенных нами исследований доказана этиологическая роль Р. intermedia, В. forsythus, Т. denticola, Р. gingivalis и А. acti-nomycetemcomitans в развитии воспалительных процессов в области зубодес-невой борозды (по данным сравнительного анализа результатов ПЦР и бакте-
риологического исследования с использованием анаэробной техники культивирования). Причем В. forsythus и Т. denticola с помощью традиционных методов микробиологических исследований в отечественной практике ранее не выявляли. Проведенные нами исследования позволяют судить о возможности введения новой отечественной диагностической системы "Мультидент - 5" в состав средств для комплексного обследования больных с заболеваниями па-родонта и ЧЛО. Получена развернутая клинико-лабораторная характеристика показателей ХГП на основании изучения микробиологических и иммуногене-тических параметров.
Выделены следующие наиболее значимые критерии для диагностики ХГП и прогнозирования осложненного течения воспалительного процесса на основании применения молекулярно-генетических исследований:
- для подтверждения диагноза генерализованного пародонтита не достаточно идентификации одного или двух видов бактерий, кроме Р. gingivalis, или комбинации В. forsythus и Т. denticola;
- пародонтопатогенные виды бактерий Р. intermedia, В. forsythus, Т. denticola и А. actinomycetemcomitans, являются индикаторами риска развития ХГП, их присутствие необходимо, но не достаточно для развития острого воспаления;
- В. forsythus является индикатором риска кровоточивости десен;
- факторами риска ХГП являются Р. gingivalis или комбинации - В. forsythus и Т. denticola; Р. intermedia, В. forsythus и Р. gingivalis; Р. intermedia, В. forsythus, Т. denticola и Р. gingivalis; Р. intermedia, В. forsythus, Т. denticola, Р. gingivalis и А. actinomycetemcomitans;
- наличие в пародонтальных карманах вирусов семейства Herpesviridae: HSV 1 и HSV 2 типов, EBV и CMV - является индикатором прогрессирования ХГП;
- повышенные уровни антител класса G к HSV 1 типа или HSV 2 типа, антител класса G к CMV и ядерному белку EBNA-1 р72 в сыворотке крови боль-
ных ХГП, свидетельствуют об иммунодефицитном состоянии и необходимости исследования иммунного статуса и проведения ПЦР - диагностики;
- пациенты с полиморфным генотипом 1Ь - 1а (-899) С—»Т, 1Ь - 10 (+3953) С—*Т относятся к группе риска заболевания тяжелыми формами пародонтита в возрасте до 35 лет, по сравнению с лицами, не обладающими данным генотипом;
- специфичность НЬА-01Ш1 *04 и аллель Б(ЗА1 *0301 являются индикаторами риска ХГП, ассоциированного с вирусами семейства Негрезутёае;
- специфичность НЬА-1ЖВ1 *01, аллели локуса 1X3А1 *0501 и Е>С>В1 *0501 ассоциированы с устойчивостью к пародонтиту;
- курение приводит к увеличению видового состава пародонтопатогенов в содержимом пародонтальных карманов, не зависимо от степени тяжести ХГП и полиморфизма генов 1Ь - 1а -899,1Ь - 1Р +3953.
Разработанные нами алгоритмы диагностики степени тяжести ХГП на основе микробиологических и иммуногенетических показателей с помощью полиномиальной логистической регрессии с упорядоченным откликом, на наш взгляд, можно использовать в качестве дополнительного диагностического средства, позволяющего оценивать результаты молекулярно - генетических анализов.
Исследования на молекулярном уровне позволят повысить надежность диагностической информации, связанной с оценкой риска генерализованного пародонтита и, таким образом, определить роль пародонтопатогенов и иммуногене-тической детерминированности макроорганизма в развитии и прогрессировании заболевания. Подобные данные позволят стоматологу планировать индивидуальное лечение, соответствующее потребностям пациента, более эффективное с экономической точки зрения, за счёт минимизации излишнего или недостаточного терапевтического и хирургического вмешательства; исключить возможность повторного инфицирования и улучшить качество профилактических мероприятий.
37
ВЫВОДЫ
1. Впервые в Российской Федерации разработана тест - система "Мульти-дент - 5", позволяющая определять с высокой точностью ДНК пародон-топатогенных микробов Prevotella intermedia sensu stricto, Bacteroides for-sythus, Treponema denticola, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphy-romonas gingivalis с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции.
2. Этиологическая диагностика хронического генерализованного пародон-тита и других воспалительных заболеваний пародонта и челюстно -лицевой области должна включать современные технологии молекуляр-но - биологических и иммуноферментных исследований.
3. Методами генодиагностики установлена взаимосвязь выявления с высокой частотой вирулентных видов бактерий (P. gingivalis, P. intermedia, В. forsythus, A. actinomycetemcomitans и Т. denticola) и их ассоциаций с клиническими параметрами у больных хроническим генерализованным па-родонтитом, но не у лиц со здоровым (интактным) пародонтом. Факторами риска хронического генерализованного пародонтита являются Р. gingivalis или ассоциации В. forsythus и Т. denticola; P. intermedia, В. forsythus и P. gingivalis; P. intermedia, В. forsythus, Т. denticola и Р. gingivalis; P. intermedia, В. forsythus, Т. denticola, P. gingivalis и A. actinomycetemcomitans.
4. Наличие в пародонтальных карманах вирусов семейства Herpesviridae: HSV 1 и HSV 2 типов, EBV и, в меньшей степени, CMV - является индикатором прогрессирования хронического генерализованного пародонтита.
5. Специфичность HLA-DRB1 *04 и аллель DQA1 *0301 являются маркерами риска хронического генерализованного пародонтита у представителей смешанной популяции г. Москвы. Аллели DRB1 *01 и DQA1 *0101
ассоциированы с устойчивостью к различным формам генерализованного пародонтита.
6. Пациенты с полиморфным генотипом 1Ь - 1а (-899) С—>Т, 1Ь - 1(3 (+3953) С—>Т относятся к группе риска заболевания тяжелыми формами пародонтита в возрасте до 35 лет. Относительная частота выявления генотипа 1Ь - 1а (-899) С-»Т, 1Ь - 1(3 (+3953) С—>Т у больных хроническим генерализованным пародонтитом в возрасте до 35 лет составляет 86 %, у больных старше 50 лет -30%и 10%-у людей со здоровым пародонтом.
7. Обоснованы критерии определения микробиологических и иммуногене-тических индикаторов риска генерализованного пародонтита для оптимизации диагностики и прогнозирования характера течения воспалительных заболеваний пародонта с помощью однофакторных и многофакторных методов статистического анализа.
8. Предложен алгоритм прогнозирования глубины пародонтального кармана основе линейной регрессионной модели, в которой предикторами являются показатели, отражающие присутствие в области зубодесневой борозды определенных видов пародонтопатогенных бактерий или вирусов в различных сочетаниях, а также иммуногенетические показатели пациента, отражающие особенности аллельного полиморфизма генов НЬА класса II.
9. Разработан алгоритм диагностики степени тяжести хронического генерализованного пародонтита на основе микробиологических и иммуноге-нетических показателей с помощью полиномиальной логистической регрессии с упорядоченным откликом.
10. Предложен алгоритм применения молекулярно - биологических и имму-ноферментных методов диагностики герпес - вирусной инфекции, ассоциированной с ХГП.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Для повышения эффективности диагностики и контроля лечения хронического генерализованного пародонтита и других воспалительных заболеваний ротовой полости и челюстно - лицевой области, а также с целью изучения роли пародонтопатогенной флоры при системных заболеваниях организма человека рекомендуется использовать набор реактивов "Мультидент - 5", который позволяет определять ДНК пародонтопатогенных микробов Р. intermedia, В. for-sythus, Т. denticola, А. actinomycetemcomitans, Р. gingivalis с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции.
2. Показаниями для идентификации пародонтопатогенов с помощью набора реактивов "Мультидент - 5" являются:
- все случаи пародонтита у взрослых, а также подростковые и юношеские па-родонтиты, характеризующиеся упорным и быстро прогрессирующим течением. Выявление вида возбудителей позволит провести правильный подбор антибактериальных препаратов и контролировать эффективность их применения в случае необходимости;
- тяжелые формы генерализованного пародонтита взрослых, устойчивые и плохо под дающиеся лечению. Выявление вида пародонтопатогенных бактерий в этих случаях поможет контролировать терапевтический успех после механического лечения, применения средств профессиональной гигиены или курса антибиотиков и делают возможным раннее диагностирование рецидивов в процессе наблюдения;
- обследование членов семьи больного, у которого выявлены пародонтопато-генные бактерии, особенно Р. gingivalis и А. actinomycetemcomitans, обладающих высокой контагиозностью для контактирующих лиц, с целью антибактериальной профилактики повторного заражения членов семьи больного;
- в случаях сложного протезирования или внутрикостной имплантации зубов, связанных с большими финансовыми затратами, анализ видового состава пато-
генов может быть полезен для назначения адекватной антибактериальной профилактики на стадии подготовки к этим видам лечения;
- относительным показанием следует считать все ситуации, при которых оправдано получение объективных данных о наступлении стойкой ремиссии, то есть, после проведения курса пародонтологического лечения, особенно, с применением лоскутных операций, коррекции прикуса в практике ортодонтии и т.п. Отсутствие пародонтопатогенных бактерий в этих случаях позволит более уверенно гарантировать стабилизацию состояния больного, а выявление -своевременно назначить адекватное лечение.
3. Клиническую диагностику различных проявлений деструктивных форм хронического генерализованного пародонтита рекомендуется сочетать с лабораторными показателями и алгоритмом определения глубины пародонтального кармана с помощью линейной регрессионной модели:
ПК (мм) = 3,04 + 0,848*Бакт. + 0,935*Вирусы - 0,162*Протект + 0,243 *Предрасп,
где "Бакт.", "Вирусы" - агрегированные показатели наличия или отсутствия пародонтопатогенных бактерий и/или вирусов, "Протект." и "Предрасп." -определенные аллели НЬА генов и их трехлокусные сочетания.
4. С целью уточнения диагноза и прогнозирования тяжелых форм хронического генерализованного пародонтита рекомендуется применять полиномиальную логистическую регрессию с упорядоченным откликом, в которую включены предикторы: "Бактерии", "Вирусы" "Протект." и "Предрасп". Данный алгоритм позволяет предсказывать отсутствие деструктивных изменений пародонта (категория 0) на уровне 92 %, среднюю степень тяжести ХГП (категория 2) на уровне 56 %, легкую степень ХГП (категорию 1) на уровне 55 % и тяжелую степень ХГП (категорию 3) на уровне 76 %.
5. В качестве экспресс - диагностики различных форм воспалительных заболеваний полости рта рекомендуется проводить молекулярно-биологическое определение маркеров пародонтопатогенов и вирусов семейства Нефевутдае
и полиномиальную логистическую регрессию с упорядоченным откликом, которая позволяет предсказывать категорию 0 (здоровый пародонт) на уровне 98 %, - категорию 2 (средняя степень тяжести ХГП) на уровне 47 %, и категорию 3 (тяжелая степень ХГП) на уровне 24 %, либо полиномиальную логистическую регрессию с упорядоченным откликом, где предикторами являются "Бактерии" и "Вирусы", и позволяет предсказывать категорию 0 (здоровый пародонт и легкая степень ХГП) на уровне 82 %, категорию 2 (средняя и тяжелая степени тяжести ХГП) на уровне 68 %.
6. Для диагностики хронического генерализованного пародонтита, ассоциированного с вирусами простого герпеса 1 и 2 типов, Эпштейн - Барра и/или ЦМВ, пациентам группы риска (определяемой по данным анамнеза, клиническим и рентгенологическим признакам), а также при отрицательных результатах на пародонтопатогены предлагается проводить дополнительные лабораторные исследования по следующему алгоритму:
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Барер Г., Царев В., Николаева Е., Рамии С. Особенности микробной колонизации десны при сочетанной патологии пародонта и сахарного диабета 1 типа // «Cathedra» - стоматологическое образование. - 2004. - Т. 4, № 11. — С. 26-29.
2. Дмитриева JI.A., Теблоева JI.M., Гуревич К.Г., Золоева З.Э., Николаева E.H. Особенности изменения микрофлоры пародонтального кармана при применении озонотерапни // Пародонтология. - 2004. - № 4 (33). -С. 20-24.
3. Ефанов О.И., Царев В.Н., Николаева E.H., Волков А.Г., Дикопова Н.Ж. Изучение влияния апекс-фореза на микрофлору корневых каналов зубов с помощью ПЦР // «Cathedra» - стоматологическое образование. - 2006. - Т. 5, № 2. - С. 36 - 38.
4. Ефанов О.И., Царев В.Н., Волков А.Г., Николаева E.H., Дикопова Н.Ж., Носик A.C. Оценка антибактериальной активности апекс - фо-реза // Стоматология. - 2006. - Т. 85, № 5. - С. 20 - 23.
5. Ефанов О.И., Царев В.Н., Волков А.Г., Николаева E.H., Носик A.C., Дикопова Н.Ж. Антибактериальная эффективность различных видов трансканального воздействия постоянным током // Рос. Стоматол. журн. - 2008. - № 2. - С. 38 - 42.
6. Иванов С.Ю., Царев В.Н., Чувилкин В.И., Солощанский И.И., Николаева E.H. Диагностика возбудителей периимплантитов с помощью молекуляр-но-генетических методов // Человек и лекарство: Матер. - М., 2003 г. - С. 196.
7. Иванов С.Ю., Царев В.Н., Чувилкин В.И., Николаева E.H., Солощанский И.И. Оценка эффективности антибактериальной санации пациентов от возбудителей периимплантитов с помощью молекулярно-генетических методов // Мед. вест. МВД. - 2005. - № I. - С. 8 - 12.
8. Иванов С.Ю., Бизяев А.Ф., Царев В.Н., Николаева E.H., Алешанов К.А. Профилактика воспалительных осложнений стоматологической имплантации методом антисептических полосканий раствором "Гивалекс" // Мед. вест. МВД. - 2005. - № 2. - С. 40-43.
9. Максимовская Л.Н., Царев В.Н., Рунова Г.С., Николаева E.H., Фомичева Е.М., Новикова A.C. Диагностика и лечение хронического генерализованного пародонтита, ассоциированного с цитомегало- и герпесвирусной инфекцией // Образование, наука и практика в стоматологии. - М., 2006. - С. 98 - 99.
10. Митронин A.B., Царева Т.В., Николаева E.H., Митронин В.А., Фомичева Е.М. Оценка антимикробной активности гидроксида кальция в лечении периодонтита // Форум стоматологии. — 2004. - № 1 (13). - С. 8 - 13.
11. Митронин A.B., Царев В.Н., Николаева E.H., Новикова A.C. Использование полимеразной цепной реакции в диагностике верхушечного периодонтита // Образование, наука и практика в стоматологии. - М., 2005. - С. 194 -197.
12. Николаева E.H., Царев В.Н., Плахтий Л.Я. Генетический полиморфизм генов IL-1 а и IL - lß у больных с воспалительными заболеваниями пародон-та // Владикавказ, медико - стоматол. вестн. - 2003. - Т. 3, № 6. - С. 159 — 161.
13. Николаева E.H., Царев В.Н., Земляная Н.Ю., Щербо С.Н., Воронцова Н.И., Руднева Е.В., Стецюк И.В. Лабораторная диагностика инфекционных па-родонтитов // Человек и лекарство: Матер. - М., 2004. - С. 465.
14. Николаева E.H., Царев В.Н., Щербо С.Н., Земляная Н.Ю., Воронцова Н.И. Опыт разработки стандартного метода молекулярно-генетической диагностики и оценки эффективности лечения заболеваний пародонта // Форум стоматологии. - 2004. - № 1 (13). - С. 20 - 24.
15. Николаева E.H., Царев В.Н., Щербо С.Н., Земляная Н.Ю., Воронцова Н.И. Применение молекулярно генетических методов исследований в
диагностике пародонтита // Институт стоматологии. — 2004. - № 4 (25). -С. 63-66.
16. Николаева E.H., Алексеева Ю.В., Царев В.Н., Агапов B.C. Применение молекулярно-генетических методов исследования в диагностике гнойно-воспалительных заболеваний челюстно - лицевой области // Стоматология для всех. - 2004. - № 2. - С. 46 - 49.
17. Николаева E.H., Царев В.Н., Щербо С.Н. Разработка и применение отечественной тест-системы для диагностики пародонтита с помощью мультиплексной ГЩР // Съезд о-ва биотехнологов России, 2-й: Матер, докл. - М.,
2004.-С. 121.
18. Николаева E.H., Царев В.Н., Щербо С.Н. Разработка и применение отечественной тест-системы для диагностики пародонтита с помощью мультиплексной ПЦР // Съезд о-ва биотехнологов России, 2-й: Тр. 2004. - М., -
2005.-С. 173- 177.
19. Николаева E.H., Царев В.Н., Бизяев А.Ф., Алешанов К.А. Эффективность использования антисептических полосканий раствором "Гивалекса" в комплексной профилактике и лечении воспалительных осложнений при операциях в полости рта // Медицинский алфавит. Стоматология. - 2005. -№ 1. - С. 24-27.
20. Николаева E.H., Царев В.Н., Плахтий Л.Я., Ипполитов Е.В., Валиева М.А. Сравнительные результаты выявления резистентных штаммов анаэробных бактерий в Москве и Владикавказе с помощью молекулярно-генетического метода // Сезд о-ва биотехнологов России, 4-й: Матер. - Пущино. - 2006. -С. 181-182.
21. Николаева E.H., Царев В.Н., Горбачева Е.А., Ипполитов Е.В. Особенности полиморфизма генов HLA II класса у пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта // Вестн. биотехнологии и физ. - хим. биологии. -
2006.-Т. 2.,№2. -С. 21-28.
22. Николаева E.H., Царев В.Н., Горбачева Е.А., Ипполитов Е.В., Логунов H.A. Полиморфизм генов HLA II класса в норме и у пациентов с вое-
палительными заболеваниями пародонта (Часть I) // Институт стоматологии. - 2006. - № 4 (33). - С. 58 - 60.
23. Николаева E.H., Царев В.Н., Горбачева Е.А., Ипполитов Е.В., Логунов H.A. Полиморфизм генов HLA II класса в норме и у пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта (Часть II) // Институт стоматологии. - 2007. - № 1 (34). - С. 74 - 75.
24. Николаева E.H., Царев В.Н., Лагутин М.Б. Алгоритм диагностики генерализованного пародонтита на основе микробиологических и иммуногене-тических показателей // Стоматолог. - 2007. - № 8. - С. 35 - 40.
25. Николаева E.H., Царев В.Н., Лагутин М.Б. Разработка алгоритма диагностики хронического генерализованного пародонтита на основе микробиологических и иммуногенетических показателей / E.H. Николаева, В.Н. Царев, М.Б. Лагутин //«Cathedra» - стоматологическое образование. — 2007. -Т. 6, № 3. - С. 34-40.
26. Остроухова A.A., Николаева E.H., Тихонов A.A. Эффективность плазменной стерилизации инструментов, применяемых в ортодонтии // Ортодонтия. - 2003. - № 1. - С. 22 - 26.
27. Патент РФ № 2306341. Набор реагентов для определения ДНК пародонто-патогенных микробов Prevotella intermedia sensu stricto, Bacteroides for-sythus, Treponema denticola, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphy-romonas gingivalis при помощи мультиплексной полимеразной цепной реакции. Царев В. Н., Николаева Е. Н., Земляная Н. Ю., Воронцова Н. И., Шеремет О. К., Иванова Н. В. / ГОУ ВПО "Московский медико-стоматологический университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию", ООО НПФ "Генлаб", опубл. 20.09.2007 Бюл. "Изобретения, полезные модели", 2007, № 26.
28. Плахтий Л.Я., Давыдова М.М., Николаева E.H. и др. Учебное пособие по иммунологии: Учеб. пособие для студентов мед. ВУЗов - 3-е изд. испр. и доп. - М.: Изд-во ГОУ ВПО МГМСУ, 2006. - 55 с.
29. Рабочая тетрадь-практикум по микробиологии, иммунологии и вирусологии: Учеб. пособие для студентов стоматологического и лечебного ф-тов / под ред. В.Н. Царева.- М.: Изд-во «Карпов», 2006. - 99 с.
30. Романов А.Е., Николаева E.H., Фомичева Е.М., Золоева З.Э., Жамал-динова A.B., Дмитриева Л.А. Характеристика лейкоцитарных маркеров у больных с хроническим генерализованным пародонтитом в фазе обострения // Стоматология. - 2003. - № 6. - С. 13 -16.
31. Руководство к практическим занятиям с иллюстрированными ситуационными заданиями по микробиологии, иммунологии и вирусологии: Учеб. пособие для студентов мед. ВУЗов / под ред. A.A. Воробьева и В.Н. Царева. - М.: МИА, 2008. - 320с.
32. Фомичева Е.М., Николаева E.H., Горбачева Е.А., Логунов H.A., Царева Т.В. Выявление герпесвирусной инфекции при генерализованном паро-донтите и тактика противовирусного лечения // Съезд о-ва биотехнологов России, 4-й: Матер - Пущино, 2006. - С. 276 - 277.
33. Царёв В.Н., Николаева E.H., Максимовский Ю.М., Плахтнй Л.А. Носик A.C. Перспективы применения молекулярно-генетических методов исследований в диагностике пародонтита // Рос. Стоматол. журн. -
2002.- №5. -С. 6 -9.
34. Царев В.Н., Покровский В.Н., Давыдова М.М., Тихонова С.И., Николаева E.H. Экзаменационные тестовые задания по микробиологии, иммунологии и вирусологии: Учеб. пособие для студентов мед. ВУЗов. М.: ВУНМЦ,
2003.-74 с.
35. Царев В.Н., Митронин A.B., Максимовский Ю.М., Ушаков Р.В., Николаева E.H., Тютюник Ю.Л. Диагностика хронического периодонтита с помощью полнмеразной цепной реакции и перспективы эндодон-тического применения макролидов и цефалоспоринов // Стоматология для всех. - 2004. - № 1. - С. 8 - 11.
36. Царев В.Н., Плахтий Л.Я., Николаева E.H. и др. Диагностика хронического генерализованного пародонтита молекулярно- генетическими и иммуноло-
гическими методами: Методические рекомендации. - М.: МЗ РФ, 2004. -56 с.
37. Царев В.Н., Митронин A.B., Николаева E.H., Щербо С.Н., Земляная Н.Ю., Воронцова Н.И. Трансканальное использование антибиотиков нового поколения в лечении хронического периодон тита и оценки их эффективности с применением генодиагностики //«Cathedra» - стоматологическое образование. - 2004. - Т. 4, № 9. - С. 34 - 40.
38. Царев В.Н., Николаева E.H., Ушаков Р.В. и др. Применение генодиагностики для контроля персистенции пародонтопатогенных бактерий в полости рта здоровых и больных пародонтитом людей // Стоматолог. - 2004. -№8.-С. 30-33.
39. Царев В.Н., Николаева E.H., Максимовская Л.Н. и др. Генодиагностика вирусов семейства Herpesviridae у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом // Образование, наука и практика в стоматологии. - М., 2005.-С. 222-224.
40. Царев В.Н., Николаева E.H. Микробиологическая диагностика воспалительных заболеваний полости рта и челюстно-лицевой области с помощью отечественной системы "Мульти - Дент" // Образование, наука и практика в стоматологии. - М., 2005. - С. 224 - 226.
41. Царев В.Н., Николаева E.H., Носик A.C., Щербо С.Н. Современные методы микробиологической диагностики заболеваний тканей пародонта // Медицинский алфавит. Стоматология. - 2005. - № 2. - С. 26 - 29.
42. Царев В.Н., Николаева E.H., Ипполитов Е.В., Горбачева Е.А. Выявление резистентных штаммов анаэробных бактерий с помощью ПЦР в стоматологической практике // Междунар. конгр. MAKMAX/ASM по антимикробной терапии, 8-й: Матер. - М., 2006. - С. 29 - 30.
43. Царев В.Н., Николаева E.H., Плахтий Л.Я. и др. Диагностика и прогнозирование течения заболеваний пародонта с применением молекулярно-биологических и иммуноферментных систем // Медицинская технология № ФС -2006/043-У от 10 апреля 2006 г.
44. Царев В.Н., Николаева E.H., Фомичева Е.М., Максимовская JI.H., Рунова Г.С., Новикова С.Т., Логунов H.H. Диагностика хронического генерализованного пародонтита, ассоциированого с цитомегало-' и герпесвирусной инфекцией // Стоматология для всех. - 2006. - № 3. - С. 6 - 12.
45. Царев В.Н., Барер Г.М., Янушевич О.О., Николаева E.H., Салем Рамин, Парунова C.B., Горбачева Е.А., Ипполитов Е.В. Клинико-микробные аспекты и контроль эффективности комплексного лечения воспалительных заболеваний пародонта у больных сахарным диабетом I типа // Стоматолог. - 2006. - № 4. - С. 40 - 46.
46. Царев В.Н., Николаева E.H., Носик A.C. Применение новых молеку-лярно-генетических систем для диагностики воспалительных заболеваний слизистой оболочки рта и пародонта // Жури. Микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 2006. - № 7. - С. 69 - 73.
47. Царев В.Н., Николаева E.H., Ипполитов Е.В., Горбачева Е.А. Полиморфизм генов HLA II класса у пациентов с хроническим генерализованным пародонтитом, ассоциированным с вирусами семейства Herpesviridae II «Cathedra» - стоматологическое образование. - 2007. - Т.6, № 1. - С. 50 -53.
48. Царев В.Н. Николаева E.H., Плахтий Л.Я. Сравнительное изучение резистентности анаэробных пародонтопатогенных бактерий к антибиотикам в Москве и Владикавказе // Образование, наука и практика в стоматологии. -М., 2007.-С. 217-219.
49. Царев В.Н., Николаева E.H. Аллельный полиморфизм генов ИЛ-1а и ИЛ-lß у больных с хроническими воспалительными заболеваниями пародонта // Вестн. РАМН. - 2007. - № 3. - С. 43 - 47.
50. Шишкина И.М., Ипполитов Е.В., Чиркова Т.Д., Николаева E.H. Значение пародонтопатогенной и стрептококковой флоры в развитии хронического катарального гингивита // Образование, наука и практика в стоматологии. -М., 2007.-С. 219-221.
51. Царев В.Н., Николаева E.H. Технологии генодиагностики в отечественной стоматологии // Стоматология. - 2007. - Xs 5. — С. 82 — 87.
52. Тарасенко С.В., Николаева E.H., Тарасенко И.В., Лазарихина Н.М., Царева Т.В. Клиническое обоснование применения Er,Cr:YSGG- лазера для хирургического лечения пациентов с хроническим генерализованным пародон-титом // Стоматолог. - 2008. - №2. - С.6 - 13.
53. Царев В.Н., Николаева E.H., Ипполитов Е.В. Технологии генодиагностики в отечественной стоматологии: выявление пародонтопатогенных анаэробов, хламидий, герпесвирусов и грибов // Образование, наука и практика в стоматологии. - М., 2008. - С. 152 - 154.
54. Царев В.Н., Ушаков Р.В., Николаева E.H., Староверова А.О., Яхьяев М.И. Выявление маркеров пародонтопатогенных бактерий у пациентов с патологией сердечно-сосудистой системы // Стоматолог. - 2008. - №3. - С. 14 -18.
55. Царев В.Н., Николаева E.H., Волченко Ф.Ф., Графова Т.И. и др. Частная микробиология: Учеб. пособие для студентов мед. ВУЗов УМО МЗ и CP РФ.-2007.-80 с.
56. Янушевич О.О., Крихели Н.И., Дмитриева Н.Г., Николаева E.H. Опыт применения отбеливающей зубной пасты, содержащей 10 % перекиси карбамида, в комплексном лечении галитоза // Стоматолог. - 2008. - № 6. - С. 22-26.
57. Янушевич О.О., Крихели Н.И., Николаева E.H. Применение гомеопатических препаратов в комплексном лечении воспалительных заболеваний па-родонта // Стоматология для всех. - 2008. - № 3. - С. 25 - 31.
Формат А5
Бумага офсетная N1-80 г/м2 Усл. печ. л. Тираж юо экз. Заказ № 64
Отпечатано в РИО МГМСУ Изд. лицензия ИД № 04993 от 04.06.01 года Москва, 103473, Делегатская ул., 20/1
Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Николаева, Елена Николаевна
Перечень условных обозначений.
Введение.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Концепция факторов риска заболеваний.
1.2. Микробы - факторы риска пародонтита.
1.2.1. Пародонтопатогенные бактерии - индикаторы риска 23 пародонтита.
1.2.2. Современные представления о роли вирусов семейства 41 Herpesviridae в этиопатогенезе пародонтита.
1.3. Генетические факторы риска пародонтита.
2. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Методы лабораторных исследований.
2.1.1 Забор исследуемого материала.
2.1.2. Определение ДНК Prevotella intermedia, Bacteroides for-sythus, Treponema denticola, Actinobacillus actinomy-cetemcomitans и Porphyromonas gingivalis с помощью набора реактивов "Мультидент - 5 ".
2.1.2.1. Выделение ДНК.
2.1.2.2. Амплификация ДНК.
2.1.2.3. Детекция продуктов амплификации.
2.1.3. Определение ДНК пародонтопатогенов с помощью набора реактивов "microDent®" ("Hain Diagnostica").
2.1.3.1. Полимеразная цепная реакция.
2.1.3.2. Выявление пародонтопатогенных бактерий методом обратной гибридизации.
2.1.4. Определение ДНК вирусов семейства Herpesviridae.
2.1.4.1. Идентификация ДНК CMV, HSV 1,2 и EBV с помощью
2.1.4.2. Детекция ДНК CMV, HSV 1,2 и EBV методом электрофореза в агарозном геле.
2.1.5. Типирование генов HLA.
2.1.5.1. Выделение ДНК из соскобов слизистой щеки.
2.1.5.2. Клонирование выделенной ДНК.
2.1.5.3. Регистрация результатов.
2.1.6. Изучение полиморфизма генов 1Ь-1аи1Ь-1[3.
2.1.6.1. Выделение ДНК из исследуемого образца.
2.1.6.2. Проведение ПЦР.
2.1.6.3. Детекция продуктов амплификации методом обратной гибридизации.
2.1.7. Микробиологическое исследование.
2.1.7.1. Забор исследуемого материала.
2.1.7.2. Выделение чистых культур и их идентификация.
2.1.8. Иммуноферментный анализ содержания антител к Human cytomegalovirus, Herpes simplex -1, 2 virus и Epstein - Barr virus (твердофазным методом) в сыворотке крови.
2.2. Методы клинического обследования пациентов.
2.2.1. Определение гигиенического индекса полости рта.
2.2.2. Оценка папиллярно-маргинально-альвеолярного индекса.
2.2.3. Изучение степени кровоточивости десны после зондирования.
2.2.4. Определение глубины пародонтальных карманов.
2.2.5. Исследование степени подвижности зубов.
2.2.6. Определение пародонтального индекса.
2.3. Рентгенологические методы исследования.
2.4. Характеристика обследованных пациентов.
2.5. Статистические методы и критерии.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
3. РАЗРАБОТКА ТЕСТ - СИСТЕМЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК ПАРОДОНТОПАТОГЕННЫХ МИКРОБОВ С ПОМОЩЬЮ МО-ЛЕКУ ЛЯРНО - ГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ.
3.1. Разработка набора реактивов для определения ДНК паро-донтопатогенных микробов Prevotella intermedia sensu stricto, Bacteroides forsythus, Treponema denticola, Actino-bacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis при помощи мультиплексной полимеразной цепной реакции.
3.2. Анализ информативности молекулярно-генетических маркеров для диагностики и контроля лечения воспалительных заболеваний пародонта, вызванных анаэробными микробами.
3.2.1. Изучение особенностей состава пародонтопатогенной микрофлоры у больных ХГП.
3.2.2. Апробация набора реактивов "Мультидент - 5" при различных воспалительных заболеваниях ротовой полости и челюстно-лицевой области.
3.2.3. Апробация набора реактивов "Мультидент - 5" при мониторинге эффективности проводимого лечения.
4. ИССЛЕДОВАНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ВИДОВОГО СОСТАВА ОСНОВНЫХ ПАРОДОНТОПАТОГЕНОВ У ПАЦИЕНТОВ С ХРОНИЧЕСКИМ ГЕНЕРАЛИЗОВАННЫМ ПАРОДОНТИТОМ И
У ЛИЦ СО ЗДОРОВЫМ ПАРОДОНТОМ.
4.1. Результаты клинического обследования пациентов.
4.1 Л. Характеристика обследованных пациентов. Принципы
разделения на группы.
4.1.2. Результаты индексных оценок.
4.2. Изучение особенностей состава пародонтопатогенов (Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Bacter-oides forsythus, Actinobacillus actinomycetemcomitans и Treponema denticola) с помощью тест — системы "Муль-тидент-5".
4.3. Результаты исследования состояния специфического противовирусного иммунитета.
4.4. Исследование особенностей состава вирусов семейства Herpesviridae с помощью ПЦР.
4.5. Особенности состава пародонтопатогенов в зависимости от присутствия вирусов семейства Herpesviridae.
4.6. Оценка взаимосвязи пародонтальных индексов с ассоциациями пародонтопатогенов.
4.7. Анализ влияния вирусов на значения пародонтальных индексов.
4.8. Аллельный полиморфизм генов IL-la и IL-ip у больных хроническим генерализованным пародонтитом.
4.9. Полиморфизм генов HLA класса II в норме и у пациентов с воспалительными заболеваниями пародонта.
5. РАЗРАБОТКА АЛГОРИТМОВ ДИАГНОСТИКИ ХГП НА ОСНОВЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ И ИММУНОГЕНЕТИЧЕ-СКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ.
5.1. Корреляционный анализ предикторов с целью их агрегирования.
5.2. Изучение зависимости глубины пародонтального кармана от агрегированных переменных (факторов).
5.3. Анализ зависимости степени тяжести заболевания от агрегированных предикторов.
5.4. Алгоритм экспресс - диагностики степени тяжести хронического генерализованного пародонтита по микробиологическим показателям.
6. ОБСУЖДЕНИЕ.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетические маркеры риска генерализованного пародонтита и их применение в диагностике"
Актуальность исследования
Среди важнейших проблем современной стоматологии воспалительные заболевания пародонта занимают одно из ведущих мест. Главной причиной потери зубов в средней и старшей возрастных группах населения нашей страны является пародонтит [4, 5, 6, 13]. Проявление и прогрессирование признаков па-родонтита зависит от многих факторов и детерминант, включая индивидуальные особенности субъекта, социальные, поведенческие, системные, генетические факторы, изменения на уровне зубов, микробный состав зубного налета и другие индикаторы и факторы риска [81, 143, 146, 157, 193, 209, 226, 227, 234]. В связи с большим количеством признаков, влияющих на развитие и прогрессирование пародонтита, трудно понять, в результате каких процессов происходит инициирование и прогрессирование заболевания. Не всегда понятно, какие из этих терминов применяют в стоматологической литературе, каким образом клиницисты используют такую информацию. Однако, в зависимости от результатов оценки факторов, связанных с началом и прогрессированием заболеваний пародонта, выбирают дизайн исследования и уровень значимости результатов измерения, определяющих силу ассоциаций каждого индикатора риска и их использование для принятия клинического решения [209, 213, 318, 334].
В настоящее время не существует специфических и чувствительных диагностических тестов определения возможного прогрессирования заболевания на уровне индивидуума [193, 233]. Считается, что пародонтит можно успешно лечить в начальных стадиях заболевания. Однако часто не ясно, какие признаки могли бы являться факторами риска потери зубодесневого прикрепления на этих стадиях [390].
Накопленный за последние десятилетия опыт свидетельствует, что ведущая роль в формировании воспалительного процесса в полости рта принадлежит резидентной облигатной анаэробной и микроаэрофильной микрофлоре. К агентам, индуцирующим длительное воспаление и разрушение тканей десны и альвеолярного отростка, обычно относят экзо- и эндотоксины пародонтопато-генных бактерий Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Actinobacillus actino-mycetemcomitans), Tannerella forsythia (Tannerella forsythia, Bacteroides forsythus), Treponema denticola, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia и др. [18, 59-61, 157, 160, 282, 390, 391]. В связи с этим основной целью терапии заболеваний пародонта является уничтожение его возбудителей и устранение отрицательных последствий их воздействия на окружающие ткани. Трудности лечения воспалительных процессов в тканях пародонта связаны с наличием, так называемых, торпидных или устойчивых к терапии форм пародонтита, которые, в определенной степени, связаны с длительной персистенцией пародонто-патогенных видов микробов. Эффективность ортопедических и хирургических методов лечения, включая дентальную имплантацию, существенно ограничивают осложнения инфекционно-воспалительного характера. Однако ранее в нашей стране диагностика данных видов бактерий не проводилась из-за отсутствия соответствующих методов их выявления. Это могло отрицательно отражаться как на не своевременном выявлении возбудителей заболеваний пародонта, так и на не адекватном лечении. В последнее время дискутируется вопрос о роли вирусных инфекций в прогрессировании деструктивных процессов в пародонте и характере изменений иммунного статуса больных пародонтитом при персистенции вирусов [58, 61 - 63, 120 - 128, 344 - 348, 361 - 367]. Однако роль вирусной инфекции в этиологии генерализованного пародонтита до настоящего времени в достаточной степени не установлена. В отечественной литературе отсутствуют данные о возможной локализации вирусов семейства Herpesviridae в пародонтальных карманах больных с различными формами пародонтита. Остается таюке открытым вопрос о характере изменений иммунного статуса больных пародонтитом при персистенции вирусов. Дальнейшей разработки требуют методы диагностики и лечения этого заболевания.
Исход и течение инфекционного процесса в пародонте могут быть предопределены не только вирулентностью микробов, но и генетическим полиморфизмом организма человека [197, 234 - 237, 257, 272, 386, 417]. К настоящему времени накоплено немало данных о наличии ассоциативных связей антигенов HLA с различными формами пародонтита у лиц с различной этнической принадлежностью [16, 27, 31, 163, 239]. Молекулярное типирование аллелей HLA класса II, пришедшее на смену серологическому выявлению антигенов, позволило анализировать аллельный уровень с более высокой разрешающей способностью, при этом были выявлены как позитивные, так и негативные ассоциации некоторых маркеров HLA класса П с пародонтитом [99, 376, 387, 386]. Исследование полиморфизма генов HLA и IL - 1 [38, 39, 134, 234 - 236] может играть важную роль для выявления предрасположенности и прогнозирования течения воспалительных заболеваний пародонта. Однако полученные результаты во многом противоречивы и неоднозначны, что требует дальнейшего более детального изучения данной проблемы. В нашей стране подобные исследования ранее не проводили.
Современное развитие науки позволило разработать и внедрить в диагностическую практику более совершенные, информативные и достоверные методы исследований, позволяющие по-новому оценить этиологию и патогенез воспаления, уточнить некоторые неясные до недавнего времени этиопатогенетиче-ские механизмы. Поэтому представляется необходимым разработать и внедрить в практику отечественные наборы реактивов для выявления генетических маркеров пародонтопатогенов с помощью полимеразной цепной реакции. Актуальным является более пристальное и всестороннее изучение микробиологических и иммуногенетических маркеров риска пародонтита и их использование в многофакторном анализе.
Цель исследования
Целью диссертационной работы являлось повышение эффективности диагностики генерализованного пародонтита на основании разработки микробиологических и иммуногенетических критериев.
Задачи исследования
1. Разработать тест - систему (набор реактивов) для идентификации основных пародонтопатогенов (Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Bacteroides forsythus, Actinobacillus actinomycetemcomitans и Treponema denticola) с помощью молекулярно-генетических методов.
2. Оценить информативность использования молекулярно-генетических маркеров для диагностики и контроля лечения воспалительных заболеваний пародонта, вызванных анаэробными микробами.
3. Изучить видовой состав основных пародонтопатогенов (P. gingivalis, Р. intermedia, В. forsythus, A. actinomycetemcomitans и Т. denticola) с помощью новой отечественной тест-системы "Мультидент - 5" и их ассоциаций с клиническими параметрами у больных хроническим генерализованным пародонтитом и лиц со здоровым пародонтом.
4. Исследовать роль вирусов семейства Herpesviridae (HSV 1 и HSV 2 типов, EBV и CMV) в этиопатогенезе генерализованного пародонтита.
5. Определить с помощью высокоразрешающего метода ДНК - типирования особенности аллельного полиморфизма генов HLA класса II (DRB1, DQA1, DQB1), характерные для представителей смешанной популяции г. Москвы, чувствительных и резистентных к пародонтиту.
6. Оценить полиморфизм генов IL - 1а и IL - 1(3 у больных генерализованным пародонтитом тяжелой степени в различных возрастных группах и людей со здоровым пародонтом с помощью молекулярно-генетических методов исследований (полимеразной цепной реакции и обратной гибридизации).
7. Обосновать критерии определения микробиологических и иммуногене-тических индикаторов риска генерализованного пародонтита для оптимизации диагностики и прогнозирования характера течения воспалительных заболеваний пародонта с помощью однофакторных и многофакторных методов статистического анализа.
8. Разработать алгоритм прогнозирования глубины пародонтального кармана у пациентов на основе линейной регрессионной модели, включающей данные выявления основных пародонтопатогенных бактерий, вирусов и параметров иммуногенетического статуса пациента.
9. Разработать алгоритм диагностики степени тяжести хронического генерализованного пародонтита, основанный на построении полиномиальной логистической регрессии с упорядоченным откликом, включающей в качестве предикторов микробиологические и иммуногенетические показатели пациента.
10. Разработать алгоритм диагностики поражений тканей пародонта, ассоциированных с герпесвирусной инфекцией, на основе комплексной оценки данных иммуноферментного определения антител к вирусам и обнаружения ДНК пародонтопатогенов и вирусов молекулярно-биологиче-ским методом.
Научная новизна
В представленной работе впервые в Российской Федерации:
1) разработан и всесторонне апробирован набор реактивов для молеку-лярно-генетического выявления ДНК пяти основных пародонтопатогенных бактерий - A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis, P. intermedia, В. forsythus и Т. denticola;
2) уточнена этиологическая роль перечисленных выше и некоторых других видов микроорганизмов и установлена степень их участия в развитии острого и хронического воспаления тканей пародонта; выявлены маркеры ДНК вирусов герпеса 1 и 2 типов, вируса Эпштейна - Барр и цитомегаловирусов в содержимом пародонтальных карманов у больных хроническим генерализованным пародонтитом с помощью полимеразной цепной реакции и определена относительная частота их выявления;
3) с помощью молекулярно - генетических методов исследований изучена взаимосвязь аллельного полиморфизма генов HLA класса II (DRB1, DQA1, DQB1) и генов IL - 1а и IL - ip у представителей смешанной популяции г. Москвы, чувствительных и резистентных к пародонтиту, с особенностями течения воспалительного процесса и предрасположенностью к развитию генерализованного пародонтита;
4) определена диагностическая ценность факторов и индикаторов риска для оптимизации диагностики и прогнозирования характера течения воспалительных заболеваний пародонта;
5) определены наиболее значимые диагностические и прогностические критерии осложненного характера течения воспалительного процесса на основании анализа микробиологических и иммуногенетических показателей;
6) разработаны алгоритмы комплексной клинико-лабораторной, иммуно-генетической и микробиологической диагностики генерализованного пародонтита, позволяющие обосновать и уточнить этиопатогенетический диагноз заболевания, назначать адекватную антимикробную терапию, направленную на элиминацию патогенов, создать оптимальные условия для последующего хирургического или ортопедического лечения, контролировать стабильность наступившей ремиссии и своевременно прогнозировать возможные рецидивы заболевания.
Практическая значимость
Улучшение квалифицированной помощи пациентам с хроническими воспалительными заболеваниями пародонта за счет более совершенной диагностики и более глубоких теоретических знаний особенностей развития и течения воспалительных процессов в пародонте.
Предложен новый отечественный набор реактивов для диагностики и контроля эффективности лечения воспалительных заболеваний пародонта с использованием молекулярно - генетических методов исследований.
Определен исходный микробиологический статус населения в различных возрастных группах и выявлены группы людей с риском развития воспалительных заболеваний пародонта, что позволяет провести профилактику повторного заражения членов семьи больного. Полученный массив данных может быть использован в качестве контроля для дальнейших исследований данной проблемы.
Установлена взаимосвязь аллельного полиморфизма генов HLA класса II (DRB1, DQA1, DQB1), IL - 1а и IL - 1{3 у представителей смешанной популяции г. Москвы, чувствительных и резистентных к пародонтиту, с особенностями течения воспалительного процесса и предрасположенностью к развитию пародонтита и может быть использована в исследованиях по проблеме "HLA и болезни".
Разработаны новые критерии на основании микробиологических и имму-ногенетических показателей для постановки правильного диагноза и выбора соответствующего способа лечения, получения объективных данных об эффективности проводимого лечения.
Обосновано применение молекулярно - биологических и иммунофер-ментных методов для диагностики и контроля эффективности лечения герпес-вирусной инфекции у больных хроническим генерализованным пародонтитом. Предложен соответствующий диагностический алгоритм.
Положения, выносимые на защиту
1. Новая отечественная тест - система "Мультидент - 5" позволяет определять ДНК пародонтопатогенных микробов Prevotella intermedia sensu stricto, Bacteroides forsythus, Treponema denticola, Actinobacillus actinomy-cetemcomitans, Porphyromonas gingivalis с помощью мультиплексной по-лимеразной цепной реакции и предназначена для использования в диагностике и контроле лечения воспалительных заболеваний пародонта, вызванных анаэробными микробами.
2. Факторами риска хронического генерализованного пародонтита являются P. gingivalis или комбинации В. forsythus и Т. denticola; P. intermedia, В. forsythus и P. gingivalis; P. intermedia, В. forsythus, Т. denticola и Р. gingivalis; P. intermedia, В. forsythus, Т. denticola, P. gingivalis и A. acti-nomycetemcomitans.
3. Индикаторами риска развития и прогрессирования хронического генерализованного пародонтита являются пародонтопатогенные виды бактерий P. intermedia, В. forsythus, Т. denticola и A. actinomycetemcomitans; вирусы семейства Herpesviridae: HSV 1 и HSV 2 типов, EBV и CMV, специфичность DRB1 *04 и аллель DQA1 *0301 генов HLA класса II.
4. Аллели генов HLA - DRB1 *01 и HLA - DQA1 *0101 ассоциированы с устойчивостью к различным формам генерализованного пародонтита.
5. Специфичность HLA - DRB1 *04 и аллель DQA1 *0301 являются маркерами риска хронического генерализованного пародонтита, ассоциированного с вирусами семейства Herpesviridae, "протективными" свойствами обладают специфичность HLA - DRB1 *01, аллель локуса DQA1 *0501 и DQB1 *0501.
6. Предрасположенность к развитию агрессивной формы хронического генерализованного пародонтита у лиц молодого возраста европеоидного происхождения в смешанной популяции г. Москвы ассоциирована с полиморфизмом гена IL - 1а, локализованного в позиции -899, и гена IL - ip в позиции +3953.
7. Алгоритмы лабораторной диагностики пародонтита на основе статистических моделей (линейной и полиномиальной логистической регрессии с упорядоченным откликом) включают микробиологические и иммуногене-тические показатели риска генерализованного пародонтита.
8. Алгоритм диагностики поражений тканей пародонта, ассоциированных с герпесвирусной инфекцией, основан на комплексной оценке данных им-муноферментного определения антител к вирусам (определение стадии
ГВИ) и обнаружения ДНК пародонтопатогенов и вирусов молекулярнобиологическим методом (окончательный диагноз).
Внедрение в практику
Разработана новая медицинская технология № ФС-2006/043 — У "Диагностика и прогнозирование течения заболеваний пародонта с применением моле-кулярно - биологических и иммуноферментных систем".
Результаты исследования внедрены в практику работы кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии; кафедры стоматологии общей практики и подготовки зубных техников №2 ФУВС, лаборатории молекулярно - биологических исследований НИМСИ и Клинико - диагностического центра ГОУ ВПО МГМСУ Росздрава.
Материалы диссертации используются в процессе обучения студентов, интернов, клинических ординаторов и аспирантов на кафедре микробиологии, вирусологии, иммунологии и кафедрах стоматологического профиля ГОУ ВПО МГМСУ Росздрава.
Разработан и внедрен в практику кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии МГМСУ набор реактивов для выявления пяти видов пародонтопатогенов с помощью молекулярно - генетических методов исследований.
Апробация работы
Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на:
Всероссийской конференции "Профилактика основных стоматологических заболеваний" (г. Москва, 2003);
Российско - норвежском симпозиуме "Заболевания пародонта - актуальные проблемы" (г. Москва, 2004);
X и XI Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (г. Москва, 2003, 2004 гг);
Втором съезде общества биотехнологов России (г. Москва, 2004);
Всероссийском симпозиуме "Актуальные проблемы стоматологии" Всероссийского конгресса "Современные методы профилактики и лечения заболеваний пародонта" (г. Уфа, 2004);
Всероссийской научно-практической конференции Первого Всероссийского стоматологического форума "Дентал Ревю" (г. Москва, 2004);
II Всероссийской научно-практической конференции "Образование, наука и практика в стоматологии" (г. Москва, 2005);
Второй и третьей научно-практической конференции "Актуальные проблемы медицинской биотехнологии" (г. Анапа, 2005, 2006);
III Всероссийской научно-практической конференции "Образование, наука и практика в стоматологии" (г. Москва, 2006);
Четвертом съезде общества биотехнологов России (Москва, 2006);
VIII международном конгрессе MAKMAX/ASM по антимикробной терапии (г. Москва, 2006);
IV Всероссийской научно-практической конференции "Образование, наука и практика в стоматологии" (г. Москва, 2007); совместном заседании сотрудников Научно - исследовательского медицинского стоматологического института; кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии; кафедры стоматологии общей практики и подготовки зубных техников №2 ФУВС; кафедры факультетской терапевтической стоматологии ГОУ ВПО МГМСУ Росздрава и кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии ГОУ ВПО ММА им. И. М. Сеченова Росздрава (протокол № 7 от 13 мая 2008 г.).
Публикации
По материалам диссертации опубликована 57 научных работ, в том числе 14 — в научных изданиях, рекомендованных ВАК МО РФ, учебные пособия — 4, руководство для студентов - 1, методические рекомендации МЗ и CP для врачей — 1; получен 1 патент РФ № 2306341 на изобретение, опубл. 20.09.2007 Бюл. "Изобретения, полезные модели", 2007, № 26; зарегистрирована медицинская технология № ФС-2006/043 — У.
Объем и структура работы
Диссертация построена по традиционному плану и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, трех глав собственных исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Материалы диссертации изложены на 385 страницах машинописного текста. Работа иллюстрирована 94 рисунками и содержит 80 таблиц. Список литературы включает 72 отечественных и 350 иностранных источников.
Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Николаева, Елена Николаевна
выводы
1. Впервые в Российской Федерации разработана тест - система "Мультидент - 5", позволяющая определять с высокой точностью ДНК пародон-топатогенных микробов Prevotella intermedia sensu stricto, Bacteroides forsythus, Treponema denticola, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Por-phyromonas gingivalis с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции.
2. Этиологическая диагностика хронического генерализованного пародонтита и других воспалительных заболеваний пародонта и челюстно-лицевой области должна включать современные технологии молекуляр-но - биологических и иммуноферментных исследований.
3. Методами генодиагностики установлена взаимосвязь выявления с высокой частотой вирулентных видов бактерий (P. gingivalis, P. intermedia, В. forsythus, A. actinomycetemcomitans и Т. denticola) и их ассоциаций с клиническими параметрами у больных хроническим генерализованным пародонтитом, но не у лиц со здоровым (интактным) пародонтом. Факторами риска хронического генерализованного пародонтита являются Р. gingivalis или ассоциации В. forsythus и Т. denticola; P. intermedia, В. forsythus и P. gingivalis; P. intermedia, В. forsythus, Т. denticola и Р. gingivalis; P. intermedia, В. forsythus, Т. denticola, P. gingivalis и A. actinomycetemcomitans .
4. Наличие в пародонтальных карманах вирусов семейства Herpesviridae: HSV 1 и HSV 2 типов, EBV и, в меньшей степени, CMV - является индикатором прогрессирования хронического генерализованного пародонтита.
5. Специфичность HLA-DRB1 *04 и аллель DQA1 *0301 являются маркерами риска хронического генерализованного пародонтита у представителей смешанной популяции г. Москвы. Аллели DRB1 *01 и DQA1
0101 ассоциированы с устойчивостью к различным формам генерализованного пародонтита.
6. Пациенты с полиморфным генотипом IL - 1а (-899) С—>Т, IL - 1(3 (+3953) С—»Т относятся к группе риска заболевания тяжелыми формами пародонтита в возрасте до 35 лет. Относительная частота выявления генотипа IL - 1а (-899) С—>Т, IL - 1(3 (+3953) С—>-Т у больных хроническим генерализованным пародонтитом в возрасте до 35 лет составляет 86 %, у больных старше 50 лет — 30 % и 10% — у людей со здоровым пародонтом.
7. Обоснованы критерии определения микробиологических и иммуногене-тических индикаторов риска генерализованного пародонтита для оптимизации диагностики и прогнозирования характера течения воспалительных заболеваний пародонта с помощью однофакторных и многофакторных методов статистического анализа.
8. Предложен алгоритм прогнозирования глубины пародонтального кармана основе линейной регрессионной модели, в которой предикторами являются показатели, отражающие присутствие в области зубодесневой борозды определенных видов пародонтопатогенных бактерий или вирусов в различных сочетаниях, а также иммуногенетические показатели пациента, отражающие особенности аллельного полиморфизма генов HLA класса И.
9. Разработан алгоритм диагностики степени тяжести хронического генерализованного пародонтита на основе микробиологических и иммуно-генетических показателей с помощью полиномиальной логистической регрессии с упорядоченным откликом.
10. Предложен алгоритм применения молекулярно - биологических и им-муноферментных методов диагностики герпес - вирусной инфекции, ассоциированной с ХГП.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Для повышения эффективности диагностики и контроля лечения хронического генерализованного пародонтита и других воспалительных заболеваний ротовой полости и челюстно-лицевой области, а также с целью изучения роли пародонтопатогенной флоры при системных заболеваниях организма человека рекомендуется использовать набор реактивов "Мультидент - 5", который позволяет определять ДНК пародонтопатогенных микробов Prevotella intermedia sensu stricto, Bacteroides forsythus, Treponema denticola, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromo-nas gingivalis с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции.
2. Показаниями для идентификации пародонтопатогенов с помощью набора реактивов "Мультидент - 5" являются:
• все случаи пародонтита у взрослых, а также подростковые и юношеские пародонтиты, характеризующиеся упорным и быстро прогрессирующим течением. Выявление вида возбудителей позволит провести правильный подбор антибактериальных препаратов и контролировать эффективность их применения через 5-7 и 10-14 дней лечения в случае необходимости;
• тяжелые формы генерализованного пародонтита взрослых, устойчивые и плохо поддающиеся лечению. Выявление вида пародонтопатогенных бактерий в этих случаях поможет контролировать терапевтический успех после механического лечения, применения средств профессиональной гигиены или курса антибиотиков и делает возможным раннее диагностирование рецидивов в процессе наблюдения;
• обследование членов семьи больного, у которого выявлены паро-донтопатогенные бактерии, особенно P. gingivalis и А. actinomycetemcomitans, обладающих высокой контагиозностью для контактирующих лиц, с целью антибактериальной профилактики повторного заражения членов семьи больного;
• в случаях сложного протезирования или внутрикостной имплантации зубов, связанных с большими финансовыми затратами, анализ видового состава патогенов может быть полезен для назначения адекватной антибактериальной профилактики на стадии подготовки к этим видам лечения;
• относительным показанием следует считать все ситуации, при которых оправдано получение объективных данных о наступлении стойкой ремиссии, то есть, после проведения курса пародонтоло-гического лечения, особенно, с применением лоскутных операций, коррекции прикуса в практике ортодонтии и т. п. Отсутствие пародонтопатогенных бактерий в этих случаях позволит более уверенно гарантировать стабилизацию состояния больного, а выявление - своевременно назначить адекватное лечение.
3. Клиническую диагностику различных проявлений деструктивных форм хронического генерализованного пародонтита рекомендуется сочетать с лабораторными показателями и алгоритмом определения глубины пародонтального кармана с помощью линейной регрессионной модели:
ПК (мм) = 3,04 + 0,848*Бакт. + 0,935*Вирусы - 0,162*Протект. +
0,243*Предрасп., где "Бакт.", "Вирусы" - агрегированные показатели наличия или отсутствия пародонтопатогенных бактерий и/или вирусов, "Протект." и "Предрасп." - определенные аллели HLA генов и их трехлокусные сочетания, принимающие значения от 0 до 4.
4. С целью уточнения диагноза и прогнозирования тяжелых форм хронического генерализованного пародонтита рекомендуется применять полиномиальную логистическую регрессию с упорядоченным откликом, в которую включены предикторы: "Бактерии", "Вирусы" "Протект." и "Предрасп." Данный алгоритм позволяет предсказывать отсутствие деструктивных изменений пародонта (категория 0) на уровне 92 %, среднюю степень тяжести ХГП (категория 2) на уровне 56%, легкую степень ХГП (категорию 1) на уровне 55 % и тяжелую степень ХГП (категорию 3) на уровне 76 %.
5. В качестве экспресс - диагностики различных форм воспалительных заболеваний полости рта рекомендуется проводить молекулярно-биологическое определение маркеров пародонтопатогенов и вирусов семейства Herpesviridae и анализ результатов с помощью полиномиальной логистической регрессии с упорядоченным откликом, позволяющей предсказывать категорию 0 (здоровый пародонт) на уровне 98 %, категорию 2 (средняя степень тяжести ХГП) - на уровне 47 % и категорию 3 (тяжелая степень ХГП) - на уровне 24 %; либо используя полиномиальную логистическую регрессию с упорядоченным откликом, где предикторами являются "Бактерии" и "Вирусы", позволяющую предсказывать категорию 0 (здоровый пародонт и легкая степень ХГП) на уровне 82 %, категорию 2 (средняя и тяжелая степени тяжести ХГП) - на уровне 68 %.
6. Для диагностики хронического генерализованного пародонтита, ассоциированного с вирусами простого герпеса 1 и 2 типа, Эпштейна - Барр и/или ЦМВ, пациентам группы риска (определяемой по данным анамнеза, клиническим и рентгенологическим признакам), а также при отрицательных результатах на пародонтопатогены предлагается проводить дополнительные лабораторные исследования по следующему алгоритму:
ИФА - определение AT к вирусам
Положительный результат 7
IgM
ПЦР-диагностика 1
Отрицательный результат
Положительный результат
IgG
Количественная характеристика иммунного статуса
Гипореактивность
Другие варианты иммунореактивности
Отрицательный результат I
Рис. Алгоритм лабораторной диагностики пародонтита, ассоциированного с вирусами семейства Herpesviridae.
Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Николаева, Елена Николаевна, Москва
1. Агапов B.C., Царев В.Н., Якименко И.И. Обследование больных с лим-фангиомами челюстно-лицевой области в стадии воспаления и ремиссии // Институт стоматологии. - 2005. - № 3 (28). - С. 30 - 32.
2. Айвазян С.А., Бухштабер В.М., Енюков И.С., Мешалкин Л.Д. Прикладная статистика: Классификация и снижение размерности. — М.: Финансы и статистика, 1989. — 607с.
3. Барер Г., Царев В., Николаева Е., Рамин С. Особенности микробной колонизации десны при сочетанной патологии пародонта и сахарного диабета 1 типа // Кафедра. 2004. - № 11. - С. 26 - 29.
4. Безрукова И.В., Грудянов А.И. Агрессивные формы пародонтита. — М.: МИА, 2002. С. 27 - 49.
5. Белоусов Н.Н. Причины широкого распространения тяжелых форм воспалительных заболеваний пародонта // Пародонтология. 2005. - № 3 (36).-С. 10-13.
6. Боднева С.Л. Использование комплексной оценки неспецифических факторов риска при генерализованном пародонтите: Дис. . канд. мед. наук // ГОУ "ИПК ФУ Медбиоэкстрим." М., 2003. - 123с.
7. Болдырева М.Н., Алексеев Л.П., Хаитов P.M., Гуськова И.А. и др. HLA-генетическое разнообразие населения России и СНГ. I. Русские // Иммунология. 2005 - № 5. - С. 260 - 263.
8. Болдырева М.Н., Алексеев Л.П. HLA и естественный отбор. Гипотеза "преимущества функциональной гетерозиготности" // Иммунология. -2006-№3.-С. 172- 176.
9. Болдырева М.Н., Грудакова Е.Г., Гуськова И.А. и др. Распределение аллелей DRB1*04 среди здоровых представителей 7 популяционных групп, проживающих в России // Иммунология. 2000. - № 6. — С. 12—15.
10. Болезни пародонта. Патогенез, диагностика, лечение // А.С. Григорьян, А.И. Грудянов, Н.А. Рабухина, О.А. Фролова. М.: МИА, 2004. - С. 64 -70.
11. Бондаренко A.A. HLA и болезни. Киров, 1999. — 194 с.
12. Боровский Е.В. Проблемы и достижения в консервативной стоматологии // Медицинский алфавит. Стоматология. — 2005. № I (39). — С. 10—12.
13. Громова А.Ю., Симбирцев А.С. Полиморфизм генов семейства IL-1 человека // Цитокины и воспаление. — 2005. — Т. 4, № 2. — С. 3 — 12.
14. Демин В.Ф., Голиков В .Я., Иванов С.И. и др. Нормирование различных видов риска // Гигиена и санитария. 2002. — № 6. - С. 30 — 35.
15. Деньга О.В., Мороз О.В., Бирюлина Т.В. и др. Антигенный ряд HLA -системы при заболеваниях пародонта // Вюник стоматологи. — 1997. — № З.-С. 293-295.
16. Дмитриева JI.A., Теблоева JI.M., Гуревич К.Г., Золоева З.Э., Николаева Е.Н. Особенности изменения микрофлоры пародонтального кармана при применении озонотерапии // Пародонтология. 2004. - № 4 (33). - С. 20 — 24.
17. Дунязина Т.М., Bauermeister C.D. Значение исследования "маркерных" микроорганизмов зубной бляшки на пародонтологическом приеме // Институт стоматологии. — 2001. — №3. — С.7 — 8.
18. Ершов Ф.И., Касьянова Н.В. Цитомегаловирусная инфекция (современные данные об эпидемиологии, клинике, диагностике и терапии) // Инфекции и антимикробная терапия. 2002. - Т.4, № 4. — С. 116 - 119.
19. Ефанов О.И., Царев В.Н., Николаева Е.Н., Волков А., Дикопова Н.Ж. Изучение влияния апекс-фореза на микрофлору корневых каналов зубов с помощью ПЦР // Кафедра. 2006. - Т. 5, № 2. - С. 36 - 38.
20. Ефанов О.И., Царев В.Н., Волков А., Николаева Е.Н., Дикопова Н.Ж., Носик А.С. Оценка антибактериальной активности апекс — фореза // Стоматология. 2006. - Т. 85, № 5. - С. 20 - 23.
21. Животовский J1.A. Популяционная биометрия. М.: Наука, 1991. - С.70 — 91.
22. Зеновский В.П., Давыдова Н.Г. Опыт применения автоматизированной компьютерной программы "Диаст" для дифференциальной диагностики заболеваний пародонта в учебном процессе // Стоматология для всех. -2004.-№2.-С. 50-51.
23. Иванов С.Ю., Бизяев А.Ф., Царев В.Н., Николаева Е.Н., Алешанов К.А. Профилактика воспалительных осложнений стоматологической имплантации методом антисептических полосканий раствором "Гивалекс" // Медицинский вестник МВД. 2005. - № 2. - С. 40 - 43.
24. Киченко С.М., Сухова Т.В., Сухов В.Д., Сергеева Г.С., Шулан А.А. // Новые критерии в диагностике пародонтита у людей // Российский стоматологический журнал. 2004. - № 1. - С. 31 - 33.
25. Кологривова Е.Н., Лебедев М.П., Борисенко А.В. и др. Интенсивность гуморального иммунного ответа к герпес — вирусам как индикатор иммунологической недостаточности организма // Ж. микроб, эпид. иммуноби-ол. 2000. - № 6. - С. 45 - 48.
26. Лагутин М. Б. Наглядная математическая статистика. — М.: БИНОМ, 2007.-480 с.
27. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование: Пер. с англ. М.: Мир, 1984. - 480 с.
28. Мащенко И.С., Соколова И.И. Иммуногенетические аспекты генерализованного пародонтита // Новое в стоматологии. — 2003. — № 4. — С. 44 — 46.
29. Маянский Н.А., Маянский А.Н. Номенклатура и функции главного комплекса гистосовместимости человека // Иммунология. — 2006. — № 1. — С. 40 46.
30. Митронин А.В., Царева Т.В., Николаева Е.Н., Митронин В.А., Фомичева Е.М. Оценка антимикробной активности гидроксида кальция в лечении периодонтита // Форум стоматологии. 2004. - № 1 (13). - С. 8 — 13.
31. Мюллер Х-П. Пародонтология: Пер. с нем. — Львов: ГалДент, 2004. — 256 с.
32. Николаева Е.Н., Алексеева Ю.В., Царев В.Н., Агапов B.C. Применение молекулярно-генетических методов исследования в диагностике гнойно-воспалительных заболеваний челюстно лицевой области // Стоматология для всех. - 2004. - № 2. - С. 46 - 49.
33. Николаева Е.Н., Царев В.Н., Горбачева Е.А., Ипполитов Е.В. Особенности полиморфизма генов HLA II класса у пациентов с воспалительнымизаболеваниями пародонта // Вестник биотехнологии и физико химической биологии. - 2006. - Т. 2., № 2. - С. 21 - 28.
34. Николаева Е.Н., Царев В.Н., Плахтий Л.Я. Генетический полиморфизм генов IL-1 а и IL-(3 у больных с воспалительными заболеваниями пародонта // Владикавказский медико-стоматологический вестник. — 2003. Т. III, №6.-С. 159-161.
35. Николаева Е.Н., Царев В.Н., Щербо С.Н., Земляная Н.Ю., Воронцова Н.И. Опыт разработки стандартного метода молекулярно-генетической диагностики и оценки эффективности лечения заболеваний пародонта // Форум стоматологии. 2004. - № 1 (13). - С. 20 - 24.
36. Николаева Е.Н., Царев В.Н., Щербо С.Н., Земляная Н.Ю., Воронцова Н.И. Применение молекулярно генетических методов исследований в диагностике пародонтита // Институт стоматологии. — 2004. — № 4 (25). — С. 63 — 66.
37. Остроухова А.А., Николаева Е.Н., Тихонов А.А. Эффективность плазменной стерилизации инструментов, применяемых в ортодонтии // Орто-донтия. 2003. - № 1. - С. 22 - 26.
38. Парунова С.Н. Влияние микрофлоры полости рта на регенерацию тканей пародонта у больных сахарным диабетом: Автореф. дис. . канд. мед. наук: 16.02.05 // МГМСУ. М., 2004. - 21 с.
39. Плахтий Л.Я. Тактика антибактериальной терапии пародонтита, основанная на результатах микробиологического и молекулярно-генетического исследования: Дис. докт. мед. наук: 23.02.02 // МГМСУ. М., 2002. -253 с.
40. Рахманин Ю.А., Демин В.Ф., Иванов С.И. Общий подход к оценке, сравнению и нормированию риска для здоровья человека в зависимости от различных факторов среды обитания // Вестник Российской АМН. — 2006. № 4. - С. 5 - 8.
41. Реброва О.Ю. Статистический аилиз медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTIC А. 3-е изд. — М.: МедиаСфера, 2006.-312 с.
42. Сампиев А.Т. Эффективность профилактики заболеваний тканей пародонта при ортодонтическом лечении детей и подростков: Дис. . канд. мед. наук: 18.01.05 // ГОУ ВПО МГМСУ. М., 2005. - 150 с.
43. Сенников С.В., Силков А.Н., Козлов В.А. Аллельные варианты и изофор-мы цитокинов в диагностике и патогенезе иммунопатологических состояний // Иммунология. 2002. - № 4. - С. 243 - 247.
44. Система HLA и патология человека // Под ред. А.А. Баранова, Б.С. Кага-нова, С.А. Шер, А.Е. Богорад. — М.: Издательский Дом «Династия», 2003. 148 с.
45. Соловьева A.M., Матело С.К., Тотолян А.А. и др. Эпидемиологическое исследование распространенности периодонтопатогенной микрофлоры полости рта у населения России // Стоматология. — 2005. — № 5. — С. 14 —, 20.
46. Флетчер Р., Флетчер С., Вагнер Э. Клиническая эпидемиология. — М.: МедиаСфера, 1998. 345 с.
47. Хаитов P.M., Алексеев Л.П. Геномика HLA: новые возможности молекулярной геномики человека в диагностике и терапии // Молекулярная медицина. 2003.-№ 1.-С. 17-31.
48. Хаитов М.Р., Алексеев Л.П., Трофимов Д.Ю. и др. Изучение роли респираторных вирусов в этиологии и патогенезе бронхиальной астмы // Иммунология. 2003. - № 2. - С. 96 - 99.
49. Холлендер М., Вулф Д. А. Непараметрические методы статистики: Пер. с англ. — М.: Финансы и статистика, 1983. — 518 с.
50. Царев В.Н., Николаева Е.Н. Аллельный полиморфизм генов ИЛ- 1а и ИЛ-1 (3 у больных с хроническими воспалительными заболеваниями пародонта // Вестник Российской АМН. 2007. - № 3. - С. 43 - 47.
51. Царёв В.Н., Николаева Е.Н., Максимовский Ю.М., Плахтий Л.А. Носик А.С. Перспективы применения молекулярно-генетических методов исследований в диагностике пародонтита // Российский стоматологический журнал. 2002. - № 5. - С. 6 - 9.
52. Царев В.Н., Николаева Е.Н., Николаева Л.Н., Носик А.С., Мегрелишвили Н. А. ПЦР-диагностика пародонтита. // X Российский национальный конгресс "Человек и лекарство": Тез. докл. — М., 7-11 апреля 2003. С. 399.
53. Царев В.Н., Николаева Е.Н., Носик А.С., Щербо С.Н. Современные методы микробиологической диагностики заболеваний тканей пародонта. // Медицинский алфавит. Стоматология. — 2005. № II (43). - С. 26 - 29.
54. Царев В.Н., Николаева Е.Н., Плахтий Л.Я., Зуева И.А, Фомичева Е.М., Носик А.С. Диагностика хронического генерализованного пародонтита молекулярно генетическими и иммунологическими методами. Пособие для врачей. - М.: МЗ РФ, 2004.
55. Царев В.Н., Ушаков Р.В. Антимикробная терапия в стоматологии. — М.: МИА, 2004. 143 с.
56. Цепов A.M., Николаев А.И. Межсистемные связи при болезнях пародонта // Пародонтология. 2003. - № 2 (27). - С. 19 - 24.
57. Черкасский Б.Л. Руководство по общей эпидемиологии. М.: Медицина, 2001.- 115 с.
58. Чухловин А.Б., Тотолян А.А. Генодиагностика возбудителей инфекционных заболеваний и поиск специфических "генов риска" // Клиническая лабораторная диагностика. 2005. - № 4. - С. 21 - 36.
59. Шмагель К.В., Беляева О.В., Черешнев В.А. Современные взгляды на иммунологию пародонтита // Стоматология. 2003. - № 1. - С. 61 — 64.
60. Шульженко А., Викулов Г. Герпетические инфекции человека. Перспективы диагностики и противовирусной терапии // Стоматолог. — 2004. — № 7.-С. 41-55.
61. Янушевич О.О., Царёв В.Н., Парунова С.Н. Влияние микрофлоры полости рта на регенерацию тканей пародонта у больных сахарным диабетом // Ортодонтия. 2004. - № 3-4. - С. 15 - 20.
62. Aas J.A., Paster B.J., Stokes L.N., Olsen I., Dewhirst F.E. Defining the normal bacterial flora of the oral cavity // J.Clin. Microbiol. 2005. - Vol. 43, № 11.-P. 5721 -5732.
63. Agerbaek M.R., Lang N.P., Persson G.R. Microbiological composition associated with interleukin-1 gene polymorphism in subjects undergoing supportive periodontal therapy // J Periodontol. 2006. - Vol. 77, № 8. - P. 1397 - 1402.
64. Amano A., Nakagawa I., Okahashi N., Hamada N. Variations of Porphyromonas gingivalis fimbriae in relation to microbial pathogenesis // J. Periodont. Res. 2004. - Vol. 39. - P. 136 - 142.
65. Amer A., Singh G., Darke C., Dolby A.E. Association between HLA antigens and periodontal disease // Tissue Antigens 1988. - Vol. 31. — P. 53 — 58.
66. Amin M., Ho A.C.S., Lin J.Y., Batista da Silva A P., Glogauer M., Ellen R.P. Induction of de novo subcortical actin filament assembly by Treponema denticola major outer sheath protein // Infect. Immun. — 2004. — Vol. 72. — P. 3650 — 3654.
67. Armitage G.C. Analysis of gingival crevice fluid and risk of progression of periodontitis // Periodontology 2000. 2004. - Vol. 34. - P. 109 -119.
68. Armitage G.C. Periodontal diagnoses and classification of periodontal diseases // Periodontology 2000. 2004. - Vol. 34 - P. 9 - 21.
69. Armitage G.C., Wu Y., Wang H-Y., Sorrell J., di Giovine F.S., Duff G.W. Low prevalence of a periodontitis-associated interleukin-1 composite genotype in individuals of Chinese heritage // J. Periodontal. 2000. - Vol. 71. - P. 164 -171.
70. Armitage P., Berry G., Matthews J.N.S. Statistical methods in medical research. -2002. 4th edn. Blackwell Science Ltd, London.
71. Asai Y., Jinno Т., Ogawa T. Oral treponemes and their outer membrane extracts activate human gingival epithelial cells through Toll-like receptor 2 // Infect. Immun. 2003. - Vol. 71. - P. 717 - 725.
72. Ashimoto A., Chen С., Bakker I., Slots J. Polimerase chain reaction detection of 8 putative periodontal pathogens in subgingival plaque of gingivitis and andvanced periodontitis lesions // Oral microbiol Immunol. — 1996. — Vol. 11. -P. 266-273.
73. Baehni P., Giovannoli J.-L. Patient profile and decision-making in periodontal practice // Periodontology 2000. 2004. - Vol. 36. - P. 27 - 34.
74. Bartold P.M., Marshall R.I., Georgiou Т., Mercado F.B. Заболевания пародонта // Пародонтология. 2003. -№ 3 (28). - С. 3 - 9.
75. Bartold P.M., Narayanan A.S. Molecular and cell biology of healthy and di-aseased periodontal tissues // Periodontology 2000. -2006. Vol. 40, № 1. - P. 29-49.
76. Batista da Silva A.P., Lee W., Bajenova E., McCulloch C.A., Ellen R.P. The major outer sheath protein of Treponema denticola inhibits the binding step of collagen phagocytosis in fibroblasts // Cell. Microbiol. — 2004. Vol. 6. — P. 485-498.
77. Bauermeister C.-D. Микробиологическая диагностика заболеваний тканей пародонта // Новое в стоматологии 2003 - № 7 (115). - С. 27 - 30. (Mik-robiologische Diagnostik parodontaler Infectionen // ZMK. — 2003. — № 1-2. -S.12).
78. Berglundh Т., Donati M. Aspects of adaptive host response in periodontitis // J. Clin. Periodontol. 2005. - Vol. 32, Suppl 6, - P. 87 - 107.
79. Berker E., Kantarci A., Hasturk H., Dake van Т.Е. Effect of neutrophil apop-tosis on monocytic cytokine response to Porphyromonas gingivalis lipopolys-saccharide // J. Periodontol. 2005. - Vol. 76. - P. 964 - 971.
80. Bian X., Wang H., Ning Y., Lee S.Y., Fenno J.C. Mutagenesis of a novel gene in the prcA-prtP protease locus affects expression of Treponema denticola membrane complexes // Infect. Immun. — 2005. Vol. 73. - P. 1252 - 1255.
81. Bickel M., Axtelius В., Solioz C., Attstrom R. Cytokine gene expression in chronic periodontitis // J. Clin. Periodontol. 2001. - Vol. 28. - P. 840 - 847.
82. Blom A.M. Strategies developed by bacteria and virus for protection from the human complement system // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 2004. — Vol. 64. — P. 479 - 496.
83. Bonfil J.J., Dillier F.L., Mercier P. et al. A 'case control1 study on the role of HLA DR4 in severe periodontitis and rapidly progressive periodontitis // J. Clin. Periodontol. 1999. - Vol. 26. - P. 77 - 84.
84. Booth V., Solakoglu O., Bavisha N., Curtis M. A. Serum IgGl and IgG2 antibody responses to Porphyromonas gingivalis in patients with periodontitis // Oral Microbiol. Immunol. 2006. - Vol. 21, № 2. - P. 93 - 99.
85. Borrell L.N., Papanou P.N. Analytical epidemiology of periodontitis // J. Clin. Periodontol. 2005. - Vol. 32, Suppl 6. - P. 132 - 58.
86. Borza C.M., Hutt-Fletcher L.M. Alternate replication in В cells and epithelial cells switches tropism of Epstein-Barr virus // Nat. Med. — 2002. — Vol. 8. — P. 594-599.
87. Boutaga K., van Winkelhoff A.J., Vandenbroucke-Grauls C.M.J.E., Savelkoul P.H.M. The additional value of real-time PCR in the quantitative detection of periodontal pathogens // J. Clin. Periodontol. 2006. - Vol. 33, № 6. - P. 427 -433.
88. Brett P.M., Zygogianni P., Griffiths G.S., Tomaz M., Parkar M., D'Aiuto F., Tonetti M. Functional gene polymorphisms in aggressive and chronic periodontitis // J. Dent. Res. 2005. - Vol. 84, № 12. - P. 1149 - 1153.
89. Brochut P.F., Grenier D., Nakayama K., Mayrand D. Acquisition of iron from human transferrin by Porphyromonas gingivalis: a role for Arg- and Lys-gingipain activities // Oral Microbinl. Immunol. 2001. — Vol. 16. — P. 79 -87.
90. Brochut P.F., Marin I., Baehni P., Mombelli A. Predictive value of clinical and microbiological parameters for the treatment outcome of scaling and root planing // J. Clin. Periodontol. 2005. - Vol. 32, № 7. - P. 695 - 701.
91. Brogden K.A., Guthmiller J.M. Polymicrobial diseases, a concept whose time has come // ASM News. 2003. - Vol. 69. - P. 69 - 73.
92. Caffesse R.G., De La Rosa R.M., De La Rosa G.M., Weltman R: Effect of inter leukin-1 gene polymorphism in a periodontally healthy hispanic population treated with mucogingival surgery // J. Clin. Periodontol. 2002. — Vol. 29. — P. 177 — 181.
93. Cattabriga M., Rotundo R., Muzzi L. et al. Retrospective evaluation of the influence of the interleukin-1 genotype on radiographic bone levels in treatedperiodontal patients over 10 years // J. Periodontol. — 2001. -Vol. 72. P. 767 -773.
94. Chen H., Wilkins L.M., Aziz N. et al. Single nucleotide polymorphisms in the human interleukin-1 В gene affect transcription according to haplotype context // Hum. Mol. Genet. 2006. - Vol. 15, № 4. - P. 519 - 529.
95. Chen Т., Abbey K., Deng W.J., Cheng M.C. The bioinformatics resorce for oral pathogens // Nucleic Acids Res. 2005. - Vol. 33. - W734 - W740.
96. Chi В., Qi M., Kuramitsu H. K. Role of dentilisin in Treponema denticola epithelial cell layer penetration // Res. Microbiol. 2003. - Vol. 154. - P. 637 -643.
97. Choi B.K., Lee HJ., Kang J.H., Jeong G.J., Min C.K., Yoo YJ. Induction of osteoclastogenesis and matrix metalloproteinase expression by the lipooligo-saccharide of Treponema denticola // Infect. Immun. — 2003. Vol. 71. - P. 226-233.
98. Christgau M., Ashnidis C., Hiller K.A., Schmitz G., Sclimat S. Influence of interleukin-1 gene polymorphism on periodontal regeneration in intrabony defects // J. Periodontol. Res. 2003. - Vol. 38. - P. 20 - 27.
99. Claesson R., Johansson A., Belibasakis G. et al. Relese and activation Of matrix metalloproteinase 8 from human neutrophils triggered by leukotoxin of Actinobacillus actinomycetemcomitans // J. Periodontol. Res. 2002. - Vol. 37.-P. 353-359.
100. Clark D.T., Soory M. The metabolism of holesterol and certain hormonal steroids by Treponema denticola // Steroids. 2006. - Vol. 71, № 5. — P. 352 -363.
101. Colombo A.P., Teles R.P., Torres M.C., Souto R., Rosalem W.J., Mendes M.C., Uzeda M. Subgingival microbiota of Brazilian subjects with untreated chronic periodontitis // J. Periodontol. 2002. - Vol. 73, №> 4. - P. 360 -369.
102. Colombo A.V. Identification of oral bacteria associated with crevicular epithelial cells from chronic periodontitis lesions // J. Med. Microbiol. 2006. - Vol. 55, № 5.-P. 609-615.
103. Contreras A., Mardirossian A., Slots J. Herpesviruses in HTV-periodontitis // J. Clin. Periodontol. 2001. - Vol. 28. - P. 96 - 102.
104. Contreras A., Nowzari H., Slots J. Herpesviruses in periodontal pocket and gingival tissue specimens // Oral Microbiol. Immunol. — 2000. Vol. 15, № 1. -P. 15-18.
105. Contreras A., Slots J. Mammalian viruses in human periodontitis // Oral Microbiol Immunol. 1996. - Vol. 11, № 6. - P. 381 - 386.
106. Contreras A., Slots J. Active cytomegalovirus infection in human periodontitis // Oral Microbiol. Immunol. 1998. - Vol. 13, № 4. - P. 225 - 230.
107. Contreras A., Slots J. Herpesviruses in human periodontal disease. Short review // J. Periodont. Res. 2000. - Vol. 35. - P. 3 - 16.
108. Contreras A., Slots J. Herpesviruses in human periodontal disease // J. Periodontal. Res.-2000. Vol. 35, № 1. - P. 3 - 16.
109. Contreras A., Slots J. Typing of herpes simplex virus from human periodontium. // Oral Microbiol. Immunol. 2001. - Vol. 16, № 1. - P. 63 - 64.
110. Contreras A., Umeda M., Chen С., Bakker I., Morrison J.L., Slots J. Relationship between herpesviruses and adult periodontitis and periodontopaphic bacteria // J. Periodontology 1999. - Vol. 70, № 5. - P. 478 - 484.
111. Cortelli J.R., Cortelli S.C., Jordan S., Haraszthy V.I., Zambon J.J. Prevalence of periodontal pathogens in Brazilians with aggressive or chronic periodontitis // J. Clin. Periodontal. 2005. - Vol. 32, № 8. - P. 860 - 866.
112. Curtis M.A., Slaney J.M., Aduse-Opoku J. Critical pathways in microbial virulence // J. Clin. Periodontal. 2005. - Vol. 32, Suppl. 6. - P. 28 - 38.
113. D'Aiuto F., Parkar M., Brett P.M., Ready D., Tonnetti M.S. Gene polymorphisms in pro-inflammatory cytokines are associated with systemic inflammation in patients with severe periodontal infections // Cytokine 2004. — Vol. 28.-Issue l.-P. 29-34.
114. Darby I.B., Hodge P.J., Riggio M.P., Kinane D.F. Clinical and microbiological effect of scaling and root planing in smoker and non-smoker chronic and aggressive periodontitis patients // J. Clin. Periodontal. — 2005. — Vol. 32, № 2. -P. 200 206.
115. De Leo F.R. Modulation of phagocyte apoptosis by bacterial pathogens // Apoptosis. 2004. - Vol. 9. - P. 399 - 413.
116. De Sanctis M., Zucchelli G. Interleukin-1 gene polymorphisms and long-term stability following guided tissue regeneration therapy // J. Periodontol. — 2000. -Vol. 71.-P. 430-436.
117. Deas D.E., Mackey S.A., McDonnell H.T. Systemic disease and periodontitis: manifestations of neutrophil dysfunction // Periodontology 2000. — 2003. — Vol. 32.-P. 82- 104.
118. Delaleu N., Bickel M. Interleukin -113 and interleukin -18: regulation and activity in local inflammation // Periodontology 2000. 2004. - Vol. 35. - P. 42 -52.
119. Deschner J. Полиморфизм интерлейкина 1. Его значение и определение в пародонтологии // Квинтэссенция. - 2003. - № 4. - С. 51 - 58.
120. Descher J., Singhal A., Long P., Liu С.С., Piesco N., Agarwal S. Cleavage of CD 14 and LBP by a protease from Prevotella intermedia II Arch. Microbiol. — 2003.-Vol.178, № 6.-P. 430-436.
121. Dixon D., Bainbridge B.W., Darveau R.P. Modulation of the innate immune response within the periodontium // Periodontology 2000. 2004. - Vol. 35. -P. 53 - 74.
122. Dolic M., Bailer J., Staehle H.J., Eickholz P. Psychosocial factors as risk indicators of periodontitis // J. Clin. Periodontol. 2005. - Vol. 32, № 11. - P. 1134- 1140.
123. Dye B.A., Selwitz R.H. The relationship between selected measures of periodontal status and demographic and behavioural risk factors // J. Clin. Periodontol. 2005. - Vol. 32, № 7. - P. 798 - 808.
124. Dyer J.K., Peck M.A., Reinhardt R.A. et al. HLA-D types and serum IgG responses to Capnocytophaga in diabetes and periodontitis // J. Dent. Res. — 1997. Vol. 76. - 1825 - 1832.
125. Dyke Van Т.Е., Dave S. Risk factors for periodontitis // J. Int. Acad. Periodontol. 2005. - Vol. 7, № 1. - P. 3 - 7.
126. Ebringer A., Wilson C. HLA molecules, bacteria and autoimmunity // J. Med. Micribiol. 2000. - Vol. 49, № 4. - P. 305 - 311.
127. Ehmke В., Beikler Т., Riep В., Fleming Т., Gobel U., Moter A. Intraoral dissemination of treponemes after periodontal therapy // Clin. Oral Invest. 2004. -Vol. 8, №4.-P. 219-225.
128. Ehmke В., Krefi W., Karch H., Grimm Т., Klaiber В., Flemmig T.F. Inter-leukin-1 haplotype and periodontal disease progression following therapy // J. Clin. Periodontol. 1999. - Vol. 26. - P. 810 - 813.
129. Eick S., Pfister W. Comparison of microbial cultivation and a commercial nucleic acid based method for detection of periodontopathogenic species in subgingival plaque samples // J. Clin. Periodontol. 2002. - Vol. 29. — P. 638 -644.
130. Eick S., Reissman A., Rodel J., Schmidt K.H., Pfister W. Porphyromonas gingivalis survives within KB cells and modulates inflammatory response // Oral Microbiol. Immunol. 2006. - Vol. 21, № 4. - P. 231 -217.
131. Ekuni D., Yamamoto Т., Yamanaka R., Tachibana K., Watanabe T. Proteases augment the effects of lipopolysaccharide in rat gingiva // J. Periodont. Res. -2003. Vol. 38. - P. 591 - 596.
132. Ellen R.P., Galimanas V.B. Spirochetes at the forefront of periodontal infections // Periodontology 2000. 2005. - Vol. 38. - P. 13 - 32.
133. Emery V.C. Cytomegalovirus and the aging population // Drugs Aging. -2001.-Vol. 18.-P. 927-933.
134. Emingil G., Kuula H., Sorsa Т., Atilaa G. Gingival crevicular fluid matrix met-alloproteinase-25 and -26 levels in periodontal disease // J. Periodontol. — 2006. Vol. 77, № 4. - P. 664 - 671.
135. Enersen M., Olsen I., Winkelhoff A.J. van, Caugant D.A. Multilocus sequence typing of Porphyromonas gingivalis strains from different geographic origins // J. Clin. Microbiol. 2006. - Vol. 44, № 1. - p. 35 - 41.
136. Ezzo P.J., Cutler C.W. Microorganisms as risk indicators for periodontal disease // Periodontology 2000. 2003. - Vol. 32. - P. 24 - 35.
137. Feng Z., Weinberg A. Role of bacteria in health and diasease of periodontal tissues // Periodontology 2000. 2006. - Vol. 40, № 1. - P. 50 - 76.
138. Feucht E.C., DeSanti C.L., Weinberg F. Selective induction of human beta-defensin mRNAs by Actinobacillus actinomycetemcomitans in primary and immortalized oral epithelial cells // Oral Microbiol. Immunol. 2003. - Vol. 18.-P. 359-363.
139. Fine D.H., Kaplan J.B., Kachlany S.C., Schreiner H.C. How we got attached to Actinobacillus actinomycetemcomitans: A model for infectious diseases // Pe-riodontololgy 2000. 2006. - Vol. 42. - P. 114 - 157.
140. Firatli E., Kantarci A., Cebeci I. et al. Association between HLA antigens and early onset periodontitis // J. Clin. Periodontol. — 1996. — Vol. 23. — P. 563-566.
141. Folwaczny M., Glas J., Тбгок H.-P., Limbersky O., Folwaczny C. Toll-like receptor (TLR) 2 and 4 mutations in periodontal disease // Clin. Exp. Immunol. 2004. - Vol. 135. - P. 330 - 335.
142. Forner L., Larsen Т., Kilian M., Holmstrup P. Incidence of bacterimia after chewing, tooth brushing and scaling in individuals with periodontal inflammation // J. Clin. Periodontol. 2006. - Vol. 33, № 6. - P. 401 - 407.
143. Fujinami R.S., Herrath M.G. von, Christen U., Whitton J.L. Molecular mimicry, bystander activation, or viral persistence: infections and autoimmune disease // Clin, microbiol. reviews. 2006. - Vol. 19, № 1. - P. 80 - 94.
144. Galbraith G.M.P., Hendley T.M., Sanders J J. Palesch Y., Pandey J.P. Polymorphic cytokine genotypes as markers of disease severity in adult periodontitis // J. Clin. Periodontol. 1999. - Vol. 26. - P. 705 - 709.
145. Garcia L., Tercero J.C., Legido В., Ramos J.A., Alemany J., Sanz M. Rapid detection of Actinobacillus actinomycetemcomitans, Prevotella intermedia, and Porphyromona gingivalis by multiplex PCR // J. Periodont. Res. — 1998. Vol. 33.-P. 59-64.
146. Gemmell E., Seymour G.J. Immunoregulatory control of Thl/Th2 cytokine profiles in periodontal disease // Periodontology 2000. — 2004. — Vol. 35. P. 21 -41.
147. Gemmell E., Yamazaki K., Seymour G.J. The role of T cells in periodontal disease: homeostasis and autoimmunity // Periodontol 2000. — 2007. Vol. 43. -P. 14-40.
148. Gomes S.C. Periodontal status in smokers and never-smokers: clinical findings and real-time polymerase chain reaction quantification of putative periodontal pathogens // J. Periodontol. 2006. - Vol. 77, № 9. p. 1483 - 1490.
149. Gonzales J.R., Michel J., Rodriguez E.L., Herrmann J.M., Bodeker R.H., Meyle J. Comparison of interleukin-1 genotypes in two populations with aggressive periodontitis // Eur. J. Oral Sci. 2003. - Vol. 111. - P. 395 - 399.
150. Goteiner D., Goldman M.J. Human lymphocyte antigen haplotype and resistance to periodontitis // J. Periodontol. 1984. - Vol. 55. - P. 155 - 158.
151. Graswinckel J.E.M., van der Velden U., van Winkelhoff A.J., Hoek F.J., Loos B.G. Plasma antibody levels in periodontitis patients and controls // J. Clin. Periodontol. 2004. - Vol. 31. - P. 562 - 568.
152. Graves D.T., Naguib G., Lu H., Desta Т., Amar S. Porphyromonas gingivalis fimbriae are pro-inflammatory but do not play a prominent role in the innate immune response to P. gingivalis // J. Endotoxin Res. 2005. - Vol. 11, № 1. -P. 13-18.
153. Greenstein G., Hagt T.C. Clinical utility of a genetic susceptibility test for severe chronic periodontitis // J. Am. Dent. Assoc. 2002. — Vol. 133, № 4. — P. 452-459.
154. Grossi S.G., Genco R.J., Machtei E.E. et al. Assessment of risk for periodontal disease. II. Risk indicators for alveolar bone loss // J. Periodontol. — 1995.-Vol. 66.-P. 23 -29.
155. Gruica В., Wang H.-Y., Lang N.P., Buser D. Impact of IL-1 genotype and smoking status on the prognosis of osseointegrated implants // Clin. Oral Impl. Res. 2004. - Vol. 15. - P. 393 - 400.
156. Haffajee A.D. Systemic antibiotics: to use or not to use in the treatment of periodontal infections. That is the question the treatment of periodontal infections // J. Clinical Periodontol. 2006. - Vol. 33, № 5. - P. 359 - 361.
157. Haffajee A.D., Bogren A., Hasturk H., Feres M., Lopez N.J., Socransky S.S. Subgingival microbiota of chronic periodontitis subjects from different geographic locations // J. Clin. Periodontol. 2004. - Vol. 31. - P. 996 - 1002.
158. Haffajee A.D., Socransky S.S. Introduction to microbial aspects of periodontal biofilm communities, development and treatment // Periodontology 2000. -2006. -Vol. 42, № 1. P. 7 - 12.
159. Haffajee A.D., Teles R.P., Socransky S.S. The effect of periodontal therapy on the composition of the subgingival microbiota // Periodontology 2000. 2006. -Vol. 42,№ 1.-P. 219-258.
160. Hai R., Chu A., Li H., Umamoto S., Rider P., Liu F. Infection of human cytomegalovirus in cultured human gingival tissue // Virology J. 2006. - Vol. 3, № 84. - P. 1-13.
161. Hajishengallis G., Sojar H., Genco R.J. et al. Intracellular signaling and cytokine induction upon interactions of Porphyromonas gingivalis fimbriae with pattern-recognition receptors // Immunol. Invest. — 2004. Vol. 33. — P. 157 - 172.
162. Hamada N., Watanabe K., Arai M., Hiramine H., Umemoto T. Cytokine production induced by a 67-kDa fimbrial protein from Porphyromonas gingivalis // Oral Microbiol. Immunol. 2002. - Vol. 17. - P. 197 - 200.
163. Handfield M., Progulske-Fox A., Hillman J.D. In vivo induced genes in human diseases // Periodontology 2000. 2005. - Vol. 38 - P. 123 - 134.
164. Hanookai D., Nowzari H., Contreras A., Morrison J.L., Slots J. Herpesviruses and periodontopathic bacteria in Trisomy 21 periodontitis // J. Periodontol. -2000. Vol. 71, № 3. - P. 376 - 384.
165. Hashimoto M., Asai Y., Ogawa T. Treponemal phospholipids inhibit innate immune responses induced by pathogen-associated molecular patterns // J. Biol. Chem. 2003. - Vol. 278. - P. 44205 - 44213.
166. Hashimoto M., Asai Y., Tamai R., Jinno Т., Umatani K., Ogawa T. Chemical structure and immunobiological activity of lipid A from Prevotella intermedia ATCC 25611 lipopolysaccharide // FEBS Letters. 2003. - Vol. 543. - P. 98 -102.
167. Hashimoto M., Ogawa S., Asai Y., Takai Y., Ogawa T. Binding of Porphyromonas gingivalis fimbriae to Treponema denticola dentilisin // FEMS Microbiol. Lett. 2003. - Vol. 226. - P. 267 - 271.
168. Heitz-Mayfield L.J. Disease progression: identification of high-risk groups and individuals for periodontitis // J. Clin. Periodontol. — 2005. Vol. 32, Suppl 6. -P. 196-209.
169. Heitz-Mayfield L. J. Microbial colonization pattern predict the outcomes of surgical treatment of intrabony defects // J. Clin. Periodontol. 2006. - Vol. 33,№ l.-P. 62-68.
170. Heling I., Morag-Hezroni M., Marva E., Hochman N., Zakay-Rones Z., Morag A. Is herpes simplex virus associated with pulpperiapical inflammation? // Oral
171. Surg. Oral Med. Oral Pathol. Oral Radiol. Endod. 2001. - Vol. 91, № 3. - P. 359-361.
172. Henderson В., Nair S.P., Ward J.M., Wilson M. Molecular pathogenicity of the oral opportunistic pathogen Actinobacillus actinomycetemcomitans // Ann. Rev. Microbiol. 2003. - Vol. 57. - P. 29 - 55.
173. Hodge P., Michalowicz H. Genetic predisposition to periodontitis in children and young adults // Periodontology 2000. 2001. - Vol. 26. - P. 113 - 134.
174. Hodge P.J., Riggio M.P., Kinane D.F. No association with HLA-DQB1 in European Caucasians with early-onset periodontitis // Tissue Antigens. — 1999. Vol. 54, № 2. P. 205 - 207.
175. Hodge P.J., Riggio M.P., Kinane D.F: Failure to detect an association with IL1 genotypes in European Caucasians with generalised early onset periodontitis // J. Clin. Periodontol. 2001. - Vol. 28. - P. 430 - 436.
176. Holmlund A., Hanstrom L., Lerner U.H. Bone resorbing activity and cytokine levels in gingival crevicular fluid before and after treatment of periodontal disease // J. Clin. Periodontol. 2004. - Vol. 31. - P. 475 - 482.
177. Holmstrup P., Westergaard J. HIV infection and periodontal diseases // Periodontology 2000. 1998. - Vol. 18.-P. 37-46.
178. Holt S.C., Eberson J.L. Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola, and Tannerella forsythia: the "red complex", a prototype polybacterial pathogenic consortium in periodontitis // Periodontology 2000. 2005. — Vol. 38. -P. 72-122.
179. Houle M.-A., Grenier D., Plamondon P., Nakayama K. The colla-genase activity of Porphyromonas gingivalis is due to Arg-gingipain // FEMS Microbiol. Lett. 2003. - Vol. 221. - P. 181 - 185.
180. Huang Y., Umeda M., Takeuchi Y., Ishizuka M., Yano-Higuchi K., Ishikawa I. Distribution of Bacteroides forsythus genotypes in a Japanese periodontitis population // Oral Microbiol. Immunol. 2003. - Vol. 18, № 4. - P. 208 - 214.
181. Huynh-Ba G., Lang N.P., Tonetti M.S., Salvi G.E. The association of the composite IL-1 genotype with periodontitis progression and/or treatment outcomes: a systematic review // J Clin Periodontol. 2007. - Vol. 34, № 4. - P. 305 -317.
182. Idesawa M., Sugano N., Ikeda K., Oshikawa M., Takane M., Seki K., Ito K. Detection of Epstein-Barr virus in saliva by real-time PCR // Oral Microbiol. Immunol. 2004. - Vol. 19. - P. 230 - 232.
183. Irwin C., Mullally В., Ziada H., Allen E., Byrne P.J. Periodontics: 2. Risk factors and susceptibility in periodontitis // Dent. Update. — 2007. Vol. 34, № 5. -P. 270-272, 275-276.
184. Ishihara K., Kuramitsu H.K., Okuda K. A 43-kDa protein of Treponema denticola is essential for dentilisin activity // FEMS Microbiol. Lett. 2004. - Vol. 232.-P. 181-188.
185. Jansson H. Studies on periodontitis and analyses of individuals at risk for periodontal diseases // Swed. Dent. J. Suppll. 2006. - Vol. 180. - P. 5 - 49.
186. Jansson H., Lysssenko V., Gustavsson A., Hamberg K., Soderfeldt В., Groop L., Bratthall G. Analysis of the interleukin 1 and interleukin — 6 poly-morfisms in patients with chronic periodontitis // Swed. Dent. J. - 2006. — Vol. 30,№ l.-P. 17-23.
187. Jansson H.D.D.S., Hamberg K., De Bruyn H., Bratthall G. Clinical consequences of IL-1 genotype on early implant failures in patients under periodontal maintenance // Clin. Implant. Dent. Relat. Res. 2005. - Vol. 7, № 1. — P. 51 -59.
188. Jervoe-Storm P.M., Nolden K.R. Anwendung eines neuen microbiologischen Tests in der Parodontitis-Therapie // Dtsch. Zahnarztl Z. 1999. - № 53. - P. 824.
189. Johansson A., Hanstrom L., Kalfas S. Inhibition of Actinobacillus actinomycetemcomitans leukotoxicity by bacteria from the subgingival flora // Oral Microbiol. Immunol. 2000. - Vol. 15. - P. 218 - 225.
190. Kaitz J., Couhshin J., Benouer R., Brautbar C. Human leucocyte antigen (HLA) DR4. Positive association with rapidly progressive periodontitis // J. Periodontol. 1987. - Vol. 59. - P. 607 - 610.
191. Kamma J.J., Baehni P.C. Five-year maintenance follow-up of early-onset periodontitis patients // J. Clin. Periodontol. 2003. - Vol. 30. - P. 562 -572.
192. Kamma J.J., Contreras A., Slots J: Herpes viruses and periodontopathic bacteria in early-onset periodontitis // J. Clin. Periodontol. 2001. - Vol. 28. - P. 879-885.
193. Kamma J.J., Giannopoulou C., Vasdekis V.G.S., Mombelli A. Cytokine profile in gingival crevicular fluid of aggressive periodontitis: influence of smoking and stress // J. Clin. Periodontol. 2004. - Vol. 31. - P. 894 - 902.
194. Kamma J.J., Slots J. Herpesviral bacterial interactions in aggressive periodontitis // J. Clin. Periodontol. - 2003. - Vol. 30. - P. 420 - 426.
195. Kanaya S., Nemoto E., Ogawa Т., Minamibuchi M., Honda Т., Shimauchi H. Porphyromonas gingivalis fimbriae induce CD14+ / CD16+ dendritic cellphenotype via TLR2 11 Internat. Congr. Ser. 2005. - Vol. 1284. - P. 169 -174.
196. Kelk P., Claesson R., Hanstrom L. et al. Abundant secretion of bioactive inter-leukin — 1 beta by human macrophages induced by Actinobacillus actinomycetemcomitans leukotoxin // Infect. Immun. 2005. - Vol. 73. — P. 453 — 458.
197. Kimura S., Koga Т., Fujiwara T. et al. Tyrosine protein phosphorylation in murine В lymphocytes by stimulation with lipopolysaccharide from Porphyro-monas gingivalis // FEMS Microbiol. Letters Vol. 130, № 1945. - P. 1 - 6.
198. Kinane D.F., Bartold M.P. Clinical relevance of the host responses of periodontitis // Periodontol. 2000. 2007. - Vol. 43. - P. 278 - 293.
199. Kinane D.F., Peterson M., Stathopoulou P.G. Environmental and other modifying factors of the perionontal diasease // Periodontology 2000. 2006. -Vol. 40, № l.-P. 107-119.
200. Klinge В., Norlund A. Socio economic perspective on periodontal diseases: a systematic review // J. Clin. Periodontal. - 2005. - Vol. 32, Suppl 6, - P. 314 -325.
201. Knaup В., Schunemann S., Wolff M.H. Subclinical reactivation of herpes simplex virus type 1 in the oral cavity // Oral. Microbiol. Immunol. — 2000. Vol. 15.-P. 281-283.
202. Kolenbrander P.E., Palmer R.J. Jr., Rickard A.H., Jakubovics N.S., Chalmers N.I., Diaz P.I. Bacterial interactions and successions during plaque development // Periodontology 2000. 2006. - Vol. 42. - P. 47 - 79.
203. Konradsson R., van Dijken J.W. Interleukin-1 levels in gingival crevicular fluid adjacent to restorations of calcium aluminate cement and resin composite // J. Clin. Periodontol. 2005. - Vol. 32, № 5 - P. 462 - 466.
204. Kornman K.S. Diagnostic and prognostic tests for oral diseases: practical applications // J. Dent. Educ. 2005. - Vol. 69, № 5. - P. 498 - 508.
205. Kornman K.S. Interleukin 1 genetics, inflammatory mechanisms, and nutri-genic opportunities to modulate diseases of aging // Am. J. Clin. Nutr. 2006. - Vol. 83, № 2. - P. 475S - 483S.
206. Kornman K.S., Crane A., Wang H.-Y., di Giovine F.S., Newman M.G., Pirk F.W., Wilson Jr.T.G., Higginbottom F.L., Duff G.W. The interleukin-1 genotype as a severity factor in adult periodontal disease // J. Clin. Periodontol. -1997.-Vol. 24.-P. 72-77.
207. Kornman K.S., di Giovine, F.S. Genetic variations in the cytokine expression: a risk factor for severity of adult periodontitis // Ann. Periodontol. — 1998. -Vol.3.-P. 327-338.
208. Kornman K.S., di Giovine, F.S. Genetic polymorphisms of the IL-lalpha and IL-lbeta genes in African-American LJP patients and an African-American control population // J. Periodontol. 2000. - Vol. 71. - P. 723 - 728.
209. Kornman K.S., Newman M.G. Role of genetics in assessment, risk, and management of adult periontitis. In: Periodontal Medicine, eds. Rose L.F., Genco R.J., Cohen D.W. & Mealey B.L. - 2000. - 45 pp Ontario: B.C. Decker, Inc.
210. Kowalski J., Gorska R., Dragan M., Kozak I. Clinical state of the patients with periodontitis, IL-1 polymorphism and pathogens in periodontal pocket—is there a link? (An introductory report) // Adv. Med. Sci. 2006. - Vol. 51, Suppl 1. -P. 9- 12.
211. Kratka Z., Bartova J., Krejsa O., Otcenaskova M., Janatova Т., Duskova J. Interleukin- 1 gene polymorphisms as assessed in a 10-year study of patients with early-onset periodontitis // Folia Microbiol (Praha). — 2007. Vol. 52, № 2.-P. 183- 188.
212. Kubar A., Saygun I., Yapar M., Ozdemir A., Slots J. Real-time PCR quantification of cytomegalovirus in aggressive periodontitis lesions using TaqMan technology // J. Periodont. Res. 2004. - Vol. 39. - P. 81- 86.
213. Laine M.L., Leonhardt A., Roos Jansaker A.M., Pena A.S., van Winkenlhoff A.J., Winkel E.G., Renvert S. IL-1RN gene polymorphism is associated with peri-implantitis // Clin. Oral. Implants Res. - 2006. - Vol. 17, № 4. - P. 380 -385.
214. Lee J.Y. Porphyromonas gingivalis heat shock protein vaccine reduces the alveolar bone loss induced by multiple periodonthopathogenic bacteria // J. Periodontal. Res.-2006.-Vol. 41, № 1.-P. 10-14.
215. Lee S.-W., Sabet M., Nauman R.K. Surface layer of Bacteroides forsythus is involved in the abscess formation in mice. Annual meeting of AADR // J. Dent. Res.-2002.-Vol. 81.-P. 114.
216. Lee W., Pankoski L., Zekavat A., Shenker B.J. Treponema denticola immu-noinhibitory protein induces irreversible G1 arrest in activated human lymphocytes // Oral Microbiol. Immunol. 2004. - Vol. 19. - P. 144 - 149.
217. Lee Y., Straffon L.H., Welch K.B., Loesche W.J. The transmission of anaerobic periodontopathic organisms // J. Dent. Res. 2006. - Vol. 85, № 2. - P. 182-186.
218. Lehner P.J., Wilkinson G.W. Cytomegalovirus: from evasion to suppression? // Nat. Immunol. 2001. - Vol. 2. - P. 993 - 994.
219. Li Y., Xu L., Hasturk H., Kantarci A., DePalma S.R., Van Dyke Т. E. Localized aggressive periodontitis is linked to human chromosome lq25 // Hum. Genet. 2004. - Vol. 114. - P. 291 - 297.
220. Loesche W.J., Grossman N.S. Periodontal disease as a specific, albeit chronic, infection: diagnosis and treatment // Clin. Microbiol. Rev. — 2001. Vol. 14, № 10.-P. 727-752.
221. Loos B.G., John R.P., Laine M.L. Identification of genetic risk factors for periodontitis and possible mechanisms of action // J. Clin. Periodontol. — 2005. — Vol. 32, Suppl 6. P. 159 - 179.
222. Lopez N.J., Jara L., Valenzuela C.Y. Association of interleukin — 1 polymorphism with periodontal diseases // J. Periodontol. 2005. - Vol. 76, № 2. — P. 234-243.
223. Machtei E.E., Hausmann E., Dunford R., Grossi S., Ho A., Davis G., Chandler J, Zambon J., Genco R.J. Longitudinal study of predictive factors for periodontal disease and tooth loss // Clin. Periodontol. 1999. - Vol. 26. - P. 374 -380.
224. Mager D.L., Haffajee A.D., Socransky S.S. The effects of periodontitis and smoking on the microbiota of oral mucous membranes and saliva in systemi-cally healthy subjects // J. Clin. Periodontol. 2003. - Vol. 30. - P. 1031 -1037.
225. Mahanonda R, Pichyangkul S. Toll-like receptors and their role in periodontal health and disease // Periodontology 2000. 2007. - Vol. 43. - P. 41 - 55.
226. Mardirossian A., Contreras A., Navazesh M., Nowzari H., Slots J. Herpesviruses 6, 7 and 8 in HTV- and non-HIV-associated periodontitis // J. Periodontal Res. 2000. - Vol. 35, № 5. - P. 278 - 284.
227. Marsh P.D. Dental plaque: biological significance of biofilm and community life-style // J. Clin. Periodontol. 2005. - Vol. 32, Suppl. 6. - P. 7 - 15.
228. Marsh P.D. Dental diseases — are these examples of ecological catastrophes? // Int. J. Dent. Hyg. 2006. - Vol. 4, Suppl. 1. - P. 3 - 10.
229. McCullagh P., Nelder J.A. «Generalized Linear Models». — London: Chapman & Hall, 1989.
230. Meisel P., Schwahn C., Gesc D., Bernhardt O., John U., Kocher T. Dose-effect relation of smoking and the interleukin-1 gene polymorphisms in periodontal disease // J. Periodontol. 2004. - Vol. 75. - P. 236 - 242.
231. Meng H., Xu L., Li Q., Han J., Zhao Y. Determinants of host susceptibility in aggressive periodontitis // Periodontology 2000. 2007. - Vol. 43. - P. 133 — 59.
232. Mercado F., Marshall R.I., Klestov A.C., Bartold P.M. Is there a relationship between rheumatoid arthritis and periodontal disease? // J. Clin. Periodontol. 2000. - Vol. 27. - P. 267 - 272.
233. Mezyk-Kopec R., Bzowska M., Potempa J. et al. Inactivation of membrane tumor necrosis factor alpha by gingipains from Porphyromonas gingivalis // Infect. Immun. 2005.-Vol. 73.-P. 1506-1514.
234. Michalowicz B.S. Genetic and heritable risk factors in periodontal disease // Periodontol. 1994. - Vol. 65. - P. 479 - 488.
235. Michalowicz B.S., Ronderos M., Camara-Silva R., Contreras A., Slots J. Human herpesviruses and Porphyromonas gingivalis are associated with juvenile periodontitis // J. Periodontol. 2000. - Vol. 71. - P. 981 - 988.
236. Miller D.M., Rahill B.M., Boss J.M. et. al. Human cytomegalovirus inhibits major histocompatibility complex class II expression by disruption of the Jak/Stat pathway // J. Exp. Med. 1998. - Vol. 187, № 5. - P. 675 - 683.
237. Miller N., Penaud J., Ambrosini P., Bisson-Boutelliez С., Впапсфоп, S. Analysis of etiologic factors and periodontal conditions involved with 309 abfrac-tions // J. Clin. Periodontol. 2003. - Vol. 30. - P. 828 - 832.
238. Mocarski E.S.Jr. Virus self-improvement through inflammation: no pain, no gain // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. - Vol. 99. - P. 3362 - 3364.
239. Mombelli A., Casagni F., Madianos P.N. Can presence or absence of periodontal pathogens distinguish between subjects with chronic and aggressive periodontitis? A systematic review // J. Clin. Periodontol. 2002. - Vol. 29, Suppl. 3.-P. 10-21.
240. Mombelli A., Meier C. On the symmetry of periodontal disease // J. Clin. Periodontol. 2001. - Vol. 28. - P. 741 - 745.
241. Moreira N.A., Chiappe V., Caniggia F.L., Alonso C., Piovano S. Clinical and microbiological associations in chronic periodontitis // Acta Odontol. Lati-noam.-2004.-Vol. 17, № 1 -2.-P. 15-21.
242. Moses J.H., Tsichti H., Donaldson P., Smith P.B., Johnson N.W., Bodmer J.G. HLA and susceptibility to juvenile periodontitis in Afro-Caribbeans // Tissue Antigens. 1994. - Vol. 43. - P. 316 - 319.
243. Mullally B.H., Dace В., Shelburne C.E. et al. Prevalence of periodontal pathogens in localized and generalized forms of early-onset periodontitis // J. Perio-dont. Res. 2000. - Vol. 35. - P. 232 - 241.
244. Nakagawa I., Amano A., Inaba H. et al. Inhibitory affects of Porphyromonas gingivalis fimbriae on interactions between extracellular matrix proteins and cellular integrins // Microbes Infect. 2005. - Vol. 7. - P. 157 - 163.
245. Nakamura Т., Nitta H., Ishikawa I. Effect of low dose Actinobacillus actinomycetemcomitans lipopolysaccharide pretreatment on cytokine production by human whole blood // J. Periodont. Res. 2004. Vol. 39. - P. 129 - 135.
246. Nares S. The genetic relationship to periodontal disease // Periodontology 2000. 2003. - Vol. 32. - P. 36 - 49.
247. Natto S., Baljoon M., Dahlen G., Bergstrom J. Tobacco smoking and periodontal microflora in a Saudi Arabian population // J. Clin. Periodontol. — 2005. — Vol. 32.-P. 549-555.
248. Neely A.L., Holford T.R., Anerud A., Boysen H. The natural history of periodontal disease in humans: risk factors for tooth loss in caries-free subjects receiving no oral health care // J. Clin. Periodontol. 2005. - Vol. 32, № 9. - P. 984-993.
249. Nichols F.C., Rojanasomsith К. Porphyromonas gingivalis lipids and diseased dental tissues // Oral Microbiol. Immunol. 2006. - Vol. 21, № 2. - P. 84 -92.
250. Niklaus A.F.P., Lang M.S., Tonetti W., Bragger B.U., Gordon D.B., Kenneth W.D., Kornman S. IL-1 gene polymorphism and smoking as risk factors for periimplant bone loss in a well-maintained population // Clin. Oral Impl. Res.-2003.-Vol. 14.-P. 10-17.
251. Nishihara Т., Koseki T. Microbial etiology of periodontitis // Periodontology 2000. 2004. - Vol. 36. - P. 14 - 26.
252. Noguchi K., Ishikawa I. The roles of cyclooxygenase-2 and prostaglandin E2 in periodontal disease // Periodontology 2000. 2007. - Vol. 43. - P. 85 - 101.
253. Nunn M.E. Understanding the etiology of periodontitis: an overview of periodontal risk factors // Periodontology 2000. 2003 - Vol. 32. - P. 11 - 23.
254. O'Brien-Simpson N.M., Veith P.D., Dashper S.G., Reynolds E.C. Antigenes of bacteria associated with periodontitis // Periodontology 2000. 2004. - Vol. 35.-P. 101-134.
255. Offenbacher S., Zambon JJ. Consensus report for periodontal diseases: pathogenesis and microbial factors // Ann. Periodontol. — 1996. Vol. 1. — P. 926 — 932.
256. Ohara M., Hayashi Т., Kusunoki Y. et al. Caspase-2 and caspase-7 are involved in cytolethal distending toxin induced apoptosis in Jurkat and MOLT-4 T-cell lines // Infect. Imm. - 2004. - Vol. 72. - P. 871 - 879.
257. Ohyama H., Matsushita S., Kato N. et al. T cell responses to 53-kDa outer membrane protein of Porphyromonas gingivalis in humans with early-onset periodontitis // Hum. Immunol. 1998. - Vol. 59. - P. 635 - 643.
258. Ohyama H., Takashiba S., Oyaizu K. et al. HLA Class II genotypes associated with early-onset periodontitis: DQB1 molecule primarily confers susceptibility to the disease // J. Periodontol. 1996. - Vol. 9. - P. 888 - 894.
259. Palmer R.M., Wilson R.F., Hasan A.S., Scott D.A. Mechanisms of action of environmental factors tobacco // J. Clin. Periodontol. - 2005. — Vol. 32, Suppl. 6.-P. 180-195.
260. Papapanou P.N., Neiderud A.-M., Sandros J., Dahlen G. Interleukin-1 gene polymorphism and periodontal status A case-control study // J. Clin. Periodontol. 2001.-Vol. 28.-P. 389-396.
261. Papapanou P.N., Neiderud A.M., Disick E.L.E., Miller G.C., Dahlen G. Longitudinal stability of serum immunoglobulin G responses to periodontal bacteria // J. Clin. Periodontol. 2004. - Vol. 31. - P. 985 - 990.
262. Parra В., Slots J. Detection of human viruses in periodontal pockets using polymerase chain Reaction // Oral Microbiol. Immunol. 1996. - Vol. 11, № 5. -P. 289-293.
263. Paster В., Boches S., Galvin J., Erickson R., Lau C., Levanos V., Sahasrabudhe A., Dewhirst F. Bacterial diversity in human subgingival plaque // J. Bacterid. -2001.-Vol. 183.-P. 3770-3783.
264. Paster В J., Olsen I., Aas J. A., Dewhirst F.E. The breadth of bacterial diversity in the human periodontal pocket and other oral sites // Periodontology 2000. -2006.-Vol. 42.-P. 80-87.
265. Paulander J., Wennstrom J.L., Axelsson P., Lindhe J. Some risk factors for periodontal bone loss in 50-year-old individuals // J. Clin. Periodontol. -2004. Vol. 31. - P. 489 - 496.
266. Pepper S., Benninger-Doring G., Modrow S., Wolf H., Jilg W. Immediate-early transactivator Rta of Epstein-Barr virus (EBV) shows multiple epitopes recognized by EBV-specific cytotoxic T lymphcytes // J. Virol. — 1998. -Vol. 11.-P. 8644-8649.
267. Picolos D.K., Lerche-Sehm J., Abron A., Fine J.B., Papapanou P.N. Infection patterns in chronic and aggressive periodontitis // J. Clin. Periodontol. — 2005. -Vol. 32, № 10.-P. 1055- 1061.
268. Pihlstrom B.L. Periodontal risk assessment, diagnosis and treatment planning // Periodontoiogy 2000. 2001. - Vol. 25. - P. 37 - 58.
269. Podmore M., Ebersole J.L., Kinane D.F. Immunodominant antigens in periodontal disease: a real or illusive concept? // Crit. Rev. Oral Biol. Med. -2001.-Vol. 12.-P. 179-185.
270. Prato G., Rotundo R., Magnani C., Ficcara G. Viral etiology of gingival recession. A case repot // J. Periodontol. 2002. - Vol. 73, № 1. - P. 110 — 114.
271. Preiser W., Vogel J.-U., Doerr H.W. Virology and epidemiology of oral herpesvirus infections // Med. Microbiol. Immunol. 2003. - Vol. 192. - P. 133-136.
272. Quappe L., Jara L., Lopez NJ. Association of interleukin-1 gene polymorphisms with aggressive periodontitis // J. Periodontol. 2004. - Vol. 75. — P. 1509 -1515.
273. Rajapakse P.S., Dolby A.E. Evidence for local production of antibodies to auto and non-self antigens in periodontal disease // Oral Diseases. — 2004. -Vol. 10.-P. 99-105.
274. Reichert S., Stein J., Fuchs C., John V., Schaller H.-G., Machulla H. K. G. Are there common human leucocyte antigen' associations in juvenile idiopathic arthritis and periodontitis? // J. Clin. Periodontol. 2007. - Vol. 34, № 6. - P. 492 - 498.
275. Reinholdt J., Bay I., Svejgaard A. Association between HLA-antigens and periodontal disease // J. Dent. Res. 1977. - Vol. 56. - P. 1261 - 1263.
276. Renvert S., Ohlsson O., Persson S., Lang N.P., Persson G.R. Analysis of periodontal risk profiles in adults with or without a history of myocardial infarction // J. Clin. Periodontol. 2004. - Vol. 31. - P. 19 - 24.
277. Rickinson A.B., Moss D.J. Human cytotoxic T lymphocyte response to Ep-stein-Barr virus infection // Annu Rev. Immunol. 1997. - Vol. 15. — P. 405 -431.
278. Rogers M.A., Figliomeni L., Baluchova K. et al. Do interleukin-1 polymorphisms predict the development of periodontitis or the success of dental implants? // J. Periodontal. Res. 2002. - Vol. 37. - P. 37 - 41.
279. Ronderos M., Ryder M.I. Risk assessment in clinical practice // Periodontology 2000. 2004. - Vol. 34. - P. 120 - 135.
280. Ryder M.I. The influence of smoking on host responses in periodontal infections // Periodontol. 2000. 2007. - Vol. 43. - P. 267 - 277.
281. Sabeti M., Simon J.H., Nowzari H., Slots J. Cytomegalovirus and Epstein-Barr virus active infection in periapical lesions of teeth with intact crowns // J. En-dod. 2003. - Vol. 29, № 5. - P. 321 - 333.
282. Sabeti M., Simon J.H., Slots J. Cytomegalovirus and Epstein-Barr virus are associated with symptomatic periapical pathosis // Oral Microbiol. Immunol. — 2003. Vol. 18, № 5 - P. 327 - 328.
283. Sabeti M., Valles Y., Nowzari H., Simon J.H., Kermfni-Arab V., Slota J. Cytomegalovirus and Epstein-Barr virus DNA transcription in endodontic symptomatic lesion // Oral Microbiol. Immunol. 2003. - Vol. 18. - P. 104 - 108.
284. Sahingur S.E., Cohen R.E. Analysis of host responses and risk for disease progression // Periodontology 2000. 2004. - Vol. 34. - P. 57 - 83.
285. Saito K., Takahashi N., Horiuchi H., Yamada T. Effects of glucose on formation of cytotoxic end-products and proteolytic activity of Prevotella intermedia,
286. Prevotella nigrescens and Porphyromonas gingivalis // J. Periodont. Res. — 2001. Vol. 36. - P. 355 - 360.
287. Sakeilari D., Koukoudetsos S., Arsenakis M., Konsmntinidis A. Prevalence of IL-1A and IL-1B polymorphisms in a Greek population // J. Clin. Periodontol. 2003. - Vol. 30. - P. 35 - 41.
288. Salvi G.E., Lang N.P. Host response modulation in the management of periodontal diseases // J. Clin. Periodontol. 2005. - Vol. 32, Suppl 6. - P. 108 -129.
289. Saygun I., Kubar A., Ozdemir A., Slots J. Periodontitis lesions are a source of salivary cytomegalovirus and Epstein-Barr virus // J. Periodont. Res. — 2005. — Vol. 40, №2.-P. 187-191.
290. Saygum I., Kubar A., Ozdemir A., Yapar M., Slots J. Herpesviral bacterial interrelationships in aggressive periodontitis // J. Periodontal. Res. — 2004. — Vol. 39, №4.-P. 207-212.
291. Saygun I., Kubar A., Ozdemir A., Yapar M., Slots J. Herpesviral-bacterial interrelationships in aggressive periodontitis // J. Periodont. Res. 2004. -Vol. 39.-P. 207-212.
292. Saygun I., Yapar M., Ozdemir A., Kubar A., Slots J. Human cytomegalovirus and Epstein-Barr virus type 1 in periodontal abscesses // Oral Microbiol. Immunol. 2004. - Vol. 19. - P. 83 - 87.
293. Schatzle M., Loe H., Lang N.P., Heitz-Mayfield L.J.A., Biirgin W., Anerud A., Boysen H. Clinical course of chronic periodontitis: III. Patterns, variations and risks of attachment loss // J. Clin. Periodontol. 2003. - Vol. 30. - P. 909-918.
294. Schenkein H.A. Host responses in maintaining periodontal health and determining periodontal disease // Periodontology 2000. 2006. - Vol. 40, № 1. -P. 77-93.
295. Schmidt H., Hensel M. Pathogenicity islands in bacterial pathogenesis // Clin. Microbiol. Rev. 2004. - Vol. 17, № 1. - P. 14 - 56.
296. Schneider S., Roessli D., Excoffier, L. Arlequin: a Software for population genetics data analysis, Version 2.000. Genetics and Biometry Laboratory, Department of Anthropology, University of Geneva, Geneva. 2000.
297. Sela M.N. Role of Treponema denticola in periodontal diseases // Crit. Rev. Oral Biol. Med. 2001. - Vol. 2. - P. 399 - 413.
298. Sela M.N., Kohavi D., Krausz E., Steinberg D., Rosen G. Enzymatic degradation of collagen-guided tissue regeneration membranes by periodontal bacteria // Clin. Oral Implants Res. 2003. - Vol. 14, № 3. - P. 263 - 268.
299. Seymour G.J., Taylor JJ. Shouts and whispers: an introduction to immu-noregulation in periodontal disease // Periodontology 2000. 2004. - Vol. 35. -P. 9- 13.
300. Shapira L., Eizenberg S., Sela M.N., Soskolne A., Brautbar H. HLA A9 and В15 are associated with the generalized form, but not the localized form, of early-onset periodontal diseases // J. Periodontol. — 1994. Vol. 65. — P. 219-223.
301. Shapira L., Wilensky A., Kinane D.F. Effect of genetic variability on the inflammatory response to periodontal infection // J. Clin. Periodontol. 2005. - Vol. 32, Suppl 6.-P. 72-86.
302. Sharma A., Inagaki S., Honda K. et al. Tannerella forsythia-induced alveolar bone loss in mice involves leucine-rich-repeat BspA protein // J. Dent. Res. -2005. Vol. 84. - P. 462 - 467.
303. Shenker B.J., Besack D., McKay T. et al. Induction of cell cycle arrest in lymphocytes by Actinobacillus actinomycetemcomitans cytolethal distending toxin requires three subunits for maximum activity // J. Immunol. 2005. - Vol. 174.-P. 2228-2234.
304. Simonian К. The role of herpesviruses in periodontal disease // J. West. Soc. Periodontol. Periodontal. Abstr. 2003. - Vol. 51, № 1. - P. 5 - 9.
305. Slots J. Herpesviruses in periodontal diseases // Periodontology 2000. — 2005. -Vol. 38.-P. 33-62.
306. Slots J. Update on human cytomegalovirus in destructive periodontal disease // Oral. Microbiol. Immunol. 2004. - V. 19. - P. 217 - 223.
307. Slots J., Contreras A. Herpesviruses: a unifying causative factor in periodontitis? // Oral Microbiol. Immunol. 2000. - Vol. 15, № 5. - P. 277 - 280.
308. Slots J., Kamma J.J., Sugar C. The herpesvirus Porphyromonas gingivalis — periodontitis axis // J. Periodont. Res. - 2003. - Vol. 38.-P. 318-323.
309. Slots J., Sabeti M., Simon J.H. Herpesviruses in periapical pathosis: an etiopa-thogenic relationship? // Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. Oral Radiol. Endod. 2003. - Vol. 96, № 3. - P. 327 - 331.
310. Slots J., Saygun I., Sabeti M., Kubar A. Epstein-Barr virus in oral diseases // J. Periodontal Res. 2006. - Vol. 41, № 4. - P. 235 - 244.
311. Slots J., Sugar C., Kamma J.J. Cytomegalovirus periodontal presence is associated with subgingival Dialister pneumosintes and alveolar bone loss // Oral Microbiol. Immunol. 2002. - Vol. 17. - P. 369 - 374.
312. Socransky S.S., Haffajee A.D., Smith C., Duff G.W. Microbiological parameters associated with IL-1 gene polymorphisms in periodontitis patients // J. Clin. Periodontol. 2000. - Vol. 27. - P. 810 - 818.
313. Socransky S.S., Haffajee A.D., Smith C., Martin L., Haffajee J.A., Uzel N.G., Goodson J.M. Use of checkerboard DNA DNA hybridization to study complex microbial ecosystems // Oral Microbiol. Immunol. - 2004. - Vol. 19. - P. 352-362.
314. Soderberg-Naucler C., Streblow D.N., Fish K.N., Allan-Yorke J., Smith P.P., Nelson J.A. Reactivation of latent human cytomegalovirus in CD14(+) monocytes is differentiation dependent // J. Virol. 2001. — Vol. 75. — P. 7543 -7554.
315. Spahr A., Klein E., Khuseyinova N., Boechh C., Muche R., Kunze M., Roth-enbacher D., Pezeshki G., Hoffineister A., Koenig W. Periodontal infection and coronary heart disease // Arch. Intern. Med. 2006. — Vol. 166, № 5. - P. 554-559.
316. Spencer J.V., Lockridge K.M., Barry P.A., Lin G., Tsang M., Penfold M.E., Schall T.J. Potent immunosuppressive activities of cytomegalovirus-encoded interleukin-10 // J. Virol. 2002. - Vol.76. - P. 1285 - 1292.
317. Stamm L.V., Bergen H.L., Walker R.L. Molecular typing of papillomatous digital dermatitis-associated Treponema isolates based on analysis of 16S-23S ribosomal DNA intergenic spacer regions // J. Clin. Microbiol. 2002. - Vol. 40, №9.-P. 3463-3469.
318. Stanford T.W., Rees T.D. Acquired immune suppression and other risk fac-tors//indicators for periodontal disease progression // Periodontology 2000.2003. Vol. 32. - P. 118 - 135.
319. Stein J., Reichert S., Gautsch A., Machulla H.K.G. // Are there HLA combinations typical supporting for or making resistant against aggressive and/or chronic periodontitis? // J. Periodont. Res. 2003. - Vol. 38. - P. 508 - 517.
320. Strietzel F.P., Reichart P.A., Kulkarni M., Wegner В., Kiichler I. Smoking interferes with the prognosis of dental implant treatment: a systematic review and meta-analysis // J. Clin Periodontol. 2007. - Vol. 34, № 6. - P. 523 -544.
321. Suzuki N., Nakano Y., Yoshida Y., et al. Identification of Actinobacillus actinomycetemcomitans serotypes by multiplex PCR // J. Clin. Microbiol. — 2001. -Vol. 39, № 5. P. 2002 - 2005.
322. Suzuki Y. A tumor necrosis factor-alpha antagonist inhibits inflammatory bone resorption induced by Porphyromonas gingivalis infection in mice // J. Periodontal. Res.-2006.-Vol. 41, № 2.-P. 81-91.
323. Tabanella G. Cytomegalovirus-associated periodontitis and Gullian-Barre syndrome // J. Periodontol. 2005. - Vol. 76, № 12. - P. 2306 - 2311.
324. Takahashi Y., Davey M., Hiromichi Y., Frank C.G., Attardo G.C. Fimbria-dependent activation of pro-inflammatory molecules in Porphyromonas gingivalis infected human aortic endothelial cells // Cellular Microbiol. 2006. -Vol. 8, №5.-P. 738-757.
325. Takashiba S., Naruishi K. Gene polymorphism in periodontal health and di-asease // Periodontology 2000. 2006. - Vol. 40, № 1. - P. 94 - 106.
326. Takashiba S., Ohyama H., Oyaizu K., Kogoe-Kato N., Murayama Y. HLA genetics for diagnosis of susceptibility to early-onset periodontitis // J. Periodontal. Res. 1999. - Vol. 34. - P. 374 - 378.
327. Tanner A.C., Izard J. Tannerella forsythia, a periodontal pathogen entering the genomic era // Periodontology 2000. 2006. - Vol. 42. - P. 88 - 113.
328. Tanner A.C.R., Kent R. Jr., Dyke Van Т., Sonis S.T., Murray L.A. Clinical and other risk indicators for early periodontitis in adults // J. Periodontol. 2005. -Vol. 76, №4.-P. 573-581.
329. Tanner A.C.R., Paster В J., Lu S.C., Kanasi E., Kent R.Jr., Van Dyke Т., Sonis S.T. Subgingival and tongue microbiota during early periodontitis // J. Dent. Res. 2006. - Vol. 85, № 4. - P. 318 - 323.
330. Taylor J.J., Philip M. P., Donaldson P. T. Cytokine gene polymorphism and immunoregulation in periodontal disease // Periodontology 2000. — 2004. — Vol. 35.-P. 158-182.
331. Teles R.P., Haffajee A.D., Socransky S.S. Microbiological goals of periodontal therapy // Periodontology 2000. 2006. - Vol. 42, № 1. - P. 180 - 218.
332. Teughels W., Sliepen I., Quirynen M., Haake S.K., Van Eldere J., Fives-Taylor P., Van Ranst M. Human cytomegalovirus enhances A. actinomycetemcomitans adherence to cells // J. Dent. Res. 2007. - Vol. 86, № 2. - P. 175 - 180.
333. Timmerman M.F. Risk factors for periodontitis // International J. Dental Hygiene. 2006. - Vol. 4, № 1. - P. 2 - 7.
334. Ting M., Contreras A., Slots J. Herpesvirus in localized juvenile periodontitis //J. Periodontal. Res. 2000. - Vol. 35, № 1. - P. 17 - 25.
335. Tortorella D., Gewurz B.E., Furman M.H., Schust D.J., Ploegh H.L. Viral subversion of the immune system // Annu Rev. Immunol. 2000. - Vol. 18. — P. 861 -926.
336. Trevilatto P.C., Tramontina V.A., Machado M.A.N., Gon9alves R.B., Sallum A.W., Line S.R.P. Clinical, genetic and microbiological findings in a Brazilian family with aggressive periodontitis // J. Clin. Periodontol. 2002. — Vol. 29. -P. 233-239.
337. Triantos D., Horefti E., Paximadi E., Kyriakopoulou Z. et al. Presence of human herpes virus-8 in saliva and non-lesional oral mucosa in HIV-infected and oncologic immunocompromised patients // Oral Microbiol. Immunol. — 2004. — Vol. 19.-P. 201 -204.
338. Umeda M., Takeuchi Y., Noguchi K., Huang Y., Koshy G., Ishikawa I. Effects of nonsurgical periodontal therapy on the microbiota // Periodontology 2000. -2004. Vol. 36. - P. 98 - 120.
339. Wang P.L., Ohura K. Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide signaling in gingival fibroblasts CD 14 and Toll-like receptors // Crit. Rev. Oral Biol. Med. - 2002. - Vol. 13. - P. 132 - 142.
340. Wara-Aswapati N., Boch J.A., Auron P.E. Activation of interleukin lbeta gene transcription by human cytomegalovirus: molecular mechanisms and relevance to periodontitis // Oral Microbiol. Immunol. 2003. - Vol. 18, № 2. - P. 67 -71.
341. Winkelhoff A J. Van, Boutaga K. Transmission of periodontal bacteria and models of infection // J. Clin. Periodontol. 2005. - Vol. 32, Suppl. 6. - P. 16 -27.
342. Yamazaki K., Nakajima T. Antigen specificity and T-cell clonality in periodontal diseases // Periodontology 2000. 2004. - Vol. 35. - P. 75 - 100.
343. Yapar M., Saygun I., Ozdemir A., Kubar A., Sahin S. Prevalence of human herpesviruses in patients with aggressive periodontitis // J. Periodontol. 2003. -Vol. 74.-P. 1634-1640.
344. Yildirim S., Yapar M., Kubar A., Slots J. Human cytomegalovirus, Epstein-Barr vims and bone resorption-inducing cytokines in periapical lesions of deciduous teeth // Oral Microbiol. Immunol. 2006. - Vol. 21, № 2. - P. 107 -111.
345. Yilmaz О., Young P.A., Lamont R.J., Kenny G.E. Gingival epithelial cell signaling and cytoskeletal responses to Porphyromonas gingivalis invasion // Microbiology 2003. - Vol. 149. - P. 2417 - 2426.
346. Yoshie H., Kobayashi Т., Tai H., Galicia J.C. The role of genetic polymorphisms in periodontitis // Periodontology 2000. 2007. - Vol. 43. - P. 102 -132.
347. Yoshioka M., Grenier D., Hinode D., Fukui M., Mayrand D. Antigenic cross-reactivity and sequence homology between Actinobacillus actinomycetemcomitans GroEL protein and human fibronectin // Oral Microbiol. Immunol. -2004. Vol. 19. - P. 124 - 128.
348. Young L.S., Rickinson A.B. Epstein-Barr virus: 40 years on // Nat. Rev. Cancer. 2004. - Vol. 4. - P. 757 - 768.
349. Zadeh H.H., Nowzari H., Slots J. Herpesvirus infection of inflammatory cells in human periodontitis // Oral Microbiol. Immunol. 1999. - Vol. 14. - P. 206 -212.
350. Zhou Q., Daste Т., Fenton M. et al. Cytokine profiling of macrophages exposed to Porphyromonas gingivalis, its lipopolysaccharide, or its FimA protein // Infect. Immun. 2005. - Vol. 73. - P. 935 - 943.
-
Николаева, Елена Николаевна
-
доктора медицинских наук
-
Москва, 2008
-
ВАК 03.00.07
- Микробиоценозы полости рта у больных генерализованным пародонтитом,способ диагностики и коррекции
- Реология крови и физико-химические свойства эритроцитов у практически здоровых лиц и больных хроническим генерализованным пародонтитом до и после КВЧ-терапии
- Нарушения агрегационной и адгезивной активности тромбоцитов у больных с воспалительными заболеваниями пародонта и методы их патогенетической коррекции
- Колонизация условно-патогенными микроорганизмами слизистой оболочки полости рта при хроническом пародонтите
- Система протеина С у практически здоровых лиц и ее нарушения при воспалительных заболеваниях пародонта
