Микробиоценозы полости рта у больных генерализованным пародонтитом,способ диагностики и коррекции

Лебедев, Денис Викторович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Микробиоценозы полости рта у больных генерализованным пародонтитом,способ диагностики и коррекции
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микробиоценозы полости рта у больных генерализованным пародонтитом,способ диагностики и коррекции"

ЛЕБЕДЕВ ДЕНИС ВИКТОРОВИЧ

МИКРОБИОЦЕНОЗЫ ПОЛОСТИ РТА У БОЛЬНЫХ ГЕНЕРАЛИЗОВАННЫМ ПАРОДОНТИТОМ, СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ И КОРРЕКЦИИ

03.02.03 - микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 7 ОИТ 2011

Москва-2011

4858547

Работа выполнена в ГБОУ ВПО Тверская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Вячеслав Михайлович Червинец Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Павел Вячеславович Калуцкий Лауреат Государственной премии РФ,

доктор медицинских наук, профессор Евгений Петрович Пашков Ведущая организация:

Московский государственный медико-стоматологический университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится «_»_2011 года в _часов на заседании

диссертационного совета Д. 208.040.08 в (Первом Московском государственном медицинском университете им. И. М^Сеченова по адресу: 119992, Москва, Трубецкая ул., 8, строение 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Московский медицинский университет им. И. М. Сеченова Министерства здравоохранения и социального развития России (117998, Москва, Нахимовский проспект, 49).

Автореферат разослан «_»_2011 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Андрей Юрьевич Миронов

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Воспалительные заболевания пародонта являются причиной взаимодействия микробного содержимого зубной бляшки и тканевого ответа на нее (Грудянов А.И., 2009; Dahlen G., 2006). Появление новых методик микробиологической диагностики позволило идентифицировать ранее не изученные микроорганизмы в составе микробиоценоза при воспалительных заболеваниях пародонта. Появление заболевания периодонта связано, в основном, с заменой преобладающей Грам (+) бактериальной флоры гингивальной щели на Грам (-) анаэробы. Небольшое количество видов Грам (-) флоры связано со специфическими формами заболевания периодонта: Porphyromonas gingivalis при остром и тяжёлом периодонтите у взрослых, Actinobacillus actinomycetemcomitans при локализованном ювенильном периодонтите, Prevotella intermedia и Treponema denticola при остром некроти-зирующем гингивите. Повышенный уровень микроорганизмов был обнаружен в периодонталыюм налёте и невысокий уровень в здоровых участках (Николаева Е.Н., 2009, Царев В.Н., 2010).

Бактерии были устранены успешной терапией, но вновь были обнаружены при реинфекциях. Это свидетельствует об этиологической значимости данных возбудителей в развитии пародонтита.

Остается не до конца выясненным вопрос о роли ассоциативной услов-но-патогенпой микрофлоре полости рта, чтобы ответить на нерешенные вопросы об этиологии заболеваний пародонта. Многие авторы отмечают, что при заболеваниях полости рта наблюдается дисбаланс микрофлоры или дис-бактериоз (Грудянов А.И., 2011). По данным Даниленко В.Н., 2009, только 10% микроорганизмов являются культивируемыми. Не разработаны методы экспресс диагностики дисбактериоза полости рта при различных воспалительных заболеваниях полости рта. В настоящее время остается актуальным разработка новых антимикробных препаратов комплексного действия в лечении пародонтитов.

Цель работы:

Выявить особенности микрофлоры ротовой жидкости и пародонталь-ного кармана у больных генерализованным пародонтитом средней тяжести, определить способ оценки и коррекции дисбактериоза полости рта.

Задачи исследования:

1. Изучить микробиоценоз ротовой жидкости и зубодесневого желобка практически здоровых людей.

2. Выделить, идентифицировать и определить факторы патогенности микроорганизмов ротовой жидкости и пародонталыюго кармана у больных генерализованным пародонтитом средней тяжести.

3. Определить степени дисбактериоза полости рта по протеолитиче-ской (казеинолитической) активности ротовой жидкости.

4. Определить чувствительность микрофлоры полости рта к антибактериальным препаратам.

5. Провести коррекцию нарушенного микробиоценоза полости рта больных хроническим пародонтитом новым антимикробным препаратом на основе хитозана.

Научная новизна:

1. Впервые при изучении микробиоценозов у больных генерализованным пародонтитом средней тяжести выявлено увеличение спектра условно-патогенной микрофлоры и их количества, что соответствует определению дисбактериоз или дисбиоз.

2. Установлено, что условно-патогенные бактерии, выделенные из ротовой жидкости и пародонтального кармана у больных, характеризуются наличием цитотоксической, протеолитической, гемолитической, лецитовите-лазной, РНК-азной, ДНК-азной активностью, что свидетельствует об их потенциальном участии в поддержании воспалительного процесса.

3. Впервые для экспресс диагностики дисбактериоза полости рта у больных генерализованным пародонтитом использовано определение казеиноли-тической (протеинолитической) активности ротовой жидкости.

4. Впервые изучена чувствительность всей выделенной условно-патогенной микрофлоры, доминирующей в этиологии генерализованного па-родонтита, к антибактериальным препаратам, хитозану, его комбинации с БАД «Абисиб» и проведена апробация коррекции дисбактериоза у больных.

Научно-практическая значимость:

1. Показана перспективность экспресс диагностики дисбактериоза полости рта при генерализованном пародонтите по определению казеиноли-тической активности ротовой жидкости.

3. Показана перспективность использования хитозана и его комплекса с БАД «Абисиб» в комплексной терапии генерализованного пародонти-та.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. У больных генерализованным пародонтитом средней тяжести микрофлора ротовой жидкости и пародонталыюго кармана изменяется как по спектру, так и по количеству и факторам патогенности, что соответствует понятию дисбактериоз.

2. Условно-иагогенная микрофлора, выделенная от больных генерализованным пародонтитом средней тяжести, обладающая факторами патогенности, проявляет выраженную способность к образованию биопленок.

4. Экспресс диагностика дисбактериоза полости рта при генерализованном пародонтитом средней тяжести может осуществляться по определению казеинолитической активности ротовой жидкости.

3. Микроорганизмы, выделенные из полости рта больных генерализованным пародонтитом средней тяжести проявляют высокую чувствительность к хитозану и его комбинации с БАД «Абисиб», что может быть использовано в комплексной терапии данного заболевания.

Внедрение результатов в практику:

Материалы исследования внедрены в практическую деятельность бактериологической лаборатории научно-исследовательского центра ГОУ ВПО «Тверская ГМА Минздравсоцразвития России» и лечебную работу стоматологического «Агамицентра» г.Москва.

Результаты исследования используются в учебном процессе кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО «Тверская ГМА Минздравсоцразвития России», кафедры терапевтической стоматологии факультета постдипломного образования ГОУ ВПО «Тверская ГМА Минздравсоцразвития России».

Апробация работы

Материалы диссертации доложены: на V конференции молодых ученых России с международным участием (Москва, 19-22 мая 2008 г.), на совместном заседании Тверских региональных обществ микробиологов, эпидемиологов, паразитологов с инфекционистами и иммунологами 11 февраля 2009 года, на расширенном заседании кафедр факультетской терапии, внутренних болезней педиатрического факультета, фундаментальной и клинической фармакологии, инфекционных болезней, гистологии с эмбриологией, биологии 1 апреля 2009 года, на XV Международная конференция челюстно-лицевых хирургов и стоматологов «Новые технологии в стоматологии» 17-19 мая 2010г. г. Санкт-Петербург.

Личный вклад автора.

Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных результатов. В работах, выполненных в соавторстве, автором лично проведено моделирование процессов, мониторинг основных параметров, аналитическая и статистическая обработка, научное обоснование и обобщение полученных результатов. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки задач до обсуждения результатов в научных публикациях и докладах и их внедрения в практику.

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 11 научных работ, в том числе 4 в изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации.

Объем и структура работы.

Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов, методов исследования, 8 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций. Работа изложена на 140 стр. машинописного текста, иллюстрирована 14 рисунками, 7 таблицами, 7 фотографиями. Библиографический указатель включает 198 наименований из них 87 отечественных и 111 зарубежных источников литературы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования.

Для решения поставленных задач нами обследованы пациенты с обострением генерализованного пародоптита средней тяжести. Обследовано 132 человека в возрасте от 36 до 59 лет, мужчин - 87, женщин - 45. При проведении забора материала было получено разрешение этического комитета и согласие самих обследуемых пациентов. До лечения больные чаще всего

предъявляли жалобы на неприятный запах и дискомфорт в полости рта, кровоточивость и болезненность десны, на подвижность отдельных зубов. Большинство больных ранее не лечились у пародонтолога. У обследованных установлена высокая интенсивность кариеса зубов (КПУ = 18,4±3,6). У всех пациентов наблюдалась выраженная кровоточивость десны при зондовой пробе на фоне неудовлетворительной гигиены полости рта. Индекс гигиены полости рта как «неудовлетворительный» и «плохой» установлен у 86% больных пародонтитом средней степени и у всех пациентов с тяжелым течением пародонтита. У обследованных в пародонте наблюдали воспалительный процесс, подтвержденный изменениями пародонтальных индексов, отмечено возрастание средних значений индекса гингивита до 52,6±1,72% при тяжелом течении, а пародонтального индекса до 4,57±0,17.

Для изучения микрофлоры проводили забор содержимого пародонтального кармана с последующим распределением его по предметному стеклу. Забор смешанной слюны объемом 3 мл проводили натощак путем спле-вывания в стерильный флакон. В качестве контроля была исследована ротовая жидкость и содержимое зубодесневого желобка 26 школьников в возрасте 12-17 лет.

В лаборатории проводили разведение исследуемого материала в изотоническом растворе хлорида натрия и посев на оптимальные для роста бактерий плотные питательные среды.

Для комплексного изучения аэробной и анаэробной микрофлоры посевы производили как на отечественные питательные среды, так и на среды американской фирмы BBL®, включающие желточно-солевой агар (ЖСА) для выделения стафилококков, среду Эндо для энтеробактерий, Sabouraud Dextrose Agar (BBL®) для культивирования дрожжеподобных грибов, Schaedler Agar (BBL®) с кровью и среду MRS Agar (BBL®) для выделения анаэробных бактерий, модернизированный Columbia Agar (BBL®) с кровью для культивирования H.pylori.

Для идентификации аэробных бактерий производили рассев материала на питательные среды: среда Эндо, желточно-солевой агар, среда Сабуро, желточно-сахарный агар. Инкубировали 24-48 часов в условиях аэробиоза при 37°С. Производили учет, макроскопическое и микроскопическое изучение колоний, отсев для получения чистой культуры бактерий. Затем идентификация с использованием Enterotube II, Oxy/Ferm tube, Mycotube (BBL), API 20E; API 20NE; API 20 Staph; API 20 Strept; API 20C Aux (bio Mérieux)

Идентификация Helicobacter pylori имеет свои особенности: транспортировка материала в транспортной среде Portagerm-pylori (BBL); затем рассев материала на Columbia agar Base шоколадный с гемолизированной кровью; инкубация в микроанаэростате с использованием Campy Pak в атмосфере СС>2 + Ü2 + 5% 02 72 часа, при 37°С. Учет, макроскопическое и микроскопическое изучение колоний, отсев для получения чистой культуры бактерий, идентификация в API 20 Campy.

Для идентификации анаэробных бактерий производили рассев материала на Schaedler Agar с кровью (BBL), MRS агар (BBL). .Инкубировали в условиях анаэробиоза с использованием Gas Pak Plus (BBL) в микроанаэростате в атмосфере СО2+Н2 72 часа, при 37°С. Производили учет, макроскопическое и микроскопическое изучение колоний, отсев для получения чистой культуры бактерий. Затем идентификация с использованием API 20А.

Количество бактерий определяли путем подсчета колониеобразующих единиц на I мл слюны (lg КОЕ/мл) или на 1 г содержимого пародонтального кармана (Ig КОЕ/г). Предел разрешающей способности варьировал и составлял 1,1- 1,61g КОЕ/мл/г.

Для выявления лецитиназы исследуемые культуры засевали на желточную среду. Через 18-24 часа инкубации при 37°С вокруг продуцирующих лецитиназу колоний наблюдали зоны оналесценции. Гемолитическую активность определяли по наличию вокруг колоний зоны гемолиза после суточной инкубации посевов исследуемых культур бактерий на 5% кровяном

питательном агаре при 37°С. В опыте использовалась кровь человека 0(1) группы Rh+. Оксидазный тест проводили, используя стандартные индикаторные диски Oxidase test (bio Merieux). Для определения каталазной активности микроорганизмов использовали метод раздавленной капли на предметном стекле. Определение продукции микроорганизмами уреазы проводили, используя стандартный Urease Test Broth (BBL®, USA). Продукцию ка-зеиназы изучали экспресс-методом для определения дисбактериоза кишечника (Червинец В.М. с соавт. 2004). Дезоксирибонуклеазную активность исследуемых штаммов определяли методом Агаповой О.В., 1999 и рибонуклеаз-ную по методике Никитина В.М., 1986. Цитотоксичность микроорганизмов определяли путем внесения стерильных ультразвуковых фильтратов тестируемых штаммов микробов в объеме 0,2 мл в пробирку с 2-суточной культурой клеток НЕр-2 и инкубации в термостате при 37°С в течение 2-5 суток по методике, применяемой в вирусологии для определения цитопатического действия вирусов на клетки культуры ткани. Степень выраженности цитопатического действия учитывали по изменению характера монослоя в виде отслоения клеток, изменения их морфологии, наличию деструкции.

Первичное изучение антагонизма проводили, согласно методики прямого антагонизма Блинкова Л.П., 2003. Степень адгезии микроорганизмов определяли, пользуясь средним показателем адгезии (СПА) по методу Бри-лис В.И.(1986) на эритроцитах человека О (I) группы Rh+ . Чувствительность выделенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам определялась методом диффузии в агар на среде Muller-Hinton 2 в соответствии с методиками, рекомендованными NCCLS. Способность микроорганизмов к образованию биопленок изучали по методу Романова, Ю.М., 2006.

Способ экспресс диагностики дисбактериоза полости рта по определению протеинолитической активности микроорганизмов в ротовой жидкости зарегистрирован в Федеральном институте промышленной собственности № 2009129208 (040645) от 30.07.2009г.)

Данные экспериментов обрабатывались с помощью прикладной программы "STAT1STICA" (Stat Soft Russia). Достоверность различий определялась на основании критерия Стыодента.

Результаты исследования

Исследованиями, проведенными у 26 практически здоровых школьников 12-17 лет установлено, что в ротовой жидкости изолировали микроорганизмы 14 родов и 1 семейства Enterobacteriaceae (рис. 1). В 53,8% - 100% случаев выделяли микроорганизмы рода Streptococcus, Peptostreptococcus, Lactobacillus, Staphylococcus, Veillonella, дрожжевые грибы рода Candida, бактерии семейства Enterobacteriaceae, с меньшей частотой - стоматококки, микрококки, нейссерии, пептококки, бациллы, бактероиды, актиномицеты, лептотрихии.

Видовой состав микрофлоры был представлен следующими: Streptococcus uberis, S.agalactiae, Lactobacillus rhamnosus, L.plantaruin, L.paracasei, Staphylococcus aureus, S.epidermidis, S.lentus, Candida albicans, C.famata, C.parapsilosis и др. Семейство Enterobacteriaceae было представлено Citrobacter freundii, Serratia liquefaciens, Acinetobacter lwoffn.

Количество микроорганизмов в 1 мл ротовой жидкости составляло от 6,95±0,71 lg КОЕ у пептострептококков до 2,8±0,50 lg КОЕ у микрококков. В среднем количество микроорганизмов было 4,9±1,2 lg КОЕ/мл.

Микроорганизмы выделялись в ассоциациях от 3 до 9 видов, в среднем 6,5±1,7 видов бактерий. В основном представляли ассоциации стрептококки, бактероиды, нейссерии, нептострептококки, лактобациллы, энтеробактерии и ДР-

100 т

50 -40 -

- 20 -10 - I a

1 1 1

1 1 1 1 1 1 1

Streptococcus spp. Lactobacillus spp. Velllonellaspp. ^nterobacteriaceae 0 % 3 | Micrococcus spp. u 1 Peptococcus spp. Actinomyces spp. Bacteroides spp.

Рис. 1. Спектр и частота встречаемости микроорганизмов ротовой жидкости здоровых людей 12-17 лет

У практически здоровых школьников 12-17 лет дисбактериоз 1 степени зарегистрирован у 3 -х детей, что составило 10,7%, у остальных он отсутствовал.

Из образцов содержимого зубодесневого желобка выделено 15 родов микроорганизмов и 1 семейство энтеробактерий. Более чем у половины обследованных подростков выделялись микроорганизмы рода Peptostreptococcus, Streptococcus, Staphylococcus, Lactobacillus, Bacteroides и Peptococcus, бактерии семейства Enterobacteriaceae и Micrococcus -в 33,042,8%, менее чем у 25% подростков установлены стоматококки, бифидобак-терии, вейллонеллы и грибы рода Candida и очень редко (в 7,1%) - бациллы, лептотрихии, порфиромонады и актиномицеты.

Микрофлора была представлена следующими видами: Streptococcus uberis, S.agalactiae, Lactobacillus rhamnosus, L.fermentum, L.plantarum, L.paracasei, Staphylococcus aureus, S.xilosus, S.epidermidis, S.lentus, Bacillus circulans, Candida albicans, C.famata, C.parapsilosis и др. Семейство

Enterobacteriaceae было представлено Citrobacter freundii, Serratia liquefaciens, Acinetobacter lwoffli.

Количество микроорганизмов в зубодесневом желобке было небольшим и составляло от 4,26±0,5 lg КОЕ/г у иептострептококков до 1,65±0,2 lg КОЕ/г у дрожжеподобных грибов рода Candida. В среднем - 3,0±0,45 lg КОЕ/г. Микроорганизмы выделялись в ассоциациях от 2 до 9 видов (в среднем 6,2±2,3). В ассоциации входили в основном стрептококки, стафилококки, пептострептококки, пептококки, лактобациллы, бактероиды, эитеробактерии и др.

Такое качественное и количественное соотношение микроорганизмов с отсутствием или незначительным наличием протеолитической (казеинолити-ческой) активности можно расценивать как нормобиоценоз.

У пациентов с пародонтитом в мазках из пародонтального кармана обнаружили большое количество представителей грамположительной, гра-мотрицательной микрофлоры, извитые формы бактерий. В пародонтальном кармане встречались Грам+ стафилококки, стрептококки, палочки, Грам- палочки, нити, спирохеты, лептотрихии, фузобактерии, лактобациллы, грибы рода Candida и др.

При бактериологическом исследовании пародонтального кармана 132 больных с генерализованным пародонтитом средней тяжести обнаружено, что происходят изменения в качественном и количественном составе с преобладанием штаммов с факторами патогенпости (рис.2). В 100% случаев выделялись микроорганизмы рода Streptococcus и Peptostreptococcus, в 96% случаев - Staphylococcus, в 68% - Micrococcus, Peptococcus и Lactobacillus, в 66% - Porphiromonas, в 26% - Actinomyces, в 24% - Clostridium, в 14-16% -Bacteroides, Bacillus, Bifidobacterium, Stomatococcus, Candida, в 12% -Veillonella, в 9-9,6% - Neisseria и бактерии семейства Enterobacteriaceae, в 5,1%) - H.pylori.

100 90 80 70 60

St 50 40 30 20 10 0

'* -1 -1 III I 1 1 1 I I

d о о о 8 lA 3 о g I £ d ■с ф

о о о 2. о 0 1 о о о S Е £ 2 1 о со » 3 я S

£ Ö Q. Я « 0 1 е- о а. О 1 а ■о i

•с •

6 я ja о

микроорганизмы

Рис. 2. Спектр и частота встречаемости микроорганизмов пародонта-алыюго кармана больных генерализованным пародонтитом.

Микрофлора была представлена следующими видами: Streptococcus uberis, S.agalactiae, Lactobacillus rhamnosus, L.fermentum, L.plantarum, L.paracasei, Lactococcus lactis, Staphylococcus aureus, S.cohnii, S.capitis, S.xilosus, S.epidermidis, S.lentus, Cryptococcus species, C.humicolus, Enterococcus durans, Bacillus circulans, Peptococcus niger, Peptostreptococcus anaerobius, Porphiromonas gingivalis, Actinomyces naeslundii, A.meyeri, Clostridium clostridiiforme, C.dostridii, Veillonella atypica, Bacteroides ovatus, Neisseria sicca, N.mycosa, Candida albicans, C.famata, C.parapsilosis и др. Семейство Enterobacteriaceae было представлено Citrobacter freundii, Serratia liquefaciens, S.rubidea, S.liquefaciens, Acinetobacter lwoffii, Moraxella species, a также Pseudomonas putida и др.

Количество микроорганизмов превышало 4 lg КОЕ/мл и в среднем составляло 5,8 lg КОЕ/мл. Наиболее многочисленными изолировались бактерии родов Peptostreptococcus (7,7 lg КОЕ/г), Streptococcus (6,72 Ig КОЕ/г),

Porphiromonas (6,8 lg КОЕ/г), Bacteroides (6,3 Ig KOE/r), Veillonella, Peptococcus, Clostridium (6 lg KOE/r), Staphylococcus (5,9 lg KOE/r), Neisseria (5,4 lg KOE/r), Actinomyces (5,2 lg KOE/r).

Факторы патогенности обнаруживались у 24-82% стафилококков, стрептококков, пептококков, пептострептококков, порфиромонад, клостри-дий, бацилл. Микроорганизмы выделялись в ассоциации от 4 до 8 в исследуемом материале.

В ротовой жидкости при генерализованном пародонтите выявляли в 100% случаев стрептококки и пептострептококки, в 97% - стафилококки, в 66% - микрококки, в 59% - бактерии рода Porphiromonas, в 32% - лактоба-циллы, в 21% - актиномицеты и в менее чем 15% - энтеробактерии, бифидо-бактерии, стоматококки, вейлонеллы, бациллы, кандиды, нейссерии.

Количество большинства выделенных условно-патогенных микроорганизмов превышало 5 lg КОЕ/г и составляло у бактерий родов Peptostreptococcus 7,6 lg КОЕ/г, Veillonella - 7,5 lg КОЕ/г, Bacteroides - 7,2 lg KOE/r, Porphiromonas - 7 lg KOE/r, Staphylococcus - 6,6 Ig KOE/r, Lactobacillus - 6,3 lg KOE/r, Streptococcus - 5,8 lg KOE/r, Peptococcus - 5,5 Ig KOE/r, Clostridium 5,4 lg KOE/r, Neisseria - 5 lg KOE/r.

В монокультуре микроорганизмы не встречались. Бактерии выделялись в сочетании от 4-х до 8 культур, в среднем 6,4 ± 2,6. Чаще встречались пептострептококки, стрептококки, бактероиды, стафилококки, порфиромонады, лактобациллы. Признаки патогенности определяли у стафилококков 57,1%, у стрептококков и пептострептококков - 7,1%.

Экспресс - диагностика образцов ротовой жидкости выявила в 58,7% случаев 2 степень дисбактериоза, в 10,2% - 1 степень дисбактериоза, а с выраженными проявлениями воспаления патодонта в 31,1% -3 степень дисбактериоза.

При определении казеинолитической активности выделенных микроорганизмов из ротовой жидкости и пародонтального кармана больных ге-

нерализованным пародонтитом установлено, что Staphylococcus spp. в 71,7% выделяют протеолнтнческие ферменты с зоной протеолиза 11-14 мм, что соответствует 2 степени дисбактериоза, бактерии родов Streptococcus, Clostridium - в 52,3% с зоной протеолиза 8-14 мм (1 и 2 степень дисбактериоза), микрококки обладали протеинолитической активностью в 48,9% случаев, порфиромонады в 20% с зоной протеолиза 11-14 мм (2 степень дисбактериоза). Казеинолитическая активность не выявлена у пептококков, пептостреп-тококков, лактобацилл, бактероидов, кандид.

Таким образом, установлена причастность ассоциации условно-патогенной микрофлоры к развитию воспалительных заболеваний пародонта и выявлена связь между присутствием в ротовой жидкости патогенной и условно-патогенной микрофлоры и степенью ее протеолитической (казеиноли-тической) активности.

Микрофлора полости рта практически здоровых детей и подростков, выделенная из различных биотопов обладала примерно одинаковой степенью чувствительности к антибиотикам.

К антибиотикам пенициллинового ряда (ампициллин, карбенициллин) в 100% случаев были чувствительны стрептококки, микрококки, лептотри-хии, энтеробактерии, в 89,5% - лактобациллы, в 80% - бациллы, в 63,6-81,8% — стафилококки.

К цефалоспоринам (цефазолин, цефалотин, цефуроксим, цефотаксим, цефтриаксон, цефтазидим, цефалексин) в 85,7-100% были чувствительны стафилококки, стрептококки, микрококки, лактобациллы, стоматококки, энтеробактерии, в 20-80% - бациллы. Лептотрихии обладали чувствительностью только к цефазолину и цефатоксину.

К тетрациклину чувствительность проявляли 85,7-100% выделенных стафилококков, стрептококков, стоматококков, микрококков, лактобацилл, энтеробактерий, 40% бацилл. Лептотрихии к тетрациклину были резистент-

ны. К левомицетину чувствительны 81,8-100% стафилококков, стрептококков, микрококков, лактобацилл, 40% бацилл.

К аминогликозидам (канамицин, гснтамицин, амикацин) чувствительны 72,7-100% энтеробактерий, стафилококков, стоматококков, бацилл. Резистентность к аминогликозидам проявляли 89,5-94,2% лактобацилл.

К полимиксину были чувствительны только энтеробактерии и лептот-рихии, остальные микроорганизмы в 80-94,8% случаев резистентны. К фуро-донину чувствительны все выделенные микроорганизмы.

К ципрофлоксацину чувствительны 72,7-100% стафилококков, стрептококков, микрококков, бацилл, энтеробактерий, резистентность проявили 73,7% лактобацилл. К офлоксацину были чувствительны 63,1-100% всех микроорганизмов. К стрептомицину микрофлора чувствительна за исключением лактобацилл и лептотрихий, которые в 84,2-100% проявили резистентность. Резистентных к ванкомицину стафилококков не выделялось.

Чувствительность к антибиотикам микрофлоры полости рта, выделенной от больных генерализованным пародонтитом, отличается от микрофлоры практически здоровых детей и подростков. Появляются больше штаммов, обладающих резистентностью ко многим антибиотикам.

От 17 до 15 родов микробов оказались чувствительны к норфлоксаци-ну, ампициллину, тетрациклину, рифампицину, амоксициллину и кларитро-мицину. От 8 до 14 - к оксациллииу, пенициллину, олеандомицину и линко-мицину. И всего лишь три - к метронидазолу. При этом наиболее высоким и широким бактерицидным действием - к 9 родам микроорганизмов, выделенных из СО, обладал офлоксацин, несколько меньшим (5-7 родов) - оксацил-лин, хлорамфеникол, норфлоксацин, ципрофлоксацин, гентамицин, ампициллин и кларитромицин, тогда как тетрациклин, пенициллин, олететрин, рифампицин, линкомицин и амоксициллин полностью подавлял рост всего лишь двух- четырех микробных культур, выделенных из СО. Наименьшим антимикробным действием обладал метронидазол.

Стрептококки в 100% обладали высокой чувствительностью к ампи циллину, амоксициллину и кларитромицину, в 90,9% - к пенициллину и хло рамфениколу, в 81,8%) - к олеандомицину, в 63,6% - к оксациллину и ри фампину, в 54,5% - к тетрациклину, в 45,5% - к ципрофлоксацину, в 27,3% к линкомицину и офлоксацину и только в 9,1% - к метронидазолу. Средня степень чувствительности отмечалась у 90,9% штаммов к гентамицину 54,5% - к норфлоксацину, 45,5% - к офлоксацину, 26,5-36,4% - к тетрацик лину, оксациллину, ципрофлоксацину, 18,2% - к олеандомицину и линкоми цину.

Дрожжевые грибы рода Candida в 100% случаев были резистентны кетоконазолу, в 83,3% - к клотримазолу, флуконазолу, в 75% - к амфотери цину В, в 25% - к нистатину и в 16,7% - к итраконазолу. К хитозану на Аби сибе кандиды проявляли 100%) чувствительность.

Таким образом, микрофлора полости рта больных генерализованны пародонтитом отличается от микрофлоры практически здоровых тем, что них в большем количестве присутствуют условно-патогенные микроорга низмы, обладающие факторами патогенности и проявляющих устойчивость антибиотикам. При лечении необходимо учитывать резистентность условно патогенной микрофлоры к антибиотикам и, прежде всего, к бензилпеницил лину. Для оптимального подавления ее роста целесообразно применять ком бинацию фторхинолонов (офлоксацина, ципрофлоксацина) с полусинтетиче скими пенициллинами (оксациллином), аминогликозидами (гентамицином и итраконазол для подавления дрожжевых грибов.

Учитывая чувствительность выделенной из СО микрофлоры к антибактериальным препаратам, по нашим данным, наиболее широким спек тром подавления роста всей микрофлоры СО бактерицидным действием по отношению к большинству микроорганизмов обладает офлоксацин. И несколько меньшим - норфлоксацин, ампициллин, гентамицин, кларитроми-цин ципрофлоксацин и оксациллин, в то время как метронидазол практиче-

ски не оказывал влияния и подавлял активность только трех родов микроорганизмов, выделенных из СО.

Следует считать, что для санации в виде монотерапии может быть использован офлоксацин. А для оптимального подавления роста всей микрофлоры целесообразно применять комбинацию фторхинолонов (офлоксацина, норфлоксацина, ципрофлоксацина) с полусинтетическими пенициллинами (ампициллином, оксациллином), аминогликозидами (гентамицином), или макролидами (кларитромицином) и для подавления дрожжевых грибов - ит-раконазол.

Однако применяемые в терапии антибиотики и антимикробные хими-опрепараты могут вызвать иммунодепрессивное и аллергизирующее действие, подавлять репаративные процессы, а также могут привести к появлению устойчивых к антибиотикам штаммов. Поэтому проблема лечения острых периодонтитов все еще остается актуальной.

Исследованиями установлена высокая антимикробная активность нового препарата хитозана, с преимущественной активностью в отношении представителей условно-патогенной микрофлоры. Он представляет собой деаце-тилированное производное хитина панциря краба, состоит из звеньев 2-амино-О-глюкозы и М-ацетилглкжозамина, очень близок по структуре к му-кополисахаридам клеточных оболочек и внеклеточного вещества различных органов человека. Хитозан вызывает пролонгирующее действие лекарственных препаратов, усиливает их лечебный эффект. Кроме того, хитозан обладает антимикробной, сорбционной, деадгезивной и иммуномодулирующей активностью.

Предлагается способ местного лечения воспалительных заболеваний пародонта путем введения в пародонтальные карманы в виде аппликации на ватной турунде или губке 2% раствора пищевого кислоторастворимого хитозана в биологически активной добавке «Абисиб», представляющий собой водный экстракт сибирской пихты, богатой витаминами, фитонцидами, био-

флавоноидами, микроэлементами, органическими кислотами (рН 4). (Патент на изобретение №2400174 Способ местного лечения воспалительных заболеваний пародонта.).

При определении чувствительности методом диффузии в агар выделенных из слюны и пародонтального кармана больных с пародонтитами 167 штаммов микроорганизмов обнаружено, что 85,1% всех штаммов, включая дрожжеподобные грибы рода Candida, проявили высокую и среднюю чувствительность к 2% раствору хитозана на «Абисибе». Зоны задержки роста были в пределах 12-30 мм. Резистентными оказались выделенные штаммы лак-тобацилл, представляющих нормальную микрофлору и 3,7% выделенных условно-патогенных штаммов пептококков и пептострептококков.

При проведении местного лечения хитозаном на «Абисибе» установлено, что сроки лечения больных с генерализованным пародонтитом в зависимости от локализации процесса протекают обычно в течение 7-8 суток. Клинические показатели до лечения соответствовали по своим значениям средней степени пародонтита в стадии обострения и отражали плохой уровень гигиены полости рта, выраженную степень воспаления тканей пародонта, глубокие пародонтальные карманы. Статистический анализ клинических показателей выявил значимые различия по средним показателям до и после лечения (р < 0,05).

Клинические показатели после лечения соответствовали хроническому воспалению в стадии стабилизации.

Таким образом, данные исследований показывают, что местное применение 2% раствора хитозана в Абисибе высоко эффективно и улучшает качество лечения различных форм воспалительных заболеваний пародонта. Сроки лечения сокращаются на 2-8 суток по сравнению с традиционными способами терапии с применением антибиотиков и антисептиков. Хитозан оказывает бактерицидное действие и ранозаживляющий эффект без дополнительного системного применения антибиотиков и противовоспалительных препа-

ратов, даже на хирургическом этапе комплексного лечения. Применение хи-тозана на Абисибе позволяет существенно повысить качество и сократить сроки лечения на всех этапах комплексного лечения воспалительных заболеваний пародонта.

Выводы

1. У практически здоровых детей в возрасте 12-17 лет доминирующими видами микроорганизмов в ротовой жидкости и зубодесневом желобке были микроорганизмы родов Streptococcus, Peptostreptococcus, Lactobacillus, Staphylococcus, Veillonella, Bacteroides, Peptococcus, дрожжеподобные грибы рода Candida, бактерии семейства Enterobacteriaceae, с меньшей частотой изолировали стоматококки, микрококки, нейссерии, бациллы, бактероиды, актиномицеты, лептотрихии. и очень редко (в 7,1%) - бациллы, лептотрихии, порфиромонады и актиномицеты. Микроорганизмы встречаются в ассоциациях от 3 до 9 видов, имеют узкий спектр ферментативной активности. Количество микроорганизмов редко превышает 4 lg КОЕ.

2. У больных генерализованным пародонтитом средней тяжести в пародон-тальном кармане доминирующими были микроорганизмы родов Streptococcus, Peptostreptococcus, Staphylococcus, Micrococcus, Peptococcus и Lactobacillus, Porphiromonas, реже изолировались актиномицеты, клост-ридии, бактероиды, бациллы, стоматококки, бифидобактерии, дрожжевые грибы, вейлонеллы, нейссерии и бактерии семейства Enterobacteriaceae, в 5,1% выделили Н.pylori. Количество микроорганизмов в среднем составляло 5,8 lg КОЕ/мл. Факторы патогенности обнаруживались у 24-82% стафилококков, стрептококков, пептококков, пептострептококков, порфи-ромонад, клостридий, бацилл. Микроорганизмы выделялись в ассоциации от 4 до 8 в исследуемом материале.

3. При экспресс - диагностике дисбактериоза по казеинолитической активности образцов ротовой жидкости установлено, что в 10,2% выявляется 1

степень дисбактериоза, в 58,7% случаев - 2 степень, а с выраженными проявлениями воспаления патодонта в 31,1% -3 степень дисбактериоза.

4. Чувствительность к антибиотикам микрофлоры полости рта, выделенной от больных генерализованным пародонтитом, отличается от микрофлоры практически здоровых детей и подростков. Появляются больше штаммов, обладающих резистентностью ко многим антибиотикам. Для оптимального подавления роста всей микрофлоры целесообразно применять комбинацию фторхинолонов (офлоксацина, норфлоксацина, ципрофлоксаци-на) с полусинтетическими пенициллинами (ампициллином, оксацилли-ном), аминогликозидами (гентамицином), или макролидами (кларитроми-цином) и для подавления дрожжевых грибов - итраконазол.

5. Установлено, что 85,1% всех штаммов, выделенных из полости рта больных генерализованным пародонтитом, включая дрожжеподобные грибы рода Candida, проявили высокую и среднюю чувствительность к 2% раствору хитозана на «Абисибе». При проведении местного лечения хитоза-ном на «Абисибе» установлено, что сроки лечения больных с генерализованным пародонтитом сокращаются на 2-8 суток по сравнению с традиционными способами терапии с применением антибиотиков и антисептиков.

Практические рекомендации 1 .При генерализованном пародонтите в целях экспресс диагностики дисбактериоза полости рта предлагается определение казеинолитической активности ротовой жидкости, включающее предварительное обеззараживание исследуемой ротовой жидкости хлороформом и внесение полученного супер-натанта в лунки с питательной средой, содержащей казеин. После инкубации при температуре 35-37°С в течение 6-18 часов реакция проявлялась путем внесения на агар раствора кислоты. Результаты оценивают по размеру диаметра зон просветления. При этом размер зоны просветления 0-6 мм вокруг лунки свидетельствует об отсутствии дисбактериоза, 7-8 мм соответствует 1 степени дисбактериоза, 9-16 мм - дисбактериоз 2 степени и более 16 мм - 3

степень. Способ зарегистрирован в Федеральном институте промышленной собственности № 2009129208 (040645) от 30.07.2009г.)

1. Полученные данные о чувствительности выделенной из полости рта больных генерализованным пародонтитом к антибактериальным препаратам, позволяют ориентировать клиницистов при выборе эффективного антимикробного средства. При лечении необходимо учитывать резистентность условно-патогенной микрофлоры к бензилпенициллину. Для оптимального подавления ее роста целесообразно применять комбинацию фторхинолонов (офлоксацина, ципрофлоксацина) с полусинтетическими пенициллннамн (оксациллином), аминогликозидами (гентамици-ном) и итраконазол для подавления дрожжевых грибов.

2. В комплексной терапии генерализованного пародонтита местное применение путем введения в пародонтальные карманы в виде аппликации на ватной турунде или губке 2% раствора пищевого кислоторастворимого хитозана в биологически активной добавке «Абисиб» высоко эффективно и улучшает качество лечения различных форм воспалительных заболеваний пародонта. Сроки лечения сокращаются на 2-8 суток но сравнению с традиционными способами терапии с применением антибиотиков и антисептиков. Патент на изобретение № 2400174 от 27.09.2010.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. O.A. Гаврилова, В.М. Червинец, Ю.В. Червинец, Д.В. Лебедев Микроэкология слизистой оболочки полости рта у школьников // Материалы всероссийской научной конференции с международным участием «Социально-медицинские аспекты экологического состояния Центрального экономического района России. Тверь, 2007,- С.289-291.

2. В.М. Червинец, И.Я. Пиекалнитс, O.A. Гаврилова, Ю.В. Червинец, Д.В, Лебедев. Особенности микрофлоры полости рта у больных с генерализованным пародонтитом средней тяжести // Материалы всероссий-

ской научной конференции с международным участием «Социально-медицинские аспекты экологического состояния Центрального экономического района России. Тверь, 2007,- С.499-500.

3. O.A. Гаврилова, Ю.В.Червинец, В.М. Червинец, Бондаренко В.М., A.M. Самоукина, Д.В. Лебедев. Микробный пейзаж полости рта у здоровых подростков и больных хроническим гастродуоденитом // Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунобиологии 2008, №6, с.59-63.

4. Лебедев Д.В. Дисбактериоз полости рта у больных с воспалительными заболеваниями пародонта // Вестник Российской академии медицинских наук. Приложение. Тезисы V Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» 2008, №6, с.242-243.

5. А.М.Самоукина, Ю.В.Червинец, Д.В.Лебедев, О.А.Гаврилова Микрофлора полости рта детей 7-11 лет // Вестник Российской академии медицинских наук. Приложение. Тезисы V Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» 2008, №6, с.385-386.

6. Ю.В. Червинец, A.M. Самоукина, Е.С. Михайлова, Д.В. Лебедев, O.A. Гаврилова. Микрофлора полости рта детей 7-11 лет // Тезисы конференции «Современные проблемы науки и образования IV общероссийской научной конференции г.Москва, 17-19 февраля 2009 г. Журнал «Успехи современного естествознания», 2009, № 2, с.73.

7. В.М.Червинец, Д.В.Лебедев, Ю.В. Червинец, O.A. Гаврилова, A.M. Самоукина, Е.С.Михайлова. Колонизационная и патогенетическая способность микрофлоры пародонтального кармана больных с воспалением пародонта // Тезисы конференции «Актуальные вопросы науки и образования V общероссийской конференции, г.Москва, 13-15 мая

2009 г. Журнал «Успехи современного естествознания» 2009, №7, с.111.

8. Ю.В. Червинсц, A.M. Самоукина, В.М. Червинец, Е.С. Михайлова, Д.В. Лебедев, В.М. Бондаренко. Способность индигенных лактобацилл полости рта человека к формированию биопленок // Журнал микробиологии эпидемиологии и иммунобиологии 2010, №6, с.80-83.

9. С.Г.Ботина, Ю.В.Червинец, К.М.Климина, Н.В.Коробан, В.М.Червинец, О.А.Гаврилова, Д.В.Лебедев, А.Ю.Миронов. Генетическая идентификация антагонистически активных штаммов лактобацилл, выделенных из полости рта здоровых людей // Клиническая лабораторная диагностика 2010, №11, с.43-46.

Ю.Ю.В.Червинец, С.Г.Ботина, А.А.Глазова, Н.В.Коробан, В.М.Червинец, A.M.Самоукина, О.А.Гаврилова, Д.В.Лебедев, А.Ю.Миронов. Генетическая паспортизация и изучение способности к формированию биопленок лактобациллами, выделенными из полости рта здоровых людей // Клиническая лабораторная диагностика 2011, №2, с.44-46.

11. В.М.Червинец, Б.Н.Давыдов, О.А.Гаврилова, И.Я.Пиекалнитс, Ю.В.Червинец, Д.ВЛебедев, A.M.Самоукина, А.И.Албулов, Н.Я.Костеша Способ местного лечения воспалительных заболеваний пародонта // Патент на изобретение №2400174, Бюл.№ 27, 27.09 2010 г.

12.В.М.Червинец, Б.Н.Давыдов, О.А.Гаврилова, И.Я.Пиекалнитс, Ю.В. Червинец, Д.В. Лебедев, A.M.Самоукина. Способ диагностики дисбак-териоза полости рта // Приоритетная справка. Зарегистрирована в Федеральном институте промышленной собственности № 2009129208 (040645) от 30.07.2009.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Лебедев, Денис Викторович

Список сокращений.

Введение.

ГЛАВА 1. Микробиоценозы полости рта у больных генерализованным пародонтитом средней тяжести (Обзор литературы).

1.1. Коррекция дисбактериоза полости рта при хроническом генерализованным пародонтите.

1.2. Антибиотики, рекомендуемые к использованию при лечении

- заболеваний пародонта.

1.3. Антимикробная активность хитозана.

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Характеристика исследуемого материала.

2.2. Методы идентификации выделенных микроорганизмов.

2.3. Методики определения факторов патогенности микроорганизмов . 38 2.3.1. Методика определения лецитиназной и гемолитической активности 38 2.3.2 Методика определения оксидоредуктазной активности.

2.3.3. Методика определения уреазной активности микроорганизмов.

2.3.4. Методика определения микробных протеаз.

2.3.5. Методика определения нуклеазной активности микроорганизмов

2.3.6. Определение цитотоксичности микроорганизмов.

2.4. Определение антагонистической способности микроорганизмов методом перпендикулярных штрихов.

2.5. Методика определения адгезивной способности микроорганизмов

2.6. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

2.7. Методика определения способности микроорганизмов к образованию биопленок.

2.8. Способ экспресс диагностики дисбактериоза полости рта по определению протеинолитической активности микроорганизмов в ротовой жидкости.

2.9. Статистическая обработка материала.

ГЛАВА 3. Микробиоценоз полости рта у здоровых людей и у больных генерализованным пародонтитом.

3.1. Микробиоценоз основных биотопов полости рта практически здоровых школьников 12-17 лет.

3.2. Микробиоценоз пародонтального кармана больных генерализованным пародонтитом средней тяжести.

ГЛАВА 4. Факторы патогенности микроорганизмов полости рта у здоровых и больных генерализованным пародонтитом.

4.1. Спектр ферментативной активности микрофлоры полости рта у здоровых лиц.

4.2. Спектр ферментативной активности микрофлоры полости рта больных генерализованным пародонтитом средней тяжести.

4.3. Взаимоотношения микроорганизмов между собой.

4.4. Адгезивная способность микроорганизмов.

4.5. Способность к формированию биопленок.

ГЛАВА 5. Определение степени дисбактериоза полости рта по протеолитической (казеинолитической) активности ротовой жидкости.

ГЛАВА 6. Чувствительность условно-патогенных микроорганизмов, доминирующих в этиологии болезней полости рта к антибактериальным препаратам

6.1. Антимикробная активность хитозана.

ГЛАВА 7. Применение нового препарата хитозан, растворенного на Абисибе в комплексном лечении генерализованного пародонтита.

ГЛАВА 8. Обсуждение результатов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Микробиоценозы полости рта у больных генерализованным пародонтитом,способ диагностики и коррекции"

Актуальность проблемы

Микрофлора полости рта в норме представлена различными видами микроорганизмов. С ними могут быть связаны различные заболевания полости рта. Парадонтопатогенная микрофлора появляется тогда, когда нарушается, нормальный баланс между микроорганизмами, аутохтонной и аллохтон-ной микрофлорой.,Разработка современных молекулярных технологий в изучении микрофлоры полости рта, может способствовать улучшению методов-диагностики, оценке риска заболеваний; и их лечения. Микробиологические исследования играют важную роль для расшифровки этиологии различных заболеваний полости рта, их профилактики и лечения^

Большинство учёных придерживается версии, что результатом заболеваний периодонта является комплекс причин:, наличие глубокого зубо-десневого кармана и благодаря этому патологическое воздействие микроорганизмов. Предполагается, что некоторые состояния могут возникать из-за распространения воспаления пульпы к прилежащим тканям периодонта. Появление заболевания периодонта связано; в основном, с заменой преобладающей Грам (+) бактериальной флоры;гингивальной щели на Грам (-^анаэробы. Небольшое количество видов Грам (-) флоры связано со специфическими формами заболевания- периодонта: Porphyromonas gingivalis при остром и тяжёлом периодонтите у взрослых, Actinobacillus actinomycetemcomitans при локализованном ювенильном периодонтите, Prevotella intermedia и Treponema denticola при остром некротизирующем гингивите. Повышенный уровень микроорганизмов был обнаружен в перио-донтальном налёте и невысокий уровень в здоровых участках [77]. Бактерии были устранены успешной терапией, но вновь были обнаружены при реин-фекциях. Это свидетельствует об этиологической значимости данных возбудителей в развитии периодонтита.

Однако остается не до конца выясненным вопрос о роли ассоциативной условно-патогенной микрофлоре полости рта, чтобы ответить на нерешенные вопросы об этиологии заболеваний периодонта. Многие авторы отмечают, что при заболеваниях полости рта наблюдается дисбаланс микрофлоры или дисбактериоз [16]. Не разработаны методы экспресс диагностики дисбакте-риоза полости рта при различных воспалительных заболеваниях полости рта. В настоящее время остается актуальным разработка новых антимикробных препаратов комплексного действия в лечении пародонтитов.

В этой связи целью нашего исследования явилось выявить особенности микрофлоры ротовой жидкости и пародонтального кармана у больных генерализованным пародонтитом средней тяжести, определить способ оценки и коррекции дисбактериоза полости рта.

Для решения этих проблем поставлены задачи.

1. Изучить микробиоценоз ротовой жидкости и зубодесневого желобка практически здоровых людей.

2. Выделить, идентифицировать и определить факторы патогенности микроорганизмов ротовой жидкости и пародонтального кармана у больных генерализованным пародонтитом средней тяжести.

4. Определить чувствительность микрофлоры полости рта к антибактериальным препаратам.

Научная новизна исследования

Практическая значимость исследования

2. Полученные данные о чувствительности выделенной из полости рта больных генерализованном пародонтитом к антибактериальным препаратам, позволяют ориентировать клиницистов при выборе эффективного антимикробного средства.

Апробация работы

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. У больных генерализованным пародонтитом средней тяжести микрофлора ротовой жидкости и пародонтального кармана изменяется как по спектру, так и по количеству и факторам патогенности, что. соответствует понятию дисбактериоз.

2. Условно-патогенная микрофлора, выделенная от больных генерализованным пародонтитом средней тяжести, обладающая факторами патогенности, проявляет выраженную способность к образованию биопленок.

4. Экспресс диагностика дисбактериоза полости рта при генерализованным пародонтитом средней тяжести может осуществляться по определению казеинолитической активности ротовой жидкости.

Объем и структура диссертации

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Лебедев, Денис Викторович

Выводы

1. У практически здоровых детей в возрасте 12-17 лет доминирующими видами микроорганизмов в ротовой жидкости и зубодесневом желобке были микроорганизмы- родов Streptococcus, Peptostreptococcus, Lactobacillus, Staphylococcus, Veillonella, Bacteroides, Peptococcus, дрожжеподобные грибы рода Candida, бактерии семейства Enterobacteriaceae, с меньшей частотой изолировали стоматококки, микрококки, нейссерии, бациллы, бактероиды, актиномицеты, лептотрихии. и очень редко (в 7,1%) — бациллы, лептотрихии, порфиромонады и актиномицеты. Микроорганизмы встречаются в ассоциациях от 3 до 9 видов, имеют узкий спектр ферментативной активности. Количество микроорганизмов редко превышает 4 lg КОЕ.

2. У больных генерализованным пародонтитом средней тяжести в пародон-тальном кармане доминирующими были микроорганизмы родов Streptococcus, Peptostreptococcus, Staphylococcus, Micrococcus, Peptococcus и Lactobacillus, Porphiromonas, реже изолировались актиномицеты, клост-ридии, бактероиды, бациллы, стоматококки, бифидобактерии, дрожжевые грибы, вейлонеллы, нейссерии и бактерии семейства Enterobacteriaceae, в 5,1%-выделили H.pylori. Количество микроорганизмов в среднем составляло 5,8 lg КОЕ/мл. Факторы патогенности обнаруживались у 24-82% стафилококков, стрептококков, пептококков, пептострептококков, порфи-ромонад, клостридий, бацилл. Микроорганизмы выделялись в ассоциации от 4 до 8 в исследуемом материале.

3. При экспресс — диагностике дисбактериоза по казеинолитической активности образцов ротовой жидкости установлено, что в 10,2% выявляется 1

Ill степень дисбактериоза, в 58,7% случаев - 2 степень, а с выраженными проявлениями воспаления патодонта в 31,1 % -3 степень дисбактериоза.

5. Установлено, что 85,1% всех штаммов, выделенных из полости рта больных генерализованным пародонтитом, включая дрожжеподобные грибы рода Candida, проявили высокую и среднюю чувствительность к 2% раствору хитозана на «Абисибе». При проведении местного лечения хитоза-ном на «Абисибе» установлено, что сроки лечения больных с генерализованным пародонтитом сокращаются на 2-8 суток по сравнению с традиционными'способами терапии с применением антибиотиков и антисептиков.

Практические рекомендации

1. При генерализованном пародонтите в целях экспресс диагностики дисбактериоза полости рта предлагается определение казеинолитической активности ротовой жидкости, включающее предварительное обеззараживание исследуемой ротовой жидкости хлороформом и внесение полученного су-пернатанта в лунки с питательной средой, содержащей казеин. После инкубации при температуре 35-37°С в течение 6-18 часов реакция проявлялась путем внесения на агар раствора кислоты. Результаты оценивают по размеру диаметра зон просветления. При этом размер зоны просветления 0-6 мм вокруг лунки свидетельствует об отсутствии дисбактериоза, 7-8 мм соответствует 1 степени дисбактериоза, 9-16 мм — дисбактериоз 2 степени и более 16 мм — 3 степень. Способ зарегистрирован в Федеральном институте промышленной собственности № 2009129208 (040645) от 30.07.2009г.)

2. Полученные данные о чувствительности выделенной из полости рта больных генерализованным пародонтитом к антибактериальным препаратам, позволяют ориентировать клиницистов при выборе эффективного антимикробного средства. При лечении необходимо учитывать резистентность условно-патогенной микрофлоры к бензилпенициллину. Для оптимального подавления ее роста целесообразно применять комбинацию фторхинолонов (офлоксацина, ципрофлоксацина) с полусинтетическими пенициллинами (оксациллином), аминогликозидами (гентамици-ном) и итраконазол для подавления дрожжевых грибов.

3. В комплексной терапии генерализованного пародонтита местное применение путем введения в пародонтальные карманы в виде аппликации на ватной турунде или губке 2% раствора пищевого кислоторастворимого хитозана в биологически активной добавке «Абисиб» высоко эффективно и улучшает качество лечения различных форм воспалительных заболеваний пародонта. Сроки лечения сокращаются на 2-8 суток по сравнению с традиционными способами терапии с применением антибиотиков и антисептиков. Патент на изобретение № 2400174 от 27.09.2010.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Лебедев, Денис Викторович, Москва

1. Агапова, О.В. Ферменты патогенности клинических штаммов Klebsiella pneumoniae Текст. / O.B. Агапова,В.М. Бондаренко, H.A. Поликарпов [и др.]. // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. — 1999. № 2. С. 5-8.

2. Антибактериальная терапия. Практическое руководство Текст. / Под ред. Л.С. Страчунского. М.: [б.и.], 2000. - 192 с.

3. Ахметова, Д.М. Динамика микробного пейзажа при лечении озонированным оливковым маслом больных хроническим пародонтитом Текст. / Д.М. Ахметова // Казанский медицинский журнал. 2008. -№3.-С. 331-334.

4. Барер, Г.М. Опыт клинического применения антибактериального геля пролонгированного действия «Элизол» при лечении пародонтита Текст. / Г.М. Барер, О.В. Соловьева, О.О. Янушевич // Пародонтоло-гия. 2001. - №3. - С. 40-43.

5. Барер, Г.М. Системы локальной доставки лекарств в лечении пародон-тита: обзор литературы Текст. / Г.М. Барер, О.В. Соловьева, О.О. Янушевич // Пародонтология. 2002. - №3. - С. 23-28.

6. Безрукова, И.В. Микробиологические и иммунологические аспекты этиопатогенеза быстропрогрессирующего пародонтита (обзор литературы) Текст. / И.В. Безрукова // Пародонтология. 2000. - № 3. — С. 38.

7. Безрукова, И.В. Микрофлора пародонтальных карманов у пациентов с быстропрогрессирующим пародонтитом Текст. / И.В. Безрукова, Н.А. Дмитриева // Пародонтология. 2001. - № 4. - С. 18-22.

8. Ю.Блинкова, Л.П. Бактериоцины: критерии, классификация, свойства, методы выявления Текст. / Л.П. Блинкова // Микробиология, эпидемиология и иммунобиология. 2003. - № 3. - С. 109-113.

9. Брилис В.И. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов Текст. / В.И. Брилис [и др.] // Лабораторное дело. 1986. - № 4. -С. 210-212.

10. Видовой состав анаэробной микрофлоры пародонтального кармана в зависимости от стадии пародонтита Текст. / Н.В. Зырянова [и др.] //

11. Стоматология. 2009. - №4. - С.43-47.

12. Гажва, С. И. Хирургические методы лечения заболеваний пародонта Текст. / С. И. Гажва. Нижний Новгород: [б.и.], 2003. - 105 с.

13. Грудянов, А.И.,. Антимикробная и противовоспалительная терапия в пародонтологии Текст. / А.И. Грудянов, В.В. Овчинникова, H.A. Дмитриева. М.: МИА. - 2004. - 79 с.

14. Грудянов, А.И. Использование пробиотиков в комплексном лечении воспалительных заболеваний пародонта Текст. / А.И.Грудянов, Е.В.Фоменко. Москва: [б.и.], 2008.

15. Грудянов, А.И. Лекарственные средства, применяемые при заболеваниях пародонта Текст. / А.И. Грудянов, H.A. Стариков // Пародонтологии. 1998. - №2. - С. 6-17.

16. Грудянов, А.И., Новое в терапевтической детской хирургической стоматологии Текст. / А.И. Грудянов, С.А. Кирюхина, O.A. Алексина. -М: [б.и.], 1987. Т. 2. - С. 25-26.

17. Грудянов, А.И. Оценка эффективности локального применения препарата «Метрогил-дента» при воспалительных заболеваниях пародонта Текст. / А.И. Грудянов, H.A. Дмитриева, В.В. Овчинникова // Паро-донтология. 2002. - № 3. - С. 30-32.

18. Грудянов, А.И. Пародонтология: Избранные лекции Текст. / А.И. Грудянов. М.: ОАО «Стоматология», 1997. - 32 с.

19. Грудянов, А.И. Перспективы научных исследований в области терапевтической стоматологии Текст. / А.И. Грудянов, JI.A. Дмитриева, Ю.М. Максимовский // Стоматология. 1996. - Т. 75, № 6.- С. 8-11.

20. Грудянов, А.И. Эубиотики в комплексном лечении воспалительных заболеваний парадонта Электронный ресурс. / А.И. Грудянов, H.A. Дмитриева, Е.Б.Фоменко. Электрон, дан. - [Б.м.], [б.и.], 2010. - Режим доступа: http://www.disbak.ru

21. Дмитриева, JI.A. Сравнительная оценка современных антибактериальных препаратов при лечении пародонтита тяжелой степени в стадии обострения Текст. / JI.A. Дмитриева // Стоматология. — 1998. Т. 77, №4. - С. 17-19.

22. Желудева, И.В. Антибактериальная терапия в стоматологии. Обоснование выбора бактериофагов для лечения воспалительных заболеваний

23. Электроннй ресурс. / Электрон, дан. - Б.м.], [б.и.]. - Режим доступа : www.gpc-paks.ru/index.php7option.

24. Желудева, И.В. Обоснование выбора бактериофагов для лечения воспалительных заболеваний пародонта Текст. / И.В. Желудева [и др.] // Пародонтология. 2002. - № 1-2. - С. 46-50.

25. Заболевания пародонта: Атлас Текст. / Н.Ф. Данилевский [и др.]. М.: Медицина, 1993. - 320 с.

26. Иванов, B.C. Заболевания пародонта Текст. / B.C. Иванов. М.: Медицинское информационное агентство, 1998. - 296 с.

27. Ипатова, Е.В. Клинико-физиологические показатели состояния тканей пародонта при применении препаратов природного происхождения в комплексном лечении пародонтита Текст. / Е.В. Ипатова. — Архангельск: [б.и.], 2003. 23 с.

28. Калинин, В.И. Эффективность применения пролонгированных препаратов для лечения воспалительных заболеваний пародонта на примере биоактивного лекарственного криогеля Текст. / В.И. Калинин [и др.] // Пародонтология. 1997. - №2. - С. 16-18.

29. Канканян, А.П. Болезни пародонта: Новые подходы в этиологии, патогенезе, диагностике, профилактике и лечении Текст. / А.П.Канканян, В.К. Леонтьев. Ереван: Тигран Мец, 1998. - 360 с.

30. Комаров, Б.А. Почему хитозан полезен человеку? Текст. / Б.А.Комаров // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: материалы науч.-практ. конф., (22 24 окт. 2001 г.) - М.: ВНИРО, 2001.- 187 с.

31. Комлева, A.C. Оптимизация консервативного лечения больных хроническим генерализованным пародонтитом, ассоциированным с кандида-флорой Текст.: автореф. дис. . канд. мед. наук: 14.01.14/А. С. Комле-ва.- Омск, 2010.-23 с.

32. Косарев, А. Изучение сорбции органических веществ на хитине, хито-зане и некоторых химических производных данных биополимеров. Производство и применение хитина и хитозана Текст.: тез. докл. конф. / 4-я Всеросс. конф. М.: ВНИРО, 1995. - 77 с.

33. Кудрявцева, Т.В. Применение биоактивного лекарственного криогеля при лечении заболеваний пародонта Текст.: автореф. дис. . канд. мед. наук: 14.00.21 / Т.В. Кудрявцева. СПб., 1993. - 15 с.

34. Курякина, Н. В. Заболевания пародонта Текст. / Н. В. Курякина, Т. Ф. Кутепова. [Б.м.]: НГМА, 2003. - С. 18-21.

35. Ленинджер, А. Биохимия Текст. / А. Ленинджер. — М.: Мир, 1974. -280 с.

36. Максимовская, Л.Н. Лекарственные средства в стоматологии: Справочник Текст. / Л.Н.Максимовская, П.И.Рощина. М.: Медицина, 2000. - 240 с.

37. Матисова, Е.В. Колонизация условно-патогенными микроорганизмами слизистой оболочки полости рта при хроническом парадонтите Текст.: автореф. дис. . канд. мед. наук: 03.02.03, 14.01.14 / Е.В. Матисова. -Волгоград, 2010.

38. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: В 2-х томах Текст. / М.Д. Машковский. М.:Медицина, 1987. - Т. 2. - 576 с.

39. Медикаментозная терапия у больных пародонтитом с использованием препарата «Холисал» Текст. / Л. Е. Леонова [и др.]. М.: [б.и.], 2008. -4 с.

40. Мельников, В.Г. Изучение роли актиномицетов в развитии воспалительных заболеваний пародонта Текст.: автореф. дис. . канд. мед. наук: 03.02.03 / В.Г. Мельников. М., 1990.-20 с.

41. Механизмы насыщения тканей пародонта и регионарных лимфатических узлов при эндолимфатическом и лимфотропном введении антибиотика Текст. / Т.Н. Модина [и др.] // Пародонтология. 2000. -№3. - С. 9-12.

42. Молекулярная биология клетки Текст. / Б. Албертс [и др.] М.: Мир, 1987. - Т. 3.-221 с.

43. Никитин, В.М. Справочник методов биохимической экспресс-индикации микробов Текст. / Никитин В.М. Кишинев: [б.и.], 1986. -294 с.

44. Николаева, Е.Н. Молекулярно-генетические маркеры риска генерализованного пародонтита и их применение в диагностике Текст.: авто-реф. дис. . докт. мед. наук: 14.01.14 / Е.Н. Николаева. Москва, 2007. -48 с.

45. Новикова, А.С. Диагностика и лечение хронического генерализованного пародонтита, ассоциированного с цитомегало- и герпесвирусной инфекцией Текст.: автореф. дис. . канд. мед. наук: 14.00.21 / Новикова Анна Сергеевна. Москва, 2006. - 127 с.

46. Патент на изобретение № 2145975. Авторы: Червинец В.М., Червинец Л.Ф. Способ культивирования Helicobacter pylori. Заявка: 99115430/14, 19.07.1999. Опубликовано: 27.02.2000.

47. Патент №2061491, 1996 г. Костеша Н.Я. Способ получения средства, повышающего резистентность организма. МПК 6 А61К35/78. Заявка: 93006909/14, 04.02.1993. Опубликовано: 10.06.1996.

48. Патент России № 2050855. Автор(ы): Стрелис А.К., Костеша Н.Я., Гу-бина В.А., Андреев И.Г. Способ патогенетического лечения больных инфильтративным туберкулезом легких. МПК 6 А61К35/78 Заявка:5031884/14, 04.02.1992. Опубликовано: 27.12.1995.

49. Применение адгезивных лекарственных пленок «Диплен-Дента» в стоматологии Текст. / Р.В.Ушаков [и др.] // Пародонтология. 2000. -№ 3. - С.13-16.

50. Применение полимеразной цепной реакции для диагностики и контроля эффективности лечения генерализованного пародонтита Текст. / В.Н. Царев [и др.] // Рос. стоматол. журн. 2002. - № 2. - С. 12—19.

51. Прохоренков, В.И. К вопросу о кинетике водорастворимого хитозана в коже Текст. / В.И. Прохоренков [и др.] // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана: материалы науч.-практ. конф., (22 24 окт. 2001 г.) - М.: ВНИРО, 2001. - 223 с.

52. Романов, А.Е. Антибактериальная терапия в комплексном лечении пародонтита Текст. / А.Е. Романов, В.Н. Царев, Е.В. Руднева // Стоматология. 1996. - Т. 75, № 1. - С . 23-25.

53. Романова, Ю.М. Образование биопленок пример социального поведения бактерий Текст. / Ю.М. Романова [и др.] // Микробиология. -2006. - Т. 75. № 4. - С. 556-661.

54. Севишко, М.В. Микробные ассоциации у больных генерализованнымпародонтитом при наличии хламидийной инфекции Текст. / М.В. Се-вишко. [Б.м.], [б.и.], 2006, 51 с.

55. Современные аспекты клинической пародонтологии Текст. / Под ред. JI.A. Дмитриевой. М.: МЕДпресс, 2001. - 128 с.

56. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник Текст. / М.: АстраФармСервис, 2001. 1536 с.

57. Терапевтическая стоматология. Учебник Текст. / Е.В. Боровский [и др.]. -М.: Медицина, 1998. 736 с.

58. Тец, В.В. Справочник по клинической микробиологии Текст. / В.В. Тец. СПб.: Стройлеспечать, 1994. - 224 с.

59. Тоболина, E.H. Сравнительная клинико-функциональная оценка методов лечения хронического генерализованного пародонтита Текст.: автореф. дис. . канд. мед. наук/ E.H. Тоболина. Пермь, 2006, 25 с.

60. Трезубов, В.Н. Справочник врача-стоматолога по лекарственным препаратам Текст. / В.Н. Трезубов [и др.]. СПб: ИКФ «Фолиант», 2000. -352 с.

61. Ушаков, Р.В. Местное антимикробное лечение в стоматологии Текст. / Р.В. Ушаков, В.Н. Царев. М.: МИА, 2004. - 156 с.

62. Ушаков, Р.В. Применение адгезивных лекарственных пленок «Диплен-Дента» в стоматологии Текст. / Р.В. Ушаков // Пародонтология. -2000. -№3.-С.13-16.

63. Филатова, H.A. Использование препаратов группы макролидов в комплексном лечении заболеваний пародонта Текст.: автореф. дис. . канд. мед. наук: 14.00.21 / H.A. Филатова; [Моск. мед. стомат. ин-т.]. -М., 1997.-21 с.

64. Филатова, H.A. Перспективы применения нового макролидного антибиотика азитромицина (сумамеда) в комплексном лечении пародон-тита Текст. / H.A. Филатова [и др.] //Стоматология. - 1995. - Т 74, № 1.-С. 12-15.

65. Фитохитодезтерапия ран, ожогов и травм Текст. / К.А.Трескунов [и др.] // Практическая фитотерапия. 2002. - № 1. - 19 с.

66. Царев, В.Н. Перспективы применения препаратов фторхинолонового ряда в комплексном лечении хронического генерализованного паро-донтита в стадии обострения Текст. / Царев В.Н. [и др.] // Стоматология. 1998. - Т. 77, №5. - С. 13-14.

67. Цепов, Л. М. Диагностика и лечение заболеваний пародонта Текст. / Л.М. Цепов, А. И. Николаев. М.: [б.и.], 2004. - С. 58-62.

68. Цепов, Л. М. Заболевания пародонта: взгляд на проблему Текст. / Л.М. Цепов. М.: МЕДпресс-информ, 2006. - 192 с.

69. Цепов, Л. М. Клиника, диагностика и лечение основных заболеваний пародонта: Справочно-методическое пособие Текст. / Л. М.Цепов,

70. А.И. Николаев. Смоленск: Изд-во СГМА, 1997. - 57 с.

71. Цепов, JI.M. Медикаментозная терапия в пародонтологии: от стереотипов и эмпиризма к реальности Текст. / JI.M. Цепов, В.Г. Морозов // Стоматология. 1992. - Т. 71, № 2. - 84 с.

72. Чернышева, С.Б. Использование современных антибактериальных препаратов группы фторхинолонов в комплексном лечении заболеваний пародонта Текст.: автореф. дис. . канд. мед. наук: 14.00.21 / Чернышева С.Б.; [МГМСУ]. М., 1999. - 28 с.

73. Шлегель, Г. Общая микробиология Текст. / Г. Шлегель. М.: Мир,1987.

74. Экстракт пихты сибирской АБИСИБ и его применение в медицине и ветеринарии Текст. / Н.Я. Костеша [и др.]. Томск- [б.и.], 2005. - Т. 2. - 144 с.

75. Acino А., Chitin and its Chemical Transformations. Japan. J. Zool., 12, 527 (1960).

76. Amano, A. Prevalence of specific genotypes of Porphyromonas gingivalis FimA and periodontal health status / A. Amano et al. // J Dent Res. 2000. -Vol. 79.-pp. 1664-1668.

77. American Academy of Periodontology. Systemic Antibiotics in Periodontics, Position Paper // J. Periodontol. 1996. - Vol.67. - pp.831838.

78. Ashimoto, A. Polymerase chain reaction detection of 8 putative periodontal pathogens in subgingival plaque and advanced periodontitis lesions У A.Ashimoto et al. // Oral Microbiol Immunol. 1996. - Vol. 11. - pp. 266-273.

79. Bergey, D. H. In Bergey's Manual of Determinative Bacteriology / D.H. Bergey. Baltimore: Williams & Wilkins, 1923. - pp. 271-272.

80. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. — Baltimore; Hong Kong; London; Sydney. — 1984, 1986, 1989. — Vol. 1, 2, 3^.

81. Berglundh, T. Local and systemic TCR V gene expression in advanced periodontal disease / T. Berglundh et al. // J. Clin. Periodontol. 1998. -Vol. 25.-pp. 125-133.

82. Bernfeld, P. H.C. / P. H.C. Bernfeld, J. S. Nesselbaum // J. Am. Chem. Soc. 1954.-Vol. 76.-15 p.

83. Bowden, G. H. Microbiology of root surface caries in humans / G. H. Bowden // J Dent Res. 1990. - Vol. 69. - pp. 1205-1210.

84. Bowden, G. H. W. Survival of oral bacteria / G. H. W. Bowden, I. R. Hamilton // Crit Rev Oral Biol Med. 1998. - Vol. 9. - pp. 54-85.

85. Brailsford, S. R. The predominant aciduric microflora of root-caries lesions / S. R. Brailsford et al. // J Dent Res. 2001. - Vol. 80. - pp. 1828-1833.

86. Carlsson, L.C.T. Trypsin inhibition in serum and urine of neonatal and lactating rats and in rat colostrums and milk / L.C.T. Carlsson et al. // Int. J. Biochem. 1975. - Vol. 6. - pp. 173-180.

87. Chen, R. Effect of chain flexibilities of chotosans on the physical and permeability properties of the ultrafiltration membranes prepared. 1-st International conference of the European Chitin Society. Abstracts book / Brest-France. 1995. - p. 38.

88. Clement, B. G. Terminal restriction fragment patterns (TRFPs), a rapid, PCR-based method for the comparison of complex bacterial communities / B. G. Clement et al. // J Microbiol Methods. 1998. - Vol. 31.-pp. 135-142.

89. Colombo, A.V. Identification of oral bacteria associated with crevicular epithelial cells from chronic periodontitis lesions / A.V. Colombo et al. // J Med Microbiol. 2006. - Vol. 56. - pp. 609-615.

90. Conrads, G. The use of a 16S rDNA directed PCR for the detection of endodontopathogenic bacteria / G. Conrads et al. // J Endod. 1997. - Vol. 23.-pp. 433-438.

91. Contreras, A. Importance of Dialister pneumosintes in human periodontitis / A. Contreras et al. // Oral Microbiol Immunol. 2000. -Vol. 15.-pp. 269-272.

92. Curtis, M. A. Cysteine proteases of Porphyromonas gingivalis / M. A. Curtis, J. Aduse-Opoku, M. Rangarajan // Crit Rev Oral Biol Med. 2001. -Vol. 12.-pp. 192-216.

93. Darveau, R. P. The microbial challenge in periodontitis / R. P. Darveau, A. Tanner, R. C. Page // Periodontol. 1997. - Vol. 14. - pp. 1232.

94. Dewhirst, F. E. The diversity of periodontal spirochetes by 16S rRNA analysis / F. E. Dewhirst et al. // Oral Microbiol Immunol. 2000. - Vol. 15.-pp. 196-202.

95. Donlan, R.M. Biofilms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms / R.M. Donlan, J.W. Costerton // Clin Microbiol Rev. -2002.-Vol. 15, №2.-pp. 167-193.

96. Dorn, B. R. Invasion of human oral epithelial cells by Prevotella intermedia / B. R. Dorn, K. P. Leung, A. Progulske-Fox // Infect Immun. -1998. Vol. 16. - pp. 6054—6057.

97. Downes, J. Bulleidia extructa gen. nov., sp. nov., isolated from the oral cavity / J. Downes et al. // International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. 2000. - Vol. 50. - pp. 979-983.

98. Downes, J. Characterisation of Eubacterium-like strains isolated from oral infections / J. Downes et al. // J. Med. Microbiol. 2001. - Vol. 50. -pp. 947-951.

99. Downes, J. Dialister invisus sp. nov., isolated from the human oral cavity / J. Downes, M. Munson, W. G. Wade // Int J Syst Evol Microbiol. -2003. -Vol. 53.-pp. 1937-1940.

100. Dunbar, J. Assessment of microbial diversity in four southwestern United States soils by 16S rRNA gene terminal restriction fragment analysis / J. Dunbar, L. O. Ticknor, C. R. Kuske // Appl Environ Microbiol. 2000. - Vol. 66. - pp. 2943-2950.

101. Feres, M. Systemic doxycycline administration in the treatment ofperiodontal infections (II). Effect on antibiotic resistance of subgingival species/ M. Feres et al. // J. Clin. Periodontol. 1999. - Vol.26, N 12. -pp. 784-792.

102. Fives-Taylor, P. Characteristics of Actinobacillus actinomycetemcomitans invasion of and adhesion to cultured epithelial cells/ P. Fives-Taylor, D. Meyer, K. Mintz // Adv Dent Res. 1995. - Vol. 9. -pp. 55-62.

103. Fouad, A.F. PCR-based Identification of Bacteria Associated with Endodontic Infections / A. F. Fouad et al. // J Clin Microbiol. 2002. -Vol. 40, № 9. - pp. 3223-3231.

104. Gatti, J. J. Bacteria of asymptomatic periradicular lesions identified by DNA-DNA hybridization/ J. J. Gatti et al. // Endod Dent Traumatol. -2000.-Vol. 16.-pp. 197-204.

105. Gonzalez, J. M. Bacterial community structure associated with a dimethylsulfonipropionate-producing North Atlantic algal bloom / J. M. Gonzalez et al. // Appl Environ Microbiol. 2000. - Vol. 66. - pp. 42374246.

106. Grossi, S.G. Treatment of periodontal disease in diabetics reduces glycated hemoglobin / S.G. Grossi et al. // J. Periodontol. 1997. - Vol. 68, N8.-pp. 713-9.

107. Haapasalo, M. Black-pigmented Bacteroides spp. in human apical periodontitis / M. Haapasalo et al. // Infect Immun. 1986. - Vol. 53. - pp. 149-153.

108. Han, Y. W. Interactions between periodontal bacteria and human oral epithelial cells: Fusobacterium nucleatum adheres to and invades epithelial cells / Y. W. Han et al. // Infect Immun. 2000. - Vol. 68. - pp. 31403146.

109. Henderson, B. Actinobacillus actinomycetemcomitans / B. Henderson // J Med Microbiol.-2002.-Vol. 51.-pp. 1013-1020.

110. Herrera, D. The periodontal abscess (II). Short-term clinical and microbiological efficacy of 2 systemic antibiotic regimes / D. Herrera et al. // Clin. Periodontol. 2000. - Vol.27, N 6. - pp. 395-404.

111. Hiraishi, A. Terminal restriction pattern analysis of 16S rRNA genes for the characterization of bacterial communities of activated sludge / A. Hiraishi, M.J Iwasaki, H. Shinjo // Biosci Bioeng. 2000. - Vol. 90. - pp. 148-156.

112. Holdeman, L. V. H. Outline of Clinical Methods in Anaerobic Microbiology/ L. V. H. Holdeman, W. E. C. Moore. Blacksburg, VA: Virginia Polytechnic Institute and State University, 1970.

113. Hugenholtz, P. Impact of culture-independent studies on the emerging phylogenetic view of bacterial diversity / P. J. Hugenholtz, B. M. Goebel, N. R. Pace // Bacteriol. 1998. - Vol. 180. - pp. 4765-4774.

114. Hutter, G. Molecular analysis of bacteria in periodontitis: evaluation of clone libraries, novel phylotypes and putative pathogens / G. Hutter et al. // Microbiology. 2003. - Vol. 149. - pp. 67-75.

115. Jung, I.-Y. Identification of oral spirochetes at the species level and theirassociation with other bacteria in endodontic infections / I.-Y. Jung et al. // Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 2001. - Vol. 92. - pp. 329-334.

116. Kadowaki, T. Porphyromonas gingivalis Proteinases as Virulence Determinants in Progression of Periodontal Diseases / T. Kadowaki et al. // J Biochem. 2000. - Vol. 128, № 2. - pp. 153-159.

117. Kaplan, C. W. 16S ribosomal DNA terminal restriction fragment pattern analysis of bacterial communities in feces of rats fed Lactobacillus acidophilus NCFM / C. W. Kaplan et al. // Appl Environ Microbiol. -2001.-Vol. 67.-pp. 1935-1939.

118. Kitts, C. L. Terminal restriction fragment patterns: a tool for comparing microbial communities and assessing community dynamics / C. L. Kitts // Curr Issues Intest Microbiol. 2001. - Vol. 2. - pp. 17-25.

119. Kleinfelder, J.W. Fluoroquinolones in the treatment of Actinobacillus actinomycetemcomitans-associated periodontitis/ J.W. Kleinfelder et al. // J. Periodontol. -2000. Vol.71, N 2. - pp. 202-208.

120. Kolenbrander, P.E. Communication among oral bacteria / P.E. Kolenbrander et al. // Microbiol Mol Biol Rev. 2002. - Vol. 66. - pp. 486-505.

121. Kroes, I. Bacterial diversity within the human subgingival crevice / I. Kroes, P. W. Lepp, D. A. Relman // Proc Natl Acad Sei USA.- 1999. -Vol. 96.-pp. 14547-14552.

122. Kumar, P. S. Changes in Periodontal Health Status Are Associated with

123. Bacterial Community Shifts as Assessed by Quantitative 16S Cloning and Sequencing / P. S. Kumar et al. // Journal of Clinical Microbiology. -2006. Vol. 44, No. 10. - pp. 3665-3673.

124. Kumar, P. S. Identification of Candidate Periodontal Pathogens and Beneficial Species by Quantitative 16S Clonal Analysis / P. S. Kumar et al. // Journal of Clinical Microbiology. 2005. - Vol. 43, No. 8. - pp. 39443955.

125. Lamont, R. J. In or out: the invasiveness of oral bacteria / R. J. Lamont, O. Yilmaz // Periodontol. 2002. - Vol. 30. - pp. 61-69.

126. Lamont, R. J. Porphyromonas gingivalis invasion of gingival epithelial cells / R. J. Lamont // Infect Immun. 1995. - Vol. 63. - pp. 3878-3885.

127. Lane, D.J. 16S/23S rRNA sequencing. In: Nucleic acid techniques in bacterial systematic / D.J. Lane. Chichester, UK: John Wiley & Sons, 1991.-pp. 115-175.

128. Le Goff, A. Evaluation of root canal bacteria and their antimicrobial susceptibility in teeth with necrotic pulp / A. Le Goff et al. // Oral Microbiol Immunol. 1997. - Vol. 12. - pp. 318-322.

129. Ledder, R.G. Molecular Analysis of the Subgingival Microbiota in Health and Disease / R.G. Ledder et al. // Applied and Environmental Microbiology. 2007. - Vol. 73, No. 2. - pp. 516-523.

130. Lee, A. Helicobacter pylori: techniques for clinical diagnosis and basic research / A. Lee, F. Megraud. 1996. - pp. 20-21.

131. Leser, T. D. Changes in bacterial community structure in the colon of pigs fed different experimental diets and after infection with Brachyspira hyodysenteriae / T. D. Leser et al. // Appl Environ Microbiol. 2000. -Vol. 66. - pp. 3290-3296.

132. Liu, W.-T. Characterization of microbial diversity by determining terminal restriction fragment length polymorphisms of genes encoding 16S rRNA / W.-T. Liu et al. // Appl Environ Microbiol. 1997. - Vol. 63. -pp. 4516^1522.

133. Loesche, W. J. Chemotherapy of dental plaque infections / W. J. Loesche // Oral Sci Rev. 1976. - Vol. 9. - pp. 63-107.

134. Loesche, W. J. Role of Streptococcus mutans in human dental decay / W. J. Loesche // Microbiol Rev. 1986. - Vol. 50. - pp. 353-380.

135. Lopez, N.J. Repeated metronidazole and amoxicillin treatment of periodontitis. A follow-up study / N.J. Lopez et al. // J. Periodontol. -2000. Vol.71, N 1.-pp. 79-89.

136. Madianos, P. N. Porphyromonas gingivalis FDC381 multiplies and persists within human oral epithelial cells in vitro / P. N. Madianos et al. // Infect Immun. 1996. - Vol. 64. - pp. 660-664.

137. Mager, D. L. Distribution of selected bacterial species on intraoral surfaces / D. L. Mager et al. // J Clin Periodontol. 2003. - Vol. 30. - pp. 644-654.

138. Marsh, P. D. Host defenses and microbial homeostasis: role of microbial interactions / P. D. Marsh // J Dent Res. 1989. - Vol. 68. - pp. 15671575.

139. Marsh, T. L. Terminal restriction fragment length polymorphism (T-RFLP): an emerging method for characterizing diversity among homologous populations of amplification products / T. L. Marsh // Curr Opin Microbiol. 1999. - Vol. 2. - pp. 323-327.

140. Megraud, F. Advantages and disadvantages of current diagnostic tests for detection of Helicobacter pylori / F. Megraud // Scand. J. Gastroenter. -1996.- Vol. 31.-pp. 57-62.

141. Meyer, D. H. Invasion of epithelial cells by Actinobacillus actinomycetemcomitans: a dynamic, multistep process / D. H. Meyer, J. E. Linppmann, P. Fives-Taylor // Infect Immun. 1996. - Vol. 64. - pp. 29882997.

142. Milsom, S. E. Applications of 16S rRNA analysis for the species and subspecies identification of oral bacteria / S. E. Milsom. University of Bristol, UK, 1997.

143. Milsom, S. E. Isolation and characterisation of Dialister pneumosintes / S. E. Milsom, D. Dymock, W. G. Wade // J Dent Research. 1996. - Vol. 75.- 1185 p.

144. Moore, W.E.C. The bacteria of periodontal diseases / W. E. C. Moore, L. V. H. Moore // Periodontol. 1994. - Vol. 5. - pp. 66-77.

145. Munson, M.A. Molecular and Cultural Analysis of the Microflora Associated with Endodontic Infections / M.A. Munson et al. // J.Dent Res. 2002. - Vol. 81, №11.-pp. 761-766.

146. Newman, H.N. Plaque and chronic inflammatory periodontal disease. A question of ecology / H.N. Newman / J. Clin. Periodontal. 1990. - Vol. 17.-pp. 533-541.

147. Olitsky, P. K. Experimental studies of the naso-pharyngeal secretions from influenza patients / P. K. Olitsky, F. L. Gates// J Exp Med. — 1921. — Vol. 33.-pp. 713-729.

148. Paster, B. J. Bacterial diversity in human subgingival plaque / B. J. Paster et al. // J Bacteriol. 2001. - Vol. 183. - pp. 3770-3783.

149. Peters, S. R. Adherence to and penetration through endothelial cells by oral treponemes / S. R. Peters et al. // Oral Microbiol Immunol. 1999. -Vol. 14.-pp. 379-383.

150. Purucker, P. Local versus systemic adjunctive antibiotic therapy in 28 patients with generalized aggressive periodontitis / P. Purucker et al. // J. Periodontol. 2001. - Vol.72, N 9. - pp. 1241-1245.

151. Rooney, J. Adjunctive effects to non-surgical periodontal therapy of systemic metronidazole and amoxycillin alone and combined / J. Rooney et al. // J. Clin. Periodontol. 2002. - Vol. 29. - pp. 342-350.

152. Ruby, J. Nature of Symbiosis in Oral Disease / J. Ruby, M. Goldner // Journal of Dental Research. 2007. - Vol. 86, №1. - pp. 8-11.

153. Rudney, J. D. Intracellular Actinobacillus actinomycetemcomitans and Porphyromonas gingivalis in buccal epithelial cells collected from human subjects / J. D. Rudney, R. Chen, G. J. Sedgewick // Infect Immun. 2001. - Vol. 69. - pp. 2700-2707.

154. Sakamoto, M. Application of terminal RFLP analysis to characterize oral bacterial flora in saliva of healthy subjects and patients with peridontitis / M. Sakamoto et al. // J Med Microbiol. 2003. - Vol. 52. - pp. 79-89.

155. Sakamoto, M. Changes in oral microbial profiles after periodontal treatment as determined by molecular analysis of 16S rRNA genes / M. Sakamoto et al. // J Med Microbiol. 2004. - Vol. 53. - pp. 563-571.

156. Sakamoto, M. Comparison of the oral bacterial flora in saliva from a healthy subject and two periodontitis patients by sequence analysis of 16S rDNA libraries / M. Sakamoto et al. // Microbiol Immunol. 2000. - Vol. 44. - pp. 643-652.

157. Sakamoto, M. Rapid detection and quantification of five periodontopathic bacteria by real-time PCR / M. Sakamoto et al. // Microbiol Immunol. -2001.-Vol. 45.-pp. 39-44.

158. Sakamoto, M. Reclassification of Bacteroides forsythus (Tanner et al. 1986) as Tannerella forsythensis corrig., gen. nov., comb. nov. / M. Sakamoto et al. // Int J Syst Evol Microbiol. 2002. - Vol. 52. - pp. 841849.

159. Sandros, J. Porphyromonas gingivalis invades human pocket epithelium in vitro / J. Sandros et al. // J Periodontol Res. 1994. - Vol. 29. - pp. 6269.

160. Sansone, C. The association of mutans streptococci and non-mutans streptococci capable of acidogenesis at a low pH with dental caries on enamel and root surfaces / C. Sansone et al. // J Dent Res. 1993. — Vol.72.-pp. 508-516.

161. Schein, W. Helycobacter pylori and the mouth cavity overview and perspectives / W. Schein, S. Meryn // Wien - Klin. - Wochenschr. - 1994. -Vol. 106.-pp. 547-549.

162. Shepherd, R. Chitosan functional properties / R. Shepherd et al. // Glycoconj J. 1997. - Vol. 14. - pp. 535-542.

163. Sigusch, B. A 2-step non-surgical procedure and systemic antibiotics in the treatment of rapidly progressive periodontitis / B. Sigusch et al. // J. Periodontol. 2001. - Vol.72, N 3. - pp. 275-283.

164. Slots, J. Actinobacillus actinomycetemcomitans and Bacteroides intermedius in human periodontitis age relationship and mutual association / J. Slots, D. Feik, T.E. Rams // J.Clin.Periodontol. 1990. - Vol. 17. - pp. 659-62.

165. Smith, S.R. Double-blind placebo-controlled trial of azithromycin as an adjunct to non-surgical treatment of periodontitis in adults: clinical results / S.R. Smith et al. // J. Clin. Periodontol. 2002. - Vol.29, N 1. - pp. 54-61.

166. Socransky, S.S. Microbial complexes in subgingival plaque / S.S. Socransky et al. // J Clin Periodontol. 1998. - Vol. 25. - pp. 134-144.

167. Socransky, S.S. "Checkerboard" DNA-DNA hybridization / S.S. Socransky et al. // Biotechniques. 1994. - Vol. 17. - pp. 788-792.

168. Sunde, P. T. Assessment of periradicular microbiota by DNA-DNA hybridization / P. T. Sunde et al. // Endod Dent Traumatol. 2000. - Vol. 16.-pp. 84-90.

169. Sunde, P. T. Fluorescence in situ hybridization (FISH) for direct visualization of bacteria in periapical lesions of asymptomatic root-filled teeth / P. T. Sunde et al. // Microbiology. 2003. - Vol. 149. - pp. 10951102.

170. Sundqvist, G. Taxonomy, ecology, and pathogenicity of the root canal flora / G. Sundqvist // Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 1994. - Vol. 78. -pp. 522-530.

171. Takeuchi, Y. Treponema socranskii, Treponema denticola, and Porphyromonas gingivalis are associated with severity of periodontal tissue destruction / Y. Takeuchi et al. // J Periodontol. 2001. - Vol. 72. - pp. 1354-1363.

172. Theilade, E. The non-specific theory in microbial etiology of inflammatory periodontal diseases / E. Theilade // J Clin Periodontol. -1986. Vol. 13. - pp. 905-911.

173. Tinoco, E.M. The distribution and transmission of Actinobacillus actinomycetemcomitans in families with localized juvenile periodontitis / E.M.Tinoco, M. Sivakumar, H.R. Preus // J Clin Periodontol. 1998. - Vol. 25.-pp. 99-105.

174. Uematsu, H. Predominant obligate anaerobes in human periodontal pockets / H. Uematsu, E. Hoshino // J Periodont Res. 1992. - Vol. 27. -pp. 15-19.

175. Umeda, M. The utility of whole saliva to detect the of presence of periodontopathic bacteria / M. Umeda et al. // J Periodontol. 1998. -Vol. 69.-pp. 828-833.

176. Wade, W. G. Predominant cultivable flora in pericoronitis / W. G. Wade et al. // Oral Microbiol Immunol. 1991. - Vol. 6. - pp. 310-312.

177. Weltrowski, M. Reactive filter for textile dyes adsorption. 1-st International conference of the European Chitin Society. Abstracts book / Brest-France. 1995. - p. 39.

178. Winkel, E. G. Amoxicillin plus metronidazole in the treatment of adult periodontitis patients / E.G . Winkel et al. // J. Clin. Periodontol. 2001. — Vol. 28.-pp. 296-305.

Информация о работе

Лебедев, Денис Викторович
кандидата медицинских наук
Москва, 2011
ВАК 03.02.03

Диссертация

Микробиоценозы полости рта у больных генерализованным пародонтитом,способ диагностики и коррекции - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы