Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярно-генетическая характеристика белка ScaAB стрептококков группы B

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Воробьева, Екатерина Ивановна

Список сокращений

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

2.1. Общие сведения о стрептококках i

2.2. Факторы патогенности стрептококков группы В

2.2.1. ß антиген стрептококков группы В

2.2.2. Семейство Alp белков СГВ

2.2.3. С5а пептидаза стрептококков группы В

2.2.4. Другие факторы патогенности стрептококков группы В

2.3. Сведения о липопротеинах семейства Lral

2.3.1. Особенности строения липопротеинов грамположительных бактерий

2.3.2. АТФ-связывающие транспортные системы АВС-типа

2.3.3. Роль Мп транспортных систем АВС-типа в вирулентности

2.3.4. Другие функции липопротеинов семейства Lral

2.3.5. Липопротеины семейства Lral - компоненты вакцин против 34 стрептококков

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1. Бактериальные штаммы, плазмиды, культуральные среды и условия роста

3.2. Выделение хромосомной ДНК

3.3. Выделение плазмидной ДНК

3.4. Выделение ДНК из агарозного геля

3.5. Рестрикция и лигирование ДНК

3.6. Электрофорез ДНК в агарозном геле

3.7. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

3 3.8. Трансформация Escherichia coli

3.9. Гибридизационный анализ ДНК

3.10. Создание фаговой библиотеки генома СГВ

3.11. Секвенирование ДНК

3.12. Электропорация стрептококков группы В

3.13. Метод адгезии СГВ на клетках вагинального эпителия

3.14. Методы выделения и очистки рекомбинантных белков

3.15. Электрофорез белков

3.16. Изучение иммунного ответа

3.17. Определение константы связывания антител к рекомбинантному белку ScaAB

3.18. Модельная СГВ инфекция

3.19. Исследование протективных свойств белков

3.20. Опсонофагоцитарная реакция макрофагов мыши с СГВ

3.21. Компьютерный анализ

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. Клонирование гена возможного фактора адгезии СГВ

4.2. Компьютерный анализ нуклеотидной последовательности гена scaAB

4.3. Сравнительный анализ строения оперонов ABC-транспортных систем

4.4. Получение мутантов СГВ по гену scaAB

4.5. Анализ штаммов СГВ разных серотипов на присутствие гена scaAB

4.6. Получение рекомбинантного белка ScaAB

4.7. Оптимизация экспрессии белка ScaAB в рекомбинантном штамме Е. coli

4.8. Оценка титра антител к рекомбинантному белку ScaAB в сыворотке мышей после модельной СГВ инфекции

4.9. Изучение иммунного ответа на рекомбинантный белок ScaAB

4.10. Изучение протективных свойств рекомбинантного белка БсаАВ

4.11. Исследование протективности иммунной сыворотки к белку БсаАВ на 81 суточном слое мышиных макрофагов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетическая характеристика белка ScaAB стрептококков группы B"

В настоящее время заболевания, вызываемые стрептококками группы В (СГВ), рассматриваются как важная медицинская и социальная проблема во всех странах мира. Это связано с увеличением числа случаев заболеваний, вызываемых СГВ, а также с увеличением уровня носительства стрептококков данной группы здоровыми людьми. Стрептококки группы В являются одной из основных причин неонатальных инфекций, чаще всего протекающих в форме сепсиса и менингита. СГВ инфекция у новорожденных обычно развивается в первые часы или дни после родов, при этом нередки случаи молниеносного течения болезни. Заражение ребенка происходит во время родов от матери с носительством СГВ или еще антенатально в случае наличия у матери скрытой инфекции СГВ. В связи с этим все большую актуальность принимает бессимптомное носительство, процент которого достигает в разных странах от 30 до 50%.

Стрептококки группы В вызывают также и ряд серьезных заболеваний у взрослых, таких как пиелонефрит, офтальмит, артрит, эндокардит, септицемия, причем в ряде развитых стран, например в США, СГВ инфекции взрослых превосходят уровень заболеваний новорожденных. В последние годы накопились данные о способности СГВ вызывать серьезные инвазивные поражения различных органов и систем человека с высокой частотой летальных исходов (до 30% случаев), которые сопровождаются токсическим шоком и некротическим фасцитом. Тревогу вызывают случаи появления штаммов СГВ, устойчивых к действию многих лекарственных препаратов. Проблема стрептококковой патологии и детской смертности особенно остро стоит в нашей стране, где в связи с ухудшением экономической ситуации и снижением уровня жизни населения резко понизилась рождаемость. Все вышесказанное определяет социально-экономическое и общемедицинское значение исследований стрептококков группы В.

Большинство исследователей рассматривает полисахаридную капсулу в качестве основного фактора патогенности СГВ. Кроме того, к факторам патогенности относят такие синтезируемые СГВ ферменты, как нуклеазы, протеазы, CAMP фактор, гемолизин, С5а пептидаза и др. В настоящее время значительное внимание уделяется изучению поверхностных белков СГВ, играющих важную роль на разных стадиях развития инфекции, в том числе и участвующих в процессах адгезии. Многие поверхностные белки, обладающие высокой иммуногенностью за счет непосредственного взаимодействия с системой иммунитета хозяина, в настоящее время рассматриваются в качестве потенциальных компонентов вакцин против стрептококков группы В. Более того, изучение поверхностных белков СГВ интересно с точки зрения некоторых проблем медицинской микробиологии, таких как механизмы адгезии к клеткам эпителия или взаимодействия с белками плазмы крови. Среди поверхностных белков СГВ следует отметить группу фибриллярных белков, семейство Alp-подобных белков, р антиген, а также липопротеины, в том числе и липопротеин Lmb. В настоящее время наиболее интенсивно ведутся исследования поверхностных белков, однако их роль в формировании вирулентного фенотипа и механизмы взаимодействия с иммунной системой хозяина изучены недостаточно. Особенно важным представляется изучение белков, задействованных на начальных этапах развития инфекции, а именно, в процессах адгезии, и проникновения в ткани организма хозяина (пенетрации).

В последнее десятилетие у многих видов стрептококков был выявлен ряд сходных по строению поверхностных липопротеинов, участвующих в процессах адгезии и агрегации. Все эти липопротеины относятся к семейству Lral и являются компонентами ABC транспортных систем, ответственных за транспорт Мп2+ в клетку. Последние исследования показали, что большинство известных стрептококковых липопротеинов семейства Lral обладают протективными свойствами, что позволяет рассматривать их как перспективные компоненты вакцин против стрептококковых инфекций. Нами было сделано предположение, что у стрептококков группы В также существует подобный липопротеин. Его обнаружению и исследованию свойств данного липопротеина посвящена настоящая работа.

Все вышесказанное определило цели и задачи настоящего исследования. Целью работы являлось клонирование гена липопротеина СГВ, гомологичного генам липопротеинов Lral стрептококков других групп и изучение свойств кодируемого данным геном белка. Для этого планировалось выполнить следующие задачи:

1. Идентификация и клонирование гена липопротеина СГВ ScaAB, гомологичного генам липопротеинов Lral стрептококков других групп.

2. Определение нуклеотидной последовательности идентифицированного гена.

3. Клонирование рекомбинантного белка ScaAB в экспрессионных векторах в системе Е. coli.

4. Выделение и биохимическая характеристика рекомбинантного белка ScaAB.

5. Получение изогенных мутантов с нарушенной экспрессией гена липопротеина ScaAB.

6. Изучение иммуногенности рекомбинантного белка ScaAB на модели лабораторных животных.

7. Изучение протективной активности рекомбинантного белка ScaAB. Научная новизна и теоретическая ценность работы.

1. Впервые в системе Е. coli осуществлено клонирование гена липопротеина Lral семейства scaAB. Определена нуклеотидная опследовательность данного гена, а также участка гена регулятора транскрипции scaR. Нуклеотидная последовательность депонирована в банк данных нуклеотидных последовательностей GenBank под номером AY 267033.

2. В результате клонирования в экспрессионной векторной системе pQE31 выделен и охарактеризован рекомбинантный белок ScaAB.

3. Показано, что рекомбинантный белок ScaAB подвергается процессингу в системе Е. coli.

4. Показана иммуногенность рекомбинантного ScaAB белка и наличие протективных свойств в отношение модельных СГВ инфекций in vivo и in vitro.

5. Впервые были сконструированы изогенные мутанты СГВ с нарушенной экспрессией гена липопротеина ScaAB.

Практическая ценность.

Сконструирован штамм Е. coli, продуцирующий рекомбинантный белок ScaAB. Доказано, что рекомбинантный белок ScaAB обладает иммуногенностью и протективностью в отношении СГВ инфекции. Это позволяет рассматривать данный белок как перспективный потенциальный компонент вакцин против СГВ. Положения, выносимые на защиту.

1. Изученный ген scaAB кодирует липопротеин СГВ, принадлежащий к семейству Lral липопротеинов.

2. Белок ScaAB является фактором, стимулирующим иммунный ответ на инфекцию СГВ и обеспечивает протективный иммунитет.

3. Липопротеин ScaAB участвует в процессе адгезии клеток СГВ к клеткам эпителия человека.

Достоверность полученных результатов подтверждается высокой специфичностью использованных молекулярно-генетических методов (полимеразная цепная реакция, ДНК-ДНК гибридизация, секвенирование ДНК) и иммунологических методов исследования (ELISA), которые позволяют однозначно трактовать полученные результаты. Апробация работы. Материалы диссертации опубликованы в 7 научных работах и доложены на 4 симпозиумах и конференциях: 9 Симпозиуме Иммунологического общества Чехии и Словакии, 2000 г.; VIII Съезде Всероссийского общества эпидемиологов микробиологов и паразитологов, Москва, 2002 г.; 14 Европейском Конгрессе по клинической микробиологии и инфекционным болезням, Чехия, 2004 г.; XVI Международном Симпозиуме по стрептококкам и стрептококковым заболеваниям, Австралия, 2005 г. Материалы докладывались на заседаниях отдела молекулярной микробиологии ГУ НИИЭМ РАМН (2002, 2003,2004,2005 гг.).

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 109 страницах машинописного текста, включающего: введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, главу собственных исследований и обсуждения полученных результатов, заключение, выводы, список литературы. Работа проиллюстрирована 9 таблицами и 17 рисунками. Указатель литературы содержит 142 источника, в том числе 5 отечественных и 137 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Воробьева, Екатерина Ивановна

6. ВЫВОДЫ

1. Осуществлено клонирование и секвенирование участка генома СГВ, содержащего полноразмерный ген липопротеина ScaAB и участок гена регулятора транскрипции ScaR.

2. Определена аминокислотная последовательность белка ScaAB. Показана высокая гомология липопротеина ScaAB с липопротеинами, факторами адгезии и агрегации стрептококков других групп.

3. Получен штамм-продуцент E.coli, экспрессирующий рекомбинантный белок ScaAB. Показано, что в системе E.coli происходит процессинг стрептококкового липопротеина ScaAB.

4. Получены интеграционные мутанты стрептококков группы В с нарушенной экспрессией гена липопротеина ScaAB. Доказано участие данного белка в процессе адгезии СГВ к клеткам вагинального эпителия.

5. Показано, что рекомбинантный белок ScaAB обладает иммуногенностью, стимулирует протективный иммунный ответ в отношении модельной СГВ инфекции и может рассматриваться в качестве потенциального компонента для создания рекомбинантной вакцины против инфекций СГВ.

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Стрептококки группы В способны вызывать тяжелые инфекционные заболевания у новорожденных (сепсис, пневмонию, менингит) и патологию беременности. Кроме этого, СГВ являются причиной серьезных заболеваний взрослых: пиелонефрита, артрита, эндокардита, септицемии. Патология, вызываемая стрептококками группы В, представляет важную медицинскую проблему во всем мире. Хорошо известно, что вирулентность стрептококков группы В коррелирует с их способностью продуцировать типоспецифическую полисахаридную капсулу [43]. Однако, наряду с полисахаридами, СГВ продуцируют на поверхность клетки большую группу веществ белкового происхождения, роль которых в формировании вирулентности изучена недостаточно. К числу белков, участвующих в формировании вирулентности СГВ, относятся белковые факторы адгезии и агрегации. У стрептококов других групп выделяют липопротеины, относящиеся к семейству Ьга1 и являющиеся факторами адгезии и агрегации [72].

Представленное исследование имело целью исследовать стрептококки группы В на предмет выявления в их геноме гена хсаАВ и изучения свойств кодируемого им белка, участвующего в процессах адгезии и агрегации и гомологичного липопротеинам Ьга1 стрептококков других групп. В связи с этим был поставлен ряд задач, включающих в себя идентификацию и клонирование гена ясаАВ СГВ, кодирующего липопротеин из данного семейства, получение изогенных мутантов СГВ по гену ьсаАВ, выделение и очистку рекомбинантного белка БсаАВ, изучение иммуногенности и протективных свойств данного белка.

Исследования проводились с использованием современных методов молекулярной микробиологии, генетики и иммунохимии. В работе были применены разнообразные генетические методы: клонирование и секвенирование, полимеразная цепная реакция, гибридизационный анализ, инсерционный мутагенез. Кроме того, использовались методы хроматографической очистки белков и методы иммуноферментного анализа.

С целью идентификации и клонирования гена scaAB был использован штамм 78/471 серотипа Пс. ДНК этого штамма была выделена и использована в качестве матрицы в полимеразной цепной реакции. Праймеры были сконструированы в результате анализа консервативных участков нуклеотидных последовательностей генов липопротеинов семейства Lral стрептококков других групп. В результате ПЦР был амплифицирован участок гена scaAB СГВ размером 300 п.н., который оказался на 74-90% гомологичен центральным участкам генов липопротеинов Lral стрептококков других групп. Для определения полной нуклеотидной последовательности гена scaAB была получена библиотека генома СГВ в векторной системе на основе фага X Blue Star. В результате анализа полученной библиотеки методом ПЦР с использованием праймеров на центральную часть гена scaAB и методом ДНК-ДНК гибридизации был обнаружен рекомбинантный клон, содержащий фрагмент хромосомной ДНК СГВ размером 1287 п.н. Результаты секвенирования показали, что данный фрагмент хромосомной ДНК содержал полноразмерный ген scaAB и фрагмент гена scaR, кодирующий предполагаемый регулятор транскрипции данного гена. Полученная нуклеотидная последовательность была депонирована в банк данных GenBank под номером AY 267033. Таким образом, проведено клонирование и секвенирование участка ДНК СГВ, содержащего ген scaAB, кодирующий предполагаемый фактор адгезии и агрегации СГВ. Анализ нуклеотидной последовательности позволил установить расположение и ориентацию гена регулятора транскрипции scaR относительно гена scaAB.

Компьютерный анализ полной нуклеотидной последовательности гена scaAB позволил определить аминокислотную последовательность предполагаемого фактора адгезии и агрегации ScaAB. Анализ аминокислотной последовательности белка показал, что полноразмерный белок ScaAB состоит из 310 аминокислот и имеет молекулярную массу около 35 KÖa. В N-терминальном конце белка обнаружена последовательность LGAC, которая соответствует последовательности LxxC, являющейся сайтом отщепления сигнального пептида белков семейства Lral протеазой II. Данная аминокислотная последовательность LxxC характерна для всех липопротеинов семейства Lral и находится в исследуемом белке ScaAB с 17 по 20 аминокислотный остаток. Таким образом, белок ScaAB может быть отнесен к Lral семейству липопротеинов,

Для определения степени гомологии белка ScaAB с липопротеинами семейства Lral стрептококков других групп был проведен сравнительный анализ их аминокислотных последовательностей. В результате было показано, что белок ScaAB на 75,5 % гомологичен белку SsaB S. sanguis, на 74% - FimA S. parasanguis и PsaA S. pneumoniae, на 73% - ScbA S. crista и ScaA S. gordonii, на 57% - белку EfaA Enterococcus faecalis. Сравнительный анализ выявил также идентичное расположение аминокислотных остатков, формирующих Мп2+-связывающий центр. Полученные данные позволяют утверждать, что ген scaAB СГВ кодирует липопротеин семейства Lral, гомологичный липопротеинам — факторам адгезии и агрегации стрептококков других групп.

С целью выяснения возможного участия белка ScaAB СГВ в процессах адгезии и агрегации были проведены эксперименты по инактивации гена scaAB посредством инсерционного мутагенеза. Для инактивации гена scaAB была сконструирована плазмида на основе несущего ген устойчивости к эритромицину вектора, не реплицирующегося в стрептококках. Конструкция содержала центральный участок гена scaAB размером 300 п.н. Данная плазмида использовалась для трансформации клеток штамма 58/59 стрептококков группы В методом электропорации. Отобранные по признаку устойчивости к эритромицину клоны СГВ имели инсерцию плазмиды в области гена scaAB. Полученные таким образом ScaAB" мутанты обладали способностью образовывать крупные, до 50 клеток, агрегаты. При этом индекс адгезии мутантных клеток к клеткам вагинального эпителия уменьшался по сравнению с индексом адгезии исходного штамма. Результаты экспериментов по инсерционному мутагенезу позволяют предположить, что белок ScaAB задействован в процессах прикрепления стрептококков к клеткам слизистого эпителия хозяина. Поскольку адгезия микроорганизма на клетках эпителия является первым этапом колонизации организма, нам представляется правильным рассматривать новый белок, обнаруженный у СГВ, в качестве потенциального фактора вирулентности.

Для оценки возможности использования данного белка в качестве компонента вакцины, были проведены следующие эксперименты:

1) Наличие гена scaAB в штаммах стрептококков группы В, относящихся к разным серотипам оценивалось методом ПЦР с использованием двух пар праймеров, фланкирующих полноразмерный ген (900 п.н.) и центральный участок гена, размером 300 п.н. В качестве матрицы для ПЦР использовались хромосомные ДНК 45 штаммов СГВ, относящихся к серотипам I - V. Результаты амплификации показали, что ген scaAB присутствует в геномах штаммов СГВ всех пяти серотипов без исключения. Анализ всех 45 штаммов с двумя парами праймеров не выявил отличий в размерах ПЦР фрагментов. Одинаковые размеры амплифицируемых фрагментов позволили сделать вывод об отсутствии каких-либо делеций в последовательностях данного гена у штаммов разных серотипов. Сходство штаммов СГВ по данному гену обосновывает использование белка ScaAB в качестве компонента противострептококковой вакцины.

2) Для изучения иммуногенности и протективности белка ScaAB был получен препарат очищенного рекомбинантного белка. С этой целью был амплифицирован полноразмерный ген scaAB. Полученный амплификат был проклонирован в систему Е. coli с помощью линейного вектора pGEM-T Easy, а затем в экспрессионную систему векторов pQE 30-32. Рекомбинантные клоны, полученные в результате трансформации, проверяли на наличие экспрессии белка ScaAB. Результаты показали эскпрессию белка в рекомбинантных клонах, содержащих плазмиду pQE31 со вставкой гена scaAB. Однако, несмотря на наличие рекомбинантного белка в лизате, получить препарат полноразмерного белка ScaAB, очищенный методом аффинной хроматографии первоначально не удалось. На основании полученных данных было сделано предположение, что в системе Е. coli также как и в стрептококковых клетках, происходит процессинг белка, в результате чего сигнальный пептид вместе с участком, кодируемым вектором pQE (6xHis) отщепляется от белка ScaAB по сайту LGAC. В результате рекомбинантный белок не связывался с сорбентом при аффинной хроматографии. В дальнейшем было предпринято клонирование последовательности гена, кодирующей зрелый белок ScaAB и не кодирующей сайта LGAC. В результате был получен препарат очищенного рекомбинантного белка ScaAB массой 37 KÖa. Таким образом, было подтверждено предположение о процессинге белка ScaAB СГВ в гетерологичной системе Е. coli.

3) Получение препарата очищенного рекомбинантного белка ScaAB позволило провести ряд экспериментов по оценке роли белка в формировании иммунного ответа на инфекцию, вызванную СГВ. Для предварительной оценки наличия антител к изучаемому белку при стрептококковой инфекции нами был проведен сравнительный анализ титра антител к различным белкам СГВ в гипериммунной сыворотке, полученной от мышей, перенесших СГВ инфекцию. Анализ уровня содержания антител в гипериммунных сыворотках показал, что титр антител к рекомбинантному белку ScaAB превосходил титр антител к другим белковым факторам СГВ таким, как С5а пептидаза, глутаминсинтетаза или рекомбинантные полипептиды на основе белка Вас. Полученные результаты позволили сделать вывод о целесообразности дальнейших исследований по оценке иммуногенности и протективности белка ScaAB, как потенциального компонента противострептококковых вакцин.

Изучение иммунного ответа на рекомбинантный белок ScaAB проводили на беспородных мышах. Титр специфических антител (IgG) определяли на разных сроках от начала иммунизации. Полученные результаты показали наличие иммунного ответа на присутствие рекомбинантного белка, причем самый высокий титр антител к белку наблюдался на 48 день от начала иммунизации. Наличие в крови иммунизированных животных антител с двумя различными уровнями аффинитета позволил предположить, что изучаемый нами белок ScaAB содержит более чем одну антигенную детерминанту.

4) Изучение протективности антител к белку ScaAB проводилось в сравнении с ранее изученной протективностью рекомбинантного белка Р6 [132], полученного на основе поверхностного IgA-связывающего белка Вас СГВ. Дополнительно исследовался протективный эффект при иммунизации мышей смесью рекомбинантных белков ScaAB и Р6. Протективность рекомбинантных белков оценивалась на двух моделях: модели защиты лабораторных животных в условиях экспериментальной СГВ инфекции in vivo и модели опсонофагоцитоза макрофагов in vitro.

Характер развития инфекционного процесса оценивался на основании определения концентрации стрептококков в селезенке мышей, предварительно инфицированных СГВ. В начальной фазе инфекции и в контрольной, не иммунизированной группе мышей, и во всех трех группах иммунизированных животных наблюдалось уменьшение концентрации стрептококков. Через сутки после начала эксперимента ярко выраженный протективный эффект наблюдался только у групп мышей, иммунизированных белком ScaAB и смесью белка ScaAB с рекомбинантным белком Р6. Следует отметить, что белок ScaAB обеспечивал более высокий уровень протективности по сравнению с протективностью белка Р6 несмотря на относительно низкий титр антител к белку ScaAB, который был равен 1:1600 по сравнению с титром антител к белку Р6 равным 1:25000.

Результаты оценки протективного эффекта рекомбинантного белка ScaAB в условиях экспериментальной инфекции СГВ у мышей in vivo были подтверждены данными эскпериментов по изучению протективности этого белка на модели опсонофагоцитоза in vitro. Сравнение индекса инфицирования при обработке макрофагов нормальной или иммунной сывороткой методом подсчета адгезированных макрофагами бактериальных клеток показало, что сыворотка к белку ScaAB оказывало стимулирующий эффект на опсонофагоцитарную реакцию макрофагов мыши. При этом индекс инфицирования увеличивался в 2 раза. Оценка индекса инфицирования путем подсчета числа адгезированных на макрофагах жизнеспособных клеток СГВ показала, что в случае использования сыворотки к белку ScaAB через 3 часа 95% связанных макрофагами стрептококков погибает.

Таким образом, выявленные закономерности указывают на то, что полученный нами белок ScaAB обладает иммуногенностью и стимулирует протективный иммунный ответ в условиях модельной СГВ инфекции. Эти данные позволяют рассматривать данный белок как потенциальный компонент вакцин против стрептококков группы В.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Воробьева, Екатерина Ивановна, Санкт-Петербург

1. Агафонова И.И. Особенности математического описания экспериментальных данных при анализе распределения сывороточных IgG , специфичных в отношении вируса гриппа. Вестник АМН СССР. 1991, 11, 11-14.

2. Джонсон Д.Р., Каплан Э.Л., Срамек Я., Бикова Р., Гавличек И., Гавликова Г., Мотлова И., Криз П. Лабораторная диагностика инфекций, вызванных стрептококком группы А. Женева, 1998, 34.

3. Лакин Г.Ф. Биометрия. М., Высшая школа, 1990.

4. Маниатис Т., Фрич Э., Самбрук Дж. Молекулярное клонирование. М., Мир, 1984.

5. Мерингова Л.Ф., Войцеховский Б.Л., Духин А.И., Крамская Т.А., Поляк Р.Я. Применение методов химической кинетики для оценки аффинитета циркулирующих свободных и связанных с антигеном антител (модель-экспериментальный грипп). Иммунология. 1986,. 6,48-51.

6. Andersen R.N., Ganeshkumar N., Kolenbrander P.E. Cloning of the Streptococcus gordonii PK488 gene, encoding an adhesin which mediates coaggregation with Actinomyces naeslundii PK606. Inf. Immun. 1993, 61, 3, 981-987.

7. Areschoug Т., Stalhammar-Carlemalm M., Karlsson I., Lindahl G. Streptococcal p protein has separate binding site for human factor H and IgA Fc. J.Biol.Chem. 2002,277, 12642-12648.

8. Areschoug Т., Stalhammar-Carlemalm M., Larsson C., Lindahl G. Group В streptococcal surface protein as a targets fcr protective antibodies: identification of two novel proteins in strains of serotype V. Infect. Immun. 1999, 67, 6350-6357.

9. BayerA.S., Chow A.W., Anthony B.F., Guze L.B. Serious infections in adults due to group В streptococci. Am. J. Med. 1976, 61, 498-501.

10. Beckmann C., Waggoner J.D., Harris T.O., Tamura G.S., Rubens C.E. Identification of novel adhesins from group B Streptococci by use of phage display reveals that C5a peptidase mediates fibronectin binding. Infect. Immun. 2002,70,2869-2876.

11. Berry A.M., Paton J.C. Sequence heterogeneity of PsaA, a 37-kilodalton putative adhesin essential for virulence of Streptococcus pneumoniae. Inf. Immun. 1996, 64, 12, 5255-5262.

12. Betriu C., Culebras E., Gomez M., Rodriguez-Avial I., Sachez B.A., Agreda M.C., Picazo J.J. Erythromycin and clindamycin resistance and telithromycin susceptibility in Streptococcus agalactiae. Antimicrob. Agents Chemother. 2003, 47, 1112-1114.

13. Bevanger L. Ibc proteins as serotype markers of group B streptococci. Acta Path. Microb. Immunol. Scand. Sect. B.1983, 231-234.

14. Bevanger L., Brakstad O.G., Maeland J.A., Kvam A.I.,Iversen G., Lyng R.V. Aberration in expression of the ß antigen of Streptococcus agalactiae. Adv. Exp. Med. Biol. 1997, 418, 9991001.

15. Birnboim H.C., Doly J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant DNA. Nucl. Acid. Res. 1979, 7, 1513-1523.

16. Blumberg H.M., Stephens D.S., Modansky M., Erwin M., Elliot J., Facklam R.R., Schuchat A., Baughman W., Farley M.M. Invasive group B streptococcal disease: the emergence of serotype V. J.Infect.Dis.1996, 173, 365-373.

17. Bohnsack J.F., Mollison K.W., Buko A.M., Ashworth J.C., Hill H.R. Group B streptococci inactivate complement component C5a by enzymic cleavage at the C-terminus. Biochem. J. 1991,273,635-640.

18. Boyer K.M. Neonatal group B streptococcal infections. Curr. Opin. Pediatr. 1995, 7, 13-18.

19. Brady L.J., Boyle M.D. Identification of non-immunoglobulin A-Fc-binding forms and low-molecular-weight secreted forms of the group B streptococcal antigen. Infect. Immun. 1989, 57, 1573-1581.

20. Braun V., Wu H.C. Lipoproteins, structure, function, biosyntesis and model for protein export. New Compr. Biochem. 1994, 27, 319-341.

21. Brodeur B.R., Boyer M., Charlebois I., Hamel J., Couture F., Rioux C.R., Martin D. Identification of group B streptococcal Sip protein, which elicits cross-protective immunity. Infect. Immun. 2000, 68, 5610-5618.

22. Bulgakova T.N., Grabovskaya K.B., Rye M., Jelinkova J. The adhesin structures involved in the adherence of group B Streptococci to human vaginal cells. Folia Microbiol. 1986, 31, 394-401.

23. Burnette-Curley D., Wells V., Viscount H., Munro C.L., Fenno J.C., Fives-Taylor P., Macrina F.L. FimA, a major virulence factor associated with Streptococcus parasanguis endocarditis. Infect. Immun. 1995,63,4669- 4674.

24. Cheng Q., Stafslien D., Purushoothaman S.S., Cleary P. The group B streptococcal C5a peptidase is both a specific protease and an invasin. Infect. Immun. 2002, 70,2408-2413.

25. Cheton P.L., Archibald F.S. Manganese complexes and the generation and scavenging of hydroxyl free radicals. Free Radic. Biol. Med. 1988, 5, 325-333.

26. Chmouryguina I., Suvorov A., Ferrieri P., Cleary P.P. Conservation of the C5a peptidase genes in group A and B streptococci. Infect. Immun. 1996, 64, 2387-2390.

27. Chun C.S.Y., Brady L.J., Boyle M.D.P., Dilon H.C., Ayoub E.M. Group B streptococcal C protein associated antigens: association with neonatal sepsis. JID.1991, 163. 786-791.

28. Cimolai N., Roscoe D.L. Contemporary context for early-oneset group B streptococcal sepsis of the newborn. Am. J. Perinatol. 1995, 12, 46-49.

29. Cleary P.P., Handley J., Suvorov A.N., Podbielski A., Ferrieri P. Similarity between the group B and A streptococcal C5a peptidase genes. Infect. Immun. 1992, 60,4239-4244.

30. Cleat P.H., Timmis K.N. Cloning and expression in Escherihia coli of the Ibc protein genes of group B streptococci: binding of human immunoglobulin A to the beta antigen. Infect. Immun. 1987,55,1151-1155.

31. Cockayne A., Hill P.J., Powell N.B.L., Bishop K., Sims C., Williams P. Molecular cloning of a 32-kilodalton lipoprotein component of a novel iron-regulated Staphylococcus epidermidis ABC transporter. Inf. Immun. 1998, 66, 3767-3774.

32. Colman G, Efstratiou A. and Marrison D. Streptococci and related organisms, identification methods in applied and enviromental microbiology. 1992,221-249.

33. Combet C., Jambon M., Deleage G., Geouijon C. Automatic comparative molecular modelling of protein. Bioinformatics. 2002, 18, 213-214.

34. Cumming C.G. Group B streptococcal cell surfaces. J.Med.Microbiol.1984,18,151-155.

35. Curtis S.N., Krause R.M. Identification of rhamnose as an antigenic determinant of group B streptococci carbohydrate. Federation Proceeding. 1964, 23, 151-155.

36. Dagert M., Ehrlich S.D. Prolonged incubation in calcium chloride improves the competence of Escherichia coli cells. Gene. 1979, 6,23-28.

37. Duben J., Jelinkova J., Neubauer M. Group B streptococci in the female genital tract and nosocomial colonization of newborns. Infect.Immun. 1978,23, p.89-94.

38. Edwards M.S., Baker C.J. Group B streptococcal infection. In: J.S. Remington and J.O. Klein (ed.), Infection diseases of the fetus and the newborn infant. The W.B. saunders Co., Philadelphia, 2001,1091-1156.

39. Edwards M.S., Nicholson W.A., Baker C.J., Kasper D.L. The role of specific antibody in alternative pathway-mediated opsonophagocytosis of type III, group B Streptococcus. J. Exp. Med. 1980, 151,1275-1287.

40. Facklam R.R., Washington J.A. Streptococcus and related catalase-negative gram-positive cocci. In: Manual of Clinical Microbiology, edited by Balows A., Hausler W.Jr. and Herrmann K.L. Washington, DC: American Society for Microbiology, 1991,238-239.

41. Ferried P. GBS infection in the newborn infant: diagnosis and treatment. Antibiot. Chemoter. 1985,35,211-215.

42. Ferrieri P. Surface-localized protein antigens of group B Streptococci. Rev. Infect. Dis.1988, 10, 363-366.

43. Ferrieri P., Flores A. Surface protein expression in group B streptococcal invasive isolates. Adv. Exp. Med.Biol. 1997,418, 635-637.

44. Franciosi R.A., Knostman J.D., Zimmerman R.A. Group B streptococcal neonatal and infant infections. J.Pediatr. 1973, 82, 707-710.

45. Friquet B., Charfotte A.F., Djavadi-Ohaniance L., Goldberg M.E. Measurements of the true affinity constant in solution of antigen-antibody complexes by enzyme-linked immunosorbent assay. J. Immunol.Meth. 1985, 77, 305-319.

46. Gallagher P.G., Watanakunakorn C. Group B streptococcal endocarditis; report of seven cases and review of the literature, 1962-1985. Rev. Infect. Dis. 1986, 8,175-188.

47. Ganeshkumar N., Arora N., Kolenbrander P.E. Saliva-binding protein (SsaB) from Streptococcus sanguis 12 is a lipoprotein. J. Bacteriol. 1993,175, 572-574.

48. Gardam M.A., Low D.E., Saginur R., Miller M.A. Group B streptococcal necrotizing fascitis and streptococcal toxic-shock-like syndrome in adults. Arch. Intern. Med. 1998,158,1704-1708.

49. Gase K., Ozegowski J., Malke H. The Streptococcus agalactiae hylB gene encoding hyalurone lyase: completion of the sequence and expression analysis. Biochem. Biophys. Acta. 1998, 1398, 86-98.

50. Gor D.O., Ding X., Li Q., Schreiber J.R., Dubinsky M., Greenspan N.S. Enhanced immunogenicity of pneumococcal surface adhesin A by genetic fusion to cytokines and evaluation of protective immunity in mice. Infect. Immun. 2002, 70, 5589-5595.

51. Granlund M., Oberg L., Sellin M., Norgren M. Identification of a novel insertion element, IS 1548, in group B streptococci, predominantly in strains causing endocarditis. J. Infect. Dis. 1998, 177, 967-976.

52. Gravekamp C., Kasper D.L., Michel J.L., Kling D.E., Carey V., Madoff L.C. Immunogenicity and protective efficacy of the alpha C protein of group B streptococci are inversely related to the number of repeats. Infect. Immun. 1997, 65, 5216-5221.

53. Gravekamp C., Horensky D.S., Michel J.L., Madoff L. Variation in repeat number within the alpha C protein of group B streptococci alters antigenicity and protective epitopes. Infect. Immun. 1996, 64,3576-3583.

54. Gutekunst H., Eikmanns B.J., Reinscheid D.J. The novel flbrinogen-binding protein FbsB promotes Streptococcus agalactiae invasion into epithelial cells. Infect Immun. 2004, 72, 34953504.

55. Harrington DJ., Greated J.S., Chanter N., Sutcliffe I.C. Identification of lipoprotein homologues of pneumococcal PsaA in the equine pathogens Streptococcus equi and Streptococcus zooepidemicus. Inf. Immun. 2000, 68, 10, 6048-6051.

56. Harris T.O., Shelver D.W., Bohnsack J.F., Rubens C.E. A novel streptococcal surface protease promotes virulence, resistance to opsonophagocytosis, and cleavage of human fibrinogen. J. Clin. Investig. 2003, 111, 61-70.

57. Harrison L.H., Elliot J.A., Dwyer D.M., Libonati J.P., Ferrieri P., Billmann L., Schuchat A. Serotype distribution of invasive group B streptococcal isolates in Maryland: implications for vaccine formulation. J.Infect.Dis. 1998, 177, 998-1002.

58. Hauge M., Jespersgaard C., Poulsen K., Kilian M. Population structure of Streptococcus agalactiae reveals an association between specific evolutionary lineages and putative virulence factors but not disease. Infect. Immun. 1996,64, 919-925.

59. Holmstrom B., Grimsley E.W. Necrotizing fasciitis and toxic shock-like syndrome caused by group B streptococcus. South. Med. J. 2000, 93, 1096-1098.

60. Jacobsson K. A novel family of fibrinogen-binding proteins in Streptococcus agalactiae. Vet. Microbiol. 2003,96, 103-113.

61. Jakubovics N.S., Smith A.W., Jenkinson H.F. Expression of the virulence-related Sea (Mn2+) permease in Streptococcus gordonii is regulated by a diphtheria toxin metallorepressor-like protein ScaR. Mol. Microbiol. 2000,38, 140-153.

62. Jakubovics N.S., Jenkinson H.F. Out of the iron age: new insights into the critical role of manganese homeostasis in bacteria. Microbiol. 2001,147, 1709-1718.

63. Janulczyk R., Pallon J., Bjorck L. Identification and characterization of a Streptococcus, pyogenes ABC transporter with multiple specificity for metal cations. Mol. Microbiol. 1999, 34, 596-606.

64. Jenkinson H.F. Cell surface protein receptors in oral streptococci. FEMS Microbiol. Lett. 1994, 121, 133-140.

65. Jennings H.J., Katzenellenbogen C., Lugowski C., Kasper D.L. Structure of the native polysaccharide antigen of type la and lb group B Streptococcus. Biochemistry. 1983,258,17931798.

66. Jerlstrom P.J., Chatwal G.S., Timmis K.N. The IgA binding ß antigen of the C protein complex of group B streptococci: sequence determination of its gene and detection of two binding regions. Molec. Microb. 1991, 5, 843-849.

67. Jiang Y.X., Murray B.E., Weinstock G.M. Enterococcus faecalis antigen in human infection. Infect. Immun. 1997, 65, 4207-4215.

68. Jürgens D., Sterzik B., Fehrenbach F.J. Unspecific binding of group B streptococcal cocytolysin (CAMP factor) to immunoglobulins and its possible role in pathogenicity. J. Exp. Med. 1987, 165, 720-732.

69. Kasper D.L., Baker C.J., Jennings H.J. Cell structure and antigenic composition of GBS. Antibiot. Chemoter. 1985, 35, 90-100.

70. Keefe G.P. Streptococcus agalactiae mastitis: a review. Can.Vet. 1997, 38, 429-437.

71. Kitten T., Munro C.L., Michalek S.M., Macrina F.L. Genetic characterization of a Streptococcus mutans Lral family operon and role in virulence. Infect. Immun. 2000, 68, 44414451.

72. Kogan G., Uhrin D., Brisson J.R., Paoletti L.C., Blodgett A.E., Kasper D.L., Jenning H.J. Structural and immunochemical characterization of the type VIII group B Streptococcus capsular polysaccharide. J.Biol.Chem.1996, 271, 8786-8790.

73. Kolenbrander P. E., Andersen R. N., Baker R. A., Jenkinson H. F. The adhesion-associated sea operon in Streptococcus gordonii encodes an inducible high-affinity ABC transporter for Mn2+ uptake. J. Bacteriol. 1998,180, 290-295.

74. Kong F., Gowan S., Martin D., James G., Gilbert G.L. Molecular profiles of group B streptococcal surface protein antigen genes: relationship to molecular serotypes. J. Clin. Microbiol. 2002,40, 620-626.

75. Koroleva I.V., Efstratiou A., Suvorov A.N. Structural heterogeneity of the streptococcal C5a peptidase gene in Streptococcus pyogenes. J. Bacter. 2002, 184(22), 6384-6386.

76. Krachler M., Rossipal E., Micetic-Turk D. Concentrations of trace elements in sera of newborn, young infants, and adults. Biol. Trace Elem. Res. 1999, 68,121-135.

77. Kramskaya T., Grabovskaya K., Chetverikova L., Polyak R. Inpairment of resistance to the virus reinfection during virus-bacterial infection. In: Pathogenic streptococci: Present and future (Totolian A.A., Ed.) St. Petersburg, Russia, 1994, 337-338.

78. Kreig N.R. and Holt J.G. Bergey's Mannual of Systematic Bacteriology. Williams and Wilkins Co. 1984, 1-1599.

79. Lachenauer C.S., Creti R., Michel J.L., Madoff L.C. Mosaicism in the alpha-like protein genes of group B streptococci. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000, 97, 9630-9635.

80. Lachenauer C.S., Kasper D.L., Shimada J., Ichiman Y., Ohtsuka H., Kaku M., Paoletti L.C., Ferrieri P., Madoff L.C. Serotype VI and VIII predominate among group B streptococci isolated from pregnant Japanese women. J.Infect.Dis. 1999, 179, 1030-1033.

81. Lachenauer C.S., Madoff L.C. A protective surface protein fron type V group B streptococci shares N-terminal sequence homology with the alpha C protein. Infect. Immun. 1996, 64, 42554260.

82. Laemmli U.K. Cleavage of structural protein during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, London, 1970,227, 680-686

83. Lammler C., Schwarz S., Wibawan I.W., Ott E., Bopp V., Martinez-Tagle A. Comparicon of streptococci of serological group B isolated from healthy carriers and active disease in Chile. J. Med. Microb. 1995,42, 161-164.

84. Lancefield R.C. A serological differentiation of human and other groups of hemolytic streptococci. J.Exp. Med. 1933, 57, 571-595.

85. Lancefield R.C.- A serological differentiaion of specific type of bovine hemolityc streptococci (group B)c J. Exp. Med. 1934, 59, 441-458.

86. Larsson C., Stalhammar-Carlemalm M., Lindahl G. Protection against experimental infection with group B streptococcus by immunization with a bivalent protein vaccine. Vaccine. 1999, 17, 454-458.

87. Larsson C., Stalhammar-Carlemalm M., Lindahl G. Experimental vaccination against group B streptococcus, an encapsulated bacterium, with highly purified preparations of cell surface proteins Rib and a. Infect. Immun. 1996, 64, 3518-3523.

88. Lindahl G., Stalhammar-Carlemalm M., Areschoug T. Surface proteins of Streptococcus agalactiae and related proteins in other bacterial pathogens. Clin.Microbiol.Rew. 2005, 18, 102127.

89. Lowe A.M., Lambert P.A., Smith A.W. Cloning of an Enterococcus faecalis endocarditis anigen: homology with adhesins from some oral streptococci. Infect. Immun. 1995, 63, 2, 703706.

90. Lowry O.H., Rosenbraugh N.J., Ferr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the folin phenol reagent. J.Mol.Biol. 1957, 193, 265-273.

91. Madoff L.C., Hori S., Michel J.L., Baker C.J., Kasper D.L. Phenotypic diversity in the alpha C protein of group B streptococci. Infect. Immun. 1991, 59, 2638-2644.

92. Maeland J.A., Brakstad O.G., Bevanger L., Kwam A.I. Streptococcus agalactiae ß gene and gene product variation. J. Med. Microbiol. 1997, 46, 999-1005.

93. Martin D., Rioux S., Gagnon E., Boyer M., Hamel J., Charland N., Brodeur B.R. Protection from group B streptococcal infection in neonatal mice by maternal immunization with recombinant Sip protein. Infect. Immun. 2002, 70, 4897-4901.

94. Michel J.L., Madoff L.C., Olson K., Kling D.E., Kasper D.L. Large, identical, tandem repeating units in the C protein alpha antigen, bca, of group B streptococi. Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1993,89, 10060-10064.

95. Morales W.J., Dickey S.S., Bornick P., Lim D.V. Change in antibiotic resistance of group B streptococcus: impact on intrapartum management. Am. J. Obstet. Gynecol. 1999, 181, 310314.

96. Nagano N., Nagano Y., Taguchi F. High expression of a C protein beta antigen gene among invasive strains from certain clonally related group of type la and lb group B streptococci. Infect. Immun. 2002, 70, 4643-4649.

97. Novak R., Braun J.S., Charpentier E., Tuomanen E. Penicillin tolerance genes of Streptococcus pneumoniae: the ABC-type manganese permease complex Psa. Mol. Microbiol. 1998, 29,1285-1296.

98. Paik S., Brown A., Munro C., Cornelissen C.N., Kitten T. The SloABCR operon of Streptococcus mutans encodes an Mn and Fe transport system required for endocarditis virulence and its Mn-dependent repressor. J. of Bacter. 2003, 185, 5967-5975.

99. Pohorille A., Schweighofer K., Wilson M.A. The origin and early evolution of membrane channels. Astrobiology. 2005, 5, 1-17.

100. Reglier-Poupet H., Pellegrini E., charbit A., Berche P. Identification of LpeA, a PsaA-like membrane protein that promotes cell entry by Listeria monocytogenes. Inf. Immun. 2003, 71, 1, 474-482.

101. Riordan F.A., Thomson A.P., Sills J.A., Hart C.A. Bacterial meningitis in the first three months of life. Postgrad. Med. J. 1995, 71,36-38.

102. Rioux S., Martin D., Ackermann H.W., Dumont J., Hamel J., Brodeur B.R. Localization of surface immunogenic protein on group B streptococcus. Infect. Immun. 2001, 69, 5162-5165.

103. Rubens C.E., Haft R.F., Wessels M.R. Characterization of the capsular polysaccharide genes of group B streptococci. Dev. Biol. Stand. 1995, 85, 237-244.

104. Rubens C.E., Wessels M.R., Heggen L.M., Kasper D.L. Transposon mutagenesis of type III gruopB Streptococcus: correlation of capsule expression with virulence. Proc.Natl.Acad.Sci,USA. 1987, 84, 7208-7212.

105. Russell H., Tharpe J.A., Wells D.E., White E.H., Johnson J.E. Monoclonal antibody recognizing a species-specific protein from Streptococcus pneumoniae. J. Clin. Microbiol. 1990, 28,2191-2195.

106. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, USA, 1989.

107. Sanger F,. Coulson A.R., Barell B.G., Smith A.S.N., Roe B.A. Cloning in single-standed bacteriophage as an aid to rapid D.NA sequencing. J.Mol. Biol. 1980, 143, 161-178.

108. Saurin W., Hofnung M., Dassa E. Getting in or out: early segregation between importers and exporters in the evolution of ATP-binding cassette (ABC) transporters. J. Mol. Evol. 1999, 48, 22-41.

109. Schalen C. Prevalence of IgA receptors in clinical isolates of Streptococcus pyugenes and Streptococcus agalactiae: serological distinction between the receptors by blocking antibodies. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1993, 7,39-46.

110. Schlivert P.M., Gocke J.L., Deringer J.R. Group B streptococcal toxic shock-like syndrome: report of a case and purification of the associated pyrogenic toxin. Clin. Infect. Dis. 1993, 17, 26-31.

111. Singh K.V., Coque T.M., Weinstock G.M., Murray B.E. In vivo testing of an Enterococcus faecalis efaA mutant and use of efaA homologs for species identification. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1998, 21, 323-331.

112. Stalhammar-Carlemalm M., Stenberg I., Lindahl G. Protein Rib: a novel 'group B streptococcal cell surface protein that confers protective immunity and is expressed by most strain causing invasive infections. J. Exp. Med. 1993, 177, 1593-1603.

113. Sutcliffe I.C., Russell R.R. Lipoproteins of Grampositive bacteria. J. Bacterid. 1995, 177, 1123-1128.

114. Sutcliffe I.C., Harrington D.J. Pattern searches for the identification of putative lipoprotein genes in Gram-positive bacterial genomes. Microbiol. 2002, 148, 2065-2077.

115. Takahashi S., Nagano Y., Nagano N., Hayashi O., Taguchi F., Okuwaki Y. Role of C5a-ase in group B streptococcal resistance to opsonophagocytic killing. Infect. Immun. 1995, 63, 47644769.

116. Talkington D.F., Brown B.G., Tharpe J.A., Koening A., Russell H. Protection of mice against fatal pneumococcal challenge by immunization with pneumococcal surface adhesin A (PsaA). Microb. Pathog. 1996, 21, 17-22.

117. Tjalsma H., Bolhuis A., Jongbloed J.D.H., Bron S., van Dijl J.M. Signal peptide-dependent protein transport in Bacillus subtilis: a genome-based survey of the secretome. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2000, 64,515-547.

118. Tseng HJ., McEwan A.G., Paton J.C., Jenning M.P. Virulence of Streptococcus pneumoniae: PsaA mutants are hypersensitive to oxidative stress. Infect. Immun. 2002, 70, 1635-1639.

119. Viscount H.B., Munro C.L., Burnette-Curley D., Peterson D.L., Macrina F.L. Immunization with FimA protects against Streptococcus parasanguis endocarditis in rats. Infect. Immun. 1997, 65,994-1002.

120. Wastfelt M., Stalhammar-Carlemalm M., Delisse A.-M., Cabezon T., Lindahl G. Identification of a family of streptococcal surface proteins with extremely repetitive structure. J. Biol. Chem. 1996,271, 18892-18897.

121. Wessels M.R., Rubens C.E., Benedi V.J., Kasper D.L. definition of a bacterial virulence factor: sialylation of the group B streptococcal capsule. Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1989, 86, 8983-8987.

122. Wexler D.E., Chenoweth D.E., Cleary P.P. Mechanism of action of the group A streptococcal C5a inactivator. Proc. Natl. Acad. Sci.USA. 1985, 82, 8144-8148.8. БЛАГОДАРНОСТИ