Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Молекулярно-биологические аспекты модификации метаболизма хризантем (Crysanthemum morifolium Ramat. ) путем экспрессии гетерологических генов

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Митюшкина, Татьяна Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 .Методы переноса генов в растительный геном

1.1.1. Агробактериальная трансформация

1.1.2.Вирусные векторы 7 1.1.3 .Физические методы переноса 8 1.2.Применение методов генной инженерии для улучшения сортов сельскохозяйственных культур. 9 1.2.1 .Использование генов ô-токсинов для экспрессии в растениях 12 \22.Rol гены из Agrobacterium rhizogenes: происхождение и роль в метаболизме бактерий и растений.

1.2.3.Применение RolC гена в декоративном цветоводстве.

1.2.4."Антисенс технология": природное проявление и исследование генома растений.

1.3 .Хризантема - место и значение в промышленном цветоводстве.

1.3.1 .История культуры.

1.3.2.Современные направления в биотехнологии хризантем.

1.3.2.1 .Культура "in vitro "хризантем

1.3.2.2. Регенерация растений и каллусная культура.

1.3.2.3.Культура протопластов.

1.3.2.4.Соматический эмбриогенез 52 1.3.2.5.Образование корней. 53 1.3.3.Обзор работ в области создания трансгенных хризантем

ГЛАВА 2.Цели и задачи

ГЛАВА З.Материалы и методы 67 3.1 .Объекты исследования

3.2.Культура in vitro

3.3.Адаптация растений хризантем к условиям in vivo

3.4. Регенерация адвентивных побегов

3.5. Агробактериальные штаммы и векторы

3.6. Экстракция фитогормонов.

3.7. Выделение ДНК.

3.8. Блоттинг по Саузерну обработанных рестриктазами и разделенных фрагментов ДНК.

3.9. Проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР).

3.10. Определение содержания агропина в растительных тканях

3.11. Определение активности NPT-II in situ.

3.12. Иммунологическое определение содержания 5-эндотоксина в растительных тканях.

3.13. Хроматографический анализ содержания пигментов.

3.14. Тест на устойчивость хризантем к насекомым.

3.15. Метод определения фертильности пыльцы.

ГЛАВА 4. Результаты исследований 77 4.1. Регенерация адвентивных побегов из листовых эксплантов хризантемы. 77 4.2.Экспрессия гена 5-эндотоксина в растениях хризантем для повышения устойчивости к вредителям. 82 4.3.Анализ морфофизиологических изменений растений хризантем экспрессирующих ген rolC из Agrobacterium rhizogenes

4.3.1.Морфологические изменения.

4.3.2.Молекулярно-генетический анализ.

4.3.3.Гормональный баланс трансформантов. 98 4.3 АСтруктура генеративных органов. 104 4.4.Эффективность применения гетерологичного гена халконсинтазы в антисмысловой ориентации для подавления окраски в соцветиях хризантемы. 111 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 118 ВЫВОДЫ 121 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-биологические аспекты модификации метаболизма хризантем (Crysanthemum morifolium Ramat. ) путем экспрессии гетерологических генов"

Несмотря на огромные достижения традиционной селекции растений, некоторые проблемы сельского хозяйства решить такими методами невозможно или очень сложно. Хотя селекция ведется уже несколько тысяч лет, но ее общий принцип фактически остался прежним: скрещивание разнородных в генетическом отношении форм и последующий отбор в гибридном потомстве экземпляров с набором желательных признаков. Таким способом происходит совершенствование давно существующих культур за счет придания им новых ценных качеств. Но этот метод обладает несколькими недостатками, а именно: долговременностью селекционного процесса, случайностью комбинирования генов в результате рекомбинации, низким выходом нужных генотипов, невозможностью переноса признаков из филогенетически отдаленных видов, потребностью в больших площадях, зависимостью от времени года.

В последние годы особенно возрастает внимание к биотехнологии растений. Прежде всего, это происходит, потому что данная технология служит источником новых идей и методов их воплощения для сельского хозяйства, садоводства, пищевого, химического и фармацевтического производства. Использование фундаментальных основ биологии в прикладных целях -модификация процессов роста и развития, увеличение продуктивности растений - лежит в основе совершенствования с/х культур, методами недоступными для традиционной селекции.

Наибольшие успехи в практическом растениеводстве связаны с разработкой и применением методов генетической инженерии растений.

Генная инженерия - это перенос генов, выделенных из одних организмов, в другие. Главное преимущество генной инженерии в том, что она позволяет перенести отдельный ген, отвечающей за конкретный признак, что исключает случайные комбинации признаков и разрушение уже сложившегося и вполне удовлетворительного генотипа. Универсальность генетического кода позволяет использовать гены, выделенные из любых организмов. Применение в этом процессе технологии in vitro значительно ускоряет селекцию и делает ее внесезонной.

Генетическая инженерия способна дополнить геном растения, путем переноса чужеродного генетического материала. Таким образом, становятся возможны получение признаков недостижимых методами традиционной селекции, например, получить голубую розу.

На этом этапе основными процессами становятся идентификация и выделение генов, определяющих требуемые признаки; и разработка методов переноса генов для основных с/х культур, а также достижение их эффективной экспрессии.

Ученые надеются, что в ближайшие несколько лет геном растений будет полностью секвенирован и изучены функции большинства генов. Будут выделены гены, способные придавать устойчивость к основным с/х вредителям, грибам, бактериям и вирусам. Уже получены коммерческие культуры с модифицированным составом масел, белков и крахмалов. Кроме того, использование этих усовершенствованных культур будет способствовать сохранению окружающей среды, прежде всего из-за уменьшения используемых площадей под с/х угодья, уменьшения использования агрохимии, получения новых полимерных материалов растительного происхождения, полностью разлагающихся в естественных условиях.

Производство срезочных культур и горшечных растений поднялось на индустриальный уровень в 20-ом столетии, и объемы продолжают увеличиваться. Традиционно, Голландия считается мировым центром цветоводства, потому что голландский экспортный рынок по своей природе отражает мировой рынок цветочной промышленности, а по объему равен его половине. Розы, хризантемы, гвоздики и тюльпаны составляют примерно 70% от всех производимых срезочных культур.

Исторически, попытки селекционеров в улучшении с/х растений всегда были направлены на увеличение урожайности, устойчивости к насекомым, повышение качества продукции, а также ее привлекательности для покупателя, что имеет особую актуальность в производстве продукции цветоводства.

Цвет, запах, форма - основные качества, на которые обращают внимание, как потребители, так и селекционеры декоративной продукции. Эти свойства в значительной степени определяются, синтезом вторичных метаболитов. Использование методов генетической инженерии для управления этими свойствами было успешно продемонстрировано на работах по изменению окраски.

Используя методы традиционной селекции (скрещивание и продолжительная селекция) удается добиться некоторых желаемых изменений формы, цвета, продлить жизнь после срезки и увеличить устойчивость к биотическим и абиотическим факторам. Однако основным затруднением на этом пути является ограниченность генома. Клеточная селекция и полиплоидия направлены на реализацию признаков, уже заложенных в геноме исходных форм. При отдаленной гибридизации и клеточной инженерии сочетание родительских признаков у получаемых форм также случайно.

Опираясь на достижения молекулярной биологии и используя технику "ш уИго" становится достижимой цель селекционеров - изменение единственного признака без нарушения сложившегося генотипа сорта.

Хотя хризантема в последние годы занимает второе место в цветочной индустрии, оттеснив с него гвоздику, количество полевых испытаний трансгенных форм хризантем остается очень ограниченным 5 против 12 у гвоздики, что связано в первую очередь как, с трудностями методик ее генетической трансформации так, и доступностью генов определяющих ее коммерческие характеристики.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Митюшкина, Татьяна Юрьевна

ВЫВОДЫ

1. Разработана эффективная система регенерации из соматических тканей ряда сортов хризантем. Морфогенетический потенциал листовых дисков хризантем определялся как генотипом сорта, возрастом растений, так и составом среды культивирования.

2. Разработанная система трансформации как на основе обезоруженных, так и необезоруженных агробактериальных штаммов позволяет эффективно переносить и экспрессировать гетерологичные гены в различных сортах хризантем.

3. Получены трансгенные растения хризантем с укороченным геном 5-эндотоксина Cry 1 Abi, rolC из A.rhizogenes и халконсинтазы из львиного зева.

4. Впервые установлена токсичность продуктов гена 5-эндотоксина для членистоногих - акарид при их экспрессии в трансгенных хризантемах.

5. При изучении изменений, вызванных экспрессией в растениях гена rolC из A.rhizogenes в хризантемах обнаружено присутствие гомологичных rolC гену последовательностей в геноме ряда сортов хризантем.

6. Предпологается, что изменение гормонального статуса rolC трансформантов хризантем является основной причиной проявления rolC-фенотипа: изменения архитектуры растений; структуры генеративных органов; морфологии пыльцевых зерен - ведущее к потере фертильности.

7. На примере использования гена халконсинтазы львиного зева в антисмысловой ориентации в трансгенных растениях хризантем показано эффективное подавление экспрессии хозяйского гена и подтверждена возможность использования гомологичных генов филогенетически отдаленных семейств в целях регулирования экспрессии различных генов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенных исследований достигнута высокоэффективная регенерация побегов из листовых тканей ряда сортов хризантем растущих в условиях "in vitro". Показана сортоспецифичность морфогенной способности сортов, а также преимущество использования в качестве доноров укорененных растений. Модификацией гормонального состава среды достигнуто как повышение регенерационной способности трудно регенерируемых сортов, так и направленный морфогенез - как прямой, так и опосредованный наряду с высокоэффективным вторичным эмбриогенезом.

Полученные результаты явились основой для генетической трансформации ряда сортов хризантем как маркерными, так и генами, обуславливающими хозяйственно-ценные признаки.

Успешное использование необезоруженного супервирулентного штамма в качестве компонента бинарной векторной системы подтвердило целесообразность данного подхода для эффективной трансформации маловосприимчивых к агробактериальной инфекции культур с устойчивостью, основанной на гиперчувствительном ответе и способной преодолеваться только узкоспецифичными агробактериальными штаммами, обезоруживание которых в каждом конкретном случае не представляется целесообразным.

Полученные таким образом трансгенные хризантемы явились первым примером переноса гена 8-эндотоксина в эту культуру. Также впервые достоверно показана его экспрессия и эффективность против класса вредителей - акарид. Специфическая токсичность продукта укороченного гена 8-эндотоксина могла быть обусловлена как модификацией гипервариабельного участка, что придало ему способность активно связываться с рецепторами кишечного тракта нового типа организмов, так и присутствие активной формы токсина в клеточном соке растений, обеспечив тем самым его проникновение в организм сосущего паразита крайне затруднительное при поверхностном нанесении препарата. Значимость полученных результатов подтверждается их активным обсуждением в болыпенстве обзоров по молекулярной селекции хризантем опубликованных в последние годы (Boase и др., 1997, Zuker и др.Д998, Rout и др., 1997).

Трансформацией хризантем сорта White Snowdon конструкцией, содержащей ген го 1С под 35S промотором достигнуто изменение габитуса растений -укорочение междоузлий, усиление ветвистости, более чем четырехкратное увеличение числа бутонов при сниженил размера растения и получена идеальная форма для горшечного растения. Кроме того, наблюдалась потеря фертильности пыльцы, связанная в первую очередь с изменением морфологии пыльцевых зерен, подтвержденная исследованиями с помощью сканирующего электронного микроскопа.

Также обнаружено присутствие гомологичных rolC гену последовательностей в геномах ряда нетрансгенных сортов, что может служить как свидетельством естественного предшествующего его переноса в растения, так и "растительного" происхождения rol генов "захваченных" агробактериями у растений в процессе эволюции.

У rolC трансформантов обнаружены значительные различия по содержанию суммарной фракции свободных и слабосвязанных спирторастворимых цитокининов, особенно в листьях верхнего яруса по сравнению с нетрансгенными растениями. Существенные различия наблюдаемые также в содержании как ауксинов так и абцизовой кислоты, позволяют сделать предположение о ведущей роли изменений гормонального статуса трансформантов в проявлении "rolC" фенотипа.

Достигнуто успешное подавление экспрессии халконсинтазы в трансгенных растениях хризантем, содержащих антисмысловую последовательность анологичного гена львиного зева. Таким образом подтверждена возможность использовать гомологичных последовательностей фенотипически достаточно

120 отдаленных семейств в антисмыловой ориентации для достижения эффективного подавления экспрессии растительных генов.

Как видно из приведенных данных возможно успешное широкое использование последовательностей генов выделенных из генов достаточно отдаленных семейств с неполной гомологией нуклеотидных последовательностей.

Полученные результаты наглядно демонстрируют широкие возможности биотехнологических приемов в получении новых форм декоративных растений и закладывает основы успешного применения методов молекулярной селекции для совершенствования сортимента одной из важнейших цветочных культур -хризантемы.

121

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Митюшкина, Татьяна Юрьевна, Пущино

1. Богдарина И.Г., Рукавцова Е.Б., Шматченко В.В., Зинкевич В.Е., Север И.С., и др. Экспрессия гена дельта-эндотоксина Bacillus thuringiensis в трансгенных растениях Nicotiana tabacum. Доклады Академии Наук СССР, 1990., т. 315., С. 1489-1492.

2. Дрейпер Д. Скотт Р. 1991. Генная инженерия растений. Пер. с англ. М., Мир.

3. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование: Пер. с англ. М., Мир. 1984.

4. Митрофанова О.В. Вирусные болезни промышленных цветочных культур и биотехнологические приемы их оздоровления. Диссертация на соискание степени доктора биологических наук в форме научного доклада. Санкт-Петербург. 1992.

5. Пирузян Э.С., Андрианов В.М. Плазмиды агробактерий и генетическая инженерия. М., Наука. 1985. С. 79-96.

6. Муромцев Г.С. Основы химической регуляции роста и продуктивности растений. М., Агропромиздат, 1987. 383с.

7. Ackermann C. Pflanzen aus Agrobacterium rhizogenes tumoren an Nicotiana tabacum // Plant Sci. Letter. 1977. V. 8. P. 23-30.

8. Amagasa K., Kameya T. Plant regeneration and callus formation from Chrysanthemum morifolium, C.coronarium and Lactuca sativa protoplast //J.Jap. Soc. Hort. 1989. V. 57. P. 620-625.

9. Bajaj Y.P.S. A suggested method for in vitro long-term storage at 4°C of Chrysanthemum and Petunia Germplast // Plant Tissue Cult. 1993. V. 31.P. 57-58.

10. Bannier L.J., Stepenkus P.L Cold acclimatization of Chrysanthemum callus cultures //J. Amer. Soc. Hort. Sei. 1976. V. 101. P. 409-412.

11. Barton K.A., Whiteley H.R., Ning-Sun Yang Bacillus thurigniensis 8-endotoxin expressed in transgenic Nicotiana tabacum provides resistance to Lepidopteran insect 11 Plant Physiol. 1987. V. 85. P. 1103-1109.

12. Ben-Jaacov J., Langhans R.W. Rapid multiplication of Chrysanthemum plants by stem-tip proliferation // HortSci. 1972. V.7 P.289-290.

13. Berliner E. Uber die Schlaffsucht der Mehlmottenraupe (Ephestia £wehniella Zell), und ihren Erreger Bacillus thuringiensis n. sp. II Zeitschrift fur angewandtes Entomologie. 1915. Y.2. P. 29-56.

14. Berthome B., Tepfler M., Hanteville S. et al. Evaluation of strategies to obtain virus-resistant geranium plants {Pelargonium spp) // Abstracts of EUCARPIA 19th Intern. Symp. Improvement of Ornamental Plants. Angers. My 1998. P. 28.

15. Bhattacharya P., Dey S., Das N., Bhattacharya B.C. Rapid mass propagation of Chrysanthemum morifolium derived from stem and leaf explants // Plant Cell Rep. 1990. V. 9. P. 439-442.

16. Bird C.R. Ray J. A. Manipulation of plant gene expression by antisense RNA // Biotechn. Gen. Engin. Rev. 1991. V. 9. P. 207-227.

17. Boase M., Miller R., Deroles S. Chrysanthemum systematics, genetics, and Breeding // Plant Breeding Rev. 1997. V. 14. P. 321-361.

18. Boase M.R., ButlerR.C., Borst N.K. Chrysanthemum cultivar Agrobacterium interactions revealed by GUS expression time course experiments // Seien. Hort. 1998. V. 77. P. 89-107.

19. Bourgue J.E. Antisense strategies for genetic manipulation in plants // Plant Sei. 1995. V. 105. P. 125-149.

20. Bramley P., Teulieres C., Blain I., Bird C., Schuch W. et al. Biochemical characterization of transgenic tomato plants in which carotenoid synthesis has benn inhibited through the expression of antisense RNA to pTOM5 // Plant J. 1992. V. 2. P. 343-349.

21. Brierley P., Lorentz P. Helthy tip cuttings from some mosaic-diseased Asiatic Chrysanthemum: some benefits and other effects of heat treatment // Phytopathology. 1960. V. 50. P. 404-408.

22. Broertjes C., Roest S., Bokelmann G.S. Mutation breeding of Chrysanthemum morifolium Ram. Using in vivo and in vitro adventitious bud techniques // Euphytica. 1976. V. 25. P. 11-19.

23. Cannon M., Platz J., O'Leary M. Organ-specific modulation of gene expression in transgenic plants using antisens RNA // 1990. V. 15. P. 39-74.

24. Capone I., Spano L., Cardarelli M., et al. Induction and growth properties of carrot roots with different complements of Agrobacterium rhizogenes T-DNA // Plant Mol. Biol. 1989. V. 13. P. 43-52.

25. Cardarelli M., Spano L., Mariotti D., Mauro M., Constantino P. The role of auxin in hairy root induction // 1987. V. 208. P. 475-480.

26. Cathey H.M. J. Chrysanthemum morifolium (Rama.) Hemsl. // In : L. T. Evans(ed.), The induction of flowering , some case histories. Cornell Univ. Press, Ithaca, NY. 1969. P. 268-290.

27. Chen J. Studies on the origin of Chinese florist's chrysanthemum // Acta. Hortic. 1985. V. 167. P. 349-361.

28. Cluster P.D., O'Dell M., Metzlaff M., Flavell R.B. Details of T-DNA structural organization from a transgenic Petunia population exibiting co-supression // Plant Mol. Biol. 1996. V.32.P.1197-1203.

29. Constantino P., Spano L., Pomponi M., et al. T-DNA of Agrobacterium rhizogenes is transmitted through meiosis to the progeny of hairy root cells //J. Mol. Appl. Genet. 1984. V.2. P. 456-470.

30. Cornelisson M. and Vanderwiele M. Both RNA level and translation efficiency are reduced by antisense RNA in transgenic tobacco // // Nucleic Acids Research.1989. V. 17. P. 834-843.

31. Cornelisson M. Nuclear and cytoplasmic sites for antisens control // Nucleic Acids Research. 1989. V. 18. P. 7203-7209.

32. Courtney-Gutterson N. Molecular Breeding for color, flavor and fragrance // Scientia Hortic. 1993. V. 55. P. 141-160.

33. Courtney-Gutterson N., Napoli C., Lamieux Ch. et al. Modification of flower colour in florist's Chrysanthemum: Production of a white-flowering variety through molecular genetic // BioTech. 1994. V. 12. P. 268-271.

34. Cuozzo M., O'Connell K., Kaniewski W., et.al. Viral protection in transgenic tobacco plants expressing the cucumber mosaic virus coat protein gene // Mol. Plant-Microbe Interact. 1993. V. 6. P. 358-367.

35. Dangl J., Hahlbrock K., Schell J. Regulation and structure of chalcone synthase genes // Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants. 1989 V. 6. P. 155-173.

36. David C., Chilton M., Tempe J. Conservation of T-DNA in plants regenerated from hairy root cultures. // Bio/Technology. 1984. V. 2. P. 73-76.

37. Davies K., Bloor S., Spiller G., et al. Modification of chalcone biosynthesis in petunia // Abstract of 5th International Congress of Plant Molecular Biology. Singapore. 21-27 September 1997. № 408.

38. Davies K.M., Bradley J.M., Schwinn K.E., Markham K.R., Podivinsky E. Flavonoid biosynthesis in flower of five lines of lisianthus (Eustoma grandijZorum Grise.) // Plant Sci. 1993. V. 95. P. 67-77.

39. De Jong J., Merteens M., Rademaker W. Stable expession of the GUS report gene in chrysanthemum depends on binary plasmid T-DNA // Plant Ceel Rep. 1994. V. 14. P. 59-64.

40. De Maagd R., Bosch D., Stiekema W. Bacillus thuringiensis toxin-mediated insect resistance in plants // Trends in Plant Science. 1999. V. 4. P. 9-13.

41. DePaolis A., Mauro L., Pomponi M., Cardarelli M., Spano L., Constantino P. Localization of agropine-synthesizing functions in the Tr region of the root-inducing plasmid of Agrobacterium rhizogenes //Plasmid/ 1985. V. 13. P. 1-17.

42. Deroles S., Bradley M., Davies K. et al. Generation of novel patterns in Lisanthusflowering using an antisense chalcone synthase gene // Acta Hort. 1995. V. 420. P. 26-28

43. Deroles S.C., Gardner R.C. Analysis of the T-DNA structure in a large number of transgenic petunias generated by Agrobacterium-mediated transformation // Plant Mol. Biol. 1988. V. 11. P. 365-377.

44. Dolgov S.V., Mityshkina T.U., Rukavtsova E.B., Buryanov Y.I. Production of transgenic plants of Chrysanthemum morifolium Ramat. with the gene of Bacillus thuringiensis 5-endotoxin//Acta Hort. 1995. V. 420. P. 46-47.

45. Dons J.J.M., Mollema C., Stiekema W.J. et al. Routes to the development of diseases resistant ornamentals. In: Genetics and breeding in ornamental species. Paris: 1991. P. 387-417.

46. Elomaa P., Honkanen J., Puska R. et al. Agrobacterium-mQdmtQd transfer of antisense chalcone synthase cDNA to Gerbera hybrida inhibits flower pigmentation // BioTech. 1993. V. 11. P. 508-511.

47. Endo M., Inada I. Chromosome numbers of edible and garnish chrysanthemum, Chrysanthemum morifolium Ramat. // J. Japan Soc. Hort. Sei. 1990. V. 59. P. 603612.

48. Endo M., Iwasa S. Characteristics and classification of edible and garnish chrysanthemum, Chrysanthemum morifolium Ramat.// J. Japan Soc. Hort. Sei. 1982. V. 51. P. 177-186.

49. Esposito S., Colucci M.G., Bressan R.A. et al. Antifungal transgenes expression in Petunia hybrida II Abstracts of EUCARPIA 19th Intern. Symp. Improvement of Ornamental Plants. Angers. July 1998. P. 23.

50. Estruch J.J., Chriqui D., Grossmann K.,et al. The plant oncogene rolC is responsible for the reease of cytokinins from glucoside conjugates // The EMBO

51. Journal. 1991a. V. 10. № 10. P.2889-2895.

52. Estruch J.J., Schell J., Spena A. The protein encoded by the rolB plant oncogene hydrolyses indole glucosides // The EMBO Journal. 1991b. V. 10. P. 3125-3128.

53. Fang G., Grumet R. Genetic engeneering of potyvirus resistance using constracts derived from the zucchini yellow mosaic virus coat protein gene // Mol. Plant-Micr. Interact 1993. V. 6. P. 358-367.

54. Farinelli L., Malnoe P. Coat protein gene-mediated resistance to potato virus Y in tobacco // Mol. Plant-Micr. Interact. 1993. V. 6. P. 284-292.

55. Faus I, Patino C, Rio JL, del Moral C, Barroso HS, Rubio V. (1996) Expression of a synthetic gene encoding the sweet-tasting protein thaumatin in Escherichia coli II Biochem Biophys Res Commun. Vol. 229(1). P. 121-127.

56. Feitelson J.S., Payne J., Kim L. Bacillus thuringiensis: insects and beyond // Biotechnology. 1992. V. 10. P. 271-275.

57. Figueiredo P., Elhabiri M., Toki K., et al. New aspects of anthocyanin complexation. Intrmolecular copigmentaion as a means for colour loss? // Phytochem. 1996.V. P.301-308.

58. Firoozabady E., Moy Y., Lemieux C.S. et al. Efficient transformation and regeneration of carnatiom cultivars using Agrobacterium II Mol. Breed. 1995. V.l. P. 283-293.

59. Fischhoff D.A., Bowdish K.S., Perlak F.J., et al. Insect tolerant transgenic tomato plants // Bio/Technology. 1987. V. 5. P. 807-813.

60. Fray R., Grierson D. Molecular genetics of tomato fruit ripening // Trends Gen. 1993. V. 9. P. 438-443.

61. Fromm M., Morrish F., Armstrong C. Inheritance and expression of chimeric genes in the progeny of transgenic maize plants II Biotechn. 1990. V. 8. P. 833844.

62. Fujii Y., Morii M., Oe M. Regeneration of plants from stem and petals of Chrysanthemum coccineum 11 Plant Cell Rep. 1990. V. 8. P. 625-627.

63. Fukai S., De Jong J. and Rademaker W. Agrobacterium mediated genetic transformation of chrysanthemum // Acta Hortticulturae 1995. V. 392. P. 147-152.

64. Fukai S., Seiichi., De Jong J. and Rademaker W. Efficient genetic transformation of Chrysanthemum (Dendranthema grandiflorum (Ramat.) Kitamura) using stem segments // Breeding Science. 1995. V. 45. P. 179-184.

65. Furner I.J., Huffman G.A., Amasino R.M., Garfinkel D., Gordon M., Nester E.W. An Agrobacterium transformation in the evolution of the genus // Nature. 1986. V. 319. P. 422-427.

66. Gamborg O.L., Miller R.A., Ujima K. Nutrient requirement of suspension cultures of Soyabean root cultures // Exp. Cell. Res. 1968. V. 50. P. 151-158.

67. Gasser C.S., Fraley R.T. Genetically engineering plants for crop improvement // Sei. 1989. V. 244. P. 1293-1299.

68. Gogarten J., Fichmann J., Braun L et.al. The use of antisens mRNA to inhibit the tonoplast H+ ATPase in carrot // Plant Cell 1992. V.4. P. 851-864.

69. Gringorten J.L., Milne R.E., Fast P.G., Sohi S.S., Van Frankenhuyzen K. Suppression of Bacillus thuringiensis 8-endotoxin activity by low alkaline pH // J.Invertebr. Pathol. 1992. V.60. pp47-52.

70. Haakkart F.A., Quak F. Effects of heat treatment of young plants on freeing Chrysanthemum from virus B by means of meristem culture // Neth. J. Plant Pathol. 1964. V. 70. P. 154-157.

71. Hamilton A., Lycett G., Grierson B Antisens gene that inhibits synthesis of the hormone ethylene in transgenic plants // Nature 1990. V. 346. P. 284-287.

72. Hansen G., Larribe M., Vaubert D., et.al. Agrobacterium rhizogenes pRi8196 T-DNA: mapping and DNA sequence of functions involved in mannopine synthesis and hairy root // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1991. V. 88. P. 7763-7767.

73. Harborne J.B., Williams C.A. Anthocyanins and other flavonoids // Nat. Prod. Rep. 1995. P. 639-657.

74. Heinkeke D., Kruse A., Flügge U., et.al. Effect of antisense repression of the chloroplast triose-phosphate translocator on photosynthetic metabolism in transgenic potato plants // Planta. 1994. V. 193. P. 174-180.

75. Helariutta Y. Development expression and molecular evolution of the flavonoid biosyntnetic genes in Gerbera hybrida (Asteraceae) // PhD Thesis. Helsinki 1995.

76. Hemenway C., Fahg R., Kanewski W., Chua N., Turner N. Analysis of the mechanism of protection in transgenic plants expressing the potato virus X coat protein or its antisence RNA // EMBO J. 1988. V. 7. P. 1273-1280.

77. Heywood V., Humphries C. Anthemideae: systematic review // In: Heywood V. Harborne J. Turner B. (eds.) The biology and chemestry of the Compositae. Academic, NY. P. 851-898.

78. Hill G.P. Shoot formation in tissue cultures of Chrysanthemum "Bronze Pride" // Physiol.Plant. 1968. V. 21. P. 321-327.

79. Hitmi A., Barthomeuf C., Coudret A. Production of purethrins with Chrysanthemum cinerariaefolium Vis. Callus culture: Improvment of callus growth and pyrethrin synthesis // J. of Plant Physiol. 1998. V. 153.P. 233-236.

80. Hitmi A., Sallanon H., Barthomeuf C. Cryopreservation of Chrysanthemum cinerariaefolium Vis. cells and its impact on their pyretrin biosynthesis ability // Plant Cell Rep. 1997. V. 17.P. 60-64.

81. Hoekama A., Hirsch P.R., Hooykaas P.J. et al. A binary plant vector strategy based on separation on vir- and T-region of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid//Nature. 1983. V. 303. P. 139-180.

82. Hofgen R., Willmitzer L. Transgenic potato plants depleted for the major tuber protein patatin via expression of antisense RNA // Plant Sci. 1992. V. 87. P.45-54.

83. Hofte H.,Whiteley H.R. Insecticidal crystal proteins of Bacillus thuringiensis //Microbiol.Rev. 1989 .V. 5 3 .pp242-25 5.

84. Holton T.A. Tanaka Y. Blue roses a pigment of our imagination? // Trends Biotechn. 1994. V. 12. P. 40-42.

85. Holton T.A., Cornish E.C. Genetic and biochemestry of anthocyanin biosynthesis //The Plant Cell. 1995. V. 7. P. 1071-1083.

86. Huffman G.A., White M., Gordon M., Nester E. Hairy-root-inducing plasmid: physical map and homology to tumor-inducing plasmids // J. Bacteriol. 1984. V. 157. P. 269-276.

87. Hutchinson J.F., Miller R., Kaul V., Stevenson T., Richards D. Transformation of Chrysanthemum raorifolium based on Agrobacterium gene transfer // J. Cell Biochem. 1989. P.261.

88. Jouanin L., Bonade-bottino M., Girard C. et al. Transgenic plants for insect resistance//Plant Sci. 1998. V.l.P. 1-11.

89. Julliard J., PeleseF., SottaB., et.al. TL-DNA transformation decreasses ABA level // Physil. Plant. 1993. V. 88. P.713-717.

90. Kamo K. Bean Yellow Mosaic virus coat protein and GUSA gene expression in transgenic Gladiolus paints // Acta Hort. 1996. V. 223. P. 393-399.

91. Kaul Y., Miller R.M., Hutchinson J.F., Richards D. Shoot regeneration from stem and leaf explants of Dendranthema grandiflora Tzvelev (Syn Chrysanthemum morifolium Ramat) II Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 1990.V. 21.P. 21-30.

92. Kawchuk L., Martin R., McPerson J. Sense and antisense RNA-mediated resistance to potato leafroll virus in russet Burbank potato plants. // Mol. Plant Microbe Inter. 1991. V. 4. P. 247-253.

93. Kiyokawa S., Kikuchi Y., Kamada H., Harada H. Genetic transformation of Begonia tuberhybrida by Ri rol genes // Plant Cell Rep. 1996. V. 15. P.606-609.

94. Klee H., Estelle Molecular genetic approaches to plant hormone biology // Annu. Rev. Plant Biol. 1991. V. 42. P. 529-557.

95. Knutzon D., Thompson G., Radke S., et.al. Modification of Brassica seed oil by antisense expression of a stearoylacyl carrier protein desaturase gene. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. V. 89. P. 2624-2628.

96. Kobayashi H., Oikawa Y., Koiwa H. Flower-specific gene expression directed by the promoter of a chalcone synthase gene from Gentiana triflora in Petunia hybrida II Plant Sci. 1998. V. 131. P. 173-180.

97. Kohno H., Ishigeki M., Yoshida F. Comparative studies of mineral nutritioncalli induced from various plant species. I. Callus induction from various plant species // Bull. Fac. Agric. Tamagaua Univ. 1978. V. 18. P. 16-21.

98. Koziel M.G., Beland G.L., Bowman C. Field performance of elite transgenic maize plants expressing an insectical protein derived from Bacillus thuringiensis II BioTechn. 1993. V. 11. P. 194-200.

99. Koziel m.G., Carozzi N.B., Desai N. Optimizing expression of delta-endotoxin with an emphasis on post-transcriptional events // Plant Mol. Biol. 1996. V. 32. P. 194-200.

100. Kramer M., Sheehy R., Hiatt W. Progress towards the genetic engineering of tomato fruit. // Trends Biol. Tchen. 1989. V. 7. P. 191-194.

101. Kurioka Y., Suzuki Y., Kamada H., Harada H. Promotion of flowering and morphological alterations in Atropa belladonna transformed with a CaMV 35S-rolC chimeric gene of the Ri plasmid //Plant Cell Rep. 1992. V. 12. P. 1-6.

102. Langeveld S.A., Pham K., Van Achadewij M. et al. Genetic transformation of lily by particle bombardment // Abstract of 5th International Congress of Plant Molecular Biology. Singapore. 21-27 September 1997. № 1418.

103. Ledger S., Deroles S., Given N. Regeneration and Agrobacterium-mediated transformation of chrysanthemum //1991. V. 10. P. 195-199.

104. Lloyd A.M., Barnason A.R., Rogers S.G. et al. Transformation on Arabidopsis thaliana With Agrobacterium tumefaciens // Sci. 1986. V. 234. P. 401-516.

105. Lowe J., Davey M., Power J., Blundy K. A study of some factors affecting Agrobacterium transformation and plant regeneration of Dendranthema grandiflora Tzvelev (syn. Chrysanthemum morifolium Ramat.) // 1993. V. 33. P. 171-180.

106. Lu C.Y., Nugent G., Wardley T. Efficient, direct plant regeneration from stem explants of chrysanthemum (Chrysanthemum morifolium Ramat. cv. Royal Purple) // Plant Cell Rep. 1990.V. 8. P. 733-736.

107. Malaure R.S., Barclay G., Power J.B. et al. The production of novel plants from florets of Chrysanthemum morifolium using tissue Culture II Journal Plant Physiol. 1991. V. 139. P. 8-18.

108. Marchant R., Davey M.R., Lucas J.A. Expression of a chitinase transgene in rose (Rosa hybrida L.) reduces development of blackspot disease (Diplocarpon rosae Wolf) // Mol. Breeding. 1998. V. P. 187-194.

109. Margelli A., Langenkemper K., Dehio C., Schell J., Spena A. Splising of thr rolA transcript of Agrobacterium rhizogens in Arabidopsis II Science 1994. V. 266. P.1986-1988.

110. Martin P.A., Travers R.S. Worldwide abundance and distribution of Bacillus thuringiensis isolates // Appl. Environ. Microbiol. 1989. V. 55. P. 2437-2442.

111. Maurel C., Barbier-Brygoo H., Spena A., et al. Single rol gene from the Agrobacterium rhizogenes TL-DNA alter some of the cellular responses to auxin in Nicotiana tabacum IIPlant Physiol. 1991. V. 97. P. 212-216.

112. Maurel C., Brevet J., Barbier-Brygoo H., Guera J., Tempe J. Auxin regulates the promoter of the root-inducing rolB gene of Agrobacterium rhizogenes in transgenic tobacoo // Mol. Gen. Genet. 1990. V. 223. P.58-64.

113. May R.A., Trigano R.N. Somatic embryogenesis and plant regeneration from leaves of Dendrathema grandiflora II J. Am. Soc. Hort. Sci. 1991. V. 116. P. 366371.

114. Mc Bridge K.E., et.al. Amplification of a chimeric Bacillus gene in chloroplasts leads to an extraordinary level of an insecticidal protein in tobacco //Biotechn. 1995. V. 13. P. 362-365.

115. McCown B., McCabe D., Russel D. Stable transformation of Populus and incorporation of best resistance by electric discharge particle accleration // Plant Cell Rep. 1991. V. 590-594.

116. Metzlaff M., O'Dell M., Cluster P.D., Flavell R.B. RNA-Mediated RNA degradation and chalcone synthease a silencing in petunia. // 1997. V. 88. P. 845854.

117. Meyer P., Heidmann I., Forkmann G. 1987. A new petunia colour generated by transformation of a mutant with maiz gere // Nature. V. 333. P. 667-679.

118. Miyazaki S., Tashiro Y., Shimada T. Tissue culture of Chrysanthemum morifolium Ramat. I. Cultivar differences in organ formation // Agricultural

119. Bulletin of Saga Univ. 1976. V. 40. P. 31-44.

120. Mol J., Grotewold E., Koes R. How genes paint flowers and seeds // Trends in Plant Sci. 1998. V. 3.P. 212-217.

121. Mol J., Stuitje A., van der Krol A. Genetic manipulation of floral pigmentation genes // Plant Mol. Biol. 1989.V. 13. P. 287-294.

122. Mol J.N., van Krol A.R., van Tunen A.J. et.al. Regulation of plant gene expression by antisense RNA // FEBS. 1990. V. 268. P. 427-430.

123. Mol J.N.M., Holton T.A., Koes R.E. 1995, Floriculture: genetic engineering of commercial traits // Trends Biotechn. V. 13. P. 350-355.

124. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. // Physiol. Plantl962. V. 15 P. 473-497.

125. Nakamura T., Handa T., Oono Y., et.al. Organ-specific mRNA in transgenic tobacco plants possessing T-DNA of Ri-plazmids // Plant Sci. 1988. V. 56. P. 213218.

126. Nehra N., Chibbar R., Leung N. et.al. Self-fertile transgenic wheat plants regenerated from isolated scutellar tissues following microprojectile bombardment with two distinct gene constructs // Plant J. 1994. V.5. P. 285-297.

127. Nilsson O., Crozier A., Shmulling T., et al. Indole-3 acetic acid homeostasis in transgenic tobacco plants expressing the Agrobacterium rhizogenes rolB gene // The Plant Journal. 1993a. V. 3(5). P.681-689.

128. Nilsson O., Moritz T., Imbault N., et al. Hormonal characterrization of transgennic tobacco plants exspressing the rolC gene of Agrobacterium rhizogenes TL-DNA // Plant Physiol. 1993b. V. 102. P. 363-371.

129. Nishimura H., Denzumi S., Inoguchi M., Kato J. Analuis of flowering of Ri transformed chicory. Non-requirement of vernalization for flowering is transmissible by grafting. // Plant Cell Physiol. 1995. V. 35 P. S88.

130. Noda K-I., Glover B., Linstead P., Martin C. // Flower colour intensity depends on specialized cell shape controlled by a Myb-related transcription factor // Nature. 1994. V. 369. P. 661-664.

131. Oeller P., Min-Wong L., Talor L., Pike D., Theologis A Reversible inhibition of tomato fruit senscence by antisence RNA // Science. 1991 .V. 254. P. 437-439.

132. Ohishi K., Sakurai Y. Morphological changes in Chrysanthemum derived from petal tissue // Res. Bull. Aichiken Agric. Res. Cent. 1988. V. 20. P. 278-284.

133. Okada M. Classification of chrysanthemum varieties in view of their enviromental responses to flowering (In Japanese with summary in English) // J. Hort. Ass. Japan. 1957. V. 26. P. 59.

134. Oliver W., Ferguson D., Burke J., Velten J. Inhibition of tobacco NADH by expression of heterologous antisens RNA depend from a cucumber cDNA: Implications for the mechanism of action of antisens RNAs. // Mol. Gen. Genet. 1993. V. 239. P. 425-434.

135. Ooms G., Kamp A., Bunrell M., Roberts J.// Theor. Appl. Genet. 1985. V. 70. P. 440-446.

136. Paludan N., Virus-free Chrysanthemum plants from approved cultivars obtained by means of heat treatment and meristem tip culture // 1973. V. 77. P. 689-696.

137. Pandolfini T., Storlazzi A., Calabria E., Defez R., Spena A. The splicosomal intron of the rolA gene of Agrobacterium rhizogenes is a prokaryotic promoter // 2000 V. 35. P.1326-1324.

138. Pavingerova D., Dostal J., Biskova R., Benetka V. Somatic embryogenesis and Agrobacterium-mediated transformation of chrysanthemum // Plant Science. 1994. V. 97. P.95-101.

139. Pellegrineschi A Genetic transformation of geranium // Biotchn. Agr. Forestry.1996. V. 38. P. 211-221.

140. Pellegrineschi A., Damon J-P., Valtorta N., Paillard N., Tepfer D. Improvement of ornamental characters and fragrance production in lemon-scented geranium through genetic transformation by Agrobacterium rhizogenes. II BioTechn. 1994. V. 12. P. 64-68.

141. Pereira L., Erickson L. Stable transformation of alfalfa by particle bombardment // Plant Cell Rep. 1995. V. 14. P. 290-293.

142. Perlak F.J., Deaton R.W., Armstrong T.A. Insect resistant cotton plants // BioTechn. 1990. V. 8. P. 939-943.

143. Perlak F.J., Fuchs R.L., Dean D.A. et al Modification of the coding sequence enhances plant expression of insect protein genes // Proc. Natl. Acad. Sci. 1991. V. 88. P. 3324-3328.

144. Perlak F.J., Stone T.B., Muskopf Y.M. et al. Genetically improved potatoes: protection from damage by Colorado potato beetles // Plant Mol. Biology. 1993. V. 22. P. 313-321.

145. Petty L.M., Thompson A.J., Thomas B. Modifying chrysanthemum {Dendraathema grandijlorum) growth habit by genetic manipulation // Acta Hort. 1998. V. 508. P. 319-321.

146. Powell P., Stark D., Sanders P., Beachy R. Protection against tobacco mosaic virus in transgenic plants that express tobacco mosaic virus antisence RNA // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989. V. 86. P. 358-367.

147. Prinsen E., Chriqui D., Vilaine F., et al. Endogenous phytohormonees fhytohormones in tabacco plants transformed with Agrobacterium rhizogenes pRi TL-DNA genes //The Journal Plant Physiol. 1994. V. 144. P. 80-85.

148. Prinsen E.J., Bercetche J., Chriqui D., van Onckelen H. Pisum sativum epicotyls inoculated with Agrobacterium rhizogenes agropine strains harbouring various T-DNA fragments // J.of Plant Physiol. 1992. V. 140. P. 75-83.

149. Qoick W., Schurr U., Fichtner K. et.al. The impact of decreased Rubisco on photosynthesis, growth, allocation and storage in tobacco plants which have been transformed with antisense rbsS //Plant J. 1991. V. 1. P. 51-58.

150. Quick W., Schurr U., Fichtner K. et.al. The impact of decreased Rubisco on photosynthesis, growth, allocation and storage in tobacco plants which have been transformed with antisens rbsS. // Plant J. 1991 .V.l .P.51-58.

151. Raymond K.C., John T.R., Bulla L.A. Larvicidal activity of chimeric Bacillus thuringiensis protoxins // Molecular Microbiology. 1990. V. 4. P. 1967-1973.

152. Renou J.P., Brochard p., Jalouzot Recovery of transgenic chrysanthemum (Dendranthema grandiflora Tzvelev) after hygromycin resistance selection // Plant Science. 1993. V. 89. P. 185-197.

153. Revenkova E.V., Kraev A.S., Skryabin K.G. 1993. Construction of a disarmed derivative of the supervirulent Ti plasmid pTiBo542. In: Plant Biotechnology and molecular biology. Eds by K.G.Skryabin. Moscow: 1993.

154. Reynoird J.P., Meynet J., Caissard J.C., Chriqui D. Micropropagation of Gerbera. Biotechnology in Agriculture and Forestry. Plant Protoplast and Genetic Engineering VII. Ed. by Y.P.S.Bajaj: 1996. V. 23. P. 147-162.

155. Rezaian M.A. and Symons R.H. Anti-sens regions in satellite RNA of cucumber mosaic virus from stable complexes with the viral coat protein gene // Nucl. Acids Res. 1986. V. 14. P. 3229-3239.

156. Rezaian M.A., Skene K.G.M., Ellis J.G. Antisens RNAs of cucumber mosaic virus in transgenic plants assessed for control of the virus // Plant Mol. Biology. 1988. V. 11. P. 463-471.

157. Rhodes C., Pierce D., Mettler I., et.al. Genetically transformed maize plants from protoplasts // Sci. 1988. V. 240. P. 204-207.

158. Riesmeier J., Flugge U., Schulz B. et.al. Antisense repression of the chloroplast triose phosphate translocator affects carbone partitioning in transgenic potato plants // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. V. 90. P. 6160-6164.

159. Rietveld E., Gielen J., Westerbroek A., Tan M., Schram A. Introduction of the rolC gene of Agrobacterium rhizogenes into Salpiglossis sinuata. II Poster S&G Seeds.

160. Robert L.S., Donaldson P.A., Ladaique C., et al. Antisens RNA inhibition of p-glucoronidase gene expression in transgenic tobacco plants // Plant Mol. Biology.1989. V. 13. P. 399-409.

161. Robichon M.P., Renou J .P., Jalouzot R. Genetic transformation of Pelargonium x hortorum II Plant Cell Reports. 1995. V.15. P. 63-67.

162. Robinson K.E.P., Firoozabady E. Transformation of floriculture crops // Sci. Hort. 1993. V.55.P. 83-99.

163. Roest S., Bokelmann G. Vegetative propagation of Chrysanthemum morifolium Ramat. in vitro // Sci.Hort. 1975. V. 3 P. 317-330.

164. Rogers J.C., I I RNA complementary to a-amylase mRNA in barley // Plant Mol. Biology. 1988. V. 11. P. 125-138.

165. Rothstein S.J., Diamo J., Strand M., Rice D. Stable and heritable inhibition of the expression of napoline synthase in tobacco expressing antisense RNA. //PNAS. 1987. V. 84. P. 8439-8443.

166. Rout G.R., Palai S.K., Das P. Direct plant regeneration of Chrysanthemum morifolium Ramat. cv. Deep Pink // Proc. Nat. Acad. Sci. India 1996. V. 67(B), I. P.57-66.

167. Rugini E., Pellegrineschi A., Mencuccini M., Mariotti D. Increase of rooting ability in the woody species kiwi {Actinidia deliciosa A. Chev.) by transformation with Agrobacterium rhizogenes rol genes // Plant Cell Repot. 1991. V. 10. P. 291295.

168. Salehuzzaman S., Jacobsen E., Visser R. Isolation and characterization of a cDNA encoding granule-bound starch synthase in cassava (Manibot esculenta Crantz) and its antisense in potato. 1993. V. 23. P. 947-962.

169. Sandler S.J., Stayton M., Townsend J.A., et al. Inhibition of gene expression in transformed plants by antisens RNA // Plant Mol. Biology. 1988. V. 11. P. 301310.

170. Sauvadet M.A., Brochared P., Boccon-Gibod A protoplast-to-plant system in Chrysanthemum: differential responses among several commercial clones // Plant Cell Rep. 1990. V. 8. P. 692-695.

171. Schmulling T., Rohrig H., Pilz S., WalderR., Schell J. Restoration of fertility by antisens RNA in genetically engineered male sterile tobacco plants // 1993.V.237.P. 385-394.

172. Schmulling T., Schell J., Spena A. Single genes from Agrobacterium rhizogenes influence plant development // The EMBO Journal. 1988. V. 7. P. 2621-2629.

173. Schuch W., Bird C., Ray J. et.al. Control and manipulation of gene expression during tomato fruit ripening // Plant Mol.Biol. 1989. V. 13. P. 303-311.

174. Schum A., Preil W. Regeneration of callus from Chrysanthemum morifolium mesophyll protoplast // Gartenbauwissenochafft. 1981. V. 46(2) P. 91-93.

175. Schwinn K.E., Markham K. R., Given N.K. Floral flavonoids and the potential for pelargondin biosinthesis in commercial chrysanthemum cultivars // Phytochemistry. 1994. V. 35. P. 145-150.

176. Scorza R., Zimmerman T.W., Cordits J.M.,Footen K.J. Horticultural characteristics of transgenic tobacco expressing the rolC gene from Agrobacterium rhizogenes //J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1994. V. 119(5). P. 10911094.

177. Sekar V., Thomson D.V., Maroney M.J., Bookland R.G., Adang M.J. Molecular cloning and characterization of the insecticidal crystal protein gene of Bacillus thuringiensis var. tenebrionis. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1987. V. 84. P. 7036-7040.

178. Serino G., Clerot D., Brevet J., Constantino P., Cardarelli M. Rol genes of Agrobacterium rhizogenes cucumopine strain; sequence, effects and pattern of expression // Plant Mol. Biol. 1994. V. 26. P. 415-422.

179. Sheehy R., Kramer M., Hiatt W. Reduction of polygalacturonase activity in tomato fruit by antisens RNA. // Proc. Natl.Acad.USA. 1988.V. 85. P. 8805-8809.

180. Shen W., Daviod C., Barbier-Brygoo J., Tempe J., Guera J. High sensitivity to auxin is a common feature of hairy root //Plant Physiol. 1990. V. 94. P. 554-560.

181. Shen W.H., Petit A., Guera J., Tempe J. Hairy roots are more sensetiv to auxin than normal roots // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. V. 85. P. 3417-3421.

182. Shimada H., Tada Y., Kawasaki T., Fujimura T. Antisense regulation of the rice waxy gene expression using a PCR-amplifled fragmentof the rice genomereduces the amylase content in grain starch.// Theor Appl. Genet. 1993. V. 86. P. 665-672.

183. Shimamoto K., Teda R., Izawa T., Fujimoto H. Fertile transgenic rice plants regenerated from transformed protoplast //Nature 1989. V. 338. P. 274-277.

184. Sinkar V.P., Pythoud F., White F.H., et al RolA locus of the Ri plasmid directs developmental abnormalities //Gene Dev. 1988. V. 2. P. 688-697.

185. Skirvin R.M., Norton M., McPhetlers. Somaclonal variation: has it proved useful for plant improvement? // Acta Hort. 1993. V. 336. P. 333-340.

186. Smith C., Watson C., Ray J. et.al. Antisens RNA inhibition of polygalacturonase gene expression in transgenic tomatoes // Nature. 1988. V. 334. P. 724-726.

187. Smith R.A., Couche G.A. The phylloplane as a source of Bacillus thuringiensis variants. // Apll. Environ. Microbiol. 1991. V. 57. P. 311-315.

188. Sommer H., Seadler H. Structure of the chalcone synthase gene of Antirrhinum majus 11 Mol. Gen. Genet. 1986. V. 202. P.429-434.

189. Soreng R., Cope F. On the taxonomy of cultivated species of the chrysanthemum genus complex {Anthemideae; Compositae) H Baileya. 1991. V. 23. P. 145-165.

190. Souq F., Coutos-Thevanot P., Yean H. Genetic transformation of rose, 2 examples: one on morphogenesis, the other on anthocyanin biosynthetic pathway //Acta Hort. 1996. V. 424. P. 381-388.

191. Spano L., Mariotti D., Cardarelli M., et al. Morphogenesis and auxin sensitivity of transgenic tobacco with defferent complements of Ri T-DNA // Plant Physiol. 1988. V. 87. P. 479-483.

192. Spena A., Estruch J., Hansen G., et.al. The Rhizogenes tale: modification of plant growth and physiology by an enzymatic system of hydrolysis of phytohormone conjugates // Advances in Molecular Genetics of Plant Micr. Interac. 1993. V. II. P. 109-124.

193. Spena A., Schmulling T., Koncz C., Schell J.S. Independent and synergistic activity of rolA, B and C loci in stimulating abnormal growth in plants. // The

194. EMBO Journal. 1987. V. 6. P. 3891-3899.

195. Stapf O. Chrysanthemum makinoi II Citrus Bot. Mag. Tab 1933. P.9330-9333.

196. Stewart C.N., Adang M.J., Raymer P.L. Insect control and dosage effects in transgenic canola containing a synthetic Bacillus thuringiensis CrylAC gene // Plant Physiol. 1996. V. 112. P. 115-120.

197. Strizhov N., Keller M., Mathur J., et. al. A synthetic crylC gene, encoding a Bacillus thuringiensis 5-endotoxin, confers Spodoptera resistance in alfalfa and tobacco // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V. 93. P. 15012-15017.

198. Stummer B.E., Smith S.E., Langridge P. Genetic transformation of Verticordia gradis (Myrtaceae) using wild-type Agrobacterium rhizogenes and binary Agrobacterium vectors // Plant Science. 1995. V. 111. P.51-62.

199. Sugaya S., Hayakawa K., Handa T., Uchimiya H. Cell-specific expression of the rolC gene of the TL-DNA of Ri phsmide in transgenic tobacco plants II Plant Cell Physiol. 1989. V. 30. P. 649-653.

200. Sutter E., Langhans R.W. Abnormalities in Chrysanthemum regenerated from long-term culture // Ann. Bot. 1981. V. 48. P. 559-568.

201. Takatsu Y., Nishizawa Y., Hibi T., Akutsu K. Transgenic chrysanthemum {Dendranthema grandijlorum (Ramat.) Kitamura) expressing a rice gene shows enhanced resistance to gray mold (Botrytis cinerea) // Scien. Hort. 1999. V. 82 P. 113-123.

202. Tanaka Y., Tsuda S., Kusumi T. Metabolic engineering to modify flower color // 1998. V.39(11).P. 1119-1126.

203. Taylor J., Jones J., Sondler S. Optimazing the expression of chimeric genes in plant cell // Mol. Gen. Genet. 1987. V. 210. P. 572-577.

204. Temple S., Knight T., Unkefer P. ei.al. Modulation of glutamine synthetase gene expression in tobacco by the introduction of an alfalfa glutamate sythesise in sense and antisense orientation. // Mol.Gen.Genet. 1993. V. 236. P. 315-325.

205. Tepfer D. La transformation genetique de plantes supérieures par Agrobacterium rhizogenes //In A Puhler, ed, Molecular Genetics of the Bacteria Plant Interaction. Springer Verlag, Berlin. 1982. P. 248-258.

206. Tepfer D., Transformation of sevsral species of higher plants by Agrobacterium rhizogenes: sexual transmission of the transformed genotype and phenotype //Cell. 1984. V. 37. P. 959-967.

207. Terras F., Schoofs H.,De Bolle M. Analysis of two novel classes of antifungal proteins from radish (Raphanus sativus L.) seeds // J. Biol. Chem. 1992. V. 267. P. 15301-15309.

208. Travers R., Faust R., Reichelder^er C. Effectes of Baccilus thuringiensis var.kurstaki 8-endotoxin on isolated lepidopterian mitochondria // J. Invertebr. Pathol. 1976. V. 28. P. 351-356.

209. Tsukahara M., Yoshioka M., Ogawa T. et al. Transformation of chrysanthemum with the virus and viroid resistance gene (pad) II Abstracts of IX International Congress on Plant Tissue and Cell Culture. Jerusalem. June 14-19. 1998. P. 182.

210. Urban L.A., Sherman J.M., Moyer J.W. et al. High frequency shoot regeneration and Agrobacterium-mediated transformation of chrysanthemum (Dendranthema grandiflora) // Plant Sei. 1994. V. 98. P. 69-79.

211. Vaeck M., Reynaerts A., Hofte H., et. al. Transgenic plants protected from insect attack //Nature. 1987. V.328. P. 33-37.

212. Van Aarssen R., Soetaert P., Stam M. et al. Cry IA (b) transcript formation in tobacco is inefficient//Plant Mol. Biology. 1995. V. 28. P. 513-524.

213. Van den Elzen P.J.M., Jondedijk E., Melchers L.S. et al. Virus and fungal resistance: from laboratory to field // Phil. Trans. R. Soc. London. 1993. V. 324. P. 271-278.

214. Van der Krol A., Lenting P., Veenstra J. et.al. An antisens chalcone synthese gene in transgenic plants inhibits flower pigmentation // Nature. 1988. V. 333. P. 866-869.

215. Van der Krol A., Mur L., Lange P., MolJ., Stuitje A. Inhibition of flower pigmentation by antisens CHS genes: promoter and minimal sequence requrements for the antisense effect. // Plant. Mol. Biol. 1990.V. 14. P.457-466.

216. Van der Salm T., van der Toorn C., Bouwer R., Hanisch ten Cate C., Dons H.

217. Production of rol gene transformed plants Rosa hybrida L. And characterization of their rooting ability. // Mol. Breeding. 1997.V. 3. P. 39-47.

218. Van der Salm. T., Bosch D., Honee G. et al. Insect resistance of transgenic plants that express modified Bacillus thuringiensis cry IA(b) and crylC genes: a resistance management strategy // Plant Mol. Biology. 1994. V. 26. P. 51-59.

219. Van Onckelen H., Prinsen D., Chriqui M., et al. Endogenous auxin lvels in normal and hairy root tobacoo plants // Med. Fac. Landbouww. Rijksuniv. Gent. 1988. V. 4a. P. 1685-1693.

220. Van RieJ., McGaughy W.H., Johnson D.E., et. al. Receptors on the brush border membrane of the insect midgut as determinants of the specificity of Bacillus thuringiensis 5-endotoxins // Appl. Environ. Microbiol. 1990. V. 56. P. 1378-1385.

221. Van Wordragen M., De Jong J., Huitema H., Dons H. Genetic transformation of chrysanthemum using wild type Agrobacterium strains; strain and cultivar specificity // Plant Cell Rep. 1991. V. 9. P. 505-508.

222. Van Wordragen M., De Jong J., Schoraagel M., Dons H. Rapid screening for host- bacterium interactions in Agrobacterium-medium gene transfer to chrysanthemum, by using th GUS-intron gene // Plant Science. 1992. V. 81. P. 207-214.

223. Vansuyt G., Vilaine F., Rossingnol M. RolA modulates the senseitivity to auxin of the proton translocation catalyzed by the plasma membrane H+ATPase in transformed tobacco // FEBS Lett. 1992. V. 298. P. 89-92.

224. Vaucheret H., Kronenberger J., Lepingle A. et. al. Inhibition of tobacco nitrite reductase activity by expression of antisense RNA // Plant J. 1992. V. 2. P. 559569.

225. Vazquez A.M., Short K.C. Morphogenesis in cultured floral parts of African violet//J. of Exp. Bot. 1978. V. 29. № 112. P. 1265-1271.

226. Wan Y., Lemaux P. Generation of large numbers of independently transformed fertile barley plants // Ibid. 1994. V. 104. P. 37-48.

227. Watard A.A., Yun D.J., Matsumoto T., et al. Microprojectile bombardmentmediated transformation of Lilium longiflorum II Plant Cell Rep. 1998. V. 17. C. 262-267.

228. White F., Garfinkel D., Huffman G., Gordon M., Nester E. // Sequences homologous to Agrobacterium rhizogenes T-DNA in the genomes of uninfected plants. //Nature. 1983. V. 301. P. 348-350.

229. White F.F., Taylor., Huffman G.A., Gordon M.P., Nester E.W. Molecular and genetic analysis of the transferred DNA regions of the root inducing plasmids of Agrobacterium rhizogenes // J. Bac. 1985. V. 164. P. 33-44.

230. White P.R. The cultivation of animal and plant cells // Ronald Press Co., N.Y. 1963.

231. Whiteley J.R., Schnepf The molecular biology of parasporal crystal body formation in Bacillus thurigniensis // Annu.Rev. Microbiol. 1986. V. 40. P.549-576.

232. Williams S. et.al. Chemical regulation of Bacillus thurigniensis delta-endotoxin expression in transgenic plants // Biotechn. 1992. V. 10. P. 540-543.

233. Winefield C., Lewis D., Arathoon S., Deroles S. Alteration of Petunia plant form through the introduction of the rolC gene from Agrobacterium rhizogenes II Mol. Breeding. 1999. V. 5. P. 543-551.

234. Woodson W.Biotechnology of floricultural crops. // HortScience. 1991. V. 26(8). P.1029-1032.

235. Wunn J., Kloti A., Burkhardt P.K. et al. Transgenic indica rice breeding line IR58 expressing a synthetic cryIA(b) gene from Bacillus thuringiensis provides effective insect pest control//BioTechn. 1996. V. 14. P. 171-176.

236. Yepes L.M., Mittak V., Pang S.Z. et al. Biolistic transformation of Chrysanthemum with nucleocapsid gene of tomato spotted wilt virus // Plant Cell Rep. 1995. V. 14. P. 694-698.

237. Zhang H., Yang H., Rech E, et.al. Transgenic rice plants produced by electroporation mediated plasmid uptake into protoplast // Plant Cell Rep. 1988. V. 7.P. 379-383.

238. Zhu O., Maher E., Masoud et.al. Enhanced protection against fungal attack by