Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Модуляция сократительных ответов гладких мышц почечной артерии коровы на гиперкалиевый раствор, адреналин и ацетилхолин
ВАК РФ 03.00.13, Физиология
Автореферат диссертации по теме "Модуляция сократительных ответов гладких мышц почечной артерии коровы на гиперкалиевый раствор, адреналин и ацетилхолин"
На правах рукописи
□0345В023
Кашин Роман Юрьевич
ОДУЛЯЦИЯ СОКРАТИТЕЛЬНЫХ ОТВЕТОВ ГЛАДКИХ МЫШЦ ПОЧЕЧНОЙ АРТЕРИИ КОРОВЫ НА ГИПЕРКАЛИЕВЫЙ РАСТВОР, АДРЕНАЛИН И
АЦЕТИЛХОЛИН
03.00.13 - физиология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук
а*
г#
Москва-2008
003456023
Работа выполнена на кафедре нормальной физиологии Кировской государствен)! медицинской академии.
Научный руководитель:
доктор медицинских наук, профессор Циркин Виктор Иванович
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Северин Александр Евгеньевич
доктор биологических наук, профессор Смирнов Виктор Михайлович
Ведущая организация:
Московский государственный медико-стоматологический университет.
Защита состоится «22» декабря 2008 года в 15.00 часов на заседан диссертационного совета Д.212.154.17 при Московском педагогичесю государственном университете по адресу: 129164, Москва, ул. Кибальчича, д.6, корпус биолого-химический факультет, ауд. 205.
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Московско педагогического государственного университета по адресу: 119992, Москва, ул. Мал Пироговская, д.1.
Автореферат разослан «20» ноября 2008 года
Ученый секретарь
диссертационного совета
Холмогорова Н.В.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования. Известно, что реакция гладких мышц (ГМ) сосудов вещество может зависеть от состояния эндотелиоцитов, продуцирующих N0 anhoutte Р., 2001; Vuong T. et al.. 2001; Zhang R. et al., 2006; Хлыбова C.B. и др., 2007). о доказано и в отношении вазодилатации, вызываемой ацетилхолином (Vanhoutte Р., )1; Vuong T. et al., 2001; Zhang R. et al., 2006). Но вопрос о роли NO в реализации оконстрикторного эффекта катехоламинов (Wang S. et al., 2002; Осадчий Л.И. и др., >5) и гиперкалиевого деполяризующего раствора (Suenaga H., Kamata К., 1999; atsumoto T. et al., 2006) остается открытым.
Установлено, что сыворотка крови (СК) в определенных разведениях (1:103, 1:500, 100, 1:50) повышает или снижает эффективность активации Р-АР гладких мышц матки, ахеи и коронарных сосудов (Циркин В.И. и др., 1997, 2002, 2007; Сизова Е.Н., Циркин И., 2006; Демина H.JI. и др., 2008) и миокарда (Трухин А.Н. и др., 2004; Пенкина Ю.А.
--ОППОЧ О_____—--------------— . --------------------- -------с------------- о АП
др., ¿\i\joj. ииплиплс^л najiniiicM о tipuBj-i jrviuicnnuiu ccnctiujuinjaiopa p-rur
СБАР) и эндогенного блокатора Р-АР (ЭББАР). В опытах с ГМ и миокардом показано, о подобно СК, Р-адреносенсибилизирующую активность проявляют гистидин, тирозин триптофан (Ноздрачев А.Д. и др., 1998; Трухин А.Н. и др., 2004; Туманова Т.В. и др., 14; Сизова Е.Н., Циркин В.И., 2006; Пенкина Ю.А. и др., 2008) и метаболические епараты - милдронат и предуктал (Сизова Е.Н. и др., 2002; Сизова Е.Н., Циркин В.И., 16; Пенкина Ю.А. и др., 2008). Это позволяет рассматривать их в качестве эндогенных экзогенных сенсибилизаторов р-АР. Сообщается о способности СК повышать (Циркин И. и др., 2002; Демина Н.Л. и др., 2008) или снижать (Демина Н.Л. и др., 2008) фективность активации а-АР миоцитов сосудов, что говорит о наличии в крови югенного сенсибилизатора а-АР (ЭСААР) и блокатора а-АР (ЭБААР). Возникает прос - способны ли гистидин, тирозин, триптофан, милдронат и предуктал дулировать эффективность активации а-АР?
Известно, что СК (1:500, 1:100, 1:50) снижает эффективность активации М-линорецепторов (М-ХР) гладких мышц матки, трахеи, желудка (Циркин В.И. и др., 12, 2007; Мальчикова C.B. и др., 2003; Сизова Е.Н. и др., 2004; Демина Н.Л. и др., 18) и миокарда (Проказова Н.В. и др., 1998), а в отдельных случаях (1:104, 1:103) -вышает её (Сизова Е.Н. и др., 2004). Это объясняется наличием в крови эндогенного окатора М-ХР (ЭБМХР) и сенсибилизатора М-ХР (ЭСМХР). Однако способность СК дулировать эффективность активации М-ХР эндотелиоцитов не изучалась, хотя это жно для понимания патогенеза артериальной гипертензии. Показано, что разующийся в организме лизофосфатидилхолин (ЛФХ) снижает эффективность ивации М-ХР миокарда (Проказова Н.В. и др., 1998; Коротаева К.Н., 2008) и ГМ елудка (Куншин А.Н. и др., 2007) и сосудов (Tang Yu-Hai et al., 1997; Vuong T. et al., Il; Zhang R. et al., 2006). Это позволяет рассматривать ЛФХ в качестве компонента БМХР (Сизова Е.Н., Циркин В.И., 2006; Куншин А.А. и др., 2007; Циркин В.И. и др.,
17). Модулирует ли ЛФХ эффективность активации а-АР миоцитов сосудов - неясно, atsumoto T. et al. (2006), Zhang R. et al. (2006) считают, что ЛФХ не влияет на этот оцесс. Но в отношении миокарда лягушки и крысы показано (Пенкина Ю.А. и др.,
18), что ЛФХ снижает положительный инотропный эффект адреналина, а гистидин, розин, триптофан, милдронат, предуктал и СК восстанавливают его.
Учитывая, что вопрос о модуляции трансмембранной передачи сигнала от цептора к клеточным эффекторам находятся в настоящее время в центре внимания
исследователей (Ткачук A.B., 2007), мы считали возможным более детально изучить ei в отношении ГМ почечной артерии коровы (ПАК). Мышцы почечной артерии (Makita 1983; Hesse I., Johns E„ 1984; Chelly J. et al., 1986; Whitney E et al., 1996; Taniguchi 2005; Демина H.JI, и др., 2008; Enkhjargal В. et al., 2008) и, особенно, коровы (Демш Н.Л. и др. 2008) не часто становятся предметом физиологических исследований. В то время, эффективность нервных и гуморальных регулирующих влияний на ГМ почечн артерии может иметь большое значение для функции почки как органа выделения регулятора системного кровотока и гомеостаза. Все сказанное определило постанов цели и задач исследования.
Цель исследования - изучить характер сократительных ответов гладких мыл почечной артерии коровы на адреналин, ацетилхолин и гиперкалиевый раствор Кребса зависимости от функционального состояния эндотелия и наличия в среде потенциальнь эндогенных и экзогенных модуляторов хемореактивности (сыворотки кров аминокислот, лизсфосфатйдилхолина, лекарственных препаратов).
Задачи исследования.
1. Изучить характер сократительных ответов циркулярных полосок почечн артерии коровы на гиперкалиевый раствор Кребса, адреналин и ацетилхолин, в то числе на полосках с интактным или поврежденным эндотелием, а также при действии нитро-Ь-аргининметилового эфира (L-NAME).
2. Исследовать влияние 104-, 103-, 500-, 100- и 50-кратных разведений сыворот крови женщин, лизофосфатидилхолина, гистидина, триптофана, тирозина, милдроната предуктала на эффективность активации адреналином а-адренорецепторов циркулярнь полосок почечной артерии коровы.
3. Оценить (на фоне тонуса, повышенного адреналином) влияние 104-, 103-, 500 100- и 50-кратных разведений сыворотки крови женщин на эффективность акгивац ацетилхолином М-холинорецепторов циркулярных полосок почечной артерии коровы интактным или с поврежденным эндотелием.
Научная новизна. Дана комплексная физиологическая характеристика миоцит ПАК как потенциального объекта изучения вопросов физиологии ГМ и эндогеннь модуляторов а-адрено- и М-холинореактивности. Показано, что вазоконстрикгорн эффект адреналина (W6 г/мл) в отношении ГМ почечной артерии зависит функционального состояния эндотелия - при интактном эндотелии он на 16-20% ниж чем при поврежденном. В то же время вазоконстрикторный эффект адреналина обусловлен влиянием адреналина на синтез NO. Показано, что лизофосфатидилхол (ЛФХ) в концентрациях 10"7-10 4 г/мл дозозависимо и обратимо снижает тону вызванный адреналином (10^ г/мл), т.е. проявляет а-адреноблокирующую активност Это дает основание считать ЛФХ одним из компонентов эндогенного блокатора а-" (ЭБААР). Выявлена способность CK (1:100, 1:50, в том числе после 6-месячно хранения при гистидина, тирозина и триптофана (10'5 г/мл) повышать тону
вызываемый адреналином, а также способность CK (1:104, 1:103, 1:500, 1:100, 1:5 гистидина, тирозина, триптофана, милдроната и предуктала (все - 10"5 г/м восстанавливать адреналинвызванный тонус, сниженный ЛФХ. Это указывает важную физиологическую роль ЭСААР и позволяет рассматривать гистидин, тирозин триптофан в качестве компонентов ЭСААР и внутриклеточных шапероно восстанавливающих трансмембранную передачу сигнала от рецепторо ассоциированных с G-белком, внутрь клетки, а милдронат и предуктал - к
енциальные экзогенные а-адреносенсибили заторы и шапероны. На полосках с актным эндотелием АХ (10 -10'5 г/мл) в условиях базального тонуса и тонуса, званного ГРК (60 мМ КС1) или адреналином (10'6 г/мл), проявляет релаксирующий >ект, что объясняется активацией М-ХР эндотелиоцитов. На фоне еналинвызванного тонуса СК (1:104, 1:Ю\ 1:500, 1:100, 1:50) снижает проявление аксирующего эффекта АХ, что говорит о способности эндогенного блокатора М-ХР МХР) снижать эффективность активации М-ХР эндотелиоцитов.
Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследования ширяют представление о природе, механизме действия и роли эндогенных дуляторов хемореактавности прямого, действия (ЭСААР, ЭБААР и ЭБМХР) в /ляции тонуса почечной артерии. Они углубляют знание об ЛФХ как о вторичном реднике, в частности, о роли ЛФХ в регуляции а-адренореактивности ПАК, о роли отелия в реализации тонотропных эффектов катехоламинов и АХ, о роли гистидина, озина и триптофана (как компонентов эндогенных сенсибилизаторов р-АР и а-АР), о ханизме действия метаболических препаратов - милдроната и предуктала. Результаты ледования важны в методическом отношении - они демонстрируют возможность ользования ПАК как тест-объекта для оценки содержания в биологических дкостях ЭБМХР, ЭСААР и ЭБААР. В целом, результаты исследования представляют терес для физиологии гладких мышц, кровообращения, вегетативной нервной стемы, эндокринной системы, а также для фармакологии, кардиологии и других делов медицины.
Положения, выносимые на защиту:
1. Наличие функционально активного эндотелия, продуцирующего N0, снижает нические ответы циркулярных полосок почечной артерии коровы (ПАК) на перкалиевый раствор (60 мМ КС1; на 16-40%) и на адреналин (10'6 г/мл; на 16-20%).
2. Эффективность активации а-адренорецепторов (АР) миоцитов ПАК повышают 0- и 50-кратные разведения сыворотки крови человека (это объясняется наличием в й эндогенного сенсибилизатора а-АР, или ЭСААР), а также гистидин, тирозин и иптофан (10"5 г/мл), но снижает лизофосфатидилхолин (ЛФХ, 10'7-10 г/мл), торотка крови (1:104-1:50), аминокислоты, милдронат и предуктал восстанавливают фективность активации а-АР, сниженную ЛФХ (10"6 г/мл).
3. В опытах с циркулярными полосками ПАК ацетилхолин (АХ, Ю'МО"5 г/мл) азывает эндотелийзависимый релаксирующий эффект на фоне базального тонуса и нуса, вызванного ГРК (60 мМ КС1) или адреналином (10'6 г/мл). Сыворотка крови ловека снижает этот эффект (на фоне тонуса, вызванного адреналином), о объясняется наличием в ней эндогенного блокатора М-холинорецепторов (ЭБМХР) и о способностью снижать эффективность активации М-ХР эндотелиоцитов.
Внедрение. Результаты исследования используются в учебной и научной ятельности кафедры нормальной физиологии Кировской государственной дицинской академии, в том числе в разделе «Кровообращение», а также при следовании свойств гладких мышц аорты крысы как потенциального объекта для ентификации ЭСААР и ЭБААР в крови беременных женщин.
Апробация работы. Результаты исследования доложены на X Всероссийской дико-биологической конференции молодых исследователей «Человек и его здоровье» -Петербург, 2007), научной сессии Вятского ГГУ (Киров, 2007), IX Всероссийской коле-конференции по физиологии кровообращения (Москва, 2008) и представлены в
материалах IX Всероссийской школы-конференции по физиологии кровообращет (Москва, 2008), I Всероссийской молодёжной научной конференции «Молодёжь и на на Севере» (Сыктывкар, 2008) и заочных электронных конференциях Российс академии естествознания (2006,2007).
По материалам диссертации опубликовано 13 работ, в том числе 2 статьи журналах, рекомендованных ВАК России. Все исследования, результаты котор представлены в диссертации, выполнены лично автором.
Структура и объём работы. Диссертация изложена на 153 страни' компьютерного текста и состоит из введения, 4 глав (обзор литературы, мето исследования, результаты исследований, обсуждение результатов), заключения, вывод практических рекомендаций и списка литературы, включающего 107 источников русском языке и 169 - на иностранных языках. Диссертация иллюстрирована таблицами и 19 рисунками.
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В 46 сериях опытов на 1653 циркулярных полосках почечной артерии 166 ко оценивали их сократительную активность (СА) при действии ГРК (30-80 мМ К адреналина (Ю',0-10'6 г/мл) и АХ (10"'- 5x10 г/мл) и модулирующее влияние СК (1:1 1:103, 1:500, 1:100, 1:50) небеременных женщин (п=66), ЛФХ (Ю'МО"4 г/мл), гистиди тирозина, триптофана, милдроната, предуктала, ницерголина, обзидана, атенолола (вс 10'5 г/мл) и Ы-нитро-Ь-аргининметилового эфира (Ь-ЫАМЕ, 10"4 г/мл). При этом 16 сер из 46 проводили одновременно на полосках группы 1 (с интактным эндотелием, т.е. артерий, полученных в переделах 2 часов от момента забоя животного) и на полос группы 2 (т.е. с поврежденным эндотелием, из артерий, хранившихся 24 ч. при 4°С которых перед опытом удаляли эндотелий ватным тампоном). В остальных 30 сер использовали полоски с интактным эндотелием, взятые в опыт спустя 2-24 часа по забоя животного. Регистрацию СА полосок вели по методике Циркина В.И. и др. (19 при 38°С, постоянной перфузии раствором Кребса со скоростью 0.7 мл/мин, пассив аэрации рабочей камеры и исходной нагрузке в 500 мг (4.9 мН) на многоканальн «Миоцитографе», созданном на базе прибора Н-3020, механотрона 6МХ термостатирующего устройства и шприцевого дозатора. Во всех сериях началу опы предшествовал 30-минутный период адаптации полосок, т.е. перфузия раствором Кре до установления стабильного базального тонуса. Опыты вели по схемам, указанн ниже (длительность этапов, как правило, 10 минут). Исследование адреномодулирующей активности воздействий (серии 9-41) проводили на фоне блок РгАР и р2-АР обзиданом (10"6 г/мл). Венозную кровь получали на станции перелив-крови у 19-50-летних женщин. Её исследовали спустя 2-4 ч. после забора (серии 12, 23, 24,45,46) или через 6 месяцев хранения при -10°С после её размораживания за 1-до опытов (серия 22). СК получали центрифугированием крови (1000 об/мин, 15 мин Её разводили раствором Кребса. Он содержал (мМ): ЫаС1 - 136; КС1 - 4.7; СаС12 - 2. МбСЬ - 1.2; КН2Р04 - 0.6; ИаНС03 - 4.7; СбНиОб - 11 (рН 7.4). Применяли адренал гидрохлорид (Москва), обзидан (Германия), ницерголин (Оболенск), атено (Щёлково), лизофосфатидилхолин (Харьков), аминокислоты (Венгрия), милдро (Латвия), предуктал (Франция), ацетилхолина хлорид и Ы-нитро-Ь-аргининметилов эфир (США-Бельгия). Результаты исследования обрабатывали параметрическим метод
х представляли в виде М±ш); различия оценивали по критерию Стьюдента, считая их стоверными при р<0.05 (Гланц С., 1999).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
Показано, что независимо от функционального состояния эндотелия циркулярные лоски ПАК не обладают спонтанной СА и имеют низкий базальный тонус (рис.1).
1. Влияние гиперкалиевого раствора Кребса (ГРК) на тонус полосок в висимости от функционального состояния эндотелия. В серии 1, проводимой на лосках группы 2 (п=17) по схеме: раствор Кребса (РК) —> ГРК (20 мМ КС1) —> РК ГРК (30 мМ КС1) РК -> ... ГРК (80 мМ КС1) -> РК, показано, что повышение нцентрации в среде КС1 в диапазоне от 30 до 60 мМ дозозависимо и обратимо вышает тонус (рис.1,А-В, и 2,А). Различия в величине тонуса, вызванного при йствии ГРК, содержащего 60, 70 и 80 мМ КС1 (рис. 2,А), были недостоверны (р>0.1). тветная реакция на ГРК у 100% полосок проявлялась при 60 мМ КО и выше. Исходя из ого, в последующих сериях использовали ГРК, содержащий 60 мМ КС1.
Сыб-1:100 Тир-5 Милд-5
Рис.1. Механограммы циркулярных полосок почечной артерии коровы с интактным ндотелием (группа I, панели А, В и Г) и с повреждённым эндотелием (группа 2, панели , Д-Ж). Панели А и Б демонстрируют влияние ацетилхолина (5х10'5 г/мл; АХ-5) на онус, вызванный гиперкалиевым раствором Кребса (ГРК, 60 мМ KCl); Панели В и Г емонстрируют влияние Ь-нитро-К-аргининметилового эфира (10"4 г/мл, L-NAME-4) на онус, вызванный ГРК (60 мМ KCl; панель В) или адреналином (10'6 г/мл, Адр-6) овместно с обзиданом (10"6 г/мл; Обз-б; панель Г). Панели Д-Ж демонстрируют а-дреноблокирующее влияние лизофосфатидилхолина (10~б г/мл, ЛФХ-6) на тонус, ызванный адреналином, и способность 100-кратного разведения сыворотки крови (Сыв-:100; панель Д), тирозина (10 5 г/мл; Тир-5; панель Е) и милдроната (10 5 г/мл; Милд-5; анель Ж) восстанавливать эффективность активации а-адренорецепторов.
Горизонтальные линии под механограммами обозначают момент воздействия веществ Калибровка - на панелях А-Г - 5 мН, 5 мин, на панелях Д, Е и Ж - 10 мН, 10 мин.
В серии 2 (РК -> ГРК, 60 мМ КС1,10 мин. РК) показано (рис.2,В). что вызваннь ГРК тонус в группе 1 (п=23) на 25% меньше, чем в группе 2 (п=31) - 9.2±0.6 прот 12.2±0.7 мН (р<0.05). Это можно объяснить продукцией эндотелиоцитами полос группы 1 N0, который препятствует развитию тонического ответа на ГРК. $ доказательства этого предположения была проведена серия 3 (РК —» ГРК, 60 мМ КС1, мин. —> РК). В ней показано (рис.2,В), что в группе 2 (п=31) тонус повышался максимальной величины в первые 10 мин. перфузии ГРК, а затем на протяжении 50 ми оставался относительно постоянным. В группе 1 (п=23) тонус в первые 10 мин. перфузи ГРК был ниже (на 44%), чем у полосок группы 2 (соответственно 9.2±1.6 против 16.4±1 мН, р<0.05), но в дальнейшем он постепенно возрастал и к 50-й мин. становился таки же (16.6±1.9 мН), как у полосок группы 2 (17.6±2.7 мН, р>0.1). Эти результаты м объясняем тем, что по мере воздействия ГРК (60 мМ КС1) у полосок группы 1 эндотелиоцитах снижается запас Ь-аргинина (как источника синтеза N0) и поэто уменьшается продукция N0 и его релаксирующее влияние на миоциты. При это учитывая данные МепШгаЬа1 V. е1 а1 (2000) о повышении продукции N0 в эндотели брыжеечной артерии крысы под влиянием ГРК (70 мМ КС1), мы не исключаем, что и нашим опытах ГРК (60 мМ КС1) тоже увеличивал продукцию N0 и тем самым повыш скорость истощения запасов Ь-аргинина.
0 10 20 30 40 50 60 70 80 9 8 7 в
мМ -Ig [адр]
О 10 20 30 40 50 60 мин- 0 10 20 30 40 50 60 мин-
Рис.2. Величина тонуса циркулярных полосок почечной артерии коровы (мН панель А - у полосок группы 2 в зависимости от концентрации KCl в гиперкалиево растворе Кребса (10-80 мМ KCl); панель Б - у полосок группы 2 в зависимости концентрации адреналина (10"9-10б г/мл; по шкале абсцисс - отрицательный десятичны логарифм концентрации в среде адреналина; панели В и Г - у полосок группы 1 и 2 н 10-60-й минутах действия гиперкалиевого раствора Кребса (бОмМ KCl, панель В) ил адреналина (Ю-6 г/мл, панель Г) * - различие с полосками группы 2 достоверно (р<0.05 по критерию Стьюдента.
Для доказательства представления о N0 как факторе, препятствующем развитию нического ответа миоцитов на ГРК, на полосках группы 1 (п=9) была выполнена серия с использованием L-NAME, блокатора синтеза N0 (Vanhoutte Р., 2001; Хлыбова C.B. и
2007). В ней (РК L-NAME, 10"4 г/мл РК ГРК, 60 мМ КС1, 10 минут -» ГРК + NAME —» ГРК РК) установлено (рис.1,В), что L-NAME не изменяет базальный нус полосок (это, однако, не исключает способность L-NAME снижать сократимость иоцитов). Вопреки ожиданию, в присутствии L-NAME тонус полосок не возрастал следствие блокады синтеза NO), а останавливался в своем росте; удаление L-NAME провождалось быстрым ростом тонуса (с 25.9±4.7 до 37.8±2.8 мН, р<0.05). ыявленный феномен противоречит представлению о L-NAME как о блокаторе синтеза О, но согласуется с данными литературы о способности L-NAME блокировать Са2+-налы миоцитов сосудов (Henrion D. et al., 1996; López R. et al., 2004). Вероятно, это ляется одной из причин торможения тонического ответа на ГРК в присутствии L-АМЕ. Ранее Mendizabal V. et al. (2000) отметили, что L-NAME (Ю'МО^М) не влияет на нтез N0, индуцированный ГРК, и это объяснялось наличием NOS-независимого пути нтеза N0 в эндотелиоцитах. Очевидно, этот феномен частично объясняет отсутствие :идаемого результата от применения L-NAME. Таким образом, результаты серии 4 не озволили доказать предположение о снижении синтеза N0 при длительном воздействии РК. В то же время они косвенно подтверждают данные Henrion D. et al. (1996) и López . et al. (2004) о блокирующем влиянии L-NAME на Са2+-проницаемость и данные lendizabal V. et al. (2000) о наличии NOS-независимого пути синтеза N0 в дотелиоцитах ПАК.
В целом, результаты серий 1-4 позволяют заключить, что ГРК (60 мМ КС1) можно спользовать для повышения тонуса миоцитов ПАК. Это важно в методическом тношении при исследовании вазодилатирующей активности веществ (в том числе АХ), ри оценке функционального состояния эндотелиоцитов как продуцентов N0.
2. Адреналинвызванный тонус циркулярных полосок ПАК и влияние на него ыворотки крови человека, лизофосфатидилхолина (ЛФХ), аминокислот и екарственных препаратов. В серии 5, которую проводили на полосках группы 2 (п=7) о схеме: РК -> адреналин (Адр), 10"6 г/мл РК -» Адр, 10"'° г/мл РК Адр, 10 9 мл -> РК-> Адр, 10"8 г/мл РК —> Адр, 10"7 г/мл -> РК-> Адр, 10"6 г/мл -> РК, становлено (рис.1,Г-Ж; 2,Б), что в концентрациях 1О'|0и 10"9 г/мл адреналин не влияет а базальный тонус, а в концентрациях 10", 10' и 10"6 г/мл дозозависимо и обратимо овышает его (соответственно до 0.9±0.5; 3.4±0.9 и 32.2±4.6 мН), что наблюдалось у 2.9%, 85.7% и 100.0% полосок. С учетом этих данных, в следующих сериях адреналин спользовали в концентрации 10~б г/мл.
В сериях 6,7 и 8, проведённых на полосках группы 2 (п=72) по схеме: РК —> Адр, 10' г/мл —» Адр + блокатор, 10'5 г/мл —► Адр —* РК, показано, что ницерголин (блокатор аР) снижает вызванный адреналином тонус до 16.7±5.4% от его первоначальной еличины, а обзидан (блокатор рг и Рг-АР) и атенолол (блокатор Pi-AP) - лишь до 9.6±7.9% и 64.5±7.6% соответственно. Это свидетельствует о наличии в миоцитах ПАК -АР (вероятнее всего, а,-АР), ргАР и р2-АР. С учетом степени снижения тонуса, ызванного адреналином, полагаем, что СА миоцитов ПАК возрастает при активации аг Р и, в меньшей степени, Pi-AP и снижается при активации р2-АР. Так как тоническая еакция миоцитов ПАК на адреналин обусловлена преимущественно активацией а-АР,
то при исследовании а-адреномодулирующей активности различных воздействий (сер 9-41) р-АР блокировали обзиданом (10"6 г/мл).
В серии 9, проведенной на полосках группы 1 (п=22) и группы 2 (п=33) по схе РК —> Адр, 10"6 г/мл, 10 мин. —► РК, установлено, что в группе 1 тонический ответ адреналин был на 16% ниже (р<0.05), чем в группе 2 (13.7±0.7 мН против 16.0±1.0 м Это означает, что наличие функционально активного эндотелия, т.е. способно продуцировать N0, препятствует развитию тонуса при активации а-АР. Данн предположение подтвердили результаты серии 10 (РК —»Адр, 10"6 г/мл, 60 минут —» Р проведенной на полосках группы 1 (п=22) и группы 2 (п=33). В ней установле (рис.2,Г), что в обеих группах тонус повышался до максимальной величины уже течение первых 10 минут перфузии адреналином и оставался на этом уровне (11.0-11 мН в группе 1 и 13.1-14.6 мН в группе 2) еще 50 минут, при этом на протяжении перв 40 минут перфузии в группе 1 тонус был на 16-20% ниже (р<0.05), чем в группе 2.' означает, что адреналин не влияет на синтез N0; это согласуется с представлением W; S., et al. (2002). Можно также утверждать, что базальная секреция N0 эндотелиоцитг полосок группы 1 на протяжении всего 60-минугного воздействия препятству развитию максимального ответа на адреналин. Очевидно также, что активация а-АР полосках ПАК протекает без выраженной десенситизации. Это было отмечено и ран (Дёмина Н.Л. и др., 2008).
В серии 11, проведенной на полосках группы 1 (п=17) по схеме: РК —> Адр, 1 г/мл -4 Адр + L-NAME, 10"4 г/мл Адр -» РК, установлено (рис.1,Г), что L-NAME (1 г/мл) не повышает тонус, вызванный адреналином, а, наоборот, снижает его ( 61.3±12.1% от первоначальной величины, р<0.05) с последующим его восстановлени (до 120,5±8.9%) после удаления L-NAME. Полагаем, что данный феномен связан способностью L-NAME блокировать Са2+-проницаемость миоцитов сосуда, как э отмечено в литературе (Henrion D. et al., 1996; López R. et al., 2004) и нами в серии 4. целом, можно утверждать, что тонотропный эффект адреналина не связан торможением синтеза N0 в эндотелиоцитах. По этой причине исследование модуляц эффективности активации а-АР мы проводили без учета функционального состоян эндотелия, т.е. на полосках, хранившихся после забоя животного 2-24 ч. (серии 12-41).
В сериях 12-18 (РК н> Адр, 10"6 г/мл РК воздействие РК; I п=11 оценивали влияние СК (1:104,1:103,1:500,1:100,1:50), гистидина, тирозина, триптофан милдроната, предуктала (все - 105 г/мл) и ЛФХ (10'6 г/мл) на базальный тон Установили, что ни одно из этих воздействий не повышает тонус. Вопрос вазодилатирующем эффекте этих воздействий остается открытым, так как на фо низкого базального тонуса выявить его сложно, хотя, судя по результатам ря последующих серий (21,34-39), его могут проявлять 10 -кратное разведение С миддронат и предуктал.
В серии 19 (РК ГРК, 60 мМ КС1 -> ГРК + ЛФХ, 10 6 г/мл -» РК; п=20) и в сер 20 (РК Адр, 10"6 г/мл Адр + ЛФХ, Ю'ЧО"4 г/мл -> Адр РК; п=207) оценив влияние ЛФХ на тонус, вызванный ГРК или адреналином. Установлено, что ЛФХ (сер 19) не снижает тонус, вызванный ГРК, а даже повышает его (с 9.7±1.1 до 10.6±1.2 м или до 108.8±3.2% от исходной величины, р<0.05). В то же время (серия 20) тону вызванный адреналином, дозозависимо и обратимо снижался (рис.1,Д-Ж, рис.3,А) п влиянием ЛФХ в концентрациях 10"7, 10"6, 10'5, 5х10"5 и 10^ г/мл (соответственно
.2±6.3%, 31.8±4.9%, 21.3+5.6%, 19.2±7.0% и 13.8±2.1 0.05).
А
180 140
100 60 20
ол 1П8
/и - —
(34)
5x10 8 Ю-7
; (34) (13) # (24)
ш
£
12 3 12 3
10"® (44)
1 -1П4
i ьии
12 3 12 3
1:50
10 5 (36)
от первоначального уровня,
5x10"5 10"
(12)
-fa
(39)
140
123 123 Мил д.
Три.
(24) (22)
123 123123 123123 123123 123123 123 Рис.3. Тонус циркулярных полосок почечной артерии коровы при трех тестирования реналином (100 г/мл) совместно с обзиданом (10 " г/мл), в % к 1-му тестированию, щель А: 1- адреналин; 2- адреналин + лизофосфатидилхолин (ЛФХ, 10"8-10'4 г/мл); 3-
реналин. Панель Б: 1- адреналин; 2- адреналин + ЛФХ, 10" г/мл; •¡действие (104-50-кратные
сыворотки крови,
3- адреналин + ЛФХ + гистидин, тирозин, различия с 1-м (*)
разведения
иптофан, милдронат, предуктал, все - Ю-5 г/мл). Примечание: * и 2-м (*) тестированиями адреналином достоверны (р<0.05), по критерию Стьюдента. ;есь и на рис. 4 и 5 в скобках указано число наблюдений.
Так как в серии 20 применялся обзидан (10 6 г/мл) как блокатор (3-АР, эти данные ¡зволяют утверждать, что ЛФХ (10"7-10^ г/мл) обладает а-адреноблокирующей (тивностью. Хотя это утверждение не согласуется с данным литературы о том, что ЛФХ i снижает адреналинвызванный тонус полосок аорты крысы (Matsumoto Т. et al., 2006) и азентеральной артерии крысы (Zhang R. et al., 2006), миоциты которых в основном щержат оь-АР, мы объясняем это противоречие тем, что: 1) ЛФХ преимущественно кижает эффективность активации арАР, а не а2-АР, т.е. является селективным аг [реноблокатором; 2) миоциты ПАК, в отличие от миоцитов аорты и мезентеральной терии крысы, содержат преимущественно агАР, которые блокируются ЛФХ. 1 В сериях 21 и 22 (РК Адр, 10_б г/мл -» Адр + СК, одно из 5 разведений Адр -> К) мы исследовали влияния СК небеременных женщин на эффективность активации а-¡Р. В серии 21 (п=78) показано (рис.4,А) что СК, исследованная спустя 2-4 часа после бора крови, в разведении 1:103 снижает тонус, вызванный адреналином (до 80.4±6.2%
от первоначального уровня, р<0.05). Это мы расцениваем, как отражение способное больших разведений СК снижать сократимость миоцитов ПАК. В разведении 1:500 не влияла на тонус, вызванный адреналином, а в разведениях 1:100 и 1:50 повышала (соответственно до 132.3±5.1% и 135.4+4.3% от первоначального уровня, р<0.05), проявляла а-адреносенсибилизирующую активность, что мы объясняем наличием крови ЭСААР. В серии 22 (п=83) показано (рис.4,Б), что СК, хранившаяся 6 месяцев п -10°С, в разведениях 1:104, 1:103 и 1:500 не влияет на тонус, вызванный адреналином, разведениях 1:100 и 1:50 повышает его (соответственно до 128.0±5.0% и 135.6±9.2% исходного уровня, р<0.05). Это подтверждает наличие в крови ЭСААР, указывает на устойчивость к длительному хранению при -10°С и говорит о том, что компонента ЭСААР являются низкомолекулярные вещества.
Влияния СК на эффективность активации а-АР мы также исследовали в серии основной задачей которой было изучение влияния СК на эффект АХ в условиях тону вызванного адреналином (её результаты изложены в разделе 3). Эту серию проводили полосках группы 1 (п=50, разведения 1:104, 1:10"\ 1:500, 1:50) и группы 2 (п= разведения 1:103,1:100,1:50) по схеме: РК —> Адр, 10"6 г/мл (этап 1) Адр + СК, одно 5 разведений (этап 2) Адр + СК + АХ, 5х10"5 г/мл (этап 3) —> РК. Анализ первых дв этапов показал, что СК в разведении 1:50 повышает (р<0.05) адреналинвызваный тон (табл.) на полосках группы 1 до 137.3±15.8% от исходного уровня, а на полосках груп 2 - до 118.6±5.6% (pi.2<0.1). Это означает, что способность эндотелиоцит продуцировать N0 не имеет значения для проявления а-адреносенсибилизирующ активности СК. В разведении 1:103 (табл.) СК не влияла на тонус в обеих группах ( составил соответственно 100.8±6.8% и 97.5±11.4% от исходной величины). Кроме того опытах на полосках группы 1 (1:104 и 1:500) и группы 2 (1:100), показано, что СК разведении 1:100 повышает тонус (до 114.2±5.4%, р<0.05), а в разведениях 1:104 и 1:5 не влияет на пего. Все это подтверждает выеод о наличии в крови ЭСААР, эффе которого проявляется при разведении СК в 100 и 50 раз, и указывает на то, что характ влияния ЭСААР на адреналинвызванный тонус не зависит от функционально состояния эндотелия, а определяется преимущественно кратностью разведения С Отметим также, что при исследовании СК здоровых женщин (серии (21, 22 и 46) нам удалось наблюдать а-адреноблокирующую активность СК, которая ранее бы обнаружена при исследовании 103-, 500-, 100-, и 50-кратных разведений СК у больн артериальной гипертензией III стадии и объяснялась наличием ЭБААР (Демина H.JI. др., 2008). Это говорит о низком содержании ЭБААР в крови у здоровых женщин.
В серии 23 (РК -> Адр, 10"6 г/мл Адр + ЛФХ, 10"6 г/мл Адр + ЛФХ + СК одном из разведений РК; п=99) исследовали способность СК восстанавлива эффективность активации а-АР, сниженную ЛФХ. Показано (рис.1,Д; 3,Б), что проявляет эту способность в разведениях 1:104, 1:103, 1:500, 1:100 и 1:50. Так, в опыта 500-кратным разведением СК (п=19) адреналин повышал тонус до 26.2±2.7мН; п влиянием ЛФХ тонус снижался до 5.1±2.3 мН или до 16.7±7.0%, а при введении СК восстанавливался до 25.8±2.5 мН или до 101.5±3.9%. Аналогичные данные получены серии 24, проведенной по модифицированной схеме (РК Адр, 10"6 г/мл -> РК Адр ЛФХ, 10'6 г/мл -> Адр + ЛФХ + СК в одном из разведений -> РК; п=65): Л препятствовал повышению тонуса полосок при активации а-АР адреналином (10"6 г/м а СК (во всех разведениях) способствовала развитию этого тонуса. Так, в опытах с 50 кратным разведением СК (п=13) исходно адреналин повышал тонус до 22.6±3.4 мН,
оне ЛФХ - лишь до 5.4±2.3 мН или до 19.4±7.9% от первоначальной величины, а на юне ЛФХ и СК - до 23.4±3.8 мН или до 109.7±15.6%. Все это подтверждает редставление о наличии в крови ЭСААР и указывает на то, что эффект ЭСААР собенно ярко проявляется на фоне сниженной (в частности, под влиянием ЛФХ) ффективности передачи сигнала от а-АР внутрь миоцита.
А 1-1 о3 1:100 Б1 -1 о4 1-япп 1ЯП
• 1:500 _ 1:50 Ш 1:10з1 ^1:100
0 123 123 123 123 123
'ис.4. Тонус циркулярных полосок почечной артерии коровы при трех тестированиях дреналином (10"6 г/мл) совместно с обзиданом (10"6 г/мл), в % 1-му тестированию. 1анель А - до (1), на фоне (2), и после удаления (3) «свежей» сыворотки крови в ¡азведениях 1:104-1:50. Панель Б - до (1), на фоне (2), и после удаления (3) длительно ранившейся сыворотки крови в разведениях 1:104-1:50. Панель В - до (1), на фоне (2) и юсле удаления (3) вещества (гистидина, тирозина, триптофана, милдроната или (редуктала, все - 10'5 г/мл). Примечания: для всех панелей: * и * - различия с 1-м (*) и 2-I (*) тестированиями адреналином достоверны (р<0.05), по критерию Стьюдента.
В сериях 25-33 изучали влияние гистидина, тирозина и триптофана на ффективность активации а-АР, в том числе в присутствии ЛФХ. В частности, в сериях 15, 26 и 27 (РК —> Адр, 10'6 г/мл -» Адр + аминокислота, 10"5 г/мл —> Адр —» РК) показано рис.4,В), что гистидин (п=19), тирозин (п=28) и триптофан (п=16) повышают тонус, ¡ызванный адреналином (соответственно до 127.1±4.4%, 128.0±3.8% и 124.9±4.5% от его первоначальной величины, р<0.05). Аналогичные данные получены при изменении последовательности воздействий (серии 28, 29 и 30: РК —» Адр, 10"6 г/мл —» РК —> минокислота, АК, 10"5 г/мл —> АК + Адр —> РК) - гистидин (п=9), тирозин (п=10) и риптофан (п=12) повышали тонус, вызванный адреналином, соответственно до
118.3±7.1%, 127.3±5.9% и 143.0±16.6% от величины, наблюдаемой при 1-м тестировани адреналином (р<0.05). В сериях 31, 32 и 33 (РК Адр, 10'6 г/мл Адр + ЛФХ, 10"6 г/м —» Адр + ЛФХ + аминокислота, 10"5 г/мл -4 РК) показано (рис.1,Е; 3,Б), что гистиди (п=47), тирозин (п=29) и триптофан (п=24) восстанавливают адреналинвызванный тону сниженный ЛФХ. Так, в опытах с триптофаном (серия 33) адреналин повышал тонус д 17.5±1.1 мН; ЛФХ его снижал до 5.3±1.0 мН (т.е. до 29.6±4.8% от первоначальног уровня), а триптофан восстанавливал его до 14.7±1.7 мН (до 78.2±12.1%). Следовательн гистидин, тирозин и триптофан, подобно СК человека, обладают адреносенсибилизирующей активностью, которая проявляется на интактных полосках на полосках, подвергнутых воздействию ЛФХ. Ранее в опытах с гладкими мышцам (Ноздрачев А.Д. и др., 1998; Туманова Т.В. и др., 2004; Сизова Е.Н., Циркин В.И., 2006) миокардом (Трухин А.Н. и др., 2004; Пенкина Ю.А. и др., 2008), было показано, что эт аминокислоты (АК) обладают р-адреносенсибилизирующей активностью, т.е. повышаю эффективность активации Д-АР, в том числе сниженную озоном или ЛФХ; это позволил рассматривать АК в качестве компонентов ЭСБАР. Очевидно, что эти три АК могут быт и компонентами ЭСААР. Полагаем, что повышение и/или восстановлени эффективности активации а-АР и Р-АР под влиянием АК связано с их способностью (ка внутриклеточных шаперонов) восстанавливать конформационное состояние субъединицы С-белка, нарушаемое под воздействием повреждающих агентов типа ЛФ а также с их способностью активировать фосфатазу (т.е. процесс дефосфорилировани АР) и повышать сродство АР к агонисту.
В сериях 34-41 изучали влияние милдроната и предуктала на эффективност активации а-АР, в том числе в присутствии ЛФХ. В частности, в сериях 34-39 показан что милдронат и предуктал частично снижают тонус, вызванный адреналином. Так, сериях 34 и 35 (РК -> Адр, 10~6 г/мл —> Адр + вещество, 10"5 г/мл —> Адр -> Р милдронат (п=32) снижал адреналинвызванный тонус до 56.4±8.8% от первоначально величины, а предуктал (п=25) - до 61.0+11.0% (рис.4,В). Аналогично, в сериях 36 и 3 (РК —> Адр, 10"6 г/мл —> РК —> вещество, 10'5 г/мл—» вещество + Адр —» РК), при 2-тестировании адреналином, т.е. на фоне милдроната (п=12) тонус составил 81.5±5.5% о первоначальной величины, а на фоне предуктала (п=8) - 107.5+11.0%. Аналогично, сериях 38 и 39 (РК —* вещество, 10"3 г/мл —» вещество + Адр, 10"6 г/мл —► Адр —+ Р удаление милдроната (п=9) повышало адреналинвызванный тонус до 133.0±15.3 (р<0.05) от величины тонуса, развиваемого на 5-й мин. воздействия адреналин совместно с этим веществом, а удаление предуктала (п=24) - до 143.1±18.4%. В то ж время оба вещества восстанавливали тонический ответ полосок ПАК на адренали сниженный ЛФХ, т.е. проявляли а-адреносенсибилизирующую активност Действительно, в сериях 40 и 41 (РК Адр, Ю'6 г/мл —> Адр + ЛФХ, 10"6 г/мл —> Адр ЛФХ + вещество —> РК) показано (рис.1,Ж и 3,Б), что милдронат (п=22) восстанавливае сниженный ЛФХ адреналинвызванный тонус до 73.4±4.7% от исходной величин (р<0.05), а предуктал (п=79) - до 78.0±4.1% (р<0.05); в этих опытах ЛФХ сниж адреналинвызванный тонус соответственно до 33.9±4.1% и до 32.1±2.6% (р<0.05 Результаты серий 34-41 вполне объяснимы, если предположить, что милдронат предуктал оказывают два эффекта - вазодилататорный и а-адреносенсибилизирующи В обычных условиях, т.е. в опытах с интактными полосками доминиру вазодилататорный эффект (поэтому оба вещества снижают адреналинвызванный тонус а в опытах на полосках, обработанных ЛФХ, преобладает а-адреносенсибилизирующи
14
фект, т.е. оба вещества повышают эффективность активации а-АР. Таким образом, добно АК, милдронат и предуктал увеличивают эффективность активации и р-АР, как казано ранее (Сизова Е.Н. и др., 2002; Сизова Е.Н., Циркин В.И., 2006; Пенкина Ю.А. др., 2008), и а-АР. Поэтому мы склонны рассматривать милдронат и предуктал как зогенные сенсибилизаторы а-АР и как шапероны, действующие по тому же механизму, к ЭСААР, гистидин, тирозин и триптофан.
3. Сократительные ответы циркулярных полосок ПАК на ацетилхолин (АХ) и модуляция сывороткой крови. Известно (Vanhoutte Р., 2001; Хлыбова C.B. и др., Г7), что эндотелийзависимую вазодилатацию АХ реализует за счет активации М-ХР дотелиоцитов, повышающей продукцию N0. Поэтому влияние АХ на базальный тонус ерии 42 и 43) и на тонус, вызываемый ГРК (серия 44) или адреналином (серии 45 и 46), изучали, как правило, на полосках с интактным (группа 1) и поврежденным (группа эндотелием.
Исследование эффектов АХ на фоне базального тонуса в серии 42 (группа 1, п=7) и серии 43 (группа 1, п=20; группа 2, п=13), проводимое по схеме: РК -> АХ, в одной из нцентраций, 10'9-5х10'5 г/мл —> РК, показало, что в группе 1 АХ в концентрациях 10"9-"7 г/мл не изменяет базальный тонус полосок, а в концентрациях 10"6,10"5 и 5х10"3 г/мл первые 5 мин. воздействия дозозависимо увеличивает его (до 5.4-5.9 мН), а в следующие 5 мин. - снижает до исходного уровня или ниже (на 0.4-4.7 мН), т.е. на .0-126.7% от первоначального подъема. Такой же эффект АХ проявлял и в группе 2 ерия 43), но первичный подъем тонуса в ней был выше, чем в группе 1 (9.5±1.9 против 4±0.6 мН, р<0.05). Это говорит о том, что релаксирующий эффект АХ в группе 2 (из-за сутствия эндотелия) выражен слабее, чем в группе 1. Учитывая представления о ханизме влияния АХ на гладкие мышцы (Сизова Е.Н., Циркин В.И., 2006), полагаем, о в обеих группах вазоконстрикторный эффект АХ обусловлен активацией М-ХР чоцитов ПАК, а его прекращение - десенситизацией М-ХР миоцитов к АХ, рушением АХ ацетилхолинэстеразой, а также (в группе 1) усилением продукции N0 дотелиоцитами при активации их М-ХР. В целом результаты серий 42 и 43, терпретация которых требует ряд допущений, указывают на то, что данная модель не яется оптимальной для изучения влияния СК на эффекты АХ.
В серии 44 (РК ГРК, 60 мМ КС1 ГРК + АХ, в одной из концентраций, 10"9-10'5 мл ГРК -» РК) на полосках группы 1 (п=45) показано (рис.1,А и 5,А), что АХ в нцентрации 10"9-10"7 г/мл не меняет тонус, вызванный ГРК, а в концентрациях 10"6 и 10" г/мл снижает его (соответственно до 78.1±8.7% и 60.2±16.7% от первоначальной личины, р<0.05). В группе 2 (п=3б) АХ в концентрации 10"9-10"6г/мл не влиял на тонус, в концентрации 10" г/мл повышал его (до 149.3±17.2%; р<0.05; рис.1,Б и 5,Б), ледовательно, на фоне тонуса, вызванного ГРК, направленность эффекта АХ зависит от ункционального состояния эндотелиоцитов - если они продуцируют N0 (группа 1), то ! оказывает вазодилатирующий эффект, а в противном случае (группа 2) -чоконстрикторный. Это согласуется с представлением об АХ как эндотелийзависимом одилататоре (Vanhoutte Р., 2001; Хлыбова C.B. и др., 2007), свидетельствует о юсобности АХ оказывать вазодилатацию на фоне тонуса, вызванного ГРК, и говорит о рспективности применения такой модели для изучения вазодилатирующего эффекта и его модуляции.
Влияние АХ на тонус, вызванный адреналином, и модуляцию эффектов АХ под шянием СК оценивали в сериях 45 и 46, отличающихся последовательностью
воздействий. Серию 45 проводили с полосками группы 1 (п=84) и группы 2 (п=44) 1 схеме: РК -н> Адр, 10"6 г/мл (этап 1) -> Адр + АХ, 5х10"5 г/мл (этап 2) Адр + АХ + СК одном из 5 разведений (этап 3) —» РК. На полосках группы 2 (рис.5,Г) при воздейств] АХ на фоне тонуса, вызванного адреналином, к 5-й мин. тонус возрастал (до 127 138.4% от его исходной величины, р<0.05); к 10-й мин. он оставался повышеннь (129.5±11.8% в опытах с 50-кратным разведением СК), либо снижался до исходно уровня (в опытах с СК в разведениях 1:100-1:104). В группе 1 (рис.5,В) АХ не измен тонус, вызванный адреналином, ни к 5-й мин. (97.1-118.3% от первоначального уров» р>0.1), ни к 10-й мин. (88.0-101.1%, р>0.1); в отдельных экспериментах к 10-й мин. А снижал тонус. Очевидно, что в обеих группах АХ вызывает вазоконстрикцию (за сч активации М-ХР миоцитов), а в группе 1-й вазодилатацию (за счет активации М-У эндотелиоцитов), которая компенсирует вазоконстрикцию.
1:1041:1031:5001:1001:50 Г% 1 ■1 °4 1:1°3!£00 V 00 !'50
12а263 12а2бЗ 12а2б3 12а263 12а2бЗ 0 12а2бЗ 12а2бЗ 12а2б3 12а2бЗ 12а263 Рис.5. Тонус циркулярных полосок почечной артерии коровы при действ^ ацетилхолина (10'6 г/мл) на фоне тонуса, вызванного гиперкалиевым (60 мМ КС раствором Кребса (ГРК, панели А и Б) или адреналином (10"6 г/мл) совместно обзиданом (10 б г/мл; панели В и Г), в % к исходной величине вызванного тонуса. Пане. А (группа 1) и Б (группа 2): 1- ГРК; 2- ГРК + ацетилхолин; 3- ГРК. Панели В (группа 1] Г (группа 2): 1- адреналин; 2а адреналин + ацетилхолин, 5 мин. воздействия; 2 адреналин + ацетилхолин, 10 мин. воздействия; 3-адреналин + ацетилхолин + сыворот крови в одном из разведений, 1:104-1:50). Примечание: * и# - различия соответственне 1 -м (*) и 2-м или 2а-м (#) этапами достоверны (р<0.05), по критерию Стьюдента.
Анализ результатов этапа 3 этой серии показал (рис.5,Г), что на полосках группы! введение 50-кратного разведения СК на фоне тонуса, вызванного адреналином и А повышало его (до 135.4±10.0% от первоначальной величины, р<0.05). Этот эффект в| расцениваем как проявление а-адреносенсибилизирующей активности СК, реализац) которой не препятствует наличие АХ в среде. Остальные разведения СК (1:100, 1:5С
О3, 1:104) не повышали тонус (он составил соответственно 112.3±13.4%, 106.2±11.2%, 5.1±14.9% и 88.3±8.9% от первоначальной величины), т.е. не проявляли а-еносенсибилизирующую активность. Иные результаты получены в группе 1 (рис.5,В) разведение 1:50 не повышало тонус, вызванный адреналином и АХ (он составил 9.6±9.9% от первоначальной величины, р>0.1), разведения 1:100 и 1:500 также не няли тонус (он составил 107.3±8.0% и 85.5±10.3%), а разведения 1:103и 1:104 снижали *ус (соответственно до 81.6±б.9% и 77.5±8.4%, р<0.05). Следовательно, наличие в де ЭБМХР (СК в разведениях 1:50, 1:100, 1:500) уменьшает способность АХ вышать синтез N0 в эндотелиоцитах и тем самым снижает вазорелаксирующий фект АХ; в отсутствии ЭБМХР (СК в разведениях 1:104 и 1:103) АХ вызывает актерный для него вазорелаксирующий эффект. Таким образом, результаты серии 45 орят о возможности исследования эффектов АХ на фоне тонуса, вызванного еналином, и о способности ЭБМХР (СК в разведениях 1:500, 1:100 и 1:50) снижать фективность активации М-ХР эндотелиоцитов. Этот вывод подтверждают и ультаты серии 46.
Серию 46 (частично о ней говорилось в разделе 2) проводили на полосках группы 1 50) и группы 2 (п=37) по схеме: РК —> Адр, 10"6 г/мл -> Адр + СК, в одном из 5 ведений —» Адр + СК + АХ, 5х10"5 г/мл —» РК. Установлено (табл.), что 50-кратное ведение СК, вводимое на фоне тонуса, вызванного адреналином, повышает (р<0.05) ус в обеих группах - до 137.3±15.8% (группа 1) и 118.6±5.6% (группа 2) от его одной величины, что объясняется наличием в ней ЭСААР. Введение АХ на фоне еналина и СК дополнительно повышало (р<0.05) тонус до 206.2±37.6% (группа 1) и .1±8.2% (группа 2) от величины тонуса, вызванного адреналином (р1_2>0.1). Таким азом, в присутствии в среде 50-кратного разведения СК реакция на АХ у полосок с тактным эндотелием (группа 1) стала такой же, как у полосок с поврежденным "отелием (группа 2). В разведении 1:500 в группе 1 (группу 2 не исследовали) СК не еняла адреналинвызванный тонус (103.3±5.7%), т.е. не проявляла ЭСААР-ивность, а введение АХ на фоне адреналина и СК дополнительно повышало тонус (до 8.4±20.6%, р<0.05). Аналогично, в разведении 1:103 СК в группах 1 и 2 (табл.) не еняла адреналинвызванный тонус (100.8±6.5% и 97.5±11.4%), а введение АХ на фоне еналина и СК повышало (р<0.05) тонус соответственно до 128.4±10.2% и 131.2±18.3% .2>0.1). В разведении 1:104 СК в группе 1 (группу 2 не исследовали) также не изменяла еналинвызванный тонус (104.0±6.5%), а введение АХ на фоне адреналина и СК вышало (р<0.05) тонус до 144.7±11.7%. Следовательно, СК в разведениях 1:104,1:103 и 00 (как и разведение 1:50) препятствует проявлению релаксирующего эффекта АХ, и объясняется наличием в ней ЭБМХР. Отметим, что СК в разведении 1:100 в группе 2 уппу 1 не исследовали) повышала (р<0.05) адреналинвызванный тонус (до 114.2±5.4% исходного уровня), что объясняется наличием ЭСААР, а введение АХ на фоне еналина и СК дополнительно повышало (р<0.05) тонус до 152.9±9.8%. Таким разом, результаты серии 46 свидетельствуют о том, что СК в разведениях 1:104, 1:10\ 00,1:50 (и, вероятно, 1:100) снижает способность АХ вызывать релаксацию миоцитов. о мы объясняем наличием в сыворотке ЭБМХР.
Как отмечалось выше, на полосках группы 1 на фоне тонуса, вызванного еналином, АХ в отсутствии СК вызывает два эффекта - вазоконстрикторный (за счет
вации М-ХР миоцитов) и вазодилататорный (за счет активации М-ХР отелиоцитов, повышающей синтез N0). И так как оба эффекта АХ компенсируют
друг друга, то в этих условиях АХ не вызывает дополнительного роста тонуса. Нали же CK, которая, как известно (Циркин В.И. и др., 2002, 2007; Мальчикова C.B. и 2003; Сизова E.H., 2004; Сизова E.H., Циркин В.И., 2006; Демина H.JI и др., 200 содержит ЭБМХР, приводит к доминированию вазоконстрикгорного эффекта АХ. можно объяснить тем, что под влиянием ЭБМХР эффективность активации у М-эндотелиоцитов снижается в большей степени, чем у М-ХР миоцитов. Но утверждение будет правильным в том случае, если предположить, что сродство ЭБМХР у М-ХР зндотелиоцитов выше, чем у М-ХР миоцитов.
Табл. Вызванный адреналином тонус циркулярных полосок (групп 1 и 2) коровы (в м % к 1-му этапу опытов, М±т) при воздействии АХ на фоне 104-50-кратных разведен сыворотки крови человека. Этапы опытов: 1-й - адреналин, 10"6 г/мл; 2-й - адреналин, 1 г/мл + разведение сыворотки; 3-й - адреналин, 10"6 г/мл + разведение сыворотки ацетилхолин, 5x10 ^ г/мл._
Сыв орот ка п Этапы эксперимента (все на фоне обзидана, 10~6 г/мл)
1-й 2-й 3-й
мН мН % мН %
Полоски группы 1 (с интактным эндотелием)
1:50 11 13.4±2.3 16.4±2.7 137.3±15.8* 21.9±3.1* 206.2±37.6*
1:500 17 8.2+1.7 8.1±1.7 103.3±5.7 10.2±2.2 148.4±20.6*#
1:100 0 9 20.0±1.6 20.7±2.6 100.8±6.5 25.5±2.6 128.4±10.2*#
1:104 13 17.4±2.4 18.0±2.8 104.0±6.5 24.5±3.4*# 144.7±11.7**
Полоски группы 2 (с поврежденным эндотелием)
1:50 14 15.3±1.8 17.3±1.9 118.6±5.6* 20.8±2.1 146.1 ±8.2**
1:100 18 14.1±1.8 16.1±2.1 114.2±5.4* 20.1 ±2.4 152.9+9.8**
1:100 0 5 14.9±3.0 14.5±3.5 97.5± 11.4 19.2±4.9 131.2+18.3
Примечание: * и # - различия соответственно с 1-м и 2-м этапами достовер (р<0.05) по критерию Стьюдента.
Мы также полагаем, что вероятность снижения эффективности активации М-эндотелиоцитов под влиянием ЭБМХР должна быть выше в том случае, если ЭБ1 оккупирует свободные М-ХР, а не занятые АХ. Действительно, в серии 45, в которой вводилась на фоне адреналина и АХ, она проявляла М-холиноблокирующую активно в разведениях 1:500, 1:100 и 1:50, а в серии 46 (введение СК до воздействия АХ) разведениях 1:104и 1:103,1:500,1:50 (и, очевидно, в разведении 1:100).
В целом, из результатов серий 45 и 46 следует, что 1) эффекты ЭБМХР достато универсальны, т.е. в различных концентрациях ЭБМХР может блокировать любые ХР; 2) чувствительность разных М-ХР к ЭБМХР неодинакова (у М-ХР эндотелиоци она выше, чем у М-ХР миоцитов); 3) наличие ЭБМХР может существенно влиять способность АХ проявлять эндотелийзависимое расслабление. С этих позиций полага что высокое содержание в крови у человека ЭБМХР повышает риск разви артериальной гипертензии.
выводы
1. Циркулярные полоски почечной артерии коровы (ПАК), которые, независимо от ункционального состояния эндотелия, не обладают спонтанной сократительной тивностью и имеют низкий базальный тонус, дозозависимо и обратимо повышают нус под влиянием гиперкалиевого раствора (ГРК, 30-60 мМ КС1) и адреналина (10'8-10'
г/мл). Наличие интактного эндотелия снижает тонические ответы на ГРК (60 мМ КС1) и реналин (10"6 г/мл) соответственно на 16-40% и 16-20%.
2. Тонус полосок ПАК, вызванный адреналином (10"6 г/мл), снижается ицерголином (до 16.7% от его первоначальной величины), обзиданом (до 79.6%) и
енололом (до 64.5%), т.е. преимущественно он обусловлен активацией а-АР.
3. Тонус полосок ПАК, вызванный активацией а-АР адреналином (10"6 г/мл) на оне обзидана (Ю-6 г/мл), повышается (до 128.0-135.6% от его первоначальной сличины) под влиянием 100- и 50-кратных разведении сыворотки крови человека, что бъясняется наличием в крови эндогенного сенсибилизатора а-АР (ЭСААР). Этот тонус акже возрастает при действии аминокислот (10'5 г/мл) - гистидина (до 118.3-127.1%), ирозина (до 127.3-128.0%) и триптофана (до 124.9-143.0%), что позволяет их ассматривать в качестве компонентов ЭСААР.
4. Тонус полосок ПАК, вызванный активацией а-АР адреналином (10"6 г/мл) на оне обзидана (Ю-6 г/мл), снижается лизофосфатидилхолином (ЛФХ, Ю'МО"4 г/мл) до 3.2-13.8% от его первоначального уровня. Это позволяет рассматривать ЛФХ в качестве омпонента эндогенного блокатора а-АР (ЭБААР). Адреналинвызванный тонус, ниженный ЛФХ (10_б г/мл), восстанавливается под влиянием 104-, 103-, 500-, 100- и 50-ратных разведений СК человека (до 91.4-126.2% от первоначальной величины), истидина (до 88.9%), тирозина (до 59.8%), триптофана (до 78.2%), милдроната (до 3.4%) и предуктала (до 78.0%). Эти же воздействия препятствуют проявлению а-
реноблокирующего эффекта ЛФХ, что объясняется их способностью восстанавливать рансмембранную передачу сигнала от рецепторов внутрь клетки.
5. Констрикторный и релаксирующий эффекты ацетилхолина (АХ, 10'9-5х10'5 /мл), реализуемые на циркулярных полосок ПАК соответственно за счет активации М-олинорецепторов (М-ХР) миоцитов и эндотелиоцитов, зависят от концентрации АХ в реде, а также от функционального состояния миоцитов (базальный или вызванный онус) и эндотелиоцитов (интактные, т.е. продуцирующие N0, группа 1; и оврежденные, группа 2). Наличие интактных эндотелиоцитов повышает вероятность еализации релаксирующего эффекта АХ.
A) В условиях базального тонуса АХ (10"6-5х10'5 г/мл) на всех полосках вызывает вухфазный ответ - повышение тонуса, что особенно выражено в группе 2, и его нижение до исходного уровня или ниже (более выражено в группе 1).
Б) На фоне тонуса, вызванного ГРК (60 мМ КС1), у полосок группы 1 превалирует елаксирующий эффект - АХ (10"6 и 10'5 г/мл) снижает тонус до 78.1% и 60.2% от ервоначальной величины, а у полосок группы 2 доминирует констрикторный эффект -X (10"5 г/мл) повышает тонус до 149.3%.
B) На фоне тонуса, вызванного адреналином (10*6 г/мл), у полосок группы 1 онстрикторный и релаксирующий эффекты АХ взаимно компенсированы - АХ (5xl0's /мл) не изменяет их тонус, а у полосок группы 2 доминирует констрикторный эффект -
АХ (5х105 г/мл) вызывает транзиторный рост тонуса (до 127.9-138.4% о первоначальной величины).
6. Эндотелийзависимый релаксирующий эффект АХ (5x10"5 г/мл), наблюдаемый н фоне тонуса, вызванного адреналином (10"6 г/мл), снижается под влиянием 104-, 103- 500 , 100- и 50-кратных разведений сыворотки крови человека - в их присутствии у полосо группы 1 констрикторный эффект АХ становится доминирующим (т.е. как у полосо группы 2). Такая активность сыворотки крови объясняется наличием в ней эндогенног блокатора М-холинорецепторов (ЭБМХР) и его способностью снижать эффективное активации М-ХР эндотелиоцитов.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Циркулярные полоски почечной артерии коровы (ПАК) рекомендуете использовать при изучении природы, механизма действия и физиологической роли эндогенных модуляторов а-адрснореактивности, М-холинореактивности и факторов, продуцируемых эндотелием.
2. При исследовании потенциальных вазодилататоров в опытах с циркулярными полосками ПАК целесообразно вести наблюдения в условиях тонуса, повышенного гиперкалиевым (60 мМ KCl) раствором Кребса или адреналином (10"6 г/мл).
3. Рекомендуется исследовать возможность применения гистидина, тирозина, триптофана и экзогенных аналогов ЭСААР (милдроната, предуктала) при лечении заболеваний, вызванных дефицитом а-адренергических воздействий на артерии.
4. Перспективно дальнейшее исследование лизофосфатидилхолина (ЛФХ) как потенциального неселективного фактора, разобщающего передачу сигнала от рецепторов, ассоциированных с G-белком, внутрь клетки, и факторов, препятствующих его действию (сыворотка крови, аминокислоты, метаболические препараты).
5. При изучении патогенеза артериальной гипертензии целесообразно учитывать роль эндогенных модуляторов хемореактивности прямого действия, в том числе ЭСААР
и ЭБМХР в регуляции тонуса сосудистых гладких мышц.
***
Выражаю особую благодарность заведующей отделом биохимии липидов Института экспериментальной кардиологии РКНПК (Москва), кандидату химических наук, ведущему научному сотруднику Проказовой Нине Викторовне.
СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.
Публикации в рецензируемых журналах, определённых ВАК РФ:
1. Кашин Р.Ю., Пенкина Ю.А., Демина Н.Л., Циркин В.И., Тарловская Е.И., Костяев A.A., Проказова Н.В. Роль эндогенных модуляторов адренореактивности в патогенезе артериальной гипертензии // Уральский медицинский журнал. - 2007. -№7(35). - С.88-94 (0.44 п.л.; доля личного участия - 20%).
2. Кашин Р.Ю., Демина Н.Л., Циркин В.И., Тарловская Е.И. а и ß-адрено-, М-холиномодулирующая активность сыворотки крови при артериальной гипертензии II Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2008. - №2. - С.16-22 (0.44 п.л,; доля личного участия - 25%, входит в состав списка журналов ВАК, рекомендованных для публикации работ защищающихся по медицине).
Статьи в сборниках и материалы конференций: Кашин Р.Ю. Влияние сыворотки крови, лизофосфатидилхолина и гистидина на альфа-енореактивность миоцитов почечной артерии коровы // Фундаментальная наука и ническая медицина: Материалы X Всероссийской медико-биологической ференции молодых исследователей «Человек и его здоровье» - С-Пб., 2007. - С. 192-(0.06 п.л.; доля личного участия - 100%). Кашин Р.Ю., Пенкина Ю.А., Циркин В.И., Проказова Н.В. Способность гистидина, птофана и тирозина восстанавливать адренореактивность, сниженную под влиянием реждающих факторов // Экология и здоровье: Материалы сателлитного симпозиума Съезда физиологов России. - М.: РУДН, 2007. - С.126-129 (0.12 п.л.; доля личного стия - 40%).
Кашин Р.Ю. Альфа-адренореактивность почечной артерии коровы // Материалы I ероссийской молодёжной научной конференции «Молодёжь и наука на Севере». -
т,-,,. ... IJTT \Г~Г\ ПАХТ ШЛО 1TÏ 1П I --------------------------
<Vll3lDIVa^. ХЛЛЛЧП ШЦ J 1 Ш1., JJ\JKJО. - ll.jl., дилл Jininulu ynct^in» —
%).
Кашин Р.Ю., Снигирева H.JI., Тарловская Е.И., Циркин В.И. Влияние сыворотки ви больных с артериальной гипертензией на адренореактивность гладких мышц ечной артерии коровы // Артериальная гипертензия. - 2006.- Т. 12. - Приложение. -8 (0.06 п.л.; доля личного участия - 25%).
Кашин Р.Ю., Циркин В.И., Проказова Н.В. Влияние лизофосфатидилхолина на альфа-енореактивность гладких мышц сосудов почечной артерии коровы // Успехи ременного естествознания. - 2006. - №8. - С.70-71 (0.06 п.л.; доля личного участия -
о).
Кашин Р.Ю., Циркин В.И., Проказова Н.В. Влияние гистидина на альфа-еноблокирующий эффект лизофосфатидилхолина в опытах с гладкими мышцами чечной артерии коровы // Успехи совр. естествознания. - 2006. - №11. - С.48-49 (0.06 .; доля личного участия - 90%).
Кашин Р.Ю., Циркин В.И., Мальчикова C.B. Влияние сыворотки крови человека, двергнутой длительному хранению при минусовой температуре, на альфа-енореактивность гладких мышц почечной артерии // Современные наукоемкие нологии. - 2007. - №1. - С.49-50 (0.06 пл.; доля личного участия - 90%). .Кашин Р.Ю., Циркин В.И. Адренореактивность циркулярных сегментов почечной ерии коровы // Современные наукоёмкие технологии. - 2007. - №4. - С.80-81 (0.06 пл.; ля личного участия - 90%).
.Кашин Р.Ю., Циркин В.И. Влияние гиперкалиевого раствора Кребса на тоническую ивность гладких мышц полосок почечной артерии коровы. // Современные юёмкие технологии. - 2007. - №6. - С. 64-65 (0.06 пл.; доля личного участия - 90%). .Кашин Р.Ю., Циркин В.И., Пенкина Ю.А., Проказова Н.В. Способность гистидина, птофана и тирозина восстанавливать сниженную лизофосфатидилхолином ренореактивность миокарда и сосудистых гладких мышц // Успехи современного ествознания. - 2007. - № 7. - С.64-65 (0.06 пл.; доля личного участия - 40%). .Кашин Р.Ю., Циркин В.И. Сыворотка крови снимает эндотелийзависимые нотропные эффекты ацетилхолина в опытах с циркулярными полосками почечной терии коровы //Четвертая всероссийская школа-конференция по физиологии овообращения: Тезисы докладов. - М.: МГУ, 2008. - С.40-41 (0.06 пл.; доля личного астия - 90%).
Список сокращений:
Адр - адреналин
а-АР - а-адренорецепторы
Р-АР - р-адренорецепторы
Ь-ЫАМЕ - Ы-нитро-Ь-аргинин-метиловый эфир
N0 - оксид азота
АХ - ацетилхолин
Гис - гистидин
ГРК - гиперкалиевый раствор Кребса ЛФХ - лизофосфатидилхолин М-ХР - М-холинорецепторы ПАК - почечная артерия коровы РК - раствор Кребса СК - сыворотка крови Тир - тирозин Три - триптофан
ЭБААР - эндогенный блокатор а-адренорецепторов ЭББАР - эндогенный блокатор Р-адренорецепторов ЭБМХР - эндогенный блокатор М-холинорецепторов ЭСААР - эндогенный сенсибилизатор а-адренорецепторов ЭСБАР - эндогенный сенсибилизатор р-адренорецепторов ЭСМХР - эндогенный сенсибилизатор М-холинорецепторов
Подп. к печ. 17.11.2008 Объем 1,25 пл. Заказ№.146 ТирЮОэкз.
Типография Mill У
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кашин, Роман Юрьевич
Введение.4.
Глава 1. Модуляция сократительной активности гладких мышц сосудов эндогенными и экзогенными факторами (обзор литературы).9.
1.1. Особенности сократительной активности гладких мышц.11.
1.2. Влияние ацетилхолина на сократительную активность гладких мышц сосудов и модуляция холинореактивности.17.
1.3. Влияние адреналина на сократительную активность гладких мышц сосудов и модуляция их адренореактивности.25.
1.4. Влияние повышенного содержания ионов К+ в среде на сократительную активность гладких мышц сосудов.35.
1.5. Физиологические особенности гладких мышц почечной артерии коровы и других животных.37.
Глава 2. Объекты и методы исследования.39.
Глава 3. Результаты собственных исследований.42.
3.1. Влияние гиперкалиевого раствора Кребса (ГРК) на тонус циркулярных полосок почечной артерии коровы в зависимости от функционального состояния эндотелия.42.
3.2. Адреналинвызванный тонус циркулярных полосок почечной артерии коровы и модулирующее влияние на него сыворотки крови человека, аминокислот и лекарственных препаратов.46.
3.3. Сократительные ответы циркулярных полосок почечной артерии коровы на ацетилхолин и модулирующее влияние на них сыворотки крови человека.60.
Глава 4. Обсуждение результатов исследования.68.
4.1. Влияние ГРК на тонус циркулярных полосок ПАК в зависимости от функционального состояния эндотелия.69.
4.2. Влияние адреналина на тонус циркулярных полосок ПАК в зависимости от функционального состояния эндотелия.72.
4.3. Влияние лизофосфатидилхолина (ЛФХ) на базальный и вызванный ГРК или адреналином тонус циркулярных полосок ПАК.75.
4.4. Влияние сыворотки крови (СК) человека, гистидина, тирозина и триптофана на базальный и вызванный тонус миоцитов почечной артерии коровы.82.
4.5. Влияние милдроната и предуктала на базальный и вызванный тонус миоцитов почечной артерии коровы.90.
4.6. Влияние ацетилхолина (АХ) на тонус гладких мышц почечной артерии коровы и модулирующее действие сыворотки крови.92.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Модуляция сократительных ответов гладких мышц почечной артерии коровы на гиперкалиевый раствор, адреналин и ацетилхолин"
Актуальность исследования. Известно, что реакция гладких мышц (ГМ) сосудов на вещество может зависеть от состояния эндотелиоцитов, продуцирующих NO [87,249,252,273]. Это доказано и в отношении вазодилатации, вызываемой ацетилхолином [249,252,273]. Но вопрос о роли NO в реализации вазоконстрикторного эффекта катехоламинов [49,255] и гиперкалиевого деполяризующего раствора [191,234] остается открытым.
Установлено, что сыворотка крови (СК) в определенных разведениях (1:103, 1:500, 1:100, 1:50) повышает или снижает эффективность активации [3-АР гладких мышц матки, трахеи и коронарных сосудов [23,24,72,91,93,97] и миокарда [51,52,82]. Это объясняется наличием в крови эндогенного сенсибилизатора Р-АР (ЭСБАР) и эндогенного блокатора Р-АР (ЭББАР). В опытах с ГМ и миокардом показано, что подобно СК, Р~ адреносенсибилизирующую активность проявляют гистидин, тирозин и триптофан [46,51,52,72,82,84] и метаболические препараты — милдронат и предуктал [51,52,66,72]. Это позволяет рассматривать их в качестве эндогенных и экзогенных сенсибилизаторов Р-АР. Сообщается о способности СК повышать [23,24,25,93] или снижать [23,24,25] эффективность активации а-АР миоцитов сосудов, что говорит о наличии в крови эндогенных сенсибилизатора а-АР (ЭСААР) и блокатора а-АР (ЭБААР). Возникает вопрос — способны ли гистидин, тирозин, триптофан, милдронат и предуктал модулировать эффективность активации а-АР?
Известно, что СК (1:500, 1:100, 1:50) снижает эффективность активации М-холинорецепторов (М-ХР) гладких мышц матки, трахеи, желудка [23,24,42,68,93,97,98] и миокарда [54,55], а в отдельных случаях (1:104, 1:103) — повышает её [68]. Это объясняется наличием в крови эндогенных блокатора М-ХР (ЭБМХР) и сенсибилизатора М-ХР (ЭСМХР). Однако способность СК модулировать эффективность активации М-ХР эндотелиоцитов не изучалась. Показано, что образующийся в организме лизофосфатидилхолин (ЛФХ) снижает эффективность активации М-ХР миокарда [33,55], ГМ желудка [36] и сосудов [240,252,273]. Это позволяет рассматривать ЛФХ в качестве компонента ЭБМХР [36,72,97,98]. Модулирует ли ЛФХ эффективность активации а-АР миоцитов сосудов — неясно. Ряд авторов [191,273] считают, что ЛФХ не влияет на этот процесс. Но в отношении миокарда лягушки и крысы показано [51], что ЛФХ снижает положительный инотропный эффект адреналина, а гистидин, тирозин, триптофан, милдронат, предуктал и СК восстанавливают его.
Учитывая, что вопрос о модуляции трансмембранной передачи сигнала от рецептора к клеточным эффекторам находятся в центре внимания исследователей [79], считали возможным более детально изучить его в отношении ГМ почечной артерии коровы (ПАК). Мышцы почечной артерии [23,25,124,134,155,189,241,258] и, особенно, ПАК [23,25] не часто становятся предметом физиологических исследований. В то же время, эффективность нервных и гуморальных регулирующих влияний на ГМ почечной артерии может иметь большое значение для функции почки как органа выделения и регулятора системного кровотока и гомеостаза. Все сказанное определило постановку цели и задач исследования.
Цель исследования — изучить характер сократительных ответов гладких мышц почечной артерии коровы на адреналин, ацетилхолин и гиперкалиевый раствор Кребса в зависимости от функционального состояния эндотелия и наличия в среде потенциальных эндогенных и экзогенных модуляторов хемореактивности — сыворотки крови, аминокислот, лизофосфатидилхолина, лекарственных препаратов.
Задачи исследования.
1. Изучить характер сократительных ответов циркулярных полосок почечной артерии коровы на гиперкалиевый раствор Кребса, адреналин и ацетилхолин, в том числе на полосках с интактным или поврежденным эндотелием, а также при действии ТЧ-нитро-Ь-аргининметилового эфира.
2. Исследовать влияние 10-, 104 500-, 100- и 50-кратных разведений сыворотки крови человека, лизофосфатидилхолина, гистидина, тирозина, триптофана, милдроната и предуктала на эффективность активации адреналином а-адренорецепторов гладких мышц почечной артерии коровы.
3. Оценить (на фоне тонуса, повышенного адреналином) влияние 10 103-, 500-, 100- и 50-кратных разведений сыворотки крови человека на эффективность активации ацетилхолином М-холинорецепторов циркулярных полосок почечной артерии с интактным или с поврежденным эндотелием.
Научная новизна. Дана комплексная физиологическая характеристика миоцитов ПАК как потенциального объекта изучения вопросов физиологии ГМ и эндогенных модуляторов а-адрено- и М-холинореактивности. Показано, что вазоконстрикторный эффект адреналина (10~6 г/мл) в отношении ГМ почечной артерии зависит от функционального состояния эндотелия — при интактном эндотелии он на 16-20% ниже, чем при поврежденном. В то же время вазоконстрикторный эффект адреналина не обусловлен влиянием адреналина на синтез NO. Показано, что лизофосфатидилхолин (ЛФХ) в концентрациях 10"7-10-4 г/мл дозозависимо и обратимо снижает тонус, вызванный адреналином (10"6 г/мл), т.е. проявляет а-адреноблокирующую активность. Это дает основание считать ЛФХ одним из компонентов эндогенного блокатора а -АР (ЭБААР). Выявлена способность СК (1:100 и 1:50, в том числе после хранения при -10°С в течение 6-месяцев), гистидина, тирозина и триптофана (все — 10~5 г/мл) повышать тонус, вызываемый адреналином, а также способность СК (1:104, 1:10 , 1:500, 1:100, 1:50), гистидина, тирозина, триптофана, милдроната и предуктала (все - 10~5 г/мл) восстанавливать адреналинвызванный тонус, сниженный ЛФХ. Это указывает на важную физиологическую роль ЭСААР и позволяет рассматривать гистидин, тирозин и триптофан в качестве компонентов ЭСААР и внутриклеточных шаперонов, восстанавливающих трансмембранную передачу сигнала от рецепторов, ассоциированных с G-белком, внутрь клетки, а милдронат и предуктал — как потенциальные экзогенные а-адреносенсибилизаторы и шапероны. На полосках с интактным эндотелием
АХ (10"6-10~5 г/мл) в условиях базального тонуса и тонуса, вызванного ГРК (60 мМ КС1) или адреналином (10~6 г/мл) проявляет релаксирующий эффект, что объясняется активацией М-ХР эндотелиоцитов. На фоне адреналинвызванного тонуса СК (1:10*, 1:103, 1:500, 1:100, 1:50) снижает проявление релаксирующего эффекта АХ, что говорит о способности эндогенного блокатора М-ХР (ЭБМХР) снижать эффективность активации М-ХР эндотелиоцитов.
Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты исследований расширяют представление о природе, механизме действия и роли эндогенных модуляторов хемореактивности прямого действия (ЭСААР, ЭБААР и ЭБМХР) в регуляции тонуса почечной артерии. Они углубляют знание об ЛФХ как о вторичном посреднике, в частности, о роли ЛФХ в регуляции а-адренореактивности ПАК, о роли эндотелия в реализации тонотропных эффектов катехоламинов и АХ, о роли гистидина, тирозина и триптофана (как компонентов эндогенных сенсибилизаторов |3-АР и а-АР), о механизме действия метаболических препаратов — милдроната и предуктала. Результаты исследования важны в методическом отношении, так как демонстрируют возможность использования ПАК как тест-объекта для оценки содержания в биологических жидкостях ЭБМХР, ЭСААР, ЭБААР. В целом, результаты исследования представляют интерес для физиологии гладких мышц, кровообращения, вегетативной нервной системы, эндокринной системы, а также для фармакологии, кардиологии и других разделов медицины.
Положения, выносимые на защиту:
1. Наличие функционально активного эндотелия, продуцирующего NO, снижает тонические ответы циркулярных полосок почечной артерии коровы (ПАК) на гиперкалиевый раствор (60 мМ КС1; на 16-40%) и на адреналин (10" 6 г/мл; на 16-20%).
2. Эффективность активации а-адренорецепторов (АР) миоцитов ПАК повышают 100- и 50-кратные разведения сыворотки крови человека (это объясняется наличием в ней эндогенного сенсибилизатора а-АР, или
ЭСААР), а также гистидин, тирозин и триптофан (10"5 г/мл), но снижает лизофосфатидилхолин (ЛФХ, Ю^-Ю"4 г/мл). Сыворотка крови аминокислоты, милдронат и предуктал восстанавливают эффективность активации а-АР, сниженную ЛФХ (10"6 г/мл).
3. В опытах с циркулярными полосками ПАК ацетилхолин (10"б-10"5 г/мл) оказывает эндотелийзависимый релаксирующий эффект на фоне базального тонуса и тонуса, вызванного ГРК (60 мМ КС1) или адреналином (10"6 г/мл). Сыворотка крови человека (1:104-1:50) снижает этот эффект (на фоне тонуса, вызванного адреналином), что объясняется наличием в ней эндогенного блокатора М-холинорецепторов (ЭБМХР) и его способностью снижать эффективность активации М-ХР эндотелиоцитов.
Внедрение. Результаты исследования используются в учебной и научной деятельности кафедры нормальной физиологии Кировской государственной медицинской академии, в том числе в разделе «Кровообращение», а также при исследовании свойств гладких мышц аорты крысы как потенциального объекта для идентификации ЭСААР и ЭБААР в крови беременных женщин.
Апробация работы. Результаты исследований докладывались на X Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Человек и его здоровье» (С-Петербург, 2007), на научной сессии Вятского ГГУ (Киров, 2007), на IX Всероссийской школе-конференции по физиологии кровообращения (Москва, 2008). Они были представлены в материалах IX Всероссийской школы-конференции по физиологии кровообращения (Москва, 2008), I Всероссийской молодёжной научной конференции «Молодёжь и наука на Севере» (Сыктывкар, 2008) и на заочных электронных конференциях Российской академии естествознания (2006, 2007).
По материалам диссертации опубликовано 13 работ, в том числе 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК России. Все исследования, результаты которых представлены в диссертации, выполнены лично автором.
Заключение Диссертация по теме "Физиология", Кашин, Роман Юрьевич
выводы.
1. Циркулярные полоски почечной артерии коровы (ПАК), которые, независимо от функционального состояния эндотелия, не обладают спонтанной СА и имеют низкий базальный тонус, дозозависимо и обратимо повышают тонус под влиянием гиперкалиевого раствора (ГРК, 30-60 мМ
Q /Г
КС1) и адреналина (10" -10" г/мл). Наличие интактного эндотелия снижает тонические ответы на ГРК (60 мМ КС1) и адреналин (106 г/мл) соответственно на 16-40% и 16-20%.
2. Тонус полосок ПАК, вызванный адреналином (10 6 г/мл), снижается ницерголином (до 16.7% от его первоначальной величины), обзиданом (до 79.6%) и атенололом (до 64.5%), т.е. преимущественно он обусловлен активацией а-АР.
3. Тонус полосок ПАК, вызванный активацией а-АР адреналином (10"6 г/мл) на фоне обзидана (10"6 г/мл), повышается (до 128.0-135.6% от его первоначальной величины) под влиянием 100- и 50-кратных разведений сыворотки крови (СК) человека, что объясняется наличием в крови эндогенного сенсибилизатора а-АР (ЭСААР). Этот тонус также возрастает при действии аминокислот (10"5 г/мл) - гистидина (до 118.3-127.1%), тирозина (до 127.3-128.0%) и триптофана (до 124.9-143.0%), что позволяет рассматривать их в качестве компонентов ЭСААР.
4. Тонус полосок ПАК, вызванный активацией а-АР адреналином (10"6 г/мл) на фоне обзидана (Ю-6 г/мл), снижается лизофосфатидилхолином (ЛФХ, Ю^-Ю"4 г/мл) до 43.2-13.8% от его первоначального уровня. Это позволяет рассматривать ЛФХ в качестве компонента эндогенного блокатора а-АР (ЭБААР). Адреналинвызванный тонус, сниженный ЛФХ (10"" г/мл), восстанавливается под влиянием 104-5 0-кратных разведений СК человека (до 91.4-126.2% от первоначальной величины), гистидина (до 88.9%), тирозина (до 59.8%), триптофана (до 78.2%), милдроната (до 73.4%) и предуктала (до 78.0%). Эти же воздействия препятствуют проявлению а-адреноблокирующего эффекта ЛФХ, что в целом объясняется их способностью восстанавливать трансмембранную передачу сигнала от рецепторов внутрь клетки.
5. Констрикторный и релаксирующий эффекты ацетилхолина (АХ, 10~9-5x10"5 г/мл), реализуемые на циркулярных полосках ПАК за счет активации соответственно М-холинорецепторов (М-ХР) миоцитов и М-ХР эндотелиоцитов, зависят от концентрации АХ в среде, а также от функционального состояния миоцитов (базальный или вызванный тонус) и эндотелиоцитов (интактные, т.е. продуцирующие N0, — группа 1 или поврежденные - группа 2). Наличие интактных эндотелиоцитов повышает вероятность реализации релаксирующего эффекта АХ.
A) В условиях базального тонуса АХ (10"6-5х10~5 г/мл) на всех полосках вызывает двухфазный ответ — повышение тонуса, особенно выраженное в группе 2, и его снижение до исходного уровня или ниже, что более выражено в группе 1.
Б) На фоне тонуса, вызванного ГРК (60 мМ КС1), у полосок группы 1 превалирует релаксирующий эффект — АХ (10~6 и 10~5 г/мл) снижает тонус до 78.1% и 60.2% от начальной величины, а у полосок группы 2 доминирует констрикторный эффект — АХ (10"5 г/мл) повышает тонус до 149.3%.
B) На фоне тонуса, вызванного адреналином (10 6 г/мл), у полосок группы 1 констрикторный и релаксирующий эффекты АХ взаимно компенсированы - АХ (5x10"5 г/мл) не изменяет их тонус, а у полосок группы 2 доминирует констрикторный эффект — АХ (5x10"5 г/мл) вызывает транзиторный рост тонуса (до 127.9-138.4% от первоначальной величины).
6. Эндотелийзависимый релаксирующий эффект АХ (5x10"5 г/мл), наблюдаемый на фоне тонуса, вызванного адреналином (10"6 г/мл), снижается под влиянием 104-50-кратных разведений СК человека - в их присутствии у полосок группы 1 констрикторный эффект АХ становится доминирующим (т.е. как у полосок группы 2). Такая активность СК объясняется наличием в ней эндогенного блокатора М-холинорецепторов (ЭБМХР) и его способностью снижать эффективность активации М-ХР эндотелиоцитов.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.
1. Циркулярные полоски почечной артерии коровы (ПАК) рекомендуется использовать при изучении природы, механизма действия и физиологической роли эндогенных модуляторов а-адренореактивности, М-холинореактивности и факторов, продуцируемых эндотелием.
2. При исследовании потенциальных вазодилататоров в опытах с циркулярными полосками ПАК целесообразно вести наблюдения в условиях тонуса, повышенного гиперкалиевым (60 мМ КС1) раствором Кребса или адреналином (10б г/мл).
3. Рекомендуется исследовать возможность применения гистидина, тирозина, триптофана и экзогенных аналогов ЭСААР (милдроната, предуктала) при лечении заболеваний, вызванных дефицитом а-адренергических воздействий на артерии.
4. Перспективно дальнейшее исследование лизофосфатидилхолина (ЛФХ) как потенциального не селективного фактора, разобщающего передачу сигнала от рецепторов, ассоциированных с G-белком, внутрь клетки, и факторов, препятствующих его действию (сыворотка крови, аминокислоты, метаболические препараты).
5. При изучении патогенеза артериальной гипертензии целесообразно учитывать роль эндогенных модуляторов хемореактивности прямого действия, в том числе ЭСААР и ЭБМХР в регуляции тонуса сосудистых гладких мышц.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кашин, Роман Юрьевич, Киров
1. Абдрашитова Н.Ф. Особенности изменения свободнорадикального окисления в крови рабочих, контактирующих с озоном // Авиакосм, и экол. мед. 1999.-№1.-С.38-41,
2. Авакян А.Э., Ткачук В.А. Структурная и функциональная организация систем передачи сигнала через рецепторы, сопряженные с G-белками // Рос. физиол. ж. 2003. - Т.89, №2. - С.219-239.
3. Авдонин П.В., Ткачук В.А. Рецепторы и внутриклеточный кальций. -М.: Наука, 1994. С.29-42.
4. Азин А.Л., Васильев А.Г., Плеханов И.П. Роль ионов кальция в механизмах калиевой контрактуры гладких мышц // Физиол. ж. СССР. 1974. - Т.60, №5. - С.770-777.
5. Алабовский В.В., Болдырев А.А., Винокуров А.А., Щаврацкий В.Х. Действие гистидинсодержащих дипептидов в условиях ишемии и реперфузии изолированного сердца// Биохимия.- 1997.- Т.63, №1.- С.91-102.
6. Алехина С.П. Щербатнюк Т.Г. Озонотерапия: клинические и экспериментальные аспекты. Нижний Новгород: Литера, 2003. - 240 с.
7. Антонов С.М. Регуляция блока каналов NMDA-рецепторов проходящими ионами, и её функциональное значение // Рос. физиол. ж. -2004. Т.90, №8. - С.235.
8. Атаджанов М.А., Баширова Н.С., Усманходжаева А.И., Садыкова Г.Р., Таджибаева Х.Х. Спектр фосфолипидов в органах-мишенях при стрессе // Патфизиология и экспериментальная терапия. 1995. - №3. - С.46-48.
9. Бабская Н.Е., Ашмарин И.П. Действие дипептидов GLY-PRO, PRO-GLY, глицина и пролина на кардиотропные эффекты ацетилхолина // Бюл. эксперим. биол. и мед. -1998. Т.126, №8. - С. 139-141.
10. Баскаков М.Б., Медведев М.А. Механизмы межклеточной и внутриклеточной сигнализации в гладких мышцах // Мат. симпозиума посвящ. 115-летию каф. физиол. ТГУ и СГМУ.- Томск: СГМУ, 2004.- С.7-25.
11. Белизи С., Назарова И.А., Климова И.А., Прокофьев В.Н., Пушкина Н.В. Антиоксидантные свойства лактоферрина из женского молока // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1999. - Т.124, № 5. - С.523-525.
12. Белокрылов Г.А., Деревнина О.Н., Попова О.Я. Различия в иммунном ответе, фагоцитозе и детоксицирующих свойствах под влиянием пептидных и аминокислотных препаратов // Бюл. эксп. биол. и мед. 1996. - Т. 121, № 5.-С.509-512.
13. Бердышева Л.В. Кинетика ai-адренергической сократительной реакции семявыносящего протока крысы на фоне действия карбахола // Рос. физиол. журн. 2004. - Т.90, №8. - С.238.
14. Богачева Н.В., Гусев Н.Б. Структура и свойства кальдесмона и кальпонина// Усп. биол. химии. 1997. №37. - С.3-48.
15. Братухина С.В. Адренергический механизм при беременности и в родах, его роль в патогенезе слабости родовой деятельности // Дисс. . к.м.н. Киров, 1997. - 257с.
16. Власова М.А., Боровик А.С., Тимин Е.Н., Тарасова О.С., Родионов И.М. Влияние трансмурального давления на констрикторные реакции хвостовой артерии гипотензивных и нормотензивных крыс. // Бюлл. эксп. биол. и мед. 2003. - Т. 136, №7. - С.37-40.
17. Ворновицкий Е.Г., Ленькова Н.А., Василец Л.А., Ходоров Б.И. Положительное инотропное действие плазмы крови на папиллярную мышцу сердца кролика // Бюлл. эксп. биол. и медицины.- 1982.- Т.49, №10.- С. 10-13.
18. Воротников А.В., Крымскмй М.А., Ширинский В.П. Внутриклеточная сигнализация и фосфорилирование белков при сокращении гладких мышц. // Биохимия 2002. - Т.67, №12. - С.1587-1610.
19. Гаврилов В.Б., Лычковский А.В., Шостак Е.П., Конев С.В. Флуоресцентный анализ содержания тирозина в плазме крови // Ж. прикл. спектроскопии. 1998. - №3. - С.366-371.
20. Гланц С. Медико-биологическая статистика.- М.:Практика.1999. -459с.
21. Демина Н.Л. Роль эндогенных модуляторов а- и p-адрено- и М-холинореактивности в регуляции артериального давления и патогенезе артериальной гипертензии // Дис. . к.б.н. Киров, КГМА, 2007. - 164 с.
22. Демина Н.Л., Циркин В.И., Тарловская Е.И., Кашин Р.Ю. а- и Р-адрено-и М-холиномодулирующая активность сыворотки крови при артериальной гипертензии//Кардиоваскулярная терапия и профилактика, 2008. - №2. -С. 16-22.
23. Демина Н.Л., Циркин В.И., Тарловская Е.И., Костяев А.А. Альфа-адреномодулирующая активность сыворотки крови при артериальной гипертензии // Рос. кардиол. журнал. 2008. - №1 (69). - С.65-70.
24. Есимбетов А.Т. Изучение действия биологически активных соединений на Са2+-зависимые процессы в гладкомышечных клетках // Автореф. дисс. . к.б.н., Ташкент, 2006. - 19 с.
25. Западнюк В.И., Купраш Л.Н., Заика М.У. Аминокислоты в медицине, -Киев: Здоровье, 1982. С.139-151.
26. Капилевич Л.В., Носарев А.В., Дьякова Е.Ю., Ковалев И.В., Баскаков М.Б., Анфиногенова Я.Д., Фролов В.Н., Медведев М.А. Особенности регуляции гладких мышц сосудистой стенки легочной артерии кролика // Рос. физиол. ж. 2002. - Т.88, №4. - С.452-459.
27. Кисель М.А., Шадыро О.И., Юркова И.Л. Влияние лизофосфатидилхолина на радиционно-инициированное перекисное окисление липидов в липосомах. // Рад. биол. радиоэк. 2001. - №1. - С.20-23.
28. Кононова Т.Н. Роль эндогенных (3-адрено и М-холиномодуляторов в регуляции деятельности систем организма человека // Дис. . к.б.н., Киров, 2004. - 173 с.
29. Коротаева К.Н. Влияние лизофосфатидилхолина на эффективность активации М-холинорецепторов изолированного миокарда крысы // Молодежь и наука на Севере: Мат. докл. I всерос. молодежной научн. конф. Том II. Сыктывкар: Коми НЦ УрО РАН, 2008. С.226-228.
30. Красникова Т.Л., Габрусенко С.А. Р-адренергические рецепторы сердца в норме и при сердечной недостаточности // Успехи физиологических наук. — 2000. Т.31, №2. - С.35-50.
31. Куншин А.А. Влияние сыворотки крови человека на М-холино- и а-, Р~ адренореактивность гладких мышц желудка крысы // Автореф. дисс. . к.б.н. Киров, - 2006.- 23 с.
32. Куцарев И.П. Показатели жидкостных систем человека в норме: Справочник для врачей и клинических лаборантов. Ростов-на-Дону: «Феникс», 2003. - 110 с.
33. Лукьянцева Г.В., Сергеев И.Ю., Копылова Г.Н., Самонина Г.Е., Герман С.В. Влияние амилина на тонус изолированного кольцевого препарата аорты крысы // Бюл. эксперим. биол. и мед. 2001, - Т. 131, №10. - С.375-377.
34. Магазаник Л.Г. Большаков К.В., Гмиро В.Е., Тихонов Д.Б. Механизмы блокады открытых каналов НМДА рецепторов // Рос. физиол. журн. 2004. -Т.90, №8. - С.260-261.
35. Малкоч А.В., Майданник В.Г., Курбанова Э.Г. Физиологическая роль оксида азота в организме. 4.1. // Нефрология и диализ.-2000,- Т.2, №1.- С. 1-2.
36. Мальчикова С.В., Сизова Е.Н., Циркин В.И., Гуляева С.Ф., Трухин А.Н. М-холиноблокирующая активность сыворотки крови при остром коронарном инциденте и влияние на нее физических тренировок // Росс, физиол. ж. -2003. Т.89, №5. - С.556-563.
37. Марков Х.М. Оксид азота и сердечно-сосудистая система // Успехи физиол. наук. 2001. - Т.32, № з. С.49-65.
38. Морозова М.А. Роль нервных и гуморальных факторов в срочной регуляции p-адрспорсактивности миометрия человека и животных // Автореф. дис. . к.б.н. М.: МГТГУ, 2000. - 18 с.
39. Мушкамбаров Н.Н., Кузнецов C.JI. Молек. биология.- М., 2003. 544с.
40. Ноздрачев А.Д., Туманова Т.В., Дворянский С.А., Циркин В.И., Дармов И.В., Дробков В.И. Активность ряда аминокислот как возможных сенсибилизаторов p-адренорецепторов гладкой мышцы // Доклады РАН -1998. Т.363, №1. - С.133-136.
41. Носарев А.В., Капилевич Л.В., Дьякова Е.Ю., Ковалев И.В., Баскаков М.Б. Регуляция механического напряжения легочных артерий а- и Р-адреномиметиками // Рос. физиол. журн. 2004. - Т.90, №8. - С.508-509.
42. Осадчий Л.И., Балуева Т.В., Сергеев И.В. NO-зависимый механизм адренергической реакции системной гемодинамики // Бюлл. эксп. биол. и мед. 2005. - Т.140, №8. - С.124-126.
43. Осокина А. А. Клинико-лабораторная характеристика р-адренергического механизма при угрозе преждевременных родов // Автореф. . дис. к.м.н. Казань, 1998. - 20 с.
44. Пенкина Ю.А. Модуляция Р-адренореактивности изолированного миокарда при воздействии сыворотки крови и ряда веществ // Дис. . к.б.н. -Киров, КГМА, 2007. 161 с.
45. Подтетенев А.Д., Братчикова Т.В., Койташ Г.А. Регуляция родовой деятельности. М.: Изд-во РУДН, 2003. - 54 с.
46. Проказова Н.В., Звездина Н.Д., Коротаева А.А. Влияние лизофосфатидилхолина на передачу трансмембранного сигнала внутрь клетки. Обзор. //Биохимия. 1998. - Т.63, № 1. - С.38-46.
47. Прохоров В.Н. Патогенез нарушений кровоснабжения плода и пути их коррекции во время беременности и родов (на примере женщин с первичными формами ожирения) // Автореф. дис. . д.м.н. М., 2000. - 40 с.
48. Розен Б.В. Основы эндокринологии. М.: Изд-во МГУ, 1994. - 384 с.
49. Рудзит В.К. Диабетогенные метаболиты триптофана как причина сахарной болезни Рига: «Зинтане», 1981.-83 с.
50. Сазанов А.В., Ноздрачев А.Д., Циркин В.И., Дворянский С.А. О наличии эндогенного активатора синтеза Р-адренорецепторов (модулятора Р-адренореактивности косвенного действия) // Доклады РАН. 2000. - Т.372, №2.- С.272-275.
51. Сазанова М.Л. Влияние сыворотки пуповинной крови человека на гладкие мышцы матки и сосудов пуповины // Автореф. . дис. к.б.н. Киров, 2002. - 17 с.
52. Сергеев П.В., Шимановский Н.Л., Петров В.И. Рецепторы физиологически активных веществ. Волгоград: «Семь ветров», 1999. - 640 с.
53. Сидоренко Б.А., Преображенский Д.В. Ишемия миокарда: от понимания механизмов к адекватному лечению // Кардиология. 2000. - Т.40, №9 (приложение). - С. 106-119.
54. Сизова Е.Н. Физиологическая характеристика эндогенного сенсибилизатора p-адренорецепторов и других гуморальных компонентов Радренорецепторного ингибирующего механизма // Дисс. . к.б.н. Киров, 1998. - 289 с.
55. Сизова Е.Н., Циркин В.И., Дворянский С.А. Изучение роли эндогенных модуляторов хемореактивности в регуляции коронарного кровотока // Росс, физиол. журн. 2002а. - Т.88, № 7. - С.856-864.
56. Сизова Е.Н, Циркин В.И., Костяев А.А. Влияние озона на сократительную активность и хемореактивность продольной мускулатуры рога матки небеременных крыс // Рос. физиол. журн. имени И.М. Сеченова, 2003- Т.89.№ 4.- С.427-435.
57. Сизова Е.Н., Циркин В.И., Трухин А.Ы. Наличие в крови и ликворе человека эндогенных модуляторов М-холинорецепторов // Вестник Поморского университета.- 2004. № 6. - С.22-31.
58. Сизова Е.Н., Циркин В.И., Туманова Т.В., Костяев А.А. Способность гистидина, триптофана, тирозина, триметазидина, милдроната и сыворотки крови уменьшать p-адреноблокирующий эффект озона // Современные наукоемкие технологии 2004. - №3. - С.21-26.
59. Сизова Е.Н. Физиологическая характеристика эндогенных модуляторов Р-адрено- и М-холнореактивности и их участие в регуляции деятельностиразличных систем организма человека и животных // Дисс.докт. биолол.наук.- Киров, 2005. -267 с.
60. Сизова Е.Н., Циркин В.И. Физиологическая характеристика эндогенных модуляторов p-адрено- и М-холинореактивности. Киров: Изд-во ВСЭИ, 2006.- 183 с.
61. Суслова И.В., Коротаева А.А., Проказова Н.В. Изменение параметров равновесного связывания ЗН-хинуклидинилбензилата на мембранах предсердия кролика под действием лизофосфатидилхолина // Докл. РАН: -1995. Т.342, №2. - С.273-276.
62. Талаева Т.В., Шумаков В.А., Братусь В.В. Энергетический метаболизм миокарда в условиях коронарной недостаточности; возможности его фармакологической коррекции // Укр. кардюл. ж. 2005. - №3. - С.9-16.
63. Тарасов Н.И., Коков А.Н., Барбараш JI.C. Влияние триметазидина на послеинфарктное ремоделирование левого желудочка // Терапевт, арх. 2005. - Т.77, №8. - С. 10-14.
64. Терещенко С.Н., Голубев А.В., Косицына И.В., Джаиани Н.А., Кочетов
65. A.Г. Триметазидин MB в комплексной терапии острого инфаркта миокарда на фоне сахарного диабета 2-го типа // Кардиология.-2006.-Т.46,№2.-С.З1-34.
66. Ткачук В.А., Авакян А.Э. Молекулярные механизмы сопряжения G-белков с мембранными рецепторами и системами вторичных посредников // Росс, физиол. журн. 2003. - Т.89, №12. - С.1478-1490.
67. Ткачук В.А. Рецепция и внутриклеточная сигнализация // Современный курс классической физиологии (избранные лекции). Под ред. Ю.В. Наточина,
68. B.А.Ткачука. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - С.325-348.
69. Трухин А.Н. Влияние эндогенных модуляторов 3-адрено- и М-холинорецепторов на хемореактивность миометрия, миокарда и вариабельность сердечного ритма // Дис. . к.б.н. Киров, 2003. - 287с.
70. Трухин А.Н., Циркин В.И., Сизова Е.Н. Повышение р-адренореактивности миокарда лягушки под влиянием гистидина // Бюлл. эксп. биологии и медицины. 2004. - Т.138, №8. - С.144-131.
71. Туманова Т.В. Изучение природы эндогенного сенсибилизатора 3-адренорецепторов и других факторов, регулирующих сократимость и адренореактивность гладких мышц // Дис. . к. б. н. Киров, 1998. - 236с.
72. Туманова Т.В., Сизова Е.Н., Циркин В.И. Способность L-гистидина снижать десенситизацию миометрия к адреналину // Бюлл. эксп. биологии и медицины. 2004. - Т.138, №10. - С.364-367.
73. Ульянинский JI.C., Звягинцева М.А., Кошарская И.Л. Пептид дельта-сна как модулятор действия медиаторов на сердце // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1990. - Т. 109, №5. - С.419-420.
74. Федосеев Г.Б. Механизмы обструкции бронхов.-СПб.:МИО,1995.-336 с.
75. Хлыбова С.В., Циркин В.И., Дворянский С.А. Роль системы L-аргинина-оксида азота в регуляции висцеральных функций в обеспечении гестационного процесса. Киров: КГМА, 2007. - 178с.
76. Хобот В.В., Горбаченков А.А. Благоприятный эффект триметазидина в постинфарктном периоде. Клиническое состояние, функция левого желудочка // Кардиология. 2004. - Т.44, №11.- С.28-33.
77. Циркин В.И., Дворянский С.А., Ноздрачев А.Д., Заугольников B.C., Сизова Е.Н. Повышение Р-адренореактивности коронарных артерий под влиянием сыворотки крови // Доклады РАН. 1996. - Т.351, № 4. - С.565-566.
78. Циркин В.И., Дворянский С.А. Сократительная деятельность матки (механизмы регуляции).- Киров, 1997. 270с.
79. Циркин В.И. Трухина С.И. Физиологические основы психической деятельности и поведения человека. М.: Медицинская книга, 2001. - 524с.
80. Циркин В.И., Ноздрачев А.Д., Сизова Е.Н., Мальчикова С.В., Гуляева5
81. С.Ф. Изменение содержания в крови эндогенных модуляторов Р-адрено- и М-холинореактивности под влиянием физических тренировок у лиц, перенесших инфаркт миокарда // Бюлл. эксп. биологии и медицины. 2003а. -Т. 136, №7. - С. 18-22.
82. Циркин В.И., Ноздрачев А.Д., Сазанова М.Л., Дворянский С.А., Хлыбова С.В. Утероактивные, Р-адреномодулирующие и М-холиномодулирующие свойства сыворотки пуповинной крови человека // Доклады РАН. 20036 - Т.388, № 5. - С.704-707.
83. Циркин В.И., Ноздрачев А.Д., Сизова Е.Н., Туманова Т.В. Изучение физиологических свойств эндогенного сенсибилизатора Р-адренорецепторов (ЭСБАР) и его возможных компонентов // Доклады РАН 2004. - Т.398, №4. -С.563-566.
84. Циркин В.И., Ноздрачев А.Д., Куншин А.А. Влияние сыворотки крови человека на М-холинореактивность гладких мышц желудка крысы // Доклады РАН. 2007а. - Т.414, №3. - С.419-422.
85. Циркин В.И., Кононова Т.Н., Сизова Е.Н., Попова И.В., Вахрушева А.С. О возможной роли эндогенных модуляторов Р-адрено- и М-холинореактивности в патогенезе бронхиальной астмы // Пульмонология. -20076. №5. - С.46-50.
86. Циркин В.И., Кононова Т.Н., Сизова Е.Н., Попова ИВ., Вахрушева А.С. Изменение p-адрено- и М-холиномодулирующей активности сывороткикрови и мочи при бронхиальной астме // Физиология человека. 2008. - Т.34, - №3. - С.1-4.
87. Чучалин А.Г. Бронхиальная астма.- М.:ИД «Русский врач»,2001.- 144 с.
88. Шаленкова М.А., Алексеева О.П., Крипггопенко С.В., Семенова А.К. Анализ совместного применения метопролола и триметазидина для лечения стабильной стенокардии на основе построения фукнции эффективности // Нижегор. мед. ж., 2005. - №2. - С.58-60.
89. Шишкина Г.Т., Дыгало Н.Н. Подтип-специфические клинически важные эффекты а2-адренорецепторов // Успехи физиологических наук. -2002. Т.ЗЗ, №2. - С.30-40.
90. Шмушкович Б.И., 2001 цит. по Чучалин А.Г. Бронхиальная астма. -М.: ИА «Русский врач», - 2001. - 144с.
91. Шуба М.Ф., Кочемасова Н.Г. Физиология сосудистых гладких мышц. Киев: Наук. Думка, 1988. 252с.
92. Шушканова Е.Г. Механизмы регуляции адренореактивности миометрия человека и животных // Автореф. дисс. . к.б.н. М. 1997. - 17 с.
93. Aggen J., Nairn A. Chamberlin, R Regulation of protein phosphatase-1 // Chem. Biol. 2000. - Vol.7, №1, - R13-R23.
94. Alabadi J., Miranda F., Llorens S., Ruiz de Apodaca R., Centeno J., Alborch E. Diabetes potentiates acetylcholine-induced relaxation in rabbit renal arteries // Eur. J. Pharmacol. 2001. - Vol.415, №2-3. - P.225-232.
95. Asaoka Y., Yoshida K., Sasaki Y., Nishizuka Y. Possible role of mammalian secretory group II phospholipase A2 in T-lymphocyte activation: implication in propagation of inflammatory reaction // Proc. Natl. Acad Scl. USA, 1993. -Vol.90.-P.4917-4921.
96. Ballesteros J., Kitanovic S., Guarnieri F. Functional microdomains in G-protein-coupled receptors. The conserved arginine-cage motif in the gonadotropin-releasing hormone receptor // J. Biol. Chem. 1998. - Vol.273. - P. 10445-10453.
97. Bartlett I., Marshall J. Analysis of the effects of graded levels of hypoxia on noradrenaline-evoked contraction in the rat iliac artery in vitro // Exp. Physiol. -2002. Vol.87, №2. - P.171-184.
98. Baselli E., Brandes S., Luthin G., Ruggeri M. The effect of pregnancy and contractile activity on bladder muscarinic receptor subtypes // Neurourol. and Urodyn. 1999. - Vol.18, №5. - P.511-520.
99. Baysal F., Onder S., Ozgul M., Toygar A. The effect of potassium on frog stomach muscle //Br. J. Pharmacol. 1979 - Vol.66, №2 - P.303-306.
100. Belokrylov G., Derevnina O., Molchanova I., Sorochinskaya E. Immuno-, phagocytosis-modulating, and antitoxic properties of amino acids and peptide preparations // Drug. Dev. and Ind. Pharm. 1998. - Vol.24, №2. - P.l 15-127.
101. Bessems M., Doorschodt В., Albers P., Meijer A., van Gulik T. Wash-out of the non-heart-beating donor liver: a matter of flush solution and temperature? // Liver Int. 2006. - Vol.26, №7. - P.880-888.
102. Bordeleau L., Gailis L., Fournier D., Morissette M., Di Paolo Т., Daleau P. Cut-off phenomenon in the protective effect of alcohols against lysophosphatidylcholine-induced calcium overload // Pflugers Arch. 2005. -Vol.450, №5. - P.292-297.
103. Canelo R., Hakim N., Ringe B. Experience with hystidine tryptophan ketoglutarate versus University Wisconsin preservation solutions in transplantation //Int. Surg.-2003.-Vol.88, №3. -P.145-151.
104. Carter R., Kanagy N. Tyrosine kinases regulate intracellular calcium during cb-adrenergic contraction in rat aorta // Amer. J. Physiol. 2002. - V.283, №4. -H1673-H1680.
105. Chelly J., Tsao G., Nath R. Doursout M., Buckley J. Effects of norepinephrine on the dog common carotid, coronary and renal arteries in vitro studies // Eur. J. Pharmacol. 1986. - Vol.120, №1. - P. 137-139.
106. Chen M., Xiao C.-Y., Hashizume H., Abiko Y. Phospholipase A2 is not responsible for lysophosphatidylcholine-induced damage in cardiomyocytes // Amer. J. Physiol. 1998. Vol.275, №5. - H1782-H1787.
107. Cirano G., Cicale C., Sorrentino R. Indomethacini impairs ex vivo aorta contraction to phenylepinephrine and KC1 of lipopolysaccharide treated rats // Brit. J. Pharmacol. 1992. - Vol.105, Suppl. - 104P.
108. Coleman В., Patel D., Carpentier R. Adrenergic-mediated effects of cocaine on force-frequency relationship // FASEB J. 1997. - Vol.11, №3. - P.498.
109. Conigrave A., Quinn S., Brown E. L-amino acid sensing by the extracellular Ca2+-sensing receptor //Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-2000.-Vol.97,№9.-P.4814-4819.
110. Datte J., Gohlke P., Pees C., Ziegler A. At receptor inhibition affects the noradrenaline sensitivity in isolated portal vein of normotensive rat // J. Cell Biol. -2000. Vol.148, №2. - P. 177-187.
111. Davis L., Magness R., Rosenfeld Ch. Role of angiotensin 11 and a-adrenergic receptors during estrogen-induced vasodilatation in ewes // Amer. J. Physiol. 1992. - Vol.263, №5, pt 1. - P.837- 843.
112. Degrace P., Demizieux L., Gresti J., Tsoko M., Andre A., Demaison L., Clouet P. Fatty acid oxidation and related gene expression in heart depleted of carnitine by mildronate treatment in the rat // Mol. and Cell Biochem. 2004. -Vol.258, №1.-C.171-182.
113. Doelman C., Kramer K., Trimmerman H., Bast A. Vitamin E and selenium regulates balance between P-adrenergic and muscarinic responses in rat lungs // FEBS lett. 1988. - Vol.233, №2. - P.427-431.
114. Duo Q., Huang H., Xie Z., Zheng X., Liao D. Защитное действие онихина при вызываемом лизофосфатидилхолином нарушении эндотелийзависимой вазорелаксации. кит. // Zhongguo dongmai yinghua zazhi.- 2001. - Vol.9, №1. - P.27-30.
115. Enkhjargal В., Hashimoto M., Kinoshita H., Sakai Y. Characteristics of contractile activity in the renal artery of ovariectomized rats // J. Smooth Muscle Res. 2008. - Vol.44, №1. - P. 17-28.
116. Ezimokhai M. Human chorionic gonadotrophin alters isolated vascular smooth muscle reactivity // Hypertens. Pregnancy. 2000. - Vol.19, №1. - P.150.
117. Farmer M., Roberts R., Gardiner S., Ralevic V. Effects of in vivo lipopolysaccharide infusion on vasoconstrictor function of rat isolated mesentery, kidney, and aorta // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003. - Vol.306, №2. - P.538-545.
118. Fearon I. OxLDL enhances L-type Ca currents via lysophosphatidylcholine-induced mitochondrial reactive oxygen species (ROS) production // Cardiovasc Res. 2006. - Vol.69, №4. - P.855-864.
119. Flavahan N. Lysophosphatidylcholine modifies G protein-dependent signaling in porcine endothelial cells // Am. J. Physiol. 1993. - Vol.264, № 3, Pt2. - H722-H727.
120. Floras J. Sympathoingibitory effects of atrial natriuretic factor in normal humans // Circulation. 1990. - Vol.81, №6. - P.1860-1873.
121. Freedman R., Sabharwal S., Moten M., Migagly P. Local temperature modulates ar and a2- adrenergic vasoconstriction in man // Amer. J. Physiol.-1992. Vol.263, №4, pt.2. - HI 197- H1200.
122. Furchgott R., Zawadzki J. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine // Nature 1980. - Vol.288. -P.373-376.
123. Furghott R., Vanhoutte P. Endothelium-derived relaxing and contracting factors // FASEB J.- 1989.-Vol.3.- P.2007-2017.
124. Gailis L., Lamarche J., Boudriau S., Chahine M., Daleau P. Ethanol delays and reverses lysophosphatidylcholine-induced calcium overload in neonatal rat heart cells // Pflugers Arch.- 2001.- Vol. 443, №1.- P. 48-53.
125. Garcia R., Thibault G., Cantin M., Genest J. Effect of a purified atrial natriuretic factor on rat and rabbit vascular strips and vascular beds // Am. J. Physiol. 1984. - Vol.247, №1, Pt2. - R34-R39.
126. Geire S., Muller-Strahl G., Zimmer H. The inotropic response of the isolated, perfused, working rat heart to norepinephrine is attenuated by inhibition of nitric oxide // Basic Res. Cardiol. 2002. - Vol.97, №2. - P.145-152.
127. Gether U., Kobilka B. G-protein-coupled receptors. II. Mechanism of agonist activation // J. Biol. Chem. 1998. - Vol.273. - P.17979-17982.
128. Gorpinchenko E.I. The role of renal beta-adrenoreceptors in regulating its blood supply and urine formation // Fiziol. Zh. SSSR. -1976. Vol.62, №5. -P.776-782.
129. Hachiro Y., Muraki S., Abe Т. Экспериментальное изучение защиты миокарда с использованием ретроградной перфузии раствора ГТК (гистидин-триптофан-кетоглутарат) через коронарный синус — яп. // Sapporo igaku zasshi 1997. - №6. - Р.305-315.
130. Hashizume H., Hogue A., Magishi et al. A new approach to the development of antiischemic drugs. Substances that counteract the deleterious effect of lysophosphatidylcholine on the heart // Jpn. Heart J. 1997. - №1. - P. 11-25.
131. Hausdorff W., Caron M., Lefkowitz R. Turning of the signal: desensitization of P-adrenergic receptor function // FASEB Journal. 1990. - Vol.4, №11. -P.2881-2899.
132. Henrion D., Dowell F., Levy В., Michel J. In vitro alteration of aortic vascular reactivity in hypertension induced by chronic NG-nitro-L-arginine methyl ester // Hypertension. 1996. - Vol.28, №3. - P.361-366.
133. Hesse I., Johns E. An in vivo study of the alpha-adrenoreceptor subtypes on the renal vasculature of the anaesthetized rabbit // J. Auton. Pharmacol. 1984. -Vol.4, №3.-P.145-152.
134. Higashijima Т., Burnier J., Ross E. Regulation of Gi and Go by mastoparan, related amphiphilic peptides, and hydrophobic amines. Mechanism and structural determinants of activity // J. Biol. Chem. 1990.- Vol.265, №24.- P. 14176-14186.
135. Hiramatsu M., Murai M., Kameyama T. Different modulation of cholinergic neuronal systems by dynorphin A (1-13) in carbon monoxide-exposed mice // Biochem. Pharmacol. 1999. - Vol.57, №11. - P.1321-1329.
136. Holmer S., Susanni E., Tobise K. et al. Development regulation of myocardial beta- receptor adenylat cyclase transduction system // Eur. Heart. J. -1991. Vol.12, Suppl. - P.223.
137. Hool L., Middleton L., Harvey R. Genistein increases the sensitivity of cardiac ion channels to P-adrenergic receptor stimulation // Circ. Res. 1998. -Vol.83, №l.-P.33-42.
138. Horio Sh., Fukui H. Inhibition of oxotremorine-induced desensitization of guinea-pig ileal longitudinal muscle in Ca2+-free conditions // J. Pharm. and Pharmacol. 2001. - Vol.53, №2. - P.249-254.
139. Horowitz A., Menice C., Laporte R., Morgan K. Mechanisms of smooth muscle contraction // Physiol. Rev. 1996. - Vol.76, №4 - P.967-1003.
140. Ichikawa K., Ito M., Hartshorne D. Phosphorylation of the large subunit of myosin phosphatase and inhibition of phosphatase activity // J. Biol Chem. — 1996.- Vol.271, №9. P.4733-4740.
141. Ignarro L., Napoli C., Loscalzo J. Nitric oxide donors and cardiovascular agents modulating the bioactivity of nitric oxide // An. overview Circ. Res. 2002.- Vol.90, №l.-P.21-28.
142. Ito M., Feng J., Tsujino S., Inagaki N., Inagaki M., Tanaka, J., Ichikawa K., Hartshorne D., Nakano T. Interaction of smooth muscle myosin phosphatase with phospholipids // Biochemistry 1997. - Vol.36, №24. - P.7607-7614.
143. Iwata Т., Honda H. Acute hyperthyroidism alters adrenoceptor- and muscarinic receptor-mediated responses in isolated rat renal and femoral arteries // Eur. J. Pharmacol. 2004. - Vol.493, №1-3. - P. 191-199.
144. Julou-Schaeffer G., Freslon J. Effects of ryanodine on tension development in rat aorta and mesenteric resistance vessels // Br. J. Pharmacol. 1988. - Vol.95, №2. - P.605-613.
145. Kaminski R., Zolkowska D., Kozicka M., Kleinrok Z., Czuczwar S. L-histidine is a beneficial adjuvant for antiepileptic drugs against maximal electroshock-induced seizures in mice //Amino Acids.-2004.-Vol.26, №l.-P.85-89.
146. Kawaguchi Т., Koehler R., Brusilow S., Traystman R. Pial arteriolar dilation to acetylcholine is inhibited by ammonia-induced increases in glutamine // FASEB Journal. 1997. - Vol.11, №3. - P.486.
147. Kelley C., Sellers J., Goldsmith P., Adelstein R. Smooth muscle myosin is composed of homodimeric heavy chains // J. Biol. Chem. 1992. - Vol.267, №4. -P.2127-2130.
148. Kikuta K., Sawamura Т., Miwa S., Hashimoto N., Masaki T. High-affinity arginine transport of bovine aortic endothelial cells is impaired by ^phosphatidylcholine // Circ. Res. 1998. - Vol.83, №11. - P.1088-1096.
149. Kitazawa Т., Masuo M., Somlyo A. G protein-mediated inhibition of myosin light-chain phosphatase in vascular smooth muscle // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. -1991. Vol.88, №20. - P.9307-9310.
150. Kwan C., Zhang W., Kwan Т., Sakai Y. In vitro relaxation of vascular smooth muscle by atropine: involvement of K+ channels and endothelium // Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 2003. - Vol.368, №1. - P.l-9.
151. Kwon S. Mechanisms of NO-resistant relaxation induced by acetylcholine in rabbit renal arteries // J. Vet. Med. Sci. 2001. - Vol.63, №1. - P.37-40.
152. Lambert I., Falktoft B. Lysophosphatidylcholine induces taurine release from HeLa cells //J. Membr. Biol. 2000. - Vol.176, №2 - P. 175-185.
153. Lefkowitz R., Cotecchia S., Samama P., Costa T. Constitutive activity of receptors coupled to guanine nucleotide regulatoiy proteins // Trends Pharmacol. Sci. 1993. - Vol.14. - P.303-307.
154. Lew M., Angus J. Vascular responses to sympathetic nerve stimulation in vitro are enhanced by vasoconstrictors at subthreshold concentration // Proc. Austral. Physiol, and Pharmacol. Soc. 1992. - Vol.23, №1. - P.46.
155. Li J., Xu В., He J. Исследование соотношения бета-адренорецепторов и связанного с L-аргинином/оксидом азота метаболического пути in vivo — кит. // Zhongguo bingli shengli zazhi. 2001. - Vol.17, №1. - P.842-844.
156. Liggett S., Caron M., Lefkowitz R., Hnatowich M. Coupling of a mutated form of the human p2-adrenergic receptor to Gi and Gs. Requirement for multiple cytoplasmic domains in the coupling process // J. Biol. Chem. 1991 - Vol.266, №8.-P.4816-4821.
157. Liu Q., Hofmann P. Antiadrenergic effects of adenosine Al receptor-mediated protein phosphatase 2a activation in the heart // Am. J. Physiol. 2002. -Vol.283, №4. - H1314-H1321.
158. Lu Zhi-Zhen, Zhang You-Yi, Dong Er-Dan, Han Qi-De Характеристика опосредованной а2-адренорецепторами контрактильной реакции изолированной аорты крыс — кит. // Shengli xuebao. 2001. - Vol.53, №3 -Р.188-192.
159. Lundvall J., Hillman J., Gustafsson D. Beta-adenergic dilator effects in consecutive vascular sections of skeletal muscle // Amer. J. Physiol. 1982. -Vol.243, №5. - H819-H829.
160. Lyles G., Birrell C., Banchelli G., Pirisino R. Amplification of alpha 1D-adrenoceptor mediated contractions in rat aortic rings partially depolarised with KC1 // Pharmacol Res. 1998. - Vol.37, №6. - P.437-454.
161. Maigaard S., Forman A., Andersson K.-E. Relaxant and contractile effects of some amines and prostanoids in the myometrial and vascular smooth muscle within the human uteroplacental unit // Acta Physiol. Scand. 1986. - Vol.128, №1. - P.33-40.
162. Makita Y. Effects of adrenoceptor agonists and antagonists on smooth muscle cells and neuromuscular transmission in the guinea-pig renal artery and vein//Brit. J. Pharmacol. 1983. - Vol.80, №4. - P.671-679.
163. Malmqvist U., Arner A. Correlation between isoform composition of the 17 kDa myosin light chain and maximal shortening velocity in smooth muscle // Pflug. Arch. 1991. - Vol.418, №6. - P.523-530.
164. Matsumoto Т., Kobayashi Т., Kamata K. Mechanisms underlying lysophosphatidylcholine-induced potentiation of vascular contractions in the Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty (OLETF) rat aorta // Br. J. Pharmacol. -2006. Vol.149, №7. - P.931 -941.
165. Matsumura Y., Egi Y., Maekawa H. et al. Enhancement of norepinephrine and angiotensin II-induced renal effects by NG-nitro-L-arginine, a nitric oxide synthase inhibitor // Biol, and Pharm. Bull. 1995. - Vol.4. - P.496-500.
166. Maul H., Longo M., Saade G., Garfield R Nitric oxide and its role during pregnancy: from ovulation to delivery // Curr Pharm Des. 2003. - Vol.9, №5. -P.359-380.
167. Menon N., Pataricza J., Zehetgruber M., Bing R. A model to study physiological activation of phospholipase-A2 and vasorelaxation by ^phosphatidylcholine // Life Sciences. 1990. - Vol.47, №21. - P. 1941-1949.
168. Mizukawa H., Okabe E. Inhibition by singlet molecular oxygen of the vascular reactivity in rabbit mesenteric artery // Brit. J. Pharmacol. 1997. -Vol.120, №l.-P.63-70.
169. Moore P., Laporte J., Gonzalez S. et al. Glucocorticoids ablate IL-lp-induced p-adrenergic hyporesponsiveness in human airway smooth muscle cells // Amer. J. Physiol. 1999. - Vol.277, №5. - L932-L942.
170. Nakamura Y., Yasukochi M., Kobayashi S., Uehara K., Honda A., Inoue R., Imanaga I., Uehara A. Cell membrane-derived lysophosphatidylcholine activates cardiac ryanodine receptor channels // Pfliigers Archiv. 2007. -Vol.453, №4. - P.455-462.
171. Nakane Т., Itoh N., Chiba S. Responses of isolated and perfused dog coronary arteries to acetylcholine, norepinephrine, KC1, and diltiazem before and after removal of the endothelial cells by saponin // Heart Vessels. 1986. - Vol.2, №4. -P.221-227.
172. Nakanishi T. Test for analysing nerve conduction velocity // Rinsho Shinkeigaku. 1991. - Vol.31, №2. - P.1326-1329.
173. Naruta K., Osa Т., Inouc H. Comparison of Mg, Mn, and Co ions affecting the b-adrenoceptor-mediated membrane response in the guinea-pig taenia caeci // Jap. J. Physiol. 1989. - Vol.39, №5. - P.659-671.
174. Nishizuka Y. Intracellular signaling by hydrolysis of phospholipids and activation of protein kinase С // Science. 1992. - V.258. - P.607-614.
175. Ohara Y., Peterson Т., Zheng В., Kuo J., Harrison D. Lysophosphatidylcholine increases vascular superoxide anion production via protein kinase С activation // Atherscler. Thromb. 1994. - Vol.14. - P.1007-1013.
176. Oishi K., Raynor R., Charp P., Kuo J. Regulation of protein kinase С by lysophospholipids. Potential role in signal transduction // J. Biol. Chem. 1988. -Vol.263.-P.6865-6871.
177. Ota Y., Kugiyama K., Sugiyama S., Matsumura Т., Terano Т., Yasue H. Complexes of apoA-1 with phosphatidylcholine suppress dysregulation of arterial tone by oxidized LDL // Amer. J. Physiol. 1997. - Vol.273, №3. - H. 1215-1222.
178. Paegelow I., Schonfelder G., Nitschkoff S., Flegel B. Reactivity of isolated arteries from hypertensive rabbits // Acta. Biol. Med. Ger. 1976. - Vol.35, №10. -P.1301-1310.
179. Pang J., Xu X., Li H. et al. Inhibition of P-estradiol on trachea smooth muscle contraction in vitro and in vivo // Acta Pharmacol. Sin. 2002. - Vol.23, №3. - P.273-277.
180. Patterson R., Leake D. Human serum, cysteine and histidine inhibit the oxidation of low density lipoprotein less at acidic pH // FEBS Lett. 1998. - Vol.3. -P.317-321.
181. Persad S., Rupp H., Jindal R., Arneja J., Dhalla N. Modification of cardiac P-adrenoceptor mechanisms by Н2Ог // Amer. J. Physiol. 1998. - Vol.274, №2. -P.416-423.
182. Petroianu A., Weinberg J. Motility of isolated mammalian gastric fundus // Сотр. Biochem. Physiol. 1986. - Vol.85, №1. - 51-59.
183. Qian Z-Y., Miao Y., Dai C., Xu Z., Liu X. Combined multiple organ resection in 16 patients with adenocarcinoma of the body or tail of the pancreas — кит. // Zhongguo Yi Xue Ke Xue Yuan Xue Bao.-2005.-Vol.27, №5.-P.572-574.
184. Rivas-Arancibia S., Vazquez-Sandoval R., Gonzalez-Kladiano D., Schneider-Rivas S., Lechuga-Guerrero A. Effects of ozone exposure in rats on memory and levels of brain and pulmonary superoxide dismutase // Environ Res. -1998.-Vol.76, №l.-P.33-39.
185. Rogausch H. The effect of lysolecithin on contractile force of isolated gastric smooth muscle //Res. Exp. Med. (Berl). 1978. - Vol.173, №1. - P.9-15.
186. Rubio E., Tomas F., Espejo M., Santonja J., Martinez-Mir I. Study of the spontaneous motility and effect of histamine on isolated myometrial strips from patients with GnRH analog-treated myoma // Meth. and Find. Exp. and Clin. Pharmacol. 1999. - P.48.
187. Samb A., Taille C., Almolki A. et al. Heme oxygenase modulates oxidant-signaled airway smooth muscle contractility: Role of bilirubin // Amer. J. Physiol. 2002. - Vol.283, №3. - L596-L603.
188. Sasaki, Y., Asaoka Y., Nishizuka Y. Potentiation of diacylglycerol-induced activation of protein kinase С by lysophospholipids. Subspecies difference // FEBS Lett. 1993. - Vol.320. - P.47-51.
189. Semercioz A., Onur R., Ayar A., Orhan I. The inhibitory role of melatonin on isolated guinea-pig urinary bladder: an endogenous hormone effect // BJU Int. -2004. Vol.94, №9. - P.1373-1376.
190. Shadyro O., Kisel R., Vysotskii V., Edimecheva I. Effects of vitamins, coenzymes and amino acids on reactions of homolytic cleavage of the O-glycoside bond in carbohydrates // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2006. - Vol.16, №18. -P.4763-4766.
191. Shirazi S., Schulze-Delrieu K. Selectivity of histamine for the proximal muscle loop of the cat pylorus // Arch Int Pharmacodyn Ther. 1984. - Vol.271, №2. - P.282-292.
192. Shirinsky V., Birukov K., Hettasch J., Sellers J. Inhibition of the relative movement of actin and myosin by caldesmon and calponin // J. Biol. Chem. -1992. Vol.267, №22. - P.15886-15892.
193. Singh K., Xiao L., Remondino A. et al. Adrenergic regulation of cardiac myocyte apoptosis // J. Cell. Physiol. 2001. - Vol.189, №3. - P.257-265.
194. Soltis E., Cassis L. Influence of perivascular adipose tissue on rat aortic smooth muscle responsiveness // Clin. Exp. Hypertens. A. 1991. - Vol.13, №2. -P.277-296.
195. Somlyo A., Somlyo A. Electromechanical and pharmacomechanical coupling in vascular smooth muscle // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1968. - Vol.159, №1. - P.129-145.
196. Somlyo A., Somlyo A. Signal transduction and regulation in smooth muscle //J. Physiol. (Lond). 2000. - Vol.522. - P. 177-185.
197. Sterin A., Goldray A., Gimeno M. et al. In vitro contractile responses of the uterus from "restricted died" rats to adrenoceptor agonists. Influence of Cyclooxigenase inhibitors // Eur. J. Pharmacol. 1983. - Vol.90, №4. - P.411-417.
198. Strader C., Candelore M., Hill W., Sigal I., Dixon R. Identification of two serine residues involved in agonist activation of the p-adrenergic receptor // J. Biol. Chem. 1989. - Vol.264. - P.13572-13578.
199. Suenaga H., Kamata K. Marked dissociation between intracellular Ca2+ level and contraction on exposure of rat aorta to lysophosphatidylcholine // Eur. J. Pharmacol. 1999. - Vol.378, №2. - P. 177-186.
200. Sum Ch., Park P., Wells J. Effects of N-ethylmaleimide on conformational equilibria in purified cardiac muscarinic receptors // J. Biol. Chem. 2002. -Vol.277, №39. - P.36188-36203.
201. Taddei S., Virdis A., Ghiadoni L. et al. Age-related reduction of NO availability and oxidative stress in humans // Hypertension. 2001. - Vol.38, №2. -P.274-279.• 2+
202. Takenouchi Т., Sato M., Kitani H. Lysophosphatidylcholine potentiates Cainflux, pore formation and p44/42 MAP kinase phosphorylation mediated by P2X7 receptor activation in mouse microglial cells // J. Neurochem. 2007. - Vol.102, №5. - P.1518-1532.
203. Tam S.-Y., Roth R. Mesoprefrontal dopaminergic neurons: Can tyrosine availability influence their functions? // Biochem. Pharmacol. 1997.- Vol.53, №4. -P.441-453.
204. Taniguchi J., Honda H., Shibusawa Y., Iwata Т., Notoya Y. Alteration in endothelial function and modulation by treatment with pioglitazone in rabbit renal artery from short-term hypercholesterolemia // Vascul Pharmacol. 2005. - Vol.43, № 1. - P.47-55.
205. Thulesius O., Said S., Shuhaiber H. et al. Endothelial mediated enhancement of noradrenaline indused vasoconstriction in normal and varicose veins // Clin. Physiol. 1991. - Vol.11, №2. - P. 153-159.
206. Toda N. Potassium-induced relaxation in isolated cerebral arteries contracted with prostaglandin F2a // Pflugers Arch. 1976. - Vol.364, №3. - P.235-342.
207. Toth A., Kiss E., Gergely P., Walsh M., Hartshorne D., Erdodi F. Phosphorylation of MYPT1 by protein kinase С attenuates interaction with PP1 catalytic subunit and the 20 kDa light chain of myosin // FEBS Lett. 2000. -Vol.484.-P.l 13-117.
208. Tsunoo A., Kurokawa M., Takahashi K. Neurally evoked potentiation of tonic contractions in the guinea-pig vas deferens involves adenosine receptors // J. Physiol. 1991. - Vol.433. - P. 163-181.
209. Uhrenholt Т., Schjerning J., Hansen P., Nirregaard R., Jnsen В., Sorensen G., Skitt O. Rapid inhibition of vasoconstriction in renal afferent arterioles by aldosterone // Circ. Res. 2003. - Vol.93, №12. - C.1258-1266.
210. Undrovinas A., Maltsev V., Kyle J., Silverman N., Sabbah H. Gating of the late Na+-channel in normal and failing human myocardium // J. Mol. Cell Cardiol. 2002. Vol.34, №11. - P. 1477-1489.
211. Vanhoutte P. Endothelium-derived free radicals: for worse and for better // J. Clin. Invest. 2001. - Vol.107. - P.23-25.
212. Vayssettes-Courchay С., Ragonnet С. In vivo analysis of adrenergic and serotoninergic constrictions of the rabbit saphenous vein // Eur. J. Pharmacol. -2000. Vol.408, №3. - P.277-288.
213. Vedernikov Yu., Lankin V., Tikhaze A., Vikhert A. Lipoproteins, as factors in veseel tone and reactivity modulation // Basic Res. Cardiol. 1988. - Vol.83, №6. - P.590-596.
214. Vuong Т., de Kimpe S., de Roos R., Rabelink Т., Koomans H., Joles J. Albumin restores lysophosphatidylcholine-induced inhibition of vasodilatation in rat aorta // Kidney Int. 2001. -Vol.60, №3. - P.1088-1096.
215. Wambach C., Liu D. Insulin attenuates vasoconstriction by noradrenaline,serotonine and potassium chloride in rat mesenteric arterioles // Clin. Exp. Hypertens. A. 1992. - Vol.14, №4. - P.733-740.
216. Wang H., Zeng S.-J., Qiu P.-X. Development of muscarinic m3 and m4 receptor antibodies with pharmacological activities — кит. // Zhongguo yaoli xuebao. 1998. - Vol.19, №6. - P.523-526.
217. Wang S., Datta S., Segal S. Pregnancy alters adrenergic mechanisms in uterine arterioles of rats // Anesth Analg. 2002. - Vol.94, №5. - P.1304-1309.
218. Watson C., Gold M. Lysophosphatidylcholine modulates cardiac INa via multiple protein kinase pathways // Circ. Res. 1997. - Vol.81, №3. - P.387-395.
219. Watts J., Ford M., Leonova E. Iron-mediated cardiotoxicity develops independently of extracellular hydroxyl radicals in isolated rat hearts // J. Toxicol. Clin. Toxicol. 1999. - Vol.37, №1. - P.19-28.
220. Whitney E., Menice C., Yeh J., Bagwell C., Jerius H., Brophy C. Renal artery smooth muscle is refractory to contraction by angiotensin II // J. Surg Res. -1996. Vol.61, №2. - P.307-310.
221. Wierzba Т., Juzwa W., Redlarski G. Oxytocin as a modulator of the vasomotoric responses in mesenteric circulation of rat //31 Int.Congr. Physiol. Sci., Helsinki, 9-14 july, 1989: Abstr.Oulu.- 1989. P.60.
222. Wong J., Tran K., Pierce G., Chan A., Choy P. Lysophosphatidylcholine stimulates the release of arachidonic acid in human endothelial cells // J. Biol. Chem. 1998. -№12. - P.6830-6836.
223. Woo N., Ganguly P. Neuropeptide Y prevents agonist-stimulated increases in contractility // Hypertension. 1995. - Vol.26, №3. - P.480-484.
224. Wu D., Morrison R., de Vellis J. Modulation of beta-adrenergic response in rat brain astrocytes by serum and hormones // J. Cell. Physiol. 1985. - Vol.122, №1. - P.73-80.
225. Wu R., Huang Y., Elinder L., Frostegard J. Lysophosphatidylcholine is involved in the a ntigenicity of oxidized LDL // Arteriosclerosis, Thrombosis and Vase. Biol. 1998. - Vol.18, №4. - P.626-630.
226. Xiao R.-P., Pepe S., Spurgeon H. et al. Opioid peptide stimulation reverses p-adrenergic effects in rat heart cells // Am. J. Phisiol.-1997.-Vol.272.-H797-805.
227. Yamada K., Yanagida H., Ito Y., Inoue R. Postsynaptic enhancement by motilin of muscarinic receptor cation currents in duodenal smooth muscle // Amer. J. Physiol.- 1998.-Vol.274, №3.- G487-G492.
228. Yamaguchi Т., Rodman D., OBrien R., Mc Murtry L. Modulation of pulmonary artery contraction by endothelium-derived relaxing factor // Eur. J. Pharmacol.- 1989.- Vol. 161, № 2-3.-P. 259-262.
229. Yamakawa Т., Eguchi S., Yamakawa Y., Motley E., Numaguchi K., Utsunomiya H., Inagami T. Lysophosphatidylcholine stimulates MAP kinase activity in rat vascular smooth muscle cells // Hypertension. 1998. - Vol.31, №1. - P.248-253.
230. Yatzidis H. Oral supplement of six selective amino acids arrest progression renal failure in uremic patients //Int. Urol. Nephrol.-2004.-Vol.36, №4.-P.591-598.
231. Yi В., Ma В., Xing B. Rapid effects of hydrocortisone on the cholinergic synaptic transmission of В neurons in bullfrog sympathetic ganglia — кит. // Shengli xuebao. 1999. - Vol.51, №2. - P.147-152.
232. Yonekubo K., Ohta Т., Nakazato Y., Ito S. Inhibitory effects of cortical steroids and adrenocorticotropic hormone on catecholamine secretion in guinea-pigperfused adrenal glands // Auton Autacoid Pharmacol. 2002. - Vol.22, №2. -P.93-101.
233. Yu Y., Guo H., Piao L. et al. Intracellular calcium was involved in muscarinic currents increased by hypoosmotic membrane stretch in gastric myocytes of guinea pig // Acta Pharmacol. Sin.-2002.-Vol.23, №11.-P.1007-1012.
234. Zhang L., Rui Y., Chu Z. Влияние пробукола и других средств на вызываемую лизофосфатидилхолином вазоконстрикцию базилярной артерии быка in vitro — кит. // Di-er junyi daxue xuebao. 2000. - №3. - P.257-259.
235. Zhang R., Rodrigues В., MacLeod K. Lysophosphatidylcholine potentiates phenylephrine responses in rat mesenteric arterial bed through modulation of thromboxane A2 //J. Pharmacol. Exp. Ther. 2006. - Vol.317, №1. - P.355-361.
236. Zheng M., Uchino Т., Kaku Т., Kang L., Wang Y., Takebayashi S., Ono K. Lysophosphatidylcholine augments Ca(v)3.2 but not Ca(v)3.1 T-type Ca channel current expressed in HEK-293 cells // Pharmacology. 2006. - Vol.76, №4. -P. 192-200.
237. Zhu K., Baudhuin L., Hong G., Williams F., Cristina K., Kabarowski J., Witte O., Xu Y. Sphingosylphosphorylcholine and lysophosphatidylcholine are ligands for the G protein-coupled receptor GPR4 // J. Biol. Chem. 2001.-Vol.276, №44. P.41325-41335.
238. Zvezdina N.D., Prokasova N.V., Vaver V.A., Bergelson L.D., Turpaev T.M. Effect of lysolecithin and lecithin of blood serum on the sensitivity of heart to acetylcholine // Biochem. Pharm. 1978. - Vol.27, №24. - P.2793-2801.
-
Кашин, Роман Юрьевич
-
кандидата биологических наук
-
Киров, 2008
-
ВАК 03.00.13
- Механизмы гормональной регуляции электрической и сократительной активности гладких мышц
- Механизмы гормональной регуляции электрической и сократительной активности гладких мышц
- Влияние сыворотки пуповинной крови человека на гладкие мышцы матки и сосудов пуповины
- Сократительная активность гладких мышц коронарныхсосудов в норме и при гипоксии
- Влияние сыворотки крови человека на M-холино- и α-, β-адренореактивность гладких мышц желудка крысы
