Модуляция физико-химическими агентами структурно-функционального состояния нейтрофилов крови человека

Михилева, Елена Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Модуляция физико-химическими агентами структурно-функционального состояния нейтрофилов крови человека
ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Модуляция физико-химическими агентами структурно-функционального состояния нейтрофилов крови человека"

На правах рукописи

Михилева Елена Александровна

МОДУЛЯЦИЯ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИМИ АГЕНТАМИ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ НЕЙТРОФИЛОВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

Специальность 03.00.02 - Биофизика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Воронеж-2006

Работа выполнена в Воронежском государственном университете

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук,

профессор, заслуженный деятель науки РФ

Арпохов Валерий Григорьевич

доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Бузлама Виталий Соломонович

кандидат биологических наук Дмитриев Евгений Владиславович

Ведущая организация:

Воронежская государственная медицинская академия

Защита состоится 27 февраля 2006 г. в 15-00 часов на заседании диссертационного совета Д 212.038.03 при Воронежском государственном университете по адресу: 394006, г. Воронеж, Университетская пл., 1, ауд. 59

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Воронежского государственного университета

Автореферат разослан января 2006 года

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Грабович М.Ю.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время внимание исследователей привлекает вопрос об участии нейтрофилов в регуляции иммунного и других звеньев гомеостаза. Являясь наиболее лабильными и пластичными клетками крови, способными к быстрому реагированию на любые повреждающие воздействия, нейтрофилы формируют первую линию защиты организма. Реактивность нейтрофилов важно учитывать при включении их в патогенез как одного из ключевых эффекторов иммунокомплексного воспаления. С этой точки зрения изучение функционального потенциала нейтрофилов позволяет выявить резервные возможности фагоцитарного звена иммунитета, а также рассматривать изменения реактивности этих клеток в качестве индикаторов патологических нарушений.

В реализации эффекторных функций нейтрофилов особое место отводится продуктам секреции данных клеток. Активированные фагоциты продуцируют различные медиаторы воспалительных реакций, среди которых активные кислородные метаболиты и ряд цитокинов. Современные знания о цитокинах позволяют считать эти медиаторы иммунитета частью сложной цепи взаимодействующих молекулярных факторов, посредством которых работа различных систем организма становится скоординированной и регулируемой (A.A. Михайлова, 1992).

Использование в клинике при воспалительных процессах и других имму-нопатологиях, обусловленных недостаточностью системы нейтрофилов, препаратов на основе естественных клеточных регуляторов - цитокинов - открывает большие перспективы. Среди рекомбинантных цитокинов, применяемых в современной медицине, интерес представляет фактор некроза опухоли а. Его мощное биологическое влияние на иммуногенез, воспалительные процессы и опухолевые клетки позволяет считать фактор некроза опухоли (ФНОа) многообещающим средством иммунотерапии онкологических, воспалительных, инфекционных и аутоиммунных заболеваний, а также при иммунодефицитах, трансплантации органов и тканей (В.П. Шичкин, 1998).

Несмотря на широкие перспективы использования ФНО в клинике, необходимо решить ряд проблем, связанных с подбором терапевтических концентраций, трудностью прогнозирования и контроля реакции организма на цито-киновую терапию.

Участие нейтрофилов в процессах распознавания возбудителя и формирования иммунного ответа во многом определяется внутриклеточным метаболизмом и структурно-функциональным состоянием рецепторного аппарата клеток (A.M. Земсков и соавт., 2001). Дефекты в работе ферментных систем и ослабление адгезивных взаимодействий нейтрофилов ведут к серьезным нарушениям фагоцитоза, что ослабляет неспецифический иммунитет и может служить причиной частого бактериального инфицирования. Однако бесконтрольное действие большого количества активированных нейтрофилов приводит к повреждениям тканей и органов собственного организма, развитию аутоиммунной агрессии. Все это определяет необходимость поиска эффективных методов воздействия на кровь и ее компоненты, корригирующих функциональное со-

стояние фагоцитов.

РОС. национал! ВНБЛНОТЕКА

Одним из методов иммунокоррекции является ультрафиолетовое облучение крови. Аутотрансфузия УФ-облученной крови в настоящее время широко используется при лечении гнойно-септических, сердечно-сосудистых и других заболеваний (А.Н. Вельских и соавт., 1996; В.И. Карандашов, Е.Б. Петухов, 1997). В проведенных экспериментальных и клинических исследованиях установлен дезинтоксикационный, противовоспалительный, иммуномодулирующий эффект действия УФ-света (К.А. Самойлова и соавт., 1986; Е.А. Олейникова и соавт., 1986; В.Г. Артюхов и соавт., 2001), его участие в структурно-функциональных перестройках рецепторного аппарата иммунокомпетентных клеток (К.А. Самойлова и соавт., 1987. 1990, 1991; Е.В. Волгарева и соавт., 1990; К.А. Samoilova et al., 1996; K.D. Obolenskaya et al., 1998), в процессах активации белков системы комплемента (В.Г. Артюхов и соавт., 1990; В.В. Гусинская и соавт., 1994, 1995а, 19956), сывороточных иммуноглобулинов (В.Ю. Жосанов и соавт., 2001), модуляции уровня цитокинов (Е.Б. Жибурт и соавт., 1995; D. Kulms et al, 2001).

Несмотря на значительные успехи в изучении фагоцитарного звена иммунитета, исследование регуляторного действия УФ-света на функциональную (фагоцитарную, секреторную, адгезионную, щгготоксическую) активность ней-трофилов остается малоизученной областью фотоиммунологии. Практически отсутствуют работы, посвященные анализу взаимосвязи структурно-функциональных фотомодификаций фагоцитов с процессами их взаимодействия с сывороточными опсонинами, в частности белками системы комплемента, а также с медиаторами иммунного ответа - цитокинами. Необходимость таких исследований очевидна с точки зрения современных представлений о функциональной кооперации клеточных и гуморальных компонентов иммунной системы. Раскрытие закономерностей и механизмов действия УФ-излучения на клеточные и гуморальные звенья иммунной системы позволит теоретически обосновать практическое применение УФ-света в клинической практике.

Интерес представляет также изучение возможности регуляции активности фагоцитов сочетанным действием естественных модуляторов физической и химической природы (к примеру, УФ-света и фактора некроза опухоли). Так, использование ФНОа в различных концентрациях на фоне фотомодификации крови может способствовать повышению эффективности иммунокорригирую-щего действия АУФОК при лечении патологий различной степени тяжести.

Исследование механизмов, лежащих в основе регуляторного действия УФ-света и ФНОа на нейтрофилы, позволит выявить новые подходы к терапии клеточных дефектов фагоцитоза и иммунокоррекции.

Цель и задачи диссертационной работы. Целью настоящей работы явилось изучение структурно-функционального состояния нейтрофилов в условиях УФ-облучения и в присутствии фактора некроза опухоли а.

В связи с этим перед нами стояли следующие задачи:

1. Изучить влияние УФ-света (240-390 нм) в диапазоне доз 75,5^-2265 Дж/м2 на процесс взаимодействия нейтрофилов с СЗ фактором системы комплемента.

2. Выявить влияние УФ-света (75,5-^-755 Дж/м2) и фактора некроза опухо-

ли a (40-н1000 пкг/мл) на фагоцитарную активность и состояние ферментных систем нейтрофилов.

3. Оценить вклад изменений структурно-функционального состояния рецепторов иммунной адгезии (FcR и CR3) на мембранах УФ- и/или ФНО-модифицированных нейтрофилов в модуляцию фагоцитарной активности данных клеток.

4. Исследовать цитотоксическую (ФНО-продуцирующую и NO*-секретирующую) способность нейтрофилов в условиях УФ-облучения (75,5-2265 Дж/м2).

Научная новизна. Работа является комплексным исследованием, посвященным изучению структурно-функционального состояния нейтрофилов при действии УФ-света и ФНОа.

Впервые изучено влияние УФ-света на взаимодействие мембран нейтрофилов с СЗ фактором системы комплемента и выявлены основные закономерности, обусловливающие данный процесс. Установлено, что в основе структурно-функциональных фотомодификаций мембран нейтрофилов лежит эффект «кэппинга» рецепторов CR1 с лигандированным СЗ фактором комплемента.

Показано регуляторное действие УФ-света и ФНОа на фагоцитарную активность нейтрофилов. Рассматривается вклад различных процессов (перок-сидного фотоокисления липидов, активности НАДФН-оксидазы, миелоперок-сидазы и супероксидцисмутазы) в изменение функционального потенциала фото- и ФНО-модифицированных нейтрофилов. Обсуждаются возможные пути изменения структурно-функционального состояния рецепторов иммунной адгезии (CRI, CR3, FcR), приводящие к повышению или понижению функциональной активности модифицированных фагоцитов.

Выявлено иммунокорригирующее действие УФ-света на уровень продукции NO* и фактора некроза опухоли a нейтрофилами; конечный эффект при этом определяется исходным уровнем исследуемых показателей и дозой УФ-света. Установлены корреляционные зависимости между уровнем генерации NO* и ФНО-продуцирующей способностью и СОД-активностью нейтрофилов.

Практическая значимость. Научные положения диссертационной работы расширяют и углубляют современные представления о молекулярно-клеточном механизме регуляторного действия УФ-света на функциональную активность нейтрофилов, являющихся важным звеном неспецифического иммунитета организма.

Изучение фотоиндуцированных структурно-функциональных изменений рецепторов CRI, CR3, FcR, через которые реализуются адгезивные взаимодействия нейтрофилов, важно при рассмотрении вопросов, связанных с выяснением механизмов действия УФ-света на молекулярно-клеточном уровне. Полученные экспериментальные данные позволяют выявить общие закономерности регуляторного действия УФ-света на процесс взаимодействия рецепторов нейтрофилов с соответствующими лигандами, в частности с СЗ фактором комплемента, что необходимо для решения проблемы опсонинзависимой регуляции фагоцитоза.

Данные, полученные при исследовании функциональной активности фо-

томодифицированных нейтрофилов в присутствии ФНОа (уровень процессов ПФОЛ, состояние систем генерации АКМ, антиоксидантной системы, рецеп-торного аппарата), могут бьггь использованы для оценки резервных возможностей иммунитета и определения глубины и динамики патологических сдвигов в организме.

Эксперименты с использованием фактора некроза опухоли а позволяют выработать новые подходы к иммунокоррекции патологических состояний организма при проведении фармакотерапии и определить возможность применения метода АУФОК на различных стадиях воспалительного процесса с целью повышения эффективности его использования.

Предложенная схема регуляторного действия УФ-света и ФНОа на функциональные свойства нейтрофилов может бьггь полезна для понимания молекулярных механизмов иммунокорригирующего действия метода АУФОК.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на VIII международной конференции по химии и физико-химии оли-гомеров «0лигомеры-2002» (Черноголовка, 2002); 8-ой Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущине, 2004); III съезде биофизиков России (Воронеж, 2004); XIX съезде физиологического общества им. И. П. Павлова (СПб., 2004); Научной сессии сотрудников Воронежского госуниверситета (Воронеж, 2005); IV съезде фотобиологов России (Саратов, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 статьи и 6 тезисов, в том числе 3 статьи в журналах системы РАН и РАМН.

На защиту выносятся следующие положения:

1. УФ-свет (240-390 нм) в дозах 75,5-5-2265 Дж/м2 индуцирует повышение антителосвязывающей способности СЗ компонента комплемента в системе из взаимодействующих нейтрофилов и белков системы комплемента.

2. УФ-излучение в дозах 75,5+755 Дж/м2 и ФНОа в концентрациях 40^1000 пкг/мл оказывают модулирующее действие на функциональное состояние нейтрофилов (системы генерации активных кислородных метаболитов и антиоксидантной защиты, рецепторный аппарат), изменяя фагоцитарную активность клеток.

3. УФ-свет (75,5-^2265 Дж/м2) усиливает антителосвязывающую способность СЯЗ-рецепторов и вызывает разнонаправленные эффекты в отношении Fc-рецепторов с лигандированным IgG, зависящие от исходного уровня их сорбционной способности.

4. УФ-облучение нейтрофилов в дозах 75,5-^2265 Дж/м2 оказывает корригирующее действие на генерацию NO* и продукцию ФНОа данными клетками.

5. Схема возможных регуляторных процессов, приводящих к изменению функционального потенциала нейтрофилов в условиях УФ-облучения и в присутствии ФНОа.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа включает 201 страницу машинописного текста, 15 таблиц, 43 рисунка. Состоит из «Введения», семи глав, «Заключения», «Выводов» и «Приложения». Список литературы содержит 272 источника, из них 128 - отечественных и 144 — зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ГЛАВА 1. Нейтрофильные лейкоциты, их роль в поддержании иммунного гомеосгаза организма

В главе представлены современные сведения о морфологических и функциональных особенностях нейтрофилов, структуре и биологической роли ряда рецепторов, в частности, Рс-рецепторов, рецепторов к компонентам комплемента и цитокинам. Дана характеристика ФНОа, рассмотрены его структура, биологические эффекты и участие в регуляции физиологических процессов в организме.

ГЛАВА 2. Воздействие УФ-света на состояние компонентов иммунной системы

В главе приведен анализ литературных данных об изменениях структурного и функционального состояния компонентов иммунной системы, индуцированных УФ-светом.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ ГЛАВА 3. Объекты и методы исследования

Объектами исследования явились нейтрофилы периферической крови человека, суспендированные в растворе Хенкса (рН 7,4) в концентрации 1x106 кл/мл, и сыворотка крови доноров как источник СЗ белка комплемента. Нейтрофилы выделяли методом центрифугирования крови на двойном градиенте плотности фиколл-урографина (1,077 и 1,119 г/мл) (М.М. Бакуев и соавт., 1991).

УФ-облучение образцов проводили в стеклянной термостатируемой (20 °С) кювете при постоянном перемешивании с помощью ртутно-кварцевой лампы ДРТ-400 через светофильтр УФС-1 с полосой свето пропускания в области 240-390 нм. Интенсивность излучения - 151 Дж/м2. Дозы облучения нейтрофилов составили 75,5; 453; 755 и 2265 Дж/м2, сыворотки крови - 75,5; 755 и 2265 Дж/м1.

Изучение сорбционных свойств мембран нейтрофилов проводили методом твердофазного неконкурентного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием моноспецифической сыворотки к иммуноглобулинам класса в (ООО «ИМТЕК», Москва), а также моноклональных антител ЬТ11 (ООО «Сорбент», Москва) и к СЗ компоненту комплемента (МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского). В качестве белка-метчика комплексов антиген-антитело выступала пе-роксидаза хрена. Структурные изменения рецепторов на мембранах нейтрофилов исследовали методом прямой иммунофлуоресценции.

Об уровне процессов пероксидного фотоокисления липидов на мембранах нейтрофилов судили по интенсивности спонтанной хемилюминесценции (ХЛ) клеток в присутствии люминола. Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли методом люминолзависимой ХЛ, используя в качестве стимулятора фагоцитоза латекс (Ю.А. Владимиров, А.Я. Потапенко, 1989). Измерение ХЛ проводили на биохемилюминометре БХЛ-06 М.

Жизнеспособность нейтрофилов определяли по стандартной методике с использованием красителя трипанового синего (Дж. Клаус, 1990).

Каталитическую активность МПО регистрировали спектрофотометриче-ски при длине волны 450 нм по реакции окисления тетраметилбензидина в присутствии пероксида водорода (P.D. Josephygg et al., 1982).

Для определения СОД-активности нейтрофилов использовали метод, основанный на способности СОД конкурировать с красителем нитросиним тетра-золиевым за супероксидные анион-радикалы, образующиеся в системе тетраме-тилендиамин (ТЕМЭД)-рибофлавин при облучении видимым светом (Г.А. Кочетов, 1980).

Содержание белка в супернатанте нейтрофилов определяли методом JIo-ури (A.A. Землянухин, 1993).

Продукцию оксида азота измеряли по суммарному содержанию в среде ионов N02" и N03" спектрофотометрическим методом, сочетающим восстановление ванадием (III) нитрата до нитрита и определение последнего с помощью реактива Грисса (ГЛ. Близнецова и соавт., 2001).

Концентрацию ФНОа в лизатах нейтрофилов определяли с использованием тест-системы ИФА на основе антител к ФНОа (ООО «Протеиновый контур», СПб.).

Статистическую обработку результатов экспериментов проводили с помощью пакета прикладных программ «Statgraphics». Достоверность отличий контрольных и экспериментальных результатов оценивали при помощи t-критерия Стьюдента.

ГЛАВА 4. Влияние УФ-света на процесс взаимодействия мембран нейтрофилов с СЗ фактором системы комплемента

Для исследования механизмов действия УФ-света на процесс взаимодействия мембран нейтрофилов с СЗ фактором системы комплемента была разработана схема ИФА-тестов на основе оценки антителосвязывающей способности сывороточного и мембраносвязанного белка СЗ:

Нф+С+Ат(СЗ)-Ш -L- (НфК0*+Аг(СЗ>11х

Нф+Ат(СЗ)-Пх — Нф*+Ат(СЗ)-Пх С+Ат(СЗ)-П1 С*+Ат(СЗ)-Пх

Нф+С+Ат(СЗ>-П1 -1- Нф*+С+Ат(СЗ)-Пх Нф+С+Ат(СЗ)-Ш-£- Нф+С*+Ат(СЗ)-Пх

где жирный шрифт - контрольная система, нормальный шрифт - опытная система; Нф - нейтрофилы; С - сыворотка крови как источник СЗ; Ат(СЗ)-Пх -конъюгат пероксидазы хрена с антителами к СЗ компоненту комплемента; * - УФ-облученный компонент ИФА-системы

Полученные данные (рис. 1) свидетельствуют о том, что после УФ-облучения в дозах 75,5; 755 и 2265 Дж/м2 нейтрофилов (1х106 кл/мл) и сыворотки (титр 1:32) (см. схему (1)) регистрировалось повышение оптической плотности детектируемого продукта реакции (окисленной формы ОФД) по отношению к необлученной системе. Наблюдаемый эффект возрастания антите-лосвязывающей способности СЗ в исследуемой тест-системе ИФА может был. следствием увеличения количества СЗ компонента в УФ-облученной сыворотке и на мембранах фотомодифицированных нейтрофилов или в одном из этих компонентов. В связи с этим были проведены эксперименты по изучению фотомодификаций мембран нейтрофилов (см. схему (2)) и сывороточного СЗ (см. схему (4)).

Рис. 1. УФ-индуцированные изменения анти-телосвязывающей способности сывороточного и мембраносвязанного СЗ

Ш - система (Нф+С)*+Ат(СЗ)-Пх; Ш - система Нф*+С+Ат(СЗ>Пх; ■I - система Нф+С*+Ат(СЗ)-Пх

Здесь и на рис. 2, 3 ^ - средняя разность между значениями ИФА-сигнала опытных и контрольных образцов

2265 Дж/м2

УФ-облучение (75,5-^2265 Дж/м2) нейтрофилов индуцирует возрастание величины 1)492 в системе Нф*+Ат(СЗ)-Пх (рис. 2), обусловленное увеличением числа сорбированных на их мембранах антител к СЗ компоненту. Наблюдаемые изменения связаны, по всей видимости, со структурными фотомодификациями мембран фагоцитов.

75,5

Рис. 2. УФ-индуцированные изменения аиги-телосвязывающей способности мембраносвязанного СЗ в системе Нф*+Ат(СЗ)-Пх

Методом иммунофлуоресцентного анализа показано, что структурные фотомодификации нейтрофилов проявляются в виде «кэппинг»-эффекта, при этом рост дозы УФ-облучения приводит к увеличению общего числа кэппи-рующих клеток. Преобладающим типом распределения флуоресцирующих комплексов на поверхности нейтрофилов при действии УФ-света (75,54-2265 Дж/м2) является «кэп 1А» (табл.). Вместе с тем, с увеличением дозы УФ-облучения возрастает количество нейтрофилов с амебовидным свечением.

Таблица

Количество (%) «кэппирукицих» нейтрофилов в условиях УФ-облучения

Доза УФ-облучения, Дж/м2 Тип распределения флуоресцирующих комплексов

краевое «кэп !4» «кэп V*» амебовидный

0 91 9

75,5 63 10 12 5

755 20 21 42 17

2265 11 13 49 27

Добавление к фотомодифицированным (75,5-5-2265 Дж/м2) нейтрофилам нативной сыворотки, содержащей СЗ компонент комплемента, ведет к повышению оптической плотности в системе ИФА Нф*+С+Ат(СЗ)-Пх (см. схему (3), рис. 1), что, возможно, связано с увеличением количества СЗ компонента, сорбируемого УФ-облученными клетками из наливной сыворотки, или с эффектом «кэппинга» рецепторов на мембранах фотомодифицированных фагоцитов.

УФ-облучение сыворотки в дозах 75,5; 755 и 2265 Дж/м2 индуцирует усиливающееся с ростом дозы повышение ИФА-сигнала в системе С*+Ат(СЗ)-Пх (рис. 3), что свидетельствует об увеличении антителосвязывающей способности сывороточного СЗ. Наблюдаемый эффект может быть вызван активацией и расщеплением СЗ на субфрагменты, в частности СЗЬ, обладающие большим сродством к антителам, чем сам СЗ.

Рис. 3. УФ-индуцированные изменения антителосвязывающей способности сывороточного СЗ в системе С*+Ат(СЗ>Пх

После иммобилизации УФ-модифицированной (75,5+2265 Дж/м2) сыворотки на мембранах необлученных нейтрофилов регистрировалось изменение величины D492 в системе Нф+С*+Ат(СЗ)-Пх (рис. I), аналогичное для системы С*+Ат(СЗ)-Пх (рис. 3). Следовательно, в основе фотомодификаций вышеуказанных систем лежат сходные механизмы, касающиеся самого фактора СЗ и процессов его расщепления при УФ-облучении на активные субфрагменты с последующим их взаимодействием с мембранами нейтрофилов.

Таким образом, эффект усиливающегося с ростом дозы УФ-света повышения антителосвязывающей способности СЗ в системе из взаимодействующих УФ-облученных компонентов - мембран нейтрофилов и белков системы комплемента (см. схему (1), рис. 1) - является суммарным и определяется структурно-функциональными фотомодификациями как клеточных мембран, так и процессами, протекающими в сыворотке крови, при преобладающем вкладе последних.

ГЛАВА S. Исследование сочетанного действия УФ-света и фактора

некроза опухоли а на функциональную активность нейтрофилов

В ходе работы было исследовано влияние сочетанного действия УФ-излучения (75,5+2265 Дж/м2) и ФНОа (40-5-1000 пкг/мл) на функциональную активность нейтрофилов. Выявлено, что УФ-свет во всем диапазоне доз приводит к увеличению уровня спонтанной ХЛ нейтрофилов, обусловленному, по всей видимости, повышением концентрации АФК вследствие интенсификации процессов ПФОЛ на мембранах фотомодифицированных клеток. Аналогичные изменения индуцируют ФНОа в диапазоне концентраций 40+1000 пкг/мл на мембранах нативных нейтрофилов, а также сочетанное действие цитокина (40 и 200 пкг/мл) и УФ-облучения в дозах 75,5 и 453 Дж/м2.

Показано, что УФ-свет в дозах 453 и 755 Дж/м2, ФНОа в высоких концентрациях (500 и 1000 пкг/мл, а также его сочетанное действие с УФ-облучением (75,5+755 Дж/м2) вызывают снижение количества жизнеспособных нейтрофилов, вероятно, за счет дестабилизации мембранных структур УФ- и цитокинмодифицированных фагоцитов.

Исследование лагексиндуцированной ХЛ нейтрофилов позволило установить, что УФ-свет в дозах 75,5 и 453 Дж/м2 повышает их функциональный потенциал, что обусловлено преимущественно активацией НАДФН-оксидазного комплекса (Г.И. Клебанов и соавт., 2001). Максимальная доза УФ-света (755 Дж/м2) не вызывает достоверных изменений стимулированной ХЛ фагоцитов.

ФНОа (40+1000 пкг/мл) выступает в роли регулятора фагоцитарной активности нейтрофилов. Эффект активации фагоцитов наблюдается при концентрациях цитокина 40 и 200 пкг/мл. ФНОа в максимальной концентрации 1000 пкг/мл приводит к резкому снижению хемилюминесцентного ответа нейтрофилов (рис. 4).

Сочетанное действие УФ-света и ФНОа носит разнонаправленный характер, определяется дозой УФ-облучения и в большей степени концентрацией цитокина. Стимулирующее влияние на функциональный потенциал нейтрофилов

400 6001

Рис. 4. Влияние ФНОа на хемилюминес-центный ответ нейтрофилов

1 - немодифицированные клетки;

2 - клетки, модифицированные ФНОа в концентрации 40 п кг/мл;

3-200 пкг/мл;

4 - 500 пкг/мл;

5 -1000 пкг/мл

* - отличие от контроля недостоверно; по оси абцисс — время, по оси ординат — величина интенсивности хемилюминес-центного сигнала

оказывают УФ-свет в дозе 75,5 Дж/м и ФНОа в концентрации 40 пкг/мл. Повышение концентрации цитокина до 200 и 500 пкг/мл индуцирует снижение фагоцитарной активности фотомодифицированных нейтрофилов (рис. 5). Максимально данный эффект выражен при совместном действии УФ-облучения в диапазоне доз 75,5-^755 Дж/м2 и ФНОа в концентрации 1000 пкг/мл.

Рис. 5. Изменение стимулированной хе-милюминесценции нейтрофилов, модифицированных ФНОа в концентрациях 40 и 200 пкг/мл

СИ - в отсутствие ФНОа; ■) - ФНОа в концентрации 40 пкг/мл; - 200 пкг/мл

Показано возрастание СОД-активности нейтрофилов при УФ-облучении в дозах 453 и 755 Дж/м2, при инкубации необлученных клеток с цитокином во всем диапазоне концентраций, а также при сочетании УФ-облучения в дозе 75,5 Дж/м2 и ФНОа в концентрации 40 пкг/мл. Увеличение СОД-активности является следствием праймирования фагоцитов УФ-светом и ФНОа и направлено на регуляцию содержания в клетках высокореакционных и токсичных для них

АКМ, в частности OJ •

УФ-излучение (75,5 и 453 Дж/м2) и ФНОа (40 и 200 пкг/мл) увеличивают миелопероксидазную активность нейтрофилов, что обусловлено активацией

НАДФН-оксидазы, генерирующей Ог, и СОД, катализирующей дисмутацию

Ог в пероксид водорода, являющийся субстратом миелопероксидазной реакции.

ГЛАВА 6. Влияние сочеганного действия УФ-света и фактора некроза опухоли а на структурно-функциональное состояние рецепторов иммунной адгезии

Проведено исследование влияния УФ-света (75,5+2265 Дж/м2) и ФНОа (40-5-1000 пкг/мл), а также их сочеганного действия на структурно-функциональное состояние Рс- и СИЗ рецепторов на мембранах нейтрофилов.

По уровню исходной антителосвязывающей способности РсЯ с лиганди-рованным 1§0 и характеру ответной реакции клеток на воздействие УФ-облучения вьщелено две группы доноров. Уровень антителосвязывающей способности РсЯ на мембранах нативных нейтрофилов составил для доноров первой группы 0,402±0,020, второй группы - 0,332±0,028 ед. опт. пл. Показано, что фотомодификация клеток первой группы доноров во всем диапазоне доз приводит к снижению ИФА-сигнала исследуемой тест-системы. УФ-облучение (75,5 и 453 Дж/м2) нейтрофилов второй группы повышает антителосвязываю-щую способность РсЯ с лигандированным а максимальная доза 2265 Дж/м2 снижает ее.

Установлено, что воздействие УФ-света (75,5+755 Дж/м2) на фагоциты повышает антителосвязывающую способность СИЗ. Модификация нейтрофилов цитокином в концентрациях 40 и 200 пкг/мл усиливает способность РсК с лигандированным и СЮ к связыванию специфических антител, тогда как высокие концентрации ФНОа (500 и 1000 пкг/мл) снижают ее.

Выявлено регуляторное действие УФ-облучения (75,5+2265 Дж/м2) в сочетании с ФНОа (40+1000 пкг/мл) по отношению к структурно-функциональному состоянию РсЛ с лигандированным и СЮ на мембранах фагоцитов, при этом характер и направленность ответных реакций систем обусловливается преимущественно концентрацией цитокина.

ФНОа в концентрации 40 пкг/мл способствует усилению антителосвязывающей способности рецепторов РсЯ. и СЮ на мембранах фотомодифициро-ванных (75,5+2265 Дж/м2) нейтрофилов. К аналогичным изменениям сорбци-онной способности СИЗ приводит сочетанное действие УФ-облучения (75,5 и 453 Дж/м2) и ФНОа в концентрации 200 пкг/мл.

Повышение антителосвязывающей способности УФ- и/или ФНО-модифицированных нейтрофилов обусловлено, вероятно, усилением аффинности лигандированного на РсИ, и СЮ рецепторов к связываемым антителам, формированием рецепторных кластеров в результате «кэппинга», а также дегрануляцией предсуществующих СЮ рецепторов на поверхность клеток.

ФНОа в концентрациях 500 и 1000 пкг/мл снижает способность рецеггго-ров РсЛ и СЮ УФ-облученных (75,5+2265 Дж/м2) нейтрофилов к связыванию специфических антител. Показано, что УФ-свет в дозах 755+4530 Дж/м2 и/или ФНОа (1000 пкг/мл) индуцируют шеддинг как молекул так и комплексов 1§С-РсЯ с мембран модифицированных нейтрофилов (рис. 6). Кроме того,

вклад в уменьшение антителосвязывающей способности УФ- и/или ФНО-модифицированных фагоцитов вносит, возможно, процесс снижения аффинности на РсЯ и СЛЗ рецепторов к связываемым антителам.

Рис. 6. Антителосвязывающая способность Рс-рецепторов с лигандированным в супернатантах УФ- и/или цитокинмоди-фицированных нейтрофилов

СЗ - в отсутствие ФНОа;

М - модифицированные ФНОа в концентрации 1000 пкг/мл

755 2265 4530

Дж/м2

ГЛАВА 7. Влияние УФ-света на цитотоксическую активность нейтрофилов

В реализации цитотоксического потенциала нейтрофилов важное место отводится активным формам кислорода и азота, продуцируемым иммуноцита-ми, а также цитокинам, главным образом ФНОа. В проведенных нами экспериментах показано, что УФ-свег в дозе 75,5 Дж/м2 оказывает корригирующее действие на продукцию N0" и СОД-активность фагоцитов (рис. 7 (а, б)) относи-

|ЖХ],мкмоль/л

Атд.отн.ея.

0 75,5 453 755 2265 Дж/м1

а)

0 75,5 453 755 2265 Дж/м2

б)

Рис. 7. Влияние УФ-света на продукцию оксида азота (а) и СОД-активность (б) нейтрофилов крови человека СП - первая группа доноров; УЗ- вторая группа доноров

тельно исходного уровня исследуемых параметров. С ростом дозы УФ-облучения (453+2265 Дж/м2) в нейтрофилах повышается содержание метаболитов N0* и снижается СОД-активность. Выявлена обратная корреляционная зависимость между изменениями уровня содержания N0* и активности СОД, наиболее выраженная для нативных и УФ-модифицированных в дозе 75,5 Дж/м2 нейтрофилов.

Проведение экспериментов с использованием ингибитора белкового синтеза циклогексимида позволило установить, что в основе повышения уровня N0* и СОД-активности в фотомодифицированных клетках лежит индуцированная УФ-светом активация синтеза индуцибельной ЫО-синтазы и СОД бе

ПОУО.

Выявлено, что действие УФ-излучения в дозах 75,5+2265 Дж/м2 на ФНО-продуцирующую способность нейтрофилов носит неоднонаправленный характер и определяется исходной концентрацией цитокина в нативных (до облучения) клетках. По уровню исходного содержания ФНОа в необлученных нейтрофилах и характеру ответной реакции клеток на воздействие УФ-света были выделены две группы доноров.

Содержание цитокина у доноров первой группы было близким к физиологическому (51,0+6,2 пкг/мл), тогда как у доноров второй группы данный показатель превышал физиологическую норму на 488 % (рис. 8).

[ФНОа] пкг/мл

Рис. 8. Влияние УФ-света на продукцию ФНОа нейтрофилами крови человека

СИ - первая группа доноров; М - вторая группа доноров

75,5 453 755 2265 Дж/м2

УФ-модификация (75,5+2265 Дж/м2) увеличивала секрецию ФНОа нейтрофилами первой группы, причем максимальный эффект оказывала доза 75,5 Дж/м2 (повышение на 385 %), и снижала цитокинпродуцирующую способность клеток второй группы доноров, при этом наибольшее падение вызывала доза 453 Дж/м2 (снижение на 52,2 %, рис. 8). Показано наличие прямой корреляционной зависимости между содержанием N0* и ФНОа в нативных и УФ-облученных (75,5 и 755 Дж/м2) клетках, что позволяет говорить об участии данного цитокина в регуляции процесса синтеза N0*.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

С помощью методов иммуноферментного и иммунофлуоресцентного анализа, люминолзависимой хемилюминесценции, определения каталитической активности СОД и миелопероксидазы, генерации N0*, жизнеспособности и продукции ФНОа нейтрофилами исследовано влияние УФ-света (240-390 нм) в дозах 75,5+2265 Дж/м2 и ФНОа в концентрациях 4Он-1000 пкг/мл на структурно-функциональные свойства нейгрофилов человека.

Для исследования механизмов действия УФ-излучения на структурно-функциональное состояние мембран Нф и СЗ компонента комплемента, функционирующих отдельно и в комплексе друг с другом, была разработана схема • ИФА-тестов на основе оценки антителосвязывающей способности сывороточного и мембраносвязанного белка СЗ.

Установлено, что эффект усиливающегося с ростом дозы УФ-света по- »

вышения антителосвязывающей способности СЗ в системе из взаимодействующих УФ-облученных компонентов (мембран Нф и СЗ фактора) является суммарным и определяется структурно-функциональными фотомодификациями как клеточных мембран, так и процессами, протекающими в сыворотке крови, при преобладающем вкладе последних.

Показано, что структурно-функциональные фотомодификации мембран Нф проявляются в виде «кэппинг»-эффекта с образованием рецепторных кластеров с лигандированным СЗ фактором комплемента. Преобладание распределения флуоресцирующих комплексов на УФ-модифицированных Нф (75,5+2265 Дж/м2) по типу «кэп %» приводит к повышению антителосвязывающей способности лигандированного СЗ и, как следствие, к возрастанию агдезивных свойств фагоцитов. Вместе с тем, с повышением дозы УФ-облучения (2265 Дж/м2) наблюдается увеличение процента клеток с амебовидным «кэпом», что, по-видимому, ведет к структурной изоляции рецепторов путем интернализации или шеддинга комплексов рецептор-лиганд. Интернализа-ция рецепторных кластеров осуществляется по механизму эндоцитоза. Таким образом, изменяя число и локализацию рецепторов с лигандированным СЗ белком комплемента, фагоциты способны регулировать свои свойства: рецептор-ные, агдезивные, сорбционные и т. д.

Выявлено, что УФ-свет (453 и 755 Дж/м2) и ФНОа (500 и 1000 пкг/мл) снижают жизнеспособность Нф вследствие деструктивной модификации внешних примембранных слоев клеток, что сопровождается увеличением проницаемости мембран для красителя трипанового синего. Сочетанное действие УФ-облучения (75,5+755 Дж/м2) и ФНОа в концентрациях 200, 500 и 1000 пкг/мл усиливает процесс деструкции мембран фагоцитов. УФ-свет и ФНОа в меньших дозах и концентрациях не оказывают влияния на жизнеспособность Нф.

С помощью методов люминолзависимой хемилюминесценции, ИФА и определения ферментативной активности СОД и МПО изучено влияние соче-танного действия УФ-света (75,5+755 Дж/м2) и ФНОа (40+1000 пкг/мл) на фагоцитарную активность Нф периферической крови человека. Выявлен вклад процессов ПФОЛ, активности ферментных систем (НАДФН-оксидазы, СОД и

МПО) и функционального состояния рецепторов РсЯ и СЮ в изменение фагоцитарной активности фото- и ФНО-модифицированных Нф.

Установлено, что УФ-свет (75,5^755 Дж/м2) и ФНОа (404-1000 пкг/мл), действуя по отдельности и в сочетании друг с другом, повышают уровень спонтанной (без стимуляции к фагоцитозу) хемилюминесценции Нф, а, следовательно, и интенсивность процессов ПФОЛ.

Обнаружено, что УФ-свет (75,5 и 453 Дж/м2) оказывает праймирующее действие, индуцируя повышение функционального потенциала стимулированных к фагоцитозу Нф (прайминг), что проявляется в увеличении генерации активных метаболитов кислорода. Фотоиндуцированный прайминг Нф обусловлен, главным образом, активацией НАДФН-оксидазного комплекса вследствие прямого и/или опосредованного продуктами ПФОЛ действия УФ-света. Увеличение продукции Ог способствует возрастанию СОД-активности. В свою очередь, возможное образование в ходе реакции диссмутации пероксида водорода - компонента системы миелопероксидазы - стимулирует миелопероксидазную активность клеток. Повышение фагоцитарной активности Нф сопровождается разнонаправленными изменениями антителосвязывающей способности Рс-рецепторов с лигавдированным у разных доноров, что, по-видимому, определяется ее исходным уровнем. Выявлено усиление способности СЮ рецепторов к связыванию специфических антител на мембранах фотомодифицирован-ных в дозах 75,5+755 Дж/м2 Нф. Повышение антителосвязывающей способности является результатом «кэппинг»-эффекта, а также усиления аффиности данных рецепторных молекул к связываемым антителам.

Показано, что ФНОа в диапазоне концентраций 40+1000 пкг/мл выступает в качестве регулятора фагоцитарной активности Нф, при этом изменение функциональных свойств фагоцитов в присутствии цитокина является разнонаправленным и зависит от концентрации ФНОа.

Нами установлено, что ФНОа в концентрациях 40 и 200 пкг/мл индуцирует увеличение функциональной активности фагоцитов, обусловленное активацией НАДФН-оксидазы (по Са2+-независимому механизму) и усилением антителосвязывающей способности СЮ и РсЯ с лигандированным Наблюдаемое увеличение СОД-активности в данном случае обусловлено праймингом цитокинмодифицированных Нф и направлено на регуляцию содержания в клетке токсичных для нее АКМ. Цитокининдуцированное возрастание СОД-активности приводит, по всей видимости, к накоплению пероксида водорода и, как следствие этого, повышению активности МПО. Выявлена прямая корреляционная зависимость между данными параметрами. ФНОа в концентрации 1000 пкг/мл приводит к снижению фагоцитарной активности Нф, вероятно, за счет инактивации НАДФН-оксидазы вследствие цитотоксического действия цитокина на мембранные структуры модифицированных клеток. ФНОа в концентрациях 500 и 1000 пкг/мл ингабирует активность МПО фагоцитов и уменьшает антителосвязывающую способность рецепторов РсЯ и СЮ на поверхности клеток, что обусловлено, по всей видимости, ослаблением их аффинности к связываемым лигандам, а также ФНО-индуцированным шедцингом рецепторных молекул.

Показано, что УФ-свет в дозе 75,5 Дж/м2 и/или ФНОа в концентрации 40 пкг/мл оказывают стимулирующее действие на функциональный потенциал Нф, что может быть опосредовано как увеличением активности НАДФН-оксидазы, СОД и МПО, так и повышением аффинности лигандированного на РсЯ, и рецепторов СЮ, а также возрастанием числа последних в ходе дегра-нуляции и транслокации предсуществующих рецепторных молекул на клеточную поверхность. Установлено, что инкубация УФ-облученных в дозах 453 и 755 Дж/м2 Нф с ФНОа в концентрации 40 пкг/мл, а также клеток, фотомодифи-цированных во всем диапазоне доз с цитотокином в концентрации 200 пкг/мл приводит к снижению функциональной активности фагоцитов. При этом анти-телосвязывающая способность РсЯ с лигандированным (у доноров с исходно низкой антителосвязывающей способностью) и рецепторов СЯЗ сохраняется на высоком уровне. Это свидетельствует об определяющей роли инактивации ферментных систем в изменении функционального потенциала Нф.

С повышением концентрации цитокина (500 и 1000 пкг/мл) наблюдается подавление фагоцитарной активности УФ-облученных клеток, вызванное потерей активности ферментных систем (НДДФН-оксидазы и МПО) и уменьшением адгезивных свойств рецепторного аппарата.

Нами выявлено, что модификация Нф УФ-светом (2265 и 4530 Дж/м2) и/или ФНОа в концентрации 1000 пкг/мл приводит к шеддингу как лигандов, так и комплексов рецептор-лиганд с поверности клеток, усиливающемуся с ростом дозы УФ-облучения.

Показано, что СОД-активность Нф повышается при сочетанием действии УФ-излучения в дозе 75,5 Дж/м2 и ФНОа в концентрации 40 пкг/мл. В остальных случаях цитокин (40+1 ОООпкг/мл) не оказывает влияния на активность фермента фотомодифицированных (75,5+755 Дж/м2) Нф. В целом изменение функционального потенциала стимулированных к фагоцитозу Нф при сочетан-ном действии УФ-света и цитокина в большинстве случаев регулируется несколькими механизмами, действующими одновременно и включающими в себя модуляцию активности ферментных систем, обеспечивающих эффекторные функции Нф в фагоцитозе (НАДФН-оксидазы и МПО), и изменение структурно-функционального состояния рецепторного аппарата клетки.

В основе проявления нейтрофилами цитотоксической активности лежит генерация активных метаболитов кислорода и азота, а также секреция цитоки-нов, главным образом ФНОа, проявляющего цитолитическую активность. Выявлено корригирующее действие УФ-света в дозе 75,5 Дж/м2 относительно исходного уровня содержания N0* и СОД-активности, что способствует поддержанию физиологического гомеостаза. Установлено наличие обратной корреляционной зависимости между уровнем содержания N0" и СОД-активностью в нативных и фотомодифицированных в дозе 75,5 Дж/м2 нейтрофилах. Избыточное образование активных форм кислорода и азота при воздействии УФ-излучения в больших дозах (755 и 2265 Дж/м2) приводит к ингибированию системы ферментативной антиоксидантной защиты и формированию окислительного стресса клеток.

С помощью ингибитора белкового синтеза - циклогексимида - нами показано, что повышение уровня NO* и СОД-активности обусловлено УФ-индуцированной активацией синтеза индуцибельной NO-синтазы и СОД de novo. Сигнальную функцию в процессах синтеза данных белков выполняют свободные радикалы, образующиеся при фотомодификации клеток (В.Ф. Михайлов и со авт., 2003).

УФ-свет (75,5+2265 Дж/м2) оказывает модулирующее действие на уровень продукции ФНОа нейтрофилами. При этом конечный эффект определяется исходной концентрацией цитокина в клетках. УФ-облучение в дозах, близких к терапевтическим (75,5 и 453 Дж/м2), проявляет корригирующее действие относительно исходного уровня содержания цитокина. Установленная прямая корреляционная зависимость между содержанием N0" и ФНОа в нативных и фотомодифицированных в дозах 75,5 и 755 Дж/м2 нейтрофилах свидетельствует о взаимосвязи процессов синтеза данных соединений, которая проявляется, по-видимому, на уровне регуляции экспрессии индуцибельной NO-синтазы (X. Маеда, Т. Акаике, 1998; Б.С. Тэйлор и соавт., 1998).

Структурно-функциональные перестройки рецепторного аппарата способны менять функциональное состояние клетки, что находит отражение в повышении или понижении фагоцитарной активности УФ- и/или цитокинмоди-фицированных Нф и сопровождается изменением генерации активных форм кислорода и азота, СОД-активности и продукции ФНОа.

Проведенный анализ рецегггорных взаимодействий Нф при действии УФ-света и ФНОа служит важным элементом в изучении фагоцитарного звена иммунитета и необходим для раскрытия общих закономерностей регуляции реактивности фагоцитов. Рассмотрение возможных механизмов позитивной («кэп-пинг»-эффект, усиление аффинности, подключение резервного пула рецепторов) и негативной (ослабление аффинности, эндоцитоз и шеддинг) регуляции рецепции Нф в условиях воздействия факторов физической и химической природы может быть полезно при решении проблем иммунокоррекции фагоцитарных реакций и определения новых подходов к иммуномодулирующей терапии.

На основании собственных экспериментальных и литературных данных предложена схема возможного регуляторного действия УФ-света и ФНОа на функциональный потенциал нейтрофилов крови человека (рис. 9).

ВЫВОДЫ

1. При взаимодействии нейтрофилов и белков системы комплемента под действием УФ-света (240-390 нм) в диапазоне доз 75,5+2265 Дж/м2 происходит усиливающееся с ростом дозы облучения повышение антителосвязывающей способности белка СЗ, обусловленное как структурно-функциональными фотомодификациями клеточных мембран, так и процессами, протекающими в сыворотке крови, при преобладающем вкладе последних.

2. Структурно-функциональные УФ-модификации мембран нейтрофилов проявляются в виде «кэппинг»-эффекта с формированием рецепторных кластеров с лигандированным СЗ. Преобладание «кэпов» по типу «кэп 'Л» (755 Дж/м2) приводит к повышению, а амебовидных «кэпов» (2265 Дж/м2) - к снижению анти-

Рис. 9. Схема возможного регуляториого действия УФ-света и ФНОа на функциональные свойства нейтрофилов

телосвязывающей способности СЗ фактора, лигандированного на мембранах фотомодифицированных нейтрофилов.

3. УФ-облучение сыворотки крови доноров (75,5+2265 Дж/м2) вызывает увеличение антителосвязывающей способности сывороточного СЗ, усиливающееся

с ростом дозы и обусловленное, по всей видимости, процессами его расщепления на субфрагменты, активные по отношению к комплементарному каскаду. Фотоактивация сывороточного СЗ приводит к повышенной сорбции образующихся активных субфрагментов мембранами необлученных нейтрофилов.

4. Воздействие УФ-света в дозах 75,5 и 453 Дж/м2 на нейтрофилы повышает фагоцитарную активность клеток, что обусловлено интенсификацией процессов ПФОЛ, активацией НАДФН-оксидазы, миелопероксидазы, цитозольной су-пероксиддисмутазы, а также увеличением сорбционной способности рецепторов СЮ на мембранах фагоцитов в результате «кэппинг»-эффекта и/или усиления их аффинности к связываемым лигандам.

5. УФ-свет (75,5+755 Дж/мг) оказывает разнонаправленное действие на антите-лосвязывающую способность Рс-рецепторов с лигандированным на мембранах нейтрофилов, зависящее от ее исходного уровня. При исходно низкой антителосвязывающей способности наблюдается увеличение, при исходно высокой - уменьшение сорбционных свойств фотомодифицированных клеток.

6. Фактор некроза опухоли а (ФНОа) в малых концентрациях (40 и 200 пкг/мл) повышает функциональный потенциал нейтрофилов (активность НАДФН-оксидазы, СОД и миелопероксидазы, антителосвязывающую способность рецепторов), а в высоких (500 и 1000 пкг/мл) - снижает его.

7. УФ-свет (75,5+755 Дж/м2) и ФНОа (40+1000 пкг/мл) выступают в качестве иммуномодуляторов фагоцитарной активности нейтрофилов, индуцируя кратковременный тип прайминга. Их праймирующая способность максимально проявляется при сочетании УФ-излучения в дозе 75,5 Дж/м2 и ФНОа в концентрации 40 пкг/мл. С повышением дозы и концентрации модификаторов функциональная активность нейтрофилов снижается.

8. ФНОа (40 и 200 шаг/мл) индуцирует возрастание антителосвязывающей активности рецепторов Рс с лигандированным и СЯЗ на поверхности фотомодифицированных в дозах 75,5 и 453 Дж/м2 нейтрофилов. Цитокин в концентрациях 500 и 1000 пкг/мл снижает сорбционную способность рецепторов на мембранах УФ-облученных фагоцитов.

9. УФ-облучение в дозе 75,5 Дж/м2 оказывает корригирующее действие на содержание N0" и СОД-активность нейтрофилов относительно их исходного уровня. Увеличение дозы УФ-света (453+2265 Дж/м2) приводит к повышению уровня содержания метаболитов оксида азота и снижению СОД-активности. Выявлена обратная корреляционная зависимость между данными параметрами.

10. УФ-свет (75,5 и 453 Дж/м2) выступает в роли регулятора ФНО-продуцирующей способности нейтрофилов; конечный эффект его действия зависит от исходной концентрации цитокина в клетке. Установлена прямая корреляционная зависимость между содержанием N0* и ФНОа в нативных и фотомодифицированных (75,5 и 755 Дж/м2) нейтрофилах.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Структурно-функциональные фотомодификации СЗ и С4 белков системы комплемента, функционирующих отдельно и в комплексе с мембранами ней-трофилов / В.Г. Артюхов, В.В. Гусинская, Е.А. Рамильцева, Е.А. Михилева // 0лигомеры-2002: VIII международная конференция по химии и физико-химии олигомеров: тез. докл., Черноголовка, 9-14 сентября 2002 г. - Черноголовка, 2002.-С. 318.

2. The Influence of Integral (240-390 nm) and Coherent (337 nm) Ultra Violet Light on Structural and Functional Properties of Human Blood Neutrophyl Membranes / V.G.Artuychov, V.V.Gusinskaja, O.V.Basharina, L.T.Rjazantseva, E.A.Ramiltseva, E.A.Michileva // III зЪд Украшського бюф13ичного товариства: тез. доп., JlbBÎB, 8-11 жовтня 2002 р. - Льв1в, 2002 - С. 87.

3. Михилева Е.А. Влияние фактора некроза опухоли на функциональную активность фотомодифицированных нейтрофильных лейкоцитов / Е.А. Михилева // Биология - наука XXI века: 8-ая Пущинская школа-конф. молодых ученых: тез. докл., Пущино, 17-21 мая 2004 г. - Пущино, 2004. - С. 88.

4. Гусинская В.В. Взаимодействие белка СЗ системы комплемента с нейтрофи-лами крови человека в условиях УФ-облучения / В.В. Гусинская, Е.А. Михилева // III съезд биофизиков России: тез. докл., Воронеж, 24-29 июня 2004 г. - Воронеж, 2004. - С. 633-634.

5. Михилева Е.А. Сочетанное действие УФ-света и фактора некроза опухоли на активность миелопероксидазы нейтрофилов / Е.А. Михилева, В.В. Гусинская, В.Г. Артюхов II Российский физиологический журнал. - 2004. - Т. 90, №8 (Приложение). - С. 117-118.

6. Артюхов В.Г. Взаимодействие нейтрофилов крови человека с СЗ-фактором системы комплемента в условиях УФ-облучения / В.Г.Артюхов, В.В. Гусинская, Е.А. Михилева // Иммунология. - 2005. - Т. 26, №2. - С. 76-79.

7. Михилева Е.А. Продукция фактора некроза опухоли-a УФ-модифицированными нейтрофилами крови человека / Е.А. Михилева, В.В. Гусинская, В.Г. Артюхов // Организация и регуляция физиолого-биохимических процессов. - Воронеж, 2005. - Вып. 7. - С. 114-117.

8. Артюхов В.Г. УФ-индуцированные изменения структурно-функционального состояния мембран нейтрофильных лейкоцитов, функционированных отдельно и в комплексе с СЗ белком комплемента / В.Г. Артюхов, В.В. Гусинская, ЕЛ. Михилева //IV съезд фотобиологов России: тез. докл., Саратов, 26-30 сентября 2005 г. - Саратов, 2005. - С. 12.

9. Артюхов В.Г. Уровень продукции оксида азота и фактора некроза опухоли-а нейтрофильными лейкоцитами крови человека в условиях УФ-облучения / В.Г. Артюхов, В.В. Гусинская, Е.А. Михилева // Радиационная биология. Радиоэкология. - 2005. - Т. 45, №5. - С. 584-588.

10. Артюхов В.Г. Изменения локализации CR1 рецепторов на поверхности нейтрофильных лейкоцитов, индуцированные УФ-свегом / В.Г. Артюхов, В.В. Гусинская, Е.А. Михилева// Иммунология. - 2006. - Т. 27, №1. - С. 6-9.

Заказ № 16 от 24.01 06 г. Тир. 100 экз. Лаборатория оперативной полиграфии ВГУ

! ¡

! ! I i

»*2 59 8

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Михилева, Елена Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. Нейтрофильные лейкоциты, их роль в регуляции иммунного гомеостаза организма.

1.1. Морфологические и функциональные особенности нейтрофи

1.2. Рецепторы и белки на поверхности нейтрофилов.

1.3. Участие активных кислородных метаболитов в реализации эффек-торного потенциала нейтрофилов.

1.4. Цитокины как медиаторы иммунного ответа. Роль фактора некроза опухоли в иммунологических реакциях.

ГЛАВА 2. Воздействие УФ-света на состояние компонентов иммунной системы.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 3. Объекты и методы исследования.

3.1.Объекты исследования.

3.2. Методы исследования.

3.2.1. Выделение нейтрофилов из крови человека.

3.2.2. Получение сыворотки крови.

3.2.3. УФ-облучение исследуемых образцов.

3.2.4. Инкубация нейтрофилов с фактором некроза опухоли а.

3.2.5. Метод иммуноферментного анализа для определения поверхностных рецепторов нейтрофилов.

3.2.6. Метод иммунофлуоресценции для изучения структурных свойств мембран нейтрофилов. ^

3.2.7. Получение лизатов нейтрофилов для определения концентрации ФНОа.

3.2.8. Метод иммуноферментного анализа для определения концентрации ФНОа в лизатах нейтрофилов.

3.2.9. Измерение интенсивности люминолзависимой хемилюминес-ценции нейтрофилов.

3.2.10. Получение супернатанта нейтрофилов

3.2.11. Определение активности супероксиддисмутазы нейтрофилов крови человека.

3.2.12. Определение продукции оксида азота нейтрофилами крови человека

3.2.13. Определение активности миелопероксидазы нейтрофилов крови человека.

3.2.14. Определение концентрации белка методом Лоури.

3.2.15. Определение жизнеспособности нейтрофилов с помощью три-панового синего.

3.2.16. Статистическая обработка результатов экспериментов.

ГЛАВА 4. Влияние УФ-света на процесс взаимодействия мембран нейтрофилов с СЗ фактором системы комплемента. ^

4.1. Взаимодействие мембран нейтрофилов с СЗ фактором системы комплемента в условиях УФ-облучения

4.2. Влияние УФ-света на функциональное состояние мембраносвя-занного СЗ.

4.3. Взаимодействие фотомодифицированных нейтрофилов с сывороточным СЗ.

4.4. Влияние УФ-света на структурно-функциональное состояние сывороточного СЗ. '

4.5. Влияние УФ-света на локализацию СШ-рецепторов с лигандированным СЗ на поверхности нейтрофилов. ''

4.6. Определение роли фотомодификаций мембран нейтрофилов и белка СЗ в изменении антителосвязывающей способности изучаемой ^ системы.

ГЛАВА 5. Исследование сочетанного действия УФ-света и фактора некроза опухоли а на функциональную активность нейтрофилов.

5.1. Влияние сочетанного действия УФ-света и ФНОа на уровень спонтанной хемилюминесценции.

5.2. Исследование уровня жизнеспособности УФ- и цитокинмодифи-цированных нейтрофилов с помощью красителя трипанового синего

5.3. Влияние сочетанного действия УФ-света и ФНОа на фагоцитарную активность нейтрофилов.

5.4. Исследование сочетанного действия УФ-света и ФНОа на активность супероксиддисмутазы нейтрофилов. ^^

5.5. Исследование активности миелопероксидазы нейтрофилов в условиях сочетанного действия УФ-света и ФНОа.

5.6. О процессах, ответственных за изменение функциональной активности УФ- и/или цитокинмодифицированных нейтрофилов. Ш

ГЛАВА 6. Влияние сочетанного действия УФ-света и фактора некроза опухоли а на структурно-функциональное состояние рецепторов им- ^^ мунной адгезии.

6.1. Исследование сочетанного действия УФ-света и ФНОа на структурно-функциональное состояние Fc-рецепторов с лигандированным иммуноглобулином G на мембранах нейтрофилов. ^

6.2. Исследование сочетанного действия УФ-света и ФНОа на десорбцию молекул свободного и связанного на Fc-рецепторах иммуногло

1 9 Л булина G с УФ- и/или цитокинмодифицированных нейтрофилов.

6.3. Исследование сочетанного действия УФ-света и ФНОа на структурно-функциональное состояние CR3 рецепторов на мембранах нейтрофилов

6.4. О вкладе рецепторного аппарата в реализацию функционального потенциала нейтрофилов. ^^

ГЛАВА 7. Влияние УФ-света на цитотоксическую активность нейтрофилов

7.1. Влияние УФ-света на продукцию оксида азота нейтрофилами крови человека.

7.2. Влияние УФ-света на продукцию ФНОа нейтрофилами крови человека

7.3. Влияние УФ-света на активность супероксиддисмутазы нейтрофилов крови человека.

7.4. Продукция оксида азота и активность супероксиддисмутазы УФ-модифицированных нейтрофилов в присутствии циклогексими

Введение Диссертация по биологии, на тему "Модуляция физико-химическими агентами структурно-функционального состояния нейтрофилов крови человека"

Использование в клинике при воспалительных процессах и других иммунопатологиях, обусловленных недостаточностью системы нейтрофилов, препаратов на основе естественных клеточных регуляторов - цитокинов -открывает большие перспективы. Среди рекомбинантных цитокинов, применяемых в современной медицине, интерес представляет фактор некроза опухоли а. Его мощное биологическое влияние на иммуногенез, воспалительные процессы и опухолевые клетки позволяет считать фактор некроза опухоли (ФНОа) многообещающим средством иммунотерапии онкологических, воспалительных, инфекционных и аутоиммунных заболеваний, а также при иммунодефицитах, трансплантации органов и тканей [123].

Участие нейтрофилов в процессах распознавания возбудителя и формирования иммунного ответа во многом определяется внутриклеточным метаболизмом и структурно-функциональным состоянием рецепторного аппарата клеток [40]. Дефекты в работе ферментных систем и ослабление адгезивных взаимодействий нейтрофилов ведут к серьезным нарушениям фагоцитоза, что ослабляет неспецифический иммунитет и может служить причиной частого бактериального инфицирования. Однако бесконтрольное действие большого количества активированных нейтрофилов приводит к повреждениям тканей и органов собственного организма, развитию аутоиммунной агрессии. Все это определяет необходимость поиска эффективных методов воздействия на кровь и ее компоненты, корригирующих функциональное состояние фагоцитов.

Одним из методов иммунокоррекции является ультрафиолетовое облучение крови. Аутотрансфузия УФ-облученной крови в настоящее время широко используется при лечении гнойно-септических, сердечно-сосудистых и других заболеваний [51, 80]. В проведенных экспериментальных и клинических исследованиях установлен дезинтоксикационный, противовоспалительный, иммуномодулирующий эффект действия УФ-света [81, 97, 110], его участие в структурно-функциональных перестройках рецепторного аппарата иммунокомпетентных клеток [22, 25, 45, 98, 220, 241], в процессах активации белков системы комплемента [3, 29, 30, 31], сывороточных иммуноглобулинов [103], модуляции уровня цитокинов [116, 200].

Несмотря на значительные успехи в изучении фагоцитарного звена иммунитета, исследование регуляторного действия УФ-света на функциональную (фагоцитарную, секреторную, адгезионную, цитотоксическую) активность нейтрофилов остается малоизученной областью фотоиммунологии. Практически отсутствуют работы, посвященные анализу взаимосвязи структурно-функциональных фотомодификаций фагоцитов с процессами их взаимодействия с сывороточными опсонинами, в частности белками системы комплемента, а также с медиаторами иммунного ответа - цитокинами. Необходимость таких исследований очевидна с точки зрения современных представлений о функциональной кооперации клеточных и гуморальных компонентов иммунной системы. Раскрытие закономерностей и механизмов действия УФ-излучения на клеточные и гуморальные звенья иммунной системы позволит теоретически обосновать практическое применение УФ-света в клинической практике.

Интерес представляет также изучение возможности регуляции активности фагоцитов сочетанным действием естественных модуляторов физической и химической природы (к примеру, УФ-света и фактора некроза опухоли). Так, использование ФНОа в различных концентрациях на фоне фотомодификации крови может способствовать повышению эффективности иммунокорригирующего действия АУФОК при лечении патологий различной степени тяжести.

В связи с этим перед нами стояли следующие задачи:

1. Изучить влияние УФ-света (240-390 нм) в диапазоне доз 75,5+2265 Дж/м на процесс взаимодействия нейтрофилов с СЗ фактором системы комплемента.

2. Выявить влияние УФ-света

75,5-755 Дж/м ) и фактора некроза опухоли а (40-5-1000 пкг/мл) на фагоцитарную активность и состояние ферментных систем нейтрофилов.

3. Оценить вклад изменении структурно-функционального состояния рецепторов иммунной адгезии (РсИ. и СЮ) на мембранах УФ- и/или ФНОмодифицированных нейтрофилов в модуляцию фагоцитарной активности данных клеток.

4. Исследовать цитотоксическую (ФНО-продуцирующую и N0*-секретирующую) способность нейтрофилов в условиях УФ-облучения (75,5-2265 Дж/м2).

Научная новизна. Работа является комплексным исследованием, посвященным ' изучению структурно-функционального состояния нейтрофилов при действии УФ-света и ФНОа.

Показано регуляторное действие УФ-света и ФНОа на фагоцитарную активность нейтрофилов. Рассматривается вклад различных процессов (пероксидного фотоокисления липидов, активности НАДФН-оксидазы, миелопероксидазы и супероксиддисмутазы) в изменение функционального потенциала фото- и ФНО-модифицированных нейтрофилов. Обсуждаются возможные пути изменения структурно-функционального состояния рецепторов иммунной адгезии (CRI, CR3, FcR), приводящие к повышению или понижению функциональной активности модифицированных фагоцитов.

Выявлено иммунокорригирующее действие УФ-света на уровень продукции N0* и фактора некроза опухоли а нейтрофилами; конечный эффект при этом определяется исходным уровнем исследуемых показателей и дозой УФ-света. Установлены корреляционные зависимости между уровнем генерации N0* и ФНО-продуцирующей способностью и СОД-активностью нейтрофилов.

Данные, полученные при исследовании функциональной активности фотомодифицированных нейтрофилов в присутствии ФНОа (уровень процессов ПФОЛ, состояние систем генерации АКМ, антиоксидантной системы, рецепторного аппарата), могут быть использованы для оценки резервных возможностей иммунитета и определения глубины и динамики патологических сдвигов в организме.

Предложенная схема регуляторного действия УФ-света и ФНОа на функциональные свойства нейтрофилов может быть полезна для понимания молекулярных механизмов иммунокорригирующего действия метода АУФОК.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на VIII международной конференции по химии и физико-химии олигомеров «0лигомеры-2002» (Черноголовка, 2002); 8-ой Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2004); III съезде биофизиков России (Воронеж, 2004); XIX съезде физиологического общества им. И. П. Павлова (СПб., 2004); Научной сессии сотрудников Воронежского госуниверситета (Воронеж, 2005); IV съезде фотобиологов России (Саратов, 2005).

На защиту выносятся следующие положения: Л

1. УФ-свет (240-390 нм) в дозах 75,5-^2265 Дж/м индуцирует повышение антителосвязывающей способности СЗ компонента комплемента в системе из взаимодействующих нейтрофилов и белков системы комплемента. л

2. УФ-излучение в дозах 75,5-^-755 Дж/м и ФНОа в концентрациях 40-7-1000 пкг/мл оказывают модулирующее действие на функциональное состояние нейтрофилов (системы генерации активных кислородных метаболитов и антиоксидантной защиты, рецепторный аппарат), изменяя фагоцитарную активность клеток. л

3. УФ-свет (75,5-^2265 Дж/м ) усиливает антителосвязывающую способность СИЗ-рецепторов и вызывает разнонаправленные эффекты в отношении Рс-рецепторов с лигандированным 1§0, зависящие от исходного уровня их сорбционной способности. л

4. УФ-облучение нейтрофилов в дозах 75,5^-2265 Дж/м оказывает корригирующее действие на генерацию N0* и продукцию ФНОа данными клетками.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа включает 201 страницу машинописного текста, 15 таблиц, 43 рисунка. Состоит из «Введения», семи глав, «Заключения», «Выводов» и «Приложения». Список литературы содержит 272 источника, из них 128 — отечественных и 144 -зарубежных.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Михилева, Елена Александровна

выводы

1. При взаимодействии нейтрофилов и белков системы комплемента под действием УФ-света (240-390 нм) в диапазоне доз 75,5^-2265 Дж/м происходит усиливающееся с ростом дозы облучения повышение антителосвя-зывающей способности белка СЗ, обусловленное как структурно-функциональными фотомодификациями клеточных мембран, так и процессами, протекающими в сыворотке крови, при преобладающем вкладе последних.

2. Структурно-функциональные УФ-модификации мембран нейтрофилов проявляются в виде «кэппинг»-эффекта с формированием рецепторных кластеров с лигандированным СЗ. Преобладание «кэпов» по типу «кэп 'А» (755 Дж/м ) приводит к повышению, а амебовидных «кэпов»

2265 Дж/м )

- к снижению антителосвязывающей способности СЗ фактора, лигандиро-ванного на мембранах фотомодифицированных нейтрофилов.

3. УФ-облучение сыворотки крови доноров (75,5-^2265 Дж/м ) вызывает увеличение антителосвязывающей способности сывороточного СЗ, усиливающееся с ростом дозы и обусловленное, по всей видимости, процессами его расщепления на субфрагменты, активные по отношению к комплементарному каскаду. Фотоактивация сывороточного СЗ приводит к повышенной сорбции образующихся активных субфрагментов мембранами необ-лученных нейтрофилов.

4. Воздействие УФ-света в дозах 75,5 и 453 Дж/м на нейтрофилы повышает фагоцитарную активность клеток, что обусловлено интенсификацией процессов ПФОЛ, активацией НАДФН-оксидазы, миелопероксидазы, цитозольной супероксиддисмутазы, а также увеличением сорбционной способности рецепторов CR3 на мембранах фагоцитов в результате «кэп-пинг»-эффекта и/или усиления их аффинности к связываемым лигандам.

5. УФ-свет (75,5-^-755 Дж/м2) оказывает разнонаправленное действие на антителосвязывающую способность Fc-рецепторов с лигандированным

IgG на мембранах нейтрофилов, зависящее от ее исходного уровня. При исходно низкой антителосвязывающей способности наблюдается увеличение, при исходно высокой - уменьшение сорбционных свойств фотомо-дифицированных клетЬк.

7. УФ-свет (75,5-755 Дж/м2) и ФНОа (40-И 000 пкг/мл) выступают в качестве иммуномодуляторов фагоцитарной активности нейтрофилов, индуцируя кратковременный тип прайминга. Их праймирующая способность максимально проявляется при сочетании УФ-излучения в дозе 75,5 Дж/м и ФНОа в концентрации 40 пкг/мл. С повышением дозы и концентрации модификаторов функциональная активность нейтрофилов снижается.

8. ФНОа (40 и 200 пкг/мл) индуцирует возрастание антителосвязывающей активности рецепторов Fe с лигандированным IgG и CR3 на поверхо ности фотомодифицированных в дозах 75,5 и 453 Дж/м нейтрофилов. Цитокин в концентрациях 500 и 1000 пкг/мл снижает сорбционную способность рецепторов на мембранах УФ-облученных фагоцитов. ij

9. УФ-облучение в дозе 75,5 Дж/м оказывает корригирующее действие на содержание N0* и СОД-активность нейтрофилов относительно их исходного уровня. Увеличение дозы УФ-света (453-2265 Дж/м2) приводит к повышению уровня содержания метаболитов оксида азота и снижению ' СОД-активности. Выявлена обратная корреляционная зависимость между данными параметрами. л

Ю.УФ-свет (75,5 и 453 Дж/м ) выступает в роли регулятора ФНО-продуцирующей способности нейтрофилов; конечный эффект его действия зависит от исходной концентрации цитокина в клетке. Установлена прямая корреляционная зависимость между содержанием N0* и ФНОа в нативных и фотомодифицированных (75,5 и 755 Дж/м ) нейтрофилах.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

С помощью методов иммуноферментного и иммунофлуоресцентного анализа, люминолзависимой хемилюминесценции, определения каталитической активности СОД и миелопероксидазы, генерации N0*, жизнеспособности и продукции ФНОа нейтрофилами исследовано влияние УФ-света (240390 нм) в дозах 75,5-^2265 Дж/м2 и ФНОа в концентрациях 40-И ООО пкг/мл на структурно-функциональные свойства нейтрофилов человека.

Для исследования механизмов действия УФ-излучения на структурно-функциональное состояние мембран Нф и СЗ компонента комплемента, функционирующих отдельно и в комплексе друг с другом, была разработана схема ИФА-тестов на основе оценки антителосвязывающей способности сывороточного и мембраносвязанного белка СЗ.

Установлено, что эффект усиливающегося с ростом дозы УФ-света повышения антителосвязывающей способности СЗ в системе из взаимодействующих УФ-облученных компонентов (мембран Нф и СЗ фактора) является суммарным и определяется структурно-функциональными фотомодификациями как клеточных мембран, так и процессами, протекающими в сыворотке крови, при преобладающем вкладе последних.

Показано, что структурно-функциональные фотомодификации мембран Нф проявляются в виде «кэппинг»-эффекта с образованием рецептор-ных кластеров с лигандированным СЗ фактором комплемента. Преобладание распределения флуоресцирующих комплексов на УФ-модифицированных Нф (75,5-7-2265 Дж/м ) по типу «кэп 'Л» приводит к повышению антителосвязывающей способности лигандированного СЗ и, как следствие, к возрастанию агдезивных свойств фагоцитов. Вместе с тем, с повышением дозы УФ-облучения (2265 Дж/м2) наблюдается увеличение процента клеток с амебовидным «кэпом», что, по-видимому, ведет к структурной изоляции рецепторов путем интернализации или шеддинга комплексов рецептор-лиганд. Ин-тернализация рецепторных кластеров осуществляется по механизму эндоцитоза. Таким образом, изменяя число и локализацию рецепторов с лигандиро-ванным СЗ белком комплемента, фагоциты способны регулировать свои свойства: рецепторные, агдезивные, сорбционные и т. д.

Выявлено, что УФ-свет (453 и 755 Дж/м2) и ФНОа (500 и 1000 пкг/мл) снижают жизнеспособность Нф вследствие деструктивной модификации внешних примембранных слоев клеток, что сопровождается увеличением проницаемости мембран для красителя трипанового синего. Сочетанное дейл ствие УФ-облучения (75,5V755 Дж/м ) и ФНОа в концентрациях 200, 500 и 1000 пкг/мл усиливает процесс деструкции мембран фагоцитов. УФ-свет и ФНОа в меньших дозах и концентрациях не оказывают влияния на жизнеспособность Нф.

С помощью методов люминолзависимой хемилюминесценции, ИФА и определения ферментативной активности СОД и МПО изучено влияние со-четанного действия УФ-света

75,54-755 Дж/м ) и ФНОа (40-И 000 пкг/мл) на фагоцитарную активность Нф периферической крови человека. Выявлен вклад процессов ПФОЛ, активности ферментных систем (НАДФН-оксидазы, СОД и МПО) и функционального состояния рецепторов FcR и CR3 в изменение фагоцитарной активности фото- и ФНО-модифицированных Нф.

Установлено, что УФ-свет (75,5V755 Дж/м2) и ФНОа (40-И 000 пкг/мл), действуя по отдельности и в сочетании друг с другом, повышают уровень спонтанной (без стимуляции к фагоцитозу) хемилюминесценции Нф, а, следовательно, и интенсивность процессов ПФОЛ. л

Обнаружено, что УФ-свет (75,5 и 453 Дж/м ) оказывает праймирующее действие, индуцируя повышение функционального потенциала стимулированных к фагоцитозу Нф (прайминг), что проявляется в увеличении генерации активных метаболитов кислорода. Фотоиндуцированный прайминг Нф обусловлен, главным образом, активацией НАДФН-оксидазного комплекса вследствие прямого и/или опосредованного продуктами ПФОЛ действия УФсвета. Увеличение продукции Ог способствует возрастанию СОДактивности. В свою очередь, возможное образование в ходе реакции диссму-тации пероксида водорода - компонента системы миелопероксидазы - стимулирует миелопероксидазную активность клеток. Повышение фагоцитарной активности Нф сопровождается разнонаправленными изменениями анти-телосвязывающей способности Fc-рецепторов с лигандированным IgG у разных доноров, что, по-видимому, определяется ее исходным уровнем. Выявлено усиление способности CR3 рецепторов к связыванию специфических антител на мембранах фотомодифицированных в дозах

75,5-755 Дж/м Нф.

Повышение антителосвязывающей способности является результатом «кэп-пинг»-эффекта, а также усиления аффиности данных рецепторных молекул к связываемым антителам.

Показано, что ФНОа в диапазоне концентраций 40-И ООО пкг/мл выступает в качестве регулятора фагоцитарной активности Нф, при этом изменение функциональных свойств фагоцитов в присутствии цитокина является разнонаправленным и зависит от концентрации ФНОа.

Нами установлено, что ФНОа в концентрациях 40 и 200 пкг/мл индуцирует увеличение функциональной активности фагоцитов, обусловленное активацией НАДФН-оксидазы (по Са -независимому механизму) и усилением антителосвязывающей способности CR3 и FcR с лигандированным IgG. Наблюдаемое увеличение СОД-активности в данном случае обусловлено праймингом цитокинмодифицированных Нф и направлено на регуляцию содержания в клетке токсичных для нее АКМ. Цитокининдуцированное возрастание СОД-активности приводит, по всей видимости, к накоплению пероксида водорода и, как следствие этого, повышению активности МПО. Выявлена прямая корреляционная зависимость между данными параметрами. ФНОа в концентрации 1000 пкг/мл приводит к снижению фагоцитарной активности Нф, вероятно, за счет инактивации НАДФН-оксидазы вследствие цитотоксического действия цитокина на мембранные структуры модифици-. рованных клеток. ФНОа в концентрациях 500 и 1000 пкг/мл ингибирует активность МПО фагоцитов и уменьшает антителосвязывающую способность рецепторов РсЯ и СЮ на поверхности клеток, что обусловлено, по всей видимости, ослаблением их аффинности к связываемым лигандам, а также ФНО-индуцированным шеддингом рецепторных молекул.

Показано, что УФ-свет в дозе 75,5 Дж/м и/или ФНОа в концентрации 40 пкг/мл оказывают стимулирующее действие на функциональный потенциал Нф, что может быть опосредовано как увеличением активности НАДФН-оксидазы, СОД и МПО, так и повышением аффинности 1§0, лигандирован-ного на БсЯ, и рецепторов СЮ, а также возрастанием числа последних в ходе дегрануляции и транслокации предсуществующих рецепторных молекул на клеточную поверхность. Установлено, что инкубация УФ-облученных в дозах 453 и 755 Дж/м Нф с ФНОа в концентрации 40 пкг/мл, а также клеток, фотомодифицированных во всем диапазоне доз с цитотокином в концентрации 200 пкг/мл приводит к снижению функциональной активности фагоцитов. При этом антителосвязывающая способность РсЯ с лигандированным (у доноров с исходно низкой антителосвязывающей способностью) и рецепторов СЮ сохраняется на высоком уровне. Это свидетельствует об определяющей роли инактивации ферментных систем в изменении функционального потенциала Нф.

С повышением концентрации цитокина (500 и 1000 пкг/мл) наблюдается подавление фагоцитарной активности УФ-облученных клеток, вызванное потерей активности ферментных систем (НАДФН-оксидазы и МПО) и уменьшением адгезивных свойств рецепторного аппарата.

Нами выявлено, что модификация Нф УФ-светом (2265 и

4530 Дж/м ) и/или ФНОа в концентрации 1000 пкг/мл приводит к шеддингу как лигандов, так и комплексов рецептор-лиганд с поверности клеток, усиливающемуся с ростом дозы УФ-облучения.

Показано, что СОД-активность Нф повышается при сочетанном действии УФ-излучения в дозе 75,5 Дж/м2 и ФНОа в концентрации 40 пкг/мл. В остальных случаях цитокин (40-И ОООпкг/мл) не оказывает влияния на активл ность фермента фотомодифицированных (75,5-^755 Дж/м ) Нф. В целом изменение функционального потенциала стимулированных к фагоцитозу Нф при сочетанном действии УФ-света и цитокина в большинстве случаев регулируется несколькими механизмами, действующими одновременно и включающими в себя модуляцию активности ферментных систем, обеспечивающих эффекторные функции Нф в фагоцитозе (НАДФН-оксидазы и МПО), и изменение структурно-функционального состояния рецепторного аппарата клетки.

В основе проявления нейтрофилами цитотоксической активности лежит генерация активных метаболитов кислорода и азота, а также секреция цитокинов, главным образом ФНОа, проявляющего цитолитическую активность. Выявлено корригирующее действие УФ-света в дозе 75,5 Дж/м относительно исходного уровня содержания N0* и СОД-активности, что способствует поддержанию физиологического гомеостаза. Установлено наличие обратной корреляционной зависимости между уровнем содержания N0* и СОД-активностью в нативных и фотомодифицированных в дозе 75,5 Дж/м нейтрофилах. Избыточное образование активных форм кислорода и азота при воздействии УФ-излучения в больших дозах (755 и 2265 Дж/м ) приводит к ингибированию системы ферментативной антиоксидантной защиты и формированию окислительного стресса клеток.

С помощью ингибитора белкового синтеза - циклогексимида - нами показано, что повышение уровня N0* и СОД-активности обусловлено УФ-индуцированной активацией синтеза индуцибельной КЮ-синтазы и СОД с!е поуо. Сигнальную функцию в процессах синтеза данных белков выполняют свободные радикалы, образующиеся при фотомодификации клеток [70].

УФ-свет (75,5-^2265 Дж/м ) оказывает модулирующее действие на уровень продукции ФНОа нейтрофилами. При этом конечный эффект определяется исходной концентрацией цитокина в клетках. УФ-облучение в дозах, близких к терапевтическим (75,5 и 453 Дж/м ), проявляет корригирующее действие относительно исходного уровня содержания цитокина. Установленная прямая корреляционная зависимость между содержанием N0* и

ФНОа в нативных и фотомодифицированных в дозах 75,5 и 755 Дж/м ней-трофилах свидетельствует о взаимосвязи процессов синтеза данных соединений, которая проявляется, по-видимому, на уровне регуляции экспрессии индуцибельной NO-синтазы [65, 115].

Структурно-функциональные перестройки рецепторного аппарата способны менять функциональное состояние клетки, что находит отражение в повышении или понижении фагоцитарной активности УФ- и/или цитокин-модифицированных Нф и сопровождается изменением генерации активных форм кислорода и азота, СОД-активности и продукции ФНОа.

Проведенный анализ рецепторных взаимодействий Нф при действии УФ-света и ФНОа служит важным элементом в изучении фагоцитарного звена иммунитета и необходим для раскрытия общих закономерностей регуляции реактивности фагоцитов. Рассмотрение возможных механизмов позитивной («кэппинг»-эффект, усиление аффинности, подключение резервного пула рецепторов) и негативной (ослабление аффинности, эндоцитоз и шед-динг) регуляции рецепции Нф в условиях воздействия факторов физической и химической природы может быть полезно при решении проблем иммуно-коррекции фагоцитарных реакций и определения новых подходов к иммуно-модулирующей терапии.

Рис. 43. Схема возможного регуляторного действия УФ-света и ФНОа на структурно-функциональные свойства нейтрофилов

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Михилева, Елена Александровна, Воронеж

1. Албертс Б. Молекулярная биология клетки: в 3-х т. / Б. Албертс и др.; пер. с англ. -М.: Мир, 1994. Т. 1. -517 с.

2. Алмазов В.А. Физиология лейкоцитов человека / В.А. Алмазов и др. -Л.: Наука, 1979.-230 с.

3. Артюхов В.Г. Роль фотомодификации некоторых компонентов крови в изменении функциональной активности системы комплемента сыворотки доноров / В.Г. Артюхов, В.В. Гусинская, Г.И. Зарубаева // Иммунология. 1990.-№ 6. - С. 9-12.

4. Артюхов В.Г. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами / В.Г. Артюхов, М.А. Наквасина. Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 2000. - 296 с.

5. Арцишевская P.A. Десорбция гликопротеинов с поверхности лимфоцитов периферической крови человека после облучения коротковолновыми УФ-лучами / P.A. Арцишевская, А.П. Миронова, К.А. Самойлова // Цитология. 1984. - Т. 26, № 2. - С. 209-214.

6. Бакуев М. М. Особенности секреции миелопероксидазы и хемилюми-несцентного ответа нейтрофилов человека при контакте со стимуляторами различной природы / М.М. Бакуев, М.З. Саидов, A.A. Бутаков // Иммунология. 1991.-№ 1.- С. 15-17.

7. Бахов Н.И. Механизмы защиты организма от вирусных инфекций: ней-трофильные лейкоциты / Н.И. Бахов, Ю.Ф. Майчук, A.B. Корнев // Успехи современной биологии. -2000. Т. 120, № 1. - С. 23-25.

8. Белецкий И.П. Пути передачи цитотоксического сигнала рецепторами семейства TNF-Rs / И.П. Белецкий, А.Б. Мошникова, О.В. Прусакова // Биохимия. 2002. - Т. 67, вып. 3. - С. 377-395.

9. Бережная Н.М. Нейтрофилы и иммунологический гомеостаз / Н.М. Бережная. Киев: Наук, думка. - 1988. - 192 с.

10. Болдырев A.A. Окислительный стресс и мозг / A.A. Болдырев // Соро-совский образовательный журнал. 2001. - Т. 7, № 4. - С. 21-28.

11. И.Вальтер Т. Фагоцитарная активность гранулоцитов после УФ-облучения / Т. Вальтер, М. Риттер, В. Гаст // Биофизика. 1989. - Т. 34, №6.-С. 1001-1003.

12. Ванин А.Ф. Оксид азота в биомедицинских исследованиях / А.Ф. Ванин // Вестник РАМН. 2000. - № 4. - С. 3-5.

13. Варгин В.В. Вторичные иммунодефицита, возникающие в ходе инфекции / В.В. Варгин, Б.Ф. Семенов // Иммунология инфекционного процесса. M., 1994. - С. 178-192.

14. Василенко A.M. Цитокины в сочетанной регуляции боли и иммунитета / A.M. Василенко, JI.A. Захарова // Успехи современной биологии. -2000.-Т. 120, №2.-С. 174-189.

15. Васильева Г.И. Кооперативное взаимодействие моно- и полинуклеар-ных фагоцитов, опосредованное моно- и нейтрофилокинами / Г.И. Васильева, И.А. Иванова, С.Ю. Тюкавкина // Иммунология. 2000. - № 5. -С. 11-17.

16. Викторов И.В. Роль оксида азота и других свободных радикалов в ишемической патологии мозга / И.В. Викторов // Вестник РАМН. -2000.-№4.-С. 5-10.

17. Владимиров Ю.А. Физико-химические основы фотобиологических процессов / Ю.А. Владимиров, А.Я. Потапенко. М: Высшая школа, 1989.- 199 с.

18. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в первичных биологических процессах / Ю.А. Владимиров // Биологические мембраны. 1998. - Т. 15, №5.-С. 517-529.

19. Владимиров Ю.А. Биохемилюминесценция / Ю.А. Владимиров // Современное естествознание: энциклопедия: в 10-ти т. М.: Издательский Дом Магистр-Пресс, 2000. - Т. 8: Молекулярные основы биологических процессов. - С. 294-302.

20. Влияние некоторых иммуномодуляторов на функциональную активность фагоцитирующих клеток периферической крови доноров / C.B. Дамбаев и др. // Иммунология. 2000. - № 6. - С. 15-20.

21. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на продукцию оксида азота и цитокинов лейкоцитами / Г.И. Клебанов и др. // Биологические мембраны. 2002. - Т. 19, № 5. - С. 391-402.

22. Влияние УФ-облучения в терапевтических дозах на экспрессию некоторых маркеров поверхности лимфоцитов крови доноров / К.А. Самойлова и др. // Тезисы III Всесоюзного съезда гематологов и трансфу-зиологов. М., 1991. - Т. 2. - С. 416-417.

23. Влияние УФ-облучения на функциональную активность нейтрофилов крови человека / В.Г. Артюхов и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2005. - Т. 139, № 3. - С. 291-293.

24. Влияние эндогенных фотосенсибилизаторов на лазер-индуцированный прайминг лейкоцитов крови / Г.И. Клебанов и др. // Биологические мембраны. 1998. - Т. 15, № 3. - С. 273-285.

25. Волгарева Е.В. Влияние УФ-облучения и УФ-облученной аутологич-ной крови на функциональное состояние лимфоцитов периферической крови человека / Е.В. Волгарева, А.П. Волгарев, К.А. Самойлова // Цитология. 1990. - Т. 32, № 12. - С. 1217-1224.

26. Волькенштейн М.В. Биофизика / М.В. Волькенштейн. М.: Наука, 1988.-С. 141-142.

27. Гамова И.М. Изменения экспрессии мембранных рецепторов иммуно-компетентных клеток крови, индуцированные различными методами фотомодификации крови / И.М. Гамова, К.Д. Оболенская, К.А. Самойлова // Цитология. 1991. - Т. 33, № 9. - С. 63.

28. Гистология / Под ред. В.Г. Елисеева, Ю.И. Афанасьева, H.A. Юриной.- М.: МедицинаГТ983. с. 146-147.

29. Гусинская В.В. Структурно-функциональное состояние отдельных факторов системы комплемента УФ-облученной сыворотки крови человека / В.В. Гусинская, С.А. Воробьева // Успехи физиол. наук. 1994. -Т. 25, № 1.-С. 117-118.

30. Гусинская В.В. Анализ УФ-индуцированных структурно-функциональных изменений белков системы комплемента и эритроци-тарных мембран: дисс. . канд. биол. наук / В.В. Гусинская. — Воронеж, 1995. 173 с.

31. Гусинская B.B. Функциональная активность отдельных факторов сис- • темы комплемента УФ-модифицированной сыворотки крови человека /

32. B.В. Гусинская, В.Г. Артюхов, С.А. Воробьева // Физико-химические основы функционирования белков и их комплексов: Материалы Международного симпозиума. Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 1995.1. C. 38-44.

33. Двурекова Е.А. Структурно-функциональное состояние иммуноцитов при их взаимодействии с гуморальными факторами иммунной системы в условиях УФ-облучения: дисс. . канд. биол. наук / Е.А. Двурекова. -Воронеж, 2005. 208 с.

34. Действие липополисахаридов и УФ-света диапазона С на регуляцию апоптоза нейтрофилов человека / М.Г. Винокуров и др. // Иммунология. 2001. - № 2. - С. 25-27.

35. Дмитриев Е.В. Модуляция структурно-функциональных изменений мембран Т- и B-лимфоцитов крови человека некоторыми химическими и физическими агентами: дисс. . канд. биол. наук / Е.В. Дмитриев. -Воронеж, 2003 161 с.

36. Долгушин И.И. Участие нейтрофилов в регуляции воспалителыю-репаративной реакции поврежденной ткани / И.И. Долгушин, A.B. Зу-рочка, A.B. Чукичев // Иммунология. 1998. - № 6. - С. 14.

37. Дубинина Е.Е. Некоторые особенности функционирования ферментов антиоксидантной защиты плазмы крови человека / Е.Е. Дубинина // Биохимия. 1993. - Т. 58, № 2. - С. 268-273.

38. Жеребцов H.A. Биохимия: Учебник / H.A. Жеребцов, Т.Н. Попова, В.Г. Артюхов. Воронеж: Изд-во Воронеж, гос. ун-та, 2002. - 696 с.

39. Зезеров Е.Г. Патогенетическое, диагностическое и терапевтическое значение факторов роста, цитокинов, индукторов и ингибиторов апоптоза при раке предстательной железы / Е.Г. Зезеров // Клиническая лабораторная диагностика. 1999. - № 9. - С. 11.

40. Землянухин A.A. Практикум по биохимии / A.A. Землянухин; под ред. A.B. Веретенникова. Воронеж: Изд-во Воронеж, ун-та, 1993. - 185 с.

41. Земсков A.M. Типовые реакции иммунной системы при патологических процессах / A.M. Земсков, В.М. Земсков, В.А. Вороновский // Физиология человека. 2001. -№ 1.-С. 113-121.

42. Зенков Н. К. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах / Н. К. Зенков, Е. Б. Меньщикова // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113, № 3. - С. 286-296.

43. Зенков Н.К. Окислительный стресс: Биохимический и патофизиологический аспекты / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меньщикова. М.: МАИК «Наука / Интерпериодика», 2001. - 343 с.

44. Зубова С.Г. Роль молекул адгезии в процессе распознавания чужеродных и трансформированных клеток макрофагами млекопитающих / С.Г. Зубова, В.Б. Окулов // Успехи современной биологии. 2001. - Т. 121, № 1.-С. 59-66.

45. Интерлейкинзависимые иммунодефицита человека / О.В. Петров и др. // Иммунология. 1987. - № 4. - С. 20-24.

46. Изменение поверхности активации циркулирующих лейкоцитов при аутотрансфузии УФ-облученной крови / К.А. Самойлова и др. // Вестник хирургии. 1990.-Т. 144, №6.-С. 99-105.

47. Изменения экспрессии мембранных маркеров и количества мононук-леаров крови человека после ее облучения in vivo и in vitro видимым и инфракрасным светом в терапевтических дозах / H.A. Жеваго и др. // Цитология. 2003. - Т. 45, № 2. - С. 179-194.

48. Иммунодефицитные состояния / Под ред. B.C. Смирнова, И.С. Фрейд-лин. СПб.: Фолиант, 2000. - 586 с.

49. Иммунология / Под ред. У. Пола; пер. с англ. М.: Мир, 1987. - Т. 3. -340 с.

50. Иммунофлуоресцентный анализ / П.С. Барбан и др.. Свердловск: УрО АН СССР, 1988. - 175 с.

51. Искусных А.Ю. Исследование механизмов окислительно-восстановительного гомеостаза на примере системы «активированные нейтрофилы-пероксидное окисление липидов-антиоксиданты»: дисс. . канд. биол. наук / А.Ю. Искусных. — Воронеж, 2004. — 158 с.

52. Карандашов В.И. Ультрафиолетовое облучение крови / В.И. Каранда-шов, Е.Б. Петухов. М.: Медицина, 1997. - 224 с.

53. Кетлинский С.А. Эндогенные иммуномодуляторы / С.А. Кетлинский,

54. A.C. Симбирцев, A.A. Воробьев. Спб.: Гиппократ, 1992. - 255 с.

55. Клебанов Г.И. Клеточные механизмы прайминга и активации фагоцитов / Г.И. Клебанов, Ю.А. Владимиров // Успехи современной биологии. 1999. - Т. 119, № 5. - С. 462-475.

56. Клебанов Г.И. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на пероксидацию мембранных липидов и концентрацию ионов кальция в цитозоле фагоцитов / Г.И. Клебанов, Т.В. Чичук, Ю.А. Владимиров // Биологические мембраны. 2001. - Т. 18, № 1. - С. 42-50.

57. Клебанов Г.И. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения красного диапазона на активность супероксидцисмутазы макрофагов / Г.И. Клебанов, Е.А. Полтанов, Ю.А. Владимиров // Биофизика. 2003. - Т. 48, вып. З.-С. 462-473.

58. Ковальчук JI.B. Иммуноцитокины и локальная иммунокоррекция / JT.

59. B. Ковальчук, JI.B: Ганковская // Иммунология. 1995. - № 1. - С. 4-7.

60. Ковальчук JI.B. Роль оксида азота в иммунопатогенезе стафилококковых инфекций / JI.B. Ковальчук, З.Ф. Хараева // Иммунология. 2003. -№3. с. 186-188.

61. Козлов JI.B. Белки системы комплемента: активация и регуляция / JI.B. Козлов // Иммунология. 1997. - № 2. - С. 8-13.

62. Коррекция циклофероном иммунодефицитного состояния / H.A. Дид-ковский и др. // Циклоферон от эксперимента в клинику. Применение лекарственных форм циклоферона. - СПб., 2002. - С. 20-38.

63. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии / Г.А. Кочетов; под ред. С.Е. Северина. М.: Высшая школа, 1980. - 272 с.

64. Лакин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М.: Высшая школа, 1990.-351 с.

65. Лимфоциты: Методы / Под ред. Дж. Клауса. М.: Мир, 1990. - 395 с.

66. Ложкина А.Н. Участие системы комплемента в регуляции гомеостаза / А.Н. Ложкина // Успехи современной биологии. 1987. - Т. 1, № 4. - С. 36-54.

67. Ляшенко A.A. К вопросу о систематизации цитокинов / A.A. Ляшенко,

68. B.Ю. Уваров // Успехи современной биологии. 2001. - Т. 121, № 6.1. C. 589-603.

69. Маеда X. Оксид азота и кислородные радикалы при инфекции, воспалении и раке / X. Маеда, Т. Акаике // Биохимия. Т. 63, вып. 7. - С. 1007-1019.

70. Мартынова Е.А. Влияние сфинголипидов на активацию Т-лимфоцитов /Е.А.Мартынова//Биохимия.- 1998.-Т. 63,№ 1.-С. 122-132.

71. Маянский А.Н. Механизмы рекогносцировочных реакций нейтрофила / А.Н. Маянский // Успехи современной биологии. 1986. - Т. 102, вып. 3(6). - С. 360-376.

72. Маянский А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск: Наука, 1989. - 340 с.

73. Маянский А.Н. Реактивность и медиаторные функции интестинальных эпителиоцитов в системе мукозального гомеостаза / А.Н. Маянский, И.В. Маянская // Иммунология. 2004. - № 3. - С. 185-192.

74. Михайлова A.A. Участие медиаторов иммунитета в нейроиммунном воздействии // A.A. Михайлова // Иммунология. 1992. - № 4. - С. 4-8.

75. Модуляция апоптоза нейтрофилов периферической крови человека УФ-излучением диапазона С и у-излучением / М. Г. Винокуров и др. // Биофизика. 1999. - Т. 44, № 5. - С. 929-930.

76. Молекулярно-клеточные механизмы действия низкоинтенсивного лазерного излучения / Ю.А. Владимиров и др. // Биофизика. 2004. - Т. 49, вып. 2.-С. 339-350.

77. Морозов В.Г. Выделение и изучение свойств регуляторных пептидов иммунной системы / В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон // I Всесоюз. имму-нол. съезд: тез. докл. — М., 1989. С 72.

78. Мурина М.А. Хемилюминесценция системы полиморфноядерные лейкоциты люмииол в присутствии биогенных хлораминов / М.А. Мурина, Н.С. Белакина, Д.И. Рощупкин // Биофизика. - 2004. - Т. 49, вып. 6. -С. 1099-1104.

79. Нейтрофилы, их роль в регуляции метаболизма тканей / Н.И. Бахов и др. // Успехи современной биологии. 1987. - Т.104. - С. 281-296.

80. Нестерова И.В. Цитокиновая регуляция и функционирующая система нейтрофильных лейкоцитов / И.В. Нестерова, Н.В. Колесникова // Гематология и трансфузиология. 1999. - Т. 44, № 2. - С. 43-47.

81. Нестерова И.В. Физиологическая роль нейтрофильных гранулоцитов в поддержании иммунного гомеостаза / И.В. Нестерова // Rus. J. Immunol. 2004. - Vol. 9, Suppol. 1. - P. 17.

82. Новиков B.B. Растворимые формы дифференцировочных антигенов гемопоэтических клеток / В.В. Новиков // Гематология и трансфузиология. 1996. - № 6. - С. 40-43.

83. Новые возможности оценки эффективности экстракорпоральных методов гемокоррекции в лечении больных с гнойно-деструктивными заболеваниями легких и плевры / А.Н. Вельских и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 1996. - № 1. - С. 42-43.

84. Олигомерные белки: модуляция УФ-чувствительности и закономерности фотохимических превращений / В.Г. Артюхов и др. // Радиационная биология. Радиоэкология. 2001. - Т. 41, № 1. - С. 78-103.

85. Олиферук Н.С. Оценка фагоцитарной и бактерицидной активности нейтрофилов, макрофагов и незрелых дендритных клеток / Н.С. Олиферук, А.Н. Ильинская, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2005. - Т. 26, № 1.-С. 10-12.

86. Окислы азота (NO*, NO2') как кофакторы миелопероксидазных систем / П.Г. Бут и др. // Известия АН. Серия биологическая. 2004. - № 3. -С. 269-273.

87. Пальцев М.А. Межклеточные взаимодействия / М.А. Пальцев, A.A. Иванов. -М.: Медицина, 1995.-224 с.

88. Пальцын A.A. Воспаление: Рук-во для врачей / A.A. Пальцын. М., 1995.-С. 100-115.

89. Перекисное окисление липопротеинов крови человека, индуцированное гипохлорит-анионом / С.А. Евгина и др. // Биологические мембраны. 1992. - Т. 9, № 9. с. 946-953.

90. Поберезкина Н.В. Биологическая роль супероксиддисмутазы/ Н.В. По-березкина, Л.Ф. Лосинская // Укр. биохим. журнал. 1989. - Т. 61, № 2. -С. 14-27.

91. Потапнев М.П. Цитокиновая сеть нейтрофилов при воспалении / М.П. Потапнев // Иммунология. 1995. - № 4. - С. 34-40.

92. Потапнев М.П. Апоптоз клеток иммунной системы и его регуляция цитокинами / М.П. Потапнев // Иммунология. 2002. - № 4. - С. 237243.

93. Ройт А. Иммунология / А. Ройт, Д. Бростофф, Д. Мейл. М.: Мир, 2000.-581 с.

94. Роль интерлейкина-1 и его сигнальной трансдукции в иммунокомпе-тентных и нервных клетках в развитии стрессорной реакции / Е.Г. Ры-бакина и др. // Иммунология. 1998. - № 6. - С. 23.

95. Роль нейтрофилов в регуляции иммунной реактивности и репаратив-ных реакций повреждений ткани / И.И. Долгушин и др. // Вестник РАМН. 2000. - № 2. - С. 14-19.

96. Роль праймированных нейтрофилов в повреждении паренхиматозных органов и развитии воспалительной патологии / A.A. Барсуков и др. // Успехи современной биологии. 2004. - Т. 124, № 6. - С. 542-554.

97. Руководство по иммунофармакологии: пер. с англ. / Под ред. М.М. Дейла, Дж. К. Формена. М.: Медицина, 1998. - 332 с.

98. Роль тимуса в регуляции синтеза цитокинов клетками костного мозга при стрессе / И.В. Богдашин и др. // Иммунология. 1991. - № 5. - С. 30-32.

99. Самойлова К.А. Выход веществ из лимфоцитов периферической крови человека, облученных коротковолновыми УФ-лучами / К.А. Самойлова, А.П. Миронова, P.A. Арцишевская // Цитология. 1984. - Т. 26, № 1. — С. 102-108.

100. Самойлова К.А. Фотобиологические процессы в клетках и плазме крови и их роль в лечебно-оздоровительном действии УФ-излучения / К.А.

101. Самойлова, И.Г. Дуткевич // Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на организм человека и животных: сб. науч. тр. / Под ред. И.Е. Ганелиной, К.А. Самойловой. Л.: Наука, 1986. -С. 154-178.

102. Самойлова К.А. Изменение фагоцитарной активности лейкоцитов донорской крови после ее УФ-облучения. II. Моделирование эффекта ау-тотрансфузии УФ-облученной крови / К.А. Самойлова, К.Д. Оболенская, И.С. Фрейдлин//Цитология. 1987.-Т. 29, №9.-С. 1048-1055.

103. Серая И.П. Современные представления о биологической роли оксида азота / И.П. Серая, Я.Р. Нарциссов // Успехи современной биологии. -2002. Т. 122, № 3. - С. 249-258.

104. Симонян М.А. Взаимодействие супероксидцисмутазы с органическими перекисями и с генерированными из них супероксидами / М.А. Симонян // Биохимия. 1984. - Т. 49, вып. 11. - С. 1792-1798.

105. Содержание цитокинов и антител к ФНОа у больных раком молочной железы и фиброаденоматозом / А.И. Аутеншлюс и др. // Иммунология. 2003. - № 3. С. 140-142.

106. Спектрофотометрический метод определения метаболитов оксида азота / Г.Н. Близнецова и др. // Вестник Воронеж, гос. ун-та. Проблемы химии и биологии. 2002. - № 1. - С. 56-60.

107. Стефани Д.В. Клиническая иммунология и иммунопатология детского возраста: Рук-во для врачей / Д.В. Стефани, Ю.Е. Вельтищев. -М.: Медицина, 1996. 384 с.

108. Суслов А.П. Макрофаги и противоопухолевый иммунитет / А.П. Суслов // Итоги науки и техники. Серия «Онкология». М.: ВИНИТИ, 1990. -Т.19.- С. 56-60.

109. Сывороточный уровень растворимых молекул межклеточной адгезии при урогенитальном хламидиозе / Н.И. Егорова и др. // Цитокины и воспаление. -2003. -№ 2. С. 12-15.

110. Татаришвили И.С. «Кэппинг»-эффект и возможности его использования в клинике / И.С. Татаришвили, Д.В. Стефании // Лабораторное дело. 1989. -№ 2. - С. 16-17.

111. Теория и практика иммуноферментного анализа / Под ред. A.M. Егорова. М.: Высшая школа, 1991. - 287 с.

112. Терещенко И.П. Роль системы нейтрофильных гранулоцитов в формировании особенностей развития патологического процесса / И.П. Терещенко, А.П. Кашулина // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1993. - № 4. - С. 56-60.

113. Тотолян А. А. Клетки иммунной системы (I-II) / А. А. Тотолян, И. С. Фрейдлин. СПб.: Наука, 1999. - 231 с.

114. Турпаев К.Т. Активные формы кислорода и регуляция экспрессии генов / К.Т. Турпаев // Биохимия. 2002. - Т. 67, вып. 3. - С. 339-352.

115. Тутельян A.B. Прайминг фагоцитов и его применение в системе оценки специфической активности иммунорегуляторных соединений / A.B. Тутельян, Г.И. Клебанов // Иммунология. 2004. - № 1. - С. 14-16.

116. Тэйлор Б.С. Индуцибельная синтаза оксида азота в печени: регуляция и функции / Б.С. Тэйлор, Л.Х. Аларсон, Т.Р. Биллиар // Биохимия. — 1998. Т. 63, вып. 7. - С. 905-923.

117. Ультрафиолетовая фотомодификация функционального состояния лейкоцитов / Е.Б. Жибурт и др. // Эфферентная терапия. 1995. - Т. 1, № 3. - С. 56-58.

118. Фотобиология и мембранная биофизика / Под ред. И.Д. Волотовско-го. Мн.: Технопринт, 1999. - 352 с.

119. Фрадкин В.А. Диагностика аллергии реакциями нейтрофилов крови.- М.: Медицина, 1985. 176 с.

120. Фрейдлин И.С. Дефекты цитокиновой сети и принципы их коррекции / И.С. Фрейдлин, Н.К. Артеменко, Г.С. Фрейдлин // Иммунология.- 1998.-№6.-С. 23-25.

121. Фридович И. Радикалы кислорода, пероксид водорода и токсичность кислорода. Свободные радикалы в биологии / И. Фридович. М.: Мир, 1979. - Т. 1. - С. 272-308.

122. Цитокинотерапия гнойных ран в эксперименте / Л.В. Ковальчук и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1997. -Т. 123,№6.-С. 680-683.

123. Шаронов Б.П. Окислительная модификация и инактивация суперок-сиддисмутазы гипохлоритом / Б.П. Шаронов. И.В. Чурилова // Биохимия. 1992. - Т. 57, вып. 5. - С. 719-727.

124. Шичкин В.П. Патогенетическое значение цитокинов и перспективы цитокиновой/антицитокиновой терапии / В.П. Шичкин // Иммунология.- 1998.-№2.-С. 9-13.

125. Щепеткин И.А. Фактор некроза опухоли как полипептидный фактор роста / И.А. Щепеткин // Успехи современной биологии. 1993. - Т. 113,вып 5.-С. 617-625.

126. Щепеткин И.А. Регуляция функциональной активности нейтрофилов цитокинами / И.А. Щепеткин, Н.В. Чердынцева, Н.В. Васильев // Иммунология. 1994. - № 1. - С. 4-6.

127. Якутова Э.Ш. Образование свободных радикалов при взаимодействии гипохлорита с ионами железа (II) / Э.Ш. Якутова и др. // Биофизика. 1994. - Т. 39, вып. 2. - с. 275-279.

128. Ярилин A.A. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии / A.A. Ярилин // Иммунология. 1997. - № 5. -С. 7-14.

129. Ярилин А. А. Основы иммунологии / А. А. Ярилин. — М.: Медицина, 1999.-607 с.

130. Abbas A. Functional diversity of helper T lymphocytes / A. Abbas, K. Murphy, A. Sher // Nature. 1996. - V. 383. - P. 787-793.

131. Actin and tubulin co-cap with surface immunoglobulins in mouse В lymphocytes / G. Gabbiani et al. // Nature. 1977. - Vol. 269 - P. 697-698.

132. Adenosine promotes neutrophil Chemotaxis / J.L. Rose et al. // J. Exp. Med. 1988.-V. 167.-P. 1186-1194.

133. Albakri Q.A. Intracellular assembly of inducible NO synthase is limited by nitric oxide-mediated changes in heme insertion and availability / Q.A. Albakri, DJ. Stuehr // J. Biol. Chem. 1996. - V. 271. - P. 5414-5421.

134. Albers H. Biochemische Grundlage der Hamagenen Oxidationstherapie / H. Albers, H. Kromphardt // Phys. Diat. Therapie. 1964. - Bd. 5. - S. 235236.

135. A metalloproteinase disintegrin that releases TNF-a from cells / R.A. Black et al. //Nature. 1997. -V. 385. - P. 729-733.

136. A novel domain within the 55 kd TNF receptor signals cell death / L.A. Tartaglia et al. // Cell. 1993. - V. 74. - P. 845-853.

137. Antibodies to a soluble form of a TNF receptor have TNF-like activity / H. Engelmann et al. // J. Biol. Chem. 1990. - V. 265, № 24. - P. 1449715504.

138. Antiproliferative effects of NO synthase products / M. Lepoivre et al. // Res. Immunol. 1991. - V. 142. - P. 580-583.

139. Aoki S. Solube intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) antigen in patients with rheumatoid arthritis / S. Aoki, K. Imai, A. Yachi // Scand. J. Immunol. 1993. - V. 38. - P. 485-490.

140. Apoptosis of neutrophils / N.A. Maiansky et al. // Acta Haematol. -2004.-V. 111.-P. 56-66.

141. A study of cytokines in burn blister fluid related to wound healing / I. Ono et al. // Burns. 1995. - V. 21, № 5. - P. 352-355.

142. Babior B.M. The respiratory burst oxidase / B.M. Babior // Hematol. Oncol. Clin. North. Am. 1988. - V. 2. - P. 201-212.

143. Balance of IL-1 receptor antagonist / IL-lß in rheumatoid synovium and ids regulation by IL-4 and IL-10 / P. Chomarat et al. // Immunology. -1995.-V. 154. -P. 1432-1437.

144. Baldwin A.S. Series introduction: the transcription factor NF-kB and human disease / A.S. Baldwin // J. Clin. Invest. 2001. - V. 107. - P. 3-6.

145. Bannister J. Bovine erythrocyte cupro-zinc protein. 1. Isolatin and general characterization / J. Bannister, W. Bannister, E. Wood // Eur. J. Bio-chem.- 1971.-V. 18, №5.-P. 178-176.

146. Basu-Modak S. Singlet oxygen: a primary effector in the ultraviolet A/near-visible light induction of the human heme oxygenase gene / S. Basu-Modak, R.M. Tyrrell // Cancer Res. 1993. - V 53. - P. 4510-4550.

147. Bazil V. Shedding as a mechanism of down modulation of CD 14 on stimulated human monocytes / V. Bazil, J.L. Strominger // J. Immunol. -1991.-V. 147.-P. 1567-1574.

148. Becker E.L. The formylpeptide receptor of the neutrophil / E.L. Becker // Am. J.Pathol.- 1987.-V. 1129. P. 16-24.

149. Beta-actinin is equivalent to CapZ protein / K. Maruyama et al. // Biol. Chem. 1990. - V. 265. - P. 8712- 8715.

150. Beutler B. TNF, apoptosis and autoimmunity: a common thread / B. Beutler, F. Bazzoni // Blood Cells, Molecules, and Diseases. 1998. - V. 24, №2.-P. 216-230.

151. Bielenstein E. Die UV-Bestrahlung von Blut in Sauerstoffatmosphare (HOT) nach wehly unter Bernchsichtigung der vergahren der Oxigenierung und der UV-Bestrahlung von Blut / E. Bielenstein // Z. arztl. Fortbild. -1972.-Bd. 66.-S. 663-667.

152. Black P.H. Shedding from normal and cancer cell surface antigens / P.H. Black//New England J. Med. 1980. - V. 303. - P. 1415-1416.

153. Borregaard N. Subcellular localization of the human neutrophil NADPH-oxidase. b-Cytochrome and associate flavoprotein / N. Borregaard, A. Tauber // J. Biol. Chem. 1984. - V. 259, № 1. - P. 47-52.

154. Candeias L.P. Formation of hydroxyl radicals on reaction of hypochlor-ous acid with ferrocyanide, a model iron (II) complex / L.P. Candeias, M.R. L. Stratford, P. Wardman // Free Radical Res. 1994. - V. 20. - P. 241-249.

155. Carswell E.A. An endotoxin-induced serum factor that causes necrosis of tumots / E.A. Carswell, L.J. Old, R.L. Kassel // Proc. Acad. Sei. USA. -1975. Vol. 72. - P. 3666-3670.

156. Collagen-induced arthritis in TNF receptor-1-deficient mice: TNF recep-tor-2 can modulate arthritis in the absence of TNF receptor-1 / Y. Tada et al. // Clin. Immunol. 2001. - V. 99, № 3. - P. 325-333.

157. Compartmentalised inducible nitric-oxide synthase activity in septic shock / D. Annane et al. // Lancet. 2000. - V. 355. - P. 1143-1148.

158. Condeelis J. Isolation of concanavalin A caps during various stages of formation and their association with actin and myosin / J. Condeelis // J. Cell Biology. 1979. - Vol. 80. - P. 751-758.

159. Cooke J.P. Cytoprotective effects of nitric oxide / J.P. Cooke, P.S. Tsao // Circulation. 1993. -V. 88. - P. 2451-2454.

160. Cosman D. The hematopoietin receptor superfamily / D. Cosman // Cytokine. 1993. - V. 6. - P. 95-106.

161. Crystal structure of the soluble human 55kd TNF receptor-human TNF beta complex: implications for TNF receptor activation / D.W. Banner et al. // Cell. 1993. -V.l.- P. 431-445.

162. Cytokines, endotoxin and glucocorticoida regulate the expression of inducible nitric oxide synthase in hepatocytes / D.A. Geller et al. // Proc. Nath. Acad. Sei. USA. 1993. - V. 90. - P. 522-526.

163. Differential effects between marymastat, a TNF-converting enzyme inhibitor, and anti-TNF-antibody on murine models for sepsis and arthritis / F. Tsuji et al. // Cytokine. 2002. V. 17, № 6. - P. 294-300.

164. Dusi S. Mechanisms of NADPH-oxidase activation in human neutrophils: p67phox is required for the translocation of rac 1 but not rac 2 from cy-tosol to the membrane / S. Dusi, M. Donini, F. Rossi // Biochem. J. 1995. -V. 308.-P. 991-994.

165. Effecct of 4-hydroxunonenal on superoxide anion production from primed human neutrophils / C. Dianzani et al. // Cell. Biochem. Funct. -1996.-V. 14.-P. 193-200.

166. Effects of leukotriene B4 in the human lung. Recruitment of neutrophils into the alveolar spaces without a change in protein permeability / T.R. Martin etal.//J. Clin. Invest. 1989.-V. 84.-P. 1609-1619.

167. Ehlers M.R.W. CR3: a general purpose adhesion recognition receptor essential for innate immunity / M.R.W. Ehlers // Microbes and Infection. -2000. - V. 2. - P. 289-294.

168. Envelope proteins and replication of vesicular stomatitis virus: in vivo effects of RNA+temperature sensitive mutation on viral RNA synthesis / C. Martinet et al. // J. Virol. - 1979. - V. 29. - P. 123-133.

169. Evans T.J. Immunotherapy of sepsis / T.J. Evans, J. Cohen // J. Med. Microbiol. 1993. - V. 38. - P. 237-239.

170. Fearon D. T. Identification of the membrane glycoprotein that the C3b receptor of the human erythrocyte, polymorphonuclear leukocyte, B lymphocyte and monocyte / D.T. Fearon // J. Exp. Med. 1980. - Vol. 152. - P. 20-30.

171. Felley-Bosco E. Role of nitric oxide in genotoxicity: implication for can-cerogenesis / E. Felley-Bosco // Cancer Metastas. Rev. 1998. - V. 17. - P. 25-37.

172. Fliss H. Hypochlorous acid mobilizes cellular zink / H. Fliss, M. Menard, M. Desai //Can. J. Physiol. Pharmacol. 1991. - V. 69. - P. 1686-1691.

173. Frank M. The role of complement in inflammation and phagocytosis / M. Frank, L. Fries // Immunol. Today. 1991. - V. 12. - P. 322-328.

174. Frick G. Fibel der Ultraviolettbestrahlung des Blutes / G. Frick. -München: Hans Muller Verlag, 1993. 89 S.

175. Fridman W. Fe receptors and immunoglobulin binding factor / W. Frid-man // FASEB J. 1991. - V. 5. - P. 2684-2689.

176. Gamaley I.A. Roles of reactive oxygen species: signaling and regulation of cellular function / I.A. Gamaley, I.V. Klyubin // Int. Review. Cytol. -1999. -№ 188. -P. 203-255.

177. Godar D. Special dependence of UV-induced immediate and delayed apoptosis: the role of membrane and DNA damage / D. Godar, A.D. Lucas // Photochem. Photobiol. 1995. - V. 62. - P. 108-113.

178. Herzog Ch. IL-1 und Tumornekrosefactor / Ch. Herzog, W. Muller // Ztschr. Rheumatol. 1987. -Bd. 46. - S. 213-219.

179. Hoover R.L. Inhibition of cap formation on lymphocytes by free fatty acids is not mediated by a depletion of ATP / R.L. Hoover, R. Klausner, M. Karnovsky // J. Biol. Chem. 1982. - V. 257. - P. 2151 -2154.

180. Huie R.E. The reaction of no with superoxide / R.E. Huie, S. Padmaja // Free Rad. Res. Commun.- 1993.- V. 18.-P. 195-199.

181. Human fibroblasts release reactive oxygen species in response to IL-1 or TNF-a / B. Meier et al. // Biochem. J. 1989. - V. 263. - P. 539-545.

182. Human neutrophil FcRIIIB and formyl peptide receptors are functionally linked during formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine induced Chemotaxis / R.R. Kew et al. // J. Immunol. 1992. - V. 149. - P. 989-997.

183. Hydrogen peroxide as a potent activator of T lymphocyte functions / M. Los et al. // Eur. J. Immunol. V. 25, № 1. - P. 159-165.

184. IgA-induced chemokinesis of human polymorphonuclear neutrophila requirement of their Fc-a recrptor / Y. Sibille et al. // Mol. Immunol. 1987. -V. 24.-P. 551-559.

185. Induction of decay-accelerating factor by cytokines or the membrane-attack complex protects vascular endothelial cell against complement deposition / J.C. Mason et al. // Blood. 1999. - V. 94, №5.-P. 1673-1682.

186. Induction of nitric oxide synthase in human vascular smooth muscle: interaction between proinflammatory cytokine / A.H. Chester et al. // Car-diovasc. Res. 1998.-V. 38.-P. 814-821.

187. Josephygg P.D. The horseradish peroxidase-catalyzed oxidation of 3,5,3',5'-tetramethylbenzidine / P.D. Josephygg, T. Elingg, R.P. Masonl // J. Biol. Chem. 1982. - V. 257, № 7. - P. 3669-3675.

188. Kam P.C. Nitric oxide: basic science and clinical applications / P.C. Kam, G. Govender // Anaesthesia. 1994. - V. 49, № 6. - P. 515-521.

189. Killing of Staphylococcus aureus by TNF-a -activated neutrophils. The role of serum opsonins, integrin receptors, respiratory burst, and degranulation / A. Ferrante et al. // J. Immunol. 1993. - V. 151, № 9. - P. 48214828.

190. Klebanoff S.J. Oxygen metabolites from phagocytes / S.J. Klebanoff // Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. N.Y.: Raven Press, 1992.-P. 541-588.

191. Kobayashi T. Novel insights into current models of NADPH-oxidase regulation, assembly and localization in human polymorphonuclear leukocytes / T. Kobayashi, H. Seguchi // Histol. and Histopahtol. 1999. - V. 14. -P. 1295-1308.

192. Koppenol W.H. The basic chemistry of nitrogen monoxide and peroxyni-trite / W.H. Koppenol // Free Rad. Biol. Med. 1998. - V. 25. - P. 385-391.

193. Krych M. A secreted small form of human complement C3b/C4b receptor (CR1), that binds to C4b but not C3b / M. Krych, M.W. Nickells, J.P. Atkins // FASEB J. 1989. - V. 3, № 3. - P. 368.

194. Kulms D. Ultraviolet radiation-indused IL-6 release in HeLa cells is mediated via membrane events in a DNA damage independent way / D. Kulms, B. Poppelman, T. Schwarz // J. Biol. Chem. - 2000. - V. 275. - P. 15060-15066.

195. Kulms D. Ultraviolet radiation inhibits IL-2-induced tyrocine phosphorylation and the activation of STAT5 in T lymphocytes / D. Kulms, T. Schwarz // J. Biol. Chem. 2001. - V. 276. - P. 12849-12855.

196. Lack of binding of human C3, in its native state, to C3b receptors / M. Berger et al.//J. Immunol. 1981.-V. 127, №4.-P. 1329-1334.

197. Larrick J.W. Cytotoxic mechanism of tumor necrosis factor-a / J.W. Lar-rick, S.C. Wright // FASEB J. 1990. - V. 4. - P. 3215-3223.

198. Lennon S.V. Dose-dependent induction of apoptosis in human tumour cell lines by widely diverging stimuli / S.V. Lennon, S.J. Martin, T.G. Cotter // Cell. Prolif. 1991. - V. 24. - P. 203-214.

199. Ligands «activate» integrin a2p3 / X.P. Du et al. // Cell. 1991. - V. 65. -P. 409-416.

200. Loor F. Plasma membrane and cell cortex interactions in lymphocyte functions / F. Loor//Adv. Immunol. 1980.-Vol. 30.-P. 1-120.

201. Mapping of epitopes, glycosylation sites, and complement regulatory domains in human decay accelerating factor / K.E. Coyne et al. // J. Immunol.-1992.-V. 149.-P. 2906-2913.

202. Marklund S.L. Extracellular superoxide dismutase in human tissuesand human cell lines / S.L. Marklund // J. Clin. Invest. 1984. - V. 74. P. 13981403.

203. Marshall H.E. Nitrosation and oxidation in regulation of gene expression / H.E. Marshall, K. Merchant, J.S. Stamler // FASEB J. 2000. - V. 14. - P. 1889-1900.

204. May M.J. Signal transduction through NF-kB / M.J. May, S. Ghosh // Immunol. Today. 1998. - V. 19. - P. 80-88.

205. McCoord J.M. Sources of free radicals / J.M. McCoord, B.A. Omar // Toxicol, and Industr. Health. 1993. - V. 9. - P. 23-27.

206. Metabolic fale of L-arginine in relation to microbistatic capability of murine macrophages / D.L. Granger et al. // J. Clin. Invest. 1990. - V. 85.-P. 264-273.

207. Miley G.P. Ultraviolet blood irradiation. A history and guide to clinical application (1933-1997). / G.P. Miley, R.C. Olney, H.T. Lewis. Maryland: The Foundation for blood irradiation Inc, Silver Spring, 1997. - 253 p.

208. Nathan C.F. Role of nitric oxide synthesis in macrophage antimicrobial activity / C.F. Nathan, J.B. Hibbs // Current Opinion Immunol. 1991. - V.- P. 65-70.

209. Natural killer cell and granulocyte Fey receptor III (CD 16) differ in membrane anchor and signal transduction / P. Selvaraj et al. // J. Immunol.- 1989. V. 143. - P. 3283-3288.

210. Nauseef W.M Myeloperoxidase deficiency / W.M. Nauseef // Hematol. Pathol. 1990.-V. 4.-P. 165-178.

211. Neutrophil-activating peptide 2 and gro/melanoma growth-stimulatory activity interact with neutrophil activating peptide-l/IL-8 receptors on human neutrophils / B. Moser et al. // J. Diol. Chem. 1991. - V. 266. - P. 1066-10671.

212. Niedel J. Receptor-mediated uptake and degradation of 1251 chemotactic peptide by human neutrophils / J. Niedel, S. Wilkinson, P. Cuatrecasas // J. Biol. Chem. 1979. - V. 254. - P. 10700-10706.

213. Nitric oxide circulates in mammalian plasma primarily as an S-nitroso adduct of serum albumin / J.S. Stamler et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1992. V. 89. - P. 7674-7677.

214. Nitric oxide down-regulates hepatocyte-inducible nitric oxide synthase gene expression / B.S. Taylor et al. // Arch. Surg. 1997. - P. 1177-1183.

215. Oxygen radicals: physiological and medial aspects, with specific reference to high energy irradiation / M.A. Mishelson et al. // Oxygen Radicals in Chem. And Biol.: Proc. Ill Int. Conf., Newherbeerg, 1983. P. 83-842.

216. Park S.K. Nitric oxide limits transcriptional induction of nitric oxide synthase in CNS glial cells / S.K. Park, H.L. Lin, S. Murphy // Biochem. Bio-phys. Res. Commun. 1994. -V. 201. - P. 762-768.

217. Peroxunitrite-mediated tyrosine nitration catalyzed by superoxide dismu-tase / H. Ischiropoulos et al. // Arch. Biochem. Biophys. 1992. - V. 298. -P. 431-437.

218. Porteu F. Tumor necrosis factor induced a selective shedding of its p75 receptor from human neutrophils / F. Porteu, C. Hieblot // J. Biol. Chem. -1994. V. 296, № 4. - P. 2834-2840.

219. Pourzand Ch. Apoptosis, the role of oxidative stress and the example of solar UV-radiation / Ch. Pourzand, R.M. Tyrrell // Photochem. Photobiol. -1999.-V. 70.-P. 380-385.

220. Priming effects of GM-CSF, INF-y and TNF-a on human neutrophil inflammatory cytokine production / E. Jablonska et al. // Melanoma Res. — 2002.-V. 12.-P. 123-128.

221. Priming of phagocytes by cytokines and water-soluble products of lipid peroxidation / L.V. Kovalchuk et al. // Biomed. Sci. 1991. - V. 2. - P. 221-231.

222. Production of cytokines and prostaglandin E2 by subpopulations of guinea pig enterocytes: effect of endotoxin and thermal inyury / C.K. Ogle et al. // J. Trauma. 1996. - V. 41. - P. 298-305.

223. Rapid local expression of interleukin-12, tumor necrosis factor alpha, and gamma interferon alter cutaneous Francisella tularensis infection in Tulare-mia-immune mice / S. Stenmark et al. // Infect. Immun. 1999. - V. 67. -P. 1789-1797.

224. Reaction of bovine-liver copper-zinc superoxide dismutase with hydrogen peroxide. Evidence for reactionwith H2O2 and H02 leading to loss of copper / S.I. Jewett et al. // Eur. J. Biochem. - 1989. - V. 180, № 3. - P. 569-575.

225. Rebuck J.W. A method of studying leukocytic function in vivo / J.W. Rebuck, J.H. Crowley // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1995. - P. 757-805.

226. Redistribution and pinocytosis of lymphocyte surface immunoglobulin molecules induced by antiimmunoglobulin antibody / R.B.W. Taylor et al.//Nature New Biology. 1971.-V. 223.-P. 225-229.

227. Redox regulation of healing NF-kB activation in cultured human kerati-nocytes upon wounding and the effect of low energy HeNe irradiation / A.F. Haas et al. // Free Rad. Biol. Med. 1998. - V. 25, № 9. - P. 998-1005.

228. Regulation of adhesion of ICAM-1 by the cytoplasmic domain of LFA-1 integrin beta subunit / M.L. Hibbs et al. // Science. 1991. - V. 251. - P. 1611-1613.

229. Regulation of the human neutrophil NADPH-oxidase by rho-related G-proteins / C.H. Kwong et al. // Biochemistry. 1993. - V. 32. - P. 57115717/

230. Repine J.E. Hydroxyl radical scavengers produce similar decreases in the chemiluminescence responses and bactericidal activities of neutrophils / J.E. Repine, K.S. Johansen, E.M. Berger // Infect. And Immun. 1984. - V. 43. - P. 435-437.

231. Ress R.C. Cytokines: their role in regulation immunity and the response to infection / R.C. Ress // Rev. Med. Microbiol. 1992. - V. 3. - P. 9-14.

232. Role of cholesterol in the capping of surface immunoglobulin receptors on murine lymphocytes / R.L. Hoover et al. // J. Cell Biology. 1983. - V. 97.-P. 73-80.

233. Role of tyrosyl phosphorylation in neutrophil priming by TNF-a and granulocyte colony stimulating factor / K. Akimaru et al. // Arch. Biochem. Biophys. 1992. - V. 298, № 2. - P. 703-709.

234. Samoilova K.A. Ultraviolet irradiation of blood: mechanisms of wide therapeutic effect / K.A. Samoilova, S.A. Snopov, K.D. Obolenskaya // Biological effects of light. Berlin, New York: Walter de Gruyter, 1996. - P. 199-203.

235. Schreier G.F. Membrane and cytoplasmic changes in B lymphocytes induced by ligand surface Ig interaction / G.F. Schreier, E.R. Unanue // Adv. Immunol. 1976. - Vol. 24. - P. 37-165.

236. Schultze-Osthoff K. Redox signaling by transcription factor NF-kB and AP-1 in lymphocytes / K. Schultze-Osthoff, M. Los, P.A. Baeuerle // Bio-chem. Pharmacol. 1995. - V. 50. - P. 735-741.

237. Segal A.W. The molecular and cellular pathologie of chronic granulomatous desease / A.W. Segal // Eur. J. Clin. Invest. V. 1988. - V. 18. - P. 433-443.

238. Segal A.W. The NADPH-oxidase of phagocytic cells is an electron pump that alkalinizes the phagocytic vacuole / A.W. Segal // Protoplasma. 1995. -V. 184.-P. 86-103.

239. Selectins: a family of adhesion receptors / M. Bevilacqua et al. // Cell.1991.-V.67.-P.233.

240. Serum CD14 levels in polytraumatized and severely burned patients / C. Kruger et al. // Clin Exp. Immunol. 1991. -V. 85, №2. - P. 297-301.

241. Shehad El-Din S.A. Assessment of certain neutrophil receptors, opsono-phagocytosis and soluble ICAM-1 following thermal injury / S.A. Shehad El-Din et al. // Burns. 1999. - V. 25, № 5. - P. 395-401.

242. Smith J.A. Neutrophils, host defense, and inflammation: a double-edged sword / J.A. Smith // J. Leukoc. Biol. 1994. - V. 56. - P. 672-686.

243. Stuehr D.J. Mammalian nitric oxide synthase / D.J. Stuehr // Biochim. Biophys. Acta 1999. - V. 1411. - P. 217-230.

244. The cytosolic component of the respiratory burst oxidase exist as a Mr 6 240,000 complex that acquires a membrane-binding site during activation of the oxidase in a cell-free system / J.-W. Park et al. // J. Biol. Chem. —1992.-V. 267.-P. 17327-17332.

245. The interactions of nitric oxide with oxygen radicals and scavengers in cerebral ischemic injuri / J.S. Beckman et al. // Adv. Neurol. 1996. - V. 71.-P. 339-350.

246. The receptor with high affinity for immunoglobulin E / H. Metzger et al. //Annu. Rev. immunol. 1986. -V. 4. - P. 419.

247. The three family recognize a common carbohydrate epitope, the sialyl Lewis (X) oligosaccharide / C. Foxall et al. // J. Cell Biol. 1992. - V. 117.-P. 895-902.

248. Titheradge M.A. Nitric oxide in septic shock / M.A. Titheradge // Bio-chim. Biophys. Acta. 1999. - V. 1411. - P. 437-455.

249. Tumor necrosis factor-a potentials CR3-induced respiratory burst by activating p38 MAP kinase in human neutrophils / M. Forsberg et al. // Immunology. 2001. - V. 103, № 4. - P. 465-472.

250. Ultra-weak chemiluminescence of smokers' blood / B. Yoda et al. // Archives of Environmental Health. 1985. -V. 40. - P. 148-151.

251. UVA-induced immunosuppression / G.M. Halliday et al. // Mutation Research / Fundamental and Molecular Mechanism of Mutagenesis. — 1998. V. 422, №9. -P. 139-145.

252. Van de Winkel J. Biology of human immunoglobulin G Fc receptors / J. Van der Winkel, C.L. Anderson // J. Leukoc. Biol. 1991. - V. 49. - P. 511524.

253. Van de Winkel J. Human IgG Fc receptor geterogeneity: molecular aspects and clinical implications / J. Van der Winkel, P. Capel // Immunol. Today.- 1993.-V. 14.-P. 215-220.

254. Van Epps D.E. Suppression of leukocyte Chemotaxis by IgA myeloma components / D.E. Van Epps, R.S. Williams // J. Exp. Med. 1976. - V. 144.-P. 1227-1242.

255. Vassali P. The pathophysiology of TNF / P. Vassali // Ann. Rew. Immunol. 1 992. - № 10. - P. 411 -452.

256. Viral dynamics in HIV type 1 infection / X. Wei et al. // Nature. 1995. -V. 373.-P. 117-122.

257. Vogt W. Oxidants generated by the myeloperoxidase halide system activate the fifth component of human complement, C5 / W. Vogt, D. Hesse // Immunobiology. 1994. - V. 192. - P. 1-9.

258. Wanders R.J.A. Identification of superoxide dismutase in rat liver peroxisomes / R.J.A. Wanders, S. Denis // Biochim. et Biophys. Acta. 1992. -V. 1115.-P. 259-262.

259. Ward P.A. Mechanisms of endothelial cell injury / P.A. Ward // J. Lab. and Clin. Med. 1991. - V. 118. - P. 421-426.

260. Weiss S.J. Tissue destruction by neutrophils / S.J. Weiss // New Engl. J. Med. 1989. - V. 320. P. 365-376.

261. Wilton M.A. The role of Fc and C3i receptors in phagocytosis by in-flammtory polymorphonuclear leukocytes in man / M.A. Wilton, H.H. Renggli, T. Lehner // Immunology. 1977. - V. 32. - P. 955-961.

262. Yanaga F. Ceramide does not mediate the effect of TNFa on superoxide generation in human neutrophils / F. Yanaga, S.P. Watson // Biochem. J. -1994.-V. 298.-P. 733-738.

263. Yim M.B. Enzyme function of copper, zinc superoxide dismutase as a free radical generator / M.B. Yim, P.B. Chock, E.R. Stadtman // J. Biol. Chem. 1993. - V. 268. - P. 4099-4105.

264. Zimmerman G.A. Endothelial cell interactions with granulocytes: tethering and signaling molecules / G.A. Zimmerman, S.M. Prescott, T.M. Mcln-tyre // Immunol. Today. 1992. - V. 13. - P. 93-99.

Информация о работе

Михилева, Елена Александровна
кандидата биологических наук
Воронеж, 2006
ВАК 03.00.02

Диссертация

Модуляция физико-химическими агентами структурно-функционального состояния нейтрофилов крови человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы