Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Модификация способа получения и оценка эффективности иммуномодулирующего средства из тимуса телят и молодняка крупного рогатого скота

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Модификация способа получения и оценка эффективности иммуномодулирующего средства из тимуса телят и молодняка крупного рогатого скота"

На правах рукописи

ТАРМАКОВА ОЛЬГА СТАНИСЛАВОВНА

МОДИФИКАЦИЯ СПОСОБА ПОЛУЧЕНИЯ И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ИММУIЮМОДУЛИРУЮЩЕГО СРЕДСТВА ИЗ ТИМУСА ТЕЛЯТ И МОЛОДНЯКА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

03.00.23. - Биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Улан-Удэ - 2005

Работа выполнена в Проблемной научно-исследовательской лаборатории Восточно-Сибирского государственного технологического университета

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Жамсаранова С.Д.

доктор биологических наук, профессор Анцупова Т.П. кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Хобракова В.Б.

Ведущая организация: Бурятский государственный университет

Защита состоится ¡и 2005 г. в /£ часов на заседании

диссертационного совета ДМ212.039.02 в Восточно-Сибирском государственном технологическом университете по адресу: 670013 г.Улан-Удэ, ул. Ключевская, 40в

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВосточноСибирского государственного технологического университета

Автореферат разослан «¿¿»/^ <ир 4.- 2005 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, >, , /

доктор технических наук, профессор.^ ^ [С' Н.И. Хамнаева

'У

-ч

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. На сегодняшний день неблагоприятная экологическая ситуация, огромная информационная и нервно-эмоциональная нагрузка, злоупотребление медикаментозными средствами, табаком, алкоголем, нарушения в питании, как по качеству, так и по количеству пищи, и многие другие факторы приводят к росту числа заболеваний, в том числе к болезням, сопровождающимся снижением естественной резистентности и иммунологической реактивности организма (Хаитов и соавт., 1996; Чиркин и соавт., 1999; Шабров и соавт., 2003; Иванова, 2005).

В настоящее время нет никаких сомнений в том, что нарушения иммунной системы играют важную роль в хронизации заболеваний, развитии осложнений, отсутствии достаточного клинического эффекта при назначении адекватной терапии. В связи с продолжающимся в последние десятилетия ростом распространенности и тяжести иммунодефицитных состояний и аллергических болезней проблема заболеваний, обусловленных нарушениями в системе иммунитета, переросла в глобальную медико-социальную проблему. На сегодняшний день более чем у 30% больных болезни протекают в сочетании с клиническими и лабораторными признаками иммунной недостаточности. Кроме того, отмечается рост распространенности первичных иммунодефицитных состояний у детей и взрослых (Лусс и соавт., 2004).

Широкое применение препаратов на основе биологически активных соединений, содержащихся в различных органах и тканях животного организма, является одним из перспективных направлений иммунокоррегирующей терапии. В настоящее время достигнут значительный прогресс в создании лекарственных средств на основе эндогенных биологически активных веществ; активно изучается их клиническая эффективность и возможность использования в качестве биологически активных добавок (БАД) к пище (Тутельян и соавт., 2003; Морозов и соавт., 2000).

В связи в вышеизложенным разработка иммуномодулирующих средств на основе органов иммунной системы убойных животных (в частности, из тимуса телят и молодняка крупного рогатого скота (КРС)) является актуальной и перспективной.

Работа выполнена при поддержке грантов «Молодые ученые ВСГТУ» (2004), «Молодые ученые Республики Бурятия» (2004), в рамках выполнения научно-исследовательских работ по региональной

научно-технической программе «Бурятия, Наука. Технологии и инновации» (2003).

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований явилась разработка способа, позволяющего получить максимальное количество биологически активного средства из тимуса телят и молодняка крупного рогатого скота, и выявление эффективности его использования при вторичных иммунодефицитных состояниях.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- оптимизировать процесс автолиза с помощью математического метода планирования экспериментов;

изучить возможность использования сублимационного высушивания при атмосферном давлении для стабилизации полученного средства;

- определить фракционный состав иммуномодулирующего средства, условно названного «Иммуноактив-Т»;

- исследовать иммуномодулирующую эффективность сухой формы «Иммуноактив-Т» на модели вторичного иммунодефицитного состояния экспериментальных животных;

- оценить безопасность иммуномодулирующего средства;

- получить таблетированную форму «Иммуноактив-Т»;

- обосновать возможность использования «Иммуноактив-Т» в качестве биологически активного компонента при создании пищевых продуктов функционального назначения;

- разработать технологическую схему получения «Иммуноактив-

Т».

Научная новизна работы. Установлены закономерности на основе метода математического моделирования, позволяющие увеличить степень извлечения биологически активных пептидов в два раза относительно исходных технологических параметров.

Установлены оптимальные режимы сублимационного высушивания при атмосферном давлении, позволяющие сохранить биологическую активность «Иммуноактив-Т».

Экспериментально доказана эффективность «Иммуноактив-Т» в отношении гуморального, клеточного звеньев иммунитета и функциональной активности макрофагов экспериментальных животных, находящихся в состоянии имму но депрессии. Установлены эффективная доза и длительность курсового применения «Иммуноактив-Т».

Разработаны параметры таблетирования сухой формы «Иммуноактив-Т».

Показана эффективность использования «Иммуноактив-Т» при создании новых продуктов функционального назначения.

Практическая ценность. Разработана нормативная документация на биологически активную добавку к пище «Иммуноактив-Т» ТУ 921832-046-02069473-2005.

Разработана нормативная документация на консервы мясные «Колбасный фарш отдельный особый» ТУ 9216-053-02069473-2005.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на:

• ежегодных научно-практических конференциях ВосточноСибирского государственного технологического университета по секции «Химия биологически активных веществ» (Улан-Удэ, 2003, 2004, 2005); 7-й Пущинской школе-конференции молодых ученых (Пущино, 2003); VII Всероссийском конгрессе «Здоровое питание населения России» (М., 2003); V Международной научно-технической конференции «Пища. Экология. Человек» (М., 2003); Всероссийской молодежной научно-технической конференции «Молодые ученые Сибири» (Улан-Удэ, 2003); IV Международной научно-практической конференции «Пища. Экология. Качество» (Краснообск, 2004); Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию профессора В.Я. Суетина «Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой, возрастной и экспериментальной морфологии» (Улан-Удэ, 2004); Всероссийской научно-технической конференции с * международным участием «Новые технологии добычи и переработки

природного сырья в условиях экологических ограничений» (Улан-Удэ, 2004).

» Разработки экспонировались на международной выставке

«Научные разработки вузов Сибири», г. Маньжурия, 2004 г. (Китай); на традиционной выставке проектов НИОКР «Наука. Образование. Бизнес», г. Улан-Удэ, 2004 г.; международной выставке «Пищевые технологии и системы качества», г. Улан-Батор, 2004 г. (Монголия); международной выставке-ярмарке «Бизнеслэнд», г. Улан-Удэ, 2004 г.; выставке «Энергосберегающая техника и передовые технологии в производстве сельскохозяйственной продукции», г. Улан-Удэ, 2004 г.; на 2-й китайско-российской выставке по науке и технике, г. Маньжурия, 2005 г. (Китай).

Публикации. По результатам исследований опубликовано 10 печатных работ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов, списка

литературы, состоящего из 200 источников. Работа изложена на 122 страницах, включает 19 таблиц, 13 рисунков, 2 приложения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Схема экспериментальных исследований приведена на рис. 1. В работе было использовано иммуномодулирующее средство «Иммуноактив-Т», полученное из тимуса телят и молодняка крупного рогатого скота. Содержание белка определяли по методу Лоури (1951) и биуретовым методом. Экспериментальные исследования проводились на половозрелых мышах (самцах) линии СБА и F1 (СВА*С57В16) массой 18-20 г и морских свинках (самцах) массой 150-200 г. Иммунодефицитное состояние воспроизводили путем перорального введения цитостатика - азатиоприна в концентрации 50 мг/кг. При изучении иммунобиологической эффективности «Иммуноактив-Т» вводили перорально в течение 7 дней в дозе 0,01; 0,1 и 1 мг/кг массы животного. При исследовании динамики изменения иммунобиологической эффективности иммуномодулирующее средство вводили перорально в течение 7, 14, 21 дня в дозе 0,1 мг/кг массы животного. Экспериментальное изучение клеточного звена иммунитета проводили в реакции гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ), согласно стандартной методике локальной ГЗТ (Петров и др., 1987). Исследование активности антигенспецифических Т-супрессоров антителообразования проводили в соответствии с Методическими рекомендациями... (1989). Гуморальный иммунный ответ оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых с использованием модифицированного A. J. Cunningham (1965) метода, предложенного N. Jeme, A. Nordin (1963). Фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов мышей в отношении Staphylococcus aureus исследовали по методике, описанной И.С. Фрейдлин (1976). Для фракционирования «Иммуноактив-Т» методом гель-фильтрации использовали колонку с Sephadex G-25 Superfine (Pharmacia Fine Chemicals) (2,5 x 30 см), уравновешенную в 0,1 M СН3СООН, скорость потока 60 мл/ч. Детекцию осуществляли детектором 2158 Uvicord SD (LKB, Швеция) по УФ-поглощению при 226 нм. Масс-спектрометрию осуществляли на МАЛДИ-времяпролетном масс-спектрометре Ultraflex BRUKER (Германия), оснащенном УФ лазером (337 нм). Масс-спектры получены в режиме положительных ионов с использованием рефлектрона; точность измеренных масс - 0,02 % (внешняя калибровка)*.

* Данный этап работы проводился в отделе протеомных исследований ГУ НИИ биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМН (г Москва).

Рисунок 1 - Схема проведения исследований

Исследования биологической активности «Иммуноактив-Т» экспресс - методом включали в себя изучение экспрессии рецепторов тимоцитов морской свинки, обработанных трипсином, с эритроцитами кролика в реакции «активного розеткообразования» (согласно фармакопейной статье ВС 42-1571-85). Содержание влаги оценивали согласно ГОСТ Р51 479-99. Оценку микробиологических показателей проводили в соответствии с СанПиН 2.3.2.1078-01. Токсичность

исследуемого средства определяли на инфузориях Tetrachimena pyriformis (Экспрессный контроль безвредности и качества..., 1982). При статистической обработке экспериментальных данных вычислялась средняя арифметическая (М), ошибка средней арифметической (±ш), критерий Стьюдента (t) и достоверность различий (Р). Различия считали достоверными при вероятности 95% (Р<0,05) (Беленький, 1963).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Выделение биологически активных веществ из тимуса телят и молодняка КРС

При получении иммуномодулирующего средства «Иммуноактив-Т» за основу был взят способ выделения биологически активной фракции (АФТ) из тимуса телят и молодняка КРС (ВСГТУ, 2000). Схема выделения АФТ включала процесс автолиза. На данном этапе под действием собственных ферментов органа происходит накопление низкомолекулярных белков и пептидов, определяющих биологическую активность препаратов на основе тимуса. Но данный процесс требовал более глубокого изучения и представлял наибольший интерес с точки зрения перспектив его оптимизации.

Для оценки влияния технологических параметров на выход низкомолекулярных белков и пептидов и оптимизации процесса автолиза были проведены факторные эксперименты с использованием математического планирования экспериментов по методу Протодьяконова. Уровни изучаемых факторов представлены в табл. 1

По запланированным уровням факторов составлена матрица трехфакторного эксперимента на пяти уровнях, по которой были проведены 25 опытов.

Таблица 1 - Уровни изучаемых факторов

Фактор Уровень

XI, температура, °С 3 10 20 37 80

Х2, продолжительность, ч 0,3 1 3 16 24

ХЗ, гидромодуль 1:3 1:2,5 1:2 1:1,5 1:1

Данные экспериментов использовались для построения графических зависимостей и получения обобщенного критериального уравнения Протодьяконова:

У^-О.ОООМХА+О.ОШвЮО^Х^О.Ш)-

(-0.00180Х2Х2+0.0603405662Х2+0.343)-(-0.96245Х3Х3+0.8290136949Х3+0.483))/(0.62).

На основании данных факторного эксперимента были выбраны оптимальные значения технологических параметров: температура автолиза - 37°С; продолжительность автолиза -8 ч; гидромодуль - 1:2. При выбранных условиях было получено иммуномодулирующее средство, в котором содержание белка, составившее 2,3 г/кг, было в два раза больше в сравнении с количеством белка, получаемого при исходных технологических параметрах.

Средства биологической природы отличаются низкой стабильностью при хранении в жидкой форме. Как один из способов консервирования полученного средства, был предложен метод сублимационного высушивания при атмосферном давлении. В результате проведенной серии экспериментов установлены следующие режимы сублимационного высушивания: t = -10°С, т = 33 ч, при этом влажность средства составила 11%. На рис 2 показана зависимость влагосодержания высушиваемого средства от времени сушки.

J "1 мЙйЛл*'

О 10 15 21 27 31 33 Время, час

Рисунок 2 - Динамика изменения влажности иммуномодулирующего средства в процессе сублимации при атмосферном давлении

После досушки материала в ИК-сушке при t = 45°С, т = 20 мин влажность продукта равнялась 3,5%. Изучение степени растворимости показало, что, согласно условным терминам, принятым в Государственной Фармакопее для обозначения растворимости веществ, полученная форма средства относится к группе «легко растворимых». Процесс сублимационной сушки при атмосферном давлении не влиял на активность иммуномодулирующего средства, что было доказано в опытах in vitro в реакции «активного розеткообразования».

, , ■-»-. р 1-Г-, ............ , .......— ) .......... ■ • ■ | ■ ■ ■ ■ I ■ '■ ' ■ ч ■ | ■

ЮОО 1Мв 2 ООО мое »ООО МОО 4ОО0 4 МО *ОО0 »Ив «ООО а/а

11.Д1а1пии ТИ>У1Л ГДП.П мм.Ир^пм--и-1 г» т птип »пги , . ., .

Рисунок 3 - Масс-спектрограмма «Иммуноактив-Т» в диапазоне молекулярных масс 800 - 5000 Да (смыв 60% адетонитрилом 0.1% ТФУ)

♦ к>

N (Ч

•(и.

< 1

•ООО 10000 12000

мое« иооо

Рисунок 4 - Масс-спектрограмма «Иммуноактив-Т» в диапазоне молекулярных масс 3800 - 17000 Да (второй смыв 80% адетонитрилом 0.1% ТФУ)

Дальнейшие исследования касались изучения состава иммуномодулирующего средства с использованием методов гель-

фильтрации и масс-спектрометрии. Согласно результатам проведенных исследований (рис. 3, 4), в состав средства входят соединения с молекулярной массой от 850 до 17000 Да. С помощью гель-фильтрации суммарный экстракт из тимуса был разделен на 4 фракции, условно обозначенные как TI, Т2, ТЗ, Т4. Скрининг иммунобиологической активности данных фракций в реакции «активного розеткообразования» показал, что наиболее активные фракции элюировались в низкомолекулярной области до 5000 Да (фракции ТЗ и Т4). Таким образом было установлено, что биологическую активность иммуномодулирующего средства определяют низкомолекулярные фракции (ММ до 5 кДа), активность которых сопоставима с активностью суммарного экстракта.

Полученные данные открывают перспективы использования отдельных фракций для получения лекарственных препаратов с высокой активностью, однако целью дальнейших исследований была оценка эффективности суммарного экстракта.

Оценка иммунобиологической эффективности

иммуномодулирующего средства на лабораторных животных

При экспериментальной оценке специфической активности иммуномодуляторов в соответствии с Методическими указаниями... (2000) необходимо исследовать их действие на основные звенья » иммунной системы (табл. 2).

Учитывая, что макрофаги в значительной степени определяют величину развиваемой иммунной реакции, биологическую активность к. «Иммуноактив-Т» исследовали по реакции фагоцитарной активности

макрофагов, выделенных из перитонеальной полости мышей, в отношении Staphyllococcus aureus на фоне азатиоприновой иммуносупрессии in vivo. Как показали результаты исследований, введение животным азатиоприна подавляло активность и интенсивность фагоцитоза соответственно в 1,8 и 1,8 раза по сравнению с группой интактных животных. Введение «Иммуноактив-Т» иммунодефицитным животным в дозе 0,01 мг/кг статистически достоверно повышало показатели активности и интенсивности фагоцитоза в 1,6 и 1,5 раза соответственно. В дозе 0,1 мг/кг «Иммуноактив-Т» восстанавливал активность и интенсивность фагоцитоза в 1,9 и 2,4 раза соответственно; в дозе 1 мг/кг наблюдался рост показателей в 1,5 и 1,8 раза соответственно. «Иммуноактив-Т», введенный группе интактных животных, не вызывал изменений показателей активности и интенсивности фагоцитоза.

Таким образом, результаты эксперимента позволяют сделать вывод, что регуляция функции фагоцитарного звена иммунного ответа имеет существенное значение в реализации иммуномодулирующих свойств «Иммуноактив-Т». Выявлено, что эффективность тестируемого средства носит дозозависимый характер и в большей степени проявляется при введении дозы 0,1 мг/кг массы тела. Полученные данные позволяют предполагать наличие биологической активности «Иммуноактив-Т» в отношении других компонентов иммунитета.

Таблица 2 - Показатели иммунной системы экспериментальных животных при введении «Иммуноактив-Т» на фоне азатиоприновой иммуносупрессии (М±т), п=10

Наименова- Иссле- Аз.+«Им- Аз.+«Им- Аз.+«Им- «Иммуно-

ние реакции дуемые параметры муноак-тив» (0,01 мг/кг) муноак-тив» (0,1 мг/кг) муноак-тив» (1 мг/кг) актив» (0,1 мг/кг)

Реакция ИР, % 21,5±0,5 25,8± 0,2 15,3±0,1 26,6±0,5

ГЗТ (повыше- (повыше- (повыше- (не

ние в 1,5 ние в 1,8 ние в 1,05 изменяет-

раза)** раза)** раза)** ся)*

Фагоци- Актив- 62±0,3 71,8± 0,4 58,7± 0,1 68±0,4 (не

тарная актив- ность фагоци- (повышение в 1,6 (повышение в 1,9 (повышение в 1,5 изменяется)*

ность тоза, % раза)** раза)** раза)**

макрофа- Интен- 7,9± 0,5 12,9± 0,4 9,6±0,37 8,6± 0,6

гов m vivo сивность (повыше- (повыше- (повыше- (не

фагоци- ние в 1,5 ние в 2,4 ние в 1,8 изменяет-

тоза, % раза)** раза)** раза)** ся)*

Реакция Абсолют- 47536,8±9 48750±49 34969,5±1 40705,9±9

антитело- ное число 05,4 2,5 957,3 92,5 (не

образован АОК (повыше- (повыше- (повыше- изменяет-

ия ние в 2,18 раза)** ние в 2,24 раза)** ние в 1,6 раза)** ся)*

Относи- 271,6±6,9 697±16,5 295,4±5,5 342,9±7

тельное (повыше- (повыше- (повыше- (не

число ние в 1,19 ние в 3 ние в 1,3 изменяет-

АОК раза)** раза)** раза)** ся)*

Примечание: **— достоверность р<0,05 относительно группы животных в состоянии иммунодефицита; *- относительно группы интактных животных.

Оценка клеточного иммунного ответа показала, что напряжение иммунной системы, вызванное введением цитостатика азатиоприна, проявлялось в снижении индекса реакции на 46,8% по отношению к контрольной группе. Наиболее выраженный стимулирующий эффект наблюдали при введении тестируемого средства в дозе 0,1 мг/кг, вызывавшей увеличение индекса реакции на 77,9% по сравнению с уровнем супрессии. «Иммуноактив-Т» в дозе 0,01 мг/кг способствовал росту ИР на 48,2%, а в дозе 1 мг/кг - на 5,3% по сравнению с группой животных, получавших азатиоприн. Введение иммуномодулирующего средства интактным животным в дозе 0,1 мг/кг не вызывало выраженной реакции ГЗТ.

Таким образом, результаты проведенных исследований позволяют сделать вывод, что «Иммуноактив-Т» обладает иммунобиологической активностью в отношении клеточного звена иммунного ответа.

Изучение процесса антителообразования показало, что введение иммунодепрессанта азатиоприна оказывало угнетающее действие на процесс антителообразования и вызывало статистически достоверное снижение количества АОК в 1,9 раза как в абсолютных значениях, так и при расчете на 106 спленоцитов. Введение «Иммуноактив-Т» в дозе 0,01 мг/кг стимулировало продукцию АОК в 2,2 раза в пересчете на селезенку и в 1,2 раза в пересчете на 106 спленоцитов относительно группы животных, получавших азатиоприн. Доза «Иммуноактив-Т» 0,1 мг/кг способствовала приросту АОК в 2,2 раза в пересчете на селезенку и в 3,1 раза в пересчете на 106 спленоцитов. При введении «Иммуноактив-Т» в дозе 1 мг/кг количество АОК увеличивалось в 1,6 раза в пересчете на селезенку ив 1,3 раза в пересчете на 106 спленоцитов. Введение исследуемого средства интактным животным не оказывало достоверного влияния на уровень продукции АОК.

В результате проведенных исследований можно сделать вывод, что полученное средство обладает иммунобиологической активностью в отношении гуморального звена иммунитета.

Об активности супрессорных клеток, выступающих в роли основного отрицательного регулирующего звена иммунного ответа, судили по угнетению антителогенеза у мышей-реципиентов после адоптивного переноса суспензии селезеночных клеток гипериммунизированных сингенных животных, что выражалось в значительном уменьшении абсолютного и относительного числа АОК соответственно в 2,1 и 2,6 раза по отношению к контролю. В качестве последнего использовали количество антителопродуцентов мышей-реципиентов, которым трансплантировали селезеночные клетки

сингенных особей, иммунизированных внутрибрюшинным введением 2x10 8 ЭБ на мышь. Введение донорам иммунных клеток селезенки «Иммуноактив-Т» в дозе 0,01 мг/кг усиливало активность супрессорных клеток, выражающуюся в достоверном увеличении количества АОК в 1,5 раза в пересчете на орган и 2,3 раза при пересчете на 106 спленоцитов по сравнению с контролем супрессии. Воздействие на мышей «Иммуноактив-Т» в дозе 0,1 мг/кг отменяло супрессорный эффект, происходило увеличение продукции АОК в 2,2 (абсолютное число АОК) и в 3,2 раза (относительное число АОК) относительно контроля супрессии.

Результаты исследования представлены на рис 5.

120000 100000 - -80000 -60000 -40000 -20000

I абсолютное число АОК

■ Относительное число АОК

Рисунок 5 -антигенспецифических (М±м), п=10

Влияние «Иммуноактив-Т» на активность клеток-супрессоров антителообразования

Доза 1 мг/кг способствовала накоплению АОК в 1,8 (абсолютное число АОК) и в 2,3 раза (относительное число АОК) по сравнению с контролем супрессии.

Результаты исследований свидетельствуют о важной роли влияния «Иммуноактив-Т» на функцию клеток-супрессоров, снижение ингибирующего эффекта иммунокомпетентных клеток супрессоров зависит от вводимой концентрации тестируемого средства.

Таким образом, экспериментальные данные наглядно демонстрируют иммуномодулирующий эффект «Иммуноактив-Т» и его

способность отменять супрессивное действие азатиоприна на клеточноопосредованные иммунные реакции, антителогенез и фагоцитоз. Одним из механизмов действия «Иммуноактив-Т» является регуляция функции клеток-супрессоров. Показано, что иммуномодулирующий эффект носит дозозависимый характер и в большей степени проявляется в дозе 0,1 мг/кг. Исследуемое средство не влияло на показатели иммунной системы интактных животных, что свидетельствует о способности «Иммуноактив-Т» активизировать последние только в условиях повреждения иммунитета.

Результаты вышеописанных экспериментов позволяют рекомендовать прием «Иммуноактив-Т» в дозе 0,1 мг/кг массы тела. Однако для практического внедрения разработанного средства необходимы рекомендации по длительности его применения. Ввиду этого дальнейшие исследования касались определения динамики иммунокоррекции при курсовом введении «Иммуноактив-Т». Для этого экспериментальным животным, получавшим иммунодепрессант, вводили изучаемое средство в выявленной ранее активной дозе - 0,1 мг/кг массы животного в течение 7, 14, 21 дня. Состояние иммунитета оценивали по реакции гиперчувствительности замедленного типа, способности клеток селезенки продуцировать антителообразующие клетки, а также интенсивности и активности фагоцитоза (табл. 3).

Полученные данные позволяют утверждать, что применение «Иммуноактив-Т» в качестве иммуномодулирующего средства эффективно в течение 7-14 дней. В этот период исследуемое средство активно стимулировало показатели иммунитета, восстанавливая их до уровня интактных животных. Увеличение длительности воздействия «Иммуноактив-Т» до 21 дня приводило к снижению его эффективности, что, по-видимому, можно объяснить динамикой формирования иммунного ответа.

Таблица 3 - Эффективность «Иммуноактив-Т» при курсовом применении на фоне азатиоприновой иммуносупрессии (М±ш), п=10

Наименование реакции Исследуемые параметры Аз+Им-муноактив-Т (7 дней) Аз+Им-муно-актив-Т (14 дней) Аз+Имму-ноактив-Т (21 день)

Реакция гиперчувствительности замедленного типа Индекс реакции, % 57,8± 0,2 (повышение в 1,9 раза)* 59,3± 1,4 (повышение в 1,9 раза)* 47,6+ 2,9 (повышение в 1,6 раза)*

Фагоцитарная активность перито-неальных макрофагов in vivo Активность фагоцитоза, % 72,6±0,6 (повышение в 2,3 раза)* 73,4±0,86 (повышение в 2,4 раза)* 65,7±0,89 (повышение в 2,1 раза)*

Интенсивность фагоцитоза, % 9,6±0,5 (повышение в 2,1 раза)* 10±0,2 (повышение в 2,2 раза)* 7±0,3 (повышение в 1,5 раза)*

Реакция антитело- образования Абсолютное число АОК 70802±3105 (повышение в 2,1 раза)* 70906±4558 (повышение в 2,1 раза)* 54272-Н876 (повышение в 1,6 раза)*

Относительное число АОК 449±31 (повышение в 1,7 раза)* 451,5±32,8 (повышение в 1,7 раза)* 338,8±29 (повышение в 1,3 раза)*

Примечание: *- достоверность р<0,05 относительно группы животных, находившихся в состоянии иммунодефицита.

Следующий этап работы касался определения безопасности «Иммуноактив-Т». Токсичность «Иммуноактив-Т» определяли по результатам экспресс - метода с использованием тест-культуры ТеЦасЫтепа ругЛЪгпнв. Полученные результаты представлены в табл. 4.

Таблица 4 - Влияние «Иммуноактив-Т» на морфофизиологическую и количественную характеристику популяции Tetrachimena pyriformis

Объект исследования Морфофизиологические характеристики Рост клеток, %

1 ч 24 ч 96 ч

«Иммуноактив - Т» + + + 6

Изучение влияния «Иммуноактив-Т» на морфофизиологические и количественные характеристики популяции Тей-асЫтепа рупбэгаш, показало, что исследуемое средство не токсично. Анализ контаминации «Иммуноактив-Т» в течение 18 месяцев доказал стабильность микробиологических показателей (табл. 5).

Таблица 5 - Изменение микробиологических показателей в процессе хранения «Иммуноактив-Т»

Сроки КМАФАН БГКП Salmonella Плесень Bacillus

хранения (месяц) и дрожжи cereus

0 0,8* 103 - - - -

1 0,5* Ю3 - - - -

3 0,4*103 - - - -

6 о,з*ю3 - - - -

12 0,4*103 - - - -

15 0,5*103 - - - -

18 0,6*103 - - - -

Обозначения: «-» колонии не обнаружены.

Рост числа микроорганизмов не превышал нормативный показатель 5*Ю5КОЕ/г, БГКП, бактерии рода Salmonella, плесень и дрожжи, Bacillus cereus не были обнаружены.

Экспериментальные данные свидетельствуют о безопасности полученного иммуномодулирующего средства.

Результаты оценки технологических характеристик сухой формы «Иммуноактив-Т» (сыпучесть - 2,8 г/с; насыпная масса - 0,6 г/см ; угол естественного откоса - 50°) указывают на возможность создания таблетированной формы средства.

С учетом полученных результатов разработан следующий компонентный состав на одну таблетку:

«Иммуноактив-Т» Сахар молочный (ОСТ 4963-85) Крахмал картофельный (ГОСТ 7699-78, высший сорт) Кальция стеариновокислый

- 0,05г. -ОД 08г.

- 0,04г.

- 0,002г.

Суммируя имеющиеся данные, можно рекомендовать «Иммуноактив-Т» в качестве самостоятельной биологически активной добавки к пище для поддержания в физиологических границах функциональной активности иммунной системы.

Для реализации возможности использования полученного средства в качестве биологически активного компонента при создании функциональных продуктов питания совместно с кафедрой «Технология мясных и консервных продуктов» (ВСГТУ) были созданы мясные консервы «Колбасный фарш отдельный» с добавлением «Иммуноактив-Т». Анализ данных, полученных при исследовании влияния модельного образца мясных консервов на иммунитет лабораторных животных, находящихся в состоянии иммунодефицита, показал, что созданный продукт обладал иммуномодулирующим действием, восстанавливая функциональную активность иммунной системы животных (табл. 6).

Таблица 6 - Показатели иммунитета экспериментальных животных, получавших мясные консервы с добавлением «Иммунактив-Т»

Наименование реакции Исследуемые параметры Азатиоприн (Аз.) Введение Аз.+ мясные консервы Введение Аз.+ мясные консервы с добавлением «Иммуноактив-Т»

Реакция ГЗТ ИР,% 16,2±1,3 (повышение в 2,2 раза)* 26,1± 1,9 (повышение в 1,6 раза)** 37,2±3,3 (повышение в 2,3 раза)**

Реакция антитело-образования Абсолютное число АО К 304011+17625 (повышение в 2,2 раза)* 532000±3 5958,9 (повышение в 1,7 раза)** 694312,5±51951 (повышение в 2,3 раза)**

Относительное число АОК 2646±174 (повышение в 2 раза)* 3295,3± 189,2 (повышение в 1,2 раза)** 7448,6±593 (повышение в 2,8 раза)**

Примечание: *- достоверность р<0,05 относительно группы интактных животных; **- достоверность р<0,05 относительно группы животных, находившихся в состоянии иммунодефицита.

На основе результатов исследований разработана технологическая схема иммуномодулирующего средства «Иммуноактив-Т», представленная на рис. 6.

Рисунок 6 - Технологическая схема получения иммуномодулирующего средства «Иммуноактив-Т»

Таким образом, технология «Иммуноактив-Т» позволяет рационально использовать природные сырьевые ресурсы, полнее реализовать потенциал биологически активного природного материала, способного восстанавливать защитные силы организма.

выводы

1. Оптимизирован процесс автолиза, который является одним из этапов получения биологически активных пептидов из тимуса убойных животных. Использование математического метода планирования экспериментов позволило увеличить в два раза степень извлечения низкомолекулярных белков и пептидов из тимуса телят и молодняка КРС.

2. Методом сублимационного высушивания при атмосферном давлении получена сухая форма исследуемого средства. Оценка «Иммуноактив-Т» в реакции «активного розеткообразования» показала, что иммунобиологическая активность средства в процессе сушки не снижается.

3. Иммунобиологическую активность «Иммуноактив-Т» определяют пептидные фракции с молекулярными массами от 850 до 5000 Да.

4. Иммуномодулирующее средство восстанавливало показатели клеточного, гуморального звеньев иммунного ответа и фагоцитоза макрофагов экспериментальных животных на модели иммунодепрессивного состояния при курсовом применении в течение 714 дней в дозе 0,1 мг/кг.

5. Безопасность «Иммуноактив-Т» доказана при исследовании показателей токсичности и микробиологической контаминации средства. Морфофизиологические и количественные характеристики популяции Tetrachimena pyriformis со временем не изменялись, рост числа микроорганизмов не превышал предельно допустимой концентрации.

6. Разработаны состав и параметры таблетирования «Иммуноакгив-Т» для использования его в виде БАД к пище, нормативная документация ТУ 921832-046-02069473-2005 «Пищевая биологически активная добавка Иммуноактив-Т».

7. Экспериментально доказана возможность использования «Иммуноактив-Т» при создании функциональных продуктов питания на примере мясных консервов «Колбасный фарш отдельный». Вводимый компонент не оказывал влияния на органолептические, физико-химические и функционально-технологические свойства продукта при этом достоверно повышал показатели иммунитета экспериментальных животных, находящихся в состоянии азатиоприновой иммунодепрессии. Разработана нормативная документация ТУ 9216053-02069473-2005 «Колбасный фарш отдельный особый».

8. Разработана технологическая схема получения иммуномодулирующего средства «Иммуноактив-Т».

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. Тармакова О.С., Битуева A.B., Бубеева Н.Б., Жамсаранова С.Д. Сублимационная сушка биологически активных фракций при атмосферном давлении //Сб. тезисов 7-й Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология наука XXI века». -Пущино, 2003.-С. 133.

2. Тармакова О.С., Битуева A.B., Бубеева Н.Б., Тумурсух LLL, Жамсаранова С.Д. Санитарно-микробиологическая оценка биологически активных добавок //Материалы VII Всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России».-М., 2003.-С.509 -510.

3. Битуева A.B., Тармакова О.С., Жамсаранова С.Д. Иммунобиологическая активность пептидных фракций из органов иммунной системы крупного рогатого скота //Материалы V международной научно-технической конференции «Пища. Экология. Человек.».-Москва, 2003. - С.21-22.

4. Битуева A.B., Тармакова О.С., Жамсаранова С.Д. Биологическая активность экстрактов из тимуса и лимфатических узлов крупного рогатого скота, подвергнутых сублимационной сушке при атмосферном давлении //Материалы Всероссийской молодежной научно-технической конференции «Молодые ученые Сибири».-Улан-Удэ, 2003. -С.42—44.

5. Тармакова О.С., Бубеева Н.Б., Жамсаранова С.Д. Влияние процесса автолиза на биологическую активность пептидных фракций тимуса //Сб. науч. тр. Сер. Химия и биологически активные вещества -Изд-во ВСГТУ. - Улан-Удэ: 2004,-Вып. 9.-С.117-121.

6. Тармакова О.С., Битуева A.B., Жамсаранова С.Д. Оценка эффективности сухой формы пищевого иммуномодулятора на основе пептидов тимуса // Тр. IV Международной научно-практической конференции «Пища. Экология. Качество». - Новосибирск, 2004. -С. 142-146.

7. Тармакова О.С., Битуева A.B., Жамсаранова С.Д. Иммуностимулирующий эффект сублимированной пептидной фракции тимуса телят //Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию профессора В.Я. Суетина «Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой,

возрастной и экспериментальной морфологии». - Улан-Удэ, 2004. -С. 185-186.

8. Тармакова О.С., Битуева A.B., Жамсаранова С.Д. Эффективность воздействия сублимированной фракции тимуса на процесс антителообразования // Сб. науч. тр. «Актуальные проблемы морфологии» .-Красноярск, 2004. -С.245-246.

9. Тармакова О.С., Битуева A.B., Жамсаранова С.Д. Консервирование пищевых иммуномодуляторов, полученных из органов иммунной системы убойных животных, методом сублимационного высушивания // Материалы Всероссийской научно-технической конференции с международным участием «Новые технологии добычи и переработки природного сырья в условиях экологических ограничений»-Улан-Удэ, 2004. -С. 159-160.

10. Жамсаранова С.Д., Битуева A.B., Павлова С.Н., Тармакова О.С. Новая биоактивная функциональная добавка «Иммуноактив-Т» // Мясная индустрия - 2005. - №10. - С.28-30.

Подписано в печать 18.11.2005 г. Формат 60x84 1/16. Объем в усл. пл. 1,16.

Тираж 100 экз. Печать операт., бум, писч. Заказ №236

Издательство ВСГТУ

670013 г.Улан-Удэ, ул. Ключевская, 40в.

Отпечатано в типографии ВСГТУ

670013 г. Улан-Удэ, ул. Ключевская, 42

»24528

РНБ Русский фонд

2006-4 25460

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Тармакова, Ольга Станиславовна

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Сырье животного происхождения как перспективный источник 9 * биологически активных соединений

1.2. Строение и функция иммунной системы

1.3. Биологически активные факторы тимуса и лечебные препараты на 27 их основе

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Модификация способа получения иммуномодулирующего средства 50 3.1.1. Оптимизация процесса автолиза t 3.1.2. Консервирование «Иммуноактив-Т» методом сублимационного высушивания при атмосферном давлении

3.1.3. Исследование физико-химических свойств и состава 62 «Иммуноактив-Т»

3.2. Оценка иммунобиологической эффективности «Иммуноактив-Т» 67 на лабораторных животных

3.2.1. Влияние «Иммуноактив-Т» на показатели активности и 68 интенсивности фагоцитоза перитонеальных макрофагов мышей в условиях иммунодефицита, вызванного азатиоприном

3.2.2. Изучение функции клеточного звена иммунитета при воздействии 69 «Иммуноактив-Т» на фоне иммунодефицита

4 3.2.3. Исследование иммуномодулирующего действия «Иммуноактив

Т» на гуморальный иммунитет при вторичном иммунодефицитном состоянии

3.2.4. Оценка функциональной активности антигенспецифических Т- 73 супрессоров экспериментальных животных при воздействии «Иммуноактив-Т»

3.2.5. Исследование динамики изменения иммунобиологической 75 эффективности «Иммуноактив-Т»

3.3. Определение безопасности «Иммуноактив-Т»

3.3.1. Анализ микробиологической контаминации

3.3.2. Оценка токсичности 80 < 3.4. Получение твердой дозированной формы «Иммуноактив-Т»

3.5. Разработка модельного образца мясных консервов «Колбасный 88 фарш отдельный» с добавлением «Иммуноактив-Т»

3.5.1. Оценка качественных характеристик продукта

3.5.2. Исследование иммуномодулирующих свойств продукта

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Модификация способа получения и оценка эффективности иммуномодулирующего средства из тимуса телят и молодняка крупного рогатого скота"

Актуальность темы. На сегодняшний день неблагоприятная экологическая ситуация, огромная информационная и нервно-эмоциональная нагрузка, злоупотребление медикаментозными средствами, табаком, алкоголем, нарушения в питании, как по качеству, так и по количеству пищи, и многие другие факторы приводят к росту числа заболеваний, в том числе к болезням, сопровождающимся снижением естественной резистентности и иммунологической реактивности организма [Хаитов P.M. и соавт., 1996; Чиркин В.В. и соавт., 1999; Шабров А.В. и соавт., 2003; Иванова И.К., 2005].

В настоящее время нет никаких сомнений в том, что нарушения иммунной системы играют важную роль в хронизации заболеваний, развитии осложнений, отсутствии достаточного клинического эффекта при назначении адекватной терапии. В связи с продолжающимся в последние десятилетия ростом распространенности и тяжести иммунодефицитных состояний и аллергических болезней проблема заболеваний, обусловленных нарушениями в системе иммунитета, переросла в глобальную медико-социальную проблему. На сегодняшний день более чем у 30% больных болезни протекают в сочетании с клиническими и лабораторными признаками иммунной недостаточности. Кроме того, отмечается рост распространенности первичных иммунодефицитных состояний у детей и взрослых [Jlycc Л.В. и соавт., 2004].

Широкое применение препаратов на основе биологически активных соединений, содержащихся в различных органах и тканях животного организма, является одним из перспективных направлений иммунокоррегирующей терапии. В настоящее время достигнут значительный прогресс в создании лекарственных средств на основе эндогенных биологически активных веществ; активно изучается их клиническая эффективность и возможность использования в качестве биологически активных добавок (БАД) к пище [Тутельян В.А., и соавт., 2003; Морозов В.Г. и соавт., 2000].

В связи в вышеизложенным разработка иммуномодулирующих средств на основе органов иммунной системы убойных животных (в частности, из тимуса телят и молодняка крупного рогатого скота (КРС)) является актуальной и перспективной.

Работа выполнена при поддержке грантов «Молодые ученые ВСГТУ» (2004), «Молодые ученые Республики Бурятия» (2004), в рамках выполнения научно-исследовательских работ по региональной научно-технической программе «Бурятия. Наука. Технологии и инновации» (2003).

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований явилась разработка способа, позволяющего получить максимальное количество биологически активного средства из тимуса телят и молодняка крупного рогатого скота, и выявление эффективности его использования при вторичных иммунодефицитных состояниях.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- оптимизировать процесс автолиза с помощью математического метода планирования экспериментов;

- изучить возможность использования сублимационного высушивания при атмосферном давлении для стабилизации полученного средства;

- определить фракционный состав иммуномодулирующего средства, условно названного «Иммуноактив-Т»;

- исследовать иммуномодулирующую эффективность сухой формы «Иммуноактив-Т» на модели вторичного иммунодефицитного состояния экспериментальных животных;

- оценить безопасность иммуномодулирующего средства;

- получить таблетированную форму «Иммуноактив-Т»;

- обосновать возможность использования «Иммуноактив-Т» в качестве биологически активного компонента при создании пищевых продуктов функционального назначения.

- разработать технологическую схему получения «Иммуноактив-Т».

Научная новизна работы. Установлены закономерности на основе метода математического моделирования, позволяющие увеличить степень извлечения биологически активных пептидов в два раза относительно исходных технологических параметров.

Установлены оптимальные режимы сублимационного высушивания при атмосферном давлении, позволяющие сохранить биологическую активность «Иммуноактив-Т».

Экспериментально доказана эффективность «Иммуноактив-Т» в отношении гуморального, клеточного звеньев иммунитета и функциональной активности макрофагов экспериментальных животных, находящихся в состоянии иммунодепрессии. Установлены эффективная доза и длительность курсового применения «Иммуноактив-Т».

Разработаны параметры таблетирования сухой формы «Иммуноактив

Т».

Показана эффективность использования «Иммуноактив-Т» при создании новых продуктов функционального назначения.

Практическая ценность. Разработана нормативная документация на биологически активную добавку к пище «Иммуноактив-Т» ТУ 921832-04602069473-2005.

Разработана нормативная документация на консервы мясные «Колбасный фарш отдельный особый» ТУ 9216-053-02069473-2005.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на:

• ежегодных научно-практических конференциях ВосточноСибирского государственного технологического университета по секции «Химия биологически активных веществ» (Улан-Удэ, 2003,2004,2005);

• 7-й Пущинской школе-конференции молодых ученых (Пущино,

2003);

• VII Всероссийском конгрессе «Здоровое питание населения России» (Москва, 2003);

• V Международной научно-технической конференции «Пища. Экология. Человек.» (Москва, 2003);

• Всероссийской молодежной научно-технической конференции «Молодые ученые Сибири» (Улан-Удэ, 2003);

• IV Международной научно-практической конференции «Пища. Экология. Качество» (Краснообск, 2004);

• Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию профессора В.Я. Суетина «Актуальные аспекты экологической, сравнительно-видовой, возрастной и экспериментальной морфологии» (Улан-Удэ, 2004);

• Всероссийской научно-технической конференции с международным участием «Новые технологии добычи и переработки природного сырья в условиях экологических ограничений» (Улан-Удэ, 2004).

Разработки экспонировались на международной выставке «Научные разработки ВУЗов Сибири», г. Маньчжурия, 2004 г. (Китай); на традиционной выставке проектов НИОКР «Наука. Образование. Бизнес», г. Улан-Удэ, 2004 г.; международной выставке «Пищевые технологии и системы качества», г. Улан-Батор, 2004 г. (Монголия); международной выставке-ярмарке «Бизнеслэнд», г. Улан-Удэ, 2004 г.; выставке «Энергосберегающая техника и передовые технологии в производстве сельскохозяйственной продукции», г. Улан-Удэ, 2004 г.; на 2-ой китайско-российской выставке по науке и технике, г. Маньчжурия, 2005 г. (Китай).

Публикации. По результатам выполненных исследований опубликовано 10 печатных работ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов, списка литературы, состоящего из 200 источников. Работа изложена на 126 страницах, включает 19 таблиц, 13 рисунков, 2 приложения.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Тармакова, Ольга Станиславовна

ВЫВОДЫ

1. Оптимизирован процесс автолиза, который является одним из этапов получения биологически активных пептидов из тимуса убойных животных. Использование математического метода планирования экспериментов позволило увеличить в два раза степень извлечения низкомолекулярных белков и пептидов из тимуса телят и молодняка КРС. '

2. Методом сублимационного высушивания при атмосферном давлении получена сухая форма исследуемого средства. Оценка «Иммуноактив-Т» в реакции «активного розеткообразования» показала, что иммунобиологическая активность средства в процессе сушки не снижается.

3. Иммунобиологическую активность «Иммуноактив-Т» определяют пептидные фракции с молекулярными массами от 850 до 5000 Да.

4. Иммуномодулирующее средство восстанавливало показатели* клеточного, гуморального звеньев иммунного ответа и фагоцитоза макрофагов экспериментальных животных на модели иммунодепрессивного ? состояния при курсовом применении в течение 7-14 дней в дозе 0,1 мг/кг.

5. Безопасность «Иммуноактив-Т» доказана при исследовании показателей токсичности и микробиологической контаминации средства. Морфофизиологические и количественные характеристики популяции Tetrachimena pyriformis со временем не изменялись, рост числа микроорганизмов не превышал предельно допустимой концентрации.

6. Разработаны состав и параметры таблетирования «Иммуноактив-Т» для использования его в виде БАД к пище, нормативная документация ТУ 921832-046-02069473-2005 «Пищевая биологически активная добавка Иммуноактив-Т».

7. Экспериментально доказана возможность использования «Иммуноактив-Т» при создании функциональных продуктов питания на примере мясных консервов «Колбасный фарш отдельный». Вводимый компонент не оказывал влияния на органолептические, физико-химические и функционально-технологические свойства продукта, при этом достоверно повышал показатели иммунитета экспериментальных животных, находящихся в состоянии азатиоприновой иммунодепрессии. Разработана нормативная документация ТУ 9216-053-02069473-2005 «Колбасный фарш отдельный особый».

8. Разработана технологическая схема получения иммуномодулирующего средства «Иммуноактив-Т». 4 t

107

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Тармакова, Ольга Станиславовна, Улан-Удэ

1. Агеев А.К. Гистопатология вилочковой железы человека / А.К. Агеев. Л.: Медицина, 1973. - 127 с.

2. Аминова Г.Г. Изменение конструкции тимуса крыс под влиянием гидрокортизона / Г.Г. Аминова, Л.М. Ерофеева // Архив АГЭ. 1983. -т. 44. - с.45-48.

3. Антипов А.В., Мизерецкий Н.Н. Современная технология сублимации молочных продуктов / А.В. Антипов, Н.Н. Мизерецкий // Пища. Экология. Человек : докл. 5-й международ, науч.-техн. конф. -М.: МГУПБ. 2003. - с. 86-88.

4. Антипова Л.В. Методы исследования мяса и мясных продуктов / Л.В. Антипова, И.А. Глотова, А.И. Рогов. М.: Колос, 2001. - 376 с.

5. Арион В.Я. Выделение, физико-химические свойства и биологическая активность Т-активина / В.Я. Арион // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Иммунология. 1982. - т. 10. - с. 45-53.

6. Арион В.Я. Иммунологически активные факторы тимуса / В.Я. Арион // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Иммунология. (Медиаторы иммунной системы). 1981. - т.9. - с. 10-50.

7. Арион В.Я. От пересадки тимуса к молекулярной реконструкции иммунной системы / В.Я. Арион, Ю.И. Морозов, Р.В. Петров // Вестник РАМН. 1999. - №5. - с.15-19.

8. Арион В.Я. Современные взгляды на природу и клиническое использование тимических препаратов / В.Я. Арион, И.В. Зимина, Ю.М. Лопухин // Иммунология. 1997. - №3. - с. 157-166.

9. Арион В.Я. Тактивин (Т-активин) и его иммунобиологическая активность // Иммунобиология гормонов тимуса / под ред. Ю.А. Гриневича. Киев: Здоровье, 1989. - с. 103-125.

10. Арион В.Я. Т-активин и его иммунобиологические свойства : дис. . докт. биол. наук / В.Я. Арион. — М., 1990. с. 52.

11. Арцимович Н.Г. Иммунофизиология / Н.Г. Арцимович ; под ред. Е.А. Корнеевой. Спб., 1993. - С. 558-578.

12. Атмосферная сублимационная сушка пищевых продуктов / Камовников Б.П. и др. М.: Колос, 1994. - 255 с.

13. Бакаева З.В. Противоязвенные свойства II и III фракции-сайтропина вытяжки из рогов сайги / З.В. Бакаева, Г.Е. Самонина, О.Е. Романов // Вестник Московского университета. - 2004. - №.1; - с 11

14. Барта И. Селезенка (Анатомия, физиология, патология и клиника) / И. Барта. Будапешт : Изд-во АН Венгрия, 1976. - 78 с.

15. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта / М.Л. Беленький. Л., 1963. - с. 81-107.

16. Белецкая Л.В. Иммунология / Л.В. Белецкая, Э.В. Гнездицкая. -М., 1980.-т.1.-№4.-89 с.

17. Белецкая Л.В. Коллекторная система тимуса / Л.В. Белецкая, Л.П. Катасонова, Т.С. Алиев // Бюллетень эксперим. биологии и медицины. -1981. т.92. - № 9. - с.371-373.

18. Бернет Ф. Клеточная иммунология / Ф. Бернет ; под ред. А.Е. Гурвича. М., 1971. - 542 с.

19. Беседнова Н.Н. Регуляция иммунных процессов пептидами природного происхождения / Н.Н. Беседнова // Антибиотики и химиотерапия. 1999. - Т.44. - №1. - с.31-35.

20. Бильдуева Д.Г. Разработка кормовой добавки на основе цеолитов и оценка ее иммуномодулирующей активности : дис. . канд. биол. наук / Д.Г. Бильдуева. Улан-Удэ, 2001. - 130 с.

21. Биологически активные добавки в питании человека / Пащенко Л.П. и др.. // Пищевая промышленность. 2002. - № 7. - с. 82-83.

22. Битуева А.В. Получение биорегулятора из лимфатических узлов крупного рогатого скота и характеристика его иммунобиологической активности : дис. . канд. биол. наук / А.В. Битуева. Улан-Удэ, 2003. - 141 с.

23. Бобренева И.В. Рекомендации по внесению биологически активных добавок в рецептуры функциональных продуктов питания / И.В; Бобренева // Мясная индустрия. 2003. - №5. - с. 27-29.

24. Болезни вилочковой железы / В.П. Харченко. М.: Триада-Х, 1998.-102 с.

25. Булаев В.М. Применение пептидов в психиатрии и неврологии / В.М. Булаев // Журнал невропатологии и психиатрии. 1987. - т.87. -вып.8. - с. 1244-1248.

26. Вальтер М.В. Постадийный контроль в производстве таблеток / М.В. Вальтер, О.Л. Тютенков, Н.А. Филипин. М.: Медицина, 1982. -с. 58.

27. Взаимодействие Т-активина с перитонеальными макрофагами / Короткова М.Н. и др. // Журн. микроб, эпидемиологии и иммунобиологии. 1989. - № 6.

28. Влияние экстракта из пантов северного оленя на микрофлору толстого кишечника здоровых дошкольников / Я.А. Ахременко и др. // Здоровое питание населения России : материалы 7-го всерос. конгресса, М., 2003. с. 46-47.

29. Возрастные изменения тканевых структур и клеточного состава некоторых лимфатических узлов и вилочковой железы плодов и телят молочного периода : дис. . канд. биол. наук / B.C. Григорьев. Казань, 1973.

30. Воробьев А.А. Иммуномодуляторы: принципы классификации и стратегия применения в медицине / А.А. Воробьев // Вестник РАМН. -2002. №4. - с. 3-6.

31. Воробьева Е.А. Архив анатомии, гистологии, эмбриологии / Е.А. Воробьева. 1961. - т. 41. - №9. - с. 60.

32. Выделение и очистка нового тимусного пептидного из тимуса теленка / Кин К.-М. и др..;// Биохимия. 2004. - т. 69. - вып. 8.-е. 1133-1138.

33. Галактионов В.Г. Графические модели в иммунологии / В.Г. Галактионов. М., 1986. - 236 с.

34. Галактионов В.Г. Очерки эволюционной иммунологии / В.Г. Галактионов. М.: Наука. - 1995. - 256 с.

35. Гладкова Н.Е. Исследование иммунодепрессивных свойств азатиоприна, метотрексата и хлорамфеникола активности : дис. . канд. мед. наук / Н.Е. Гладкова. М., 1973.

36. ГОСТ 12296-66. Консервы мясные «Колбасный фарш отдельный». Технические условия.

37. ГОСТ Р51 479-99 Мясо и мясные продукты. Метод определения массовой доли влаги.

38. Государственная Фармакопея СССР : Вып.1. Общие методы анализа / МЗ СССР. 11-е издание, М.: Медицина, 1987. - 336 с.

39. Гриневич Ю.А. Иммунобиология гормонов тимуса / Ю.А. Гриневич, В.Ф. Чеботарев, И.С. Никольский. Киев : Здоровья, 1989. -152 с.

40. Девойно Л.Б. Моноаминергические системы в регуляции иммунных реакций (серотин, дофамин) / Л.Б. Девойно, Р.Ю. Ильюченко. Новосибирск : Наука, 1983. - 323 с.

41. Детские функциональные продукты на мясной основе / А.В. Устинова и др. // Пищевая промышленность. 2005. - №3. - с. 14 — 15.

42. Джатдоева А. А. Содержание токсичных элементов в биологически активных добавках к пище / А.А. Джатдоева, С.А. Хотимченко // Вопросы питания. 2005. - №2. - с. 45-48.

43. Дранник Г.Н. Иммунотропные препараты / Г.Н. Дранник, Ю.А. Гриневич, Г.М. Дизик. Киев : Здоров'я, 1994. - 288 с.

44. Дырдуева Н.Б. Оценка иммунокорригирующего действия фракции тимуса, иммобилизованной на цеолите, при вторичном иммунодефицитном состоянии : дис. . канд. биол. наук / Н.Б. Дырдуева. Улан-Удэ, 2000. - 123 с.

45. Жамсаранов Ц.Д. Оценка безопасности и биологической ценности БАД растительного происхождения / Ц.Д. Жамсаранов, И.Д. Жамсаранова, С.Н. Лебедева // Молодые ученые Сибири : материалы Всерос. молодежной науч.-технич. конф. Улан-Удэ, 2003. - с. 60-61.

46. Жамсаранова С.Д. Разработка биологически активных добавок из вторичного сырья животного происхождения / С.Д. Жамсаранова //материалы Всерос. науч.-технич. конф. с международ, участием. -Улан-Удэ, 2004. с. 148-149.

47. Жаринов А.И. Краткие курсы по основам современных технологий переработки мяса, организованные фирмой «Протеин Технолоджиз Интернешнл» (США) / Жаринов А.И., Кузнецова О.В., Черкашина Н.А. М.: ИТАР-ТАСС, 1997. - 180 с.

48. Жебраускас П. Влияние азатиоприна, преднизолона и дегранола на некоторые иммунологические показатели у мышей / П. Жебраускас, В. Рочка, Б. Тилиндис // труды науч. конф. мед. фак-та. Вильнюс, 1970. -с. 61-65.

49. Жеребцов Н.А. Биохимия / Н.А. Жеребцов, Т.Н. Попова, В.Г. Артюхов. Воронеж : Издательство Воронежского государственного университета, 2002. - 696 с.

50. Журавская Н.К. Исследование и контроль качества? мяса и мясопродуктов / Н.К. Журавская, Л.Т. Алехина, JI.M. Отряшенкова. -М.: Агропромиздат, 1985. -296 с.

51. Забусов Ю.Г. Биологическое значение так называемой акцидентальной инволюции тимуса / Ю.Г. Забусов // Тимико-лимфоцитарная система и вопросы нейрогуморальной регуляции при рассеянном склерозе. Казань. - 1975. - С.28-36.

52. Западнюк И.П. Лабораторные животные: разведение, содержание, использование в эксперименте / И.П. Западнюк, В.И. Западнюк, Б.В. Западнюк. Киев : Головное издательство, 1983. - 383с.

53. Захарова Л.А. Миелопептиды: природа и функциональная активность : дис. . канд. мед. наук/ Л.А. Захарова. М., 1987. - 130 с.

54. Иванова И. К. Морфофункциональные изменения надпочечников, тимуса и желудка белых крыс при иммобилизационном стрессе и их коррекция фитосредством «Тантон» : дис. . канд. биол. наук / И. К. Иванова. Улан-Удэ, 2005. - 129 с.

55. Иммунодиагностика и иммунокоррекция в клинической практике / под ред. И.Д. Столярова. СПб.: Сотис, 1999. - 176 с.

56. Иммунология / Д.А. Берзофски и др.. М.: Мир, 1987. - 360 с.

57. Иммунология: Практикум / под ред. Е.У. Пастер и др.. Киев : Выща шк. Изд-во при Киев. Ун-те, 1989. - с. 196-197.

58. Иммуномодулирующее действие мясных консервов с БАД / JI.H. Федянина и др. // Мясная индустрия. 2005. - № 1. - с. 16 - 18.

59. Иммуномодулирующий эффект мясных консервов для детского питания / А.В. Устинова и др. // Мясная индустрия. 2000. - №7. - с. 26 - 27.

60. Исследование свойств пищевой добавки / O.JI. Дубинина и др.. // Молодые ученые Сибири : материалы Всерос. молодежной науч.-технич. конф. Улан-Удэ, 2003. - с. 23 - 24.

61. Каболова З.А. Гистологическое и гистохимичеокое изучение тимуса белых крыс в различные возрастные периоды / З.А. Каболова // Гистохимия в нормальной и патологической морфологии. -Новосибирск : Наука, 1967. С. 127-128.

62. Касьянов С.П. Эффективная технология выделения физиологически активных липидов из печени краба / С.П. Касьянов, Т.П. Новгородцева // Биотехнология: состояние и перспективы развития : материалы 3-го Московского международ, конгресса, 2005. -с. 111.

63. Кемилева 3. Вилочковая железа / 3. Кемилева. М.: Медицина, 1984.-256 с.

64. Киселева Е.П. Механизмы инволюции тимуса при опухолевом росте / Е.П. Киселева // Успехи современной биологии. 2004. - т. 124. - №6. - с. 589-601.

65. Козлов В.А. Методическое руководство по применению метода локального гемолиза и статистическому оцениванию результатов / В.А. Козлов, О.Т. Кудаева, Е.Е. Наумова. Новосибирск, 1988. - 16 с.

66. Комплексное тестирование активности препаратов из тимуса in vitro / А.А. Ярилин и др. // Иммунология. 1986. - № 3. - с. 23 - 26.

67. Криволуцкий Д.А. Целебные животные / Д.А. Криволуцкий. -Пермь : Изд-во Пермского университета, 1994. 56 с.

68. Кузник Б.И. Цитомедины и их роль в регуляции физиологических функций / Кузник Б.И., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. // Успехи современной биологии. 1995. - т.115. - № 3. - с. 353 - 367.

69. Кульберг А.Я. Регуляция иммунного ответа / А.Я. Кульберг. М., 1985.-223 с.

70. Лазарян Д.С. Перспективы использования расплода пчел в . медицинской практике / Д.С. Лазарян. Пятигорск, 2002. - 134 с.

71. Лебедева С.Н. Морфофункциональная характеристика вторичных иммунодефицитных состояний животных ятрогенной этиологии и эффективность их коррекции природными иммуномодуляторами : дис. .докт. биол. наук / С.Н. Лебедева. Улан-Удэ, 2002.-251 с.

72. Ломакин М.С. Гормоны и другие биологически активные вещества тимуса: структуры и функции / М.С. Ломакин, Н.Г. Арцимович // Иммунология. 1992. - № 1.-е. 10-15.

73. Лусс Л.В. Принципы назначения имуномодулирующей терапии в клинике / Л.В. Лусс, Т.В. Латышева, Н.Х. Сетдикова // тез. докл. объединенного иммунологического форума. Екатеринбург, 2004. - с. 253.

74. Любавская Т.Я. Антимикробные и иммуномодулирующие свойства комплексных экстрактов из трепанга японского Stichopus Japonicus Selenka : дис. . канд. мед. наук / Т.Я. Любавская. -Владивосток, 1966. - 120 с.

75. Малышев В.П. Вероятностно-детерминированное планирование эксперимента / В.П. Малышев. Алма-Ата, 1981. - 72 с.

76. Манько В.М. Иммуномодуляция: история, тенденция развития, современное состояние и перспективы / В.М. Манько, Р.В. Петров, P.M. Хаитов // Иммунология. 2002. - №3. - с. 132 - 138.

77. Миллер Дж. Биология тимуса / Дж. Миллер, Р. Дукор : пер. с англ. М.: Мир, 1967. - 112 с.

78. Михайлов В.П. Архив анатомии, гистологии и эмбриологии / В.П. Михайлов. 1972. - т. 62. - № 6. - с. 12.

79. Михайлова А.А. Миелопептиды новый класс эндогенных иммунорегуляторов / А.А. Михайлова, JI.A. Захарова, С.В. Сорокин. -М., 1987.-42 с.

80. Молекулярная и функциональная гетерогенность иммунологически активного фактора тимуса Т-активина / В.Я. Арион и др. // Химия и биология иммунорегуляторов / под. ред. Г.И. Чипенс. -Рига : Зинантне, 1985. С. 39-51.

81. Молекулярно-генетические аспекты противоопухолевой активности препарата глутоксим / Кожемякин JI.А. и др. // Вопросы, онкологии. 2001. - т. 47. - №3. - с. 338-342.

82. Морозов В.Г. Выделение и очистка и идентификация иммуномодулирующего полипептида, содержащегося в тимусе телят и человека / В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон // Биохимия. 1981. - т.46. - № 9.-С. 1652-1659.

83. Морозов В.Г. Пептидные тимомиметики / В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон, В .В. Малинин. СПб, 2000 - с. 47.

84. Морозов В.Г. Тималин и его иммунобиологическая активность / В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон // Иммунобиология гормонов тимуса : под ред. Ю.А. Гриневича. Киев : Здоровье, 1989. - с. 125-142.

85. Морозов В.Г. Цитамины (биорегуляторы клеточного метаболизма) / В.Г. Морозов, Г.А. Рыжак, В.В. Малинин. Спб., 2000. -117 с.

86. Муравьев И.А. Технология лекарств / И.А. Муравьев. М.: Медицина, 1980. - т. 1. - 704 с.

87. Нежута А.А. Научное обоснование и методика разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов : дисс. . докт. технич. наук / А.А. Нежута. М, 2003. - 288 с.

88. Нейроиммуноэндокринология тимуса 7 И.М. Кветной и др. -СПб.: Издательство ДЕАН, 2005. 160 с.

89. Николаев Е.Н. Масс спектрометрия в современной протеомике / Е.Н. Николаев // Биотехнология: состояние и перспективы развития : материалы конгресса. М., 2003. - с. 37-38.

90. Осинцев Н.С. Целебные силы пантов / Н.С. Осинцев, С.Н. Осинцев. Калуга : Манускрипт, 2004. - 154 с.

91. Основы масс-спектрометрии органических соединений / B.F. Заикин и др.. М.: МАИК «Наука/Интерпериодика», 2001. - 286 с.

92. Особенности сублимационной сушки лекарственных и: диагностических препаратов в ампулах / С.Ф. Антонов и др. // Биотехнология.-1998. №5.-С.48-69.

93. Оценка токсичности и биологической ценности продуктов переработки масличных семян с использованием модельных биологических систем / В.Н. Григорьева и др.. // Здоровое питание населения России : материалы 7-го всерос. конгресса. М., 2003. - 139140 с.

94. Пат. 1506668 Рос. Федерация, А1 А61К 35/26, 38/00. Способ получения иммуностимулирующих факторов из тимуса северного кита / Н.С. Мотавкина и др.. № 4035714/14 ; 4041713/14 ; заявл. 06.03.86 ; опубл. 20.03.96 бюл. № 8.

95. Пат. 1531276 Рос. Федерация, А1 А61К 35/55. Способ получения низкомолекулярного небелкового препарата «Вилозен» из вилочковойжелезы / В.Г. Юсупов и др.. № 4397376/14 ; заявл. 22.03.88 ; опубл. 20.05.95, бюл. № 14.

96. Пат. 2153328 Рос. Федерация, С2 А61К 9/127, 35/54. Способ получения липосом / Н.А. Тыхеева, Г.П. Ламажапова, С. Д. Жамсаранова. № 98119046/14 ; заявл. 19.10.1998 ; опубл. 27.07.2000, бюл. №21.

97. Пат. 2205013 Рос. Федерация, CI А61К 35/26, 35/12. Способ приготовления иммуномодулирующего препарата из тимуса северного оленя / Н.П. Лысенко и др.. № 2001128494/14 ; заявл. 24.10.2001 ; опубл. 27.05.2003, бюл. № 15.

98. Патрушев Л.И. Экспрессия генов / Л.И. Патрушев. М.: Наука, 2000-830 с.

99. Пептидные препараты. 1. Систематизация и стандартизация. / Ковалева С.В. и др. // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии. 2003. - №3. - с. 5-12.

100. Пестерева О.В. Теоретическое обоснование и практические рекомендации использования жира нерпы на пищевые цели : дис. . канд. технич. наук / О.В. Пестерева Улан-Удэ, 1995. - 148 с.

101. Петров Р.В. Иммуногенетика и исскуственные антигены / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, P.M. Атауллаханов. М.: Медицина, 1983. - с. 345.

102. Петров Р.В. Иммунология / Р.В. Петров. М.: Медицина, 1982. -368 с.

103. Поликар Л. Физиология и патология лимфоидной системы / Л. Поликар. М.: Медицина, 1965. - 165 с.

104. Полипептиды тимуса: перспективы и схемы использования в ветеринарии / А.А. Новых и др.. Ставрополь, 1996. - с. 112.

105. Попечителев Е.П. Аналитические исследования в медицине, биологии и экологии / Е.П. Попечителев, О.Н. Старцева. М: Высш.шк., 2003.-279 с.

106. Практикум по иммунологическим методам исследования / Т.Н. Баглаев и др.. Улан-Удэ: Изд-во ВСГТУ, 1987. - 52 с.

107. Равич-Щербо В.А. Ретроградный лимфоток торакальной области / В.А. Равич-Щербо. Воронеж, 1940. - с. 5.

108. Разработка, получение и некоторые свойства нового иммуномодулятора пептидной природы из ткани селезенки / А.Б. Цыпин и др. // Иммунология. 1995. - №3. - с. 33 - 36.

109. Решетников И.С. Тимус северного оленя: морфофункциональное развитие, влияние экологических факторов, биопрепараты / И.С. Решетников, JI.H. Владимиров. М.: Академкнига, 2002. - 238 с.

110. Роднина Т.Г. Дегустационная экспертиза качества продуктов / Т.Г. Роднина // Хранение и переработка сельскохозяйственного сырья. 1995.-№4.-с. 45-48.

111. Салаватулина P.M. Новый метод определения основных функциональных свойств фарша / P.M. Салаватулина, С.А. Алиев, В.И. Любченко // Мясная индустрия СССР. 1983. - №9. - с. 26 - 27.

112. Самсонов М.А. Системный подход и системный анализ в диетологии / М.А. Самсонов // Вопросы питания. 2004. - №1. - с. 25.

113. Сапин М.Р. Иммунная система человека / М.Р. Сапин, JI.E. Этинген. М.: Медицина, 1996. - 304 с.

114. Сапин М.Р. Цитоконструкция вил очковой железы половозрелых обезьян / М.Р. Сапин, Г.М. Харин, В.И. Вавилов // Архив АГЭ. 1977. -т. 72. -№ 1. - с.32-36.

115. Сафронов Б.Н. Полипептидный фактор тимуса тималин в эксперименте и клинике / Б.Н. Сафронов, В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон // Физиология человека. - 1984. - т. 10. - № 2. - с. 229 - 233.

116. Семенов Г.В. Сушка сырья: мясо, рыба, овощи, фрукты, молоко / Г.В. Семенов, Г.И. Касьянов. Ростов на Дону : «МарТ», 2002. - 112 с.

117. Современные лекарственные средства : Справочник. т. 1. — Донецк : МП «Отечество», 1996.-448 с.

118. Солнцева Г.А. Методические указания по применению научно обоснованных методов органолептической оценки качества мясных продуктов / Г.А. Солнцева, Г.П. Динариева. М.: ВНИИМП, 1975. - с. 8 - 12.

119. Труфакин В.А. Иммуноморфологические аспекты аутоиммунных процессов / В.А. Труфакин. Новосибирск : Наука, Сиб. Отд-ние, 1983. -178 с.

120. Тутельян В.А. Физиологческая роль коротких пептидов в питании / В.А. Тутельян, В.Х. Хавинсон, В.В. Малинин // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. - т. 135. - № 1. - с. 49.

121. Устинова А.В. Поликомпонентные мясные консервы для лечебно-профилактического питания населения / А.В. Устинова, Н.Е.

122. Белякина, Н.В. Тимошенко // Мясная индустрия. 2003. - №2. - с. 11 -14.

123. Файвишевский MJL Переработка крови убойных животных / M.JI. Файвишевский. М.: Агропромиздат, 1988. - 224 с.

124. Фрейдлин И.С. Загадки тимуса. Возраст и иммунитет. / И.С. Фрейдлин // Соросовский образовательный журнал. 1997. - №5. - с. 26 -29.

125. Фрейдлин И.С. Система мононуклеарных фагоцитов / И.С. Фрейдлин. М.: Медицина, 1984. - с. 272.

126. Фриденштейн А.Я. Клеточные основы иммунитета / А.Я. Фриденштейн, И.Л. Чертков. М.: Медицина, 1969. - 255 с.

127. Фримель Х.И. Основы иммунологии / Х.И. Фримель ; под ред. А.Н. Маца. М.: Мир, 1986. - 254 с.

128. Функциональная морфология лимфатических узлов и других органов иммунной системы и их роль в иммунных процессах / под ред. М.Р. Сапина. М., 1983. - 208 с.

129. Хавинсон В.Х. Пептиды тимуса и механизмы иммуномодуляции / В.Х. Хавинсон, В.В. Жуков // Успехи современной биологии. 1992. -т. 112.-№4.-с. 554-570.

130. Хаитов P.M. Основные представления об иммунотропных лекарственных средствах / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 1996. - № 6. - с. 4 - 9.

131. Хлебников В.И. Биологическая добавка «Кальмарин» улучшает потребительские свойства мясных полуфабрикатов / В.И. Хлебников,

132. С.Ю. Дмитриенко, Т.Г. Кузнецова // Мясная индустрия. 2004. - № 6. -с. 38-39.

133. Хобракова В.Б. Экспериментальная азатиоприновая иммуносупрессия и ее коррекция сухим экстрактом пятилистника кустарникового : дис— канд. биол. наук / В.Б. Хобраков. Улан-Удэ, 1999.-131 с.

134. Хэм А. Гистология / А. Хэм, Д. Кормак : пер. с англ. М.: Мир, 1983.-т. 5.-112 с.

135. Чиркин В.В. Вторичные иммунодефицита 7 В.В. Чиркин, В.Ф. Семенков, В.И. Карандашов. М.: Медицина, 1999. - 248 с.

136. Шабров А.В. Биохимические основы действия микрокомпонентов пищи / А.В. Шабров, В.А. Дадали, В.Г. Макаров. -М.: Аввалон, 2003. 184 с.

137. Экспрессный контроль безвредности и качества сельскохозяйственных продуктов / под ред. А.Д. Игнатьева, Н.А. Корнеева. М., 1982. - 45 с.

138. Якименко О.В. Проблемы эндокринологии / О.В. Якименко, Н.Б. Урганский. 1988. - № 4. - с. 68-72.

139. Ярилин А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин. М.: Мир, 1999.-с. 251.

140. Ярилин А.А. Тимус как орган эндокринной системы / А.А. Ярилин, И.М. Беляков // Иммунология. 1996. - № 3. - с. 4 - 10.

141. A syntetic pentapeptide with biological activity characteristic of the thymic hormone thymopoitin / G. Goldstein et al. // Science. 1979. - vol. 204. - № 4399. - p. 1309- 1310.

142. A thymic factor preventing wasting and influencing lymphopoiesis in mice / N. Trainin et al. // Isr. J. Med. Sci. 1966. - vol. 2. - p. 549 - 559.

143. Antibodies to CD3/Tcell receptor complex induce death by apoptosis in immatture T-cells in thimic cultures / C. A. Smith et al. //Nature. 1989. -337.-p. 181 - 184.

144. Bach J.F. The thymus as an endocrina gland / J.F. Bach // Rev. Europ. Clin. Biol. 1972. - №6. - Vol. 17. - p. 545 - 548.

145. Bach J.F. Thymus a zinc-dependent hormones / J.F. Bach, M. Dardenne // Med. Oncol. Tumor Pharmacother. - 1989. - 1. - p. 25 - 29.

146. Basch R. S. Induction of T-cell differentiation in vitro by thymine, a purified polypeptide hormone of the thymus / R. S. Basch, G. Goldstein // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1974. - vol. 71. - p. 1474-1478.

147. Cell / Champion S. et al. 1986. - vol. 44. - p. 781 - 790.

148. Clark S.L. Anatomy // S.L. Clark, J. Amer. 1963. - v. 112. - № 1, p. 1.

149. Clin. Res. /M.G. Ervin et al. 1988. - vol. 36. - p. 217A.

150. Cordero O.J. Novel approaches to immunotherapy using thymic peptides / O.J. Cordero, H.R. Maurer, M. Noguera // TIBS. 1997. - № 1. -p. 10-13.

151. Deschaux P. Le thymus organe endocrinen / P. Deschaux // T. physiol. 1980. - vol. 76. - № 4. - p. 357 - 371.

152. Ding J.E. Multiple mechanisms of lymphocyte mediated killing / J.E. Ding, L. Chan-Ching // Immunol. Today. 1988. - vol. 9. - № 5. - p. 140 -145.

153. Diological activies of thymic hormone / A.L. Goldstein et al. // Rotterdam Scient. Publ. 1975. - p. 173 - 197.

154. Exptl Med. / H. Wekerle, U.P. Keteisen, M.J. Ernst. 1980. - v. 151. -№ 4. - p. 926.

155. Falchetti R. Farmacological and biological properties of a calf thymus extract (TP-1) / R. Falchetti, G. Bergesi, A. Eshkol // Drugs. Exp. Clin. Res. 1977.-vol.3.-p. 39-47.

156. George A.J.T., Ritter М.А. Immunol. Today / A.J.T. George, M.A. Ritter.- 1996.-v. 17.-p. 267.

157. Goldstein A.L. Isolation of bovine thymin: a polypeptide hormone of the thymus / A.L. Goldstein //Nature. 1974. - vol. 247. - p. 1 - 14.

158. Goldstein A.L. Preparation assay and parlm purification of a thymic lymphocytopoietic factor (thymasin) / A.L. Goldstein, E.D. Slater, A. White // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1966. - vol. 56 - № 3; - p. 1010 - 1017.

159. Goldstein A.L. Thymosin: Basis properties and clinical potential in the treatment of patients with immunodeficiency disease and cancer / A.L. Goldstein // Appl. Cane. Chemother. Antibiot. Chemother. 1978. - № 24. -p. 47 - 59.

160. Hammar J.A. Die normalmorphologische Thymus forschung im letzten Vierteljahrhundert / Hammar J.A. Leipzig : Barth, 1963. - 453 s.

161. Henry K. A colour atlas of thymus and lymph node histopathology / K. Henry, G. Farrer-Brown. Amsterdam, 1981. - 328 p.

162. Hormonelike tetrapeptide with antimicrobial and antitumer activities / K. Nishioka et al. // Life Sg. 1988. - vol. 28. - № 10. - p. 1081 - 1090.

163. Imhof B.A. Proc. nat. Acad. Sci. USA / B.A. Imhof, M.A. Deugner, J.M. Girault. 1988. - vol. 85. - p. 7699 - 7703.

164. Immunity / B.D. Jamieson et al. 1999. - v. 10. - p. 569.

165. J. Nat cancer Inst. / R.H. Levey et al. 1973. - v. 31. - p. 199 - 217.

166. Karelin A. A. A novel system of peptidergic regulation / A. A. Karelin, E.Yu. Blishchenco, V.T. Ivanov // FEBS Lett. 1998. - vol. 428. - № 1 - 2. -p. 7 -12.

167. Kendall M.D. The thymus gland / M.D. Kendall. London : Acad. Press.-1981.-218 p.i

168. Komuro K. Induction of T-lymphocytes from precursor cells in vitro by a product of the thymus / K. Komuro, E.A. Boyse // Exp. Med. 1973. -vol. 138.-№2.-p. 479-482.

169. Lancet/AiutiF. et al. 1983. - № 8324. ~p. 551 - 555.

170. Leucocyte Biol. / S. Sato et al. 1988. - vol. 44. - p. 149 - 157.

171. Lypopolysaccharide and interleukin-1 depress food-motivated behavior in mice by a vagal-mediated mechanism / J.L. Bret Dibat et al. // Brain Behav. Immun. 1995. - vol. 9 (3). - p. 242 - 246.

172. Miller H.C. Production of functional T-cell after treatment of bone marrow with thymic factor / H.C. Miller, S.K. Schmiege, A. Rule // Immunology. 1973. - vol. 111. - № 4. - p. 1005 - 1009.

173. Miller J.F.A.P. T-cell regulation of immune responsiveness / J.F.A.P. Miller// Ann. N.Y. Acad. Sci. 1975. - vol. 249. - p. 9 - 26.

174. Modulation of endogenous prostaglandins by thymosin aj in lymphocytes / E. Rinaldi Garaci et al. // Cell. Immunol. 1983. - vol. 80. -№ l.-p. 57-65.

175. Moller G. Do suppresor T cell exist / G. Moller // Scand. J. Immunol. 1988. - vol. 27. - № 3. - p. 247 - 250.

176. Nabarra В. Ultrastructural study of thymic microen vironment involution in aging mice / B. Nabarra, I. Andrianarison // Exp. Gerontol. -1996. - vol. 31, № 4. - p. 489 - 506.

177. Nature / D.C. Douek et al. 1998. - v. 396. - p. 690.

178. Proc. Nat. Acad. Sci. USA / Goldstein A.L. et al. 1977. - vol. 74. -p. 725 - 729.

179. Progr. Brain. Res. / Jard S. et al. 1987. - vol. 72. - p. 173 - 178.

180. Protein measurement with Folin phenol reagent / O. Lowry et. al. // J. Biol.Chem. 1951. - v. 193.-№ l.-p. 265-275.

181. Reolants G.E. The regulation of the lymphocytes precuros pool by a numeral factor released by the thymus / G.E. Reolants, K.S. Withey // Cell. Immunol. 1977. - vol. 34. - № 2. - p. 420 - 423.

182. Robinson J.H. Immunology Today / J.H. Robinson, R.K. Jordan. -1983.-v. 4.- №2. -p. 41.

183. Scotnicki A.B. Biologiczna aktywnosc I wlasciwosci fizykochemiczne wyciagu grasiczego TFX / A.B. Scotnicki // Polski tygodnik lekarski. 1978. - vol. 33. - p. 1119 - 1122.

184. Sreward W.P. Efficacy of thymostimulin / W.P. Sreward // Lancet. -1994.-№8890.-p. 184.

185. Surico N. Effect of immunostimulating therapy on the immunocompetent system / N. Surico, K. Tavassoli // Panminerva Med. -1993.-№4.-p. 172- 180.

186. Thurman G.B. The role of thymosin in lymphocyte maturation / G.B. Thurman, A.L. Goldstein // Bull 1st. Steroter. Milanese. 1975. - vol. 54. -№ 3. - p. 203-210.

187. Thymosin an innovative approach to the treatment of chronic hepatitis В. / Mutchnik M.G. et al.// Combination Therapies. - 1992. - p. 143 - 157.

188. Thymulin and its role in immunomodulation / B. Safien-Garabedian et al. // J. Autoimmun. 1992. - № 5. - p. 547 - 555.

189. Wara D.W. Activation of T-cell rosettes in immunodeficient patients by thymosin / D.W. Wara, A.J. Amman // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1975. -vol. 249.-p. 308-315.

190. Watkins L.R. Cytokine-to-brain communication. A review and analysis of alternative mechanisms / L.R. Watkins, S.F. Maier, L.E. Goehler //Life Sci. 1995.-57.-p. 1011 - 1026.

191. Whisler R.L. Heterogenity of murine regulatory T-cells 1. Subpopulations of amplifer and supressor T-cells / R.L. Whisler, J.D. Stobo //J. Med. 1976. - vol. 144. - № 2. - p. 398 - 423.

192. Yerne W.K. Plaque formation in agar by single antibody produting cell / W.K. Yerne, A.A. Nordin // Sience. 1963. - № 140. - p. 3565 - 3567.