Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

МАТЕРИАЛЫ ПО ХИМИЧЕСКОЙ ХАРАКТЕРИСТИКЕ ТИМУСА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И ВЛИЯНИЕ ЕГО ПРЕПАРАТА НА. БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ ТЕЛЯТ

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "МАТЕРИАЛЫ ПО ХИМИЧЕСКОЙ ХАРАКТЕРИСТИКЕ ТИМУСА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И ВЛИЯНИЕ ЕГО ПРЕПАРАТА НА. БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ ТЕЛЯТ"

Я- 2.8Я2

ГОСАГРОПРОМ СССР ЛЬВОВСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ЗООВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи КЛИМЕНКО ОЛЕГ НИКОЛАЕВИЧ

УДК 636.2/.28: 612.1.015 : 619 : 615.36

МАТЕРИАЛЫ ПО ХИМИЧЕСКОЙ ХАРАКТЕРИСТИКЕ ТИМУСА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И ВЛИЯНИЕ ЕГО ПРЕПАРАТА - НА . БИОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ ТЕЛЯТ

, - 03.00.04 — «БИОХИМИЯ»

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Львов—№7

•с /: (/. л, / - /О¿иу/ < с / "

Работа выполнена на кафедре органической и биологической химии Белоцерковского сельскохозяйственного института нм, П. Л. Погребняка.

Научный руководитель: заслуженны б работник высшей школы „ УССР, доктор биологических наук, профессор А. И. Кононснин.

Научный консультант: кандидат ветеринарных наук, доцент А. М. Никитенко.

Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки УССР, доктор биологических наук, профессор П. 3. Лагодюк; доктор медицинских наук В. А. Малыжев.

Ведущая организация: Научно-исследовательский институт земледелия и животноводства западных районов УССР.

Защита диссертации состоится 16 > ГЬЫрОсилА г.

в /3 часов на заседании специализированного совета Д. 120,17.01 при Львовском ордена Трудового Красного Знамени зооветеринарном институте.

Адрес института: 290010 г, Львов, ул. Пекарская, 50. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Львовско- ■ г го ордена Трудового Красного Знамени зооветеринарного института.-

Автореферат разослан * 16 > ьАШ^Оиа 198/1-. Ученый секретарь специализированного

совета, кандидат биологических наук, доцент П. И, Головач

БФ 10710. Подписано в печать II. П. 1987 г. Формат 60Х84/|4. Бумага писчая белая. Фиэ. печ. л. 1,0, Тираж:

100 экз. Зак, № 844, Бесплатно. Гортипография, 256400, Б. Церковь, бульвар Победы, 22а.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы« Одной из первостепенных задач, вытекающих из решении XXVII съезда КПСС в области сельского хозяйства, яв*-ляется обеспечение страны продуктами питания и сельскохозяйственным сырьем, объединение всех усилий агропромышленного комплекса для получения высоких конечных результатов в соответствии с Продовольственной программой СССР.

Вместе с созданием надежной кормовой базы и улучшением породных качеств крупного рогатого скота поставленная задача должна решаться путем повышения продуктивности животных посредством применения биологически активных гормональных и тканевых препаратов. В ряде исследований и разработок, направленных на повышение п р оду кт11в и ости животных, указывается, что применение тканевых и гормональных.препаратов для стимуляции роста и развития сельскохозяйственных животных позволяет сократить сроки откорма, получить дополнительную животноводческую продукцию, повысить сохранность поголовья (И. А. Кала шин к, 1960, 1974; 3. И. Дорогая, 1966; В. Н. Шамберев, 1972; Л. Н. Воробьев, 1974; А. М. Журбенко, 1983).

В условиях промышленной технологии повышенное количество стр ее с-фа кторов вызывает у животных развитие иммунодефицита п снижение продуктивных качеств (Ю. Н. Федоров, 1981; И. И, Тарасов, 1983). Появилась потребность в профилактических целях активно воздействовать на иммунную систему организма для активизации гуморальных « клеточных факторов иммунитета (И. М. Шуль-ман, 1976; А. М. Никитеико, Л. А. Заика, 1984; А. М. Смирнова, В. С. Кондратьев, И. В. Никитина и др., 1984).

Непосредственным воздействием на иммунный статус организма является применение гормональных и тканевых препаратов, получаемых из тканей тимуса (D. Metcalf, 1956; St.—М. Milctt, I. Potop, 1970; Э. В. Поллинг с соавт., 1971; A. L. Goldstein et ah, 1972; G. Goldstein, С. Lan, 1980; В. А. Малыжев, 1982).

Несмотря на возрастающее количество работ по выделению из тимуса веществ гормональной природы и воздействию их на организм, до настоящего времени недостаточно изучены вопросы получения препаратов с максимальной гормональной активностью и применения этих препаратов |Ц В^З^уУЭ^1)р:,тг*жт1ВОтноводстве, влияния их на рост и развитие жнпо^ных^у^^.^-^'^,-.. j

Цель и задачи: исследования

Целью данной работы является изучение влияния тканевого препарата тимуса на важнейшие биохимические показатели крови н продуктивные качества крупного рогатого скота и определение возраста крупного рогатого скота симментальской и черно-пестрой пород, в котором тимус животных наиболее пригоден для изготовления тканевого препарата.

Согласно цели исследования были поставлены следующие задачи:

1. Определить оптимальную структуру, биохимические и гистохимические показатели тимуса крупного рогатого скота, используемого для изготовления тканевого препарата.

2- Изучить влияние тканевого препарата тимуса на отдельные биохимические показатели крови молодняка крупного рогатого скота.

3. Определить оптимальные дозы, кратность и способы введения тканевого препарата тимуса, а также его влияние на продуктивные показатели молодняка крупного рогатого скота.

Научная новизна. Основные положения, характеризующие научную новизну работы, заключаются в том, что в работе впервые подробно изучены особенности строения, биохимический состав и гистохимическая характеристика тнмуса крупного рогатого скота различных возрастных групп в постнатальном онтогенезе. Оптимизировано изготовление тканевого препарата из тимуса и исследованы некоторые особенности обменных процессов в организме молодняка крупного рогатого скота под влиянием тканевого препарата тимуса.

Практическая,ценность-и теоретическая значимость-работы;

Практическая ценность работы заключается в определении степени пригодности тимуса крупного рогатого скота различных возрастных групп для изготовления тканевого препарата, установлении оптимальных доз, кратностн и способа введения, препарата телятам для повышения неспецифической резистентности их организма и получения более высокого прироста живой массы при неизменном уровне кормления и содержания животных.

Теоретическая значимость работы состоит в определении гисто-биохимических-показателей, характерных для тнмуса крупного рогатого скота в различные периоды постнатального онтогенеза, выявлении характера влияния инъекций тканевого препарата тнмуса на отдельные показатели белкового, углеводного и липндного обменов в крови животных и установлении возможности применения препарата тнмуса с целью стимуляции роста и развития молодняка крупного рогатого скота.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Гистохимическая и биохимическая характеристика тнмуса крупного рогатого скота различных возрастных групп.

2. Воздействие тканевого препарата тимуса на показатели бел-

нового, углеводного и лнпндного обменов в крови молодняка крупного рогатого скота.

3. Влияние тканевого препарата тимуса на показатели продуктивности крупного рогатого скота.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы были доложены и обсуждены на: научных конференциях профессорско-преподавательского состава Белоцерковского СХИ им. П. Л. Погребняка (Белая Церковь, 1984, 1985, 1986 гг.); Всесоюзном симпозиуме «Стресс, адаптация и функциональные нарушения» (Кишинев, 1984); Всесоюзной научно-технической конференцнн молодых ученых «Актуальные вопросы профилактики и лечения болезней сельскохозяйственных животных» (Москва, 1985); научно-технической конференции «Пути совершенствования научно-технического прогресса в сельскохозяйственном производстве» (Одесса, 1985); U съезде анатомов, гистологов, эмбриологов н топографоаиатомов Украинской ССР (Полтава, 1985); республиканской научно-практической конференции «Ветеринарные проблемы промышленного животноводства» (Белая Церковь, 19S5); Всесоюзном симпозиуме «Биохимия сельскохозяйственных животных и Продовольственная программа» (Ташкент, 1986); X Всесоюзном съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Винница, 1986).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ.

Объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов, предложений производству, списка использованной литературы (249 источников, в т. ч, 132 зарубежных). Работа изложена на 118 страницах машинописи, иллюстрирована 20 таблицами, 25 рисунками и приложениями (2 таблицы).

МАТЕРИАЛЫ ШМЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИИ

Опыты по изучению влияния тканевого препарата тимуса на биологические и продуктивные качества молодняка крупного рогатого скота проводились в течение 1983—1986 годов в опытном хозяйстве «Терезнно» Украинского научно-исследовательского института разведения и искусственного осеменения крупного рогатого скота, учебно-опытном хозяйстве Белоцерковского сельскохозяйственного института им. П. Л. Погребняка, Лучанском межколхозном предприятии по откорму молодняка крупного рогатого скота Таращанского района Киевской области н ряде хозяйств Киевской и Черкасской областей. Всего проведено 14 опытов, в которых тканевым препаратом тимуса было обработано 156 голов молодняка крупного рогатого скота в возрасте от 7 дней до 17 месяцев (табл. 1).

. Таблица 1

Половозрастной - н породный состав - молодняка крупного рогатого > скота. опытных и контрольных групп*

Группы, голов ' Контроль

Опыт

рычки и.телки симментальской породы от 7 до 60 дней 89- 88

Двенадцатимесячные бычки симментальской породы' 35- 35

Семнадцати месячные бычки н телки симментальской породы 15 20

Од помесячные бычки и телки' черно-пестрон породы 13 13

Всего: 152 156

_ Тканевой препарат изготавливался из тимуса крупного рогатого скота по методу В..П. Филатова (1955). В 1 мл гомогенизированной тканн содержалось 600—750 тыс. .клеток и 80—120 единнц действия тимозипа (А. М. Никнтенко с соавт., 1984).

Для изучения влияння-тканевого препарата на некоторые показатели крови и продуктивные качества одномесячным животным вводился гомогенат тимуса подкожно, в область шеи, двух- или трехкратно, с интервалом в 10 или 14 дней, в дозах 0,015; 0,025; 0,040 и 0,050 мл/кг живой массы животного.

Влияние препарата тимуса на продуктивность животных оценивалось по показателям сохранности поголовья опытной и контрольной групп через 30, 60, 90 и 120 суток после начала опыта и по данным взвешивания.

Материалом для биохимических исследований послужила кровь животных опытной и контрольной групп. Кровь бралась у телят до утреннего кормления из яремной вены. Взятие крови проводилось до введения препарата, а также через 3, 10, 15 30 и 60 суток после первого введения.

Определение биохимических показателей в крови проводилось: общего белка — методом Лоури (1951); гемоглобина — гемоглобин-цианндовым методом; гамма-глобулинов — ци и к-сульфатной пробой Разделение белков сыворотки крови на отдельные фракции производилось при помощи диск-электрофореза в полнакрпламидном геле. Определение общих лишгдов в сыворотке крови проводилось методом Цельнера (1962); общего холестерина — методом Илька (1962); общих фосфолипидов — по содержанию общего фосфора (В. П. Шишков, 1978); глюкозы — орто-толуидиновым методом.

Материалом для определения наибольшей пригодности тнмуса крупного рогатого скота различных возрастных групп для изготовления тканевого препарата послужил тимус крупного рогатого скота симментальской и черно-пестрой пород возрастом 0,5—1 год, 1,5—2 года и 3—5 лет в количестве 403 голов.

Из части материала, предназначенного для.гистохимических исследований, приготавливались свежезамороженные срезы на микро-томе-криостате МК-25. Другая часть материала помещалась в фиксирующие жидкости Шабадаша, Карнуа или Бэкера для последующей заливки в парафин. Парафиновые срезы изготавливались на санном микротоме МС-2. Толщина срезов для гистохимических препаратов не превышала J0 мкм.

Обзорные гистологические препараты окрашивались гематокси-лии-эозином. На препаратах изучались локализация и содержание «суммарных» нуклеиновых кислот {Эйнарсои, 1951); ДНК н РНК (Браше, 1942; Пирс, 1962); «суммарных» белков (Боихег, 1955; Шуст, 1967); общих липидов (Мак-Манус, 1946; Кей и Уайхед, 1941); кислых н нейтральных липидов (Кайн,1947); гликогена (Шабадаш, 1949); мукополисахаридов {Пирс, 1962); кислой фосфатазы — КФ 3.1.3.2 (Гомори, 1950); щелочной фосфатазы—КФ 3.1.3.1 (Гомори-Такаматчу, 1946); липазы — КФ 3.1.1.3 (Гомори, 1952); неспецифической эстеразы — КФ—3.1.1.1., 3.1.1.6, 3.1.1.7 (Пирс, 1962); ацетил-холииэстеразы — КФ 3J .1.7 (Гомори, 1952); сукцинатдегид-рогеназы—КФ 1.3.99.1 (Нахлас, Валькер и Зелигмаи, 1957); аденозннтрифосфатазы— КФ 3.6.1.3 (Паднкула и Герман, 1955).

Гистохимические препараты и контроли к ним приготавливались по методикам, изложенным в гистохимических руководствах (Э. Пирс, 1962; А. И, Кононский, 1976; X. Лупна, 1980). Гистохимическое исследование локализации ДНК. и РНК, связанное с применением лю-миписцеитной микроскопии, выполнялось на люминисцентном микроскопе Люмам И-3. Определение размеров гистоструктур тимуса проводилось на микроскопе МБС-9 при помощи окуляр-микрометра. Микрофотографирование гистохимических препаратов производилось с помощью микроскопа МБР-1 с фотонасадкой МНФ-12.

Определение содержания сухого вещества в тканях тимуса проводили высушиванием проб до абсолютно сухой массы; нуклеиновых кислот — по Н. М. Климову и Г. Ф. Коромыслову (1970); общих липидов — гравиметрически; общего белка — по Лоури; тнмозииа — по I. A. Hooper (1975); лпмфоцитозстимулирующего вещества — по И. А; Безвершенко с соавт. (1974).

Результаты экспериментальных исследований обрабатывались согласно биометрических руководств (Г. Г. Автанднлов, 1981, 1984). Достоверность результатов определяли ло таблицам Стьюдента для малых выборок.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Био-гистохимическая характеристика: тимуса крупного рогатого скота

В результате проведенных исследований установлено, что в тимусе крупного рогатого скота, по мере увеличения возраста животного, происходит изменение структуры органа, его гистохимических характеристик и химического состава.

Структурной единицей тимуса как дольчатого органа является долька. Соотношение медуллярной и кортикальной зон долек изменяется с возрастом в сторону редукции кортикальной зоны (табл. 2).

Таблица 2

Отношение размеров медуллярной к кортикальной зон в дольках тимуса крупного рогатого.скота симментальской; породы (М; п=«30)

Возраст животных, лет

0,5-1

1,5-2 3—5

Отношение 0,73 1,50 1,92

В тимусе 3—5-летних животных встречаются доли с полностью редуцированной кортикальной зоной. Показатель отношения медуллярной и кортикальной зон в тимусе молодых животных варьирует значительно меньше,- чем у 3—5-летних. Относительные размеры площадей кортикальной и медуллярной зон тимуса изменяются не только с увеличением возраста животных.: В зависимости от величины самих долей находится и отношение площадей, входящих в них 'зон. В больших дольках тимуса одного и того же животного относительная площадь медуллярной зоны больше, нежели в дольках меньшего размера. Поперечное сеченне долей тимуса крупного рогатого скота по достижению животными половой зрелости колеблется в пределах 1,5—2,0 мм. В дольках первого порядка, отделенных друг от друга соединительнотканными септами, можно выделить часть долен (34%) со сросшейся медуллярной зоной.

Уменьшение площади кортикальной зоны н,.следовательно, количества кортикальных тимоцнтов в результате возрастных изменении может указывать на частичное сокращение поступления в тимус пред* шественников Т-клеток и сведения роли тимуса в организме к поддержанию пролиферации мммупокомпонентных клеток в тимус-зависимых зонах лимфоидних органов (Л. В. Ковальчук,. 1969).

Одним из основных гормональных факторов, оказывающих влияние на созревание тнмоцитов, является тнмозин (Т. К- Валуева, В. Ф. Чеботарев, 1982). Структурами, ответственными за выработку тимозина, являются звездчатые эпителиальные клетки стромы тимуса кортикальной зоны (М. Но1иЬ е1 а!., 1979) последовательно, редукция кортикального слоя долек существенно уменьшит инкрецию гормональных веществ в органе.

В проведенных исследованиях наибольшее количество тимозина в тканях тимуса животных обнаружено в 0,5—1-годнчном возрасте, а наибольшее количество ЛСВ выделено в 1,5—2-летнем: (табл. 3). У животных этих возрастных групп установлено наличие относительно наибольшей кортикальной зоны и повышенной активности СДГ в звездчатых эпителиальных клетках.

Таблица 3

Химический состав тимуса крупного рогатого скота симментальской породы (М±м)-

Еозраст животных, лет

Показатели химического состава

0,5—1

1,5-2

Сухое вещество

7)

Фосфор ДНК (в мг %; п-7)

17,86 ±0,78 29,69+2,13 72,12±7,87

78.52 ± 7,70 90,59 13,67 J 6,00 ± 0,76

171,98+10,62 222,38 i 10,15 117,32+47,18

48,16±3,24. 47,50 ¿3,08 44,00±3,10

31,99+3,53 36,93 ± 6,45 88,16 ± 4,77

502,90 ±4,73 482,40+3,53 332,00+5,47

Общий белок (в г %; п=6) Общие липиды

(в г %; п-7)

Тимозин 3 (в мг %; п-10) Л н мфоцитозстим улиру ю-шее вещество

(в мг %; п= 10)

59,80+1,96

70,10^2,39

50,40+2.32

Согласно данным гистохимических исследований, в тимоцнтах субкапсулярной зоны обнаружена повышенная активность кислой-фосфатазы. По-видимому, она может быть связана с поступлением в эту зону значительного количества прети мичесгшх предшественников Т-клеток (В. А, Малыжев, 1982).

В цитоплазме отдельных тнмоцитов и группах клеток премедул-лярпой зоны установлено наличие значительной активности неспецн-фической эстеразы. Согласно данным I. Izard, С. Bimes (1963), С. Bi-mcs (1965), в премедуллярной зоне тимуса обнаруживаются лимфоциты, предрасположенные к образованию телец Фоа-Курлова, способных трансформироваться в лизосомы.

При проведении гистометрии структур в дольках тимуса обнаружено, что в процессе возрастной инволюции увеличивается количество (от 2,77 шт. до 3,67 шт.) и размеры (с 72,53 мкм до 92,80 мкм) телец Гассаля (табл. 4). Полученные данные согласуются с результатами исследований Б, У. Исаева (1967), М. Е. Пилипенко (1975), И. С. Решетникова (197G) и подтверждают положение о том, что основная функция телец Гассаля сводится к деструкции и лизису эпителиальных клеток и лимфоцитов в тимусе. Об этом же свидетельствует наличие здесь значительной активности кислой фосфатазы, осуществляющей гидролиз фосфомоноэфнров,. и АТФ-азы, участвующей в реакциях окислительного фосфорилировання.

Анализ результатов биохимических исследований указывает на то, что в постнатальном онтогенезе наиболее существенные изменения в тимусе выявлены в содержании сухого вещества и общих лн-пндов (табл. 3). Показатель содержания сухого вещества в тимусе

Таблица 4

Количествен-размеры телец - Гассадя (М±м; п—30)

Пока&ателц " Возраст животных, лет

0,5-1 1,5—2 3-5

Количество в

дольке (шт.) 2,77±0,19 . - 3,16±0,29 3,67 ±0,38

Поперечное ' - .

сечение <мкм) 72,53±6.99 80,00±5,49 92,80±7,09

у животных 0,5—1-годичного возраста 017,86%) несколько ограни* чивает применение тимуса животных этой возрастной группы для изготовления тканевого препарата.

Проведен ни мн исследованиями установлено, что замещение железистой ткани тимуса на.липидную в большинстве случаев начинается с возникновения отдельных липидных клеток в областях скопления соединительной ткани в междольковом пространстве. Прилегающие к этому пространству ткани образуют зону с повышенным содержанием липидов и низкой активностью сукин натдегидрогеназы. Замещение железистой ткани на липндную происходит за счет накопления нейтральных липидов, что не согласуется с данными И, С. Решетникова (1979), указывающего на тимус старых животных как на депо фосфолипидов. Наличие нейтральных липидов в.тимусе и их: фракционный состав освещены: исследованиями !. Reisch und and. (1972), установивших, что основную массу нейтральных липидов тимуса составляют тригдицериды, холестерин н частично метиловые эфиры холестерина,, моно- и днглицериды. Из жирных кислот в составе нейтральных липидов преобладают С!2—Cis-кислоты, тогда как длинноцепочные кислоты {См—С22) встречаются здесь значительно реже. Из свободных жирных кислот в органе преобладают олеиновая, стеариновая, пальмитиновая и линолевая.

В связи с перерождением тканей тпмуса у животных 3—5-летнего возраста, когда основная масса тканей представлена липидами (88,16 г%), тимус этой группы животных является недостаточно пригодным для изготовления тканевого препарата.

Несмотря на появление инволютнвных изменений, существенных различий в содержании общего белка в тимусе в исследуемые периоды обнаружено не было. Этот показатель уменьшился с 48,13 г % (в 0.5— I-годичном возрасте) до 44,00 г % (в 3—5-летнем). Согласно данным A. Abra han et al. (1961), белковый и аминокислотный состав тимуса существенно различается у животных различных возрастов. В цитоплазме большинства эпителиальных клеток кортикальной зоны 1,5—2-летннх животных наблюдается скопление плотных

гранул белкового характера. В этом же периоде развития органа в $

его тканях содержится значительное количество тнмозина 3, продуцентом которого является эпителиальный ■ ретикулум тимуса.

Некоторое количество белковых веществ, локализующихся в тельце Гассаля, имеет кислый характер, вследствие протеолнтпческих процессов и происходящей; там деструкции клеточных элементов (В. С. Григорьев, 1972). Значительную часть белка в органе составляют капсулярные белки и белковые вещества сосудистых стенок.

По мере увеличения возраста животных, начиная с периода.поло-возрелостн,. в тимусе происходит уменьшение содержания нуклеиновых кислот: ДНК — с 171,98 мг % Р (в 0,5— Ьгодичном возрасте) до 117,32 мг % Р (в 3—5-летнем) и РНК соответственно с 78,52 мг % Р до 16,00 мг % Р. Полученные данные согласуются с результатами исследования, указывающего на уменьшение содержания нуклеиновых- кислот в тканях тимуса при старении животных. (Е. Frederico, В, I, Bigwood, 1961). В процессе старения и инволюции тимуса отмечены значительные изменения возраст нога характера, выражающиеся в том, что в активном тимусе молодых животных. ДНЮгистоновый комплекс связывает лишь незначительную часть ДНК; в отличии от тимуса старых животных.-в котором большая часть ДНК комплексована с гнстонамн. Изменения в развитии тимуса и содержании нуклеиновых кислот в тканях после полового созревания, по-видимому, могут быть связаны с интенсивным синтезом в данный период стероидных гормонов (Е. А. Рога, A. Abraham, V. Toma,.I963)t

Наибольшая концентрация: нукленновых кислот выявляется в тн-моцитах кортикальной зоны и: мышечной оболочке интраорганных. кровеносных сосудов. Несколько меньшее содержание РНК и ДНК обнаруживается в медуллярной зоне и междольковой соединительной ткани. РНК в дольках тимуса сконцентрирована в медуллярной н субкапсул яр ной зонах, а также в эндотелии кровеносных сосудов и соедииительнотканных септах, разделяющих железистую ткань на дольки. Повышенным содержанием: РНК выделяются пиронинофнль-ные структуры телец Гассаля и цитоплазма эпителиальных клеток. Глыбкн хроматина выявляются в основном в ядрах эпителиальных клеток и клеток лимфондного ряда, преимущественно сконцентрированных в кортикальной зоне. В тельцах Гассаля зерна и конгломераты выявляются в ядрах дегенерирующих клеток (центральная часть телец).

Несмотря на большую нестабильность в содержании углеводов в тканях тимуса, гликоген наиболее интенсивно выявляется в тнмо-цитах субкапсулярной зоны, эндотелии кровеносных сосудов it междольковой соединительной ткани. Несколько меньшая концентрация углеводов обнаруживается в цитоплазме кортикальных тнмоцитов. В медуллярной зоне ШИК-положительными свойствами выделяются тельца Гассаля н гигантские гипертрофированные клетки (Т. Hoshf-по; 1963). От центра телец Гассаля расходятся аморфные тяжи. В них содержится несколько меньше ШИК-положительных веществ.

чем в центре образования. Между тяжами телец Гассаля встречаются лимфоциты, реже — дегенерирующие эпителиальные клетки. • Наибольшая активность кислой фосфатазы обнаруживается в тн-моцитах субкапсулярной зоны» С увеличением возраста животных кислая фосфатаза выявляется в дольках диффузно, но с преобладанием в субкапсулярной зоне.

Щелочная фосфатаза равномерно распределена в дольках тимуса и лишь несколько повышенным: ее содержанием выделяются кортикальные тнмоцнты и клетки стенок кровеносных сосудов. В соединительной ткани междолькового пространства значительных количеств щелочной фосфатазы не обнаруживается,

1 * В эндотелии кровеносных сосудов тимуса' отмечается повышенная активность АХЭ-азы и АТФ-азы. Активность ферментов уменьшается по направлению к внешним стенкам сосудов и становится незначительной в адвентиции.

Суммируя полученные данные, исходя из биохимического состава, .тканей тимуса, состояния его микроструктур н секторного аппарата, следует указать, что наиболее пригодным для изготовления тканевого препарата является тимус крупного рогатого скота в возрасте 1,5—2-х лет.

' 2. Биохимические изменения в крови при.введении

препарата тимуса

Двукратное введение тканевого препарата, тимуса одномесячному молодняку крупного рогатого скота симментальской породы в дозе 0,040 мл /кг живой массы не вызвало существенных изменений в содержании общего белка в крови опытных животных (табл. 5), а различия этого показателя в контроле и опыте были недостоверными <Р>0,05).

Таблица 5

Содержание общего белка в сыворотке крови телят при двукратном введении препарата тимуса (М±м;, в. г/л; п—7)

Время, сутки

Контроль

Опыт

До введения 51,80±1,10 52,00±1,30 >0,05

3 51,60 ±1,10 53,10± 1,30 >0,05

10 52,20 ±0,80 51,20 ± 1,00 >0,05

30 52,30 ± 1,20 52,00 ± 1,00 >0,05

60 ' 55,70 ±0,40 56,50 ± 1,00 >0,05

Изучение влияния введения гомогената тимуса на состояние отдельных фракций общего белка показало, что в период опыта произошло увеличение содержания гамма-глобулинов, - трансферринов и альфа-глобулинов в крови опытных животных (табл. б).

. . Таблица 6

Содержание белков в сыворотке крови телят, при двукратном введении, препарата

тимуса (М±м; в г/л; п=7)

Время, сутки

А!Ь

Tf

B-LP

Контроль

До вве-

дения 36,4+0,7 3,7+0,4 3,0+0.3

3 36,0+1,0 3.2+0,2 3,1+0,2

10 35,4+1,3 3,4+0,4 3,2+0,4

30 37,0+1,0 3,2+0,1 3,3+0,3

60 39,1+0,8 2,5+0,3 3,4+0,4

Опыт

До вве-

дения 37,0+0.8 3,2+0,2 3,1+0,3

3 31,9+0,7* 4,2+0,3* 5,1+0,7*

10 33,6+0,4 3,4+0,2 3,9+0,3

30 34,6+0,5 3,6+0,2 3,8+0,3

60 39,8+0,9 4,0+0,4* 3,6+0,3

Примечание: * — статистически значимые раз.

1,6+0,2 1.8+0,2 1,5+0,1 1,8+0,1 1,9+0,1

1,5+0.2 1.8+0,2 1.4+0,1 1.5+0,1 1,6+0,1

7,1+0,8 7.6+0,3 7.4+0,4 7.8+0.3 8,3+0,5

7,3+0,4

9.7+0,6*

8,2+0,5

8,2+0,3

7,8+0,7

теид; у — гамма-глобулины.

Аналогичные данные, свидетельствующие об активизации гуморальных факторов защиты организма, получены при введении животным экстрактов тимуса. (X. Г. Газатулин с соавт., 1977). Повышение уровня гамма-глобулинов в крови животных вследствие стимуляции тканевым препаратом возможно обусловлено проявлением некоторых их аптигензависимых функций: активацией системы комплемента, нейтрализацией бактериальных токсинов, усилением фагоцитоза, высвобождением биогенных аминов из тучных клеток, повышением клеточкой цитотоксичиости (А. Я. Кульберг, 1985).

С целью: более детального изучения активации системы гуморального иммунитета было определено изменение содержания гамма-глобулинов в крови опытных животных при однократном введении препарата тимуса одномесячным телятам симментальской породы (табл. 7).

Таблица 7

Содержание - гамма-глобулинов в сыворотке крови телят, при однократном введении тканевого препарата тимуса {М±м; в Shank — Hoagland единицах; п=6)

Время.суткк

Контроль

Опыт

Ло введения 3,67±0,03 3,72+0,04 >0,05

I 3,70 ±0,06 4,08 ±0,14 <0,05

3 3,86±0,13 4,30 ±0,10 <0,05

7 ' 3,75 ±0,09 4,24 ±0,03 <0,001

И 3,79 ±0,06 4,37±0,09 <0,001

Приведенные данные свидетельствуют о том, что увеличение содержания гамма-глобулиновой фракции в сыворотке крови опытных животных отмечено через сутки после введения препарата тимуса.

Значительных различий в содержании глюкозы в начальной стадии опыта в крови опытных и контрольных животных обнаружено не было. Однако, на 60 сутки после начала опита содержанке глюкозы в крови животных опытной группы было несколько меньшим, чем в контроле, и составило 3,10 ммоль/л. Для животных контрольной группы этот показатель был равен 3,81 ммоль/л (табл. 8).

Таблица 8

Содержание - глюкозы в; крови телят при двукратном введения . препарата тимуса

(М±м; в ммоль/л; п—10)

Врем*, сутки

KoHTpo.it

Опыт

До введения 6,33±0.42 6,15±0,35 >0,05

3 6,08 ±0,42 6,31+0.31 >0,05

10 5,97± 0,35 5,76 ±0,20 >0,05

15 5,88 ±0.39 6,13 ±0,45 >0,05

30 4,45 ±0,18 4,02±0,12 >0.05

60 • 3,81 ±0,22 3,10±0,16 <0,05

Анализ содержания общих лнпидов сыворотки крови опытных и контрольных животных указывает на тенденции к увеличению количества общих лнпидов в крови после введения тканевого препарата тимуса (табл 9). Оно отмечается в сыворотке крови опытных животных на 3 сутки после начала опыта н максимального своего значения (3,29 г/л) достигает на 10 сутки после первого введения препарата. В дальнейшем содержание общих лнпидов в сыворотке крови остается более высоким, чем в контроле до конца опыта.

Таблица 9

Содержание' общих лнпидов в- сыворотке кроки телят при двукратной введении препарата тимуса (М±м; в г/л; п=>10)

Время, сутки ! Контроль

Опыт

До введения 2,74±0,08 2.68+0,07 >0,05

3 2,71 ±0,07 2,92 ±0,12 >0,05

10 2,74 ±0.06 3.29 ±0,12 <0,001

15 2,79±0,0 6 3,20 ±0,08 <0,001

30 2,70 ±0,06 3,10±0,11 <0,01

60 2,81 ±0,06 3,03 ±0,U >0,05

При рассмотрении влияния тканевого препарата тимуса на показатели липидного обмена установлено увеличение содержания-три-, глнцеридов на заключительном этапе опыта. Если у контрольных животных содержание трнглицеридов в сыворотке крови на 60 день опыта составило 0,15 ммоль/л. то в опыте оно было равно ■ 0,19 ммоль/л. Изменения в содержании в крови опытных животных фосфолипндов и холестерина были статически недостоверными (табл. 10).

Таблица 10

Содержание триглицеридов, фосфолилидов. к холестерина в сыворотке крови телят на 60-Й день опыта <М±м; п—10)

Показатель

Контроль

Опыт

Триглицериды .(ммоль/л) 0,15±0,01 0,19±0,01 <0,01

Фосфолипиды (г/л) . 1,05± 0.02 1,09 ±0,06 >0,05

Холестерин (ммоль/л) 3,97*0.16 " 4,09±0,11 >0,05

Согласно данным И. Кемилевой (1984), введение в организм животных тимозина стабилизирует содержание обших липндов, холестерина н триглицеридов в сыворотке крови и печени при повыше-ник:их потребления* Это выражается-в чувствительной активизации синтеза.а-протеиков н связанной с ней холестероловой эстернфика-цией при отсутствии видимого эффекта на синтез р-липопротеннов и вероятно, слабой активностью синтеза пре-р-лннопротеннов. Кроме этого, гормоны тимуса могут принимать прямое участие в регуляции липидного обмена (I, Е, King et al., 1965), оказывать неспецнфичес-кое трофическое влияние на клеточном и субклеточном уровнях или осуществлять свое влияние при помощи других эндокринных желез. В то же время, влияние тимозина на обмен веществ нельзя отождествлять с действием тканевого препарата, содержащего целый комплекс тнмнческих гормонов.

Увеличение содержания общих липндов в крови опытных животных,. по-видимому, является результатом специфического действия тнмусных гормонов на лнпидный обмен, а уменьшение содержания глюкозы в организме может быть связано с ннсулиноподобным действием экстрактов тимуса на глюкозу (I. Comsa, 1959; 3. И. Кемн-лева, 1984).

Вместе с тем, результатами респираторных и балансовых опытов установлено, что в организме свиией, обработанных, агарово-ткане-вым препаратом, происходит улучшение использования обменной энергии в организме, более интенсивное превращение продуктов метаболизма углеводов в жир (В; В, Соседко, 1967).

Являются ли эти изменениям обмене липндов и углеводов взаимосвязанными или представляют из себя различные фрагменты воздействия отдельных тимусных гормонов, обладающих высокой специфичностью действия, на данном этапе исследования сказать трудно, хотя вполне вероятно использование части глюкозы с трансформацией ее в нировиноградную кислоту и ацетил-КоА для биосинтеза липидов (С. Догли, Д: Ннкольсон, 1973).

Двукратное введение гомогената тимуса одномесячным телятам в дозе 0,04 мл/кг живой массы с целью повышения резистентности организма,вызвало увеличение в крови животных содержания гамма-глобулинов, трансферринов, общих липндов и триглицеридов. Вместе с тем, било отмечено некоторое уменьшение содержания альбуминов в крови опытных животных в начальный период опыта.. Однако, к

концу опыта данный показатель незначительно отличался от такового в контроле.

В целом, по окончанию опыта.в крови опытных животных практически все исследуемые показатели были близки к таковым в контроле и находились в пределах физиологических норм.

3. Экономическая эффективность применения, тканевого, препарата тимуса

Согласно литературным данным (И. А. Калашннк, 1960, 1974; В. П. Радченков, 1971; Л. Н. Воробьев, 1974), применение тканевых препаратов для стимулирования мясной продуктивности крупного рогатого скота позволяет снизить затраты корма на получение прироста живой массы и получить от животных дополнительную продукцию.

Согласно полученным данным, при изучении препаратов тимуса, изготовленных из тканей тимуса животных различных возрастных групп, установлено, что для стимуляции прироста живой массы крупного рогатого скота наиболее целесообразно применять тканевой препарат, изготовленный из тимуса. 1,5—2-летних, животных,

В настоящей работе применение тканевого препарата тимуса молодняку крупного рогатого скота вызвано необходимостью стимулировать факторы гуморального н клеточного иммунитета в неблагоприятные для животных климатические периоды.

Введение тканевого препарата тимуса одномесячному молодняку крупного рогатого скота позволило повысить нсспецнфическую резистентность организма,' получить дополнительный (на 3,4—6,8 кг на одну голову) прирост живой массы, а. также снизить затраты корма иа получение продукции.

Ввиду того, что основное количество опытов по изучению влияния тканевого препарата тимуса на показатели прироста живой массы молодняка дало положительные результаты и проводилось на одномесячном молодняке, была поставлена задача выяснить возможность применения препарата на животных других возрастных групп. С этой целью препарат тимуса был введен семидневным бычкам и телочкам симментальской породы.

Применение тканевого препарата семидневным животным позволило получить у бычков среднемесячный дополнительный приросг живой массы на одну голову 2,2 кг, у телочек — 1,1 кг.

Введение препарата тимуса двенадцатнмесячным бычкам симментальской породы позволило увеличить среднемесячный приросг живой массы на одну голову по сравнению с контролем на 2,3 кг.

Ввиду того, что наибольшее увеличение среднемесячного прироста живой массы у молодняка крупного рогатого скота получено-при введении препарата тимуса в одномесячиом возрасте, применение препарата в целях повышения продуктивности, за счет интенсификации иммунной системы организма, наиболее целесообразно именно в этот возрастной период.

Выводы

1. Соотношение медуллярной и кортикальной зон, микроструктура н интенсивность гистохимических реакций в дольках тимуса крупного рогатого скота указывают на- наибольшую функциональную активность эпителиального ретнкулума и лимфоцитов в тимусе животных 0,5—2-годичного возраста, что подтверждается повышенным содержанием в его тканях диализуемого лимфоцнтозстимулнрующего вещества и недиалнзуемого тимознна 3.

2. По мере развития организма крупного рогатого скота у 3— 5-летних животных наблюдается возрастная инволюция тимуса, снижение уровня биосинтетических процессов и уменьшение содержания фосфора РНК и фосфора ДНК в тканях, замена белкового состава тканей на нейтральные липнды и увеличение содержания сухого вещества.

3. Наибольшей интенсивностью гистохимических реакций на содержание «суммарного» белка, гликогена, ШИК-положительных веществ, активность сукцинатдегидрогеназы, неспецифической эстеразы, кислой и щелочной фосфатаз обладают ннкретирую-щие элементы тимуса 1,5—2-летних животных. По мере развития животного организма происходит уменьшение интенсивности этих реакций и замена ннкретирующих микроструктур лнпидными клетками.

4. Оптимальное содержание белков, тимознна 3, лимфоцнтоз-стимулирующего вещества, нуклеиновых кислот, углеводов и л и гидов имеется в тканях тимуса 1,5—2-летних животных, что позволяет рекомендовать его для изготовления тканевого препарата.

5." В результате ннъекций тканевого препарата тимуса в начальный период опыта (от 3-х до 10-ти суток) происходит уменьшение альбумпп-глобулинового соотношения и увеличение содержания в крови альфа-глобулинов, трансферринов н гамма-глобулинов. Стабилизация этих показателей и уменьшение их величин до уровня контрольных происходит на конечном (30—60-е сутки) этапе опыта.

6. Специфическое влияние тканевого препарата тимуса на некоторые показатели обмена углеводов и липидов на протяжении всего-опыта (1—60-е сутки) проявляется в уменьшении в крови животных, содержания глюкозы и увеличении количества общих лнпндов, три-глнцеридов, фосфолипидов и холестерина.

7. Введение тканевого препарата тимуса позволяет увеличить прирост живой массы одномесячных телят в среднем на 3,4—6,8 кг-

1 по сравнению с контролем и способствует уменьшению затрат корма ' для получения единицы прироста массы.

Практические рекомендации

С учетом биохимического состава тканей, гистохимической характеристики тимуса и влияния его препарата на показатели прироста живой массы телят, наиболее целесообразным является изготов-

ление тканевого препарата из тнмуса крупного рогатого скота 1,5— 2-летнего возраста..

В целях повышения резистентности молодняка крупного рогатого скота н стимуляции-прироста'живой массы тканевой препарат тимуса следует применять животным с 0,5—1-месячного возраста в виде подкожных. инъекций гомогенизированной тканью тимуса. Введение препарата производится двух- трехкратно с интервалом от 10-ти до 14-ти дней в область шеи, в дозах 0,04—0,05 мл/кг живой массы. Применение препарата тимуса при: сбалансированном кормлении животных и в зависимости от условий содержания позволяет получить более высокий-(на 3,4—6,8 кг) прирост живой Массы молодняка.

Для стимуляции-прироста живой; массы у животных, находящихся на откорме, применение препарата может осуществляться в аналогичных условиях и дозах. •

Список работ, опубликованных по теме диссертаций.

1. А. И. Кононскнй, О. Н. Клименко. Материалы по гисто- и биохимии тимуса; используемого для: приготовления биостимуляторов п животноводстве //«Стресс, адаптация и функциональные' Нарушения».— Тезисы Всесоюзного симпозиума. — Кишинев," 1984.— С. 341.

2. О. Н. Клименко. Биостимулятор из тимуса крупного рогатого скота и-его влияние на рост п развитие телят //Тезисы Всесоюзной научно-технической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы профилактики и лечения-болезней сельскохозяйственных животных».— Москва, 1985. — С. 137,

3. О. Н. Клименко, Гормональная стимуляция прироста живой массы телят препаратом тнмуса. крупного рогатого скота //Тезисы научно-технической конференции «Пути, совершенствования научно-технического прогресса в сельскохозяйственном производстве». — Одесса, 1985. — С; 74—75.

4. А. И. Кононский, Г. Д. Ковбасюк, О. Н. Клименко,. С. Н. Цех-мистренко. Гистохимические изменения некоторых органов н тканей при действии различных стресс-факторов на организм //Актуальные вопросы морфологии. — Тезисы докладов II съезда анатомов, гистологов, эмбриологов и топографоанатомов УССР. — Полтава, 1985; — С. 102.

5. О. Н. Клименко. Влияние биостимулятора из тимуса крупного рогатого скота па некоторые биохимические показатели крови и прирост массы телят //Тезисы докладов республиканской научно-практической конференции «Ветеринарные проблемы промышленного животноводства». — Белая Церковь, 1985. — С. 34—35.

6. О. Н. Клименко, Г, И. Маматченко. Влияние биостимулятора из тнмуса на продуктивность и показатели лнпидпого обмена у крупного рогатого скота //Тезисы Всесоюзного симпозиума «Биохимия сельскохозяйственных животных и Продовольственная программа», — Ташкент, 1986. — С. 76.