Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Микроорганизмы-антагонисты Botrytis cinerea Pers.ex.Fr. и эффективность биологических препаратов против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области
ВАК РФ 06.01.11, Защита растений
Автореферат диссертации по теме "Микроорганизмы-антагонисты Botrytis cinerea Pers.ex.Fr. и эффективность биологических препаратов против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области"
Храбрых Олеся Леонидовна
МИКРООРГАНИЗМЫ - АНТАГОНИСТЫ BOTRYTIS CINEREA PERS. EX. FR. И ЭФФЕКТИВНОСТЬ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ СЕРОЙ ГНИЛИ НА ЗЕМЛЯНИКЕ САДОВОЙ В УСЛОВИЯХ ОМСКОЙ
ОБЛАСТИ
06 01 11 - Защита растений
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
0031Т3156
Краснодар - 2007
003173156
Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омский государственный аграрный университет»
Научный руководитель кандидат биологических наук,
доцент Барайщук Галина Васильевна, ФГОУ ВПО «ОмГАУ»
Официальные оппоненты доктор биологических наук,
доцент Горьковенко Вера Степановна ФГОУ ВПО «КубГАУ»
Ведущая организация ФГОУ ВПО «Новосибирский государственный аграрный университет»
Защита состоится «14» ноября 2007 года в 13°° часов на заседании диссертационного совета Д 220 038 06 при ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу 350044, г Краснодар, ул Калинина, 13, факультет защиты растений, аудитория 321, факс (861) 2215885
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на официальном сайте ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» http /www kubagro ru
Автореферат разослан «/¿»QtM _2007 г.
кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Холод Надежда Афанасьевна
ГНУ СКЗНИИСиВ РАСХН
Г
Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор
В П Сокирко
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. В настоящее время химический метод защиты растений является самым распространенным и эффективным методом борьбы с болезнями растений Однако, массовые недовольства населения на остаточное количество средств химизации в зрелой продукции, неютивнос их действие на окружающую среду и появление резистентных штаммов патогенов указывают на потребность поиска альтернативы химическому методу, которую представляет биологический метод контроля с применением биологических агентов
Одним из опасных фитопатогенов (Suty et al, 1999) с высокой степенью развития устойчивости к применяемым средствам химизации является возбудитель заболевания серая гниль Botrytis cinerea Для этого патогена характерна резистентность к антибиотикам, синтезируемым полезной бактерией Pseudomonas fluorescens (Schoonbeek et al, 2002), что усиливает необходимость поиска новых биологических агентов в эпоху биологизации сельскохозяйственного производства
Бактерии родов Pseudomonas, Bacillus, гриб Trtchoderma зарекомендовали себя как биологические агенты в подавлении роста и развития возбудителя серой гнили, на основе которых производятся коммерческие препараты Дрожжевые грибы являются менее изученным объектом, но, как показывают результаты исследований, с огромным потенциалом для использования в целях защиты сельскохозяйственных культур от возбудителя серой гнили Botrytis cinerea
Цель и задачи исследований. Цель работы заключалась в поиске новых биологических агентов для подавления роста и развития патогена Botrytis cinerea и апробации биологических препаратов, производимых на основе уже известных запатентованных штаммов Pseudomonas и Trtchoderma против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области
Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:
- проанализировать взаимоотношения возбудителя серой гнили Botrytis cinerea и бактерий рода Pseudomonas и Bacillus при различных условиях культивирования in vitro,
- изучить влияние различных титров бактериального инокулюма Pseudomonas и Bacillus на рост и развитие патогена,
- определить характер взаимоотношений между грибом-патогеном и грибами рода Trichoderma in viti о,
- выявить антагонистическую способность изолятов дрожжевых грибов по отношению к Botrytis cinerea на агаризованной и в жидкой средах in viti о,
- определить эффективность биологических препаратов на основе Pseudomonas и Trichodei та против серой гнили на землянике садовой т vivo
Научная новизна исследований. Впервые детально изучена способность штаммов Р ßuoiescens Pfl543, Р biassicacearum 1112, В subtilis SLU3, В subtihs FDK21 ингибировать рост и развитие возбудителя серой гнили ßotiytis " х
cinerea Проанализирована способность В subtilis штамм QST713, на основе которого в США производится препарат Серенадэ (Paulitz, 2001), подавлять рост и развитие патогена т vitro Рассмотрено действие различных титров бактериального инокулюма на споры и рост мицелия Botrytis cinerea в жидкой среде Впервые изучены взаимоотношения между грибом-патогеном и грибом Trichoderma viride штамм Омский in vitro, а также оценена эффективность препарата Триходермин на основе данного штамма Trichoderma Впервые рассмотрен характер взаимоотношений новых, ранее неизученных изолятов дрожжевых грибов и возбудителя заболевания серая гниль при различных условиях культивирования Дана оценка эффективности биологических препаратов, производимых на основе запатентованных штаммов Pseudomonas и Trichoderma, против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области
Практическая значимость работы. Продемонстрирована возможность использования в целях защиты сельскохозяйственных культур от возбудителя серой гнили Botrytis cinerea разнообразия бактерий родов Pseudomonas и Bacillus Исследован характер взаимоотношений патогена и грибов рода Trichoderma, включая штамм Омский Выявлена способность дрожжевых грибов подавлять рост и развитие Botrytis cinerea Показана целесообразность применения биологических препаратов на основе Pseudomonas и Trichoderma для снижения степени поражения серой гнилью земляники садовой в условиях Омской области
Апробация работы. Основные материалы диссертации были представлены на российской научно-практической Конференции, посвященной 100-летию со дня рождения ЕВ Талалаева (Иркутск, 2002 г) на Ш Всероссийской научной молодежной конференции "Под знаком Сигма" (Омск, 2005 г), на Всероссийском съезде по защите растений "Фитосанитарное оздоровление экосистем" (г Санкт-Петербург, 2005 г), на научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов ФГОУ ВПО "Омский государственный аграрный университет" (г Омск, 2006 г)
Публикация результатов исследований. По результатам исследований опубликовано 9 печатных работ, 3 из них в зарубежных источниках, в т ч в журналах "Омский научный вестник", "Аграрный вестник Урала" Федеральное государственное унитарное предприятие "Всероссийский научно-технический информационный центр" зарегистрировало интеллектуальный продукт под названием "Методика обработки земляники садовой Fraga) ta grandiflora Ehih против серой гнили Botrytis cinerea в условиях Западной Сибири" под номером 73200500276 от 29 12 2005 г
Основные положения, выносимые на защиту:
- возможность использования более широкого разнообразия биологических агентов для подавления роста и развития возбудителя серой гнили Botrytis cinerea,
- эффективность биологических препаратов на основе Pseudomonas и Trichoderma против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, 6 глав, выводов, практических рекомендаций, приложения, библиографического списка, состоящего из 171 наименований, в том числе 134 работы иностранных авторов Работа изложена на 138 страницах машинописного текста, содержит 23 рисунков и 18 таблиц
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
На основе анализа 171 литературного источника в главе рассматривается состояние изученности вопросов, составляющих задачи исследований, рассмотрены специфические особенности гриба-возбудителя серой гнили Botrytis cinerea, характеризуются защитные мероприятия для снижения степени поражения серой гнилью, анализируется биологический метод контроля, в котором особая роль принадлежит использованию биологических агентов Рассмотрены современные представления об использовании бактерий, грибов рода Tnchoderma и дрожжевых грибов в подавлении роста и развития Botrytis cinerea
2. ОБЪЕКТЫ, МЕТОДИКА И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ И ПОЛЕВЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Научно-исследовательская работа была выполнена в ФГОУ ВПО "Омский государственный аграрный университет" в 2005-2007 гг, на посадках земляники садовой ГУСП ОПХ "Омское", а также в Федеральном Биологическом Исследовательском Центре Сельского хозяйства и Леса (г. Доззенхайм, Германия)
Объекты исследований и культивирование микроорганизмов. Объектом исследований являлся гриб-возбудитель серой гнили Botrytis cinerea, вирулентный штамм 63375 Культивирование и сбор спор гриба-патогена осуществляли по методике Сансоне (Sansone et al, 2005)
В качестве полезных микроорганизмов использовали четыре штамма бактерии рода Pseudomonas (Pseudomonas ßuorescens А506, Р fluoiescens PÍ1S43, Р fluorescens CHAO, P brassicaceat um 1112) и три штамма бактерии рода Bacillus (Bacillus subtilis QST713, В subtilis SLU3, В subtihs FDK21) Бактерии культивировали на агаризованной среде Standart 1 Для подсчета клеток бактерий ! мл суспензии помещали в кювету и анализировали при 600 nm, используя спектрофотометр SPECORD 200
Анализировали антагонистическую активность грибов рода Trichodeiта (Tnchoderma harzianum Т39, Т artoviride PI и Г viride Омский) Культуры грибов в течение экспериментального периода хранили в холодильной камере на картофельно-декстрозном агаре Для сбора спор в чашки Петри с обильным спороношением Tnchoderma добавляли 5 мл стерильной воды Титр спор в суспензии определяли гемоцитометром и доводили до 3* 106 спор/мл
В качестве потенциальных биотогических агентов рассматривались 15 изолятов дрожжевых грибов (Aiueobasidium piillulans CF10, Aareobasidium
pullulons CF40, Cryptococcus laurentu DSM70766, Candida sake DSM70763, Cileromyces matritensis DSM70187, Hanseniaspora uvatum DSM2768, Pichia anómala DSM6766, Pichia guilhei mondu DSM6381, Metschnikowia pulcherrima 3, Melschnikowia pulchernma 4, Melschmkowia pulchertima MSK1, Yeastisolate 5, Yeaslisolate 6, 1T2 2Т1а) Дрожжевые грибы культивировали на дрожжевом солодовом агаре Рабочая суспензия дрожжевых грибов была приготовлена по методике Женг (Zheng et al, 2004) Титр рабочей суспензии стерильной водой доводили до 1 * 107 клеток/мл
Инокуляция агаризованной среды полезными микроорганизмами и Botrytis cinerea При определении антагонистических отношений между биологическими агентами и Botrytis cinerea при условии одновременной инокуляции агаризованную среду инокулировали бактериальной суспензией (Barka et al, 2000), суспензией, содержащей споры Trichorderma, или рабочей суспензией дрожжевых изолятов (Masih et al, 2001) в объеме 0 02 мл Рядом был нанесен инокулюм Botrytis cinerea в объеме 0 02 мл с титром 3*106 спор/мл Наблюдения за ростом и развитием Botrytis cinerea и микроорганизмов - потенциальных биоагентов проводились после шести и двенадцати дней инкубации при 23°С
Наличие антагонистических отношений между полезными микроорганизмами и Botrytis einet еа также определяли при условии предварительной инокуляции среды изолятами бактерий, грибов рода Trichoderma и дрожжевых грибов Агаризованную среду инокулировали суспензиями бактерий, спор гриба Trichoderma или клеток дрожжевых грибов в объеме 0 1 мл (Reyes et al, 2004) Через 30 мин в центр чашки Петри помещали инокулюм гриба-патогена в объеме 0 01 мл с титром 3*106 спор/мл Радиальный рост Botrytis cinerea измерялся после шести и двенадцати дней инкубации
Инокуляция жидкой среды. Среду инокулировали 0 1 мл Botrytis cinerea с титром 3*106 спор/мл и 0 1 мл бактерией рода Pseudomonas с титром 3*106 или 3*108 клеток/мл, или бактерией рода Bacillus с титром 3*107 или 3*109 клеток/мл, или изолятами дрожжевых грибов с титром 1*107 клеток/мл (Zheng et al, 2004) Наличие антагонизма определялось микроскопически, используя микроскоп марки Leika DM4000B Исследование заключалось в визуальном осмотре образцов путем их сравнения с контрольным вариантом, измерении длины зародышевой трубки и мицелия Botrytis etnetea
Условия и методика проведения полевых опытов в 2005-2007 гг. Исследования по данной теме проводили в 2005-2007 гг в саду ОПХ "Омское" НПО "Колос" на базе лаборатории садоводства Сибирского научно-исследовательского института сельского хозяйства на посадках земляники сорта Павловчанка и Фея
Анализ основных показателей климата южной лесостепи Омской области в годы исследований демонстрирует контрастность и сложность возделывания земляники садовой в Западной Сибири - зоне рискованного земледелия Лугово-черноземные и серые лесные глееватые почвы составляют 79% общей
площади сада и считаются благоприятными почвами для выращивания земляники.
В целях защиты земляники от серой гнили применяли биологические препараты: Планриз Ж (Pseudomonas fluorescens), Псевдобактерин-2 П (Pseudomonas aureofascens), Триходермин Ж (Trichoderma viride), Триходермин Ж (Trichoderma harzianum). Опыт содержал контрольный вариант (обработка проточной водой) и Эталон - применение химического фунгицида Фундазол 50% с.п. Апробирование биологических препаратов проводили на землянике садовой сортов Павловчанка и Фея раннего и среднего сроков созревания соответственно. Трехкратную обработку проводили в период цветения земляники с семидневным интервалом. Первая обработка биопрепаратами приходилась на период начала массового цветения. Обработку Фундазолом проводили однократно в период отрастания листьев. В полевых условиях плоды земляники обследовали на поражаемость серой гнилью в период сбора на каждый второй день путем подсчета здоровых и больных ягод. Количество пораженных ягод выражали в %.
3. ВЗАИМООТНОШЕНИЕ БАКТЕРИЙ РОДОВ PSEUDOMONAS, BACILLUS И ГРИБА-ПАТОГЕНА BOTRYTIS CINEREA
3.1 Взаимоотношение бактерий рода Pseudomonas, Bacillus и гриба-патогена Botrytis cinerea на агаризованной среде. Наблюдения показали наличие интенсивного роста Botrytis cinerea с обильным спороношения в контрольном варианте, где вместо бактерии использовался буферный раствор KP в объеме 0.02 мл, после шестидневного культивирования (рисунок 1).
Р. fluorescew СНАО /'. brassicacearum И12
Рисунок 1 - Влияние бактерии рода Pseudomonas в титре 3* I0S клеток/мл на рост и развитие Botrytis cinerea в титре 3* 106 спор/мл после шести дней культивирования (ориг ).
Подобный рост гриба-патогена обнаружен в вариантах с использованием бактерий Р. fluorescens А506 и Р. fluorescens СНАО. Культивируясь, образуя
пушистый белый мицелий, Botrytis cinerea заполнил емкости полностью, достигая краев чашек Петри Данные публикаций (Schnider, 2000, Notz, 2002, Duffy et al, 2003) свидетельствуют о том, что оба микроорганизма обладают способностью синтезировать антибиотики или вещества-токсины, обладающие антимикробными свойствами Однако, наличие антагонизма по отношению к Botrytis cinerea в конкретных случаях замечено не было Возможное объяснение этого наблюдения заключается в том, что бактерия, в силу своего медленного роста и развития по сравнению с Botrytis cinerea, при одновременной инокуляции в равном объеме и титре, не способна достигнуть того состояния, при котором начинает синтезироваться токсичное вещество, способное ингибировать рост гриба-патогена Подобное явление, когда для синтеза того или иного вещества микроорганизму нужно достичь определенной концентрации, носит название Quorum-sensing (Хмель, 2006) и играет огромную роль при биологической защите растений Предположительно, при данном титре бактерий Р fluorescens А506 и Р fluorescens СНА0, а именно 3*106 клеток/мл, концентрация сигнальных молекул не достигает уровня, при котором активируется синтез антибиотика
Сосуществуя с бактерией Pseudomonas brassicacearum 1112, Botrytis cinerea демонстрирует признаки роста только со стороны собственного инокулюма Возможно, в данном случае бактерия синтезирует токсин, выделяя его в агар, предотвращая рост Botrytis cinerea Однако, на рисунке 1 едва заметны признаки роста гриба вокруг бактериального инокулюма Можно предположить, что бактерия Р brassicacearum 1112 обладает способностью активно синтезировать токсин, тем самым сдерживать рост и развитие гриба-патогена, но только до определенного момента, а именно до момента активации защитного механизма Доказано, что Botrytis cinerea обладает несколькими защитными механизмами против токсичных веществ, такими как лакказа (Максимова, 2004; Schouten et al, 2002) и АТП-соединяющая кассета АВС-переносчиков (транспортеров) (Schoonbeek et al, 2002)
Интересный характер роста Botrytis cinerea отмечен в варианте при использовании бактерии Р fluorescens РП543 в качестве антагониста Хорошо заметно, что рост Botrytis cinerea имеет огибательный характер, колонизируя вокруг бактериальной суспензии, заполняя пространство Возможно, бактерия данного штамма синтезирует вещество, токсичное для гриба-патогена, выделяя его в агар
Для вариантов с применением бактерии Bacillus также характерен огибательный характер роста Botrytis cinerea (рисунок 2)
Контроль ß. sublilis QST13 В. subtilis SLU3 В. subtilis FDK21
Рисунок 2 - Влияние бактерии рода Bacillus в титре 3*107 клеток/мл на рост и развитие Botrytis cinerea в титре 3* 106 спор/мл после шестидневного культивирования (ориг.).
Бактерии Bacillus subtilis QST713, В. subtilis SLU3 и В. subtilis FDK21, предположительно, имеют свойства синтезировать антибиотик, задерживая рост гриба-патогена.
Для проверки способности Botrytis cinerea колонизировать на участках без признаков роста после шестидневной инкубации в вариантах с использованием Р. fluorescens РП543 и Р. brassicacearum 1112, а также В. subtilis QST713, В. subtilis SLU3 и В. subtilis FDK21 было принято решение о пролонгации культивирования микроорганизмов. Таким образом, антагонизм между бактерией рода Pseudomonas и грибом-патогеном наблюдался через двенадцать дней культивирования, между бактерией В. subtilis и Botrytis cinerea - через девять дней культивирования.
Присутствие бактерий Р. fluorescens А506, Р. fluorescens CHAO, а также Р. brassicacearum 1112 и В. subtilis SLU3 не ингибирует рост и развитие Botrytis cinerea, сравнивая с контрольным вариантом. Основываясь на этом наблюдении, можно сделать вывод, что перечисленные микроорганизмы при одновременной инокуляции с грибом-патогеном в равном объеме и титре, не способны задерживать рост Botrytis cinerea.
Интересный результат, и в то же время оправдывающий ожидания, был получен в варианте с использованием Р. fluorescens РП543. Как после шести дней культивирования, так и после двенадцати дней инкубации, Botrytis cinerea успешно развивался только вокруг бактериального инокулюма, демонстрируя огибательный характер роста. Это наблюдение еще раз подтверждает теорию о способности Р. fluorescens PÍ1543 синтезировать токсин (антибиотик), который, выделяясь в среду, ингибирует рост Botrytis cinerea. Подобный характер роста замечен в вариантах с применением В. subtilis QST713 и В. subtilis FDK21 в качестве антагонистов после девятидневного культивирования, объясняя способность перечисленных штаммов синтезировать антибиотик в титре 3*107 клеток/мл.
3.2 Проявление антагонистических свойств бактерий по отношению к Botrytis cinerea в жидкой среде. В контрольном варианте, где вместо антагониста использовался буферный раствор KP, после 20 часов культивирования отмечено скопление проросших спор, которые образовывают большие кластеры (рисунок 3).
L
P. fluorescens Pf] 543 P. fluorescent Pfl543 3*10fl клеток/мл 3*108 клеток/мл
Рисунок 3 - Влияние P. fluorescens A506 и P. fluorescens РП543 на рост Botrytis cinerea при культивировании в жидкий среде (ориг.).
Подобное скопление проросших спор Botrytis cinerea с хорошо развитым мицелием, образующих кластеры, характерно для вариантов при одновременном культивировании Botrytis cinerea и бактерий Р. fluorescens А506 (рисунок 3) и P. brassicaciarum 1112 в титре 3* 106 клеток/мл. При увеличении титра суспензии Р. fluorescens А506, состоящей из 3*10* клеток/мл, были обнаружены только единичные споры Botrytis cinerea, находящиеся в непроросшем и проросшем состоянии, при этом средняя длина мицелия проросших спор составляет 121.2 мкм, которая, как показывает статистический анализ данных, существенно меньше длины мицелия Botrytis cinerea при минимальном титре данного штамма Р. fluorescens (d=476.6 мкм>НСР05=179.3 мкм). Увеличение же титра бактерии Р. brassicaciarum 1112 до 3*108 клеток/мл, не оказало ингибирующего эффекта на прорастание спор гриба-патогена, сравнивая с контрольным вариантом, образуя длину мицелия Botrytis cinerea 858.2 мкм, которая даже существенно больше длины мицелия патогена в контрольном варианте (d=198.7 мкм>НСР05= 179.3 мкм). Обильный мицелий в вариантах с применением в качестве антагониста бактерии Р. brassicaciarum 1112 при различных титрах инокулюма и Р. fluorescens А506 в титре 3*106 клеток/мл свидетельствует о неспособности этих микроорганизмов ингибировать прорастание спор и рост мицелия Botrytis cinerea при условии одновременной инокуляции жидкой среды патогеном и антагонистом.
Подобное наблюдение, где при увеличении титра бактерии существенно снижается количество спор Botrytis cinerea в анализируемой суспензии, характерно и для вариантов при использовании в качестве антагонистов Р. fluorescens CHAO, В. subtilis QST713, а также В. subtilis FDK21 (рисунок 4).
я 1Ш .-»шКвн Р. fluorescens А506
В. subtilis SLU3 В. subtilis SLU3 3*107 клеток/мл 3* I09 клеток/мл
Контроль
В. subtilis FDK21 В. subtilis FDK21 3*107 клеток/мл 3*V09 клегток/мл
Рисунок 4 - Влияние В. subtilis SLD3 и В. subtilis FDK21 на рост Botrytis cinerea при культивировании в жидкий среде (ориг.).
При титре инокулюма 3*108 клеток/мл бактерии Р. ßuorescens CHAO в анализируемой суспензии в основном зафиксировано наличие непроросших спор Botrytis cinerea с длиной ростовой трубки 13.7 мкм.
В вариантах при использовании В. subtilis QST713 и В. subtilis FDK21 с титром 3*109 клеток/мл в качестве антагонистов Botrytis cinerea были обнаружены только единичные проросшие споры патогена. Предположительно, данные бактерии при высоком титре бактериального инокулюма в жидкой среде синтезируют токсин, действующий негативно на прорастание спор Botrytis cinerea.
При использовании в качестве антагониста В. subtilis SLU3 также отмечено закономерное снижение количества спор Botrytis cinerea в анализируемой суспензии при увеличении титра бактериального инокулюма. Однако в данном варианте в отличие от вариантов с использованием В. subtilis QST713 и В. subtilis FDK21 с титром 3*107 клеток/мл и 3*109 клеток/мл отмечены большие и малые кластеры проросших спор Botrytis cinerea с хорошо развитым мицелием длиной 460.2 мкм и 236.6 мкм, соответственно. Возможно, данная бактерия все же синтезирует вещество, которое негативно действует на споры патогена, но степень токсичности вещества не столь значительна.
3.3 Влияние бактерий на радиальный рост Botrytis cinerea. После шести дней культивирования в контрольном варианте, где агаризованная среда инокулировалась буферным раствором KP, был отмечен активный рост Botrytis cinerea с признаками спороношения (рисунок 5).
Р. fluorescens СНАО Р. brassicaceanmi 1112
Рисунок 5 - Влияние бактерий рода Pseudomonas в титре 3* 106 клеток/мл на радиальный рост Botrytis cinerea в титре 3*10 спор/мл после шестидневного культивирования (ориг.).
Радиальный рост гриба-патогена в контрольном варианте достигал краев чашек Петри, составляя 40 мм (таблица 1).
Таблица 1 - Влияние изолятов бактерий и периода культивирования на радиальный рост Botrytis cinerea, мм
Изолят бактерии Период культивирования, дни Среднее по фактору А (изолят бактерии) (НСР05=1.74)
6 12
Контроль (буферный раствор KP) 40 40 40
Pseudomonasßaoreseens А506 8.7 39.8 24.3
Pseudomonas fluorescens РП543 0.5 1.5 1
Pseudomonas fluorescens CHAO 17.2 39.3 28.3
Pseudomonas brassicacearum 1112 0 0 0
Bacillus subtilis QST713 0 0 0
Bacillus subtilis SLU3 12.7 15.3 14
Bacillus subtilis FDK21 0 0 0
Среднее по фактору В (период культивирования) (НСР05=0.87) 9.9 17 13.5
НСР05=2.46 для сравнения частных средних
Максимальный рост Botrytis cinerea после шести дней культивирования на среде, предварительно инокулированной бактерией, был отмечен в вариантах с использованием Р ßuoiescens А506, Р ßuorescens CHAO и В siibtihs SLU3 в качестве антагонистов После двенадцати дней культивирования в вариантах, где среда предварительно инокулировалась Р ßuorescens А506 и Р ßuoiescens CHAO, радиальный рост гриба-патогена составил 39 8 мм и 39 3 мм, соответственно, что только на 0 2 мм и 0 7 мм меньше значения радиального роста контрольного варианта, составляя несущественность различий (НСРо5=2 46 мм) и отрицая теорию о возможности использования данных штаммов в качестве антагонистов Botrytis cinerea Незначительный же рост Botrytis cinerea после экспериментального периода, сравнивая с контрольным вариантом, позволяет предположить, что В subtihs SLU3 способен ингибировать рост патогена, возможно, синтезируя токсин, при условии предварительной инокуляции среды бактерией Однако, принимая во внимание результат, полученный в эксперименте по выявлению антагонизма между В subtilis SLU3 и Botrytis cinerea при их одновременной инокуляции (глава 3 1), где после девяти дней культивирования был отмечен только рост патогена с признаками спороношения, напрашивается вывод о нецелесообразности применения В subtihs SLU3 в качестве антагониста
Едва заметен радиальный рост Botrytis cinerea на среде, предварительно инокулированной Р ßuorescens Pfl543 как после шестидневного культивирования, так и после двенадцати дней (таблица 1), составляя 0 5 мм и 1 5 мм, соответственно Вероятнее всего, данная бактерия способна синтезировать вещество-токсин не только при условии одновременной инокуляции агаризованной среды бактерией и патогеном при равном объеме и титре (глава 3 1), а также при условии предварительной инокуляции среды бактерией-антагонистом в титре 3*106 клеток/мл
При предварительной инокуляции среды бактерией Р brassicacearum 1112, В subtihs QST713 и В subtihs FDK21 рост Botrytis cinerea был полностью ингибирован как после шестидневного культивирования, так и после двенадцати дней Вероятно, что при условии предварительной инокуляции среды бактериальные штаммы ингибируют рост и развитие Botrytis cinerea, синтезируя и выделяя в среду достаточное количество токсичного вещества, к которому, вероятнее всего, у Botrytis cinerea нет защитного механизма
4. АНТАГОНИЗМ МЕЖДУ ГРИБАМИ РОДА TRICHODERMA И ГРИБОМ-ПАТОГЕНОМ BOTRYTIS CINEREA
4.1 Взаимоотношение Trichoderma и Botrytis cinerea на агаризованной среде. В качестве объекта в эксперименте использовался Т harzianum штамм Т-39, на основе которого в Израиле производится препарат Триходекс, действующий негативно на рост и развитие Botrytis cinerea Данный штамм играл роль положительного контроля против вирулентного штамма Botiytis cinerea 63375 Особый интерес вызывали Trichodcnna artovmde PI и
Trichoderma viride Омский. В контрольном варианте с использованием стерильной деонизированной воды вместо инокулюма Trichoderma отмечен хороший рост Botrytis cinerea с обильным спороношением после шести дней культивирования (рисунок 6).
Контроль Т. harzianum Т39 Т. viride Омский
Т. artoviride PI
Рисунок 6 - Взаимоотношение гриба-патогена Botrytis cinerea и гриба рода Trichoderma при одновременной инокуляции агаризованной среды данными микроорганизмами в равном объеме 0.02 мл и с титром 3*106 спор/мл. Фото сделано после шестидневного культивирования микроорганизмов (ориг.).
Рост Botrytis cinerea был отмечен в вариантах с использованием Т. harzianum Т39, Т. viride Омский. Культивируясь при одновременной инокуляции в равных объеме и титре, Botrytis cinerea не выдерживает конкуренции с Т. harzianum Т39. Предположительно, темп роста Т. harzianum Т39 превосходит темп роста Botrytis cinerea, в результате чего площадь с питательной средой колонизируется полезным грибом, оставляя небольшой шанс патогену для роста и развития. Второе предположение основывается на способности Т. harzianum Т39 синтезировать вещество, токсичное для патогена, которое выделяется в среду, ингибируя рост Botrytis cinerea, даже если темпы роста у микроорганизмов совпадают. Botrytis cinerea отличался доминированием в росте в варианте при применении Т. viride Омский в качестве антагониста. После шестидневного культивирования рост гриба Trichoderma отмечен только со стороны собственного инокулюма. Успешная колонизация агаризованной среды патогеном находит свое объяснение в природном опережающем темпе роста Botrytis cinerea по отношению к Т. viride Омский.
Результаты наблюдений демонстрируют способность Т. artoviride PI подавлять рост и развитие Botrytis cinerea и способность Т. harzianum Т39 задерживать распространение патогена благодаря успешной конкуренции за питательные вещества и нишу в титре 3*106 спор/мл при условии одновременной инокуляции агаризованной среды как инокулюмом Botrytis cinerea, так и грибами рода Trichoderma.
Параллельно опыту по выявлению антагонизма между Botrytis cinerea и Trichoderma при условии одновременной инокуляции агаризованной среды микроорганизмами в равных объеме и титре, был осуществлен эксперимент по обнаружению подавления роста Botrytis cinerea при условии предварительной инокуляции среды грибами рода Trichoderma.
4.2 Влияние Trichoderma на радиальный рост Botrytis cinerea. В контрольном варианте без применения Trichoderma отмечен активный рост патогена после шести и двенадцати дней культивирования, при котором мицелий достигает краев чашек Петри, составляя 39 7 мм и 40 мм соответственно (таблица 2)
Таблица 2 - Влияние грибов рода Tuchoderma и периода культивирования на
Изолят Trichoderma Период культивирования, дни Среднее по фактору А (изолят гриба) (НСР05=1.36)
6 12
Контроль 39 7 40 39 8
Trichoderma harzianum Т39 07 08 0 75
Trichoderma actovirtde PI 0 0 0
Trichoderma viride Омский 66 2 43
Среднее по фактору В (период культивирования) (HCPOS=0.96) 117 10 7 11.2
НСРо5=1-93 для сравнения частных средних
При использовании Т artovu ide PI в качестве антагониста рост Botrytis cinerea отсутствовал, тогда как едва заметен был рост патогена на среде, инокулированной Т harzianum Т39 как после шести, так и после двенадцати дней культивирования, образуя радиус вокруг инокулюма Botrytis cinerea, равный 0 7 мм и 0 8 мм соответственно Несущественное увеличение роста патогена (d=0 1 мм<НСР05=1 93 мм) свидетельствует о неспособности Botrytis cinerea культивироваться в присутствии Т harzianum Т39 при условии предварительной инокуляции среды биологическим агентом.
Радиальный рост Botrytis cinerea в варианте с применением Т viride Омский после шести дней культивирования составлял 6 6 мм, тогда как после двенадцати дней культивирования замечено уменьшение радиуса на 4 6 мм Данное наблюдение позволяет предположить, что Botrytis cinerea на первых этапах, а именно в течение шести дней, проявляет некую способность противостоять Т viride Омский, которая исчезает после двенадцати дней Существенная разница между средними значениями радиального роста Botrytis cinerea при условии предварительной инокуляции среды Т viride Омский и контрольного варианта как после шести, так и после двенадцати дней культивирования (d>HCP0s=l 93 мм) свидетельствует о способности данного штамма подавлять рост и развитие патогена
Полученные результаты еще раз подтверждают теорию о том, что чем раньше биологический агент занимает одну нишу с патогеном, тем успешнее будет контроль заболевания
5 ДРОЖЖЕВЫЕ ГРИБЫ -ИНГИБИТОРЫ РОСТА И РАЗВИТИЯ BOTR YTIS CINEREA
5.1 Взаимоотношение дрожжевых грибов и гриба-патогена Botrytis cinerea на агаризованной среде. Анализ чашек Петри на наличие признаков роста Botrytis cinerea в присутствии изолятов дрожжевых грибов после шестидневного культивирования показал, что во всех вариантах присутствует одинаковый характер роста патогена, без признаков ингибирования, сравнимый с контрольным вариантом При данных условиях и титре инокулюма Botrytis cinerea и дрожжевых грибов, равных 3*106 спор/мл и 1*107 клеток/мл соответственно, дрожжевые грибы не оказывают негативного влияния на рост и развитие патогена При данном титре дрожжевые грибы не выдерживают конкуренцию за питательные вещества и нишу, которая, по мнению многих авторов, является основным механизмом действия многих используемых дрожжей (Spadaro et al, 2002, Chand-Goyal, 1996)
Параллельно был рассмотрен эксперимент по обнаружению антагонистических свойств дрожжевых грибов по отношению к возбудителю серой гнили при условии предварительной инокуляции агаризованной среды дрожжевыми грибами
5.2 Влияние изолятов дрожжей на радиальный рост Botrytis cinerea. Радиальный рост Botrytis cinerea в контрольном варианте отличался ритмичным характером, составляя 29 7 мм после шестидневного культивирования, и достигая 38 7 мм после двенадцати дней культивирования, охватив всю среду (таблица 3)
Таблица 3 - Влияние изолятов дрожжевых грибов и периода культивирования на
Изолят дрожжевых грибов Период культивирования, дни Среднее по фактору А (изолят дрожжевых грибов) (НСР05=3.35)
6 12
Контроль 29 7 38 7 34 2
Aiireobasidium pullulans CF10 0 0 0
Aiireobasidmm pullulans CF40 0 03 02
Cryptococcus laurentu DSM70766 22 95 59
Candida чаке DSM70763 1 2 1 3 1 3
Citeromyces matritensis DSM70187 162 36 3 26 3
Hanseniaspora uvarum DSM2768 07 42 25
Pichia anómala DSM6766 42 20 7 125
Pichia guilhermondii DSM6381 1 5 35 25
Metschnikowia pulchemma 3 08 1 09
Metschmkowia pulcherrima 4 1 2 1 3 1 3
Metschmkowia pulcherrtma MSK1 5 5 6 5 8
Yeastisolate 5 07 1 09
Yeastisolate 6 1 1 1
1T2 32 3 5 3.3
2Tla 1 3 1 3 1 3
Среднее по фактору В (период культивирования) (НСР05=1.19) 43 8 1 6.2
НСР0<;=4.74 для сравнения частных средних
Максимальный рост Botrytis стегеа после шести дней культивирования на авизованной среде с содержанием изолятов дрожжевых грибов отмечен в вариантах с применением Citeromyces matritensis DSM70187, Metschnikowia pulcherrima MSK1 и Pichia anomala DSM6766, который составил 16 2 мм, 5 5 мм и 4 2 мм соответственно Однако после двенадцати дней культивирования рост патогена существенно увеличился только в присутствии Citeromyces matritensis DSM70187, достигая 36 3 мм, что только на 2 4 мм меньше радиального роста патогена в контрольном варианте (HCP0s=4 74 мм), свидетельствуя о неспособности данного изолята ингибировать рост патогена при условии предварительной инокуляции агаризованной среды
Значительное увеличение радиального роста Botrytis cinetea обнаружено в варианте с использованием Pichia anomala DSM6766 в качестве антагониста, который составил 20 7 мм Несмотря на то, что статистически это значение существенно отличается от значения радиального роста патогена, полученного в контрольном варианте (d=18 мм>НСР05=4 74 мм), все же нельзя уверенно сделать вывод о способности Pichia anomala DSM6766 подавлять рост и развитие Botrytis стегеа, сравнивая с ростом патогена в присутствии других изолятов дрожжевых грибов
Дрожжевые грибы Cryptococcus laurentu DSM70766, Candida sake DSM70763, Hansemaspora uvarum DSM2768, Pichia gwlliermondn DSM6381, Metschmkowia pulcherrima 3, Metschmkowia pulcherrima 4, Yeastisolate 5, Yeastisolate 6, 1T2, 2Т1а способны ингибировать рост и развитие патогена, так как во всех вариантах Botrytis стегеа характеризовался слабым ростом после шести и двенадцати дней культивирования
Полное отсутствие роста патогена наблюдалось в присутствии А pullulons CF10 и A pullulons CF40, что говорит о способности данного вида дрожжевых грибов ингибировать рост и развитие Botrytis стегеа при условии предварительной инокуляции среды
Помимо экспериментов по выявлению антагонистических свойств дрожжевых грибов по отношению к Botrytis ctnei еа на агаризованной среде был проанализирован характер взаимоотношений микроорганизмов в жидкои среде
5.3 Ингибирование роста Botrytis стегеа в жидкой среде. В
контрольном варианте после 20 часов культивирования отмечено скопление
Контроль
Candida sakc DSM70763
yeastisoiate 5
Yeastisolale 6
Ciyp/ococciis luwenlii DSM70766
Citeromyces matritemis DSM70187
Meischmkowci Metschnikowia
A ureohusiciium
Metschnikowia
проросших 7
спор с образованием больших кластеров (рисунок
Контроль Aureobasidium
2Т1а
Контроль
Hanseniaspora uvarum DSM2768
anomala DSM6766 guilliermondii DSM6381
Рисунок 7 - Влияние дрожжевых грибов на рост Botrytis cinerea при культивировании в жидкой среде. Микрофотографирование осуществлялось при помощи микроскопа при 5-ти кратном увеличении (ориг.).
Подобное количество проросших спор Botrytis cinerea с образованием длинного мицелия характерно для варианта с применением Citeromyces matritensis DSM70187, который составляет 606.7 мкм и существенно не отличается от значения длины мицелия патогена контрольного варианта при 5-ти и 1% уровне значимости (d=85 мкм<НСР05=98.97 мкм, HCP0i=133 мкм). Данный результат еще раз опровергает научную гипотезу о способности данного дрожжевого гриба выступать в роли биологического агента в подавлении роста и развития Botrytis cinerea.
Подобный характер роста патогена замечен в вариантах при использовании 2Т1а и Altreobasidium pitllulans CF10, где единично проросшие споры формируют небольшие кластеры с длиной ростовой трубки 23.6 мкм в случае с изолятом 2Т1а и длинный мицелий, составляющий 142.7 мкм, в случае с Aureobasidium pullulans CFIO. Тем не менее, в обоих вариантах после 20 ч культивирования количество проросших спор Botrytis cinerea было существенно ниже по сравнению с контролем. Основываясь на данном наблюдении и, принимая во внимание результат предыдущего опыта, из которого следует, что данные изоляты ингибируют рост патогена на агаризованной среде, можно сделать вывод, что 2Т1а и Aureobasidium pullulans CF10 являются антагонистами Botrytis cinerea.
При использовании Aureobasidium puUulans CF40, Ciyptococcus laurenlii DSM 70766, Metschnikowia pulcherrima 4, Metschnikowia pulcherrima MSK1, Pichia guilliermondn DSM6381, Yeasíisolate 5, Yeashsolate 6 в анализируемых суспензиях присутствовали только единичные проросшие споры патогена, свидетельствуя об антагонистических свойствах перечисленных штаммов дрожжевых грибов по отношению к Botrytis cinerea
Анализируемые суспензии в вариантах с применением Hansemaspora uvarum DSM2768, Metschnikowia pulcherrima 3 и 1T2 были насыщены клетками дрожжевых грибов, среди которых едва распознаваемы были единичные непроросшие и проросшие споры Botrytis cinerea, составляя среднюю длину ростовой трубки 0 3 мкм, 1 8 мкм и 1 5 мкм соответственно При использовании же Candida sake DSM70763 замечено полное отсутствие спор патогена Данные изоляты дрожжевых грибов, как показывают результаты, во-первых, негативно действуют на споры Botrytis cinerea, о чем свидетельствует их ничтожно малое количество при анализе, а, во-вторых, ингибируют рост ростовой трубки
Анализируя полученные данные можно сделать вывод, что дрожжи Aureobasidium pullulans CF10, Aureobasidium pullulans CF40, Cryptococcus laurentu DSM70766, Candida sake DSM70763, Hansemaspora uvarum DSM2768, Metschnikowia pulcherrima 3, Metschnikowia pulcherrima 4, Metschnikowia pulcherrima MSK1, Pichia guilliermondu DSM6381, Yeastisolate 5, Yeastisolate 6, 1T2 и 2Т1а проявляют антагонистическую активность по отношению к Botrytis cinerea
6. ЭФФЕКТИВНОСТЬ БИОПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ СЕРОЙ ГНИЛИ НА
ЗЕМЛЯНИКЕ САДОВОЙ IN VIVO
В последнее время много внимания уделяют ведению экологически чистого сельскохозяйственного производства, в том числе и садоводства, созданию и испытанию биологических средств защиты растений Земляника садовая чаще всего потребляется в свежем виде, особенно населением Сибири, в силу того, что эта культура открывает сезон потребления свежих ягод после долгой зимы Поэтому экологически чистое производство должно затронуть такую культуру как земляника садовая
В контрольном варианте наблюдается самый высокий процент пораженных ягод серой гнилью на сортах Павловчанка и Фея во все годы наблюдений, образуя среднее значение по годам наблюдений 15 5% и 38% соответственно (таблица 4, таблица 5)
Таблица 4 - Пораженные ягоды Botrytis cinerea земляники copra Павловчанка за 2005-2007 гг (г Омск, ГУСП ОПХ «Омское»)_
Вариант Количество пораженных ягод, % Среднее значение по годам наблюдений
Среднее значение по повторностям в годы наблюдений
2005 г. 2006 г. 2007 г.
Контроль (вода) 17 3 102 19 1 15.5±2 7
Эталон (Фундазол, 50% с п) 29 26 3 1 2 9±0 2
Планриз Ж, титр 2* 109 82 62 8 1 7 5i0 6
Псевдобактерин-2 П, титр 2*10" 49 34 33 3 9±0 5
Триходермин Ж (Т утс1е), титр 1*10' 67 3 5 75 5 9±1 2
Триходермин Ж (Т Иаггюпит), титр 1*109 66 42 62 5 7±0 8
НСР05 0.92 1.59 1.36 4.04
НСРо, 1.29 2.23 1.91 5.67
Среднее значение контрольного варианта с применением воды за анализируемый период также показывает, что сорт Павловчанка является более устойчивым к заболеванию серая гниль, сравнивая с сортом Фея Самый высокий процент пораженных ягод Botrytis cinerea зафиксирован в 2007 г, составляя 19 1%, тогда как поражаемость ягод патогеном на сорте Фея в данном году соответствовала 43.4%. При обработке земляники сорта Павловчанка Фундазолом средний процент пораженных ягод составляет 2 9%, что на 12 6% меньше средней, полученной в контрольном варианте Столь большое значение разности между средними двух вариантов, сравнивая с предельной ошибкой разности средних при 5-ом % уровне значимости HCP0s, который равен 4 04%, свидетельствует о существенной роли химического препарата Фундазол против серой гнили Подобное явление характерно и для сорта Фея, где разница между средними контрольного варианта и Эталона составляет 30 9% и больше наименьшей существенной разницы при 5-ти % и 1% уровне значимости (30 9%>6 03%, 30 9%>8 47%) (таблица 5)
Таблица 5 - Пораженные ягоды Botrytis cinerea земляники сорта Фея за 2005-2007 гг (г Омск, ГУСП ОПХ «Омское»)__
Вариант Количество пораженных ягод, % Среднее значение по годам наблюдений
Среднее значение по повторностям в годы наблюдений
2005 г. 2006 г. 2007 г.
Контроль (вода) 36 9 33 8 43 4 38±2 8
Эталон (Фундазол, 50% с п ) 82 8 52 7 1±1
Планриз Ж, титр 2*109 15 8 164 114 14 5±1 6
Псевдобактерин-2 П, титр 2*10'1 142 13 8 8 95 12 3±1 7
Триходермин, Ж (7' viride), титр 1*109 162 15 3 9 13 5±2 3
Триходермин, Ж (Т harzianum), титр 1*1О9 186 189 12 96 16 8±1 9
НСР05 2.37 1.51 1.93 6.03
HCPoi 3.33 2.12 2.70 8.47
Самая низкая степень поражения ягод Botrytis cinerea характерна для препарата Псевдобактерин-2, составляя 3 9% на сорте Павловчанка и 12 3% на сорте Фея
При сравнении разницы средних значений процента пораженных ягод серой гнилью при обработке биологическими препаратами и химическим контролем с НСР05 и НСР01, обнаружено, что на сорте Павловчанка нулевая гипотеза не отвергается при применении Псевдобактерина-2 и препаратов на основе грибов рода Trichoderma, как при 5-ти %, так и при 1% уровне значимости Статистически доказано, что данные биологические препараты не уступают в эффективности химическому препарату. Данный вывод подтверждается значением НСР05 которая выше фактических показателей наименьшей существенной разницы при 5-ти % уровне значимости испытуемых биологических препаратов (таблица 6)
Таблица 6 - Биологическая эффективность биологических препаратов против серой гнили на землянике садовой сорта Павловчанка за 2005-2007 гг (г Омск, ГУ СП ОПХ «Омское»)_
Вариант Эффективность биологических препаратов, % Среднее значение по годам наблюдений, %
Год наблюдений
2005 г. 2006 г. 2007 г.
Контроль (вода) - - - -
Эталон (Фундазол, 50% с п) 83 3 74 8 83 95 80 7±2 96
Планриз Ж, титр 2* 109 52 5 38 6 57 7 49 6±5 7
Псевдобактерин-2 П, титр 2*10" 71 4 66 2 82 7 73 4±4 9
Триходермин, Ж (Т viride\ титр 1*109 61 5 65 9 60 6 62 7±1 6
Триходермин, Ж (Т harzianum), титр 1*109 61 6 59 1 67 4 62 7±2 5
HCPos 20.85
Эффективность Псевдобактерина-2 против серой гнили на землянике сорта Павловчанка приближена к эффективности химического эталона
(d=7 3%<HCP05 =20 85%) Препарат Планриз оказался менее эффективным на данном сорте, количество пораженных ягод при обработке этим препаратом составляет 7 5%, что на 4 6% выше среднего процента по годам наблюдений при обработке Фундазолом Полученная разница между средними показателями пораженных ягод выше наименьшей существенной разницы при 5-ти % уровне значимости HCP0s=4 04%, свидетельствуя о том, что все-таки эффективность биологического препарата Планриз, которая составляет 49 6%, существенно ниже эффективности химического эталона, составляющей 80 7%, на сорте раннего срока созревания Павловчанка
При сравнении разницы средних значений процента пораженных ягод Botrytis cinerea при использовании биологических препаратов и Фундазола с НСР05 и HCPoi на сорте Фея доказано, что нулевая гипотеза отвергается при использовании Планриза и препаратов на основе грибов рода Trichodeima при 5-ти % уровне значимости Статистически подтверждается, что химический препарат существенно снижает степень поражения земляники серой гнилью, эффективность которого составляет 80 7% по сравнинению с биологическими препаратами Планриз и Триходермин на основе Т harzianum с эффективностью 60 8% и 54 7% соответственно (таблица 7)
Таблица 7 - Биологическая эффективность биологических препаратов против серой гнили на землянике садовой сорта Фея за 2005-2007 гг (г Омск, ГУСП ОПХ «Омское»)
Вариант Эффективность биологических препаратов, % Среднее значение по годам наблюдений, %
Год наблюдений
2005 г. 2006 г. 2007 г.
Контроль (вода) - - - -
Эталон (Фундазол, 50% с п) 77 7 76 3 88 1 80 7±3 7
Планриз Ж, титр 2* 109 57 2 51 5 73 8 60 8±6 7
Псевдобактерин-2 П, титр 2*10" 61 6 59 3 79 4 66 8±6 3
Триходермин, Ж (Т У1г^е), титр 1*109 56 2 54 8 79 2 63 4±7 9
Триходермин, Ж (Т Ъатапит), титр 1*109 49 8 44 2 70 1 54 7±7 8
НСР„5 18.81
Разница между средним показателем процента пораженных ягод Botrytis cinerea вариантов с использованием биологического препарата Псевдобактерин-2 и химического Фундазол составляет 5.2%, что ниже НСРо5=6 03% и НСР0|=8 47% (таблица 5), и доказывает, что по эффективности Псевдобактерин-2 (66 8%) не уступает эффективности химического эталона на сорте Фея (80 7%)
ВЫВОДЫ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ
На основании результатов лабораторных исследований и полевых испытаний были получены следующие выводы
1 Бактерии Pseudomonas fluorescens штамм РИ543 в титре бактериального инокулюма 3*106 клеток/мл, Bacdlus subtdis штамм QST713 и Bacillm subtdis штамм FDK21 в титре инокулюма 3* 101 клеток/мл ингибируют рост и развитие Botrylis cinerea, предположительно, вследствие синтеза антибиотика На основании этого перечисленные штаммы могут быть рекомендованы к использованию в качестве биологических агентов для подавления роста и развития возбудителя серой гнили Botrytis cinerea,
2 Штамм Омский Trichoderma viride проявил антагонистическую активность по отношению к Botrytis cinerea только при условии предварительного заселения субстрата и может быть рекомендован к использованию в качестве биологического агента,
3 Отсутствие роста патогена в присутствии грибов рода Trichoderma artoviride Р1 и Trichoderma haizianum T39 при титре инокулюма 3*10й спор/мл свидетельствует о целесообразное! и их использования в практике защиты растений,
4 Дрожжи Aureobasidium pullulons CF10, Aureobasidium pullulons CF40, Cryptococcus laurentu DSM70766, Candida sake DSM70763, Hanseniaspora uvarum DSM2768, Metschmkowia pulcherrima 3, Metschmkowia pulcherrima 4, Metschnikoma pulcherrima MSK1, Pichia guilhermondu DSM6381, Yeastisolate 5, Yeastisolate 6, 1T2 и 2Т1а проявляют антагонистическую активность по отношению к Botrytis cinerea и могут быть рекомендованы к использованию в качестве биологических агентов для подавления роста и развития возбудителя серой гнили,
5 Эффективность биологического препарата Псевдобактерин-2, производимого на основе Pseudomonas aureofascens штамм BS 1393, против заболевания серая гниль на сортах Павловчанка и Фея, составляющая 73 4% и 66 8% соответственно, статистически не отличается от эффективности химического препарата Фундазол,
6 Эффективность препаратов на основе Trichoderma viride штамм Омский и Trichoderma harzianum штамм 1820 против серой гнили составляет 62 7% на сорте раннего срока созревания Павловчанка и статистически не уступает эффективности фунгицида Фундазол 50% с п ,
7 Эффективность препарата Триходермин на основе Trichoderma viride штамм Омский против серой гнили составляет 63 4% на сорте среднего срока созревания Фея и статистически не уступает эффективности химического препарата Фундазол 50% с п ,
8 Эффективность биологического препарата Планриз, производимого на основе Pseudomonas fluorescens штамм АР-33, при обработке земляники сорта Павловчанка и Фея против серой гнили составляет 49 6% и 60 8% соответственно, которая существенно ниже эффективности химического
эталона, свидетельствует о нецелесообразности его использования в целях защиты земляники садовой от серой гнили
Результаты полевых опытов позволяют сделать следующие рекомендации производству
1 Биологический препарат Псевдобактерин-2, производимый на основе Pseudomonas aureofascens штамм BS 1393, рекомендуется к использованию в качестве средства защиты против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области с соблюдением титра 2*107 клеток/мл рабочей суспензии при трехкратном опрыскивании растений с момента цветения с семидневным интервалом,
2 Рекомендуется использование препаратов на основе Tnchoderma viride штамм Омский и Tnchoderma harzianum штамм 1820 против серой гнили на сорте раннего срока созревания Павловчанка в условиях Омской области с титром 5*10б спор/мл рабочей суспензии при опрыскивании растений трехкратно с семидневным интервалом, начиная с момента цветения,
3 Биологический препарат Триходермин на основе Tnchoderma viride штамм Омский рекомендуется к использованию против Botrytis cinerea на землянике садовой сорта Фея в условиях Омской области при трехкратным опрыскиванием растений через семь дней, начиная с момента цветения, и с соблюдением титра 5*106 спор/мл рабочей суспензии
ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНЫ СЛЕДУЮЩИЕ РАБОТЫ:
1 Барайщук, Г В Микробиологические препараты против фитофагов в защите растений Омской области / Г В Барайщук, О.Л. Максимова // Оценка современного состояния микробиологических исследований в Восточно-Сибирском регионе - Материалы российской науч -практ Конф , посвящ 100-летию со дня рождения Е В.Талалаева - (Иркутск 1113 Марта 2002 г ) Иркутск, 2002 - С 11-12
2 Maksimova, O.L. Defense mechanism of Botrytis cinerea against 2 4-Diacetylphloroglucinol, an antibiotic produced by Pseudomonas fluorescens / О L Maksimova // MsC Thesis - Wageningen University - 2004 - 46 p
3 Schouten, A Self-protection of Botrytis cinerea against biocontrol agents / A Schouten, G С M van den Berg, Y Cuesta Arenas, O. Maksimova, J M Raaijmakers II Gewasbescherming -2004 - Vol 35(6) -P 327
4 Schouten, A A lacease and ABC-transporters confer resistance in Botrytis cinerea to antibiotics produced by antagonistic Pseudomonas / A Schouten, G С M van den Berg, Y Cuesta Arenas, O. Maksimova, J M Raaijmakers // XIII International Botrytis Symposium - (Antalia, Turkey, November 2004) Antaha, 2004 - P 144
5 Максимова О Л. Экологически чистая защита земляники садовой от серой гнили / О Л Максимова // III Всероссийская научная молодежная
конференция "Под знаком Тезисы докладов - (Омск 2-4 Июля 2005 г) Омск, 2005 -С 188-189
6 Максимова, OJ1 Эффективность применения биологических препаратов против Botrytis стегеа на посадках земляники садовой Fragat ta grandiflora Ehih в условиях Западной Сибири / O.JI Максимова, Г В Барайщук , А С Новицкий //Материалы съезда - (Санкт-Петербург, 5-10 Декабря 2005 г ) Санкт-Петербург, 2005 -С 173-174
7 Методика обработки земляники садовой Fragaria grandiflora Ehrh против серой гнили Botrytis стегеа в условиях Западной Сибири / О.Л. Максимова, Г В Барайщук // Интеллектуальный продукт № 73200500276 от 29 12 2005
8 Храбрых O.JI Бактерии рода Pseudomonas и Bacillus - антагонисты возбудителя заболевания серая гниль Botryíis стегеа / О Л Храбрых, Г В Барайщук, A Kollar, W Jelkmann // Омский научный вестник -№1(53)-2007 - С 29-33
9 Храбрых O.JI Дрожжи в борьбе с возбудителем заболевания серая гниль Botrytis стегеа / О Л Храбрых, Г В Барайщук, A Kollar, W Jelkmann // Аграрный вестник Урала - №4 - 2007 - С 30-33
Подписано и печагь 11 10 2007 г Формат 60x84
Бума! а офсетная Офсе1 ная печать
Печ л 1 Заказ №598 Тираж 100 экз.
Отпечатано в гапографии КубГАУ 350044, г Краснодар, ул Калинина, 13
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Храбрых, Олеся Леонидовна
ВВЕДЕНИЕ
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Значение земляники садовой в Западной Сибири
1.2 Вредоносность Botrytis cinerea на землянике садовой
1.3 Защитные мероприятия против серой гнили
1.3.1 Профилактические
1.3.2 Химические средства защиты и устойчивость
Botrytis cinerea к ним
1.3.3 Биологический контроль
2. ОБЪЕКТЫ, МЕТОДИКА И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ И ПОЛЕВЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1 Материалы и методы проведения лабораторных экспериментов in vitro
2.1.1 Культивирование Botrytis cinerea
2.1.2 Культивирование бактерий родов Pseudomonas и Bacillus
2.1.3 Культивирование грибов рода Trichoderma
2.1.4 Культивирование дрожжевых грибов
2.1.5 Инокуляция агаризованной среды полезными микроорганизмами и Botrytis cinerea
2.1.6 Инокуляция жидкой среды
2.2 Условия и методика проведения полевых опытов в 2005-2007 гг.
2.2.1 Климатические условия в годы проведения исследований
2.2.2 Почвенные условия участка
2.2.3 Характеристика сортов земляники садовой
2.2.4 Характеристика биологических препаратов
2.2.5 Методика опрыскивания и учета пораженных ягод серой гнилью
3. ВЗАИМООТНОШЕНИЕ БАКТЕРИЙ РОДОВ PSEUDOMONAS, BACILLUS И ГРИБА-ПАТОГЕНА BOTRYTIS CINEREA
3.1 Взаимоотношение бактерий родов Pseudomonas,
Bacillus и гриба-патогена Botrytis cinerea на агаризованной среде
3.2 Проявление антагонистических свойств бактерий по отношению к Botrytis cinerea в жидкой среде
3.3 Влияние бактерий на радиальный рост Botrytis cinerea
4. АНТАГОНИЗМ МЕЖДУ ГРИБАМИ РОДА TRICHО DERM А
И ГРИБОМ-ПАТОГЕНОМ BOTRYTIS CINEREA
4.1 Взаимоотношение Trichoderma и Botrytis cinerea на агаризованной среде
4.2 Влияние Trichoderma на радиальный рост Botrytis cinerea
5. ДРОЖЖЕВЫЕ ГРИБЫ - ИНГИБИТОРЫ РОСТА И РАЗВИТИЯ
BOTRYTIS CINEREA
5.1 Взаимоотношение дрожжевых грибов и гриба-патогена Botrytis cinerea на агаризованной среде
5.2 Влияние изолятов дрожжевых грибов на радиальный рост Botrytis cinerea
5.3 Ингибирование роста Botrytis cinerea в жидкой среде
6. ЭФФЕКТИВНОСТЬ БИОПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ
СЕРОЙ ГНИЛИ НА ЗЕМЛЯНИКЕ САДОВОЙ IN VIVO
Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Микроорганизмы-антагонисты Botrytis cinerea Pers.ex.Fr. и эффективность биологических препаратов против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области"
В настоящее время химический метод защиты растений является самым распространенным и эффективным методом борьбы с болезнями растений. За короткие сроки снижая степень поражения растения возбудителем, средства химизации имеют ряд негативных характеристик. Одним из существенных недостатков применения химических средств борьбы является их накопление в зрелой продукции, что в последнее время вызывает массу недовольств со стороны потребителя. Зафиксировано отрицательное действие средств химизации на окружающую среду, а также их участие в появлении резистентных штаммов патогенов.
Серая гниль, возбудителем которой является Botrytis cinerea Pers. ex. Fr. -распространенное заболевание многих сельскохозяйственных культур, которое ведет к серьезным экономическим потерям. Более того, этот гриб-патоген относится к ряду опасных фитопатогенов (Suty et al., 1999) с высокой степенью развития устойчивости не только к химическим средствам защиты, но и к антибиотикам, синтезируемым полезной бактерией Pseudomonas fluorescens (Schoonbeek et al., 2002), что усиливает необходимость поиска новых биологических агентов.
Гриб Trichoderma, бактерии рода Pseudomonas, Bacillus зарекомендовали себя как биологические агенты - антагонисты возбудителя серой гнили. В конце 80-х годов гриб Trichoderma являлся наиболее изученным микроорганизмом, который рассматривался как потенциальный биологический агент для подавления роста и развития растительных патогенов (Punja, 2003). Известно, что грибы рода Trichoderma продуцируют вторичные метаболиты с широким спектром антимикробной активности, такие как глиотоксин и глиовирин (Howell, 2003), а также конкурируют с фитопатогенами за питательные вещества и нишу. Явление антагонизма бактерий рода Pseudomonas и Bacillus ко многим микромицетам обусловлена в первую очередь синтезом широкого спектра соединений антибиотической природы (Katz, 1977; Raaijmakers, 1999). Известностью пользуются антибиотики, продуцируемые Pseudomonas fluorescens, 2.4-Диацетилфлорглюцин (2.4-ДАФГ), пирролнитрин и феназины (феназин-1-карбоновая кислота, феназин-1-карбоксамид).
Существенный вклад в разработке биологических препаратов был достигнут за последние 10 лет (Paulitz, 2001) и большинство продуктов нарабатываются как раз на основе грибов Trichoderma (Триходермин, Триходекс) или бактерий Pseudomonas и Bacillus (Планриз, Псевдобактерин, Фитоспорин, Серенадэ). На основе Trichoderma harzianum штамм Т-39, полученного в Центре Волкани Израиля, производится препарат Триходекс, который подавляет рост и развитие Botrytis cinerea (Paulitz, 2001). На основе Bacillus subtilis штамм QST713 в США производят препарат Серенадэ (Paulitz, 2001), применяемый против Botrytis cinerea.
Дрожжевые грибы являются менее изученным объектом для применения в качестве биологического агента для подавления роста и развития Botrytis cinerea, но, как показывают результаты исследований, с огромным потенциалом для использования в практике защиты растений. Одним из главных факторов биологической активности дрожжевых грибов является способность клеток прикрепляться к гифам мицелия патогена, тем самым обеспечивая эффективную работу энзимам, деградирующим клеточную стенку (Cook, et al., 1997). Дрожжевые грибы, действуя, в основном, через конкуренцию за питательные вещества и нишу, не синтезируют токсичные вещества с негативным влиянием на здоровье человека, животных и окружающую среду.
Обладая высокой степенью развития устойчивости к химическим фунгицидам и антибиотикам, синтезируемым биологическими агентами, поиск новых микроорганизмов-антагонистов Botrytis cinerea является актуальной задачей, особенно в эпоху биологизации сельскохозяйственного производства.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Цель исследований заключалась в поиске новых биологических агентов для подавления роста и развития патогена Botrytis cinerea и апробации биологических препаратов, производимых на основе уже известных запатентованных штаммов Pseudomonas и Trichoderma, против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области.
Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:
• проанализировать взаимоотношения возбудителя серой гнили Botrytis cinerea и бактерий родов Pseudomonas и Bacillus при различных условиях культивирования in vitro;
• изучить влияние различных титров бактериального инокулюма Pseudomonas и Bacillus на рост патогена;
• определить характер взаимоотношений между грибом-патогеном и грибами рода Trichoderma in vitro',
• выявить антагонистическую активность изолятов дрожжевых грибов по отношению к Botrytis cinerea на агаризованной и в жидкой средах in vitro;
• определить эффективность биологических препаратов на основе Pseudomonas и Trichoderma против серой гнили на земляники садовой in vivo.
Основные положения, выносимые на защиту:
• возможность использования более широкого разнообразия биологических агентов для подавления роста и развития возбудителя серой гнили Botrytis cinerea;
• эффективность биологических препаратов на основе Pseudomonas и Trichoderma против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области.
Научная новизна. Впервые детально изучена способность штаммов Р. fluorescens PfI543, P. brassicacearum 1112, В. subtilis SLU3, В. subtilis FDK21 ингибировать рост и развитие возбудителя серой гнили Botrytis cinerea. Проанализирована способность Bacillus subtilis штамм QST713, на основе которого в США производится препарат Серенадэ (Paulitz, 2001), подавлять рост и развитие патогена in vitro. Изучено действие различных титров бактериального инокулюма Pseudomonas и Bacillus на продуктивность спор и рост мицелия Botrytis cinerea в жидкой среде. Впервые изучены взаимоотношения между грибом-патогеном и грибом Trichoderma viride штамм Омский in vitro, а также оценена эффективность препарата Триходермин на основе данного штамма. Впервые изучен характер взаимоотношений новых, ранее неизученных изолятов дрожжевых грибов и возбудителя заболевания серая гниль при различных условиях культивирования. Дана оценка эффективности биологических препаратов, производимых на основе запатентованных штаммов Pseudomonas и Trichoderma, против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области.
Практическая ценность. Продемонстрирована возможность использования в целях защиты сельскохозяйственных культур от возбудителя серой гнили Botrytis cinerea разнообразия бактерий родов Pseudomonas и Bacillus. Исследован характер взаимоотношений патогена и грибов рода Trichoderma, включая штамм Омский. Выявлена антифунгальная активность дрожжевых грибов по отношению к Botrytis cinerea. Показана эффективность и целесообразность применения биологических препаратов на основе Pseudomonas и Trichoderma для снижения степени поражения серой гнилью земляники садовой в условиях Омской области.
Апробация результатов диссертации. Основные материалы диссертации были представлены на российской научно-практической Конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Е.В. Талалаева (Иркутск, 2002 г), на HI Всероссийской научной молодежной конференции "Под знаком Сигма" (Омск, 2005 г), на Всероссийском съезде по защите растений "Фитосанитарное оздоровление экосистем" (г. Санкт-Петербург, 2005 г.), на научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов ФГОУ ВПО "Омский государственный аграрный университет" (г. Омск, 2006 г.).
Публикация результатов исследований. По результатам исследований опубликовано 9 печатных работ, 3 из них в зарубежных источниках, в т.ч. в журналах "Омский научный вестник", "Аграрный вестник Урала". Федеральное государственное унитарное предприятие "Всероссийский научно-технический информационный центр" зарегистрировало интеллектуальный продукт под названием "Методика обработки земляники садовой Fragaria grandiflora Ehrh. против серой гнили Botrytis cinerea в условиях Западной Сибири" под номером 73200500276 от 29.12.2005.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, 6 глав, выводов, практических рекомендаций, приложения, библиографического списка, состоящего из 171 наименований, в том числе 134 работ иностранных авторов. Работа изложена на 138 страницах машинописного текста, содержит 23 рисунка и 18 таблиц.
Заключение Диссертация по теме "Защита растений", Храбрых, Олеся Леонидовна
ВЫВОДЫ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ
На основании результатов лабораторных исследований и полевых испытаний были получены следующие выводы:
1. Бактерии Pseudomonas Jluorescens штамм Pfl543 в титре бактериального инокулюма 3*106 клеток/мл, Bacillus subtilis штамм QST713 и Bacillus п subtilis штамм FDK21 в титре инокулюма 3*10 клеток/мл ингибируют рост и развитие Botrytis cinerea, предположительно, вследствие синтеза антибиотика. На основании этого перечисленные штаммы могут быть рекомендованы к использованию в качестве биологических агентов для подавления роста и развития возбудителя серой гнили Botrytis cinerea;
2. Штамм Омский Trichoderma viride проявил антагонистическую активность по отношению к Botrytis cinerea только при условии предварительной инокуляции питательной среды и может быть рекомендован к использованию в качестве биологического агента;
3. Отсутствие роста патогена в присутствии грибов рода Trichoderma artoviride PI и Trichoderma harzianum T39 при титре инокулюма 3*106 спор/мл свидетельствует о целесообразности их использования в качестве биологических агентов;
4. Дрожжевые грибы Aureobasidium pullulans CF10, Aureobasidium pullulans CF40, Cryptococcus laurentii DSM70766, Candida sake DSM70763, Hanseniaspora uvarum DSM2768, Metschnikowia pulcherrima 3, Metschnikowia pulcherrima 4, Metschnikowia pulcherrima MSK1, Pichia guilliermondii DSM6381, Yeastisolate 5, Yeastisolate 6, 1T2 и 2Tla проявляют антагонистическую активность по отношению к Botrytis cinerea и могут быть рекомендованы к использованию в качестве биологических агентов для подавления роста и развития возбудителя серой гнили;
5. Эффективность биологического препарата Псевдобактерина-2, производимого на основе Pseudomonas aureofascens штамм BS 1393, против возбудителя заболевания серая гниль на сортах Павловчанка и Фея, составляющая 73.4% и 66.8% соответственно, статистически не отличается от эффективности химического препарата Фундазол;
6. Эффективность препаратов на основе Trichoderma viride штамм Омский и Trichoderma harzianum штамм 1820 против возбудителя серой гнили составляет 62.7% на сорте раннего срока созревания Павловчанка и статистически не уступает эффективности фунгицида Фундазол 50%» с.п.;
7. Эффективность препарата Триходермин на основе Trichoderma viride штамм Омский против серой гнили составляет 63.4% на сорте среднего срока созревания Фея и статистически не уступает эффективности химического препарата Фундазол 50%» с.п.;
8. Эффективность биологического препарата Планриз, производимого на основе Pseudomonas fluorescens штамм АР-33, при обработке земляники сорта Павловчанка и Фея против серой гнили составляет 49.6% и 60.8% соответственно, которая существенно ниже эффективности химического эталона, свидетельствует о нецелесообразности его использования в целях защиты земляники садовой от серой гнили.
Результаты полевых опытов позволяют сделать следующие рекомендации производству:
1. Биологический препарат Псевдобактерин-2, производимый на основе Pseudomonas aureofascens штамм BS 1393, рекомендуется к использованию в качестве средства защиты против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области с соблюдением титра у
2*10 клеток/мл рабочей суспензии при трехкратном опрыскивании растений в фазу цветения с семидневным интервалом;
2. Рекомендуется создание и использование препаратов на основе Trichoderma viride штамм Омский и Trichoderma harzianum штамм 1820 против серой гнили на сорте раннего срока созревания Павловчанка в условиях Омской области с титром 5*106 спор/мл рабочей суспензии при опрыскивании растений трехкратно с семидневным интервалом, начиная с фазы «начало цветения»;
3. Биологический препарат Триходермин на основе Trichoderma viride штамм Омский рекомендуется к использованию против Botrytis cinerea на землянике садовой сорта Фея в условиях Омской области при трехкратном опрыскивании растений с семидневным интервалом в фазу цветения с соблюдением титра 5*106 спор/мл рабочей суспензии.
Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Храбрых, Олеся Леонидовна, Краснодар
1. Агроклиматический бюллетень. Омск, 2004. - 111 с.
2. Агроклиматический бюллетень. Омск, 2005. - 113 с.
3. Агроклиматический бюллетень. Омск, 2006. - 110 с.
4. Агроклиматический бюллетень. Омск, 2007. - 108 с.
5. Агроклиматический справочник. Москва, 1953. - 126 с.
6. Актуганов, Г.Э. Хитинолитическая активность бактерий Bacillus Cohn.-антагонистов фитопатогенных грибов. / Г.Э Актуганов, А.И. Мелентьев, Л.Ю. Кузьмина, Н.Ф. Галимзянова, А.В. Широков //Микробиология. 2003. - Том 72. - Номер 3 (Май-Июнь). - С. 356-360.
7. Алексеева, С.А. Культура земляники в Кабардино-Балкарии. / С.А. Алексеева, Т.К. Шогенова, М.П. Артанова // Защита и карантин растений. 2004. - № 9. -С. 49-50.
8. Барайщук, Г.В. Биологическая защита растений. / Г.В. Барайщук // Учеб. пособие. Омск: Изд-во ФГОУ ВПО ОмГАУ. 2006. - 144 с.
9. Белых, A.M. Земляника в Сибири / A.M. Белых // РАСХН. Сиб. отд-ние. НЗПЯОС им. И.В. Мичурина. Новосибирск, 2000.- 110 с.
10. Быстрая, Г.В. Защита виноградников от вредителей и болезней. / Г.В. Быстрая // Защита и карантин растений. 2004. - № 9. - С. 58-59.
11. Голышин, Н. М. Фунгициды в сельском хозяйстве. / Н.М. Голышин // Учебник. 2-е изд перераб. и доп. - М.: Колос, 1982. - 271 с.
12. Гулиий, В.В. Микроорганизмы, полезные для биометода. / В.В. Гулиий, Т.В. Теплякова, Г.М. Иванов // Издательство Наука. Сибирское отделение, Новосибирск, 1998. ~ t'
13. Доспехов, Б.А. Дисперсионный анализ данных многофакторного опыта. Методика полевого опыта: (С основами статистической обработки результатов исследований). / Б.А. Доспехов // Изд. 4-ое, перераб. и доп. Москва: Колос, 1979.-416 с.
14. Коломиец, Э.И. Биологические препараты на смену химическим. / Э.И. Коломиец, Т. В. Романовская, Н.А. Здор // Защита и карантин растений. - 2006. -№10.-С. 18-20.
15. Лутов, В.И. Земляника в промышленном саду. / В.И. Лутов // Научно-экономические проблемы регионального садоводства: Материалы научно-практической конференции, г. (Барнаул, 4-6 марта 2002). Барнаул, 2003. -С.120-129.
16. Монастырский, О.А. Биозащита зерновых культур от токсикогенных микроорганизмов / О.А.Монастырский // Защита и Карантин растений. 2003. -№:2. - С. 5-8.
17. Надыкта, В.Д. Перспективы биологической защиты растений от фитопатогенных микроорганизмов / В.Д. Надыкта // Защита и Карантин растений. 2004. - №6. - С.26-28.
18. Натальина, О. Б. Болезни ягодников. / О. Б. Натальина // М. 1963. -245 с.
19. Осипов, Ю.В. Земляника: возделывание с минимальными затратами труда. / Ю.В. Осипов //М.: Росагропромиздат, 1989. 32с.
20. Рейнгард, Я. Р. Диагностика и классификация почв Омской области и их сельскохозяйственное использование: учеб. пособие / Я. Р. Рейнгард, Л. Н. Мищенко, А. А. Неупокоев, В. И. Убогов, А.И. Семенкин // Омск, 1990. 62 с.
21. Рудаков, О.Л. Защита овощных культур закрытого грунта от корневых гнилей и болезней увядания / О.Л. Рудаков, В.О. Рудаков // Защита и карантин растений. 2000. - № 10
22. Рыжков, А. П. Сибирское плодоводство / А. П. Рыжков // Часть II. Учеб. пособие ОмСХИ. Омск, 1993. - 200 с.
23. Сизенко, Ю.М. Интенсификация производства земляники за рубежом. / Ю.М. Сизенко // Москва, 1989. 55 с.
24. Соловьева, А.Е. Технологические основы питомниководства земляники садовой. /А.Е.Соловьева, A.M. Белых//Новосибирск, 2002. 124 с.
25. Сорокопудова, О.А. Биологические препараты для борьбы с ботритиозом лилий. / О.А. Сорокопудова // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 2004. - №6 (Ноябрь-Декабрь). - С. 39-40.
26. Стольникова, Н.П. Повышение эффективности культуры земляники. / Н.П. Стольникова // Научно-экономические проблемы регионального садоводства: Материалы научно-практической конференции, г. (Барнаул, 4-6 марта 2002). -Барнаул, 2003. С. 113-116.
27. Хмель, И.A. Quorum-sensing регуляция экспрессии генов: фундаментальные и прикладные аспекты, роль в коммуникации бактерий. / И.А. Хмель //Микробиология. 2006, - Том 75. - Номер 4 (Июль-Август). - С. 457-464.
28. Чигалейчик, А.Г. Пути совершенствования триходерминовыхбиопрепаратов / А.Г. Чигалейчик, В.Г. Сахаровский // Защита и Карантин растений.- 1999. -№:9. С.32-33.
29. Шашкин, Н. И. Земляника в колхозном саду. / Н. И. Шашкин // М. 1956. -87 с.
30. Штерншис, М.В. Биологическая защита растений. / М.В. Штерншис, Ф. С.-У Джалилов, И.В. Андреева, О.Г. Томилова // Под ред. М.В. Штерншис (Учебники и учеб. пособия для студентов высш. учеб. заведений) М.: КолосС. - 2004.- 264 с.
31. Штерншис, М.В. Роль и возможности биологической защиты растений. / М.В. Штерншис // Защита и карантин растений. 2006. - № 6. - С. 14-17.
32. Avis, T.J. Specificity and mode of action of the antifungal fatty acid cis-9-heptadecenoic acid produced by Pseudozyma flocculosa. / TJ. Avis, R.R. Be'langer //Appl. Environ. Microbiol. 2001. - 67. -P. 956-960.
33. Baek, J.M. The role of extracellular chitinase from Trichoderma virens Gv 29-8 in the biocontrol of Rhizoctonia solani. / J.M. Baek // Curr. Genet. 1999. - 35. - P. 4150.
34. Bailey, B.A. Direct effects of Trichoderma and Gliocladium on plant growth and resistance to pathogens. / B.A. Bailey, R.D. Lumsden // In Trichoderma and Gliocladium. / G.E. Harman, C.P. Kubicek // 1998. Vol. 2 - P. 185-204.
35. Bangera, M. G. Identification and charac-terization of a gene cluster for synthesis of the polyketide antibiotic 2,4-diacetylphloroglucinol from Pseudomonasfluorescens Q2-87. / M. G. Bangera, L. S. Thomashow // J. Bacteriol. 1999. - 181. -P. 3155-3163.
36. Bar-Nun, N. Cucurbitacins repressors of induction of laccase formation. / N. Bar-Nun, A.M. Mayer // Phytochemistry. 1989. - 28. - P. 1369-1371.
37. Bar-Nun, N. Repression of laccase formation in Botrytis cinerea and its possible relation to phytopathogenicity. / N. Bar-Nun, A. Tal-Lev, E. Harel, A.M. Mayer // Phytochemistry. 1988. - 27. - P. 2505-2509.
38. Batta, Y.A. Biological effect of two strains of microorganisms antagonistic to Botrytis cinerea: causal organism of gray mold on strawberry. / Y.A. Batta // J. Res.: Natural Sci. 1999. - 13. - P. 67-83.
39. Bhatt, D.D. Preliminary investigation on biological control of grey mold {Botrytis cinerea) of strawberries. / D.D. Bhatt, E.K. Vaughan // Plant Dis. Rep. 1962. - 46. -P. 342-345.
40. Bisson, L.F. Stuck and sluggish fermentations. / L.F. Bisson // Am. J. Enol. Vitic. 1999.-50. P. 107-119.
41. Blakeman, J.P. Potential for biological control of plant diseases on the phylloplane. / J.P. Blakeman, N.J. Fokkema // Annu. Rev. Phytopathol. 1982. - 20. -P. 167-192.
42. Brent, K.J. Fungicide resistance: the assessment of risk. / K.J. Brent, D.W. Hollomon // FRAC Monograph. 1998. - No. 2. - Brussels.
43. Buhagiar, R. W.M. The yeasts of strawberries. / R. W.M. Buhagiar, J. A. Barnett //J. Appl. Bact. 1971. - 34. - P. 727-739.
44. Chand-Goyal, T. Control of postharvest pear diseases using natural saprophytic yeast colonists and their combination with low dosage of thiabendazole. / T. Chand-Goyal, R. A. Spotts // Postharvest Biol. Technol. 1996a. - 7. - P. 51-64.
45. Chand-Goyal, T. Postharvest biological control of blue mold of apples and brown rot of cherries by saprophytic yeasts and their combination with a low dose of fungicides. /Т. Chand-Goyal, R. A. Spotts II Biol. Control. 1996b. - 6. - P. 253-259.
46. Conney, J.M. Trichoderma/pathogen interaction: measurement of antagonistic chemicals produced at antagonist/pathogen interface using tubular bioassay. / J.M. Conney, D.R. Lauren // Lett. Appl. Microbiol. 1998. - 27(5). - P. 283-286.
47. Cook, D.W.M. Attachment of microbes antagonistic against Botrytis cinerea: biological control and scanning electron microscope studies in vivo. / D.W.M. Cook, P.G. Long, L.H. Cheah // Ann. Appl. Biol. 1997. - 131. -P. 503-508.
48. Cook, R. J. Molecular mechanisms of defense by rhizobacteria against root disease. / R. J. Cook, L. S. Thomashow, D. M. Weller, D. Fujimoto, M. Mazzola, G. Bangera, D. S. Kim //Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1995. - 92. - P. 4197-4201.
49. Dassa, E. The ABC of ABCs: A phylogenetic and functional classification of ABC systems in living organisms. / E. Dassa, P. Bouige // Res. Microbiol. 2001. -152.-P. 211-229.
50. De Kievit T.R. Bacterial Quorum Sensing in pathogenic relationship / T.R. De Kievit, B.H. Iglewski // Infect. Immun. 2000. - V. 68. - P. 4839-4849.
51. De La Cruz, J. Purifcation and characterization of an endo-L-l,6-glucanase from Trichoderma harzianum that is related to its mycoparasitism. / J. De La Cruz, J.A. Pintor-Toro, T. Benitez, A. Llobell // J. Bacteriol. 1995. - 177. - P. 1864-1871.
52. De Waard, M. A. Significance of ABC transporters in fungicide sensitivity and resistance. / M. A. De Waard // Pestic. Sci. 1997. - 51. - P. 271-275.
53. Del Sorbo, G. Fungal trans-porters involved in efflux of natural toxic compounds and fungicides. / G. Del Sorbo, H. Schoonbeek, M. A. De Waard // Fungal Genet. Biol. 2000.-30.-P. 1-15.
54. Delaney, S. M. phzO, a gene for biosynthesis of 2-hydrolyated phenazine compounds in Pseudomonas aureofaciens 30-84. / S. M. Delaney, D. V. Mavrodi, R. F. Bonsall, L. S. Thomashow // J. Bacteriol. 2001. - 18. - P. :318-327.
55. Driessen, A. J. Diversity of trans-port mechanisms: Common structural principles. / A. J. Driessen, B. P. Rosen, W. N. Konings // Trends Biochem. Sci. 2000. - 25. -P. 397-401.
56. Droby, S. Characterization of the biocontrol activity of Debaryomyces hansenii in the control of Penicillium digitatum on grapefruit. / S. Droby, E. Chalutz, C.L. Wilson, M. Wisniewski // Can. J. Microbiol. 1989. - 35. - P. 794-800.
57. Droby, S. Induction of resistance to Penicillium digitatum in grapefruit by the yeast biocontrol agent Candida oleophila. / S. Droby, V. Vinokur, B. Weiss, L. Cohen, A. Daus, E.E. Goldschmidt, R. Porat // Phytopathology 92. 2002. - P. 393399.
58. Duffy, B. Pathogen self-defense: Mechanisms to Counteract Microbial Antagonism. / B. Duffy, A. Schouten, J. M. Raaijmakers // Annu. Rev. Phytopathol. -2003.-41.-P. 501-538.
59. Duffy, В. Potential role of pathogen signaling in multitrophic plant-microbe interactions involved in disease protection. / B. Duffy, C. Keel, G. Defago // Applied and environmental microbiology. 2004. - Vol. 70. - No. 3. - P. 1836-1842.
60. Elad, Y. Degradation of plant pathogenic fungi by Trichoderma harzianum. / Y. Elad, I. Chet, Y. Henis // Can. J. Microbiol. 1982. - 28. - P. 719-725.
61. Elad, Y. The role of Trichoderma harzianum protease in the biocontrol of Botrytis cinerea. / Y. Elad, A. Kapat //Eur. J. Plant Pathol. 1999. - 105. - P 177-189.
62. Elad, Y., Shabi, E. and Katan, T. Multiple fungicide resistance to benzimidazoles, dicarboxymides and diethofencarb in field isolates of Botrytis cinerea in Israel. / Y. Elad, E. Shabi, T. Katan // Plant Pathol. 1991. - 41. - P. 41-46.
63. Ellis, M. A. Using fungicides to control strawberry fruit rots in Ohio. / M. A. Ellis // Department of Plant Pathology, the Ohio State University, OARDC. 2004. - 5 p.
64. El-Neshawy, S.M. Nisin enhancement of biocontrol of postharvest diseases of apple with Candida oleophila. / S.M. El-Neshawy, C.L. Wilson //Postharvest Biol. Technol.- 1997.-10.-P. 9-14.
65. Fan, Q. Biological control of postharvest brown rot in peach and nectarine fruits by Bacillus subtilis (B-912). / Q. Fan, S.P. Tian, Y.X. Li, Y. Xu, Y. Wang // Acta Botanica Sin. 2000. - 42. - P. 1137-1143.
66. Fleet, G. H. Yeast interactions and wine flavour. / G. H. Fleet // International Journal of Food Microbiology. 2003. - 86. - P. 11 - 22.
67. Fokkema, N.J. The role of saprophytic fungi in antagonism against Drechslera sorokiniana (Helminthosporium sativum) on agar plates and on rye leaves with pollen. / N.J. Fokkema // Physiol. Plant Pathol. 1973. - 3. - P. 195-205.
68. Forster, B. Basis for use strategies of anilinopyrimidine and phenylpyrrole fungicides against Botrytis cinerea. / B. Forster, T. Staub // Crop Protec. 1996. - 15 (6). - P. 529-537.
69. Fournier, E. Characterization of nine polymorphic microsatellite loci in the fungus Botrytis cinerea (Ascomycota). / E. Fournier, T. Giraud, A. Loiseau, D. Vautrin, A. Estoup, M. Solignac // Molecular Ecology Notes. 2002. - Vol.2. - P. 253-255.
70. Fravel, D. R. Role of antibiosis in the biocontrol of plant diseases. / D. R. Fravel // Annu. Rev. Phytopathol. 1988. - 26. - P. 75-91.
71. Gachon, C. Real-time PCR monitoring of fungal development in Arabidopsis thaliana infected by Alternaria brassicicola and Botrytis cinerea. / C. Gachon, D. Saindrenan // Plant physiology and biochemistry. 2004. - Vol. 42. - P. 367-371.
72. Gullino, M.L. Attempts at biological control of postharvest diseases of apple. / M.L. Gullino, C. Aloi, M. Palitto, D. Benzi, A. Garibaldi // Meded. Fac. Landbouww. Rijksuniv. Gent. 1991. - 56. - P. 195-202.
73. Hammer, P. E. Four genes from Pseudomonas fluorescens that encode the biosynthesis of pyrrolnitrin. / P. E. Hammer, D. S. Hill, S. T. Lam, К. H. Van Pee, J. M. Ligon // Appl. Environ. Microbiol. 1997. - 63. - P. 2147-2154
74. Harman, G.E. Myths and dogmas of biocontrol-changes in perceptions derived from research on Trichoderma harzianum T-22. / G.E. Harman // Plant Dis. 2000. -84.-P. 377-393.
75. Hileman, B. Food supply safety: U.S. seeks to cut pesticide use. / B. Hileman // Chem. Eng. News. 1993 - 71. - P. 3-4.
76. Howell, C.R. Mechanisms employed by Trichoderma species in the biological control of plant diseases: the history and evolution of current concepts. / C.R. Howell //Plant Dis. 2003. - 87. - P. 4-10.
77. Ippolito, A. Control of postharvest decay of apple fruit by Aureobasidium pullulans and induction of defense responses. / A. Ippolito, A. E. Ghaouth, C. L. Wilson, M. Wisniewski // Postharvest Biology and Technology. 2000. - 19. - P. 265-272.
78. Ippolito, A. Impact of preharvest application of biological control agents on postharvest diseases of fresh fruits and vegetables. / A. Ippolito, F. Nigro // Crop Protection. 2000. - 19. - P. 715-723.
79. Janisiewicz, W. J. Ecological diversity, niche overlap, and coexistence of antagonists used in developing mixtures for biocontrol of postharvest diseases of apples. / W. J. Janisiewicz // Phytopathology. 1996. - 86. - P. 473-479.
80. Jarvis, W.R. Botryotinia and Botrytis Species: Taxonomy, Physiology, and Pathogenicity: A Guide to the Literature. / W.R. Jarvis // Canada Department of Agriculture, Harrow, Ontario, Canada. 1977.
81. Jijakli, M.H. Characterization of an exo-L-l,3-glucanase produced by Pichia anomala strain K, antagonist of Botrytis cinerea on apples. / M.H. Jijakli, P. Lepoivre // Phytopathology. 1998. - 88 (4). - P. 335-343.
82. Kapat, A. Effect of two isolates of Trichoderma harzianum on the activity of hydrolytic enzymes produced by Botrytis cinerea. / A. Kapat, G. Zimand, Y. Elad // Physiol. Mol. Plant Pathol. 1998. - 52. - P. 127-137.
83. Katz, E. The peptide antibiotics of Bacillus: chemistry, biogenesis and possible functions /Е. Katz, A. Demain // Bacteriol. Rev. 1977. - V. 41. - № 2. - P. 449-474.
84. Keel, C. Suppression of root diseases by Pseudomonas fluorescens CHA0: importance of the bacterial secondary metabolite 2,4-diacetylphloroglucinol. / C.
85. Keel, U. Schnider, M. Maurhofer, С. Voisard, D. Burger, D. Haas, G. Defago I I Mol. Plant-Microbe Interact. 1992. - 5. - P. 4-13.
86. Kovach, J. Using honey bees to disseminate Trichoderma harzianum to strawberries for Botrytis control. / J. Kovach // Integrated Pest Management Program Cornell University. 2004. - 6 p.
87. Leibinger, W. Control of postharvest pathogens and colonization of the apples surface by antagonistic micro-organisms in the field. / W. Leibinger, B. Breuker, M. Hahn, K. Mendgen // Phytopathology. 1997. - 87. - P. 1103-1110.
88. Leifert, C. Antibiotic production and biocontrol activity by Bacillus subtilis CL27 and Bacilluspumilus CL45. / C. Leifert, H. Li, S. Chidburee, S. Hampson, S. Workman // J. Appl. Bacteriol. 1995. - 78. - P. 97-108.
89. Lima, G. Activity of the yeasts Cryptococcus laurentii and Rhodotorula glutinis against post-harvest rots on different fruits. / G. Lima, F. De Curtis, R. Castoria, V. De Cicco. // Biocontrol Sci. Technol. 1998. - 8. P. 257-267.
90. Lima, G. Effectiveness of Aureobasidium pullulans and Candida oleophila against postharvest strawberry rots. / G. Lima, A. Ippolito, F. Nigro, M. Salerno // Postharvest Biol. Technol. 1997. - 10. - P. 169-178.
91. Maksimova, O.L. Defense mechanism of Botrytis cinerea against 2.4-Diacetylphloroglucinol, an antibiotic produced by Pseudomonas fluorescens. / O.L. Maksimova // MsC Thesis. Wageningen University. - 2004. - 46 p.
92. Marbach, I. Molecular properties of extracellular Botrytis cinerea laccase. / I. Marbach, E. Harel, A.M. Mayer // Phytochemistry. 1984. - 23. - P. 2713-2717.
93. March, J.C. Quorum sensing and bacterial cross-talk in biotevhnology / J.C. March, W.E. Bentley //Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 2005. - V. 21. - P. 319-346.
94. Masih, E. I. Can the grey mould disease of the grape-vine be controlled by yeast? / E. I. Masih, I. Alie, B. Paul // FEMS Microbiology Letters. 2000. - 189. - P. 233237.
95. Masih, E.I. Characterisation of the yeast Pichia membranifaciens and its possible use in the biological control of Botrytis cinerea, causing the grey mould disease of grapevine. / E.I. Masih, S. Slezack-Deschaumes, I. Marmaras, E. A. Barka, G.
96. Vernet, С. Charpentier, A. Adholeya, B. Paul. // FEMS Microbiology Letters. 2001. -202.-P.227-232.
97. Mavrodi, D. V. A seven-gene locus for synthesis is of phenazine-l-carboxylic acid by Pseudomonas fluorescens 2-19 J D. V. Mavrodi, V. N. Ksenzenko, R. F. Bonsall, R. J. Cook, A. M. Boronin, L. S. Thomashow // J. Bacteriol. 1998. - 180. -P. 2541-2548.
98. Miller M.B. Quorum sensing in bacteria / M.B. Miller, B.L. Bassler // Annu. Rev. Microbiol. 2001. - V. 55. - P. 165-199.
99. Milling, R.J. Mode of action of the anilinopyrimidine fungicide pyrimethanil: Effects on enzyme secretion in Botrytis cinerea. / R.J. Milling, C.J. Richardson // Pestic. Sci. 1995. - 45. - P. 43-48.
100. Paul, B. Biological control of Botrytis cinerea causing grey mould disease of grapevine and elicitation of stilbene phytoalexin (resveratrol) by a soil bacterium. / B.
101. Paul, A. Chereyathmanjiyil, I. Masih, L. Chapuis, A. Benoit // FEMS Microbiol. Lett. 1998.- 165.-P. 65-70.
102. Paul, B. Suppression of Botrytis cinerea causing gray mould disease of grapevine (Vitis vinifera), and its pectinolytic activities by a soil bacteria. / B. Paul, I. Girard, T. Bhatnagar, P. Bouchet // Microbiol. Res. 1997. - 152. - P. 413-420.
103. Paulitz, Т. C. Biological control in greenhouse systems. / Т. C. Paulitz, R. R. Belanger // Annu. Rev. Phytopathol. 2001. - 39. - P. 103-133.
104. Pezet, R. Purification and characterization of a 32-kDa laccaselike stilbene oxidase produced by Botrytis cenerea. Pers.: Fr. / R. Pezet // FEMS Microbiol. Lett. -1998.- 167.-P. 203-208.
105. Piano, S. Characterization of the biocontrol capability of Metschnikowia pulcherrima against Botrytis postharvest rot of apple. / S. Piano, V. Neyrotti, Q. Migheli, M.L. Gullino // Postharvest Biol. Technol. 1997. - 11. - P. 131-140.
106. Punja, Z. K. Using fungi and yeasts to manage vegetable crop diseases. / Z. K. Punja, R. S. Utkhede // TRENDS in Biotechnology. 2003. - Vol.21.
107. Raaijmakers, J. M. Effect of population density of Pseudomonas fluorescens on production of 2,4-diacetylphloroglucinol in the rhizosphere of wheat. / J. M. Raaijmakers, R. E. Bonsall, D. M. Weller // Phytopathology. 1999. - 89. - P. 470475.
108. Raaijmakers, J. M. Frequency of antibiotic-producing Pseudomonas spp. in natural environments. / J. M. Raaijmakers, D. M. Weller, L. S. Thomashow // Appl. Environ. Microbiol. 1997. - 63. - P. 881-887.
109. Reyes, M. E. Q. Microbial antagonists control postharvest black rot of pineapple fruit. / M. E. Q. Reyes, K. G. Rohrbach, R. E. Paull // Postharvest Biology and Technology. 2004. - 33. - P. 193-203.
110. Roberts, R.G. Postharvest biological control of gray mold of apples by Cryptococcus laurentii. / R.G. Roberts // Phytopathology. 1990a. - 80. - P. 526-530.
111. Rogers, B. The pleitropic drug ABC transporters from Saccharomyces cerevisiae. / B. Rogers, A. Decottignies, M. Kolaczkowski, E. Carvajal, E. Balzi, A. Goffeau // J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 2001. - 3. - P. 207-14.
112. Rosenberger, D.A. Postharvest fungicides for apples: development of resistance to benomyl, vinclozolin, and iprodione. / D.A. Rosenberger, F.W. Meyer // Plant Dis. -1981.-65.-P. 1010-1013.
113. Rosslenbroich, H.-J. Botrytis cinerea history of chemical control and novel fungicides for its management / H.-J. Rosslenbroich, D. Stuebler // Crop Protection. -2000. -Vol. 19.-P. 557-561.
114. Sansone, G. Control of Botrytis cinerea strains resistant to iprodione in apple with rhodotorulic acid and yeasts. / G. Sansone, I. Rezza, V. Calvente, D. Benuzzi, M. I. Sanz de Tosetti // Postharvest Biology and Technology. -2005. 35. - P. 245-251.
115. Schena, L. Genetic diversity and biocontrol activity of Aureobasidium pullulans isolates against postharvest rots. / L. Schena, A. Ippolito, T. Zahavi, L. Cohen, F. Nigro, S. Droby // Postharvest Biology and Technology. 1999. - 17. - P. 189-199.
116. Schoonbeek, H. The ABC transporter BcatrB affects the sensitivity of Botrytis cinerea to the phytoalexin resveratrol and the fungicide fenpiclonil. / H-J. Schoonbeek, G. Del Sorbo, M. A. De Waard // Mol. Plant-Microbe Interact. 2001. -14.-P. 562-571.
117. Schoonbeek, H-J. Fungal ABC transporters and microbial interaction in natural environments. / H-J. Schoonbeek, J.M. Raaijmakers, M.A. De Waard // Molecular Plant- Microbe Interaction. 2002. - Vol. 15. - № 11. - P.l 165-1172.
118. Schouten, A. Resveratrol acts as a natural profungicide and induces self-intoxication by a specific laccase. / A. Schouten, L. Wagemakrs, F.L. Stefanato, R.M. Van der Kaaij, J.A.L. van Kan // Molecular Microbiology. 2000. - Vol.43 (4).- P. 883-894.
119. Schouten, A. Self-protection of Botrytis cinerea against biocontrol agents. / A. Schouten, G.C.M van den Berg, Y. Cuesta Arenas, O. Maksimova, J.M Raaijmakers // Gewasbescherming. 2004. - Vol. 35 (6). - P.327.
120. Scott, D. H. Strawberries. Advances in Fruit Breeding. / D. H. Scott, F. J. Lawrence // N.Y. University press. -1975. 71 p.
121. Shuman, J. L. Actigard may reduce disease in strawberry. / J. L. Shuman // Virginia vegetable, small fruit and specialty crops. 2003. - Volume 2. - Issue 2. - 1-3p.
122. Silo-Suh, L.A. Biological activities of two fungistatic antibiotics produced by Bacillus cereus UW85. / L.A. Silo-Suh, B.J. Lethbridge, S.J. Raffel, H. He, J. Clardy, J. Handelsman // Appl. Environ. Microbiol. 1994. - 60. - P. 2023-2030.
123. Smilanick, J.L. Strategies for the isolation and testing of biocontrol agents. / J.L. Smilanick // In: Wilson, C.L., Wisniewski, M.E. (Eds.), Biological Control of Postharvest Diseases: Theory and Practice. CRC Press, Boca Raton. 1994. - P. 2542.
124. Spotts, R.A. Populations, pathogenicity and benomyl resistance of Botrytis spp., Penicillium spp. and Mucor piriformis in packinghouses. / R.A. Spotts, L.A. Cervantes //Plant Dis. 1986. - 70. - P. 106-108.
125. Staples, R. Putative virulence factors of Botrytis cinerea acting as a wound pathogen. / R. Staples, A. Mayer //FEMS Microbiol. Lett. 1995. - 134. - P. 1-7.
126. Steel, C.C. Catalase activity and sensivity to the fungicides, iprodione and fludioxonil in Botrytis cinerea / C.C. Steel // Lett. Appl. Microbiol. 1996. - 22. - P. 335-338.
127. Sutton, J.C. Epidemiology and management of Botrytis leaf blight of onion and gray mould of strawberry: a comparative analysis. / J.C. Sutton // Can. J. Plant. Pathol.-1990.- 12. -P 100-110.
128. Suty, A. Fenhexamid- sensitivity of Botrytis cinerea'. Determination of baseline sensitivity and assessment of the risk of resistance. / A. Suty, R. Pontzen, K. Stenzel // Pflanzenschutz-Nachrichten Bayer. 1999. - 52. - P. 145-157.
129. Thomas, E. Phytotoxicity of Pseudomonas chlororaphis 06: role of phenazines and implications for biocontrol. / E. Thomas // MS Thesis. Utah State University. -1998.
130. Thomashow, L.S. Production of the antibiotic phenazine-l-carboxylic acid by fluorescent Pseudomonas species in the rhizosphere of wheat. / L.S. Thomashow, D.M. Weller, R.F. Bonsall, L.S. Pierson // Appl Environ Microbiol 1990. 56. - P. 908-12.
131. Urban, M. An ATP-driven efflux pump is a novel pathogenicity factor in rice blast disease. / M. Urban, T. Bhargava, J. E. Hamer // Eur. Mol. Biol. Organ. J. 1999. -18.-P. 512-521.
132. Vermeulen, T. The ABC transporter BcatrB from Botrytis cinerea is a determinant of the activity of the phenylpyrrole fungicide fludioxonil. / T. Vermeulen, H. Schoonbeek, M. A. De Waard // Pest Manage. Sci. 2001. - 57. - P. 393-402.
133. Vinas, I. Biological control of major postharvest pathogens on apples with Candida sake. / I. Vinas, J. Usall, N. Teixido, V. Sanchis // International Journal of Food Microbiology. 1998. - 40. - P. 9-16.
134. Viterbo, A. Selective mode of action of cucurbitacin in the inhibition of laccase formation in Botrytis cinerea. / A. Viterbo, R.C. Staples, B. Yagen, A.M. Mayer // Phytochemistry. 1994. - 35. -P. 1137 1142.
135. Whipps, J. M. Microbial interactions and biocontrol in the rhizosphere. / J. M. Whipps // J. Exp. Bot. 2001 - 52. - P. 487-511.
136. Whipps, J.M. Success in biological control of plant pathogens and nematodes by microorganisms. / J.M. Whipps, K.G. Davies // See Ref. 2001. - 31 p.
137. Whitehead, N.A. Quorum-sensing in Gram negative bacteria. / N.A. Whitehead, A.M.L. Barnard, H. Slater N.J.L. Simpson, G.P.C. Salmond // FEMS Microbiol. Rev. -2001.-25.-P. 365-404.
138. Woo, S.L. Disruption of the ech42 (endochitinaseencoding) gene affects biocontrol activity in Trichoderma harzianum PI. / S.L. Woo // Mol. Plant Microbe Interact. 1999. - 12. - P. 419^129.
139. Wubben, J.P. Cloning and characterisation of endopolygalacturonase genes from Botrytis cinerea / J.P. Wubben, W Mulder, A. Ten Have, J. A.L. van Kan, J. Visser // Applied and Environmental Microbiology. 1999. - Vol. 65 (4). - P. 1596-1602.
140. Zhang, H. Biological control of postharvest diseases of peach with Cryptococcus laurentii. / H. Zhang, X. Zheng, T. Yu // Food Control. 2007. - 18. - P. 287-291.
141. Zheng, X. Effects of Cryptococcus laurentii (Kufferath) Skinner on biocontrol of postharvest decay of arbutus berries. / X. Zheng, H. Zhang, Y. Xi // Bot.Bull. Acad. Sin.-2004.-45.- P. 55-60.
142. Zwiers, L.-H. Characterization of the ABC transporter genes MgAtrl and MgAtr2 from the wheat pathogen Mycosphaerella graminicoh. / L.-H. Zwiers, M. A. De Waard // Fungal Genet. Biol. 2000. - 30. - P.l 15-125.
-
Храбрых, Олеся Леонидовна
-
кандидата биологических наук
-
Краснодар, 2007
-
ВАК 06.01.11
- Экологически безопасные способы защиты растений земляники садовой от комплекса вредных организмов
- Грибы рода Botrytis Micheli (Fungi, Deuteromycota)
- Микозы ягод земляники садовой и интегрированные пути борьбы с ними в условиях средней России
- Использование бактерий-антагонистов против болезней томата в защищенном грунте
- Вопросы защиты ягодных культур от корневых и стеблевых гнилей при производстве посадочного материала
