Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Микроинъекции ДНК онкогенных вирусов в полярную плазму ранних эмбрионов Drosophila melanogaster : эмбриологические и генетические эффекты

ВАК РФ 03.00.11, Эмбриология, гистология и цитология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Набирочкин, Сергей Дмитриевич

Введение

Глава I. Обзор литературы.

1.1. Факторы, определяющие ядерную детерминацию в раннем развитии эмбрионов Drosophila melanogaster

1.2. Эксперименты по генетической трансформации'животных

Глава П. Материалы и методы

Список сокращений

Глава Ш. Результаты

3.1. Развитие полярных клеток ранних эмбрионов Drosophila melanogaster в норме и при экспериментальна воздействиях (после коротковолнового ультрафиолетового облучения и микрошъекций воды и раствора ДНК)

3.2. Инъекции интактного вируса саркомы Рауса и клонированных фрагментов ретровирусных ДНК в ранние эмбрионы Drosophila melanogaster

3.3. Микроинъекции ДИК аденовируса Sa7 в ранние эмбрионы Drosophila melan ogaster

Глава 1У. Обсуждение полученных результатов

Выводы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Микроинъекции ДНК онкогенных вирусов в полярную плазму ранних эмбрионов Drosophila melanogaster : эмбриологические и генетические эффекты"

Одна из важнейших задач современной эмбриологии - научиться управлять процессами индивидуального развития, а один из способов решения этой задачи - оказание направленного воздействия на генетический аппарат эмбриона.

В последнее время, благодаря разработке метода микроинъекций экзогенных ДНК в зиготы и ранние эмбрионы млекопитающих, амфибий и насекомых, стало возможным получение трансгенных линий животных, несущих в геноме определенные, введенные извне генетические элемент ты,функционирование которых в новом генотипическом окружении может служить удобной экспериментальной моделью для изучения сложных ядерно-цитоплазматических отношений, определяющих основные закономерности эмбрионального развития животных ( Fox et. al., 1971; Газарян,Языков,1978; Gordon et.al.,1980; Газарян и др.,1981; Rusconi,Shaffner,1981;Etkin,Roberts,1983).

В нашей стране целенаправленные работы по микроинъекциям вирусов и клонированных ДНК в яйцеклетки животных начали проводится на кафедре эмбриологии МГУ в рамках научной программы "Эмбрио-генетика". В первых работах, выполненных Шахбазяном А.К. в 1978 -1979 г.г., было продемонстрировано мутагенное действие вируса саркомы Рауса, инъецированного в ранние эмбрионы Drosophila (Газарян и др.,1981; ШахбазянД982). Параллельно аналогичные исследования проводились за рубежом ( Rubin,Spradling,1982jSpradling, Rubin,1982).

В целом, сейчас можно выделить два взаимосвязанных направления работ в этой области - обогащение геномов животных новыми генами (расширение границ рекомбинационных процессов) и избирательное воздействие на структуру и функции генов (направленный мутагенез). В обоих случаях используется один и тот же методический подход: микроинъекции определенных последовательностей ДНК в яйцеклетки, зиготы ж ранние эмбрионы животных.

Целью нашей работы являлось использование метода микроинъекций чужеродных генов в ранние эмбрионы D.melanogaster для изучения изменений, возникающих в эмбрионах под их влиянием, и генетических обусловленных ими изменений в развитии имагинальных органов.

Ранее в нашей лаборатории введением вируса саркомы Рауса в центральную часть эмбрионов была получена мутация еаг»нарушающая развитие глазо-антеннального диска (Шахбазян,1982).

В связи с этим, в задачи настоящей работы входило:

1) совершенствование метода микроинъекций и повышение эффективности и направленности мутагенного действия чужеродных ДНК путем а Использования наряду с интактным вирусом клонированной ДНК онкогенных вирусов; б) их введения непосредственно в полярную плазму на стадии формирования полярных клеток; в) использования дополнительных факторов дестабилизации эмбрионального генома (коротковолнового ультрафиолетового облучения); г) использования генетически нестабильных линий дрозофилы в качестве реципиента;

2) получение большого числа новых мутаций, затрагивающих преимущественно, развитие глазо-антеннального и крылового имагинальных дисков;

3) изучение характера проявления мутаций в имагинальных дисках личинок.

Выбор ДНК онкогенных вирусов был продиктован следующими обстоятельствами. ДНК онкогенных вирусов,как известно, обладают естественной способностью вступать в определенные структурно-функциональные отношения с геномом пермиссивной•животной клетки и,реплицируясь, передаваться в ряду клеточных поколений. Наряду с этим, вирусные ДНК могут реплицироваться и в клетках, не являющихся для них пермиссивной системой. Так, например, ДНК аденовируса обезьян Sa7 обладает высокой трансформирующей и мутагенной активностями В Культуре КЛеТОК ДРУГИХ МЛеКОПИТаюЩИХ ( Visser et.al.,1981;De Leij et.al,,1982;Jochemsen et.al.,1982;Kowalski,Denhardt,1982),

Ретровирусы бнли использованы наш, прежде всего, потому,что их кДНК как по своей структуре, так и по поведению напоминает транспозонподобные элементы, найденные у низших эукариот, в том числе И у дрозорЛЫ ( Majors et.al., 1981 ;Shimotohno,Temin, 1981 ; Skalka et.al.,1981;Varmus et.al.,1981;Grace et.al.,1982).

Нам представлялось интересным выяснить также, насколько зависит характер мутагенного действия вирусных ДНК от условий эксперимента, в особенности, от подбора линии-реципиента и от специальной подготовки яиц к микроинъекциям, иными словами, влияет ли генетический фон на специфичность мутагенеза, опосредованного онко-генными ДНК.

Заключение Диссертация по теме "Эмбриология, гистология и цитология", Набирочкин, Сергей Дмитриевич

ВЫВОДЫ

1. На основе техники микроинъекций ДНК онкогенных вирусов в полярную плазму эмбрионов D.melanogaster разработан высокоэффективный метод массового получения направленных мутаций, нарушающих развитие имагинальных органов.

2. Показано, что основным изменением морфогенеза имагинальных дисков личинок полученных мутантных линий является увеличение масштабов клеточной гибели.

3. Проведено сравнение мутагенной активности rsv , клеточных,онко-вирусных и плазмидных ДНК; показано, что а) за эффективность мутагенного действия ДНК rsv ответственны концевые повторы (ltr); б) ДНК аденовируса Sa7 обладает такой же эффективностью мутагенного действия, как и ДНК rsv; в) ретровирусная и аденовирусная ДНК индуцируют мутации в разных группах локусов.

4. Показано, что облучение зародышей Drosophila всеми использованными дозами УФ-света на ст.3-4 и 7-8 снижает частоту генных рекомбинаций, и лишь при облучении зародышей на ст.12 (доза 0,005 дж/см2 )частота рекомбинации повышается на 75% без индукции видимых мутаций; сочетание УФ-облу$ения эмбрионов в этом режиме с введением ДНК онкогенных вирусов повышает частоту возникновения мутаций в 3-4 раза.

5. Большая часть мутаций и мутантных линий, получаемых с помощью онкогенных ДНК, характеризуется значительной (нередко "взрывной") нестабильностью, свидетельствующей об инсерционной природе описываемых мутаций.

6. Вводимые в эмбрионы последовательности онковирусной ДНК во многих случаях сохраняются и передаются в ряду поколений мутантных мух.

7. Впервые показано, что транспозиция мобильного элемента (на примере copia -элемента) может быть вызвана внешним агентом (ДНК).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Набирочкин, Сергей Дмитриевич, Москва

1. Александров Ю.Н., Голубовский М.Д., Роль вирусов и экзогенной ДНК в естественном мутационном процессе: экспериментальные исследования на дрозофиле, Генетика, 1983, т.19, В II, с.1818-1827.

2. Амбарцумян Н.С., Татосян А.Г., Ениколопов Г.Р., Молекулярное клонирование фрагментов ДНК вируса саркомы Рауса, Мол.биол., 1982, вып.6, C.II83-II88.

3. Восток К., Саммер Э., Хромосома эукариотической клетки, 1981, М., Мир, 598с.

4. Бреслер С.Е., Ланцов В.А., Тамм.С.Э., Запоминание транспозона-ми места предшествующей интеграции, Докл. АН СССР, 1982, т.267, В 6, с.1468-1471.

5. Бужневская Т.И., Лукаш Л.Л., Вирусиндуцированный мутагенез в клетках млекопитающих, Журнал общ.биол., 1980, т.41, !?- 6,с.918-923.

6. Газарян К.Г., Хунг Н.М., Трансплантация ядер соматических клеток в яйца костистых рыб (на примере вьюнаMisgurnis foesilis), Докл. АН СССР, 1978, т.240, В 3, с.725-728.

7. Газарян К.Г., Языков A.A., Современная эмбриология на пути к генетической инженерии животных, Вестн.Моск.Университета, сер. Биология, 1978, вып.З, с.36-44.

8. Газиев А.И., Ферменты в пострадиационном метаболизме ДНК, в кн.: Радиационная биохимия, 1975, М,, Атомиздат, с.41-82.

9. Георгиев Г.П., Ильин Ю.В., Рысков А.П., Крамеров Д,А., Мобильные диспрргированные генетические элементы и их возможное отношение к канцерогенезу, Генетика, 1981, т.17, .,' 2, 222-232.

10. Герасимова Т.И., Генетическая нестабильность у D.melanogaster. Мутагенное действие MR -фактора, инсерционные мутации в локусе cut , Генетика, 1982а, т.18, }>. 3, с.454-461.

11. Герасимова Т.И., Мутантные переходы нестабильных аллелей в локусе cut у Drosophila melanogaster , Докл. АН СССР, 19826, т.266, J3 3, с.722-725.

12. Гершензон С.М., Зильберман P.A., Левочкина С.А., Вызывание мутаций у Drosophila тимонуклеиновои кислотой, Журнал общ. биол., 1948, т.9, с.69-72.

13. Гершензон С.М., Александров Ю.Н., Малюта С.С., Мутагенное действие ДНК и вирусов у дрозофилы, 1975, Наукова думка, Киев, 180с.

14. Гершензон С.М., Александров Ю.Н., Мутагенное действие природных и синтетических полинуклеотидов и проблема направленных мутаций, Журнал общ.биол., 1982, т.Х Ш, Г-? 6, с.747-762.

15. Гердон Дж., Регуляция функции генов в развитии животных, 1977, М., Мир.

16. Гинтер Е.К., Кузин Б.А., Готовность к дифференциации глазных и антенальных имагинадьных дисков D.melanogasterразных возрастов, Онтогенез, 1970, т.1, гё 5, с.492-500.

17. Гинтер EJC., Булыженков Б.Э., Детерминация имагинальных дисков дрозофилы и её генетическая регуляция, в кн.: Дрозофила в экспериментальной генетике, 1978, Новосибирск, Наука, с.4-41.

18. Дубинин Н.П., Потенциальные изменения в ДНК и мутации, 1973, М., Наука.

19. Дэвидсон Э., Действие генов в раннем развитии, Москва, Мир, 1972.

20. Еестяников В.Д., Репарация ДНК и её биологическое значение, 1979, Л., Наука.

21. Захаров И.К., Голубовский М.Д., Влияние температуры и У-хро-мосомы на проявление и частоту совместного мутирования двух нестабильных генов у D.melanogaster , Генетика, 1980, т.У1,9, с.1603-1611.

22. Захаров И.К., Юрченко Н.И., Генетическая нестабильность. Анализ супермутабильных аллелей гена cut У D.melanogaster» Ре-нетика, 1982, т.18, JS 10, с.1673-1682.

23. Ильин Ю.В., Чуриков H.A., Любомирская Н.В., Георгиев Г.П., Множественные рассеянные по хромосомам структурные гены Dro-sophila melanogaster с варьирующей локализацией. Сообщение I.

24. Общая характеристика трех отбраиных семейств клонированных генов, Генетика, 1979, т.ХУ, 1?. 5, с.775-784.

25. Ильина Т.С., Механизм генетической транспозиции, Генетика, 1981, т.17, J5 I, с.7-32.

26. Какпаков В.Т., Питательные среды дрозофилы, в кн.: Проблемы генетики в исследованиях на дрозофиле, 1977, Наука, с.225-230.

27. Киселев Ф.Л., Галецкий С.А., Мазуренко Н.И., Асанов A.A., Зборовская Н.Б., Тополь Л.В., Молекулярно-биологические критерии функционирования генома вируса саркомы Рауса в трансформированных крысиных клетках ХС, Мол.биол., 1982, т.16, вып.1,с.66-76.

28. Лакин Б.А., Биометрия, 1980, М., Высш.школа, 130с.

29. Ланцов В.А., Рекомбинация у бактерий, Генетика, 1977, т.13, с.710-734.

30. Левин В.Л., Козлова М.А., Фотореактивация цитоплазматических повреждений у эмбрионов дрозофилы, облученных на стадиях мей-оза и зиготы УФ-лучами разной длины волн, Цитология, 1977,т.19, У? 4, с.434-437.

31. Левин В.Л., Самойлова К.А., Современное состояние проблемы фотореактивации, в кн.: Фотобиология животной клетки, 1979, Л., Наука, с.95-105.

32. Левин В.Л., 0 фотореактивации клеток эмбрионов дрозофилы, Цитология, 1982, т.ХХ1У, 1" 3, с.311-315.

33. Мглинец В.А., Гомеозисные мутации у дрозофилы и проблемы генетики развития, в кн.: Дрозофила в экспериментальной генетике, 1978, Новосибирск, Наука, с.41-72.

34. Парибок В.П., Томилин Н.В., Точность работы эндонуклеазы из Micrococcus luteus , участвующей в вьтщеплении димеров пиримиди-новых оснований из ДНК, Докл. АН СССР, 1970, т.195, с.489-492.

35. Парнес В.А., Рапопорт И.А., Левина Д.М., Генетический анализ действия вируса саркомы Рауса (штамм Шмидт-Рупина) на мутации у дрозофилы, Докл. АН СССР, 1968, т.182, с. 953-956.

36. Пасюкова Е.Г., Генетическая нестабильность у Drosophila mela-nogaster , Генетика, 1981, т.17, ft 4, с.595-608.

37. Рапопорт И.А., Парнес В.А., Левина Д,М., Влияние вируса саркомы Рауса (штамм Бриана) на мутации у дрозофилы и отношение онкогенеза к мутациям, Докл. АН СССР, 1968, т.183, с.1097-2000.

38. Ромейс В., Микроскопичеекая техника, 1953, М., ИЛ, с.324-325.

39. Сахарова НЛО., Шахбазян А.К., Карчевская Н.С., Газарян К.Г., Характеристика мутантных линий дрозофилы с.нарушениями развития глазо-антенных дисков. П. Аномалии в развитии глазных дисков, Онтогенез, 1983, т.14, Дз 2, с.137-145.

40. Строева О.Г., Никитина Л.А., Пересадка ядер амфибий и её значение для исследования проблемы дифференцировки, Журнал общ. биол., I960, т.21, 3* 5, с.335-346.

41. Томилин Н.В., Энзимология процессов репарации ДНК, Цитология, 1977, т.XIX, c.I086-II0S.

42. Хесин Р.Б., Непостоянство генома, 1984, М., Наука, 472с.

43. Хунг Н.М., Газарян К.Г., Пересадка ядер соматических клеток • в активированные яйца костистых рыб (на примере вьюна Misgur-nis foesilis ), Онтогенез, 1978, т.9, tf I, с.85-90.

44. Чуриков Н.А., Ильин Ю.В., Новый принцип организации генетического материала у эукариот: характеристика гена Dm 225-представителя множественных рассеянных потхромосомам генов дрозофилы, Докл. АН СССР, 1978, т.239, й 6, с.1486-1489.

45. Шахбазян А.К., Аканасова JI.A., Кафиани К.А., Газарян К.Г., Метод микроинъекций и пересадки ядер в яёцо дрозофилы, Онтогенез, 1981, т. 12, JS 3, с.230-232.

46. Allie C.D., Underwood E.M., Caulton J.M., Mahowald A.P., Pole cells of Drosophila melanogaster in Culter, Dev.Biol., v.69, p.451-465, 1979.

47. Belyaeva E.Sp., Pasyukova E.G., Gvozdev V.A., Ilyin Yu.V., Kajdanov L.Z., Transpositions of Mobile Dispersed Genes in Drosophila melanogaster and Fitness of Stocks, Mol.Gen.Genet., 1982, v.185, p.324-328.

48. Bender W., Akam M., Karch F., Beachy P.A., Peifer M., Spierer P», Lewis E.B., Hognes D.S., Molecular Genetics of the Bithorax Complex in Drosophila melanogaster, Science, 1983» v.221, p.23-29.

49. Berg R., Engels W.R., Kreber R.A., Site-specific X-chromosomes rearrengements from hybrid dysgenesis in Drosophila melanogaster, Science, v.210, 1980, p.427-429.

50. Bingham P.M., Judd B.H., A copy of the copia transposable element is very tightly linked to the wa allele at the white locus of Drosophila melanogaster, Cell, 1981, v.25, p.705-711.

51. Bingham P.M., Eidwell M.G., Rubin G.M., The molecular basis of P-M hybrid dysgenesis : the role of the P-element, a P -strain-specific transposon family, Cell, 1982, v.29, p.995-1004.

52. Bimberg M.G., Evans R.M., Accelerated growth of mice from eggs microinjected with methallothionein-growth hormone fusion genes, J.Cell.Biochem., Suppl., 1983» N7A, p.136.

53. Bridges B.A., Sedgwick S.G., Effect of photoreactivation on the filling of gaps in DHA synthesized after exposure of gaps of E. coli to UV-light, J.Bacterid., 1974, v. 117, p. 1077 -1081.

54. Briggs R., King T.J., Transplantation of living nuclei from blastula cells into enucleated frogs eggs, Proc.Hat.Acad.Sci. USA, v.38, 1952, p.455-463.

55. Brinster R.L., Chen H.Y., Trumbauer M., Senear A.W., Warren R., Palmi ter R.D., Somatic expression of Hrepes thymidine kinase in Mice following injection of a Fusion gene into Eggs, Cell, 1981, v.27, p.223-231.

56. Brinster R.L., Chen H.Y., Warren R., Sarthy A., Palmiter R.D., Regulation of methallothionein-thymidine Kinase fusion plas-mids injected into mouse eggs, Nature, 1982, v.296, p.39-42.

57. Brown T.C., Bovd J.B., Postreplication repair-defective mutants of Drosophila melanogaster fall into two classes, Mol.Gen.Genet., 1981, v. 183, p.356-362.

58. Bucheton A., Bregliano J.C., The I-R System of Hybrid Dysgenesis in Drosophila melanogaster, Biol.Cell., 1982, v.46, p. 123-131.

59. Bryant P.G., Regeneration and duplication following operations in situ on the imaginal discs of Grosophila malanogaster, Dev. Biol., 1971, v.26, p.606-615.

60. Bryant P.G., Girton J.R., The use of cell lethal mutations in the study of Grosophila development, Dev. Biol., 1980, v.77» p.233-243.

61. Calos M.P., Miller J.H., Transposable Elements, Cell, v.20, 1980, p.679-695.

62. Chan L.N., Gehring W., Determination of blastodermal cells in Drosophila melanogaster, Proc.Nat.Acad.Sci.USA, 1971, v.68, p. 2217-2221.

63. Clark W.C., Russel M.A., The correlation of lysosomal activity and adult phenotype in cell-lethal mutant of Drosophila,Dev. Biol., 1977, v.57, p.160-173.

64. Colgan D.I., Somatic effects of hybrid dysgenesis in Drosophila melanogaster, Heredity, v.49, p.243-246, 1982.

65. Collins M., Rubin G.M., Structure of the Drosophila mutable allele, "white-crimson", and its white-ivory and wild-type derivates, Cell, 1*82, v.30, p.71-79.

66. Collins U., Rubin G.M., High-frequency precise excision of the Drosophila foldback transposable element, Nature, 1983, v.303, p.259-260.

67. Costantini P., Lacy E., Introduction of a rabbit -globin gene into the mouse germ line, Nature, 1981, v.294, p.92-94.

68. Costantini F., Lacy E., Gene trasfere into the mouse germ line,

69. Cell.Physiol., Suppl., 1982, v.1, p.219-225.

70. Counce S.J., The Analysis of insect Embryogenesis, in "Annual Review of Entomology", 1961, Palo Anto, California, 6, p. 295-312.

71. Daili O.P., Cuttitta P.P., The absense of DNA photoreactiva-tion enzyme in yeast mitochondria, Biochem.Biophys.Acta, 1976, v.444, p.375.

72. Davies R.J.H., The ultraviolet photochemistry of nucleic acids and their components, Photochem. and Photobiol., 1980, v.34, p. 623-626.

73. Be Leij L., Smets L.A., Jochemsen H., van der Eb A.J., Tumor-and growth-reli ted membrane changes caused by transformation with different fragments of the adenovirus 12 genome, Virology, 1982, v.122, p.210-214.

74. Dimario P.J., Hennen S., Analysis of the Drosophila female sterile mutant tiny by means of pole cell transplantation,J. Ezp.Zool., 1982, v.221, p.219-224.

75. Dunsmuir P., Brorein W.J., Simon J.M.A., Rubin G.M., Insertion of the Drosophila transposable element copia generates a 5 base pair duplication,Cell, 1980, v.21,p.575-579.

76. Fox A.S., Yoon S.B., Duggleby W.F., Gelbert S.M., Genetic transformation in Drosophila, in "Informative Molecules in Biological Systems", 1971, H.-Y., p.313-332.

77. Fox A.S., Parzen S.D., Salverson H., Yoon S.B., Gene transfer in Drosophila melanogaster : genetic transformation induced by the DNA of transformed stocks, Genet. Res., 1975, v,26,p. 137-147. ^

78. Fox A.S., Kreber R.A., Liu C.P., Yoon S.B., Recombination of recessive v+ transformants in Drosophila melanogaster, Genet. Res., 1976, v.28, p.215-230.

79. Fristrom D., Cellular degeneration in wing development of the mutant vestigial in Drosophila melanogaster, J.Cell. Biol., 1968, v.39, p.488-491.

80. Fristrom D., Cellular degeneration in the production of some mutant phenotypes in Drosophila melanogaster, Mol.Gener.Ge-net., 1969, v.103, p.363-379.

81. Gallwitz D., Kinetics of histone mRNA in the cytoplasm after inhibition of DHA replication in synchronised Hela cells, Nature, 1975, v.257, p.247.

82. Girton J.R., Bryant P.S., The use of cell lethal mutations in the Study of Drosophila development, Dev.Biol., 1980, v. 77, p.233-243.

83. Goldberg D., Posakony J.W., Maniatis T., Correct developmental expression of a cloned alcoholdehydrogenase gene transduced into the Drosophila Germ Line, Cell, 1983, v.34,p.59-79.

84. Gordon J.W., Scanges G.A., Plotkin D.S., Barbosa J.A., Ruddle F.H., Genetic transformation of mouse embryos by microinjection of purified DNA, Proc.Nat.Acad.Sci.USA, 1980, v. 77, p.7380-7384.

85. Gordon J.W., Ruddle F.H., Integration and Stable germ line transmission of genes injected into mouse pronuclei, Science, 1981, v.214, p.1244-1246.

86. Howell S.H., Stern H., The appearence of DNA breakage and repair activities in the synchronous meiotic cycle of Lilium, J.Mol.Biol., 1971, v.55, p.357-378.

87. Hunter J.R., Taylor J.H., Moser H.Y., Effect of UV-irradiation on eggs and larvae of Scomber japonicus during embryonic stage, Photochem. and Photobiol., 1979, v.29, p.325-338.

88. Jaenisch R., Germ line integration and Mendelian Transmission of the exogenous Moloney leukemia virus, Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1976, v.73, p.1260-1264.

89. Jaenisch R., Retroviruses and Embryogenesis : Microinjection of Moloney Leukemia Virus into Midgestation Mouse Embryos, Cell, 1980, v.19, p.181-188.

90. Jaenisch R., Jahner D., Nobis P., Simon 1«, Lohler J., Harbers K., Grotkopp D., Chromosomal Position and activation of retroviral genomes inserted into the germ line of mice, Cell, 1981, v.24, p.519-529.

91. Kaufmann B.P., Iddles M.K., Ectopic pairing in salivary gland chromosomes of Drosophila melanogaster, Portugaliae Acta Biol., 1963, v.7, p.225-248.

92. Kaufmann S.A., Heterotopic transplantation in the syncytial blastoderm of Drosophila : evidence for anterior and posterior nuclear commitments, W.Roux*Arch., 1980, v.189, p.135-145.

93. Kidd S., Lockett T.J., Young M.W., The Notch Locus in Drosophila melanogaster, Cell, 1983, v.34, p.421-433.

94. Kidwell M.G., Kidwell J.F,, Nei M., A case of high rate of spontaneous mutation affecting viability in Drosophila melanogaster, Genetics, 1973, v.75, p.133.

95. Kidwell M.G., Kidwell J.F., Sved J.A., Hybrid dysgenesis in

96. Drosophila melanogaster : A syndrome of abberant traits including mutation, Sterility, Hale recombination, Genetics,1977, v.86, p.813.

97. Kimble M., Sandstedt V., Light microscopic analysis of mei-osis and early cleavage in eggs from females homozygous foryj Jthe claret-nondisjunctional (ca ) mutation in Drosophila melanogaster, Genetics, 1981, v.97, p.57.

98. Kimble M., Church K., Meiosis and early cleavage in Drosophila melanogaster eggs : effects of the claret-nondisjunctional mutation , J.Cell.Sci., 1983, v.62, p.301-308.

99. Lavin M.F., Postreplication repair in mammalian cells after ultraviolet irradiation. A model, Biophys.J., 1978, v.23, p* 247-256.

100. Lawrence P.A., Green S.M., Johnston P., Compartmentalization and growth of the Drosophila abdomen, J.Embryo1.Exp.Morphol.,1978, v.43, p.233-245.

101. Lefevre G., A photographic representation and interpretation of the polytene chromosomes of Drosophila melanogaster salivary glands, in "The genetics and biology of Drosophila", (Ashburner ed.), 1976, N.-Y., v.1a, p.31-36.

102. Levis R., Rubin G.M., The mutable w Dzl mutation of Drosophila is caused by a 13 kilobase insertion that is imprecisely excised in phenotypic revertants, Cell, 1982» v.30, p.543-550.

103. Lohs-Shardin M., Sander K., Mutants altering embryonic pattern formation in Drosophila, Verh.Dtsch.Zool.Ges.73, 1980, Jahresversamml.Berlin,26-31 Mai,Stuttgart,N.-Y., p.282.

104. Mahowald A.P., I. Fine structure of Pole cells and Polar Granules in Drosophila melanogaster, J.Exp.Zool., 1962, v. 151, p.201-215.

105. Mahowald A.P., Polar Granules of Drosophila. Ultrastructural changes during early embryogenesis, J.Exp.Zool., 1968, v. 167, p.237-262.

106. Mahowald A.P., Polar Granules of Drosophila. The Continuity of Polar Granules during the life cycle of Drosophila, J.Exp. Zool., 1971a, V.176, p.329-344.

107. Mahowald A.P., Polar Granules of Drosophila. Cytochemical studies showing loss of RNA from Polar Granules during early stages of embryogenesis, J.Exp.Zool., 1971b, v.176, p.345-352,

108. Majors J.E., Swanstrom R., De Lorbe W.J., Payne G.S., Hughes S.H., DNA Intermediates in the Replication of Retroviruses Are Structurally ( and Perhaps Functionally ) Related to

109. Transposable Elements, Cold Spring Harbor Quant.Biol., 1981, ▼.45, p.731-738.

110. Maniatis T., Jeffrey A., Kleid D.G., nucleotide Sequence of the Rightward Operator of phage , Proc.ITat.Acad.Sci.USA, 1975, v.72,p.1184-1188.

111. Mariol M.C., Genetic and developmental studies of a new grandchildless mutant of Drosophila melanogaster, Mol.Gen. Genet., 1981, v.181, p.505-511.

112. Masahiro T., Sanae K., Developmental capacities of the imaginai disc cell nuclei from mature larvae transplanted into early cleavage eggs of Drosophila melanogaster, Conan. Diga-ku Kic. Rigacu. Mem. Konan. Univ. Sci. Ser., 1982, v.28, p. 1-14.

113. Mc Knight G.S., Hammer R.E., Kuenzel E.A., Brinster R.L., Expression of the chicken transferrin gene in transgenic mice, Cell, 1983, v.34, p.335-341.

114. Modolell J., Bender W., Meselson M., Drosophila melanogaster mutations suppressible by the suppressor of Hairy-wing are insertions of 7,3-kilobase mobile element, Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1982, V.80, p.1678-1682.

115. OfHare K., Rubin G.M., Structure of P-transposable elements and their sites of insertion and excision in Drosophila melanogaster genome, Cell, 1983, v.34, p.25-35.

116. Okada M., Repair of genetically caused defect in oogenesis in Drosophila melanogaster by transplantation of Cytoplasm from wild-type eggs and by infection of pyrimidine Nucleosides, Dev.Biol., 1974, v.37, p.55-62.

117. Okada H., Kleinmann I.A., Schneiderman H.A., Restoration of fertility in sterilized Drosophila eggs by transplantationof Polar cytoplasm, Dev.Biol., 1974a, v.37, p.43-54.

118. Okada M., Kleinman I.A., Schneiderman N.A., Chimeric Drosophila adults produced by transplantation of nuclei into specific regions of fertilized eggs, Dev.Biol., 1974b, v.39,p.286-294.

119. Ouwneel W.Y., Developmental capacities of young and maturewild-type and opht. eye imaginal discs in Drosophila mela-nogaster, W.Roux'Arch., 1970, v.166, p.76-88.

120. Palmiter R.D., Differential regulation of methallothionein -thymidine kinase fusion genes in transgenic mice and their offspring, Cell, 1982, v.29, p.701-710.

121. Palmiter R.D., Brinster R.L., Hammer R.E., Trumbauer M.E., RosBenfeld M.Y., Bimberg N.C., Evans R.M., Dramatic growth of mice that develop from eggs microinjected with methallo-thionein-growth hormone fusion genes, Nature, 1982, v.300,p. 611-615.

122. Foulson D.P., Histogenesis,organogenesis and differentiation in the embryo of Drosophila melanogaster, in "Biology of Drosophila" (Demerec ed.),1950, N.-Y., 432p.

123. Rabinowitz M., Studies on the cytology and early embryology of the egg of Drosophila melanogaster, J.Morphol., 1941» v. 69, p.1-49.

124. Rau E.G., Kalthoff K., Complete reversal of antero-posterior polarity in a centrifuged insect embryo, Nature, 1980, v.287, p.635-645.

125. Rigby P.W,, Dieckmann M., Rhodes C., Berg P., Labelling of deoxyribonucleic acid to high specific activity in vitro by nick translation with DNA polymerase I, J.Mol.Biol., 1977, v.113, p.257.

126. Ripley S., Kalthoff K., Double abdomen indu tion with low UV-doses in Smittia spec. ( Chiron. Dipt.) : sensitive period and complete photoreversibility, W.RouxfArch., 1981, v.190, p.49-54.

127. Rubin G.M., Kidwell M.G., Bingham P.M., The molecular basis of P-M hybrid dysgenesis : the nature of induced mutations, Cell, 1982, v.29, p.987-994.

128. Rubin G.M., Spradling A.C., Genetic transformation of Drosophila with transposable element vectors, Science, 1982, v. 218, p.348-353.

129. Rubin G?M., Dispersed Repetitive DNAs in Drosophila, in "Mobile Genetic Elements" ( Shapiro ed.), 1983, ff.-Y., p. 329-362.

130. Rubin G.M., Spradling A.C., Vectors for p-element-mediated gene transfer in Drosophila, Hucl.Acid.Res., 1983, v.11, p. 6341-6351.

131. Rusconi S., Schaffner W., Transformation of frog embryos with a rabbit -globin gene, Proc.Hat.Acad.Sei.USA, 1981, v.78, p.5051-5055.

132. Rüssel M.A., Girton J.R., Morgan K., Pattern formation in ts-cell-mutant of Drosophila. The range of phenotypes, jnduced by larval heat treatment, W.Roux'Arch., 1971, v.183, p.41-59.

133. Rüssel M.A., Pattern formation in the imaginal discs of atemperature-sensitive cell-lethal mutant of Drosophila mela-nogaster, Dev.Biol., 1974, v.40, p.24-39.

134. Scholnick S.B., Morgan B.A., Hirsh J., The cloned Dopha Decarboxylase gene is developmentally regulated when reintegrated into thr Drosophila genome, Cell, 1983, v.34, p.37-45.

135. Sedgwick S.G., Genetic and kinetic evidence for different types of postreplication repair in E.coli B, J.Bacteriol., 1974, v.123, p.154-161.

136. Shiba T., Saigo K., Retro virus-like particles containing RITA homologous to the transposable element copia in Drosophila melanogaster, Nature, 1983, v.301, p.119-124.

137. Shimotohno K., Temin H.M., Evolution of Retroviruses from Cellular Movable Genetic Elements, Cold Spring Harbor Quant. Biol.,1981, v.45, p.719-730.

138. Shubiger G., Regeneration, duplication and transdetermination in fragments of the leg disc of Drosophila melanogaster,Dev. Biol., 1971, v.26, p.277-295.

139. Shubiger G., Wood W.J., Determination During Early Embryogenesis in Drosophila melanogaster, Amer.Zool., 1977, v.17, p.565.576.

140. Siolbere F., Garapin A.C., Thousterman S., Horobniseani S.F., Cowilski P., Cloning of the active thymidine kinase gene of Herpes Simplex Virus type I in £. coli, Proc.Hat.Acad.Sci. USA, 1979, v.76, p.37-59.

141. Skalka A., Hishinuma G.Ju.F., De Bona P.J., Astrin S., Structural Analogies among Avian Retroviruses DNAs and Transpo-sable Elements, Cold Spring Harbor Quant. Biol., 1981, v.45, p.739-746.

142. Sonnenblick B.P., The embryology of Drosophila melanogaster, in "Biology of Drosophila", 1950, N.-Y., p.62-163.

143. Southern E.J., Detection of specific Sequences among DNA fragments Separated by Gel Electrophoresis, J.MOL.Biol., 1975» v.98, p.503-517.

144. Spradling A.C., Rubin G.M., Transposition of cloned P-element into Drosophila germ line chromosomes, Science, 1982, v.218, p.341-347.

145. Spradling A.C., Rubin G.M., The effect of chromosomal position on the expression of the Drosophila Xanthine dehydrogenase gene, Cell, 1983, v.34, p.47-57.

146. Stanley G., Mc Knight G.S , Hammer E., Kuenzel E.A., Expression of the chicken trahsferrin gene in transgenic mice, Cell, 1983, v.34, p.335-341.

147. Summers W.C., Summers W.P., "T deoxycytidine used in a rapid, sensitive and specific assay for herpes simplex virus type 1 thymidine kinase ,J.Virol., 1977, v.24, p.314-318.

148. Wagner T.E., Steward T.A., Mintz B., The human -globin gene and a functional viral thymidine kinase gene in developing mice, Proc.Nat.Acad.Sci.USA, 1981b, v.78, p.5016-5020.

149. Wagner E.F., Covarrubias L., Stewart T.A., Prenatal lethalities in Mice Homozygous for human growth hormone gene sequences integrated in the germ line, Cell, 1983, v.36, p. 647-655.

150. Waring G.L., Allis C.D., Mahowald A.P., Isolation of Polar granules and the identification of polar granule-specific protein, Dev.Biol., 1978, v.66, p.197-206.

151. Warn R., Restoration of the capacity of Pole Cells in UV-ir-radiated Drosophila embryos, J.Embryol.Exp.Morphol., 1975» v.33, p.1003-1011.

152. Watara K., Hiroshi I., Close relationship between the long terminal repeats of avian leukosis-sarcoma virus and copialike movable genetic elements of Drosophila, Proc.flat.Acad.

153. Sci.USA, 1983, v.80, p.3193-3197.223* Wieschaus E., Gehring W., Clonal analysis of primordial disc cells in early embryo of Drosophila melanogaster, Dev.Biol., 1976, v.50, p.249-265.

154. Wieschaus E., Cell Lineage relationships in the Drosophila embryo, in "Genetic mosaics and cell differentiation", 1978, v. 9, p.97-118.

155. Willison K.R., Inserted retroviruses cause embryonic lethal mutation, Mature, 1982, v.300, p.401-402.

156. Willison K.R., Lethal mutation in collagen gene, nature, 1983, v.303, p.307.

157. Wolpert L., Positional information and the spetial pattern ofcellular differentiation, J.Theor.Biol., 1969, v.25,p.1-47.

158. Zalokar M., Transplantation of nuclei into the Polar Plasm of Drosophila eggs, Dev.Biol., 1973, v.32, p.193-198.

159. Zalokar M., Autoradiographic study of protein and RNA formation during early development of Drosophila eggs, Dev.Biol., 1976, v.49, p.425-437.

160. Zalokar M., Erk I., Division and migration of nuclei during early embryogenesis of Drosophila melanogaster, J.Microsc. Biol.Cell, 1976, v.25, p.97-106.

161. Zalokar M., Erk I., Phase-partition fixation and staining of Drosophila eggs, Stan. Technol., 1977, v.52, p.89-95.

162. Zhimulev I.P., Semeshin V.F., Kulichkov V.A., Belyaeva E.S., Intercalary Heterochromatin in Drosophila. I. Localization and General Characteristics, Chromosoma (Berl.), 1982, v. 37, p.197-228.