Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Микрофлора толстого кишечника у детей, стадающих аллергическими заболеваниями

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микрофлора толстого кишечника у детей, стадающих аллергическими заболеваниями"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ НИЖГОРОДСКИЙ ИНСТИТУТ

Ча правах рукописи

ФЕДОРОВА ЖЕНА РОМАНОВНА

МИКРОФЛОРА татстого КИШЕЧНИКА У ДЕТЕЙ, СТРАДАХЩИХ АЛЛЕЕГИЧЕШШ ЗАБМШШШ

03.00.07 - микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Нижний Новгород - 1392

Работа выполнена в Казанском государственном института усовершенствования врачей.

Нпушне руководители:

доктор медицинских, наук, профессор Н.Ф.Амфитеатрова

доктор медицинских наук, профессор А.Ы.Потемкина

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор А.Н.Ыаянский

доктор медици. :ких наук, профессор К.Р.Соколова

Отзыв о научно-практической значимости работы дает Институт питания А1Щ.

Защита состоится на заседании специализированного сопита К.084.39.02 по присуждению ученой степени кандидата медицинских наук в Нижегородском медицинском институте по адресу: 603СЭ5, Нижний Новгород, шт. Минина и Пожарского, д. 10/1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородского медицинского института.

Автореферат разослан____^¿¿И^^З^.:_________1992 г.

Ученый секретарь специализированного Совета, д д Леонов

канд.мед.наук

ЗСУДАГ "' »{КЬНОЙЦЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОШ BHöJlilu's^.Ä

Актуальность проблемы. В последние года отмечается повсе-ыесгный рост аллергических заболеваний у детей, нарастает тяжесть их течения, увеличивается число комбинированных форы я резистентность к общепринятой терапии {Торопова H.H. я соавт., 1986; Потемкина A.M., 1990).

Широкое распространение этих заболеваний а основном связано с поступлением в детский организм плщ&влх аллергенов (Толпаги-на Т.Б..Потемкина A.M., 1977; Воронцов Ч.М. и соавт., 1983 ; flit ССслalknn.^ Wdht V/.Ä. , 1982; UeumUi , I9F3). Кроме того, Е^маловатшл' воль в развитии пищевой свнсябя-лизадая играгт функцгогзльнке расстройства гблудочрэ-двиашого тракта в я том числе длсбактерзиз кишечника (Сербская В.Г., Марко О.Я., 1976; Ногаымр А.!.'., 1983 ; SoolkU J.F.. 1977; (lipxaudi (^.iCcLcanicu.(fMi„ IS88).

В литература имеются исследования, а которых показан сосиа кипечной микрофлоры у больных атопаческчм дернахггом, но в большинства работ не отмечается влияние возраста, тячесга течения а наличие сопутствующей патологии органон пздеверсния на созтаа кишечного микробиоценоза (Шатерялкоа В.А. « соав?., 1932 ; Кгяао-ва Й.Б. и соавт., 1386 ; !i ища ков A.A. я соагт., 1986; ГЬтамяг-на A.M. и соавт., 1988; Петров В.Г. и соавт., 19ЭГ).

Лишь в единичных работах приводятся материалы изучения микрофлоры толстого кзшечпнка у взрослю, йолъзах бронхиальной аотыой (Ужегова Е.Б. г. соавг., 1936; Полосухина В.А. и соаэт., 198?) и совершенно нет публикаций по исследованию микробиоценоза яиавч-вика у детей, больных ресстдаторитп аллергозама.

Цель настоящей работа: - изучить ыякрофлору толстого кишечника детей, больных аллергическими заболеваниями.

Основные задаче исследования.

1. Изучить микрофлору толстого кяиечника у детей, страдающих атоническим дерматитом и респираторными аллергозааа.

2. Установить влияние тяжести течения, этиологии заболевания и возраста ребенка т.а состояние микрофлоры толстого кишечника.

3. Определить влияние сопутствующей патологии желудочно-кишечного тракта на ыикрофлору толстого кишечника детей, больных аллергическими заболеваниями.

4. Изучить биохимические свойства наделенных микроорганизмов.

5. Исследовать цигопатогезныо свойства выделенных эшерахий.

Научная новизна. Впервые проведено качественное ? количественное изучение микрофлоры толстого кишечника детей, страдавших респираторными аняоргозами (цредастыой и бронхиальной астмой),

и установлена зависимость показателей кишечной микрофлоры от наличия сопутствующей патологии со стороны органов пищеварения.

.Впервые выявлены изменения кишечного микробяоценоза в зависимости от возраста ребенка и этиологии аллергического заболевания яри каждой нозологической форме.

Разработана и впервые использована спиртово-молочно-дрожжв-еэя среда для культивирования лактобацалл и новый метод иг выращивания под одноразовыми чашками Петри малого диаметра с МПА, засеянным культурой аэробных бактерий (рационализаторские предложения £ 741/1, Л 742/2 от 5.02.1932 г.).

Предложены способы определения видовой принадлежности бацилл и грамполоЕигэдъных аэробных и факультагивно-ачаэробных кокков

о помощыэ ключей, составленных на кафедре микробиологии Казанского ГВДУВа (рационализаторские предложения % 432/2, # 433/3 от 22.02.1989 г. >.

Практическая значимость. Установленная нами пиролая распространенность дисбакгориоза толстого кшачника у детеа, больных атоническим дерматитом (100 %) и респираторными аллергозаия (98,5 %), указывает на необходимость проведения микробиологического исследования содержимого толстого кишечника всеы детлы, больным аллергическими заболеваниями.

Для формирования групп ряска у детей, больнях аллергичосаи-ми заболевай л шля, необходимо выявлениз условно-патогенных макроорганизмов среди грамогрсцатвльных бактерия я кокков с обязательным изучением их биохимических свойств и цитотоксичности эшерихий на культуре клеток линии У£.

У детей, страдающих атоническим дериать.ом и рееппраторнлми аллергозами, обоснована целесообразность проведения коррекции кишечной микрофлоры.

Основные положения диссертации, впноермые па защиту .

1. У детей, больных аллергическими заболеваниями, выявляются качественные и количественные изменения в составе микрофлоры толстого кишечника, зависящие от нозологической форш заболевания.

2. При дисбактериоэе толстого кишечника у детей, страдающих атоническим дерматчтои и респираторными аллергозами, ча^е, чей у здоровых детей, выявляются ассоциации, оостоязлс из различных условно-пагогеяньд макросов, в эпирихии, оказывающие цлипатогенное действие па культуру клегск линия SÍ .

3. Разработанные новая элективная спиртспо-молочцэ-дроюЕв-вая среда для вкращиаания лангобацилл я к.етод вх куяьтявирова-

шш нод одноразовыми "чешкам;! Пэгри малого гпамэтра с ША, за-сб.чннш.) кулыуро;} аэробных бактерий, высокоэффективны, позволя-ит ваделить частую культуру бактерий, не требуют дефиц: тных лн-греднонгов я оборудования.

Внедрение. Материалы диссертации внедрены в работу лечебных а профилактических учрсгкдоний: аллергологического отделения 7 детской больницы г.Казани, городской инфекционной клинической ч<0ЛоН|;цы I им. А.Ф.Агафоьова, клиники детских болезней лмени В.ЫДепсксгс, городского и республиканского центров государственного санитарного и эпидемиологического надзора Татарстана ; в учебный процесс на кафедрах инфекционных болезной, микробиологии, педиатрии I Казанского ГВДУВа и микробиологии Казанского медицинского института.

Апробация роботы. Основные положения работы долокены на 2-ой Всероссийской конференции ш клинической микробиологии (1989 г.), научко-пракгической конференции ш гастроэнтерологии а г.Казани (1'989 г.), конференции молодых ученых ГИДУВа (г.Казань, 198Э г.), на 6 Всесоюзном съезде дерматологов и венерологов (15ВЗ г.),на заседанчп Каганского общества ЭМИ (1991 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 статей, изданы 4 методических рзкоызвдавии для врачей бакгермологов и клиницистов, разработаны и внедрены 4 рационализаторских предложения.

Структура к объем диссертаций. Диссертация изложена на 164 страницах мапшюдпеп. Состоит из владения, обзора литературы, 5 глав собственных. всслздоганЕй, заключения, выводов, рекомендаций в практику и указателя лигературы, включающего в себя 215 источников, из которых 90 йноотранннх. Работа ссдзркит 10 рисунков и 35 таблиц.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТУ Материалы и методы исследования

Материалом для исследования служили фокалии 278 больных аллергическими заболеваниями а возрасте от О до 14 лет, в том числе 101 больного предастмой, 56 больных бронхиальной астмой, 88 - экземой и 33 - нейродермитом, музешшо штаммы лактобяцилл, зшерихий и золотистых стафилококков, а та ¡и о свежевздеяелныо культуры микроорганизмов.' В качества контроля была изучена микрофлора фекалий % здоровых детей в возрасте от 3 до 5 лот.

При какдой нозологической форме заболевания дети были разделены на группы в зависимости от тяжести течения, этиологии заболевания, аозраига и наличия сопутствующей патологии органов пищеварения.

Забор материала у кавдого ребенка провоплен два дня подряд. Учитывали средние показатели двух исследований.

Посев испражнений проводили согласно методическим рекомендациям "Бактериологическая диагностика „исоактериова у онкологических боаьных" (1983 г.) и "Применение бактерийных биологических препаратов в практике лечения больных кишечными инфекциями. Диагностика и лечение дисбактериоза кишечник?"(1986 г.) Среды томатная и МРС-4 для вырагдивания лакгобацилл, предложенные методическими 'рекомендациями, были заменены на опиртово-молочно-дрокяепуя среду (СЭДЦС), как более элективную и дос^пную для практических лабораторий, среда Вильсона-Блера была заменена на среду Кигта-Гароцод, как более качоотьаиную.

Выращивание лектобацилл проьодшхв на орода СЧДС под одноразовыми чашками Петри уапого диаметра с Ш, засошшш культурой аэробных бактерии.

Цитопатогенность эиергхий определяли согласно разработанному

в Казанском НШШ способу определения пагогенности энтеро-биитериИ (авторы Галеава 0.11., Сычкова Л. ¡Л., приоритетный номер заявки И 4781667/13/006163 от II января 1990 г.).

Данные, полученные в результате проведенных исследована, били обработаны статистически о использованием точного метода Счшора.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Проведенные исследования показали, что разработанная нами сгафТсьо-молочно-Ародасевая среда для выращивания лакгобацилл,содержащая от 0,4 до 4,0^ этилового спирта,полностью задерживала рост сопутствующей микрофлоры в не угнетала роста лактобацинл. Более шсокио концентрации этилового спирта ингибировали рост лактобйцилл. Поэтому в дальнейших исследованиях нами использовалась спиргово-молочно-дрожжевая среда с 0,4 % этилового спирта.

Применяемый в практике для выращивания анаэробов "етод Форт-нера и его модификации в ряде случаев не обеспечивают счижение концентрации кислорода в воздушном пространстве чашки Петри до необходимого для роста лактобациял минимума. Метод "часовых стекол", также рекомендованный для выращивания анаэробов, не используется из-за отсутствия в продажа "часовых стекол" .

Нами разработан новый метод выращивания лактобациля на СЩС под одноразовыми чашками Петри малого диаметра (40 мм), содержащими мясо-пептонный агар о четырех часовой культурой серрации марцесценс.

Разработанные нами новая питательная среда для выделения лактобациля и метод их выращивания обладают определенными цреиму-> ¡паствами перед методиками.рекомендованными действующими инструкциями: они позволяют выделить чистую культуру лактобацилл, не требуют дефицитных ингредиентов и оборудования.

ную возрастную динамику микрофлоры толстого кишечника у детей, (Зольных экземой.

Сопутствующая патология органов пищеварения не оказывала существенного влияния ни состав кишечной микрофлоры.

У всех 33 больных нейродермитяа выявлялись качественные и количественные изменения кишечного шкробиоценоза, характеризовавшиеся сни&ением общего количества эшэрихи - у 84,9 % больных, энтерококков - у 97,0 %, бифидобактерий - у 72,7 %, лактобацилл - у 69,7 % и появлением на этом фоне лакгозонегативных и гемо-лизирувдих эшерихий - у 33,3 % и.24,2 % соответственно и ассоциаций, состоящих из различных условно-патогенных шкробов.

Все исследованные больные имели среднетяжелое и тяжелое течение заболевания. Различий в составе макрофлоры толстого кишечника у этих двух груш больных не ватвлано.

Возраст больных не оказывал влияния на состав кишечной микрофлоры.

У больных нейродермитом с сопутствующей патологией органов пищеварения гемолизирующие эгаерахии встречалась чаще, чем у де-' тей не смеющих сопутстгувдих заболеваний желудочно-кишечного тракта и печени (соответственно 40,0 % и 0 %, Р<0,05). Другие роды и виды микроорганизмов определялись в обеих группах де^ай с одинаковой частотой.

Проведенные исследования показали, что среди 157 детей.больных респираторными алларгозами, 99,3 % - имели различные изменения биоценоза толстого кишечника. У 79,6 5» больных детей отмечалось снижение общаге количества эшерихий, причем у 54,8 % детой количество эшерихий не превышало 100 млн КОЕ/г. Лактозоиегатпо-ные эшерихик у 22,9 % больных детей составляй более 5 % от об-

щего количества эшерихий, у 30,6 % детей были выявлены гемоли-зирущие эшерихии, которые не были обнаружены ни у одного здорового ребенка.

Энтерококки в содержимом толстого кишечника определялись у всех вдоровых детей я отсутствовали у 21,0 % больных (Р 0,05),

_7

В разведениях 10 и более они встречались у больных детей в два раза реже, чем у эдоровчх.

У 28,0 % больных детей были выявлены плесневые грибы в разведениях фекалий КГ4 а более, тогда как у здоровых детей они ве обнаруживались в таких разведениях.

Для большинства больных респираторными аллергозами было характерно снижение количества бифядобактерий, которое отмечалось у 72,0 % детей и лактобацилл - у 62,4 %.

У больных детей часто выявлялись микробы родов клебсиелла в энгеробактер, а такт4 ассоциации, состоящие из 2-6 различных условно-патогенных микробов.

У всех детей, больвых преданной (101 ребенок), выявлялись изменения кишечной микрофлоры, которые характеризовались в основном снижением общего количества эшерихий - у 77,2 % больных, бифидобакгерий - у 78,2 %, лактобацилл - у 60,4 %, появлением на этом фоне гемолязирующпх и лактоэонегативных эшерихий (26,7 % я 37,6 % соответственно), плесневых грибов - у 27,7 микробов родов клебоивлла, энтеробактер я ассоциаций различных усяов:ю-пагогенннх микроорганизмов.

Изучение макробиоценоза толстого кишечника у больных, различными формами предастмы, позволило выявить тенденцию к наиболее выраженным изменениям в составе кишечной микрофлоры у детей о пищевой а теологией цредастш.

Возррст болышх и наличие сопутствующей патологии органов пищеварения не сказывали существенного влияния на состав кишечной микрофлоры у «Зольных предасгмой.

При исследовании микробиоценоза толстого кишечника у 56 детей, больных бронхиальной астмой, в 98,2 % были обнаружены качественные и количественные изменения а микрофлоре толстого кишечника. Они характеризовались снижением общего количества эше-рихий - у 88,9 % детей, энтерококков - у 91,1 %, бифидобактерий - у 60,7лактобацилл - у 66,1 %', появлением на этом фоне гемолизирущих эшерихи£ - у 17,8 %, плесневых грибов - у 28,6% и ассоциаций, состоящих из различных условно-патогьнных микробов.

Наиболее выраженные изменения в состава кишечной микрофлоры отмечались у детей с пищевой этиологией бронхиальной астмы, при которой гемолизирущие эшерихии и плесневые ггчбы обнаруживались значительно чаще, чем при сочетанной и бытовой этиологи-чяских формах заболевания.

Возраст детой,больных бронхиальной астмой, не оказывал существенного влияния на состав кишечной микрофлоры и лишь гемолизирущие эшерихии встречалась в младшей возрастной группе у детей от 0 до 3 лет значительно чаще, чем у больных второй я третьей групп (а 45,4-? 8,3- и 12,1 % соответственно).

Сопутствующая патология органов пищеварения не оказысала влияния на состав кишечной микрофлоры у болышх бронхиальной астмой.

Сравнение микрофлоры фекалии у дегей, больных различными нозологическими формами респираторных аллергозов, показало, ч?о при предастме, -чаше, чем при бронхиальной асгаа, встречались гвмо-лязгруэдие эшерихии, энтерококки, ассоциации различных уеловыэ-

патогенных микроорганизмов и реже определялись бифидобактерии.

У больных аллергическими заболеваниями 43,0 % выделенных культур эшврихий оказывали цигопатогенное действие на культуру клеток линии Ж . У здоровых детей на дол» цитопатагенных эше-рихий приходилось лишь 2,5 % всех выделенных штаммов. Причем гемолизир^кщие эшэрихии обладали цатопагогенными свойствами чаще, чем негемолизирукщие (з 84,2 % ь 34,7 % от обпего количества соответствующих эшерихий). Они вызывали гибель монослоч клеток при введении меньшего количества микробов, чем цри заражении культуры клеток негешяизирувдиш эшерихиями.

Следовательно, признак датоватогенности является важным биологическим свойством. Его необходимо выявлять при лабораторной диагностике дисбактериоза с целю определения групп риска и обязательно учитывать при назначении лечения детям, страдающим аллергическими заболевг зш»и.

Таким соразом, у больных атипическим дерматитом и респираторными аллергозами определяются качественные и количественные нарушения кишечного кикробиоцаноза, зависящего от нозологической формы и этиологии заболевания. У этих детей чаще, чем у здоровых выявляются эшерихии, оказывающие цигопатогенное действие за культуру клеток линии

ВЫВОДЫ

1. У детей, больных аллергическими заболеваниями, выявляются количественные а качественные изменения в составе микрофлоры толстого кишечника, зависящие от нозолог: ческой формы заболевания.

2. У все:: больных атоническим дерматитом и респираторными аллергозами наблюдалось снижение бифидобактерий, лактобацилл и общего количества эперихий ; увеличение лактозонегатив шх, геь-ли-зирувднх эперихий и других условно-патогенных микробов семейства

кишечных, родов псевдомонас и ааромонао, а также плесневых грибов; появление ассоциаций» состоящих из различных условно-патогенных микроорганизмов. У больных респираторными аллерго-зами отмечалось т. хке снижение количества энтерококков.

3. У детей, страдающих экземой, наиболее выраженные изменения в составе ыикробиоцеяоза кизечнчка выявлялись среди болыгт. в возрасте до одною года; не отмечено влияние сопутствующих заболеваний органов пищеварения на состав микрофлоры толстого кишечника; чаще, чем у (Зольных нейродермитом обнаруживались условно-патогенные бактерия п энтерококка.

4. У больных нейродермитом при сопутствующих заболеваниях органов пищеварения гемолазирувдие эшерихии встречались чаще, чем у лиц без сопутствующих патологий печени и жеяудо«пю-кипеч-ного тракта; возраст больных не влиял на состояние микрофлоры толстого кишечника.

5. Наиболее выраженные изменения в микробноцонезе толстого кишечника у больных респираторными аллергозами выявлены при пищевой этиологии заболеваний; возраст и наличие сопутствующей патология органов пищеварения на влияли на состав кишечной микрофлоры. У больных предастмой нарушения в состава ыикробиоцекога толстого кишечника встречались значительно чаще, чеь. у больных бронхиальной астмой.

6. При дисбакгериозе толстого кишзчниге» у деглй, отрадавдих аллергическими заболеваниями, чаще, чем у здоровых детой, выявлялись эшерихии, оказывающие цитопатогенкое действие на культуру клеток линии Я.

7. Разработаны новая элективная спиртово-молочно-дрокхепля среда для ввделекия лактобацалл и метод их культивирования под одноразовыми чазкаыи Петри малого диаметра с ?.!ПА, засеянным куль-

турой аэробных бактерий.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЖОШВДЩИ ОРГАНАМ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

1. Всем детям, больным аллергическими заболеваниями, необходимо проводить обследование на диобактеряоз толстого кишечника.

2. Ешерихии, выделенные из фокалий больных, страдающих аллергическими заболеваниями, в особенности, обладающие гемочпзи-руншши свойствами,необходимо исследовать на ци топатогенную активность, которую следует учитывать при назначении лечения детям.

3. Для использования в практике рекомендуется новая элективная спяртово-ыодочно-дрозигавгя среда для выявления яактобацилл

и метод их культивирования под одноразовыми чашками Петри маге го диаметра с 1ИА, зас ^яншм культурой аэробных бактерий.

СПКСОК РАБОТ. СПШИЩЭЛННУХ ПО ТЕМЕ ДЙС1РТАВДИ

1. Потемкина A.M.Федоров Р.Б., Кемалетдинова Н.В., Федорова Е.Р., Терещенко Ф.М. Микрофлора толстого квиечника у детей, страдащих атоническим дерматитом // Актуальные вопросы клинической микробиология в неинфекционной клинике: Тезисы докладов

2 Всесоюзной конференции.- М., 1988. - 0.142.

2. Федорова Е.Р. Характеристика энтерококков, выделенных от аилергологических больаых // Тезисы докладов конференции молодых ученых Казанского ЩЩа по рсализами в внедрению основных разделов Республиканской программы "Здоровье" на 1986-1990 гг. -Казань, IS89. - C.I9-20.

3. Федорова Е.Р. Ылкрофлора толстого кишечника j 6lлшь аллергией // Мезвсы докладов "онфарепции молодей ученых Казан-

ского ГЩПГВа го реализации и внедрению основных разделов Республиканской программы "Здоровье" на 1986-1990 гг. - Казань, 1988. - С.19.

4. Федоров Р.В., Потемкина A.M., Федорова Е.Р. Роль дис-бактвраоза кишечника в формировали атопического дерматита // Тезисы докладов У1 Всесоюзного съезда дерматологов п венерологов (25-26 сеняября, Чэлябмск) - М., 1989. - С.295-296.

5. Келина Т.И., Федоров Р.В., Федорова Е.Р. Персистендия условно-патогенного стафилококка и нарушении гомеоотаза у часто и длительно болеющих детей // Педиатрия. - 1991. - Л 5. -0.46-50.

6. Федоров Р.В., Федорова Е.Р. Бактериологическая диагностика дисбактерпоза: Методические рекомендации для врачей-курсантов. - Казань, 1989. - 30 с.

7. Сорокин A.A., Федорова Е.Р. Диагностика и течение две-бактериоза кишечника: Методические редомевдацил для врачей-курсантов. - Казань, 1390. - 37 с.

8. Федорова Е.Р., Келина Т.Н., Федоров Р.В., Лашипа Г.Н. Методы идентификации и дифференциации стафилококков: Методичз-ские рвкомевдации для врачей-курсантов. - Казань, 1991.- 36 с.

9. Келина Т.И., Федорова Е.Р., Федоров Р.В. Диагностика s лечение стафилококкового носительства у часто п длвтзльно болеющих детей: Методические рвкомевдации для врачей-курсантов.-Казань, 1991. - 35 с.