Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Микрофлора кишечника при некоторых патологических состояниях инфекционной и неинфекционной природы

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микрофлора кишечника при некоторых патологических состояниях инфекционной и неинфекционной природы"

С. П МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ МОСКОВСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ И. М. СЕЧЕНОВА

На правах рукописи УДК 616.34-008.87-076:579.26

БУДАНОВА

Елена Вячеславовна

МИКРОФЛОРА КИШЕЧНИКА ПРИ НЕКОТОРЫХ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ

состояниях

ИНФЕКЦИОННОЙ И НЕИНФЕКЦИОННОЙ ПРИРОДЫ

03.00.07 — Микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 1993

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии Московской медицинской академии имени И. М. Сеченова.

Научный руководитель

академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор А. А. Воробьев.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор С. Д. Боропаева, доктор медицинских наук, профессор М. М. Дыхно.

Ведущее учреждение — Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г. Н. Габричевского.

Защита состоится « . . . » . . . . . 1994 г.

в «... » часов на заседании специализированного совета № 10 (Д 074.05.10) при Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова по адресу: 119881, г. Москва, ул. Б. Пироговская, д. 2/6.

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ММА им. И. М. Сеченова по адресу: 119042, г. Москва, Зубовский бульвар, д. 37/1.

Автореферат разослан « . . . »..... 1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат медицинских наук,

доцент А. Ю. Миронов

ОБЩ KfiPfiKTEPliCTBKfl РАБОТЫ

актуальность тема. Исследования последних лет в области iMKposKQлогин убедительно показали, что нормальные аикробиоца-!сзы человека явлаится интегративной частьв его организма. ;воеобразным якстракорпорелинна органов, выполнявший и регули-10ЯЗйв иногочнсленнив фцнкции I Вендеров Б.ft,, 1990; Бондарен-;о В.В., Горскаа E.H.,1992; Hltsuqka Т. ,1988; -Tannock G.H., 988; van der Kaaij D,.1988; Knocke M., Bernhardt H..1992; ancrede C.,1992 ].' Нарушение состава микрофлоры, саана ее [редставнтелзки экологических нии, изменение аетаболитного остава содервиаого кизечника фораирушт дисбактериози, авлав-;иеся в случае тракслокации бактерий в кровь источником ауто-ифекцин [ Вендоров 5.Я.,1987; Алиагаибетоп К.Х., Бондаренко .П.. 1991; Вгоапе B.J. et ah,1991; Ohsugi Т.,1991 ].

В связи с 9ТИИ представляется актуальным изучение харак-зрз влияния и степени поэреадавчего воздействия ксенобиотиков озличного происхоадеша на системы какроорганизма, в особен-ости - на иикроэкологическув. Несмэтра на то, что данной роблеье посвзвзны многочисленные исследования ученых, поваза-н последствия злияниа разнообразных факторов внеиней срзди на ту систему макроарганизиа, комплексных исследований с цельа ыавлений обчих закономерностей и особенностей реагирования икробиоценозов на воздействие факторов разнонаправленного айствиа (химических, лицевых, инфекционной и неинфекционной рироды) пока не проводились.

Наряду с ятой проблемой, в настоящее время актуальним ос-а^тся Bönpoc пояска новых путей коррекции ¡икрозкологических арувений киаечника различного генеза. Учитывая то, что при [¡сйно-воспалительных заболеваниях челюстно-лицевой области ксот мосто резкая активация калликреин-кининовой системы, иивй'.ется активность ингибиторов протеаз (в частности, антиг-и1сина) в результате повышения активности протеолитических врчрнтов 9ПМ в очаге воспаления, вызывавших деструкция тканей Кгрмдавов В.И.,1988], представляется целесообр? ним нслоль-ofiitli.e синтетических ингибиторов протеолитических ферментов СШ>), являющихся протекторами клеточных повревдений, как дли Dpp-ицин нарувенного микробиоценоза у больных одонтогенными пгтнонаыи, так и для подавления синтеза протеолитических |ер-

аентоз к ограничения зоны воспаления в гнойной очаге у sti больных.

Такии образом, изучение изменений нормальной иикрофлор! кивечника при некоторых патологических состояниях инфекционное .и неинфэкцяонной прирс.,ы с цельв установления, причинно-следс-таенных связей к поиска новых путей коррекции выявленный изменений является, безусловно, актуальный.

Цель и задача казедовання. Основная цель работы эаклвча-лась в изучении вякробной экологии толстого кквечнпка при некоторых патологических состояниях различной этиологии и патогенеза и в разработке способа коррекции выявленных изиенений норнофлоры.

Для достиеения поставленной цели были сформулирована сле-дувцие задачи:

1) дать характеристику иикроэкологических изменений со сторона толстого кишечника под действием хинических факторов (при контакте с CMC на производстве, при зкепорименталькоц контактной дерматите) и в зависимости от различных концентраций алиментарного кальци? в диете лабораторных зивотных;

2) изучить возмоаность коррекции сдвигов со стороны киеечной микрофлоры крис при зкелеринентальнои контактном дерматите с помоаьв препаратов кальция;

3) изучить количественный и качественный состав микрофлоры толстого кивечника у больных одонтйгенныки флегноиаии и в контрольной группе клинически здоровых'ладей:

4J исследовать влияние аибена на рост и разиновени'е представителей резидентной ыикрофлоры кииечника человека на примере некоторых ятааиов кишечной палочки in vitro;

5) изучить возмовность коррекции нарушенного микробиоценоза толстого кишечника у стоматологических больных с помощью бифидуибактерина и/или амбена;

6) провести сравнение клинической эффективности бифидуибактерина и амбена, а такие их коибинированного применения в практике лечения больных одонтогенныии флегмонами.

Научная новизна. Е ходе работы изучен микробный состав толстого кишечника у больных одонтогенныии флегионаии. Показано, что у таких больных имеются-выраженные изменения в анаэробной составляющей микробиоценоза: угнетается рост бактероидов, лактобацилл, бифидобактерий; вместе с тем возрастает в, эваемость микробных ассоциаций из числа условно-патогенных

аикроорганизиов.

В опытах in vitro показано влияние препарата аабеи'на рост ятаиаов E.coli Й17 и К 12 Hb 101. При этой выявлено, что добавление ннкродоз зтого вещества в знякие питательнее среды для культивирования вызывает стинулации роста этих -итаайсз бактерий, ускоряет выход кризой роста иикроорганизаое на сга-ционарнуа фазу.

Навими исследованияин впервые показана вознозиость и 8ф-фактивиость коррекции изменений микрофлоры толстой кивки у стонатологических вольных/ поиольв ингибитора протеолитичвс-кик ферментов анбена и бифидунбактерииа, а таксе эозысзность их коабинированного использования в практика лечения больных одонтогеннвни флегнонаии,

В результате исследований впервые изучен характер и закономерности изменений микробного пейзава кизечника при экспериментальном контактной дерматите тл под влиянием различных концентраций алиментарного кальция. D эксперименте исследована оозиояность коррекции дисбиотичвских изменений со стороны толстого кизечника крас, вызванных контактным аллергическим дериатитон, с покоаьз препаратов кальция.

Практическая эпачпиоеггь работа. На основании полученная данных усовершенствована методические подхода бактериологического исследования микробной экологии при некоторых патологических ссстояняях инфекционной и неинфекционной природ« и показана необходимость коррекции нормального иикробиоценоза толстого кизечника а лвдей, профессионально контактирувадх с СЙС ра производстве, а такае у больных одонтогенными флегиома-уя чслнстио-лицевой области.

Предловон способ коррекции нарувений никробной экологии тс 1стого кизечника у больных одонтогенныыи флегионаыи челастно-я*и&9ой области.

'Внадренко в практики, По иатериалаи диссертации оформлен Пстент "Применение пааба в качестве стимулятора роста бифидо-бзигйрий, лактобацилл. зверихий" N гос. регистрации q4052783.

Результаты («следований используются на кафед ; никробио-яа;(!|<, вирусологии и иммунологии ЧМй ии.И.М.Сеченова при чтении лекций и проведении практических занятий.

Некоторые методические приемы бактериологической диагностики внедрены в практику работы ЦГСЗН г.Кирсанова Танб^ской области.

Апробация работи. Материалы диссертационной работы доло ясны и обсуыдена на совместной научно-практической конференции кафедры микробиологии, вирусологии н иммунологии н кафедры че-•люстно-лицевой хирургии !1МА ии. И.Н.Сеченова ( апрель 1991 г., кай 1993 г.), па Втор й научно-практической конференции молодых ученых Казахпана ( февраль 1993 г.), на научной конференции кафедры микробиологии', вирусологии и иннунологии ММ имени И.И. Сеченова ( апрель 1993 г.), на научной сессии РАЫН .''Хииия и здоровье" ( июнь 1393 г.)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, 1 статья принята в печать, оформлен патент.

Структдра и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 6 глав собственных исследований, заключения и выводов. Работа изловёна на "/,32* страницах машинописного текста, иллюстрирована таблицами и X. рисунками.. Указатель литературы содеркит ш источников, в том числе /г* зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТН

Материала и метода. В работе представлены материала обследования ?8 больных острыми одонтогенными флегвонани различной локализации в возрасте от 1? до 62 лет, паходивяихсз на лечении в клинике челюстно-лицсвой хирургии 1ША им. й.У.Сеченова. Эти больные были обследованы до начала лечения, а такав через 7-10 дней после начала лечения антибактериальными препаратами групп пенициллинов, цефалоспоринов и макролидов.

Клиническое испытание препарата аибен осуществляли на группе из 65 человек, больных и здоровых добровольцев, разделенных на подгруппы. При "этом стоматологическим больныи н лицам контрольной группы назначали амбен в порошкообразной форме по 0,25гЗ раза в день в течение 5 дней [Маиковский М.Д.,19841. Фекалии у больных и здоровых испытуемых исследовали до и после лечения для контроля динамики изменений кишечной микрофлоры.

Для изучения влияния химических факторов на нормальнув микрофлору человека мы провели бактериологическое исследование, фекалий 10 работников цеха по производству СНС Новомосковского ПО "Бытхим". Контролем для них слуаила группа 38 клинически зх ровых жителей г. Можайска в репродуктивном возрасте, не

нмзбиих контакта с химическим производством.

Семейный анализ проводили на группе нз ¡0 полных семей; мать, отец, двое детей и родственники второй степени родства (всего 50 чел.) в возрасте от 7 до 75 лет.

Определение основных представителей микробиоценоза кизеч-ника проводили с использованием методических рекомендаций ННЙ-МЭМ ии. Г.Н.Габричевского (1986). Идентификации энтерсбактерий осуществляли с использованием коммерческих, тест - систем "Enterotest-I", "Enterotest-H" (Чехословакия).

Для осуществления модельных экспериментов на животных была выбрана модель контактного аллергического дерматита. В ка-честпе пиаевого фактора' использован кальций. В эксперимент взята 30 беспородных белых крыс, которые получали стандартное питание со снияенной, нормальной и повьшенной концентрацией кальция в рационе. Еивстные всех групп в течение 30 дней получали указанное питание, после чего у них по принятой методике СРабек А.С.. 1970) был вызван контактний аллергический дерматит растворои динитрохдербензола. Эксперимент был проведен в двух сериях экспериментов.

Бактериологическое исследование фекалий аивотных проводили по методике, разработанной з лаборатории гигиены и экологической аикробиологии Всесоюзного НИИ антибиотиков (1989).

Яла изучения влияния амбена In vitro на рост эяерихий были использованы втамми Escherichia coll К17, полученный путем посева препарата "Колибактерин" на среду Зндо и рекоыбииантный атаки Е.соП К 12 Нв 101, полученный из коллекции Московского института вирусологии им, Д.И.Ивановского. На этом этапе работа а пробирки с бульоном Хоттингера вносили 0,4 мл взвеси E.cdll.B концентрации 10*и добавляли 0,1 ил аибена с конечной концентрацией 2,0 аг/мл, 0.2 мг/нл и 0,02 мг/ мл. В контроль-п-в пробирку вместо амбена вносили 0,1 мл физиологического рап'пора. Посев на чашки Петри с МПй осучествляли в начиле опчта, а такзе через 3, 5 и 7 часов инкубации при температуре 3?вС, При этой из каждой пробирки с бульоном Хоттингера и рас-туда* микроорганизмами готовили б последователы-х десятик-ра ныл разведений в Q.7X агаре "Лифко" и производили посев на чайки, с МПЙ по методике Васильевой Е.В. (1988).

Статистическую обработку полученных в ходе исследований данных проводили обцепринятыми методами'вариационной' ста: :сти-ки. сравнительного и дисперсионного анализа [Урбах В.Я., 1975]

- ь -

с применение« ПЭВМ IBM РС/fiT. Семейный анализ проводили ка| вариант близнецового согласно [Соколов Е.И. с соавт., 1980]. При зтоа определяли вклад генотипической (G) и паратипичекой •составляицей общей фенотипической дисперсии признаков (Е). •Последний дифференциро.али до случайной компоненты (Ем) и аффекта совместного лрогивания, т.е., "семейного" фактора (Ef).

Результаты и обсцаденно, Исследования состава к некоторых свойств микрофлоры толстого кивечника, проведенные наии в группе больних одонтогенными флегыонаш! различной локализации и степени тяаести до лечения антибактериальными препаратами выявили значительные изменения в анаэробной составляющей микробиоценоза данного биотопа (таблица 1).

таблипа 1

Некоторые показатели иикробиоиеноза кишечника у больных одонтогенными флегмонами ( в 1в КОЕ/г Фекалий )

Никроорганизиы

Здоровые Больные

X t m

К

Н. 7,

m

БиФидобактерии Бактероиды лактобаигашы Энтерококки Кишечные палочки лактозопозитив. слабоФерментир, лактозонегатив. генолизирушие стафилококки эпидермальные золотистые клостридии Протеи

Грибы рода candida Дрожжевые грибы

7,66t?, гч

6, 31 ÍVJ, 72 3. 63iO. 57

5, 66ti, 12

6, 32tO. 26 2. 6ñiO, 45 1. 69+0. 39 1, 58t.O, 48

0. 83+0.34

1, 26+0, 33

0. Gt±X>. 23

1, lOiO, 33 i, 61+0,45 1, 9G¿0, 52

5. 97+.0. 56 4, 88±0, 56 4, 22¿0, 57 4,42i.O. 63

8. 01+0, 18 . 3, 46l0. 58 2,48tQ. 54

2. 061ЯК53

3, 90j_0. 39 3, 40 tO. 5T

1. 56±0.'10 3, 20+0, 56.

2, IbiXi. 43 2, 32+0. 53

0,78»» 3,70

0. 77 5, 60«

0,72»»« 12,70»»

0.78 3.80

0,96 21.50»»

1.29 2.60

1,47» 2,40

1,30««« 0.60

4,70«»» 6,00

2,69»»-« 9.00

1,92»»» 16, 80««-

2, 90«« 9. 80s» 1,34 3,90 1.18 2,60

Примечание: к - отношение средних величин; Н - вклад Фактора.

в /.; « - р<0.05; «» - р<0,01; ««« - р< 0.001.

йы обнаружили, что у 80,62 больных бклп снияено количество бактероидов, у 57,Т/. - наблюдался дефицит бифидобактерий и лактобацилл. Средние значения этих показателей микробного пей-заза кишечника составили соответственно 4,аб+_0,56 lg KOE'r . 5,97¿Q,58 и 4.22+.0.Б? lg КОЕ/г фекалий.

Наряду с этин, мы выявили такие изменение свойств предс тавителей резидентной микрофлоры - зверихий.' Мы отмечали увеличение количества слабеферментируищих и лактозонегативннх ки-вечных палочек ase до назначения антибактериальной терапии. Гемолизирущие эаерихии выявлялись нами у 15,4 7. больных в количестве 2,06+0,55 IgKOE/r испразнений.

Йа Фоне дефицита кикробов-эубионтов иаблидалось увеличение числа условно-патогенных микроорганизмов. Наиболее часто обнаруаивались Staphylococcus epidersldls и S.aureus - иа уровне 3,9+0,39 л 3,4+0,5? IgKOE/r фекалий соответственно. Бактерий рода Proteus и грибы рода Candida в отдельных случаях вы обнаруяивали до пятого - седьиого разведения, рода Klebsiella - до девятого. В посевах фекалий такав отиечалсз рост бактерий родов Citrobacter, Enterobacter и Clostridia.

Перед клиническим испытаниен препарата аыбен ыы изучили влияние этого препарата на, рост зверихий In vitro. Проведенные нами исследования показали, что инокуляция иикродоз анбена в питательнув среду для культивирования кивечных палочек выэыва-ef более внраяеннув стимуляцию их роста по сравнении с десятикратно увеличивающимися дозировками (таблица 2). Так, при-сдгствие амбена в концентрации 0,02 иг/мл питательной среды ВУ)н£ало стимуляции роста E.coll Ml? через „ часов культивиро-ймия на 44,32, а ятамиа E.coll К 12 Hb 101 - на 37,82 по срав-йИиг с увеличение» выхода биомассы бактерий иа 15.8 X и 21.IX ссшетственно для зтих станков при дозе амбена 0.2 иг/мл. На иг"<к('ляцив аыбеиа в количестве 2 иг/мл среды «таыкн E.coll peal 1|н.'вали по-разному. Так, например, указанная концентрация вы-эыSfij:a прирост биомассы экеркхий втамыа К 12 Нв 101 -ч 36,34 X чезе: 5 часов инкубации, в то время, как рост вта .ta Н17, напр. т в, угнетался на'12,52. Такг результаты, вероятно, обуг-лпчйнн «таммовыми различиями эяерихий, взятых нами для экспе-ргнентов in vitro.

' Таблица Z Влияние- различных ¡»¡шея'геагат аибена аа рост штажоц кивечной ишочии m vitro

?онпен-трааия Время. Количество микробных клеток, в 13 КОБ/НЯ

аибева.-иг/ил ' Ч Н 17 X t ш ПРИРОСТ X К 12 ИЗ 101 X £ Ш. ПРИРОСТ Y.

0,00 0 3 5 7 ' 7. 40+0. 50 б. 90t0r 11 7.95+0.21 5, 38+0. 16 -б. 76 0. 92 is. гч 5. 20+0, 19 3. 37+0, 44 6. 1310, 19 6, ЗОЮ, 10 -25.60 15. 17 17.40

0. Ой 0 3 6 7 б, 12±0, 16 7. ОЗЮ, SO 8, 63+0, 08 S. 69tO, 14 14. 90 44, 30 42, 00 4. 97+0. 14 5, <¡0*0, 19 7. 97+9-14 7. еою, 18 7, 90 37, 64 36, га

0 0 3 5 7 6. 95+0, 27 7. 10*0. 50 S. 05i0. 28 7. 96iO. 18 г, 1б 15, ВО 14. 50 4. 97Ю.09 4, iOiO, гг б, 30+0. »4 б, 90+0. 28 -21,22 2!, iö 27, 97

О 6.9710.10 4, 73tO, гч

2.00 3 6.24+0.12 -10,50 3, 70+0, ?.9 -27,34

.5 6,08+0,28 -12,50 7, 43±G, 25 30.34

7 6.45iQ.ia -7.50 7,60+0,22 39.40

Исследования на группе из 15 добровольнее, !0 из которнх приникали аибен по выше указанной схвие, а 5 испытуемых получали плацебо - порошок Sacchari albl пс;;ззали (таблица 3), что на фоне приема ^ибека отмечалось достоверное увгхгг-юние количества лактобацилл па 2,4 lg КОЕ, бифидобактернЛ - на 1,4 КОЕ (pcO.OOl), эшерихий с нормальной фс-риентатпгной актав-ностьв - на 1,8 lg, снивение количестогМактерий рода Protons. Вклад Фактора приема амбена в процесс'формирования количгс?га указанных групп микроорганизмов составлял 30,40 %-для бкфидо-бактерий, 12,6% для лактобацилл (р<0,05), а для лактозопези-тивных кивечных палочек и протеев был незначительным и недостоверный, составив лишь 3,44 и 0,652 соответственно.

В контрольной группе добровольцев значимых различий в уровне бифидобактерий, лактобацилл и эаерихий до н послп приема плацебо не отмечалось.

Бактериологические исследования фекалий больных с одешто-генныыи флегмонами показали, что прием амбена уме б течение 5 дней вызывал достоверное повывение количества бифидобактсрий на 2 l'g КОЕ (р <0,01), лактобацилл - на 2 1д, лактозопозитив-ных эверихий и бактероидов - на 1 ig КОЕ. При этом такге происходило снижение количества слабофермэитирувцих зиермхий на 3 lg. бактерий рода Proteus в 5 раз Ср<0.01). дроазелодобних

таелина з

микрофлора кпше«шнка добровольдез на Фоне приема сикязна <в 1е КОЕУг фскалкй)

Количество микроорганизмов

Микроорганизмы ____________________________

до лечения после лечения 2С Н. ;< г

х ♦я • г ¿в

Бифидобактерии Т. оою. 42 9. 3910. зг 0. 83« *» 30.40 7. ат»

Лактовашздлы е. 9910. за 9. £6*0. ез 0. 75*« 12.00 г. 51 *

энтерококки г, 49*0. 96 Т. 7110. 79 0. 97 ■ 0. 19 га. 20

Кшечше палочки

лактозоаознтнв. 7, 70.£1. га а. 3410. 98 0. 37 3.44 1. 58

слабофернеатир. 0. 76Ю. 80 2. 13+1. 15 0. зс»»« 3, 57 ь Об

лактозонегатив. г. 0311. 14 г. 37Ц. 07 0. аз« 0.31 17. 96

Стафилококки

эпидермальные 3. 69+1. 31 3. 281.1. 41 1. гг о. гв " 20. оа

золотистые 1. 15»0. вг г. 2111. 19 0. 52*« 3.21 1. 08

дроххепоаобвые грибы 3. 0111. и г. ОНО. 96 1. 15 0. 45 1с. 30

клостридии 0, 3010. 32 1.631X3. 73 0. 18««« 14.70 3. 09

Протеи 0. 50*0. 53 0. 30*0. 32 1. 67»«» 0. 65 3. 50

примечание: и - отношение средша велкчаа до назначения анйсна/после назначения; Я - вклад Фактора, в Р - критерий Фишера: « - р«о. 05; »« - р<0,01; •«« - р<о. 001

iрноои - и i раза (р<0,05), & бактерии с геислитичзсков активность«! виавляяись в ¿,8 раз ренгз по сравнение с состоянием' до лечения с рис. 1 ), Значение зтого фактора йшт наиболее сузест-вешшн для количественного содвраакия бифидобактерий (Н=33,2Х, p<û.05>, лактобацилл tН=24,05Х. р<0,05), бактерий рода Proteus iHsiîl.492.p>û.ô5). хотя в группе добровольцев для этого пока-вателя вклад фактора п; лена аабвна не превышал 0,602. Следует такие подчеркнуть, что хотя для золотиста* стафилококков и лактоз'оиегативных зверихий вввеуказанннй Фактор имел небольыов значение - 0,44 и 0,02 X, влияние его бнло достоверный lp<Ö,Ql и р<0,05 для кавдого показателя соответственное.

Прикенение бифидумбактерина в течение такого .ые периода времени стоматологическими большим приводило к увеличение количества бифидобактерий на 1.5 lg ip<0,05), снишш» количества лактозонегативных и слабоферментирувцих эвзрихий на 1 lg, грибов рода Candida в 3,6 раза, протеев - в ¿,87 раз по сравнении с иикрооным фоном до лечения. Сучбстоешшх изменений со стороны других показателей микробиоцвноза кикечника не наблш-далось, хотя количество эпидериальных стафклзкокков увеличивалось с 0,75 jtO.79 до 1,71^0,9? lg КОЕ/г фекалий (рс0,001). Влияние бифидумбактерина на микрофлору ккаечника стоматологических Вольных било менее существенным, нзаели илианио аибена и было относительно высокий. для количества бифидобактерий 1й-20,19%, р>0,05); на другие показатели иикробиоценоза данный фактор оказывал несущественное и недостоверное влияние, не » превышая 6.99Х.

Комбинированное применение амйена4 и бифидумбактерина с цеяьв коррекции наруиенного микроэкологического статуса у большие одонтогенными флегмонами вызывало достоверное снижение количества грибов рода Candida и клостридий в 4,74 раза ip<0,001), лактозонегативных кииечных палочек в 2,2 раза (р<0,01), золотистых стафилококков - в 10 раз 1р<0,05), недостоверное увеличение количества бактероидов с 6,43.10,99 до 7,77+0,74 lg КОЕ/г фекалий, а такие снижение количества этшдврмалъних стафилококков на ¿,4 Iß и энтерококков на 1,1 lg. Количество гемолизиру-вцих микроорганизмов снизалось в 1,62 раз. Дисперсионный анализ продемонстрировал, что фактор комбинированного применения препаратов амбен и бифидумбактерин оказывал существенное влияние на количество энтерококков и эпидериальных стафилококков 43,4 и 19,42 соответственно ip>0,05). Так« показано иедосто-

3 - амбен

- С кфщр л! актери и

- игбен и бифицунбактеркн | - плацебо

До лечения •

Рис, I. Некоторые показатели кишечной микрофлоры больных одонтогенндаи флегмонами после лечания амбеном и бифидумбшстериноы

По оси абсцисс: показатели микро&лоры больных I-бпфицобактерии; ¿2-лактобадаллы; З-лаетозопозитивше эшерихии; 4~слабсфер;.;зктирущке эшерихии; б-стафшюкокки эпидер-мальные; б-дрожаи; 7-юзострндии; 8-протеи.

По оси ординат: отношение средних величин после лечения к показателям до лечения.

и

I

' верное влионие этого фактора на стапань диспарсии остальн параметров микрофлоры толстого кииечника.

d больных, приниыаввих плацебо, наряду с традиционной ан-тибиотикотерапией, отмечалось достоверное увеличение количест ва дровкбподобных грибов tp<l),001), снивение количества знте рококков и золотистых стафилококков ip<0,05), а такве клостр.н дий в 2 раза tp>0,05). Проведенный наыи факторный анализ пока зал, что плацебо оказывало недостоверное влияние на все пара ■нетрн микрофлоры и было значимым только для энтерококков ; дронвеподобных грибов iH=2i,3 и 11,4% соответственно), но не достоверным ср>0,05 >.

При изучении особенностей микроэкологии под воздействие Химических факторов окруеаицей среды иы изучили кишечную ник рофлору работников химического производства, ииэвщих контакт CMC в цехе фасовки в течение 1,5 лет. В этой группе ни набда дали достоверное снихение количества бактероидов до 4,25+1.1 1в КОЕ / г фекалий по сравнению с аналогичным показателем 6,31+0,72 Is КОЕ/г - у лиц контрольной группы tp<ö,ü5). Виест с тем, увеличивалось количество спорообразушнк бактерий се иейства Сlostridiua и бактерий рода Proteus б 2 раза tp<0,05) а тante изменялось процентное соотновеяяе лактозопоэитивны кишечных палочек. слабоферментИрующих и лактозонегатшш эше рнхий в пользу увеличения количества бактерий с иэиененно ферментативной активностью на 1,5 Is КОЕ. Остальное параметр микрофлоры толстого кишечника нало отличались от показателе лиц контрольной группы I рис. 2 ).

йетодами популяционной генетики мы попытались оценить со вокупный вклад ненаследственных факторов изменчивости в про цесс формирования микробного пейзава кииечника здорового чело века. При проведении семейного анализа оказалось, что'встреча емость в ыикробиоценозе кииечника индигешшх микроорганизио не зависит, от средовых факторов, тогда как для транзиторны микробов влияние паратипической составлявшей было значимы (р<0,01). Эти факторы были представлена в основном случайно компонентой - Е«=0,54 и превосходили "семейную" (эффект сов местного про!ивания) в 2,6 раза (р<0.05).

Имеющиеся в литературе сведения о высокой частоте аллер гопатологий среди работников химических предприятий, и вняв ленные нами микроэкологические изменения со стороны ки«ечник у работников, занятых на производстве CMC, поставили нас пере

|Ш - рабочиэ ПО "Вш-юш* [ - жители г. Можайска

Ей

5 6?

*ис. 2. Микрофлора кгашчника работников Новомосковекого ПО "БыЬащ

По сс-и-абсцисс: 1-бифидобактерии; 2-бактеровды; 3-лактоба-цилям; 4-знтерококки; Ь-слабоферментир. зшзрихии} 6-лакто-зопозитивные зшерихии; 7-стафилококни эпидерм.; 8-стафило-кокхн ¿олотнст.; 9-ялострицки; Ю-лротеп.

По сои ординат: количество микроорганизмов в Ц. КОЕ/г

гь

сенсибилиэира-"ванныа крысь |_| -инта) -нке крысы

1 2 3 4 5 6 7 8

Рис. 3, Влияние сенсибилизации на микрофлору киг.-ечника крыс в

эксперименте

По оси абсцисс: микроорганизмы

По сои ординат: количество микроорганизмов б С&-КОЕ/г

нвобходиыостьв изучения влияния сенсибилизации на кикрофлор кишечника крыс в эксперименте с цельв выявления возаовных закономерностей Формирования этих нарузений и определения связй аллергоцатологии с составов и свойствами килечной иикрофлорн.

В ходе экспериментов ыа обиарувили, что сенсибилизация дннитрохлорбензолои (ДНХБ) и развитие контактного аллергического дериатита повлекли за собой увеличение количества энтерококков на ¿,5 1 е. лактозонегативннх кивечных палочек и обчего количестве лактозонегативннх энтеробактерий с 3,22+1,71 1дК0Е/ и 4,90 ¿,0,?? 1е КОЕ/г исправнений у интактнык зивотных до 4,92+1,73 1е КОЕ/г и 6,33+1,14 1д КОЕ/г фекалий соответственно у сенсибилизированных крыс. . В анаэробной части иикробиоценоза отмечалось увеличение количества бифидобактерий и енкзшше количества клостридий на I 1д. Остальные показатели оставались без изыенаний (рис.3). Дисперсионный анализ позволил сделать внвод о той, что вклад фактора сенсибилизации ииевт наибольшее значение в отновенив количества бифидобактэрий (Н=32,5%.р<0,03 й клостридкй (Н=16,IX, р<0.05) (табл.4).

тавлииа 4

Влияние сенсибилизации, алиментарного кальция и сочетаниого действия этик Факторов па показатели кишечной кикроФлорн крис■ I до данным дисперсионного анализа »

Показатели сенсибилиз. кальций сенс. *калышй

иикро флоры Н. X н. х Р Н. У. Р

лактозопозйтйвныё

эшерихии 0. 034 183. 26 34.40 6, 31«» г. тт 2. 60

Лактозоногативные 1. 67

зшерихии 3. 33 1. 82 30.20 9. 20« 4.09

/¡актозонегативные 3. 70 1.60

знтеробактерии 7.'16 1.23 2. 18 4. 76 •

стафилококки 0. 43 14, 34 19.40 3,89 5.93 1.27

Энтерококки 0, 22 28. 18 26.20 4. 27« 14. 10 г. об

Лактобапиллы 7,аз 1.36 55.70 15,08»» 12.20 1. 73 29. 34»

БиФидобактерин 32. 50 7.69« 37. 20 7. 10»» 0.27

клостридий 16. 10 3.06 14. 65 2,06 11.89 1.69

Протеи - - - - 43.04 •9, 45»«

Примечание: Н - вклад Фактора, в х; ? - критерии Фишера; » - р<о, 05; «« - р<0.01

Навй исследования характера исвнобиотического влияния алиментарного кальция на кииечнуи кикрофлору крыс показали, что как низков содеряанив ионов кальция в пиче, так и их пова-

СЕНСИБИЛИЗИРОВАННЫЕ КРЫСЫ

Гипокальциевая диета

Гиперкальциевая диета

ИНГАКТНЫЕ КРЫСЫ Гипокальциевая диета

I .ка-2

Гиперкальциевая диета I

но. 4. Влияние алиментарного кальция на микрофлору кишечника .,! интактных и сенсибилизированных крыс

1-лактозопозитивные этерихии; 2-лактоэонегативные эшерихии; З-энтеробактерии; 4-стафилококки; 5-энтерококки; б-«, »кто» бациллы; 7-бифидобактерии; 8-клостридии.

Заштрихованная часть диаграммы-диета с нормальным содержание» кальция.

достоверно различимые показатели.

венная концентрации оказываат сучествонноэ влияние нь состав свойства кишечной микрофлора крае (рис.4). Так, ыы установили, что низкое содернание кальция в лицевом рационе лабораторных аивотных вызывает достоверное сниаение количества лактобацилл (р<0,001'). энтерококков (р<0.01), бифидобактерий и клостридий до 5.90+0,64 и 0,9010,48 1е КОЕ /г исправнений соответственно, по сравнении с г?,00±0,56 и 3,22+1,17 КОЕ/г фекалий у крнс, находивиихся на диете с нормальный содеряанием кальция 1р<0,05 Вместе с тем, у крыс, получаввих гипокальциевув диету, увеличивалось количество кивечных палочек, не ферментирующих лактозу, на 5,55 1в КОЕ, стафилококков - на 2,4 1ц (р<0,05), недостоверно увеличивалось общее количество лактозонегативннх зкте-робактерий в 10 раз. В этой группе такяе отмечалось повыаение частоты висеваемости бактерий рода РгоЬеиз.

Повыкенное содеряание кальция в лицевом рационе крыс вызы вало аналогичные изменения, но менее вырахенные.

• Проведенный нами факторный анализ показал, что вклад фактора ксенобиотического влияния кальция в изменение параметров микробиоценоза толстой кивки ингактных крыс является наиболее существенным в отношение формирования количества лактобацилл, бифидобактерий и лактоэопозитивных эверихий - 55,52, 3?,2У. и 34,4% соответственно (р<0,01).' При этом следует отметить, что влияние ионов кальция на различные параметры микрофлоры кивеч-ника был довольно значимым, и для больиинства показателей было выве 14,65% (табл.4).

• При изучении возмояности алиментарной профилактики контактного аллергического дерматита и связанных с ним микроэкологических нарувений препаратами кальция мы установили, чте чрезвычайно низкое содерхание кальциевых ионов б диете крыс дс и после затравки наряду с достоверным увеличением количестве энтерококков на ¿ 1е. клостридий - на 1,7 1 в (р<0,05) и недостоверным увеличением количества лактозонегативннх энтероб^кте-рий вызывало резкое снижение количества стафилококков на 6 1{ КОЕ, лактобацилл - на 2,5 1й и бифидобактерий - на 2.2'1е'после сенсибилизации при отсутствии количественных изменений с( стороны лактозопозитивных зверихий С рис. 4>.

У нивотннх, получаввих питание с нормальным и повывеннш сод-еряаняем ионов кальция до затравки, после сенсибилизацш микрофлора кивёчника мало подвергалась изменениям. Количеств) лактозопозитивных кишечных палочек, бифидобактерий, лактоба-

и кластриднй сохранялось на урозна, близком к нормальному иди незначительно повивалось. При этой количество стафилококков, иыевщих значение при формировании атопических дермати-j'Oö {King 3. et al., 1992], сминалось на 3 lg КОЕ. Кроме того, в этих группах вивотных первичные ковные проявления развива-. .liKCb аа 3 - 4 дня позяе и были менее вырахенными.

й н В О д н

1. 3 больных' одонтогенныыи флегмонами челвстно-лицевой области в 80.tí 7. случаев выявляются микрозколсгические наруие-низ в толстом кишечнике, которые характеризуется дефицитом Ой- ' Фидойактерий, бактероидов и лактобацилл, изменением ферментативных свойств зяеркхий и высоким содеряанием условр-патогеи-ннх микроорганизмов, главным образом, в ассоциациях!

2. S работников химических производств, длительное время контактировавших с синтетическими моющими средствами, наблюдается достоверное снижение количества бактероидов, увеличивается число спорообразующих бактерий семейства Clostridiua и бактерий рода Proteus, а такке увеличивается удельный вес килечных палочек со сниненной ферментативной активностью.

3. При изучении свойств препарата амбен ( парааминометил-бензойиой кислоты ) в опытах in vitro и in vivo выявлена его стимулирующая активность в отношение зшерихий, бифидобактерий н лактобацилл и ингибирувцее действие на рост бактерий родов' Proteus, Staphylococcus, Clostridium, дрокшеподобных грибов.

4. Установлено, что при экспериментальном контактном дерматите у крыс нарушается нормальное соотношение бактерий ки-яечного биоценоза: увеличивается общее количество энтеробакте-рий и лактозонегативных эзерихий, содеряание энтерококков и бифидобактерий, снияается уровень клостридий,

5. Различное количественное содер!ание кальция в диете белых крыс отражается на состоянии микрофлоры; низкое содеряание кальция в пище зедет к снижении количества лактобацилл, бифидобактерий, энтерококков и клостридий и росту лактозонега-. тивных кишечных палочек и стафилококков.

6. Методами попудяционной генетики показано, что на из менчивость количественных характеристик транзиторной флоры ки-иечника человека заметное влияние оказывают ненаследственнне факторы (диета, воспалительные процессы в челюстно-лицевой об-

ласти, химические факторы, а такае другие факторы ннфвкциоино и неинфекционной природы), причем ведущим среди них является случайннй фактор.

?. Нарушения микрофлоры кивечннка у человека и вивотных под воздействием факторов инфекционной и неинфекционной природы не зависят от характера и особенностей патогенетического Фактора, и отличавтся лишь количественными и качественйыми (видовыми) изменениями микробного пейзала.

8. йикроэкологические изменения в толстом кииечнике стоматологических больных поддастся нормализации не только с помочью коррекции зубиотиками. но химическим препарататон аибе-нон, ингибирупщим протеолитические ферменты.

9. Комбинированное применение эубиотиков и анбена при гнойно-Еоспалительных заболеваниях челвстно-лицевой области оказывает более выраяенный нормализующий эффект на кикробнув флору кишечника, чем раздельное применение этих препаратов.

Практические рекомендации

1. Клиническое обследование больных острыми воспалительными заболеваниями челвстно-лицевой области доляно вклпчать исследование кишечной микрофлоры для выявления иикрозкологи-Ч8СКИХ сдвигов со стороны этого биотопа.

2. При лечении острых одонтогенных Флегмон челвстно-лицевой области наряду с традиционно применяющимися при этой патологии препаратами целесообразно назначать эубиотикн и/или ам-бен с учетом особенностей кишечного микробиоценоза.

3. При проведении клинико-лабораторных исследований у лиц, профессионально контактирующих с СИС, необходимо проводить бактериологическое исследование фекалий с целья своевременного обнарукения сдвигов i микробном пейзане кииечника.

4. Работникаи производства CMC для профилактики дисОактв-риоза кивечника целесообразно назначать препараты калъукя под контролем показателей кивечной микрофлоры!, •

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО 7Ш ДИССЕРТАЦИЙ

• 1. Наруиения микрозкологии велудочно-кивечного тракта при гнойно-воспалительных заболеваниях челвстно-лицевой области. В кн.' Гигиенические аспекты охраны окруааваей среды и здоровья человека. Сб. науч. тр. МНА им. И.М.Сеченова.-И., 1992,- С.118 -120.

I. Влияние слииэнтарного кальция на устойчивость организма к сенсибилизации, tСоавт. : Суханов Б.П., Королев А,Д., Вис-лобоков О. и др.). Там яе, С.124-127.

3. К вопросу о механизмах формирования микробиоцекоза кишечника здорового человекалСоавт.: Иноземцеза /1.0., Соловьева 0.Й.). // Тез. докл. 2-й научно-практической конференции моло-' дых ученых Казахстана,-И.,1993,-С.41-42.

4. О влияния ксенобиотиков на аикрофлору кииечника крыс s эксперимен те. (Соавт.: Несвияский Я.В., Иноземцева Л.0., Воробьев П.А. и др. ). Депонировано з ВИНИТИ. 17.06.93 г. N 1090 -В 93. ( рук./ 3 с.>

5-. Определение влияния единого ареала обитания на формирование микробного пейзааа толстого кишечника человека.(Соавт.: Инозеацзва /1.0., Воробьев А.А., Несвипский Ш.В.). Депонировано в ВИНИТИ. 17.06.33 г. Я 1691—В 93.( рук./7с. ). •

6. Применение ПАМБА в качестве стимулятора роста бифидобактерий, лзктобацилл, эверихий. (Соавт.: Горская Е.К.,. Бонда-ренко В.М., Воробьев й.А.). Заявка на патент H гос.регистрации 93052703 от 03.12.1993 г. ' '

7, Вичрофлора кивечника у больных острыми воспалительными заболеваниями челвстно-лицевой области. (Соаэт.: Бевз Н.И.,\ Папков Е.П., Тер-Асатуров Т.П.. Гончарова Г.И.)// Йурнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. Принята в печать.