Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Дисбактериоз кишечника и их коррекция кисломолочными продуктами, приготовленными с использованием индигенных микроорганизмов

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Дисбактериоз кишечника и их коррекция кисломолочными продуктами, приготовленными с использованием индигенных микроорганизмов"

Министерство здравоохранения Российской Фодарадкм

дасжактериозы кшечшсл и их коррекция тсжгктжшт продукта?«! . тптаоаявшшш с исзюяьзованием шщшздиых ШКРООРГАНЖШОВ

03.00.07 - микробиология

Автореферат диссертации ка соискшош ученой степени кандидата медицинских наук

Российский Государственный ьеедацимский университет

рго он

- 5 дпр 1933

На правах рукописи УДК 616. 34-ООа 87:576. 83-08

Ефимов Борис Алексеевич

Москва 1993

Работа выполнена в Российском Государственном цедицтвскои университете

Научный руководитель доктор медицинских наук, профессор & Ы. Коршунов

Официальные оппоненты: достор медицинских наук, Е С. Зуева догггор биологических наук, Л. П. Блшшгаа

Ведущая организация - Государственный научный центр т> анткбкатикшл

Задета диссертации состоятся "..........1993 г.

в ...... часов на заседании спец!шашгроваязюго учгшго

cesara Н 6 К. (Ш, 14. С5 Российского Государстсешгого иаде-i^sxsotíí ymizvpsiizsm ко адресу : 117523, г. Москва, ул. Оотграгмгя:юва. я 1

С Кйвевркщией можно оанагавдаься в бй&шяеке ÍW.

Автореферат разослан "......"...........1033 г.

Ученый секретаре слефэдвзаироваюгого ученого coserá

Т. Н. Клушша

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования.

В результате многолетних исследований установлена огромная значимость нормальной микрофлоры кишечника для поддержания здоровья человека на оптимальном уровне /Петровская. Е Г., Марко О. П., 1976; Панчишна М. В. , Олейнкк С. ф. , 1977; Блохина И. Е , Дорофейчук КГ., 1979; Щнегин Б. В., Мальцев A.R, Коршунов Е II , 1984; Красноголозец В. Е , 1989; Van der Waaij, 1988/.

При самых разнообразных неблагоприятных внешних воздействиях (экстремальных условиях, стрессовых ситуациях, антибактериальной терапии, лучевой болезни) у людей происходят глубокие нарушения. нормальной микрофлоры кишечника, которые, развившись вторично, отягощают течение основного заболевания, ухудшают его прогноз , а в ряде случаев приводят к развитию эндогенных инфекционных заболеваний. /Пинегин ЕЕ и др., 1984; Ташпулатов 1984; Прохорова И. И., 1991 г/.

Однако, до настоящего времени не проводились комплексные исследования качественных и количественных изменений микрофлоры кишечника у лиц, занятых в производстве антибиотиков, поиск эффективных средств профилактики и лечения таких нарушений микрофлоры кишечника. Кроме того, до настоядего времени остаются мало изученными вопросы лечения дисСактер.иоаов кишечника у летчиков-испытателей, пребывающих в экстремальных условиях.

В практическом здравоохранении для нормализации микрофлоры кииечника используются, в настояние время, сухие бактерийные препараты на основе лакто- и бифидобактерий, а также энтерококков /Гончарова, 1980; Семенихина, 1982; Borggeta, 1981 /.

В то же время перспективным для профилактики и лечения дис-бактериозов кишечника является применение кисломолочных продуктов, готовящихся с использованием нндигенных микроорганизмов.

Гакие препараты являются физиологичными, содержат большое количество живых бактерий и целый ряд биологически.активных веществ- продуктов жизнедеятельности бактерий (витамины группы В, органические кислоты, лизоцим, незаменимые жирные кислоты и. др.), просты в производстве и могут бить использованы в качестве продукта питания /Гончарова, 1879; Семенихина, 1982; игнЗегйаЬэ, 1988/.

Цель исследования.

Целью настоящей работы явилось изучение качественного и количественного состава микрофлоры кишечника у лиц, которые в процессе своей трудовой деятельности подвергаются воздействию, неблагоприятных факторов (производственный контакт с антимикробными препаратами; нервно-эмоциональные и физические перегрузки) и коррекция их микрофлоры с помощью различных кисломолочных препаратов, ' приготовленных на основе микроорганизмов-

V -

представителей нормальной микрофлоры кишечника.

Задачи исследования.

В соответствии с поставленной целью в задачи исследования входило:

1. Изучить качественный и количественный состав микрофлоры кишечника у сотрудников предприятия, производящего различные антибактериальные препарата

2. Изучить качественный и количественный состав микрофлоры кишечника у летчиков-испытателей сверхзвуковых самолетов.

3. Изучить влияние кисломолочного бифидумбактерина, выраба тываемого на основе В.ЫПс1ит 791, на микрофлору кишечника лиц контактирующих с антибактериальными препаратами в процессе производственной деятельности, и летчиков-испытателей сверхвву новых самолетов.

- з -

4. Разработать новую кисломолочную смесь для лечебного питания на основе штамма энтерококков 5. Гаесшт УДС-86.

5. Изучить влияние кисломолочного продукта, приготовленного на основе Б, Гаесшт УДС-86 на микрофлору кишечника в эксперименте и у добровольцев.

Научная новизна.

Впервые была проведена количественная и качественная оценка состояния микрофлора кишечника у работников фармацевтического предприятия, контактирующих с антибиотиками (в процессе их производства), и у летчиков-испытателей сверхзвуковых самолетов. Впервые было проведено изучение эффективности препарата кисломолочного бифидумбактерина при лечении дисбактериозов кишечника у сотрудников фармацевтического предприятия, занятья в производстве антибиотиков, и у летчиков-испытателей сверхзвуковых самолетов.

В результате исследований впервые получен итамм энтерококков Э.Гаес1ит УДС-86. Данный микроорганизм является представителем микрофлоры кишечника человека и характеризуется высокой антагонистической активностью по отношению к ряду патогенных и условно-патогенных бактерий, непатогенностью для лабораторных животных и безвредностью для человека, способностью сквашивать молоко. Впервые-на основе данного штамма энтерококков был получен кисломолочный продукт обладающий хорошими органолептически-ми свойствами. Полученный препарат был эффективен при коррекции микрофлоры кишечника у добровольцев, имеющих продолжительный контакт с антибиотиками, в связи с их профессиональной деятельностью. На данный штамм энтерококков было получено авторское свидетельство на изобретение N 1497211.

Практическая и научная ценность работы:

Полученные результаты убедительно показывают на глубокие и

- 4 - ■

стойкие нарушения нормальной микрофлоры кишечника у лиц, работающих в контакте с антибиотиками, и у летчиков-испытателей сверхзвуковых самолетов, что является показанием для постоянного контроля за микробным статусом кишечника у этих категорий трудящихся с целью проведения профилактики, и лечения дисбактериозов кишечника

Было установлено, что коррекцию микрофлоры кишечника при развитии дисбактериозов кишёчника у лиц, работающих в контакте с антибиотиками, и у летчиков-испытателей сверхзвуковых самолетов можно эффективно проводить с помощью кисломолочного бифидумбак-терина

Применение кисломолочной смеси, приготовленной с использованием изученного штамма энтерококков, позволило эффективно нормализовать микрофлору кишечника у добровольцев, контактирующих с антибиотиками.

По материалам диссертации были опубликованы методические рекомендации . для практического здравоохранения "Диагностика, профилактика и лечение дисбатаериозов кишечника", Ю СССР, 1991 г.

Апробация работа

Основные положения диссертации были доложены на научной конференции кафедры микробиологии с курсом МВФ РГЫУ в июле 1991 г.

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Структура диссертации. Работа изложена на русском языке на страницах машинописного текста, состоит из введения, 4 глав и выводов. Библиография включает в себя наименований работ отечественных и зарубежных авторов.

- б -СОДЕРЖАНИЕ РАБОТУ 1. Материалы и методы.

В процессе исследования была изучена микрофлора кишечника у 150 работников ПО Мосмедпрепараты им. Л. Я. Карпова, причем у 80 ив них, двукратно, до и после лечения кисломолочным бифидумбакте-рином; у 6 летчиков-испьггателей сверхзвуковых самолетов до и после лечения тем же препаратом, а таю® у 10 добровольцев до и после применения у них кисломолочного продукта, приготовленного с помощью энтерококков.

Материалом для микробиологического исследования служили фекалии обследуемых,

При изучении состояния микрофлоры кишечника определяли количество колониеобразующих единиц бифидобактерий, лактобакте-рий, бактероидов, зубактерий и других неслорообрааующих анаэробных бактерий, стафилококков, энтерококков, дрожжвподоСних грибов рода Candida и энтеробактеркй в 1 г испражнений, путем высева различных разведений исследуемого материала на соответствующие селективные питательные среды /Гончарова Г. И., 1968; Ленцнер A.A., 1973; Калина Г. П., 1972; Мальцев RR, 1977; Шур-калин Е К. , 1987/.

Для коррекции микрофлоры кишечника у работников ГЮ Ыосмедп-репараты и летчиков-испытателей использовалась лечебно-питательная смесь - кисломолочный бифидумбактерин, которая готовилась путем сквашивания молока закваской из штамма бифидобактерий В. bi-fidum 791, любезно предоставленного нам д.iah. Г.И.Гончаровой.

Кисломолочный бифидумбактерин назначался 1 раз в сутки в количестве 200 ш на прием. Продолжительность лечения составляла 25 дней.

№амм энтерококков S. faecium У ДО 86 был выделен накы иа ки-

шечника эдорового взрослого человека. Определение биохимических свойств данного штамма энтерококков проводили при помощи системы АР1-20 Б1гер1; серологическая идентификация проводилась при помощи специфических антисывороток к стрептококкам группы Д (01Гсо)

Наличие каталазы, активность ДНК-азы, лецитиназы, плаамокоа-гулазы и другие протеолитические свойства энтерококков определяли по общепринятым методикам /М. 0. Еиргер, 1982 г/.

Наличие ллаэмид определяли тепловым методом Холмса и Куин-глей /1981/ и щелочным методом, предложенным Еирнбоймом и Доли, /1979/ о некоторыми модификациями.

Чувствительность энтерококков к антибиотикам определяли методом двукратны? серийных разведений в жидкой питательной среде /С. Навадада, У1П. Зомина, 1974/.

Антагонистическую активность энтерококков по отношению к ряду патогенных и условно-патогенных микроорганизмов определяли методом совместного культивирования в жидкой среде, модифицировав его применительно к особенностям культивирования энтерококков.

Проверка непатогенности энтерококков проводилась на 50 нелинейных мышах и 50 мышах линии СВА, массой 18-20 г, которым

9

вводах» указанный югамм в количестве 1.0x10 микробных клеток на мыжь, йитрагастрально через зонд. Животные получали энтерококки 1 раз в сутки в течение 30 дней. В течение всего периода введения штамма энтерококка и последующих 30 дней животные находились под наблюдением. Спустя 1, 5, 10 и 30 суток от начата введения бактерий, животных забивали по три нелинейных мыши и 3 мыши линии СБА, вскрывали брюшную полость, грудную клетку, отмечали состояние внутренних органов сразу после вскрытия. Исследование транслокации энтерококков производили путем бактериологи-

ческих исследований следующих органов: печени, селезенки, участков толстой и тонкой кишки, лимфатических узлов.

Экспериментальную работу по изучению влияния штамма энтерококков 3. Гаес1шп УДС-86 и кисломолочной смеси, приготовленной на их основе, на микрофлору кишечника, проводили на беспородных мышах и мышах линии СБА обоего пода, массой 18,0-20,0 г. Всего в работе использовано более 150 животных. Материалом для микробиологического исследования служил тонкий кишечник мышей.

Определение нетоксигенности, апирогенности и переносимости энтерококков для людей проводились на добровольцах: сотрудниках кафедры микробиологии РГМУ.

С целью изучения влияния кисломолочной смеси, приготовленной путем сквашивания молока закваской из штамма энтерококков Б. Гаес1ит УДС-86, на количественный и качественный состав микрофлоры толстого кишечника добровольцев, определяли в динамике количество бифидобактерий, лактобактерий, стафилококков, энтерококков и энтеробактерий, путем высева различных разведений исследуемого материала на соответствующие селективные питательные среды. Кисломолочная смесь назначалась 1 раз в сутки в количестве 200 мл на прием, в течение 20 дней.

Статистическую обработку полученных данных проводили методом вариационной статистики с вычислением средней арифметической, среднего квадратичного отклонения, средней ошибки, средней величины, достоверности различных средних,сравниваемых показателей определяли по критерию Стыодента /И. П. Ашмарин, А. А. Воробьев, 1962/. Полученные данные представлены в 1г КОЕ на 1 г исследуемого материала /Лакин Г. Ф., 1973/.

2. Основные результаты исследования.

I

2.1. Изучение состава микрофлоры кишечника у лиц,

имеющих в процессе производственной деятельности контакт с антибактериальными препаратами различного спектра действия.

В своих исследованиях мы обнаружили что, у рабочих (21 человек) контактирующих на протяжении 5 лет и более с гентамици-ном, рифампицином, ампициллином и органическими растворителями-дисбактериоз кишечника проявлялся в значительном снижении в содержимом кишечника количества бифидо- и лактобактерий (рис. 1). У 43% обследованных было выявлено присутствие в большом количестве лактозонегативных кишечных палочек. У 14,2% обследованных этой группы высевались кдебсиеллы (К.pneumoniae). причем у 9,5Х человек клебсиеллы находились в кишечнике в ассоциации с Е. cloacae уровень которых колебался от 3.0 до 7.0 КОЕ/г иссле-

рис.1 Состав микрофлоры кишечника у сотрудников фармацевтического предприятия (омднмтР) Алятмъняй контакт)

KOE/г исследуемого «йггерката

¿ро>жй») 1 лйктЬбЛс.1 бйктЬроиды E.coli L- энтерококки бифидобак. клостридии

m гонгами инн рифашишм

СИ /киюииихн «пицнл/мн полувтт™.««»

оргаттвхи* ровтворитми

п«ницил/мны

ЛИКЛСКСОЦИЛ/ИН

вибиомииин

гвмоепорицик

холжхлорид

дуемого материала. Шюстридии выделялись у 25Z обследуемых.

Наиболее выраженные диебнотические изменения микрофлоры

кишечника отмечались у лиц, имевших постоянный контакт с линкоми-

цином и полусинтетическими пенициллинами (2-я группа, 24 человек).

У 80% обследуемых этой группы уровень бифидобактерий был ниже У

10 КОЕ/г исследуемого материала. У 20% обследованных бифидо-бактерии хотя и определялись, однако их средний уровень был значительно ниже нормы. Лактобактерии выявлялись только у 641 обследованных этой группы, ио их количество было значительно снижено. У 90% обследуемых лиц выделялись гемолизинпродуцирующие формы стафилококков, а у 75% обследуемых высевались lac- кишечные палочки.

У 3-й группы обследованных (18 человек), куда вошли работники, контактировавшие в течение 5 и более лет с диклоксацилли-ном, дибиомицином, гемоспорицином, холинхлоридом и органическими растворителями, дисбиотичеекие изменения носили менее выраженный характер, чем у лиц 1 й и 2 й групп. Так, бифидобактерии ьысевались у 66?. обследованных, и средний уровень этих микроорганизмов равнялся 7. 3t0.3 КОЕ/г исследуемого материала Лактобактерии выделялись у всех обследованных пациентов этой группы и, в среднем, составляли 6.7±0.3 КОЕ/г исследуемого материала. В то № время, у 85% обследуеммых пациентов в фекалиях обнаруживались клосгридии, уровень которых достигал 5. 440. 6 КОЕ/г исследуемого материала. Уровень энтеробактерий у обследуемых пациентов третьей группы был близок к верхним границам нормы. . Лактозонегативных форм эитеробактерий и гемолиэинпродуцирукщих стафилококков, в испражнениях лиц, входивших в третью группу, выявлено не было. Однако, количество негемолитических форм стафилококков превышало норму.

Таким образом, в результате проведенных исследований было установлено, что у ярех лиц, имевших длительный контакт с анти-

микробйыми препаратами, отмечались выраженные нарушения микрофлоры кишечника, при этом ее качественные и количественные изменения зависели от спектра антибактериальных препарататов, с которыми контактировали обследованные лица по роду своей профессиональной деятельности.

В дальнейших исследованиях проведено изучение микрофлоры кишечника у сотрудников ежедневно, но кратковременно, контактирующих со всем указанным спектром антибиотиков (контролеры, наладчики оборудования, инженеры и др., рис. 2)

Выраженные нарушения нормальной микрофлоры кишечника обнаруживались в тех случаях,' когда стаж работы на данном предприятии превышал 5 лет (4 группа, 25 человек). Эти изменения проявлялись в резком снижении в кишечнике уровней бифидобактерий, лак-тобагегерий, неспорообразуходх грамотрицательных анаэробных бак-

рис.2 «остов микрофлоры кишечника у сотрудников <рармаи«втичеокого прдприятия

(ежедневный кратковременный контакт с антибиотиками)

КОЕ/г исследуемого материала

£.со!11+ ' ст'аршакбккн ' лрмши ' яаЬобскт'врш 'СЫпроиш СлоИ Ь- . »нтврококки бифндобактврия кловтридии

ЁЗЗ контакт до 9 лет Е5Э контакт Со лее 5 лет

терий. Кроме того у 80Z обследованных данной группы присутствовали в большом количестве lac- кишечные палочки (7,2 0,8 КОБ/г исследуемого материала); в 27,87. случаев выделялись протеи; у

8% обследуемых выявлялось присутствие клебсиелл в большом коли-6

честве (более 10 КОЕ/г исследуемого материала). У 551 работников были выделены гемолизинпродуцируюшие формы стафилококков. Таким образом кратковременный, но ежедневный, на протяжении 5 лет и более, контакт со всеми антибиотиками, выпускающимися на данном предприятии, приводил к глубоким нарушениям нормальной микрофлоры кишечника.

!

У работников инженерно-технических служб, работающих на предприятии менее. 5 лет явления дисбакгериоза были выражены в значительно меньшей степени, чем у инженерно-технического персонала со стажем работы на данном предприятии более 5 лет.

Таким образом у лиц, постоянно работающих в цехах по производству антимикробных препаратов,'а также у служащих данного предприятия, имеющих стаж производственной работы более 5 лет, происходит гарахенное нарушение нормальной микрофлоры кишечника. Такие нарушения естественно приводят к снижению колонизационной резистентности Кишечника, что существенно увеличивает вероятность заболеваний как эндо- так и экзогенной природы, особенно в тех случаях, когда сотрудники данного предприятия подвергаются воздействию экзогенных неблагоприятных факторов (погрешность в диете, нервно-эмоциональные перегрузки, загрязнение окружающей среды, переохлаждение,повьшеиный уровень ионизирую- . щей радиации и. д. ). В связи с этим, в группах выше перечисленных рабочих и служащих, необходимо, своевременно, проводить мероприятия по предупреждению развития дисбактериозов кишечника, а в случаях необходимости и соответствующее лечение данной патологии.

-122.2. Изучение микрофлоры кишечника у летчиков-испытателей

сверхзвуковых самолетов. В результате проведенных исследований было установлено, что регулярные профессиональные перегрузки у летчиков-испытателей приводят к нарушениям нормальной микрофлоры кишечника, проявляющимся в выракенном дефиците бифидо- и лактобактерий и присутствии в избыточных количествах клостридий, стафилококков и энте-робактерий (эиерихий, клебсиелл, энтеробактеров). Эти микроорганизмы в большинстве случаев занимали доминирующее положение в микрофлоре кишечника (рис. 3).

Таким образом у летчиков-испытателей подвергающихся, нерв-ноамоцданальнш и физическим перегрузкам, происходит развитие дисбактериозов кишечника, что требует проведения постоянного контроля за состоянием микробного статуса их кишечника и своевременной его коррекции.

рис.Э Микрофлора кишечника у летников-испытателей сверхзвуковых самолетов

КОЕ/г исследуемого материала

волонтеры

-132. 3. Влияние кисломолочного бифидумбактерина на нормализацию микрофлоры кишечника у рабочих и служащих фармацевтического предприятия, контактирующих с антибактериальными препаратами.

Работники предприятия, контактирующие с антибактериальными препаратами в процессе их производства, были разделены на две группы. Первую группу обследуемых- (44 человека) составили сотрудники, ежедневно кратковременно контактирующие с гентамицином, рифампицином, полусингетическими пенищшинами, диклоксацилли-ном, дибиомицином, гешепорицином, холипхлоридом, органическими растворителями (более 5 лег). Вторую группу (60 человек) составили работники, ежедневно длительно контактирующие со всеми антибактериальными препаратами (более 5 лет).

У обследуемых лиц первой группы, после проведенного курса

3 ч

лечения, уровень бифидобактерий повышался в 10 -10 р&з и восстанавливался до нормы (рис. 4). Уровень лактобактерий, у обследуемых первой группы, повышался более чем в 80 раз и состав-"

рис.4 Влияние кисломолочного бифидумбактерина

на микрофлору кишечника у сотрулникоо

, «рармацевтичоского продприятия ' .

(ежедневный кратковременный контакт с антибиотиками;

КОЕ/г исследуемого материала

"е ¿oll 1оо+ ' «тафилококкй »«тв^ококки' 5ифиЬоб<жт.' клвс^ридии'

E.coifloo- ога(рил>к.(г«м) дрожжи /гактобактерии вахтяронлн

до /вчения BS3 пос/в лечения

лял 7,3±0.4 КОЕ/г исследуемого материала. Параллельно с этим происходила полная элЛиминадия, не характерных для нормальной микрофлоры lac- эшерихий, протеев; клебсиелл, энтеробактеров, гемолизинпрдуцирующих стафилококков. Количество стафилококков у обследуемых этой группы уменьшалось в 234 раза

У пациентов второй группы после проведенного лечения, также отмечалось эффективное восстановление уровней бифидо- и лакто-бактерий (9.0±0.3 и 7,5*0,1 КОЕ/г исследуемого материала соответственно). Параллельно с этим, из кишечника элиминировались lac- эшерихии. Общий уровень стафилококков у пациентов второй группы снижался в 6,6 раза; количество дрожжеподобных грибов рода Candida уменьшалось в 10 раз (рис.5).

~i—---~-~—:-~~~ ~ 1 ~

рис.5 Влияние кисломолочного бифидумбактерина па микрофлору кишечника у сотрудников

, ■> фармацевтического Предприятия .

(ежедневный длительный контакт с антибиотиками/

Таким образом, применение кисломолочного бифидумбактерина, обеспечило быструю и эффективную нормализацию микрофлоры кишечника у рабочих.« служащих предприятия по производству различных

г'"к ' '

антимикробных препаратов.

-152.4. Влияние кисломолочного бифидумбактерина на микрофлору кишечника у летчиков-испытателей сверхзвуковых самолетов.

Навначение препарата- кисломолочного бифидумбактерина летчикам- испытателям приводило к выраженной нормализации микрофлоры кишечника (рис. б). Это проявлялось в повышении количества эн-

рис.6 Влияние кисломолочного бифидумбактерина но микрофлору кишечника у лвтчиков-испь— татолей сверхзвуковых самолетов

КОЕ/г исследуемого материала

догенных бифидобакгерий и лактобацилл (в 100 и более раз и в 10-15 раз соответственно), снижении уровней клостридий и стафилококков и элиминации клебсиелл и энтеробактеров.

. Таким образом, полученные данные показали, что препарат кисломолочного бифидумбактерина обеспечивает эффективное восстановление нормальной микрофлоры кишечника у лиц, подвергающихся' регулярным нервно-эмоциональным и физическим перегрузкам. В связи с этим, данный, препарат может быть использован для профилактики и лечения дисбактериоэов кишечника у данного контингента

летчиков.

2.5. Получение стрептококков S. faecium УДС-86 и изучение их биологических свойств.

Логическим продолжением исследований в направлении разработки методов коррекции дисбактериозов кишечника является создание поликомпонентных бактериальных кисломолочных продуктов с включением в них, кроме бифидобактерий, и других представителей нормальной микрофлоры кишечника, обладающих высокой антагонистической и кислотообразующей активностью, естественной хромосомной устойчивостью к антибиотикам, и способных повышать колонизационную резистентность кишечника.

Одним из представителей нормальной микрофлоры кишечника человека и животных, играющих важную роль в формировании колонизационной резистентности, являются энтерококки.

В результате исследований было установлено, что штамм энтерококков S. faecium УДС-86 обладает следующими свойствами: сбраживает мальтозу, целлюлозу, сорбит, сахарозу, лактозу, маи-нит, салицин; не сбраживает D-арабиноэу, рафинозу, рамнозу, глицерин, ксилозу, инозит, дульцит. Максимальная величина общей титруемой кислотности ( к 24 часам от начала культивирования) достигает 250-270°Т; - характеризуется высокой антагонистической активностью по отношению к Staphylococcus aureus 209-Р, Staphylococcus aureus 10А-3, Staphylococcus saprophiticus 12, Staphylococcus epidermidis 104-E, Esherichia coli 0111, Proteus mirabilis 771, Salmonella dublin C-96, Klebsiella pneumoniae К 3-4Î2 Vir. - обладает естественной, не плазмидной, устойчивостью к линко-

t

мицину в доэе 1,0 мкг/мл, к левомицегину (10.0 мкг/мл), нитрок-солину (100,0 мкг/мл), гентамицину (4,0 мкг/мл), нистатину (100,0 мкг/мл), одеандомицину (1000,0 мкг/мл), полнмиксину (5000.0 мкг/мл), канамицину (10000,0 мкг/vui), клафорану (1000,0 мкг/мл), ампициллину (1,0 мкг/мл).

Проверка полученного штамма энтерококков на непатогенность показала, что штамм S. faeoium УДС-86 не патогенен для экспериментальных животных и безвреден для человека

2.6. Технология приготовления кисломолочного продукта на основе закваски из штамма энтерококков S. faecium УДС-86.

В результате сквашивания стерильного аолока закваской, включающей пгтамм энтерококка S. faecium УДС-86, нам удалось получить кисломолочный продукт с хорошими органолептическими свойствами. Продукт имел равномерный, нежный сгусток, приятный кисломолочный вкус и запах, напоминающие ряженку. Кислотность кисломо-' лочной смеси не превышала 100°Г. Бремя сквашивания напитка составляло 10-12 часов.

В последующих экспериментах было проведено изучение апато-генности, полученной кисломолочной смеси на модели животных. Кисломолочная смесь проверялась на отсутствие патогенных свойств на мышах (линии СБА). Результаты наблюдений показали, что интрагастральное введение кисломолочной смеси, приготовленной путем заквашивания молока закваской из S.faecium УДС-86, в количестве 0,25 мл/мьшь на протяжении 30 дней не вызывало каких-либо патологических нарушений у экспериментальных животных. На протяжении всего курса применения Препарата и последующих 30 дней мыши были активны, не отмечалось отклонений от нормы со стороны функционирования желудочно кишечного тракта, вес животных в опытных и контрольных группах не уменьшался. На протяже-

нии всего периода наблюдения в опытных группах не погибло ни одного животного.

Таким образом, было установлено, что кисломолочный продукт, приготовленный с помощью штамма энтерококков Б. Гаесидш УДС-86, отличался быстротой сквашивания, умеренной кислотностью, имел хорошие органолептические свойства и был непатогенен для животных. Это позволило нам перейти к следующему этапу наших исследований, в которых полученный препарат использовался для коррекции микрофлоры кишечника у мышей, при специально созданном у них экспериментальном химиотерапевтическом дисбактериозе.

2.7. Изучение влияния кисломолочного продукта, приготовленного на основе Э. ГаесШт УДС-86, на микрофлору тонкого кишечника мышей при экспериментальном дисбактериозе.

Здоровым конвенциональным мышам иитрагастрально вводили в течение 5 дней ампиокс в дозе 4 мг/мышь, вызывая таким образом

рис.7 Влияние кисломолочного продукта, приготовленного на основе ЗЛаескт УДС-86, на микрофлору тонкой кишки у мышей

КОЕ/г исследуемого материола

энтеробактвриистафилококки энтерококки локтобсктерми

мыши

ЕЭ конвенциональные Ш опылше контрольные

(первый день после отмены шпиоксо)

у них дисбактериоз кишечника (рис. 7).

На первый день после отмены антибиотиков у мышей контрольной группы в тонком кишечнике отмечалось значительное увеличение количества энтеробактерий, стафилококков и снижение количества лактобактерий по сравнению с конвенциональными мышами.

фи параллельном' введении животным опытной группы ампиокса и кисломолочной смеси, приготовленной с использованием штамма энтерококков Б. Гаес1шл УДС-86, на первый день после отмены антибиоТика уровень энтеробактерий и стафилококков в тонкой кишке был существенно ниже, чем у животных контрольной группы. Уровень лактобактерий в"этом отделе кишечника наоборот, более чем в 100 раз, превшая количество лактобактерий в тонкой кишке у контрольной группы мышей.

На шестые сутки после отмени ампиокса (на первый день после отмены кисломолочной смеси) у иивотяых опытной группы в тонкой

рис.8 В/тяни» кисломолочного продукта, приготовленного «о основ» Б.Тавсгшп УДС—86, но микрофлору тонкой кишки у МЫШОП

КОЕ/г исследуемого материала

мыши

033 конвенциаиааьнив ШШ опытные контрольные

(6-лень после отмены ампиокса)

кишке наблюдалось дальнейшее снижение количества стафилококков до нормального уровня [3,3*0,3 КОЕ/г исследуемого материала], тогда как у животных контрольной группы уровень стафилококков в тонкой кишке оставался повышенным и составлял 5,0i0,3 КОЕ/г исследуемого материала Уровень, лактобактерий в тонкой кишке животных опытной группы, более чем в 10 раз превышал уровень этих микробов в тонкой кишке контрольной группы мышей, и составлял 6,7i0,07 и 5,510,4 КОЕ/г исследуемого материала соответственно.

Таким образом, на модели экспериментального химиотерапевти-ческого дисбактериова кишечника, было установлено, что кисломолочный препарат на основе S. faecíum УДС-86 позволяет эффективно предупреждать развитие дисбактериоэа, обусловленного назначением антибиотиков.

2.6. Изучение влияния кисломолочного продукта, приготовленного на основе S. faecíum УДС-86, на микрофлору толстого кишечника людей, контактирующих по роду своей профессиональней деятельности с антибиотиками.

Исследования проводились на сотрудниках кафедры микробиологии РГЫУ, которые в течение последних 2-х месяцев имели постоянный контакт с антибиотиками различного спектра действия (ампи-окс, гентамицин, ципрофлоксашн, абактал, нистатин). Такой контакт с антимикробными препаратами был вызван неоходимостью проведения исследований на модели химиотералевтического дисбактериоэа у животных, а также с необходимостью экспериментального получения тотально деконтаминированных животных.

Под наблюдением находилось 8 добровольцев в возрасте от 26 до 43 лет. У всех добровольцев до и после лечения (0-й и 21-й день) исследовали микрофлору содержимого полости толстой кишки. Кисломолочный продукт назначался 1 раз в сутки в количестве 200

- 21мл на прием. Продолжительность лечения составляла 20 дней (рис. 9)

рис.9 Влияние кисломолочного продукта, приготовленного на основе S.faacium УДС-86, на микрофлору кишечника у добровольцев

НЮ до лэчэния ЕМ посла /вменив

У обследованных лиц, было выявлено снижение количества би-фидобактерий, лакгобактерий и энтерококков по сравнению с нормой (8,38±0,2б , 6,7+0,27 КОЕ/г и 5,3±0,31 КОЕ/г исследуемого материала соответственно). Число лактозопозитивиых кишечных палочек составляло 8,б±0,29 КОЕ/г исследуемого материала. Стафилококки выявились у - трех добровольцев в количестве 4,0t0,4 КОЕ/г исследуемого материала. Кроме того у 'пяти человек в фекалиях обнаруживались дрожкеподобные грибы рода Candida (3,7+0,5 КОЕ/г исследуемого материала), и у трех человек клостридии' (4,0±0,Z КОЕ/г исследуемого материала).'

Прием в течение 20 дней кисломолочного продукта, приготовленного с использованием штамма S. faecium УДС-86 добровольцами, и« вызывал у последних каких-либо расстройств, нарушений функций жглудочно кишечного тракта и организма в целом. На протяже-

нии всего периода наблюдений (30 дней после завершения приема препарата) общее состояние добровольцев, получавших кисломолочную смесь, характеризовалось как удовлетворительное, самочувствие как хорошее. Температура тела была нормальной, вес не изменялся, аппетит оставался хорошим, нарушений моторики и выделительной функции кишечника не наблюдалось.

После проведенного лечения у всех добровольцев отмечалось увеличение уровня лактобактерий, бифидобактерий и энтерококков на фоне снижения количеств энтеробактерий, стафилококков, клос-тридий и дрожяеподобных грибов рода Candida.

Таким образом из представленных результатов видно, что применение кисломолочной смеси, приготовленной с использованием . штамма энтерококков S,faecium УДС-86, приводило к нормализации микрофлоры кишечника. 1 ч

ВЫВОДЫ

1. Ежедневный контакт сотрудников "фармацевтического предприятия с антибиотиками в процессе их производства приводит к возникновению у них глубоких дИсбактериозов кишечника. Степень выраженности дисбактериозов кишечника и качественные изменения в составе нормальной микрофлоры, зависят от длительности контакта с антибиотиками и их спектра.

.2. Профессиональные перегрузки у летчиков-испытателей сверхзвуковых самолетов приводят к выраженным изменениям нормальной микрофлоры кишечник

3. Применение кисломолочного бифидумбактерина, вырабатываемого путем сквашивания молока штаммом бифидобактерий В. bifidum 791, способствует быстрому и эффективному восстановлению нормальной микрофлоры кишечника у лиц с дисбактериозами кишечника, обусловленными контактом с антибиотиками в процессе их производства. ■

-234. Применение кисломолочного бифидумбактерина обеспечивает быструю и выраженную коррекцию микрофлоры кишечника у летчиков-истлателей сверхзвуковых самолетов.

6. Штамм энтерококков S. faecium УДС-86 обладает высокой кислотообразующей и антагонистической активностью по отношению к ряду зятеропатогениых микроорганизмов (стафилококков, клебси-елл, сальмонелл, кишечных палочек, протеев).

6. Кисломолочный продукт, приготовленный путем заквашивания молока закваской из штамма энтерококка S. faecium УДС-86, способен восстанавливать микрофлору кишечника при экспериментальном хи-миотерапевтяческом дисбактериозе.

7. Кисломолочный продукт, приготовленный на основе S. faecium УДС-86, обладает хорошими органолептичесютми свойствами, безвреден для человека и способен нормализовать микрофлору кишечника при дисбактериозах.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕШ ДОСЕРТ/ЩИИ 1/. Влияние энтерококков на микрофлору кшечника при экспериментальных дисбактериозах. Материалы международной конференции "Гнотобиология в теоретической и практической медицине", Москва, 1987, с. 32. /В соавт. с Т. А. Логадырь, Н. П. Ивановой, В. II Коршуновым/. 2/. Влияние энтерококков на восстановление микрофлоры кишечни- . . ка,измененной в результате антибиотакотералии и углеводного питания. Ж. "Антибиотики и химиотерапия", N6,1989, с. 433-437. /В соавт. CRM. Коршуновым, Т. А. Логадырь, С. Е Барзашка-Попо-вой, Н. П. Тарабриной, И. А. Гладько/. ' 3/. Авторское свидетельство на изобретение N 1486514 "Штамм энтерококков S. faecalis Н-22, используемый для приготовления бактерийных препаратов", 1989. VB соавт. с В. М. Корпгуно-

вым, Е Е Ивановой. Т. А. Логадырь/.

4/. Авторское свидетельство на изобретение N 1497211 "Штамм энтерококков S. f'aeci um УДС-86 используемый для приготовления бактерийных препаратов 1989. /В соавт. с Е М. Коршуновым, E IL 'Ивановой, Т. А. Логадырь/.

5/. Изучение состояния микрофлоры кишечника у лиц, находящихся в контакте с различными антимикробными препаратами, Журн. мик-робиол. , N9, 1991, с. 25-27. ./В соавт. с Л. И. Кафарской, И. А. Гладько, Е Е Тарабриной, Р. Д. Фоне кой, Е М. Коршуновым/.

6/. Диагностика, профилактика и лечение дисбактериозов кишечника. Методические рекомендации Ю СССР. Москва, 1991, с. 15. /В аоав. с Е М. Коршуновым, JI И. Кафарской, И. А. Гладько, Е Е Тарабриной, ЕК Смирновым, Р. Д. Фонской, Г.И.Гончаровой/.

7/. Efficacy lactic acid bifidobacterin in treating patients with chemotherapeutlс dysbacteriosis. 5-th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, Norway, 1991, ¡1.206. /L. 1. Kafarskaya.N. P.Tarabrina, I. A.'Gladiko, V. M. Korshunov/.

8/. Коррекция химиотерапевтических дисбактериозов с помощью кисломолочного бифидумбактерина Тезисы докладов всесоюзной конференции "Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций", Москва, 1991, с. 321-322 /В соавт. с Е М. Коршуновым, JL И. Кафарской, Е Е Тарабриной, И. А. Гладько/.

9/. Авторское свидетельство на изобретение N 1674562 "Способ отбора штаммов бактерий "•'я приготовления препаратов эубио-тиков", 1991. /В соавт. с В. М. Коршуновым, Е А. Петровым/.

10. /Изучение влияния кисломолочного бифидумбактерина на микрофлору кишечника летчиков- испытателей. Журн. микробиол. N4, 1992, с. /В соав7'. с Л. И. Кяфарской, И. А- Гладько, Е Е Тарабриной, Е М.'Скаорцопым, В. М. Коршуновым/.