Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Микроэкологические особенности биотопов у больных ВИЧ-инфекцией, употребляющих психотропные средства

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микроэкологические особенности биотопов у больных ВИЧ-инфекцией, употребляющих психотропные средства"

На правах рукописи

03 эО/-СЮеЯ е)

УДК 616.98-056.83-008.87-036

Беляев Андрей Михайлович

МИКРОЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ БИОТОПОВ У БОЛЬНЫХ ВИЧ - ИНФЕКЦИЕЙ, УПОТРЕБЛЯЮЩИХ ПСИХОТРОПНЫЕ ВЕЩЕСТВА

03.00.07 - микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Республика Казахстан Астана 2000

Работа выполнена в Карагандинской государственной медицинской академии

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

- доктор медицинских наук, профессор Алмагамбетов К.Х.

- кандидат медицинских наук, доцент Снопков В.Н.

- доктор биологических наук, профессор Бисенова Н.М.

- кандидат медицинских наук Лобынцева Е.П.

Ведущее учреждение: Казахский государственный

медицинский университет им. С.Д. Асфендиярова

Защита состоится « _ »_ 2000 г. в_часов на заседании диссертационного совета Д.09.06.01. при государственной медицинской академии ( г. Астана, ул. Сары-Арка, 95).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке государственной медицинской академии г. Астана.

Автореферат разослан "_"_ 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат медицинских наук, Кабылденова Г. А.

Р5~М- М- - £1> 0

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Проблема СПИДа приобрела чрезвычайную актуальность в глобальном масштабе. Быстрое пандемическое распространение заболевания, высокая летальность, длительный инкубационный период, широко распространенное вирусоносительство - вот характерные черты СПИДа, определяющие сложность борьбы с этой инфекцией /ВОЗ, 1986; Покровский В.И.,1992; Покровский В.В.,1996; Белозёров Е.С.,1995; Benevedes J.M.,1997; Burk D.S., 1997/.

По данным Карагандинского областного центра СПИД, в настоящее время в Казахстане выявлено более 1000 ВИЧ-инфицированных, из них свыше 800 человек проживают в Карагандинской области, 86% составляют лица, употребляющие внутривенно психотропные вещества /Отчёт Карагандинского обл.центра-СПИД,2000/.

Несмотря на многочисленные публикации, отражающие исчерпывающую информацию о возбудителе ВИЧ, успешные научные разработки методов этиологической диагностики ВИЧ /Покровский В.В.,1996; Покровский В.И., 1995; Змушко Е.И.,1997; Sheller М.С.,1997/, проблемы патогенеза ВИЧ - инфекции, клинико-лабораторных критерий стадий заболевания остаются недостаточно изученными /Лобзин Ю.В.,1997/.

Известно, что главными причинами летального исхода при изучаемой патологии являются инфекционные осложнения, вызванные оппортунистическими микроорганизмами. Тем не менее до сих пор особенности аутомик-рофлоры (АМФ) больных ВИЧ-инфекцией, употребляющих психотропные вещества, не подвергались детальному изучению /Лобзин Ю.В.,1997; Воло-вич В.И.,1997/.

Вследствие высокой чувствительности аутофлоры к различным факторам внешней и внутренней среды изучение АМФ кожи и слизистых позволяет определять состояние антиинфекционной резистентности, эффектив-

ность лечения и полноту восстановления функций организма человека /Клемпарсая Н.Н.,1966; Валивач М.Н.,1998; Дорафейчук В.Г.,1979; Сытник С.И.,1989/. При диагностике болезней, обусловленных снижением антиинфекционной резистентности, изучение аутофлоры является наиболее простым удобным и высоко-информативным показателем /Игнатов А.И.,1989/.

Принимая во внимание, что в литературе отсутствуют данные об изменении микроэкологической характеристики и факторов патогенности ауто-микрофлоры больных ВИЧ-инфекцией, употребляющих психотропные вещества, а также, учитывая актуальность и новизну проблемы, для нас несомненный интерес представило изучение у указанного контингента микробного состава АМФ как показателя функционального состояния организма.

Работа выполнялась в соответствии с научной отраслевой программой «Медико-экологические проблемы здоровья населения Центрального Казахстана», № г.р. 01910001435.

В связи с вышеизложенным нами была поставлена цель - выявить микроэкологические особенности биотопов кожи и слизистой носоглотки у больных ВИЧ - инфекцией, употребляющих психотропные вещества.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

1. Изучить микрофлору кожи, слизистой носоглотки у больных ВИЧ-инфекцией, употребляющих психотропные вещества, при различных стадиях заболевания.

2. Определить экологические характеристики и биологические свойства микробионтов в исследуемых биотопах, обусловливающие возникновение инфекционных осложнений у указанного контингента.

3. Установить особенности иммунологического статуса и неспецифической противоинфекционной защиты у наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией.

4. Установить взаимосвязь между иммунологической недостаточностью и активацией условно-патогенной флоры кожи и носоглотки.

Научная новизна

В результате проведённого исследования:

впервые изучены особенности изменения микробиоценозов кожи и слизистой носоглотки у наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, проявляющиеся в увеличении высеваемости (3- гемолитических стрептококков, грамот-рицательной флоры, грибов;

впервые показано, что у выделенных микробионтов доминируют такие нетоксигенные факторы патогенности, как высокая адгезивность, гемолитическая, гиалуронидазная активность, снижается антилизоцимная активность;

впервые исследованы особенности экологических параметров ауто-микрофлоры микробиотопов кожи и носоглотки наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, проявляющиеся в снижении видового разнообразия и равномерности распределения видов, снижении удельного веса сильных антагонистов;

выявлена сильная прямая, обратная корреляционная связь между показателями неспецифическими факторами резистентности и характеристиками нетоксигенных факторов патогенности аутофлоры кожи и слизистой носоглотки у наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, на разных стадиях заболевания.

Практическая значимость результатов

В совокупности с традиционными иммунологическими тестами комплекс показателей, характеризующих состояние микрофлоры кожи и носоглотки, позволяет оценить тяжесть течения ВИЧ-инфекции у лиц, употребляющих психотропные вещества, при переходе генерализованной персистирующей лимфоаденопатии к стадии вторичных заболеваний.

Выявлены особенности микроэкологических параметров биоценозов, позволяющие прогнозировать возможные инфекционные осложнения у больных ВИЧ-инфекцией, употребляющих психотропные вещества.

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты диссертации внедрены в работу клинико- диагностических лабораторий, лечебно-профилактических учреждений Караганды, Акмолинской и Северо-Казахстанской областей. Материалы диссертации используются в лекционном курсе практических занятий для студентов на курсе микробиологии, факультете повышения квалификации при подготовке врачей бактериологов в Карагандинской государственной медицинской академии.

Основные положения, выносимые на защиту

1. У больных ВИЧ-инфекцией, употребляющих психотропные вещества, в зависимости от стадии инфекции изменения микробиоценоза кожи характеризуются увеличением р — гемолитических стрептококков, гемолитических биоваров эпидермального стафилококка и энтерококка. В биоценозе носоглотки изменения выражаются в увеличении Р - гемолитических стрептококков, золотистого стафилококка, грибковой флоры.

2. Микробное сообщество кожи и слизистой носоглотки у больных ВИЧ-инфекцией, употребляющих психотропные вещества, имеет нестабильную популяционную характеристику, выражающуюся в снижении генеративной и антагонистической активности индигенной флоры, нарастанием патогенного потенциала условно - патогенных микробионтов за счёт увеличения адгезивной, гемолитической и гиалуронидазной активности.

3. Наиболее информативным показателем измененной иммунной системы наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, является увеличение в биотопах кожи и носоглотки популяционной микрофлоры с различными факторами патоген-ности нетоксигенного характера.

4. У больных ВИЧ-инфекцией, употребляющих психотропные вещества, выявляется сильная прямая, обратная корреляционная связь между показателями иммунологической защиты и характеристиками нетоксигенных факторов патогенности аутофлоры кожи и носоглотки.

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на областном лабораторном совете при Карагандинском облздравотделе (1998, 1999), итоговых научных конференциях (1998-2000 гг.), заседании проблемной комиссии «Медико-биологические проблемы» Карагандинской государственной медицинской академии (2000), научном семинаре по медико-биологической специальности государственной медицинской академии, г. Астана (2000).

По материалам исследования опубликовано 12 печатных работ, получено одно удостоверение на рацпредложение. Издан информационный листок для практических лабораторий СПИД центров.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 5 разделов собственных исследований, выводов, практических рекомендаций и указателя используемой литературы, включающего 175 наименований, из них 45 иностранных авторов. Материалы диссертация изложены на 130 страницах, иллюстрированы 25 рисунками и 28 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования Работа выполнялась в Карагандинской государственной медицинской академии на базе кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии, Карагандинском областном центре по профилактике и борьбе со СПИД (гл. врач И.П. Кузнецов) и учреждении УВД Карагандинской области АК 159/1 (зам. нач. по медицинским вопросам В.И. Алиев) в два этапа.

На первом этапе работы для выявления закономерностей изменений по-пуляционных характеристик, биологических свойств и факторов патогенности аутомикрофлоры различных биотопов у лиц с иммунологической недостаточностью, вызванных наркоманией и ВИЧ- инфекцией, было отобрано 104 человека, которые были распределены на пять групп. Среди обследованных преобладали мужчины (98,5%) в возрасте от 18 до 34 лет. Для диагностики и расшифровки иммунодефицитного состояния использовались сведения из

первичной медицинской документации (амбулаторных карт, историй болезней), которые дополнялись данными анкетирования.

Группа из 41 человека состояла из наркоманов, находящихся на разных стадиях ВИЧ-инфекции: 11 человек были больны ВИЧ-инфекцией стадии 2Б; 17 человек -стадии 2В,13 человек - стадии ЗА. 27 человек были наркоманами, у которых лабораторно была исключена ВИЧ - инфекция. 38 человек составили контрольную группу и были практически здоровыми. Все лица, кроме контрольной группы, употребляли внутривенно наркотики не менее трёх лет, на момент обследования находились в учреждении АК 159/1, поступив туда из города Темиртау, где регистрируется эпидемический подъём заболеваемости ВИЧ-инфекцией.

Второй этап работы предусматривал комплексное клинико-эпидемиоло-гическое, бактериологическое и иммунологическое обследование выбранного контингента и корреляционный анализ полученных результатов. Клиническое и эпидемиологическое обследование проводилось совместно с врачами областного центра по борьбе со СПИДом.

Исследование микробиоценоза кожи проводилось методом прямого отпечатка /Клемпарская H.H., Шальнова Г.А., 1966 /, для чего использовались коммерческие полистероловые одноразовые отпечатки, в которые в стерильных условиях разливались элективные и специальные среды (10% кровяной агар, среда Эндо, желточно-солевой агар, среда Сабуро). Так же использовались отпечатки лейкопластырем в тех же точках стерилизованным фламбиро-ванием. Отпечатки проводились в 6 участках - симметрично на коже щек, шеи и подключичной области (на области тимуса).

На кровяном агаре после термостатирования при температуре 37° С проводился учёт общего количества колоний и гемолитической флоры. На среде Эндо через 18 часов учитывалось количество грамотрицательных микроорганизмов. На ЖСА через 48 часов учитывалось общее количество и удельный вес лецитиназоположительных стафилококков.

На среде Сабуро после инкубации в течение 3-5 суток при 25°С учитывалось количество грибковой флоры.

Для изучения микрофлоры глотки и носа материал забирался стерильным ватным тампоном с последующим качественно-количественным исследованием /Бочков И.А. с соавт., 1983/. Бактериологическая идентификация выделенных культур прокориотических микроорганизмов проводилась с использованием тестовых признаков, предложенных определителем бактерий Берд-жи (1997). Идентификация грибковой флоры проводилась на основании руководства по медицинской микологии /Кашкин П.Н.,1983/. Полученные культуры дополнительно подвергались изучению для выявления биологических свойств, связанных с их колонизационной резистентностью и факторами пато-генности.

Для экологической оценки данных бактериологических исследований и определения уровней дисбиотических состояний в исследуемых биотопах использовались расчеты показателей экологических характеристик биотопов /Сытник С.И., 1989/.

Для определения доли участия разных видов в структуре биоценоза использовался показатель постоянства вида, который рассчитывался по формуле:

рШ

с = —-'

Р

где с - доля вида в сообществе в %, р - число выборок, содержащих данный вид, Р- общее число взятых образцов.

В зависимости от полученных значений виды подразделялись на постоянные - наличие более чем в 50% образцов, добавочные - в 25% - 50% и случайные - менее чем в 25% выборок.

Для сравнения встречаемости двух видов в сообществах использовался коэффициент сопряжённости Коули:

с_ АД-ВС (А+В\В+Д) '

где С - коэффициент Коули, А - число биотопов с видом А и В вместе, В -биотопы с видом А без В, С - число участков с видом В без А, Д— число биотопов без видов А и В.

Разнообразие видов в биотопах оценивалось по формуле:

logN

где d - коэффициент разнообразия, S - количество видов в сообществе, N -общая микробная плотность.

Равномерность распределения видов в сообществе (Е) высчитывалась по формуле:

log^ -logrc,

где S - количество видов, п, — значимость для наиболее значимого вида (КОЕ на см2, мл, г), ns — значимость для наименее значимого вида (КОЕ на см2 мл, г).

Дополнительно определялся индекс доминирования в структуре сообщества:

d = 4PN ,

где D — индекс доминирования, Р - встречаемость данного вида в сообществе, N— средняя плотность сообщества.

Исследование начальных этапов роста и развития микроорганизмов проводилось по методике Юровской Е.М.(1979), с расчётом генеративных показа-

t\gl t телеи: ™ =-2-, п = — ,

lg^-lgÄ g

где g - время генерации, t - время наблюдения, В - число бактерий к концу опыта, b - начальное число бактерий, п - число генераций.

Антагонистические свойства стафилококков из биотопов кожи и верхних дыхательных путей оценивали по методике, описанной Ивановым Н.И.,

Даниловым Е.Г. (1986). Кроме того, использовалась методика, описанная Мельниковым Д.М. (1975).

Адгезивная активность определялась с эритроцитами морской свинки и буккальным эпителием по методикам Брилис В.И. (1986) и Кветной A.C. (1995). Уровень адгезивной активности оценивался по индексу адгезивности (ИАМ):

ТАЛЫ СШШ

ИАМ -■--,

К

где СПА - средний показатель адгезии, который выражается в отношении количества адгезированных микроорганизмов к общему количеству подсчитанных клеток, К - коэффициент участия, выражающийся удельным весом клеток, участвующих в адгезии от общего количества подсчитанных клеток в%.

Градация адгезивных свойств оценивалась по предложенным вышеуказанными авторами критериям: ИАМ< 1,75 - неадгезивный, ИАМ от 1,75 до 2,5 - низкоадгезивный, ИАМ от 2,56 до 4 - среднеадгезивный, ИАМ > 4 - высокоадгезивный.

Гемолитическая способность качественно определялась на первичном посеве с кровяного агара (а или ß гемолиз). Для сравнения уровня гемолитической активности использовалась методика, предложенная Волиной Е.Г., Сарухановой JI.E., Левиной Л.Ф. (1986).

Гиалуронидазная активность оценивалась по методике Смирновой Л.Т. (1989). В качестве препарата гиалуроновой кислоты использовали субстрат, приготовленный из пупочных канатиков новорожденных. Разрушение гиалуроновой кислоты ферментами микроорганизма выявляется феноменом отсутствия сгустка при добавлении уксусной кислоты. Степень активности гиалу-ронидазы оценивалась как высокая при отсутствии сгустка в 5 пробирках, средняя - при отсутствии сгустка в первых трёх - четырёх пробирках, низкая -при отсутствии только в первой пробирке.

Для определения антилизоцимной активности микрофлоры применялась методика, предложенная Бухариным О.В.(1992).

Комплексную оценку состояния иммунного статуса проводили с помощью унифицированного метода, включающего определение лейкоцитарной формулы, относительного (%) и абсолютного количества Т и В - лимфоцитов в тесте спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (E-POJI) и мыши (M-POJI), а также уровень розеткообразущих нейтрофилов (Е-РОН). Уровень Т-хелперов и Т - супрессоров определяли по нагрузочному тесту с теофиллином.

Количество сывороточных иммуноглобулинов классов A,M,G проводилось методом радиальной иммунодиффузии по Manchini с соав. (1965).

Фагоцитарная активность лейкоцитов периферической крови анализировалась по унифицированной методике, описанной в справочном руководстве под редакцией Меньшикова В.В. (1987). Определялось фагоцитарное число (ФЧ) и индекс бактерицидности нейтрофилов (ИБН) к тест микроорганизмам -Staphylococcus aureus 505 и Escherichia coli М-17.

Бактерицидная активность нейтрофилов оценивалась в тесте восстановления нитросинего тетразолия спонтанного и индуцированного зимозаном по методике Park (1968) в модификации Ваксмана М.Е. и Маянского А.Н. (1979). Рассчитывался коэффициент функциональной метаболической активности нейтрофилов:

а

где К -коэффициент функциональной метаболической активности нейтрофилов, а - значение стимулированного НСТ теста, б - спонтанного НСТ теста.

Для определения вышеперечисленных показателей использовалась капиллярная кровь из пальца. Постановка указанных тестов осуществлялась с применением лейкоцитарной суспензии цельной крови.

Бактерицидность крови и слюны определялась по методике Палий Г.К. (1984), в отношении грамположительных микроорганизмов Staphylococcus aureus 505, грамотрицательных Escherichia coli М-17. Бактерицидность слюны определялась, помимо вышеперечисленных микроорганизмов, ещё и к Streptococcus pyogenes.

При оценке бактерицидность кожи применялась методика, предложенная Мальцевым В.Н. и Насоновым Т.А.(1989). Использовалась лиофилизирован-ная культура кишечной палочки М-17, которая наносилась на внутреннюю поверхность кожи предплечья. Через 3-6-9 минут делали отпечатки на среду Эндо. После инкубации в термостате при 37°С подсчитывалось число колоний и оценивалась бактерицидность кожи по проценту выживших колоний.

Математический анализ прогностической ценности показателей микробиоценоза кожи проводился в сопоставлении значимости различных видов и би-оваров. Определялся уровень корреляционной связи показателей микробиоценоза с параметрами иммунного статуса. Процесс расчета данных корреляции проводился в двух вариантах. В первом варианте бактериологические и иммунологические показатели всех обследуемых учитывались как единая совокупность, во втором - отдельно для каждой группы обследуемых лиц.

Статистическая обработка результатов исследования проводилась на персональном компьютере IBM AMD Кб Pentium 233 МГц по программе АРМ — СТАТИСТИКА, а также Microsoft Excel с входным набором средств анализа данных для решения сложных статистических задач с определением параметрических и непараметрических статистических показателей.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование микробиоценоза кожи позволило выявить у обследуемых лиц межгрупповые различия. У наркоманов, неинфицированных ВИЧ-инфекцией и наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией стадии 2Б, дисбиотические изменения микрофлоры кожи не имели достоверных отличий между собой, так

как совокупное накопление факультативной микрофлоры не превышало 25% (рис.1). У наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией стадии 2В, ЗА, имелся выраженный характер дисбиоза кожи из-за значительного накопления в популяции условно-патогенных видов более 70%, что создавало угрозу возникновения оппортунистических инфекций. Но вместе с тем у обследуемых этих групп сохранялась значительная популяция индигенных для нормальной микрофлоры кожи видов, таких как негемолитические стафилококки, микрококки, коринеформные бактерии (от 76% до 100%), что говорило о возможности обратимости дисбиоза. Наиболее характерные изменения состава нормальной микрофлоры кожи были связаны с увеличением удельного веса в популяции видов с гемолитической активностью преимущественно за счет ^-гемолитиче-ских стрептококков (до 70%) и накоплением гемолитических биоваров ер1с1епш(11з и Е^аесаНБ. Данная флора так же определяла увеличение общего КОЕ/см2 кожи.

100 90 -80 -70 -60 -50 -40 -30 -20 -10 -0

%

Изменение удельного веса гемолитической, лецитиназоположительной и грамотрицательной флоры

кожи

Оь

-л

Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4 Группа 5

□ гемолитическия флора лица

□ шеи

□ подключичной области

□ лецитиназоположительные стафилококки лица

□ шеи

□ подключичной области

□ грамотрицательная флора лица

□ шеи

□ подключичной области

Рисунок 1.

Грамотрицательная и грибковая флора у наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией стадии 2В и ЗВ, несмотря на тенденцию к увеличению по совокупности видов, по отдельным видам не становилась определяющей в составе биотопа кожи и не превышала 20%.

Увеличение общего количества и удельного веса условно-патогенной микрофлоры кожи у наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, было обусловлено снижением ниже 30% бактерицидных свойств кожи (рис.2). Дополнительным фактором, приводящим к изменению состава и численности членов микробиоценоза кожи у обследуемых, явилось снижение генеративных свойств и антагонистической активности резидентных видов микрофлоры кожи (рис. 3).

К0Е Сравнение общего КОЕ и бактерицидности кожи %

Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4 Группа 5

■■ • | КОЕ кв см (лицо) I I КОЕ кв см (шея)

| ' КОЕ кв см (подключичная область) ■"""•""■Бактерицидность кожи в %

Рисунок 2.

Нами была установлена особая роль Е^аесаНБ в увеличении популяции (^-гемолитических стрептококков у больных ВИЧ-инфекцией. Е^аесаНз, обладая антагонистической активностью против 81.5аргорЬуйси5, приводила к снижению его численности на коже в данной группе больных. В свою очередь 81.заргорЬу1:юи8, имея выраженную антагонистическую активность против |3-гемолитических стрептококков, сдерживал их накопление в популяции у здо-

Изменение индекса доминирования экологически значимых видов в микрофлоре кожи

Str.agalactiae Str.pyogenes E.faecalis Corynebacterium sp.

Micrococcus sp. St. aureus

St.saprophyticus St.epidermidis

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

■ Группа - 1 □ Группа - 2 □ Группа -3D Группа - 4 ■ Группа - 5

Рисунок 3.

ровых лиц и исчезновение его из кожного микробиоценоза наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, приводил к снятию антагонистического прессинга в отношении популяции р-гемолитических стрептококков и способствовал их размножению. Увеличение инвазивного потенциала кожной микрофлоры наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией стадии 2В и ЗА, происходило за счет накопления в популяции продуцентов гиалуронидазы и гемолизинов, что создавало условия для длительной персистенции условно-патогенных микроорганизмов и облегчало внедрение в организм патогенных.

Исследование микробиоценоза слизистой носоглотки у обследуемых лиц позволило отметить, что у наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, отличия биоценоза глотки носили в большей степени качественный характер, чем

гт

—■-■■II и I ZTZHT

количественный (рис. 4). Структурные изменения состава микрофлоры глотки у больных с разной стадией ВИЧ-инфекцией характеризовались возрастанием экологической значимости р-гемолитических стрептококков, гра-мотрицательной флоры плазмокоагулазоложительных стафилококков и дрожжей, но при этом отмечалось сохранение экологической значимости популяции а-гемолитических стрептококков как индигенных видов носоглотки.

Общая микробная обсеменённость глотки и носа

7 -| 6,5 6 -5,5 -5 -4,5 -4 -3,5 -3 -2,5 -2 -1,5

КОЕ на тампон

-1-1-1

Группа 3 Группа 4 Группа 5

Группа 1 Группа 2

'Общее КОЕ Lg глотка «<>»»Общее КОЕ нос Рисунок 4.

Изменение микрофлоры носа больных ВИЧ-инфекцией характеризовалось увеличением общей плотности микробной популяции, более выраженным повышением плотности плазмокоагулозоположительных стафилококков и повышением удельного веса а-гемолитических стрептококков. Изучение экологических, генеративных, адгезивных свойств микрофлоры глотки и носа показало изменение уровня колонизационной активности членов микробного сообщества (рис.5, рис. 6).

Изменение индекса D микрофлоры глотки обследуемых лиц

Str.sali varius Str.pneumoniae Str.pyogenes Str.agalactiae St.aureus Neisseria flava Acinetobacter.sp. Escherichia coli S.marcescens K. pneumoniae Alcaligenes sp. Ps. aeruginosa C. albicans Прочие дрожжи

1 10 100 IS группа G4 группа ЕЗЗ группа D2 группа Ш 1 группа

10000

Рисунок 5.

Изменение индекса D микрофлоры носа обследуемых лиц

Str.mitis Str.pneumoniae Str.pyogenes Str.agalactiae St.aureus St.epiderm idis Escherichia coli S.marcescens K. pneumoniae Neisseria flava Alcaligenes sp. Acinetobacter.sp.

C. albicans Прочие дрожжи

1 10 100 1000

15 группа ЕП4 группа ПЗ группа П2 группа В 1 группа

Рисунок 6.

Слабые изменения в адгезивной активности и более выраженная генеративная активность микрофлоры характеризовали микробную популяцию как стабильную, находящуюся на стадии смены доминирующих видов. Нарастание патогенного потенциала членов биотопа в виде усиления продукции гиа-луронидазы, гемолитической активности позволили предположить, что изменения в биотопе ВДП при различных стадиях ВИЧ-инфекции могут привести к появлению инфекционных осложнений.

Исследование лабораторных показателей состояния иммунной системы и неспецифической противоинфекционной защиты в обследуемых группах позволило выявить признаки иммунодефицита в группе наркоманов и у наркоманов, больных ВИЧ - инфекцией.

Между группой наркоманов и наркоманами, больными ВИЧ- инфекцией стадии 2Б, изменения показателей, отражающих состояние иммунной системы, не имели достоверных отличий, что позволило сделать предположение о неактивном влиянии ВИЧ на иммунологическую реактивность на данном этапе течения заболевания.

Изменения показателей клеточного и гуморального звена иммунитета были наиболее выражены в группах наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией стадии 2В и ЗА, указывали на снижении Т-лимфоцитов и особенно теофил-линрезистентных Т- лимфоцитов. Изменения гуморального иммунитета характеризовались повышением ЦИК и иммуноглобулинов классов А и М.

Изменения фагоцитарной системы у обследуемых лиц носили вид функциональной недостаточности и в меньшей степени касались структуры системы (рис.7). Из функций фагоцитирующих клеток более выражено снижалась их биохимическая активность, обеспечивающая бактерицидный эффект. Это проявлялось в неуклонном снижении ИБН и КМА, в спонтанном и индуцированном НСТ в группах наркоманов и наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией.

Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4 Группа 5

Н■ ИСТ спонтанный ' IНСТ индуцирований зимазаном — -КМ А

Рисунок 7.

Исследования бактерицидных свойств крови, слюны, кожи выявили, что первоочередным изменением при иммунодефицитных состояниях является снижение неспецифической противомикробной защиты рубежных тканей -кожи и слизистых. При этом снижение бактерицидное™ кожи отмечалось в направлении от группы наркоманов к группе наркоманов, больных ВИЧ-инфекции стадии ЗА, более чем в три раза, бактерицидности слюны - на 18 -26%, бактерицидное™ цельной крови - на 20 % по сравнению со здоровыми.

Многофакторный корреляционный анализ позволил выявить зависимость между показателями микробиоценоза и противоинфекционной защиты. Установлено, что наибольшее влияние на качественный и количественный состав микрофлоры кожи и носоглотки наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, при переходе генерализованной персистирующей лимфоаденопа-тии к стадии вторичных заболеваний имеют показатели неспецифичес-

кой местной и общей резистентности, такие как бактерицидность кожи, слюны, цельной крови.

Выявлена сильная отрицательная корреляционная связь между бактери-цидностью кожи и общей микробной обсеменённостью кожи (г = - 0,721, Р < 0,05), между количеством Р-гемолитических стрептококков глотки и бактери-цидностью слюны (г = - 0,689, Р<0,02).

Отмечено селективное влияние бактерицидных факторов кожи и слюны на накопление в популяции кожи и носоглотки микроорганизмов с антилизо-цимной активностью. Установлена сильная положительная корреляционная связь антилизоцимной активности микроорганизмов с бактерицидными свойствами слюны (г = +0,789, Р<0,02) и в меньшей степени кожи (г = +0,611, Р<0,05).

Менее выраженное влияние на микробиоценоз оказывала фагоцитарная активность, так сильная отрицательная корреляционная связь была отмечена между показателями количества гемолитической флоры кожи, количеством р -гемолитических стрептококков носоглотки и коэффициентом метаболической активности нейтрофилов (г = - 0,668, Р < 0,02; г = - 0,856, Р < 0,02).

Выявленная положительная корреляционная связь между количеством Р - гемолитических стрептококков и количеством ЦИК в крови (г = +0,696, Р<0,02) позволила подтвердить роль р - гемолитических стрептококков в образовании циркулирующих иммунных комплексов у данных больных.

Наименьшее влияние на микробный состав биотопов кожи и носоглотки наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, при переходе генерализованной перси-стирующей лимфоаденопатии к стадии вторичных заболеваний, оказывали такие показатели, как количество лейкоцитов, Т и В - лимфоцитов, иммуноглобулинов (г= - 0,128, Р<0,05; г= - 0,056, Р<0,05; г= - 0,068, Р<0,02; г=- 0,158, Р < 0,05). Очевидно, эти факторы иммунитета у данной категории больных

не достигают того значения, при котором их влияние на противоинфекцион-ную защиту имеет определяющее влияние.

Таким образом, исследование микроэкологических особенностей биотопов кожи и слизистой носоглотки у больных ВИЧ - инфекцией, употребляющих психотропные вещества, позволило отметить увеличение в биотопах кожи Р - гемолитических стрептококков, гемолитических биоваров эпидер-мального стафилококка и энтерококка, в биоценозе носоглотки - увеличение (3 - гемолитических стрептококков, золотистого стафилококка, грибковой флоры. Микробиоценозы кожи и носоглотки имеют нестабильную популяцион-ную характеристику, выражающуюся в снижении генеративной и антагонистической активности индигенной флоры, нарастанием патогенного потенциала условно - патогенных микробионтов за счёт увеличения адгезивной, гемолитической и гиалуронидазной активности.

ВЫВОДЫ

1. Дисбиоз в биотопах кожи и носоглотки наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, характеризуется нарастанием в сообществе факультативной флоры (свыше 50%). Видами, численность которых возрастает, являются для кожи -Р-гемолитические стрептококки, энтерококки, для носа - р-гемолитические стрептококки, плазмокоагулазоположительные стафилококки, для глотки - р-гемолитические стрептококки, энтеробактерии и дрожжи.

2. Экологические показатели микрофлоры кожи и носоглотки у наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, характеризуются снижением индекса видового разнообразия популяции и равномерности распределения видов, уменьшением удельного веса антагонистически активных микробов от общей микробной плотности (до 10%). Патогенный потенциал микрофлоры кожи и носоглотки возрастает за счет увеличения адгезивной (свыше 50%), гемолитической (свыше 70%) и гиалуронидазной (свыше 30%) активности.

3. Изменения неспецифической противоинфекционной защиты у наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, проявляются снижением бактерицидности

кожи (66%-27%), слюны (77%-54 %), крови (от 84% до 73%), индекса бактерицидное™ нейтрофилов (до 76%-63%) и коэффициента функциональной метаболической активности нейтрофилов (до 0,4 - 0,27).

4. Наибольшее влияние на качественный и количественный состав микрофлоры кожи и носоглотки у наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, имеют показатели неспецифической местной и общей резистентности: бактерицид-ность кожи, слюны, цельной крови (г= -0,912, Р<0,05; г= -0,956, Р<0,05; г= -0,619, Р<0,02), фагоцитарная активность (г= -0,856, Р<0,02; г= -0,916, Р<0,02), удельный вес антагонистически активных микроорганизмов (г= -0,731, Р<0,02; г= -0,618, Р<0,02). В меньшей степени экологические характеристики микрофлоры кожи и носоглотки зависят от количества лейкоцитов, Т и В лимфоцитов, иммуноглобулинов (г= -0,128, Р<0,05; г= -0,056, Р<0,05; = - 0,068, Р<0,02; г=-0,158, Р<0,05).

Практические рекомендации

Для раннего выявления снижения противоинфекционной защиты у наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, в лабораторную диагностику целесообразно включать бактериологические методы исследования микрофлоры кожи и носоглотки, позволяющие оценить динамику и тяжесть течение заболевания.

У наркоманов, больных ВИЧ-инфекцией, рекомендуется учитывать, что нарастание удельного веса гемолитически активной микрофлоры кожи (более 70%), р- гемолитических стрептококков в глотке (более чем 105 / тампон) и в носу (более чем 104/ тампон) отражает снижение фагоцитарной активности.

Изменение удельного веса облигатной микрофлоры кожи и носоглотки не позволяет судить о степени иммунологической недостаточности, тем не менее этот показатель может применяться для оценки степени обратимости дисбиоза.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Оценка состояния естественной резистентности по колонизации кожи и слизистых //Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях.- Материалы XII Российской научной конф., Челябинск, 1995.-С.67. /соавт. Н.П. Кузнецов, В.Н. Снопков,

A.У. Байдуйсенова/.

2. Нарушение фагоцитарного состояния фагоцитирующих клеток у лиц, проживающих в различных регионах Казахстана //Материалы V Международной конференции по химии и технологии халькогенов и халькогенидов, посвященной 70-летию академика Е.А. Букетова.-Караганда, 1995,- С. 41. /соавт.

B.Н. Снопков, Е.А. Бердимбетов, А.У. Байдуйсенова/.

3. Экологическая характеристика кожного микробиоценоза и верхних дыхательных путей как информационная система иммунодефицитных состояний //Деп. №6132-Ка95. КагосИННТИ-16.05.1995.сб.Алматы, 1995, вып.2.-СЛ04-105. / соавт. В.Н. Снопков, А.У.Байдуйсенова, A.B. Катрук/.

4. Микроэкология человека и лечение больных с инфекционно-аллергиче-ским синдромом //International Journal on Immunorehabilitation, 1997.-№ 5.-

C.254. /соавт. В.Н. Снопков, A.B. Куяров, А.У. Байдуйсенова/.

5. Методические подходы к донозологической диагностике отклонений в здоровье обследуемых лиц, проживающих в экологически неблагоприятных регионах //Труды междун. научн. конф. «Научно-технический прогресс-основа развития рыночной экономики».-Караганда, 1997.-С.684-686. /соавт. В.Н. Снопков, А.У. Байдуйсенова, З.М. Кандыбина/.

6. Диагностическое значение информационной системы «Аутофлора, воспалительные и иммунные реакции» //Сб. трудов «Современные проблемы аллергии, клинической иммунофармакологии».-М.,1997.-С.281. /соавт. A.B. Куяров, Г.И. Жумадилова, С.А.Кузнецова/.

7. Клинические и бактериологические сопоставления при различных им-мунопатогенетических ИДС с инфекционным синдромом //«Наука и образо-

вание - ведущий фактор стратегии Казахстан-2030». Труды межд. научн. конф. -Караганда, 1998.-С.251-254. /соавт. В.Н. Снопков, Н.К. Рымкулова, З.М. Кандыбина, А.У. Байдуйсенова/.

8. Сравнительное изучение микрофлоры кожи живота с целью обоснования чрезпупочной лапоротомии //Экология, труд и здоровье населения Центрального Казахстана //Сб.статей конф. молодых ученых. -Караганада, 1998.-С.109-112. /A.A. Абдишкуров, H.A. Шамбилов, A.A. Нурбеков/.

9. Показания к оценке колонизационной резистентности кожи и слизистых у ВИЧ - инфицированных в реализации эпиднадзора за стрептококкозами //Информационный листок: Карагандинский ЦНТИ, 1999.-6 с. /соавт. В.Н. Снопков, Н.П.Кузнецов, В.А.Крюкова, В.И.Алиев, С.Н. Сраубаева/.

10. Экология Streptococcus pyogenes у ВИЧ-инфицированных и проблемы эпидемиологического надзора за стрептококкозами //Астана медициналык журналы, 1999.-№2.-С.115-119. /соавт. В.Н. Снопков, В.А. Снопкова/.

11. Микроэкологическая характеристика биотопов кожи у наркоманов и больных ВИЧ-инфекцией //Астана медициналык журналы, 1999.-№4.-С.98-104. /соавт. В.Н. Снопков, К.Х. Алмагамбетов/.

12. Оценка неспецифической резистентности у лиц с иммунной недостаточностью по интегрированным показателям бактерицидной активности крови, слюны и кожи //Медицина и экология, 1999.-№4.-С.36-41.

ТУЖЫРЫМ Беляев Андрей Михаилйулы Психотропты заттарды кабылдайтын АИВ инфекциялы аурулардыц микроэкологиялык, биотоптарыныц срсктсл1ктер! 03.00.07- микробиология Психотропты заттарды кабылдайтын АИВ инфекциясы бар аурулардыц терюшдс р-гемолитикалык стрептококктардьщ, эпидермальдык, стафиллококктардыц гемолитикалык, биоварыныц жэне энтерококктардыц кобсйгеш, ал тогаргы тыныс алу жолында р-гемолитикалык, стрептококктардыц, алтын туей стафиллококктардыц, кандида флорасыныц.

Tepi жэне мурын-жутк,ынтак, микробиоценозы турак,сыз; индигещцк жэне антогонистис белсендиш! теменден, шартты патогещцк микробтардыц адгезивтгк, гемолиздис жэне гиалуроннидаздык, белсендшгшщ кетершукмен патогендйс патенциалы кугейген.

АИВ инфекциялы наркомандардыц дерт1 генерализацияланган персистента лимфоаденопатиядан еиншшк аурулар сатысына ауысканда Tepi жэне мурын-жутк,ынтак, микрофлорасыныц саны мен к¥Рамына жеке жэне жалпы рсзистснттЬс керсеткшггерде (Tepi,TyicipiK, кан бакгерицидтшг1) мацызды эсер етед1

SUMMARY Belyayev Andrey

Microecological features of biotopes at the patients HIV - infection, using psychotropic materials

03.00.07 - microbiology The research of microecological features of biotopes of skin and nasopharynx in patients HIV-infection contamination, using psychotropic materials, has allowed to reveal augmentation in biotopes of skin p - haemolytic streptococcuses, haemolytic biovariants of an epidermal staphylococcus and enterococcus, in a biocenosis of the mucous membrane of the upper respiratory ways - augmentation p - haemolytic streptococcuses, staphylococcus aureus, of funguses flora.

Microbiocenoses of skin and nasopharynxes had astable population characteristics expressing by drop generative and antagonism of activity residents of flora, by increase pathogenic of potential is conditional - pathogenic of microbionts at the expense of augmentation adhesive, haemolytic and hyaluronidasic of activity.

The greatest influence on qualitative and quantitative structure of a microflora of skin and nasopharynxes in narcomaniacs, patients by a HIV-infection, at transition generalized persistent lymphadenopathyes to a stage of secondary infection diseases have such parameters of a nonspecific aboriginal and general resistance, as