Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Микробные агроконсорциумы на основе цианобактерий
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология
Автореферат диссертации по теме "Микробные агроконсорциумы на основе цианобактерий"
На правах рукописи
КОВИНА АЛЕВТИНА ЛЕОНИДОВНА
МИКРОБНЫЕ АГРОКОНСОРЦИУМЫ НА ОСНОВЕ ЦИАНОБАКТЕРИЙ
Специальность 03.00.07 - микробиология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Москва 2001
Работа выполнена на кафедре ботаники, физиологии растений и микробиологии Вятской государственной сельскохозяйственной академии
Научный руководитель - заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Е. М. Панкратова.
Официальные оппоненты
профессор, доктор биологических наук В. К. Шильникова доцент, кандидат биологических наук Н. Н. Колотилова.
Ведущее учреждение - Институт фундаментальных проблем биологии
РАН
Защита состоится ¿У /Л. с-_2001 г в /г часов на заседании
диссертационного совета Д 220 043 03 в Московской сельскохозяйственной академии им К А Тимирязева по адресу 127550, Москва, ул Тимирязевская, 49 Ученый совет МСХА.
С диссертацией можно ознакомиться в ЦНБ МСХА
Автореферат разослан /¿/¿/¿¿«-¿«х^ __2001г
Ученый секретарь диссертационного совета кандидат сельскохозяйственных наук, профессор
В. А. Калинин
Актуальность темы. В последние годы в прикладной микробиологии акцент смещается с изучения и применения чистых культур на ассоциативные или смешанные популяции, которые, следуя «Международному кодексу номенклатуры бактерий», предложено называть консорциумами микроорганизмов. Консорциумы разнонаправлены по действию, в них достигается не только аддитивный, но и синергичесхий эффект, увеличиваются шансы приживления инокулюма. ...
Цианобактерии в качестве партнеров таких ассоциаций .исследованы очень незначительно (Панкратова, Калинин, 1991; Калинин, 1995). В то же время они являются непременным компонентом микробиоты почвы с потенциальной способностью давать вспышки размножения на ее поверхности (Домраче-ва, 1998), являются первичными продуцентами органического вещества и обладают агрономически значимой азотфиксацией (Панкратова, 1998). Способность к синтезу спектра физиологически активных веществ (Горюнова и др., 1969; Сиренко, 1972; Сиренко, Козицкая, 1988; Андреюк и др., 1990), стимулирующих корнеобразование у высших растений, делает их объектом пристального внимания биологов, агрономов, биохимиков и биотехнологов. Однако, с точки зрения целенаправленного конструирования микробных консорциумов с участием цианобактерий, практически вне поля зрения осталась их способность вступать в прочные или временные связи с самыми обычными почвенными микроорганизмами, характер взаимоотношения с которыми полностью не выяснен. Но несомненно, что очистка слизистых чехлов этих организмов от бактерий-спутников представляет значительную трудность и приводит к уменьшению жизнеспособности цианобактерий. Не исследована возможность замены естественного микробного населения слизистых чехлов на программируемых вселенцев. Таким образом, исследования, направленные на изучение возможности создания консорциумов с участием цианобактерий, имеют важное как теоретическое, так и практическое значение. -
Цели и задачи исследований. Целью исследований явилось изучение возможности создания на основе цианобактерий искусственных микробных консорциумов, условий их стабильного функционирования и эффективности действия на растения и почву. , . ■ . <•
Перед работой стояли следующие задачи: . , • .V; : ■.
• Изучить возможность создания консорциумов между аксеничной культурой Nostoc paludosum Kuetz., с одной стороны и, с другой стороны:
.. - видами Rhizobium Ieguminosarum Frank, R. galegae Frank,. R. - trifolii Danqeard; . .
- видами Agrobacterium radiobacter Conn.,. Arthrobacter mysorens Nand a. .Rao,, Azospirillum lipoferum Tarr., Krieg a. Dober.
• Изучить условия гомеостатического состояния и физиологические параметры консорциума по сравнению с составляющими его партнерами при росте на различных средах и субстратах; .
Изучить топографию хемотрофных п""тгтттг^ И 'II I i Ч"а
науч -дя библиотека ^оск. голwC-чохоз. академии
и. л. Ii. А. Тимирязева Инв. №
нобактерий,
• Исследовать стабильность искусственных микробных консорциумов во времени и при моделировании условий культивирования,
• Изучить действие консорциумов (агроцианов) на клевер (циано - ризобиаль-ный консорциум) и выгонку рассады капусты (циано - бактериальный консорциум),
• Проанализировать приживление инокулюма и возможность изменения микробного статуса почвы при использовании искусственных консорциумов
Новизной работы в целом является разработка и углубление нового направления использования азотфиксирующих цианобактерий как автотрофного компонента, носителя и субстрата для культивирования хемотрофных бактерий с целью создания искусственных стабильных микробных консорциумов направленного действия Впервые показана возможность вселения в слизь цианобактерий в аксеннчном состоянии (капсулирования) запрограммированной микрофлоры - образование устойчивых микробных сообществ, максимально автономных от среды Исследованы субстраты и среды для их выращивания Доказано длительное сосуществование в высушенном состоянии Установлена эффективность их действия как инокулюма.
Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на научных конференциях агрономического факультета ВГСХА (Киров,1993, 1994, 1997, 1999г г.), Международном конгрессе по азотфиксации (С Петербург, 1995), XXXI конференции «Эффективность применения средств химизации и продуктивность сельскохозяйственных культур» (Москва, 1996), Всероссийской конференции «Микробиология почв и земледелие» (С - Петербург, 1998) Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 работ Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 158 страницах машинописного текста и состоит из введения, 3 глав и выводов Работа содержит 10 рисунков, 36 таблиц Библиография представлена 276 источниками, из которых 99 на иностранных языках.
Объекты и методы исследования Объекты исследования. Основным объектом для работы выбрана культура цианобактерии Nostoc paludosum шт 18 из коллекции водорослей и цианобактерий ВГСХА. Штамм поддерживается в культуре на безазотистой среде Громова №6 (Громов, Титова, 1993) с 1,5% агаром или в колбах Эрленмейера на 100см' той же жидкой среды, в люминостате при освещенности 2-3 тыс лк и температуре 22-25° С Бактериально чистая культура -этой цианобактерии получена путем разработанной на кафедре ботаники, физиологии растений и микробиологии прописи (Панкратова, Калинин, 1994, Калинин, 1995), состоящая из последовательных манипуляций, механической очистки от слизи, облучения УФ и очистки антибиотиками по типу выбивания определенных бактерий-спутников (принцип мишени)
Культуры хемотрофных бактерий Rhizobium leguminosarum шт 1022, Rgalegae шт0702, Rtnfolu цгг348а, Agrobactenum radiobacter пгг.17,
Arthrobacter mysorens шт.7 и Azospirillum lipoferum шт. РИП-22 были получены из ВНИИСХ микробиологии (Пушкин - С. - Пб.). Эти культуры прошли в ВНИИСХМ предварительный отбор на эффективность при инокуляции семян сельскохозяйственных культур при создании биопрепаратов (Белимов и, др., 1998; Кунакова, 1998). Культуру Rhizobium поддерживали на бобовом агаре (Теппер и др., 1987). Agrobacterium, Arthrobacter и Azospirillum культивировали на агаризованной среде ДАС (Берестецкий и др.; 1985). ' , : - • ■..: ,
При культивировании агроцианов (дианобактерии + хемотрофные бактерии) использовали жидкую безазотистую среду Громова №6 с добавлением и без добавления бобового отвара. • г,. ., :■
С целью увеличения выхода биомассы агроцианов изучали возможность их культивирования на мхе Sphagnum medium Limpr. Мох собирали на болоте в окрестностях г. Кирова. После суточного настаивания мха с водой из расчета 1:100 готовили вытяжку и определяли количество мела, необходимое для доведения субстрата до pH 6,8-7,0. Мох раскладывали по опытным емкостям (чашки Петри, плоскодонные колбы на 500 мл), добавляли требуемое по навеске количество мела и стерилизовали при 1 атм. 20 мин. Нейтрализованный и стерилизованный мох служил субстратом для выращивания и сохранения инокулюма.
Биомассу цианобактерий учитывали по сухому веществу. Концентрацию хлорофилла определяли на ФЭКе (Викторов, 1969). ' ,
Численность клеток бактерий определяли по стандарту мутности и методом высева из разведений на твердые селективные среды по общепринятым микробиологическим методикам: среда Эшби для олигонитрофилов, бобовый агар для клубеньковых бактерий, ДАС для агробактерий, артробактера и азос-пириллы, среда Чапека для грибов (Руководство к практическим занятиям по микробиологии, 1983). ...... - - » ¡..- • -i
Нитрогеназную активность исследовали методом ацетиленовой редукции (Hardy et al., 1973). Хроматографическое разделение и детектирование исследуемых компонентов в газовых смесях проводили на хроматографе "Цвет-101" с пламенно-ионизационным детектором и колонкой с Porapak Q. В качестве газа-носителя использовали аргон с подвижной скоростью 50 мл /мин. . • : ■ •
Анализ слизистых, чехлов клеток цианобактерий проводили в живом нефиксированном виде: 1. Окраска раствором хонгорот; 2. Исследование слизистых чехлов по методу Бурри (Красильников, 1986). ;
Микрофотосъемку осуществляли, при инструментальном увеличении х1350 на фотопластинки типа "Микро".
Для целей сохранения музейных штаммов и консорциумов использовали метод лиофильной сушки. Сушке подвергали культуры в жидкой питательной среде, которые суспензировали стеклянными бусами. На сушку брали 0,2 мл суспензии. Замораживание вели в стеклянных стерильных ампулах в течение 5 сек. при температуре -42°С в 96% спирте-ректификате. Сушка проводилась в сублимационной сушилке "Edwards". Коллектор сушилки стерилизовали парами формалина в течение суток, после чего проводили загрузку коллектора ам-
пулами Режим в вакуумной камере 1,8-2x101 мБа Сушка шла 18 часов, затем ампулы запаивались в пламени бензиновой горелки Ампулы хранили в холодильнике при температуре около 5°С До сушки и после нее определялся титр бактерий. Затем ампулы использовали по заданному режиму, при этом содержимое ампулы замачивалось в течение суток в 5 мл безазотистой среды Громова №6 и тестировалось на жизнеспособность путем высева консорциумов на безазотистую среду Громова №6 (для цианобактерий) и на ДАС или бобовый агар (для хемотрофных бактерий)
Полевые мелкоделяночные опыты по изучению эффективности биопрепаратов были заложены на дерново-подзолистой почве Кировской области с клевером Опыты в защищенном грунте при выгонке рассады капусты проведены в АО "Красногорское" Подробности методики приведены при изложении результатов.
Изменение микробного статуса почвы при инокуляции искусственными композитами изучали по динамике численности основных групп микроорганизмов путем высева почвы на сетективные микробиологические среды. Одновременно с этим учитывали возможные изменения в составе фототрофного компонента почвенной микробиоты - эукариотных водорослей и цианобактерий - методом прямого счета, чашечных культур со стеклами обрастания и водных культур (Штина, 1969)
Результаты и их обсуждение
1.Характеристика партнеров консорциумов. Цианобактерия ЬГозГОс ра1ис!о£шп,18 была выбрана согласно нескольким критериям Штамм изолирован из почв Кировской области, т е того региона, где проводились полевые опыты. Предыдущие исследования (Калинин, 1995) показали высокую скорость азотфиксащш, образования биомассы и технологичность культивирования, в частности, легкую отделяемость от культуральной среды Цианобактерия была получена в аксеничном состоянии, что являлось непременным условием для составления искусственных композитов Сапротрофные культуры бактерий — виды р ШигоЬшт (ШнгоЫит ^шшпо5агит,1022, Я galegae,0702 и 0706, Я.тйэ1н, 348-а), А^оЬасгепит гас1юЬасгег,17, АпЬгоЬааег тузогепз,7 и АговртНит !lpofeгum, РИП-22 являются перспективными для целей агробио-технологии, на основе которых во ВНИИСХМ созданы биопрепараты Все указанные хемотрофные бактерии являются типичными представителями ризосферы большинства растений Уже известная к началу нашей работы совместимость агробактерий, артробактера и азоспирилл в ассоциативных культурах облегчала задачу составления консорциумов на основе цианобактерий
2.Совместимость партнеров в консорциумах с цианобактериями. Первоначально изучали возможность существования ассоциаций бисистемных искусственных консорциумов Искусственные консорциумы были составлены по следующей схеме Кояос ра1ийозиш,18 + Agгobacteпum гас1юЬас1ег,17, Кра1иск«ит,18 + АпЬгоЬасгег тузогепз,7, N ра1ис1о5ит,18 + АгоэртНит ПроГегит, РИП-22
Результаты опытов показали совместимость партнеров в искусственно созданных консорциумах с цианобактериями. Взаимодействие носило позитивный или близкий к нейтральному характер. Аксеничная культура цианобакте-рий росла хуже, чем в ассоциации с сапротрофными бактериями (табл.1). Наиболее усиливал рост ностока А. тузогем, один из штаммов которого являлся естественным спутником цианобактерии до ее аксенизации (Калинин, 1995). При подсеве этой бактерии к ностоку биомасса последнего увеличилась по сравнению с аксеничной культурой на 65% через 25 дней совместного культивирования и на 31% - через 40 дней. Уменьшение позитивного эффекта, по-видимому, связано с более быстрым автоингибированием ностока при длительном выращивании в ограниченном объеме среды, что отмечается исследователями при выращивании ностока в экстенсивных культурах (Вольберг, 1988).
. . * Таблица 1
Характер роста и нитрогеназная активность бисистемных композитов
Варианты Через 20 дней инкубации Через 40 дней инкубации Нитрогеназная активность, нмоль/мг/ч.
Численность сапротроф-ных бактерий, млнУмл Виомасса композита Численность салротроф-ных бактерий, МЛН./МЛ Биомасса композита
мг % мг %
1 0,0 20 100 0,0 35 100 39.8915,78
2 2,2±0.6 23 115 2,1±0,5 40 114 64,5713,40
3 3,0±0,3 33 165 1,3±0,3 46 131 38,77113,70
4 2,210,7- 30 150 б,5±3.0 46 131 52,5515,40
Примечание. Варианты: 1-№ки)с ра1ш!озит (аксеничная культура, контроль), ■ 2- N. рЫЫоБшп +А^оЬамепит гаёюЬайег, 3-^ра1идо5шп+АгЙ1гоЬасгег тузогепэ, 4-1чГ.ра1ш1о5Шп+Аго5р1гШит Нро£егит. Первоначальный инокулят: ЫобЮс ра1исЗо-5ит-0,0 ] г сухого вещества ва 50 мл среды, титр вносимых бактерий-1 • 106 клУмл.
Характер взаимоотношений партнеров в ассоциации зависит от соотношения численности их клеток, как в начальный период составления консорциума, так и при длительном культивировании.
Мы исследовали влияние на состояние ассоциации двух начальных титров хемотрофного партнера - 106 кл./мл и 108 кл./мл среды. Так, при исходном титре бактерий 10* кл./мл их численность резко снижалась у А. гасНоЬа^ег (до 20 *106) и у А. тузогепэ (до 9,4 «106 кл./мл) во время лагфазы N. ра1ш1о8ит и достигала своих постоянных величин к концу логарифмической фазы перед выходом на стационарную фазу роста фототрофного партнера. Численность клеток А.Нробггшп в начальный период роста N. рЫшкюшп практически оставалась постоянной и резко падала при его ускорении, стабилизируясь на 45 ~ день совместного культивирования.^ .
Рис I Динамика нарастания биомассы N0^100 ра1ис1о5ит и численности бактерий—симбиотро-фов при их разном начальном титре Условные обозначения Л — композит N ра1ийо5ит +■ А^ртзЬааелит гас)юЬас1ег Б - N paludosum + АгЛгоЬасгег шузогспз В - N ра1ис1о5ит + АгозртНит ЬроГсгиш 1- численность клеток бактерий при титре 104 кл./мл, 2 - численность клеток бактерий при титре 10е кл./мл, 3 — накопление сухого вещества N рл1ис1озиш (мг) при титре бактерий 10' кл7мл, 4 - накопление сухого вещества N ра!и<1озит (мг) при тигре бактерий 10* клУмл
При меньшем начальном титре клеток, подсеваемых к ностоку бактерий (106 клУмл), численность А. тувогепз и А. ПроГегит во всем опыте не превышала значения 107 кл7мл и не уменьшалась ниже 104, следовательно, предел 106-107 кл./мл среды является оптимальным уровнем численности этих бактерий в жидкой культуре N. раЬккюит. Различие между ростом этих штаммов заключается в том, что максимальное значение численности у А. юузогеги пришлось на 10-е сутки и затем с началом интенсивного роста N. ракккюит постепенно снижалось. Максимум роста А. НроГегит - 40-е сутки, т.е. в конце логарифмической фазы роста N. ра1ш!озит.
Динамика популяции А. гаФоЬаЛег имела более сложный характер. В течение первых 20 дней наблюдался активный рост бактерий до значения 2,2 «106 кл./мл среды. Затем происходило резкое снижение численности клеток и через 30-40 суток популяция стабилизировалась на уровне 2,1- 4,8 «106 клУмл среды. В это же время во всех композитах биомасса цианобактерий накапливалась лучше при более низком начальном титре бактерий - сапротрофов.
Таким образом, установлено, что исследуемые штаммы бактерий способны развиваться в жидких безазотистых средах совместно с N. раШозит. Между цианобактерией и изучаемыми ассоциативными штаммами складываются позитивные отношения. Численность бактерий стабилизируется на уровне не ниже 106 клУмл для всех отобранных штаммов. Судя по росту N. раЬскэзшп в композитах, значением оптимального титра для его заражения бактериями является 106 кл./мл среды. • V, . .'• ■:<
Следующим этапом исследований было изучение консорциума N. ра1и<1о-эит + Я. §а^ае, которое имело особое значение с целью поиска стабилизации эффекта инокуляции семян бобовых растений клубеньковыми бактериями. Модификация условий опыта следующая. • ;.,./:
Аксеничную культуру N. ра1и<к«ит выращивали в жидкой безазотистой среде Громова №6 в течение месяца в люминостате. Культуру в логарифмической фазе роста разбивали стеклянными бусами и вносили по 1см1 суспензии в 100 см3 колбы Эрленмейера с 30 мл свежей среды. Одновременно в эти же колбы вносили (в количестве 2 »106 кл./мл среды) К.§а^ае, который выращивали на бобовом агаре. Длительность опыта 30 суток. ; -
После внесения в среду с ностоком численность ризобий сначала снижается (рис.2). По мере культивирования численность ризобий начинает расти параллельно увеличению массы ностока. Масса консорциума за месяц возрастает с 5,4±0,93 мгдо 52,5±2,7 мгнаЗО мл среды. ' -
Таким образом, удалось установить, что Я. §а1е§ае не только сохраняется в культуре в течение всего периода совместного роста с N. ра1ис1о8ит, но живет и размножается за счет экскретируемых ностоком веществ.
6 ■
2 -
5 --
4 ■ ■
З ■
1 ■
О
а
5
15
20
зо сутки
Рис 2 Динамика роста Nostoc paludosum и Rhizobium galegae в совместной культуре На оси абцисс - длитеїьность культивирования / сутки На оси ординат I - логарифм численности клеток Rhizobium galegae на 1 мл среды (А), II - масса Mostoc, мг сух вещества / 30 мл среды
3. Стратификация партнеров в консорциумах. В естественных условиях слизь, окружающая (слетки цианобактерий, заселяется многочисленными бактериями — спутниками, находящими в ней, прежде всего, питательную среду для роста и размножения Факт сам по себе очень интересный, если учесть, с одной стороны, способность образовывать антибиотики и, с другой, участие многих бактерий, при неблагоприятных условиях, в первичной деструкции цианей (Панкратова, Мезенцева, 1985)
Была поставлена задача определить, где находятся подсеваемые бактерии относительно клеток (нитей) цианобактерий в культуральной жидкости, адсорбируются ли на поверхности слизистых чехлов или проникают вглубь их?
Искусственный консорциум, составленный из популяции аксеничной культуры N08100 ра1ис!озит и ЮнгоЫит кциттовагит, культивируемый на жидкой безазотистой среде Громова №6, дважды центрифугировали, отбивая от среды путем ресуспензирования в свежую безазотистую среду После этого снова заливали 15 см3 свежей среды и подвергали встряхиванию на качалке в течение 1часз. Таким образом, мы старались освободиться от той части бактерий, которая находилась в культуральной среде или была механически адсорбирована на нитях цианобактерий С помощью контрольных высевов проверяли влияние различных механических обработок консорциума в жидкой культуре на распределение клеток ризобий В биомассе ностока после двойного промывания и встряхивания на качалке численность ризобий была 1,75»103 кл/мл, после двойного промывания, центрифугирования, встряхивания на качалке и растирания до суспензии в ступке со свежей средой Громова „Ч°6 —
СБ)
0,93 «104 клУмл среды. Следовательно, основное количество клеток ризобий несомненно сосредотачивается в биомассе ностока, причем часть их, вероятнее всего, прочно удерживается.
■■ Подтверждение этого вывода было получено прямым микроскопированн-ем и фотографированием искусственного консорциума. Прежде всего, внимание было обращено на исследование, слизистых чехлов нитей цианобактерий, хотя и динамичной природы и структуры, но составляющих с ними единое целое (Громов, 1976; Саут, Уитгик, 1990). Анализ слизистых чехлов проводили в живом нефиксированном виде: 1. С помощью окрашивания раствором конго-рот; 2. Исследования по методу Бурри. В первом случае при просмотре под микроскопом можно отчетливо видеть живые нити цианобактерий, а если есть слизистые чехлы, то виден светлый ореол вокруг нитей. При втором способе просмотр проводили в фазовом контрасте, анализируя темные цианобактери-альные нити, вокруг которых были видны светлые чехлы. Частички туши, находящиеся в броуновском движении, не примыкают к телу клеток, образуя темный фон при наблюдении и микрофотосъемке.
Хорошо видны следующие моменты. Во-первых, бактерии находятся в слизи, окружающей клетки ностока, во-вторых, они сосредотачиваются преимущественно вдоль нити. И, наконец, форма бактерий несомненно кокковая, т.е. палочковидная форма клеток, свойственная Rhizobium, превратилась в кокковую. Идентификация слизевых бактерий N. paludosum путем высева кулыу-ральных сред ностока на бобовый отвар показала при микроскопировании наличие обычных подвижных грамотрицательных палочек размером 0,5-0,9x1,2-3,0 мкм. ..,..,
'' Таким образом, сделан окончательный вывод о возможности капсулиро-. вания клубеньковых бактерий в слизи цианобактерий и об образовании стойких микробных ассоциаций между ними.
4. Жизнеспособность консорциумов в разных условиях. Возможность использования микробных консорциумов в биотехнологических целях во MHO- ' гом определяется степенью их стабильности, т.е. длительностью сохранности партнеров в ассоциации. ■ ■■ . - -
В прежних сериях опытов было установлено, что жидкая минеральная среда Громова № 6, которая служила базовой для культивирования цианобактерий, является низкоэнергетичной для роста популяции гетеротрофных бактерий. Это подтверждало использование гетеротрофными партнерами ассоциации ! продуктов фотосинтеза и азотфиксацни фототрофов при отсутствии изначального содержания в среде связанного азота и углерода. Изучению подвергнуты бикомпозитыпри культивировании 90 дней: Ч. N.paludosum,18 + RJeguminosarum,1022; 2. N.paiudosum,18 .+ A.radiobacter,17. Характер взаимоотношений микроорганизмов в течение совместного культивирования показан
нарисункеЗ. ............■ • -
. Между клетками ностока и ризобиями возникало равновесное состояние при титре бактерий не превышающем 7 млн. клУмл среды. В начале инокуля-.ции ностока бактериями их титр снижается на 5 порядков. Это может быть' следствием бактерицидной атаки ностока или отсутствия питательного суб-
страта для гетеротрофных бактерий По мере нарастания биомассы ностока, что контролировалось по содержанию хлорофилла, титр ризобий увеличивался от 3,24 • 104 с 11 дня опыта до 7 • 10е клУмл к моменту снятия опыта, что предполагает использование ризобиями экссудатов ностока и отсутствие антагонистических отношений между партнерами
Содержания
1д кл /ыл хлорофилла мгл-
РисЗ Динамика титра клеток ШигоЬшт !egшшnosarum (1), А^Ьаиепит гасЦоЬасгег (2) и содержание хлорофилла «а» в бинарном композите Мсйюс ра1ш1о8шпЛ1 1е5иштозагига (3) в ракккиит/А гаШоЬамег (4)
Численность агробактерий в совместной культуре с ностоком в начале опыта также резко снижается После перехода цианобактерин из лаг- в логфазу популяция агробактерий неуклонно растет, достигая величины титра 1 млн клЛл В присутствии агробакгерии увеличивалась биомасса цианобактерии
Наблюдения за совместными культурами в жидкой минеральной среде позволили заключить, что носток не элиминирует из среды и не только не ин-гибирует, но и стимулирует размножение гетеротрофных бактерий С другой стороны, клетки ризобий и агробактерий положительно влияют на рост ностока
Селективной средой для выращивания клеток ризобий в лабораторных условиях является бобовый отвар С целью повысить титр бактерий исследовали его влияние в качестве добавки в культуральную среду бинарного композита. Эффективность добавления бобового отвара зависела от его дозы и состояния культуры ностока Добавление бобового отвара в минеральную среду одновременно с проведением инокуляции ее ностоком было менее эффективно, чем через 15 дней культивирования цианобактерий, когда последние вступили в логарифмическую фазу роста.
и
• Обнаружено, что концентрация бобового отвара не должна превышать 1:100 (бобовый отвар: среда Громова №6), при ее увеличении до 5:100, 10:100 и 20:100 интенсивность роста аксеничной культуры ностока закономерно снижается (табл.2). "•■ . .
" Таблица 2 -
' Влияние бобового отвара на рост ностока (мг сух. вещ7 100 мл среды)
Среда „ ' Добавлено бобового отвара (мл) . >
0 1 5 10 ■ ■20 -
Безазотистая среда (контроль) • ■ 107
Безазотистая среда + бобовый отвар ' 1Ц '.215 V ' - • .21 108 \ /52 , 50 21 ' . 18
Примечание: в числителе - бобовый отвар добавлен одновременно с инокуляцией, в знаменателе - через 15 дней после инокуляции. Длительность опъгта 30 дней.
Этот опыт позволил установить, что популяция клеток ностока может размножаться в присутствии органического вещества бобового отвара. В этом случае можно предположить наличие развиваемой адаптации цианобактерии к органическому веществу или наличие миксотрофного питания (Кондратьева, 1996). ...........- - .
На следующем этапе мы изучали возможность и эффективность роста консорциума Ы.ра1ис1о$шп + 1УигоЫит в присутствии бобового отвара. При инокуляции. Я. ^шшпозагит 15-дневной культуры ностока ' выход биомассы консорциума минимальный. Титр бактерий даже уменьшился по сравнению с первичным инокулюмом (табл.3)." . * ■ *"-
с Таблица 3
Влияние бобового отвара и срока инокуляции ЮнгоЫшп leguminosarum культуры Когюс ра1ис1о5ит на состояние консорциума (длительность опыта 45 дней)
Срок подсева рнзо-бий Добавление бобового отвара,- Г , Численность ризобий, млнУмл Биомасса консорциума, мг сух. вещества /100 мл
при инокуляции при снятии опыта
К 15-дневной культуре ІЧовЮс нет 6,5 5 37+1,5 ;
То же при инокуляции 1:100 7,5 9 59±2,8 •
К 30-дневной культуре МоїЮс нет • 6,5 6 43±0,9 ' '
Это объясняется, по-видимому, недостаточным количеством для хемо-трофных бактерий энергетического материала, экскретируемого востоком в молодом возрасте. По мере старения культуры увеличивается количество орга-
нического вещества в культуральной среде, необходимого для питания ризо-бий, следствием чего является увеличение их численности (с 5 до б млн клУмл при снятии опыта)
Обычными субстратами для роста почвенных цианобактерий являются поверхность почвы, расщелины камней, скалы, места, где были извержения вулканов и другие освещаемые поверхности, в том числе верхушки мохостоя В определенные периоды цианобактерии образуют сплошной налет на этих поверхностях («цветение» почвы, корочки, маты) В разрастаниях им всегда сопутствуют гетеротрофные бактерии Поэтому представлялось интересным изучение культивирования консорциумов на твердых субстратах 1. Агаризован-ной среде, 2 Почве как субстрате, 3 Мхе сфагнуме
Обычным способом культивирования цианобактерий в коллекциях является использование безазотистых агаровых сред При выделении штамма цианобактерий в культуру слизь почвенного изолята бывает засечена- многочисленными бактериями, так называемыми «спутниками», принадлежащими к самым различным физиологическим группам Длительное наблюдение за музейными культурами обнаружило явление частичного «самоочищения» цианобактерий от слизевых бактерий-спутников Учитывая сказанное, мы пошли по пути создания благоприятных условий для гетеротрофного партнера (Ковина, Тре-филова, 1996) В опыте это был Я. tegummosaпIm Использовали чистый бобовый отвар с добавлением 2% агара Ранее нами было показано, что бобовый отвар, добавленный в жидкую безазотистую среду, стимулирует рост цианобактерий Добивались равномерного затягивания бобового агара в чашках Петри колониями ризобий После этого в газоны ризобий врезались круглые высечки с газонами ностока, предварительно выращенными на минеральной безазотистой агаризованной среде При этом удалялись точно такие же высечки с колониями ризобий Культуры экспонировали по стандартной методике По расписанию измерялись зоны экспансии цианобактерий Показано, что бактерии не мешали разрастанию нитей ностока, пронизывающих среду и распространяющихся по ее поверхности
Следующим этапом работы было изучение почвы как естественной стации для роста цианобактерий Однако, при ее инокуляции всегда существует опасность возникновения конкурентных отношений между вносимым консорциумом и аборигенной микрофлорой При производстве препаратов культур бактерий всегда проводят стерилизацию субстрата-носителя Мы использовали наипростейший прием - стерилизацию почвы в автоклаве в течение 30 минут при 0,5 атм
Стерильная почва с рН 7,4 в количестве 60 г (воздушно-сухая масса) находилась в чашках Петри Влажность ее поддерживали на уровне 80% от п в бобовым отваром Длительность опыта 60 дней Инокуляция ностоком и ризо-биями проведена одновременно Как и в предыдущих опытах оказалось, что ЯЬггоЬшт 1е§шптозагит и Моэюс ракккиит можно культивировать совместно на стерильной почве с использованием бобового отвара При использовании благоприятного источника органического вещества клетки ризобий сравнительно равномерно распределяются в объеме почвы Длите тьная экспозиция
приводила к уменьшению титра ризобий, что могло быть связано с проведением опыта в замкнутой (т е не проточной) системе (табл 4)
Таблица 4
Влияние длительности совместного культивирования бикомпозита N05100 - ШигоЫит на стратификацию и состояние партнеров а стерильной почве при использовании бобового от-
Срок о преде пения Проба Ризооии клУг возя -сух почвы Содержание хло-1 рофилла, мг/г (цианобактерии)
в день инокуляции во всей почве 2 2.10! 0 33
через месяц то же 2 6.10* 035
через два месяца то же 8 6.10" 0 39
в матах ностока 8 0 .10і 44
под матами 6 0.10° -
почва без видимых разрастаний 7,5.10" 0,37
Примечание приведены средние данные из 25 повторений Для полива применялся 2% бобовый отвар Длительность опыта 60 дней Прочерк означает отсутствие данных
Даже при визуальном наблюдении было заметно, что через два месяца газон консорциума развивался в многослойный мат При этом, несмотря на увеличение метаболической поверхности фототрофа, уменьшается величина удельного фотосинтеза из-за худшего освещения нижних слоев мата и затрудненной диффузии газов (Панкратова и др , 1996, Домрачева, 1998), а, следовательно, и количество экссудатов фототрофного партнера Это наиболее вероятная причина уменьшения численности клеток ризобий Поэтому для биотехнологических целей наиболее удачным сроком при приготовлении микробного консорциума на почве нужно считать месячную экспозицию и использование бобового отвара
Приоритетным направлением наших исследований является попытка использования сфагнового мха (Sphagnum medium Limpr ) в качестве нового субстрата для культивирования искусственных консорциумов на основе пианобак-терий Привлекательность его как субстрата для кутьтивирования микробных ассоциаций заключается в большой поверхности для прикрепления клеток бактерий, хорошей светопроницаемости и влагоемкости Вместе с тем, недостатками этого субстрата являются его кислотность и бактерицидность Поэтому перед использованием мха как субстрата была проведена серия рекогносцировочных опытов, которая заключалась в исстедовании возможности культивирования на мхе цианобактерий и микробных композитов
Сфагновый мох - сильно киспый материал - рН 3,3 Промывание дистиллированной водой, кипячение и промывание кислотность материала не снижало Нейтрализацию мха проводили мелом Стегка изметьченную, промытую навеску мха (0,5 г) помещали в чашки Петри и добавляли мет для доведения рН субстрата до указанных значений Субстрат увлажняли безазотистой средой Громова и стерилизовали Для инокуляции применяли месячную культуру нос-тока и купьтуры гетеротрофов, смываемые с соответствующих сглективнь'х
сред. Чашки экспонировали в люминостате: Наилучший рост ностока наблюдался в интервале 6,4-6,6, (который и использовался в последующих, опытах),' что было заметно даже визуально по степени разрастания (площади) газонов относительно поверхности мха на чашке Петри.
].. ' . Нужно отметить, что хорошие результаты были достигнуты, если бактерии вносились на уже сформированные газоны цианобактерий.
.....^ ' Таблица 5
Рост и азотфиксация бинарных консорциумов на мхе сфагнуме (на чашках Петри) - : .
Организмы, штаммы і ■ Площадь- ' покрытия ' мха востоком, смг Содержание хлорофилла а, мг г"' 1 "" Численность клеток сапротрофных бактерий в 1 г мха ~ Нитрогевазная активность, км СіНч/час-'г"1
при внесении яерез 2 месяца - приино- ; кулядин при снятии опыта
4.paludosum,18 12,23 0,31 0,72 . 0,0 : 0,0 23,4
M.paludosum,18 bR-leguminosa-,-um, 1022 ' 14,45 ■ 0,31 '•' 0,85 10' • . 3.38.108 55,19
M.paludosura,18 «-Ajradiobac- :er,17 18,31 0,31 1,17 10» 2,69« 108 26,35
Из таблицы 5 видно, что изменение показателя площади покрытия не было столь заметным у разных консорциумов из-за многослойности развития матов цианобактерий и стратегии прошивания субстрата нитями ностока. Судя по содержанию хлорофилла, можно заключить, что рост автотрофа в бикомпози-тах (Ы.ра1иск>5ит+К.. ^иттозагшп; Н.ра]ис1озит+А.гас1юЬас1ег) был выше, чем в монокультуре на 18% и 62,5%, соответственно. В данном опыте гомеостати-ческое равновесие наступило при численности бактерий 108 клеток на 1 г мха.
5. Устойчивость циано — бактериальных консорциумов. Одним из существенных вопросов при создании искусственных циано-бактериальных консорциумов является возможность их длительного сосуществования, что само по себе предполагает образование между партнерами стабильных взаимозависимых метаболитических контактов. • , •
Ранее нами было отмечено, что партнеры композита длительное время сохраняются в жидких культурах: гетеротрофный партнер со временем не элиминируется, а фототрофный компонент ассоциации - не теряет жизнеспособности. Высушивание популяций микроорганизмов является жестким прессингом, часто влекущим за собой частичную гибель клеток. : -■ . . . ■ ..
В воздушно-сухих условиях проверяли сохранность композитов, составленных из N. ра1иёозиш и подсеянных к нему А^Ьасгепит га<ИоЬа«ег /; АггЬгоЬасгег тувогепв / АгояртПит НроСегит. После экспозиции (30 дней) со-, держимое четырех колб каждого варианта смешивали и разбивали стеклянными бусами. Суспензию объемом 5 мл наносили на стерильный фильтр и высушивали. Контроль численности бактерий проводили через 10,30 и 60 дней по-
еле высушивания путем высева на среду ДАС, размельченных в определенном объеме стерильной среды фильтров
Разные бактерии обладали неодинаковой способностью сохраняться в искусственных консорциумах после его высушивания, но во всех случаях их численность уменьшалась Так, у А гасЬоЬайег численность клеток до высушивания 4,8±2,5»10°клУмл, посіє высушивания (через 60 дней) - 2,0±0,32«106кл./мл, у А Ііроґегат - до высушивания 3,0±0,б« 106клУмл, после - 1,4±0,41 «106клУмл, у А туэогепз до высушивания - 2,2±0,2» 106 клУмл, после - 0,01 ±0,32 • 106клУмл В го же время цианобактерии после испытанного режима сушки через 10-15 дней инокуляции в свежую жидкую безазотистую среду приступали к интенсивному росту
Ещё более жесткие условия воздействия на консорциум, чем высушивание в токе воздуха, складываются при его лиофшшзации При этом приеме действие уже на оба компонента было сравнительно одинаково Известно, что цианобактерии плохо сохраняют активность после лиофильной сушки Также показано, что устойчивость к лиофшшзации у разных бактерий различна Более устойчивы грамположительные, чем грамотрицательные бактерии
Мы исследовали месячную жидкую бикомплементарную культуру, состоящую из N ра!и«1озит (аксеничная культура) и Я ^штповагшп, N раїисіозит и А гаёюЬайег Культуры перед началом сушки суспензировали стеклянными бусами и на сушку брали 0,2 мл. Титр бактерий определяли до сушки и через 15 и 60 дней после ампулирования Ампула по расписанию разгерметизировалась и ее содержимое замачивалось на одни сутки в 5 мл среды Громова №6 (табл 6)
Таблица б
Влияние лиофильной сушки на выживание хечотрофного партнера в бинарных консорциумах из жидких сред (клУмл)
Консорциум Срок анализа хечотрофного партнера кл мл
После сушки
через 15 дней через 60 дней через 2 года
N раІи<І05шп ■*■ Я. Іеяшшпозапіт 1,07.10* 1.24.10* 1,28.103
N раїисіовит-ь А гасЬоЬа«ег 1 32-10" 1,17.10* 1.35.103
Видно, что хемотрофные партнеры сохраняются в консорциуме после его сушки вымораживанием Феномен тем более обращает на себя внимание, так как оба партнера не спорообразующие бактерии, обычно быстро гибнущие при таком способе обработки Следовательно, и здесь можно сделать вывод о про-тективном значении цианобактерий Второй компонент консорциума - циано-бактерия - хорошо «отрастала» после помещения в соответствующую среду в люминостат Таким образом, жесткое воздействие на консорциум путем его лиофильной сушки показало сохранность обоих компонентов, что еще раз подтверждает не случайность такого сочетания
Для того, чтобы определить прочность консортивных связей, было проделано еще несколько опытов.
■ •. . Исследовали сохранность композита на стерильной почве. Ранее нами было показано, что в бинарных консорциумах (цианобактерия + ризобии) титр ризобий может быть увеличен путем добавления бобового отвара в количестве, персонально благоприятном для роста клубеньковых бактерий и в определенной концентрации хорошо переносимого цианобактериями. Благодаря хемотаксису бактерий, вызванному наличием в среде бобового отвара, они рассредоточились между корочками ностока и почвой, лишенной видимых разрастаний цианей. Несомненно, что такой носитель (почва, обогащенная бобовым отваром) перспективен для размножения и хранения инокулюма. Но нужно подчеркнуть, что если консорциум подращивался на носителе месяц, то после его перемешивания и доведения до воздушно-сухого состояния, титр клубеньковых бактерий снижается на два порядка. Если же консорциум подращивается в течение 2-х месяцев, а затем подсушивается, то численность ризобий по сравнению с первоначальной, практически не снижается (табл. 7)..
,, Таблица 7
Влияние длительности культивирования бинарного консорциума на численность и сохранность клеток ШнгоЫит ^¡^иттозагит после высушивания носителя
Длительность культивирования консорциума Численность клеток ризобий в 1 г носителя
перед высушиванием в носителе после сушки
один месяц 2,6 *108 - > ■ ■ 1,7 .10"
два месяца 8,6 «Ю6 2,5.10' ! - -
Примечание: субстрат — почва + бобовый отвар; высушивание консорциума в проточном токе воздуха.
Возможность культивирования циано — бактериальных консорциумов на мхе была доказана раньше. Нужно было доказать их нерасторжимость на столь необычном субстрате во времени и особенно при хранении.
Инокулхт двухмесячного композита, приготовленный на мхе по вышеописанной методике, переносился не отделяя ото мха, из чашек Петри на фильтры, где и подсушивался в стерильных условиях бокса 20 дней. После этого определяли титр клеток ризобий. Высушивание приводило к падению титра: перед высушиванием он был 107-108, после — 6,6 *106- 8,1 «Ю'клУмл, однако, совершенно очевидно, что он оставался достаточно высоким, что дает основание для вывода о возможности использования широко распространенного вида мха для приготовления препаратов на основе цианобактерий. >• <■•
6. Влияние циано - бактериальных композитов (агроцианов) на растение. Кроме чисто теоретического интереса, связанного с особенностями биологии цианобактерий и возможностью конструирования на их основе микробных консорциумов, также преследовалась задача — создание консорциумов направленного действия, прежде всего для стабилизации инокуляционного эффекта бобовых растений. Использование циано - ризобиальных консорциумов могло бы быть эффективно по следующим причинам (Панкратова и др., 1989; Ковина и др., .1994; Панкратова, 1994): . . ..
- цианобактерии защищают попавшие в слизь ризобии от колебаний влажности почвы и от конкурентной борьбы за остродефицитные источники органического вещества, таким образом поддерживая их более длительное время в состоянии повышенной вирулентности,
- благодаря большому количеству слизи циано — ризобиальный консорциум легко прилипает к семенам. Это свойство определяется цианобактериальным компонентом Цианобактерии способны прилипать к любому субстрату, поэтому при использовании препаратов на основе цианобактерий отпадает необходимость применения различных прилипатепей,
- цианобактериальный компонент консорциума обладает широким спектром ростактивирующих веществ с выраженным ризогенным эффектом Эти вещества, стимулируя рост корней, способствуют заражению их ризобиями, т к доказано, что процесс инокуляции растений клубеньковыми бактериями идет через молодые корни
Циано-ризобиальные консорциумы дтя удобства мы назвали агроциана-ми и их действие было изучено нами при инокуляции клевера и капусты
Отзывчивость клевера красного на бактеризацию изучали на раннеспелом районированном сорте Дымковский на опытном участке лаборатории многолетних трав НИИСХ Северо-Востока им академика Рудницкого (зав лаб М И Тумасова) Почва участка дерново-подзолистая тяжело-суглинистая, содержащая гумуса-1,92%, рН КС1-4.72, содержание Р205-27,0, К20-24,2мг/100г почвы
Схема опыта 1 Контроль без обработки, 2 Обработка КЫгоЬтош Ьп1Ь1п, 3 Обработка агроцианом МоэЮс ра1ис1о5шп-+Я шй>1» (инокулюм, приготовленный на почве), 4 N раШсЬзит+Я 1пГо1п (инокулюм, приготовленный на мхе)
Таблица 8
Влияние бактериальных обработок на биологические показатели, рост и развитие растений клевера красного
Вы- Сухое веще- Клу- Нитро- Количество шт
со- ство. г ч2 бень- геназная рас- гото- семян Вес
Варианты та, над- ков на активность те- вок на 1 1000
обработок см корни зем- 1 рас- кмольС,Н1 ний на 1 голо- се-
ная те- на 1 клу- расте- вку мян.
часть ние шт бенек в час ние г
1 Без обработ- 77 0 89 2 659 2 438 0 0 35 3133 7.1 31 3 187
ки (контроль)
: я тГо1п 84 3 90 е> 703 2 376 8 0 45 400 0 9 1 32,3 1 89
3 [1.№Го1п+
N ра1и<1о5ит 80 0 120,4 791,2 344,4 0-6 353 3 8,4 33,7 1,88
(на почве)
4 й тй>1ц+
V раМозит 86 3 49 4 837 2 657 6 0 62 480 7,5 41,2 1 90
(на мхе)
Примечание Повторносгь 4-кратная Показатели достоверны на уровне 95%
Общая площадь делянки 6м2. Повторное» опыта четырехкратная. На од. ну делянку высевали 7,4 г семян, обработанных согласно вариантам (табл.8).
При обработке агроцианами отмечено увеличение высоты растений на 6,8% и на 8,6%, также зеленой массы на 26,9% и на 28,8% в 3 и 4 вариантах по .сравнению с контролем. Увеличилось количество стеблей при увеличении ветвления на 1 стебель. Также отмечено влияние бактериальных обработок на . формирование семян. Нитрогеназная активность клубеньков при бактериальных обработках была выше на 28,6% во втором, на 31,4% в третьем и на 77,1% в четвертом вариантах по сравнению с контролем. Именно, благодаря увеличению азотфиксирующей активности, увеличились и ростовые и хозяйственно-биологические показатели. В большинстве случаев использование инокулюма на мхе было более эффективно, чем использование инокулюма с почвенным > наполнителем. .. „• • ;, , .
Подводя итоги по изучению инокуляции семян клевера новой формой ба-кудобрений — агроцианом, можно сделать твердое заключение, что, несмотря на наличие в почве диких штаммов ризобий, бактериальная обработка оказалась . высокоэффективным приемом перед стандартной обработкой семян монокультурой клеток КЫгоЫиш ЬэйзШ. ... .■•■■-■' ■'■.■:. > •
Сложный агроциан был испытан в защищенном грунте на капусте, культуре отзывчивой на бактериальные обработки и обработку цианобактериями (Соколов и др., 1996). Опыт проводился в теплицах, производственным назначением которых была выгонка рассады капусты на раннем сорте «Крафт». Аг-роцианы составляли из ранее изученных комплементарных сочетаний ЫозЮс раЫёозит и хемотрофных' бактерий Agrobacterium гасКоЬалег, Аг&гоЬааег тувогепз и АгоБрнгШит ПроГегит. .
Размер делянки 1 м2, количество растений 400 штук. Количество иноку-лята на делянку: 5 г гигромассы композита с титром бактерий Ю'клУмл. Препарат разводился в 500 мл среды Громова №6 без азота и равномерно наносился на делянку дважды - до всходов капусты и после всходов. Контрольный вари. ант одновременно увлажнялся эквивалентным количеством среды Громова (по-вторность 4-х кратная). < ;
Таблица 9
Влияние тетрамикробиого консорциума на выгонку рассады капусты (среднее на 1 растение)
Вариант Надземная часть Корневая система
высота, см площадь листьев,см2 число листьев,1ПТ. масса (сух.вещ.), . г " ' объем, см'1 масса . (сух.вещ.), г
Контроль 8,32±1,02 145,5 • ■ 4,49 0,78±0,21 0,80 0,06±0,01
Микробный консорциум 9.84±0.71 18,3 - 196.9 35,3 , 5.02 11,8 1.09±0.11 39,7 ' 1.10 " 37,5 - 0.08+0.01 •33,4
Уровень значимости Р>0,95-0,99. В числителе — абсолютные значения, в знаменателе — процент к контролю. Состав консорциума:Ы.ра1иёозит,18+А.га&оЬас1ег,17+АлЬгоЬас1ег туэогепзЛ+АгоэртПит НроГегат, РИП-22.
Обработка микробным тетракомпозитом улучшила качество рассады капусты: при увеличении высоты на 18%, увеличилась площадь листьев, их количество и масса на 35,3%, 11,8% и 39,7% соответственно (табл 9)
Особенно значимым для дальнейшего приживления рассады явилось улучшение показателей корневой системы На опытных делянках ни одно растение не было поражено грибными заболеваниями и корневыми гнилями
7. Влияние агроцианов на микрофлору. Внесение в почву инокулюма через семена (бобовые культуры) или путем опрыскивания почвы (овощные культуры) может сопровождаться изменением микробного статуса почвы. Это зависит от двух основных причин приживления инокулюма и влияния его на развитие растения, что в конечном итоге через опад, корневые экссудаты и проективное покрытие поверхности почвы, определяет возможность сдвига видового состава и численности фототрофных и гетеротрофных микроорганизмов почвы
Основной вопрос при изучении действия биопрепаратов относится к приживлению вносимых микроорганизмов на корнях и в ризосфере Прямое их действие на растение, либо опосредованное через почвенные процессы, в итоге и определяет эффективность обработок.
Прежде всего, внимание было обращено на клубеньковые бактерии, входящие в состав агроцианов Об активности бобово-ризобиального симбиоза судили по учету численности клубеньков на корнях бобовых и их нитрогеназной активности Обработка различных бобовых культур агроцианами приводила х образованию активных клубеньков, что доказывается их местоположением, размером, цветом и активностью нитрогеназы При инокуляции агро цианом многочисленные клубеньки обычно располагались на главном корне, на боковых корнях их было мало Более крупные клубеньки возникали при обработке семян искусственным консорциумом, они были преимущественно розового цвета, что свидетельствует о большом количестве в них легтемоглобина Все эти признаки подчеркивают эффективность симбиоза (Посыпанов, 1991, Трепа-чев, 1999), что также подтверждает прямое определение нитрогеназной активности в клубеньках (табл 8)
В определенной степени инокуляция агроцианами оказывала влияние на микробный статус почвы, хотя подобное влияние могло быть опосредовано через экссудаты растений и отторгнутые им ткани (опад, отмершие корни), количество которых находится в прямой зависимости от урожая. Следовательно, повышение урожая под влиянием агроцианов сопрягалось с увеличением органического вещества в почве — экссудатов и детрита, которое действовало, прежде всего, на ризосферную микрофлору
В ризосфере бобовых растений к середине их вегетации (июль месяц) увеличивалось число клеток грибов-аммонификаторов (152,2±35,94 тыс./1г почвы при внесении Ыозюс-'-КЫгоЫит против 59,80±8,40 при обработке одним КЫгоЫит) и свободноживущих клубеньковых бактерий (2,65+0,25 мчн кл/ 1г почвы против 1,11 ±0,06, соответственно) Численность клеток аммонифицирующих бактерий практически не изменялась (3,48±0,34 и 3,62±0,29 млн клУ 1г
почвы, соответственно). В этот же срок на поверхности почвы под растительным опадом картина была несколько иной: обработка агроцианом снижала количество грибов-аммонификаторов. Это может быть связано с трофической дифференцировкой видового состава этих организмов, в распоряжении которых в ризосфере находятся преимущественно экссудаты корней и продукты их отмирания, на поверхности почвы - опад, минерализующийся в условиях большего доступа кислорода и света. Интересно, что при инокуляции агроцианом в поверхностном слое почвы увеличивается количество клубеньковых бактерий. Мы объясняем это тем, что гормогонии цианобакгерий в силу фототаксиса «выползают» на поверхность почвы и увлекают за собой, находящиеся в слизистом чехле клубеньковые бактерии. Олигонитрофильные бактерии, представляющие разнородную физиологическую группу, объединенные по принци. пу олигонитрофии, на бактеризацию семян не среагировали.
Приживление и размножение в почве ностока легче всего было наблюдать в вегетационном опыте с горохом, где вместо почвы использовался прокаленный песок (совместно с: Калинин, 1995). Состояние нитей ностока было различным при изолированном внесении цианобактерии и в агроциане. При внесении агроциана (носток — ризобиум) одновременно с формирующимися спорами были видны и очень молодые гормогонии, состоящие из 3-5-7 ¡слеток. При внесении монокультуры ностока количество клеток в гормогониях и гете-роцист увеличивалось. Все это свидетельствует об активном состоянии популяции. . .. .....
Одновременно с цианобактериями в полевых экспериментах учитывалось биоразнообразие других фототрофных микроорганизмов — почвенных водорослей, обычно всегда находящихся вблизи очагов размножения цианобактерий (Домрачева, 1998). В опытах с козлятником составленный список фототрофов включал 96 видов: цианобактерий 26, зеленых водорослей 41, желто-зеленых 19, диатомовых 8, пирофитовых 1 в золотистых 1. Численность клеток разных отделов водорослей и клеток цианобактерий изменялись в почве разных вариантов. Эти различия сохранились и в последействии микробных обработок на второй год наблюдения за посевами. Численность клеток фототрофов в почве около посевов козлятника (контроль) была невысока (до 20 тыс. / г почвы), под посевами козлятника она достигала в июньской и сентябрьской пробах сотен , тысяч. Численность ностоков, при их внесении на семена, значительно повышалась в почве в июньской пробе, однако к сентябрю второго года использования она снижалась. Численность зеленых водорослей была высока и в июньской и в сентябрьской пробах в варианте, где вносили только ризобии и уменьшалась - при внесении ризобий и ностока. Численность диатомей была выше при внесении бинарного препарата. Изменение динамики фототрофов при инокуляции семян могло быть следствием косвенного действия: растения в варианте с обработкой бинарным препаратом бьши развиты лучше, что вызывало увеличение проективного покрытия ими почвы и ухудшение условий существования фототрофов. . , ,
Таким образом, картина развития прокариотных и эукариотных фототро-фов зависит не столько от внесения инокулюма в почву, сколько от его влияния на рост растений, определяющих состояние освещенности поверхности почвы Влияние агроцианов на свободноживущие гетеротрофные микроорганизмы не стабильно и носит временный характер
Выводы
1 В работе использовано свойство азотфтссирующих цианобактерий образовывать в процессе жизнедеятельности прочные и временные связи с разнообразными хемотрофными организмами, заселяющими счизистые образования около их клеток и нитей Показано, что цианобактерии могут быть использованы как действующий компонент, носитель и субстрат для культивирования запрограммированных бактерий
2 Принципиальными условиями для создания устойчивых, автономных по углероду и азоту ассоциаций, являются - наличие аксеничных культур цианобактерий и положитетьные ассоциативные связи партнеров в циано - бактериальном консорциуме
3 Показана возможность образования прочных консорциумов между ЬГовЮс раковин» и видами р ЮнгоЬшт, между N ра!исккит и комплексом бактерий -АёГоЬааегшт гаскоЬааег, АлЬгоЬайег туэогепз и АгоэртПит ЬроГегиш
4 Гомеостатическое состояние консорциума достигается при заражении цианобактерий, находящихся в логарифмической стадии роста, и определенном титре хемотрофных бактерий Цианобактерии хорошо растут, если титр каждого бактериального партнера не превышает 106 кл / мл культуральной среды
5 Искусственные консорциумы лучше растут и фиксируют больше азота, чем аксеничная популяция цианобактерий, что свидетельствует о возникновении нового уровня или системы с несводимыми свойствами, суть которой заключается в том, что особенности консорциума нельзя свести только к свойствам его партнеров
6 При помощи прямого микроснопирования в фазовом контрасте, с одновременным фотографированием, была показана стратификация клеток хемотрофных бактерий в культуре ностока Обнаружено, что гетеротрофные партнеры занимают место естественных бактериальных спутников, капсулируясь в слизи цианобактерий, образуя с ними стойкие микробные ассоциации
7 Доказано, что искусственные консорциумы могут длительное время расти и сохраняться в течение нескочьких лет на чисто минеральных безазотистых и агаризованных средах, при этом хемотрофные партнеры с> шествуют за счет прижизненных экссудатов цианобактерий и веществ их слизи
8 Впервые показана способность аксеничной культуры цианобактерий расти на минеральной безазотистои среде в присутствии бобового отвара в строго фиксируемом количестве (1 100) При больших концентрациях наблюдается аглю-тинация колоний ностока с постедующим их разрушением Феномен предполагает миксотрофизм организма
9 Установлено, что циано — ризобиальные консорциумы лучше растут на минеральных безазотистых средах, в которые добавляется бобовый отвар, что уве-
личивает вдвое выход биомассы консорциума в единицу времени и повышает численностыслеток ризобий на 4 порядка.
10. Стабильность искусственного циано - ризобиального консорциума в течение 2-х лет была подтверждена при культивировании его на стерильной почве, при разных режимах высушивания, хранении в ампулированном состоянии после лиофильной сушки и при культивировании на совершенно новом в практике исследования субстрате - нейтрализованном сфагновом мхе, пропитанном питательными средами. * " _ *
11. Показано, что сфагновый мох благоприятен для роста цианобактерий и циано - бактериального консорциума. Он имеет определенные преимущества перед другими субстратами, благодаря дешевизне, большой адсорбционной поверхности и способности длительно сохранять влагу, в набухшем состоянии, Цианобактериальная слизь хорошо прилипает к веточкам мха. Этот метод куль-, тивирования-может быть перспективен в биотехнологии консорциумов на основе цианобактерий.. • •.-•■■ . ... , -
12. Проведенная работа дала основание для испытания новой формы биопрепарата, получившей название агроциана, принцип построения которого был ocho-, ван на капсулировании (контейнизировании) в слизи цианобактерий хемотроф-ных бактерий, программированного действия. В опытах преследовалась цель векторного внесения инокулюма с высоким уровнем усвоения молекулярного азота, использования других биогенных элементов и увеличенной жизнестойкостью хемотрофных вселенцев, благодаря защитному действию слизи цианобактерий. •
13. Показаны преимущества обработки агроцианом (Nostoc paludosum + Rhizobium trifolii) семян клевера красного по сравнению со стандартной обработкой семян ризобиями. Обработка консорциумом стимулировала развитее растений, улучшая показатели: мощность растений, ветвление и облиствен-ность, количество головок на 1 растение, семян на одну головку, вес 1 ООО семян, что дало прибавку урожайности по отношению к обработке одним ризо-биумом. Улучшение хозяйственно-биологических показателей клевера было связано с увеличением азотфиксирующей активности клубеньков. • • ■.
14. Обработка агроцианом улучшала качество рассады капусты в условиях защищенного грунта: увеличилась высота растений, количество листьев и их ксе-ромасса, длина и объем корневой системы. На опытных делянках ни одно растение не было поражено грибными заболеваниями и корневыми гнилями.
15. Введение в почву инокулюма через семена (бобовые культуры) или путем поверхностной обработки почвы (защищенный грунт) сопровождается изменением микробного статуса почвы. В вегетационном опыте показано-приживление цианобактерий и хемотрофных партнеров; в полевом опыте — увеличение численности как свободноживущих ризобий, так и количества клубеньков на корнях бобовых растений," уменьшение численности грибов в прикорневой зоне. Сдвигов в численности клеток почвенных эукариотных водорослей и изменений их видового состава не отмечено. -г '
16. Прием создания микробных консорциумов , на основе азотфиксирующих цианобактерий открывает новые перспективы в агробиотехнологии и, с боль-
шей вероятностью, может быть использован для экологических целей, где возникает потребность в стабильно работающих микробных сообществах.
Список работ, опубликованных по теме диссертации
1 Калинин А А, Бородина Н В , Ковина A JI Влияние гетероцистных циано-бактерий на рост и развитие гороха // Микроорганизмы в сельском хозяйстве Тез докл - Пушино, 1992 - С 79
2 Калинин А А , Мезенцева Г В , Ковина А Л Бактериальный композит и его влияние на микрофлору почв // Рациональное использование земельных ресурсов России Тез докл-Киров, 1993 - С 121-122
3 Калинин А А, Ковина АЛ, Панкратова Е М, Перминова Г Н Цианобакте-рии как возможные организмы для создания диазотрофных микробных препаратов и их влияние на растения // Современные проблемы почвоведения и экологии Тез докл - Москва, 1994 - С 82
4. Ковина А Л , Панкратова Е М, Перминова Г Н Азотфиксирующие циано-бактерии как основа для создания сложных микробных препаратов // Агрономическая наука - достижения и перспективы Тез докл - Киров, 1994 -С 14
5 Pankratova Ye М, Kalinin А А , Kovma A L Growth interaction between Nostoc and Rhizobium // К)"1 International congress on Nitrogen Fixation- SamtPetersburg, Russia - 1995 - P 665
6 Pankratova Ye M, Kalinin A A , Kovina A L Growth interaction between Nostoc and Rhizobium // Nitrogen Fixation: Fundamentals and Applications Ed. I A.Tikhonovich, V I Romanov, N.A Provorov, M E Newton - Kliwer Acad Publ - 1995 - P 720
7 Ковина А Л, Трефилова Л В Исследование условий, субстратов и сред для культивирования искусственных ассоциаций микроорганизмов // Эффективность применения средств химизации и продуктивность сельскохозяйственных культур Тез докл - Москва, 1996 - С 16
8 Зяблых Р Ю , Ковина А Л Взаимоотношения цианобактерий с бактериями рода Rhizobium при совместном культивировании // Почва, биология растений и агротехника их возделывания Тез докл - Киров, 1997 - С 20-23
9 Трефилова Л В , Зяблых Р Ю , Ковина А Л , Калинин А А Эффективность цианобактериальных консорциумов при выгонке рассады капусты в защищенном грунте // Пермский аграрный вестник - вып 11, 1998 -С 116-117
10 Панкратова Е М, Калинин А А , Ковина А Л , Трефилова Л В , Зяблых Р Ю Создание на основе цианобактерий стабильных микробных консорциумов // Микробиология почв и земледелие. Тез докл - Санкт-Петербург, 1998 -С 28
Подписано в печать 2 04 01 Уел печ л 1,4
Бумага офсетная Печать матричная
Заказ N° 620 Тираж 100
Текст напечатан с оригинал-макета, предоставленного автором
610 000 г Киров ул Московская 36 Изготовление - ООО 'Альфа Полекс" ПРИП ВятГТУ
Лицензия ЛР № 020519 от 20 06 97г
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ковина, Алевтина Леонидовна
1.1. Положение цианобактерий в системе органического мира и их общая характеристика
1.2. Физиологическая экология цианобактерий.
1.2.1. Распространение в почвах зоны умеренного кли
1.2.2. Действие абиотических факторов и взаимоотношения с гетеротрофными организмами
1.2.2.1. Регулирующее действие условий существования
1.2.2.2. Характеристика естественного микробного окружения клеток.
1.2.2.3. Естественные симбиозы азотфиксирующих цианобактерий
1.3. Понятие об искусственных консорциумах
Глава 2. ЦЕЛЬ, ЗАДАЧИ, МЕТОДЫ И ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЪЕКТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ ./.
2.1. Цель и задачи исследований. ^
2.2. Объекты и методы
2.3» Природные условия применения агроцианов
Глава 3. ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Характер взаимных эффектов при совместном росте цианобактерии Моб1:ос раХийовш и хемотрофных бактерий как основа составления агроцианов
3.1.1. Характеристика микробных изолятов
3.1.2. Совместимость партнеров в бисистемных консорциумах
3.1.2.1. Рост и азотфиксация в совместных культурах 56 3.1.2.1.1. Оптимальное соотношение клеток К.раХи&оеш) и А.га<ИоЬас1;ег / А.тувогепв / А.НроГегит в бисистемных консорциумах.
3.1.2.2. Бисистемный консорциум КТое^с раХийовит
НМгоМш зр. ер.
3.1.1.2.1. Влияние бобового отвара на рост ностока
3.1.2.2.2. Влияние бобового отвара на рост консорциума
3.2. Жизнеспособность консорциума в разных условиях
3.2.1. В жидких культурах
3.2.2. Рост на твердых субстратах
3.2.2.1. Рост на поверхности агара
3.2.2.2. На почве
3.2.2.3. На мхе
3-3- Стратификация партнеров в консорциумах
3-4- Устойчивость циано - бактериальных консорциумов
3.4.1. При культивировании в жидкой среде
3.4.2. После высушивания
3.4.2.1. В воздушно-сухом состоянии
3.4.2. При лиофильной сушке
3.4.3. При хранении в почве
3.4.4. На сфагновом мхе
3.5. Влияние циано - бактериальных композитов (агроцианов) на растение и микрофлору почвы
3.5.1. На клевере красном
3.5.2. На горохе
3.5.3. На капусте
3-5.4. Влияние агроцианов на микрофлору
ВЫВОДЫ
Введение Диссертация по биологии, на тему "Микробные агроконсорциумы на основе цианобактерий"
В последнее время утвердилось мнение о перспективности применения в агробиотехнологии не одновидовых популяций микроорганизмов, а их ассоциаций, т.е. консорциумов (Рыбальский, Лях,
1990). При этом достигается разнонаправленность действия и не только аддитивный, но и синергический эффект; увеличиваются шансы приживления инокулюма.
Цианобактерии в качестве партнеров таких ассоциаций исследованы очень незначительно (Панкратова, Калинин, 1991; Калинин, 1995). В то же время они являются непременным компонентом микро-биоты почвы с потенциальной способностью давать вспышки размножения на ее поверхности (Домрачева, 1998), обладают агрономически значимой азотфиксацией и являются первичными продуцентами органического вещества (Панкратова, 1998). Способность к синтезу спектра физиологически активных веществ (Горюнова и др., 1969; Сиренко, 1972; Сиренко, Козицкая, 1988; Андреюк и др., 1990), стимулирующих корнеобразование у высших растений (Панкратова, Калинин,
1991), делает их объектом пристального внимания биологов, агрономов, биохимиков и биотехнологов. Однако, с точки зрения целенаправленного конструирования микробных консорциумов, практически вне поля зрения осталась необычная коммуникабельность цианей, т.е. их способность вступать в прочные или временные связи с самыми обычными почвенными бактериями. Более того, очистка слизистых чехлов этих организмов от сопутствующей микрофлоры представляет значительную трудность. Все вышесказанное обусловливает своевременность исследований по этим организмам как объектам биотехнологии.
Целью работы явилось изучение возможности создания на основе цианобактерий искусственных микробных композитов, условий их стабильного функционирования и эффективности действия на растения и почву. Решали задачи:
- изучить возможность образования консорциумов между аксеничной культурой Шов1;ос ра1иаовш и видами р. НМаоМт; N. раХийовит и А^оЬа^ег1ит гай:1оЬа^ег, Аг-ЫггоЬа^ег тувогегш и АгоБрХгШиш lipofeгum;
- изучить условия гомеостатического состояния и физиологические параметры консорциума по сравнению с составляющими его партнерами при росте на различных средах и субстратах;
- изучить топографию хемотрофных вселенцев в аксеничную культуру цианобактерий;
- исследовать стабильность искусственных микробных консорциумов во времени и при моделировании условий культивирования;
- изучить действие консорциумов (агроцианов) на клевер и горох (циано-ризобиальный консорциум) и выгонку рассады капусты (циано-бактериальный консорциум);
- проанализировать приживление инокулюма и возможность изменения микробного статуса почвы при использовании микробных консорциумов.
Новизной работы в целом является разработка и углубление нового направления использования азотфиксирующих цианобактерий как автотрофного компонента, носителя и субстрата для культивирования хемотрофных бактерий с целью создания искусственных стабильных микробных ассоциаций направленного действия. Впервые показана возможность вселения в слизь цианобактерий в аксеничном состоянии (капсулирования) запрограммированной микрофлоры - образование устойчивых микробных сообществ, максимально автономных от среды. Впервые изучены условия их образования, субстраты и среды для их выращивания. Доказано длительное сосуществование в высушенном состоянии. Установлена эффективность их действия как инокулюма.
Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Ковина, Алевтина Леонидовна
ВЫВОДЫ
1. В работе использовано свойство азотфиксирующих цианобактерий образовывать в процессе жизнедеятельности прочные и временные связи с разнообразными хемотрофными организмами, заселяющими слизистые образования около их клеток и нитей. Показано, что цианобактерии могут быть использованы как действующий компонент, носитель и субстрат для культивирования запрограммированных бактерий.
2. Принципиальными условиями для создания устойчивых, автономных по углероду и азоту ассоциаций, являются - наличие аксеничных культур цианобактерий и положительные ассоциативные связи партнеров в циано -бактериальном консорциуме.
3. Показана возможность образования прочных консорциумов между ТчГоз1:ос ра1ис1о8ит и видами р. Ш^оЫит; между Ы.ра1ис1о8ит и комплексом бактерий -А£гоЬас1епит гасНоЬайег, Аг&гоЬаЛег туБогеш и АгозртПит lipofeшm.
4. Гомеостатическое состояние консорциума достигается при заражении цианобактерий, находящихся в логарифмической стадии роста, и определенном титре хемотрофных бактерий. Цианобактерии хорошо растут, если титр каждого бактериального партнера не превышает 106 кл./ мл культуральной среды.
5. Искусственные консорциумы лучше растут и фиксируют больше азота, чем аксеничная популяция цианобактерий, что свидетельствует о возникновении нового уровня или системы с несводимыми свойствами, суть которой заключается в том, что особенности консорциума нельзя свести только к свойствам его партнеров.
6. При помощи прямого микроскопирования в фазовом контрасте, с одновременным фотографированием, была показана стратификация клеток хемотрофных бактерий в культуре ностока. Обнаружено, что гетеротрофные партнеры занимают место естественных бактериальных спутников, капсулируясь в слизи цианобактерий, образуя с ними стойкие микробные ассоциации.
7. Доказано, что искусственные консорциумы могут длительное время расти и сохраняться в течение нескольких лет на чисто минеральных безазотистых и агаризованных средах, при этом хемотрофные партнеры существуют за счет прижизненных экссудатов цианобактерий и веществ их слизи.
8. Впервые показана способность аксеничной культуры цианобактерий расти на минеральной безазотистой среде в присутствии бобового отвара в строго фиксируемом количестве (1: 100). При больших концентрациях наблюдается аглютинация колоний ностока с последующим их разрушением. Феномен предполагает миксотрофизм организма.
9.Установлено, что циано - ризобиальные консорциумы лучше растут на минеральных безазотистых средах, в которые добавляется бобовый отвар, что увеличивает вдвое выход биомассы консорциума в единицу времени и повышает численность клеток ризобий на 4 порядка.
10. Стабильность искусственного циано - ризобиального консорциума в течение 2-х лет была подтверждена при культивировании его на стерильной почве, при разных режимах высушивания, хранении в ампулированном состоянии после лиофильной сушки и при культивировании на совершенно новом в практике исследования субстрате - нейтрализованном сфагновом мхе, пропитанном питательными средами.
11. Показано, что сфагновый мох благоприятен для роста цианобактерий и циано - бактериального консорциума. Он имеет определенные преимущества перед другими субстратами, благодаря дешевизне, большой адсорбционной поверхности и способности длительно сохранять влагу в набухшем состоянии. Цианобактериальная слизь хорошо прилипает к веточкам мха. Этот метод культивирования может быть перспективен в биотехнологии консорциумов на основе цианобактерий.
12. Проведенная работа дала основание для испытания новой формы биопрепарата, получившей название агроциана, принцип построения которого был основан на капсулировании (контейнизировании) в слизи цианобактерий хемотрофных бактерий, программированного действия. В опытах преследовалась цель векторного внесения инокулюма с высоким уровнем усвоения молекулярного азота, использования других биогенных элементов и увеличенной жизнестойкостью хемотрофных вселенцев, благодаря защитному действию слизи цианобактерий.
13. Показаны преимущества обработки агроцианом (N08100 ра1иёоБит + ШпгоЫит ПгАэШ) семян клевера красного по сравнению со стандартной обработкой семян ризобиями. Обработка консорциумом стимулировала развитие растений, улучшая показатели: мощность растений, ветвление и облиственность, количество головок на 1 растение, семян на одну головку, вес 1 ООО семян, что дало прибавку урожайности по отношению к обработке одним ризобиумом. Улучшение хозяйственно-биологических показателей клевера было связано с увеличением азотфиксирующей активности клубеньков.
14. Обработка агроцианом улучшала качество рассады капусты в условиях защищенного грунта: увеличилась высота растений, количество листьев и их ксеромасса, длина и объем корневой системы. На опытных делянках ни одно растение не было поражено грибными заболеваниями и корневыми гнилями.
15. Введение в почву инокулюма через семена (бобовые культуры) или путем поверхностной обработки почвы (защищенный грунт) сопровождается изменением микробного статуса почвы. В вегетационном опыте показано приживление цианобактерий и хемотрофных партнеров; в полевом опыте -увеличение численности как свободноживущих ризобий, так и количества клубеньков на корнях бобовых растений, уменьшение численности грибов в прикорневой зоне. Сдвигов в численности клеток почвенных эукариотных водорослей и изменений их видового состава не отмечено.
128
16. Прием создания микробных консорциумов на основе азотфиксирующих цианобактерий открывает новые перспективы в агробиотехнологии и, с большей вероятностью, может быть использован для экологических целей, где возникает потребность в стабильно работающих микробных сообществах.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ковина, Алевтина Леонидовна, Киров
1. Азаров В.Ф. Симбиотический азот в земледелии центрально-чер- • ноземной зоны Российской Федерации: Автореф. дис. . док. биол. наук.-М., 1995.- 59 с.
2. Алексахина Т.Н., Штина Э.А. Почвенные водоросли лесных биогеоценозов. -М. : Наука, 1984.- 148 с.
3. Андреюк Е.И., Коптева Ж.П., Занина В.В. О фитотоксических свойствах некоторых синезеленых водорослей // Фитотоксические свойства почвенных микроорганизмов.-Л., 1978.-С.81-86.
4. Андреюк Е.И., Коптева Ж.П., Занина В.В. Цианобактерии.- Киев: Наук. Думка, 1990.- 200 с.
5. Артамонова B.C. Альгосинузии почв Присалаирья: Автореф. дис. . канд. биол. наук.- Новосибирск, 1985.- 17 с.
6. Базилинская М.В. Использование биологического азота в земледелии. Обзорная информация.- М., ВНИИТЭИСХ, 1985.- 55 с.
7. Базилинская М.В. Виоудобрения.- М.: Агропромиздат, 1989.128 с.
8. Балезина Л.С. Влияние удобрений и извести на развитие почвенных водорослей // Тр. Кировского с.-х. ин-та.- Киров, 1965.- Т.18.-Вып.30.- С.160 166.
9. Балезина Л.С. Влияние минеральных и органических удобрений на развитие водорослей в дерново-подзолистой почве // Микробиология.-1975.- Т.44.- N 2.- С.347-350.
10. Балезина Л.С. Влияние удобрений и гербицидов на развитие почвенных водорослей: Автореф. дис. . канд. биол. наук.- Горький, 1970.- 22 с.
11. Белимов A.A. Эффективность инокуляции ячменя смешанными культурами диазотрофов: Автореф. дис. . канд. биол. наук.- Л., 1990. 19 с.
12. Белимов A.A., Кожемяков А.П. Смешанные культуры азотфикеирую-щих бактерий и перспективы их использования в земледелии // Сельскохозяйственная биология.- 1992.- N 5.- С. 77 87.
13. Белимов A.A., Кулакова A.M., Груздева Е.В. Влияние pH почвы на взаимодействие ассоциативных бактерий с ячменем // Микробиология.- 1998.- 67.- Т 4.- С. 561 568.
14. Бершова О.И., Коптева Ж.П., Танцюренко Е.В. Взаимоотношения синезеленых водорослей возбудителей "цветения" воды с бактериями // "Цветение" воды.- Киев: Наук. Думка, 1968.- С. 159 - 171.
15. Большой практикум по микробиологии.- М.: Высшая школа, 1962.491 с.
16. Васюк Л.Ф. Ассоциативные азотфиксаторы и условия их эффективного применения // Бюллетень ВНИИ с.-х. микробиологии.- 1985.-N 42.- С. 16 19.
17. Васюк Л.Ф., Иванов Н.С., Чеботарь В.К., Чмелева З.В., Кононова P.A., Смирнова Г.В. Специфичность взаимодействия ассоциативных диазотрофов с сортами картофеля // Микроорганизмы в сельском хозяйстве: Тез. докл.- Пущино, 1992.- С. 28-29.
18. Вахрушев A.C. Полевой метод определения азотфиксации синевезеленых водорослей с помощью JN: Автореф. дис. . биол. наук.-М., 1974.- 20 с.
19. Викторов Д.П. Малый практикум по физиологии растений // М.: Высшая школа, 1969.- 119 с.
20. Вознесенский В.А. Первичная обработка экспериментальных данных.- Л.: Наука, 1969.- 83 с.
21. Вольберг М.М. Взаимодействие популяций микроводорослей и бактерий в модельной системе: Автореф. дис. . канд. биол. наук.- М., 1988.- 24 с.
22. Гецен М.В. Водоросли в экосистемах Крайнего Севера. Л.: Наука, 1985.- 165 с.
23. Глаголева О.Б., Зенова Г.М. Экологическая характеристика бактериального звена альго-бактериальных ассоциаций // Вестн. МГУ.-Сер. Почвоведение.- 1992.- N 3.- С. 19 25.
24. Голлербах М.М., Косинская Е.К., Полянский В.И. Определитель пресноводных водорослей СССР. Том 2. Синезеленые водоросли.- М.: Сов. наука, 1953.- 652 с.
25. Голлербах М.М., Штина Э.А. Почвенные водоросли.-Л.: Наука, 1969.- 228 с.
26. Горелова O.A., Баулина О.М., Гусев М.В., Корженевская Т.Г. Формирование гормогониев и их таксис при взаимодействии цианобак-терий и растений // Автотрофные микроорганизмы: Тез. докл. М.: Из-во МГУ, 1996.- С. 30.
27. Горелова O.A., Баулина О.М., Щелманова А.Г., Корженевская Т.Г., Гусев М.В. Гетероморфизм цианобактерии Nostoc sp. ~ микросимбионта мха Blasia pusilla.// Микробиология.- 1996.- Т. 65.-N 6.- С. 824 832.
28. Горюнова C.B. О возможности применения азотфиксирующих сине-зеленых водорослей для повышения урожайности рисовых полей // успехи микробиологии.- 1971.- Вып. 7.- С. 195 207.
29. Горюнова C.B., Ржанова Г.Н., Орлеанский В.К. Синезеленые водоросли (биохимия, физиология, роль в практике).- М.: Наука, 1969.228 с.
30. Громов Б.В. Коллекция культур водорослей Биологического института Ленинградского университета //Тр. ин-та / Петергоф, биол. ин-т Ленинградского ун-та.- 1965.- N 19.- С. 125 130.
31. Громов Б.В. Ультраструктура синезеленых водорослей.- Л.; Наука, 1976.- 94 с.
32. Громов Б.В. Биологически активные вещества (БАВ) цианобакте-рий // Автотрофные микроорганизмы: Тез. докл.- М.: Из-во МГУ, 1996.-С. 8.
33. Громов Б.В., Титова H.H. Коллекция культур водорослей лаборатории микробиологии Биологического института Ленинградского университета // Культивирование коллекционных штаммов водорослей.-Л., 1983.- С. 3 27.
34. Гусев М.В. Азотфиксирующие цианобактерии в экспериментальной симбиологии //Автотрофные микроорганизмы: Тез. докл.- М.: Из-во МГУ, 1996.- С. 7.
35. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология.- М.: Изд-во Моск.унта, 1985.- 376 с.
36. Гусев М.В., Никитина К.А. Цианобактерии.- М.: Наука, 1979.227 с.
37. Дедыш С.Н., Зенова Г.М. Специфическая зона вокруг клеток водорослей в почве // Альгология.- 1992.- Т.2.- N 4. С. 32 38.
38. Домрачева Л.И. Особенности развития группировок фототрофных микроорганизмов при "цветении" почвы // Автотрофные микроорганизмы: Tes. докл. M.: МГУ, 1996.- С. 33.
39. Домрачева Л.И. "Цветение" почвы в агроэкосистемах и закономерности его развития: Автореф. дие. . докт. биол. наук.- М., 1998.- 46 с.
40. Домрачева Л.И., Лебедева О.Н., Кожевин П.А. Особенности аль-бактериального комплекса при "цветении" почвы // Вестник МГУ.- Сер. Почвоведение.- 1986.- N 3-- С. 38-45.
41. Домрачева Л.И., Панкратова Е.М., Перминова Г.Н. Оценка биологического состояния почвы по ее "цветению" // Почвоведение.-1992.- N 11.- С. 71 80.
42. Домрачева Л.И., Штина Э.А. Структура группировок водорослей при "цветении" почвы // Вотан, журн.- 1985.- Т. 70.- N 2.- С. 180187.
43. Доросинский Л.М. Некоторые вопросы практического использования клубеньковых бактерий // Клубеньковые бактерии и их использование в земледелии: Тр. ВШИ с.-х. микробиологии.- 1980.- Т. 50.-С. 76 85.
44. Доросинский Л.М. Конкурентная способность клубеньковых бактерий // Биологический азот в сельском хозяйстве СССР.- М.: Наука, 1989.- С. 27 34.
45. Дорохина Н.Ю. Симбиотическая активность и урожайность козлятника лекарственного и восточного в зависимости от условий выращивания: Автореф. дис. . канд. с.-х. наук.- М., 1998.- 15 с.
46. Заварзин Г.А. Биоценоз в природе и промышленных условиях.-Пущино, 1987.- С. 3 11.
47. Заварзин Г.А. Эпиконтинентальные содовые водоемы как предполагаемые реликтовые биотопы формирования наземной биоты // Микробиология.- 1993а.- Т. 62.- Вып. 5.- С. 789 801.
48. Заварзин Г.А. Шестой международный симпозиум по микробнойэкологии GIAM 6.- 19936.- T. 62.- Вып. 5.- С. 970 - 976.
49. Звягинцев Д.Г. Достижения и перспективы развития почвенной и сельскохозяйственной микробиологии // Микроорганизмы в сельском хозяйстве: Тез. докл. Пущино, 1992. - С. 64-65.
50. Калинин A.A. Цианобактерии как возможные компоненты диазотроф-ных микробных ассоциаций и их влияние на растения: Автореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1995.- 28 с.
51. Калинин A.A., Бородина Н.В., Ковина А.!. Влияние гетероцистных цианобактерий на рост и развитие гороха // Микроорганизмы в сельском хозяйстве: Тез. докл.- Пущино, 1992.- С.79.
52. Калинин A.A., Ковина А.Л., Панкратова Е.М., Перминова Г.Н. Цианобактерии как возможные организмы для создания диазотрофных микробных препаратов и их влияние на растения // Современные проблемы почвоведения и экологии: Тез. докл.- Москва, 1994.- С.82.
53. Калинин A.A., Мезенцева Г.В., Ковина А.Л. Бактериальный композит и его влияние на микрофлору почв // Рациональное использование земельных ресурсов России: Тез. докл. Киров, 1993.- С-121-122.
54. Кирпенко Ю.А., Сиренко Л.А. Детоксикация и перспективы использования водорослевого сырья // Токсины синезеленых водорослей и организм животного.- Киев: Наук. Думка, 1977.- С. 94 99.
55. Ковина А.Л., Панкратова Е.М., Перминова Г.Н. Азотфиксирующие цианобактерии как основа для создания сложных микробных препаратов // Агрономическая наука достижения и перспективы: Тез. докл.1. Киров, 1994.- С. 14.
56. Кожевин П.1., Домрачева Л. И., Лебедева О.Н. Особенности аль-гобактериального комплекса при "цветении" почвы // Вестник МГУ.-Сер. Почвоведение.- 1986.- N 3.- С. 15 19
57. Кожемяков А.П. Приемы повышения продуктивности азотфиксации и урожая бобовых культур // Биологический азот в сельском хозяйстве.- М.: Наука, 1989.- С. 15 27
58. Кожемяков А.П., Велимов A.A. Перспективы использования ассоциаций азотфиксирующих бактерий для инокуляции важнейших сельскохозяйственных культур // Тр. ВНИИ с.-х. микробиологии.- 1991.Т. 61.- С. 7 18.
59. Кожемяков А.П., Доросинский М.М. Эффективность использования препаратов азотфиксирующих микроорганизмов в сельском хозяйстве // Тр. ВНИИ с.-х. микробиологии.- 1989.- Т. 59.- С. 5 13.
60. Кожемяков А.П., Тихонович И.А. Использование инокулянтов бобовых культур и биопрепаратов комплексного действия в сельском хозяйстве // Докл. Российской академии с.-х. наук.- 1998.- N 6.-С. 7 10.
61. Кондратьева Н.В. Визначник пр!сноводных водоростей Украшсь-Koi PCP. Синьо-зелен1 водорост1 Cyanophyta. Ч. 2. Клас гормого-HieBi - Hormogoniophyceae.- Киев: Наук. Думка, 1968.- 523 с.
62. Кондратьева Н.В. Флора водорослей континентальных водоемов Украины. Прокариотические водоросли (Procaryophycobionta) : Общая характеристика. Строение, размножение и циклы развития.- Ч. 1.-Вып. 1.- Киев, 1995.- 236 с.
63. Кондратьева E.H. Автотрофные прокариоты.- Ms Из-во МГУ, 1996.- 312 с.
64. Кондратьева E.H., Максимова И.В., Самуилов В.Д. Фототрофные микроорганизмы.- М.: Из-во МГУ, 1989.- 376 с.
65. Коптева Ж.П. Физиологические особенности и взаимоотношения синезеленых водорослей и бактерий: Автореф. дис. . канд. биол. наук.- Киев, 1973.- 29 о.
66. Корженевская Т.Г. Экспериментальная симбиология (на примере синцианозов растений): Автореф. дис. . докт. биол. наук. М., 1990.- 49 с.
67. Костяев М.Я., Гецен М.В. Трофические взаимоотношения организмов в фитоценозах большеземельской тундры (на примере биологической фиксации азота) // Взаимодействие организмов в тундровых экосистемах: Тез. докл. Сыктывкар, 1989.- С. 31 - 33.
68. Кравченко Л.В. Энергетические затраты на ассоциативную азот-фиксацию и их обеспечение в ризосфере небобовых растений // Биологический азот в сельском хозяйстве СССР.- М.: Наука, 1989.- С. 99 109.
69. Красильников А.П. Микробиологический словарь-справочник.-Минск: Беларусь, 1986.- 351 с.
70. Кузьменко М.М. Миксотрофизм синезеленых водорослей и его экологическое значение.- Киев: Наук, думка, 1979.- 253 с.
71. Кузьменко М.И. Миксотрофизм синезеленых водорослей и его экологическое значение: Автореф. дис. . докт. биол. наук.- Киев, 1981.- 51 с.
72. Кукк Э.Г. Отдел синезеленые водоросли (Cyanophyta) // Жизнь растений: В 6-и т.- М.: Просвещение, 1977.- Т. 3. С. 78 - 92.
73. Лабутова Н.М., Вишневская H.A. Влияние Agrobacterium radio-bac ter на популяцию фитопатогенного гриба Fusarium solani при разных условиях в почве // Микробиология почв и земледелие: Тез. докл.- С.-Петербург, 1998.- С. 39.
74. Лебедева А.Ф., Саванина Я.В., Савельев М.Б. Смешанно-раздельное культивирование цианобактерии Anacystis nidulans и бактерийрода Pseudomonas в присутствии ванадия // Автотрофные микроорганизмы: Тез. конф.- М.: Из-во МГУ, 1996.- 43 с.
75. Ленгуорси Г. Жизнь микроорганизмов при экстремальных значениях pH // Жизнь микробов в экстремальных условиях.- М.: Мир, 1981.- С. 322- 364.
76. Маковкина E.H., Костяев В.Я. Азотфиксирующий компонент в структуре тундровых фитоценозов //Взаимодействие организмов в тундровых экосистемах: Тез. докл.- Воркута, 1989.- С. 30 31.
77. Материалы 4 Международной научной конференции СОИСАФ "Биологический азот в растениеводстве" // М., 1996.- 173 с.
78. Мезенцева Г.В. Возможные пути трансформации органического вещества азотфиксирующих цианобактерий в почве: Дис. . канд. биол. наук.- Л., 1986.- 190 с.
79. Мезенцева Г.В. Трансформация оранического вещества азотфиксирующих Oyanophyta в почве // Альгология.- 1992.- Т. 2.- N 4.-С. 27 31.
80. Методы почвенной микробиологии и биохимии // Под ред. Д.Г. Звягинцева.- М.: Из-во МГУ, 1980.- 224 с.
81. Мишустин E.H., Шильникова В.К. Биологическая фиксация атмосферного азота.- М.: Наука, 1968.- 532 с.
82. Муковникова Е.К. Влияние Ш1трагинизации и органических удобрений на симбиотическую азотфиксацию и продуктивность семенной люцерны на светло-каштановых почвах при орошении: Автореф. дис. . канд. с.-х. наук.- Волгоград, 1995.- 21 с.
83. Натмен П.С. Клубеньковые бактерии в почве // Почвенная микробиология.- М.: Колос, 1979.- С. 141 167.
84. Негру U.A., Сабельникова В.И. Влияние некоторых видов си-незеленых водорослей на содержание азота в почве и рост проростков некоторых растений // Тр. Кировского с.-х. ин-та.- Киров, 1972.- С.
85. Некрасова К.А. Трофические связи почвенных животных и водорослей (на примере коллембол) //Почвенная фауна и биологическая активность осушенных и рекультивированных торфяников.- М.: Наука, 1980.- С. 160 166.
86. Никитин Д. И. Синтрофные сообщества гетеротрофных микроорганизмов в биосфере // Микроорганизмы как компоненты биогеоценоза.-Алма-Ата, 1982.- С. 27 28.
87. Никитина З.И. Микробиологический мониторинг наземных экосистем.- Новосибирск: Наука, 1991. 220 с.
88. Нице Лазер. Микробиологическая активность почвы в условиях адаптивного земледелия: Автореф. дис. . докт. биол. наук.- М., 1995.- 38 с.
89. Новикова Н.М., Сафронова В.И., Павлова Е.А. О характере взаимодействия клубеньковых бактерий козлятника Rhizobium galegae с бобовыми растениями // Сельскохозяйственная биология.- 1992.- N 5. С. 105 - 110.
90. Одум Ю. Экология: В 2-х т.- М.: Мир, 1986.- Т. 1.- 328 с.
91. Определитель бактерий Берджи // Под ред. Дж. Хоулта, Н. Кри-га. П. Снита и др. М.: Мир, 1997.- Т. 1.- 430 с.
92. Османова P.A. Скорость роста почвенных водорослей и их влияние на развитие высших растений // Развитие и значение водорослей в почвах Нечерноземной зоны: Матер, межвуз. конф.- Пермь, 1977.-С. 65 67.
93. Пашков Н.С. Признаки новой парадигмы в почвенно-микробио-логических исследованиях агросистем // Микробиология почв и земледелие: Тез. докл.- С.-Петербург, 1998.- С. 5.
94. Панкратова Е.М. Влияние соединений азота на рост синезеле-ных водорослей и фиксацию ими молекулярного азота // Тр. межвуз. конф.- Киров, 1967 а.- С. 183 191.
95. Панкратова Е.М. Влияние синезеленых водорослей на азотный режим почвы и урожай растений // Современное состояние и перспективы изучения почвенных водорослей в СССР: Тр. межвуз. конф.-Киров, 1967 б.- С. 241 246.
96. Панкратова Е.М. Влияние азотфиксирующих водорослей на жизнедеятельность растений // Материалы V рабочего совещания по вопросу круговорота веществ в замкнутой системе на основе жизнедеятельности низших организмов.- Киев, 1968.- С. 107 109.
97. Панкратова Е.М. О роли азотфиксирующих синезеленых водорослей и сопутствующих им олигонитрофильных бактерий в фиксации свободного азота //Ботанический журнал.- 1970.- Т. 55.- N 11.- С. 1611 1618.
98. Панкратова Е.М. Участие синезеленых азотфиксирующих водорослей в накоплении азота в почве // Микробиология и научно-технический прогресс: Тез. докл.- Минск, 1971.- С. 78 80.
99. Панкратова Е.М. Использование растением азота поглощенного водорослями // Экология и физиолого-биохимические основы микробиологического превращения азота.- Тарту, 1972.- С. 199 205.
100. Панкратова Е.М. Фиксация атмосферного азота синезелеными водорослями в природных условиях // Ботанический журнал.- 1973.Т. 58.- N 3.- С. 360 368.
101. Панкратова Е.М. О накоплении азота синезелеными водорослями в почве // V конф. по споровым растениям Средней Азии и Казахстана: Тез. докл.- Ашхабад.- 1974.- Ч.2.- С. 297 298.
102. Панкратова Е.М. Распространение азотфиксации среди синезеле-ных водорослей // Ботанический журнал.- 1975.- Т. 60.- Ы 4.- С. 583 598.
103. Панкратова Е.М. Мобилизация в почве азота, накопленного азот-фикоирующими водорослями // Круговорот и баланс азота в системе почва удобрение - растение - вода.- М.: Наука, 1979.- С. 22 -29.
104. Панкратова Е.М. Роль азотфиксирующих синезеленых водорослей (цианобактерий) в накоплении азота и повышении плодородия почвы: Автореф. дис. . докт биол. наук.- М., 1981.- 39 с.
105. Панкратова Е.М. Размеры азотфиксирующей деятельности синезеленых водорослей (цианобактерий) в зависимости от внесения азотных удобрений: Тез. докл. Пущино, 1982.- С. 34 - 35.
106. Панкратова Е.М. Диапазон толерантности и физиологический оптимум для роста и азотфиксации цианобактерий // Достижения микробиологии практике: Матер, съезда.- Алма-Ата: Наука, 1985.Т. 6.- С. 143.
107. Панкратова Е.М. Участие цианобактерий в круговороте азота в почве и создании ее плодородия // Успехи микробиологии, 1987.-Вып. 21.- С. 212 242.
108. Панкратова Е.М. Азотфикеирующие цианобактерии и их экология в пахотных почвах умеренной зоны // Биологический азот в сельском хозяйстве СССР. М.: Наука, 1989.- С. 147 156.
109. Панкратова Е.М. Экологическое влияние цианобактерий на почву и растение при различном сочетании естественных и антропогенных факторов // Экология и почвы.- Пущино, 1998. Т. 2.- С. 84 - 104.
110. Панкратова Е.М., Вахрушев A.C. Усвоение высшим растением азота, фиксированного синезелеными водорослями из атмосферы // Микробиология.- 1969.- т. 38." Вып. 9.- С. 1080 1085.
111. Панкратова Е.М., Домрачева Л.И. Использование почвенных водорослей для мониторинга состояния почвы в зависимости от ее сельскохозяйственной нагрузки // Микроорганизмы в сельском хозяйстве: Тез. докл.- М.: Из-во МГУ.- 1986.- С. 115.
112. Панкратова Е.М., Домрачева Л.И. Экологическое прогнозирование состояния почвы по фототрофным микробным комплексам // Проблемы оценки состояния почв, растительного и животного мира.- Киров, 1995 а.- С. 87 90.
113. Панкратова Е.М., Домрачева Л.И. Методы и подходы к стандартизации биологического благополучия почвы в агрогенных системах умеренной зоны // Проблемы оценки состояния почв, растительного и животного мира.- Киров, 1995 б.- С. 78 86.
114. Панкратова Е.М., Домрачева Л.И., Перминова Г.Н. Экспресс-метод определения биологического благополучия почв на базе фототрофных микроорганизмов // Рациональное использование земельных ресурсов России: Тез. докл.- Киров, 1993.- С. 122 123.
115. Панкратова Е.М., Домрачева Л.И., Перминова Г.Н., Мезенцева Г.В. Обсервация биологического состояния почвы при длительном внесении минеральных удобрений // Микроорганизмы в сельском хозяйстве: Тез. докл.- Пущино, 1992.- С. 159 160.
116. Панкратова Е.М., Домрачева Л.И., Резник E.H. Функционирование цианобактерий на пахотных почвах Нечерноземной зоны // Почвоведение.- 1989.- N 4.- С. 75 81.
117. Панкратова Е.М., Домрачева Л.И., Резник E.H. Изменение параметров альго-цианобактериальных сообществ "цветения" почвы при внесении удобрений // Почвоведение.- 19%.- N 9.- С. 1112 1118.
118. Панкратова Е.М., Калинин A.A. Цианобактерии как возможные организмы для создания бактериальных препаратов // Роль научных ис-ледований в развитии сельскохозяйственного производства Кировской области: Сб. тр.- Киров, 1991.- С. 25 33.
119. Панкратова Е.М., Калинин A.A. Аксенизация цианобактерий // Агрономическая наука достижения и перспективы: Тез. докл. - Киров, 1994.- С. 19 - 20.
120. Панкратова Е.М., Мезенцева Г.В. Деструкция клеток синезеленых водорослей в почве // Виол, науки. Сер. почвоведение.- 1985.- N 3.-С. 95 99.
121. Панкратова Е.М., Перминова Г.Н., Третьякова А.Н. Цианобактерии как возможные компоненты сложных бактериальных удобрений // Микроорганизмы стимуляторы и ингибиторы роста растений и животных: Тез. докл. - Ташкент, 1989.- Ч. 2.
122. Панкратова Е.М., Резник E.H., Бородина Н.В. Динамика накопления азота цианобактериями в пахотных почвах при возрастающих дозах азотных удобрений // Биодинамика почв: Тез. докл. Таллин, 1988.- С. 17.
123. Панкратова Е.М., Резник E.H., Бородина Н.В. Цианобактерии в качестве азотонакопителей в пахотных почвах // Эколоия и биотехнология азотфиксирующих почвенных микроорганизмов: Тр. ВШИ с.-х. микробиолоии.- С. Петербург, 1991.- Т. 61.- С. 74-81.
124. Пересторонина Л.М. 0 способе получения бактериологически чистых культур азотфиксирующих синезеленых водорослей // Методы изучения и практического использования почвенных водорослей: Тр. инта.- Киров, 1972.- С. 181 184.
125. Перминова Г.Н. Влияние синезеленых водорослей на азотный режим почвы и урожай растений // Современное состояние и перспективы изучения почвенных водорослей в СССР: Тр. межвуз. конф.- Киров, 1967.- С. 241 246.
126. Перминова Г.Н., Панкратова Е.М. Синезеленые водоросли (циа-нобактерии) в наземных экосистемах тундры: Тез. докл.- Сыктывкар, 1989.- С. 29.
127. Посыпанов Г.С. Биологический азот в растениеводстве, состояние и перспективы // Биологический азот в растениеводстве: Тез. докл.- М., 1996.- С. 2 11.
128. Пошон Ж., Г. де Баржак. Почвенная микробиология. М., 1960.560 с.
129. Резник E.H. Участие цианобактерий в накоплении азота в пахотных почвах Нечерноземной зоны: Автореф. дис. . канд. биол. наук.- М., 1991.- 25 с.
130. Резник E.H., Домрачева Л.М., Панкратова Е.М. Использование цианобактерий и некоторых зеленых микроводорослей для диагностики перегрузки почвы азотными удобрениями: Тез. докл.- Пущино: Из-во АН СССР.- 1988, С. 159.
131. Романова Н.И., Селях И.О., Семенова Л.Р., Гусев М.В. Перспективы использования цианобактерий для повышения продуктивности сельскохозяйственных растений // Микроорганизмы в сельском хозяйстве: Тез. докл.- Пущино, 1992 а.- С. 171.
132. Романова Н.И., Семенова Л.Р., Селях И.О., Карпова О.В. Путиповышения биостимулирующего эффекта цианобактерий // Микроорганизмы в сельском хозяйстве: Тез. докл.- Пущино, 1992 б.- С. 171 172.
133. Руководство к практическим занятиям по микробиологии // Под ред. Н.С.Егорова.- М.: Из-во МГУ, 1983.- С. 151 152.
134. Рыбальский Н.Г., Лях С.П. Экобиотехнологический потенциал консорциумов микроорганизмов.- М.: ВНИМПМ.- Т.1.- 1990.- 176 с.
135. Саут Р., Уиттик А. Основы альгологии.- М.: Мир, 1990.- 597 с.
136. Сиренко Л.А. Физиологические основы размножения синезеленых водорослей в водохранилищах.- Киев: Наук. Думка, 1972.- 203 с.
137. Сиренко Л.А., Гавриленко М.Я. "Цветение" воды и евтрофирова-ние.- Киев: Наук. Думка, 1978.- 232 с.
138. Сиренко Л.А., Козицкая В.Н. Биологически активные вещества водорослей и качество воды.- Киев: Наук. Думка, 1988.- 256 с.
139. Сиренко Л.А., Кондратьева Н.В. Роль Oyanophyta в природе // Альгология.- 1998.- Т.8.- N 2.- С. 117 131.
140. Смит Д. Значение воды для микроорганизмов в природе // Жизнь микробов в экстремальных условиях.- М.: Мир, 1981.- С. 432-435.
141. Соколов O.A., Гоготов М.Н., Амелин А.Л. Экологически безопасные технологии повышения продуктивности и улучшения качества урожая растений.- Пущино. Сергиев Посад, 1996.- С. 92 93.
142. Стейниер Р., Эдельберг Э., Ингрем Дж. Мир микробов: В 3-х т.-М.: Мир, 1979.- Т. 3.- 320 с.
143. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум помикробиологии.- М.: Агропромиздат, 1987.- 239 с.
144. Третьякова А.Н. Влияние штаммов азотфиксирующих синезеленых водорослей на накопление азота и рост растений // Современное состояние и перспективы изучения почвенных водорослей в СССР: Тр. меж-вуз. конф.- Киров, 1967.- С. 246 254.
145. Третьякова А.Н., Бажина Е.В. Антифунгальные свойства почвенных водорослей // Методы изучения и практического использования почвенных водорослей.- Киров.- 1972.- С. 171 175.
146. Третьякова А.Н., Балезина Л.С. Влияние известкования на распространение водорослей в почве // Вопросы повышения плодородия почв и урожайности сельскохозяйственных культур Кировской области: Тр. ин-та.- Киров, 1981.- Т. 70.- С. 148 151.
147. Трефилова Л.В., Зяблых Р.Ю., Ковина А.Л., Калинин A.A. Эффективность циано-бактериальных консорциумов при выгонке рассады капусты в защищенном грунте // Пермский аграрный вестник.- Вып. 11, Пермь.- 1998.- С. 116 117.
148. Тюлин В.В. Почвы Кировской области.- Киров: Волго-Вятское книжное из-во, 1976.- 228 с.
149. Умаров М.М. Ассоциативная азотфиксация: проблемы и перспективы // Бюллетень ВНИИ с.-х. микробиологии.- 1985.- N 42.- С. 9 13.
150. Умаров М.М. Активизация ассоциативной азотфиксации // Микроорганизмы в сельском хозяйстве: Тез. докл.- М.: Из-во МГУ, 1986.-С. 11 12.
151. Хеймен Д.С. Участие микроорганизмов и корней растений в круговороте фосфора // Почвенная микробиология.- М.: Колос, 1979.-С. 90 119.
152. Хеппер K.M. Внеклеточные полисахариды почвенных бактерий // Почвенная микробиология.- М.: Колос, 1979.- С. 120 140.
153. Хотянович A.B. Методы культивирования азотфиксирующих бактерий, способы получения и применения препаратов на их основе (Методические рекомендации).- Л.: ВНИИСХМ, 1991.- 60 с.
154. Цыганков А.А. Управляемое культивирование пурпурных бактерий в изучении метаболизма водорода и азотфиксации: Автореф. дис. . докт. биол. наук.- Пущино, 1998.- 34 с.
155. Шапиро И.А. Адаптация лишайников к экстремальным условиям существования в связи с их азотным обменом: Автореф. дис. . докт. биол. наук.- Л., 1991.- 32 с.
156. Шильникова В.К. Азотфиксирующие бактерии // Жизнь растений: В 6-ти т.- М.: Просвещение, 1974.- Т.1.- С. 355 374.
157. Штина Э.А. О методе количественного учета почвенных водорослей // Ботанический журнал.- 1956.- Т. 41.- N 9.- С. 1314 1317.
158. Штина Э.А. Биомасса водорослей в почвах и методы ее определения // Вопросы численности, биомассы и продуктивности почвенных микроорганизмов.- Л.: Наука, 1972.- С. 48 61.
159. Штина Э.А. Почвенные водоросли как компонент биогеоценоза // Почвенные организмы как компоненты биогеоценоза.- М.: Наука, 1984.-С. 66-81.
160. Штина Э.А. Почвенные водоросли пшеничного поля // Биогеоценоз пшеничного поля.- М.: Наука, 1986.- С. 127 138.
161. Штина Э.А. Почвенные водоросли как экологические индикаторы // Ботанический журнал.- 1990.- Т. 75.- N 4.- С. 441 453.
162. Штина Э.А. Флора водорослей Кировской области // Проблемы изучения, использования и охраны природы Кировской области.- Киров, 1992.- С. 33 35.
163. Штина Э.А., Балезина Л.С., Панкратова Е.М., Перминова Г.Н., Третьякова А.Н., Юнг Л.А. Распространение азотфиксирующих сине-зеленых водорослей в неорошаемых почвах СССР // "Биологический" азот и его роль в земледелии.- М.: Наука, 1967.- С. 325 341.
164. Штина Э.А., Голлербах М.М. Экология почвенных водорослей.-М.: Наука, 1976.- 144 с.
165. Штина Э.А., Панкратова Е.М. Взаимодействие азотфиксирующих синезеленых водорослей с микроорганизмами-спутниками // Актуальные проблемы биологии синезеленых водорослей.- М., 1974.- С. 6178.
166. Штина Э.А., Панкратова Е.М. Коллекция культур микроскопических водорослей Кировского сельскохозяйственного института // Культивирование коллекционных штаммов водорослей: Сб. межвуз. науч. тр. -Л.: ЛГУ, 1983.- С. 81 86.
167. Юнг Л.А. Бактерии-спутники почвенных синезеленых водорослей и их роль в жизни альго бактериального ценоза // Почвы и приемы повышения эффективности их использования: Тр. ин-та.- Пермь, 1975.- С. 113 - 127.
168. Якунин А.Ф., Чан Ван Ни, Гоготов И.Н. Зависимость роста и синтеза разных нитрогеназ Anabaena variabilis от наличия в среде молибдена, ванадия и вольфрама // Микробиология.- 1991.- Т. 60.-Вып. 1.- С. 71 76.
169. Abdel Monem М., Soliman S. Potential role of biofertilizershfor sustainable agriculture in Egypt. // 10 International congress on Nitrogen Fixation.- Saint-Petersburg, Russia,- 1995.-Post. 677.
170. Ahluwalia A.S., Kaur Manjik. Effekt of some heavy metal compounds on growth and differentiation in a blue-green and a greenalga // Microlios.- 1988.- V. 53.- N 214.- P. 37 45.
171. Aksenov S.I., Babyeva I.P., Golubev V.I. On the mechanism of adaptation of microorganisms to conditions of extreme low humi-diti // Life Sei. a. Space Res. II.- Yerlag; Berlin, 1973.- P. 55 61.
172. Alexander V. A. Nitrogen fixation by blue-green algae in polar and subpolar regions // Nitrogen fixation by free-living microorganisms / Ed. Stewart W.D.P.- Cambridge: University Press, Cambridge, 1975.- V. 6.- 471 p.
173. Bauld J., Brock T. Algae excretion and bacterial assimilation in hot spring algae mate // J. Phycol.- 1974.- V. 10.- N 1.-P. 101 106.
174. Bagchi S. N., Chauhan Y. S., Palod A. Algicidal substance production by a novel isolate of Oscillatoria sp. // Forum Microbiol.- 1989.- V. 12.- N 1-2.- P. 100.
175. Bagchi S. N., Palod A., Chauhan V. S. Algicidal properties of a bloomforming blue-green alga Oscillatoria sp.// J. Basic Microbiol.- 1990.- V. 30.- N 1.- P. 21 29.
176. Bjalfe G. Nitrogen fixation in culture of algae and other microorganisms // Physiol. Plant.- 1962.- V. 15.- P. 122 129.
177. Boney A.D. Mucilage: ubiquitous algal attribute // Brit. Phycol. J.- 1981.- V. 16.- N 2.- P. 115 132.
178. Bothe H. Hydrogen production by algae // Experientia.- 1982.-Y. 32.- N 1.- P. 59 64.
179. Bourrelly P. Les Cyanophyceus, algues on bacteries? // Rev. algal.- 1979.- V. 14.- N 1.- P. 5 9.
180. Brock T.D. Lower pH limit ior the existence of blue-green algae: ovolutitionary and ecological imflications // Science.-1973.- V. 179.- N 4072.- P. 480 483.
181. Buzer J.S., Dohmeier R.A., Toit D.R.Du. The survival of algae in dry soils exposed to high temperatures for extended time periods // Phycologia.- 1985.- V.24.- N 2.- P. 249 251.
182. Cacciari L., del Gallo M., Ippoliti S., Lippi D., Pietrosan-ti I. Growth and survival of Azospirillum brasilense and Arthro-bacter glacomelloi in binary continuous culture //Plant and Soil. 1986.- N 1-3.- P. 107 - 116.
183. Caldwell D.E., Caldwell S.G. Bacteriological characterization of phytoplankton cell surfaces // Environment, biogeochemi-cal and Geomicrobiol.- Ann. Arbor.- Mich.- 1978.- V. 1.- P. 101107.
184. Cameron R.E. Ecology of blue-green algae in Antarctic soils //In: First Intern. Symp. on Taxonomy and Biology of Blue-Green Algae.- Madras.- 1970.- P. 3 4.
185. Oannel R.J.P., Owcianka A.M., Walker J.M. Results of a lar-gescale screening programme to defect antibacteria activity from freshwater algae // Brit. Phycol. J. 1988.- V.23.- N 1.- P. 41 ~ 44.
186. Carr N.G., Whitton B.H. The Biology of Cyanobacteria.- Ber-kely: Univ. Gal. Press., 1982.- 688 p.
187. Date J.M. A note of some factors affecting the survival of Rhizobium cultivars during freeze drying and subsequent storage // J.Appl. Bacterid.- 1982.- V.52.- N 5.- P. 461 464.
188. Day J.M. Long-terms storage of Rhizobium // Rothamsted Experimental, Station Report for 1980.- Part 1.- 200 p.
189. Domracheva L.I., Pankratova E.M., Perminova G.N. Evaluation of the Biological condition of soil from its Miorobial Bloom // Eurasian Soil Sei.- 1993.- 25/6.- P. 54 65.
190. Dryanovska O.A., Zakova N.S. Combined cultivation of Rhizo-bium leguminosarum with Ohlamydomonas reinhardi // Докл. Волг.AH.-1985.- Y.38.- N 10.- P. 1383 1385.
191. Englund B. Stuidies on ^-fixation by free-living and symbiotic blue-green algae using the acetylene reduction technique // Acta Univ. Ups.- 1977.- N 430.- 45 p.
192. Favilli P., Oaroppo S., Materassi R. Su un esperimento di algalizzazione di un suolo argilloso // Ann. miorobiol. ed enzi-mol„- 1977.- N 27.- P. 101 107.
193. Flores I., Wölk С.P. Production by filamentous, nitrogen-fizing cyanobacteria, of a bacteriocin and of other antibiotics that kill related strains // Arch. Microbiol.- 1986.- V. 45.-N 3.- P. 215 219.
194. Pong H.M., Shen Т.О. Growth and nitrogen fixation capacity of some blue-green algae in West Malaysia // Nitrogen Oycl. South-East Asian Wet Monsoonal Ecosyst. Proc. Reg. Workshop, Chiang Mai, 5-10 Nov., 1979.- Canberra, 1981.- P. 41 43.
195. Geitler L. Einige kritische Bemerkungen zy neuen zusammen fassenden Dorsteilungen der Morphologie und Systematic der Oyano-phyoeen // Plant. Syst. and Evol.- 1979.- V. 132.- N 1 2.- P. 153 - 160.
196. Gleason P.K., Oase D.E., Sippreil Kevin D., Magnuson (P.S. Effect of the natural algicide, eyanobacterium, on a herbicide-resistant mutant of Anacystis nidulans R 2 // Plant Sei.- 1986.46.- N 1. P 10.
197. Gleason P.K., Paulson J.L. Site action of the natural algici-de, cyanobacterin, in the blue-green alga, Synechoooccus sp.// Arch. Microbiol.- 1984.- V.13S.- N 3.- P. 273 277.
198. Golubic S. Antiquity of cyanobacteria // Terra oognita.-1988.- V. 8.- W 3.- P. 226.
199. Granhall U., Hofsten A.V. Nitrogenase activity in relation to intracellular organisms in Sphagnum mosses // Physiol. Plant.-1976.- Y. 36.- N 1.- P. 88 94.
200. Gyurian I., Nghia N.H. Foth G. et. al Photosynthesis, nitrogen fixation and enzyme activities in Chlamydomonas Azotobacter symbiosis // Biochem. Physiol. Pflanzen.- 1986.- 13 d. 181.- N 3.-S. 147 - 153.
201. Hardy R.W.F., Bums R.C., Holsten R.D.// Application of the acetylene ethylene assay for measurement of nitrogen fixation // Soil. Biol, and Biochem.- 1973.- N 5.- P. 47-81.
202. Henriksson E., Henriksson I.E., Da Silva E.G. A comparison of nitrogen fixation by algae of temperate and tropical soils // Ed. W. D.P. Stewart. Cambridge.- 1975.- P. 199.
203. Henriksson L.S., Rodgers G.A. Further Studies in the nitrogen cycle of Surtsey. 1974 1976 // Surtsey Reseach Progress.-1978.- Rep. 8.- P. 30 - 39.
204. Jakob H. Compatibilités, antagonismes et antibioses entro quelques algues du sol // Rev.Gen.Bot. 1961.- V.68.- P.5 - 72.
205. James E.K., Grawford R.M.M., Silvester W.B. Tolerance to anoxia and post-anoxia in the Gunnera-Nostoc symbiosis // 10^ International congress on Nitrogen Fixation.- Saint- Petersburg, Russia." 1995.- Post. 403.
206. Jones G.J. On the occurrence and control of toxic cyanobac-terial blooms in Australia // Sorisi Jap. J. Phycol.- 1993.- V.41.- N 4.- P. 400 401.
207. Kaya K. Chemistry and toxicology of microcystins as cyano-bacteria hepatotoxins // Sorui, Jap. J. Phyool.- 1993.- V. 41.-N 4.- P. 400.
208. Kerry Alison, Laudenbach David E. Influence of iron limitation and nitrogen source on growth and siderophore production by cyanobacteria // J. Phyool.- 1988.- 24.- P. 566 571.
209. Koranyi P., Gyurian I., Stefanovits P. et. al. Characterisation of on artificial nitrogen fixing alga - bacterium endo-oytobiosis // Symbiosis.- 1990.- V. 8.- N 2.- P. 175 - 187.
210. Kozhemyakov A.P., Tchebotar V.K., Belimov A.A. Estimation ofnitrogen fixation by associative rhizobacteria using tracer tech-thnique // 10 International congress on Nitrogen Fixation.- Saint-Petersburg, Russia,- 1995.- Post. 635.
211. Kremer K.J., Peterson H.J. field evalution of selected Rhi-zobium in on improved legume inoculât // Agron. S.- 1983.- V.75.-N 1.- P. 139 143.
212. Mallick R.N., Ral L.C. Effects of heavy metals on the biology of a N2 fixing cyanobacterium Anabaena doliolum // Toxicity Assess.- 1990.- V. 5.- N 3.- P. 207 - 219.
213. Maneesha and Koshav Trehan. Effect of Mercury, Lead and Cadmium on nitrogen fixation in Nostoc muscorum // J. Lndian Bot. Soc.- 1987.- 66.- N 3-4.- P. 305 310.
214. Milbank I.N. Associations with blue-green algae // Biol. Nitrogen Fixation. Amsterdam e.a.- 1974.- P. 238 264.
215. Nicolov N.N., Kostova K.P., Vaklinova S.G. Relationship of symbiosis between unicellulal green algae and nitrogen fixation bacterial // Endocytobiology.- V.2.- Eds H.E.A. Schenk e.a.- Berlin: Walrer de Gruyter.- 1983.- P. 623 630.
216. Nowak W., Netzsch-Lehner A. Reisolierungsversuche von KnOl-Ichenbakterien (Rhizobium sp.) aus BCden.- Zbl. Bakteriol., Para-si tenkunde, Infektionskrankh. und Hyg., Abt.2.- 1965.- V.119.- N 6.- P. 570 578.
217. Obreht L., Gajun S., Drobac A. Specific relationship between
218. N2~fixing cyanobacteria and plant seedlings co-cultivated in liqthvid culture // 10 International congress on Nitrogen Fixation.-Saint-Petersburg, Russia.- 1995.- Post.663.
219. Pankratova Ye.M., Kalinin A.A., Kovina A.L. Growth interaction between Nostoc and Rhizobium // 10 International congress on Nitrogen Fixation.- Saint-Petersburg, Russia.- 1995a.- P. 665.
220. Pankratova Ye.M., Kalinin A.A., Kovina A.L. Growth interaction between Nostoc and Rhizobium // Nitrogen Fixation: Fundamentals and Applications. Ed. I.A.Tikhonovich, Y.I.Romanov, N.A.Pro-vorov, M.E.Newton.- Kliwer Acad. Publ.- 1995b.- P.720.
221. Peters G. Blue-green algae and algal associations // BioScience.- 1978.- ¥.28.- N 9.- P. 580 585.
222. Rai A.N., Rowell P., Stewart W.D.P. Incorporation andmetabolism in the lichen Peltigera aphthosa Willd // Planta.-1981.- V.152.- P. 544 552.
223. Rao D.L., Burns R.G. Use of blue-green algae and bryophyte biomass as a source of nitrogen for oil-seed rape // Biol. Fertil. Soils.- 1990 a.- ¥.10. N 1.- P. 60 64.
224. Rao D.L.N., Burns R.G. The effekt of surfase growth of blue-green algae and bryophytes on some microbiological, biochemical and physical soil properties // Biol. Fertil. Soil.- 1990 b.- V.9. N 3.- P. 239 - 244.
225. Rao P.V.L., Bhattacharya S.D., Guptc S.D. Isolation, Culture and Toxicity of the Cyanobaoterius (Blue-Grenn Algae) Microcystis aeruginosa from a Freshwater Source in India // Bull. Environ, contain. Toxicol.- 1994.- ¥.52.- N 6.- P. 878 885.
226. Rasmussen U., Johansson 0., Bergman B. The Gunnera Nostoc thsymbiosis // 10 International cogress on Nitrogen Fixation.-Saint-Petersburg, Russia.- 1995.- Post. 406.
227. Reddy G.B., Giddens I. Nitrogen fixation by algae in fescue-grass soil crusts // Soil Sci. Sos. Amer. Proc.~ 1975.- ¥.39.-N 4.- P. 654 656.
228. Reisser W. Endosymbiotic cyanobacteria and cyanellae // Cell Interact. Berlin e.a.- 1984.- P. 91 112.
229. Rippka R., Deruelles J., Waterbury J.B., Herdman M., Stani-er R.Y. Genetic assighments strain histories and properties of pure cultures of cyanobacteria // J. Gen. Microbiol.- 1979.- Y. 111.- N 1.- P. 1 61.
230. Rippka R., Waterbury J.B., Stanier R.Y. Isolation and purification of cyanobacteria: some general principles // The proka-ryotes. A handbook on habitats, isolation and identification of bacterial.- Berlin: Springer Verl.- 1981.- V.1.- P. 212 220.
231. Rodgers G.A., Bergman B., Henriksson E., Udris M. Utilisation of blue-green algae as biofertilisers // Plant and Soil.-1979.- V.52.- P. 99 107.
232. Rodgers G.A., Henriksson E. Associations between the blue-green algae Anabaena variabilis and Nostoc muscorum and the moss Punaria hydrometrica with reference to the colonization of surt-sey.- Acta Bot. Islandioa.- 1976.- N 4.- P. 10 15.
233. Sagardoy M.A. Supervivencis do R. meliloti nativo on Suelos franco arenos // Agrochimica.- 1979.- V.23.- N 1.- P. 59 65.
234. Scherer S., Potts M. Novel water stress protein from a desiccation-tolerant cyanobacterium: purification and partial characterization // J. Biol. Chem.- 1989.- V.264.- N 21.- P. 12546 -12553.
235. Shephard K.L. Evaporation of water from the mucilage of a gelatinous algae community // Srit. Phycol. J.- 1987.- V.22.- N. 2.-P. 181 185.
236. Shi D.- J., Hall D.O. The Azolla-Anabaena association: historical perspective, symbiosis and energy metabolism // Bot. Rev.-1988.- V.54.- N 4.- P. 353 386.
237. Shubert I.E. Algae as Ecological Indicators // Academic Press, Inc., London.- 1984.- 454 p.
238. Shubert L.E., Pederson C.L. Interactions of Metals with Eco-physiological Processes of Soil Algae: a Conceptual View // Proc. IT ISME.~ 1986.- P. 332 336.
239. Sieminska J. Pozycja sinic (Cyanohpyta) w swiecie organiz-mow // Kosmos (PPL).- 1979.- V.28.- N 4.- P. 425 430.
240. Singh Y.P., Trehan K. Effekt of extracellular products of Aulosira fertilissima on the growth of rioe seedlings // Plant and Soil.- 1973.- Y. 38.- P. 457 464.
241. Skrdleta V. Lyophilization of Rhizobia // Acta microbiol. po-lon.— 1965.- V.14.- N 1.- P. 109 113.
242. Smarda J., Komarek I., HUbel H. SEM-analysis of colonies of the cyanophyte Nodularia water bloom from Baltic Sea // Arch. Hyd-robiol. Suppl.- 1986.- Y. 73.- N 3.- P. 319 330.
243. Soiller H.s Gunasekaran M. Ammonia-excreting mutant strain of cyanobacterium Anabaena variabilis supports growth of wheat // Appl. Microbiol, and Biotechnol.- 1990.- Y.33.- N 4.- P. 477 -480.
244. Stanier R.Y., van Niel O.B. The concept of bacterium // Arch. Microbiol.- 1962.- V. 42.- P. 17-35.
245. Stewart W.D.P. Physiological studies on nitrogen-fixing blue-green algae // Plant and Soil.- 1971.- Spec.vol.- P. 377 391.
246. Stewart W.D.P., Rodgers G.A. The cyanophyte-hepatic symbiosis // Nitrogen fixation and the interchange of nitrogen and carbon.- New Phytol.- 1977.- Y.78.- N 2.- P. 459 471.
247. Sunil P., Grower I.S. Nitrogen fixition and release of extracellular nitrogen by Anabaena. G. 102 // Phykos.- 1981.- Y.20.-N 1/2.- P. 99 101.
248. Schwabe G.H. Nitrogen fixing blue-green algae as pioneer plants on Surtsey 1968-1973 // Surtsey Research Progress Rep.-1974.- N 7.- P. 22 25.
249. Tarar J.L., Jamal Ahsan. Thermoduric properties of soil algae // J. Indian Soc. Sci.- 1980.- V.28.~ N 4.- P. 550 552.
250. Tchebotar V.K., Popova T.A., Vassyuk L.P., Kozhemyakov A.P.h
251. Nitrogen-fixing rhizobacteria: fungistatic mode of action // 101.ternational congress on Nitrogen Fixation.- Saint-Petersburg, Russia.- 1995.- Post. 634.
252. Terlissi Jr., Daniel E., Karlander E.P. Soil algae from a Maryland serpentine formation // Soil Biol. a. Biochem.- 1979.-V.11.- N 2.- P. 205 207.
253. Tison D.L., Lingg A.I. Dissolved organic matter utilization and oxygen uptake in algal-bacterial microcosms // Can. J. Microbiol.- 1979.- V. 25.- N 1.- P. 1315 1320.
254. Venkataraman G.S., Neelakantan S. Effect of the cellular constituents of the nitrogen-fixing blue-green algae, root growth of rice plants // J. Gen. Appl. Microbiol.- 1967.- V.13.- P. 53 61.
255. Vigstad H., Myklebust R., Endal A., Solheim B. Epiphytic nitrogen-fixing cyanobacteria in arctic vegetation // 10-th International Congress on Nitrogen Fixation: Fundamentals and Applications.- Kluwer Acad. Publ.- 1995.- P. 781.
256. Watanabe A. Practical signiticance of algae in Japan // Adv. Phyeol. Japan, Jena.- 1975.- P. 255 272.
257. Witty J.F., Keay P.J., Frogatt P.I., Dart P.S. Algal nitrogen fixation on temperate arable fields. The Broadbalk experiment // Plant a. Soil.- 1979.- V.52.- N 2.- P. 151 164.
258. Wolfe M. The effect of molybdenum upon the nitrogen metabolism of Anabaena cylindrica. I.A. Study of the molybdenum reguire-ment for nitrogen fixation and for nitrate and ammonia assimilation // Ann. Bot.- 1954.- V.18.- P. 299 308.158
259. World Catalogue of Algae // Publish. World Date Center on Microorganisms (WDC) of the World federation for Culture Collections.- RIKEN, Saitama, Japan, 1987.- 146 p.
260. Yakutkin V.I., Yassyuk L.F., Kozhemyakov A.P. Mizorin an associative nitrogen-fixing bacteria-based product to control Sclerotica in sunflower // 10th International congress on Nitrogen fixation.- Saint-Petersburg, Russia.- 1995.- Post. 630.
261. Zanina V.V. The influence of nitrogen and phosporus nutriti on souses on synthesis of phytotoxic substances in Microcystis ae ruginosa Ktitz.emend. Elenk.- Acta microbiol. Hung.- 1988.- V.35.-N 2.- P. 167.
262. Zhong Le-pu, Shi Ding -yi, Wang fa-zhu, Chi Zhi-you. Effect of temperoture, water content and light intensity on nitrogenase activity of Nostoc flagelliforme // Acta pot. Sin. 1992.- V.34.-N 3.- P. 219 - 225.
-
Ковина, Алевтина Леонидовна
-
кандидата биологических наук
-
Киров, 1999
-
ВАК 03.00.07
- Использование цианобактерий в агробиотехнологии
- Сообщества цианобактерий в биопленках и планктоне литоральной зоны озера Байкал
- Консорциумы микроорганизмов на основе почвенных азотфиксирующих цианобактерий и их агробиотехнологический потенциал
- Видовой состав и экофизиология цианобактерий азотных термальных источников Северного Забайкалья
- ЦИАНОБАКТЕРИИ КАК ВОЗМОЖНЫЕ КОМПОНЕНТЫ ДИАЗОТРОФНЫХ МИКРОБНЫХ АССОЦИАЦИЙ И ИХ ВЛИЯНИЕ НА РАСТЕНИЯ
