Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Микробиоценоз желудка при гастродуоденальном хелико-бактериозе и возможности его коррекции

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микробиоценоз желудка при гастродуоденальном хелико-бактериозе и возможности его коррекции"

АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ИНСТИТУТ МИКРОБИСЫ^Щ^

1 2 МАР 2001

На правах рукописи УДК 576.8.097.29:616.342 — 002

АРТЕМОВА ЕЛЕНА ВАЛЕРЬЕВНА

МИКРОБИОЦЕНОЗ ЖЕЛУДКА ПРИ ГАСТРОДУОДЕНАЛЬНОМ ХЕЛИКО-БАКТЕРИОЗЕ И ВОЗМОЖНОСТИ ЕГО КОРРЕКЦИИ

03.00.07—Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических паук

Ташкент — 2001

Рэботл выполнена в научно-лабораторном отделе Научного центра хирургии имени академика В. Вахидова Министерства здравоохранения Республики Узбекистан.

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук Л. Г. Баженов.

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук 3. Ф. Исмаилов. Доктор медицинских наук Н. Н. Шереметьев.

Ведущая организация:

Национальный Университет Узбекистана имени Мирзо Улугбека

на заседании Специал , ... . . :та Д 015.02.01 по защите диссертации па соискание ученой степени доктора наук при Институте микробиологии АН РУз по адресу: 700128, Ташкент—128, ул. А. Кадыри, 7 б.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института микробиологии АН РУз.

Защита состоится

2001 г. в «

» часов

Автореферат разослан

Ученый секретарь Специализированного Совета, доктор биологических наук

ХОДЖИБАЕВА С. М

1/к ).о-/

! ! / 1 , _ • IЛ- / , / / ; -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоя шре время утвердилось представление о тем, что в процрссе фигюгештического развития в организме человека сформировалась мнкроэкологическая система : 1р«ущим ей сложным дщйми<жхким равновесием меж^ фтиотаи-■кским статусом макроорганизма и микробными популянцями, его заселяющими (ЕЙ. Беляев,1988; Ф.ЮГариб и др,1992; А А.Воробьев,1997; А.В.БощаренкоЛ998; Т.Ма1яиосаЛУ9()).

Микрофлора человека, ире/ртавлякшяя одан из основных элементов данной системы. является важнейшим фактором неслгцифи-ческой резистентности организма Её защитная функция в первую очередь связана с блокированием рецепторшго аппарата клочок микроорганизма с непосредственной антимикробной активностью и с вшдрйсгвием на иммунную систему и друше занятные механизмы (В.Г.Акимкин,1997; Т.Ьуопч е1 а!Д986; Б.СогЬхЬ я а1, 1988; НВешАа^Л 989; 8Вагей>аШ91).

Изменения /римичеааио равновесия между компонентами мик-робисмуноза макроорганизма, приводящие к развитию дисбнозои, происходя-)- чаще всего под воздействием антимикробных препаратов, гормонов, исстсроидкых противовоспалительных препаратов, антацидов, иммуноделрессантов, облучения, в условиях стресса, их'куцния. инфещюнных и нешфещюнных болезней (ЭГЛогиевс-кий, 1997; Т.Ма1мюса.1990).

В связи с этим хеликобактерная инвазия, как инфекционное забшегание, вызывающее гастро;ус:де (ильные поражения, также приводит к дасбиогическим пару! пениям желу дочно-кш не чного факта (ЖКТ), усухублиющим, в свою очередь, основной патологический процесс (Т.КЛонатина и др.,1997; Т.Ьусш е1 а1., 1986; Б.СогЬасЬ е1а1.,1988).

В последние годы при лечешш гжтродуодснальных заболеваний (ГДЗ), ассоциированных с НеПеоЬайег ру!оп (НР), значительно расширилась практика применения ашкмикробньк препаршш широкого спектра действия и их комбинаций (Н.В.Сафонош и . др.,1995; В.М.Бондаренко,1995; ВГ.АкимкинД997). При этом вместе с нежелательными микроорганизмами уничтожается и нор-маиьная микрсх|мюра, со всеми вытекающими шасде шсждргвиями. Поэтому, о/цшм ш адекватных путей борьбы с хеликобактериозом

может явиться восстановление нормального микробиоценозг желудка, в маетности, с помощью эубиотиков (T.Lyons el al.,1986; S.Gorbach et al.,1988). Кроме того, введение в схем} терапии хеликобактерассоциированной * гастродуоденальш» патологии препаратов нробиотиков, содержащих молочно-кисльк бактерии, положительно отражается на показателях клеточного j гуморального иммунитета. Установлено также противоопухолевое действие Lactobacillus delbrueekii, L.casei и других лактобактерш (А.А.Шс1ггулин, 1999; А.П.ЗлаткинаЛ999; S.Barefood,1991 D.Gracham et al.. 1997).

В связи с этим актуальным и иерсиекпшп'ым является изуче ние микробиологических связей в микробиоценозе желуди больных ГДЗ и вшмэжносги коррекции дюГмтгкхких горункнш микробиоцжиа сиомпиц>ю нробшшко».

Цель работы. Установление основных компонент! микробиоцртза желу/ip, их свойсга и характера взаимдосгеия ip хеликобактсриоэе, а также возможности коррекщш выявленные нарушений.

Задачи исследования.

1.У совершенствовать методику опрнки микробного биоценоз; желудка.

2-Изучить частоту выделения и биологические свойства ос псиных компонентов микробиоценоза желудка.

3.Изучить влияние кислотности желудочного сока (ЖС) Hi микробиоценоз желудка.

4.Изучить ангмбиотикочувствительносгь представителей мик робиоценоза желудка при гастродуоденальномхсликобакгериозе

5.Изучшъ взаимоотношения леждо композитами шкробшфно за желудка инви1ро.

б.Определить возможность коррекции микробиоценоза с но мощью эубиотиков.

Научная новизна. Усовернеклшва® штоднка мйкробшшт чехкой сеянки шкробиеярюоа желудка боньных ГДЗ, коюрая обес нечивает возможность зджвапют определения ш только HP, но i грибов род Кацгда (ГРК) и jiaKroGaciepijfl (Л).

Разработаш питательная среда для культивирования и хране ния JI на основе станщртных компонентов: тиогликшевая среда j гидролизат казеина (Положительное решение Патентной ведомства на изобретение N IHDP 9900726.1 от 24.09.1999 г.).

Определена высеваемость Л н Ж С больных ГДЗ, а также частота обнаружении ассоциаций НР, ГРК и Л и ЖС больных ГДЗ.

Выявлена связь кислотности Ж С больных ГДЗсчасгогой обнаружении НР и ГРК. Установлен* зависимость кислотности ЖС от возраста больных ГДЗ.

Изуснвидшой состав ГРК и Л ЖС больных ГДЗ m основании морфолокькультуральных и фИЗШЛОГО-биОХИМИЧССКИХ признаков в сочетании скр^кгашкярафетххким метщтм цценгифика1 pi ГРК и Л

Определена чувствительность Л и ГРК к антимикробным препаратам и установлена возможность адекватной коррекции микробиоценоза желудка эубиогиками к антибиотиками.

Практическая ценность работы РнзрГхжштя методика oripc-деленин микра|)лоры желудка нозтхчяех оцрнить качественный и количественный состав мшерооргантмов, входащих в микробиоценоз жслудеа11риГДЗ.

Проставленные данные о чувствительности НР, ГРК и Л к антимикробным нрешрагам мсяут быть использованы для повышения адекватности антимикробной терапии хеликобактериоза.

Изученные антагонистические свойства эубиогиков позволяют целенаправлено коррспгровать мшробн1»1Й состав желудка и близлежащих отделов ЖКТ.

Учет полученных данных о влиянии хронобиологических факторов и кислотности ЖС на частоту обнаружения и эбсемененность грибами ЖС больных ГДЗ повышает эффективность планирования и проведения профилактических и лечебных мероприятий.

Положения, выносимые на защиту.

I.Разработанная методика микробиологической оцрнки микробиоценоза желудка больных ГДЗ доступна и эффективна.

¿.Часто та обнаружения НР и ГРК взаимосвязана с кислот-гостью ЖС, которая в свою очередь детерминирована возрастом вольных.

З.Выс(жис антагонистические свойства зубюшков, в частности Т, ио отношению к различным усиовно-гатогенньм и патогенным мкроор! анизшм, 1Ю315ШЯЮТ коррегировать \жробиофюз желудка, юрмализуя его.

Внедрение в практику. Усовершенствованная методика» 1зучения микробиоценоза желудка у больных с ГДЗ внедрена в

практику бактериологической лаборатории НЦХ им. акад. В.Вахидова МЗ РУз.

Методика выделения, идентификации и определения чувствительности ГРК к антимикробным препаратам ннедрс на на кафедре ЛОР - болезней I ТашГосМИ, методика выделения, культивирования и идентификации Helicobaeter (Campylobacter) pylori внедрена в баклаборатории СЭС Медико-санитарного объединения при МЗ РУз, изготовление и использование дисков с современными антимикробными препаратами доя определения анпйшгикараммы хелнкобиаеров, лактобактсрий и грибов внедрено к баклаборатории СЭС МСО МЗ РУз, в лаборатории Молекулярной эпидемиологии и специфической профилактики 1щ}к;к1цюнн!»кз^к;ва№1ЙНИИЭМИЗМЗРУзивРКБ N 1.

По результатам исследований составлено и утверждено МЗ РУз информационное письмо "Использование препарата Контролок при эрадикащш Helicobacter pylori у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки" (2000 г.).

Апробация работы Магериаш и основные тюжения /цкхергаищвюй реботы доложены ш Респубшжагской научно-практической конфереицш "Вахщэвские чгения - 98. Акгуальны; вопросы реконсгрукгивнои хирургии шщрю/р и желуде" (TanKCHi^l^S), на Республиканском коллоквиуме, посвященном незавиеимэсш Узбекистана "Наука Узбекистану" (Tai нкенг,1998), га Hay IV -1 ¡ракгп ii к1ской конференнщ, посвящрнной 80~;ютию ^ 'нНИИВС (Тапке irr,1999), на симпозиуме "Н2-блокаторы в гастроэнтерологии. Квамагел - фамотидин заюда Гедоон йктер" (ТапгкешЛ999). на заоедании Реа1убииканского ойцрегва врачей-лаборангов (Танкент, 2000), на IV Ингергацошьном Евро-Азиагасом 1всгроэншрш(жиче<хом Koiпрессе (ТанкешДЮО), ш П сьезф микробисскяш Узбекистана (ТанкенгДЮО), ш Рса1у0гшканской конференнщ го ви/трибош>ничным инфекциям (ТашкенгЛШ), на \еж!иборйгорной конференции НЛО НЦХ им ЕВащрга (ТашкенгДХХ)) , на шжшдоюнческсм научном семинаре НЦХ им.В£ахидова (Ташкент,2000), на Ученом совете №стшуге микробишкяш АН РУз (ТашкенгЛЮО), ш научном семинаре ТанИУВ МЗ РУз (ТапкенгДЮ), на шучном семинаре в инешгуте Генетики и экаср»1м;нгальнсй биологии растений АН РУз (ТанкенгДЮО).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 научных работ (и тл. 6 журтильных статей).

Объем и структура диссертации. Диссертация написана на 139 страницах шшшонисюготекста. СЬстоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций. Библиографический указатель включает 215 источников, из которых 137 авторов СНГ, а 78 - зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 28 рисунками.

Настоящая работа выполнена в соответствии с планом НИР Научного центра хирургии им. академика В.Вахидова МЗ РУз в рамках тем ГНТП: "Оптимизация хирургической тактики и результатов лечения при заболеваниях пищевода и желудка с применением новых технологий " ( N Гос.регистрации 01.970005026) и "Разработка методов очистки организма от неблагоприятных химических факторов среды обитания, эндотоксинов и коррекция гомеостаза" ^ Гос.регистрации 01.970005033).

Благодарность. Автор выражает глубокую благодарность доктору медицинских наук Баженову Леониде Григорьевичу за всестороннюю поддержку и научною руководство при работе над диссертацией.

Автор признательна дотректору НЦХим. академика В.Вахидова МЗ РУз профессору Акилову Х.А. за предоставленную возможность для выполнения данной работы.

Огромную благодарность автор выражает коллективу баклабо-ратории и лаборатории иммунологии научно-лабораторного отдела НЦХ имени В.Вахидова за помощь в проведении исследований.

Автор признательна заведующей лаборатории, "Генетики молочнокислых бактерий" Института микробиологии АН РУз Огай Дарье Киссновне за помощь в методическом плане при освоении методик по изучению лактобактерий.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал исследования. Для реализации поставленных задач в периоде 1994 но 1999 гг. проведено микробиологическое исследование проб ЖС от 244 больных сГДЗ (язвенная болезнь желудка и язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки) (ЯБЖ, ЯБДГП'4

находящихся на обследовании и лечении в НЦХ имакацрмика В.Ващрва МЗ РУз, а также от амбулаторных больных.

Изучены биопсии«лхкие акцепи 35 вь^ленных штаммов ГРК и 20 нггаммовЛ и их чувствительность к антимикробным препаратам.

Изучена антагонистическая активность вьщеленных Л. В качестве контроля в экспериментах ин витро использованы культуры Л. вхощщис к состав закваски "Ором" (МП "Ором" Института микробиологии АН РУз) Lactobacillus bulgaricus 176 и Lacidophilus 180, сухого лактобактерина L.plantarum 8 РАЗ.

Методы исследования. Получение желудочного секрета производили nyic.M жслуд)чпого зощодтованда. Базаньную нро/ущ1руемую кислотность (ВПК) определяли но методу Михаэлиса в модификации Ксйя (В.ВМсныников.1987). Пробы ЖС о1бирапиmnopipi нагонрк, 10-20 мл материала помещали в сухие, стерильные флаконы,-закрывши резиновой пробкой и немедленно транспортировали ]щя исследования в лабораторию, где регистрировали, готовили мазки, окрашивали но Граму и микроскопировали. ЖС засевали на различные питательные (селективные ) среды в количестве 0,004 mji (1 бактериологическая петля диаметром 3 мм ).

Для выявления HP производили носов на кровяной эрит-рит-аг-р (ЛГ.Баженов,1994). Затеянные чашки помещали в анаэ-р —таты(МИ- 752) смикроазрофильвымиусловиями,при этомсодержание кислорода не превышало5 -10 %, а углекислого газа -1-10 %. Инкубацию посевов производили при 37 "С в течении4 - 6 суток.

Дрожжещ*)бнь]е ГРК вьишюли путем посева ЖС на среду Сабу ро. Инкубировали iipi 22 "С и 37 °С. Учет ГРК производили в течении 1-2 суток.

Для накопления Л использовали модифицированную нами тюг-ликолевую среду (ТС) с добавлением гидролизата казеина (ТСГК) в количестве 30 % ( рН среды - 6.5 ) (Положительное решение Патентного ведомства РУз на изобретение N IHDP 9900726.1 от 24.09.99). Затем накопительную культуру подвергали дальнейшему субкуш>тивироваиию на агаризованной ТСГК в микроазрофшшньк ус-ловгах и на кровяном агаре (КА) в аэробных условиях .при 37 °С.

Для обнаружения других микроорганизмов Ж С засевали на ТС и на аэробный кровяной агар (АКА) в условиях анаэростата (для

наэро" ■)» и щ КА ( для аэробов). Посевы культивировали в те-снии 2-х суток при 37 °С.

Ксммпшмикрдарашвм^вьрхппю 1нсе;юкпта5ш.к штгагаш-ых средах, изучали визуально и с помощью стереоскопического шкроскона, подсчитывали их количество, микроскопировали по раму, определяли уреазную, каталазную и оксидезную активность, также ставили тест сЗ %-ным раствором КОН (ириграмвариа-ельной окраске).

Уреазную и оксидазную активность (для НР ) определяли с омощью соответствующих СИБ (систем!»] индикаторные умажные, производства Нижегородского НИИЭМ, РФ), аталазную активность (для НР и Л) - путем эмульгирования ескольких колоний, взятых с агара стеклянной папочкой, в капле 3 {)-ното раствора перекиси водорода на предметном стекле.

Определение видовой принадлежности Л, осуществляли в соот-етствии с определителем Берги (9-е изд.,1994) по морфоло-о-культуральным и фижшся(>биох11мическим признакам. Сбражмза-ие Л углеводов изучалось на среде МРС-3 с добавлением в ка-естве индикатора бромкрезолпурпура (0,002 %) (Н.С.Егоров, 989).

Вцрвую специфичпосп» ГРК отделяли с помацыо биохимичес-их тестов сбраживания упюводов (глюкозы, лилшкхзы, сахаро-:,ичж1хиы) ш жп/рж среде Ойуро (ПН.КапкинД983), а гакж стткхгической системы "Аихах>1ог" (с1>рьипц1м), вклюиюпрй 15 иохимических тестов.

Колонии аропгс анаэробов, выросшие на АКА цдептифицирова-и с помощью млхурс описанных ЛГ.Баженовым (1987). Аэробны; икроорганизмы (зш^робактсрии, стафилококки, стрептококки, аь-ерокжки,сардины, нейсерии, грамположительные палочки и дру-ие) идентифицировали в соответствии с приказом N 535 МЗ СССР т 22 апреля 1985 т.

Кроме традиционных методов для идентификации ГРК и Л ис-ользовали кристаллографический метод (Л.Г.Баженов, 1994).

Определение чувствительности микроорганизмов, входящих в хгав микробиарюза желу/цеа больных ЩЗ, к антимикробным пре-аршам осуществляли методом диффузии в атар из дисков (С.М.На-аишн, И.П.Фомина,1982).

Антагонистическую активность JI но отношению к HP, ГРК и уеюшкмигхй ei гньм микроорганизмам выявляли меттдом диффузии в агар (А.Д.Амбарцумян,1983).

Результаты исследований обрабатывали с помощью методов вариационной статистики с применением критерия Стыодснта и критерия X2 (Г.Ф.Лакин,1996).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Открытие в 1983 году Helicobacter pylori , микроаэрофиль-ного грамотрицатсльшго организма и установления его важной роли в развитии шстродуоденальных заболеваний (гастрит, язва желудка и 12-псрстной кишки, рак желудеа) позволило пересмотреть многие наши взгляды на их этиологию, патогенез, лечение и профилактику.

Однако биологические свойства этого патогена, вопросы его взаищрйсгеия с шкрооргашшм и с друшчи микртрганизтмн в составе микробиоценоза желудка остаются малоизученными. В значительной мере это связано с большой сложностью и 'трудоемкостью методов работы с микрофлорой желудка.

Вышеуказанное и определило основную цель настоящею исследования, как установление основных компонентов микробиоценоза ^''.;лудка и характера их взаимодействия нрихеликобактериозе, а также возможности коррекции выявленных нарушений.

Иследования но достижению шетавленной цели проходили в трех основных направлениях:

1.Совершенствование методов изучения микробиоценоза желудка.

2.Изучение микробиоценоза желудка при гасгродуоденальном хеликобактериозе (ГДХ) и его зависимости от кислотнос ти Ж С.

3.Изучение антагонистических свойств основных нредтгавите-лей микробиоценоза желудка при ГДХ и определение их чувствительности к антимикробным препарат ам.

Эти шправления и определили структуру диссертации, так как результаты исследований но каждому направлению вошли в соответствующие главы.

В рамках первого направления, в связи с неразработанностью адекватного методического обеспечения, была предпринята попытка усовершенствования методов изучения микробиоценоза желудка в

'ЬСПЮС.. бьСП! МСVЦК^ 1Пцгрс)1««II»I МСТО/ЦКИ ВЩЧСЛСНИЯ и цршфсса-щшЛ и ГРК. являющихся. тмимо НР, основными представителями микробиоценоза желудка.

Нами опробирован ряд сред дни пьщелсшя и культивирования Л: МРСеорбиновый агар (СА),ацетатный агар (АА). Их эффективность оценивалась сномопц.ютаких критериев, как сроки появления роста на данной шггателыюй среде, интенсивность росга, дегенеративные изменения микробных клеток в процессе накопления биомассы и по мере хранения культур Л, жизнеспособность клеток при хранешш. Установлено, что питательные среды, широко используемые для культивирования Л нестандартны, так как изготавливаются в лабораторных условиях, ввиду своей многокомнонентности дорогостоящи и трудоемки в приготовлении и не обеспечивают оптимального росга тестируемых микроорганизмов (К.К.Раевский, 1997).

В связи с этим нами разработана среда для культивирования Л на основе уже имсющрйся стандартной среды для контроля сте-рилыюсти(СКС) с добавлением стандартного комерчеекош гидро-лизата казеина, полностью удовлетворяющего питательные нагреб-ности Л - тиогликолсвая среда с гидролизатом казеина (ТСГК).

Преимущест вами данной среды перед средами, ранее используемыми для культивирования Л, являются ее стандартность, быстрота приготовления, высокий титр накопления биомассы Л и наличие буфферных свойств, позволяющих сохранять Л без морфологических и фюишогических изменений в течение месяца, что имеет важное значение в плане хранения и дальнейшего изучения свойств данных микроорганизмов.

Продолжая исследования в направлении усовершенствования методов изучения микробиоцегоза желудка мы столкнулись с проблемой цдрншфикащш до нтр микроорганизмов, составляющих мик-робш^ноз желудка, так как сложность и трудоемкость выполнения траднщонных биохимических тестов не позволяет в полном объёме проводить исследования по их идентификации.

Решением зшй проблемы явшея рсрнбстганш>й в нашей лабо-ртрм кристалла рафический метод идентификации микроорганизмов (ЛГ.БажеповД994), каюрьи"! прост. доступен и позволяет ус-таюшш. вцц мшфоорютвш без использования дотшпггсльных тестов.

Исследования, проведенные в этом направлении обеспечивают возможность достоверного анализа обсемененностиЖС не только HP, ГРК и другими микроорганизмами, но и представ иге лями нормальней микрофлоры-Л, что очень важно для оценки состояния микробиоцеюза желудка и назначения адекватного лечения (антибиотиками и эубиотиками) гастродуоденальных больных.

С помощью уаэвершнетшванной (ими методам изучения мик-робюфнозажлудеа,из ЖС больных ГДЗ выделено 20 штаммов Л и 35 пггаммов ГРК.

Из 20 штаммов Л 17 (85 %) были идентифицированны как Lactobacillus acidophilus, 2 штамма (10 %) - L.delbrueckii subsp. bulgaricus и 1 штамм (5 %) - L.casei. Что подтверждено кристаллографическим тестом. Все штаммы были авируленгны. Это послужило осшванием для дальнейшею изучения функции Л в мик-робиоценозе,в часшости их антагонистической активности по отношению к HP и условно-шгогснной флоре, не репетирующей в желудке при ГДЗ.

При идентификации 35 культур ГРК определены следующие виды: Candida globrata - 31,4 %, C.tropicalis - 28,6 %, C.albi-cans (stellatoidea) - 11,0 %, C.krusei - 11,0 %, C.albicans и C.famata но 8,6 %.

Почти все выделенные кандиды оказались виру летными, что viaoi.iiiae г на их участие в течении ГДЗ и делает целесообразным изучение чувствительности этих представителей микробиоцрноза желудка к эдтмикробным ирегиршам, чему и посвящены исследования третьего этапа нашей работы.

Исследования в рамках второго направления были посвящены изучению частоты обнаружения ршлтрлшк нредлашпелей микробиоцрноза желудка и ее взаимосвязи с кислотностью Ж С.

За период с 1994 - 1999 гг. при обследовании 244 больных ГДЗ среднегодовая частота обнаружения HP составила 55,7 %, ГРК - 52Д %, Л - 41,2 %, других микроорганизмов - 28,3 %.

Нельзя не отметать возрастающую роль ГРК в структуре микрофлоры, выделяемой при ГДЗ. Оше1иется также росл1 обсемеценности ими Ж С, которая достигает в среднем 104 КОЕ/мл ± 0,1 х 104 КОЕ/мл. Эга величина суи^сгеснно иревытшт кршический уровень, с которого кандщы становятся не безразличны для организма (103 КОЕ/мл) (Р.Н.Реброва,1989).

Существенное влияние на частогу выделения HP и ГРКокшы-васт кислотность ЖС. Оказалось, что частота выявления HP при сниженной кислотности составила - 45,2 %, при нормалыюй кислотности- 60,4 %, а при повышенной - 77,3 %. При этомразница между 1юказагелями при гониженной и ионы не иной кислотности была статистически достоверна ( Р <0,05 ).

В опкхнении ГРК картина была преяпвопешожгоя: ipi шнижен-ной кислотности raftinopiacb гоибольнш выал!аемосгь эшх микроорганизмов -592 %. При нормальной кислотности она была ниже (44,6 %) и при новы пенной кискткхпи - оказалась минтильпой г 342 %. Разница между крайними показателями была достоверна (Р <0,05).

Следовательно кислотность Ж С оказывает существенное влияние на частоту выделения HP и ГРК. Причем, наблюдаемый эффект имеет противоположную направлетюсть: частота выделения хелшсобактсров по мере повышения кислотности увеличивается, а ГРК - надеет, и наоборот', при низких значениях кислотности ГРК превалируют над HP.

Расчет' коэффициента корелляции свидетельствует, что эти Д1й процесса достаточно взаимосвязаны (гху = - 0,705; Р < 0,05).

Ашшзассощицш микроорганизмов, образующих микробиоценоз желу;|?<а при различных типах кислотности ЖС показал, что JI в монокультуре ipi повыиенной и норшлыюй кислсгшосш ЖС не обнаружены ни в одной пробе. Л прещувггаюг пониженную кислог-нехль ( 17,9 % встречаемости) и наиболее часто вступают в ассоциации с ГРК, нежели сНР.

ГРК при пониженной кислотности наиболее часто встречаются в ассоциащш с HP (21,4 %) и с Л (21,4 % ). При новыпенной кис-лопкеги в 28.6 % i р>б ГРК обнаружены в монокультуре.

Лишь в 9,6 % проб зарегистрированы ассоциации всех 3-х komi юнентов ми к робиоцс ноза.

Ишсресным факттм при юучгнии асамщаций микроорганизмов ЖС оказалось то, что HP имеет высокую частоту обнаружения в ас-соицапнисГРК (42,9 %), но как только к ним присоединяются Л, то'истогаих выделения сразу становится минимальной (9,6 %). Это miiopm'OTuu что являясь а]гтагонистами HP и симбионтами ГРК, Л учнетуют рауляпцимикро^жя^нсса желудка

На основании выисизложенного можно сделать вьшод, что ассоциации микроорганизмов, возникающие в ЖС больных ГДЗ, не слу-

чайны, а физиологически обусловлены. Изучение закономерностей возникновения аооотрир! микроорганизмов 1р1 различных уровнях кислотности ЖС помогает определить адекватный подход к лечешпо ГДЗ, в частности при назначении эубиотических препаратов.

Исследования зависимости кислотности ЖС больных ГДЗ от возраста показали следующее.

В возрастной группе 20 - 29 лет больше всею было больных с повыненной кислотностью - 42,1 %, 1ю уже в группе 40-49 лет резко возросло количество больных с пониженной кислотностью, которое и далее продолжало возрастать.

Таким образом, с увеличением возраста наблюдается тенденция к снижению ВПК у больных ГДЗ, что мы связываем с ослаблением секреторной функции эпителиоцитов желудка в результате длительного повреждающего воздействия НР.

Прежде >юм начать обсуждение антагонистической активности и чувствительности к ризличным антимикробным агентам предлави-телей микробиоценоза желудка ( 3-е направление исследований), необходимо отметить, что за последние годы при лечении ГДЗ значительно расширилась практика применения антимикробных препарата широкого спектра действия и их комбинаций (Н.В.Сафонова, 1995). При этом вместе с нежелательными микроорганизмами уничтожаете! и нормальная микри|)лора и создаются селективные условия для роста ГРК.

С этой ]рлыо нами изучена чувствительность Л к некоторым ант и мик роб н ым нре па ратам.

Оказалось, что 100 % штаммов Л чувствительны к эритромицину, метащпишну, рифа\шшрну, амоксиклаву, цсфотаксиму и нрфу-роксиму. Достаточно высокой была чувствительность пгтамшв Л к цефазолину (5,9 % устойчивых штаммов), метациклину (6,7 %), доксициклину (11,8 %). Наиболее утяршьлшшаммыЛбьши к ка-наммцшу (93,3 %),амикащшу (76,5 % ), линкомицину (73,3 % ) и бисептолу (82,4 %).

Полученные данные по »чувствительности Д обитающих в желудке больных ГДЗ, могут быть ¡юлезныпри подборе препаратов для антимикробной тернии, подавляющей возбудителя заболевания и в то же время максимально щадящей нормофлору желудка.

Определенный интерес представляют результаты изучения ан-тагшпсгической активности JI по отношению к HP »условно-! итоге иной микрофлоре, населяющей желудок на фоне ГДЗ.

Высланные lam штаммы Л оГщрог не тптько ашихеликобак-

терным эффектом, но также губительно влияют на Ps.aeruginosa и St.aureus, что немаловажно в плане создшия эффективных эубио-'1Л1ческих препаратов, которые наряду с прямым ингибированием жизнедеятельности HP, будут оказывать и опосредованный терапевтический эффект за счет коррекции дисбиоза ЖКТ и стимуляции иммушггета.

Таким образом, благодаря усовершенствованному нами методическому обеспсчениюустановлсно, что микробионенозжелудка iipn ГДЗ предртавляст собой достаточно сложную экосистему и определяется не только наличием HP, но и персисгснцисй ГРК и Л. Причем все эти компоненты физиолошчески взаимосвязаны и зависят как друг от друга, так и от окружающих условий, в частности кисшгкост ЖС. Выявленные закошмертхпи функционирования микробиоценоза желудка и результаты изучения биологических свойств, составляющих его компонент ов, позволяют производить П'^кватиую коррекция« выявленных нарушений и проводив целенаправленные профилактические мероприятия.

Выводы:

1 .Усовершенствована схема микробиологической диагностики микробиоценоза желудка, позволяющая определять обсеме ценность желудочного сока не только Helicobacter pylori, грибами рода Кандида но также илактобактериямп Разр1б<гташ эффективная питательная среда для выделения и культивирования лактобактерий.

2.Среднегодовая частота обнаружения Helicobacter pylori в желудочном «же бадьных гасгродуоденальными заботеванимми ах> тавила 55,7 %.' грибов рода Кандида - 52.1 %, лактобактерий -41,2 %. других микроорганизмов - 28,3 %. Вьцрленньс из жслудрч-Hoix) сока больных гасгродуоденальными заболеваниями лактобактерий на основании изучения их морфолого-культуральиых. фшишо-го-биохимических и кристаллографических свойств отнесены к L.aeidophilus (85 %), L.delbruekii subsp. bulgarieus ( 10 %) и L.casei ( 5 %). Изолированные из желудочного сока трибы рода Кандида были идентифицированы как: C.globrata -31,4 %, C.tro-

picalis- 28,6 %, C.albicans (stellatoidea) - 11,0 %, C.krusei -11,0 %, C.albicans и C.famata по 8,6 %.

3.Установлена зависимость частоты выделения Helicobacter pylori и грибов рода Кандида от кислотности желудочного сока больных гасгродуодетльньми заболеваниями. Частота выделения Helicobacter pylori номере повышения кислогносш увеличивается, а грибов рода Кандида - падает, и наоборот, при низких значениях кислотности грибы рода Кандида превалируют над Helicobacter pylori.

4.0прсделена чувствительность основных пре/ртавителей микробиоценоза желудка больных гасгродооддалышши заболеваниями к аттшкробнымпрлирягам. К таким ант ибиотикам как нитроксолин и интстрикспроявляли чувствительность и грибы рода Кандида и Helicobacter pylori, тогда как лактобактерии были устойчивы к ним. 100 % штаммов лактобактсрий чувствительны к эритромицину, метациюшну, линкомицину и бисентолу.

5.Вес выделенные штаммы лактобактерий обладали иротивохе-ликобактерными свойствами. Наличие в желудочном соке грибов рода Кандида стимулировало росг лактобактерий. Симбиоз грибов рода Кандща с лактобактериями усиливал нротивохеликобактерные свойства лактобактсрий.

6. В [.деленные штаммы лактобактерий наряду сантихсликобак-терньм эффектом проявляли антагонистические свойства также в отношении Ps.aeruginosa и S(.aureus, что важно в плане создания эффективных эубиотических препаратов, которые наряду спрямым ингибированием жизнедеятельности Helicobacter pylori, будут оказывать и опосредованный тсрашвтический эффект за с ют коррекции /рсГмга жслудо*шо4ситнсх1юго тракт и сгамулянщ иммунитета

Практические рекомендации

1.При изучении микробищеноза желудка гастродооденальных бальных, необходимо применять предложенные методл качественного и количественного определения Helicobacter pylori, грибов рода Кандида и лактобактерий.

2.Для окрики эффективности проводимой терапии и прогноза течения заболевания необходимо учитывать степе нь обсе ме не нности желудочного сока Helicobacter pylori, грибами рода Кандида и лактобактериями.

3.Приконсервативном лечении хеликобактериоза целесообразно использовать данные ашибиотикограммывыделенной культуры Helicobacter pylori, а в случаях ассоциации сгрибами рода Кандида -антибиотикограммы фибов рода Кандида, и иснол1.зовать гаряду с антибиотикотерапией, терапию эубиотиками, устойчивыми используемым антихеликобактерным и апгигрибковым препаратам.

4.При хирургическом лечении гастродуоденалып>]х заболеваний, ассоциированных с Helicobacter pylori и грибами рода Кандида, необходлю прош>дап> пре^)перац1х)пиук) ашимикробную ликвцрлдю 31 пх микрехршизмт с прлыо профилакпжи послеопермцюнных осложнений.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

l.Oraii Д.К., Григор1янц С.И., Баженов Л.Г., Панова 'Л.Н., Аргемош Е.В., Чарухина Л.Г. К вопросу использования микроорганизмов для лечения и профилактики заболеваний желудочно-кишечного тракта II В сб. "Вопросы совершенствования диашостики, лечшия и реабилитации больных на этапах длитслшото наблюдения",Ташкент. -1994.- С.232-234.

2.Аргемопа Е.В. Ошбснносги биологии местных ипаммов лак-тобацилл// Узбекский биологический журнал,- 1995,- N 2-3.- С.16-18.

3.Ризаева Е.В., Баженов Л.Г., Артсмова Е.В. Уреазная актишость слюны у больных с хсликобактериозом // Мед.журнал Узбскистана-1998,-N3.-C.5 8-59.

4.Баженов Л.Г.. Артема па Е.В., Ризаева Е.В. Идентификация клинических культур Кандида и их ч^всшитетьносп, к антимикробным препаратам // В со.'Новое в диагностике и лечении грибковых и нроюзойных заболеваний",Ташкент.-1998,- С32-34.

5.Баженов Л.Г., Ризаева Е.В., Артсмова Е.В., Ганиходжаев С.С. Диапюсшчсское значение грибов рода Кандида при гастродуодсналшом хеликобактсриозс //В сб."Новое в диагностике и лечении грибковых и прагозойных заСюлеванмй",Ташкент,- 199Н.- С.34-35.

6.Баженов J1.Г.. Артемога.ЕВ.,Ризаева Е.В. Хеликобактер пил ори, грибы рода Каццида, лактобактерии и их взаимоотношения при гастродуоденальнойнатологаи //В кн."Акт.вопр.рек.хирургии пищевода и желуцка",Ташкент,-1998.- С.290-291.

7.Баженов JI .Г.,Ри'ик;ва Е.В., Артсмова Е.В. Диагностическое значение некоторых показателей слюны при гастродуодснальном хо ликобактфише //В кн."Акт.вопр.хирургии пищевода и желуцка",'Ташкент.-1998.- С.2У1-292.

8.Баженов Л.Г., Артемова Е.В. Ангибиотикограмма ncpra>tx ны-дсленных в Республике Узбекистан ипаммов Helicobacter pylori // Инфекция, иммунитет и фармакология".- 1999,- N1.- CJ1.

9. А ртемоiи Е.В. Микробиоценоз желудка при гастродуоденальном хсликобактериозе и возможности cm коррекции // В сб. Узбскиетон Мустакиллити - унинг фани ва тсхнологияларини ривожлантирниш кафолати" 3-й Рсеиколлоквиум,Ташкент.- 1999,- С.151-154.

Ю.Касымов АЛ.,Баженов Л.Г.,Аргемога ЕБ.,Юхмагов Б .В. Кристаллографический мстод идентификации мжроорганизмов и перспектива его компьютеризации // В сб."Космические иследования, технолоши и конверсия - IV" Научн.-ир.конф.,Ташкент.-1999.- С.76-77.

Н.Баженов Л.Г.,Овчинников И.В.,Шафер Н.П.,Аргемова ЕБ. Место кваматела в коррекции микробиоценоза желудка при хсликобактериозе //Фуццамсшальные проблемы медицины. М-лы 2-го съезда морфологов Узб-на.Таикснт,-4-5 октября 1999,- С23-24.

12.Баженов Л.Г., Ризасва Е.В., Аргсмона Е.В. Совершенствование микробиологической диагностики хелпкобактериоза // Меджурнал Узбекистана.- 2000.- N 1-2.- С.100-101.

13.Баженов Л.Г., Таирова Л.С., Ганиходжаев С.С., Артсмощ ЕБ. Изучение вирулентности Helicobacter pylori с помощью простейших // Инфекция, иммунитет и фармакология.- 2000,- N 1-2.- С.66-67.

14. Ризасва Е.В., Баженов Л.Г., Аргемопа Е.В., Мир М.А. Чувствительность Hclicohactcr pylori к аспирину// Инфекция, иммунитет и фармакология- 2000.- N1-2.- С.75-76.

15.БажсновЛ.Г.,Артсмощ ЕБ. Место лактобактсрий в микробиоценозе желудка болглых с хеликобактериозом // М-лы конфеоса по гастроэнтеролог ни. Ташкент.- 29-31 Май2000.- С.102.

16.Бажснов Л.Г.,Гариб В.Ф.,Ризасва Е.В.,Харагьян Н.А.,Артемова Е.В. Диагностическое значение определения уреазной активное™ слюны при хсликобактериозе /ЯП междеимпозиум "Диагностика и лечение заболеваний, ассоциированных с Hclicobaetcr pylori".- Москва,-Рос.ж.гастроэнт.,гепат.,колопрокт.- 7 алр. 2000,- N 2,- С.9.

17.Артсмова Е.В.,Баженов Л.Г. Биологические свойства лак-тобактфий, выделенных из желудка бшьных с гасчроду«де}ил1Л1ым1т забшеваниями// М-лыII съезда микробиологов Узбекистана. Ташкент'.- 4-6 октябряДЮО.- С.16-17.

18.Баженов Л.Г.,Артсмога ЕБ.,'Таирова Л.С. Хронологические аспекты выделения некоторых возбудителей хирургических-инфекций // Инфскциядмунигет и фармакология- 2000,- N 3.- С.12.

. 19. Баженов ЛТ.,Мирзаев Б.Б.,Ризасва ЕБ.,Артемова Е.В. Эпидемиологические аспекты применения эндоскопов при хсликобактериозе //Инфекция,имунитст и фармакология.- 2000.- N 3.- С.12.

Е.В.ЛРТЕМОВА

ГАСТРОДУОДЕНАЛЛИ ХЕШ1КОБАКТЕРИОЗДА ОЦЩОЗОН МИКРОБИОЦЕНОЗИ ВА УН ИНГ КОРРЕКЦИЯ ИМКОНИЯТЛАРИ

ХУЛОСА

Ишшшг мадсади: Ошкрзондаги шосрооиоигнонш асосий компо-нентсирни, Хеликобохтеризда унинг хусусиятининг узаро богланиш фаолияти, шушпггдех коррекциядаш имкошспларш бузилгаилишни аник^лаш.

^тхазилган тадогсртлар натижасида ош козон дата млхробиоце-нозни микробиологик диагностихаси, гастродуоденал касаллик била н огриган беморшргщ меъда тщлсини урутлалшшши антухашда гапсон бгрди, факатпша Хелихобахтер пилоригина эшс Кандид турдаги замбуруглар, шунишдек лахтобохтсриялар тахошшсиятирилди. Эффектав купайтириш учун мослантан мучдгг, эхмш учун ажралиб шгкхан (Иххиро учун берилган N IHDP 9900726.1 24.09.99 дан Давлат патент эхспергизасини ижобкй хулосаси) тадкик килинди. Ош-Козондгги микробиоценозни иихроорганизмларни шотшх урааги Хеликобяктер лилори ва Кандид турдаги замбуругларни меъда ширасидаги кислота мивдори частотадш ажралиб чзгкханлиш аниклашщ. Меъда ширасидан ажралган гастродуоденал хасашшк билан огриган Семорлар лахтсбахтериялар ва Кгшдид турдаги замбуруглар курингунча мдентифицирланган ва антамикроб препаратларга таъсирчанлипши ашоутди. разима ажралган лахтобахтериялар штаммлари Хеликобактерга карши хрсиятларга эга, шунингдех щундай ммхроорганизмларга нисбатан антагонистих хосиятаарни хурсатган fteudomonas aeiuginosa ва Staphylococcus aureus эффехтив эубиотак препаратларни нланли ташкил этиш, Хелихобахтер пюгори тугри инги- бирлаятан ^етийлиги каторида, ошкозон ичах тракти дисбиози ва иммунитет стимуляцияси терапевтах эффект трюобида шуни хурсатди.

Диссертацион материал буйича 19 илмий иш чоп эталган (шу-лар жумласидан 6 журнал маколалари), Давлат патент эхспертизадан ихтиро учун бипа ижобий хулоса олинган. Диссертацияни асосий дгасалалари 5 илмий хонференцияларда маъруза цилинган.

E.B.ARTYOMOVA

GASTRIC MICROBIOCENOSIS IN

GASTRODUODENAL HELICOBACTERIOSIS AND POSSIBILITIES OF THE CORRECTION

SUMMARY

The purpose of the thesis: Identification of the main components of gastric microbiocenosis and search of the possibilities of the disorders correction.

Investigation has resulted in the improvement of the scheme gf microbiologic diagnosi of gastric microbiocenosis, permitting to determine a dissemination of gastric juice, not only with Helicobacter pylori (HP) and fungi from the genus Candida (FGC), but with lactobacteria (L). An efficient medium for isolation and cultivation of L has been developed (Positive decision of the State patent comission of experts for invention N IHDP 9900726.1 from 24.09.99). Average annual frequency of the detection of microorganisms forming gastric microbiocenosis and dependence of the frequency of HP and FGC isolation on acidity of gastric juice were established. Isolated from gastric juice HP and FGC were identified to species and their susceptibility to antimicrobial preparations was detected. All the isolated strains of L possesed antihelicobacterial properties and showed antagonism to such microorganisms as Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus. It is of graat importance for the development of efficient eubiotics which together with direct ingibition of HP would exeit a therapeutic effect at the expense of the correction of disbiosis of gastrointestinal tract and immunity stimulation.

19 articles on the materials of the thesis have been published and one positive decision of the State patent commission of experts for inventions was received. Main results of the thesis were reported at 5 scientific conferences.