Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Микробиологические аспекты инфекций, вызванных Haemophilus influenzae, у детей

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микробиологические аспекты инфекций, вызванных Haemophilus influenzae, у детей"

На правах рукописи

ВОРОНИНА Любовь Григорьевна

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗВАННЫХ Haemophilus influenzae, У ДЕТЕЙ

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Санкт-Петербург - 2007

□ ОЗОб ЮЭ4

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный консультант:

доктор медицинских наук профессор СБОЙЧАКОВ Виктор Борисович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор КАФТЫРЕВА Лидия Алексеевна доктор медицинских наук профессор КОРОЛЮК Александр Михайлович доктор медицинских наук профессор КОЧЕРОВЕЦ Владимир Иванович

Ведущая организация- ГОУ ДПО «Санкт-Петербургская государственная медицинская академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится 2007 года в 10 часов на заседании

диссертационного совета Д 215.002.08 при Военно-медицинской академии имени С М. Кирова (194044, Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева,

Дб)

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова

Автореферат разослан __ V/ 2007 года

УЧЕНЫЙ СЕКРЕТАРЬ ДИССЕРТАЦИОННОГО СОВЕТА доктор медицинских наук профессор ПАСТУШЕНКОВ Владимир Леонидович

Актуальность проблемы.

Инфекции, этиологическим фактором которых является Haemophilus influenzae, приобретают все более актуальный характер и относятся к числу наиболее распространенных среди детей во всех странах мира Ранее считалось, что Н influenzae (палочка Афанасьева-Пфейффера) играет роль в респираторной патологии, однако исследования последних десятилетий показали, что этот микроорганизм является причиной многих гнойно-септических заболеваний По данным ВОЗ, во всех странах мира регистрируются заболевания, вызываемые Я influenzae, как у детей, так и у взрослых (Vaccines and Biology, 2002) Рост числа инфекций, вызванных Н influenzae, сопровождается изменением спектра заболеваемости, утяжелением течения ранее известных и появлением новых клинических форм с летальным исходом.

Наибольшее значение в патологии человека имеют капсульные серологические варианты (серовары) типа «b» (Hib), вызывающие разнообразные клинические проявления, нередко приводящие к инвалидизации заболевших Инфекции, обусловленные Н influenzae, разделяют на острые, при которых этот микроорганизм является первичным возбудителем, и хронические, при которых он, по-видимому, играет вторичную роль Острые инфекции включают менингит, сепсис и гнойно-септические заболевания с локальными воспалительными проявлениями местного характера

В нашей стране истинная распространенность инфекций, вызванных Н influenzae, остается невыясненной По мнению многих авторов, именно несовершенство лабораторной диагностики Я influenzae-инфекции, приводит к снижению истинных показателей заболеваемости В отечественной литературе описаны, в основном, гнойные менингиты и эпиглотиты Противоречивые выводы содержат результаты исследования этиологии пневмоний, вызванных Нinfluenzae, у детей (Девяткина НП с соавт, 1989, Таточенко В К, 1998; Демина А А., 1998, Королева ИС, 2003, 2004, Сорокина МН с соавт, 2003, Катосова Л К с соавт, 2005, Покровский В И ,2005) Настороженность вызывает отсутствие сведений о заболеваемости и распространении других нозологических форм гнойно-септических инфекций, вызванных разными серологическими вариантами Я influenzae, у детей

Практически отсутствуют доступные тест-системы для изучения гуморального иммунитета, сероидентификации культур, не решена проблема производства питательных сред Для диагностики инфекций, вызванных разными фенотипами Н influenzae, требуются достоверные методы микробиологических исследований, разработка и внедрение

которых необходимы для полноценного мониторинга этих инфекций, лечения и профилактики

Цель исследования — разработать новые, провести сравнительную оценку существующих методов для повышения информативности микробиологических исследований и на этой основе определить частоту инвазивных, первично-локализованных инфекций, вызываемых Н influenzae, у детей.

Задачи исследования

1 Усовершенствовать способ получения типоспецифических сывороток к капсульным сероварам «а», «Ь», «с», «d», «е» и «f» для конструирования диагностических тест-систем.

2 Разработать и практически внедрить питательные среды для выделения Н influenzae, определить методические особенности контроля качества питательных сред для выделения Н influenzae, установить перечень свойств д ля подготовки тест-штамма

3. Разработать и оценить диагностическую значимость тест-систем иммунофементного анализа (ИФА) для определения антигенов серовара «Ь» в ликворе (спинномозговой жидкости) и других биосубстратах

4. Оценить возможности использования и диагностическую значимость различны методов микробиологического исследования инфекций, вызванных инвазивными Н influenzae

5 Выявить частоту инвазивных, первично-локализованных инфекций и назофарингиального носительства, вызванных различными фенотипическими вариантами Н influenzae, у детей Среднего Урала 6. Изучить распространеннность капсульных сероваров «а», «Ь», «с», «d»,«e», «f», нетипируемых штаммов, различных биоваров, их значение при первично-локализованных и инвазивных инфекциях 7 Определить резистентность штаммов, выделенных при инвазивных и первично-локализованных инфекциях, вызванных Н influenzae к антибиотикам различных классов

Основные положения, выносимые на защиту

1. Предложенные модификации приготовления питательных сред, методов их контроля, разработанная тест-система ИФА для выявления антигенов, в том числе капсульного полисахарида «Ь», обеспечивают

ускоренную диагностику инвазивных и верификацию этиологического диагноза первично- локализованных инфекций, вызванных Н influenzae

2 Фенотипы капсульных и бескапсульных штаммов, выделенных при первично-локализованных, инвазивных инфекциях и со слизистой носоглотки детей существенно отличаются.

3. Целесообразно дифференцированное использование серологической диагностики для верификации инфекций, вызванных сероваром «Ь» и нетипируемыми вариантами Н influenzae.

4 Выявленные изменения фенотипов резистентности к антибиотикам за исследуемый период не существенны, в то время как у нетипируемых штаммов и штаммов серовара «Ь», существуют различия в резистентности к различным классам антимикробных препаратов.

Научная новизна

Впервые разработаны способ и питательная среда для выделения Н influenzae со слизистой носоглотки (патент № 2186389 от 27 июля 2002 г, патент №21936000 от 27 ноября 2002 г), двухфазная среда ЭрДС - для выделения из стерильных полостей, ЭрДС-агар - для выделения из нестерильных локусов (заявка № 2006139958 от 18.10 2006г.)

Определены методические критерии оценки тест-штамма для бактериологического контроля качества питательных сред, предназначенных дня выделения Н influenzae из клинического материала

Сконструированы отечественные тест-системы ИФА для выявления антигенов Н influenzae серовара «Ь»

Определена частота инфекций и назофарингеальной колонизации, вызываемых сероварами «а», «Ь», «с», «d», «е», «f» и биоварами I—VIII H.influenzae.

Осуществлено серологическое и биологическое типирование выделенных со слизистой носоглотки штаммов Н influenzae, вызывающих инвазивные и первично-локализованные инфекции.

Определена частота инвазивных и первично-локализованных форм инфекций, вызванных различными фенотипами Н influenzae, у детей Среднего Урала

Проведено многоцентровое проспективное исследование назофарингеального носительства Н influenzae у больных и здоровых детей в детских коллективах

Определена резистентность штаммов Н influenzae, выделенных в Свердловской области, к разным классам антимикробных препаратов

Практическая значимость работы заключается в получении данных, расширяющих представление о роли Н.influenzae, не только серовара «Ь», но и других сероваров и биоваров при гнойно-септических инфекциях у детей. Полученные диагностические препараты позволяют выявить среди капсульных изолятов серовары, которые могут вызывать различные формы инфекций Разработанные способы приготовления и контроля качества питательных сред с использованием доступных ингредиентов позволяют выделять H.influenzae из клинического материала в лабораториях любого уровня. Разработанные латексные препараты для сероидентификации Н influenzae позволяют определить серовариант у капсульных штаммов. Предложенная схема исследования материала из стерильных полостей позволяет быстро и качественно выявить возбудитель Определение биовара позволяет выявить потенциально патогенные биовары среди штаммов Н influenzae

Полученные данные о резистентности Н influenzae к антибактерильным препаратам позволяют назначать рациональную этиотропную антибактериальную терапию. Практическая значимость работы подтверждена использованием её материалов в образовательных программах на теоретических, практических занятиях и семинарах профессиональной переподготовки при последипломном обучении врачей Результаты определения резистентности штаммов Н influenzae включены в российский реестр резистентности возбудителей инфекций к антимикробным препаратам

Внедрение результатов работы. По теме работы получено 2 патента на изобретения - «Транспортная среда для выделения Haemophilus influenzae из носоглоточной слизи» (патент № 21936000 от 27 11 2002 г ) и «Способ культивирования Haemophilus influenzae из носоглоточной слизи» (патент № 2186389 от 27.06.2002 г) Подана заявка на изобретение «Питательная среда для выделения Н influenzae и способ её приготовления» - №2006139958 от 18 10 2006 г. Подготовлены методические рекомендации - «Лабораторные методы выделения, идентификации Haemophilus influenzae» (Екатеринбург, 1999), «Выделение, идентификация и определение чувствительности к антибиотикам Haemophilus influenzae» (Смоленск, 2003). «Внебольничная пневмония у детей, пособие для врачей-педиатров» (Екатеринбург, 2004), «Лабораторные методы выделения, идентификации, определения чувствительности к антибиотикам Haemophilus influenzae» (Екатеринбург, 2006).

Результаты исследований внедрены в лабораториях клинической

микробиологии лечебно-профилактических учреждений Министерства здравоохранения Свердловской области, используются в учебном процессе курсов профессиональной переподготовки и тематического усовершенствования для врачей- бактериологов факультета повышения квалификации и последипломной подготовки Уральской государственной медицинской академии, в исследовательской работе лабораторного отдела Уральского НИИ дерматовенерологии и иммунопатологии, Уральского НИИ фтизиопульмонологии (Екатеринбург)

Полученные диагностические препараты применены в лаборатории менингококковой инфекции и гнойных менингитов Центрального НИИ эпидемиологии МЗ РФ, выделенные штаммы представлены для исследования по программе «Пегас I и П» для составления реестра резистентности штаммов Я influenzae к антибиотикам в России

Апробация работы

Материалы работы доложены на научно-практической конференции «Актуальные вопросы эпидемиологии, клиники, диагностики и профилактики инфекции, вызываемой Я influenzae типа «Ь» (Москва, 1998), на научно-практической конференции «Национальные дни лабораторной медицины» (Москва, 1999), на Всероссийской научно-практической конференции «Перинатальная анестезиология и интенсивная терапия матери, плода и новорожденного» (Екатеринбург, 1999), на 9 Европейском конгрессе по клинической микробиологии и инфекционным заболеваниям (Берлин, Германия, 1999), на научно-практической конференции Западно-Уральского региона «Вакцинопрофилактика в XXI веке» (Пермь, 2000), на Юбилейной научно-практической конференции «Роль лабораторной диагностики в современных медицинских технологиях» (Екатеринбург, 2000), на II международной конференции «Антибиотики и антибиотикорезистентность на пороге XXI века» (Москва, 2000), на международной научно-практической конференции «Разработка и стандартизация микробиологических питательных сред и тест-систем», посвященной 50-летию НПО «Питательные среды» (Махачкала, 2003), на V международной конференции по антимикробной химиотерапии (Москва, 2003), на IV межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы обеспечения санитарно- эпидемиологического благополучия населения» (Омск, 2003г), на III Уральской конференции «Болезни органов дыхания» (Екатеринбург, 2003г), на Юбилейной конференции, посвященной 80-летию кафедры микробиологии Военно-медицинской академии им С М

Кирова «Современная микробиология - клинической медицине и эпидемиологии» (Санкт-Петербург, 2003), на Всероссийской научно-практической конференции «Медицинская микробиология -XXI век» (Саратов, 2004), на первой Российской конференции «Актуальные проблемы менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов» (Москва, 2004), на заседаниях Свердловского отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов им И.И Мечникова (Екатеринбург, 2006) , на VIII международной конференции по антибактериальной химиотерапии (Москва, 2006), на межкафедральном совещании в Военно-медицинской академии им С.М. Кирова (Санкт-Петербург, 2007)

Публикации

По результатам исследований опубликовано 96 печатных работ, из них 16 - в журналах, одобренных ВАК

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 372 страницах машинописного текста и состоит из введения, 7 глав, заключения, выводов. Указатель литературы включает 141 источник на русском языке и 471 на иностранных языках В текст включены 22 таблицы и 62 рисунка

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Использовали следующие штаммы микроорганизмов- типовой штамм Н influenzae NCTC № 8143, штаммы Н influenzae серовара «а» № 1511375/63 IHE, серовара «Ь» № 151138 11/64 IHE, «Ь» № 151149 ГИСК, 2«Ь» 94505/81 HNCB, серовара «с» № 151140 7/63 IHE, серовара «d» № 151161 27/68, серовара «е» № 151146 9/64 ШЕ, серовара «f» 10/63 IHE № 151134, АТСС № 49247, АТСС № 49766, Нparainfluenzae № 151135 NCTC 7857, Н haemolyticus NCTC10659 № 151134, Hparahaemolyticus АТСС 10014, Е coli АТСС 11775, Spneumoniae АТСС 49619, N meningitidis АТСС 13077, полученные из музея патогенных бактерий ГИСК им Л А Тарасевича, S aureus АТСС 12598 авторские Н influenzae серовара «Ь» - № 98 и № 99

Методы исследований

Иммунизацию кроликов с целью получения типоспецифических сывороток к капсульным антигенам проводили формолвакцинами штаммов Н influenzae «а», «Ь», «с», «d», «е», «f» по модифицированной нами схеме Н И. Храмовой (Храмова Н И, 1975) Титр и специфичность капсульных сывороток определяли в агглютинационных и преципитационных тестах до и после истощения, а затем использовали при конструирования тест-системы ИФА и диагностикумов для реакции агглютинации латекса и ко-агглютинации

Для определения оптимального состава и способа приготовления питательных сред использовали основы разного состава - экстракт пекарских дрожжей, кровь кролика и эритроцитарную массу из крови человека, сыворотку крови крупного рогатого скота Определение чувствительности плотных и полужидких сред по скорости роста и биологическим свойствам культур проводили в соответствии с методическими указаниями (Андреева ЗМ с соавт, 1980, Исаева ЗА. с соавт, 1980) Исследование параметров роста культур проводили с измерением оптической плотности на этапах культивирования с использованием ФЭК - 56М Качество питательных сред оценивали, проводя сравнение показателей роста для жидкой среды - по максимальной удельной скорости, экспоненциальной и лаг-фазам, для плотной - по количеству КОЕ и морфологической полноценности культуры.

Твердофазный иммуноферментный анализ для обнаружения антигена Н influenzae «b» в биосубстратах проводили в непрямом «сэндвич»-варианте Использовали 96-луночные плоскодонные планшеты из полистирола производства фирмы «Dynatech» (Щвейцария) и фирмы «Медполимер» (Россия), лунки которых покрывали глобулиновой фракцией, выделенной из кроличьих гипериммунных сывороток против Н influenzae «b» О результатах специфичного связывания антигенов антителами, фиксированными на полистироле, судили по добавлению специфического конъюгата (антитела против Н influenzae «b», меченные пероксидазой) При определении оптимальных параметров проведения ИФА изучали влияние температурных, экспозиционных факторов, состава и величины промывочного и разводящего буферов, различных концентраций сорбируемых антител

Для выявления специфического комплекса антиген-антитело использовались пероксидазные конъюгаты на основе антител к полирибозилфосфату Н influenzae В качестве субстрат-индикаторной смеси использовали ортофенилендиамин с пероксидом водорода Учет

реакции проводили после добавления ОДМ H2SO4, оптическую плотность окрашенного продукта ферментативной реакции определяли на вертикальном фотометре Dynatech-4000 (Швейцария) при длине волны 450 нм. Конъюгаты получали на основе общеглобулиновой фракции, выделенной с помощью полиэтиленгликоля (молекулярная масса 6000, «Serva») из кроличьей сыворотки к Н influenzae «b» при помощи перйодатного окисления в отделе новых технологий НИИ ЭМ им Пастера по методу М Wilson, Р Nakone в модификации В Н Вербова (1988).

Реакция ко-агглютинации. Культуру S aureus (штамм Cowan I), выращенную в стандартных условиях, формалинизировали 0,5% раствором 2 часа, трёхкратно отмывали в фосфатно-буферном растворе pH 7,2. Из осадка готовили 40% взвесь, к 1,0 мл взвеси стафилококкового иммуносорбента добавляли 2,5 мл кроличьей сыворотки одного из сероваров Н influenzae, предварительно проверив в реакции агглютинации на отсутствие гетерологичных антител в разведении 1 25 Затем перемешивали при +4°С, отмывали забуференным физиологическим раствором дважды, центрифугируя при 1000 об/мин 10 мин Осадок разводили буфером, получая 1-2% взвесь, проверяли отсутствие спонтанной агглютинации

Реакция сопровождалась контролями: несенсибилизированный стафилококковый реагент и отдельно - испытуемый материал (культура Н influenzae) с физиологическим раствором; испытуемый материал и несенсибилизированный реагент, сенсибилизированный стафилококковый реагент и физиологический раствор Использование реакции ко-агглютинации показало оптимальным использование забуференного физиологического раствора pH 7,2 для проведения реакции в равных объёмах (0,02 мл), учет через 1 мин после легкого нагрева и определение не столько размеров агглютинатов, сколько степени просветления

Реакция латекс-агглютинации Для получения иммуноглобулиновых фракций из гипериммунных кроличьих сывороток к сероварам «а», «Ь», «с», «d», «f», «е», апробированных в качестве сенситинов, использовали 0,0156 М фосфатный буфер (pH 7,4) К сывороткам добавляли равный объём 20% полиэтиленгликоля, выдерживали при +4°С 10 мин, после центрифугирования при 5000 об/мин в течении 15-20 мин, осадок растворяли до первоначального объема сыворотки и вновь центрифугировали при указанных параметрах Надосадочную жидкость растворяли в меньшем количестве забуференного физиологического раствора, проводили диализ в мешке для диализа против забуференного физиологического раствора 24 ч на холоду, затем очищали на колонке с сефадексом G-25, G-200

Полученный препарат лиофильно высушивали и определяли белок по методу Лоури. Полученные и лиофильно высушенные препараты из сывороток к сероварам «а», «Ь», «с», «d», «f», «е» содержали в 1 мг от 389738 у белка (по Лоури) Частицы латекса сенсибилизировали по методике Sevenn (1972) Предварительно определяли специфичность полученных иммуноглобулинов в реакции агглютинации с капсульными вариантами 2мг/мл, 1мг/мл, 0,5мг/мл, 0,25мг/мл, 0,125мг/мл Н influenzae в концентрации 5x109 КОЕ/мл Реакцию проводили в термостате при 37° С 2,5 часа во влажной камере

Латексные препараты получали путем нагрузки 7% полистирольного латекса модифицированного метакриловой кислотой. Латекс получен из института синтетического каучука (Санкт-Петербург) К 3% взвеси латекса добавляли иммуноглобулины, разведенные по белку (2мг/мл, 1мг/мл, 0,5мг/мл, 0,25мг/мл, 0,125мг/мл), предварительно растворив из сухого лиофильно высушенного препарата Для определения параметров, необходимых для получения препарата, использовали фосфатный буфер (рН 7,2), глицериновый буфер (рН 8,2), бычий сывороточный альбумин, азид натрия Нагрузку латекса осуществляли при +37° С 2 ч при постоянном помешивании, остужали при комнатной температуре без доступа света, затем - в холодильнике при +4°С Отмывание производили при центрифугировании при 8000 об/мин 10 мин Надосадочную жидкость сливали, добавляли холодный глицериновый буфер (рН 8,2) с бычьим сывороточным альбумином, инозит натрия и встряхивали, отмывая затем 3 раза Полученные латексные препараты для определения антигенов «а», «Ь», «с», «d», «f», «е» испытывали с живыми и формалинизированными культурами при разных разведениях с латексными препаратами с разной степенью нагрузки (2мг/мл, 1мг/мл, 0,5мг/мл, 0,25мг/мл, 0,125мг/мл)

Контролями служили забуференный физиологический раствор и частицы латекса без белковой нагрузки Оптимальными концентрациями иммуноглобулинов при сенсибилизации латекса явилась нагрузка для иммуноглобулиновых препаратов Н influenzae• «а» - 2,0 мкг/мл, Н influenzae «Ь»- 0,5 мкг/мл, Н influenzae «с» -1 мкг/мл, Н influenzae «d» -1 мкг/мл, Н influenzae «f»-l мкг/мл, Н influenzae «е»-1 мкг/мл. Чувствительность латексных препаратов (ЛП) определяли с гретыми культурами Н influenzae «а», «Ь», «с», «d», «f», «е» в концентрации 5х109, 5x108, 5 xlO7, 5х 106, 5х105, 5х104, 5х103, 5х102 КОЕ Чувствительность при выделении Н influenzae «Ь» ПРФ составила 12,5 нг/мл, при типировании культур в реакции латекс-агглютинации составила 5=<105 КОЕ/мл

Специфичность определяли в реакции латекс-агглютинации культур разных сероваров и нетипируемых штаммов Н influenzae .

Реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) Для разработки диагностических препаратов для типирования капсульных штаммов типоспецифическими сыворотками к капсульным антигенам использовали инокуляты штаммов Н influenzae всех сероваров в концентрации: 5 109, 5-Ю8,5-Ю7, 5 106,5-Ю5, 5 104,5-Ю3, 5 102 КОЕ Из них готовили препараты на тонких стеклах из нефлюоресцирующего стекла (фирма «Ниармедик Плюс», Москва) Для удаления группоспецифических антител из каждой из исследуемых кроличьих сывороток применялся сорбент на основе ультраозвученной взвеси Н influenzae других сероваров На стекла с антигенами H.mfluenzae наносили разведённые сыворотки, инкубировали во влажной камере при +20°С 10 мин Для выявления комплексов антиген-антитело использовалась антивидовая люминесцирующая сыворотка производства НИИЭМ им Н Ф Гамалеи При микроскопии в люминесцентном микроскопе «Люмам-8» (JIOMO) оптимальным считали то разведение сыворотки, при котором наблюдалось достаточно интенсивное свечение антигена при постановке реакции с положительными образцами и не наблюдалось - с отрицательными

Материалы исследований. Обследованы материалы от 1593 больных с подозрением на менингит и 1446 - с другими гнойно-септическими инфекциями, 207 - новорожденных, 253 - с ХНЗЛ; 105 - с острой пневмонией, 399 - с инфекциями Лор-органов; 1061 человек из детских учреждений и 181-здоровых Проведено микробиологическое исследование следующих клинических биосубстратов, образцы крови -1892; СМЖ - 1835; раневое отделяемое, пунктаты из ран - 94; пунктаты из плевральной полости - 132; мокрота при острой пневмонии -104, жидкость бронхоальвеолярного лаважа - 452, мокрота при хронических заболеваниях легких - 676, заднеглоточные мазки - 1230, носоглоточные мазки - 56, с конъюнктивы - 340, из половых органов - 96, пунктаты при Лор - инфекциях - 536, сыворотка крови - 1421.

Для определения этиологии инфекций использовали посевы на кровяной агар на основе Blood agar base, сывороточный агар, желточно-солевой агар (ЖСА), «шоколадный» агар, в соответствии с действующими приказами МЗ (№ 535 от 22.04 85, № 858 от 01 12.88, № 375 от 23 12.98, МУК 4 2 1887-04), и на разработанные автором среды . Н. influenzae ЭрДС, Н influenzae ЭрДС-агар с ристомицином, двухфазную среду Hinfluenzae-ЭрДС. Идентификацию проводили при использовании следующих тест-систем - Api NH, Ш Наешо, Ш Strep., Ш G-, ГОС, IDStaph на «АТВ Expression», индикацию антигенов - в «Slidex memngite Kit 5», «Directigen

Meningitis combo Test», МФА M pneumoniae, вирусы гриппа А, В, парагриппа, аденовирусы, PC-вирус (НИИ гриппа, НИИМЭ им Пастера), антитела к М pneumoniae определяли в ИФА SeroMP IgM, SeroMP IgG, MPA Serodia Myco-2; в МФА определяли антитела к С pneumoniae Сpsittaci, С trachomatis (IgM, IgA, IgG) (Vircell S L), в ИФА SeroCP IgM, SeroMP IgG (Savyon), IgM, IgG, PCHPN, Pneumo (Vircell S L) Антитела к S pneumoniae определяли в ИФА IgG Spneumoniae, к белкам наружной мембраны и соматическим антигенам H.mfluenzae в ИФА IgG HIB, к полирибозилфосфату в ИФА IgG HIB (НИИВС им И И Мечникова), к вирусу гриппа - в РТГА (НИИ гриппа), к L pneumophila - в МФА Pneumo (Vircell S L)

У культур Н influenzae, выделенных из различных локусов, определяли биовар по выделению индола, наличию ферментов орнитиндекарбоксилазы и уреазы, серовар определяли в РА, латекс-агглютинации и РНИФ препаратами, приготовленными нами из полученных кроличьих типоспецифических капсульных сывороток к сероварам «а», «Ь», «с», «d», «f», «е» Резистентность к антибиотикам ATBNH, АТВНает на «АТВ Expression» (ЬюМепиех), дискодиффузионным методом на Haemophilus Test Medium (НТМ)-агаре и методом микроразведений, ß-лактамазы определяли в тесте с нитроцефином и в полимеразной цепной реакции (ПЦР) Контроль качества питательных сред для определения чувствительности к антибиотикам проводили штаммами Н influenzae

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием общеупотребительных методов параметрической и непараметрической статистики КОЕ рассчитывали, исходя из распределения Пуассона Для оценки частоты различий между показателями, в случаях соответствия вариабельности изучаемых показателей закону нормального распределения, применялся t-критерий Стьюдента Критический уровень достоверности нулевой статистической гипотезы (об отсутствии значимых различий) принимали равным 0,05

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Основным условием успешного бактериологического исследования является применение высокоэффективных питательных сред для Н influenzae, содержащих «X» и «V» факторы роста Сравнительное изучение показателей чувствительности разных сред, приготовленных на основе доступных ингредиентов по принципу «шоколадного» агара с

использованием крови человека, свидетельствует о низких показателях выявления Н influenza Изучение возможных вариантов питательных сред на различной основе с использованием видов крови различных животных и человека, а также термической обработке, позволяет сделать вывод о наиболее высокой эффективности питательных сред с добавлением крови кролика и термической обработки при 75-80°С, что соответствует данным других авторов (Храмова НИ, 1975) Использование этого режима для приготовления сред с кровью человека значительно снижает чувствительность среды за счёт разрушающего действия анти-У-фактора и других возможных ингибиторов крови человека При термической обработке при 100°С разрушается анти-У-фактор. При этом разрушается и большая часть V-фактора, недостаток которого не позволяет расти Н influenzae без микроорганизмов-саттелитов.

Учитывая трудности практических лабораторий в приобретении крови кролика и дефибринированной крови человека, нами разработан способ приготовления среды оптимального состава Стандартною эритроцитарную массу, полученную из крови человека, приготовленную в соответствие со стандартными технологиями, принятыми при приготовлении препаратов крови без цитрата натрия, нагревали до 80°С, затем добавляли дрожжевой экстракт и сыворотку крупного рогатого скота Сравнительная оценка питательных сред по показателю экстинции (Ext), показанная на рисунке 1, свидетельствует о высокой эффективности жидкой среды из крови кролика (среда №2) минимальное значение логарифмической фазы роста (W =0,45), при времени регенерации (G^ =0,87), максимальное значение удельной скорости роста (Мтах=0,7)

Увеличение длительности лог-фазы и минимального времени генерации свидетельствует о меньшей эффективности среды, приготовленной из эритроцитарной массы крови человека (среда № 1 -ЭрДС) по сравнению со средой из крови кролика, но значительно превосходит по эффективности среды из крови человека (на рис 1 - среда №3) Чувствительность среды «Н ги/7мея2гае-ЭрДС-агар» (Эр — эритоцитарная масса, Д - дрожжевой экстракт, С - сыворотка крупного рогатого скота) составила 10 -107 КОЕ /мл.

1,

t loo}

<V OS'

op-0,2' Oi-

О { 2 Ъ 1 5 6

Рис 1 Оптическая плотность культуры Н influenzae на различных жидких питательных средах По оси ординат - значения оптической плотности, выраженные в lg (Ext txlOO) при 540 нм, по оси абсцисс - время взятия пробы

1) среда ЭрДС, 2) среда с кроличьей кровью, 3) среда с кровью человека

По изложенному принципу готовится и «двухфазная» среда, где плотной фазой служит среда ЭрДС, приготовленная на основе питательного агара, а жидкой - жидкая питательная среда ЭрДС, приготовленная на основе питательного бульона, осветленная при центрифугировании

Использование «двухфазной» среды для посева материала позволило выделить возбудителей из стерильных локусов при менингите и сепсисе в 2,1 раза чаще, чем при использовании традиционных сред, рекомендованных приказами МЗ № 535 от 22 04 85, № 858 от 01.12 88, № 375 от 23 12 98 Применение «двухфазной» среды ЭрДС имеет следующие преимущества перед использованием первичных посевов на пластинчатые среды

• в зависимости от количества возбудителя в материале существенно ускоряется первый этап выделения культуры - в течение 3-4-6 часов,

• прозрачность плотной и жидкой фазы упрощает визуальные исследования,

• микроскопия мазка из жидкой фазы, окрашенного по Граму и Бурри-Гинсу, увеличивает информативность в изучении морфологии бактерий,

• культура, выросшая в жидкой среде, может использоваться для

реакции агглютинации при сероидентификации и определения биовара,

• осадок, полученный после центрифугирования из жидкой фазы, может быть использован для ускоренного выявления |3-лактамаз в хромогенном тесте, что способствует ранней этиотропной антибиотикотерапии;

• культура может быть использована для определения резистентности к антибиотикам методом диффузии в агар

Важным является также то, что «двухфазная» среда ЭрДС предлагаемого состава и способа приготовления, является пригодной для выделения других прихотливых возбудителей Так, с помощью ЭрДС «двухфазной» среды удалось выделить из ликвора как Н influenzae, так и N meningitidis и Spneumoniae

Полученные по оригинальной схеме типоспецифические капсульные сыворотки к полисахаридам Н influenzae «а», «Ь», «с», «d», «е», «f», в реакции агглютинации имели титр специфических агглютининов от 1.1024 до 1 25600 В развернутой реакции агглютинации все типовые сыворотки агглютинировали с гетерологичными капсульными бактериями не более чем на 1/4 титра специфических антител. С целью устранения гетерологичных антител применяли прогревание и истощение гетерологичными капсульными штаммами Н influenzae.

Чувствительность и специфичность полученных диагностических капсульных сывороток определяли в реакции агглютинации и в реакции преципитации с штаммами Н influenzae Чувствительность латексного препарата Н influenzae «Ь» определяли в агглютинации с полирибозилфосфатом (ПРФ). Чувствительность при индикации ПРФ, полученного шН influenzae «Ь» составила 12,5 нг/мл, при определении сероварианта культур в реакции агглютинации латекса составила 5x10 КОЕ/мл Чувствительность РНИФ при определении сероваров штаммов - 5x102 КОЕ/мл

При использовании диагностических препаратов в реакции агглютинации, латекс-агглютинации, РНИФ сероварировали 348 штаммов Н influenzae, выделенных из различных мест локализации, 21,8% штаммов которых имели капсулу, из них 78,8% штаммов отнесены к серовару «Ь», 1,3% - к серовару «а», 1,1% - к серовару «с», 11,0% - к серовару «d», 9,7% -к серовару «f»

Из крови при гнойном менингите, септицемии выделены Н influenzae «Ь» - 12 штаммов, из ликвора Н influenzae «Ь» - 31, при остеомиелите из крови - 1 штамм серовара «Ь», при деструктивной пневмонии из крови - 1 штамм Н influenzae «d», при септической

пневмонии из крови штамм серовара «b» -1, при фульминантном сепсисе из материала аутопсии - 4 штамма Н influenzae «b»

При первично-локализованных инфекциях выделены при гнойном синусите из материала пункции пазух - 22 нетипируемых штамма Н influenzae, из отделяемого при конъюнктивите 19 штаммов нетипируемых H.mfluenzae, из раны при воспаление орбиты глаза - 1 штамм, из мокроты при острой пневмонии - 27 нетипируемых и 1 штамм Н influenzae «b»

Из мокроты детей с хроническими заболеваниями лёгких выделено 52 штамма, из них 5 штаммов капсульных («b»-2, «d»-l, «f»-2), из материала бронхоальвеолярноного лаважа выделено 48 штаммов, из них 6 капсульных («Ь» - 2, «d» - 2, «f» - 2), при хроническом пиелонефрите из мочи 4 нетипируемых штамма, при вульвите из отделяемого со слизистой вульвы-3 нетипируемых штаммов Я influenzae

Результаты ИФА по определению Н influenzae серовара «Ь», выраженные в величинах оптической плотности (ОП), во всех случаях находились в прямо пропорциональной зависимости от концентрации изучаемых антигенов, представлены результаты определения разрешающей способности тест-системы по выявлению Н influenzae «b». Минимальная концентрация Я influenzae (нижний уровень детекции), выявляемая с помощью «сэндвич»- метода ИФА составила 7х104-105 КОЕ/мл Для определения воспроизводимости метода и стабильности реакции использовали контрольные штаммы Н influenzae «b» штамм «b» 11/64, 94505/80 и штаммы 98 «Ь» и 99 «Ь», выделенные из ликвора и крови больного Небольшие вариации оптической плотности были получены при исследовании одинаковых количеств Н influenzae «b» разных штаммов Проведенные на основании полученных данных расчеты показали, что ошибка количественного определения клеток указанных штаммов при использовании Я influenzae П/64 «Ь» в качестве стандарта не превышает 15%, те находится во вполне допустимых пределах Различия коэффициентов вариации и дисперсий оптической плотности результатов реакции по определению разных штаммов свидетельствуют о недостоверности различий (р<0,05), поэтому результаты обнаружения Я influenzae «b» при помощи диагностической тест-системы можно считать воспроизводимыми и стабильными Диагностическая тест-система «сэндвич» варианта ИФА позволяет обнаружить 10-15 нг/мл растворимого липополисахаридного антигена Я influenzae

Контроль специфичности разработанной тест - системы осуществляли двумя способами реакцией торможения и при постановке реакции с гетерологичными антигенами. Реакцию торможения проводили

на стадии взаимодействия антигенов с иммобилизованными антителами, добавляя в реакционную смесь те же антитела в конечной концентрации 0,5 мг/мл Наибольшую специфичность предложенного варианта «сэндвич-ИФА» по индикации Н influenzae определяли при исследовании бактерий различных групп, которые имеют общие антигены с Я influenzae или могут встречаться в тех биологических субстратах, которые предстоит исследовать для обнаружения антигенов Я influenzae

Для определения чувствительности и специфичности разработанной системы ИФА по выявлению антигенов Я influenzae сероварианта «Ь» провели серию опытов со штаммами микроорганизмов разных видов и родов Результаты исследований по определению специфичности тест-системы, показанные на рис 2, свидетельствуют, что другие бактерии не выявляются в максимальной концентрации 5x107 КОЕ/мл

on (

Ю 09 08 07 06 05 ОН 03 OS 01

О

Рис 2 Определение специфичности тест-системы «сэндвич»-варианта ИФА в чистых и смешанных бактериальных культурах По оси абсцисс - концентрация бактериальных клеток КОЕ/мл (х104), по оси ординат - оптическая плотность при 450 нм 1-Я influenzae «b» II/64, 2-Е coli + Н influenzae «b» И/64, 3-S pneumoniae 6A, 4-P aeruginosa I, 5-K pneumoniae, 6-Y enterocolitica, 1-N meningitidis «С»

Несмотря на определенное антигенное сходство Я influenzae с пневмококками 6-го типа, другими бактериями рода Haemophilus, конъюгат не выявлял их антигены в концентрации в 100 раз превышающий

уровень Н influenzae-ammenon При концентрации бактерий менее 2х106 КОЕ/мл разница оптической плотности в пробах, содержащих антигены «Ь» и других серовариантов (в большей степени сероварианта «с») незначительна, поэтому в концентрациях 104-105 КОЕ/мл, отличие серовара «Ь» от серовара «с» затруднено

Сравнение результатов индикации Я influenzae «b» в концентрации 5х105 с сероваром "с" в концентрации 107 КОЕ/мл и сероваром «f» в концентрации 2x106 КОЕ/мл показало (рис. 2), что разница в оптической плотности с учетом коэффициента вариации и различия дисперсий не достоверна (р < 0,05)

Несмотря на определенное антигенное сходство Я influenzae с пневмококками 6-го типа, другими бактериями рода Haemophilus, конъюгат не выявлял их антигены в концентрации в 100 раз превышающий уровень Я influenzae-ттжтоъ При концентрации бактерий менее 2x106 КОЕ/мл разница оптической плотности в пробах, содержащих антигены «Ь» и других сероваров (в большей степени серовара «с») незначительна, поэтому в концентрациях 104-105 КОЕ/мл, отличие серовара «Ь» от серовара «с» затруднено Результаты реакции по определению Я influenzae, представленные на рисунке 3, свидетельствуют о затруднении в дифференциации серовара «Ь» от других сероваров Я influenzae В то же время результаты реакции с другими видами гемофильных микроорганизмов (Я parainfluenzae, Н haemolyticus) не превышают отрицательный контроль На основании этих исследований можно считать предложенный вариант диагностической тест-системы видоспецифическим, позволяющим определить антигены Я influenzae «а», «Ь», «с», «d», «е», «f»

Таким образом, показана возможность использования разработанной диагностической тест-системы для обнаружения антигенов в чистых и смешанных культурах, а также в ликворе

Разработанный вариант тест-системы по индикации антигенов в ИФА следует считать видоспецифическим, позволяющим обнаружить антигены сероваров Я influenzae При этом чувствительность составила 1045 нг/мл по обнаружению антигена и свыше 7х104-105 КОЕ/мл при хорошей специфичности, воспроизводимости и достоверности исследований

Рис 3 Специфичность «сэндвич» варианта ИФА для определения капсульного полисахарида «Ь»в сравнении с другими серовариантами По оси абсцисс - концентрация бактерий в КОЕ/мл (хЮ4), по оси ординат - оптическая плотность при 450 нм 1 - Нinfluenzae «b», 2-Я influenzae «с», 3-Н influenzae «f», 4 - Н influenzae «е», 5 - Н influenzae «d», 6 - Н parainfluenzae, 7 - Н haemolyticus, 8 -Н parahaemolyticus

Предложенные тест-система ИФА, диагностические агглютинирующие капсульные сыворотки, питательные среды (ЭрДС) и способы их приготовления для культурального исследования ликвора и крови, позволили определить этиологический диагноз, определить серовар и биовар при первично-локализованных и инвазивных инфекциях, вызванных Н influenzae, в том числе у детей с гнойным менингитом, при септической пневмонии, фульминантном сепсисе, остеомиелите В таб 1 представлены результаты микробиологического исследования крови и ликвора при первичных гнойных менингитах, вызванных Н influenzae,проведенных различными методами в 1986-2005гг Диагноз гнойного менингита, вызванного Н influenzae, удалось установить с помощью разработанных методов (ИФА, среда ЭрДС) у 32 больных и только у 9 - с помощью и других методов Как показано в таб 1, у 5 больных микробиологический диагноз был подтвержден, при использовании рекомендуемых культуральных методов и у 4 - при использовании индикации антигена методом латекс - агглютинации с использованием коммерческих диагностикумов

Таблица1

Микробиологическая диагностика Н influenzae- менингита разными методами

Год Количество случаев выявления Н influenzae методами

Микроскопия мазка из ликвора (по Граму или метиленовым синим),пр №858 от 01 12 88„№ 37523 12 98 Бактериологическое исследование Индикация антигена Н influenzae «b» в ликворе S я количество Ц о доказанных случаев

ОО ¡-00 5 <N * О СО ,01 Ьн 8 i 5 о а оо w S М О. <3! С К S3 V» О. оо а ° К <4 Ч (N Посев** ликвора приказ №375 от 23 12 98 посев ликвора на шоколадный агар из кроличьей крови посев ликвора в 2-х фазную среду ЭрДС посев крови в 2-х фазную среду ЭрДС латекс-агглютинация иммуно-ферментный анализ

1986 0 0 - 2 - - - - 2

1987 [2] 1 - ШЗ 2 ш - 2 [6] 8

1988 0 0 - Ш1 1 [1] - 1[2] 3

1996 0 0 - - 2 - [2] 2

1997 [2] 1 - - 5[1] [1] 1[б] [7] 7

1998 0 0 - 1 1Ш [1] 1[2] [3] 3

1999 0 0 1 - 2[1] 0 [3] [3] 3

2000 0 0 1 - 2[1] - [3] [3] 3

2001 ш - 0 - 2 - [2] 2

2003 [1] - 1 - m - 2 Г11 - 3

2005 [2] - 0 - 5 [2] [5] - 5

всего [8] 2 3 [217 [5]22 [6] 4[22] ЗЦ6] 41

Примечание «-» - не исследовались,«О» - отрицательный результат,«[ ]» - выявлены и другими методами,« 1 » -выявлено только указанными методом, **шоколадный агар из человеческой крови

Бактериальные менингиты, вызванные Я influenzae, диагностированы в течение периода наблюдений неравномерно, как показано на рисунке 4, в Свердловске- Екатеринбурге Н influenzae были выявлены у 2-9% больных детей в возрасте от 1 месяца до 14 лет, поступивших в стационар с признаками первичного (внебольничного) гнойного менингита. Во всех случаях выявлялись Я. influenzae серовара «Ь», но разных биовариантов I, П, Ш.

Менингиты, вызванные Я influenzae, встречались у детей в возрасте от 3 месяцев до 5 лет, что соответствует результатам исследований гнойных менингитов в Москве (Королёва И С, 2005) На рисунке 5 показаны случаи менингита в зависимости от возраста у детей до 3 месяцев и не достигших 6 лет Я influenzae не обнаружены Необходимо отметить, что Я influenzae-мтингты у детей 5 лет, но не достигших 6 лет, обнаружены не во все годы наблюдения Наибольшее количество заболевших детей было выявлено в возрасте от 1 до 3 лет С достоверностью 99% доказано, что чаще Н influenzae-uewimm встречается у детей до 3 лет, чем у детей старше этого возраста (р < 0,001)

1986 1987 1988 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 год

D Н influenzae а N meningitidis ■ S pneumoniae в прочие

Рис. 4. Выявление случаев первичных гнойных менингитов с установленной этиологией в Свердловске-Екатеринбурге в периоды 1986-1988, 1995-2001 г г По оси абсцисс абсолютное количество случаев разной этиологии, по оси ординат - периоды времени (год).

Рис 5 Количество случаев Я ги/7иеигае-менингита у детей в зависимости от возраста По оси абсцисс - группы детей разных возрастов до 3 месяцев, от 3 месяца до 1 года, старше 1 года до 3 лет, от 3 до 5 лет включительно, от 6 до 14 лет включительно По оси ординат - абсолютное число случаев

М catarrhal^

D 2% Р aerugi-

Efaecalis Lmonocy-

togenes-1% грам (-) палочки

5%

N meningitidis 40%

S pneumo niae 14%

H influenzae 20%

Рис 6 Частота выявления возбудителей среди гнойных менингитов установленной этиологии у детей в возрасте до 5 лет включительно в Екатеринбурге в периоды 1986-1988г, 1995-2001г, в % (173 случаев с установленной этиологией)

Наибольшее количество заболевших детей было выявлено в возрасте от 1 до 3 лет Для сравнения частоты выделения всех возбудителей, обнаруженных в крови и ликворе, на рисунке 6 приведены

результаты исследования 639 случаев гнойных менингитов, этиология которых в 173 (25,2%) случаях установлена у детей в возрасте менее и равном 5 лет

У детей в возрасте до 6 лет первичные гнойные менингиты были вызваны преимущественно менингококками - в 40% случаев, Н influenzae -в 20%, в - 14% Необходимо отметить, что частота выявления пневмококка и Н influenzae в разные годы отличается, но менингиты, вызванные пневмококком, всегда встречаются достоверно реже, чем менингококковые, и в некоторые годы реже, чем Н influenzae

При исследовании ликвора у детей при внутрибольничных менингитах и инфекциях церебро-спинального шунта на этапах шунтирующего лечения гидроцефалии Н influenzae не обнаружены

Среди штаммов Н influenzae, выделенных со слизистой носоглотки, капсульные штаммы всех серовариантов, за исключением сероварианта «а», как показано на рисунке 7, составили 14% Среди всех штаммов Н influenzae, серовар «Ь» составил 5%, среди обследованных-1,6%

Рис 7 Серологические варианты капсулы среди штаммов Н influenzae (п=74), выделенных со слизистой задней стенки носоглотки у детей (в %)

Фенотипическая структура штаммов Н influenzae, выделенных от больных, здоровых первой группы здоровья, в коллективах детей разных возрастов отличается и зависит от времени года у 12% - в летнее и у 39% здоровых детей - в зимнее время, у 20-25% детей с хроническими заболеваниями - вне зависимости от времени года На слизистой носоглотки здоровых детей встречаются преимущественно нетипируемые штаммы всех биоваров, реже IV, V, IV биоваров. У здоровых первой

группы наибольшая (64%) частота выявления нетипируемых штаммов VIII биовара

Штаммы Я influenzae, выделенные при первично-локализованных и инвазивных инфекциях, имели разные биоварианты Инвазивные формы , в том числе менингит, сепсис, остеомиелит, были вызваны биоварами I, II, реже III Первично-локализованные формы инфекции, такие как средний отит и другие JIop-инфекции, конъюнктивит, хронические воспалительные заболевания легких, вызваны I, II, III биоварами, а также VII, реже VIII На рисунке 8 показана частота выявления разных биовариантов, выделенных при различной патологии

По-видимому, обнаружение на слизистой носоглотки детей капсульных штаммов серовара «b» I, II, III биоваров является потенциально опасным в связи с тем, что эти биоварианты и сероварианты чаще вызывают первично-локализовнные и инвазивные Я influenzae-инфекции

биовары

Рис 8 Частота выделения биовариантов при различных инфекциях, вызванных Н influenzae По оси абсцисс - биовары, по оси ординат - частота выявления биоварианта(1,П, III, V, VI, VII, VIII ) в % при 1) первично-локализованных инфекциях, 2)при инвазивных инфекциях

При тестировании 268 штаммов Я influenzae к антибактериальным препаратам выявлены фенотипы резистентности, отличающиеся у нетипируемых и капсульных штаммов В табл 2 показаны

фенотипы резистентности к ß-лактамным антибиотикам нетипируемых штаммов Н mfluenzae, выделенных в200-2005г г Преимущественно распространены штаммы не продуцирующие ß-лактамазу и чувствительные к ампициллину Появление небольшого количества штаммов, продуцирующих ß-лактамазу и резистентных к ампициллину (5,1%), р-лактамазанегативных, резистентных или умереннорезистентных к ампициллину (3,6%) свидетельствует о возможном распространении штаммов с разными механизмами резистентности

Таблица 2

Частота выявления фенотипов резистентности к ß-лактамам

у нетипируемых штаммов Н influenzae

Название фенотипа резистентности Количество штаммов Частота в%

1)Р-лактамазонегативные (ВЬЫАБ), чувствительные к ампициллину 178 91,3

2)Р~лактамазопродуцирующие ампициллинорезистентные (ВЬРАЛ) 10 5,1

3)Р-лактамазонегативные ампициллинорезистентные, (ВЬЫАМ) 5 2,56

4)0-л актам азонегат ивные умеренно резистентные к ампициллину (ВЬЫА1) 2 1,02

Всего 195 100

Нетипируемые штаммы, выделенные в течение 2000-2005г.г были резистентны к цефалоспоринам 1 поколения, к цефуроксиму и цефаклору -4,4%, чувствительны к ампициллину -79,2) р-лактамазы обнаружены у 5,1% Не наблюдалось увеличения количества резистентных штаммов за последние пять лет к хлорамфениколу, тетрациклину, рифампицину, к фторхинолонам Выявлено увеличение резистентных к триметоприм/сульфаметоксазолу нетипируемых штаммов (10,9%) 2,6% исследованных штаммов являются р-лактамазо-негативными, ампициллинорезистентными, 1% - р-лактамазонегативными, умеренно резистентными к ампициллину Штаммы серовара «Ь», выделенные при инвазивных формах инфекции, были резистентны к цефалоспоринам I поколения, чувствительны к другим цефалоспоринам, ампициллину, хлорамфениколу Результаты резистентности к антибактериальным препаратам показаны на рисунке 9.

К)

Рис 9 Чувствительность штаммов Н influenzae (п=289), выделенных в 2000-2006 годах, к различным классам антибактериальных препаратов В" умеренно резистентные,Q- резистентные,Щ- чувствительные

выводы

1 Усовершенствованные и разработанные микробиологические методы позволяют увеличить выявление гнойно-септических инфекций, вызываемых Я influenzae, и выявить распространение фенотипов Я influenzae у больных и здоровых детей.

2 Доказаны и успешно реализованы диагностические возможности авторских питательных сред - ЭрДС, двухфазной, транспортной, и способа выделения Я influenzae со слизистой носоглотки, что позволило на 28% увеличить выделение возбудителя при первично-локализованных инфекциях и в три раза при инвазивных ЯглДиеигае-инфекциях Доказана необходимость контроля ростовых свойств питательных сред и определены критерии, предъявляемые к тест-штамму Я influenzae Диагностическая эффективность разработанных культуральных методов позволила определить роль Я influenzae в структуре гнойных менингитов

3 Диагностические препараты, полученные из типоспецифических капсульных кроличьих сывороток «а», «Ь», «с», «d», «е», «f», применимы для серотипирования капсульных штаммов в реакциях ко-агглютинации, латекс-аглютинации и наиболее специфичны в реакции непрямой иммунофлюоресценции

4 Разработанная тест-система ИФА, являющаяся специфичной и чувствительной (10-20 нг растворимого антигена в 1 мл), позволяет выявлять капсульный полирибозилфосфат Я influenzae в ликворе в течение 3 ч и увеличить этиологическое подтверждение на 29%

5 Инвазивные Н influenzae-инфекцни - менингит, сепсис, септическая пневмония, гематогенный остеомиелит вызваны биоварами I, II, 1П сероваров «Ь», «d», первично-локализованные (отит, синусит, коъюнктивит, хронические заболевания легких) - нетипируемыми по капсуле биоварами, чаще I, II, 1П (63,5%), реже - VII, VIII (30,6%)

6 Показана диагностическая ценность обнаружения сероконверсии IgG-антител к белкам наружной мембраны бескапсульных штаммов Я influenzae у больных с хроническими заболеваниями лёгких Двух-трех-кратное увеличение уровня IgG-антител при выделении возбудителя в концентрации!О3 КОЕ/мл из жидкости бронхо-альвеолярного лаважа или в концентрацииЮ5 КОЕ/мл из мокроты может свидетельствовать об обострении инфекции При выявления IgG-антител к капсульному полирибозилфосфату «Ь» у больных гнойным менингитом в тест-системе ИФА не отмечено положительной сероконверсии, в отличии от больных пневмонией, вызванной сероваром «Ь»

7 Среди фенотипов назофарингеальных штаммов, выделенных от

здоровых (первой группы здоровья) детей, выявлены преимущественно нетипируемые, бескапсульные штаммы VIII биовара У детей, относимых к другим группам здоровья, выявлены как нетипируемые, бескапсульные штаммы I, П, III, VII, VIII биоваров, так и капсульные серовары «а», «Ь», «с», «d», «f», выделенные не более, чем у 1% обследованных Частота выявления фенотипов зависит от возраста, сезона, группы здоровья детей и составляет от 12 до 36% обследованных

8 В течение 1986-2005 гг в Екатеринбурге Н influenzae «b»-менингит встречался у 2-9% среди всех детей, переболевшим гнойным менингитом, чаще у детей до 3 лет, и у 20% детей среди больных до 5 лет. Н mfluenzae-uemsmmvi занимают второе - третье место после менингококковых. Увеличения частоты Н influenzae «Ь»-менингитов у детей за исследованный период не отмечено Среди инвазивных инфекций, вызванных Яinfluenzae «b», менингиты составляют 81,1%, септическая пневмония, фульминантный сепсис, остеомиелит - по 6,3%

9 В структуре гнойно-септических инфекций у детей первично-локализованные формы, вызванные Я influenzae, составили: при среднем отите - 7%, при воспалении околоносовых пазух - 18,1%, при коньюнктивите-5,5%, при хронических инфекциях лёгких - 8,3% При хронических инфекциях лёгких, кроме нетипируемымых штаммов, выделены серовары «d» и «Ь»

10. Фенотипы резистентности среди нетипируемых Я influenzae, вызвавших первично-локализованные, и штаммов серовара «Ь», вызвавших инвазивные инфекции, существенно отличаются

11 Нетипируемые штаммы Я influenzae, выделенные в течение 2000 - 2005 гг., были резистентны к цефалоспоринам 1 поколения, к цефуроксиму и цефаклору - 4,4%, чувствительны к ампициллину -79,2%, ß-лактамазы обнаружены у 5,1% В 2,5% среди нетипируемых Н influenzae обнаружены ß-лактамазо-негативные ампициплинорезистентные штаммы (BLNAR).

12. Штаммы Я influenzae серовара «Ь», выделенные при инвазивных формах инфекции, резистентны к цефалоспоринам I поколения, но чувствительны к другим цефалоспоринам, а также к ампициллину и хлорамфениколу.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Для повышения результативности диагностики инфекций, в этиологии которых имеет место Н influenzae, необходимо проводить исследование всех возможных биосубстратов при различных формах инфекции, в том числе материала аутопсий, с использованием двухфазной питательной среды ЭрДС при исследовании стерильных полостей, и плотной среды ЭрДС - при других локализациях гнойно-воспалительного процесса

Для контроля качества питательных сред необходимо использовать 18-часовую культуру Н influenzae, выращенную при +37°С в атмосфере С02 с типичными биохимическими с антигенными свойствами без признаков диссоциации и наличия не более 10% удлинённых клеток размером >5,0 мкм Качественной можно считать плотную питательную среду для выделения Н influenzae из клинического материала, если при посеве 0,1 мл из разведения 10-7 КОЕ обнаружен рост десятков колоний

Индикация капсульного антигена Н influenzae «b» различными методами повышает информативность исследования, но не заменяет культуральные методы выделения других (не серовара «Ь»), сероваров Н influenzae, поэтому культуральное исследование обязательно при диагностике всех случаев инфекций у детей

Использование предлагаемых питательных сред, приготовленных с использованием эритроцитарной массы из крови человека, дрожжевого экстракта, сыворотки крови крупного рогатого скота, вполне доступно для практических лабораторий

Применение двуфазной среды ЭрДС для посевов материала из стерильных полостей ускоряет выделение и идентификацию культуры и позволяет выделить из стерильных полостей в минимальных количествах не только Н influenzae, но и другие прихотливые бактерии

Определение биовара штаммов Н influenzae, являющееся легко выполнимым, позволяет выявить потенциально опасные биовары (I, II, III), чаще вызывающие инвазивные гнойно-воспалительные заболевания Сероварирование препаратами к капсульным полисахаридам позволяет выявить штаммы разных сероваров, имеющих значение в инфекционной патологии у детей

Для определения антибиотикорезистентности применимы хромогенный тест выявления ß-лактамаз и дискодиффузионный метод на НТМ-агаре и с использованием автоматических систем

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Воронина Л Г Новые методы культивирования гемофильных бактерий / Л Г Воронина, CA Журов // Тезисы докладов конференции «Разработка и использование новых методов диагностики, лечения и профилактики» - Свердловск, 1986. - С 74

2 Воронина Л.Г Серотипирование Н influenzae в реакции иммунофлуоресценции / Л Г. Воронина, С А Журов, Е С. Ворошилина // Тезисы докладов конференции «Разработка и использование новых методов диагностики лечения и профилактики» - Свердловск, 1987 - С 102.

3. Воронина Л Г К вопросу совершенствования микробиологической диагностики Н influenzae при гнойных менингитах у детей / Л Г Воронина, С А Журов, Л И Лисицина // Всесоюзная конференция «Актуальные вопросы клинической микробиологии в неинфекционной клинике», 21-22 06 1988 г, том 1 -С 61-62

4 Воронина Л Г Определение антител Н influenzae типа «Ь» в сыворотке крови у детей с гнойными менингитами иммуноферментным методом / Л Г Воронина, В Б Сбойчаков, И И Волков // Тезисы докладов Всесоюзной научной конференции посвященной 60-летию Пермского НИИ вакцин и сывороток «Актуальные проблемы прикладной иммунологии, биотехнологии и производства бактерийных препаратов» -Пермь, 1988.-С 211-213

5 Воронина Л.Г Применение иммуноферментного метода для выявления антител Н influenzae «b» / Л Г Воронина, В.Б. Сбойчаков, И И Волков // «Научно-технический прогресс в медицине» тезисы докладов II областной медицинской научно-практической конференции.-Свердловск, 1988 -С 11-12

6 Воронина Л Г Усовершенствование этиологической диагностики гемофильной инфекции / Л.Г Воронина, В Б Сбойчаков, И.И Волков, О.П Ковтун // Тезисы докладов VI Всероссийского съезда микробиологов и паразитологов - М 1991, том 1 -С 17-18.

7 Воронина Л Г Разработка иммуноферментного анализа для обнаружения антигенов Н influenzae «b» / JIГ Воронина, В Б. Сбойчаков, В Н Вербов // Сборник научных трудов

Свердловского НИИ дерматологии и венерологии «Актуальные вопросы дерматологии и венерологии». - Свердловск, 1991 - С 48-49

8 Воронина Л Г Среда обогащения для обнаружения носоглоточного носительства гемофильных бактерий / Л Г Воронина, Е С Ворошилина // Тезисы докладов 48 научной конференции «Актуальные вопросы патогенеза диагностики и лечения» - Екатеринбург, 1993 -С 86

9 Воронина Л Г Микробиологическое исследование урогенитального тракта у больных с хроническим хламидиозом / Л Г. Воронина, Л К Глазкова, Е С. Ворошилина // Тезисы докладов 48 научной конференции «Актуальные вопросы патогенеза диагностики и лечения» - Екатеринбург, 1993 -С 87

10 Воронина Л Г Условно-патогенные бактерии - причина инфекции у новорожденных детей / Л Г Воронина, М Э Саевич, ЕА Мальцева // Сборник научных трудов Областной детской клинической больницы № 1 -Екатеринбург, 1994 - С. 76

11 Кожарская Г В Госпитальная инфекция в реанимационно-анестезиологическом отделении детской больницы /Г В Кожарская, Л Г Воронина, Л А Уфимцева // Тезисы докладов итоговой научно-практической конференции «Актуальные вопросы педиатрии, анестезиологии и реанимации» Екатеринбург, 1994 - С 42

12 Воронина Л Г Микробиологические аспекты рациональной антибиотикотерапии / Л Г Воронина, С Т Кузнецова // Тезисы III Российского национального конгресса «Человек и лекарство» -Москва, 1996 - С 82

13 Воронина Л Г Изучение носительства Н influenzae с помощью среды обогащения / Л Г Воронина // Тезисы докладов годичной научной сессии «Актуальные вопросы медицины» - Екатеринбург, 1996-С 9-10

14 Воронина Л Г Я influenzae типа «Ь» и ее значение в патологии детей раннего возраста / Л Г Воронина // Уральское медицинское обозрение - Екатеринбург, 1997-№2(17) - С 35

15 Коточикова ЛД Этиология сепсиса и бактериемий у детей группы риска, находящихся в отделении реанимации / Л Д Коточикова, Л Г Воронина // Тезисы докладов научно-практической конференции «Инфекции плода околоплодной среды и новорожденного», Красноярск, 27-28 11 1997 г, 1997 - С 49

16. Боронина JIГ Внутрибольничная инфекция у недоношенных больных в условиях реанимационного отделения / Л.Г. Боронина , ИЛ. Мамаев, ФГ Мухамедшин, МЭ. Саевич // Вестник Уральской государственной медицинской академии Екатеринбург .-1997 - С 82-83

17 Боронина Л Г Особенности биологических свойств Н influenzae типа «Ь» / Л.Г Боронина // Сборник конференции РАМН «Актуальные вопросы эпидемиологии, клиники, диагностики и профилактики -инфекции, вызываемой Я influenzae типа «Ь». - Москва, 1998 - С. 12

18. Кузнецова С.Т. Оптимизация антибактериальной терапии в педиатрической практике / С Т Кузнецова, Л.Г Боронина, О А Синявская, Л А Уфимцева // Вестник Уральской Государственной медицинской академии - Выпуск 7 - Екатеринбург, 1998-С 110111.

19 Боронина Л.Г Новый метод бактериологической диагностики гемофильной инфекции / Л Г Боронина // Материалы VIII съезда педиатров России «Современные проблемы педиатрии». - М 1998 -С 145

20. Кузнецова СТ. Методологические подходы к оптимизации антимикробной терапии / С Т Кузнецова, Л.Г Боронина, О А Синявская, Л.А Уфимцева // Материалы VIII съезда педиатров России «Современные проблемы педиатрии» -М 1998 -С. 373.

21 Вогошпа L.G The ethiology of the primary bacterial meningitis m children of Ekaterinburg / LG. Вогопша, P.V Lavrenova M.P Kukushkina, S V Penzhenina // Abstract book of 8th International Congress on Infectious Diseases. - Boston, Massachusetts. - 1998. -P.179.

22 Боронина Л.Г Проблемы клинической микробиологии в педиатрии / Л Г Воронина, С.В Цвиренко // Вестник Уральской Государственной медицинской академии - Выпуск 7. -Екатеринбург, 1998 - С 43-47

23. Боронина Л Г. Сравнительная оценка результатов диагностики бактериемий традиционным и современным ускоренным методами / Л.Г Боронина, И Л. Мамаев, М П Кукушкина // Актуальные вопросы педиатрии и хирургии детского возраста, анестезиологии и реанимации - Екатеринбург, 1998 - С 37

24 Дёмина А А. Эпидемиологические особенности менингитов, вызванных Я influenzae типа «Ь» /, А А. Демина, Л В. Спирихина, Г.В Крючкова, М Н Сорокина, Л Г Воронина, М О Волкова, Т.А.

Гордиенко, Т.М Веселова // Эпидемиология и инфекционные болезни - М • 1998 №4 - С 36-40

25 Воронина Л.Г. Гемофильные бактерии и их антибиотикочувствительность при патологии бронхолегочной системы у детей / Л Г Воронина, М.П Кукушкина, М Э Саевич, С С Устюгова, И Л Мамаев // Сборник трудов научно-практической конференции «Актуальные вопросы педиатрии и хирургии детского возраста, анестезиологии и реанимации». -Екатеринбург, 1998 -С 46-47

26 Громада Н Е Перинатальные инфекции. клинико-лабораторная характеристика, лечение, профилактика /НЕ Громада, Л Г Воронина // Методические рекомендации -Екатеринбург, 1998 - 89 с.

27 Воронина Л Г Антибиотикорезистентность бактерий, вызывающих инфекции новорожденных в реанимационном отделении / Л Г Воронина, М П Кукушкина, И Л Мамаев, Ф Г Мухамедшин, Л А Уфимцева, С В Цвиренко // Тезисы докладов научно-практической конференции МУ «Детские инфекционные больницы» «Интенсивная терапия в педиатрии» - Екатеринбург, 1999 - С 7

28 Воронина Л Г Этиология бактериальных инфекций детей, находящихся в отделении реанимации / Л Г. Воронина, МП Кукушкина, И Л Мамаев, Ф Г Мухамедшин, Л.А Уфимцева, С В Цвиренко // Всероссийская научно-практическая конференция «Перинатальная анестезиология и интенсивная терапия матери, плода и новорожденного» - Екатеринбург, 21.10 1999 - С 290294

29 Boronina L G Susceptibility of Haemophilus influenzae isolated from respiratory tract /LG Boromna, M P Kukushkma, M E Saevich, S S. Ustugova // Abstract of 94 European congress of Chnical Micobiology and Infectious Diseas - Berlin, Germany- 2124 03 1999 -P 167-168

30 Воронина J1Г Лабораторные методы обнаружения и идентификации Haemophilus influenzae / Л Г Воронина // Методические рекомендации - Екатеринбург УГМА,1999 -17 с

31 Воронина Л Г Микробиологический мониторинг за бактериальными менингитами у детей / Л Г. Воронина, ЛД Коточикова, И Л Мамаев, М П Кукушкина, Ф Г Мухамедшин // Клиническая лабораторная диагностика - 1999 -№11 -С 17-18

32 Воронина JIГ Этиологическая диагностика бактериальных инфекций мочевыделительной системы / Л Г Воронина // Вестник Областной клинической больницы - Выпуск№4 Екатеринбург, 1999 - С 28-30

33 Воронина Л.Г Клиническая микробиология - опора клинициста / Л Г Воронина, МП Кукушкина // Материалы научно-практической конференции «Роль лабораторной диагностики в современных медицинских технологиях», Екатеринбург, 21-22 05 2000 г - С 85-91

34 Воронина Л Г Чувствительность к антибиотикам штаммов Haemophilus influenzae, выделенных у детей при инвазивных инфекциях / Л Г Воронина, М.П Кукушкина //Тезисы международной конференции «Антибиотики и антибиотикорезистентность на пороге XXI века» Клиническая микробиология и антибактериальная химиотерапия - 2000, том 2 ,прил 1 - С 11

35 Воронина Л Г Проблемы диагностики и профилактики гемофильной инфекции в России / Л Г. Воронина // Материалы научно-практической конференции Западно-Уральского региона «ВакцинопрофилактикавЮС1 веке» -Пермь,2000 -С.68-71

36 Воронина Л Г Этиологическая диагностика первичных бактериальных менингитов у детей / Л Г. Воронина, М П Кукушкина, Н.В Мурунова, TP Огневская, СМ. Пинженина // Клиническая лабораторная диагностика - 2000. - №9 - С 43.

37 Воронина Л Г Микробный пейзаж у детей с инфекцией мочевых путей / Л Г. Воронина, Н В Котрехова // Актуальные проблемы нефрологии инфекции мочевой системы у детей Материалы Российской научно-практической конференции 16-18 октября2001г-Оренбург,-2001 -С 121-122

38 Воронина Л Г Микробиологическая диагностика хронических бронхолегочных заболеваний у детей / Л.Г Воронина, МП Кукушкина, Е Л Фоминых, И Ю Артемкина // Актуальные вопросы педиатрии и хирургии детского возраста, анестезиологии и реанимации - Екатеринбург, 2002 -С 108-111.

39 Воронина Л Г Способ культивирования Haemophilus influenzae из носоглоточной слизи / Л Г Воронина, Л И Павлова // Патент на изобретение №2186389 от 27.07 2002 г - Москва - 2 С

40 Воронина Л Г Транспортная среда для выделения Haemophilus influenzae из носоглоточной слизи / Л Г Воронина, Л И Павлова // Патент на изобретение №21936000 от 27 11.2002 г, Москва - 3 с

41 Акользин В.В Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции / В В Акользин, Л Г. Воронина // Медицинская микробиология / Учебное пособие под ред В Б Сбойчакова, издание второе - СПб, ЭЛБИ, 2002 - С 142-146

42 Богданович ТМ Выделение, идентификация и определение чувствительности к антибиотикам Haemophilus influenzae /Т.М Богданович ,ОУ Стецюк, О И. Кречикова, Л Г Воронина, Л.К Катосова, М Е Фаустова, Л С Страчунский // Клиническая микробиология и антибактериальная химиотерапия - 2000 - Том 2,-№2 -С 34-62

43 Богданович ТМ Выделение, идентификация и определение чувствительности к антибиотикам Haemophilus influenzae /, ТМ Богданович, О У Стецюк, О И. Кречикова, Л Г Воронина, Л К Катосова, М Е Фаустова, Л С Страчунский // Современные методы клинический микробиологии - Выпуск 1 - Смоленск , 2003 -С 34-63

44 Воронина Л Г Гемофильные менингиты в структуре гнойных менингитов у детей Среднего Урала / Л Г Воронина, Н В Мурунова, А И Груздев, С.М Пинженина // Материалы VI Российского съезда врачей инфекционистов, СПб, 29-31 10 2003 г. - С 463.

45 Воронина Л Г Возбудители хронических инфекций бронхо-легочной системы у детей в Екатеринбурге и Свердловской области и их антибиотико-резистентность / Л Г Воронина, KB Крутова, СМ Блинова // Материалы VI Российского съезда врачей инфекционистов, СПб., 29-31 10.2003 г - С 50.

46 Воронина Л Г Получение и использование компонентов питательной среды для Haemophilus influenzae / Л Г Воронина // Материалы международной научно-практической конференции ,посвященной 50-летию НПО «Питательные среды» МЗ РФ «Разработка и стандартизация микробиологических питательных сред и тест-систем», Махачкала 15-17 12 2003 г. - С 69-70

47 Воронина Л Г Чувствительность к антибиотикам возбудителей хронических инфекций нижних дыхательных путей, выделенных при бронхоскопии / Л Г Воронина, KB Крутова, С М Блинова, Е Е Вол // «Клиническая микробиология и антибактериальная химиотерапия». - М - 2003, том 5 , прил 1 - С 13

48 Воронина Л Г Современные технологии в этиологической диагностике бактериальных менингитов / Л.Г Воронина //

Материалы IV межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения», Омск,13-14 12 2003 г, том 1 - С 203-207.

49 Воронина JIГ Современные методы бактериологической диагностики больных с бронхолегочной патологией / Л Г. Воронина // Сборник трудов научно-практической конференции, посвященный 75-летию кафедры инфекционных болезней БГМУ «Актуальные вопросы инфекционных болезней» - Минск, 2003 г -С 7-8

50 Воронина Л Г Chryzeobacterium (Flavodacterium) клиническое значение, идентификация, чувствительность к антибиотикам / JIГ Воронина, К.В. Крутова, С М Блинова // Клиническая микробиология и антибактериальная -2003 -№3 -С 243-251

51 Воронина Л Г Об этиологической диагностике гнойных менингитов / Л Г Воронина, С М Пинженина // Сборник трудов научно-практической конференции, посвященный 75-летию кафедры инфекционных болезней БГМУ «Актуальные вопросы инфекционных болезней» - Минск, 2003 - С 9-10

52 Воронина Л Г Бактериологический метод диагностики хронических бронхолегочных заболеваний у детей / Л Г Воронина, М П Кукушкина, И Ю Артемкина // Материалы VIII конгресса педиатров России «Современные проблемы профилактической педиатрии»- Москва, 2003 - С 44 -45.

53 Чередниченко А М Внебольничная пневмония у детей / А М Чередниченко , С В Цвиренко, Л Г Воронина, С Ю Захарова, В Р Липина, И.П Шуляк, Я Я Вутирас // Пособие для врачей педиатров - Екатеринбург, 2004 - 42 С.

54 Воронина Л Г Носоглоточное носительство Haemophilus influenzae у детей в Екатеринбурге и области / Л Г Воронина, Е.А Алексеева, Л В Шевелёва, М П Кукушкина // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Медицинская микробиология - XXI век» - Саратов, 28-30 09 2004 г - С 16-17

55 Воронина Л Г Этиология внеболыгачных пневмоний у детей в г Качканар Свердловской области в 2001 г / Л Г Воронина, М П Кукушкина, С М. Блинова, Т М Мотус // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Медицинская микробиология - XXI век» - Саратов, 28-30 09 2004 г - С 39-41

56 Воронина Л Г Современные методы в этиологической диагностике гемофильной инфекции / Л Г Воронина, С В

Цвиренко // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Медицинская микробиология - XXI век» - Саратов, 28-30 09 2004 г - С. 41-42

57. Вогошпа L.G Childhood Haemophilus influenzae type b meningitis m Ural / L.G Boromna, S V. Pengenina, N V. Murunova, AI Gruzdev // 14th Europen Congress of Clinical Microbiology and infectious Diseases - Prague - 1-4 05 2004 - P. 575

58 Воронина JIГ Антибиотикорезистенгность возбудителей хронических бронхо-деструктивных инфекций у детей к лактамам и цефалоспоринам / Л Г Воронина, М П. Кукушкина, С М Блинова // Материалы XI Всероссийского конгресса «Человек и лекарство» - Москва, апрель 2004 - С 426

59 Воронина Л Г Микробиологические аспекты нозокомиальных инфекций в отделениях раннего возраста в детской многопрофильной больнице / Л Г. Воронина, С Ю Устюгова, Л А Уфимцева, С М Блинова И Сборник научных статей «Актуальные проблемы профилактики нозокомиальных инфекций в учреждениях родовспоможения и детства» - Екатеринбург. - 2004 -С 11-17.

60 Вогошпа L.G Aetiology of community-acguired pneumonia m children / L G Boromna // Abstracts of the 6 th Europen Congres of Chemotherapy and Infectioun -Pans, France -1-4 12 2004 - P. 81

61 Воронина Л Г Микробиологические аспекты нозокомиальных инфекций у детей в реанимационном отделении /Л Г Воронина, С.С Устюгова, Л А Уфимцева, С.М Блинова //Актуальные проблемы профилактики нозокомиальных инфекций в учреждениях родовспоможения и детства» // Материалы 1 Региональной научно-практической конференции 18 ноября 2003 г, Екатеринбург - 2004,- С 11-17

62 Одегова Т Ф Поиск противомикробных лекарственных средств среди продуктов органического синтеза / ТФ. Одегова, Л Г Воронина, М В Томилов, С С Швецова, В.В Новикова, Е В. Буканова // Сборник трудов «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции - Выпуск 60 -Пятигорск, 2005 - С 400-401.

63 Воронина Л Г О роли резистентных бактерий в обострении бронхолёгочных заболеваний у детей с обструктивным синдромом /Л.Г Воронина//АСТМА -2004 - том 5 -№1 -С 113

64. Вогошпа L G Central nervous system bacterial infection aetiology / L G Boromna // Abstract of 23 rd annual meeting of the European

Society for Peadiatnc Infectious Diseases-Valencia, Spain- 18-20.05.2005.-P. 116

65. Кукушкина М.П. Изучение назофарингеального носительства Haemophilus influenzae у детей Среднего Урала / М.П Кукушкина, Л.Г Воронина // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2005 - Т.7 -№2 - прил 1. - С. 39

66 Блинова С М Антибиотикорезистентность штаммов Haemophilus influenzae, выделенных от детей с хроническими воспалительными заболеваниями бронхов и лёгких / С.М Блинова, Л.Г. Воронина // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия - 2005. - Т.7 -№2 - прил. 1.- С 15

67. Boromna L.G. Resistence of bacteria isolated from children with chronic bronchopulmonery diseases / L.G. Boromna // Abstract of 2 nd the International «Resistant gram-positive infections». - Berlm, Germany. - 10-12 12.2004 -P. 208.

68. Воронина Л Г. Диагностические критерии исследования спинномозговой жидкости и этиология бактериальных осложнений этапного шунтирующего лечения гидроцефалии у детей / Л Г. Воронина, В Б. Чудаков, Т А Шумихина, Т И Лахно // Уральский медицинский журнал.- 2005. - №6 (16). - С. 26-29

69 Воронина Л.Г Этиологическая диагностика гнойных бактериальных менингитов на Среднем Урале у детей / Л Г Воронина // Эпидемиология и инфекционные болезни.-2005 - №3 -С 18-23.

70. Boronina L.G Microbiology of meningitis m hospitalised patients of Ural region, Russia: 7-year surveillance / L G Boromna // abstract book of the 15й1 Europen Congress of Clinical Microbiology and infectious Diseases. - Copenhagen. - 2-5.04.2005 - P. 1676.

71. Боронина Л Г. Состояние микрофлоры зева и носа у детей с острым лимфобластным лейкозом / Л.Г. Воронина, С М. Блинова, Л Г. Фечина // Сборник научных трудов «Специализированная помощь детям Екатеринбурга и области» - Екатеринбург, 2005 -С. 118-120.

72 Boronina L.G New original compounds as perspective remedies of infections chemotherapy / L G Boronina, M.V. Tomilov, T.F. Odegova // Материалы международной научно-практической конференции «Фармация и здоровье» - Пермь, 2005 - С. 275.

73. Боронина Л Г Гнойно-септические и раневые инфекции Гемофильная палочка / Л Г. Боронина // Руководство по военной

микробиологии / Под ред В Б. Сбойчакова, К.К Раевского, В.М. Добрынина - М. Военное издательство, 2005.- С 106-107.

74 Воронина Л Г. Этиология бактериальных менингитов в Екатеринбурге и области / Л Г. Воронина // Сборник научных трудов «Специализированная помощь детям г. Екатеринбурга и области». - Екатеринбург, 2005 - С. 116-118

75 Одегова Н.М Новые оригинальные соединения как перспективные средства химиотерапии инфекций / Н М. Одегова, Л.Г.Боронина, Т.Ф. Игидов, В.В. Новикова, MB Томилов // Тезисы докладов «2-го Всероссийского съезда фармацевтических работников», Сочи «Дагомыс», 4-8.06.2005 г - С 117

76 Одегова Н М. Новые оригинальные соединения в химиотерапии грамотрицательных инфекций / Т Ф Одегова, Л Г Воронина, MB. Томилов, Б Я Сыропятов, В В Новикова // «Современные проблемы фармакологии и фармации» материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Новосибирск,

2005.-С 197-198

77 Воронина Л.Г Антибиотикорезистентность пневмотропных бактерий, обнаруженных при бронхоскопии у детей с воспалительными заболеваниями бронхов и лёгких нетуберкулёзной этиологии / Л.Г Воронина, Т.Ф. Одегова, В В Новикова // Материалы международной научно-практической конференции «Фармация и здоровье», Пермь, 2005. - С 166

78 Воронина Л Г Эпидемиологические особенности штаммов Н influenzae «Ь», вызвавших гнойный менингит у детей в Екатеринбурге / Л Г. Воронина, СВ. Пинженина // Вестник Уральской Государственной медицинской академии.-Екатеринбург. - Выпуск 6. - 2006.- С 50-53.

79. Воронина Л Г Инфекция орбиты глаза, вызванная Я Influenzae / Л Г. Воронина //Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия -2006.-том 1,прил 1 -С 12.

80 Боронина Л Г. Антибиотикорезистентность штаммов Я influenzae, выделенных от детей с хроническими воспалительными заболеваниями бронхов и легких / Л Г. Боронина, С.М Блинова // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия -

2006.-том2,№3 -С 55

81 Боронина Л Г Характеристика возбудителей нейроинфекций у детей Свердловской области / Л Г Боронина // Уральский медицинский журнал.-2006 -№1(20)-С 12-19.

82. Воронина JI Г. Этиология сепсиса и бактериальных менингитов у детей в отделении реанимации и интенсивной терапии / Л.Г. Воронина, М.П. Кукушкина, С.С Устюгова // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. -2006. - Т 2, №3. - С. 12-14

83 Воронина Л Г Микробиологический мониторинг СМЖ при этапном шунтирующем лечении постгеморрагической гидроцефалии / Л Г Воронина, В Б Чудаков, Т А Шумихина // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия -2006 -Т2, №3.-С 17

84. Воронина Л.Г. Haemophilus influenzae в патологии беременных и новорожденных / Л Г. Воронина, Л Я Козлова, Н.В. Мурунова // Уральский медицинский журнал -2006. - №2 -С 31-34.

85. Воронина Л Г Инфекции, вызванные Н influenzae, у детей Екатеринбурга и Свердловской области / Л Г Воронина, ЛЯ. Козлова, Г Д Рухтаева // «Актуальные проблемы эпидемиологии, профилактики инфекционных болезней» тезисы доклада Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, Самара, 23-26.05.2006 - С. 15.

86 Воронина Л.Г Я influenzae «b» - менингиты в структуре бактериальных менингитов у детей Среднего Урала / Л Г Воронина, Н В Мурунова, А.И. Груздев // «Актуальные проблемы эпидемиологии, профилактики инфекционных болезней» тезисы доклада Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, Самара, 23-26 05 2006 - С 17

87 Воронина Л.Г. Популяционный иммунитет к Haemophilus influenzae у детей Свердловской области /Л.Г. Воронина //Журнал иммунологов Урала (материалы 5-й конференции иммунологов Урала, Оренбург, 30 10-01 11 2006 ) - 2006. -№1.(5) - С 42-43

88. Цвиренко С В Лабораторная диагностика в практике врача-педиатра и терапевта / С.В Цвиренко, В В Базарный Л Г Воронина II Подростковая медицина / Руководство для врачей под ред. А.М Чередниченко, член-корр. РАМН АП Ястребова. -Екатеринбург, УГМА, 2006 - С 730-749

89 Воронина Л Г Характеристика специфического иммунитета к Haemophilus influenzae и уровня назофарингеального носительство у детей / Л Г Воронина // Уральский медицинский журнал. - 2006 - №5 С 27-33.

90 Воронина Л Г Молекулярно-генетические и фенотипические особенности штаммов Н influenzae,вызвавших менингит / Л Г

Воронина, А Е Платонов, К О. Миронов // Вестник Уральской медицинской академической науки - 2006 - №3 -С 47-52

91 Воронина ЛГ Тестирование к антибиотикам возбудителей инфекций - необходимое условие адекватной антибактериальной терапии/ Л Г Воронина, С М Блинова // Уральский медицинский журнал -2006.-спец выпуск №2. С 101-105

92 Воронина Л.Г Лабораторные методы выделения, идентификации и определения резистентности к антибиотикам Haemophilus influenzae / Л Г Воронина // 2-е дополненное, издание УГМА-2006- 17с

93 Воронина Л Г Бактериальные менингиты, вызванные Haemophilus influenzae «b» в Екатеринбурге / Л.Г Воронина // Уральский медицинский журнал -2007-№1.-С 86-89

94 Воронина Л Г Инвазивные инфекции, вызванные Haemophilus influenzae, в Екатеринбурге 15-летнее исследование / Л Г Воронина // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия - 2007 -Т -9.- №2, приложение 1 - С 16-17

95 Воронина Л Г Haemophilus гнДмеигае-инфекция у детей / Сбойчаков В Б, Воронина Л Г, Владимирова Н.Г // Клинико-лабораторный консилиум - 2007 - № 14 - С 43-46

96. Воронина Л Г Антибиотикорезистентность штаммов Н influenzae, выделенных от детей с инфекционными заболеваниями в Екатеринбурге / Л Г Воронина, С М Блинова // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия - 2007 - Т9 -№2 -С 186-191.

ВОРОНИНА Любовь Григорьевна

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗВАННЫХ Haemophilus influenzae, У ДЕТЕЙ

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Подписано на печать 09.06.2007 г. Тираж 100 шт.

Отпечатано на ризографе в Копировальном центре «РТ Компьютер» 620012, г. Екатеринбург, ул. Вайнера, 8.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Боронина, Любовь Григорьевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. HAEMOPHILUS INFLUENZAE И ПРОБЛЕМЫ

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИЙ У ДЕТЕЙ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1.Особенности биологии Haemophilus influenzae.

1.2. Эпидемиология различных форм H.influenzae-инфекций.

1.2.1. Бактерионосительсто.

1.2.2. Инвазивные инфекции.

1.2.3. Первично-локализованные инфекции.

1.2.4. Инфекции, вызванные различными вариантами.

1.2.5.Инвазивные инфекции и летальность.

1.3. Особенности формирования иммунитета.

1.3.1 Иммуный ответ на антигены.

1.3.2. Популяционный иммунитет и защита от инфекции.

1.3.3. Вакцинация и эффективность прививок.

1.4. Резистентность к антибактериальным препаратам.

1.4.1.Биологические закономерности резистентности.

1.4.2. Резистентность к антибактериальних препаратам.

1.5. Методы изучения H.influenzae и диагностики H.influenzae-инфекций.

1.5.1. Метаболизм и условия культивирования.

1.5.2. Дифференциация и идентификация изолятов.

1.5.3. Культуральные методы диагностики инфекций.

1.5.4. Методы индикации антигенов.

1.5.5. Молекулярно-генетические методы.

1.5.6. Методы изучения гуморального иммунитета.

1.5.7. Методы тестирования резистентности к антибиотикам.

1.5.8. Диагностические критерии микробиологических исследований.

1.6. Диагностика инфекций, вызываемых H.influenzae, - актуальная проблема здравоохранения.

ГЛАВА 2. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МАТЕРИАЛОВ И МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика контрольных штаммов бактерий.

2.1.1 Биологические показатели штаммов и условия подготовки культур.

2.2.Получение типовых сывороток к капсульным антигенам сероварам H.influenzae.

2.2.1 .Приготовление антигенов и иммунизация кроликов.

2.2.2.0пределение специфичности и чувствительности сывороток в РА и РДП.

2.3. Контроль качества питательных сред по микробиологическим показателям.

2.3.1. Ростовые свойства жидких питательных сред.

2.3.2. Состав и способы приготовления жидких питательных сред.

2.3.3. Сравнение плотных питательных сред.

2.3.4. Оценка качества полужидкой среды обогащения.

2.4. Получение ингредиентов для конструирования тест - системы и техника постановки ИФА.

2.4.1 .Получение антигенов.

2.4.2. Получение специфического конъюгата.

2.4.3 .Техника постановки твердофазного ИФА.

2.5.Микробиологическая диагностика инфекций.

2.5.1. Культуральный метод диагностики инфекций.

2.5.2 .Определение сероварианта капсульных штаммов.

2.5.3. Молекулярно-генетические методы.

2.6. Определение антигенов возбудителей в биоматериалах.

2.6.1. Метод иммунофлуоресценции.

2.6.2 Определение антигенов H.influenzae в ИФА.

2.7. Изучение гуморального ответа к антигенам H.influenzae и других возбудителей инфекций.

2.7.1 Иммуноферментный метод.

2.7.2. Метод иммунофлуоресценции.

2.8. Определение резистентности к антибактериальным препаратам.

2.8.1 .Диско-диффузионный метод.

2.8.2.Контроль качества определения резистентности.

2.8.3. Определение МИК.

2.8.4. Молекулярно-генетический метод.

2.9. Описание клинических материалов.

2.10. Статистические методы исследований.

ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА ОПТИМАЛЬНЫХ

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ H.INFLUENZAE.

3.1 Типоспецифические диагностические сыворотки к серовариантам «а», «Ь», «с», «d», «f», «е».

3.1.1. Изучение активности гипериммунных сывороток к сероварам «а», «Ь», «с», «d», «е», «f».

3.1.2. Изучение капсульных сывороток в РА и РДП.

3.2. Конструирование диагностических препаратов для серологической идентификации культур H.influenzae.

3.2.1. Препараты для реакции латекс - агглютинации.

3.2.2 Препараты для РНИФ.

3.2.3 Препараты для реакции ко-агглютинации.

3.2.4.0ценка эффективности препаратов для сероидентификации культур.

3.3 Разработка оптимального способа приготовления и оценки качества питательных сред.

3.3.1. Разработка, сравнительная оценка жидких сред.

3.3.2 Разработка и сравнительная характеристика плотных питательных сред.

3.3.3. Разработка двухфазной среды для выделения из стерильных полостей.

3.3.4. Разработка транспортной и селективных сред, способа выделения H.mfluenzae из нестерильных локусов.

3.3.5. Разработка требований к тест культуре и контроль качества плотных питательных сред.

3.4. Конструирование диагностической тест- системы ИФА для выявления ПРФ.

3.4.1. Разработка оптимальных параметров тест - системы.

3.4.2. Чувствительность и специфичность ИФА.

3.4.3. Индикация ПРФ в ликворе в тест системе ИФА.

3.5. Сравнительная оценка микробиологических методов при инвазивных инфекциях.

3.5.1. Культуральное исследование ликвора.

3.5.2. Исследование крови и ликвора при менингите.

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОСОБЕННОСТЕЙ ШТАММОВ Н.INFLUENZAE, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ЛОКУСОВ ОТ БОЛЬНЫХ И ЗДОРОВЫХ.

4.1. Фенотипические свойства и распространение штаммов, выделенных со слизистой задней стенки носоглотки.

4.1.1. Биовары и серовары штаммов, выделенных от детей детских учреждений.

4.1.2 Биовары и серовары штаммов, выделенных у детей в закрытых детских учреждениях с круглосуточным пребыванием.

4.1.3.Частота выявления биологических вариантов среди капсульных штаммов.

4.2. Биовары и серовары штаммов, выделенных от детей первой группы здоровья.

4.3. Биологические и серологические варианты, выделенные от детей при респираторных инфекциях.

4.4. Сравнительные характеристики фенотипов штаммов, выделенных от больных и здоровых.

4.5.Частота носительства в зависимости от возраста.

4.6.Частота выделения фенотипов, выделенных в зависимости от сезона.

4.7 Фенотипические и молекулярно-генетические свойства штаммов, выделенных от больных.

4.7.1. Фенотипические свойства штаммов, выделенных при инвазивных формах инфекции.

4.7.2. Фенотипические свойства штаммов, выделенных при первично - локализованных формах инфекции.

4.7.3. Молекулярно-генетическиие характеристики штаммов серовара «Ь», выделенных от больных с менингитом.

4.7.4. Сравнение фенотипов штаммов при различных формах инфекции.

ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ЭТИОЛОГИЧЕСКОЙ РОЛИ

H.INFLUENZAE ПРИ ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИЯХ.

5.1 Внебольничные гнойные менингиты.

5.1.1 Н. influenzae - менингиты в структуре внебольничных гнойных менингитов в Екатеринбурге.

5.1.2 Частота выявления менингита в зависимости от времени года.

5.1.3 Частота выявления менингитов в зависимости от возраста.

5.1.4. Частота выделения менингита на Среднем Урале.

5.2. Н. influenzae в структуре внутрибольничных гнойных менингитов.

5.3 Бактериемия, вызванная H.influenzae, при инфекциях. в "неинфекционном" стационаре.

5.3.1 Клинические случай инвазивных инфекций( остеомиелит).

5.3.2.Клинический случай фульминантного сепсиса.

5.4. Исследование внебольничной пневмонии, вызванной

H.influenzae.

5.5.Частота первично - локализованных форм инфекции.

5.5.1. Частота инфекции, вызванной H.influenzae, при заболеваниях лор-органов.

5.5.2. H.influenzae в этиологии хронических воспалительных заболеваниях лёгких.

5.5.3. Гнойный конъюнктивит в неонатальном периоде.

5.5.4. Воспаление орбиты глаза после протезирования (клинический случай).

5.6. Частота выявления нозологических форм инфекций, вызванных

H.influenzae.

5.7. Другие заболевания у детей, связанные с H.influenzae.

5.7.1.Инфекции мочевыделительной системы (клинический случай).

5.7.2. Инфекция вульвы (клинический случай).

ГЛАВА 6. ОСОБЕННОСТИ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА К аШЕШЕЖАЕ У ДЕТЕЙ СРЕДНЕГО УРАЛА.

6.1 .Гуморальный иммунитет у детей разных возрастов.

6.1.1.Уровнь антител к соматическим антигенам.256.

6.1.2. Уровень антител к ПРФ.

6.2 Особенности гуморального иммунитета при инфекциях.

6.2.1. Уровень антител у больных гнойным менингитом.

6.2.2. Динамика образования антител при менингите.

6.2.3 Уровень антител у больных при инфекциях дыхательной системы.

6.2.4. Гуморальный иммунитет к белкам наружной мембраны у больных с заболеваниями дыхательной системы.

ГЛАВА 7. ОСОБЕННОСТИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К

АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ ШТАММОВ

Н.ЮТШЕКгАЕ.

7.1 Исследование резистентности у нетипируемых штаммов к (3-лактамным антибиотикам.

7.1.1. Определение (Злактамаз.

7.1.2 Фенотипы резистентности к (3-лактамным антибиотикам.

7.2. Исследование резистентности к антибактериальным препаратам других классов.

7.2.1. Резистентность к макролидам.

7.2.2. Резистентность к фторхинолонам.

7.2.3. Резистентность к хлорамфениколу, рифампицину триметоприм/ сульфаметоксазолу.

7.3.Резистентность капсульных штаммов.

7.4.Сравнительная оценка резистентности.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Микробиологические аспекты инфекций, вызванных Haemophilus influenzae, у детей"

Инфекции, причиной которых является Haemophilus influenzae, приобретают все более серьёзный характер и относятся к числу распространенных заболеваний среди детей в тех странах мира, где проводится этиологическая диагностика и регистрация. Ранее считали, что Н.influenzae (палочка Афанасьева-Пфейффера) играет роль в респираторной патологии при инфлюэнце, исследования последних десятилетий показали, что H.influenzae - является причиной многих гнойно-септических инфекций. По данным ВОЗ во всех странах мира, где проводится диагностика, регистрируются заболевания, вызываемые грамотрицательной палочкой -H.influenzae, в том числе серовара «Ь», как у детей, так и у взрослых (Vaccines and Biology, 2002).

В 70-80-х годах XX века во многих странах отмечен рост инфекций, вызванных H.influenzae, утяжеление течения ранее известных, появление новых клинических форм с летальным исходом. Заболеваемость инфекциями, вызванными H.influenzae, в США и Канаде составила от 40 до 100 случаев на 100 000 детей до 5 - летнего возраста. В европейских странах в до вакцинальный период показатель заболеваемости Hib-менингитом составлял 11,5-30,3 на 100 000 в возрасте до 5лет, что существенно ниже, чем в странах американского континента, где этот показатель от 30,3 до 94,6. (Vaccines and Biology, 2002).

Наибольшее значение в патологии человека имеют капсульные серологические варианты «Ь», вызывающие целую группу разнообразных клинических проявлений, нередко приводящих к инвалидизации заболевших. Инфекции, вызванные H.influenzae, разделяют на острые гноеродные и обычно инвазивные инфекции, при которых H.influenzae являются первичным патогенным возбудителем, и на инфекции, возможно хронические, при которых Н. influenzae, по-видимому, играют вторичную роль. Острые инфекции включают менингит, сепсис, ведущей причиной которого выступают H.influenzae, и другие гнойно-септические заболевания с локальными воспалительными проявлениями местного характера, например, эпиглоттит, целлюлит, артрит и остеомиелит. В России до 1973 г. H.influenzae-менингит диагностировали в основном у детей до одного года, ослабленных частыми катарами верхних дыхательных путей и пневмониями, в то же время Т.М. Зубик с оавторами описали H.influenzae менингит у новобранцев (Зубик Т.М. и др., 1983).

В течение многих лет в нашей стране истинная распространенность Hib - менингитов и других инфекций, вызванных H.influenzae, не известна. Это в определенной мере связано с отсутствием регистрации этиологии бактериальных менингитов и других угрожающих инфекций. Наблюдения отечественных исследователей свидетельствуют о более низком уровне распространенности H.influenzae- гнойных менингитов в России, чем в других странах в до вакцинальный период: в 1984г. H.influenzae - менингит выявлен у 5% детей, чаще в возрасте от 0,5 до 1,6 лет (Дёмина A.A., 1984).

Заболеваемость в 1999-200Irr Hib - менингитами в Москве, составляла 5,7 на 100 000 детей в возрасте до 5 лет (Платонов А.Е.,2000). По мнению ряда иследователей остаётся неоднозначной самостоятельная роль H.influenzae в этиологии острых и хронических заболеваний лёгких (Бартлетт Д., 2000, Вишнякова Л.А., 1983, 1986, 1988, СахароваА.Е. и др.1986,Фаустова М.Е, 2003). В России распространенность назофарингиального носительства Н influenzae типа «Ь», других серо- и биовариантов в полной мере не изучена. В связи с распространённостью назофарингиального носительства нетипируемых штаммов у 5-75% и капсульных штаммов у 1-25% обследованных, - остается нерешенным вопрос о выборе диагностических критериев микробиологического исследования материала при первично-локализованных инфекциях, связанных со слизистыми верхних дыхательных путей. Многообразие клинических проявлений инфекций, вызываемых H.influenzae, ненадежность клинического диагноза, диктуют необходимость широкого использования и достоверной интерпретации результатов лабораторных методов диагностики.

Помимо клинической направленности, диагностика Нлпйиепгае-инфекции является важнейшим инструментом эпидемиологического надзора и служит целям углубленного изучения эпидемической обстановки, а также слежения за распространением антибиотикорезистентности капсульных и бескапсульных штаммов Нлпйиепгае.

Приходится констатировать, что лабораторные исследования с целью установления этиологического диагноза Нлпйиепгае-инфекции используются недостаточно. Распространение Нлпйиепгае- и НлпАиепгае «Ь»-инфекций и заболеваний, вызванных другими серовариантами и биовариантами Нлпйиепгае, в нашей стране изучено недостаточно; не изучены особенности носительства и колонизации возбудителей различных фенотипов, а также фенотипы резистентности к антибактериальным препаратам у штаммов, выделенных из различных локализаций.

Опубликованные результаты исследований свидетельствует о том, что заболеваемость инфекциями, вызванных Нлпйиепгае, во многих странах имеет различия по частоте выявления разных нозологических форм инфекций. В отечественной литературе описаны в основном случаи гнойного менингита, эпиглоттита и противоречивые результаты исследования этиологии пневмоний, вызванных Нлпйиепгае, у детей (Веткин А.Л., 2003, Вишнякова Л.А., 1986, Катосова Л.К., 2005). Настороженность вызывает отсутствие сведений о заболеваемости и распространении других нозологических форм гнойно-септических инфекций у детей, вызванных Нлпйиепгае.

Ряд авторов считает, что несовершенство лабораторной диагностики Нлпйиепгае инфекции приводит к снижению истинных показателей заболеваемости этой инфекцией (Горбунов С.Г., 2002, Дворецкий Л.И., 2005, ТаточенкоВ.К., 1998). Результаты изучения инфекции и надзор за заболеваемостью, проведенный во многих странах мира и на разных континентах, позволили исследователям прийти к единому мнению: Нлпйиепгае - инфекция является актуальной проблемой здравоохранения.

Вместе тем, учитывая многообразие клинических форм инфекции, необходимо совершенствовать методы микробиологической диагностики и критерии этиологической значимости выявления из разных локализаций, выявления антигенов и фрагментов генома H.influenzae как для первично-локализованных, так и при инвазивных, генерализованных инфекциях.

Наиболее сложна микробиологическая диагностика H.influenzae -менингита, что связано с морфологическими, культуральными и биологическими особенностями возбудителя, такими, как: грам-вариабельность, полиморфизм, потребность в ростовых факторах. При небольшом количестве в мазке из ликвора клетки H.influenzae могут быть приняты за другие бактерии и названы диплококками или не дифференцированы.

Обнаружение H.influenzae в исследуемом материале сопряжено с значительными трудностями, что связано с особыми требованиями, предъявляемыми к питательным средам. Существующие нормативные документы указывают на возможность применения крови человека для приготовления «шоколадного» агара, двухфазной среды, в то время как о недопустимости этого существуют многочисленные доказательства (Козлов Ю. А., 1952, Королёва И.С., 2000, Вишнякова JI.A., 1981). Несмотря на то, что в лабораторной практике в настоящее время появились современные методы диагностики: индикация антигенов серовара «Ь» с помощью реакции латекс-агглютинации, ПЦР- H.influenzae «b», коммерческие питательные среды, в полной мере не решена проблема своевременной микробиологической диагностики H.influenzae-инфекций разных локализаций, вызванных как сероварами капсульных, так и бескапсульных штаммов.

При серотипировании капсульных штаммов при помощи коммерческих латексных препаратов к H.influenzae «b», возникает два проблемных вопроса. Во-первых, в ряде случаев возбудителями инфекций может быть не только штаммы серовара «Ь», но и другие, выявление сероварианта капсулы которых затруднено из-за отсутствия диагностических препаратов. В этих случаях штаммы H.influenzae относят к нетипируемым, несмотря на то, что у них есть капсула. Во-вторых, положительные результаты серотипирования H.influenzae «b» возможно расценить как ложноположительные реакции если нет возможности серотипировать штамм с диагностическим препаратом других сероваров H.influenzae.

H.influenzae имеет серовары «а», «Ь», «с», «d», «е», «f»; общепринято считать, что только серовар «Ь» вызывает инвазивные инфекции, между тем описано множество случаев инфекций, вызванных другими сероварами и нетипируемыми по капсуле штаммами разных биоваров (Bajanca М, 2004, Falla T.J., 1993, SlakM.R.E., 1998)

Несмотря на вакцинацию против H.influenzae «b», обращают на себя внимание прогнозы зарубежных специалистов о возможном увеличение случаев H.influenzae инфекций, в том числе менингитов, вызванных не сероваром «Ь», а другими сероварами и нетипируемыми штаммами (Slak M.R.E., 1993, Gill M.V., 1995).

Эти прогнозы требуют изучения всех возможных инфекций, вызываемых H.influenzae, а также штаммов, циркулирующих на различных территориях. Анализ особенностей диагностики инфекций, вызванных H.influenzae, на современном этапе выявляет как минимум две крайние тенденции: с одной стороны, полное отсутствие данных о распространении инфекций, вызванных H.influenzae на большей части территории РФ, с другой, описание случаев инфекций и бактерионосительства H.influenzae при сомнительной достоверности доказательств (Юшкова И.Ю.,2003, Ященко С.В., 2002). Иммунный ответ в нашей стране у детей при H.influenzae-инфекции изучен недостаточно, требуют внимания разрешения вопросы и методы серологической диагностики. Также не в полной мере изучены диагностические критерии выявления специфических антител при инфекциях, вызванных H.influenzae, в том числе сероваром «Ь»(Веселова Т.А. и др., 1982, Горбунов С.Г. и др. 2002, Костинов М.П., 2004).

Недоступны тест - системы для изучения гуморального иммунитета, сероидентификации культур, до сих пор не решена проблема производства качественных питательных сред. Появление отдельных диагностических систем для обнаружения основных возбудителей менингитов методом ПЦР, питательных сред и латексных препаратов только к серовару «Ь» не решает проблему диагностики в целом.

Таким образом, поиск новых возможностей существующей системы диагностики инфекций, вызванных Нлпйиепгае, позволяющих определить диагностическую значимость, как конкретного метода, так и методических подходов диагностики гнойно-септических инфекций у детей, является в современных условиях актуальным, а его практическая реализация позволит добиться значительного эффекта, связанного с исключением необоснованных лечебных манипуляций.

Отдельное место при этом должно отводиться наиболее доступным для практических лабораторий методам, позволяющим выявить возбудитель и достоверно доказать развитие инфекции.

Для повышения информативности методов серологической диагностики необходимо учитывать последние достижения биотехнологии: получение микробных капсульных антигенов, белков наружной мембраны и использование их в диагностических препаратах. Возможным подходом к повышению информативности диагностических методов может выступать определение и изменение трактовки результатов серологического исследования.

Существующие проблемы диагностики инфекций, вызванных НлпАиепгае, сводятся к отсутствию критериев, на основании которых можно доказать роль возбудителя и тем самым способствовать проведению адекватной антибактериальной терапии.

Для диагностики инфекций, вызванных разными фенотипами Нлпйиепгае, требуется достоверная информация интерпретации результатов микробиологических исследований, разработка и внедрение которых необходимы для полноценного слежения за инфекциями, их лечения и профилактики.

Цель исследования — разработать новые, провести сравнительную оценку существующих методов для повышения информативности микробиологических исследований и на этой основе определить частоту инвазивных, первично-локализованных инфекций, вызываемых H.influenzae, у детей.

Задачи исследования.

1 .Усовершенствовать способ получения диагностических типоспецифических сывороток к капсульнным сероварам «а», «Ь», «с», «d», «е», «f» H.influenzae для конструирования диагностических препаратов и тест - систем.

2. Разработать, практически реализовать применение питательных сред для выделения H.influenzae и определить методические особенности контроля качества питательных сред для выделения H.influenzae, уточнить перечень необходимых свойств и условий, подготовки тест - штамма.

3. Разработать и оценить диагностическую значимость тест-систем ИФА для определения капсульного полирибозилфосфата серовара «Ь» в ликворе и антител в сыворотке крови.

4.0ценить возможности использования и диагностическую значимость разных методов микробиологического исследования инвазивных H.influenzae-инфекций.

5.Изучить частоту выявления инвазивных, первично-локализованных инфекций и назофарингиального носительства у детей Среднего Урала, вызванных разными фенотипами H.influenzae.

6.Изучить распространение капсульных сероваров «а», «Ь», «с», «d», «e»,«f» нетипируемых штаммов, а также биоваров, их значение при первично-локализованных и инвазивных инфекциях.

7.Определить чувствительность штаммов H.influenzae, выделенных при инвазивных, первично-локализованных инфекциях к антибиотикам разных классов.

Научная новизна

В процессе работы нами впервые разработаны способ культивирования H.influenzae из носоглотки (Патент №2186389 от 27 июля 2002г), питательные среды транспортная и селективная (Патент №21936000 от 27 ноября 2002г) - для выделения со слизистой носоглотки H.influenzae, ЭрДС агар - для выделения из нестерильных локусов( заявка №2006139958 от18.10.2006.), двухфазная среда —для выделения из стерильных полостей.

Определены методические подходы к оценке тест - штамма для бактериологического контроля качества питательных сред для выделения H.influenzae из клинического материала.

Сконструированы отечественные тест-системы ИФА для выявления полисахарида «Ь».

Определена частота инфекции и назофарингеальной колонизации вызываемых H.influenzae серотипами «а», «Ь», «с», «d», «е», «f» и биоварами I-VIII.

Осуществлено серо-, био-типирование штаммов," вызывающих первично-локализованные, инвазивные инфекции, выделенных со слизистой носоглотки штаммов H.influenzae сероварами «а», «Ь», «с», «d», «е», «f» и биоварами I-VIII.

Определена частота инвазивных и первично-локализованных инфекций у детей Среднего Урала, вызванных разными фенотипами H.influenzae.

Проведено многоцентровое проспективное исследование назофарингиального носительста в детских коллективах, у больных и здоровых детей на 8 территориях Свердловской области.

Определена чувствительность с помощью стандартизованных методов к разным классам антимикробных препаратов штаммов Нлпйиепгае, выделенных в Свердловской области.

Основные положения, выносимые на защиту

1 .Предложенные модификации приготовления питательных сред, методов их контроля, разработанная тест - система ИФА для выявления антигенов, в том числе капсульного полисахарида «Ь», обеспечивают ускоренную диагностику инвазивных и верификацию этиологического диагноза первично - локализованных инфекций, вызванных Нлпйиепгае.

2.Фенотипы капсульных и бескапсульных штаммов, выделенных при первично-локализованных, инвазивных инфекциях и со слизистой носоглотки детей существенно отличаются.

3 .Целесообразно дифференцированное использование серологической диагностики для верификации инфекции, вызванных сероваром «Ь» и нетипируемыми вариантами Нлпйиепгае.

4.Выявленные изменения фенотипов резистентности к антибиотикам за исследуемый период не существенны, в то время как у нетипируемых штаммов и штаммов серовара «Ь» существуют различия в резистентности к различным классам антимикробных препаратов.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Основные теоретические итоги проделанной работы заключаются в получении данных, расширяющих представления о роли НлпАиепгае в развитии гнойно-септических инфекций у детей, о возможности потенциальной опасности определенных биовариантов и зависимости формы инфекции от серовара, биовара.

Результаты, полученные при исследовании уровня носительства капсульных вариантов у детей и определения заболеваемости инвазивными инфекциями, вызванными НлпАиепгае в Уральском регионе, существенно повлияют на тактику проведения планируемой вакцинации против

H.influenzae «b». Полученные доказательства инфекций и носительства других, не серовара «Ь», капсульных штаммов позволяют предположить участие их в развитии заболеваний в постпрививочный период — это, в своё время, потребует разработки алгоритмов своевременной диагностики.

Разработанные способы приготовления и контроля качества питательных сред с использованием доступных ингредиентов, определение диагностической ценности серологических методов позволяют достоверно верифицировать этиологический диагноз, а информированность о резистентности назначить обоснованную антибактериальную терапию

Материалы проведенных исследований использованы в следующих методических документах: методические рекомендации для бактериологов «Выделение, идентификация и определение чувствительности к антибиотикам Haemophilus influenzae», «Лабораторные методы выделения, идентификации и определения резистентности к антибиотикам Haemophilus influenzae», в разделе «Гнойно-септические и раневые инфекции» Руководства по микробиологии.

На основе полученных результатов разработаны: региональный стандарт МЗ Свердловской области и пособие для врачей - педиатров «Внебольничная пневмония у детей», раздел «Лабораторная диагностика в практике врача-педиатра и терапевта» в руководстве для врачей «Подростковая медицина». Практическая значимость работы подтверждена использованием её материалов для микробиологических исследований при диагностике гнойно-септических инфекций в лабораториях клинической микробиологии лечебно-профилактических Свердловской области, в образовательных программах на теоретических, практических занятиях и семинарах при последипломном обучении врачей.

Апробация работы.

Материалы работы доложены на научно-практической конференции

РАМН "Актуальные вопросы эпидемиологии, клиники, диагностики и профилактики инфекции, вызываемой НлпАиепгае типа «Ь» " (Москва, 1998), на научно-практической конференции "Национальные дни лабораторной медицины" (Москва, 1999), на Всероссийской научно-практической конференции "Перинатальная анестезиология и интенсивная терапия матери, плода и новорожденного" (Екатеринбург, 1999), на 9-м Европейском конгрессе по клинической микробиологии и инфекционным заболеваниям (Берлин, Германия, 1999), на научно-практической конференции Западно-Уральского региона "Вакцинопрофилактика в XXI веке " (Пермь,2000), на Юбилейной научно-практической конференции "Роль лабораторной диагностики в современных медицинских технологиях" (Екатеринбург, 2000), на II международной конференции "Антибиотики и антибиотикорезистентность на пороге XXI века" (Москва, 2000), на международной научно-практической конференции "Разработка и стандартизация питательных сред и тест-систем", посвященной 50-летию НПО «Питательные среды» (Махачкала, 2003), на V международной конференции по антимикробной химиотерапии (Москва,2003), на IV межрегиональной научно-практической конференции с международным участием "Актуальные проблемы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения"(Омск, 2003 г), на III Уральской конференции "Болезни органов дыхания" (Екатеринбург , 2003г), на Юбилейной конференции, посвященной 80-летию кафедры микробиологии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова «Современная микробиология - клинической медицине и эпидемиологии» (Санкт-Петербург, 2003), на Всероссийской научно-практической конференции "Медицинская микробиология - XXI век" (Саратов, 2004), на первой Российской конференции "Актуальные проблемы менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов" (Москва,2004), на заседаниях Свердловского отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов им.

И.И.Мечникова (Екатеринбург, 2006), на VIII международной конференции по антибактериальной химиотерапии (Москва, 2006), на межкафедральном заседании в Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (Санкт-Петербург, 2007).

По теме работы получено 2 патента изобретение: "Транспортная среда для выделения Haemophilus influenzae из носоглоточной слизи", патент №21936000 от 27.11.2002г Бюл.№33, "Способ культивирования Haemophilus influenzae из носоглоточной слизи ", патент №2186389 от 27.06. 2002г Бюл.№ 21. Подана заявка на изобретение "Питательная среда для выделения H.influenzae и способ её приготовления". Подготовлены методические рекомендации: "Лабораторные методы выделения, идентификации Haemophilus influenzae" (Екатеринбург, 1999), "Выделение, идентификация и определение чувствительности к антибиотикам Haemophilus influenzae" (Смоленск,2003), "Внебольничная пневмония у детей, пособие для врачей-педиатров" (Екатеринбург, 2004), "Лабораторные методы выделения, идентификации, определения чувствительности к антибиотикам Haemophilus influenzae " (Екатеринбург, 2006). Результаты исследований внедрены в лабораториях клинической микробиологии лечебно-профилактических учреждений МЗ Свердловской области, используются в учебном процессе курсов профессиональной переподготовки и тематического усовершенствования для врачей-бактериологов факультета повышения квалификации и последипломной подготовки Уральской государственной медицинской академии, в лаборатории иммунологии и бактериологии Уральского НИИ охраны материнства и младенчества, в исследовательской работе лабораторного отдела Уральского НИИ дерматовенерологии и иммунопатологии, Уральского НИИ фтизиопульмонологии (г.Екатеринбург). Полученные диагностические препараты применены в лаборатории менингококковой инфекции и гнойных менингитов Центрального НИИ эпидемиологии МЗ РФ, результаты исследования резистентности к антибиотикам вошли в российский реестр чувствительности H.influenzae к антимикробным препаратам разных классов.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 371 странице машинописного текста и состоит из введения, 7 глав, заключения, выводов практических рекомендаций. Указатель литературы включает 138 источников на русском языке и 296 - на иностранных языках. В текст включены 22 таблицы и 62 рисунка.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Боронина, Любовь Григорьевна

ВЫВОДЫ

1. Усовершенствованные и разработанные микробиологические методы позволяют увеличить выявление гнойно-септических инфекций, вызываемых H.influenzae, и выявить распространение фенотипов H.influenzae у больных и здоровых детей.

2. Доказаны и успешно реализованы диагностические возможности авторских питательных сред - ЭрДС, двухфазной, транспортной, и способа выделения H.influenzae со слизистой носоглотки, что позволило на 28% увеличить выделение возбудителя при первично-локализованных инфекциях и в три раза - при инвазивных НлпАиепгае-инфекциях. Доказана необходимость контроля ростовых свойств питательных сред и определены критерии, предъявляемые к тест-штамму H.influenzae. Диагностическая эффективность разработанных культуральных методов позволила определить роль H.influenzae в структуре гнойных менингитов.

3. Диагностические препараты, полученные из типоспецифических капсульных кроличьих сывороток «а», «Ь», «с», «d», «е», «f», применимы для серотипирования капсульных штаммов в реакциях ко-агглютинации, латекс-аглютинации и наиболее специфичны в реакции непрямой иммунофлюоресценции.

4. Разработанная тест-система ИФА, являющаяся специфичной и чувствительной (10-20 нг растворимого антигена в 1 мл), позволяет выявлять капсульный полирибозилфосфат H.influenzae в ликворе в течение 3 ч и увеличить этиологическое подтверждение на 29%.

5 Инвазивные H.influenzae-инфекции - менингит, сепсис, септическая пневмония, гематогенный остеомиелит - вызваны биоварами I, И, III сероваров «b», «d»; первично-локализованные (отит, синусит, коъюнктивит, хронические заболевания легких) - нетипируемыми по капсуле биоварами, чаще I, II, III (63,5%), реже - VII, VIII (30,6%).

6. Показана диагностическая ценность обнаружения сероконверсии IgG-антител к белкам наружной мембраны бескапсульных штаммов Н. influenzae у больных с хроническими заболеваниями лёгких. Двух-трех-кратное увеличение уровня IgG-антител при выделении возбудителя в концентрации 1(Г КОЕ/мл из жидкости бронхоальвеолярного лаважа или в концентрации 105 КОЕ/мл из мокроты может свидетельствовать об обострении инфекции. При выявления IgG-антител к капсульному полирибозилфосфату «Ь» у больных гнойным менингитом в тест-системе ИФА не отмечено положительной сероконверсии, в отличии от больных пневмонией, вызванной сероваром «Ь».

7. Среди фенотипов назофарингеальных штаммов, выделенных от здоровых (первой группы здоровья) детей, выявлены преимущественно нетипируемые, бескапсульные штаммы VIII биовара. У детей, относимых к другим группам здоровья, выявлены как нетипируемые, бескапсульные штаммы I, II, III, VII, VIII биоваров, так и капсульные серовары «а», «Ь», «с», «d», «f», выделенные не более чем у 1% обследованных. Частота выявления фенотипов зависит от возраста, сезона, группы здоровья детей и составляет от 12 до 36% обследованных.

8. В течение 1986-2005г.г. в Екатеринбурге H.influenzae «Ь»-менингит встречался у 2-9% среди всех детей, переболевшим гнойным менингитом, чаще у детей до 3 лет, и у 20% детей среди больных до 5 лет. H.influenzae-менингиты занимают второе-третье место после менингококковых. Увеличения частоты H.influenzae «Ь»-менингитов у детей за исследованный период не отмечено. Среди инвазивных инфекций, вызванных H.influenzae «Ь», менингиты составляют 81,1%), септическая пневмония, фульминантный сепсис, остеомиелит — по 6,3%.

9. В структуре гнойно-септических инфекций у детей первично-локализованные формы, вызванные H.influenzae, составили: при среднем отите - 7%, при воспалении околоносовых пазух - 18,1%, при конъюнктивите - 5,5%, при хронических инфекциях лёгких - 8,3%. При хронических инфекциях лёгких, кроме нетипируемымых штаммов, выделены серовары «d» и «Ь».

10. Фенотипы резистентности среди нетипируемых H.influenzae, вызвавших первично-локализованные, и штаммов серовара «Ь», вызвавших инвазивные инфекции, существенно отличаются.

11. Нетипируемые штаммы H.influenzae, выделенные в течение 2000— 2005г.г., были резистентны к цефалоспоринам 1 поколения; к цефуроксиму и цефаклору - 4,4%; чувствительны к ампициллину -79,2%; ß-лактамазы обнаружены у 5,1%. В 2,5% среди нетипируемых H.influenzae обнаружены ß-лактамазо-негативные ампициллинорезистентные штаммы (BLNAR).

12. Штаммы H.influenzae серовара «Ь», выделенные при инвазивных формах инфекции, резистентны к цефалоспоринам I поколения, но чувствительны к другим цефалоспоринам, а также к ампициллину и хлорамфениколу.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Для повышения результативности диагностики инфекций, в этиологии которых имеет место H.influenzae, необходимо проводить исследование всех возможных биосубстратов при различных формах инфекции, в том числе материала аутопсий, с использованием двухфазной питательной среды ЭрДС при исследовании стерильных полостей, и плотной среды ЭрДС - при других локализациях гнойно-воспалительного процесса.

Для контроля качества питательных сред необходимо использовать 18-часовую культуру H.influenzae, выращенную при +37°С в атмосфере СОг с типичными биохимическими и антигенными свойствами без признаков диссоциации и наличия не более 10% удлинённых клеток размером > 5,0 мкм. Качественной можно считать плотную питательную среду для выделения H.influenzae из клинического материала, если при посеве 0,1 мл из у разведения 10" КОЕ обнаружен рост десятков колоний.

Индикация капсульного антигена H.influenzae «b» различными методами повышает информативность исследования, но не заменяет культуральные методы выделения других (не серовара «Ь»), сероваров H.influenzae, поэтому культуральное исследование обязательно при диагностике всех случаев инфекций у детей

Внедрение предлагаемых питательных сред, приготовленных с использованием эритроцитарной массы из крови человека, дрожжевого экстракта, сыворотки крупного рогатого скота, вполне доступно для практических лабораторий.

Применение двухфазной среды ЭрДС для посевов материала из стерильных полостей ускоряет выделение и идентификацию культуры и позволяет выделить из стерильных полостей в минимальных количествах не только H.influenzae, но и другие прихотливые бактерии.

Определение биовара штаммов H.influenzae легко выполнимо, позволяет выявить потенциально опасные биовары (I, II, III), вызывающие инвазивные гнойно-воспалительные заболевания.

Сероидентификация препаратами к капсульным полисахаридам позволяет выявить штаммы разных сероваров, имеющих значение в инфекционной патологии у детей.

Для определения антибиотикорезистентности применимы хромогенный тест для выявления (3-лактамаз и диско-диффузионный метод на среде НТМ-агар, а также с использованием автоматических систем.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Боронина, Любовь Григорьевна, Санкт-Петербург

1. Акимович В. В. Диссоциация и бактериофагия у Haemophilus influenzae / В. В. Акимович // Журнал микробиологии и эпидемиологии. 1950.-№1.-С. 15-22.

2. Антибактериальная терпапия: практическое руководство / под редакцией JL С. Страчунского, Ю. Б. Белоусова, С. Н. Козлова. М., 2000.- 191 с.

3. Бактериальные менингиты. Неотложная помощь и интенсивная терапия: руководство по педиатрии / под ред. М. Роджерса, М. Хелфаера: Пер. с англ. СПб.: Питер, 1999. - С. 626-642.

4. Бактериологический контроль питательных сред: методические рекомендации в помощь бактериологам санитарно-бактериологических станций и больниц. Хабаровск. - С. 1937-1969.

5. Бартлетт Дж. Инфекции дыхательных путей / Дж. Бартлетт: Пер. с англ. СПб.: ЗАО «Издательство БИНОМ», 2000. - 192 с.

6. Вачаев Б. Ф. Состояние и перспективы разработки отечественной вакцины против гемофильной инфекции / Б. Ф. Вачаев, Э. А. Яговкин, Г. Г. Онищенко // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2005. -№3.-С. 37-39.

7. Вербов В. Н. Принципы твердофазного иммуноферментоного анализа / В. Н. Вербов // Твердофазный иммуноферментный анализ. Труды института имени Пастера. Ленинград, 1988 - Т.64. - С. 3-27.

8. Верткин А. Л. Досуточная летальность в стационаре при внебольничной пневмонии / А. Л. Верткин, А. В. Наумов, Е. И. Вовк // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. — 2003. — Т.5,№4.-С. 380-388.

9. Вильниц А. А. Современные клинические особенности пневмококковых и гемофильных менингитов у детей / А. А. Вильниц, М. В. Иванова, Н. В. Скрипченко // Эпидемиология и инфекционные болезни.-2005. -№3. С. 56-58.

10. Вишнякова JI. А. Этиология инфекционного процесса при бронхите / JL А. Вишнякова, М. Е. Фаусова, М. Г. Васильцева // Клиника хронического бронхита. Ленинград, 1980. - С. 14-20.

11. Вишнякова JI. А. Определение этиологии инфекционного процесса при неспецифических заболеваний легких у детей / JL А. Вишнякова // Тер. архив. 1980. - Т. VII, № 12. - С. 62-64.

12. Вишнякова JI. А. Этиология острых инфекционных воспалительных заболеваний легких / Вишнякова JI. А. // Всесоюз. конф. «Проблемы клинической микробиологии в неинфекцион. клинике». М., 1983. - С. 83-84.

13. Вишнякова JL А. Этиология острого бронхита у детей раннего возраста / JL А. Вишнякова JL А., И. В. Шкирматова, JL А. Желенина // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1986. — №12.-С. 34-37.

14. Вишнякова JI. А. Этиология инфекционного процесса при хронической пневмонии у детей / JI. А. Вишнякова, М. Е. Фаустова, Т. С. Сологуб // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1984. - № 5. - С. 36-40.

15. Вишнякова JI. А. Роль вирусных и бактериальных инфекционных процессов в этиологии и патогенезе острых заболеваний бронхов и лёгких / JL А. Вишнякова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1988. - № 5. - С. 105-107.

16. Воробьев А. А. Медицинская и санитарная микробиология: учебное пособие / А. А. Воробьев, Ю. С. Кривошеин, В. П. Широбоков. М.: ACADEMIA, 2003. - 461 с.

17. Выделение, идентификация и определение чувствительности к антибиотикам Haemophilus influenzae / Т. М. Богданович, О. У. Стецюк, Катосова JI. А. и др. // Клиническая микробиология и анитмикробная химиотерапия. 2000. - Т.2, № 2. - С. 93-109.

18. Гемофильные менингиты у детей Санкт-Петербурга в 1997-1998 г.г. / М. О. Волкова, М. Н. Кветная, М. Н. Сорокина М.Н. и др. // Детские инфекции на рубеже XXI века: настоящее и будущее. СПб., 1999.-С. 24-25.

19. Гемофильная инфекция, вызываемая Haemophilus influenzae тип В: этиология, эпидемиология, клиника, лечение, профилактика: методические рекомендации. СПб., 1998. - 35 с.

20. Генодиагностика бактериальных менингитов и генотипирование их возбудителей : пособие для врачей. М., 2001. - 36 с.

21. Горбунов С. Г. Методы лабораторной диагностики респираторных инфекций у детей (сравнительный анализ) / С. Г. Горбунов // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2000. — № 4. — С. 53-54.

22. Горбунов С. Г. Вакцинология и вакцинопрофилактика / С. Г. Горбунов, В. М. Бондаренко, А. А. Демина // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2003. — № 3. - С. 27—30.

23. Горбунов М. А. Результаты регистрационных клинических испытаний вакцины «АКТ-ХИБ» производства фирмы «Пастер Мерье

24. Коннот», Франция / М. А. Горбунов, JI. И. Павлова, Р. П. Чуприна // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1999. -№ 2. - С. 45-49.

25. Горбунов С. Г. Диагностикая ценность различных методов лабораторной диагностики пневмонии, обусловленнлй Haemophilus influenzae типа В / С. Г. Горбунов, А. А. Демина, JI. В. Спирихина // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2002. - № 2. — С. 27—30.

26. Грубер И. М. Спецефическая активность селективной питательной среды для выделения бактерий рода Haemophilus / И. М. Грубер, В. А. Мельникова, О. А. Шостак // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2005. №3. С. 15-17.

27. Дворецкий Л. И. Ошибки антибактериальной терапии инфекций дыхательных путей в амбулаторной практике / Л. И. Дворецкий, С. В. Яковлев // Антибиотики и химиотерапия. 2005 —№5. - С. 32-37.

28. Дёмина А. А. Этиология гнойных бактериальных менингитов / А. А. Дёмина, В. И. Покровский, Т. В. Ильина // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1984. - № 12. - С. 32-36.

29. Дёмина А. А. Специфический латексные препараты в этиологической диагностике гнойных бактериальных менингитов / А. А. Дёмина, Т. В. Ильина // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1985. -№ 11. — С. 3-5.

30. Дёмина А.А. Заболеваемость, обусловленная Haemophilus influenzae типа b и вакцинопрофилактика инфекции / А. А. Дёмина, В. А. Покровский, И. М. Самсонова // Журнал микробиологии. 1996. - № 5.- С. 99-104.

31. Дёмина А.А. Эпидемиология инвазивных форм заболеваний, обусловленных H.influenzae типа «Ь» / А.А. Демина // Актуальные вопросы эпидемиологии, клиники, диагностики и профилактики инфекции, вызываемой H.influenzae типа «Ь». — М., 1998. — С. 5—13.

32. Дидковский Н. А. Наследственность и хронические обструктивные болезни легких / Н. А. Дидковский, А. Г. Чучалин // Хронические и обструктивные болезни легких. М.: ЗАО БИНОМ, 1998. - С. 3093-21.

33. Дифференциальная диагностика инфекционных болезней: практическое руководство для врачей / под ред. Д. Шлоссберг, И. А. Шульман. М.: Бионом, 2000. - 305 с.

34. Егорова О. А. Оптимизация антибактериальной терапии острых отитов у детей: Автореферат дис.канд. мед. наук / Егорова О. А. — Смоленск, 1999.- 18 с.

35. Заргарян О.П. Частота и массивность обсеменения Haemophilus influenzae слизистой оболочки носа и глотки у здоровых детей / О. П. Загарян, JI. В. Колотилова // Детские инфекции. Киев, 1982. — № 12. -С. 38-41.

36. Зубик Т.М. Менингит Афанасьева Пфейфера (инфлюенца менингит) у взрослых / Т. М. Зубик, Ю. В. Лобзин, В. И. Кочеровец // Клиническая медицина. - 1983. - № 2. -С. 66-71.

37. Зубков М.Н. Эпидемиологические аспекты антибибиотико-резистентности клинических изолятов Haemophilus influenzae / М.Н. Зубков, Е. Н. Гугуцидзе, В.Е. Ноников // Пульмонология. -1995. № 3. -С. 89-91.

38. Иммунопрофилактика: справочник / под редакцией В. К. Таточенко, Н. А. Озерцовского. М., 2001. - 282 с.

39. Имму но ферментный анализ / под ред. Т. Г. Ню, Г. Ленхоффа: Пер. с англ. М.: Мир, 1988. - 443 с.

40. Иммунологические методы / под ред. Г.Фримеля: пер. с нем. — М. Мир, 1987.-423 с.

41. Карбон К. Значение новых макролидов при лечении внебольничных инфекций дыхательных путей: обзор экспериментальных и клинических данных / К. Карбон, М.Д. Пул // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2000. -Т. 2, № 1.-С. 47-57.

42. Карлова О.Г. Основы лечебной тактики при деструктивной пневмонии / О.Г. Карлова, И.А. Зимина, М.В. Горбачева // Тезисы XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». М., 2004.-С. 442-443.

43. Катосова Л.К. НлпАиепгае типа Ь в этиологии острых эпиглотитов у детей / Л.К. Катосова, М.Р. Богомильский, А.Л. Жилина // Клиническая микробиология и антимикробная терапия. 2005. - Т. 7, прилож. 1. - С. 32.

44. Кильбурн Э.Д. Вирусы гриппа и парагриппа / Э. Д. Кильбурн. М.: Медицина, 1978. - 585 с.

45. Клиническая микробиология: краткое руководство / под ред. П. Р. Марри, И. Р. Шей. М.: Мир, 2006. -424 с.

46. Козлов С. Н. Роль макролидов в лечении инфекций нижних дыхательных путей / С. Н. Козлов, С. А. Рачина // СопвПНит МесИсот. -2003.-Т. 4, №4.-С. 1-6.

47. Козлов Ю. А. Среды для гемоглобинофильных бактерий / Ю. А. Козлов // Питательные среды в медицинской микробиологии. М.: Медгиз, 1950.-С. 162-165.

48. Кокосов А.Н. Хронический бронхит: руководство по пульмонологии / А. Н. Кокосов, В. А. Герасин. Изд. 2-е, перераб. и доп. - СПб.: Медицина, 1984. - 119 с.

49. Кольцов О. В. Особенности этиологии и антибактериальной тарапии острого эпиглотита у детей / О. В. Кольцов, С. В. Гоева, М. К.

50. Соболева // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия: тезисы VII международной конференции МАКМАХ. -Москва, 2005. Т. 7, № 2. - С. 36.

51. Королева И. С. Этиология и лабораторная диагностика гнойных бактериальных менингитов / И. С. Королева, Г. В. Белошешицкий, И. Н. Лыткина // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2005. — № 3. -С. 5-8.

52. Королёва И. С. Эпидемиологические особенности носительства Haemophilus influenzae типа b / И. С. Королёва, И. Н. Лыткина, Г. Г. Чистякова // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2000. — № 3. — С. 15-19.

53. Костюкова H.H. Этиологическая структура бактериальных менингитов в различных регионах / Н. Н. Костюкова, Н. А. Коржуева, С. А. Деркач // Журнал микробиологии 1992. № 7. - С. 14-17.

54. Коточикова Л.Д. Микробиологический мониторинг за бактериальными менингитами / Л. Д. Коточикова, И. Л. Мамаев, Л. Г. Воронина // Клиническая лабораторная диагностика. 1999. — № 11. — С. 17-18.

55. Краковская А. В. Гемофильная и пневмококковая инфекции у детей с ХНЗЛ и эффективность вакцинации / А. В. Краковская, В. К. Козлов, Г. Н. Холодок // Russan Journal of Immunology. 2004. - Vol. 9. - Suppl. 1.-P.338.

56. Крейнин Л. С. Haemophilus influenzae. Заболеваемость и проблема специфической профилактики / Л. С. Крейнин, К. Г. Каверина // Журнал «микроэпидемиологии и иммунологии». 1979. — № 9. — С. 7—14.

57. Кузнецова Т.А. Выявление Hib у больных с осложнёнными формами пневмоний в Ташкенте / Т. А. Кузнецова, Л. К. Катосова, Э. М. Ходиев // Медицинский журнал Узбекистана. 1989. - № 9. - С. 12—15.

58. Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции: методические указания 4.2.698-98. М., 1998. - 47 с.

59. Лабораторная диагностика менингококковой инфекции и гнойных бактеральных менгитов: МУК 4.2.1887-04. М., 2005. - 50 с.

60. Лукачев И.В. Бронхиальная астма и бактериальная инфекция / И. В. Лукачев, М П. Костинов, С.В. Шабалина // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2003. - №4. - С. 48-52.

61. Магер И.Н. Результаты изучения заболеваемости гемофильными менингитами и перспективы их вакцинопрофилактики в Минске / И. Н. Магер, Е.Г. Фисенко, Ф.А. Германович // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2005. - № 3. - С. 33-36.

62. Мари П.Р. Клиническая микробиология: краткое руководство / П. Р. Марри, И. Р. Шей. М.: Мир, 2006. - 424 с.

63. Международная статистическая классицикация болезней и проблем, связанных со здоровьем (МКБ-10) Женева: ВОЗ, 1995. - Т. 1.-697 с.

64. Методические рекомендации по выделению и идентификации микробов рода Haemophilus / 3. М. Андреева, Н. И. Храмова. М.: ГИСК им Л.А. Тарасевича, 1979. - 18 с.

65. Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям / 3. М. Андреева, Л. Г. Бендас, Е. А. Ельчинова, Р. Г. Шепилов //М. ГИСК им. Л.А. Тарасевича - 1980. - 15 с.

66. Методические параметрам роста микроорганизмов в процессе культивирования / НИИВС им. И. И. Мечникова МЗ СССР М. - 1980. -18 с.

67. Медицинская микробиология: учебное пособие / под ред. А. М. Королюка, В. Б. Сбойчакова // СПб. ЭлбиСПб -1997. - 267 с.

68. Насыров P.A. Патоморфология менингитов, вызванных Haemophilus influenzae / Р. А. Насыров, М. М. Забежинский // Тезисы 2-го съезда Международного союза ассоциаций патологоанатомов. М., 1999.-С. 211-212.

69. О комплексной оценке состояния здоровья детей: приказ № 621 МЗ РФ от 30. 12. 2003. М., 2003. - 12 с.

70. Об унификации микробиологических бактериологических методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений: приказ № 535 МЗ СССР от 22. 04. 1985.-М., 1985.- 126 с.

71. О мерах по совершенствованию лечебно-диагностических мероприятий по борьбе с менингококковой инфекцией и внедрению эпидемического надзора: приказ МЗ СССР № 858 от 01.12.88. М., 1988.-61 с.

72. О мерах по усилению эпидемиологического надзора и профилактики менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов: приказ МЗ РФ № 375 от 23.12.98. М., 1998. - 57 с.

73. Определитель бактерий Берджи / под ред. Дж. Хоулта, Р. Крика, П. Снита, Дж. Стейли, С.Уилльямса. М: Мир, 1997. - Т 1, 2. - 799 с.

74. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам: методические указания 4.2.1890-04 / Министерство здравоохранения. М., 2004. — 100 с.

75. О профилактике гемофильной инфекции: приказ № 2510/10099-9732 МЗ РФ от 30.12.97. М., 1997. - 4 с.

76. Перт С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток / С. Дж. Перт М.: Мир, 1978. - 597 с.

77. Питательная среда для выделения и культивирования пневмококка и гемофильных палочек / JI.A. Вишнякова, М.В. Герасимова, М.Е. Фаустова // Лабораторное дело. 1981. -№ 1. - С. 38-41.

78. Платонов А. Е. Перспективы диагностики бактериальных менингитов / А. Е. Платонов, Г. А. Шипулин, И. С. Королева, О. Н. Шипулина // Журнал микробиологии. 1999. - № 2. - С. 71-76.

79. Платонов А. Е. Генодиагностика бактериальных менингитов и генотипирование их возбудителей: пособие для врачей / А. Е. Платонов, Г. А. Шипулин, Е. Н. Тютюнник, О. В. Платонова. М., 2001. — 35 с.

80. Покровская Н.Я. Гнойные менингиты: методические рекомендации / Н.Я. Покровская. -М., 1973. -28 с.

81. Покровский В.И. Гемофильная инфекция типа В / В. И. Покровский, В. К. Таточенко // Эпидемиология и инфекционные болезни.-2005. -№ 1.-С. 41-43.

82. Порубиновская Н.М. Модификация реакции пассивной гемагглютинации для выделения антител к капсульному полисахариду Haemophilus influenzae типа «Ь» / Н. М. Порубиновская, И. П. Амелина, С. И. Манахова // Лабораторное дело. 1977. - № 8. - С. 494.

83. Практическая пульмонология детского возраста: справочник / под редакцией В. К. Таточенко. М., 2006. - 250 с.

84. Применение вакцин «пневмо 23» М «АКТ-ХИБ» в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при хронических воспалительных заболеваниях легких у детей: пособие для врачей / под редакцией М. П. Костинова. М.: Медицина для всех, 2004. - 47 с.

85. Прозоровский С.В. Медицинская микоплазмология / С. В. Прозоровский, И. В. Раковская, Ю. В. Вульфович, М.: Медицина, 1995. -205 е.

86. Раков А. Л. Местный клеточный и гуморальный иммунитет у больных с острым бронхитом / А. Л. Раков, Д. Н. Панфилов, Б. И. Гельцер // Военно-медицинский журнал. 2001. - № 2. - С. 44-49.

87. Раковская И.В. Лабораторная диагностика микоплазмозов человека / И. В. Раковская, Л. Г. Горина // Диагностика. 1999. — № 11. -С. 6.

88. Расширение комплекса лечебно-профилактических мероприятий при бронхиальной астме у детей с применением вакцин «ПНЕВМО 23», «АКТ-ХИБ»: пособие для врачей / под ред. М. П. Костинова. М.: Медицина для всех, 2004. - 35 с.

89. Савицкая К. И. Микрофлора верхних дыхательных путей у детей раннего возраста в норме и при заболеваниях органов дыхания / К. И.

90. Савицкая, А. А. Воробьёв, О. Е. Солодилова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1987. — № 1.-С. 22-29.

91. Сахарова А. Е. Экспресс диагностика обострений хронического бронхита пневмококковой этиологии у детей / А. Е. Сахарова, Е. В. Климанская, Е. В. Андрющенко // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 1986. — № 1. — С. 8—11.

92. Сбойчаков В.Б. Выбор способа оптимального выражения результатов иммунологического анализа / В. Б. Сбойчаков, А. М. Королюк // Твердофазный иммуноферментный анализ: труды института им. Пастера. Ленинград, 1988. - Т. 64. - С. 81-84.

93. Сидоренко С.В. Некоторые проблемы диагностики этиотропного лечения бактериальных инфекций в интенсивной терапии / С. В. Сидоренко // Вестник интенсивной терапии. М., 1998. — С. 1-12.

94. Сидоренко С.В. Этиологическая диагностика внебольничных пневмоний / С. В. Сидоренко // Consilium medicum. С. 3-6.

95. Синопальников, А. И. Ровамицин в лечении пневмоний / А. И. Синопальников, А. В. Калинин, Ю. К. Дмитриев // Пульмонология. -1995.-№3.-С. 92-94.

96. Синопальников А.И. Принципы этиологической диагностики и антибактериальной терапии атипичных пневмоний у детей / А. И. Синопальников, Ю.К. Дмитриев, В.К. Деров // Военный медицинский журнал. 1999. -№ 9. - С. 51-55.

97. Современные методы клинической микробиологии / под ред. JI.C. Страчунского, P.C. Козлова. Смоленск: МАКМАХ, 2003. - 104 с.

98. Сорокина М. Н. Актуальные вопросы эпидемиологии, клиники, диагностики и профилактики инфекций, вызываемой Н. influenzae типа b / М. Н. Сорокина, Н.В. Скрипченко, Н.В. Иванова // Новости вакцинопрофилактики. 1998. — № 4. - С. 14-20.

99. Сорокина М.Н. Бактериальные менингиты у детей / М. Н. Сорокина, Н. В. Иванова. М.: Медицина, 2003. - 313 с.

100. Спирихина JI.B. Совершенствование лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых Haemophilus influenzae типа b: Автореф. дис. канд. биол. наук / JI.B. Спирихина. М., 1999.

101. Способ получения эритроцитарного диагностикума для выявления антител к Haemophilus influenzae типа b: A.C.I072863 А / JI.А. Левина, К.Г. Каверина, И.Я. Мошкашвилли: опубл. 84. 06. 13. БИ. 1985. -№ 6.

102. Суходоева Г. С. Haemophilus influenzae инфекция (обзор) / Г. С. Суходоева, В. П. Добрица // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1982. -№ 8. - С. 19-24.

103. Таточенко В.К. Политика в отношении вакцинации против инфекций, вызванных гемофильной палочкой типа Ь, менингококками и пневмококками / В. К. Таточенко // Новости вакцинопрофилактики. — 2000.-№5.-6 С.

104. Таточенко В. К. Антибактериальная терапия пневмонии у детей / В.К. Таточенко, Е.В. Середа, А. М. Федоров // Клинич. микробиол. антимикроб, тер. 2000. - Т. 2, № 1. - С. 77-88.

105. Твердофазный иммуноферментный анализ // Сборник научных трудов института имени Пастера. Ленинград, 1988. - Т. 64.- 185 с.

106. Тец В.В. Микроорганизмы и антибиотики. Заболевания дыхательной системы / В. В. Тец. СПб.: Эскулап, 2002. - 172 с.

107. Тимченко О.Л. Клинико-лабораторные особенности пневмоний, обусловленных Chlamydia pneumoniae / О. Л. Тимченко, Н. Д. Ющук, Г. Н. Кареткина // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2003. - № 3. - С. 46-49.

108. Учайкин В.Ф. Гнойные менингиты: клиника и вакцинация / В. Ф. Учайкин, О. В. Шамшева // Новости вакцинопрофилактики. 1999. - № 2. — 4 с.

109. Фаустова М.Е. Элективная питательная среда для микроорганизмов родасреда Haemophilus / М.Е. Фаустова // Лабораторное дело. 1990. -№ 11.-С. 682-684.

110. Фаустова М.Е. Бактериальный инфекционный процесс у больных хроническим облитерирующим бронхиолитом / М.Е. Фаустова, Е.В. Бойцова, А. В. Богданова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2003. -№ 3. - С. 71-76.

111. Ходасевич Л.С. Случай сепсиса, вызванный Haemophilus influenzae, осложненного абсцессом и разрывом миокарда / Л. С. Ходасевич, Л. Е. Крылова, И. Н. Шипанов // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2004.-№5.-С. 53-54.

112. Хронический бронхит и обструктивная болезнь легких / под ред. А.Н. Кокосова. Санкт-Петербург, 2002. - 286 с.

113. Храмова Н.И. Агглютинирующие типоспецифические сыворотки к капсульным антигенам Haemophilus influenzae / Н. И. Храмова // Лабораторное дело. 1973. - № 9. - С. 745-747.

114. Храмова Н.И. Получение специфических неадсосбированных сывороток к Haemophilus influenzae, для реакции агглютинации на стекле / Н. И. Храмова, 3. М. Андреева // Журнал микробиологии. -1975.-№3.-С. 115-118.

115. Чучалин JI.Г. Внебольничная пневмония у взрослых: практические рекомендации по диагностике, лечению и профилактике / Л Г. Чучалин, А. И. Синопальников, Л.С. Страчунский. М.: М-Вести, 2006. — 76 с.

116. Шапиро А. В. Эксперементальная пневмония, вызванная ассоциацией Н. influenzae типа и вируса гриппа / А. В. Шапиро, Л. В. Кузменков, И. А. Молчалин // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1979. - № 83. - С. 94-98.

117. Шапиро А. В. Количественное исследование микроорганизмов в мокроте больных пневмонией / А. В. Шапиро, Е. К. Гринус, Л. Г. Василенко // Проблемы клинической микробиологии в неинфекционной клинике. М., 1983. - С. 155-156.

118. Энтеробактерии: руководство для врачей / под ред. В. И. Покровского. М.: Медицина, 1985. - 318 с.

119. Юшкова И. Ю. Проблема гемофильной инфекции в Тюменской области / И. Ю. Юшкова, В. Ф. Кулькина, А. А. Огурцов и др. // Вакцинация. 2003. - № 2(26). - С. 3-6.

120. Ященко С. В. Эпидемиологические особенности носительства Haemophilus influenzae типа b / С. В. Ященко, А. П. Пак, О. А. Ульянович //Материалы VIII Всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. М., 2002. — Т. 1. С. 287 — 288.

121. Albritton W.L. Haemophilus influenzae: comparison of respiratoiy tract isolates with genitourinary tract isolates / Albbritton W.L., Brunton J.L., Meier M., Bowman M.N., Slaney L.A. // J. Clin. Microb. 1982. - Vol. 16. -№5-P. 826-831.

122. Anderson E.C. Epidemiology of invasive Haemophilus influenzae infections in Englend and Wales in the pre-vaccination era (1990-1992) / Anderson E.C., Begg N.T., Crawshaw S.C. // Epidem. Infect. 1995. - Vol. 115.-P. 89-100.

123. Anderson J.R. A nosocominal outbreak due to non- encapsulated Haemophilus influenzae: analysis of plasmids coding for antibiotic resistance / Anderson J.R., Smith M.D., Kibbler C.C. // J. Hosp. Infect. 1994. - Vol. 27.-P. 17-27.

124. Anzueto A.R. Acute exacerebrations of chronic bronchitis / Anzueto A.R., Schaberg T. // Science Press Ltd. 2003. - 64 P.

125. Arlukowicz E. Fatal acute infectious purpura fulminans in a child caused by Haemophilus influenzae a case report / Arlukowicz E., Samet A., Goss T. // Clin. Microbiol. Infect. - 2004. - Vol. 10. - P. 672.

126. Bajanca M. Haemophilus influenzae serotype 'e' cross-infection from a cystic fibrosis patient in a paediatric hospital in Portugal / Bajanca M., Teixeira F., Cani?a M. // Clin. Microbiol. Infect. 2004. - Vol. 10. - P. 667.

127. Ball P. Acute infective exacerebrations of chronic bronchitis / Ball P., Harris J.M., Lowson D. // Q J Med. 1995. - Vol. 88. - P. 61-68.

128. Barbour M.L. An improved antiserum agar method for detecting carriage of Haemophilus influenzae type b / Barbour M.L., Crook D.W., May on-White R.T. // Europ. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1993. - Vol. 12. — P. 215 - 217.

129. Barehemp S. S. Outer-mebren protein subtypes of Haemophilus influenzae type b and spreed of disease in day-core ceuters /Barehemp S. S., Granoff D. M., Munson R. S. // J.Object disease. 1981. - Vol. 144 - № 3 -P. 210 - 212.

130. Barenkamp S. J. Outer-membrane protein subtypes of Haemophilus influenzae type b and spread of disease in day-care centers / Barenkamp S. J., Granoff D. M., Munson R. S. Jr. // J. Infec. Diseas. 1981. - Vol. 144. -№3. - P. 210 - 212.

131. Barkin R. M. Capsular polysaccharide Haemophilus influenzae type b vaccine: clinical and immunologic responses to two vaccines / Barkin R. M., Hendley J. Owen, Zahradnik J. // Pediat. Infect. Disease J. 1987. - Vol. 6. - № 16. - P. 21 23.

132. Bartlett A.V. Unusual presentations of Haemophilus influenzae infection in immunocompromised patient. / Batlett A.V., Jusmon J., Daum R.S. // J. Pediatre. 1983. - Vol. 102. - P. 55-58.

133. Bartmann К. Zur pathogenen Bedeutung der verschiedenen Biotypen von Haemophilus influenzae und Haemophilus parainfluenzae für Infecnionen der Atmungsorgane / Bartmann K., Tarbuc R. // Prax. Und Klin. Pneumol.- 1983.- Vol.37-№ ll.-P. 1174-1177.

134. Baud I. D. Prevention of Haemophilus influenzae type b disease /Baud J. D., Fräser D. W., Ajello H. // Gama. 1984. -Vol. 25. - № 18. - P. 2381 -2386.

135. Beghi G. Efficacy and tolerability of azithromycin versus amoxicicllin /clavulanic acid in acute purulent exacerbation of chronic bronchitis / Beghi

136. G., Berni F., Carratu L. // J Chemother. 1995. - Vol. 7. -P.146 - 152.

137. Berit H. Selective method of the isolation of Haemophilus influenzae in material from the respiratory tract / Berit .H. //Acta patol. Microb. Scand. -1969. Vol.77 - №4 - P.676-684.

138. Binger F.M., Lamert-Zechovsky E.H. Bacteriemia during tonsilloectomia // Acta Otolarn. Head, Nack Surg. 1992. - № 11. - P .118120.

139. Benedetti P. Rhabdomyolysis and acute renal failure associated with meningitis and sepsis due to Haemophilus influenzae: case report / Benedetti P., Nicolin R., Pellizzer G. // Clin. Infect. Dis. 1997. - Vol. 24. - P. 533534.

140. Berman S. Epidemiology of acute respiratory infections in children of developing countries / Berman S. // Rev. Infect Dis. — 1991. Vol. 13. - P. 454-462.

141. Bijilmer H.A. World-wide epidemiology of Haemophilus influenzae meningitis: industrialized versus non-industrialized countries / Bijilmer H.A. // Vaccine. 1991. - Vol: 9. - P. 5-9.

142. Bijilmer H.A. Molecular epidemiology of Haemophilus influenzae type b in the Gambia / Bijilmer H.A., van Alphen L., Geelen-van den Broek L. //J. Clin. Microbiol. 1992. - Vol. 30. - P. 386-390.

143. Bijilmer H.A. The epidimeology of Haemophilus influenzae meningitis in children under five years of age in the Gambia, West Africa / Bijilmer

144. H.A., van Alphen L., Greenwood B.M. // J. Infect. Dis. 1990. - Vol. 161. -P. 1210-1215.

145. Bille J. Etiology of community-acquired pneumonia. / Bille J., Moser F., Francioli P. // Eur. J. Clin. Microbiol. 1986. - Vol. 5. - № 4 - P. 389-390.

146. Boronina L.G. Childhood Haemophilus influenzae type b meningitis in Ural / Boronina L.G., Penzhenina S.V., Murunova N.V., Gruzdev A.I. // Clin. Microbiol. Infect. 2004. - Vol. 10. - 575 P.

147. Branefors P. Serum Bactericidal effect on capsulated and noncapsulated Haemophilus influenzae / Branefors P., Dahlberg T. // Acta pathol. et miocrobiol. scand. 1980. - Vol. 88 - № 1. - P. 47-56.

148. Branefords P. K. Intrauterine infection by non capsule Haemophilus influenzae in a case of Maternal Imunodiflcitis / Braneford P. K. // Scand. J. Infec. Dis. 1986 - Vol.12, № 1. - P. 70-73.

149. Brook I. Microbiology of persistent otitis media / Brook I., Gober A.E. // ICAAC 1998. San Diego: Abstract MN-35.

150. Chang M.J. Primary peritonitis due to Haemophilus influenzae type b in a previously healthy child. / M.J. Chang, G.Controni // J. Clin. Microb. -1983. Vol. 18, №3. . P.725-726.

151. Camargos P.A. Blood steined cerebrospinal fluid responsible for Falsae positive reactions of latex particle agglutination tests. / P.A. Camargos, M. Almeida, G.L. Filho, K.W Batista / J. Clin. Pathol 1994. - Vol. 47, № 12 -P. 1116-1117.

152. Canos M. Evolution de la resistencia a la ampicilina de Haemophilus influenzae / Canos M., Checa S., Biner S., Caffarena A., Roman J., Gobernado M.// Enferm. Infec. microbiol. clin. 1992. - Vol. 10. - P. 112.

153. Carroll K. The epidemiology of bacterial meningitis in a Pacific Island population / Carroll K., Carroll C. // PNG Med. J. 1993. - Vol. 36. - P. 234-234.

154. Cartwright K.A.V. Chemoprophylaxis for secondary Haemophilus influenzae type b disease / Cartwright K.A.V., Beeg N.T., Hull D. // Commun. Dis. Rep. 1991. - Vol.1. - P. 2-6.

155. Casin I. Deoxyribonucleic acid relatedness between Haemophilus aegyptus and Haemophilus influenzae / Casin I, Grimont F., Grimont P.A.D. // Annals de l'lnstitut Pasteur. Microbiol. 1986. - Vol. 137B. - P. 155-163.

156. Cerquetti M. Amplification of capsule b locus in invasive Haemophilus influenzae strain isolated from children with Hib conjugate vaccine failures / Cerquetti M., Cardines M., Ciofi degi Atti M. // Clin. Microbiol. Infec. -Vol. 10.-P. 525-526.

157. Chaudry R. Prevalence of Mycoplasma pneumoniae and Chlamydia pneumoniae in children with community acquired pneumoniae / Chaudry R.,

158. Nazima N., Dhawan В., Kabra S.K. I I Indian J. Pediatr. 1998. - Vol. 6. - P. 866.

159. Chopitayasunondh T. Bacterial meningitis in children: Etiology and clinical features, an 11-year review of 618 cases Southeast Asian / Chopitayasunondh T. // J. Trop. Med. Publ. Helth. 1994. - Vol. 25. - P. 107-115.

160. Clairoux N. Molecolar basis of the non-p-lactamase-mediated resistance to P"lactam antibiotics in streins of Haemophilus influenzae in Canada / Clairoux N., Picard M., Brouchu A. // Antimicrob. Agents Chemother. -1992. Vol. 36. - P. 1504-1513.

161. Cornaglia G. European recommendation for antimicrobial resistance surveillance / Cornaglia G., Hrynewicz W., Jarlier V. // Clin. Microbiol. Infect. 2004. - Vol. 10. - № 4. - P. 349-383.

162. Coté S. Molecular typing of Haemophilus influenzae using a DNA probe and multiplex PCS / Coté S. Sanschagrin F., Dargis M. // Mol. Cel. Prob. 1994. - Vol. 8. - P. 23-37.

163. Coyle P.K. Overview of acute and chronics meningitis / Coyle P.K. // Neurolog. clin. 1999. - Vol. 17. - P. 691-710.

164. Craig W.A. Proof of concept: performance testing in models / Craig W.A. // Clin. Microbiol. Infect. 2004. - Vol. 10. - P. 12-17.

165. Crosson J. R. Pactiapation of complement in the Host Defense Against Experimental Haemophilus influenzae type b septicemia and Meningitis /Crosson J. R., Winkelstein T. A. Moxon R.E. // Inf. Iummol. 1976. - Vol. 14, № 14.-P. 882- 887.

166. Dagan R. Bacteriologic response in acute otitis media: comparson between azithromycin, cefaclor and amoxicillin / Dagan R., Piglansky L., Yagupsky P. // ICAAC 1997. - Abstract K-103.

167. Daoud Z. Patterns of susceptibility of Streptococcus pneumoniae andth

168. Haemophilus influenzae at a university hospital. Abstract of the 15 European Congress of Clinic. Microbiol. Infec. Diseas. serial on line. Geneva 2005 [1 screens]. Available from: URL: http://www.librainitiative.com/TCN. Athens Makri A., Athens

169. Davey P. Chemoprophylazis for contact of Haemophilus influenzae meningitis. /Davey P.G., Geddes A.M. Cruickshank A.I.K. // Brit. Med. J. -1980. Vol. 62. - № 6. - P. 1272-1287.

170. Decker M.D. Haemophilus influenzae type b vaccines: history, choice and comparisons. /Decker M.D. Edwards K.M. // Pediatr. Infect. Dis. J. -1998 -Vol. 17.-P. 113-116.

171. Derman S.J. Nasopharyngeal carriage of antibiotic resistant Haemophilus influenzae in healthy children. / derman S.J., Kucura J.C., Brunker J.M. // Pediatr. 1979. - Vol. 64. - № 3. - P. 287-291.

172. Deulofeu F. Prospective epidemiological study of invasive Haemophilus influenzae diseases in adults / Deulofeu F., Nava J.M., Bella F. // Europ. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1994. - Vol. 13. - P. 633-638.

173. Dimopoulou I.D. Molecular epidemiology of unrelated clusters of multiresistent streins of Haemophilus influenzae / Dimopoulou I.D., Kraak W.A.G., Anderson E.C.//J. Infect. Dis. 1992. - Vol. 165.-P. 1069-1075.

174. Diomina A.A. Childhood Haemophilus influenzae type b meningitis in Russia / Diomina A.A., Spirkhina L.V., Koroleva I.S., Volkova M.O. // Eur. J. Pediatr. 1999. - Vol. 158. - P. 85-86.

175. Dodge P.R. Prospective evolution of hearing impairment as a sequela of acute bacterial meningitis / Dodge P.R., Davis H., Feigin R. // New Engl. J. Med. 1984. - Vol. 31. - P. 869-874.

176. Eicuaz R. Haemophilus spp. comoagente de infección del tracto urinario. /Eicuaz R., Castillo M., Campos-Herrero MI, Pena MJ, Bordes A., Valenciano В., Latarga В. // Enferm. Infect. Y microbial. Clin. 1992. - Vol. 10.-№2.-141 P.

177. Eskola J. Efficacy of Haemophilus influenzae type b polysaccharide-diphtheria toxoid conjugates vaccine in infancy / Eskola J., Peltola H., Takala A.K. //NewEng. J. Med. 1987. - Vol. 317. - P. 717-722.

178. Faden H. Relationship between nasopharyngeal colonization and the development of otits media in children. / Faden H., Duffy L., WAsielewski

179. R., Wolf J., Krystofik D., Tung Y. // J. Infec. Dis.-1995. Vol. 172. - P. 1245-1248

180. Falla T.J. Characterization of capsular genes in Haemophilus influenzae isolates from H. influenzae type b vaccine recipients / Falla T.J., Crook D.W.M., Anderson E.C.//J. Infect. Dis. 1995.-Vol. 171.-P. 1075-1076.

181. Falla T.J. PCR for capsular typing of Haemophilus influenzae / Falla T.J., Crook D.W.M., Brophy L.N. // J. Clin. Microbiol. 1994. - Vol. 32. -P. 2382-2386.

182. Falla T.J. Population-based study of non-typable Haemophilus influenzae invasive disease in children ends neonates / Falla T.J., Dobson S.R.M., Crook D.W.M. //Lancet. 1993.-Vol. 341.-P. 851-854.

183. Farley M.M. Invasive Haemophilus influenzae disease in adults / Farley M.M., Stephens D.S., Brachman P.S. // Annals Int. Med. 1992. - Vol. 116. -P.806-812.

184. Finch R.G. Introduction: standards of antibacterial performance / Finch R.G. // Clinical Microbiol. Infection. 2004. - Vol. 10. - P. 1-5.

185. Forbes K.J. Variation in length and sequence of porin (ompP2) Alleles of non-capsulate Haemophilus influenzae / Forbes K.J., Bruce K.D., Ball A., Pennington T.H. // Mol. Microbiol. 1992. - Vol. 6. - P. 2107-2112.

186. Forbes K.J. Molecular epidemiology of invasive Haemophilus influenzae in Scotland / Forbes K.J., Morgan M.G., Williams A., Gould I. M. // Commun. Dis. Scotland. 1994. - Vol. 28. - P. 4-9.

187. Friesen C. A. Characteristic features of neonatal sepsis due to Haemophilus influenzae / C.A. Friesen, C.T.Cho //Rev. Infect. Dis. -1986. -№ 8. P. 777-780.

188. Fuhst C. Influence of protein binding on the activity of ß-lactam antibiotics on Haemophilus influenzae / Fuhst C., Barger A., Wiedemann B. // Clin. Microbiol. Infect. 2004. - Vol. 10. - P. 511-512.

189. Fyfe D.A. Clinical and therapeutic aspects pericardite caused Haemophiluse influenzae in pediatric practice. / Fyfe D.A., Hagler D.J., Puga F.J. // Maye. Clin. Proc. 1984. - Vol. 59. - №5. - P. 415-422.

190. Ganov M. Prospects for prevention of Haemophilus influenzae Type b disease by immunization / Ganoff M., Munson Robert S. // J. Infect. Dis. -1986. Vol. 153. - № 3. - P. 448- 461.

191. Garau J. Clinical failures: the tip of the iceberg? / Garau J. // Respir Med.-2001.-Vol. 95.-P. 5-11.

192. Garcia-Perea A. Susceptibility Haemophilus influenzae respiratory isolates from in Spain (2001-2002) / Garcia-Perea A., Garcia-Rey C., Garcia-Riastra C. // Clin. Microbiol. Infect. 2004. - Vol. 10. - P. 117.

193. Garcia-Tornel S. Haemophilus influenzae type b deep disease of polyresistens /Garcia-Tornel S., Gairi T. M. // J. Pediat. 1984. - Vol. 104. -№ 1 - P. 162-183.

194. Georgeopapadakou N.H. Pinicillin-binding proteins and bacterial resistance to ß-lactams / Georgeopapadakou N.H. // Antimicrob. Agen. Chemother. 1993.-Vol. 37.-P. 2045-2053.

195. Gigliotti I. Protection from infection with Haemophilus influenzae type b by monoclonal antibody to the capsule / Gigliotti I., Insel R. A. // J. Infect. Dis. 1982 - Vol. 46. - № 2. - P. 246- 254.

196. Gill M. V. Bacteremia and chorioamnionitis due to cryptic genospecies of Haemophilus influenzae biotype I. / Gill M. V. Schoch P. E., Musser J. M., and Cunha B. A. // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1995. - Vol. 14.-P. 1088-1090.

197. Gilbert G.L. Distribution of Haemophilus influenzae type b outer membrane protein subtypes in different ethnic groups in Australia / Gilbert G.L., Clements D.A. // J. Infect, dis. 1993. - Vol. 168. - P. 255.

198. Grober A.C. Bacterial meningitis in children at Kalafong Hospital, 1990-1995 / Grober A.C., Hay I. T. // South Afr. Med. J. 1997. - Vol. 87. -P. 1052-1054.

199. Goetz M.B. Nosocomial transmission of disease caused by nontypable strains of Haemophilus influenzae / Goetz M.B., O'Brien H., Musser J.M., Ward J.I. // Amer. J. Med. 1994. - Vol. 96. - P. 342-347.

200. Gold R. Epidemiology of bacterial meningitis // Infect. Dis. Clin. N. Amer. 1999. - Vol. 13. - P. 515-525.

201. Goldstein E.J. Septicaemia in paediatric intensive-care Patients at the Hospit al for Sick Children /Holzel H., de Saxe M. // J. Hosp. Inf. -1992. -№3, Vol. 22.-P. 185-195.

202. Gould I.M. Quinolone resistant Haemophilus influenzae / Gould I.M., Forbes K.J., Gordon G.S. // J. Antimicrob. Chemother. 1994. - Vol. 33. -P. 187-188.

203. Grano ff D.M. Spread of Haemophilus influenzae type b: recent epidemiologic and therapeutic considerations / Granoff D.M., Daum R.S. // J. Pediatrics. 1980. - Vol. 97. - P. 854-860.

204. Gratten M. Non-type b Haemophilus influenzae meningitis / Gratten M., Barker J., Shann F. // Lancet. 1985. - Vol .1. - P. 1343 -1344.

205. Green M. Duration of rifampin chemoprophylaxis for contacts of patients infected with Haemophilus influenzae type b / Green M., Li K.I. Wald E.R. // Antimicrob. Agen. Chemother. 1992. - Vol. 36. - P. 545-547.

206. Gentile A. Acute bacterial meningitis: epidemiological pattern in a paediatric hospital. // Abstracts of the 15 the Europen Congress of Clin. Microbiol. Infect. Dis., Copenhagen Apri 2-5. 2005. - 1668 p.

207. Ginsburg C.M. Report of 65 cases of Haemophilus influenzae b pneumonia /Ginsburg C.M., Howard J.B., Nelson J.D. // Pediatrics. 1979. -Vol. 64. -№3.-P. 283-286.

208. Glode M.P. Haemophilus influenzae type b meningitis: a contagious disease of children / Glode M.P., Leclair J., Smith A. // Brit. Med. J. 1980. -№6218.-P. 899-901.

209. Gustafsson I.The influence of protein binding antibacterial activiti of faropenem agains Haemophilus influenzae / I. Gustafsson, O.Cars // Clin. Microbiol. Infec.-2004.- Vol. 10.-P. 934-937.

210. Gwalior S.R. C-reactive protein in childhood meningitides / Gwalior S.R., Pemde H.K., Harish K. // Indian J. Pediat. 1996. - Vol. 7. - P. 73-77.

211. Haemophilus aegyptius bacteraemia in Brazilian purpuric fever // Lancet, 1987 -№ 8562 -P.761- 763.

212. Handrick W. The infections caused Haemophilus Influenzae /W.Handrick W., F.B. Spenceker, W Springer, C. Matzen // Padiat. Yrenzgeb. 1985 - Vol. 24.-№ 4.-P. 309-315.

213. Handrick W. Infections Hemophilus influenzae «b» /W. Handrick, В. Lenime // Padiat. Und Yrenzgeb. 1997. - Vol. 61. - № 3. - P. 37-49.

214. Hansen E.J. Virulence of Haemophilus influenzae type b. / Hansen E. J. Kimura A. // Microbiol. 1986. - Vol. 3. - № 6. - P. 49-52.

215. Hansen E.J. Lipooligosaccharide and virulence of Haemophilus influenzae. / Hansen E. J. // J. Cell. Biochem. 1987. - Vol. 11. - 105 p.

216. Hardiono D.P. Epidemiologic study of bacterial meningitis in Jakarta and Tangerang: preliminary report / Hardiono D. P., Hanifah O., Dalima A., Fridavati V. // Pediatr. Infect. Dis. J. 1998. - Vol. 17, № 9. - P. 176-178.

217. Harrison Lee H. Epidemiolodgy and clinical spectrum of Brazilian purpuric fever / Harrison Lee h., da Silva Graziela A., Pittman M. // J. Clin. Microbiol. 1989. - Vol.27, № 4. - P. 599-604.

218. Hoan-Jong L. Epidimiology of systemic Haemophilus influenzae disease in Korean children /Hoan-Jong L. // Pediatr. Infect. Dis. J. 1998. - Vol. 17. -P. 185-189.

219. Hobson R.P. Incidence and spread of Haemophilus influenzae on an Antarctic base determined using the polymerase chain reaction / Hobson R.P., Williams A., Rawal K. // Epidemiol. Infec. 1995. - Vol. 114. - P. 93-103.

220. Holmes R.L. Pneumonia associated with Haemophilus influenzae serotype d. /Holmes R.L., Korinn W. // J. Clin. Microbiol. 1983. -Vol. 18. - №3. - P. 730-732.

221. Hong-Sun Lin. Comparison of Haemophilus aegyptius and Haemophilus influenzae biotype III species by enzyme profile using pattern recognition of two-dimensional fluorescence date / Hong-Sun Lin, Gabir P. Chju Pau // Abstr.

222. Pap. 194th ACS Nat Meet (Amer. Chem. Soc.), New Orleans, La, Aug. 30-sept. .-Washington, D. C. 1987. - 129 p.

223. Howard A.J. Nasopharyngeal carriage and antibiotic resistance of Haemophilus influenzae in healthy children. / Howard A.J., Dunkin K.T., Millar G.W. //Epidemiology of Infection. 1998. - Vol. 100. - P. 193-203.

224. Hristeva L. Prospective surveillance of neonatal meningitis / Hristeva L., Booy R., Bower I. // Arch.Dis.Child. 1993. - Vol. 69. - P. 14-18.

225. Hussey G. Epidemiology of post-neonatal bacterial meningitis in cape Town children / Hussey G., Schaaf H., Hanslo D. Coetzee G. // South African Medical Journal. 1997. - Vol. 87. - P. 51-56.

226. Invasive Haemophilus influenzae disease in India: a preliminary report of prospective multihospital surveillance. /IBIS (Invasive bacterial Infections

227. Surveillance) Group (Presented by Steinhoff M.C.) / Pediatr. Infect. Dis. J. -1998. -Vol. 17.-P. 172-175.

228. Isolation of Haemophilus influenzae and Haemophilus parainfluenzae in non-gonococcal urethritis. Abstract of the 15th ECCMID on CD ROM. Amor A., Sanchez Conde M., Portocarrero N., Baquero M., Enriquez A. Dizgraphic -Geneva; 2005. CDI,

229. Jacob John T. Haemophilus influenzae disease in children in India: a hospital perspective / Jacob J.T., Cherian T., Raghupathy P. // Pediatr. Infect. Dis. J. 1998.-Vol. 17.-P. 169-171.

230. Jarosik G.P. A functional ton B gene is required for both utilization of heme and virulence expression by Haemophilus influenzae type b /Jarosik G.P., Sanders J.D., Cope L.D. // Infect. Immun. 1994. - Vol. 62. - P. 2470-2477.

231. Jenkins P. Detection of meningitis antigens in buffer and body fluids by ultrasound-enhanced particle agglutination / Jenkins P., Barnes R.A., Coakley W.T. //Journal of Immunilogical Methods. 1997. - Vol. 205. - P. 191-200.

232. Jordens J.Z. Polymerase chain reaction-based strain characterization of noncapsulate Haemophilus influenzae / Jordens J.Z., leaves N.I., Anderson E.C. Slack M.P.E. //J. Clin Microbiol. 1993.-Vol. 31.-P. 2981-2987.

233. Jorgensen J.H. Activity of clarithromycin and its principal human metabolite against Haemophilus influenzae / Jorgensen J.H., Mäher L.A., Howell A.W. // Antimicrob. Agen. Chemother. 1991. - Vol. 35. - P. 1524-1526.

234. Jorgensen J.H. Quantitative antimicrobial susceptibility testing of Haemophilus influenzae and Streptococcus pneumoniae by using the E-test. / Jorgensen J.H., Howell A.W., Mäher L.A. // J. Clin. Microbiol. 1991. - Vol. 4.-P. 109-114.

235. Kamiya H. Childhood bacterial meningitidis in Japan. /Kamiya H., Uehara S., Kato T., Shiraki K., Togashi T., Morishima T., Goto Y., Saton O. // Pediatr. Infect. Dis. J.-1998-Vol. 17.-P. 183-185.

236. Kawakami Y. Occurrence and biochemical properties of Haemophilus species in pharyngeal flora of healthy individuals / Kawakami Y. Okimura Y. Kanai M. // Microbial. Immunol. 1982. - Vol. 26, № 7. - P. 629-633.

237. Kaynty H. Antibody response to capsular polysaccharides of groups A and C Neisseria meningitidis and Haemophilus influenzae type b during bacteremic disease /Kaynty H., Jousimies-Somer H., Peltola H., Makela P. // J. Infec. Dis. -1981.-№ l.-P. 32-41.

238. Kayhty H. The protective level of serum antibodies to the capsular polysaccharide of Haemophilus influenzae type b / Kayhty H., Peltola N., Karanko V., MaKela P. H. // J. Infec. Dis. 1983 - Vol. 147, № 6. - P. 1100 -1109.

239. Kilian M. Biochemistrytyping Haemophilus influenzae / Kilian M., Sorensen I., Frederiksen W. // J.Clin. Microbiol. 1976. - № 9. - P. 409-415

240. Klein J.O. Role of nontypable Haemophilus influenzae in pediatric respiratory tract infections /Klein J.O. // Pediat. Infec. Dis. J. 1997. - Vol. 2, № 16.-P. 5-8.

241. Koo W. Systemic Haemophilus influenzae infection in childhood / Koo Winston, Oley C., Munro R. // Med. J. Austral. 1982. - № 2. - P. 77-80.

242. Kopacka B. Wlasciowosci chemiczne, immunologiczne I biologinczne endotoksyny paleczek Haemophilus influenzae / Kopacka B., Kuklinska-Michalska D., Wojcik E. // Med. Dosw. Microbiol. 1981. - Vol. 33, №3. - P. 165-172.

243. Kostman J.R. Invasive Haemophilus influenzae infections in older children and adults in Seattle / Kostman J.R., Sherry B.L., Fligner C.L. // Clin. Infect. Dis. 1993. - Vol. 17. - P. 389-396.

244. Kroll J.S. Capsular typing of Haemophilus influenzae with a DNA probe / Kroll J.S., Ely S., Moxon E.R. // Molec. Cell. Prob. 1991. - Vol. 5. - P. 375379.

245. Kroll J.S. Capsule loss in H. influenzae type b occurs by recombination-mediated dispruption of a gene essential for polysaccharide export / Kroll J.S., Hopkins I., Moxon E.R. // Cell. 1988. - Vol. 53. - P. 347-356.

246. Lagergard T. Nature of cross-reacting activity between Haemophilus influenzae types and b with S.pneumonia types 6A and 6B / Ladgergard T., Branefors P. // Acta. path, microbial., Sec C. 1983. - Vol. 91, № 6. - P. 371376.

247. Lanpe R .M. Adherence of H. influenzae to buccel epithelial culls. / Lanpe R.M., Meson L.D. // J. Infec. Dis. 1982. - Vol. 35. - № 1. - P. 166-172.

248. Leake E.R. Peptidoglycan isolated from nontypable Haemophilus influenzae induces experimental otitis media in the chinchilla / Leake E.R., Holmes K.,Lim D.J., DeMaria T.P. // J. Infec. Dis. 1994. - Vol. 170. - P. 1532-1538.

249. Leaves N.I. The elucidation of novel capsular genotypes of Haemophilus influenzae type b using the polymerase chain reaction / Leaves N.I., Falla T.J., Crook D.W.M. // J. Med. Microbiol. 1995. - Vol. 43. - P. 120-124.

250. Leaves N.I. Development of a ribotyping scheme for Haemophilus influenzae type b / Leaves N.I., Jordens J.Z. // Europ. J. Clin. Microb. Infec. Dis.-1994.-Vol. 13.-P. 1038-1045.

251. Lee HJ. Epidemiology of systemic Haemophilus influenzae disease in Korean children. /Lee HJ. // Pediatr. Infect. Dis. J. 1998. - Vol. 17. - P. 185189.

252. Lehmann D. Epidemology of acute respiratory tract infections, especially theose due to Haemophilus influenzae, in Papua New Guinean children / Lehmann D. // J. Infect. Dis. 1992. - Vol. 165. - P. 20-25.

253. Lévesque C. PCR mapping of intergrons reveals several novel combinations of resistance genes / Lévesque C., Piché L., Larose C., Roy P.H. // Antimicrob. Agen. Chemother. 1995.-Vol. 39.-P. 185-191.

254. Levy J. Molecular characterization of resistance plasmids in epidemiologically unrelated strains of multiresistant Haemophilus influenzae / Levy J., Verhaegen G., de Mol P. // J. Infect. Dis. 1993. - Vol. 168. - P. 177187.

255. Lindsay W. Vancomycin supplemented chocolade agar / Linsay W. // Can. J. Med. Technol. 1978. - Vol.40. - № 5. - P. 138-143.

256. Luotonen J. Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae in nasal cultures during acute otits media / Luotonen Jukka // Acta otolaryng. 1982. -Vol. 93, №3. -P. 295-299.

257. Lunpa R.M. Adherence of Haemophilus influenzae to buccal epithelial ceels // R.M. Lunpa, E.D. Meson // Infec. Immun. 1999. - Vol. 35. - P. 166-172.

258. Maclntyre P.B. Epidemiology of bacterian meninginidis in Australia Mac Intyre P.B. // Med. J. Aust. -1987. Vol. 147, № 10. - P. 485-489

259. Machka K. Development of antimicrobial resistance to Haemophilus influenzae in Europe / Machka K. // In: Ringelmann R.: Update on

260. Haemophilus influenzae: how virulence, incidence and resistance affect treatment. Royal Society of medicine Services London. - 1987. - P. 1-9.

261. Manual of clinical microbiology 7th edition. ASM press - Washington D.C.- 1999. - 1773 p.

262. Maresova V. Community-aquired pneumonia in children 1997-2003 / Maresova V., Blechova Z., Läsikova S. // Clin. Microbiol. Infect. — 2004. -Vol. 10.-669 p.

263. Marlene L. Acute bacterial meningitis in adults / Marlene L., Durand M.D., Stephen B. // New EnglJ.Med. 1993. - Vol. 328. - P. 21-28.

264. Mazloum H. A. Diffrentiation Haemophilus aegyptius and Haemophilus influenzae /Mazloum H. A., Killian M. Mohomed Z. M., Said M. D // Acta. Pathol Microbiol. Scand. -1982. № 2. - P. 109-112.

265. Mclntyre P. The outcome of childhood Haemophilus influenzae meningitis. A population based study / Mclntyre P., Jepson R., Leeder S., Irwig L. // Med. J. Austr. 1993. - Vol. 159. - P. 766-772.

266. Megraud F. Haemophilus species in the human gastrointestinal tract. /Megraud F., Bebear C., Dabernat H., Delmas C. // Eur. J. Clin. Microb. -1988 -№3.-P. 437-438.

267. Micheals R.H. Use of antiserum agar for detection of Haemophilus influenzae type b in the pharynx. / Micheals R.H., Stonebraker F.E., Robbius J.B. // Pediatres. 1975. - № 5. - P. 513-516.

268. Misbah S.A. Antipolysacchsride antibodies in 450 children with otits media. /Misbah S.A., Griffiths H., Mitchell T., Freeland A., Haeney M.R., Chapel H.M. // Clin. Exp. Immunol. 1997. - Vol. 109. - P. 67-72.

269. Mohs E. A comparative study of azithromycin and amoxicillin in paediatric patients with acute otitis media / Mohs E., Rodriguez-Solares E., Rivas E., El Hoshy Z. // J Antimicrob. Chemother. 1999. - Vol. 31. - P. 73-79.

270. Moxon T.R. Clinical usefulness of cerebrospinal fluid bacterial antigen studies. /Maxon S., Lewno M.J., Schutcze G.e. // J. Pediat. 1994. - Vol. 125.-P. 235-238.

271. Moxon E.R. The carrier state: Haemophilus influenzae / Moxon E.R. // J. Antimicrob. Chemother. 1986. - Vol. 18. - P. 17- 24.

272. Moxon E.R. The role of bacterial polysacchride capsules as virulence factors / Moxon E.R., Kroll J.S. // Cur. Top. Microbiol. Immunol. 1990. -Vol. 150.-P. 65-85.

273. Moxon E.R. The role of Haemophilus influenzae in the pathologenesis of pneumonia v/ Moxon E.R., Wilson R. // Rev. Infect. Dis. 1991. - Vol. 13. -P. 518-527.

274. Moxon E.R. The losing hearing after meningitis by Haemophilus influenzae / Moxon E.R., Wilson R. // An. Otol. Rhinol. Laryng. 1992. - № 3.-P. 272- 276.

275. Murphy T.F. Invasive Haemophilus influenzae infections in adults. Anoher clinical pearl down the drain / Murphy T.F. // Infect. Dis. Clin. Pract. -1994. Vol. 3.-P. 41-43.

276. Murphy T.F. Nontypable Haemophilus influenzae: a review of clinical aspects, surface antigens, and the human immune response to infection / Murphy T.F., Apicella M.A. // Rev. Infect. Dis. 1987. - Vol. 9. - P. 1-14.

277. Murphy T.V. Declining incidence of Haemophilus influenzae type b disease since introduction of vaccination / Murphy T.V., White K.E., Pastor P. // J. Amer. Med. Associat. 1993. - Vol. 269. - P. 246-248.

278. Musser J.M. Global genetic structure and molecular epidemiology of encapsulated Haemophilus influenzae / Musser J.M., Kroll J.S., Granoff D.M. // Rev. Infect. Dis. 1990. - Vol. 12. - P. 75-111.

279. Musser J.M. Molecular epidemiology of encapsulated Haemophilus influenzae / Musser J.M., Kroll J.S., Granoff D.M. // Rev. Infect. Dis. -1989. Vol. 10.-P. 51-61.

280. Nazareth B. A survey of invasive Haemophilus influenzae infections / Nazareth B., Slack M.P.E., Howard A. J. // Commun. Dis. Rep. CDR Review. 1992. - Vol. 2. - P. 13-16.

281. Noel G. J. Compelement-mediated early clearance of Haemophilus influenzae type b from blood in independent of serum lytic activity / Noel G. J., Katz S., EdelsonP. J. // J. Infect. Dis 1988. - Vol. 157, № 1. - 85-90.

282. Olsson-Liljequist B. In vitro activity of clarithromycin combined with its 14-hydroxy metabolite A-62671 against Haemophilus influenzae / Olsson-Liljequist В., Hoffman B.M. //J. Antimicrob Chemother. 1991. - Vol. 27. -P. 11-17.

283. Ouchi K. Chlamydia pneumoniae infection and Mycoplasma pneumoniae infection in pediatric patients / Ouchi K., Komura H., Fujii M. // Kansens. Zas. 1999. - Vol. 73. - P. 1177-1182.

284. Page R. Immunefluorescention in diagnostics bacteriology /Page R., Caldrony B. // Amer. J. Dis. Child. 1961. - Vol. 101. - № 2. - P. 155-159.

285. Pannuti C. Nosocomial pneumonia in patients' heving bone marrow transplant: attribute mortality and risk factors / Pannuti C., Gingrich R., PfallerM.A. // Cancer. 1992. - Vol. 69. - P. 1318-1324.

286. Patterns of susceptibility of Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae at a university hospital. Электронный ресурс. /Daoud Z. Hanna N. Cjcjsaki A. Nakime N. // Beirut LBN / P1461 Abstract of the 15th

287. PCR-based surveillance in five districts in Burkina Faso and Togo duringthe 2003-04 epidemic seasons. Electronical resource. /Aguilera J.F., lourd

288. M., YAro S., Adjogble K., Traore Y., Lafourcade В., Ouedraogo M.,1.blond A., Gessner В., // Paris. F; Bobo Dioulasso, BF; Lome, TG;th

289. Peltola H. Haemophilus influenzae in the post-vaccination era. // Lancet 1993.-№8849.-P. 864-865.

290. Pennington Т.Н. Haemophylus species and clones / Pennington Т.Н. //Reviews in Medical Microbiology. 1993. - Vol. 4. - P. 50-59.

291. Philips E.J. Bacterial meningitis in children and adults / Philips E. J., Simor A.E. // Postgraduate Medicine. New York: McGrawHill -1998. -Vol. 103.-P. 645-659.

292. Pichichero M.E. Relationship between naturally occurring humon mucosal and sereum antibody to the capsular polysaccharide of Haemophilus influenzae type b / Pichichero M. E., Insel K. A. //J. Infect. Dis. 1982. - Vol. 14B, № 2. - P. 243-248.

293. Pinon G. Infections genitals a Haemophilus influenzae / Pinon G., Quentin r., Lansac J. // J. Infect. Dis. 1981.-№ 11. - P. 597-599

294. Pittman M. Variation and type specificity in the bacterial species Haemophilus influenzae. // J. Exp. Med. 1931. - Vol. 53. - P. 471-495.

295. Powars D. Is there an increased risk of Haemophilus influenzae septicemia in children with sickle cell anemia? / Powars D., Overturf G., Turner E. // Pediatr. 1983. - № 6. - P. 927-931.

296. Powell M. Antimicrobial resistance in Haemophilus influenzae / Powell M. // J. Med Microbiol. 1988. - Vol. 27. - P. 81-87.

297. Powell M. Antimicrobial resistance in Haemophilus influenzae from England and Scotland in 1991 / Powell M, Fah Y.S., Seymour A. // J. Antimicrob. Chemother. 1992. - Vol. 29. - P. 547-554.

298. Powell M. Detection of ampicillin resistant to Haemophilus influenzae in United Kingdom laboratories / Powell M., Williams J.D. // J. Clin. Pathol. -1998.-Vol. 41.-P. 716-719.

299. Quagliarello V. Bacterial meningitis: Pathogenesis, pathophysiology, and progress / Quagliarello V., Scheld W.M. // New Engl. J. Med. 1992. - Vol. 327.-P. 864-869.

300. Quentin R. Genetic characterization of a cryptic genospecies of Haemophilus causing urogenital end neonatal infections / Quentin R., Martin C., Musser J.M. // J. Clin. Microbiol. 1993. - Vol. 31. - P. 1111 -1116.

301. Quraishy M.S. Pathogenic bacterial organisms in conjunctivitis in Uganda. / Quraishy M.S., Ali M.W. // Ann. Opthalmol. 1981. -Vol. 13. - № 5. - P. 573574.

302. Ramirez J.A. Serious infections and fluoroquinolones / Ramirez J.A., Morrisey I., Ambler J.E. // Science Press Ltd. 2002. - 84 P.

303. Rao V.K. Molecular determinats of the pathogenesis of disease due to non-typable Haemophilus influenzae / Roa V.K., Krasan G.P., Hendrixson D.R., Dawed S., Joseph W. St. Geme III // FEMS Microbiol. Rev. 1999. - Vol. 23. P. 99-129.

304. Read R.C. Bacterial infections of the respiratory tract. In: Topley and Wilson's Microbiology and Microbial Infections. Edited by WJ Hausler and M

305. Sussman / Read R.C., Finch R.C. / London, Edward Arnold. 1998. - P. 319347.

306. Read R.C. Respiratory tract inflectional and fluoroquinolones / Read R.C., Morrissey I., Ambler J.E. // Second edition. Science Press Ltd. 2002. - 85 p.

307. Reid A.J. Ampicillin resistance in Haemophilus influenzae: identification of resistance mechanisms / Reid A.J., Simpson I.N., Harper P.B., Amyes S.G.B. // J. Antimicrib. Chemother. 1987. - Vol. 20. - P. 645-656.

308. Rey M. Vaccine of bacterial meningitis in Africa. / Rey M. // Ann. Soc. Beige. Med. Trop. 1999. - Vol. 60. - №3. - P. 237-252.

309. Richardson M.P. Hearing loss during bacterial meningitis / Richardson M.P., Reid A., Tarlow M.J., Rudd P.T. // Arch. Dis. Child. 1997. - Vol. 76. - P. 134-138.

310. Roberts M. Adherence of Haemophilus influenzae to monkey respiratory tissue in organ culture / Roberts M., Jacobs R.F., Haas J.E., Smith.A.L. // J. Gen. Microbiol. 1984. - Vol. 130. - № 6. - P. 1437-1447.

311. Rodriguez-Avial C. Presence of TEM-1 and ROB-1 beta-lactamases in Haemophilus influenzae. Correlation with betalam resistance / Rodriguez-Avial C., Rodriguez-Avial I., Fernandez M.E. // Clin. Microbiol. Infect. 2004. -Vol. 10.-561 P.

312. Roord J.J. The induction of meningeal inflammation and blood-brain bariier permeability by Haemophilus influenzae type b peptidoglycan / Roord J.J., Apicella M., Scheid W.M. // J. Infect. Dis. 1994. - Vol. 170. - P. 254-256.

313. Roo W. Systemic Haemophilus influenzae in childhood /Roo W., Oley C., Munro R., Tomlinson P. // Med. J. Austral. 1982. - Vol. 2. - № 2. - P. 77- 80.

314. Rubin L.G. Pneumococcal and Haemophilus influenzae type b antigen detection in children at risk for occult bacteraemia. / L.G. Rubin, Carmody L. // Pediatr. 1987. - Vol. 80. - №1. - P. 92-96.

315. Rubin L.G. Role lipooligosaccharide in virulence of the Brazilian purpuric fever clone of Haemophilus influenzae biogroup aegiptius for infant rats / Rubin L.G., St. Gerne J.W. // Infect. Immun. 1993. - Vol. 61. - P. 650-655.

316. Rubin L.G. Ampicillin treatment failure of apparently ß-lactamase-negative Haemophilus influenzae type b meningitis due to novel ß-lactamase / Rubin L.G., Medeiros A.A., Yolken R.H., Moxon E.R. // Lancet. 1981. - Vol. 11.-P. 1008-1010.

317. Salisbury D.M. Summary statement: The First International Conference on Haemophilus influenzae type b infection in Asia. /Salisbury D.M. // Pediatr. Infect. Dis. J. 1998. - Vol. 17. - P. 93-95.

318. Salwen K.M. H. influenzae meningitidis in Swidem (1956-1980rr.) / Sal wen K.M. // Scand. J. Infect. 1987.-Vol. 19. - № l.-P. 1-11.

319. Sanders J.D. Reconstitution of a porindeficient mutant of Haemophilus influenzae type b with a porin gene from nontypeable H. Influenzae / Sanders J.D., Cope L.D., Jarosik G.P. // Infect. Immun. 1993. - Vol. 61. - P. 39663975.

320. Saruta K. Simultaneous detection of Streptococcus pneumoniae and Haemophilus influenzae by nested PCR amplification from cerebrospinal fluid samples / Saruta K., Matsunaga T., Kono M. // FEMS Imm. Medic. Microbiol. -1997.-Vol. 19.-P. 151-157.

321. Schhat A. Bacterial meningitis in the United States in 1995. Active Surveillance Team / Schhat A., Robinson K., Wenger J.D. // New Engl. J. Med. 1997. - Vol. 337 - P. 970-971.

322. Schito G.C. The Alexander Project Group Trends in the activity of macrolide and (3-lactam antibiotics and resistance development / Schito G.C., Mannelli S., Pesce A. // J Chemother. 1997. - Vol. 9. - P. 18-28.

323. Scriver S.R. Surveillance of susceptibility testing methodologies for Haemophilus influenzae in Canada, including evolution of disk diffusion test / Scriver S.R., Hoban D.J., McGeer A. // J. Clin. Microbiol. 1994. - Vol. 32. -P. 2013-2015.

324. Semczuk K. Characterisation of Haemophilus influenzae strains isolated from noninvasive and invasive infections in children / Semczuk K., Modrzewska M., Dzierzanovska-Fangrat K. // Clin. Microbiol. Infect. 2004. -Vol. 10.-569 P.

325. Shively R.G. Typing of Haemophilus influenzae coagglution and conventional slide agglunation / Shively R.G., Shigei J.T., Peterson E.M. // J. Clin. Microb.-1981. Vol. 14. - №16. - P. 706-708.

326. Sigurdardottir B. Acute bacterial meningitis. A 20-yeaar overview / Sigurdardottir B., Bjornsson O.M., Bouer F. // Arch.Inter.Med. 1997. -Vol. 157.-P. 425-429.

327. Silkes T. Progressing loss nof hearing meningitis caused Haemophilus influezae. / Silker E.D., Chabot J. // Int. J Pediat. Otorhinolar. 1985. - Vol. 9. -№ 3. -P. 249-256.

328. Slack M. P.E. A rapid test for ß-lactamase production by Haemophilus influenzae / Slack M.P.E., Wheldon D.B., Turk D.C. // Lancet. 1977. -Vol. 29.-P. 904-905.

329. Slack M.P.E. Invasive Haemophilus influenzae- disease: the impact of Hib immunization / Slack M.P.E. // J. Med. Microbiol. 1998. - Vol. 42. -P. 75-77.

330. Slack M.P.E. Molecular and epidemiological aspects of Haemophilus influenzae infection / Slack M.P.E., Crook D.W.M., Jordens J.Z. // Public Health Laboratory Servise Microbiol. Digest. 1993. - Vol. 10. - P. 122128.

331. SlaterL.N.Bacteremic disease due to Haemophilus influenzaecapsular type f in adults: report of cases and revier/ Slater L.N., Guarnaccia J. // Rev. Infect. Dis. 1990. - Vol. 12. - P. 628-635.

332. Smith A. L. Is Haemophilus influenzae meningitis contagious? / Smith A.L. //N. Engl. J. Med. 1979. -Vol. 301. -№3. - P. 155-156.

333. Smith-Vaughan H.C. Long PCR-ribotyping of nontypeable Haemophilus influenzae / Smith-Vaughan H.C., Sriprakash K.S., Mathews J.D., Kemp DJ. // J. Clin. Microbiol. 1995. - Vol. 33. - P. 1192-1195.

334. Snell J.J.S. Problems in susceptibility testing findings of UK NEQAS for microbiology / Snell J.J.S. // J. Antimicrob. Chemother. - 1994. - Vol. 33.-P. 1-6.

335. Steinhart R. Invasive Haemophilus influenzae infections in men with HIV infection / Steinhart R., Reingold A.L. // J. Amer. Med. Assoc. 1992. -Vol. 268.-P. 3350-3352.

336. Stein L.K. Progress in the prevention of hearing loss in infants. /Stein L.P., Boy er K.M. // Ear hear.-1994. Vol. 15.-P. 116-125.

337. Steinum О. Culture from epipharynxx of little value in bacterial pneumonia. / Steinum О., Alesting К., Brorson J.E., // Scand. J. Infec. Dis. -1987. Vol. 19. - №3. - P. 309-312.

338. Sulikowska A. Dynamics of nasopharengeal colonization by Haemophilus influenzae in infants and young children /Sulikowska A., Mröwka A., Hrynewicz W. // Clin. Microbiol. Infect. 2004. - Vol. 10. - P. 395.

339. Sunakawa K. Prevalence of antimicrobial resistance and activity of the ketilyde telithromycin against Haemophilus influenzae isolated from Japanese children / Sunakawa K., Farell D. // Clin. Microbiol. Infect. 2004. -Vol. 10. — 116 p.

340. RAM, 12 Mb hard disk space CD-ROM driver; VGA 256; Sound Blaster; Adobe Acrobat Reader 5.0. Загл. с контейнера.

341. Swaminathan В. Micjrbiology of Brazilian purpuric fever and tests / Swaminathan В., Mayer L. W., Ajello G. W. // J. Clin. Microbiol. 1989. - Vol. 27. - № 4. - P. 605-608.

342. Tai J.Y. Haemophilus influenzae type b polysaccharide protein conjugate vaccine / Tai J. Y., Vella P. P., McLean A. A. // Proc. Soc. Exp. Biol. And Med. - 1987. - Vol. 184. - № 2. - P. 154-161.

343. Takala A.K. Haemophilus influenzae type b strains of outer membrane subtypes 1 and lc cause different types of invasive disease. /Takala A.K., Eskola J., Bol P., van AlphenL., Palmgren J., M. P. Helena. // Lancet 1987. -№ 8560. - P. 647-650.

344. Takala A.K. Clements D.A. Socioeconomic risk factors for invasive Haemophilus influenzae type b disease / Takala A.K. // J. Infect. Dis. 1992. -Vol. 165.-P. 11-15.

345. Tebbutt G.M. A chemotyping scheme for clinical isolates of Haemophilus influenzae / Tebbutt G. M. // J. Med. Microbiol. 1984. -Vol. 17. - № 3. - P. 335-345.

346. Tenover F.C. Development of PCR assays to detect ampicillin resistance genes in cerebrospinal fluid samples containing Haemophilus influenzae / Tenover F.C., Huang M.B., Rasheed J.K., Persing D.H. // J. Clin. Microbiol. -1994. Vol. 32. - P. 2729-2737.

347. RAM, 12 Mb hard disk space CD-ROM driver; VGA 256; Sound Blaster; Adobe Acrobat Reader 5.0. Загл. с контейнера.

348. Tiller F.W. Serotyping of Haemophilus influenzae / Tiller F.W. // J. Hyg. Epid. Microb. Immun.-1981. №1. - P. 14-19.

349. Tunkel A.R. Pathogenesis end pat physiology of bacterial meningitis / Tunkel A.R., Scheld W.M. // Clin. Microbiol. Rev. 1993. - Vol. 6. - P. 118136.

350. Turk D.C. Haemophilus influenzae: its clinical importance / Turk D.C., May J.R. // Engl. Univers. Press, London. 1967. - 134 P.

351. Turk D.C. Capsulated Haemophilus influenzae and bronchiectasis. /Turk D.C. and Holdaway M.D. // J. Med. Microbiol. 1968. - Vol. 1. - P. 79-88.

352. Vaccines and Biologicals. Haemophilus influenzae type b (Hib) meningitis in the pre- vaccine era: a global review of incidence, age distributions, and case-fatality rates // WHO. 2002. - 224 P.

353. Van Alphen L. Differences in genetic diversity of nonecapsulated Haemophilus influenzae from various diseases, /van Alphen L., Caugant D.A., Duim B., O'Rourke M., Bowler L.D. // Microbiol. 1997. - Vol. 143. - P. 1423-1431.

354. Van Alphen L. Non-typable Haemophilus influenzae invasive disease / van Alphen L., Spanjaard L., Dankert J. // Lancet. 1993. - Vol. 341.- 1536 P.

355. Van Ketel RJ. Detection of Haemophilus influenzae in cerebrospinal fluids by polymerase chain reaction DNA amplification / van Ketel R.J., de Wever B., van Alphen L. / J. Med. Microbiol. 1990. - Vol. 33. - P. 271-276.

356. Veneria, R. A. Produce antibody of Haemophilus influenzae /Veneria R. A., RRobertson R.G. // Canad. J. Microbiol. 1975. - Vol. 21. - № 10. - P. 15871594

357. Waggoner-Fountain L. The emergence of Haemophilus influenzae types e and f as significant pathogens / Waggoner-Fountain L., Hendley J.O., Cody E.J., Perriello V.A., Donowitz L.G. // Clin. Infec. Diseases. 1995. -Vol. 21. -№5.-P. 1322-1324.

358. Wald E.R. Conjunctivitis in infants and children. /Wald E.R. // Pediatr. Infect. Dis. J. 1997. - № 16. - P. 17-20.

359. Wall R.A. Haemophilus influenzae non type b / Wall R.A., Mabey D.C.W., Corrah P.T. // Lancet. 1985. - 845 P.

360. Wall R.A. Low nasopharyngeal carriage and high ampicillin resistance of Haemophilus influenzae type b among children in Taiwan / Wall R.A., Mabey D.C.W., Corrah P.T. // Clin. Microbiol. Infect. 2004. - Vol. 10. - P. 579.

361. Ward J.I. Invasive Haemophilus influenzae type b disease in Alaska: background epidemiology for a vaccine efficacy trial / Ward J.I., Lum M.K.W., Hall D.B. // J. Infect. Diseas. 1986. - Vol. 153. - 17-26.

362. Waris M.E. Diagnosis of M. pneumoniae in children / Waris M.E., Toikka P., Saarinen T.//J. Clin Microbiol. 1998. - Vol. 36.-P. 3155-3159.

363. Weber A. Inability to express fimbriae results in impaired ability of Haemophilus influenzae b to colonize the nasopharynx / Weber A., Harris K. Lohrke S. // Infect. Immunol. 1999. - Vol. 59. - P. 4724-4728.

364. Weinberg G.A. Clonally analysis of Haemophilus influenzae isolated from children from Pakistan with lower respiratory tract infections / Weinberg G.A., Ghafoor A., Ishaq Z. // J. Infect. Dis. 1989. - Vol. 160. - P. 634-643.

365. Weiser J.N.Relattionship between colony morphology and the life cycle of Haemophilus influenzae: the contribution of lipopolyusaccharide phase variation to pathogenesis / Weiser J.N. // J. Infect. Dis. 1993. - Vol. 168. - P. 672-680.

366. Wenger J.D. Epidemiology of Haemophilus influenzae type b disease, and impact of Haemophilus influenzae type b conjugate vaccines in the United States and Canada. / Wenger J.D. // Pediatr. Infect. Dis. J. - 1998.-Vol. 17.- P. 132-136

367. Yang Y. Study on Haemophilus influenzae type b disease in China: the past, present and future. / Yang Y., Shen X., Jiang Z., Liu X., Leng Z., Lu D., Rao J., Lui J., Chang L.//Pediatr. Infect. Dis. J. 1998. - Vol. 17.-P. 159-165.