Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Микробиологическая и генетическая характеристика лекарственноустойчивых возбудителей сальмонеллезов

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микробиологическая и генетическая характеристика лекарственноустойчивых возбудителей сальмонеллезов"

АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СССР НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВАКЦИН И СЫВОРОТОК им. И.И.МЕЧНИКОВА

На правах рукописи

ГРИДНЕВ Вячеслав Александрович

УДК 616.981.49-097.22:575.1

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ И ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕКАРСТВЕННОУСТОЙЧИВЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ

03.00.07 — микробиология

А в то реферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва — 1990

Работа выполнена в Хабаровском научно-исследовательском .институте эпидемиологии и микробиологии"и" Хабаровском ' государственном' фармацевтическом институте' Министерства здравоохранения РСФСР

Официальные оппоненты:

1. Доктор медицинских наук, профессор В.Г.ЖЩЩЦ.

2. Доктор медицинских наук., профессор А.С.ШКОВ.

3. Доктор биологических наук, профессор И.А.ЕАСНШЯН.

Ведущая организация - Центральный научно-исследовательский институт .¡эпидемиологии Министерства здравоохранения СССР

Защита состоится " 3/ " 199/ г. в /1 час.

на заседании Саециализированного Ученого совета ( Д 074.22.01) при Центральном научно-исследовательском институте вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова Сг.Москва, дер. Мечникова, 5а)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотека института.

Автореферат разослан* " / " ¿ГуС*^**^¿Л/1№0 г.

• Ученый секретарь Специализированного Ученого совета, кандидат медицинских наук

Н.Г.КУДРЯВЦЕВА

Актуальность проблемы. Отсутствие тенденции к. снижению заболеваемости сальмонеллезами в нашей стране и за рубежом, обусловленной в последнее десятилетие чаще лекарственноустойчивыма возбудителями, чрезвычайное многообразие этиологических я клинических форм, заметное увеличение обсемененности сальмонеллами объектов внешней среда, возникновение всшшек внутри больничной инфекции, протекающей нередко,с высокой летальностью, определяет необходимость совершенствования системы диагностических и лечебно-профилактических шролриятийШокровский В.И. с соавт., 1982, 1986;БЛо-хина H.H. с соавт., 1984; Петровская В.Г., 1984; Нарневич М.Н. с соавт., 1989; QieruMn С. , 1981; Шву L. et al . , 1984; Taylor D. et Л. , 1984J Hadfield T. et al. , 1985; Cohen M . et al. ,1987* др.). Особую актуальность для современной медицины и ветеринарии приобретает проблема множественной лекарственной устойчивости микроорганизмов, которая является, как признано сейчас, глобальным явлением и требует глубокого и всестороннего исследования(Нава-вшн С.М.,1984, 1985).

Однако недостаточная изученность экология, биологических и генетических свойств лекарственнорвзистентных сальмонелл, природа, структуры и уровней их лекарственной устойчивости в конверсии эпидемического и 'инфекционного процессов, идентификационных и дифференцирующих характеристик возоудителей, молекулярной биологии я плазмид энтеробактерий при госпитальной инфекции затрудняет, как показывает практика, решение важной народнохозяйственной проблемы "Совершенствования бактериологической диагностики сальмонеллезов".

Цель исследования состояла в совершенствовании бактериологической диагностики сальмонеллезов на основе изучения биологии возбудителей^ генетики их лекарственной резистентности.

Задачи исследования;;

I. Установить природу, структуру, уровни лекарственной устой-

чивости сальмонелл, выделенных при различных эпидемических ситуациях, основные закономерности в развитии эпидемического процесса сальмонелл <?зов.

2. Изучить взаимосвязь между разной природой лекарственной устойчивости и другими биологическими свойствами гепатогенный и адаптированных преимущественно к. организму человек^ озроаароз сальмонелл, классифицировать конъюгагивше н-плазмидо энтеробакгерк* при госпитальной инфекции.

3. Определить влияние детерминантов лекарственной устойчивости разной природа на показатели роста и размножения энтеробакте-рий, идентификационные характеристики, продукцию ферментативно-токсических веществ, вирулентность и чувствительность к. бактериофагам возбудителей сальмонеллезов.

4. Исследовать влияние биологических особенностей возбудителей госпитальной инфекции на состояние аэробной микрофлоры кишечника детей раннего возраста и лекарственной резистентности условно-патогенных пчтеробактерий.

5. Повысить результативность бактериологической диагностики сальмонеллезов путем применения для идентификации родов кишечного семейства кардинальных дифференциально-диагностических тестов, комплекса биологических свойств возбудителей и генетики их лекарственной устойчивости.

Научная новизна.

1. Установлена диагностическая и эпидемиологическая значимость множественной и конъюгативной природа лекарственной устойчивости возоудателей сальмонеллезов, из которых 16 сороваров сальмонелл групп В, С, Д, Е дополнительно дифференцированы на 48 генетически маркированных варианта, тождественных чаще 2, г-урМшт^ит.

2. Уточнена и дополнена классификация о. ^рМпиМ-ши на би-овары выделением "госпитальных" возбудителей в качестве варианта

биовара II , который характеризуется комплексом биологических осо-

В

бенностей в спектром конъюгативных r -плазмид лик групп несовместимости с молекулярной массой соответственно 64 и 32,3 ВД и неконыогативной - около 2 ВД.

3. Показана шлекулярно-ганетическая идентичность конъюгатив-ных в -плазмид ine PI группы, разлетающихся эксцрессированннми и неэкспрессированными детерминантами лекарственной устойчивости.

4. Установлена под влиянием конъюгативных r-плазмид варианта биовара II,, s. typbifflurlum конверсия лекарственной резистентно-

д

ста, фаговаров, вирулентности при снижении ее у стрептомицинорезис-тентных мутантов, некоторых не имеющих значения для идентификации и дифференцирования ферментативных и серологических свойств возбудителей сальмонеллезов, кинетики роста кишечной палочки при удлинении, плазмидами лаг-периода, времени генерации плазмидами in с Fi группы с молекулярной массой 64 ВД и укорочении продолжительности генерации плазмидами ine м группы с молекулярной массой 32,3 ВД.

5. Определена структурная и функциональная характеристика аэробного биоценоза кишечника детей раннего возраста при внутри-больничном сальмонеллезе, низкая антагонистическая активность микрофлоры при высокой s. typhicurl\us варианта биовара II я , условно-патогенные энтеробактерии которой аккуцуйяровали конъюгативныв н -ллазмиды, молекулярно-генемгчески идентичные возбудителю госпитальной инфекции.

Практическая ценность заключалась в разработке, усовершенствовании с применением предложенных приспособлений 14 способов изучения биологических свойств и генетики лекарственной устойчивости сальмонелл, изданием 5 методических рекомендаций для практических органов здравоохранения Дальнего Востока, ГСЗУ и Управления лечебно-профилактической помощи детям и матерям МЗ РСФСР. В работу органов здравоохранения внедрены "Способ первичной идентификация воз-

будителей сальмонеллезов" на основании использования комплекса из 10 дифференциально-диагностических тестов; "Способ диагностики варианта биовара II н з. гурЫдыг^шп " на основании комплекса биологических свойств а нонъкгативной природы лекарственной устойчивости; "Способ маркирования в эпидемиологических целях лекарственно-устойчивых возбудителей сальмонеллезов по их кошыогатнвным и некон

гагативнда г -детерминантам". Это усовершенствовало бактериологи»

ческую диагностику, эпидемиологический анализ и профилактику саль-монеллезов, снизив уровень ошибочных' лабораторных заключений в пра ктических лечебно-профилактических учреждениях с 38,8 до Ъ-1%. Результата работы внедрены в практическую деятельность ю лечебно-профилактических, научных и педагогических учреждений страны.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены: на научных конференциях Хабаровского НИИЭМ, Хабаровского государствен' ного фармацевтического института, Хабаровского отделения Всероссийского научного общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, научно-практических конференциях и семинарах для врачей Хабаровского края, Амурской, Магаданской, Камчатской и Сахалинской об, ластей, Республиканском семинаре "Новые методы лабораторной диагностики кишечных инфекций"(Хабаровск, 1982 г.), Пленумах проблемной к6миссил"Кишечные инфекции"(Ленинград, 1978,1982 гг.), Пленуме Всесоюзной проблемной комиссии "Медицинская микробиология" (Тернололь, 1983 г.), Пленуме лабораторного Совета МЗ СССР(Воронеж, 1977 г.), 17 Всероссийском съезде эпидемиологов и микробиологов (Волгоград, 1978 г.). Диссертация обсуждена и одобрена на научной конференции институтов(Хабаровск, 1989 г.).

Публикации. Основное содержание работа отражено в 36 опубликованных статьях и 5 методических рекомендациях.

Подожедвд, родимте НА ЗЭДИту:

I. "Госпитальные" штаммы б. 1ур11±гаиг1ит - вариант биовара

II представляют клон возбудителей, адаптированный только к орган

низму 'человека преимущественно детей раннего возраста.

2. Значительный рост внутрибольничной заболеваемости детей обусловлен вариантом бловара II к г. ЪурЬ1тг1ип , который диагностируется и дифференцируется на основании комплекса биологических особенностей и не-формируется при приобретении лишь я -плазмид..

3. Конъюгативная к -длазмидная устойчивость не изменяет идентификационные характеристики возбудителей еальмонеллезов, вызывает конверсию лекарственной устойчивости, фаговаров, кинетики роста,ви-' рулентности при снижении ее у стрептомицинорезистентных мутантов.

4. Вариант биовара II з.ъурЫ>а1г1ии вызывает структурные из-

к

менения в аэробном биоценозе кишечника детей раннего возраста, длительно дерсистирует в организме человека, снижает антагонистическую активность микрофлоры, условно-патогенные энтеробактерии которой приобретают конъюгатявные н -плазмида, моленулярно-генетически идентичные возбудителю "госпитального" сальмонеллеза.

Объем и структура диооеитапил. Диссертация состоит из введения, главы с описанием материалов и методов исследования, шести глав собственных исследований с обзором литературы, заключения, выводов, рекомендаций для практического внедрения и списка литературы, содержащего 456 ссылки, в том числе 273 на отечественные и 183 на иностранные источники, иллюстрирована 47 таблицами, 15 рисунками, изложена на 402 страницах.

МШВШЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучена биология 7946 штаммов энтеробактерий, принадлежность которых установлена к 8 родам и 123 видам-, сероварам, возбудители еальмонеллезов составили 80,0$. Подавляющее большинство (93,6$) энтеробактерий выделены в Хабаровском крае при различных эпидемических ситуациях в 1958-1984 гг., 497 штаммов поступили из Магаданской, Камчатской, Сахалинской, Амурской областей и Приморского края.

Проведен эпадемиолого-статистический анализ 5130 подтвержденных бактериологически случаев заболеваний сальмонеллезаыи и носитель-ства, зарегистрированных в течение 30 дет (1960-1989 гг.) в Хабаровске, состояние бактериологической диагностики кишечных инфекций проанализировано в 26 лабораториях СЭС и лечебно-профилактических объединений в Хабаровске, Комсошльск.е-на-Аыурв. На сальмонеллоно-ситвльство обследованы сотрудники Хабаровского мясокомбината, от которых изучено 4962 пробы испражнений и моча, а также поступившие на мясокомбинат в этот период 6136 голов крупного рогатого скота, свиней и кур. В соответствии с задачами исследования селекционированы из 17 лекарственночувствительных штаммов б, гурЫдмгЛша , Б.р*-ггЬурЫ В , з.коиъив их ангибиотикорезистентные мутанты. На основе части исходных штаммов и устойчивых к стрептомицину мутантов получили 54 их н+ -трансконъюганта, содержащих стандартные и дикие и -плазмиды разных Зло групп. Состояние микрофлоры кишечника исследовали по Р.В.Эшатойн-Литвак., Ф.Л.Вильианской(1977) у 117 детей раннего возраста (57. - здоровых и. 60 - больных госпитальной

сальмонеллезной инфекцией), от'которых изучили 266 микробных ассо-

1 ' *

циаций и 1549 штаммов энтеробактврий. Стафилококки.л Энтерококки идентифицировали до рода и вида, дрозшеподобные грибы и бифидобак-терии - до рода.

При определения резистентности энтвробактерий и маркировании а -ллазмид использовали 17 препаратов: бензилпенициллин( Рп ), ампициллине Др ), карбеницшшш( Сра ), стрептомицине ав), неомиция <ги )шномицин( ш ), канамицнн( Ев), гента\шцнд( Ош), хлораЦй— никйд/левошцетияС Со ), тетрациклин( Тс), окситетрацшшшС тн ), морфоцшоинС Ко ), эри.трошщин( Еа), полимйксин В( Ри ), сульфаниламид^ зи)," рифампицин( и.? ) и налидаксовую кислоту( н«х ) в соответствии о Методическими указаниями по применению унифицированных клинических методов ясоледовакий(1976). Уровни резистентности изу-

чали'методом двукратных серийных разведений в плотной с применением штампа-репликатора и жидкой питательных средах. Природа, струя.-.. тура и уровни лекарственной резистентности исследованы у 4801 штамма сальмонелл 57 сероваров и 1125 других энтеробактерий, стабильность этих показателей у 64 "госпитальных" штаммов и 186 антибиотико-резистентных мутантов. Изучено также 1063 клона штаммов s.typhira-riura 7в 103 , VG757 , VG769 , VG1263 , I6I/28I И S.paratyphi В 1341. Для определения латогенности, вирулентности и инвазивности ЛИШЬ 197 штаммов S. typhirauriun , S.paratyphi В , S.kottbua И 54 их п+ -трансконъюгантов использовано более 5645 белых мышей, у которых исследована динамика инфекционного процесса, степень обсеме-ненности сальмоне-ллами паренхиматозных органов, крови, ретикулоэн-потелиальной системы и селезеночный индекс. Наиболее детально изу- ' ченн биологические и генетические характеристики сероваров s.typhi-murium , S.paratyphi'В , S.kottbua и изменение ИХ ПОД влиянием детерминантов лекарственной устойчивости разной природы.

Молекулярно-генетические свойства определены у 87 конъюгатив-ных. r-плазмид 35 штаммов, классифицированы 44 плазмиды 16 - s. ty-phimuriura и 10 - патогенных и условно-патогенных е.coli. Исследовано влияние 13 конъюгативщх в -плазмид, в том числе стандартных язаб (In© Р1 ) I НР1 (Ine Р), Йб21а (Ino 10 изученных моле-

кулярно-генетически, изолированных из 7 штаммов з. typhimurium , 2 - ai, sonn ei • I - Sh. fLemeri 3« , на идентификационные и дифференцирующие свойства чувствительных и антибиотикорезистентных S. typliirairiura » S.paratyphi В , S.kottbua И на КИНетИКу роста КИшечной палочка. Последняя исследована по Д.Мейнелл, Э.Мейнелл(1967), Д.Миллер(1976) с применением фотоэлектрического колориметра.

Конъюгативные r -плазмиды энтеробактерий изолировали по T.wa-tanabe, T.Fükaaawa (1961), селективные среда содержали в конечной концентрации raif (250 мкг/ia), н«1 (100 мкг/мл), Рп Ар , Срс

(300-350 МНГ/W), Nm , Mra , Km , Cm ,Em (128 МКг/ыл), Su (ЮОмКГ/мл), Тс , Tm, Mc (64 мкг/мл) в зависимости от спектра и уровней устойчивости шташов-доноров(Граднев В.А, с соавт.,1977, 1981). Лекарственную резистентность клинических штаммов выражали по Е.П.Сиволод-скому(1976). Элиминировали плазмиды акридиновыми красителями по Д.Г.КуДЛаЙ(1977), T.Watanabe , Т. fUkaeaw». (1961). КоЛИЦИНОГвННую активность энтеробактерий изучали по P. Erederlcq (1948), тип коли-дина определяли по А.П.Бондаренко(1971), V. Но гак (1980). Антагонистическую активность микробных ассоциаций кишечника и выделенных из них штаммов исследовали модифицированным наш методом.П.Попхрясто-ва с соавт.(1948-1949). , .

Биохимическое типирование s. typhirouriun проводили по Н.М.Ни-китюк(1969), В.А.Арбузовой с соавт.(1980), s.paratyphi в - по М.С.Ленкиной,В.А.Гридневу(1971). Антигенную структуру возбудителей сальмонеллезов установили общепринятыми методами, фаговар с использованием международных и отечественных наборов типовых бактериофагов в соответствии со схемами типирования з.paratyphi в , s. typhi-

шиг1ша по A. Fislix, в. Cell о v и Тбилисского НИИВС.'-Терморезистен-t

тность энтеробактерий изучали разработанным нами методом(ГридневВ.А. с соавт.,1974). Патогенность, вирулентность и инвазивность сальмонелл исследованы по В.А.Арбузовой о соавт. (1980) на моделях энтера-льного, подкожного и внутрибрюшинного заражения белых мышей, а также в культурах тканей ФЗЧ и Нер-2(Таврилюк Б.К.,1962; Иваненко Т.П., 1962). Гемолитическую активность штаммов выявили на плотных и гадких питательных средах, содержащих свежие эритроциты человека групп крови 0(1) и A(II), кролика, барана, морской свинки, крысы, мыши и курицы, фибринолитичаскув - по В.С.Оусловой(1944), плазмокоагулазу-с использованием разведенной 1:5 кроличьей плазмы, ДНК-азу - по с. Jeffrie« et Л. (1957), с. Jeffries (1061) в модификации Е.Ф.Зав-, городней(1971), лецитиназу - по Г.НДистовичу(1950), способность

штаммов продуцировать конститутивную или индуктивную пенициллиназу-йодометрическим методом(Шраер Д.К.,196?).

Группу несовместимости конъюгативных R -плазмид энтеробактерий определили по H.Datta et «1. (1979), А.П.Дехову(1979), используя коллекцию стандартных плазмид т. Aral (1976) - 20 групп несовместимости, fl -тип - по кMejneii, H.Datta (1966), применяя донорспеци-фические фаги Msa и Qj, , частоту передачи плазмид - в 2 часовых кроссах штаммов E.coii к-12 и рассчитали на клетку донора, число копий r-плазмид на геном клетки - по p. Zwa, а.ьвЪвк (1980), в качестве контролей использованы плазмадн rpi , шч с количеством копий 1-5 и s-a - 5-10 на геном клетки.

Выделение плазмидной ДНК из лекарственноустойчивых штаммов энтеробактерий и их трансконъюгантов осуществили по J.Mejera at ах. (1976), н. Bimbo in, J, Doly (1979) и экспресс-методом C.Kado, 3-Т. Liu (1981), Для получения большого количества ДНК плазмид и разделения ДНК на формы по плавучей плотности в 1радиенте CsO. с бромистым этидием использован щелочной метод. ДНК плазмид в форме катена-на и ДНК фага X дикого типа обработали эндонуклеазой рестрикции Bam hi в универсальном буфере, используя 1-3 ед активности фермента на I мкг ДНК, рестрикцию останавливали прогреванием пробы в течение 10 мин при 65°С. Электрофорез плазмидных ДНК, ДНК фага X и их ресгрзктов проводили в камере дая горизонтального электрофореза в 0,8 и 1,0$ агарозном геле на трис-ацетатном буфере, содержащем 0,5 жг/мл бромистого этидия. Препараты ДНК содержали краску(0,07$ бромфено лов ого синего в 0,04 М Грис-нса рН 7,9 и 30$ глицерина) в количестве I/IQ от объема ДНК, ДНК в геле идентифицировали в УФ-свете,' фотографировали аппаратом Зенит-ТИЕ на фотопленку Мйкрат-300 через оранжевый светофильтр или контактным способом. Обработку пленки, фотобумаги проводили общепринятыми методами. Результаты анализировали на фотоснимках, изготовленных на шгсраотной фотобумаге.

В качестве контроле® использованы ДНК ялазмид известной молекулярной массы pLG ( GLfttrasn L. et «1., I98l),pBR322 - 2,6 Щ, S-a -23 ВД, EP1 , EP4 - 36-38 ВД, Ridrd - 62 ВД, a также ДНК фага X дикого типа (32,3 ВД), рестрикцированную эвдонуклеазой в«и hi. Молекулярную массу ДНК плазшд энтеробактерий и рестриктов определили по их электрофоретической подвижности в агароэном геле.

Полученные данные обработаны методом вариационной статистики (Ашарин И.П., Воробьев А.А», 1962; Каминский Л.С., 1964; Левен-сон В.И,,'1968-1969; Мерков A.M., Поляков Л.Е., 1974).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

В первом разделе работы, который является как бы введением в тему исследования, предотавлены материалы за 30-летний период по эпидемиологии, этиологической структура, состоянию бактериологической диагностики сальмонеллезов. Ошибочность лабораторных заключений составила в 1970-1973 гг. 38,8$, что поафебовало проведения мероприятий по совершенствованию бактериологической диагностики этих инфекций и коррекции при установлении их этиологической структуры. В Хабаровском крае в течение 30-легнего периода наблюдения (19581987 гг.) показана циркуляция 106 сероваров сальмонелл 17 серологических групп. Подавляющее большинство (85) возбудителей принадлежало к, группам А,В,С,Д,Е и' значительно меньше (21) - к 12 редким группам. Обновление этиологической структуры сальмонеллезов, обусловленных бипатогеннтш возбудителями, наблюдали более чем на 1/3 в течение 5-7-детнего периода, что сопровождалось выявлением все большего разнообразия сальмонелл у людей, животных и в объектах внешней среды. Качествещо-количаственный состав возбудителей у населения края представляли 89, объектов внешней среда и пищевых продуктов 47, а у животных, птиц и грызунов 12 сероваров, что составило 87,0, 8,2 и 4,8/1 изученных соответственно штаммов.

- и -

Инфицярованность сальмонеллами работников предприятий пищевой промышленности и мясокомбинатов варьировала от 0,1 до 5,7$, объектов внешней среда и пищевых продуктов - от 0,04 до 7,4$, а крупного рогатого скота, свиней и кур, поступающих на мясокомбинаты, от 1,7 до 2,2%. Совместное с практическими органами здравоохранения выполнение научной тематики по проблеме сальмонеллезов, обучение специалистов современным методам диагностики на рабочих местах, семинары, издание методических материалов, внедрение кардинальных дифференциально-диагностических тестов при.идентификации возбудителей и др. позволили усовершенствовать бактериологическую диагностику остри кишечных инфекций, снизив уровень ошибочных лабораторных заключений до 5-1%. При этом установили увеличение в первый 15-летний период наблюдения количества", циркулирующих на территории Хабаровского края сероваров сальмонелл с 22 до 68, наличие корреляционной зависимости между эпидемическим и эпизоотическим процессами, доминирующее положение в цолиэтиологичной структуре сальмонеллезов представителей группы В, в особенности э.-ьурЫиазЛш» , з.Ье1<1б1Ъвга ,

на долю-которых в течение 30-летнего периода наблюдения приходилось

%

более 2/3 случаев заболеваний и бактерионосительства. Однако доминирование в Хабаровском крае э. 1згрЫгиг1ча , з.Ьв1<1в1Ьег8 в течение продолжительного периода объяснить лишь потреблением инфицированных пищевых продуктов не представляется возможным. Тем более, что на ряде территорий нашей страны в 60-70 годах отмечено снижение-уровня заболеваемости, обусловленной г.-ЬурЫмигШа , я увеличенае-З.Ье1<1в1Ьвгг (Арбузова В.А., 2975; Адуэва Н.И. с соавт., 1981; Хахарева Т.П., 1981). .

.При исследовании эпидемического процесса сальмонеллезов в течение 1960-1989 гг. в Хабаровске установили конверсию возрастной (преимущественное поражение детей раннего возраста), профессиональной структуры и сезонности заболеваемости, связанную в последнее 15-^ле-

тие с возникновением внутриболъяичных вспышек и раопроотранением лекарственноустойчивых возбудителей. Этиологические агенты заболеваний были представлены 47 сероварами групп В,СД,Е и редких сальмонелл, своеобразной динамикой их выделения, подавляющее большинство которых обусловили спорадические инфекции. Представители группы В, в особенности з. ^Ышихаим , з.Ьв1ае1Ье^ , вызывали в 1-ом и 4-6-ом пятилетиях периода наблюдения от 85,4 до 96,0$ случаев заболеваний и носительства, а во 2-3-ем - отмечали заметное снижение до 22,1-31,7$. Удельный вес заболеваемости, связанной с сероварами групп С,Д,Е и редких сальмонелл, значительно варьировал (1,5-77,9$) Активизацию эпидемического процесса, обусловленную з.1я«па1 , з.аи. М1п , з.яоайш , наблюдали в 1965-1968 гг. и в 1970-1972 гг. (17,0-55,5$ случаев заболеваний и носительства). При этом, если заболеваемость тифо-паратифами в начале первого 15-летия была наиболе высокой, а в конце второго 15-летия низкой, то при сальмонеллезах, вызванных бипатогенными возбудителями, установили обратную зависимость (рис.1). В последние годы кратность различий в показателях заболеваемости увеличилась в 23,3-99^5 раза.

Наиболее часто поражались сальмонеллезада (до 1968 г.) взрослые контингента населения, в особенности работники предприятий пищевой (мясообрабативвйщвй) промышленности, а удельный вес детей в общей сумме больных составил 9,5-36,3$. Тенденция к увеличению и стабилизации заболеваемости детей прослеживалась в течение 19691976 гг., а ухе в 1977 г. превышала в 16,8 раза заболеваемость, в^ро слых, причем доля детей в структуре сальмонеллезов составила 83,4$Г В этот период заболеваемость детей раннего возраста увеличилась в 135,2-292,6 раза, варьируя в 4-6-ом пятилетиях периода наблюдения от 244,4 до 777,9 на 100 тыс. При этом удельный вес внутрибольнич-ной заболеваемости детей раннего возраста в Хабаровске составил 34,1-50,3$, в Комсомольске-на-Амуре и Биробиджане - 43,9-66,3$. У

Рис. I Заболеваемость сальмонеллезаш населения Хабаровска в 1960-1989 гг.(в показателях на 100 тыс.)

взрослого населения наиболее часто сальмонеллезы регистрировали у пенсионеров, домохозяек, работников детских учреждений, показатель заболеваемости которых варьировал от 0,8 до 1,8 на 1000, однако в группе "пищевиков" и приравниваемых к ним профессий наблюдали лишь единичные случаи заболеваний. Внутрибольничные инфекции, обусловленные лекарственноустойчивыми s. typhircuriim , привели к изменению сезонности сальмонеллезов. Отмечено, что общие закономерности в развитии эпидемического процесса сальмонеллезов в нашей стране и за рубежом проявились на Дальнем Востоке лишь на рубеже 70-80-х годов и были связаны, в основном, с госпитальной инфекцией. При этом удельный вес сальмонеллезов в структуре острых кишечных заболеваний увеличился с 0,09 до 11,6$. Это потребовало повышения информативности бактериологической диагностики, важнейшей основы эпидемиологического анализа.'

Во втором раздела "работы представлены результаты исследования биологии естественно' циркулирующих сальмонелл и генетики их лекарственной резистентности. Данные-литературы свидетельствовали о формировании у возбудителей сальмонеллезов в 50-70-е года не только резистентности к отдельным антибактериальным препаратам, но и множественной лекарственной устойчивости(Пихл Х.0.,1962; Рабинович В.И. Ревзина Э.А.,1964; Попова ПЛ. с соавт.,1966; Коцинян М.Е. с соаэт., 1973; Каивву С.Н., Edwards P.R. , 1961; Datte К., 1962; Lebek G., 1963; tadereon e.s., 1968; Hir-elfell E.J. et al., 1980 и др.), природа которой могла быть детерминирована и внехромосомшши факторами наследственности, получившими наименование к -плазмид( Watsnabe т., 1963). Изучение 4801 штамма сальмонелл 67 сероваров, выделенных при различных эпидемических ситуациях на Дальнем Востоке нашей страны в 60-80-е года, показало широкое распространение лекарственнорезис-тентных возбудителей, удельный вес которых увеличился в последнее 15-летие с 57,7 до 93,4$. Сальмонеллы группы А составили 0,8, В-

84,6, С - 6,4, Д - 5,8, Е - 2,0$, прочие серологические группы -0,4$. В течение всего 15-летнего периода наблюдения циркулировали' лишь 13 сероваров (группы'В -4, С-5, Д-ЗиЕ-1). Представители каждого серовара сальмонелл дифференцированы на чувствительные и лекарственноустойчивые, последние при использовании 14 антибактериальных препаратов по спектрам резистентности, включающим от I до 10 г -детерминантов. Яекарственнорезистентные штаммы подразделили также на устойчивые к 1-3,. 4-7, а устойчивые к 8-10 препаратам выделены наш условно в группу полирвзистентных. Анализ результатов определения лекарственной устойчивости возбудителей проводили с учетом их происхождения и динамики выделения, 1-е пятилетие характеризовалось отсутствием внутрибольничной заболеваемости, а 2-3-е пятилетия периода наблюдения регистрацией вспышек госпитальной инфекции .

Наиболее часто возбудители сальмонеллезов обладали резистентностью к эритромицину и бензилпенициллину - 86,4 и 84,5$, реже -к антибиотикам неомициновой группы(68,3$). Последние выделялись только во 2-3-ем пятилетиях периода наблюдения и их количество увеличилось с 35,8 до 84,0$. Устойчивые возбудители к антибиотикам тетрациклиновой' группы, хлорамфениколу и стрептомицину составили 71,9-78,1$. Тем не менее, количество резистентных сальмонелл к ри-фампицину, полимиксину В и налидиксовой кислоте было небольшим и варьировало от 0,9 до 2,3$, а среди исследованных - не обнаружены устойчивые к гентамицину и с перекрестной резистентностью к вышеназванным препаратам, что подтвердило высокую эффективность их при терапии сальмонеллезов. Отмечено, что во 2-ом пятилетии у сероваров групп С,Д и Е значительно увеличилось количество штаммов, резистентных к. 1-3 и 4-7, у представителей группы В - к 4-7 и 8-10 антибиотикам, а в 3-ем - соответственно к 4-7 и 8-10 препаратам.. К 8-10 аНТИбИОТИКам бЫЛИ УСТОЙЧИВЫ ЛИШЬ З. ^рМгшг1ип ,. З.Ье1(1е1Ъегк

s.para typhi B » которые отнесены нами к полирезистентным. Удельный вес полирезистентных бипатогенных возбудителей во 2-3-ем пятилетиях периода наблюдения увеличился с 44,6 до 84,2%, а у s.paratyphi В" -с 1,1 до 2,2$, составив в последние годы 98,9$ штаммов серологической группы В. При этом у бипатогенных сероваров сальмонелл встречалось существенно меньше устойчивых представителей к 1-3 антибиотикам, чем у s. typhi , s.paratyphi А и В. Установлено также,что если резистентные к 4-7 препаратам бидатогенные возбудители сальмо-немиезов выделялись в течение всего 15-летнего периода наблюдения и их количество колебалось от 4,2 до 20,9$, то с тождественной лекарственной устойчивостью S.typhinurium , S.paratyphi А И В были обнаружены только во 2-3-ем пятилетиях и удельный вес их варьировал от 9,5 до-15,1$.

В структуре лекарственной устойчивости сальмонелл установили 15 типов резистентности и ведущие серовары с характерным спектром г -детерминантов. Подавляющее большинство штаммов"(74,8%) принадлежала к I и II типам резистентности, их представляли лишь s.typhi-murium , S.paratyphi В , S.heidelberg с УСТОЙЧИВОСТЬЮ К 9-10 аНТЯ-

биотикам. У 19 сероваров ( Группы В -8, С -7, Д-2иЕ-2) выявлены возбудители с устойчивостью к 4-7 препаратам, которые относились к III-IX типам и составили в структуре резистентности 8,3$. Наиболее разнообразен серовариантный состав типов Х-ХУ, устойчивых к. 1-3 антибиотикам, удельный -вес их в структуре резистентности составил 16,9$. Тем не менее и в этой группе встречались ведущие серовары сальмонелл. Наибольшее количество типов резистентности выявили у возбудителей сальмонеллезов, изолированных от людей, меньшее - у штаммов ответного происхождения, продуктов питания и кормов. Наиболее часто обладали резистентностью к.изученным препаратам из сероваров группы В - S. typhiKuriua , С - S. infantia , S.virchov , Д -S. typhi И Е - S.london S. give .

В лекарственной устойчивости s. typhinurium , доминирующих в течение десятилетий на Дальнем Востоке нашей страны, установили ванные закономерности. Так, если удельный вес устойчивых к антибиотикам штаммов этого серовара в 1-ом пятилетии не превышал 49,0$, а во 2-ом - 86,6$, то в 3-ем - составил 97,9$. При этом представители с устойчивостью к 8-10 препаратам в 1-ом пятилетии не были изолированы, во 2-ом - выделялись в 75,2$ случаев, а в 3-ем - значительно увеличилось количество штаммов, резистентных к 10 антибиотикам (93,1$). Отмечено такзе, что уровни ШК антибиотиков у полирезистентных s. trphi.rm.rium были в десятки и согни раз выше, чем у ле-карственноустойчивых, ранее циркулирующих на территории Дальнего Востока. Установлено такзе, что полирезистентные возбудители саль-монеллезов независимо от принадлежности к серовару выделялись только от людей и в очагах госпитальной инфекции из объектов внешней среды, а от животных, птиц, грызунов и из пищевых продуктов не были изолированы в течение всего 15-летнего периода наблюдения. Это свидетельствовало о разрыве в последнее десятилетие меяду эпидемическим и эпизоотическим процессами, обусловленными полирезястентными возбудителями. При этом, если половина лекарственноустойчивых штаммов сальмонелл, выделенных у взрослых, обладали резистентностью к 1-3 и 4-7 препаратам,4а удельный вес полирезистентных не превышал 37,4$, то у детей подавляющее большинство изолированных возбудителей (91,4$) были с множественной устойчивостью, а количество резистентных к 1-3 и 4-7 антибиотикам составило соответственно 2,6 и 3,8$. Устойчивые к 8-10 препаратам сальмонеллы выделялись у взрослых контингентов населения, так, или иначе связанных с детскими очагами госпитальной инфекции, обусловленной s. typhinurium. Наибольшее количество йодирезистентных штаммов (97,6$) было изолировано от детей в возрасте до 2-х лет, существенно меньше - у детей 3-5 и 7-14 лет, соответственно 88,4 и 52,1%, У детей раннего возраста

количество устойчивых возбудителей к 1-3 и 4-7 препаратам не превышало 0,6 и 1,3$, а у детей старших возрастных групп - варьировало от 2,9 до 17,7$. Полученные данные указывали на то, что основным и наиболее емким резервуаром и источником полирезистентных к антибиотикам возбудителей сальмонеллезов были дети раннего возраста, для ко торых пищевой путь распространения этих инфекций не является ведущим При исследовании природы лекарственной устойчивости возбудителей сальмонеллезов установили, что только у 16 (группы В - у 8, С -У 5, Д - у I и Е - у 2) из 67 изученных сероваров резистентность к антибиотикам могла' контролироваться конъюгативными я -плазмидами. Устойчивость к антибактериальным препаратам представителей группы А и редких сальмонелл не была грансшссивного типа. ■ Наиболее часто у возбудителей выявляли конъюгагивные детерминанты к хлорамфенпколу и антибиотикам тетрациклиновой группы (соответственно 86,6 и 83,4$). Высокий удельный вес штаммов с трансмиссивной устойчивостью обнаружен также среда бензилпеницилллно- и эритромицинорезистентных сальмонелл (76,1 и 73,7$), меньший - у резистентных возбудителей к антибиотикам неошциновой группы(56,8$). Донорами плазмидной устойчивости к эритромицину были лишь й. ЬурЫ.шцг1ша , а к антибиотикам неошциновой группы - Б.Ьл>Млмг1дш , Э.р*га1згрМ В , Б.-ЬурЫ. ,усТ0Й-чивые к этим препаратам. Наименее распространены у сальмонелл конъ-вгативные детерминанты устойчивости к стрептомицину .(23,0$), при резистентности к этому антибиотику 78,1$ изученных штаммов. Это указывало на возможность контроля устойчивости к стрептомицину у возбудителей не только хромосомными генами, но и неконъюгативными н -плазмидами.. Отмечено, что у сальмонелл, обладающих природной устойчивостью к бензилпенициллину и эритромицину, резистентность к этим препаратам может быть обусловлена и конъюгативными г -детерминантами с уровнем контроля МПК антибиотиков в сотни раз превышающих природную устойчивость. При этом входящие в структуру плазмид детерминанты резистентности к бензилпенициллину контролировали продукцию

индуцибельной у> -лактамазьт. Наиболее высокие уровни устойчивости, обусловленные коныогативными в -ллазмидами, были выявлены к бензил-пенициллину, хлорамфениколу и эритромицину, несколько ниже - к ами-ногликозидным антибиотикам и значительно ниже - к тетрациклину. В динамике наблюдения параллельно с нарастанием резистентности саль- • монелл к антибиотикам увеличивалась и их конъюгативная лекарственная устойчивость. Так, если в 1-ом пятилетии устойчивость возбудителей разного происхождения не была детерминирована коныогативными R плазмидами, то во 2-3-ем - количество штаммов-доноров составило соответственно 35,2 и 78,4$. .

Донорами конъюгативных а-пдазмид были возбудители сальмонел-лезов, резистентные, как. правило, к 4-10 изученным антибиотикам. Однако у некоторых представителей сероваров s. typhinuriwn и s. typhi , устойчивых к. 1-3 препаратам, также выявлены трансмиссивные То -или ни -детерминанты резистентности. У s. typhi' такие штаммы выделялись во 2-3-ем пятилетиях, ays. typhiimrium - лишь в 3-ем пятилетии периода наблюдения. Обнаружение у лекарственноустойчивых возбудителей конъюгативных к -плазмид сочеталось с появлением и циркуляцией на Дальнем Востоке полирезистентных к антибиотикам штаммов з. typhimuriua , способных распространяться среда населения и сохраняться во внешней среде. При этом структура множественной л конъюгативной лекарственной устойчивости сальмонелл была близка к s. typhirairium , которые могли быть дополнительно дифференцированы на 23 генетически маркированных варианта, 'обладающих стабильностью при естественной миграции-возбудителя(табл, I). Установлено также, что если устойчивость к антибиотикам штаммов сальмонелл, выделенных от животных, из пищевых продуктов и кормов не была трансмиссивного типа, то у возбудителей, изолированных от людей, дз объектов внешней среды и воздуха в очагах внутрибольничной инфекции, обусловленной s. typhiraarium , конъюгативные R -плазмиды детерминировали ре-

« Таблица I

Устойчивость к антибиотикам сальмонелл 'с конъюгативными r -плазмидами на Дальнем Востоке

1 о ® tJ" я Число Количество штаммов, устойчивых к антибиотикам, в m ■ Удельный вес штаммов с конъюгатив- Число вариантов конь югативной

S § а & Серовар ■штаммов всего к 1-3 антибиотикам к 4-10 антибиотикам ной лекарственной устойчивостью, лекарственной устойчивости

Р) ф о s в %tn

S. typhi нюкШя 3605 Э6,8±Р,29 4,I¿.0,33 92,7±0,43 86,4*0,58 23

S.pur«.typhi В 293 62,5±2,83 57,7*2,89 4,8*1,25 4,4*1,52 4

S.heidolberg 63 85.7t4.4I 60,3^.6,16 25,4^5,48 20,4*5,48 2

R S.derby 41 80,5±6,19 46,3^,7,79 34,2±7,4I 21,2*7,11 2

S.brandenburg 18 55,6±И,71 33,3^11,11 22,3±?,8I 20,0±.I2,65 I

S.java 14 7I,4±.I2,08 50,0^13,36 21,4*10,96 20,0*12,65 I

S.kisnngeni 4 50,0±25,00 25,0^21,65 25,0*21,65 50,0*35,36 I

S. saint-punl I 100 - 100 100 I

S. virchow 99 91,%2,74 46,5±5,0I 45,4*5,00 13,2*3,55 3

S.inferí tie 90 94,4±2,42 35,6±5,05 58,8*5,19 4,7*2,29 I

С S.kottbus 35 82,8*6,38 51,4^8,45 31,4*7,84 20,7*7,52 2

S.ebolerae-suie 15 66,7^12,17 46,7±J2,88 20,0£Е0,33 30,0*14,49 2

S. tenneseee 9 . 55,6±I6,56 II,I±J0,47 44,5£Г6,56 30,0±J7,89 I

D S.typhi 193 3I,6±3,35 20,2±2,89 11,4*2,29 6,6*3,18 2

В S.give 32 7I,9±7,94 65,6±8,40 6,3*4,30 8,7^5,88 I

S.london 32 87,5±5,85 53,I±.8,82 34,4*8,40 10,7*5,84 I

Итого 16 4544 . 90,5±p,43 I2,5t0,49 78,0i0,6I 75,0*0,68 48

зистентность в 75,0/1 случаев. Отмечено,что изучение структуры множественной и конъюгативной лекарственной устойчивости позволило-выявить динамику ее формирования у возбудителей сальмонеллезов, а также осуществить дифференцирование 1в сероваров сальмонелл групп В,С, Д,Е дополнительно, на 48 генетически маркированных варианта.

При маркировании возбудителей госпитальной инфекции с учетом структуры их конъюгагивных и неконъюгативных г -детерминантов установили два направления ("приморское" и "континентальное") в распространении на территории Хабаровского края полирезистентных з. тиг1тт . С "приморскими" штаммами, которые характеризовались значительным обеднением структуры конъюгативной лекарственной устойчивости, была связана внутрибольничная заболеваемость в портовых городах и прибрежных поселках Охотского моря и Татарского пролива. "Континентальные" штаммы "3. ^урМгшг1ига обладали чаще полной структурой трансмиссивной резистентности к. изученным антибиотикам. Отмече-•но, что если циркуляция "приморских" возбудителей ограничивалась прибрежными районами и длительностью в течение 1-3 лет, то "континентальные" - были способны не только к широкому и последовательному распространению на территории Хабаровского края, но.и обусловили длительные и упорные госпитальные вспышки в Приморском крае, Сахалинской и Камчатской областях. Последние в большей степени, чем "приморские" были способны к длительной циркуляции среди населения и сохранению в объектах внешней среды, что затрудняло купирование внутрибольничных вспышек,. Эффективность типирования лекарственноус-тойчивых возбудителей оценивали также при картографическом анализе заболеваемости сальмонеллезами в Хабаровске. Определение у сальмонелл лекарственной резистентности и ее природы с анализом групп сцепления конъгогативных г -детерминантов позволило дифференцировать "госпитальные" штаммы з. <тгрЫпят1аи , прооледив за их циркуляцией и формированием в лечебно-профилактических учреждениях очагов внут-

рибольничной инфекции с разной длительностью существования. При этом были установлены и уточнены источники, факторы и пути распространения инфекции. Эти данные были использованы при проведении целенаправленных противоэпидемических мероприятий. Результаты исследования свидетельствовали о не "региональном" для Дальнего Востока происхождении "госпитальных" возбудителей и, очевидно, о не возмок-ности, учитывая распросграйение конъюгативной лекарственной устойчивости у других сероваров сальмонелл, формировании их при приобретении лишь й -плазмяд. Однако для доказательства этого положения необходимо сравнительное изучение биологии различающихся по лекарственной резистентности и ее природе возбудителей и молекулярно-ге-нетических свойств их к -плазмяд.

■ Определение плазмидного профиля, молекулярно-генетических свойств с применением рестрикционного анализа и -плазмид "госпитальных" штаммов э. ^рЫтиг1ша расширило возможности их дифференциальной диагностики и показало наличие на территории Хабаровского края нескольких источников инфекции. Установлено, что г -подобные я -плаз-

мидьг возбудителей характеризовались принадлежностью к Хпо Р1 груп-+

пе, Л -типом, строгим контролем репликации, репрессированной частотой передачи и молекулярной массой 64 Щ и представляли дериваты исходной трансмиссивной к -длаэмвды с молекулярной массой 64 МЦ. Релликош. этих ллазмвд включали от 4 до 9 детерминантов антибиоти-коустойчивости. Основную внутрибольничную заболеваемость на Дальнем Востоке обусловили б. ЬурЫпиг1ит , содержащие только 2 плазмиды, в том числе конъюгативную с молекулярной массой 64 Щ и неконъюгатив-ную - около 2,0 Щ. Тем не менее, у части возбудителей госпитальной инфекции, наряду с перечисленными выше, изолированы трансмиссивные л -плазмиды, репликоны которых относились к 1пс м группе, п -типу, обладали менее строгим контролем репликации, репрессированной частотой передачи, молекулярной массой 32,3 ВД и могли содержать

3-5 г-детерминантов.

Учитывая, что идентичные "госпитальным" возбудителяц конъюга-тивные и -плазмида групп несовместимости fi в м выделялись у патогенных и непатогенных кишечных палочек лишь в процессе внутриболь-ничной сальмонеллезной инфекции, то можно считать, что источником их происхождения у эшерихий были полирезистенгные к антибиотикам s. typhinuriura. Однако при анализе плазмидной структуры энтеробак-терий каждого больного установили, что эшерихии могут быть носителями трансмиссивных н -плазмид inc и группы, которых не обнаружили у возбудителей внутрабольничного сальмонеллеза (история болезни № 16-78, А.Тани). Последние являлись, очевидно, естественными для е. coli флоры кишечника. Вместе с тем, наличие плазмид inc и группы у "госпитальных" штаммов s, typhiruriun VG297 и voioo6 и патогенных и непатогенных кишечных палочек, изолированных у больных (истории болезни J& 61-78, Б.Насти и ik 3489-77, П.Димы), позволили высказать противоположное суждение о источниках происхождения у е. coli конъюгативных н -плазмид M группы несовместимости. Это свидетельствовало о том, что структура трансмиссивной лекарственной устойчивости возбудителей сальмонеллезной инфекции могла формироваться при селективном давлении антибиотиков (в экологически общих микробных ассоциациях кишечника) не только за счет собственных и -плазмид inc pi группы, но и плазмид антибиотикорезистенгности эшерихий, в частности M группы несовместимости. Проведенным исследованием расширены представления о молекулярно-генетических свойствах п -плазмид энтеробактерий и функционировании плазмидных репляконов, установлены особенности плазкидного состава дальневосточных "госпитальных" штаммов s.typhiœariua , что в определенной степени согласуется с данными литературыШокровскяй В.И. о соавт., 1982; Титце Э. с соавт., 1983; Блохина И.Н.'с соавт.,1984; Ря/1гп В. с соавт.,1986; Andersen е. et al. , 1977; Paloraarea J. С., Pere» S. J. , 1982; Cohen 1Î.L Tau-иМ!, 1987 и др.).

При решении вопроса о происхождении и формировании, идентификации и дифференцировании "госпитальных" возбудителей использовали естественно циркулирующие штаммы s.paratyphi в, s.typhimuriun. Установили, что чувствительные и лекарственноустойчивые с неконъюгатив-ной природой резистентности s.paratyphi в не различались принадлежностью к хемо-, фаговарам, серовариаятам, продукцией ферментатив-

но-токсических веществ, вирулентностью для белых мьгшей и в культурах

»

ткани ФЭЧ и Нер-2. Это не позволило выявить клоны возбудителей, наиболее адаптированные к организму человека. Эпидемиологические данные указывай также на го, что приобретение конъюгативных R -плаз-мид s.paratyphi в не вызывает формирование клонов с большей патоген-ностью для человека. В последнее 15-летие не обнаружили тенденции к интенсивности эпидемического процесса, обусловленного s.paratyphi в с конъюгатявныш R -плазшдами, л не наблюдали формирование этими возбудителями очагов госпитальной инфекции. Отмечено, что применение комбинированных схем гипироаания сальмонелл повышало информативность бактериологической диагностики. В отличие от s. paratyphi в чувствительные и устойчивые к лекарственным препаратам с разной природой резистентности s. typhimurium не представляли единую группу возбудителей. С учетом генетики лекарственной резистентности, патогенности, вирулентности и инвазивности. для белых мышей лекарственночувствитель-ные s. typhimurium могли быть дифференцированы на биовары I и II „ ,

а лекарственноустойчивые - на биовар II и вариант биовара II Под п

следний включал "госпитальные" штаммы s. typhimurium и характеризовался наиболее низкой патогенностью, вирулентностью и инвазивностью для белых мышей, тропностью к, регикулоэндотелиальной системе, длительным пероистированием в организме экспериментальных животных, полирезистентностью с трансмиссивной природой лекарственной устойчивости и наличием конъюгативных r -плазмид inc pi , xno и групп с молекулярной массой соответственно 64 и 32,3 ВД и неконъюгатлвной - около

2 Щ. При этом возбудители варианта биовара II _ в сравнении с дру-

Л (

гими биоварами з. <урЫ.юиг1ии представляли ограниченную грушу па-то-хемо-фаговаров, обладающую наиболее высокой тэрморэзистентностью и антагонистической активностью в отношении патогенных и условно-патогенных видов микроорганизмов и низкой ДНК-азноЙ активностью. Полученные данные уточнили и дополнили классификацию я. 4трЫшцг1ша на. биовары(Арбузова В.А., 1955,1978; Арбузова В.А. о соавт.,1980 и др.), расширили представления о биологии циркулирующих "госпитальных" возбудителей. Биологическая обособленность "госпитальных" штаммов з. рЫшгЗлш , обусловленные ими особенности эпидемического процесса сальмонеллэзов указывали на то, что вариант биовара II является

л

сформированным клоном возбудителей, адаптированным только к организму человека преимущественно детей раннего возраста. Результаты проведенного исследования свидетельствовали о клоновом происхождении "госпитальных" возбудителей, формирование которых на может быть интерпретировано, очевидно, процессом динамического и постоянного образования новых патогенов за счет акцепции лишь н -плазмид. Тем не менее, для доказательства клоновой концепции происхождения "госпитальных" возбудителей необходимы дополнительные исследования, которые могли бы показать глубину конверсии биологии сальмонелл под влиянием й -плазмид.

В третьем заключительном разделе работы представлены результаты изучения конверсии биологии сальмонелл под влиянием 'детерминан-\ \ ' тов лекарственной резистентнооти разной природы, а также данные о

влиянии биологических особенностей варианта биовара II в з.^«*-г1вя на структурные и функциональные характеристики аэробного биоценоза кишечника детей раннего возраста. В исследовании использовали лекарствённочувствительные з. *урЬ11шг1лиа , з.ьопъиа , з. регаты. в и полученные нами их стрептоыицинорезистентные мутанты, из которых отобраны возбудители с наименьшими отклонениями в биологии от исход-

ннх штаммов. Уровни резистентности мутантов варьировали от 2500 до 10000 мкг/мл стрептомицина, мутанта 3. typhi rauriura , S.p «гаtyphi В . обладали сниженной вирулентностью для белых мышей, приобретение устойчивости не изменило принадлежности их к фаговарам. Инфицирование чувствительных штаммов л их стрептоыициноусгойчивых мутантов в -пла-змидами разных ine групп сблккало уровни резистентности s. typhineri-\m , S.kottbue , s.p»r*typhi в с "госпитальными" возбудителями. Наиболее высокие уровни устойчивости к стрептомицину обнаружили у мутантов с н -плазмидами, содержащими а» -детерминанты резистентности. Установили также, что конъюгативные в -цлазмиды, в том числе 1лс 14 группы, вызывали конверсию фагов аров, кинетики роста, вирулентности при снижении ее у стрецгомицинорезистентных мутантов, однако не изменяли существенным, образом идентификационные характеристики возбудителей сальмонеллезов и продукцию их ферментативно-токси-ческих веществ. Чувствительные к антибиотикам s, typhirauriun , s.Paratyphi в , s.kottbu« под влиянием в -цлазмид как. повышали, так. и понижали вирулентность для белых мышей, а ни одна из 8 "изученных плазмид разных ine групп не повышала степень патогенности устойчи-' внх к стрептомицину мутантов. Вместе о тем, даже цлазмиды одной ine PI группы существенно как повышли, так и понижали вирулентность декарственночувствмельннх штаммов. Тождественные конъюгатдвные в -плазмиды вызывали конверсию вирулентности возбудителей и их резистентных к стрептомицину мутантов чаще в противоположных направлениях, . что расширяло диапазон отелени патогенности серовара сальмонелл. От-• мечено, что низкая вирулентность для белых мышей в+ -трансконъюган-тов стрепгоыицияорезистенгных мутантов сальмонелл сближала их о возбудителями госпитальной инфекции в большей степени, чем R+ -транс-коньюганты чувствительных к антибиотикам штаммов. При этом обсеме-ненность сальмонеллами организма экспериментальных животных находилась в прямой зависимости от степени патогенности возбудителей и их

п+ -трансконъюгантов. Последние обладали тропностью к ретикулоэн-дотелиальной система белых мышей. Полученные данные расширили представления о роли конъюгативных н -плазшд в конверсии вирулентности сальмонелл л их антибиотикорезисгентных мутантов и в определенной степени согласуются с результатами исследователей(Яковлева О.Н. с соавт.,1983). Тем не менее, учитывая разные направления в изменении вирулентности возбудителей сальмонеллезов под влиянием R -пла-зшд и снижение ее чаще у их устойчивых к стрептомицину мутантов, обусловленные, очевидно, селективным процессом, и циркуляцию лекар-ствешочувствительных з. typhi ruriun биовара II s , способных вызывать внутрибольничные инфекции (Арбузова В.А., 1955,1978; АрбузоваВ.А. с соавт.,1980; Кафтьгрева Л.А., 1983), мы не считаем, что лекарственной резистентности принадлежит решающая роль в формирования "госпитальных" возбудителей. Это положение подтверждалось также результатами изучения влияния плазшд ine F1 группы варианта биовара II s. typhi ии г iura на фаговарн сальмонелл. Установили, что плазмиды inc эт группы изменяли фаговары лекарственночувствительных s. typhinuri-ua ,'Si>«гаtyphi в и стрептомицинорэзистентных мутантов, суживая спектр чувствительности возбудителей к типовым бактериофагам, и превращали их в нетнпируадиеся штаммы. Однако при инфицировании з. typhi-rarium фаговара 3 ллазмидаш inc Р1 группы "госпитальных" возбудителей, принадлежащих к 20 фаговару, мы на наблюдали конверсии фаговара реципиента в фаговар донора. Наши данные согласуются в определенной степени о результатами изучения конверсия фаговаров s. typhi-rairiua (Худченхо Г.В. с соавт., 1981; Кафгырева I.A. с соавт.,1984; Яковлева О.Н. с соавт.,1984; Рабш В. с соавт.', 1986).

При исследовании влияния плазшд варианта биовара II я s. typhi-raarium ine PI и inc м групп на кинетику роста установили, что конъ-югативные плазмиды увеличивали продолжительность лаг-фазк стандартных штаммов кишечной палочки. При этом цлазмида inc Fi группы с мо-

лекулярной массой 64 Щ удлиняли, а плазмиды М группы несовместимости с молекулярной массой 32,3 Щ укорачивали время генерации е. coli. Хромосомные мутации резистентности к рифампицину иди нали-диксовой кислоте у кишечной падочки не влияли на продолжительность лаг-фазы, однако вызывали укорочение времени генерации. Наши данные дополнили биологическую характеристику R -плазмид "госпитальных" возбудителей, согласуются в "определенной степени с результатами отечественных и зарубежных исследователей(Бредихин В.Т. с соалт,,1983; W*t«n»be D. et al. , 1978; Zand P., Lebet Q. ,1980), HO противоречили мнению авторов, не установивших различий в параметрах роста энтеро-бак,теряй и их r+ -трансконъюгантов(Белокрысенко С.С. с соавт.,1980; Медаидов М.М. с соавг., 1985).

Следовательно, проведенным исследованием установлено, что лекарственной резистентности разной природы не принадлежит решающая роль, в формировании "госпитальных" возбудителей, а вариант биовара II s. txphiaorimn представляет изолированный стабильный клон, ада-цтированный только к. организму человека преимущественно детей раннего возраста.

Внутрнбольначныэ инфекции, биологические особенности "госпитальных" возбудителей была основанием для изучения структурных и функциональных характеристик аэробного биоценоза кишечника детей раннего возраста. Установили распространение досбактериоза кишечника у 52,6$ здоровых детей, проживающих в условиях Дальнего Востока нашей сараны, что согласуется в определенной степени с данными авторов (За-

V

вгородняя Е.Ф. о соазт.,1981). При госпитальной инфекции качественно-количественные изменения микрофлоры кишечника наблюдались у детей о 1-й недели болезни и проявлялись дисбакгериозои на 1-4 неделе у 97,2-100$, а на 5-7 - соответственно у 94,1, 87,5 и 85,7$ больных. Д^й. этом количество s. typhiiauriua варианта биовара II Е в I. г'фекалий, выраженное в 1Б , варьировало от 6,75 до 7,71 с максимальным

увеличением на- 3-й неделе болезни и продолжающимся выделением йоз-будителя у 1/4 обследованных в течение 3 мес. после клинического выздоровления. Отмечено, что у больных детей'колонизировали дополнительно кишечник 3-6 видов условно-патогенных энтеробакгерий, а при дисбактериозе у здоровых - 1-2 вида.

Длительные и глубокие структурные изменения определили необходимость изучения защитной (антагонистической) функции аэробного биоценоза кишечника детей при госпитальной инфекции. Исследование антагонистических свойств микробных ассоциаций и выделенных из них условно-патогенных энтеробактерий проводили в отношении патогенных и не-латогенных 6 тест-микробов* которые были использованы нами также при определении антагонизма биоваров э. ЬурЫтгЗ-шя. В зависимости от достояния организма антагонистическая активность микробных ассоциаций кишечника варьировала от синергизма и отсутствия антагонизма до полного подавления роста тест-штаммов. Установили существенное снижение антагонистической функции кишечной микрофлоры у больных детей по сравнению со здоровыми. Это проявилось как в значительном уменьшении количества сильных антагонистов, .подавляющих рост 4-6 тест-штаммов, среди микробных ассоциаций и выделенных из них условно-патогенных энтеробактерий, так и в увеличении удельного .веса слабых антагонистов, задерживающих рост 1-3 тест-микробов, и неантагонистов. Последние не подавляли, а чаще симулировали рост индикаторных тест-штаммов, обладая свойствами синергистов. Наиболее низкую антагонистическую активность микробные ассоциаций кишечника выявили у больных детей первого года яихни, у которых преобладали тяжелые и средне-тяжелые клинические формы госпитальной инфекции. В динамике инфекционного процесса наблюдали существенное снижение защитной функции микрофлоры на 1-2 неделе болезни, что выражалось в снижении количества сильных антагонистов среди микробных ассоциаций кишечника и увеличении неантагонистов. Частичное восстановление защитных функций кишоч-

ной микрофлоры на 3-4 неделе болезни было обусловлено увеличением удельного веса сильных антагонистов, а на 5-7 - за счет увеличения сильных антагонистов и уменьшения неантагонистов.среди микробных ассоциаций кишечника. Отмеченная высокая антагонистическая активность з. ъурЫпмг1ига варианта биовара II может играть оцределен-ную роль в персистировании их в организма больных детей. Вместе с тем, установление корреляционной зависимости между антагонистической активностью микрофлоры кишечника и ее составом, динамикой инфекционного процесса, тяжестью клинического течения госпитальной инфекции явилось основанием рекомендовать метод определения антагонизма микробных ассоциаций для характеристики кишечного дисбактериоза.

Следовательно, "госпитальные" возбудители вызывают глубокие и длительные структурные и функциональные нарушения в аэробной кишечной микрофлоре детей раннего возраста, что определяет необходимость их своевременной диагностики, противоэпидемических мероприятий и комплексной терапии с применением в ранние сроки биопрепаратов для коррекции микробиоценоза яишечнлка.

При исследовании лекарственной устойчивости кишечных бактерий, изолированных у здоровых и больных детей раннего возраста, установили, что при госпитальной инфекции в микрофлоре кишечника существенно увеличивается количество лекарственнорезистентных условно-патогенных энтеробактерий. Последние у больных сальмонеллезом в 5,3 раза чаще, чем у здоровых детей были донорами и -плазмид. В динамике инфекционного процесса структура множественной и конъюгативной лекарственной устойчивости кишечных бактерий приближалась к б. ъурЫтиг!-ат варианта биовара IIв- Это, с учетом обнаружения у детей раннего 'возраста лишь при внутрибольничной инфекции молекулярно-генетически идентичных конъюгативных и -плазмид у патогенных и условно-патогенных энтеробактерий, свидетельствовало о диссеминации н -плазмид "госпитальных" возбудителей в экологически общих микробных ассоциациях кишечника.

- 31 -

выводы

1. Исследованием биологии сальмонелл и генетики их лекарственной резистентности усовершенствована бактериологическая диагностика сальмонеллезов. с эпидемиологическим маркированием возбудителей, снижен уровень ошибочных бактериологических заключений в практических лечебно-профилактических учреждениях с 38,8 до 5-7%, уточнена этиологическая структура заболеваемости, показана тенденция к.-росту сальмонеллезов и расширению в течение 30-летнего периода наблюдения спектра циркулирующих сероваров среди людей и животных.

2. Установлено, что в Хабаровском крае, как и на других территориях Дальнего Востока СССР, наблюдается отчетливая тенденция к росту заболеваемости сальмонеллезаш, обусловленной лекарственноус-тойчивыми возбудителями, который проходит лишь в последние пятилетия на фоне выраженного снижения гифо-паратифов, показано доминирование сероваров группы В, в особенности з. 1^рЫ.изг1тгз , з.Ьв1ав1Ъегв , с которыми связано в течение 30-летнего периода наблюдения более 2/3 случаев заболеваний а носитэльства, выявлено изменение при распространении госпитальной инфекции возрастной, профессиональной структуры и сезонности сальмонеллезов.

3. Обнаружено увеличение в период регистрации госпитальной инфекции, обусловленной з. ^ЫишЛвя , удельного веса резистентных возбудителей сальмонеллезов с 57,7 до 93,4$, сохранивших чувствительность, как правило, к гентамицину» налидиксовой кислоте, рифами-цину и полимиксвну В.

4. Показано, что особенности эпидемического процесса сальмонеллезов в последние пятилетия определяют лекарственноустойчивые возбудители с конъюгагивной природой резистентности, основным резервуаром и источником которых являются дети раннего возраста.

5. Установлено, что конъюгативнне н-плазмида содержат 4,486,4$ лекарственноуотойчивых возбудителей сальмонеллезов, обнаруже-.

ние которых позволило провести внутрисероваровое дифференцирование 16 сероваров сальмонелл групп В,С,Д,Е дополнительно на 48 генетически маркированных вариантов, тождественных чаще 5. *^-р*Итиг1ин.

6. Доказана биологическая обособленность варианта биовара II

Я

Б. ^ЫиигХшп - "госпитальные" штаммы, представляющего клон возбудителей адаптированный только к организму человека преимущественно детей раннего возраста, идентификация и дифференцирование которого проводится на основании наиболее низкой патогенности, вирулентности и инвазивности для белых мышей, коррелирующей с невысокой ДНК-азной активностью, множественной л трансмиссивной лекарственной устойчивостью с комплексом конъюгативных й -длазмид ыс л и 1по м групп молекулярной массой соответственно 64 и 32,3 ЭДЦ, рел-ликоны которых могли содержать от 3-5 до 9 детерминантов антибио-. тикоустойчивости, и неконыогативной - около 2 ВД, принадлежности к, . специфическим фаго-, хемоварам и серологическим вариантам, наиболее высокой терморезистентности и антагонистической активности в отно- . шении патогенных и условно-патогенных видов микроорганизмов.

7. Показано, что лекарственноустойчивые и чувствительные &,р»-■ га"ЬурМ в представляют единую группу пато-хемо-фаговаров, в которой не сформированы клоны возбудителей с большей адаптацией к организму человека.

8«. Установлено, что конъюгативные и -плазмиды "госпитальных" штаммов не изменяют существенным образом идентификационные характеристики ленарственночувствительных возбудителей сальмонеллезов и • их стрептомицинорезистентных мутантов, вызывают конверсию лекарственной резистентности, фаговаров, кинетики роста, вирулентности при снижении ее чаще у резистентных я. стрептомицину мутантов.

9. Доказано, что вариант биовара II д з» ^рМтшх^ию вызывает глубокие структурные и функциональные изменения в аэробном биоценозе кишечника детей раннего возраста с 1-й недели болезни, кото-

рые сохранялись на 7-й неделе у 85,7$ обследованных, длительно порепетирует в организме больных детей, формирует у энтеробактерий коныогативную л -плазмидную устойчивость.

10. Установлено, что под влиянием "госпитальных" возбудителей существенно уменьшается количество сильных антагонистов среди микробных ассоциаций кишечника и выделенных из них условно-патогенных энтеробактерий и увеличивается удельный вес слабых антагонистов и неантагонистов, защитная (антагонистическая) функция аэробного би- ' оценоза кишечника коррелирует с его составом, динамикой инфекционного процесса, тяжестью клинического течения внутриболышчной инфекции.

- 34 -

Список опубликованных работ но теме диссертации . I. Ленкина М.С., Гриднев В.А. Биологическая характеристика сальмонелл паратифа В // Антропонозные инфекции и их профилактика на Дальнем Востоке.- Хабаровск, 1971.- С. 53-58.

2. К изучению сальмонеллезных заболеваний и носительства в г. Хабаровске /Ленкина М.С., Крутикова A.M., Гриднав В.А. и др. // Там же.- С. 23-58.

3. Обнаружение сальмонелл в воде открытых водоемов и сточных водах /Ленкина М.С., Швец Н.Е., Воскресенская O.A., Гриднев В.А. // Материалы научной сессии, посвященной 50-летию образования СССР и освобождения Дальнего Востока от интервентов и белогвардейцев.-Хабаровск, 1972.- 0.-22-23.'

4. Состояние бактериологической диагностики кишечных инфекций в лабораториях Хабаровска / 1вниина М.С., Швец Н.Е., Воскресенская O.A., Гридаев В.А. // Там же,- С. 9-II.

5. Ленкина М.С., Гридаев В.А., Завгородаяя Е.Ф. Некоторые биологические свойства сальмонелл паратифа В различных ферментативных типов // Там4же,- С. 13-15.

6. Идентификация сальмонелл и дифференцирование сходных о ними бактерий в бактериологических лабораториях /Ленкина М.С., Грцц-нев В.А., Ивец Н.Е. и др.// Кишечные инфекции и борьба о ниш в областях а краях Дальнего Востока.- Хабаровск, 1973,- С. I3-Ï5.

7. Гриднез В.А., Ленкина М.С., Лукаиова Л.В. Состояние бактериологической диагностики .кишечных инфекций в лабораториях Комсо-модьска-на-Амурв // Там же.- С. 41-43.

8. Распространенность сальмонелл в Хабаровском крае и их роль в возникновении заболеваний и бактераоносительства/Ленкина М.С.,Кр; пникова A.M., Гриднев В.А. и др.//Антропонознне инфекции и их цроф! лактика на Дальнем Востоке.- Хабаровск, 1974.- Х2,- С. 73-75.

9. Гридаев В.А., Мельникова Е.Ю. Терморезистентность и чувст-

вительность к, антибиотикам s. typhinurlum , s.kottbua и Е."Крым'>7 Там же,- С. 84-87.

10. Индикация сальмонелл в некоторых объектах внешней среда /Гриднев В.А., Ленкина М.С., Швец Н.Е. и др.// Роль санигарно-мик-робиологических исследований окружающей среды в профилактике ки-шечних инфекций.- М., 1975,- С. 12-13.

11. Микробиологические и эпидемиологические аспекты сальмо-неллеза typhimurium . Биотипы, лекарственная устойчивость, терморезистентность, вирулентность /Гриднев В.А., Ливкина Е.Г., Назарова B.C. и др.// Современные проблемы сальмонеллезов и вакцинопро-филактики кори.- 1Л.-Ереван, 1976,- С. 97-99.

12. Гриднев В.А., Мельникова Е.Ю., Гудесблат НЛ. Динамика инактивации микробных популяций представителей семейства кишечных при действии субоптимальных температур //Ангропонозные инфекции и их профилактика на Дальнем Востоке,- Хабаровск,1976.- JS3.- С. 49-51.

13. Ливкина Е.Г., Гриднев В.А. Изучение стабильности измененной вирулентности s. typtiircurium , длительно пассировавшихся на средах с антибиотиками // Там же.- С. 43-44.

14. Ленкина М.С., Гриднев В.А. Декарбоксилазы аминокислот сальмонелл // Там же.- С. 51-53.

15. Ливкина Е.Г., Гриднев В.А. Изучение стабильности измененных антигенных свойств и вирулентности штаг,плов s.paratypht в при длительных пассажах на средах с антибиотшсами//Там же,- JH.- С. 7480.

16. Результаты сравнительного исследования эффективности сред обогащения для индикации сальмонелл /Ставицкая З.А., Дворецкий Т.А., Гриднев В.А., Киселева U.E.// Там же,- М,- С. 84-86.

17. Трансмиссивная лекарственная устойчивость и вирулентность "эпидемических" штаммов s, typhirairtura /Гриднев В.А., Ливкина Е.Г., Пдчугин 0.3. и др.// Антибиотики.- 1977.- Т. 22, Ш.- C.I0I2-I0I5.

- 36 - •

18. Гриднев В.А.., Ливкина Е.Г. Идентификация "эпидемических" и атипичных штаммов s. typhiraurium : Метод, рекомендации,- Хабаровск, 1977,- 18 с.

19. Гриднев В.А., Ливкина Е.Г., Филимонова Т.В. Трансмиссивная устойчивость сальмонелл к, антибиотикам и значение определения ее для эпидемиологического анализа: Метод, рекомендации в помощь врачам-бактериологам лабораторий санэпидстанций и больниц Дальнего Востока.- Хабаровск, 1977.- 15 с.

20. Диагностическая и эпидемиологическая значимость определения множественной и трансмиссивной устойчивости к антибиотикам

s.typhimurium /Гриднев'В.А., Ливкина Е.Г.,, Назарова B.C. и др. // Тез. докл. 17 Всероссийского съезда эпидемиологов и микробиологов,- М., 1978.- С. I08-II0.

21. Биологические свойства культур сальмонеллы тифямуриум, выделенных при различных эпидемических ситуациях /Гриднев В,А., Ливкина Е.Г., Назарова B.C. и др.// Острые кишечные инфекции: Респ. сб.- Д., 1978.- «2,- С. 61-65.

22. Гриднев В.А., ливкина Е.Г. Структура трансмиссивной устойчивости сальмонелл к антибиотикам // Антибиотики.- 1979.- Т. 24, №6.- С. 465-469.

23. Антагонизм аэробной микрофлоры кишечника детей при саль-монеллезе тифиыуриум / Гриднев В.А., Ливкина Е.Г., Гринберг И.И., Гридаева Л.Г.// Педиатрия,- 1980,- М,- С. 73.

■24. Иванов H.A., Гридаев В.А. Влияние конъюгативных плазмид антибиотикорезистентности s. typhimurium на некоторые показатели роста кишечной цалочки//Ангибиотикл.- 1981.- Т. 25, ЖЗ.- C.I09-II2.

25. Конъюгативные плазмида антибиотикорезистентности условно-патогенных энтеробактерий у детей при сальмонеллезе/ Гриднев В.А., Ливкина Е.Г., Гринберг И.И., Грвднева Л.Г.//Там же.- М.- С. 275279.

-ZI -

26. Гриднев B.A;, Ливкина Е.Г., Бутакова А.Е. Трансмиссивные факторы лекарственной устойчивости и применение их для маркирования штаммов сальмонелл в эпидемиологических целях: Метод, рекомендации для медицинской и ветеринарной служб Дальнего Востока.- Хабаровский ЦНТИ, 1981.- 17 с.

27. Изменения антагонистической активности аэробной микрофлоры кишечника детей при внутрибольничном сальмонеллезе/Гриднев В.А., Ливкина Е.Г., Гриднева Л.Г., Гринберг И.И.// Острые кишечные инфекции: Респ. сб.- Л., 1981.- Ж>,- С. 90-93.

28. Эпидемиологическая характеристика сальмонеллезов в г. Хабаровске / Гриднев В.А., Бутакова А.Е., Ливкина Е.Г. и др.// Там же,- С. 33-35.

29. Гриднев В.А.,. Ливкина Е.Г., Бутакова А.Е. Трансмиссивные факторы лекарственной устойчивости в эпидемиологическом анализе са- . льмонеллезов //Антропонозные инфекции и их профилактика на Дальнем Востоке.- Хабаровск, 1981.- С. 29-32.

30. Изменение биологических свойств сальмонелл при хромосомной и плазмидной устойчивости к хлорамфениколу и стрептомицину /Гриднев В.А., Ливкина Е.Г., Ковальский Ю.Г., Коваленко H.H.// Там же.-С. 32-37.

31. Сальданеллезы детей раннего возраста (внутриболышчное инфицирование): Докл. записка в ГСЭ7 и Управление лечебно-профилактической Помощи детям и матерям МЗ РСФСР ДСП 000006 ДазенсонЛ.Б., Карягина Е.И., Стрелкова М.Р. и др.- Л., 1982,- 18 с.

33. Антагонистические свойства "госпитальных" штаммов сальмонеллы тифимуриум /Гриднев В.А., Ливкина Е.Г., Ковальский Ю.Г. и др. // Пищевые токсикоинфекции.- Саратов, 1982,- Ч. I.- С, 9-12.

33.- Изучение стабильности коныогативных плазмид антибяотико-

резистеятности сальмонелл тифимуриум /Грвднев В.А., Ливкина Е.Г.,

Гридаева Л.Г. и др.// Острые кишечные инфекции: Респ. сб.- Л., 1982.- J£6.- С. 98^100. •

34. Гриднев В.А. Лекарственная устойчивость возбудителей саль-монеллезов Дальнего Востока: Метод, рекомендации.- Хабаровский ОДТИ, 1983.- 14 с.

35. Гриднев В.А., Ливкина Е.Г. Влияние конъюгативных R -плаз-мид на вирулентность чувствительных к антибиотикам штаммов сальмонелл и их сгрептомицинорезиатентные мутанты // Антибиотики.- 1983.Т. 28, #9.- С. 671-675.

36. Гриднев В.А. Конъюгагивная r -плазмидная устойчивость возбудителей сальмонеллезов // Там же.- 1984,- Т. 29, М.- С.249-253.

37. Антагонистические свойства s. tjphimurium , выделенных при различных эпидемических ситуациях/Гридаев В.А., Ливкина Е.Г., Бонда-ренко А.П. и др.// Шигеллезы, сальмонеллезы.- Л.,1984,- С. 66-70.

38. Гриднев В.А., Лнвкияа Е.Г., Ковальский Ю.Г. Характеристика лекарственной устойчивости возбудителей сальмонеллезов//Современная инфекционная патология человека в зоне строительства Восточного участка БАМа.- Хабаровск, 1984.- С. II-I7.

39. Гриднев В.А., Гриднева Л.Г. Характеристика конъюгативных

н -ллазмид энтеробактерай при внутрибольничном сальмонеллезе //Тез, докл. У Всероссийского съезда микробиологов и.эпидемиологов.- М., 1985.- С. 203-205.

40. Гриднев В.А., Гриднева Л.Г. Генетическая и молекулярная характеристика конъюгативных н -длазмид s. typhirauri.ua //Антибиотики и медицинская биотехнология.- 1986.- Ti 31, M.- С. 288-291.

41. Гриднев В.А. Влияние приобретенной лекарственной устойчивости на-фаговар сальмонелл'// Журя, микробиологии, эпидемиологии л иммунобиологии.- 1987.- Д 6.- С. II5-II6.