Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Микробиологические аспекты эпидемиологического надзора за сальмонеллезами в современных условиях

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Микробиологические аспекты эпидемиологического надзора за сальмонеллезами в современных условиях"

//ЛА с

■Г5 О Л 1 2 ДПР 1999

На правах рукописи

Кафтырева Лидия Алексеевна

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА ЗА САЛЬМОНЕЛЛЕЗАМИ В СОВРЕМЕННЫХ УСЛОВИЯХ

03.00.07,- Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Санкт-Петербург 1999

Работа выполнена в Санкт-Петербургском научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии имени Пастера

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор Хазенсон Л. Б.

Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение:

доктор медицинских наук, профессор Жебрун А. Б.

- лауреат Государственной премии СССР, доктор медицинских наук, профессор Королюк А. М.

- доктор медицинских наук, профессор Тец В. В.

- доктор медицинских наук Перш и н С. С.

Центральный НИИ эпидемиологии

Защита диссертации состоится 15 апреля 1999 года в 13.00 часов на заседании диссертационного совета Д 106.05.01 при НИИ военной медицины МО РФ (195043, Санкт-Петербург, Лесопарковая, 4). С диссертацией можно ознакомится в библиотеке НИИ военной медицины МО РФ.

Автореферат разослан" " марта 1999 года

Ученый секретарь диссертационного совета Д 106.05.01 доктор медицинских наук, профессор Гольдин Р. Б.

^и^ЬПИъапл I

)СУДАРСТВЕННАЯ

БИБЛИОТЕКА |

$ */ЛГ - С I ВВЕДЕНИЕ

* АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Продолжающийся рост заболевае-ости сальмонеллезами во многих странах, увеличение числа серологиче-шх вариантов возбудителей, обнаруживаемых у людей и животных, зна-ительная контаминация сальмонеллами пищевых продуктов животного роисхождения и различных объектов внешней среды, выдвигают пробле-у сальмонеллезов в ряд важнейших современных медико-социальных и дологических проблем, требующих решения комплекса санитарно-ггиенических, эпидемиологических и эпизоотологических задач не только а конкретной административной территории или внутри отдельной стра-ы, но и в международном масштабе.

Несмотря на то, что в Российской Федерации, более тридцати лет про-одится обязательная регистрация сальмонеллезов и повсеместно осу-[ествляется широкий комплекс профилактических мероприятий, к на-гоящему времени, в целом, не удалось достигнуть не только существенно-J снижения, но и стабилизации заболеваемости.

Наблюдаемые изменения в этиологической структуре сальмонеллезов аставляют уделить особое внимание изучению биологических свойств воз-удителей, без учета которых невозможно прогнозировать развитие эпиде-ического процесса и разрабатывать эффективные меры по снижению за-олеваемости, обусловленной определенными нозологическими формами.

В последние годы с целью совершенствования микробиологического ониторинга в системе эпидемиологического надзора за сальмонеллезами спользуют методы комплексного типирования возбудителей по феноти-ическим и генотипическим свойствам. Эффективное использование этих етодов расширяет возможности эпидемиологической диагностики как перативной, так и ретроспективной, позволяет проводить маркирование ггаммов и выявлять экологические особенности развития эпидемического роцесса, формируемого конкретными биологическими вариантами возбу-ителя (фаговаром, ферментоваром, генотипом, клоном и др.), отличать порадические случаи от вспышечных, местные от завозных, внутриболь-ичные от заболеваний, не связанных со стационаром, прослеживать эпи-емиологические связи между отдельными заболеваниями.

Отечественными и зарубежными исследователями накоплен огромный пыт изучения сальмонеллезов, отраженный в почти необозримой литера-уре (Арбузова В.А.,1980; Килессо В.АД993; Рожнова С.Ш.,1993; Черкасс-ий Б.Л., 1995; Хазенсон Л.Б., 1996). И все же отдельные стороны проб-емы продолжают оставаться и сегодня недостаточно освещенными или же ребуют пересмотра в свете накопившихся новых данных.

В эпидемиологии сальмонеллезов, как зооантропонозной инфекции, на овремснном этапе нуждаются в дальнейшем разрешении вопросы разви-

тия эпизоотического процесса среди птиц различных пород в условия промышленного птицеводства и его связи с эпидемическим процессом.

При сальмонеллезах, как нозокомиальной инфекции, необходимы ис следования, направленные на изыскание методов маркирования "госш тальных" штаммов, выяснение причин их формирования и изучение факте ров, определяющих селективные преимущества при распространении стационарах.

Новые знания о биологии и экологии сальмонелл позволят оценит влияние этих факторов на течение эпизоотического и эпидемического прс цессов сальмонеллезов и создадут предпосылки для формирования научи обосновашшх рекомендаций, направленных на предупреждение заболев; ний и снижение циркуляции возбудителей среда! людей, животных и птиц.

Таким образом, необходимость работы была обусловлена широким рас пространением возбудителей данной инфекции в природе, формирование антибиотикорезистентных вариантов сальмонелл, эпидемиологической с; мостоятельностью сальмонеллезов, вызываемых представителями не тол] ко разных сероваров, но и их конкретными биологическими вариантами.

Продолжающийся рост заболеваемости сальмонеллезами в России и н< обходимость совершенствования системы эпидемиологического надзора учетом современных особенностей биологических свойств возбудителе определяют актуальность настоящего исследования.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Сравнительное изучение комплекса бшш гических свойств сальмонелл, как важных "критериев" микробиологич< ского мониторинга и оценка влияния изученных признаков на развита эпидемического и эпизоотического процессов. Научное обоснование путе совершенствования системы эпидемиологического надзора и профилактик сальмонеллезов с учетом биологических особенностей возбудителей. ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Изучить особенности проявления эпидемического процесса сальмонелл! зов в России и на ряде административных территорий.

2. Дать биологическую характеристику фенотипических и генотипичеыи: свойств штаммов сальмонелл разных сероваров.

3. Определить основные биологические свойства сальмонелл - возбудил лей нозокомиальных инфекций.

4. Изучить пути распространения З.еШегШсЦв на промышленных птиц комплексах в связи с особой значимостью продуктов птицеводства, кг факторов передачи сальмонеллезной инфекции.

5. Оценить влияние ряда биологических свойств сальмонелл на течеш эпидемического процесса и тяжесть возникших заболеваний.

Дать оценку биологических свойств сальмонелл как критериев микробиологического мониторинга в эпидемиологическом надзоре за сальмонел-лезами.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Одной из особенностей эпидемиологии современных сальмонеллезов ияется проявление эпидемического процесса в двух основных формах, оантропонозная инфекция - резервуар связан с животным миром, пре-[ущественно с пищевым путем распространения (факторы передачи -щевые продукты животного происхождения) и как антропонозная ин-кция, обусловленная полирезистентными к антибиотикам вариантами збудителей, источники которых сосредоточены среди людей, главным разом детей раннего возраста. Распространение происходит с помощью кторов бытовой передачи в стационарах различного профиля.

2. Подъемы заболеваемости сальмонеллезами, зарегистрированные в 74-1978гг. и в 1986-1992гг. обусловлены конкретными биологическими риантами ведущих в этиологической структуре сероваров сальмонелл, ст сальмонеллезов в 1974-1978гг. был связан с появлением, а затем ши-ким распространением 8.1ур1итигшт, полирезистентных к антибакте-альным препаратам и возникновением внутриболъничных заболеваний. )дъем заболеваемости в 1986-1992гг. был связан с Б.епГегШсНз фаговара 1, кторами передачи служили продукты промышленного птицеводства ясо птицы и яйцепродукты).

3. Эволюционно сформировавшаяся популяция экологически родствен-IX штаммов сальмонелл, полирезистентных к антибиотикам, возбудите-й внутрибольничных сальмонеллезов, характеризуется выраженной гете-генностыо фенотипических и генотипических свойств, что свидетельст-ет о их различном происхождении и позволяет проводить маркирование гаммов по ряду биологических характеристик.

4. Популяция штаммов сальмонелл, циркулировавших среди людей, геет широкий диапазон уровней чувствительности к антибактериальным епаратам. Формирование и селекция антибиотикорезистентных клонов оисходит среди многих сероваров сальмонелл, что может поддерживать ределенный уровень внутрибольничного инфицирования людей.

5..Биологические варианты двух сероваров сальмонелл, с которыми бы-связаны длительные подъемы заболеваемости, содержали разные по оим характеристикам и детерминируемым свойствам плазмиды. 11-азмиды 8.1урЫтигшт придавали в условиях тесного бытового контакта стационарах определенные селективные преимущества этим микрооргазмам для заполнения экологической ниши. В результате чего, дети ран-го возраста становились длительными и массивными источниками выде-ния госпитальных штаммов.

Для Б.етегШсИз - плазмиды вирулентности (серовароспедифические обеспечивали штаммам высокую патогенность (инвазивность) для орга низма кур, что проявлялось в способности инвазировать внутренние орга ны, включая репродуктивные, и передаваться трансовариальным путем. И: том и в другом случае, биологические свойства, кодируемые плазмидами определяли своеобразие отношений между макро- и микроорганизмом, те! самым придавая эпидемиологическую значимость источникам данных воз будителей и экологические особенности развития эпидемического процесса.

6. Распространение Б.егйегШШз на отдельные административные терри тории Российской Федерации может происходить с инкубационным яйцо: или суточными цыплятами, используемыми для формирования промыт ленных стад птиц на предприятиях птицеводства, полученных из племен ных птицерепродукторов, неблагополучных по сальмонеллезной инфекции

НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

В основу работы положены обобщенные результаты исследований, про водившихся на протяжении более 20 лет (1975-1997гг.) по изучению био логических свойств штаммов сальмонелл (фенотипических и генотипичес ких), циркулирующих среди людей и животных, и эпидемиологически: особенностей вызываемых ими заболеваний.

Итоги выполненных эпидемиологических и микробиологических ис следований, а также экспериментальных работ, позволили получить новы данные о факторах и условиях, определяющих интенсивность эпидемиче ского процесса сальмонеллезов конкретных нозологических форм.

- Дана сравнительная и комплексная характеристика биологических (фено типических и генотипических) свойств и факторов вирулентности штаммо сальмонелл, циркулирующих в настоящее время, обоснована необходи мость их использования, как важных критериев микробиологического еле жения за распространенностью определенных биологических варишпо возбудителей.

- Впервые показана высокая гетерогенность популяции госпитальны штаммов сальмонелл по ферментативным, антигенным свойствам, чувстви тельности к типовым бактериофагам и антибактериальным препаратам. Ге терогенность популяции подтверждалась на молекулярно-генетическо! уровне, что проявлялось в значительном разнообразии плазмидных профи лей штаммов (по количеству и молекулярным массам плазмид).

- Установлены биологические особенности "госпитальных" штаммов саль монелл разных серологических вариантов (БЛурЫтипит, Б-ЬаИа, Б.тГапШ Б.еЩегШсНБ), циркуляция которых в больницах приводила к внут риболышчным заражениям и возникновению внутриболышчных вспыше* Показано, что антибиотикорезистентность у "госпитальных" штаммо сальмонелл детерминирована коньюгативными Я-плазмидами с разным.

шекулярными весами и маркерами резистентности. Выявленные различия общем плазмидном профиле у антибиотикорезистентных штаммов под-ерждают возможность использования этих признаков для внутривидовой фф.еренциации возбудителей внутрибольничных инфекций. 1оказано, что в совреме!П1ых условиях только комплексное типирование, нованное на выявлении фенотипических и генотипических особенностей збудителей, может дать достоверную информацию о эпидемиологиче-их связях между заболеваниями и источниками их возникновения, выявлено широкое распространение антибиотикорезистентности у саль-1нелл, принадлежащих к 28 сероварам. Результаты изучения репрезента-вной коллекции штаммов сальмонелл различного происхождения дают лубленное представление о распространенности устойчивости к антибак-риальным препаратам (се уровнях и спектрах) у представителей этого рода. 1оказано, что подъемы заболеваемости сальмонеллезами на каждой тер-тории бьиш обусловлены конкретньши биологическими вариантами вещих в этиологической структуре сероваров сальмонелл. Штаммы этих риантов характеризовались наличием плазмид, детерминирующих разлитые фенотипические свойства. Госпитальные штаммы 8.1урЫтипит держали Я плазмиды, придававшие им множественную устойчивость к тибиотикам, З.етиегШсИз - плазмиды вирулентности. Эпидемиологиче-ая значимость источников данных возбудителей определялась специфи-й взаимодействия макро- и микроорганизма, в первом случае - длитель-ш и массивным выделением госпитальных штаммов детьми раннего воз-ста, во втором - большей патогенностью для кур с инвазией в репродук-вные органы.

Доказана возможность "завоза" сальмонелл на административные терри-рии с инкубационным материалом для птицефабрик из хозяйств, небла-получных по сальмонеллезной инфекции. Выявление и обоснование дан-1ГО пути распространения зооантропонозных сальмонеллезов способство-ли пересмотру существующих санитарно-ветеринарных правил, приме-емых в птицеводческих хозяйствах, й разработке качественно новых мер юфилактики, направленных на прерывание циркуляции возбудителя у иц с учетом промышленной основы птицеводства.

ЕРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ И РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ

атериалы настоящих исследований были использованы при подготовке: триказа N 565 Министерства здравоохранения РСФСР "О профилактике кишечных инфекционных заболеваний сальмонеллезной этиологии среди детей в детских больницах и отделениях", Москва, 18.10.1977г.; методических рекомендаций "Сальмонеллезы у детей раннего возраста", Ленинград, 1980г.;

- методических рекомендаций "Эпидемиологический надзор за сальмонел-лезной инфекцией", Ленинград, 1987г.;

- медико-ветеринарных санитарных правил по борьбе и профилактике сальмонеллезов у людей и животных, Москва, 1993г.;

- методических рекомендаций "Особенности бактериологической диагностики и биологических свойств сальмонелл З.сЬоЬгаеэшз и 8.1урЫзш5, выделяемых от свиней, Санкт-Петербург., 1994г.;

- информационного письма о итогах выполнения комплексной научно-исследовательской темы "Сальмонеллезы у детей раннего возраста", МЗ РСФСР, N 09/10 - 410, от 22.04.1983г.;

- Информационного письма "О неотложных мерах профилактики сальмо-неллеза при выработке кондитерских изделий на предприятиях Министерства хлебопродуктов РСФСР, от 21.12.1989г.;

- информационного письма "Этиология сальмонеллезов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области в 1987-1993гг.;

- информационных бюллетенях Республиканского центра по сальмонеллам, изданных МЗ РСФСР в 1982г.; 1983г.; 1984г.; 1985г.;

- информационных бюллетенях центра по сальмонеллезам СевероЗападного региона за 1994г.; 1995-1997гг.;

- информационном бюллетене об инфекционных и паразитарных заболеваниях в Российской Федерации за 1992 г. - М., 1993. - С.79-83.

Результаты работы использованы в 1977-1996гг. при проведении десятков научно-практических семинаров, курсов информатики для работников медицинских и ветеринарных учреждений в различных городах страны, а также в многочисленных лекциях для работников практических учреждений, слушателей курсов повышения квалификации врачей (бактериологов, эпидемиологов, санитарных врачей) и различных ведомств.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Основные результаты работы доложены и обсуждены на: 1. Научно-практических конференциях и заседаниях.

- Заседаниях Ученого Совета НИИЭМ им. Пастера (1980-1997гг.);

- Итоговой конференции, посвященной 70-летию Института им.Пастера. -Санкт-Петербург, 1993г.;

- Научно-практической конференции практических врачей Калининградской области. - Калининград, 1980г.;

- Сессии Ученого Совета НИИЭМ им.Пастера "Эпидемиологические аспекты сальмонеллезов" (научно-практическая конференция санитарной службы Северо-Западного региона).- Петрозаводск,1988г.;

- Конференции "Лебедевские чтения" секция "Проблемы санитарно-эпидемиологического надзора". - Вологда, 1993г.;

[XII научно-практической конференции "Реализация концепции развита санэпидслужбы РФ в Санкт-Петербурге". - 1994г.; Совместных совещаниях работников медицинских и ветеринарных уч-юждений по профилактике сальмонеллезов, связанных с продуктами есивотного происхождения. - Тверь, 1990г.; 'еспубликанских совещаниях по проблеме сальмонеллезов. 'овещание по лабораторной диагностике и профилактике внутриболь-шчного сальмонеллеза. - Саратов, 1979г.;

Совершенствование работы санитарно-эпидемиологической службы по фофилактике инфекционных заболеваний. - Казань, 1990г.; Совещание санитарных и ветеринарных врачей по сальмошллезам, свя-анных с птицепродуктами. - Москва, 1989г., 1991г., 1994г.; Совещание ветеринарных врачей по проблеме сальмонеллезов у живот-шх и птиц. - Пенза, 1994г.;

Съездах и сессиях Всероссийского общества эпидемиологов, микробио-гогов и паразитологов.

8-ом съезде Всесоюзного научного общества эпидемиологов, микробио-югов и паразитологов. - Алма-Ата, 1989г.;

аседании Мурманского отделения общества эпидемиологов, микробио-югов и паразитологов. - Мурманск, 1988г.;

/I Всероссийском съезде микробиологов, эпидемиологов и паразотоло-ов. - Нижний Новгород, 1991г.;

Заседаниях Санкт-Петербургского научного общества эпидемиологов и микробиологов в 1987г., 1990г., 1993 г., 1995г.; Международных конференциях и симпозиумах. Международный симпозиум "Дни профилактической медицины". -Огославия, Ниш, 1990г., 1996г., 1997г., 1998г.; Международный симпозиум по микробиологии. - Япония, 1988г.; Международный симпозиум "Идеи Пастера в борьбе с инфекциями". -Санкт-Петербург, 1995г.;

Международный симпозиум "Пищевые зоонозы - сальмонеллезы, кампи-юбактериозы, иерсиниозы, листсриозы. Методы и средства диагностики, течения и профилактики". - Москва, 1995г.; Международная конференция, посвященная 75-летию Санкт-Ътербургского НИИЭМ им.Пастера. - Санкт-Петербург, 1998г.; Международная конференция Пастеровских институтов.-адагаскар,1998г

Материалы диссертации опубликованы в 76 паучных работах.

СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация изложена на 490 страницах ма-нописного текста; иллюстрирована 80 таблицами, 64 рисунками и мик-

рофотографиями; состоит из введения, 8 глав, заключения и выводов. Библиография включает 212 отечественных и 377 зарубежных работ.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В основу работы положены обобщенные результаты исследований, проводившихся нами на протяжении 20 лет (1975-1995гг.), по изучению биологических свойств штаммов сальмонелл (фенотипических и генотипичес-ких), циркулировавших среди людей и животных, и эпидемиологических особенностей вызываемых ими заболеваний, а также данные экспериментов на лабораторных животных (белые мыши, кролики, куриные эмбрионы).

При выполнении работы был проведен анализ статистических материалов Министерства Здравоохранения РФ, Государственного Комитета санитарно-эпидемиологического надзора РФ, а также данных опорных баз центра по сальмонеллам, расположенных на 16 административных территориях. Кроме того, использовались материалы собственных микробиологических и эпидемиологических исследований, проведенных при расследовании 62 вспышек сальмонеллезной этиологии и причин эпидемиологического неблагополучия в 34 административных территориях.

Материалом для проведения работы служили более 8 тысяч штаммов сальмонелл 53 серологических вариантов, выделенных в 1975-1995гг. от людей, животных и из объектов внешней среды. Биологические свойства сальмонелл изучали с применением следующих методов исследования: -культурально-ферментативные свойства и антигенную структуру изучали с помощью традиционных методов лабораторной диагностики; - отношение к антибиотикам - методом серийных разведений; - фаготипирование штаммов: S.typimurium - с помощью международной коллекции фагов и Тбилисского НИИВС; S.enteritidis и S.infantis - фагами Венгерского института гигиены, Будапешт (V.Laszslo, 1985), дополнительно, штаммы S.enteritidis типировали французской коллекцией фагов (в Парижском Пастеровском институте) и английскими фагами ( в Международном центре фаготипирования, Лондон); - плазмидную ДНК выделяли методом щелочного лизиса (Kado и Liu, 1981). Рестрикционный анализ плазмид S.enteritidis проводили рестриктазами Hindlll и Pstl. Группы несовместимости определяли на базе Института экспериментальной эпидемиологии (г.Вернигероде, Германия) в модификации H.Tschape и E.Tietze, 1980; -ПЦР проводили с универсальными праймерами, широко апробированными для генотипирования энтеробактерий (С.А.Булат, 1992); - продукцию коли-цинов определяли с помощью индикаторных штаммов коллекции Fredericq, методом нанесения верхнего слоя агара; - выделение белков наружных мембран проводили модифицированным методом по Ж.А.Волчкевич (1987) на базе Нижегородского НИИЭМ в лаборатории профессора Г.К.Дегтевой;

для изучения инфекционного процесса и оценки факторов вирулентности спользовали экспериментальные модели с применением микробиологиче-ких методов индикации возбудителя; - энтеральное, внутрибрюшинное и нтраназальное заражение белых мышей проводили по методике i.A.Арбузовой (1980); - наличие энтеротоксинов тестировали в опытах пе-евязанной петли кишечника кролика, тесте отека лапы белой мыши, в ин-рагастральной или анальной пробе на мышах-сосунках, а также по факто-у проницаемости сосудов в внутрикожной пробе на спине кролика; - с це-ыо выяснения роли кур в распространении возбудителей сальмонеллезов ыло проведено бактериологическое исследование 1151 проб различного [атериала (смывов с поверхностей, мяса и внутренних органов), а также уриных эмбрионов и пищевых яиц; - проведено бактериологическое ис-ледование 1730 проб фекалий на наличие сальмонелл с помощью традиционно-о (1502 пробы) и количественного микробиологического методов (228 проб);

Накопление баз данных, статистическая обработка методами вариаци-нной статистики и графическое изображение результатов проводилось на ерсональном компьютере IBM PC AT 286 с помощью пакетов прикладных рограмм FoxPro, Harvardgraphix. Обработку результатов опытов ПЦР сканирование фотографий, определение молекулярных весов фрагментов [НК и построение дендрограмм) проводили с помощью пакета Taxotron;

Отдельные фрагменты работы выполнены в рамках совместных исследо-аний при участии Карягиной Е.И., Стрелковой М.Р.,Рыкушина Ю.П., Мухи-ой Л.П., Мокроусова И.В., Нарвской О.В., которых благодарю за помощь.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. ХАРАКТЕРИСТИКА ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА

САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ

Регистрируемая заболеваемость сальмонеллезами в Российской Федера-ди имеет общую тенденцию к росту. Показатель заболеваемости увели-ился с 23,1 в 1971г. до 41 в 1997г. на 100 тысяч населения, при этом число аболевших составило 60180 человек. В динамике многолетней забо-еваемости отмечены два четко выраженных подъема ее уровня: 1974978гг. и 1986-1992гг. (Рисунок 1). Максимальный показатель забо-еваемости в первом подъеме был зарегистрирован в 1978г. (53,6 на 100 ысяч населения), во втором подъеме - в 1992г. (80,1 на 100 тысяч на-еления). Такое проявление эпидемического процесса (выраженные подъе-сы заболеваемости на фоне тенденции к росту) было характерно для боль-гей части территорий всех экономических районов. Отмеченные подъемы аболеваемости отличались основными параметрами проявления эпидеми-еского процесса: определялись различной значимостью основных источ-

пиков, факторов и путей передачи возбудителей, что обусловило и разный характер эпидемического процесса в определенные периоды времени.

Зарегистрированные подъемы заболеваемости продолжались несколько лет и их определяли сальмонеллезы, этиологически связанные с сальмонеллами двух сероваров: S.typhimurium и S.enteritidis, доля которых в этиологической структуре достигал 70-90%..

В эпидемический процесс первого подъема заболеваемости с наибольшей интенсивностью были вовлечены дети, их доля среди заболевших воз-расла до 70%. Дети первых лет жизни составляли более 90%. Это было связано с активизацией факторов бытовой передачи возбудителя в стационарах различного профиля. В целом по стране, в 1978г. из общего количества групповых заболеваний 82,5% были зарегистрированы среди детей и персонала детских больниц и отделений. Указанные особенности эпидемического процесса были связаны с появлением и широким распространением антибиотикорезистентных штаммов возбудителя - S.typhimurium. Внутри-болыдачный сальмонеллез, обусловленный S.typhimurium, полирезистентными к антибиотикам, приобрел черты антропонозной инфекции.

Второй подъем заболеваемости был связан с возрастающей распространенностью S.enteritidis. Основные факторы передачи - продукты промышленного птицеводства (мясо птицы, яйца и яйцепродукты), которые периодически оказывались значительно коптаминированы S.enteritidis. Рост заболеваемости данной этиологической формой сальмонеллеза отмечался во всех возрастных группах населения, однако, наиболее он был выражен в группе детей старшего возраста и взрослых. Среди заболевших взрослые и дети старше 3-х лет составляли 81,6-88,9%. Сальмонеллез, обусловленный S.enteritidis, имел черты классической зооантропонозной инфекции.

Следет отметить, что на фоне сальмонеллеза, связанного с мясом птицы и яйцепродуктами, на ряде территорий продолжали циркулировать полирезистентные к антибиотикам варианты сальмонелл и ежегодно регистрировались внутрибольничные заболевания, вызванные сальмонеллами разных сероваров, не только в педиатрических клиниках среди детей раннего возраста, но и в стационарах для взрослых, включая многопрофильные ЛПУ. Микробиологический мониторинг за этиологией нозокомиальных сальмонеллезов показал, что на территориях России значительно расширился серотиповой пейзаж возбудителей. В 1982-1997гг. внутрибольнич-ный сальмонеллез регистрировался реже, чем в 70-е годы, однако, 10 серологических вариантов сальмонелл, полирезистентных к антибиотикам, были зарегистрированы как возбудители внутрибольничных инфекций (S.typhimurium, S.haifa, S.infantis, S.heidelberg, S.mission, S.derby, S.kottbus, S.give, S.panama, S. enteritidis, сальмонеллы серогруппы В). В 1997г. по данным официальной регистрации сальмонеллез в структуре ОКИ, заре-

грированных в лечебных учреждениях, составил 30%. Внутрибольнич-случаи сальмонеллеза регистрировались в хирургических и детских щонарах, родильных домах и амбулаторно-поликлинических учрежде-х. В 1997г. летальность при вспьппечной заболеваемости неонатальны-ВБИ от сальмонеллезов составляла 18,2%, причем возбудителями чаще "о являлись S.typhimurium и S.enteritidis.

Гаким образом, одной из особенностей эпидемиологии современных лгонеллезов является проявление эпидемического процесса в двух ос-ных формах: 1. Зооантропонозная инфекция - резервуар связан с жи-яым миром, преимуществешго с пищевым путем распространения ■сторы передачи - пищевые продукты животного происхождения); 2. Ан-понозная инфекция, обусловленная полирезистентными к антибиотикам вантами возбудителей, источники которых сосредоточены среди людей, ишм образом, детей раннего возраста. Распространение происходит с ощью факторов бытовой передачи в стационарах различного профиля. Выявленные разлитая в характере развития эпидемического процесса салъ-еллезов могли быть объяснены при анализе биологических свойств возбуди-:й, с которыми были связаны длительные подъемы заболеваемости, а также ^делением условий, способствовавших активизации источников и факторов дачи сальмонелл ведущих сероваров. Вопросам эпидемиологического мар-эвания штаммов была посвящена следующая часть работы.

2. ХАРАКТЕРИСТИКА ФЕНОТИПИЧЕСКИХ СВОЙСТВ САЛЬМОНЕЛЛ

В настоящее время установлено, что род Salmonella состоит из мик-рганизмов, родственных по фенотипическим и генотипическим свойствам, позволило объединить их в один вид. Ни один из известных аргументов тозволяет рассматривать серовары, как самостоятельные виды. Из этого 1ует, что поиск методов для внутривидовой дифференциации каждого из )варов очень сложен, так как штаммы различных сероваров близки по фе-шическим и генотипическим характеристикам, как особи одного вида. В ходе работы было проведено изучение ферментативных признаков бо-8 тысяч штаммов сальмонелл, принадлежавлшх к 53 сероварам, цирку-овавших на 34 территориях России среди людей, животных и обнару-[ных в объектах внешней среды. Анализ результатов показал, что штам-имели типичные для данного рода и подвида 1 (S. enterica 1) свойства, заженная вариабельность этих свойств была характерна только для од-о серовара - S.typhimurium. Среди возбудителей зооантропонозных змонеллезов данной этиологии мы идентифицировали более 20 вариан-по способности ферментировать различные субстраты. Причем, один ментовар - с высокой ферментативной активностью - был наиболее рас-страненным на всех территориях, доля таких штаммов в популяции в

разные годы колебалась от 78 до 89%. Наши данные совпадают с результатами многих исследователей, констатировавших, что S.typhimurium является убиквитарным микроорганизмом, широко распространенным во всех экологических нишах. Кроме того, этот серовар является часть™ и постоянным возбудителем сальмонеллезов человека и разнообразных животных и птиц. В популяции штаммов данного серовара наиболее выражена гетерогенность ферментативных свойств. Вариабельность отмечена, в той или иной степени, практически всех известных признаков.

Штаммы других сероваров, выделенные от людей и животных, практически, не различались по ферментативным признакам и не делились на ферментовары. S.enteritidis, выделенные из различных источников, также характеризовались идентичными биохимическими свойствами, характерными для S .enteritidis var.Iena.

Штаммы сальмонелл - возбудители внутрибольничных заболеваний, оказались гетерогенны по ряду фенотипических свойств. Это относилось к серологическим и ферментативным признакам, фаготиповой принадлежности. Анализ 52 вспышек внутрибольничного сальмонеллеза, зарегистрированных в 1976-1993гг. на разных территориях России, показал, что их возбудителями являлись представители, как минимум, пяти сероваров сальмонелл (S.typhimurium - 35 вспышек), S.haifa (6), S.infantis (2), S.panama (2), S.enteritidis (3), а также сальмонеллы серологической группы В, у которых отсутствовали Н-антигены (4 вспышки), но они были этиологически связаны с внутрибольничным распространением инфекции.

По способности ферментировать субстраты госпитальные штаммы S.typhimurium подразделялись на 6 ферментативных вариантов. Каждая из ферментативных разновидностей была стабильной и ответственна за длительно протекающие вспышки с контактно-бытовым путем передачи. Серологически этот возбудитель был представлен двумя известными вариантами: с полным набором О антигенов и без антигена "5" (var. Copenhagen). По сочетанию ферментативных и серологических признаков, с учетом фаговара, можно было выделить более 10 биоваров госпитальных штаммов S.typhimurium.

Штаммы S.haifa, полирезистентные к антибиотикам (возбудители внутрибольничных заболеваний в Санкт-Петербурге, Воронежской, Мурманской, Владимирской, Псковской и Ленинградской областях), S.enteritidis (возбудители внутрибольничных вспышек в Ленинградской, Пермской и Калининской областях), S.panama (возбудители трех внутрибольничных вспышек во Владимирской области), а также штаммы серогруппы В - быта едины по ферментативным признакам и не отличались от возбудителей зооашропо-нозных сальмонеллезов (чувствительных к антибиотикам штаммов). Штаммы S.infantis (возбудители внутрибольничных заболеваний в Ленинградской области) были "маннитнегативные" и атипично росли на висмут-сульфит агаре

виде светло-зелеиых плоских колоний). Эти признаки были стабильны и ;лялись меткой штаммов, вызвавших внутрибольничнуго вспышку. Кали-гнградские штаммы этого серовара были без особенностей.

Обобщая данные о ферментативной активности штаммов разных серо->гических вариантов сальмонелл, следует признать, что в современной ла->раторной диагностике не придают большого значения биохимическому шированию. Оно не является рациональным или ведущим, так как для )лынинства сальмонелл ферментовар не имеет дифференцирующей спорности. В то же время, этот метод является пока единственным, необхо-гмым для первичной идентификации энтеробактерий, а в ряде случаев, ш одинаковой антигешюй структуре штаммов (S.typhisuis - S.choleraesuis; paratyphi В - S.java; S.mission - S.isangi; S.enteritidis var. Iena - Ratin), он 4 ~рает решающую роль для уточнения биовара.

Встречавшиеся отклонения от типичных свойств у сальмонелл, также эгут быть использованы как эпидемиологические маркеры штаммов. Атипичные" варианты сальмонелл, штаммы которых имели отклонения от )ычных серологических или ферментативных свойств, встречались в на-их исследованиях крайне редко, но они были стабильными маркерами таммов как зооантропонозных, так и внутрибольничных сальмонеллезов.

Фаготипирозание штаммов S.typhimurium, S.infantis, S.enteritidis, возбу-ггелей зооантропонозных сальмонеллезов (фагами к другим сероварам мы 5 располагали), показало, что по этой характеристике штаммы, циркули-/ющие в нашей стране, гфедставлягот неоднородную группу и под-1зделяются на ряд фаговаров. Особенностью распределения по фаговарам таммов S.typhimurium и S.enteritidis являлось преобладание в циркуляции тределенных фаговаров: фаговара 3 S.typhimurium и фаговара 1 enteritidis (Рисунок 2). Эта особенность нашла объяснение при эпиде-иологическом анализе заболеваний, вызванных этими возбудителями.

Как показали наши исследования, в Санкт-Петербурге в течение 1975-Э82гг. S.typhimurium фаговара 3 доминировали среди штаммов, выданных от животных (79,2%), от больных сальмонеллезом людей: взрос-»IX (77%) и детей (67%). Такие же культуры были обнаружены в смывах с яса и с оборудования, взятых на пяти птицефабриках (88,0%), а также в )де открытых водоемов (80,0%). Все штаммы S.typhimurium фаговара 3, оделенные из различных источников, характеризовались идентичными ¡ойствами (ферментативными, серологическими, отношением к антибио-псам, патогенностью для мышей).

Такая же тенденция (доминирование в популяции штаммов одного фа-шара), но более выраженная, отмечалась и при изучении S.enteritidis. Коллодия штаммов S.enteritidis для фаготипирования состояла из более 2 ты-14 культур, выделенных от людей, заболевших сальмонеллезом в 1985 -

1994гг. на 25 административных территориях, расположенных в различных регионах страны. Б.еЩегШсНз животного происхождения были представлены штаммами, изолированными из продуктов промышленного птицеводства 34 птицефабрик, расположенных также в различных административных территориях. Из общего количества изученных штаммов 93% относились к фаговару 1. Этот фаговар доминировал во все годы, его доля колебалась в пределах 77,6% (1988г.) - 98,6% (1986г). Штаммы фаговара 1 обнаружены на 25 территориях и везде были ведущими, составляя от 84 до 100°/! изученных культур. Подавляющее большинство штаммов (более 90%) 8.еШе-гШсИб, изолированных на 34 птицефабриках из продуктов промышленной: пгицеводства, также относились к фаговару 1. Во всех сравниваемых группам (человек, мясо кур, яйцепродукты) доминировали штаммы фаговара 1. Следует отметить, что среди штаммов, циркулировавших в 50-е годы, фаговар 1 не был обнаружен. Среди них чаще встречались фаговары 8 и 13. Штаммь З.еЩегШсНБ уаг. гаип (штамм Данич и др., используемые в нашей стране дл* дератизации) принадлежали к фаговару 7 (Таблица 1).

Следует отметить, что с 1989г. на ряде территорий (Санкт-Петербург Ленинградская и Курская область, Хабаровский край) установлена циркуляция З.еШепйсНз фаговара 6, который соответствует распространенному I странах Западной Европы фаговару 4.

Возбудители внутрибольничных заболеваний, полирезистентные к ан тибиотикам, 5ЛурЫтигшт, З.еШегШсПз и Б.шГапйз принадлежали к ограниченному числу фаговаров, практически, не обнаруженных среди чувствительных к антибиотикам культур.

Культуры Б.гурЫпшгшт, выделенные в 197б-1990гг. из 35 внутри-больничных очагов, зарегистрированных на 18 территориях, принадлежал! только к двум фаговарам - 20 и 29, в подавляющем большинстве к 20. Данный фаговар 20 (доминировавший в нашей стране среди госпитальны> штаммов) идентичен фаговару 204 Б^Ытипшп (Международная схемг фаготшшрования), широко распространенному в 70-х годах во многи> странах - возбудителю внутрибольничного сальмонеллеза.

Штаммы З.к^апЙБ, с различными ферментативными признаками, при надлежали к разным фаговарам: Калининградские культуры имели фаговар 111, в Ленинградской области циркулировали штаммы фаговара 513. Сред! штаммов, чувствительных к антибиотикам, эти фаговары мы не обнаружили.

Первая внутриболышчная вспышка, вызванная в.егйегШсНз, возникла ] Ленинградской области в 1986г., примерно, через год после подъема саль монеллеза данной этиологии и возбудитель ее не отличался по фаго типовой принадлежности (фаговар 1). В последующие годы (1989-1990гг. внутрибольничные заболевания были обусловлены другими фаговарами -!

17, которые или не встречались среди чувствительных к антибиотикам ггаммов, или их находки были очень редки.

Результаты фаготипирования свидетельствуют о том, что популяция .иркулировавших штаммов сальмонелл на территориях нашей страны ге-ерогенна по отношению к типовым фагам. Дифференциация возможна как увствителышх, так и резистентных к- антибиотикам штаммов. Слежение а циркуляцией определенных фаговаров сальмонелл позволяет определить раницы распространения их не только на одной территории или в одной онкретной стране, но и в мировом масштабе.

Следует особо подчеркнуть, что полученные нами данные свидетельст-уют о гетерогенности фенотипических свойств сальмонелл - возбудителей нутриболышчных заболеваний (сравнительно недавно эволюционно формировавшейся популяции, включающей полирезистентные к антибио-икам штаммы). Маркирование госпитальных штаммов по антигенным ха-актеристикам, ферментативным признакам и фаготиповой принадлежно-ги дает дополнительную дифференциацию штаммов и позволяет исполь-овать ее для микробиологического мониторинга за возбудителями внутри-ольничных сальмонеллезов (Таблица 2).

3. ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ И РЕЗИСТЕНТНОСТЬ САЛЬМОНЕЛЛ

К АНТИБИОТИКАМ

Динамическое слежение за уровнем чувствительности и структурой ан-ибиотикорезистентности выявило широкий диапазон этих параметров у альмонелл. Независимо от источника выделения (человек, животные) чув-гвителыюсть и спектры резистентности к антибиотикам у штаммов от-ичались значительным разнообразием. Это заключение основано на результатах определения МИК антибиотиков для 8338 штаммов сальмонелл 3 сероваров, циркулировавших в 1975-1996гг. (Таблица 3).

Как показали результаты исследования, чувствительность к антибак-ериальным препаратам является вариабельным свойством популяции ггаммов сальмонелл. Возбудители зооантропонозных сальмонеллезов бы-и чувствительны в разной степени к антибиотикам. МИК для 90% штам-[ов находились в пределах 2-64мкг/мл, для 50% штаммов - 1-32мкг/мл. !реди всех сероваров встречались штаммы с вариабельными МИК. Стати-гических различий в частоте определенных МИК антибиотиков для ггаммов разных сероваров мы не выявили. Статистические различия уста-овлены в степени чувствительности к антибиотикам у штаммов .1урМтипит, циркулировавших среди людей с интервалом в 15 лет (1975979гг. и 1990 -1994гг.). В 90-е годы в популяции отмечалось выраженное нижение доли штаммов чувствительных к низким концентрациям анти-иотиков и повышение доли штаммов с высокими значениями МИК. Такая енденция отмечена в отношении многих антибиотиков: в 70-е годы штам-

мы были "более чувствительны" к тетрациклину, стрептомицину, mohomi цину и левомицетину (Рисунок 3).

Штаммы сальмонелл, способные к широкому внутрибольничному paci ространению, характеризовались высокой множественной устойчивостью антибактериальным препаратам, а МИК антибиотиков были выи 100мкг/мл и составляла 300-1000мкг/мл. Спектры антибиотикорезистен-ности госпитальных штаммов различались как у штаммов одного серовар так и у штаммов, принадлежавших к разным сероварам. Несмотря на бол] шое разнообразие наборов детерминант устойчивости у штаммов, два cnei тра встречались у возбудителей всех изученных сероваров: - Cm, Mm, Кл Тс, Ар, Cb, Sm - 35 вспышек; - Cm, Mm, Km, Тс, Ар, Cb -10 вспышек.

Следует отметить, что на одной территории могли циркулировать го< питальные штаммы с разными спектрами резистентности. Так, в Санкт-П< тербурге и Ленинградской области у госпитальных штаммов S.typhimuriuj мы выявили семь различных спектров. Вместе с тем, спектры антибиотике резистентности являлись стабильными метками "вспышечных" штамма Как правило, из одной вспышки выделялись штаммы с идентичными cnei трами резистентности. При длительной циркуляции в стационарах у пггаи мов могли появляться дополнительные маркеры резистентности (Таблица 4).

У возбудителей зооангропонозных сальмонеллезов (не связанных с вну рибольничными заболеваниями), также отмечалась устойчивость к ai тибакгериальным препаратам. Микробиологический мониторинг за impKynj цией антибиотикорезистенгных вариантов, основанный на систематическо сборе и анализе данных о лекарственной устойчивости штаммов разноо! разных сероваров, показал, что практически ко всем антибиотикам отмене! устойчивость. Уровни МИК антибиотиков были достаточно высоки и соста) ляли 128 мкг/мл и более. Выделенные возбудители относились к 28 серолоп ческим вариантам. S.enteritidis составили 29,4%, S.typhimuriuin - 22%, S.haifa 21%, S.derby - 6.1%, S.infantis - 4,3%. Доля таких сероваров как S.breden; S.oranienburg, S.kottbus, S.manhatten, S.bovis-morbificans, S.wien, S.panam S.anatum, S.brandenburg, S.stanleyville, S.virchov, S.newport, Sitadar, S.kapemh и др. не превышала 2%. У штаммов наблюдалось большое разнообразие cnei тров антибиотикорезистентности, включающих от 1 до 5 маркеров. Причер штаммы одного серовара отличались как по количеству маркеров, так и г спектрам резистентности. Однако, множественная устойчивость к антибиот! кам выявлена только у штаммов S.typhimurium, S.haifa, S.panama, S.infanti S.enteritidis. Следует отметить, что 93% штаммов, имевших один и более ма] керов резистентности, были обнаружены у детей раннего возраста. Анализ ai тибиотикограмм штаммов, выделенных у детей раннего возраста, показал, чз в этой возрастной группе причиной сальмонеллеза в 15% случаев явились п< лирезистентные к антибиотикам штаммы, имевшие сходную ант!

тотикограмму госпитальным штаммом S.typhimurium - возбудителем внут-тбольничных заболеваний детей в 70-х годах.

Анализ циркуляции полирезистентных культур сальмонелл в зависимо-:и от территориального распространения (на примере Ленинградской, ладимирской и Калининградской областях) показал, что частота обнару-епия полирезистентных вариантов S.haifa, S.typhimurium, S.infantis, panama, S.enteritidis по суммарным данным была, примерно, одинаковой -1,4%: в Ленинградской области - 21,3%, во Владимирской области -1.5%, Калининградской - 21,9% (Р >0,05). Однако, отмечались сущест-;нные различия в частоте обнаружения их в пределах отдельных серова-эв (Рисунок 4). Результаты исследования свидетельствовали также о том, го полирезистентные к антибиотикам штаммы чаще обнаруживались у де-:й раннего возраста, чем у детей старшего возраста и взрослых.

Среди сальмонелл (32 сероваров), выделенных от животных, 6,4% пгаммов были устойчивы к антибиотикам (МИК превышали 100 мкг/мл). 3,6% штаммов животного происхождения были чувствительны к антибио-жам. Антибиотикорезистентные шта.ммы принадлежали к 10 сероварам: enteritidis, S.haifa, S.infantis, S.tshiongwe, S.typhimurium, S.dublin, kottbus, S.java, S.newport и S.montevideo. За исключением одного, выде-îHHoro из говядины, все антибиотикорезистентные штаммы были изо-ярованы из источников, прямо или косвенно связанных с деятельностью гицефабрик: из трупов кур, с поверхности тушек кур, предназначенных тя реализации в торговую сеть, из яиц или погибших куриных эмбрионов. 5 разнообразных спектров резистентности к антибиотикам включали от 1 э 3 маркеров. Штаммы, похожие по антибиотикограмме на возбудителей гутриболышчных сальмонеллезов, у животных не были найдены.

Полученные данные свидетельствуют о продолжающейся селекции ан-1биотикорезистентных клонов и этот процесс распространялся на штаммы иных сероваров сальмонелл, циркулировавших как среди людей, так и ивотных. Спектры антибиотикорезистентности могут быть "маркерами" таммов, выделенных при спорадической и вспышечной заболеваемости.

Микробиологический мониторинг за антибиотикорезистентностью таммов сальмонелл позволил документировать циркуляцию госпиталь-ых штаммов среди населения, главным образом, детей раннего возраста. 1ирокое распространение антибиотикорезистентности среди штаммов эн-:робактерий является общепризнанным фактом, однако, следует отметить, го в отношении сальмонелл, формирование полирезистентных клонов эеди различных сероваров ведет к увеличению их этиологической значи-ости, как возбудителей внутрибольничных заболеваний.

В целом, наши результаты свидетельствуют, что лекарственная устой-ивость широко распространена у штаммов сальмонелл разных сероваров.

Она характеризуется разнообразными спектрами, определенными для кон ретного региона, динамичностью, обусловленной изменениями в этиолог: ческой структуре современных сальмонеллезов. Распространение маркер< устойчивости зависело, с одной стороны, от принадлежности к определе; ному серовару, а с другой - от территориального выделения возбудител Очевидно, что значимость факторов, способствующих селекции и распр странению резистентных клонов в популяции сальмонелл, значителы варьирует и имеет разное конкретное выражение.

Тот факт, что приобретение возбудителем множественной устойчивое-; к антибиотикам, способствует в условиях стационара активизации ко тактно-бытового пути передачи и формированию длительных внутрибол ничных очагов, требует осуществления систематического микробиологич ского мониторинга за структурой и степенью антибиотикорезистентнос: сальмонелл. Своевременное использование информации о чувствительн сти возбудителя, несомненно, представляет большую ценность для по тверждения обоснованности (или изменениях в схемах) применения раци нального терапевтического средства, а также для проведения целенапра ленных профилактических мероприятий.

4. ГЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА САЛЬМОНЕЛЛ

В настоящее время предложено дополнить типирование штаммов их i нетическим маркированием, что определило широкое использование терми "молекулярная эпидемиология". В качестве методов генетического марк рования штаммов сальмонелл в работе были использованы: плазмидный ак лиз, ПЦР с универсальными праймерами, а также спектр белков наружш мембран. Каждый из методов позволил дополнить характеристику биолог ческих свойств штаммов, полученных на основе фенотипических признаков

Плазмидный анализ показал, что штаммы сальмонелл определенных с роваров содержали разнообразные по физическим характеристикам и код руемым свойствам плазмиды. Для возбудителей зооантропонозных сальм неллезов, чувствительных к антибиотикам, характерным являлось налич серовароспецифических (Vir) плазмид, Col-плазмид (ответственных за пр дукцию колицинов) и критических плазмид. Возбудители внутрибол ничных сальмонеллезов содержали R - плазмиды (антибиотикорезистев ности). Типирование по плазмидному профилю выявило неоднородность п пуляции штаммов, как чувствительных, так и резистентных к антибиотикам.

Серовароспецифические плазмиды были обнаружены у штамм S.typhimurium, S.enteritidis, S.agona, S.dublin, S.choleraesuis. Их молек лярные массы соответствовали размерам плазмид эталонных штаммов, штаммов, чувствительных к антибиотикам, принадлежавших к 15-ти сер варам, таких как S.haifa, S.derby, S.panama, S.kottbus, S.typhisuis, S.londc S.infantis, S.anatum, S.mission, S.oranienburg, S.tshiongwe и др. сероваросг

ифические плазмиды не были обнаружены. 3,5% штаммов имели Col или рилтические плазмиды массой 2,2 - l,5Md.

Штаммы S.enteritidis var. lena содержали плазмиды с молекулярным ве-эм 38Md. Такую плазмиду имели все штаммы, независимо от года и ис-эчника выделешм (1900-1994гг.), и фаготиповой принадлежности. Исюпо-ение составили штаммы S.enteritidis var. ratin, которые кроме фермен-зтивных и фаготиповых отличий от штаммов var. lena, содержали плазми-ы с молекулярной массой - 58Md. Серовароспецифические плазмиды со-ержали штаммы S.dublin - 50Md, S.agona - 45Md, S.choleraesuis - 36Md. Тгаммов S.typhimurium и S.choleraesuis var.Kunzendorf были неоднородны о дашюму признаку. Среди них встречались бесплазмидные варианты.

Как показали результаты проведенного нами исследования, в настоящее ремя в популяции S.typhimurium присутствуют как бесплазмидные (69,9% ггаммов), так и содержащие Vir плазмиды штаммы (30,1%). Следует отме-ить, что бесплазмидные штаммы преобладали в нашей коллекции во все эды наблюдения. У этого серовара отмечается выраженная тенденция меньшения в циркуляции штаммов, содержащих серовароспецифические лазмиды. Их доля в 1948-1952гг. составляла 43 ±3,0%; 30±2,7% в 1975986гг., а в 1987-1992гг. - только 18,2 ±2,3%. Различия статистически зна-имы (Р <0,05). Серовароспецифические плазмиды S.typhimurium и .enteritidis относились к одной группе несовместимости - FII. По плаз-идному профилю штаммы S.typhimurium и S.enteritidis можно было раз-елить на 7 и 5 групп, соответственно.

Рестрикционный анализ серовароспецифических плазмид штаммов .enteritidis var.Iena бьш проведен с целью подтверждения идентичности ггаммов, выделенных из различных источников: от больных людей и от ур, мясо и яйца которых предполагались как факторы передачи. Эти исс-едования имели большое значение для конкретного эпидемиологического асследования. По ферментативным признакам, фаготиповой принадлеж-ости, чувствительности к антибиотикам они представляли единую группу, [лазмидный анализ не выявил различий штаммов - все содержали плазми-у 38Md. Анализ рестрикционных профилей этих плазмид, после обработ-и рестриктазами HindIII и Pstl, также показал их полную идентичность.

Возбудители внутрибольничных заболеваний S.typhimurium, S.infantis, .haifa, S.panama, S.enteritidis, полирезистентные к антибиотикам, содержа-и R плазмиды. Эти плазмиды имели разнообразные молекулярные массы )т 74 до 120Md) и, в отличие от серовароспецифических плазмид, были онъюгативными и принадлежали к группе несовместимости F-I. Именно к гой группе несовместимости, согласно данным литературы, чаще всего ринадлежали R плазмиды "госпитальных" штаммов сальмонелл.

Популяция госпитальных штаммов сальмонелл, принадлежавших к разным серологическим вариантам, характеризовалась значительной гетерогенностью плазмидного профиля. Как показали наши исследования, в одш и те же годы, внутрибольничные вспышки в крупных городах были обусловлены штаммами, различающимися не только по фенотипическим свой ствам (сероварам, ферменговарам, фаговарам), но и по Я - плазмидам.

У штаммов 8.1урЫтипит - возбудителей внутрибольничных заболева ний, выделенных в разные годы на 18 территориях, выявлено более И плазмидных профилей: штаммы содержали от 1 до 5 плазмид с молекуляр ным весом от 120М(1 до 1.0М(1. Я-плазмиды с молекулярной массой 120Мс обнаружены в штаммах, выделенных в Санкт-Петербурге на протяженш значительного отрезка времени (1976-1984гг.). Такая плазмида присутство вала в штаммах 8ЛурЫтигшт - возбудителях внутрибольничных вспыше! в Нарве (1976г.), Карелии (1983г.), Мурманске (1990г.). В 70-х гг. плазмидь с молекулярной массой 96Мс1 были широко представлены в штаммах н< многих территориях: Мурманск (1977г.), Дербент (1976г.), Челябины (1977г.), Баку (1975г.), Свердловск (1978г.), Санкт-Петербург (1981г.), Ле нинградская обл. (1983г.). Следует отметить, что штаммы сальмонелл, вы деленные на одной территории (Санкт-Петербург), но из различных внут риболышчных вспышек, также имели выраженные различия плазмидноп профиля по количеству и весу плазмид (Таблица 5). Плазмиды, обнаружен ные у госпитальных штаммов 8,1ш1а, 8ЛпГапй8, 8.рапата, З.егЛегШ&з, так же обладали широким спектром молекулярных масс, что создавало вариан ты плазмидного профиля. Так, в Санкт-Петербурге и Ленинградской облас ти внутрибольничные вспышки были вызваны штаммами Б.Ьа^а, которьк имели идентичные маркеры резистентности к антибиотикам и Я плазмид} 120М(1. В отличие от других штаммов 8.ЬаШ1, они были резистентны к ген тамицину. На 4-х территориях ( в Карелии, Владимире, Мурманске I Пскове) штаммы Б.ЬаЛа имели одинаковые антибиотикограммы и спектрь передаваемой резистентности. Однако, на трех территориях циркулиро вавшие штаммы содержали Я плазмиды 96Мс1, а в Мурманске - плазмид ный профиль и размеры плазмид штаммов отличались (104Мй и 44,7Мс1) Штаммы Б.шГапйз были возбудителями внутрибольничных вспышек, заре гистрированных в Ленинградской области и Калининграде в 1982-1983гг Штаммы, циркулировавшие в 1982г. на этих территориях, различались п< фенотипическим свойствам и по спектрам передаваемой резистентности. I плазмиды, которые они содержали, имели различный молекулярный вес 9бМс1 (Ленинградская область) и 104Мс1 (Калининград). Однако, в 1983г. ] стационарах, где продолжали регистрироваться вспышки, у госпитальны: штаммов изменился плазмидный профиль (появились дополнительны! плазмиды), при сохранении первоначальных Я плазмид. Причем, в Ленин

декой области в 1983г. антибиотикограмма штаммов не изменилась, по внению с 1982г., а у Калининградских культур S.infantis она была вафельной. Штаммы S.panama, выделенные от детей при вспышках, воз-опих в нескольких стационарах Владимирской области, различались как спектрам резистентности, так и по размерам плазмид. Эти маркеры аммов позволили нам провести эпидемиологический анализ вспышек и )еделить число человек, вовлеченных в каждую вспышку. Несмотря на то, что рост заболеваемости, вызванный S.enteritidis, начался второй половине 1985г., с 1986г. уже стали регистрироваться внутриболь-шые вспышки, вызванные этим возбудителем, полирезистентным к анти->тикам. Причем, по ферментативным признакам они были идентичны чув-ительным к антибиотикам культурам, а по фаготиповой принадлежности и жерам резистентности - различались'. На разных территориях (в Ленин-дской, Пермской и Калининской областях) госпитальные штаммы nteritidis характеризовались индивидуальными спектрами резистентности, [змидными профилями и фаготиповой принадлежностью. Слежение за биологическими свойствами позволило нам установить, » широкая циркуляция среди людей и птиц S.enteritidis фаговара 1 приве-к вариабельности ряда фенотипических признаков, кодируемых плазми-га: резистентность к антибиотикам, продукция колицинов, наличке штических плазмид, которые не изменили фаговара штаммов. В начале гьема заболеваемости штаммы данного фаговара представляли собой туляцию с идентичными биологическими свойствами. По ферментатив-\ характеристике они относились к var.Iena, были чувствительны к антикикам, не продущгровали колицины, содержали серовароспецифиче-то плазмиду 38Md. К 1994г. (девятый год циркуляции среди людей и гц) 8,3% штаммов приобрели резистентность к различным антибиотикам 1 до 6 маркеров). Два штамма, выделенные из воды открытых водоемов, 1атили серовароспецифическую плазмиду, а полирезистентные к антикикам штаммы приобрели коныогативные R-плазмиды (96Md-140Md), i наличии плазмиды 38Md. У части штаммов появились критические 13миды (l-5Md), 10% штаммов стали продуцировать колицин группы I или Ib). Ферментативные и серологические свойства, белки наружных trôpan, вирулентность для лабораторных животных оказались более статными, изменения данных свойств не отмечены.

Таким образом, наши данные свидетельствуют, что плазмиды широко щетавлены в штаммах сальмонелл. Плазмидный профиль гптаммов, вы-юнных на различных территориях при внутрибольничных инфекциях, жет иметь существенные различия, что позволяет использовать его как жер эпидемических штаммов сальмонелл.

Вместе с тем, следует подчеркнуть, что обнаруженная гетерогенност) антигенных и ферментативных признаков, а также плазмидного профит возбудителей внутриболышчных заболеваний свидетельствует о различное происхождении "госпитальных" штаммов. По всей вероятности, R плазмиды имеют широкий круг хозяев и способны формировать эпидеми ческие штаммы вне зависимости от их фенотипических признаков. Следуе' отметить, что такие свойства R плазмид, как нестабильность и коньюга тивность, могут затруднять эпидемиологические исследования и их выво ды. Поэтому для микробиологического слежения за возбудителями внутри больничных инфекций необходимо, наравне с определением серовара иметь информацию о других фенотипических и генотипических свойствах.

Результаты, полученные при исследовании возбудителей внутриболь ничных заболеваний, свидетельствуют, что вариабельность такого призна ка, как резистентность к антибиотикам, определялась значительным раз нообразием плазмид, присутствовавших в них. Учитывая широкое распро странение R - плазмид в различных экосистемах, их конъюгативность j способность к межродовым переносам, можно предположить, что R плазмиды способствуют формированию чрезвычайно динамической и вы сокой генетической неоднородности госпитальных штаммов и возможт более высокой гетерогенности такой популяции, по сравнению, с чувстви тельными к антибиотикам штаммами.

Результаты генотипирования штаммов на основе ПЦР с универсальным] праймерами показали возможность применения данного метода для дополни тельной идентификации сальмонелл. Использованные нами праймеры выявля ли генетическую неоднородность сальмонелл, принадлежащих к серологи ческой группе D. Для штаммов этой серогруппы, включающей S.typhi S.enteritidis, S.dublin, S.panama, S.gallinarum-pullomm и др., генотип, получен ный в ПЦР с использованием двух универсальных праймеров, коррелировал сероваром (ПЦР - паттерны были серовароспецифичны). Эти праймеры могу быть использованы при изучении атипичных штаммов сальмонелл группы Е Идентичными оказались генотипы штаммов S.enteritidis фаговара 1. При ис следовании 9 эпидемиологически независимых штаммов S.enteritidis, выде ленных из различных источников (человек, курица, яйца), во всех случая наблюдали полное совпадение ПЦР-паттернов, характерных дл S.enteritidis. В то же время, мы не получили различий в ПЦР-паттернах ме жду штаммами S.typhimurium и S.haifa, принадлежащих к серогруппе В ] имеющих различия только по Н-антигёну. По всей видимости, использо ванные праймеры не затронули вариабельные области генов, кодирующи различные Н-антигены у штаммов группы В. Для дифференциации штам мов группы В и других серогрупп, возможно, требуется подбор допол нительных специфических или универсальных праймеров. Следует отме

гь, что возбудители внутриболышчных и пищевых вспышек или полире-л-ентные и чувствительные к антибактериальным препаратам штаммы, зависимо от принадлежности . к серологическому варианту typhimurium, S.haifa, S.enteritidis), относились к одному "генотипу", так 1С имели идентичные ПЦР-профили (Рисунок 5).

Таким образом, наши исследования подтвердили идентичность штам-в на уровне генотипа, имевших различия по признаку, детерминирован-му плазмидами. Появление в штаммах R-плазмид не изменяло их гено-па, что свидетельствует о тесном родстве возбудителей внутрибольнич-к и зооантропонозных сальмонеллезов.

Сопоставление протеиновых профилей подтверждало близость белково-состава наружных мембран сальмонелл, относившихся к разным серова-м, но объединенных в один биологический вид. Видимо, мембраны, как нсервативные структуры бактериальной клетки, практически не подвер-:ны изменениям и это не позволяет широко использовать их в эпидемио-гической диагностике салъмонеллезов.

Известно, что ряд сероваров сальмонелл включает биовары, которые ентичны по антигенной структуре, но отличаются по некоторыми свойс-ам. Так, S.enteritidis объединяет два биовара: var. lena и var.Ratin, разли-ющихся по ферментативным свойствам. Как показали наши исс-цования, штаммы этих вариантов различались также по фаготиповой инадлежности, по молекулярным массам серовароспецифических плаз-щ и относились к разным генотипам (имели индивидуальные ПЦР-офшш). Аналогичные результаты получены и при исследовании штам-IB S.choleraesuis (включая var.Kunzendorf) и S.typhisuis. При значительной античности антигенных свойств, штаммы различались по морфологиче-им и ферментативным характеристикам, а также по плазмидному профи), генотипу и спектрам белков наружных мембран. Из приведенных данных следует, что такие свойства, как плазмидный офиль, спектр белков наружных мембран и генотип (ПЦР-профиль) мог служить маркерами, позволяющими достоверно идентифицировать гаммы сальмонелл определенных биоваров. Рациональное применение шекулярно-генетических методов при изучении штаммов разных серова-в, позволило решить конкретные эпидемиологические задачи на многих рриториях РФ. Существующую гетерогенность фенотипических свойств, лыное антигенное разнообразие сальмонелл, вероятно, можно наблюдать . генетическом уровне, так как серовары устанавливают на основании зличий в специфичности вырабатываемых белков, играющих роль Н ан-тенов. С целью дальнейшего совершенствования генетического анализа льмонелл, вероятно, требуется целенаправленный выбор праймеров или

другие диагностические системы, выявляющие различия в геноме штаммов, чем используемые в данной работе.

5. ПАТОГЕННОСТЬ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ

САЛЬМОНЕЛЛ И ПРОДУКЦИЯ ЭНТЕРОТОКСИНОВ

Инфекционный процесс, развивающийся в организме животного или человека, вызываемый сальмонеллами, характеризуется рядом общих черт. Они известны, хорошо изучены, и являются основой для постановки диагноза. Однако, степень выраженности, особенности клиники и патогенеза заболеваний, зависят с одной стороны от состояния макроорганизма, а с другой стороны от вирулентности или особых свойств возбудителя. Сальмонеллы - инвазивные микроорганизмы. Их патогенность связана со способностью проникать через кишечный эпителий и паразитировать в макрофагах. Как патогенные микроорганизмы, они обладают набором признаков - факторов вирулентности, необходимых для выживания в организме хозяина. Различные ультраструктурные компоненты бактериальной клетки выполняют роль факторов вирулентности и участвуют в различных стадиях взаимодействия паразита с хозяином. В данной работе не затронута существенная проблема регуляции и экспрессии факторов вирулентности бактерий и их взаимодействие с организмом хозяина, которая нуждается в самостоятельном рассмотрении.

Мы изучили способность к продукции энтеротоксинов 364 штаммов с разнообразными биологическими свойствами, принадлежащих к 25 серова-рам. Полученные нами данные свидетельствуют, что штаммы сальмонелл являлись слабыми продуцентами энтеротоксинов. Способность к продукции энтеротоксинов, была обнаружена только у штаммов двух сероваров, которые были способны вызывать длительные подъемы заболеваемости у людей - 8,1урЫтигшт и Б.егЦегШсНз. Исследования, проведенные на моделях различного уровня: приближенном к естественному (перевязанная петля тонкой кишки кролика) и экспериментальном (интрагастральная или анальная проба на мышах - сосунках) подтвердили, что у штаммов Б.етегШсЦз и БЛурЫтигшт, на всех моделях, с той или иной выраженностью, выявлялась продукция энтеротоксинов (термолабильного и термостабильного). Различий в продукции токсинов у полирезистентных к антибиотикам штаммов, по сравнению с чувствительными, не отмечено. В то же время, действие термостабильного и термолабильного токсинов сальмонелл было слабее, чем у энтеротоксинов ЭТКП (Е.соН 0148).

Слабая продукция энтеротоксинов и отсутствие ее у штаммов многих сероваров, не позволяют рассматривать это свойство как надежный признак для микробиологического мониторинга за возбудителями.

Сальмонеллезы, которыми в естественных условиях болеют человек и животные, могут быть моделированы на лабораторных животных. Самым

1аспространенным для тестирования вирулентности сальмонелл является нтеральное заражение белых мышей. Патогенность для лабораторных жи-отных, в частности для белых мышей, является важным критерием биоло-ической характеристики штаммов сальмонелл. Используя данный способ аражения белых беспородных мышей и бактериологическое исследование |рганов зараженных животных, удалось выявить широкий диапазон степе-ш вирулентности сальмонелл для мышей. Установлено, что энтеральное аражение штаммами разных сероваров приводило не только к гибели мы-пей, но вызывало развитие несмертельной инфекции. В результате провеянных исследований было выявлено, что S.typhimurium, S.enteritidis, l.bovismorbificans - являлись высоковирулентньгми, они вызывали у мышей инфекционный процесс со смертельным исходом. Сальмонеллы других се-юлогических вариантов - S.heidelberg, S.newport, S.mission, S.panama, l.anatum, S.london и многие другие вызывали у животных развитие нес-1ертельного инфекционного процесса, в разной степени выраженного, но с акономерным проникновением возбудителя в паренхиматозные органы (пе-[ень, селезенку). Возбудители брюшного тифа и паратифов - были, прак-ически, не патогенны для мышей. При энтеральном введении их белым мытам происходила быстрая элиминация микроорганизмов из кишечника. В па-енхиматозных органах и лимфатических узлах они не обнаруживались.

Важнейшее положение о биологической неоднородности возбудителей ; пределах конкретной инфекционной формы, о клинико-микробиологи-геских и эпидемиологических особенностях вызываемых ими заболеваний, также о необходимости, в связи с этим, раздельного их эпидемиологиче-кого анализа, подтверждалось нашими исследованиями при использова-пш методов различного уровня (микробиологических, экспериментальных, юлекулярно-генетических). Наиболее полную конкретизацию эти положены получили при изучении сальмонеллеза, обусловленного S.typhimurium.

Многолетние исследования, проводимые в НИИЭМ им.Пастера, осно-анные на сравнительном изучении свойств S.typhimurium, выделенных из различных источников, позволили выявить циркуляцию среди людей трех дологических разновидностей S.typhimurium, различавшихся по степени ирулентности для мышей и чувствительности к антибиотикам. Условное |бозначение этих биоваров было введено В.А.Арбузовой в 1979г.:

Биовар 1 - штаммы высоковирулентны для мышей (вызывали у них при нгеральном заражении смертельную инфекцию), чувствительны к антибио-икам. Циркулировали у людей и животных с момента описания (1892г.)

Биовар II - штаммы менее вирулентны для мышей, чем биовара 1, вы-ывали развитие несмертельного генерализованного процесса. По чувстви-ельности к антибиотикам подразделялись на два биовара : IIS и IIR.

К биовару IIS отнесены штаммы чувствительные к антибиотикам. Циркуляция их отмечена впервые в 50-х годах. Ими было обусловлено более половины всех зарегистрированных случаев заболеваний данным сероваром в Ленинграде. В 80-е годы такие штаммы часто выделялись в Ленинграде от кур и больных сальмонеллезом людей Они принадлежали к фаговару 3.

Штаммы биовара IIR - полирезистентны к антибиотикам, получили широкое распространение как возбудители внутриболышчных заболеваний.

Отсутствием в те годы доступных методов маркирования штаммов объясняется широкое использование лабораторных животных для изучения факторов патогенности различных микроорганизмов. Многими исследователями была подтверждена слабая вирулентность для мышей S.typhimurium - возбудителей внутриболышчных инфекций.

Как показали наши исследования, эта закономерность раскрывалась и на других моделях: внутрибрюшинном и интраназальном заражении мышей. Наблюдалась генерализованная инфекция, но по срокам и частоте гибели мышей штаммы бюваров IIS и ÜR были менее вирулентны, чем биовара 1.

Дальнейшими исследованиями нам удалось установить взаимосвязь трех биологических признаков штаммов S.typhimurium - патогенности для мышей при энтеральном заражении, принадлежности к определенным фа-говарам и содержанием серовароспецифической плазмиды (60Md). Все штаммы S.typhimurium биовара 1, вызывавшие гибель мышей, содержали серовароспецифическую плазмиду - 60Md, а штаммы биовара II (IIS и IIR) не имели такой плазмиды: штаммы IIS оказались бесплазмидные, а "госпитальные" штаммы (биовара IIR - полирезистентные к антибиотикам) содержали R-плазмиды.

Гетерогенность популяции штаммов S.typhimurium по признаку патогенности для мышей проявлялась в принадлежности их к определенным фаговарам: штаммы фаговаров 1 var 1,1 var 2,1-avar 1, 1-а var 2, 2, 2-d были высоковирулентны для мышей (относились к биовару 1) и содержали плазмиду (60Md). Штаммы фаговаров 2-в, 2-е, 3 - принадлежали к менее патогенному варианту (IIS), не способному вызывать гибель мышей и они были бесплазмидные ( отсутствовала плазмида 60Md). Госпитальные штаммы S.typhimurium (биовар IIR) - не содержали плазмиды вирулентности (60Md), не вызывали гибели мышей, относились к фаговарам 20 и 29. В отличие от штаммов биовара 1 и IIS, они содержали R плазмиды и обладали множественной устойчивостью к антибиотикам (Таблица 6).

Таким образом, проведенные исследования показали, что наиболее "чувствительными" маркерами выявлешюй гетерогенности в популяции S.typhimurium оказался фаговар штаммов, о чем свидетельствуют наши данные о фаготиповой принадлежности штаммов каждого из трех биоваров.

Исходя из результатов исследований, можно предположить, что появ-ение трех биологических разновидностей S.typhimurium было связано с отерей плазмиды вирулентности и приобретением плазмид антибиотикоре-астентности штаммами, составляющими популяцию данного возбудителя, [аибольшим потенциалом вирулентности обладали штаммы, содержавшие гровароспецифические плазмиды (способные вызывать гибель дшшей).

Заболевания детей данной этиологической формой, зарегистрированные в 0-х и 70-х гг. и сопровождавшиеся выраженным изменением эпидемиоло-яческой характеристики сальмонеллеза, допустимо связать с появлением в ги периоды "новых" стабильных вариантов (биоваров) возбудителя, от-ичавшихся от ранее циркулировавших отсутствием плазмиды вирулентнос-и. Этот факт, исследованиями тех лет, был зафиксирован в снижении ви-улешности для мышей. Биовар IIS, впервые обнаруженный в 1950г., яв-яется, по-видимому, вариантом типичных культур биовара 1, утративших лазмиду вирулентности. Можно предположить далее, что биовар HR сфор-ировался в течение последующих лет на фоне широкого применения анти-актериальных препаратов, из биовара IIS, приобретая различные R-плаз-иды, что проявлялось в проявлении нового признака - устойчивости к анти-иотикам. Как менее патогенный вариант S.typhimurium, но имеющий опре-еленные селекгивные преимущества, этот возбудитель был способен вызы-ать тяжелые заболевания у наиболее восприимчивой части населения - детей аннего возраста. Ареал его интенсивного распространения ограничивался гационарами, в которых при большой плотности детей, постоянным их ребыванием там, и учитывая особые условия ухода за ними, он мог широ-о распространяться контактным путем с помощью разнообразных факто-ов бытовой передачи. Высокая устойчивость к дезинфектантам и факто-ам внешней среды, создавали ему дополнительные селективные преи-ущества для заполнения экологической ниши в стационарах и длительной иркуляции среди детей.

Нами было продолжено изучение вирулентности для мышей штаммов альмонелл других сероваров. Результаты исследований 1382 штаммов, от-осившихся к 25 серологическим вариантам показали, что высоко виру-ентными для мышей, способными вызывать смертельную инфекцию при нтеральном заражении, были штаммы, содержавшие серовароспецифиче-Есие плазмиды. Несмертельную генерализованную инфекцию вызывали у ъппей штаммы сероваров, не имевшие серовароспецифических плазмид: .infantis, S.panama и S.haifa и 15 сероваров (S.bredeney, S.derby, S.mission, .heidelberg, S.montevideo, S.oranienburg, S.kottbus, S.muenchen, S.give, .reading, S.senftenberg, S.Stanleyville, S.tshiongwe, S.virchov, S.kisangani).

Различий в степени вирулентности для энтерально зараженных мышей ежду чувствительными и полирезистентными к антибиотикам штаммами

сероваров 8.ш1'апи5, Б.Ьа^Га, 8.рапата не было. Все штаммы этих сероваров вызывали несмертельную генерализованную инфекцию, как и штаммы биовара II 5 ЛурЬипигшт. Штаммы, содержащие серовароспецифические плазмиды, Б.еШягШсИз (как чувствительные, так и резистентные к антибиотикам), включая штаммы уаг.Кайп, БЛиЫш и S.agona (чувствительные к антибиотикам) вызывали гибель всех мышей, а из внутренних органов павших мышей был высеян возбудитель. ■ Среди штаммов Б.сЬокгаезшз уаг. Кшиеп(1огГ, так же как и в пределах 8.1урЫтипит, выявлены разные по вирулентности для мышей варианты: - одни вызывали 100% гибель и содержали серовароспецифические плазмиды, другие - менее вирулентные, вызывали развитие несмертельного инфекционного процесса с проникновением возбудителя во внутренние органы и не имели плазмид (Таблица 7).

Элиминация серовароспецифических плазмид приводила к снижению вирулентности штаммов. Бесплазмидные производные 8. 1урЫтипит, 8.етегШ(Й8, 8^опа, полученные путем элиминации плазмид из высоковирулентных для мышей штаммов, не вызывали гибели при энтеральном заражении, инвазия за пределы кишечника (в печень, селезенку, мезентери-альные лимфатические узлы) была незначительная, а Ы}5о при внутрибрю-шинном заражении в 100 и более раз (Р. <0,05) превышала аналогичные показатели исходных штаммов.

Таким образом, проведенные нами исследования убедительно продемонстрировали неоднородность популяции штаммов сальмонелл по степени патогенности для мышей при естественном вскармливании, и прямой зависимости данного признака от присутствия в штаммах серовароспецифических плазмид. Результаты работы свидетельствуют, что дифференциация штаммов с использованием экспериментальной модели энтерального заражения белых мышей, может быть заменена определением плазмидного профиля, так как признак "гибель мышей при энтеральном заражении" коррелирует с наличием в штаммах серовароспецифических плазмид.

6. ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ, МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ И

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА,

ОБУСЛОВЛЕННОГО ^ех^егШсШ

Рост заболеваемости сальмонеллезом, обусловленный Б.егЛегШсНБ, был отмечен в 1985г. в Северо-Западном регионе, а в последующие годы этот сальмонеллез распространился и на другие территории страны, занимая лидирующее положение в этиологической структуре. До начала эпидемического роста его доля не превышала 3%, а на многих территориях данная этиологическая форма, практически, не регистрировалась. Анализ причин, определяющих высокие уровни заболеваемости сальмонеллезами на территориях России в 1986-1992гг., выявил значительную контаминацию мяса кур и яиц сальмонеллами. На всех территориях, где был отмечен рост

болеваемости, из смывов с мяса и из паренхиматозных органов птиц, из щ и яйцепродуктов выделяли штаммы З.еЩегШсИБ.

В 1981-1985гг. на территориях Северо-Западного региона (до подъема болеваемости сальмонеллезом, обусловленного Б.еЩегШсИз), от до-ипней птицы на предприятиях промышленного птицеводства выделяли льмонеллы 30 сероваров. Наиболее часто обнаруживали 8.1урЫтипит 3%), 5.шХапйй (12,6%), Б.бегЬу (8,9%), Б.коПЬш и Б.уйсЬош по (8,6%), огашепЬш^ (5,7%), Б.пегуроЛ (4,4%) и др.

В 1987-1994гг. на территориях Северо-Западного региона, на которых .ш отмечен рост заболеваемости сальмонеллезом, вызванный Б.егПегШсНз, 1СО кур (смывы) и внутренние органы (печень, селезенка, сердце), также жив предшествовавшие годы, были инфицированы сальмонеллами, но ювень инфицированности отдельными серовариантами был различный. С шболыпей частотой в смывах были обнаружены Б.еШсгШШз (68,5%), гурЬтшпит (9,4%), БлпГап^ (2,8%), БЛшГа (2,6%), 8.пе\уро«; (2,2%), коЦЬиэ (1,4%) и др. Из внутренних органов (печени, селезенки) были вы-;лены сальмонеллы 14 сероваров из 19, которые встречались на поверхно-и мяса: Б.ег^епйсйз составили более половины находок - 53%, ЗЛзЫог^уе 11,8%, Б.койЬиз - 7,1%, БлпГап^, Б.скгЬу, 8.1урЫтигшт - по 2,5%, а§опа -1,7% и др. Бактериологические исследования, проведенные нами в 1чале подъема заболеваемости (апрель 1985г.) на одной из птицефабрик гнинградской области, показали, что .в 1985г. в сравнении с 1984г. в 10 13 возросла высеваемость сальмонелл из материалов и из смывов (23,1 ± 6% против 2,3 ± 1,8%; Р<0,05). Различия в частоте обнаружения сальмо-:лл непосредственно в продукции (мясе кур, внутренних органах, смывах поверхности тушек) были 7-кратными: (31,3 ± 3,8% против 4,4% ± 1,6%; :0,05). Причем в 100% случаев это были находки Б.еЩеписНз.

Анатогичные результаты получены при исследовании яиц и яйцепро-'ктов. Высеваемость сальмонелл в 1986г. возросла в 25 раз (331,8 против 1,3 положительных находок на 10000 исследований). По данным инфор-щии, поступавшей в НИИЭМ им.Пастера, из яиц (с поверхности и из со-ржимого) выделенные сальмонеллы принадлежали к ограниченному чис-' сероваров (7). З.е^егШсИз составили 81,3%, Б.шГапйз - 6,3%, Б.сЗегЬу -2%, 8.1урЫтигшт, S.agona, S.senftenberg - 2,1%, ЗЛБЫопддуе - 1,0%. Все ¡речисленные серовары встречались на поверхности скорлупы яиц. Из со-ржимого яиц закономерно, на ряде территорий выделялись только саль-шеллы З.еЩегШсйз (Владимирская, Орловская и Ленинградская области, абаровский край, Карелия). Инфицированность яиц и яйцепродуктов, а кже эмбрионов была значительно ниже инфицированности мяса птиц. В гсе крупного рогатого скота и свиней З.егЛсгШсНз или не были обнаруже-

ны, или выявлялись значительно реже (в 21 раз), чем из мяса кур предпри ятий промышленного птицеводства.

Микробиологический мониторинг, включающий детальное изучени биологических свойств сальмонелл, позволил нам установить, что подъе; заболеваемости сальмонеллезом, вызванным S.enteritidis, на многих терри ториях России бьш связан с возбудителем, принадлежавшим, практически к одному фаговару -1. Этот же фаговар являлся доминировавшим у кур и продуктах птицеводства. Идентичность штаммов S.enteritidis фаговара 1 изолированных от людей, кур и из продуктов промышленного птицеводе тва подтверждена на молекулярно-генетическом уровне содержанием серо вароспецифичсских плазмид и их одинаковым рестрикционным профиле\ а также идентичностью амплифицированных фрагментов ДНК в ПЦР с ис пользованием двух универсальных праймеров. Детальный анализ возник шей эпидемической ситуации привел к заключению, что рост заболеваемс сти сальмонеллезами в 1985-1987гг. произошел только на тех территория? которые получали инкубациошюе яйцо или суточных цыплят с одног племенного птицезавода, при четком контроле - отсутствии подъемов забс леваемости этим сальмонеллезом, в отмеченный период, на территория? которые не имели таких связей с этим заводом (Рисунок 6). В период подт ема заболеваемости установлена высокая зараженность сальмонеллами ш са кур, пищевых яиц и "племенных" яиц на данном заводе.

Многие страны в 80-е годы переживали аналогичную ситуацию, при кс торой S.enteritidis стала основным возбудителем, вызывавшим заболевани людей с пищевым путем распространения. Эта ситуация была уникальна том, что ведущим фактором передачи служили продукты птицеводства: большей степени куриные яйца, в меньшей - мясо кур. Причины, npmej шие к глобальному увеличению циркуляции, именно, S.enteritidis, не яснь Очевидным является лишь то, что этот серовар, никогда не рассматривае мый ранее как "хозяин-адаптированный" для птиц (в отличие от S.gall narum-pullorum), обладает значительной инвазивностью для современны пород кур и может передаваться трансовариальным путем. Проводимые в многих странах исследования по изучению вертикального пути передачи кур указывают, что этот путь передачи в природе очень редок, его чре: вычайно трудно выявить. Однако, огромные масштабы производства и по: ребления яиц, масса нарушений при хранении и реализации данной проду] ции, а также широкое использование для пищевых целей блюд из сырых ил термически недостаточно обработанных яиц, делают этот уникальный nyi передачи возбудителя эпидемиологически значимым, практически, во все странах, где есть факт инфицирования птицепоголовья данным сероваром.

По нашим данным о вирулентности и инвазивности для кур штаммо]

».еЩегШсПз фаговара 1 (широко распространенного в нашей стране) свиде-ельствовали находки его в желчи, костном мозге, а также, что особенно ¡ажио для понимания сложившейся ситуации, в желточных фолликулах ;ур-несушек. Частота выделения данного микроорганизма из внутренних >ргапов была не большой и составляла 4,2-4,4%. Штаммы других фагова->ов, обнаруживались только в смывах с мяса кур. При плановых бактерио-гогических исследованиях, несмотря на значительное выделение из смывов : мяса и из паренхиматозных органов, данный возбудитель очень редко наводили в яйцах и яйцепродуктах и эти факты не позволяли нам сделать за-слгочение о реализации трансовариального пути передачи у кур. Возмож-юсть трансовариальной передачи Б.е^егМсИз фаговара 1 была доказана шга в экспериментах на 10-дневных куриных эмбрионах. Результаты этих 1селедований показали, что большие дозы возбудителя приводили к гибели (мбрионов. Инфицирующие дозы 10 и 102 КОЕ не влияли на развитие эм-5рионов. На 21 день вылупились клинически здоровые цыплята, но более 50% цыплят бьиш инфицированы Б.е^егШсНз. Возбудитель у них был обна->ужен в желточном мешке, в сердце и в печени.

Таким образом, проведенные исследования показали, что серовар ».егйегМсИз, никогда не рассматривавшийся ранее как "хозя!ш-адаптиро-¡анный" для птиц, обладает инвазивностыо для современных кроссов кур и он .южет передаваться последующему поколению трансовариальным путем.

Материалы расследования вспышек сальмонеллеза, возникших на территориях Северо-Западного региона, выявили возросшую роль, как факто-юв передачи Б.е^егШ&з, белково-кремовых изделий. Эпидемиологические денные указывали, что белково-кремовые изделия, приготовляемые по тех-юлогии без термической обработки, несмотря на высокое содержание сахара (до 40%), часто являлись причиной возникновения вспышек с пшце-5ым путем передачи. Нашими исследованиями бьшо доказано, что 5.еп1егШ(113 могут длительно выживать на скорлупе (более двух недель) и размножаться в белке и желтке яиц до 105 - 103 КОЕ/мл. Высокие концен-гращш сахара не предохраняли данные продукты от размножения содер-кащихся в них сальмонелл.

Следовательно, возможность трансовариальной передачи, способность З.еМегШ&з выживать на поверхности скорлупы и интенсивно размно-каться в содержимом яиц, даже при значительной концентрации сахара, тридают особую эпидемиологическую значимость яйцепродуктам, как активным факторам передачи современного сальмонеллеза.

Данные о контаминации Б-е^егШсИэ фаговара 1 птиц и птицепродуктов ла птицефабриках, расположенных на отдельных территориях, связанных эбщими поставками только инкубационного материала, можно рассматривать как одно из доказательств единого эпизоотического процесса рас-

пространения данного серовара (конкретного фаговара 1) среди птице поголовья, начиная с 1985г. Его начальным этапом стало появление S.en teritidis в крупных птицеводческих хозяйствах, снабжавших другие пти цефабрики инкубационным яйцом или суточными цыплятами.

Признание вертикального (трансовариального) пути передачи S.ente ritidis, в первую очередь, требует от ветеринарной службы разработки до полнительных мероприятий, направленных на прерывание данного пути i получение стада кур, свободных от этих сальмонелл.

7. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДЕТЕЙ

РАННЕГО ВОЗРАСТА, КАК ИСТОЧНИКОВ ГОСПИТАЛЬНЫХ

ШТАММОВ САЛЬМОНЕЛЛ

Внутрибольничный сальмонеллез представлял особую эпидемиологиче скую форму, которая складывалась из взаимодействия больничной сред! и группы детей, ослабленных различными соматическими и инфекционны ми заболеваниями. Под нашим наблюдением находились более 200 боль ных детей, за которыми вели длительное клинико-микробиологическое на бгаодение (возбудители - S.typhimurium, S.haifa). При сравнении тяжест] заболевания у больных, выделявших штаммы сальмонелл чувствительные i полирезистентные к антибиотикам, оказалось, что тяжелые, среднетяжелы и легкие формы заболевания встречались у них приблизительно с одинако вой частотой. Среди больных всех возрастных групп преобладали гастро интестинальные формы (более 80%).

Данные количественного бактериологического обследования свидетель ствовали о высокой эпидемиологической значимости больных сальмонел лезом детей раннего возраста, как источников госпитальных штаммов саль монелл. Инфицирование детей полирезистентными к антибиотикам пггам мами S.typhimurium приводило значительно чаще к более длительному вь: делению возбудителя, чем заражение чувствительными к антибиотика] штаммами: 38,7% детей на поздних сроках (57-242 дни болезни) оставалис бактериовыделителями. Причем, у детей раннего возраста при сальмонех лезе, обусловленном госпитальными штаммами, продолжительность диг реи была также наибольшей. Вместе с тем, дети раннего возраста были н только длительными, но и массивными выделителями возбудителя, боль шие количества возбудителя (109 - 107 в 1г испражнений) обнаруживались 3,6 раза чаще, чем у детей того же возраста с чувствительным к антибиот* кам возбудителем (биовара IIS). В сравнении с детьми 3-14 лет, они mc¿ леннее освобождались от возбудителей и чаще оставались длительным бактериовыделителями: освобождение от сальмонелл к 22 дню болезни них наблюдалось почти в 2 раза реже, а бактериовыделение через месяц позже от начала заболевания почти в 4 раза чаще. Следует особо отметит] что через месяц после начала заболевания каждая третья исследованнз

роба фекалий содержала значительные количества возбудителя (109 - 107 в г). Учитывая недостаточную эффективность существующей в 80-е годы гиотропной терапии, такие дети при неблагоприятных санитарно - эпиде-[иологических условиях в клиниках представляли серьезную угрозу, как ктивные источники сальмонеллезной инфекции (Таблица 8,Таблица 9).

Таким образом, одной из основных причин формирования внутриболь-ичной очаговой и спорадической заболеваемости следует признать появ-ение и широкую циркуляцию полирезистентных к антибиотикам штаммов ^урЫтипит, массивность и длительность его выделения детьми раннего озраста, устойчивость во внешней среде, что, в совокупности, способс-вовало активизации в больничных условиях контактно-бытового пути пе-едачи данного возбудителя.

ВЫВОДЫ

1. Динамика заболеваемости сальмонеллезами в Российской Фе-ерации характеризуется двумя шюголетними подъемами ее уровня: 974-1978гг. и 1986-1992гг. Отмеченные периоды отличались отдель-ыми параметрами проявления эгащемического процесса и определя-ись сальмонеллезами, этиологически связанными с конкретными био-огическими вариантами ведущих сероваров. Первый период был обус-овлен появлением в популяции 8.1ур1ншипит полирезистентных к ан-ибиотикам штаммов, их широкой циркуляцией среди детей раннего озраста и способностью формировать внутрибольничные очаги инфек-ии с помощью факторов контактно- бытовой передачи возбудителя, второй подъем заболеваемости был связан с возрастанием этиологи-сской роли Б.еЩегШсНз фаговара 1, активизацией пищевого пути пере-ачи с преобладанием продуктов птицеводства (мяса кур и яйце-родуктов), как основных факторов передачи инфекции.

2. Эпидемиологической особенностью современной сальмонеллез-ой инфекции является проявление эпидемического процесса в двух ормах. Зооантропонозная инфекция - резервуар связан с животным иром, преимущественно с пищевым путем распространения, факторы ередачи - пищевые продукты животного происхождения. Нозокоми-иьная инфекция, обусловленная полирезистентными к антибиотикам зриантами возбудителей, источники которых сосредоточены среди лю-ей, главным образом, детей раннего возраста. Распространение проис-одит в стационарах различного профиля.

3. Установлено, что популяция циркулирующих штаммов сальмо-елл разных серологических вариантов характеризуется гетероген-остью фенотипических и генотипических свойств, что необходимо читывать при идентификации штаммов, наравне с серологической ха-

ристикой и при разработке программ эпидемиологического надзора за сальмонеллсзами. Микробиологический мониторинг следует проводить в целях слежения за распространенностью конкретных биологических вариантов возбудителей и изучать эпидемический и инфекционный процессы, вызываемые ими.

4. Возбудители внутрибольничных сальмонеллезов, эволюционно сформировавшаяся популяция штаммов, полирезистентных к антибиотикам, неоднородны по серологическим и ферментативным признакам, фаготшювой принадлежности, спектрам устойчивости к антибиотикам и плазмидному профилю, что позволяет использовать эти свойства в целях эпидемиологического маркирования штаммов.

5. Доминирующим фактором эволюции эпидемического процесса внутрибольничных сальмонеллезов является формирование популяции полирезистентных к антибиотикам штаммов различных сероваров сальмонелл, как правило, длительно циркулировавших среди людей или животных. В настоящее время зарегистрированы внутриболышчные вспышки на территориях России, обусловленные возбудителями более 10 серологических вариантов.

6. Динамическое слежение за лекарственной устойчивостью показало, что 36% штаммов сальмонелл, принадлежавших к 28 серологическим вариантам, обладали резистентностью к одному или нескольким антибактериальным препаратам. Множественная устойчивость к антибиотикам детерминирована конъюгативными Я-плазмидами, имеющими молекулярную массу от 74 до 120М(1. Выявленные различия в спектрах ангибиотикорезистентности и в общем плазмидном профиле дают возможность использования этих маркеров для дифференциации возбудителей сальмонеллезов в пределах серологического варианта.

7. Установлена выраженная связь между биологическими свойствами сальмонелл и клинико-микробиологической характеристикой вызываемых ими заболеваний. Инфицирование детей полирезистентными вариантами 8.1урЫтипит и 8.Ьа1Га приводило значительно чаще к длительному и более массивному выделению возбудителя, чем при заражении чувствительными к антибиотикам вариантами. Продолжительность диареи и бактериовыделения была наибольшей у детей раннего возраста, инфицированных госпитальными штаммами сальмонелл, вследствие чего они являлись активными и основными источниками госпитальных штаммов сальмонелл в стационарах.

8. Идентичность штаммов Б.еЩегШсЦз фаговара 1, лидирующего в циркуляции среди людей и птиц в 1986-1996гг. на 25 территориях, подтверждена на молекулярно-генетическом уровне содержанием идентичных серовароспецифических плазмид, их одинаковым рестрикцион-

м профилем, а также гомолотичностью ПЦР - паттернов геномной Ж, что свидетельствует о взаимосвязи эпидемического и эпизооти-:кого процессов сальмонеллезной инфекции, зарегистрированной на югих территориях страны.

9. Доказано, что запое З.еШегШсЬ фаговара 1 на птицефабрики рас-ложенные на разных территориях страны, может осуществляться с кубациошшм яйцом или суточными цьшлятами, полученными из ицерепродукторов, неблагополучных по данному сальмонеллезу жробиологически и экспериментально обоснована возможность кон-кинации содержимого яиц в организме кур и реализации трансо-эиального пути передачи З.епСегШсНз.

10. Биологические варианты двух сероваров, с которыми были святы длительные подъемы заболеваемости, содержали разные по своим рактеристикам и детерминируемым свойствам плазмиды Гос-тальные штаммы Б.1урЫшипит - Я - плазмиды, придававшие штамм выраженную устойчивость к антибиотикам, селективные преиму-:ства для заполнения экологической ниши в стационарах, обеспечивая зникновение сальмонеллезов на фоне соматических заболеваний и тенсивной ангибиотикотерапии. Для Б-етегШсИз - плазмиды виру-нтности обеспечивали штаммам патогенность для организма кур, что оявлялось в способности инвазировать внутренние органы, включая продуктивные, и передаваться трансовариальным путем. Биологиче-ае свойства, кодируемые плазмидами, определяли своеобразие взаи-отношений между макро- и микроорганизмом, тем самым, придавая идемиологическую значимость источникам данных возбудителей.

о/оооо

1971 1973 1976 1977 1979 1981 1963 1385 1987 1989 1991 1993 1995 1997 Рис.1. Динамика заболеваемости сальмонеллезами в России в 1971-1997 гг.

1 - фактическая кривая; 2 - прямолинейная тенденция; 3 - криволинейная тенденция

1980 г. 1987 Г1

Э^рЫтигшт фаговар 3 Б.етегШШэ фаговар 1

1 2 3 4 1 2 3 4

Рис.2. Доля ведущих фаговаров сальмонелл, выделенных из различных источников в Санкт-Петербурге (фаговары: Щ ведущий, ¡¡¡¡¡другие)

1 - всего; 2 - взрослые; 3 - дети; 4 - продукты птицеводства

всего Области: |

■Ч.ГурЫтипит 8.Ьа1Га ) Ленинградская С2] Владииирская

Б.рапата З.етегШЛь ЩЦ Калининградская

Рис.4. Устойчивость к антибиотикам среди штаммов сальмонелл пяш сероиарои, выделенных от людей на отдельных территориях

мономицин

ей? иг1 :у\

щ

ш

5 10

стрептомицин

20

3-

за

5 10

тетрациклин

20

Щ

% 100^

ампициллин

"Ш

¡$Г£<

я

% 100

%

10

гентамицин

10

20

10

левомицетин

20

5

5

>ис. 3. ЧАСТОТА РАЗЛИЧНЫХ ЗНАЧЕНИЙ МИК АНТИБИОТИКОВ ДЛЯ ШТАММОВ в.^рЫпшгшт, выделенных в 1975-1979гг.И и 1990-1994гг.[_ ПИК: 5; 10; 20 мкг/мл;

bpxlOO 20 10 5

Hi I I I I 1_L

S.typhimurium (S) S.typhimurium (R) S.haifa (S) S.haifa (R) — S.choleraesuis*"

_ S.choleraesuis

S.choleraesuis* _ S.enteritidis**

d S.enteritidis (S) S.enteritidis (R) S.enteritidis*

РИС. 5. СХЕМАТИЧЕСКОЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ ТИПОВ ПЦР - ПАТТЕРНОВ ШТАМПОВ САЛЬМОНЕЛЛ РАЗНЫХ СЕРОВАРОВ И ДЕНДОГРАННА ИХ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ВЗАИМООТНОШЕНИИ. ПНР паттерны сальмонел получены с использованием прайнера H 21. (Программа TAXTROH. - P. A. D. Grlmont, institut Pasteur. Paris).

S - чувствительные к антибиотикам; Е - полирезистентные к антибиотикам; S.choleraesuis* - var.Kunzendorf (arabinose+, inositol+, dulcitol+) S.choleraesuis** - var.Kunzendorf (arabinose-, inositol-, dulcitol-) S.enteritidis"- var.Ratin (штанн Данич) ; S.enteritidis* - var.Ratin (штамм Исаченко) ;

% 100 ;

72 территории РФ заболеваемость сальмонеллезами

19 территорий РФ заболеваемость S.enteritidis

1984 1985 1986 1987 1984 1985 1986 1987

Рис.6. Динамика заболеваемости сальмонеллезами на территориях РФ

Ш - территории, получавшие и ШШ не получавшие материал с племенного птицерепродуктора;

Таблица 1.

ФАГОВАРЫ ШТАММОВ 8. етегШсНэ, ВЫДЕЛЕННЫХ НА РАЗЛИЧНЫХ ТЕРРИТОРИЯХ.

Территория или источник Годы выделения Фаговар 1 (%) Другие фаговары

^анкт-Пегербург 1985-1995 84 2, 3, 4, 6, 7, 8, 10, 12, 13, 16, 17

Ленинградская область 1985-1995 86 2, 3, 4, 6, 7, 10, 12, 16,17

Владимир 1985-1992 95 3, 4, 9, 17

Карелия, Мурманск 1987-1992 100 -

Вологда, Новгород, Эрел 1988 100 -

Респ. Коми, Пермь 1988 100 *

Камчатка, Тула, Эренбург, Калинин, "Архангельск 1988-1989 100

Хабаровск 1989-1990 86 3, 4,6

Н.Новгород, Респ.Тыва, Саратов, Брянск 1990-1993 100

Краснодар, Курск, Смоленск 1990-1993 96 3, 4,6

Ростов, Воронеж, Свердловск 1990-1992 100 -

Всего: человек 1985-1995 88 2, 3, 4, 6, 7, 9, 10, 12, 16, 17

мясо птицы 1985-1996 90 2, 3, 6,10,13,16

яйцепродукты 1985-1996 95,3 3, 10

Итого 1985-1996 93 2, 3, 4, 6, 7, 9, 10, 12, 13, 16,17

Таблица 2.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ВАРИАНТЫ САЛЬМОНЕЛЛ -ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ВНУГРИБОЛЬНИЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИИ

Серологический Количество Всего

вариант очагов серо- ферменто- фаго- вари-

варов варов варов антов

5.1урЫтипит 35 2 6 2 11

8.1шГа 6 1 1 * 1

2 1 2 2 2

8.рапата 2 1 1 а 1

З.ег^егШсНз 3 1 1 3 3

Серогрунпа В 4 3 2 а 4

* - не определяли

39

Таблица 3.

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ САЛЬМОНЕЛЛ К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ

Антибактериальные препараты Показатели МИК (мкг/мл) % Резистентных

диапазон чувствительности для 50% для 90%

штаммов

левомицетин 2,0-300,0 8,0 16,0 6,1

канамицин 2,0-500,0 8,0 32,0 9,9

стрептомицин 2,0-500,0 32,0 64,0 10,2

тетрациклин 16,0-300,0 32,0 64,0 8,4

полимиксин 0,5-4,0 2,0 4,0 -

ампициллин 1,0-300,0 4,0 32,0 2,9

гентамицин 0,5-128 1,0 2,0 1,1

налидиксовая кислота 1,0-32,0 16,0 16,0 -

нефазолин 0,5-16,0 8,0 16,0 -

Таблица 4.

СПЕКТРЫ АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТИ ШТАММОВ САЛЬМОНЕЛЛ - ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ВНУТРИБОЛЫШЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ.

Серовар Спектры резистентности

8.1урМтипит Ст, Мш, Кш, вт, Тс, Ар, СЬ* Ст, Мт, Кт, 8т, Ар, СЬ Мт, Кт, вт, Ар, СЬ Ст, Мт, Кт, вт, Тс Ст, Мт, Кт, Тс, Ар, СЬ** Ст, Мт, Кт, Ар, СЬ Ст, вш, Тс, Ар, СЬ

8.тГапН$ Ст, Мт, Кт, Эт, Тс, Ар, СЬ* Ст, Мт, Кт, Тс, Ар, СЬ Ст, Мт, Кт, 8т, Ар, СЬ

8.Ь;пГа Ст, Мт, Кт, вт, Тс, Ар, СЬ* Ст, Мт, Кт, Йт, Тс, Ар, СЬ, Ст

8.рапата Ст, Мт, Кт, Тс, Ар, СЬ** Ст, Мт, Кт, Бт, Тс, Ар, СЬ*

5.еп1егШ(Ш Ст, Мт, Кт, вт, Тс, Ар, СЬ* Ст, Мт, Кт, Тс, Ар, СЬ** Ст, Мт, Кт, вт, Ар, СЬ

*, ** - отмечены идентичные спектры

От - хлорамфеникол; Мт - мономицин; Кт - канамицин; $т - стрептомицин; Тс - тетрациклин; Ар -ампицилин; СЬ - карбиницилнн; Ст -гентамицин.

Таблица 5.

ПЛАЗМИДНЫЙ ПРОФИЛЬ ШТАММОВ САЛЬМОНЕЛЛ, ВЫДЕЛЕННЫХ АЗНЫХ ТЕРРИТОРИЯХ ПРИ ВНУТРИБОЛЬИИЧНОМ РАСПРОСТРАНЕНИИ

Город Год Резистентность Плазмнды

(маркеры) число молекулярный вес

(М«1)

Э.фрЫтигшт

арва 1976 Бш, Тс, Сш, Ар, Кт 1 120

анкт-Пстербург 1976 Бт, Тс, Ст, Ар, Кт 1 120

Гурманск 1977 вш, Тс, Сш, Ар, Кт 2 96; 5,5

Дербент 1976 Эт, Ар, Кт 1 96; 1,8

Челябинск 1977 вт, Тс, Ст, Ар, Кт 3 96; 2,5; 1,8

аку 1975 вт, Тс, Ст, Ар, Кт 4 96; 40; 13; 1,0

Свердловск 1978 Эт, Тс, Ст, Ар, Кт 2 96; 1,0

Санкт-Петербург 1981 Бга, Тс, Ст, Ар, Кт 2 96; 5,5

;ен. область 1982 Ст, Ар, Кт 1 80

[ен. область 1983 Ст, Ар, Кт 2 80; 5,5

Санкт-Петербург 1982 Ят, Тс, Ст, Ар, Кт 1 120

!арелия 1983 Бт, Тс, Ст, Ар, Кт 3 120; 80; 1,5

Санкт-Петербург 1984 Бт, Тс, Ст, Ар, Кт 3 120; 80; 74

[ен. область 1983 Эт, Тс, Ст, Ар, Кт 5 96; 5,5; 4,2; 2,9; 2,2

!ологда 1982 вт, Тс, Ст, Кт 4 80; 4,2; 2,9; 2,2

[ен. область 1984 вт, Ст, Ар, Тс 4 80; 5,9; 3,6; 3,0

1урманск 1990 Эт, Тс, Ст, Ар, Кт 3 120; 80; 74

[ен. область 1987 Эт, Тс, Ст, Кт 3 80; 5,5; 3,7

¡ладимир 1986 Эт, Тс, Ст, Ар, Кт 3 115; 76; 1,5

Б.ЬаИа

^анкт-Петербург 1982 вго, Тс, Ст, Ар, Кт, Ст 1 120

1ладимир 1982 вт, Тс, Ст, Ар, Кт 1 96

'арелия 1981 вт, Тс, Ст, Ар, Кт 1 96

[ен. область 1982 Бт, Тс, Ст, Ар, Кт. Ст 1 120

Мурманск 1983 вт, Тс, Ст, Ар, Кт 2 104; 44,7

[скоп 1980 Бт, Тс, Ст, Ар, Кт 1 96

Ген. область 1982 Бт, Тс, Ст, Ар, Кт, СЬ 1 96

1982 Ят, Тс, Ст, Ар, Кт, СЬ 2 96; 50

1983 вт, Тс, Ст, Ар, Кт,СЬ 2 96; 15

1983 8т, Тс, Ст, Ар, Кт, СЬ 4 96; 25; 16; 9

Калининград 1982 Эт, Тс, Ст, Ар, Кт ,СЬ 1 104

1983 Бт, Тс, Ст, Ар, Кт, СЬ 2 104; 37,5

1983 Эт, Тс, Ст, Ар, Кт ,СЬ, Ха1 4 104; 54; 37,5; 20

в.рапата

{ладимир 1982 вш, Тс, Ст, Ар, Кт ,СЬ 1 74

1983 вт, Тс, Ст, Ар, Кт, СЬ 2 74; 37

владимирская обл 1983 Тс, Ст, Ар, Кт, СЬ 1 44,7

Б.и^егШсИБ

1ен. область 1986 Бт, Тс, Ст, Ар, Кт 2 96; 38

Салииин 1989 Тс, Ст, Ар, Кт, СЬ 2 140; 38

1ермь 1990 Бт, Сш, Ар, Кт, СЬ 4 110; 90; 60; 38

Таблица 6.

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ВАРИАНТЫ 8.1урЫтигшт ДИФФЕРЕНЦИРУЕМЫЕ ПО СТЕПЕНИ ПАТОГЕННОСТИ ДЛЯ ЭНТЕРАЛЬНО ЗАРАЖЕННЫХ МЫШЕЙ, ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИБИОТИКАМ И СОДЕРЖАНИЮ ПЛАЗМИД.

Биовар Степень вирулентности Oi ношение Годы Плазмиды Фаювары

S.typhimurium Гибель мышей Инвазия органов к антибиотикам циркуляции VIR U"

Биовар 1 + +++ чувствительный С момента описания (1892)- 1994 60 Md - 1 var.l, 1 var.2 la varl, la var 2, 2d

biioeapllS - ++ чувствительный 1950-1977-1994 - - 2b, 2c, 3

БиоварIIR + полирезистентный 1973-1977-1994 Госпитальный штамм - 80120 Md 20, 29

* серовароспецифические (вирулентности) плазмиды;

** плазмиды антнбнотикорезистснтиостн (И плазмиды);

«-»- отсутствие признака; «+, +++» - степень выраженности признака;

Таблица 7.

ВИРУЛЕНТНОСТЬ ДЛЯ МЫШЕЙ, ЭНТЕРАЛЬНО ЗАРАЖЕННЫХ САЛЬМОНЕЛЛАМИ РАЗНЫХ СЕРОВАРОВ

Серовар Отношение к Гибель Плазмиды (Md)

антибиотикам мышей (%) R* VIR*

S.typhimurium (IS) S 100 - 60

S.typhimurium (IIS) S 2.3** - -

S.typhimurium (IIR) R 3.1** 80-120 -

S.infantis S 4.2** - -

R 3.2** 96-104 -

S.haifa S 3.6** - -

R 2.5** 96-120 -

S.panama S 0 - -

R 0 74 -

S.enteritidis var.Iena S 100 - 38

var.Iena R 100 96-140 38

var.Ratin S 100 - 58

S.dublin s 100 - 50

S.agona S 100 - 45

S.choleraesuis s 100 - 36

var. Kunzendorf 1*** s 0 - -

var. Kunzendorf 2*** s 100 - 36

* - плазмиды: R - антибнотнкорезистснтностн; VIR - серовароспецифические ** - не превышает гибели контрольных (незаряженных мышей) *** - разные ферментативные варианты

Таблица 8

.СТОТА ОБНАРУЖЕНИЯ БОЛЬШИХ КОЛИЧЕСТВ * в.^рЫтипит В 'ЕКЕЛИЯХ БОЛЬНЫХ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ БИОВАРА ВОЗБУДИТЕЛЯ

И СРОКА ЗАБОЛЕВАНИЯ (в %)

Недели болезни Число проб Группа больных полирезистентным возбудителем чувствительный Кратность различий

1 - 3 98 45,9% + 5,0 п = 45 16.32 + 3,7 п = 18 2.8 Р < 0.05

4 и позже 130 10.0% ±2.6 п = 13 0 0 -

Всего 228 25,4% + 2.9 п = 58 7.0% + 1.7 п = 16 З.Б Р < 0.05

* 109 - 107 в 1.0 грамме фекалий Таблица 9

ДЛИТЕЛЬНОСТЬ ВЫДЕЛЕНИЯ У БОЛЬНЫХ ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА в.^рЫтигшт РЕЗИСТЕНТНЫХ И ЧУВСТВИТЕЛЬНЫХ К

АНТИБИОТИКАМ

Число больннх Возбудитель

Отноиение к антибиотикам Последний день выделения

1-21 22-30 1-30 31 и позже

60 полирезис-тентнне 18 15 33 2?

100% 30.0 + 5.9 25.0 + 5.5 55 + 6.4 45,0 + 6,4

32 чувстви-тельнне 15 9 24 8

1002 46.8 + 8.8 28.2 + 7.9 75 ± 7»в 25,0 ¿7,6

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Арбузова В А., Кафтырева JLA. Биологическая характеристика культур сальмо неллы тифимуриум, выделенных от детей при внутриболышчном распространс нии инфекции / В кн.: Тр. НИИЭМим. Пастера. - Л., 1978. - Т. 50. - С. 97-101.

2. Полоцкий Ю.Е., Кети И., Пача Ш., Эмеди Л., Драгунская Е.М., Чахутинска М.Г., Клеганов В.К., Такеучи А., Селиверстова В.Г., Черна И., Арбузова В.А, Равдониканс Л.Е., Грабовская К.Б., Кафтырева Л.А. Энтеротоксигенность ; сальмонелл / В кн.: Тр. НИИЭМ им.Пастера. - Л. - 1978. - Т. 50. - С. 102-108.

3. Арбузова В А., Кафтырева Л.А. Биологическая характеристика сальмонелл ти фимуриум, выделенных при внутрибольничных вспышках на территориях Рос сийской Федерации / В кн.: Тез. докл. IY Всероссийского съезда эпидемиоло гов и микробиологов. - М. - 1978. - С.137-138.

4. Стрелкова М.Р., Арбузова В.А., Кафтырева Л.А., Уткова Л.В., Коршунова Г.С Белоусова Н.М. Клинико-эпидемиологическая характеристика внутрибольнич ного сальмонеллеза по материалам Челябинской области (1976-1978) / В кн Сальмонеллезы у детей. - Саратов. - 1979. - С. 26-27.

5. Кафтырева Л.А. Внутритиповая дифференцировка сальмонелл тифимуриум/] кн.: Сальмонеллезы у детей,- Саратов,- 1979,- С.3-4.

6. Кафтырева Л.А. К циркуляции так называемого "госпитального" штамма саль монеллы тифимуриум в Ленинграде // В кн.: Научно-практическая конфереи ция молодых специалистов учреждения здравоохранения Ленинграда. - Л 1979.-С. 126-127.

7. Арбузова В.А., Кафтырева Л.А., Чиракадзе И.Г. Итоги многолетних наблюде ний за циркуляцией неоднородных вариантов сальмонелл тифимуриум//В кн Пищевые токсикоинфекции,- Саратов,- 1979,- С.26-28.

8. Арбузова В.А., Кафтырева Л.А., Курносова H.A., Чернышова НА., Осипова Г.И Швалко А.Д., Феклисова Л.В., Хахарева Т.П., Рачковская Ю.К. Сальмонеллезы детей раннего возраста (эпидемиология, профилактика, клиника, лечение и лабс раторная диагностика) // Методические рекомендации. - Л. -1980. - 24 с.

9. Кафтырева Л.А. Фаготипирование культур сальмонелл тифимуриум // Жур! лаб. дело. - 1982. - N 9. - С. 157-159.

10. Кафтырева Л.А. Сравнительное изучение сальмонелл тифимуриум, выделеь пых от детей из различных внутрибольничных очагов // В кн.: Острые кише1 ные инфекции,- Л,- 1983. - Респ.сб. - N 7,- С. 38-40.

11. Кафтырева Л.А. Сравнительная биологическая характеристик S.typhimurium разных биоваров и их эпидемиологическая значение: Автс реф.дис. канд.мед.наук. - Л. - 1983. - 22с.

12. Карягина Е.И., Смирнова Г.В., Кафтырева Л.А., Войтснкова Е.В., Стрелке ва М.Р., Ивасько Ю.А., Закондонец B.C. Биологические свойства сальмонел тифимуриум различного происхождения, циркулировавших в 1979-1982гг. Ленинградской области // В кн. Острые кишечные инфекции. - Л. - 1984. Респ. сб. - Вып. 8.-С. 105-111.

Кафтырева JI.A., Нарвская О.В., Борисов Л.Б. Влияние приобретенной множественной устойчивости к антибиотикам на фаговар S.typhimurium // Журн. микробиол. - 1984. - N 10. - С. 42-49.

Карягина Е.И., Вассер Н.Р., Кафтырева Л.А., Войтенкова Е.В., Смирнова Г.В. О зараженности сальмонеллами детских площадок Ленинграда // Журн. микробиол. - 1985,-N9.-С. 115-119.

Карягина Е.И., Вассер Н.Р., Войтенкова Е.В., Смирнова Г.В., Кафтырева Л.А., Хазенсон Л.Б., Поплавская Ж.В. К вопросу контаминации сальмонеллами детских площадок //В кн.Острые кишечные инфекции. - Л. - 1985. - Респ. сб. -Вып. 9. - С. 42-48.

Бабков В.В., Нарвская О.В., Кафтырева Л.А., Хазенсон Л.Б. Лизогения и чувствительность к антибиотикам сальмонелл тифимуриум разных биоваров // В кн. Острые кишечные инфекции. - Л. - 1986. - Респ. сб. - Вып. 10. - С. 97-99. Кафтырева Л.А., Симонович В.Н., Баженов А.Н. Устойчивость к антимикробным препаратам сальмонелл, изолированных от животных//В кн.: Сб.тр. Лен. вет. института.- Л,- 1986,- С. 71-74.

Карягина Е.И., Кафтырева Л.А., Войтенкова Е.В., Смирнова Г.В., Шней-дер Р.И., Клявлина Р.Р., Липатова Л.А., Поплавская Ж.В. Влияние технологического процесса на контаминацию сальмонеллами забитых птиц // В кн. Острые кишечные инфекции. - Л. - 1986. - Респ. сб. - Вып. 10. - С. 51-56. Жукова Е.А., Стрелкова М.Р., Ермолаева-Маковская М.А., Кафтырева Л.А., Карягина Е.И., Ивасько Ю.А., Липатова Л.А. Клинико-микробиологическая характеристика сальмонеллеза хайфа у детей // В кн. Острые кишечные инфекции.-Л,- 1987.-Респ. сб.-Вып. 11.-С. 119-123.

Кафтырева Л.А., Карягина Е.И., Стрелкова М.Р., Бурова Н.В., Липатова Л.А., Рямушкина К.И., Клявина P.P., Каторгина Л.К. Острые кишечные заболевания, вызванные атипичными штаммами сальмонеллы инфантис // В кн. Острые кишечные инфекции. - Л. - 1988. - Респ. сб. - Вып. 12. - С. 80-82. Рыбаков Д.А., Мухина Л.П., Кафтырева Л.А., Дридж НЛ., Головина Г.Н., Кирсанова В.Н., Ракитин П.А., Герасимчик Л.Ф. О случаях заболеваний саль-монеллезом энтеритидис, связанных с молочной продукцией // В кн. Острые кишечные инфекции. - Л. - 1988. - Респ. сб. - Вып. 12. •• С. 40-42. Kaftireva L.A. Salmonella contamination of poultry meat and eggs // Abstracts of the International Congress of the Zoonosis. - Brno. - 1988. - P. 223. Kaftireva L.A. Salmonella contamination of poultry meat and eggs // Abstracts of the International Congress of the Zoonosis. - Brno. - 1988. - P. 223. Хазенсон Л.Б., Кафтырева Л.А. Биологические маркеры сальмонелл как индикаторы их вирулентности и эпидемиологических особенностей возникших заболеваний // В кн. Тез. докл. XVII Всесоюзного общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М. - 1989. - С.84-85. Закардонец B.C., Сциборовская О.И., Урбан В.П., Кафтырева Л.А. Характеристика биологических свойств штаммов сальмонелл тифи суис и холера суис, выделенных от свиней, больных сальмонеллезом // В кн. Инфекционные болезни сельскохозяйственных животных и птиц. - Л. - 1990. - С. 23-27.

26. Hazenson L., Safonova N., Kaftyreva L. Campylobacteriosis, salmonellosis cryptosporidiosis // XXIV dani preventive medicine. - Nis. - 1990. - P. 28.

27. Кафтырева Л.А., Нестерова М.Ю., Хазенсон Л.Б. Контаминация сальмонел лами энтеритидис продуктов промышленного птицеводства // В кн.: Совер шенствование работы санитарно-эпидемиологической службы по профилак тике инфекционных заболеваний. -М. -1990. - С.178-179.

28. Либерова Р.Н., Жердева А.Н., Немчинов В.Д., Бондаренко А.П., Кафтырея Л.А. Роль домашней птицы в эпидемиологии сальмонеллеза энтеритидис Хабаровском крае // В кн. Острые кишечные инфекции. - Л. - 1990. - Респ. сс -Вып. 13.-С. 31-33.

29. Смирнова Г.В., Кафтырева Л.А., Николаева Т.А., Капелюш Е.В., Нестеров М.Ю., Липатова ЛА., Беличенко А.П. Биологические свойства сальмонелл пг нама, циркулировавших в 80-е годы в Ленинградской и Владимирской областя // В кн. Острые кишечные инфекции. - Л. - 1990. - Респ. сб. - Вып. 13. - С. 65-67.

30. Войтенкова Е.В., Кафтырева Л.А. Хазенсон Л.Б. Сальмонеллез как госпиташ ная инфекция в РСФСР//В кн.: Совершенствование работы санитарнс эпидемиологической службы по профилактике инфекционных заболеваний М,- 1990. - С. 163-164.

31. Arai Т., Kaftreva L. Salmonella strains isolated in Leningrad area // 2 Wester Pacific congress of infections diseases and chemotherapi Jomtien-Pahuya. - hailanc - 1990. -P.143

32. Хазенсон Л.Б., Кафтырева Л.А., Нестерова М.Ю. и др. Биология сальмонел энтеритидис и особенности эпидемиологии современных сальмонелле зов//Тез. докл. VI Всероссийского съезда микробиол., эпидемиол. и паразр тол. -М. - 1991. -T.I.-C. 141.

33. Чернышева Н.А., Кафтырева Л.А., Фролочкина Т.Н., Марамович А.С. Дл1 тельный очаг паратифа В, обусловленный водным фактором передачи инфе! ции/Яез. докл. VI Всероссийского съезда микробиол., эпидемиол. и параз! тол,- М-1991.- T.I.- С. 147.

34. Облапенко Г.П., Владимирова A.M., Деревянский B.C., Куроптева

B.C., Кафтырева Л.А., Ларькова З.Н., Мозжухина И.Г. О роли однодневны цыплят в передаче S.enteritidis // Журн. микробиол. -1991. - N. 6. - С. 43-46.

35. Tokarevich N.K., Fredlin I.S., Kuzina V.A., Dimitrieva G.M., Kaftyreva LA Artyomenko N.K. Dynamics of non-specific antibacterial activity of the peritoneal eel of mice induced with Coxiella burnetii antigen// Acta Virol., 1992. - V. 36. - P. 25-31.

36. Hasenson L.B., Kaftyreva L.A., Laszlo V.G., Woitenkova E.V., Nesterova I\ Epidemiological and microbiological data on salmonella enteritidis // Ac Microbiol. Hung. - 1992. - V. 39. - N 1. - P. 31-39.

37. Нарвская O.B., Кайманович B.A., Бобков B.B., Кафтырева Л.А. Статистич> ский анализ биологических свойств S.typhimurium с применением ЭВМ Журн. микробиол. - 1992. -N. 1. - С. 70.

38. Стрелкова М.Р., Литвинова A.M., Жилина Н.Я., Сысоева Н.И., Кафтырева Л J Касаткина Т.Н. Клиническая характеристика внутрибольничного сальмонелеза

недоношенных детей. //В кн.: Медико-социальные аспекты перинаталогии и современные технологии родоразрешения. - Челябинск. -1992. - С. 378. Kaftyreva L.A., Voitenkova E.V., Nesterova M.Y. et. al. Salmonella contamination of poultry meat and eggs // International Conference of Zoonozes. - Piestany. -1993. -R 134.

Войтенкова E.B., Нестерова М.Ю., Кафтырева JI.А. Выживаемость сальмонелл в пищевых продуктах и объектах внешней среды // В кн.: Актуальные проблемы инфекционной патологии. - С-Пб. - 1993. -Ч. 1. - С. 16. Кафтырева Л.А. Эпидемиологические и микробиологические особенности сальмонеллезов в России // В кн.: Актуальные проблемы инфекционной патологии. - С-Пб. - 1993. - Ч. 1. - С. 30.

Кафтырева Л.А., Стрелкова М.Р., Гущина Г.В., Бердичевская Т.И., Нестерова М.Ю. Сальмонеллез энтеритидис у детей // В кн.: Актуальные проблемы инфекционной патологии. - С-Пб. - 1993. - Ч. 1. - С. 31. Кафтырева Л.А., Дегтева Г.К., Ермолина Г.Б., Нестерова М.Ю., Забровская A.B. Анализ белковых электрофореграмм наружных мембран S.enteritidis различного происхождения // В кн.: Актуальные проблемы инфекционной патологии. - С-Пб. - 1993. - Ч. 1. - С. 32.

Липатова Л.А., Самитова В.Н., Кафтырева Л.А. Антибиотикорезистентность сальмонелл, выделенных от детей до 2 лет // В кн.: Актуальные проблемы инфекционной патологии. - С-Пб. - 1993. - Ч. 1. - С. 39.

Нарвская О.В., Бабков В.В., Кафтырева Л.А. Использование програмного комплекса АНОД для анализа биологических свойств энтеробактерий // В кн.: Актуальные проблемы инфекционной патологии. - С-Пб. - 1993. - Ч. 1. - С. 48. Нестерова М.Ю., Околов И.Н., Кафтырева Л.А. Чувствительность к антимикробным препаратам сальмонелл, выделенных от больных детей и взрослых при внутрибольничном инфицировании //В кн.: Актуальные проблемы инфекционной патологии. - С-Пб. - 1993. - Ч. 1. - С. 52.

Войтенкова Е.В., Горбачев E.H., Гаче М.В., Артюхов А.И., Кафтырева Л.А. Апробация латекс-агглютинации для выявления антигенов сальмонелл в материале от больных и пищевых продуктов // В кн.: Актуальные проблемы инфекционной патологии. - С-Пб. - 1993. - Ч. 3. - С. 60.

Кафтырева Л.А. Инфицированность сальмонеллами продуктов промышленного птицеводства//В кн. Актуальные вопросы микробиологии, эпидемиологии и иммунологии инфекционных болезней. Тез. докл. научно-практ. конференции. - Харьков. - 1993. - С. 158.

Кафтырева Л.А. Сальмонеллезы. / Информационный бюллетень об инфекционных и паразитарных заболеваниях в Российской Федерации за 1992г. - М., 1993.-С. 79-83. Отчет Республиканского центра по сальмонеллам за 1982г. Отчет Республиканского центра по сальмонеллам за 1983г. Отчет Республиканского центра по сальмонеллам за 1984г.

53. Кафтырева JI.A., Войтенкова Е.В., Козлова Н.С. и др. Этиология сальмонел; зов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области в 1987-1993гг. : Инфор\ ционное письмо. - С-Пб. - 1994. - 18 с.

54. Носков Ф.С., Жебрун А.Б., Бичурина М.А., Вершинский Б.В., Исаева М.( Кафтырева Л.А., Мукомолов С.Л., Рыкушин Ю.П. Состояние инфекционн заболеваемости в Северо-Западном регионе России (информационное пш мо).-С-Пб.- 1994.-Зс.

55. Закардонец B.C., Забровская А.В., Кафтырева Л.А. Особенности бактерио1 гической диагностики и биологических свойств сальмонелл группы S.choleraesuis и S.typhisuis, выделяемых от свиней: Методические рекомен; ции. - С-Пб. - 1994. - 9 с.

56. Информационный бюллетень центра по сальмонеллезам Северо-Западнс региона за 1994г. - С-Пб. - 1995. - 23 с. •

57. Кафтырева Л.А., Закардонец B.C., Забровская А.В., Бердичевская Т.И. 0( бенности биологических свойств штаммов сальмонелл сероваров Salmone cholerasuis и Salmonella typhisuis // Клиническая лабораторная диагностик 1995.-N1.-C.40-42.

58. Кафтырева Л.А., Забровская А.В. Эпидемиологические особенности саальмонел зов в Северо-Западном регионе России // В кн.: История и современные пробле. гигиены и эпидемиологии Вологодской области. - Вологда. -1995. - С. 126-132.

59. Kaftyreva L.A., Koslova N.S., Kuzmin V.A., Gladin D.P. The outbreak Salmonellosis, related with using raw milk // European society of chemothcn infection diseases. 3-rd Scientific Meeting. - 1995. - B. 43. - P. 66.

60. Kaftyreva L.A., Ivanov V.P., Koslova N.S., Voskresensky A.M. Resistance antibiotics of Salmonella spp., isolated from people // European society chemotherapy infection diseases. 3-rd Scientific Meeting. - 1995. - F. 16. - P. 99.

61. Кафтырева Л.А., Войтенкова E.B., Забровская A.B., Нестерова М.Ю. Кон минация S.enteritidis мяса птиц и яиц / В кн.: Пищевые зоонозы - сальмонел зы, кампилобактериоз, иерсиниозы, листериоз. Методы и средства диагности лечения и профилактики. Интернациональный симпозиум. - М. -1995. - С. 38.

62. Войтенкова Е.В., Кафтырева Л.А., Нестерова М.Ю. Бердичевская Т.И. Э периментальное подтверждение вертикальной передачи S.enteritidis фагов; 1 у птиц // В кн.: Идеи Пастера в борьбе с инфекциями. - С-Пб. - 1995. - С. 5

63. Кафтырева Л.А. Вариабельность биологических свойств у штам\ S.enteritidis фаговара 1 // В кн. Идеи Пастера в борьбе с инфекциями. - С-П( 1995. - С. 60.

64. Нестерова М.Ю., Кафтырева Л.А., Козлова Н.С., Липатова Л.А., Циркуля: антибиотикорезистентных клонов сальмонелл у людей в Санкт-Петербурп Ленинградской области // В кн.: Идеи Пастера в борьбе с инфекциями. - C-I - 1995.-С. 67.

65. Березина Л.А., Вашукова С.С., Войтенкова Е.В., Голутва Н.К., Довгаль С Исаева М.С., Кафтырева Л.А., Матвеева З.Н., Сафонова Н.В., Ценева Г. Чайка Н.А., Штык А.Ю. Возбудители острых кишечных зaбoлeвa^ //Пособие для бактериологов. - С-Пб. - 1995. -36с.

Кафтырева JI.A., Козлова Н.С., Войтенкова Е.В., Забровская А.В., Бердичев-ская Т.И., Захаркин Ю.Ф., Нестерова М.Ю. Анализ вспышки сальмонеллеза typhimurium, связанной с употреблением сырого молока // В кн.: Проблемы санитарно-эпидемиологического благополучия населения. - С-Пб. - 1996. - С. 61-64. Хазенсон Л.Б., Карягина Е.И., Поплавская Ж.В., Кафтырева Л.А. Эпидемиологические и микробиологические данные о сальмонеллезе энтеритидис на некоторых территориях России //Журн. микробиол. - 1996 - N 4. - С. 53-57. Kafityreva L, Voitenkova Е. salmonellosis in Russia: epidemiological and microbiological aspects // XXX dani preventivne medicine. - Nis. - 1996. - P. 114. Kaftyreva L., Zabrovskaya A., Voitenkova E. Drug resistance of Salmonella strains isolated from humans and animals // XXX dani preventivne medicine. - Nis. -1996. - P. 115. Voitenkova E., Kaftyreva L., Egorova S. Salmonella contamination of food and environment in the north-western region of Russia//XXX dani preventivne medicine. -Nis.- 1996. - P. 154.

Kaftyreva L., Voitenkova E., Zabrovskaya A. Use of molecular genetics methods for epidemijlogical monitoring of salmonellosis // 31 дани превентивне медицине -Ниш. - 1997. P. 142.

Кафтырева Л.А. Исследования по проблеме кишечных инфекций в институте им. Пастера//В кн.: Идеи Петера в борьбе с инфекциями. Тез. дскл. II международ. конф. - С-Пб. - 1998. - С.123.

КафтыреваЛ.А.Эпидемиологическое значение этиологического фактора при сальмонеллезах // В кн.: Идеи Пастера в борьбе с инфекциями. Тез.докл.П международ, конф,- С-Пб.-1998. - С.135.

Жебрун А.Б., Мукомолов С.Л., Лялина Л.В., Бичурина М.А., Вершинский Б.В., Кафтырева Л.А. и др. // Инфекционная заболеваемость в СевероЗападном регионе России (аналитический обзор). - С-Пб. - 1998. - 64с. Kaftyreva, Е.Voitenkova, A.Zabrovskaya. Serotyping of salmonella strains by analysis of genes, coding H-antigenes // 1998 32 days of preventive medicine. - Nis. - 1998. P. 108.

Kaftyreva L., Voitenkova E., Nesterova M. Epidemiological analysis of Salmonellosis using molecular biological methods // Colloque scientifiq ue "Veille Microbiologique et Sante'Publique: les Atouts des Instituts Pasteur" • Antananarivo, 3-4 novembre 1998. - P. 16.