Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Микробиологическая деструкция иприта и продуктов его гидролиза

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Зайцева, Татьяна Борисовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Микробиологическая деструкция хлорорганических соединений.

1.1.1. Выделение и селекция микроорганизмов, утилизирующих хлорорганические соединения.

1.2. Иприт и продукты его гидролиза.

1.2.1. Структура и свойства иприта.

1.2.2. Механизм токсического действия иприта

1.2.3. Свойства тиодигликоля и использование его микроорганизмами.

1.2.4. Микробиологическая деструкция этиленгликолей.

1.3. Способы уничтожения иприта.

Глава 2. Методы исследований.

2.1. Скрининг культур микроорганизмов - деструкторов тиодигликоля.

2.1.1. Поиск микроорганизмов - деструкторов тиодигликоля среди коллекционных культур.:.

2.1.2. Выделение из образцов почв микроорганизмов, обладающих способностью потреблять тиодигликоль.

2.2. Методы идентификации выделенной культуры деструктора тиодигликоля.

2.3. Условия культивирования выделенной культуры деструктора тиодигликоля.

2.4. Методы контроля процесса культивирования выделенной культуры на ипритных реакционных массах.

2.5. Оптимизация состава ферментационной среды.

2.6. Измерение редокс-потенциала и уровней аэрации

2.7. Методы изучения интенсивности автолиза и клеточной проницаемости.

2.8. Методы исследования почвенных образцов.

2.9. Математические методы обработки результатов

Глава 3. Поиск и выделение микроорганизмов деструкторов тиодигликоля.

3.1. Поиск микроорганизмов, потребляющих тиодигликоль, из числа известных культур и выделенных из почв.

3.2. Идентификация и токсикологическая оценка выделенной культуры - деструктора тиодигликоля.

Глава 4. Оптимизация условий культивирования выделенной культуры Pseudomonas sp. 8-2.

4.1. Влияние pH на рост бактерий Pseudomonas sp. 8-2 и потребление тиодигликоля.

4.2. Оптимизация состава ферментационной среды.

4.3. Выявление факторов, ограничивающих скорость потребления тиодигликоля.

4.4. Влияние аэрации на рост бактерий Pseudomonas sp. 8и потребление ими тиодигликоля.

4.5. Влияние редокс-потенциала на рост и потребление тиодигликоля культурой Pseudomonas sp.8-2.

4.6. Влияние тиосульфата натрия на продолжительность процесса потребления тиодигликоля культурой

Pseudomonas sp. 8-2.

Глава 5. Дехлорирование ипритных реакционных масс культурой Pseudomonas sp. 8-2.

Глава 6. Влияние ипритных реакционных масс на почвенную микробиоту и ферментативную активность почв.

6.1. Влияние ипритных реакционных масс на почвенную микробиоту.

6.2. Влияние ипритных реакционных масс на ферментативную активность почв.

6.3. Биоремедиация почв, загрязненных ипритными реакционными массами.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Микробиологическая деструкция иприта и продуктов его гидролиза"

Хлорорганические вещества, как правило, являются химически стабильными и биоустойчивыми поллютантами, в силу чего длительное время сохраняются в экосистемах, оказывая на них негативное действие.

Хлорорганические соединения непрерывно и в значительных количествах поступают в природную среду. Их источником являются пестициды, сточные воды многих производств, использующих эти соединения и многое другое.

В настоящее время защита окружающей среды от биоустойчивых гало-генсодержащих веществ представляет собой сложную и весьма актуальную проблему. При поисках и разработках методов детоксикации, а тем более полной минерализации таких веществ в почвах и водоемах, предпочтение отдается микробиологическим методам.

Так как введение галогена в молекулу органического соединения делает его малодоступным в качестве источника углерода и энергии для подавляющего числа микроорганизмов, полная биодеградация этого соединения происходит в основном только после отщепления галогена.

В связи с этим при создании микробиологического способа детоксикации и полной деструкции таких токсикантов большое внимание уделяется поиску именно тех микроорганизмов, у которых имеются ферменты, катализирующие реакции дегалогенизации.

Особое место среди хлорсодержащих веществ занимает отравляющее вещество - иприт, отличающееся повышенной токсичностью и представляющее опасность для экологии, в том числе и для человека. Повышенная токсичность иприта объясняет его биоустойчивость, способствует его сохранению в экосистемах длительное время без снижения биологической активности.

Исследования по микробиологической деструкции иприта и основного продукта его гидролиза в воде - тиодигликоля (ТДГ) начаты недавно, и в доступной литературе имеются лишь единичные публикации по этой проблеме. Однако полученные результаты позволяют сделать вывод о перспективности микробиологического способа детоксикации иприта и основного продукта его гидролиза - тиодигликоля, о необходимости исследований в этом направлении.

Микробиологический способ выгодно отличается от известных технологий, основанных на физико-химических методах, экономичностью, отсутствием вторичных отходов, возможностью достижения полной минерализации токсикантов, пригодностью для очистки от них почв и водоемов.

Цель исследования - выделить культуру микроорганизма - активного деструктора иприта и продуктов его гидролиза, разработать микробиологический способ очистки почв от этих токсикантов с использованием выделенной культуры.

Задачи, поставленные в работе: => провести поиск и выделение культуры микроорганизма, способной дехлорировать иприт и продукты его гидролиза с последующим использованием их в качестве источников углерода; оптимизировать условия культивирования выделенной культуры с целью интенсификации процессов деструкции иприта и продуктов его гидролиза; исследовать зависимость между уровнем клеточной проницаемости биодеструктора и активностью процессов деструкции изучаемых токсикантов; определить характер воздействия изучаемых токсикантов на микробный и ферментативный потенциал некоторых почв; разработать микробиологический способ очистки почв от иприта и продуктов его гидролиза - содержащих и не содержащих хлора (тиодиглико-ля).

Научная новизна исследования

Из почвы выделена бактериальная культура, важнейшими свойствами которой являются - толерантность к ипритным реакционным массам, способность осуществлять процесс их дехлорирования и использовать образующиеся при этом продукты в качестве источника углерода. Культура идентифицирована и депонирована в коллекции микроорганизмов ВНИИСХМ.

Показано, что интенсивность детоксикации и деструкции ипритных реакционных масс выделенной культурой существенно зависит от таких физико-химических факторов среды как аэрация, ЕЬ, рН.

Выявлено, что при окислении культурой ТДГ образуются две кислоты: монокарбоновая - 2-оксиэтилтиогликолевая и дикарбоновая - тиодигликоле-вая, что позволяет предположить один из возможных путей начального этапа метаболизма ТДГ.

Впервые выявлено, что ТДГ подавляет клеточный автолиз, снижает проницаемость мембран, при этом с повышением концентрации ТДГ (до 30 г/л) эффект усиливается и сопровождается полным прекращением роста.

Показано, что ипритные реакционные массы ингибируют ферментативную активность в почве и оказывают негативное влияние на почвенную микробиоту, что проявляется в снижении показателя сходства и видового разнообразия. Отмечено, что бактерии менее чувствительны к исследуемым токсикантам, чем актиномицеты и микромицеты.

Практическая значимость

• Показана возможность эффективной очистки почв от иприта и продуктов его гидролиза в воде микробиологическим способом, при контроле происходит не только детоксикация этих веществ-ядов, но и полная их утилизация.

• Выделена высокоактивная бактериальная культура, которая может быть использована для разработки биопрепаратов для очистки почв ст иприта и продуктов его гидролиза, как содержащих, так и не содержащих хлора.

• Определены условия, влияющие на интенсивность процесса биодеструкции исследуемых токсикантов.

Апробация работы

Результаты работы обсуждены на заседании лаборатории микологии и микробиологии НИЦЭБ РАН, доложены на 111 Всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Новое в экологии и безопасности жизнедеятельности"(Санкт-Петербург, 16-18 июня 1988г), на II Международном конгрессе "Окружающая среда для нас и будущих поколений" ( Самара, 12-19 сентября 1997 г.), на Международной конференции "ISEB Meeting on Bioremediation"( Лейпциг, 24-27 сентября 1997г.).

По теме диссертации получен патент, опубликованы Ц статьи и 6 тезисов.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, списка литературы и приложений.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Зайцева, Татьяна Борисовна

ВЫВОДЫ

1. Из почвы выделена бактериальная культура, обладающая свойствами, необходимыми для полной деструкции ипритных реакционных масс, а именно -осуществлять процесс их дехлорирования и потреблять их в качестве источника углерода и энергии.

Максимальная концентрация х л ор орган и ч с с ких веществ в среде, при которой происходит 100%-ная дегалогенизация, составляет 2,8 г/л, а максимальная концентрация ТДГ - 20-25 г/л.

2. По результатам изучения морфолого-кулыуральных и физиолого-биохимических процессов выделенная культура отнесена к роду Pseudomonas и задепонирована в коллекции микроорганизмов как Pseudomonas sp.8-2.

3. Оптимизирован состав ферментационной среды для культивирования на средах с ТДГ и ипритными реакционными массами. Показано, что рост культуры и потребление ею исследуемых субстратов существенно зависят от pH среды. Включение в состав среды мела (создание pH на уровне 8,0) позволяет сократить продолжительность процесса на 2-3 суток.

4. В качестве интермедиатов, образующихся при окислении ТДГ культурой Pseudomonas sp.8-2, определены две кислоты: монокарбоновая - 2-оксиэтилтиодигликолевая и дикарбоновая - тиодигликолевая, что позволяет предположить один из возможных путей начального метаболизма ТДГ.

5. Показано, что на среде с ТДГ наблюдается подавление клеточного автолиза, снижение проницаемости мембран. С повышением концентрации ТДГ до 3050 г/л этот эффект усиливается - автолиз подавляется полностью, не определяется и проницаемость мембран. Возможно, что ингибирование роста культуры в этих условиях и обусловлено снижением интенсивности массообмен-ных процессов между клетками и средой.

6. Показано, что важнейшими факторами, влияющими на эффективность биодеструкции ТДГ, является аэрация и окислительно-восстановительный потенциал среды. Наименьшая продолжительность процесса на оптимизиро

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Зайцева, Татьяна Борисовна, Санкт-Петербург

1. Wackett L.P. Biodégradation of halogenated compounds: protein and metabolic engineering // J. of Cellular Biochemistry. 1995. - Suppl. 21a. - P. 38.

2. Таннер X., Кирсо У., Отсон Р., Липпмаа Э. Проблемы мониторинга гидрофобных соединений. 2. Полихлорированные органические соединения // Экологическая химия. 1995. - № 4. - С. 318-324.

3. Карасевич Ю.Н. Основы селекции микроорганизмов, утилизирующих синтетические органические соединения. М.: Наука, 1982. - 140 с.

4. Головлева JI.A. Метаболизм и деградация пестицидов и ксенобиотиков // Агрохимия. 1983. - № 6. - С. 123-132.

5. Круглов Ю.В. Микрофлора почвы и пестициды. М.: Агропромиздат, 1991. - С. 123.

6. Edgehill R.U., Finn R.K. Isolation, characterization and growth kinetics of bacteria metabolizing pentachlorophenol // Appl. and Env. Microb. 1982. - V. 45. -P. 1122-1125.

7. Pignatello J.J., Martinson M.M., Steier J.G., Carlson R.E., Crowford R.L. Biodégradation and photolysis of pentachlorophenol // Appl. and Env. Microb. -1983. V. 46. - P. 1024-1031.

8. Pillard D.A. Comparative toxicity of formulated glycol deicers and pure ethylene and propylene glycol to Ceriodaphnia dubia and Pnnephales promelas II Env. toxicology and chemistry. 1995. - V. 14, № 2. - P. 311-315.

9. Дворникова Т.П., Гранатская Т.А., Плацында В.А. Микробиологическое превращение гербицидов / Взаимодействие пестицидов с микроорганизмами. Кишинев: Штинница, 1984. - С. 91-104.

10. Microbial dehalogenation usingMelhanosarcina: Пат. 5342769 США, Steward Frank M., Yellostone Environmental Science. № 940439; Заявл. 04.09.92. Опубл. 30.08.94; НКИ 435 / 166.

11. Керни П.С., Кауфман Д.Д. Разложение гербицидов. М., 1971. - С. 116164.

12. Парк Д. Биохимия чужеродных соединений. М., 1973. - С. 234-253.

13. Haggblom М. Mechanisms of bacterial degradation and transformation of chlorinated monoaromatic compounds // J. Basic Micrbiol. 1990. - V. 30, № 2. -P. 115-141.

14. Меин Дж. Дж., Квистад Г.Б. Метаболизм пестицидов в почве // Прогнозирование поведения пестицидов в окружающей среде. М., 1984. -С. 48-57.

15. Взаимодействие пестицидов с микроорганизмами (научный обзор) / Под ред. И.И.Либерштейна. Кишинев: Штиница, 1984. - 140 с.

16. Denis-Lempereur J. Les bacteries qui aiment le pyralene. // Sci. et vie. -1987.-№ 842.-P. 94-95.

17. Paszczynski A., Crawford R. Potential for bioremediation of xenobiotic compounds by the white rot fungus Phanerochaete chrysosporium II Biotechnol. Prog. 1995. - № 11. - P. 368-379.

18. Saber D.L., Crawford R.L. Isolation and characterisation of Flavobacterium streins that degrade pentachlorophenol // Appl. and Env. Microb. 1985. - V. 50, № 6. -P. 1512-1518.

19. Caims Т., Siegmund E. PSBs: Regulatory history and analytical problems // Anal. Chem. 1981. - № 53. - P. 1183A-1193A

20. Knackmuss H. Degradation of halogenated and sulfonated hydrocarbons // Microbial degradation of xenobiotic and recalcitrant compounds / Eds Leisinger Т., Coor A., Hiitter R., Niiesch J. N. Y.- London: Acad. Press, 1981. - P. 190.

21. Головлева Л.А., Перцова 3.H., Боронин A.M., Грищенков В.Г., Баскунов Б.П., Полякова А.В. Деградация полихлораромэтических инсектицидов Pseudomonas aeruginosa, содержащей плазмиды биодеградации // Микробиология. 1982. - Т. 51, вып. 6. - С. 973.

22. Caslcey W.H., Taber W.A. Oxiation of ethylene glycol by a salt-requiring bacterium//Appl. and Env. Microbiology. 1981. - V. 42, № 1. - P. 180-183.

23. Козырева Л.П., Головлева Л.А. Рост Nocardi,oides simples на смеси гербицидов 2,4,5-Т и 2,4-Д // Микробиология. 1992. - Т. 62, № 1. - С. 189-192.

24. Jesenska A. Degalogenation of haloalkanes by Mycobacterium tuberculosis H37Rv and other mycobacter/ Appl. Environ. Micrbiol. 2000. - V. 219-222.

25. Lam Т., Vilker V.L. Biodehalogenation of bromotrichloromethane and dibromotrichloropropane by Pseudomonas putida PpG 786 II Biotechnology and bioengineering. - 1987. - V. 29, № 2. - P. 151-159.

26. А.С. 1597384 СССР. Способ очисткти вод от фенольных соединений / Ягафарова Г.Г., Хлесткин Р.Н., Рябинина Т.А., Сюнякова З.Ф. Открытия, изобретения. 1990. - № 37. - С. 53.

27. Ягафарова Г.Г. Разработка биотехнологии очистки воды и почвы от некоторых хлорорганических соединений и углеводородов нефти. Дисс. на соиск. уч. ст. д.б.н. Уфа, 1994. - 133 с.

28. Quensen III J.F., Tiedje J.M., Boyd S.A. Reductive dechlorination of polychlorinated biphenyls by anaerobic microorganisms from sediments // Science. 1988. - V. 242. - P. 752-754.

29. Brown J.F., Wagner R.E., Begard D.L., Brennan M.J. PSB transformation in Upper Hudson sediments. Northeatem Environm. Sci. 1984. - V. 3. - P. 167179.

30. Hart Kamp. Commandeur L.C.M. Microbial degradation of PSB; a matter of sedimental reduction and oxydation. 1994. - P. 1-23.

31. Найштейн С.Я. Циркуляция химических веществ в окружающей среде и здоровье населения. М., 1977. - 72 с.

32. Меренюк Г. Общие тенденции применения и уровня загрязнения почв пестицидами / Взаимодействие пестицидов с микроорганизмами (научный обзор). Кишинев: Штиница, 1984. - 124 с.

33. Hamilton J.T.C., Flynn О., Larkin M.J. Incorporation of haloalkanes into long chain fatty acids by the chloroalkane-degrading bacteria Rhodococcus rhodoochrous MCiMB 13064 // Symposium "Naturally prodused organohalogens", poster 12. 1993.

34. Головлева JI.А. Метаболизм и деградация пестицидов и ксенобиотиков // Агрохимия. 1983. - № 6. - С. 123-132.

35. Скрябин Г.К., Головлева Л.А., Головлев Е.Л. и др. Разложение ДДТ и его аналогов почвенной микрофлорой // Изв. АН СССР, Сер. биол. 1978. - № 3. - С. 352-365.

36. Федоров Л.А. Диоксины как фундаментальный фактор техногенного загрязнения природы // Ж. Экол. хим. 1993. - № 3. - С. 169-187.

37. Головлева Л.А., Головлев Е.Л. Микробиологическая деградация пестицидов // Успехи микробиологии. 1980. - № 15. - С. 137-179.

38. Horvath R.S., Alexander М. Cometabolism of m-clorobenzoate by an Arthrobacter И Appl. Mirobiol. 1970. - V. 20, № 2. - P. 254-258.

39. Суровцева Э.Г., Фунтикова H.C. Кометаболизм 3,4-дихлоранилина представителями рода Pseudomonas // Микробиол. 1978. - Т. 47, 1. - С. 21-25.

40. Фунтикова Н.С. Разложение линурона грибами рода Aspergillus II Микробиол. 1979. - Т. 48., № 1. - С. 57-61.

41. Siuda J.F., De Bernardis J.F. Lloydia. J. Nat. Prod. 1973. - V. 36, № 2. - P. 107-143.

42. Janssen D.B., Scheper A., Dijkhuizeu L., Witholi B. Degradation of lialogenated aliphatic compounds by Xcmlobacter autotrophicus GJ10 II Appl. and Env. Microb. 1985. - V. 49, № 3. - P. 673-677.

43. Okada F., Kitagawa M., Uchima H., Yagi O. Degradation of trichloroethylene by methanothrofic bacteria // Tng Rev. 1995. - № 167. - P. 9-18.

44. Goldman P. / Degradation of synthetic organic molecules in the biosphere. -Nat. Acad. Sci. Washington. D.S., 1972. P. 147-165.

45. Enzyme nomenclature. Elsevier. Sci. Publ. Co., Amsterdam, 1972.

46. Ruisinger S., Klages U., Lingens F. Abbau der 4-chlorobenzoesaure durch eine Artrobacler-Speci.es 253 //Arch. Microbiol. 1976. - V. 110, № 2-, P. 253-256.

47. Воронин A.M., Скрябин Г.К. Генетические аспекты деградации бактериями ксенобиотиков // Успехи микробиологии. М.: FlayKa, 1985. -Т. 20. - С. 39-60.

48. Тимофеева И.В. Действие этиленпродуцирующих ретардантов на растения ярового ячменя в зависимости от доз и сроков их применения // Применение химических средств защиты растений. Труды JICXA. -ЛСХА, вып. 213. Елгава. - 1984. - С. 35-44.

49. Скрябин Г.К., Головлева JI.A. Биотехнология защиты окружающей среды от ксенобиотиков //Изв. АН СССР, сер. биол., 1986. № 6. - С. 805-813.

50. Карасевич Ю.М. Экспериментальная адаптация микроорганизмов. М.: Наука, 1975.

51. Карасевич Ю.М., Ивойлов B.C. Подготовительный метаболизм пара-оксибензойной кислоты у дрожжей Candida tropicalis II Микробиология. -1977. Т. 46, № 5. - С. 846-856.

52. Доронина Н.В., Троценко Ю.А. Выделение и характеристика аэробных деструкторов хлорметана // Микробиология. 1997. - Т. 66, № 1. - С. 7077.

53. Edgehill R.U., Finn R.K. Microbial treatment of soil to remove pentachlorophenol (PCP) // Appl. and Envir. Microbiology. 1983. - V. 45, № 3. -P. 1122-1125.

54. Abbullah A.R., Bajet C.V., Matin M.N., Nhan D.D., Silaiman A.H. Ecotoxicology of pescidis in tropical paddy field ecosystem source / Env. Toxic, and Chemistry. 1997. - V. 16, N 1. - P. 59-70.

55. Crawford R.L. Mutualistic degradation of the lignin model compound veratrylglycerol-P-(-o-methoxyphenyl)ether by bacteria// Canad. J. Microbiol. -1975. V. 21, № 10. - P. 1654-1657.

56. Henschler D. Toxicololgy of chlorinated solvents Proceeding of the International Congress on the Human Environment (HESC)., Kyoto: Pergamon Press, 1975. P. 496-504.

57. Пирсон Г. Уничтожение химического оружия Великобритании // Рос. хим. ж.- 1995.-Т. 39, №4.-С. 113-120.

58. Lois R. Ember. Chemical arms treaty makes unprecedented demands of industry // Chem. and eng. news. 1993. - V. 71, № 23. - P. 7-17.

59. Александров B.H., Жаворонков Г.Н., Боровский Ю.В., Титов В.А. Химическое оружие иностранных армий. Уч. пособие. М., 1989. - 156 с.

60. Dacre J.С., Goldman М. Toxicology and pharmacology of chemical warfare agent sulfur mustard // Pharmacol. Rev. 1996. - V. 48, № 2. - P. 289-326.

61. Франке 3. Химия отравляющих веществ. М.: Химия, 1973. Т. 1. - 437 с.

62. Трофимов Б.А., Гусарова Н.К., Дорофеев И.А., и др. Окисление технического иприта водным раствором пероксида водорода // Журн. прикл. химии. 1994. - Т. 67, № 1. - С. 161-166.

63. Wils E.R., Hulst A.G., vanLaar J. Analysis of thiodiglycol in urine of victims of alleged attack with mustard gas. Part 2. // J. Anal. Toxicol. V. 12, № 1. - P. 15-19.

64. Умяров И.А., Кузнецов Б.А., Кротович И.Н., Холстов В.И., Соловьев В.К. Методы уничтожения запасов люизита и иприта // Российский хим. журнал. 1993. - Т. 37, № 3. - С. 25-29.

65. Кунцевич А.Д., Евстафьев И.Б., Малышев В.П., Холстов В.И. Оценка опасности трофейных химических боеприпасов, затопленных на дне Балтийского моря // ХУ Менделеевский съезд по общей и прикладной химии. Минск, 1993. - Т. 4. - С. 101-102.

66. Yang Y., Szafraniec L.L., Baudry W.T., Ward J.R. Kinetics and mechanism of the hydrolysis of 2-chloroethylsulphides // J. Org. Chem. 1988. - V. 53. - P. 3293-3297.

67. Савин Ю.И., Вишенкова E.M., Пасынкова E.M. Исследование поведения иприта и люизита в воде и почве при условиях, имитирующих природные среды //Рос. хим. ж. 1995. - Т. 39, № 4. - С. 121-125.

68. Matsushita К., Toyama Н., Adachy О. / Respiratory chains and bioenergetics of acetic acid bacteria / Adv. In microbial physiology. 1994. - V. 36. - P. 247-301.

69. Jakubowski E.M., Woodard С.1., Mershon M.M., Dolzine T.W. Quantification of thiodiglycol in urine by electron ionization gas chromatography-mass spectrometry // J. Chromatography. 1990. - V. 528, № 1. - P. 184-190.

70. Kircher М., Fleer R., Ruhland A. Biological and chemical effects of mustard gas in yeast // Mutat. Res. 1979. - V. 63, 2. - P. 273-289.

71. Основы экспериментального мутагенеза. Киев: Вища школа, 1981. - 216 с.

72. Itoh N., Yoshida M., Miyamoto T., Ichinose H., Wanishi H., Tanaka H. Fungal cleavage of thioether bond found in yperite // FEBS Lett. 1997. - V. 412, № 2. -P. 281-284.

73. Kawashima H. Production of (2-hydrjxyethyl)thio.acetic acid from thiodiglycol (2,2'-thiodiethanol) by resting cell of Candida rygosa IF01364 II Biosci., biotech., biochem. 1995. - V. 59, № 5. - P. 934-935.

74. Kobayashi S., Aoki N., Nakahara T. Abstacts of papers, the annual meeting of the Japan Society for Biosciece. Biotechnol. and agrochemistry. Nagoga, April, 1988.-P. 49.

75. Луста К.А., Решетников A. H. Физиолого-биохимические особенности Gluconobacter oxydans и перспективы использования в биотехнологии и биосенсорных системах (обзор) / Прикл. Биохимия и микробиология. -1998ю Т. 34, N 4. - С. 339-353ю

76. Медведева Н.Г., Сухаревич В.И., Федорова Н.В., Гриднева Ю.А. Трансформация тиодигликоля уксуснокислыми бактериями // Биотехнология. 1996. - № 2. - С. 44-47.

77. Holliger Ch., Schumacher W. Reduction dehalogenation as respiratory process // Antonie van Leewenhoek. 1994. - V. 66. - P. 239-246.

78. Замбржецкий O.H., Будрис M.B., Кабашников А.К. Дегидрогеназная активность Rhodococcus sp.22 деструктора оксипропилированного пропиленгликоля (Лапрон 502) // Прикл. биохимия и микробиология. -1991. - Т. 27, вып. 6. - С. 819-824.

79. Gonzales С.F., Taber W.A., Zeitoun М.А. Biodégradation of ethylene glycol by a salt-requiring bacterium // Appl. Microbiology. 1972. - V. 24, № 6. - P. 911924.

80. Jones N., Watson G.K. Ethylene glycol and polyethylene glycol catabolism by a sewage bacterium // Biochem. Soc. Trans. 1976. - V. 4, № 5. - P. 891-892.

81. Haines J.R., Alexander M. Microbial degradation of polyethylene glycol // Appl. Microbiology. 1975. - V. 29, № 5. - P. 621-623.

82. Когановский A.M., Гоздяк П.И., Удод В.M. и др. Микробная очистка сточных вод от диэтиленгликоля // Докл. АН УССР, серия Б. 1983. - № 1. -С. 58-59.

83. Reace В.A., Heydeman М.Т. Metabolism of di(ethyleneglycol) and other short polyethyleneglycols by gram-negative bacteria // J. Gen. Mirobiol. 1980. - V. 118, №1.-P. 21-27.

84. Бухгалтер Л.Б., Иванов А.И., Бухгалтер Э.Б. Современные методы анализа и способы очистки сточных вод газовых промыслов от метанола игликолей. M.: ВНИИ Эгазпром, 1988. (Обзор, информ. Сер. Прир. газ и защита окр. среды. Вып. 3). - 37 с.

85. Седина С.А. Влияние физико-химических факторов на рост Pseudomonas putida BS-2 на среде с диэтиленгликолем // Микробиол. ж. 1995. - Т. 54, №4.-С. 43-48.

86. Kawai F., Kimura T., Fukaya M., Tant Y., Ogata К., Ueno T., Fukami H. Bacterial oxidation of polyethylene glycol // Appl. and Env. Microb. 1978. - V. 5, № 4. - P. 679-684.

87. Когановский A.M., Удод B.M., Несынова JI.И., Невинная Л. Разрушение диэтиленгликоля микроорганизмами // Химия и технология воды. 1987. -Т. 9, №2. - С. 169-171.

88. Седина С.А. Деструкция ДЭГ культурой Pseudomonas putida BS-2 II Микробиол. ж. 1992. - T. 54, № 1. - С. 61-67.

89. Седина С.А., Иванов В.Н. Состав и метаболическая активность ассоциации бактерий деструкторов диэтиленгликоля // Микробиол. ж. -1991. - Т. 53, №3. - С. 30-38.

90. Kimiyasu I. Oxidation of ethylene glycol and glycolic acid by glycerol oxidase // Biosci., Biotech, and Biochim. 1995. - V. 59, № 4. - P. 576-581.

91. Lois Ember. Options exist for destroying US chemical anus // Chem. and eng. news. 1993. - V.71, № 25. - P. 30.

92. Луганский И.Н., Шелученко B.B., Кротович И.H., Чеботарев В .В., Холодова В.А., Панкова О.Л. Основные технологические и экологические аспекты проблемы уничтожеия иприта // Рос. хим. ж. 1994. - Т. 38, № 2. -С. 34-36.

93. Бекер С., Дерре Р., Штельт Е. Безопасное уничтожение высокотоксичных веществ // Российский хим. журнал. 1993. - Т. 37, № 3. - С.29-33.

94. Евстафьев И.Б., Кротович И.Н., Воиницкий В.Ф., Белолипецкий В.П. Проблемы утилизации химического оружия. Уничтожать или перерабатывать? // Журнал Всесоюзного хим. общества им. Менделеева. 1991. - Т. 34, № 1. - С. 95-97.

95. Кошелев В.М. Жданов В.А., Шувалов A.A., Кравчук Ф.Е., Кошелев Ю.П., Евменов P.A. Американские разработки методов уничтожения химического оружия//Рос. хим. ж. 1995. - Т. 39, № 4. - С. 31-36.

96. Петров C.B., Корякин Ю.Н., Завьялова Н.В., Холстов В.И. Биотехнология в решении проблемы уничтожения химического оружия // Российский хим. журнал. 1995. - Т. 39, № 4. - С. 18-20.

97. Варфоломеев С.Д., Курочкин И.Н., Райнина Е.И., Холстов В.И.,

98. Завьялова Н.В., Уайльд Д.Р. Новый технологический подход к уничтожению химического оружия. Полная биологическая деградация химических боеприпасов. // Российский хим. журнал. 1995. - Т. 39, № 4. - С. 20-24.

99. Биологическая дегазация отравляющих веществ. Материалы конференции научно-исследовательских институтов НАТО (май 1991 г.) -М., 1991.

100. Арбисман Я.С. Шпильков П.А., Петрова А.А., Баринова Н.В., Петрунин В.А. Вклад биотехнологии в проблему уничтожения отравляющих веществ // ХУ Менделеевский съезд по общей и прикладной химии. -Минск, 1993.-Т. 4. С. 30.

101. Александров В.Н., Емельянов В.И. Отравляющие вещества. М.: Военное изд., 1990.-271 с.

102. Entry J. A., Donnelly Р. К., Emmingham W. H. Mineralization of atrazine and 2,4-D in soils inoculated with Phanerochaete chrysosporium and Trappea darken / Appl. Soil. Ecology. 1996. - V. 3, N 1. - P. 85-90.

103. Хайнинг Э., Паукке X., Нагель Г.-Д., Ханзен Д. Агрохимикаты в окружающей среде. М.: Колос, 1979. - 375 с.

104. Bismas M.R. Agriculture and environment. A review 1972-1992 // Ambio. -1994. V. 23, №3. - P. 192-197.

105. McConell G., D.M.Ferguson, C.R.Pearson. Chlorinated hydrocarbons and environment // Endeavour. 1975. - V. 34. - P. 13-18.

106. Frische W. The potential of microorganisms for bioremediation. 1994. - ECB: Proceeding of the 6th European Congress on Biotechnology. - P. 1213-1221.

107. Megharaj M., Boul H.L., Thiele J.H. Effects of DDT fnd its metabolits on soil algae and enzymatic activity // Biol. Fertil. Soils. 1999. - V. 29, N 2. - P. 130-134.

108. Furu K., lomizuna V. Metabolic breakdown of kanechlors (polychlorobiphenyls) and their products by Acinetobacter sp. II Appl. and Env. Microb. 1983. - V. 46, № . - P. 140-145.

109. Subba-rao R.V., Alexander M. Bacterial and fungal cometabolism of 1,1,1-trichloro-2,2-bis(4-chlorophenyl)etan (DDT) and its breakdown products // Appl. and Env. Microb. 1985. - V. 49, № 3. .p. 1024-1031.

110. Leisinger T., Braus-Stromeyer S. Bacterial growth with chlorinated methans // Environmental Health Perspectives. 1995. - V. 103, Suppl. 5. - P. 33-37.

111. Janssen D.B., Van der Ploeg J.R., Pries F. Genetic adaptation of bacteria to halogenated alifatic compounds // Environmental Health Perspectives. 1995. -V. 103, Suppl. 5. - P. 29-32.

112. Скрябин Г.К., Головлева J1.A. Использование микроорганизмов в органическом синтезе. -М., 1976. С. 299-315.

113. Brimfield A.A. Possible protein phosphotase inhibition by bis(hydroxyethyl) sulfide a hydrolysis product of mustard gas // Toxicol. Lett. 1995. - V. 78, № 1. - P. 43-48.

114. Pham M.Q., Harvey S.P., Weigand W.A., Bentley W.E. Reactor composition for the biodégradation of thiodiglycol, a product of mustard gas hydrolysis // Appl. Biochem. and Biotechnol. 1996. - V. 57-58. - P. 779-789.

115. Удальцова Г.Ю., Холстов В.И., Григорьев С.Г. Пути решения проблемы обеспечения безопасности уничтожения опасных веществ за рубежом // Российский хим. журнал. 1993. - Т. 37, № 3. - С. 43-49.

116. Mulbry W., Rainina E. Biodégradation of chemical warefare agents // Asm. News. 1998. - V. 64, № 6. - P. 325-331.

117. Химический энциклопедический словарь. М.: Советская энциклопедия, 1983.-С. 577.

118. Haccblom M.M., Apajalanti J.H.A., Salkinoja-Salonen M.S. O-methylation of chlorinated para-hidroquinones by Rhodococcus chlorophenolicus (or Mycobacterium) 11 Appl. andEnv. Microb. 1988b. - V. 54. - P. 1818-1824.

119. Hayat M.A. Principles and technics of electron microscopy // Biol. Appl. -1974. Vol. 1,№ 1. -P. 43-51.

120. Black J.T. Principles and techniques of scanning electron microscopy // Biol. appl. 1974. - Vol. 1, № 1. - P. 1-43.

121. Spurr A.R. A low viscosity exopy resin embedding medium for electron microscopy // J/ Ultrastructure Res. 1969. - V. 26, № 1. - P. 31-34.

122. Практикум по микробиологии / под ред. проф. Н.С. Егорова. М.: МГУ, 1976.- 307 с.

123. Bergey's Manual of systematic bacteriology. Ed. by J.G. Holt, Williams and Wilkins Co., Baltimore. V. I, II. - 1984-1986. - 1504 p.

124. Kersters K., De Ley J. The oxidation of glycols by acetic acid bacteria // Biochem. et Biophys. Acta. 1963. - V. 71, № 2. - P. 311-331.

125. Munavalli S., Panella M. Thin-layer chromatography of mustard and its metabolites // J. Chromatogr. 1988. - V. 437. - P. 423-428.

126. Бирюков В.В. Планирование экспериментов при оптимизации сложных процессов по схемам ортогональных латинских прямоугольников // Хим. фарм. журнал. 1968. - Т. 2, вып. 1. - С. 57-62.

127. Шульц М.М., Писаревский A.M., Полозова И.П. Окислительно-восстановительный потенциал. JL: Химия, 1984. - С. 113-119.

128. Federson В.А., Eddy Е.М. // Bio Essais. 1990. - V. 12.-P. 173-179.

129. Кислухина О.В., Калунянц К.А., Аленова Д.Ж. Ферментативный лизис микроорганизмов. Алма-Ата: Рауан, 1990. - С. 82-84.

130. Хазиев Ф.Х. Методы почвенной энзимологии. М.: Наука, 1990. - 189 с.

131. Ашмарин И.П., Васильев Н.Н., Абросов В.А. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов. J1.: Изд-во ЛГУ, 1974. - 76 с.

132. Максимов В.Н. Многофакторный эксперимент в биологии. М.: МГУ, 1980.- 278 с.

133. Рубан Е.А. Физиология и биохимия представителей рода Pseudomonas. -М.: Наука, 1986. С. 120-142.

134. Ротмистров М.Н., Гвоздяк П.И., Ставская С.С. Микрбная деструкция систетических органических веществ. Киев: Наукова думка, 1975. - С. 115-140.

135. Кислухина О.В., Калунянц К.А., Удровский Г.Д. О возможности использования препарата лизосубтилина при микробиологическом синтезе L-лизина // Микробиол. промышленность. 1974. - Вып. 11. - С. 8-9.

136. Кислухина О.В., Кузнецова Т.А., Аксеновская В.Е. Влияние регуляторов на автолиз бактерий // Микробиология. 1982. - Т. 51, № 1. - С. 85-88.

137. Plahy Y. Fermentatchi priprava aminokiselin // Klasny Promisl. 1986. - Roc. 32. - P. 265-267.

138. Захарова И.Я., Павлова И.Н. Литические ферменты микроорганизмов. -Киев: Наукова думка, 1985. 285 с.

139. Кислухина О.В., Калунянц К.А., Алентова Д. Ферментативный лизис микроорганизмов. Алма-Ата: Рауан, 1990. - 192 с.

140. Williamson R., Ward J.B. Deficinty of autolytic activity in Bacillus subtilis and Streptococcus pneumonia is associated with decreased permeability of thewall //J. Gen. Microbiol. 1981. - V. 125, № 2. - P. 325-334.

141. Higgins M.L., Daneo-Maor L. Effect of macromolecular synthesis and lytic capasity on surface growth of Streptococcus faecal is II J. Bact. 1980. - V. 142, №2. - P. 938-945.

142. Wolf-Watz H., Normatk S. Evidence for a role of N-acetyl-muramyl-L-alamine amidazien septum separation in E. coli II J. Bact. 1969. - V. 128, № 2. - P. 580-586.

143. Akrigg A., Ayad S.R., Blamire J. Uptake of DHK by competent bacteria: a possible mechanism // J. Theor. Biol. 1969. - V. 24. - P. 266-272.

144. Williamson R., Ward J.B. Deficinty of autolytic enzymes of Clostridium perfrmgens II J. Gen. Microbiol. 1979. - V. 114, № 2. - P. 349-354.

145. Навашин C.M. Производство антибиотиков. M.: Медицина, 1970. - 368 с.

146. Работнова И.Л. Роль физико-химических условий (рН и EI12) в жизнедеятельности микроорганизмов. М.: АН СССР, 1967. - 276 с.

147. Kokholm G. Redox measurements, their theory and technique. Copenhagen, 1985.- 200 p.

148. Сухаревич В.П., Яковлева Е.П., Цыганов В. А. Влияние аэрации и редокс-нотенциала среды на биосинтез леворинов А и Б // Микробиология. -1970.-Т. 34, №6.-С. 981-985.

149. Штоффер Л.Д., Миркин Л.Г. О возможности использования окислительно-востановительного потенциала в качестве показателя насыщения среды кислородом // Прикл. биохим. и микробиол. 1969. -Т. 5, №2. - С. 151-157.

150. Shubai Н., Ishizaki A., Kobajashi К. Simultaneous measurement of dissolved oxygen ORP in aerobic culture // Agr. and Biol. Chem. 1974. - V. 38, 12. -P. 2407-2411.

151. Сухаревич В.И., Швецова Н.Н., Яковлева Е.П. О зависимости между редокс-потенциалом среды и процессом антибиотикообразования у Streptoverticillium mycoheptinicum шт.56 // Антибиотики. 1970. - №11. -С. 981-984.

152. Кристансонс М.Ж., Хабибулин Р.Э. Принципы измерения окислительно-восстановительного потенциала в биотехнологии микробного синтеза. Обзорная информация. серия УП. Процессы и аппараты микробиологических производств. 1985. - С. 1-31.

153. Аринушкина Е.В. Руководство по химическому анализу почв. М.: МГУ. - 1970 -487с.

154. Методы почвенной микробиологии и биохимии / Под ред. Звягинцева Д.Г.-М.: МГУ.- 303с.

155. Мишустин Е.Н. Ассоциации почвенных микроорганизмов. М.: Наука. -1975. - 107с.

156. Андреюк Е.И. Методологические аспекты изучения микробныхсообществ почвы / Микробные сообщества и их функционирование в почве. Киев: Наукова думка. - 1981. - С. 1 -23.

157. Одум Ю. Экология. М.: мир. - 1975. - 740с.

158. Газиев Ф.Х. Методы почвенной энзимологии. М.: Наука. - 1990. - 189с.

159. Звягинцев Д.Г. Почва и микроорганизмы. М.: МГУ. - 1987. - 256с.

160. Смирнов В В., Киприанова Е.А. Бактерии рода Pseudomonas. Киев: Наук, думка, 1990. - 264 с.

161. Stanier R.V., Palleroni N.J., Doudoroff М. The aerobic pseudomonas a taxonomic study // J. Gen. Microbiol. 1996. - V. 43, № 2. - P. 159-271.

162. Sneath P.H., Collins V.G. A study in test reproducibility between Laboratories: report of pseudomonas working party // Antoni van Leeuwenhoek J. Microbiology and Serol. 1974. - V. 40, № 4. - P.481-527.

163. Hugh R., Leifson E. The taxonomic significance of fermentative versus oxidative metabolism of carbohydrates by various gram-negative bacteria // J. Bacteriol. 1953. - V. 66, № l. p. 24-25.

164. Moeller V. Simplified tests for some aminoacid decarboxylases and for the arginine dehydrolase system // Acta pathol. Et microbiol. scand. 1955. - V. 36, № 1.-P. 158-172.

165. King O.E., Ward M.K., Raney D.E. Two simple media for the demonstration of pyocyanm and fluorescin // J. Lab. Clin. Med. 1954. - V. 44. - P. 301307.

166. Kovacz N. Identification of P. pyocianea by the oxidase reaction // Nature -1956.-V. 178.-P. 703.

167. Lowry O.H.,Rosenrough N.F., Farr A.L., Randall K.J. Protein measurement with the folin phenol reagent// J. Biol. Chem. 1951. - Vol. 193, № 1. - P.265-275.

168. Глинка H.JI. Общая химия. -Л.: Химия. 1971. - 712с.

169. Емельянова И.З. Химико-технологический контроль гидролизных производств. -М.: Лесная промышленность, 1976. 283с.

170. Франке 3., Франц П. Химия отравляющих веществ. М.: Химия.,1978. -Т.2. -406 с.