Межродовая, межвидовая, внутривидовая гибридизация пасленовых на примере родов Solanum и Lycopersicon

Гавриленко, Татьяна Андреевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Межродовая, межвидовая, внутривидовая гибридизация пасленовых на примере родов Solanum и Lycopersicon
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Межродовая, межвидовая, внутривидовая гибридизация пасленовых на примере родов Solanum и Lycopersicon"

РГ6 од - - АПР Ш

ГАВРИЛЕНКО Татьяна Андреевна

МЕЖРОДОВАЯ, МЕЖВИДОВАЯ, ВНУТРИВИДОВАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ ПАСЛЕНОВЫХ НА ПРИМЕРЕ РОДОВ SOLANUM И LYCOPERSICON (ГЕНЕТИЧЕСКИЕ И БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ)

Специальность: 03.00.15 — Генетика

АВТОР ЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

На правах рукописи

Работа выполнена в Государственном научном центре — Всероссийском научно-исследовательском институте растениеводства им. Н. И. Вавилова РАСХН.

Научный консультант: академик РАСХН, чл-кор. РАН, доктор биологических наук, профессор А. А. Жученко.

Официальные оппоненты: академик РАСХН, доктор биологических наук, профессор И. А. Тихонович; доктор биологических наук, профессор Т. Б. Батыгина; доктор биологических наук И. Г. Одннцопа.

Ведущая организация: Санкт-Петербургский Государственный Университет.

Защита состоится, 24 ■ ЛьбаАА 2РОО г. в. час. на заседании специализированного Совета'Д 020.18 02 во Всероссийском научно-исследовательском институте растениеводства.' им. Н. И. ^Ва^илова по адресу: 190000, С.-Петербург, ул. Большая Морская, д. 44.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института растениеводства им. Н. И. Вавилова.

Автореферат разослан

г.

Ученый секретарь Диссертационного совета,

доктор биологических наук,

профессор

Э. А. Гончарова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы диссертации. В генетических и в селекционных исследованиях важнейших сельскохозяйственных культур растений существует ряд проблем, которые не могут быть решены традиционными методами, а требуют внедрения новых технологий, в основе которых лежат методы культуры клеток, органов и тканей in vitro.

Так, клеточная инженерия, основанная на слиянии изолированных протопластов, создала принципиально новый способ гибридизации растений - соматическую гибридизацию. Вовлечение в гибридизацию соматических клеток вместо половых позволило эффективно использовать генофонд вида, рода,- семейства, устранив ограничения традиционной половой гибридизации: нескрещиваемость отдаленных видов; стерильность ряда селекционных образцов, мутантов и гибридных линий; однородительскос наследование цитогошматических детерминант в половом потомстве (Глеба, Сытник,1984; Kumar, Cocking,1987; Waara, Glimelius.1995). На основе соматических гибридов, синтезированы новые формы культурных растений, в селекционные программы вовлечены гибриды, обладающие ценными характеристиками (Helgeson и др., 1993;- Sjodin, Glimelius,1989; Mollers,-Wenzel,1992; Chen и др., 1999). Наряду с соматической гибридизацией, использование методов культуры in vitro изолированных зародышей, семяпочек, пыльников, позволяет получать уникальные формы растений. Помимо практического использования велико значение новых подходов для развития фундаментальных вопросов биотехнологии, генетики, физиология растений.

Возможности использования новых биотехнологий для широкого применения- еще далеко не реализованы. И прежде всего это связано с нерешенностью ряда проблем, к важнейшим из которых относится изменчивость растений-регенерангов, полученных из культуры клеток, и в :вязи с этим непредсказуемый xapaicrep экспрессии генетического материала

родительских видов у соматических гибридов. Для важнейших представителей семейства пасленовых - картофеля и томата-следующие направления не получили должного развития: (а).Ограниченность знаний об особенностях передачи генетического материала родительских видов сомаппзеским гибридам и их потомству." (б).Единичны примеры геномного анализа отдаленных соматических гибридов (Garriga Caldere и др., 1998 Parokonny и др.,1997). (в).Развигие клеточной и хромосомной инженерии видов родов Solanum и Lycopersicon ограничено слабой разработкой. и значительными методическими трудностями цитогенетического анализа гибридов, что обусловлено небольшим размером хромосом и низким уровнем кариотипической дифференциации данных видов. (г).Остаются далеко нереализованными возможности генетических и селекционных исследований культурного Картофеля - высокогетерозиготной, тетраплоидной культуры. Наличие ди- и Моногаплоидных клопов культурного картофеля, обладающих более высоким уровнем гомозигота ости и более низким уровнем плоидности, не решает проблем внутривидовой гибридизации, так как большинство таких клонов стерильны.

Целыо данной работы являлось изучение возможностей применения различных методов биотехнологии для эффективного использования Генофонда видов родов Solanum и Lycopersicon; создание и всестороннее

изучение гибридных форм различного уровня филогенетического родства;

(шлучение гибридов, перспективных для генетических и селекционных исследований, в том числе, обладающих устойчивостью к патогенам и важными агрономическими характеристиками. Исходя из поставленной цели, определены следующие задачи исследования:

1. Исследовать межвидовую и внутривидовую изменчивость по регенерационПой способности видов' картофеля и томата в системе изолированных протопластов. Отобрать генотипы с высоким к орфо генетическим потенциалом для проведения экспериментов по соматической гибридизации.

2. Изучить возможности использования различных методов in vitro для получения модельных и селекционно-важных комбинаций соматических и половых гибридов картофеля и томатов. Исследовать возможности использования Методов ■ соматической гибридизации, культуры изолированных зародышей, семяпочек и пыльников для изменения уровня плоидности и геномного состава, и получения фертильных форм гибридов.

3. Исследовать генетическую изменчивость растений, полученных с использованием методов in vitro на геномном и хромосомном уровнях; изучить характер связи между генетической и фенотипическоЙ изменчивостью созданных форм растений.

4. Получить фертильные формы и потомство соматических гибридов разного уровня филогенетического родства, в том числе гибриды,устойчивые к патогенам. .

5. Изучить перспективы ¡«прогрессии .чужеродного генетического материала и характер взаимодействия геномов отдаленных, нескрещиваемых видов у амфидиплоидов, полученных с помощью методов соматической гибридизации видов: S. tuberosum, S. etuberosum, S. nigrum, L esculentum, и у диплоидных половых гибридов томата и диких видов: S. lycopersicoides, L. chilense, полученных через эмбриокультуру и культуру семяпочек.

6. Определить возможность использования методов in situ гибридизации для: (а) идентификации Л, Е геномов картофеля, дикого вида S. nigrum, генома томата у отдаленных гибридов, (б) проведения геномного анализа гибридов и (в) идентификации хромосомных перестроек.

7. Изучить возможности применения методов клеточной инженерии для вовлечения во внутривидовую гибридизацию и в селекционный процесс стерильных дигаплоидных клонов культурного картофеля, обладающих хозяйственно-ценным признаками.

Научная новизна и практически» цеипость полученных результатов. Впервые проведены исследования взаимодействия геномов отдаленных нсскрсгциваемых видов родов Solanum н Lycopersicon на основе

комплексного анализа конъюгации хромосом, цитогйнетической стабильности, фертильности и. скрещиваемости отдаленных соматических гибридов. Впервые получены сведения о характере взаимодействия геномов Е картофеля и томата; А и Е геномов видов картофеля. Проведен анализ конъюгации гомеологичных хромосом гибридов. На основе методов геномной in situ гибридизации хромосом разработаны методические подходы для идентификации геномного состава межвидовых и межродовых гибридов родов Solanum и Lycopersicon, что имеет значение для дальнейшего развития исследований по хромосомной инженерии этих видов.

Впервые синтезированы межродовые гибриды томата и дикорастущих неклубненосных видов картофеля серии Elutferosa. гибриды S. tuberosum и S. etuberosum; впервые получено половое потомство таких гибридов. Впервые показана возможность получения диплоидных форм соматических гибридов

томата. Впервые показано, что методы слияния' протопластов Позволяют преодолевать стерильность гибридных растений.

Показано, что методы соматической гибридизации индуцируют изменения на молекулярном, геномном, хромосомном уровнях (включая межвидовые транслокации), существенно расширяя генетическую изменчивость гибридного материала, что дает возможность отбирать ценные гибридные генотипы. Межвидовые соматические гибриды картофеля могут быть использованы для селекции на устойчивость к патогенам.

Продемонстрированы новые возможности соматической гибридизации для вовлечения в селекционный процесс стерильных дигаплоидных клонов культурного картофеля. Впервые показано, что на основе соматической гибридизации стерильных дигаплоидов могут быть получены фертильнце тетраплоидные внутривидовые соматические гибриды, в том числе Перспективные для селекции. Выявлен эффект гетерозиса по признаку урожайности у тетраплоидных (2п = 48) внутривидовых соматических гибридов картофеля. Прямую практическую значимость имеет разработка методических подходов по внутривидовой соматической гибридизации.

Выделены линии: дикого вида томата L. chilense с высокой степенью скрещиваемости с культурным томатом; генотипы диких видов Solatium, обладающие высоким уровнем регенерадионной способности в системе изолированных протопластов.

Апробация работы. Основные положения работы были доложены и представлены на различных научных конференциях, включая: III Всес. Конференцию "Экологическая генетика растений и животных" (Кишинев, 1987); съезде ВОГиС (Минск, 1992); Межд. Съезд-; по физиологии и биохимии растений (Ст.-Петербург, 1993); XII Intern. Congress on Sexual Plant Reproduction. Ohio, U.S.A. 1992; XV Intern. Botanical Congress, Japan, 1993; IV Intern. Solanaceae Conference, Australia, 1994; Intern. Symp. "Crop Protection", Belgium, 1995; German-Russian Cooperation in Biotechnology. Workshop IV, St.-Petersburg, Russia, ¿996; XIV EUCARPIA Congress, Finland, 1995; 13th (The Netherlands, 1996) и 14th (Italy,. 1999) Triennial Conference of the. European Association for Potato Research - EAPR'98, 99; VHIth (Italy, 1994) и IX (Israel, 199S) Intern. Congress on Plant Tissue and Cell Culture - IAPTC; 1st (1994) и 2nd (1998) Intern. Symposium on Piant Biotechnology, Kyiv, Ukraine; Intern. Symposium "Current Topics.of Cytogenetics", Austria, 1997; Intern. Symposium "Breeding Research on Potatoes", Germany, 1998; "East-West Potato'99 Congress", Finland, 1999 и др.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. На основе использования комплекса методов биотехнологии (слияния протопластов, эмбриокультуры, культуры семяпочек и культуры изолированных пыльников гибридов) возможность создания новых форм растений - гибридов картофеля, томата различного уровня филогенетического родства, в том числе генетически стабильных, фертильных форм, обладающих селекционно-ценными характеристиками. ' 2. Соматическая гибридизация растений позволяет не только преодолевать барьеры нескрещиваемости, но ,и одновременно является эффективным методом индуцирования изменений на геномном, хромосомном,

молекулярном уровнях. Среди различных генетических изменений отдаленных гибридов практический интерес для интрогрессивной гибридизации могут представлять межгеномные транслокации. Данный механизм интеграции чужеродного генетического материала в геном культурных растений перспективен для гибридов между отдаленными видами растений с отсутствием, либо очень низким уровнем конъюгации гомеологичньы хромосом. Генетическая изменчивость гибридного материала позволяет отбирать перспективные генотипы с ценными свойствами.

3.СоматиЧеская гибридизация обуславливает возможность проведения геномного анализа, изучения степени совместимости и особенностей взаимодействия геномов отдаленных, нескрещиваемых видов растений.

4.С помощью методов слияния протопластов возможно вовлечение в гибридизационный процесс стерильных растений {дигаплоидов культурного картофеля; отдаленных гибридов) и получение на их основе фертильных форм, в том числе обладающих селекционно-ценными характеристиками.

Объем и структура работы. Работа изложена на7% страницах и состоит из введения, общего обзора литературы, 5-ти глав экспериментальной части, заключения и выводов. Работа иллюстрирована 30 таблицами и 26 рисунками. Список-литературы насчитывает 380 наименований.

Публикаиии.Материалы диссертации опубликованы в виде 52 работ в 'отечественных и зарубежных изданиях.

Личный вклад 'автора. Автор принимал участие на всех этапах исследований, представленных в диссертации. Выдвижение гипотез осуществлялось преимущественно автором. Вклад автора был определяющим при формулировании результатов .и выводов, а также в написании большинства статей по теме диссертации.

Автор выражает сердечную признательность профессору И.М.Сурикову за инициацию данных исследований. Глубокую благодарность автор выражает

академику А.А.Жученко, профессору Л.А.Лутовой, академику К.З.Будину за участие в обсуждении результатов и поддержку данной работы. Автор благодарит своих коллег и соавторов за сотрудничество: Т.Никуленкову, А.Павлова, Д.Дорохова, Н.Пивня, Г.А.Воробьеву, Л.М.Турулеву, R.Thieme, U.Darsow, T.Thieme, H.Tiemann, V.-M.Rokka, K.Horsman.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ Исходным материалом служили: генетически маркированные линии томата и картофеля (5 цитоплазматических н ядерных мутантов), 14 сортов, II дигаплоидов картофеля, 2 вида томата (15 образцов), 15 видов картофеля (25 образцов), принадлежащих к 9-ти сериям рода Solanum (Juglandifolia, Etuberosa, Caripensa, Pinnaiisecta, ßulbocaslana, Circaefolia, Commersoniana, Tuberosa, дикорастущий вид S. nigrum), всего 72 образца, большинство из которых получено из коллекции ВНИИР им. Н.И.Вавилова. Таксономия рода Solanum и обозначения геномов приводятся в соответствии с Hawkes (1994).

В работе использовали: (1) общепринятые методы культуры растений in vitro (Бутенко, 1964), культуры изолированных пылышков (Rokka и др., 1995) н соматической гибридизации. Выделение протопластов проводили в соответствии с Сидоровым и др.(1985). Слияние протопластов индуцировали в соответствии с методом Menczel и др.(1981) и согласно Thieme и др.(1987). Культивирование протопластов и регенерацию растений проводили на средах: (a) WSS; SW, SH-1, SH-2 (Сидоров и др., 1985); (б) ТМ-2, ТМ-3 (Shahin, 1985); (в) Cl/Res, Cul, Dif (Haberlach и др.,1985) с небольшими модификациями. Работа проводилась совместно с R.Thieme и Т.Никуленковой.

(2) Молекулярные методы, позволяющие идентифицировать гибриды и изучить их генетическую конституцию, включали: анализ множественных

молекулярных форм пероксидазы, эстеразы и RAPD анализ, проводимые по стандартным методикам с небольшими модификациями (Gavrilenko и др., 1992; Гавриленко и др.,1994b; Thieme и др.,1997; Gavrilenko и др.,1999а). Совместные исследования с А.Павловым, Д.Дороховым и R.Thieme.

(3) Комплекс методов цитологического' анализа: традиционные методы изучения давленных препаратов, окрашенных ацетокармином;' оценка относительнее содержания ДНК в ядрах растений методом проточной цитофотометрии (De Laat и др.,1987). Методы in situ гибридизации хромосом. Гибридизацию хромосомных препаратов гибридов проводили с геномной ДНК родительских видов, меченной различными флюорохромами (Leitch и др., 1994 с учетом модификаций Jacobsen и др., 1995; Garriga-Caldere и др.,1998). Гибридизацию пробы проводили с хромосомными препаратами гибридов, приготовленных согласно Zhong и др. (1996). Совместная работа с К. Horsman, R. Thieme.

(4) Оценка устойчивости к фитофторозу и к вирусу Y проводилась на базе Института Селекции Культурных растений, Гросс Люзевиц, Германия, в совместных исследованиях с R. Thieme, U. Darsow, Т. Thieme. Методы и результаты оценки опубликованы в совместных работах (Darsow и др.,1996; Thieme и др., 1997; 1998а,Ь; 1999; Gavrilenko и др., 1996; 1999b). Степень устойчивости к фитофторозу определялась методом искусственного заражения отделенных листьев у 3*-5ти растений на генотип. Для заражения йспользовали суспензию сложной вирулентной' расы фитофторы (смесь рас: 1.2. 3.4. 5. 6. 7. (8). 10. 11). Учет результатов проводили по показателям: (а) интенсивность спороношения, оцениваемая по распространению поражения на площади листа по девятибальной шкале СЭВ (1984); (б) диаметр некротических зон, развившихся при заражении (9 баллов - наивысший уровень устойчивости) и (в) скорость* проникновения конидий гриба в листья; Расчет среднего балла пораЖенности проводили по средним данным трех повторностей опыта.

Устойчивость к вирусу определялась для 10-тн растений'на генотип по 3 повторностям двумя методами: при механическом заражении растений и при заражении тлей (Thieme и др., 1998а,Ь; 1999). Оценку заражения проводили фотометрически с' использованием ELISA теста. Иммунными считали образцы, в которых вирус не обнаруживался иммунохимическим методом.

(5) Анализ морфологических признаков проводили по стандартным каталогам ВНИИР им.Н.И.Вавилова, оценивая от 10-ти до 22* признаков для каждого растения, каждый генотип был представлен 5-тью - 10-тью растениями на одну повторность. Анализ продуктивности внутривидовых соматических гибридов и дигаИлоидов картофеля проводили на 2-ой и 3-ий год вегетации растений в поле в совместной работе с H.Tiemann (Gavrilenko и др.,1999а,Ь).

(6) Статистическую обработку данных проводили по общепринятым методикам (Рокицкий,1974). Анализ результатов проводили с использованием программы SYSTAT для Windows-TM и статистической программы СТАТГРАФ (Отдел АИС, ВНИИР им.Н.И. Вавилова) совместно с Л.Новиковой и T.Thieme.

Использованные сокращения: GISH - in situ гибридизация хромосом гибридов с использованием проб геномной ДНК родительских видов. RAPD - анализ полиморфизма длин продуктов амплификации. 2х, 4х, 6х, 8х - ди-, тетра-, гекса- и октоплоидные генотипы.

РЕЗУЛЬТАТЫ. ИССЛЕДОВАНИЙ

1 .МЕЖ- И ВНУТРИВИДОВАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ ПО РЕГЕНЕРАЦИОННОЙ СПОСОБНОСТИ В СИСТЕМЕ ИЗОЛИРОВАННЫХ ПРОТОПЛАСТОВ У РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ КАРТОФЕЛЯ И ТОМАТА

Начальный этап работы состоял в изучении меж- и внутривидовой изменчивости по морфогенегаческой потенции мезофильных протопластов. Учет результатов проводили по общепринятым показателям: (1) эффективности высева протопластов, равной проценту протопластов,

поделившихся как минимум, один раз на 14-1ыс сутки кулышшропания; (2) эффективности регенерации протоклонов, определяемой в процентом отношении числа каллусов, сформировавших побеги, к общему числу высаженных на регенерационную среду протоклонов.

Обнаружена. значительная межвидовая изменчивость п<г морфогенегической потенции протопластов (Рис.1). Статистический анализ показал, что ьид 5. ешЬегозит имел наиболее высокие показатели; у диких видов: 5. оскгапШт и 5. выявлены наиболее низкие показатели.

Виды с высокой способностью клеток к делениям, независимо от состава среды, имели более высокие показатели, чем виды с низким морфогенетической потенциалом. Протопласты томата были способны к делениям только в одной из пяти культуральных сред - ТМ-2 (1>ис.1). Для окончательных выводов о морфогенетическом потенциале видов необходимо изучение внутривидовой изменчивости, что и было исследовано на примере дикорастущих видов картофеля серии ЕшЬего$а.

Рис. I. Эффективность делений протопластов у различных видов • картофеля и томата в разных культуральных средах

о.

га

- - „

.о .г? ,о <у

///////-> ^ <0 «О „«? ^ „«?

«9 ^ «Р &

<Ь 03 V

ЮБУУ ИМУЭБ

ПСШез.агар □ О/Явз.агароза ШТМ-2

Таблица 1

Эффективность клеточных делений и регенерации у видов серии ЕшЬегоза и их гибридов_

Образец Эффективность высева протопластов Регенерационная способность

в среде протоклонов,%

Cl/Res SW

Solanum etuberosum:

k-9141 42,0 + 2,8 а 40,6 + 1,9 a

k-8808 31,1 + 4,4 b 50Д + 2,2 b

k-21382* 58,2.+ 4,4 с 63,2 + 3,7 a 7,7 + 3,8 b

Solanum brevidens:

k-21263 . 6,0 + 1,6 d 3,2 + 1,4 с

k-21265-b 30,6 + 3,1 b 5,8 + 2,0 с

k-21265* 22,8 + 2,3 e 30,9 + •2,2 b- 31,1 + 6,2 a

Реципрокные гибриды: гибрид k-11671 S. brevidens k-21265 x 59,4 + 3,5 f 66,3 . + 1,6 a 67,6 + 3,2 d

S. etuberosum k-2I382 •

гибрид k-11673 S. etuberosum k-21382 x -

S. brevidens k-21265 68,1 + 2,3 g .73,0 + 6,8 f 76,4 ' + 2,1 e

'Образцы, участвовавшие в реципрокных скрещиваниях в качестве родительских форм. Одинаковые буквы ( a, b,c, d ...) в столбце означают, что различия между данными не значительны; разные буквы -различия существенны при р < 0,05

Результаты исследований различных генотипов диких видов 5. ешЬегозит и & бгеу/'Лто выявили наличие высоких внутривидовых различий (р<0,05) по эффективности регенерации и по способности протопластов к делениям (Табл.1). Установлена значимая положительная корреляция (г = + 0,883; р<0,01; Табл:1) между показателями эффективности высева протопластов и. регенерационной способности протоклонов. Наличие высокой корреляции позволяет в дальнейшем рассматривать оба эти показателя в качестве единой характеристики морфогенетической потенции клетки.

Анализ родительских форм и половых реципрокных гибридов между видами 5. ЬгеуШепз и & еШЬегаит показал, что генетический контроль признака морфогенетической потенции | протопластов этих видов складывается из трех компонентов. (1) Доминирования высоких показателей ядра 5. ешЪегозит над достоверно (р<0,001) более низкими показателями Ьге\>Шепз (Табл.1). (2) Влияния цитоплазмы & еШЬегозит. по ряду показателей обнаружены достоверные (р<0,05) различия между реципрокными гибридами. (3) Не исключено также, что в формировании Признаха высокой морфогенетической потенции гибридов участвуют и эффекты гетерозиса. На это указывает достоверное превышение (р<0,05) показателей регенерационной способности клеток гибрида к-11671 над соответствующими показателями родительского вида 5. ешЬеготт (Табл.1). Итак, как между видами, так и в пределах видов возможен отбор форм или Создание новых генотипов (путем гибридизации), обладающих высокой морфогенетической потенцией протоппас+ов.

2.МЕЖРОДОВАЯ СОМАТИЧЕСКАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ ТОМАТА И ДИКОРАСТУЩИХ НЕКЛУБНЕНОСНЫХ ВИДОВ КАРТОФЕЛЯ

Дикорастущие " неклубненосные виды картофеля представляют . несомненную ценность для интрогрессивной гибридизации, так как эти виды устойчивы ко многим патогенам и абиотическим стрессам (На\укез, 1994). Наряду с праетическими задачами другим важным аспектом гибридизации

является изучение особенностей взаимодействия и совместимости геномов. До последнего времени данные вопросы оставались неисследованными из-за полной репродуктивной изоляции диких неклубненосных видов картофеля серии Etuberosa (геном Е).

Эксперименты по межродовой соматической гибридизации культурного томата, L. esculentum и диких неклубненосных видов Solanum серии Etuberosa были выполнены в пяти комбинациях (Табл.2). Селекция соматических гибридов была проведена на основании морфофизиологических особенностей микрокаллусов, включающих скорость роста, размер, цвет и структуру каллуса. Изучение изоферментов пероксидазы, эстеразы и RAPD анализ подтвердили гибридность отобранных по морфогенетическим характеристикам протоклонов. В гибридных спектрах выявлены специфичные компоненты обоих родительских видов. В двух комбинациях (№ 1 и № 4, Табл.2) с участием лластомного хлорофилл-дефектного мутанта томата типа "albina" - Pl-albl, все полученные гибриды были представлены только зелеными растениями, т.е. несли' пластида! дикорастущих видов картофеля.

Как in vitro, так и in vivo отмечены различные нарушения морфогенеза межродопых соматических гибридов, что может бьпь связано с нескоордшшрованностыо • генетических процессов в гйбридном геноме (Табл.2). В результате из 219 гибридных регенератов только 44 генотипа ' были способны расти и цвести in vivo.

Цитологический анализ межродовых соматических гибридов. Все родительские формы, использованные в экспериментах по слиянию протопластов, были диплоидами - 2п = 2х = 24. Как показали результаты оценки среднего содержания ДНК на ядро и подсчет числа хромосом в кончиках корней; большинство межродовых соматических гибридов (60 %) имели теоретически ожидаемый уровень плоидиости (4х) и объединяли хромосомные наборы родительских видов. Выявлены также высокополиплоидные (бх, 8х), миксоплоидные и анеуплоидные гибриды

Таблица 2

Характеристика межродовых комбинаций слияния протопластов__

Отобрано гиб- Получено межродовых гибридов

Комбинация ридных каллусов Число гибридов in vitro / способных Число гибридов с уровнем плоидности ( % анеуплоидов)

Всего ( % с регенератами) расти in vivo / • способных к цветению 4х 6х 8х Миксо-плоидов

1. L. esculentum, pl-albl (+) S. etuberosum 55 ( 52,7%) 101/ 19 / 15 8 (50%) 2 1 0

2. L esculentum, Тамина (+) S.'etuberosum 332 ( 5,4 % ) 91/54/18 10 (33%) 1 " -1 0

3. L. esculentum, Тамина (+) (br к et)* - 58 ( 6,9 % ) I / 12 / 11 0 5 1 2

4. L. esculentum, pl-albl (+) (brxet)* 26 ( 7,7 %) 6/3/0 ' - - - -

5. L. esculentum, pl-albl (+) S. brevidens 14 ( 0) 0 - - - г

В сумме 485 ( 10,9 %) 219/ 88/ 44 18(39%) 8 з 2

* ( br х et) - половой гибрид 5. brevidens х S. etuberosum

(Табл.2), которые могли возникнуть в результате 'сомаклональной изменчивости и/или вследствие множественных слияний протопластов, либо как результат генетического разнообразия исходных клеток.

Восемь межродовых соматических гибридов были проанализированы с использованием методов геномной in situ гибридизации хромосом - GISH анализа. В результате идентифицированы: (а) геномный состав аллотетраплоидных и аллогексаплоидных соматических гибридов; (б) стабильные амфидиплоиды, включающие полные хромосомные наборы родительских видов ( 2п = 48 = 24 хромосомы томата и 24 хромосомы S etuberosum, Рис.2.1). (в) Анализ анеуплоидов показал, что анеуплоидия была связана с потерей или добавлением хромосом S. etuberosum. (г) Выявлена гибридная линия с транслоцироваиной хромосомой; межвидовая транслокация, очевидно, является . результатом сомаклональной изменчивости, (д) Не выявлено эффектов пространственного разделения родительских геномов в гибридных клетках.

Соматические гибриды проявили широкий спектр фенотипическоЙ изменчивости. Сопоставление результатов морфологического и цитологического анализов указывает, что изменчивость среди гибридных генотипов по большинству морфологических характеристик связана с различиями в уровне плоидности гибридов.

Анализ мейоза амфидиплоидных межродовых гибридов проведен с • использованием традиционного Исследования давленных .препаратов (для 8-ш! генотипов) и GISH анализа (для 2х генотипов). GISH анализ позволил идентифицировать хромосомы родительских видов в микроспороцнтах гибридов и проследить их поведение в последовательных стадиях мейоза (Габл.З; Рис.2.3; 2.4). Выявлены следующие особенности взаимодействия геномов родительских видов у межродовых соматических гибридов томата и дикого неклубненосного вида картофеля S. etuberosum:

(а). Конъюгация хромосом у изученных амфидиплоидов происходит по типу аптосиндеза - мейоз практически полностью . бивалентный.

_ _ Таблица 3

Характер конъюгации хромосом в диакинезе межродовых соматических гибридов ( 2п=4х=48 ), 1,2- анализ давленных препаратов, окрашенных ацетокармином; 3 - 013Н анализ мейотических хромосом

Комбинация Число мейоютов, Гибрид уиива-лентами ) Среднее число хромосомных ассоциаций на клетку (пил - тах)

I П Ш IV

IX. esculentum, pl-albl (+) S. е tuberosum о.Ю ' 36 ( 39 % ) 0.8 18 (28% ) Ь.З 20 ( 55 % ) Ь.5 10 (30% ) 1,3(0-4) 1,5(0-4) 2,4(0-4) 0,3(0-2) 22,9 ( 22-24) 23,0(22-24) 222(20 - 24) 23,5(21 -24) 0,16(0-1) 0 0,10(0-1) 0,10(0-1 ) 0,08(0-1) 0 0,10(0-1) 0,16(0- 1 )

2jL esculentum, Тамина ■ (+) S. etuberosum 15.5.9 . . 20. (20%) .15.5.7 30 (43%) За.1 28 (21 % ) 4а.2 - 20 ( 35 % ) .0,6(0-2) 2,0(0-4) 1,4(0-6) 0,4(0-2) 23,7(22-24) 22.2 С17 - 24 ) 23.3 ( 21-24) 23,6(21 -24) 0 0,17(0-2) 0 0,20(0-1) .0 0,15(0-1) 0 0,10(0-1)

3X esculentum, Тамина (+) S. etuberosum 15.5.Ь 30 ( 33 %) 6.а.19 17 (42 %) ■ Z 0,47(0-4) Т 0,47(0-4) S 0 « £ 1,02(0-8) Т 0,84 ( 0 - 6 ) S 0,18 (0-2) 23,5(22-24) 23,0 ( 20 - 24 ) 0,08(0-1) 0,06 (0 - 1 ) 0,08(0-1) 0,06 (0 - 1 )

* В ЩвН экспериментах: X - среднее число унивалентов на клетку, из них: «Т» - унивалентов томата. « Б » - унивалентов 5. ешЬегохит

са

использованы дикорастущие »иды, обладающие высокой устойчивостью к важнейшим патогенам: фнтофгорозу - S. pinnatisectum и S.bulbocastanum (геном В) и устойчивые к инрусу Y - S. eluberosum (геном Е). Изучение данных комбинаций представляет и теоретический интерес, так как из-за барьеров репродуктивной изоляции сведения о перспективах интрогрессивной гибридизации и о характере взаимодействия геномов А, В и Е видов картофеля очень ограничены.

Слияние протопластов и идентификация гибридов. Показано, что с использованием соматической гибридизации возможно преодолеть нескрещиваемость между отдаленными видами рода Solanum и получить многочисленные гибриды между культурным картофелем, S. tuberosum (геном А) и дикорастущими Мексиканскими видами S. pinnatisectum и S. bulbocastanum (геном В); и между культурным картофелем (геном А) и диким неклубненосным видом .9. etuberosum (геном Е) . (Табл.4). Идентификацию гибридов проноднлк на стадии начала регенерации побегов, отбирая для молекулярного анализа протоклоны, которые первыми сформировали побеги. Высокий процент межвидовых гибридов среди проанализированных регеперантов обусловлен, вероятно, эффектом гетерозиса - в результате ускоренной регенерации межвидовые соматические гибриды опережали морфогенез родительских видов (Табл.4). В изоферментных и в RAPD систрах межвидовых соматических гибридов ' выявлены специфичные фрагменты обоих родительских видов. У отдельных гибридных генотипов в RAI'D спектрах обнаружены новые, отсутствующие у обоих родительских видов фрагменты; в ряде случаев выявлена также потеря некоторых фрагментов родительских видов; данные факты указывают на перестройки в гибридном геноме (Dorokhov, Gavrilenko,1994: Thieme и др.,1997).

Цитологический и морфологический анализ межвидовых соматических гибридов картофеля, оценка ферпш.ноечн. Большинство гибридов имели теоретически ожидпеммй уропень нлоидностн и обладали суммой

Таблица 4

Характеристика межвидовых комбинаций слияния протопластов

Комбинация Число, % идентифицированных гибридных регенерантов Получено межвидовых гибридов

Число гибридов in vitro / / число гибридов in vivo / способных к цветению-/ / фертильных форм* /** Число гибридов с уровнем плоидности

• 4х 6х 8х Миксо-плоидов

2х (+) 2х 1. S. tuberosum, дигаплоид Т 67 (+) S. etuberosum 90% 91 /72/44/21 / 11 •60 ( 67 %) 14 15 (15%) (16%) 2 (2%)

2. S. tuberosum, дигаплоид Т 17 (+) S. pinnatisectum 63 % 21/14/3/0/0 - 10 ( 47 % ) 8 0 (37%) 3 ( 16%)

3 х (+) 2х 3. S. tuberosum, триплоидТ 15 (+) ( 5. pinatisectum х 5. bulbosatanum ) 84% 311 / 78 / 44 / 3 /9 5х 7х Миксо-плоиды

89 (89 %) 4 (4%) 7 (7%)

В сумме - |_; 423 / 164/ 91 /¿4/?0 !__;____;___

* Число фертильных гибридов, завязавших ягоды с жизнеспособными семенами при самоопылении и ** в возвратных скрещиваниях с тетраплоидным культурным картофелем'

хромосомных наборов соматических клеток родительских видов. Анеу-, Микен- и полиплоидные (6х, 8х) формы Также были обнаружены среди гибридов (Табл.4).

У амфидиилондиых межвидовых соматических гибридов S. tuberosum (+) S. etuberosum (2n = 4х = 48) в диакинезе в среднем образуется около одного полнвалета па мейоцит, таким образом интрогрессия возможна, хотя частота ее может быть не высока. Среди гибридов обнаружена изменчивость по уровню мужской и женской фертилыюстн. Выделены фертильные формы и получено потомство в возвратных скрещиваниях межвидовых соматических гибридов с селекционными образцами тетраплоидного культурного картофеля (Табл.4). Большинство амфидиплоидных соматических гибридов картофеля представляли морфологически совершенные и функциональные растения. В то же время результаты анализа морфологических характеристик выявили значительную изменчивость межвидовых соматических гибридов фактически по всем изученным признакам. Показано, что большинство морфологически и функционально аномальных гибридов являлись поли- и миксоплондами.

Анализ устойчивости к патогенам проводили в совместной ра'боте с U.Darsow, R.Thieme и T.Thieme (Thieme и др.,1997; Darsow и др.,1996; Thieme, Gavrilenko и др.,1998а, 1999)! Выявлена широкая изменчивость по уровню устойчивости к фитофторозу среди соматических гибридов между культурным картофелем и дикими Мексиканскими видами S. pinnatisectum и S. bulbocastammi; при этом большинство гибридов имели промежуточный уровень устойчивости (Рйс.З). Анализ 92х гибридных генотипов из двух комбинаций позволил отобрать 10 % высокоустойчивых (балл 7) и 15 % среднсустойчнвых (балл б) межвидовых соматических гибридов. Гибриды, показавшие устойчивость ниже уровня восприимчивых родительских форм культурного картофеля, в большинстве были представлены поли- и миксоплондами. -

Рис.3. Устойчивость к фитфторозу родительских форм ( стрелки ) и 78 межвидовых соматических гибридов из комбинации слияния протопластов: S. tuberosum, Т15 (+) pnl х bib. pnt х bib - половой гибрид ( S. pinnatisectum x S. bulbocastanum )

ffl о

a ю s t_

x z (0 m

о q

и и s

о с о s т

50 -40 -30 -2010-

Ж Ж

m ш ш

"А

Т15

pnl хЫЬ

Уровень (балл) устойчивости к фитофторозу

Выявлена изменчивость по уровню устойчивости к вирусу Y среди межвидовых соматических гибридов из комбинации слияния протопластов высоковосприимчивого к вирусу Y дигаплоида культурною картофеля, S. tuberosum и иммунного к вирусу Y образца дикого вида S. eluberosum. Из 63" межвидовых гибридов, 33% (21 генотип) обладали высоким уровнем устойчивости; результаты ELISA тсста показали, что эти соматические гибриды были иммунными к вирусу Y (Thicmc, Gavrilenko и др.,1998а; 1999а,Ь).

Анализ геномного состава межвидовых соматических гибридов картофеля. Для развития клеточной и хромосомной инженерии в целях

иптрогрессимюй гибридизации необходима четкая идентификация хромосом родшсльскнх индии. Данная проблема особенно сложна для представителей рола Solanum in-за полиплоидной природы многих видов, небольшого размера митотических хромосом и низкого уровня кариотипической дифференциации этих видов. В , наших исследованиях предложен модифицированный метод геномной in situ гибридизации. хромосом, позволяющий идентифицировать геномы родительских видов в ядрах гибридов из сравнительно близкородственных комбинаций. Исследованные комбинации межвидовых соматических гибридов S. tuberosum (+) S. etuberosum и S. tuberosum (+) S. nigrum характеризовались относительной генетической стабильностью - большинство гибридов имели теоретически ожидаемые число хромосом и геномный состав; отсутствовали явления физической разобщенности геномов родительских видов в метафазных пластинках гибридов и эффекты видоспецифичной элиминации хромосом. С использованием GISII анализа (а) проведено изучение геномного состава у аллоиолиплондных форм межвидовых соматических гибридов и у их потомства; (б) выявлены стабильные амфидиплоидные формы; (в) обнаружены геномные и хромосомные изменения у межвидовых соматических гибридов S. tuberosum (+) S. etuberosum' и гибридов S. tuberosum (+) S. nigrum. Выделен гибрид паслена и картофеля F109-16, несущий межвидовую траислокашпо. Показано, что с увеличением продолжительности стадии неорганизованных клеточных делений возрастает вероятность геномных и • хромосомных изменений гибридов, (г) Проанализирован геномный состав соматических гибридов картофеля и S. nigrum а также характер передачи хромосом родительских видов гибриду BCi и потомству из экспериментов по слиянию протопластов стерильного гибрида и . протопластов дигаплоида картофеля. Получены экспериментальные доказательства, что на основе изменения геномного состава стерильных'гибридов возможно получение фертнльных форм. '

4. ВНУТРИВИДОВАЯ СОМАТИЧЕСКАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ КАРТОФЕЛЯ

Высокий уровень гетерозиготности и тетраплоидная природа существенно осложняют селекционно-генетические исследования культурного картофеля. Более контролируемая селекция может быть проведена на диплоидном уровне с дигаплоидными клонами, имеющими более высокий уровень гомозиготности. Однако большинство диганлоидов характеризуются мужской стерильностью или вовсе не способны формировать цветки. Внутривидовая соматическая гибридизация картофеля, теоретическая основа которой была разработана Wenzel (1979), позволяет переходить с диплоидного на тетраплоидный уровень, вовлекать в гибридизацию стерильные дигаплоидные клоны картофеля и комбинировать их признаки. Практической реализации данной схемы были посвящены настоящие исследования, которые, выполнялись на материале коллекции Института Селекции Культурных Растений, Гросс Люзевиц, Германия, совместно с H.Tiemann и R.Thieme (Gavrilenko и др., 1994 Ь; 1999 а, b; Gavrilenko, Thieme,1998 b).

Эксперименты по внутривидовой соматической гибридизации картофеля включали' восемь комбинаций слияния протопластов с участием 10-ти дигаплоидов, обладающих различными селекционно-ценными признаками: устойчивостью к разным патогенам, продуктивностью, высоким содержанием крахмала. В результате было получено 348 внутривидовых соматических гибридов (Табл.5), гибридность которых была подтверждена анализом изоферментов пероксидазы, и в случаях идентичности изоферментных спектров родительских форм - RAPD аналнюм.

Цитологический и морфологический анализ внутривидовых соматических гибридов картофеля. Как в традиционных селекционных исследованиях, так и в новых биотехнологических программах, одним нз главных требований к создаваемым формам картофеля является тетраплоидный уровень плоидности и генетическая стабильность. Ь'олмшшсшо шбрнлок, полученных в результате слияния протопластов диплоидных (2п 2х = 24)

Таблица 5

Результаты внутривидовой соматической гибридизации стерильных дигаплоидов картофеля

Число

регенерантов Число гибридов с уровнем плоидности Комбинация (% гибридных)_ (% анеуплоидов * )_

4х | 6х | 8х 1 Миксоплоиды

Т18 (+) Т23 25(72%) ' 10(50%) 10 1 0

' Т14 (+) Т17 101 ( 38 % ) 15(33%) . Ш 2 - 5

•

Т17 (+) Т23 . • 18(44%) 4(0%) • 2 - 0 1

Т67 (+) Т75 100(95%) . 38 ( 33 % ) . . 22 2 3

. Т75 (+) Т83 105 ( 28 % ) 25(33%) 5 а 0

Т75 (+) Т95 100(47%) 27 (0 ) 12 ■ 1 2

Т75 (+) Т76 74 ( 57 %) 26(20%) 15 0 1

Т75 (+) Т89 127 ( 53 % ) 57(50%) 7 2 1

. . В сумме: 650 ( 54 % ) 202 83 • 8 13

Уровень-плоидности определен цитофотометрически, * число анеуплоидов определено подсчетом числа хромосом у части тетраплоидных гибридов

дигаплоидных клонов, имели ожидаемый уровень плоидности и были тетраплоидами (Табл.5). Среди отобранных тетраплондных форм внутривидовых гибридов обнаружены анеуплоидные формы, частота которых в отдельных комбинациях достигала 50 % от полученного числа 4х соматических гибридов. Значительные различия по частоте анеу- и ' миксоплоидных гибридов между отдельными комбинациями указывают на влияние генотипа родительских видов на генетическую стабильность гибридов (Табл.5). Помимо изменений числа хромосом, у внутривидовых соматических гибридов картофеля выявлены также структурные перестройки хромосом и нарушения протекания митоза и мейоза. Тем не менее, большинство внутривидовых соматических гибридов (44 % от общего числа изученных гибридов) являлись стабильными тетраплоидами (2п ■= 48).

Следующий этап работы состоял в исследовании характера связи между выявленными изменениями кариотипа внутривидовых соматических гибридов и морфологическим признаками. В Полевых условиях проводили оценку 22* морфологических и агрономических характеристик родительских форм дигаплоидов и внутривидовых соматических гибридов картофеля. Выявлена. высокая изменчивость по всем изученным признакам среди гибридов одной и той же комбинации. Для всех комбинации было установлено, - что полиплоидия ведет к снижению большинства морфологических и к депрессии всех изученных агрономических признаков. Значимый негативный эффект анеуплоидии отмечен только для диух из 22х изученных признаков: интенсивности цветения и массы клуб иен (г/куст) (Табл. 6).

Оценка продуктивности внутривидовых соматических гибридов проводилась по показателям: масса клубней (г / куст), число клубней на куст, средний вес (г) и форма клубней. Показано достоверное превышение показателей продуктивности у тетраплондных соматических гибридов (2п=4х=48) над соответствующими значениями исходных родительских дигаплоидов (Табл.6). Гетерозис по урожайности, наблюдаемый у

Таблица 6

Урожай (г/куст) у исходных дигаплоидов и у внутривидовых соматических гибридов картофеля с различным числом хромосом: тетраплоидные эуплоиды ( 48 ), тетраплоидные анеуплоиды ( 48+ ), гексаплоидные эуплоиды ( 72 )

Комби- Урожай исходных Урожай (пмп■ - шах) у гибридов с

нация дигаплоидов MPV числом хромосом, 2п: 48 48 + 72

Т 14 (+) Т 17 No.( *) 895 472 684 1030 а (525- 1303) 8(6) 577 b (460 - 770) 3 407 b (190-624) 4

Т18 (+) Т23 No. 532 395 464 1073 а (630- 1485) 5(4) 346 b (38-570) 4 404 b (225 - 538) . 4

Т75 (+) Т83 No. 481 347 414 698 а (207 - 946) 13(0) 329 b (190- 435) 3 427 b (186-760) 3 :

Т75 (+) Т95 No. 481 435 458 1206 а (546- 1360) 5(4) - 136 b (136- 137) 3

T75 (+) T67 No. 481 331 406 748 (269 - 1007) 12(0) 564 (361 - 834) ' 5

N0. - Число гибридов (каждый гибрид был представлен 10 растениями), *.в скобках указано число гибридов с урожаем выше, чем у сорта Адретта в 1995/1997 гт. Разные буквы в строке (а, Ь, с) указывают данные, различия между которыми достоверны при Р<0. МРУ - средние значения урожая родительских форм дигаплоидов.

тетраплоидных соматических гибридов (2п=48), связан, вероятно, с восстановлением уровня гетероэнготносги при объединении геномов различных форм дигаплоидов картофеля. В ряде комбинаций были выявлены перспективные гибриды с показателями продуктивности сравнимой или выше, чем у сорта Адретга (Табл.6), все выделенные клоны обладали эуплоидным ' числом хромосом (2п=48). Таким образом, отбор щггогенетически стабильных эуплоидных тетраплоидных форм внутривидовых соматических гибридов одновременно ведет к селекции гибридных . генотипов с перспективными агрономическими характеристиками.

Фертильность внутривидовых гибридов. В качестве родительских форм для внутривидовой соматической гибридизации были использованы дипШлоиды картофеля, формирующие стерильную пыльцу, или не способные к цветению. Показано, что большинство внутривидовых соматических гибридов картофеля цвели в полевых условиях, а 4х эуплоидные гибриды имели наиболее высокие показатели интенсивности цветения. Фертильность пыльцы у соматических гибридов варьировала в широких пределах - от 0 до 77 %; в большинстве комбинаций 4х эуплоидные гибриды имели наиболее высокие показатели фертильиости пыльцы, завязываемости ягод и осемененности плодов. Таким образом, в настоящей работе экспериментальным путем доказано, что соматическая гибридизация Позволяет вовлекать в селекционный' процесс полностью стерильные дигаплоидные клоны картофеля, на основе которых возможно получать ферТильные тетраллоидные формы, в том числе внутривидовые гибриды, перспективные для селекции высокоурожайных сортов.

5.ПОЛОВАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ ТОМАТА С ДИКИМИ ВИДАМИ РОДА 1УСОРЕ№1СОЫ И БЛИЗКИМИ ВИДАМИ РОДА БОЬАИиМ

Задачами данного раздела работы являлось выяснение границ скрещиваемости культурного томата с отдаленными видами и изучение

возможностей создания новых форм растений, с использованием половой гибридизации. Скрещиваемость оценивали по общей частоте завязавшихся плодов, частоте семян с зародышами и по степени дифференциации зародышей. ( '

5.1. Половая гибридизация культурного и чилийского томатов. Показано, что успешная гибридизация достигается при использовании генотипического разнообразия родительских видов, обеспечивающего удачный подбор совместимых компонентов скрещиваний. В 31-ой комбинации скрещиваний с участием 12-ти образцов культурного и 14-ти образцов чилийского томата получено 295 гибридных зародышей из которых 90%. были недифференцированными. Показано, что при межвидовой половой гибридизации развитие зародышей in vivo тормозится или не происходит совсем; лишь в семи комбинациях обнаружены единичные зародыши различной степени развития. Проведено культивирование in vitro 285 гибридных зародышей. На средах Уайта и Neal, Topoleski (1983) от зародышей, эксплантированных на стадии начала дифференциаций

семядолей, получены проростки, жизнеспособность которых по с^внению с

нормой (внутрисортовые скрещивания) была существенно снижена. С использованием гормональных добавок, стимулирующих развитие проростков, получено 8 межвидовых гибридов (2п=2х=24). Метод культивирований семяпочек, оказался менее эффективным. Частота регенерации побегов из каллуса, образованного семяпочками на каллусогенной среде Thomas,.Pratt (1982), не превышала 2%. Из одного каллусного клона получено 3 регенеранта, гибридность. которых был! подтверждена изоферментным анализом. (

Межвидовая несовместимость на этапе скрещиваний й формирования гибридных зародышей L. esculentum х L. chilense не являлась лимитирующей для создания фертильных межвидовых гибридов. МеЙоз межвидовых диплоидных гибридЪй протекал без существенных нарушений; конъюгация хромосом - по типу эусиндеза; в M 1 наблюдали 12 бивалентов, однако

средняя частота хиазм у межвидовых гибридов была ниже контрольного, внутривидового уровня.

При бэккроссировании межвидовых гибридов с культурным томатом получены плоды с семенами, содержащими зародыши разной степени дифференциации, с различными типами морфологических аномалий и существенно сниженной жизнеспособностью на стадии прорастания. Использование метода эмбриокультуры значительно повысило результативность возвратных скрещиваний, было получено около двухсот гибридных растений ВС |.

5.2. Межродовая половая гибридизация томата с близкими видами Solanum. В межродовых скрещиваниях томата с неклубненосным видами картофеля серий: Juglandifolia (5. ochranthum), Etuberosa (S. etuberosum, S. brevidens) и Caripensa (S. caripense) обнаружено либо только разрастание завязей, либо низкая завязываемость плодов, не содержащих зародышей. В скрещиваниях L esculentum х S. lycopersicoides было выделено 45 зародышей на стадии начала дифференциации семядолей; с помощью эмбриокультуры было получено десять гибридных растений L. esculentum х S. lycopersicoides (Воробьева и др., 1992). Межродовые половые гибриды Fi были морфологически однородны.

Анализ мейоза межродовых половых диплоидных гибридов выявил частичное нарушение конъюгации гомеологичных хромосом уже в пахитене, наличие уиивалентов в диакинезе, частота которых в Метафазе 1 возрастала более чем в два раза, варьируя от 2х до 8-ми унивалентов на мейоцнт. Несмотря на значительное снижение общей частоты обменов у межродовых гибридов (по сравнению с внутривидовым уровнем) средняя частота хиазм на бивалент в диакинезе гибридов составляла 1,1, что обуславливает достаточно высокую вероятность шлрогрессии генетического материала S. lycopersicoides в' геном культурного томата. Однако рекойбииационный потенциал диплоидных гибридов L. esculentum х S. lycopersicoides не может быть реализован из-за полной стерильности этих растений. Стерильность

межродовых диплоидных гибридов L. esculentum х S. lycopersicöides была преодолена с использованием искусственной полиплоидизации,в результате чего были получены частично фертильные аллополиплоидные формы межродовых гибридов. ,

ВЫВОДЫ

¡.Выявлены достоверные меж- и внутривидовые различия по регенерационной способности видов картофеля в системе изолированных мезофильных протопластов. Обнаружена значимая корреляция между уровнем клеточной пролиферации и эффективностью побегообразования протоклонов. Выделены генотипы с высоким морфогенетическим потенциалом протопластов; показано доминирование высокой регенерационной способности. .

2.С использованием методов соматической гибридизации были преодолены барьеры нескрещиваемости, получены и охарактеризованы межвидовые и межродовые соматические гибриды видов родов Solanum и Lycopersicon, сочетающие в своем геноме генетический материал филогенетически далеких, пескрещиваемых видов: культурного ?омата, Lycopersicon esculentum и диких видов Solanum etuberosum, S. brevidens; культурного картофеля и диких видов: S. etuberosum; S. pinnatisectum; S. ■ bulbocastanum. С помощью методов эмбриокультуры получены и исследованы половые гибриды томата и диких видов L. chilense И S. lycopersicoides. В культуре изолированных пыльников тетраплоидных межродовых соматических гибридов томата и Solanum etuberosum получень| диплоидные регенераты. .

3.Экспериментально обоснована возможность .получения фертильных И генетически стабильных форм межвидовых . соматических гибридов картофеля, объединяющих, геномы отдаленных, не скрещиваемых видов. Получено половое.потомство как в вариантах самоопыления, так.н в

возвратных скрещиваниях межвидовых соматических гибридов картофеля, в том числе гибриды устойчивые к вирусу Y и устойчивые к фитофторозу.

4.Показана возможность идентификации геномов родительских видов у межвидовых соматических гибридов картофеля с использованием методов in situ гибридизации, что позволило провести анализ геномного состава и выявить геномные и хромосомные изменения гибридов, в том числе межвидовые транслокации.

5.Показано, что методы соматической гибридизации могут быть использованы для диплоидного генофонда культурного картофеля; с помощью слияния протопластов дигаплондных клонов можно получать тетраплоидные формы культурного картофеля, в том числе представляющие интерес для селекционных исследований. У тетраплоидных форм (2п = 48 ) внутривидовых соматических гибридов выявлен гетерозис по урожайности.

. б. Соматическая гибридизация может быть использована для преодоления стерильности растений. Показана возможность получения фертильных форм внутривидовых гибридов культурного картофеля на основе слияния протопластов стерильных дигаплоидов. Показана возможность преодоления стерильности отдаленных гибридов и получения фертильных форм с измененным геномным составом на основе использования соматической гибридизации -

7.Показано, что соматическая гибридизация является эффективным методом генерирования широкого спектра изменчивости на геномном, хромосомном и молекулярном уровнях у симметричных соматических гибридов разного уровня филогенетического родства.

8.Выявлена широкая изменчивость морфологических, агрономических признаков соматических гибридов, высокая вариабельность гибридов по устойчивости к патогенам. Изменчивость гибридных популяций дает возможность отобрать перспективные гибридные клоны Для генетико-селехционных программ.

9.Соматическая гибридизация, являясь методом объединения геномов отдаленных видов, обеспечивает возможность проведения геномного анализа нескрещиваемых видов. Конъюгация хромосом амфидиплоидных межродовых гибридов Solarium etuberosum и Lycopersicon esculentum носит бивалентный характер по типу автосиндеза; в среднем частота поливалентов составляет 0,16 на мейоцит, что указывает на низкую степень гомологии хромосом родительских видов и маловероятную интрогрессию. В процессе мейоза межродовых амфидиплоидов происходит преимущественная потеря хромосом томата, (б) Интенсивность гомеологичной конъюгации хромосом у межвидовых амфидиплоидов S. tuberosum (геном А) и S. etuberosum (геном Е) составляет в среднем около одного поливаленга на мейоцит; мейоз гибридов протекает с небольшим процентом нарушений. Выявлены фертильные формы и получено потомство. в возвратных скрещиваниях с картофелем.

9.У половых диплоидных гибридов культурного и чилийского томатов хромосомы конъюгируют по типу эусиндеза, хотя частота хиазм существенно ниже внутривидового уровня, мейоз регулярный и гибриды фертильны. Основной проблемой межвидовой половой гибридизации культурного томата с Lycopersicon chilense являются нарушения в эмбриогенезе гибридов F| и ВС|, что определяет необходимость применения эмбриокультуры и использование фитогормонов.

Ю.Подавляющее большинство скрещиваний томата с неклубненосными видами картофеля оказались безуспешными. В результате использования эмбриокультуры может быть преодолена нескрещиваемость томата с одни^ видом - Solanum lycopersicoides. У межродовых диплоидных гибридов томата и S. lycopersicoides установлена частичная конъюгация хромосом (по типу гипосиндеза) и. десинапсис. Стерильность межродовых диплоидных гибридов может быть преодолена методом полиплоид из ации, получены фертильные аллополиплоидные формы.

11.Разработаны схемы н приемы создания новых форм растений, сочетающие использование различных методов биотехнологии и традиционные подходы меж- и внутривидовой гибридизации. На основе экспериментов по соматической и половой гибридизации получены новые формы межродовых, межвидовых 'и внутривидовых гибридов, представляющие интерес для генетических и селекционных исследований.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Суриков И.М., Т.А. Гаврилеико, С.Е. Дунаева, Н.И. Киссель, В.А. Мазур. К вопросу о преодолении и использовании межвидовой несовместимости сельскохозяйственных растений с Помощью методов in vitro // Сельскохозяйственная биология,- 1986, 4, с.3-9.

2.Суриков И.М., Г, А. Воробьева, Т.А. Гавриленко. Преодоление нескрещиваемости культурного томата с дикими видами Solanum lycopersicoides иLycopersicon ckilense в эмбриокультуре. В сб.: "Сосотояние и перспективы развития с.-хозяйственной биологии", Л., 1986. с.52-61.

3.Воробьева Г.А., Гавриленко Т.А' Ограничение рекомбинации у межродового гибрида Lycopersicon esculentum х Solanum lycopersicoides // Тезисы докл. III Всес. Конф. "Экологич. генетика растений и животных", Кишинев, 1987, с.58.

4.Гавриленко Т.А., И.М. Суриков. Эмбриональная летальность при получения гибридов Lycopersicon esculentum и Lycopersicon chilense // Цитология и генетика,- 1988, т. 22, с.43-50.

5.Гавриленко Т., Н. Пивень. Культура мезофильных протопластов некоторых диплоидных диких видов Solanum. // Научн.-техн. Бюллетень ВНИИР им. Н.И.Вавилова.- 1990, вып. 204, Л., с.38-42.

6.Суриков И.М., Т.А. Гавриленко. Современные проблемы межвидовой гибридизации томатов^/Сельскохозяйственная биология.-199Ö, 1, с.37-50.

7.Gavrilenko Т. Intergeneric incompatibility of Lycopersicon arid Solatium species andways for overcoming it. // XII International Congress on Sexual Plant Reproduction. Abstracts. Columbus; Ohio, U.S.A.- 1992, p.22.

8.GavriIenko Т., N. Barbakar, A. Pavlov. Somatic hybridization between Lycopersicon esculentum and non-tuberous Solarium species of the Eluberosa series // Plant Science.- 1992, 86, p.203-214.

9.Будин K.3., Гавриленко T.A. Генетические основы отдаленной гибридизации картофеля // Генетика,- 1994, т. 30, с.1413-1422,

Ю.Гаврнленко Т., Н. Барбакарь. Межродовые соматические гибриды томата Lycopersicon esculentum и дикорастущих неклубненосных видов рода Solanum серии Etuberosa. // Сб. научи, тр. по прикл. бот. ген. и сел., СПб.-1992, т. 148, с.26-37.

11.Гавриленко Т.А., Т.В. Никуленкова,' И.М. Суриков. Наследование показателей морфогенетической потенции мезофильных протопластов у гибридов между Solanum eluberosum и Solanum brevidens //Генетика,- 1994 а, т.ЗО, с.828-831.

12.Гавриленко Т.А., Д.Б. Дорохов, Т.В. Никуленкова. Характеристика межродовых соматических гибридов'. томата Lycopersicon esculehtum и неклубненосных видов картофеля серии Etuberosa // Генетика,- 1994 Ь, т.ЗО, с. 1605-1615.

13.Гавриленко Т., А. Павлов. Цитологический и изоферменшый анализ межродовых соматических гибридов. // Сб. няучн. тр. по прикл. бот. ген. и сел. СПб.-1992, т. 148, с. 38-44.

14.Воробьева ГА, И.М. Суриков, Т.А. Гавриленко, А.В. Павлов. Межродовая гибридизация томата Lycopersicon esculentum Mill, с Solanum tycapersicoides Dun. //Сб. научн. тр. по прикл. бот. ген. и сел: СПб.- 1992, т. 148, с.45-52.

15.BuIat S., Т. Gavrilenko, N. Mironenko. The genome analysis of intergeneric somatic hybrids by Universally Primed Polymerase Chain Reaction ( UP PCR )

technique.// XV International Botanical Congress at Yokohama. Abstracts. Japan, -1993, p. 549.

16.Gavrilenko T., K. Sonntag, R. Thieme, H. Tiemann. Cytogenetic and phenotypie variability studies in somatic hybrids of potato H IV International Solanaceae Conference at Adelaide, Australia. Abstract. Publicated In: Solanaceae Newsletter, 44, Ed. Nee, M. (The New York Botanical Garden), -1994 a, p. 48.

17.Gavrilenko T., G. Vorobjeva, L. Turuleva. Genomic relations between tomato and non-tuberous potato species from series Juglandifolia II IV Intern. Solanaceae Conference at Adelaide, Australia.. Publicated In: Solanaceae Newsletter, 44, Ed. Nei, M. (The N Y Botanical Garden),-1994 b, p. 48-49..

18.Dorokhov D. and T. Gavrilenko. Use of RAPD markers to characterize intergeneric somatic hybrids between Lycopersicon esculentum and Solanum eluberösum. II VIHth International Congress of Plant Tissue and Cell Culture at Firenze, Abstracts. Italy, - 1994, p. 106.

19.Gavrilenko T., D. Dorokhov, A. Pavlov, G. Vorobjeva. Possibilities for mtrogression of the genes from wild non-tuberous Solanum species to cultivated tomato. Adaptation in Plant Breeding. // XIV EUCARP1A Congress, Abstracts. Finland, -1995, p. 96.

20.Thieme R_, U. Darsow, T. Gavrilenko, H. Tiemann. Experiments in transfer of resistance to ■ Phytophthora infestans into breeding lines of S. tuberosum from wild potato species via somatic hybridization. // Intern. Symp.on Crop Protection, Universität Gent, Book of Abstracts, - 1995, p. 85.

21.Thieme R, K.. Sonntag, T. Gavrilenko, H. Tiemann. Intraspezifische somatische Hybridisierung durch Protoplastenfusion und Charakterisierung der Hybriden bei der Kartoffel. // Aktuelle Zbchtungsforschung. Postertexte. Koln-Vogelsang, - 1996, p.154-157.

22.Darsow U., L. Shilde-Rentschler, B. Ruoss, B. Oberwaldcr, H. Ninnemann, R. Thieme, T. Gavrilenko, N. Zhitlova, J.G.Th. Hermsen. Using late blight resistance from Solanum bulbocastanum and S. pinnatisectum in potato breeding. //

13th Triennial Conference of the European Association for potato Research at Veldhoven, Abstracts. The Netherlands,-1996, p.520-521.

23.Gavri!enko T„ R.Thieme, K.Sonntag, U.Darsow, D.Dorokhov, H. Tiemann, B.Gromova, A.Pavlov. Potential of using protoplast fusion techniques and somaclonal variation.// German-Russian Cooperation in Biotechnology. Workshop IV at St>Petersburg, Abstracts. Russia, - 1996, p. 21.

24.Thieme R., U. Darsow, T. Gavrilenko, D. Dorokhov, H. Tiemann. Production of somatic hybrids between S. tuberosum L- and late blight resistant Mexican wild potato species // Euphytica.- 1997,97, p. 189-200. 1

25.Gavrilenko, T.; Thieme, R. Cytogenetic and cytophotometric analysis of potato somatic hybrids. Proc. of the Intl. Symposium, Tulln, Österreich, 21. -22.02.1997, Abstract, p. 27.

26.Thieme, R.; Gavrilenko, T.; Darsow, U.; Thieme, T. Methods of producing and analysing of potato clones (Solanum ssp.) with high levels of resistance to disease. Proc. of the Intl. Conference on Susstainable Agriculture for Food, Energy and Industry, Braunschweig, 1997, Abstract, p. 354. .

27.Gavrilenko T. Cytogenetic and phenotypic variation in Solanum somatk hybrids. // International Symposium "Breeding Research on Potatoes", Abstract Gross Lusewitz, June, - 1998, p. 20.

28.Gavrilenko T., R. Thieme. Cytogenetic studies of intergeneric Lycoperslcoh

esculentum (+) Solanum etuberosum and interspecific Solarium tuberosum (+) Solanum etuberosum somatic hybrids by in situ hybridization. // 2*1 International Symposium on Plant Biotechnology, Abstracts, kyiv, Ukraine, - 1998 c, p.39.

29.Thieme R., T.Gavrilenko, T. Thieme , U. Heimbach. Production of potato genotypes with resistance to potato virus Y (PVY) by biotechnological tnethods. If IAPTC, IX International. Congress on Plant Tissue and Cell Culture, Abstracts. Ierusalem, Israel, - 1998 a, p. 20.

30.Thieme R., U. Darsow, T. Gavrilenko, T. Thieme. Production of potato genotypes with combined resistance to PVY .and late blight // IAPTC, K

International Congress on Plant Tissue and Cell Culture, Abstracts, lerusalem, 1998 b, p.20.

31.Gavrilenko Т., R. Thieme. Cytogenetic and flow cytometric analysis of somatic hybrids between species in the genus Solarium // В кн.: Current Topics in Plant Cytogenetics Related to Plant Improvement.- Ed. by Tamas Lelley -Wien:WUV.UmV.-VerL, ISBN, Austria. - 1998 a, p. 282-289.

32.Gavrilenko Т., R. Thieme. Cytogenetic and phenotypic variation in somatic Solatium hybrids. // Proceedings of Intern. Symp. "Breeding Research on Potatoes'*.-1998 b, Rostock, Germany, p. 51 -56.

33.Gavrilenko Т., Horsman K.., J.M. Bergervoet, E. Jacobsen. Genomic in situ hybridization, identifies chromosome composition in the somatic hybrid Solanum tuberosum (+) S. nigrum and it's sexual and fusion progenies.//Proc. of Intern. Symp. "Breeding Research on Potatoes".-1998a, Rostock, Germany, p.49-50.

> V

.34. Gavrilenko Т., R. Thieme, H. Tiemann. Assessment of genetic and phenotypic variation in intraspecific potato somatic hybrids // Plant Breeding -199$ a, 118, p. 205 - 213.

35.Tbieme R , T. Gavrilenko, T. Thieme,' U. Heimbach. Use of the wild potato species Solanum etuberosum for the genetic improvement of the potato. // Conference 14* Triennial Conference of the European Association for Potato Research - EAPR'99. Abstracts, Somnto, Italy, - 1999 b, p. 578-579.

36. Gavrilenko Т., Rl Thieme,T. Thieme, H. Tiemann. Inter- and intraspecific somatic hybridization for the genetic improvement of the potato. // Intern. Congress "East-West Potato'99 Congress", Abstracts, TurnivS, Finland, - 1999 b, p. 41.

37.Thieme R.; T. Gavrilenko; T. Thieme; U. Heimbach: Production of potato gentoypes with resistance to Potato Virus Y by biotechnological methods.// В кн.: Plant Biotechnology and In Vitro Biology in the 21st Century, A. Altmann et al. (eds.), Kluwer Academic Publishers, 1999, p. 557-560.

37.Horstnan K., T.Gavrilenko, M.Bergervoet, D.-J.Huigen, A.'' Wong Joe, E. Jacobsen. Alteration of the genomic composition of Solanum nigrum (+) potato backcross derivatives by somatic hybridization. Plant Breeding - в печати.

faJ^^ 40

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Гавриленко, Татьяна Андреевна

Раздел Стр.

I. ВВЕДЕНИЕ

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 15 ПОЛОВАЯ И СОМАТИЧЕСКАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ ВИДОВ РОДОВ SOLANUM И LYCOPERSICON

II. 1. Таксономические взаимосвязи родов Solanum и Lycopersicon

11.2. Таксономические и филогенетические взаимосвязи видов 17 картофеля

2.1. Генетические основы скрещиваемости видов картофеля

2.2. Мейоз межвидовых гибридов картофеля

11.3. Таксономические и филогенетические взаимосвязи видов 29 Lycopersicon

3.1. Генетические основы межвидовой гибридизации томатов

3.2. Преодоление межвидовой нескрещиваемости. Характеристика 35 половых межвидовых гибридов томата

11.4. Межродовая половая гибридизация видов родов Solanum и 37 Lycopersicon

II. 5. СОМАТИЧЕСКАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ

5.1. Методология

5.2. Генетические основы соматической гибридизации

5.3. Отдаленная соматическая гибридизация растений

5.4. Внутривидовая соматическая гибридизация

5.5. Генетическая изменчивость гибридных растений

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Гавриленко, Татьяна Андреевна

ВЫВОДЫ

1.Выявлены достоверные меж- и внутривидовые различия по регенерационной способности видов картофеля в системе изолированных мезофильных протопластов. Обнаружена значимая корреляция между уровнем клеточной пролиферации и эффективностью побегообразования протоклонов. Выделены генотипы с высоким морфогенетическим потенциалом протопластов; показано доминирование высокой регенерационной способности.

2.С использованием методов соматической гибридизации были преодолены барьеры нескрещиваемости, получены и охарактеризованы межвидовые и межродовые соматические гибриды видов родов Solarium и Lycopersicon, сочетающие в своем геноме генетический материал филогенетически далеких, нескрещиваемых видов: культурного томата, Lycopersicon esculentum и диких видов Solanum etuberosum, S. brevidens; культурного картофеля и диких видов: S. etuberosum; S. pinnatisectum; S. bulbocastanum. С помощью методов эмбриокультуры получены и исследованы половые гибриды томата и диких видов L. chilense и S. lycopersicoides. В культуре изолированных пыльников тетраплоидных межродовых соматических гибридов томата и Solanum etuberosum получены диплоидные регенераты.

3.Экспериментально обоснована возможность получения фертильных и генетически стабильных форм межвидовых соматических гибридов картофеля, объединяющих геномы отдаленных, не скрещиваемых видов. Получено половое потомство как в вариантах самоопыления, так и в возвратных скрещиваниях межвидовых соматических гибридов картофеля, в том числе гибриды устойчивые к вирусу Y и устойчивые к фитофторозу.

5.Показано, что методы соматической гибридизации могут быть использованы для диплоидного генофонда культурного картофеля; с помощью слияния протопластов дигаплоидных клонов можно получать тетраплоидные формы культурного картофеля, в том числе представляющие интерес для селекционных исследований. У тетраплоидных форм ( 2п = 48 ) внутривидовых соматических гибридов выявлен гетерозис по урожайности.

6. Соматическая гибридизация может быть использована для преодоления стерильности растений. Показана возможность получения фертильных форм внутривидовых гибридов культурного картофеля на основе слияния протопластов стерильных дигаплоидов. Показана возможность преодоления стерильности отдаленных гибридов и получения фертильных форм с измененным геномным составом на основе использования соматической гибридизации.

7.Показано, что соматическая гибридизация является эффективным методом генерирования широкого спектра изменчивости на геномном; хромосомном и молекулярном уровнях у симметричных соматических гибридов разного уровня филогенетического родства.

8.Выявлена широкая изменчивость морфологических, агрономических признаков соматических гибридов, высокая вариабельность гибридов по устойчивости к патогенам. Изменчивость гибридных популяций дает возможность отобрать перспективные гибридные клоны для генетико-селекционных программ.

2.59 хромосом родительских видов и маловероятную интрогрессию. В процессе мейоза межродовых амфидиплоидов происходит преимущественная потеря хромосом томата, (б) Интенсивность гомеологичной конъюгации хромосом у межвидовых амфидиплоидов S. tuberosum (геном А) и S. etuberosum (геном Е) составляет в среднем около одного поливалента на мейоцит; мейоз гибридов протекает с небольшим процентом нарушений. Выявлены фертильные формы и получено потомство в возвратных скрещиваниях с картофелем.

9.У половых диплоидных гибридов культурного и чилийского томатов хромосомы конъюгируют по типу эусиндеза, хотя частота хиазм существенно ниже внутривидового уровня, мейоз регулярный и гибриды фертильны. Основной проблемой межвидовой половой гибридизации культурного томата с Lycopersicon chilense являются нарушения в эмбриогенезе гибридов F] и ВСЬ что определяет необходимость применения эмбриокультуры и использование фитогормонов.

10.Подавляющее большинство скрещиваний томата с неклубненосными видами картофеля оказались безуспешными. В результате использования эмбриокультуры может быть преодолена нескрещиваемость томата с одним видом - Solanum lycopersicoides. У межродовых диплоидных гибридов томата и S. lycopersicoides установлена частичная конъюгация хромосом (по типу гипосиндеза) и десинапсис. Стерильность межродовых диплоидных гибридов может быть преодолена методом полиплоидизации, получены фертильные аллополиплоидные формы.

11 .Разработаны схемы и приемы создания новых форм растений, сочетающие использование различных методов биотехнологии и традиционные подходы меж- и внутривидовой гибридизации. На основе экспериментов по соматической и половой гибридизации получены новые формы межродовых, межвидовых и внутривидовых гибридов, представляющие интерес для генетических и селекционных исследований.

V. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

К моменту начала настоящей работы эксперименты по соматической гибридизации проводились в основном с участием модельных объектов -ядерных и цитоплазматических мутантов. Большинство исследований были направлены на выяснение особенностей трансмиссии ядерных, хлоропластных и митохондриальных генов при слиянии соматических клеток растений. Лишь в единичных комбинациях были синтезированы фертильные формы, а для представителей родов Solanum и Lycopersicon ( за исключением единственной работы Butenko и др., 1982 ), все полученные формы соматических гибридов были представлены стерильными растениями. Результатом многих исследований по отдаленной гибридизации было получение морфогенетически несовершенных растений - «монстров» - или создание клеточных колоний дефектных по регенерации ( Глеба, Сытник, 1984; Сидоров и др., 1985 ). Это объясняется недостаточной разработанностью методологии, малым числом комбинаций с участием единичных форм родительских видов, использованием мутантов, часто имеющих низкие жизнеспособность и морфогенетический потенциал, небольшим числом полученных гибридных форм.

Особенность настоящих исследований заключается в использовании генетического разнообразия исходных родительских видов и получении большого числа соматических гибридов, что повышает вероятность отбора новых форм растений с заданными свойствами. Комплексный подход, основанный на использовании разных биотехнологий ( слияние протопластов, культура in vitro изолированных зародышей и пыльников гибридов), позволял не только преодолеть нескрещиваемость видов, но и получить фертильные формы у стерильных соматических гибридов, а также создать уникальные растения, представляющие интерес для генетических и селекционных исследований. Показана возможность получения амфидиплоидных, амфигаплоидных форм гибридов, разных аллополиплоидных форм с заданной дозой геномов родительских видов, что позволило повысить эффективность исследований по интрогрессивной гибридизации.

Комплексная оценка полученных гибридов, включающая молекулярный, цитогенетический, морфологический, фитопатологический анализы, изучение фертильности, позволили отобрать новые формы растений с заданными свойствами. Объектами исследования служили 8 внутривидовых, 10 межвидовых и 4 межродовых комбинации, включающие около 200 гибридных линий. Среди полученных гибридов выделены стабильные, морфологически и функционально совершенные, фертильные формы, обладающие селекционно-ценными характеристиками, в том числе устойчивостью к заболеваниям.

Обобщение полученных нами результатов (Табл.У.1) позволяет заключить, что критическим периодом в исследованиях по соматической гибридизации является получение гибридных растений, способных формировать жизнеспособное потомство. При этом увеличение филогенетических дистанций между родительскими видами в пределах родов Solanum и Lycopersicon снижает морфогенетический потенциал гибридов и достоверно уменьшает вероятность получения фертильных форм. Несомненным положительным результатом наших исследований является получение фертильных соматических гибридов между отдаленными, нескрещиваемыми видами растений: культурным картофелем и дикими видами Solanum, обладающими В, Е геномами, диким видом S. nigrum ( Табл. V. 1). Впервые для представителей родов Solanum и Lycopersicon были получены межродовые соматические гибриды, способные продуцировать половое потомство.

Развитие методов in situ гибридизации хромосом позволило исследовать геномный состав, хромосомные перестройки, особенности протекания мейоза гибридов картофеля и томата. Наши результаты показали, что, как правило, большинство полученных соматических гибридов объединяли хромосомные наборы родительских видов (Табл. V. 1). Показано, что, при условии регенерации достаточно большого числа гибридов, возможность получения цитогенетически стабильных гибридных форм в пределах родов Solanum и Lycopersicon достаточно высока. В связи с этим следует подчеркнуть необходимость вовлечения в соматическую гибридизацию исходных форм родительских видов с высокой регенерационной способностью. Наличие миксо-, поли-, анеуплоидных форм гибридов, вероятно, связано с особенностями метода соматической гибридизации ( множественные слияния протопластов и сомаклональная изменчивость ), а не с эффектами взаимодействия геномов родительских видов, т.к. частота цитогенетически нестабильных форм гибридов была приблизительно одинаковой в межродовых, межвидовых и внутривидовых комбинациях (Табл.У.1 ). Разработанные нами схемы отбора стабильных тетраплоидных, амфидиплоидных форм соматических гибридов картофеля позволили повысить эффективность программ по соматической гибридизации растений.

Согласно Глебе и Сытнику (1984) у отдаленных соматических гибридов наблюдаются тенденции к пространственной изоляции геномов родительских видов и к видоспецифичной элиминации хромосом в процессе клеточных делений гибридов. В наших исследованиях у межвидовых гибридов в пределах рода Solanum такие закономерности выявлены не были. Вероятно, подобные механизмы несовместимости геномов функционируют в более отдаленных -межтрибных и межсемейственных комбинациях ( Gleba и др., 1987).

Мейотическая нестабильность, выраженная в десинаптических эффектах, была выявлена у межродовых соматических и половых гибридов томата с неклубненосными видами картофеля. Преимущественная потеря хромосом томата была установлена в ходе мейоза межродовых гибридов L. esculentum (+) S. etuberosum. У межвидовых соматических гибридов картофеля и у половых межвидовых гибридов томата десинапсис не наблюдался. Общей проблемой соматической и половой межвидовой гибридизации является низкий уровень конъюгации гомеологичных хромосом.

Несомненный интерес представляет выявление двух гибридных генотипов, несущих межвидовые транслокации. В обоих случаях точки разрыва были локализованы в прицентромерных районах хромосом, которые у томатов и у картофеля являются районами локализации структурного гетерохроматина. В соответствии с теорией Lee, Philips (1988) можно предположить, что задержка репликации в районах структурного гетерохроматина привела к формированию мостов в анафазах митоза, к разрывам хромосом в данных районах с последующим включением фрагментов в состав хромосом другого вида. В наших

Табл.V. 1 .Результаты межродовой, межвидовой и внутривидовой соматической гибридизации

Комбинации

Успех слияния (%) * число гибридов in vitro / числЬ гибридов in vivo фертильных форм гибридов (относительно in vivo растущих гибридов ) ^ j 'К 'К гибридов, обладающих суммой миксо-хромосомных наборов анеу-родителей полиплоидов

Межродовые Lycopersicon esculentum, pl-albl, Тамина (+) Solanum etuberosum

Межвидовые S. tuberosum ( геном А) (+) S. Etuberosum геном E

90% i. 1

101 / 19 91/54

91/72

0/0 9% / 0

36 % 58 %

29% / 15%

67%

64% 42 %

33 %

Межвидовые S. tuberosum ( геном А) (+) Мексиканские дикие виды с геномом В:

1. S.pinnatisectum,

2. S.pinnatisectum х S. bulbocastanum

63 %

84%

21/14

311/78

0/0

4 % / 12 %

47%

89%

53%

11%

Внутривидовые 8 междигаплоидных комбинаций ( min - max )

28 - 95 %

348/307

- / 65 %

24 % - 57 %

43 % - 73 %

Т~% идентифицированных соматических гибридов к общему числу регенерантов. ** % фертильных гибридов, сформировавших жизнеспособное потомство при самоопылении, *** - в возвратных скрещиваниях. " - " показатели не оценивали исследованиях мосты наблюдались в анафазах митоза у соматических гибридов разного уровня филогенетического родства. Причиной возникновения транслокаций может быть также и рекомбинация в районах повторяющихся последовательностей, локализованных в прицентромерном гетерохроматине. Индукция межвидовых транслокаций может послужить основой интрогрессии генетического материала диких видов у отдаленных гибридов с низким уровнем или отсутствием мейотической рекомбинации гомеологичных хромосом. В таких комбинациях необходимо выявлять и отбирать гибридные генотипы с транслоцированными хромосомами для последующего включения их в программу бэккроссов.

В настоящей работе проведено изучение эффектов взаимодействия геномов у гибридов разного уровня филогенетического родства. Полученные данные существенно дополняют представления о филогенетических связях клубне-, неклубнеобразующих видов картофеля и видов томатов. Наши результаты подтвердили выводы Rick с соавторами ( Rick, 1979; De Verna и др., 1990 ) о близости томатов и неклубненосных видов картофеля серии Juglandifolia. Сравнительно высокий уровень конъюгации гомеологичных хромосом, а также получение фертильного потомства у межродовых половых гибридов томата и S. lycopersicoides^ являются аргументами в пользу возможного объединения видов серии Juglandifolia с томатами; данную возможность обсуждал ранее ведущий таксономист пасленовых Hawkes (1994). В настоящей работе впервые проведено изучение взаимосвязей томатов и неклубненосных видов картофеля серии Etuberosa. Показана большая близость неклубненосных видов серии Etuberosa к клубнеобразующим видам картофеля и удаленность их от томатов, что хорошо согласуется со схемой Hosaka и др.( 1984 ) и противоречит выводам Spooner и др.( 1993 ).

Создание коллекции отдаленных гибридов, включающих и анеуплоидные формы, вместе с развитием методов in situ гибридизации хромосом, открывает возможности для проведения исследований по хромосомной инженерии, создания серий дополненных и замещенных линий и для изучения контроля гомеологичной конъюгации хромосом у аллополиплоидов.

256

Наши результаты подтвердили данные литературы о том, что наиболее сильно выраженными барьерами несовместимости при отдаленной половой гибридизации томатов является снижение жизнеспособности гибридных зародышей и низкий уровень конъюгации гомеологичных хромосом. Эти факторы могут играть роль механизмов, контролирующих репродуктивную изоляцию видов. Вовлечение генетического разнообразия исходных видов в скрещивания позволило отобрать совместимые комбинации, а использование методов эмбриокультуры позволило повысить жизнеспособность гибридов.

К важным практическим результатам настоящей работы можно отнести дальнейшую разработку методов внутривидовой соматической гибридизации дигаплоидов картофеля, результатом которой явилось получение фертильных внутривидовых гибридов, при изучении которых был продемонстрирован эффект гетерозиса по признакам продуктивности.

В заюпочени е следует отметить, что в исследованиях по соматической гибридизации растений невозможно достичь той же точности переноса генов^как в работах по генетической инженерии. В то же время, преимуществами методов слияния протопластов являются возможности переноса между видами признаков с неизвестным генетическим контролем, комплексов полигенных признаков, цитоплазматических органелл, единичных хромосом, хромосомных фрагментов.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Гавриленко, Татьяна Андреевна, Санкт-Петербург

1. Абрамова Л.И. Методические указания // Изучение числа и морфологии хромосом. Л-д: ВИР, 1988.

2. Агаджанян A.M., Навасардян Е.М. Сравнительное изучение гибридов некоторых видов Lycopersicon II Биол. журн. Армении. 1976,-Т.29.-С. 70-74.

3. Банникова В. П., О.А.Хведынич. Основы эмбриологии растений. Киев: Наукова Думка, 1982. 164 с.

4. Батыгина Т.Б., Бутенко Р.Г. Морфогенетические потенции зародышей покрытосеменных растений//Ботанический журнал. 1981 .-Т. 66.-С. 1531-1548.

5. Борисюк Н.В. Молекулярно-генетическая конституция соматических гибридов // Итоги науки и техники. Серия Биотехнология. 1988.-Т. 9.-С. 73-113.

6. Будин К.З. Генетические основы селекции картофеля. Л.: Агропромиздат, 1986. 192 с.

7. Будин К.З. Получение гаплоидов картофеля // Генетика. 1969.-Т. 5.-С.4349.

8. Будин К.З. Дигаплоиды в селекции картофеля // Тр. по прикл. бот. генет и селекции. 1973. Т. 3. С. 160-167.

9. Будин К.З., Гавриленко ТА. Генетические основы отдаленной гибридизации картофеля//Генетика. 1994. Т. 30. С. 1413-1422.

10. Букасов С.М. Систематика видов картофеля секции Tuberarium (Dun), рода Solanum L. // Научн.тр. по прикл. ботан. генет. и селекции. 1971.-Т. 46гС. 344.

11. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.: Наука, 1964. 270 с.

12. Бутенко Р.Г. Изолированные протопласты растений объект и модель для физиологических исследований // Культура клеток растений. М.: Наука, 1981. С. 69-84.

13. Бутенко Р.Г., М.В. Гусев, А.Ф.Киркин, Т.Г.Корженевская, Маркарова E.H. Клеточная инженерия. М,: Высшая школа, 1987. 127 с.

14. Брежнев Д.Д. Томаты. Л.: Колос, 1964. 320 с.

15. Воробьева Г.А., Гавриленко Т.А. Ограничение рекомбинации у межродового гибрида Lycopersicon esculentum х Solanum lycopersicoides // Тезисы докладов III Всес. Конференции "Экологическая генетика растений и животных", Кишинев, 1987. С. 58.

16. Воробьева Г.А., Приходько Н.И. Использование культуры зародышей in vitro для получения межвидовых гибридов томатов // Тр. по прикл. генет. и сел., 1980.-Т. 67.-С. 64-67.

17. Воробьева Г.А., И.М. Суриков, Т.А. Гавриленко, Павлов A.B. Межродовая гибридизация томата Lycopersicon esculentum Mill, с Solanum lycopersicoides Dun. II Сб. научн. тр. по прикл. ботан. генет. и селекции. СПб., 1992.-Т. 148гС. 45-52.

18. Гавриленко Т.А., Т.В. Никуленкова, Суриков И.М. Наследование показателей морфогенетической потенции мезофильных протопластов у гибридов между Solanum etuberosum и Solanum brevidens// Генетика. 1994 а.-Т.30г С. 828-831.

19. Гавриленко Т.А., Д.Б. Дорохов, Никуленкова Т.В. Характеристика межродовых соматических гибридов томата Lycopersicon esculentum и неклубненосных видов картофеля серии Etuberosa II Генетика. 1994 b.-T. ЗО.-С. 1605-1615.

20. Гавриленко Т., Барбакарь Н. Межродовые соматические гибриды томата Lycopersicon esculentum и дикорастущих неклубненосных видов рода Solanum серии Etuberosa // Сб. научн. тр. по прикл. ботан. генет. и селекции. СПб. 1992.-Т. 148.-С. 26 -37.

21. Гавриленко Т.А., Павлов A.B. Цитологический и изоферментный анализ межродовых соматических гибридов // Сб. научн. тр. по прикл. ботан. генет. и селекции. 1992.-Т. 148.-С. 38-44.

22. Гавриленко Т.А., Пивень Н.М. Культура мезофильных протопластов некоторых диплоидных диких видов Solanum II Научн.-техн. Бюллетень ВНИИР им. Н. И. Вавилова. 1990-Т. 204гС. 38-42.1. I S S I ¡ " !. Щж i l'il262

23. Гавриленко Т.А., Суриков И.М. Эмбриональная летальность при получении гибридов Lycopersicon esculentum и Lycopersicon chilense II Цитология и генетика. 1988.-Т. 22гС. 43-50.

24. Голубовская И.Н. Цитогенетика отдаленных гибридов пшеницы и перспективы их использования в селекции // Цитогенетика пшеницы и ее гибридов. M.: Наука, 1971. С. 243-286.

25. Георгиева Р. Род Lycopersicon. София . 1976. 262 с.

26. Глеба Ю.Ю., Сытник K.M. Клеточная инженерия растений. Киев: Наукова Думка, 1984. 160 с.I

27. Глеба Ю.Ю., Н.М. Пивень, И.К. Комарницкий, Сытник K.M. Парасексуальные цитоплазматические гибриды N.tabacum (+) N.debneyi,полученные слиянием протопластов // Докл. АН СССР. 1978.-Т. 240.-С. 122311226.

28. Горбатенко Л.Е. Южно-американские виды картофеля (секция Petota Durnort., род Solanum ) II Каталог мировой коллекции ВИР. 1990. Выпуск 569. 398 с.i

29. Диксон Р. Биотехнология растений: культура клеток. М.: ВО., Агропромиздат, 1989. 280 с.

30. Житлова H.A. Использование экспериментальной полиплоидии при межвидовой гибридизации картофеля // Генетика. 1969.-Т. 5.-С. 63-69.

31. Житлова H.A. Экспериментальное получение полиплоидов диких видов картофеля и их использование в межвидовой гибридизации // Тр. по прикл. ботан. генет. и селекции. 1971гТ. 44.-С. 175-188.

32. Жуковский П.М. Культурные растения и их сородичи. Л.: 1964.

33. Жученко A.A., В.К. Андрющенко, H.H. Балашова, М.М. Король, В.Г. Грати, С.А. Сокова, Анюховская Г.А. Комплексная оценка генофонда рода1.copersicon Tourn. в условиях орошаемого земледелия Молдавии. Кишинев: Картя Молдавеняскэ, 1973 а. 308 с.

34. Жученко А.А. Генетика томатов. Кишинев: Штиинца, 1973 Ь. 663 с.

35. Жученко А.А., Е.Я. Глущенко, Андрющенко В.К. Дикие виды и полукультурные разновидности томатов и их использование в селекции. Кишинев: Картя Молдавеняска, 1974. 138 с.

36. Жученко А.А., Король А.Б. Рекомбинация в эволюции и селекции. М.: Наука, 1986. 400 с.

37. Ивановская Е.В. Цитологический анализ гибридов дигаплоидных видов картофеля с тетраплоидами // Изв. АН СССР. 1941.-Т. 1гС. 21-31.

38. Костина Л.И. Изменчивость признаков у дигаплоидов S. tuberosum и ее значение в эволюции и селекции // Тр. по прикл. ботан. генет. и селекции. 1974. Т. 53. С. 85-99.

39. Лутова Л.А., Козырева О.Г. Генетика морфогенеза в культуре растительных тканей//Исследования по генетике. 1985.-Т. ЮгС. 113-118.

40. Лутова Л.А. Генетический контроль признаков тотипотентности и их роль в онтогенетической адаптации высших растений. Автореф. докт. дис. Ст,-Петербург: С.-Пб.ГУ, 1993. 38 с.

41. Оглуздин А.С. Геномный состав видов картофеля по белкам клубней. Автореф. дис. канд. биол. наук. Л.-д: ВИР. 1988, 24 с.

42. Паушева З.П. Практикум по цитологии растений. М.: Колос, 1974.287 с.

43. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. Минск: Высшая школа, 1967. 327 с.

44. Рыбин В.А. Результаты цитологического исследования южноамериканских культурных и диких видов картофелей и их значение для селекции // Научн. тр. по прикл. ботан. генет. и селекции. 1933.-Т. 11тС. 3-100.

45. Самсонова И.А. Исследование мутабильности пластома, характеристика пластомного мутанта томата // Генетика. 1970.-T.6rC. 36-41.

46. Самсонова И.А., Беттхер Ф. Исследование пластомных мутаций у томатов//Генетика. 1972.-T.8rC. 21-31.

47. Сидоров В.А., Н.М. Пивень, Ю.Ю. Глеба, Сытник K.M.

48. Соматическая гибридизация пасленовых. Киев: Наукова Думка, 1985, 132 с.

49. Сидоров В.А. Биотехнология растений. Киев: Наукова Думка, 1990.200 с.

50. Сидоров В.А., Н.В. Белицер, Артеменко B.C. Ультраструктурное и цитохимическое изучение протопластов табака на стадиях первичных клеточных колоний // Цитология и генетика. 1977.-Т. 11гС. 291-297.

51. Суриков И.М., Г,А. Воробьева, Гавриленко Т.А. Преодоление нескрещиваемости культурного томата с дикими видами Solanum lycopersicoides и L. chilense в эмбриокультуре // Состояние и перспективы развития с,-хозяйственной биологии. JI. 1986. С. 52-61.

52. Суриков И.М., Гавриленко Т.А. Современные проблемы межвидовой гибридизации томатов//Сельскохозяйственная биология. 1990,-Т. 1гС. 37-50.

53. Суриков И.М., Т.А. Гавриленко, С.Е. Дунаева, Н.И. Киссель, Мазур В.А. К вопросу о преодолении и использовании межвидовой несовместимости сельскохозяйственных растений с помощью методов in vitro II Сельскохозяйственная биология. 1986.-Т. 4гС. 3-9.

54. Урбах В.Ю. Биометрические методы. М.: Наука, 1964.

55. Фадеева Т.С., Лутова Л.А., Козырева О.Г. Изучение процесса регенерации как генетического признака с использованием метода культуры изолированных органов // Исследования по генетике. Л.: ЛГУ, 1974гТ. 5гС. 6371.

56. Фадеева Т.С., С.П. Соснихина, Иркаева Н.М. Сравнительная генетика растений. Л-д: ЛГУ, 1980. 248 с.

57. Шамина З.Б. Генетическая изменчивость растительных клеток in vitro. В кн.: Культура клеток растений. Киев: Изд-во Наукова Думка, 1978. С. 80-93.

58. Шамина З.Б. Особенности генетической изменчивости соматических клеток растений // Биотехнология. 1987гТ. ЗгС. 361-364.

59. Яшина И.М., Букетова М.М. Мейоз у видов картофеля разной плоидности. Генетика картофеля. М.: Наука, 1973. С. 34-68.

60. Alexander I.J. Embryo culture of tomato interspecific hybrids// Phytopathology. 1956,- V. 46,- P. 33.

61. Alonso-Blanco С., Goicoechea P. G., Roca A., Alvarez E., Giraldez R. Genetic mapping of cytological and isozyme markers on chromosomes IR, 3R, 4R and 6R of rye // TAG. 1994. - V. 88. - P. 208-214.

62. Arumuganathan K., Earle E. D. Nuclear DNA content of some important plant species // Plant Mol. Biol. Reporter. 1991. - V. 9. - P. 208-218.

63. Austin S., Baer M. A, Helgeson J. P. Transfer of resistance to potato leaf roll virus from Solarium brevidens into Solarium tuberosum by somatic fusion // Plant Sci. 1985. - V. 39. - P. 75-82.

64. Austin S., Ehlenfeldt M. K., Baer M. A., Helgeson J. P. Somatic hybrids produced by protoplast fusion between S. tuberosum and S. brevidens: phenotypic variation under field conditions // TAG. 1986. - V. 71. - P. 682-690.

65. Baird E., Cooper-Bland S., Waugh R, De Maine M. J., Powell W. Molecular characterization of inter and intra-specific somatic hybrids of potato using randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) markers // Mol. Gen. Genet. 1992. -V. 233. - P. 469-475.

66. Barbano P. P., Topoleski L. D. Postfertilization hybr i d seed failure on L. esculentum x L. peruvianum ovules // J. Amer. Soc. Hort. Sci. 1984. - V. 109. - P. 95-100.

67. Barker H. Extreme resistance to potato virus Y in clones S. tuberosum that are also resistant to potato viruses Y and A: evidence for a locus conferring broad-spectrum potyvirus resistance // TAG. 1997. - V. 95. - P. 1258-1262.

68. Barsby T. L., Shepard J. F., Kemble R. J., Wong R. Somatic hybridization in the genus Solarium: S. tuberosum and S. brevidens II Plant Cell Reports. 1984. -V. 3. - P. 165-167.

69. Bates G., Nea L., Hasenkampf C. Elektrofusion and plant somatic hybridization // Cell Fusion / Ed. A. E. Sowers. N. Y.: Plenum Press, 1987. - P. 479496.

70. Belliard G. F., Vedell F., Pelletier G. Mitochondrial recombination in cytoplasmic hybrids oiNicotiana tabacum by protoplast fusion // Nature. 1979. - V. 281.-P. 401-403.

71. Binding H., Jain S.M., Finger J., Mordhorst G., Nehls R., Gressel J. Somatic hybridization of an atrazine biotype of Solanum nigrum with S. tuberosum II TAG. 1982. - V. 63. - P. 273-277.

72. Binding H., Jain S., Finger G., Mordhorst G., Nehls R., Gressel J. Somatic hybridization of an atrazine resistant biotype of Solanum nigrum and Solanum tuberosum II TAG. 1982. - V. 63. - P. 273-277.

73. Bonierbale M., Plaisted R., Tanksley S. RFLP maps based on a common set of clones reveal modes of chromosomal evolution in potato and tomato // Genetics. -1988.-V. 120.-P. 1095-1103.

74. Bonnema A., O'Connell M. A. Molecular analysis of the nuclear organellar genotype of somatic hybrid plants between tomato (Lycopersicon esculentum) and Lycopersicon chilense II Plant Cell Reports. 1992. - V. 10. - P. 629-632.

75. Bonnett H. T., Glimelius K. Cybrids of Nicotiana tabacum and Petunia hybrida have an intergeneric mixture of chloroplasts from P. hybrida and mitochondrial identical or similar to N. tabacum II TAG. 1990. - V. 79. - P. 550-555.

76. Bradshaw J. E., Mackay G. R. Potato Genetics / Eds. Bradshaw J. E., Mackay G. R. Wallingford, UK: CAB International, 1994. - 552 p.

77. Brown P.T.H., Kyozuka Y.„ Sukekiyo Y., Kimura K., H. Lorz. Molecular changes in protoplast derived rice plants // MGG.- 1990,- V. 223,- P.324-328.

78. Brown P.T.H., Gobel E., Lorrz H. RFLP analysis of Zea mays calllus cultures and their regenerated plants // TAG. 1991.- V. 811.- P. 227-232.

79. Brown S. W. The structure and meiotic behaviour of the differentiated chromosomes of tomato // Genetics. 1949. - V. 34. - P. 437-461.

80. Brown C. R., Yang C. -P., Mqjtahedi H., Santo G. S., Masuelli R. RFLP analysis of resistance to Columbia root-knot nematode derived from Solarium bulbocastanum in a BC2 population // TAG. 1996. - V. 92. - P. 572-576.

81. Bulat S., Gavrilenko T. A., Mironenko N. The genome analysis of intergeneric somatic hybrids by Universally Primed Polymerase Chain Reaction technique // Abstracts of XV International Botanical Congress at Yokohama, Japan. -1993. P. 549.

82. Cardi T., D Ambrosio F., Consoli D., Puite K. J., Ramulu K. S. Production of somatic hybrids between frost-tolerant Solarium commersonii and S. tuberosum: characterization of hybrid plants // TAG. 1993. - V. 87. - P. 193-200.

83. Chaput M. -H., Sihachakr D., Ducreux G., Domenique M., Barghi N. Somatic hybrid plants produced by electrofosion between dihaploid potatoes: BF15, Aminca and Cardinal // Plant Cell Reports. 1990. - V. 9. - P. 411-414.

84. Chen Y. -K., Palta J. P., Bamberg J. B. Freezing tolerance and tuber production in selfed and backcross progenies derived from somatic hybrids between Solarium tuberosum and S. commersonii it TAG. 1999. - V. 99. - P. 100-107.

85. Chmielewski T. Cytogenetical and taxonomical studies on a tomato form // Genetica Polonica. 1962. - V. 3. - P. 253-264.

86. Chmielewski T. An exeption to the undirectional crossability pattern in the genus Lycopersicon // Genetica Polonica. -1966. V. 7. - P. 31-39.

87. Cooper D. C., Brink R. A. Somatoplastic sterility as a cause of seed failure after interspecific hybridization // Genetics. 1940. - V. 25. - P. 593-618.

88. Corell D. The potato and its wild relatives. Texas, USA: Renner, 1962.606 p.

89. D'Amato F. Chromosome number variation in cultured cells and regenerated plants // Frontiers of plant tissue culture. Calgary: IAPTC, 1978. - P. 287-295.

90. D'Arcy W. G. Solanaceae studies II: typification of subdivisions of Solanum II Annals of the Missouri Botanical Garden. 1972. - V. 59. - P. 262-278.

91. D'Arcy W. G. The Solanaceae since 1976, with a review of its biogeography// Solanaceae III taxonomy, chemistry, evolution / Eds. Hawkes J. G., Lester R. N., Nee M.„ Estrada N. Kew: Royal Botanic Gardens, 1976. - P. 75-137.

92. Daunay M. C., Chaput M. H., Sihachakr D., Allot M., Vedel F., Ducreux G. Production and characterization of fertile somatic hybrids of eggplant {Solanum melongena L.) with Solanum aethiopicum L. // TAG. 1993. - V. 85. - P. 841-850.

93. Davey M., Cocking E., Freeman J. Advances in protoplast research. / Ed. Ferenczy L., Farkas G. Oxford: Pergamon Press, 1980. - P. 425-430.

94. Davis B. J. Disk electrophoresis. II. Method and application human serum proteins // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1964. - V. 121.

95. De Laat A. M. M., Guhde W., Vogelzang M. D. C. Determination of ploidy of single plants and plant population by flow cytometry // Plant Breeding. -1987. V. 99. - P. 303-307.

96. Depicker A., Van Montagu M., Schell J. Genetic engineering of plants // Ed. Kosuge T., Meredith. N. Y. L. 1983. - P. 143-176.

97. Derks F. H. M., Wijbrandi J., Koomneef M., Colijn-Hooymans C. M. Organelle analysis of symmetric and asymmetric hybrids between Lycopersicon peruvianum and Lycopersicon esculentum II TAG. 1991. - V. 81. - P. 199-204.

98. DeVerna J. W., Chetelat R. T., Rick C. M., Stevens M. A. Introgression of Solanum lycopersicoides germplasm // Tomato Biotechnology. Alan R. Liss, Inc., 1987. - P. 27-36.

99. De Verna J., Rick C., Chetelat R., Lanini B., Kevin B. Sexual hybridization of L. esculentum and S. rickii by means of a sesquidiploid bridging hybrid // Proc. Natl. Acad. Sci., USA. 1990. - V. 87. - P. 9486-9490.

100. Douglas G., Keller W., Setterfield G. Somatic hybridization between Nicotiana rustica and N. tabacum II Can. J. Botany. 1981. - V. 59. - P. 220-227.

101. Dudits D., Fejer 0., Hadlaczky G., Koncz C., Lazar G., Hovrath G. Intergeneric gene transfer mediated by protoplast fusion // Mol. Gen. Genet. 1980. -V. 179. - P. 283-288.

102. Dvorak J. Evidence for genetic supression of heterogenetic chromosome pairing in polyploid species of Solarium, sect. Petota II Canad. J. of Gen. and Cyt. -1983. -V. 25. P. 530-539.

103. Edmonds J. M. Biosystematics of Solarium section Solanum ( Maurella ) II The Biology and Taxonomy of the Solanaceae / Eds. Hawkes J., Lester R., Skelding A. London: Academic Press, 1979. - P. 257-268.

104. Edwards K., Johnstone C. , Thompson C. A simple and rapid method for the preparation of plant DNA for PCR analysis // Nucl. Acids Res. 1991. - V. 19. -P. 1349.

105. Ehlenfeldt M. K., Helgeson J. P. Fertility of somatic hybrids from protoplast fusions of Solanum brevidens and S. tuberosum II TAG. 1987. - V. 73. -P. 395-402.

106. Ehlenfeldt M-K., Hanneman R. J. Genetic control of endosperm balance number (EBN): three additive loci in a threshold-like system // TAG. 1988. - V. 75.1. P. 825-832.

107. Eijlander R., Stickema W. J. Biological containment of potato (Solanum tuberosum): Outcrossing to the related wild species black nightshade (Solanum nigrum) and bitter sweet (Solanum dulcomara) II Sex. Plant. Reprod. 1994. - V. 7. -P. 29-40.

108. El-Kharbotly A., Pereira A., Stiekema W. J., Jacobsen E. Race specific resistance against Phytophthora infestans in potato is controlled by more genetic factors than only R-genes // Euphytica. 1996. - V. 90. - P. 331-336.

109. Evans D. A., Flick C. E., Jensen R. A. Diseases resistance incorporation into sexually incompatible somatic hybrids of the genus Nicotiana II Science. 1981. -V. 213. - P. 907-909.

110. Fahleson J., Lagercrantz I., Eriksson I., Glimelius K. Genetic and molecular analysis of sexual progenies from somatic hybrids between Eruca sativa and Brassica napus // Acad. Diss. Swedish University of Agricultural Sciences, 1993.

111. Fahleson J., Eriksson I., Landren M., Stymne S., Glimelius K. Intertribal somatic hybrids between Brassica napus and Thlaspi perfoliatum with high content of the T. perfoliatum nervonic acid // TAG. 1994. - V. 87. - P. 795-804.

112. Fish N., Karp A., Jones M. G. K. Improved isolation of dihaploid Solanum tuberosum protoplasts and the production of somatic hybrids between dihaploids S. tuberosum and S. brevidens II In Vitro Cell, and Devel. Biol. 1987. - V. 23. - P. 575-580.

113. Fish N., Karp A., Jones M. G. K. Production of somatic hybrids by electrofusion in Solanum II TAG. 1988. - V. 76. - P. 260-266.

114. Fish N., Steele S. H., Jones M. G. K. Field assessment of dihaploid Solanum tuberosum and S. brevidens somatic hybrids // TAG. 1988. - V. 76. - P. 880-886.

115. Garriga-Caldere F., Huigen D. J., Angrisano A., Jacobsen E., Ramanna M. Transmission of alien tomato chromosomes from BC1 to BC2 progenies derived from backcrossing potato (+) tomato fusion hybrids to potato // TAG. 1998. - V. 96. - P. 155-163.

116. Gavrilenko T. Intergeneric incompatibility of Lycopersicon and Solanum species and ways for overcoming it // Abstracts of XII International Congress on Sexual Plant Reproduction, Columbus, Ohio, U. S. A. 1992. - P. 22.

117. Gavrilenko T., Barbakar N., Pavlov A. Somatic hybridization between Lycopersicon esculentum and non-tuberous Solanum species of the Etuberosa series // Plant Science. 1992. - V. 86. - P. 203-214.

118. Gavrilenko T., Dorokhov D., Pavlov A., Vorobjeva G. Possibilities for introgression of the genes from wild non-tuberous Solanum species to cultivated tomato // Adaptation in Plant Breeding. Abstracts of XIV EUCARPIA Congress, Finland. 1995. - P. 96.

119. Gavrilenko T., Thieme R. Cytogenetic and cytophotometric analysis of potato somatic hybrids // Proc. of the Int. Symposium, Tulln, Osterreich, 21-22 February, 1997. P. 27.

120. Gavrilenko T. Cytogenetic and phenotypic variation in Solanum somatic hybrids // International Symposium "Breeding Research on Potatoes", Gross Lusewitz, June, 1998. P. 20.

121. Gavrilenko T., Thieme R. Cytogenetic and phenotypic variation in somatic Solanum hybrids // Breeding Research on Potatoes, Rostock, Germany. -1998b. P. 51-56.

122. Gavrilenko T., Thieme R., Tiemann H. Assessment of genetic and phenotypic variation in intraspecific potato somatic hybrids // Plant Breeding. 1999a. - V. 118.-P. 205-213.

123. Gavrilenko T., Thieme R., Thieme T., Tiemann H. Inter- and intraspecific somatic hybridization for the genetic improvement of the potato // Abstracts of Intern. Congress "East-West Potato'99 Congress", Turniivo, Finland. 1999b. - P. 41.

124. Gebhardt C. RFLP mapping in potato qualitive and quantitative genetic loci conferring resistance to potato pathogens // Am. Potato J. 1994. - V. 71. - P. 339-345.

125. Gebhardt C., Ritter D., Debener T., Schachschabel U„ Walkmeier B., Uhrig H., Salamini F. RFLP analysis and linkage mapping in Solanum tuberosum II TAG. 1989. - V. 78. - P. 65-75.

126. Gibson R. W., Jones M. J. K., Fish N. Resistance to potato leaf roll virus and potato virus Y in somatic hybrids between dihaploid Solanum tuberosum and S. brevidens II TAG. 1988. - V. 76. - P. 113-117.

127. Gibson R. W., Pehu E., Woods R., Jones M. G. K. Resistance to potato virus Y and potato virus X in Solanum brevidens II Ann. Appl. Biol. 1990. - V. 11. -P. 151-156.

128. Gleba Y. Y., Hoffman F. 'Arabidobrassica': Plant-genome engineering by protopIastfiísioñiyNaturwissenschaften. 1979. - V. 66. - P. 547-554.

129. Gleba Y. Y., Momot V. P., Cherep N. N. Skarshynskaya M. V. Intertribal hybrid cell lines Atropa belladona + Nicotiana chinensis II TAG. 1982. - V. 62. - P. 75-80.

130. Gleba Y. Y., Sytnik K. M. Genetic engineering in higher plants.- Berlin, Heidelberg, New York: Springer Verlag, 1984.

131. Gleba Y., Parokonny A., Kotov V., Negrutiu J., Momot V. Spatial separation of parental genomes in hybrids of somatic plant cells // Proc. Nat. Acad. Sci., USA. 1987. - N. 3. P. 3709-3713.

132. Gleba Y., Hinnisdaels S., Sidorov V. Intergeneric asymmetric hybrids between Nicotiana plumbaginifolia and Atropa belladonna obtained by "gamma-fusion" // TAG. 1988. - V. 76. - P. 760-766.

133. Gleddie S., Keller W. A., Setterfield G. Production and characterization of somatic hybrids between Solanum melongena L. and S. sisymbrifolium Lam. // TAG. -1986. -V. 71. P. 613-621.

134. Glimelius K., Bonnet H. Somatic hybridization in Nicotiana: restoration of photoautotrophy to an albino mutant with defective plastids // Planta. 1981. - V. 153. - P. 497-503.

135. Gottschalk W. Die Chromosomenstruktur der Solanaceae Berucksichtigung phylogenetischer Fragestellungen // Chromosoma. 1954. - V. 5. -P. 552-556.

136. Gupta P.K. Chromosomal Basis of Somaclonal Variation in Plants // Somaclonal variation and induced mutations in crop improvement / Ed. Mohan S., Brar. D.S. Dordrecht / Boston / London: Kluwer Academic Publishers, 1998

137. Haberlach G. T., Cohen B. A., Reichert N. A., Baer A., Towill L. E., Helgeson J. P. Isolation, culture and regeneration of protoplasts from potato and several related Solanum species // Plant Sci. 1985. - V. 39. - P. 67-74.

138. Hackauf B., Thieme R., Wehling P. Use of molecular markers for the identification of somatic potato hybrids // Proceedings of Intern. Symposium 'Breeding Research on Potatoes', Germany. 1998. - P. 59.

139. Handley L. W., Nickels R. L., Cameron M. W., Moore P. P., Sink K. C. Somatic hybrid plants between Lycopersicon esculentum and Solanum lycopersicoides //TAG. 1986.-V. 71.-P. 691-697.

140. Hannemann R. E. Assignment of endosperm balance numbers (EBN) to tuberbearing Solanum species // Report to the NCR-84 Potato Genetics Technical Committee. Des Plaines, Illinois, USA, 1984.

141. Hawkes J. G. Kartoffel. I. Taxonomy, cytology and crossability // Handdbuch Pflanzenzuchtung / Eds. Kappert H., Rudorf W. Berlin: Paul Parey, 1958. -N. 3. - P. 12-43.

142. Hawkes J. G. The potato: evolution, biodiversity and genetic resources. -London: Belhaven Press, 1990.

143. Hawkes J. G. Origins of cultivated potatoes and species relationships // Potato Genetics / Ed. Bradshaw J. E., Mackay G. R. Wallingford, UK: CAB International, 1994. - P. 3-42.

144. Helgeson J. P., Hunt G. J., Haberlach G. Т., Austin S. Sexual progeny of somatic hybrids between potato and Solanum brevidens: potential for use in breeding programs // Amer. Potato J. 1993,- V. 70. - P. 437-452.

145. Helgeson J. P. Introgression of S. brevidens DNA from somatic hybrids into potato breeding lines // Abstracts of 12th triennal EAPR conference. Paris, 1993.- P. 94.

146. Hermsen J. G. Т., Taylor L. M. Successful hybridization of non-tuberous Solanum etuberosum Lindl. and tuber-bearing S. pinnatisectum II Euphytica. 1979. -V. 28. - P. 1-7.

147. Hermsen J. G. Т., .Ramanna M. S. Meiosis in different FI hybrids of Solanum acaule and S. bulbocastanum II Euphytica. 1969. - V. 18. - P. 27-31.

148. Hermsen J. G. T. Introgression of genes from wild species, including molecular and cellular approaches // Potato Genetics / Ed. Bradshaw J. E., Mackay G. R. Wallingford, UK: CAB International, 1994. - P. 515-538.

149. Hogenboom N. G. Breaking breeding barriers in Lycopersicon II1

150. Euphytica. 1972. - V. 21. - P. 405-414.

151. Hogenboom N. G. A model for incongruity in intimate partner relationships // Euphytica. 1973. - V. 22. - P. 219-233.

152. Hogenboom N. G. Incompatibility and incongruity in Lycopersicon // The biology and taxonomy of the Solanaceae / Eds. Hawkes J. G., Lester R. N., Skelding A. D. New York, London: Academic Press, 1979. - P. 435-444.

153. Holmes F. O. A tendency to escape tobacco-mosaic disease in derivatives from a hybrid tomato // Phytopathology. 1943. - V. 33. - P. 691.i

154. Horsman K., Bergervoet M., Jacobsen E. Somatic hybridization between Solanum tuberosum and species of the S. nigrum complex // Euphitica. 1997. - V. 96. - P. 345-325.

155. Hosaka K., Ogihara Y., Matsubayashii M., Tsunewaki K. Phylogenej^c relationship between the tuberous Solanum species as revealed by restriction endonuclease analysis of chloroplast DNA // Jpn. J. Genet. 1984. - V. 59. - P. 349369.

156. Howard H. W. Potato cytology and genetics // Bibliographia Genetica. -1961. -V. 19. P. 87-216.

157. Hayashi Y., Kyozuka J., Shimamoto K. Hybrids of rice and wild Oryza species obtained by cell fusion // Mol. Gen. Genet. 1988 - V. 214. - P. 6-10.

158. Humphrey L. M. A cytological and morphological analysis of tomato species // Cytologia. Tokio, 1937. - V. 8. - P. 306-312.

159. Jaaska V. Electrophoretic studies of seedling phosphatases, esterases and peroxidases in the genus Triticum L. // Eesti NSVTA Toimetised, Biologia. 1969. -V. 18. - P. 170-183.

160. Jadari R, Sihachakr D., Rossignol L., Ducreux G. Transfer of resistance to Verticillium dahliae Kleb. from Solanum torvum S. W. into potato (Solanum tuberosum L.) by protoplast electrofusion // Euphytica. 1992. - V. 64. - P. 39-47.

161. Jauhar P. P. Methods of genome analysis in plants // Methods of genome analysis in plants / Ed. Jauhar P. CPC Press, 1996. - P. 9-37.

162. Jelodar N. B., Blackhall N. W„ Hartman T. P., Brar D. S., Khush G., Cocking E. C. Intergeneric somatic hybrids of rice and Porteresia coarctata // TAG. -1999. V. 99. - P. 570-577.

163. Jellis G. L. Multiple resistance to diseases and pests in potatoes // Euphytica. 1992. - V. 63. - P. 51-58.

164. Jiang J., Friebe B., Bikram S., Gill B. S. Recent advances in alien gene transfer in wheat // Euphytica. 1994. - V. 73. - P. 199-212.

165. Jones R. A. C. Resistance to potato leaf roll virus in Solanum brevidens II Potato Res. 1979. - V. 22. - P. 149-152.

166. Jones J. D., Jones D. A., Balint-Kurti P., Scofield S. Towards an understanding of the function of tomato genes for resistance to Cladosporium fulvum. Molecular biology of tomato / Ed. Yoder J. 1993. - P. 263-284.

167. Johnston S. A, Hanneman R. E. Manipulations of endosperm balance number overcome crossing barriers between diploid Solanum species // Science. -1982.-V. 217.-P. 446-448.

168. Johnston S. A., den Nijs A. P. M., Peloquin S. J., Hannemann R. E. The significance of genetic balance to endosperm development in interspecific crosses // TAG. 1980. - V. 57. - P. 5-9.

169. Izhar S., Tabib Y. Interspecific transfer of cytoplasmic male sterility by asymmetric fusion to Petunia hybrida II TAG. 1980. - V. 57. - P. 241-246.

170. Kao K. N. Chromosomal behaviour in somatic hybrids of soybean Nicotiana glauca II Mol. Gen Genet. 1977. - V. 150. - P. 225-230.

171. Khush G. S., Rick C. M. Meiosis in hybrids between Lycopersicon esculentum and Solanum pennellii II Genetica. 1963. - V. 33. - P. 167-183.

172. Kemble R. J., Barsby T., Wong R. S„ Shepard J. F. Mitochondrial DNA rearrangements in somatic hybrids of Solanum tuberosum and Solanum brevidens II TAG. 1986. - V. 72. - P. 787-793.

173. Kinsara A., Patnaik S. N., Cocking E. C., Power J. B. Somatic hybrid plants of Lycopersicon esculentum. Mill, and Lycopersicon peruvianum. Mill. // J. Plant Physiol. 1986. - V. 125. - P. 225-234.

174. Kirkham R., Halloran G. Cytology and fertility of hybrids between cultivated tomato and the wild species // Z. Pflanzenzuchtung. 1982. - V. 88. - P. 232-241.

175. Klimaszewska K., Keller W. A. Regeneration and characterization of somatic hybrids between Brassica napus and Diplotaxis harra II Plant Sci. 1988. -V. 58. - P. 211-222.

176. Koopmans A. Cytogenetics studies of Solarium tuberosum L. and some of its relatives // Genetica. 1951. - V. 26. - P. 359-380.

177. Kumar A., Cocking E. C. Protoplast fusion: A novel approach to organelle genetics in higher plants // Amer. J. Bot. 1987. - V. 74. - P. 1289-1303.

178. Kumar A. Somaclonal Variation // Potato Genetics / Ed. Bradshaw J. E., Mackay G. R. Wallingford, UK: CAB International, 1994. - P. 197-213.

179. Kumashiro T., Kubo T. Cytoplasm transfer of Nicotiana debneyi to N. tabacum by protoplast fusion // Jpn. J. Breed. 1986. - V. 36. - P. 39-48.

180. Lafrancois C., Chupeau Y., Bourgin J. Sexual and somatic hybridization in the genus Lycopersicon II TAG. 1993. - V. 86. - P. 533-546.

181. Larkin P. J. Introduction // Somaclonal variation and induced mutations in crop improvement / Eds. Jain S. M., Brar D. S., Ahloowalia B. S. Dordrecht, Boston, London: Kluwer Academic Publishers, 1998. - P. 3-13.

182. Lee M., Philips R.L. The chromosomal basis of somaclonal variation // Ann.Rev. Plant Physiol.Mol.Biol., 1988.-V.39.-P.413-437.

183. Leitch A. R, Schwarzacher T., Jackson D., Leitch I. J. In situ hybridization: a practical guide // Royal Microscopical Society. Microscopy handbooks. Bios Scientific Publishers. 1994. - B. 27.

184. Lesley M., Lesley J. Hybrids of the Chilean tomato // J. Heredity. 1943. -V. 34. - P. 199-205.

185. Lesley M. A cytological basis for sterility in tomato hybrids // Heredity. -1950.-V. 41.-P. 26-28.

186. Levi A., Ridley B. L., Sink K. C. Biased organelle transmission in somatic hybrids of Lycopersicon esculentum and Solanum lycopersicoides II Curr. Genet. -1988. -V. 14.-P. 177-182.

187. Li Y., Tanner G., Delves A., Larkin P. Asymmetric somatic hybrid pints between Medicago sativa and Onobrychis viciifolia II TAG. 1993. - V. 87. - P . 455463.

188. Linnaeus C. Species plantarum. 1st ed. Holmiae, Stockholm, 1753.

189. Lossl A., Frei U., Wenzel G. Interaction between cytoplasmic composition and yield paramters in somatic hybrids of S. tuberosum L. // TAG. 1994. - V. 89. - P. 873-878.

190. Luckwill L. C. The genus Lycopersicon; an historical, biological, and taxonomic survey of the wild and cultivated tomatoes // Aberdeen Univ. Stud. 1943. - P. 120.

191. Mac Arthur J. W., Chiasson L. P. Cytogenetic notes on tomato species // Cytologia. 1947. - V. 8. - P. 306-318.

192. Makonkawkeyoon S., Smitamana P., Hirunpetcharat C., Maneekarn N. Production of mouse immunoglobulin G by a hybrid plant derived from tobacco-mouse cell fusions // Expertia. 1995. - P. 19-25.

193. Magoon M., Hougas R., Cooper D. Cytogenetical studies of complex hybrids in Solarium II Ibid. 1958. - V. 49. - P. 285-295.

194. Maliga P., Menczel L., Sidorov V. Cell culture mutants and their uses // Plant improvement and somatic cell genetics. New York: Acad, press, 1982. - P. 221-237.

195. Manual on Molecular Cytogenetics Practical Course. - Wageningen Agricultural University, Laboratory of Genetics, 1997. - 47 p.

196. Marks G. E. Cytogenetic studies in tuberous Solarium species // New Phytologist. 1965. - V. 64. - P. 293-306.

197. Martin F. M. The inheritance of self-incompatibility in hybrids of L. esculentum x L. chilense II Genetics. 1961. - V. 46. - P. 1443-1454.

198. Masson J., Lancelin D., Bellini C., Lecerf M., Guerche P., Pelletier G. Selection of somatic hybrids between diploid clones of potato transformed by direct gene transfer//TAG. 1989. - V. 78. - P. 153-159.

199. Matsubayashi M. Species differentiation in Solarium Sect. Petota // IX. Science Rep. of the Faculty of Agriculture. Kobe University, 1982. - V. 15. - P. 2333.

200. Matsubayashi M. Phylogenetic relationships in the potato and its related species // Chromosome engineering in plants: genetics, breeding, evolution, part B / Eds. Tsuchiya T„ Gupta P. K. Amsterdam: Elsvier, 1991. - P. 93-118.

201. Mattheij W. M., Puite K. J. Tetraploid potato hybrids through protoplast fusions and analysis on their performance in the field // TAG. 1992. - V. 83. - P. 807-812.

202. McClean P. E., Hanson M. R. Mitochondrial DNA sequence divergence among Lycopersicon and related Solarium species // Genetics. 1986. - V. 112. - P. 649-667.

203. Medgyesy P., Menczel L., Maliga P. The use of cytoplasmic streptomycin resistance: chloroplast transfer from Nicotiana tabacum into N. sylvestris and isolation of their somatic hybrids // Mol. Gen. Genet. 1980. - V. 179. - P. 693-698.

204. Medgyesy P., Fejes E., Maliga P. Interspecific chloroplast recombination in a Nicotiana somatic hybrids // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1985. - V. 82. - P. 6960-6964.

205. Melchers G. The first decennium of somatic hybridization // Proc. 5th Int. Congr. Plant Tissue and Cell Cult., Tokyo, July 11-16, 1982. P. 13-18.

206. Melchers G., Sacristan M. D., Holder A. A. Somatic hybrid plants of potato and tomato regenerated from fused protoplasts // Carlsberg Res. Commun. -1978,-V. 43.-P. 203-218.

207. Menczel. L., Nagy F., Kiss Z., Maliga P. Streptomycin resistance and sensitive somatic hybrids of Nicotiana tabacum and Nicotiana knightiana-. correlation of resistance to N. tabacum plastids // TAG. 1981. - V. 59. - P. 191-195.

208. Mendis M. H., Power J. B., Davey M. R. Somatic hybrids of the forage legumes Medicago sativa and M. falcata II J. Exp. Bot. 1991. - V. 42. - P. 15651573.

209. Menzel M. Pachytene chromosomes of the intergeneric hybrid L. esculentum x S. lycopersicoides II Amer. J. Botany. 1962. - V. 49,- P. 605-615.

210. Menzel M. Preferential chromosome pairing in allotetraploid L. esculentum x S. lycopersicoides II Genetics. 1964. - V. 50. - P. 855-862.

211. Menzel M., Price J. Fine structure of synapsed chromosomes in F1 L. esculentum x S. lycopersicoides and its parents // Am. J. Bot. 1966. - V. 53. - P. 1079-1086.

212. Messeguer R., Ganal M. W., Steffens J. C., Tanksley S. D. Characterization of the level, target sites and inheritance of cytosine methylation in tomato nuclear DNA // Plant Mol. Biol. 1991. - V. 16. - P. 753-770.

213. Millam S., Payne L. A., Mackay G. R. The integration of protoplast fusion-derived material into a potato breeding programme a review of progress and problems // Euphytica. - 1995. - V. 85. - P. 451-455.

214. Miller P. The gardeners dictionary.- London, 1754.

215. Mojtahedi H., Brown C. R., Santo C. Characterization of resistance in a somatic hybrid of Solanum bulbocastanum and S. tuberosum to Meloidogyne chitM>oodi II J. of Nematology. 1995. - V. 27. - P. 86-93.

216. Mollers C., Wenzel G. Somatic hybridization of diploid potato protoplasts as a tool for potato breeding // Bot. Acta. 1992. - V. 105. - P. 133-139.

217. Mollers C., Frei U., Wenzel G. Field evaluation of tetraploid somatic potato hybrids II TAG. 1994. - V. 88. - P. 147-152.

218. Muller C. H. A revision of the genus Lycopersicon. USDA Misc. Publ. 1940. - V. 382. - P. 29.

219. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture // Physiol. Plant. 1962. - V. 15. - P. 473-497.

220. Nagata T., Takebe I. Plating of isolated tobacco mesophyll protoplasts on agar medium // Planta. 1971. - V. 99. - P. 12-20.

221. Neal C. A., Topoleski L. D. Effects of basal medium on growth of immature tomato embryos in vitro // J. Amer Soc. Hort. Sei. 1983. - V. 108. - P. 434438.

222. O'Connell M. A., Hanson M. R. Regeneration of somatic hybrid plants formed between Lycopersicon esculentum and L. pennellii II TAG. 1987. - V. 75. -P. 83-89.

223. Ortiz R., Huaman Z. Inheritance of morphological and tuber characteristics // Potato Genetics / Ed. Bradshaw J. E., Mackay G. R. Oxford, UK, 1994. - P. 263-284.

224. Ozias-Akins P., Ferl R. J., Vasil I. K. Somatic hybridization in the Grammineae: Pennisetum americanum (pearl millet) + Panicum miximum II Mol. Gen. Genet. 1986. - V. 203. - P. 365-370.

225. Palmer J., Zamir D. Chloroplast DNA evolution and phylogenetic relationships in Lycopersicon II Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1982. - V. 79. - P. 50065010.

226. Parokonny A. S., Kenton A., Gleba Y. Y., Bennett M. D. The fate of recombinant chromosomes and genome interaction in Nicotiana asymmetric somatic hybrids and their sexual progeny // TAG. 1994. - V. 89. - P. 488-497.

227. Peschke V.M., Phillips R.L., Gengenbach B.G. Discovery of transposable element activity among progeny of tissue culture-derived maize // Science. 1987.-V.238.- P. 804-807.

228. Pineda-Colorado R. Quantitative and genetic analysis in Solanum chacoense Bitt. using inbred lines // Ph. D. thesis. University of Wisconsin-Madison,1990.

229. Pehu E., Karp A., Moore K„ Steele S., Dunckley R., Jones M. G. K. Molecular, cytogenetic and morphological characterization of somatic hybrids of dihaploid Solanum tuberosum and diploid S. brevidens II TAG. 1989. - V. 78. - P. 696-704.

230. Pehu E., Thomas M., Poutala T., Karp A., Jones M. G. K. Species-specific sequences in the genus Solanum: identification, characterization, and application to study somatic hybrids of S. brevidens and S. tuberosum II TAG. 1990. - V. 80. - P. 693-698.

231. Perez F., Menendez A., Dehal P., Quiros C. Genomic structural differentiation in Solanum: comparative mapping of the A- and E-genomes // TAG. -1999. -V. 98. P. 1183-1193.

232. Perl A., Aviv D., Galun E. Protoplast-fusion-derived CMS potato cybrids: potential seed-parents for hybrid, true-potato-seeds // J. Her. 1990. - V. 81. - P. 438442.

233. Perl A., Aviv D., Galun E. Protoplast-fusion-derived Solanum cybrids: application and phylogenetic limitations // TAG. 1990. - V. 79. - P. 632-640.

234. Piastuch W. C., Bates G. W. Chromosomal analysis of Nicotiana asymmetric somatic hybrids analyzed by dot blotting and in situ hybridization // Mol. Gen. Genet. 1990. - V. 222. - P. 97-103.

235. Pijnacker L. P., Ferwerda M. A. Giemsa C-banding of potato chromosomes // Canad. J. Gen. Cyt. Ottawa, 1984. - V. 26, N. 4. - P. 415-419.

236. Pijnacker L. P., Ferwerda M. A., Puite K. J., Roest S. Elimination of Solanum phureja nucleolar chromosomes in S. tuberosum + S. phureja somatic hybrids // TAG. 1989. - V. 73. - P. 878-882.

237. Pijnacker L. P., Ferwerda M. A., Puite K. J., Schaart J. G. Chromosome elimination and mutation in tetraploid somatic hybrids of Solanum tuberosum and S. phureja II Plant Cell Rep. 1987. - V. 8. - P. 82-85.

238. Pijnacker L. P., Ferwerda M. A., Mattheij W. M. Microsporogenesis in three tetraploid somatic hybrids of potato and their di(ha)ploid fusion partners // TAG. 1992. -V. 85. - P. 269-273.

239. Polgar Zs., Preiszner J., Dudits D., Feher A. Vigorous growth of fusion products allows highly efficient selection of interspecific potato somatic hybrids: molecular proofs // Plant Cell Reports. 1991. - V. 12. - P. 399-402.

240. Preiszner J., Feher A., Veisz O., Sutka J., Dudits D. Characterization of morphological variation and cold resistance in interspecific somatic hybrids between potato and S. brevidens II Euphytica. 1993. - V. 57. - P. 37-49.

241. Prakken R., Swaminathan M. S. Cytological behaviour of some interspecific hybrids in the genus Solanum section Tuberarium II Genetica. 1952. -V. 26. - P. 77-80.

242. Preiszner J., Feher A., Veisz 0., Sutka J., Dudits D. Characterization of morphological variation and cold resistance in interspecific somatic hybrids between potato and S. brevidens II Euphytica. 1991. - V. 57. - P. 37-49.

243. Puite K., Roest L. S., Pijnacker L. P. Somatic hybrid potato plants after electrofusion of diploid Solarium tuberosum and Solarium phureja II Plant Cell Reports. 1986. - V. 5. - P. 262-265.

244. Pupilli F., Arcioni G. M., Scarpa G. M., Damiani F., Arcioni S. Production of interspecific somatic hybrid plants in the genus Medicago through protoplast fusion // TAG. 1992. - V. 84. - P. 792-797.

245. Ramanna M., Hermsen J. Unique meiotic behaviour in F1 plants from a cross between a non-tuberous and tuberous Solanum species in the section Petota II Euphytica. 1979. - V. 28. - P. 9-15.

246. Ramanna M., Hermsen J. Structural hybridity in the series Etuberosa of the genus Solanum and its bearing on crossability // Euphytica. 1981. -V. 30. - P. 1531.

247. Ramanna M., Hermsen J. Gene transfer from non-tuberous to tuberous Solanum species // Euphytica. 1982. - V. 31. - P. 565-572.

248. Ramulu K., Dijkhuis P., Roest S. Genetic instability in protoclones of potato (Solanum tuberosum L. cv. 'Bintje'): new types of variation after vegetative propagation // TAG. 1984a. - V. 68. - P. 515-519.

249. Ramulu K., P. Dijkhuis, S. Roest. Genetic instability in protoclones of potato (Solanum tuberosum L. cv. 'Bintje'): new types of variation after vegetative propagation. TAG, 1984a, 68: 515-519.

250. Ramulu K., Dijkhuis P., Roest S., Bokelmann G., de Groot B. Early occurence of genetic instability in protoplast cultures of potato // Plant Sci. Let. -1984b. V. 36. - P. 79-86.

251. Rietveld R. C., Bressan, Hasegawa P. M. Somaclonal variation in tuber-disc-derived populations of potato. I. Evidence of genetic stability across tuber generations and diverse locations // TAG. 1991. - V. 82. - P. 430-440.

252. Rick C., Butler L. Cytogenetics of the tomato // Adv.Gen. 1956. - V. 8. -P. 267-382.

253. Rick C. Further studies on segregation and recombination in backcross derivatives of tomato species hybrid // Biologische Zbl. 1972. - V. 91. - P. 209-220.

254. Rick C. Hybrids between L. esculentum and S. lycopersicoides II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1951. -V. 37. -P. 741-747.

255. Rick C. Disturbed segregation in progenies of L. esculentum x L. chilense II Proc. 10th Int. Congr. Genet. 1958. - V. 2. - P. 232.

256. Rick C. Differential zygotic lethality in a tomato species hybrid // Genetics. 1963. - V. 48. - P. 1497-1507.

257. Rick C. Controlled introgression of Solanum pennellii chromosomes into Lycopersicon esculentum: segregation and recombination // Genetics. 1969. - V. 62. - P. 753-768.

258. Rick C. The Tomato // Handbook of Genetics / Ed. King R. C. New York: Plenum Press, 1975. - V. 2. - P. 247-280.

259. Rick C. Biosynthetic studies of Lycopersicon and closely related species of Solanum II The biology and taxonomy of the Solanaceae / Hawkes J. G., Lester R. N., Skelding A. D.- New York, London: Academic Press, 1979. P. 667-668.

260. Rick C. Germplasm resources in the wild tomato species // Acta Hortic. 190. Symp. Tomato Production in Arid Land, Cairo, Egypt, 9-15 Dec., 1984 / Eds. El-Bellagy A. S., Persson A. R.

261. Rick C., Chetelat R., de Verna J., Stevens M. Meiosis in sesquidiploid hybrids of L. esculentum x S. lycopersicoides II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. -V. 83. - P. 3580-3583.

262. Rick C., Chetelat R., de Verna J. Recombination in sesquidiploid hybrids of L. esculentum x S. lycopersicoides and derivatives // TAG. 1988. - V. 76. - P. 647-655.

263. Rick C., Lamm R. Biosystematic studies on the status of Lycopersicon chilense II Amer. J. Bot. 1955. - V. 42. - P. 663-675.

264. Rick C., Laterott H., Philouze J. A revised key for the Lycopersicon species // TGC Report. 1990. - V. 40. - P. 31.

265. Roest S., Gilissen L. J. W. Regeneration from protoplasts a supplementary literature review // Acta Bot. Neerl. - 1993. - V. 42. - P. 1-23.

266. Rokka V. -M., Clark M. S., Knudson D. L., Pehu E„ Lapitan N. Cytological and molecular characterization of repetitive DNA sequences of Solanum brevidens and Solanum tuberosum II Genome. 1998. - V. 41. - P. 487-494.

267. Rokka V. -M., Valkonen J. P., Pehu E. Production and characterization of haploids derived from somatic hybrids between Solanum brevidens and S. tuberosum through anther culture // Plant Science. 1995. - V. 112. - P. 85-95.

268. Rokka V.-M., Pietila L., Pehu E. Enhanced production of dihaploid lines via anther culture of tetraploid potato (Solanum tuberosum L. ssp. Tuberosum) clones // Am. Pot. J. 1996. - V. 73. - P. 1-13.

269. Ross H. Potato breeding problems and perspectives. -Berlin, Hamburg: Paul Paray, 1986.

270. Ross R. W., Rowe P. R. Frost resistance among the Solanum species in the IR-1 potato collection // Am. Pot. J. 1965. -V. 42. - P. 177-185.

271. Ross R. W., Rowe P. R. Utilizing the frost resistance of diploid Solanum species // Am. Pot. J. 1969. - V. 46. - P. 5-13.

272. Sako N., Stahmann A. Multiple molecular forms of enzymes in barley leaves infected with Erysiphe gramminis II Physiol. Plant. Pathol. 1972. - V. 2. - P. 219-230.

273. Sakomoto K., Taguchi T. Regeneration of intergeneric somatic hybrid plants between Lycopersicon esculentum and Solanum muricatum II TAG. 1991. - V. 81. - P. 509-513.

274. Scandalios J. G. Genetic control of multiple molecular forms of enzymes in plants // Biochem. Genet. 1966. - V. 3. - P. 37-79.

275. Schober B., Turkensteen L. J. Recent and future developments in potato fungal pathology // Nether. J. Plant Pathol. 1992. - V. 98. - P. 73-83.

276. Schieder O. Somatic hybridization: a new method for plant improvement II Plant Improvement and somatic cell genetics / Eds. Vasil I., Scowcroft W., Frey K. -N. Y.: Academic Press, 1982. P. 239-253.

277. Schweizer G., Ganal M., Ninnemann H., Hemleben V. Species-specific DNA sequences for identification of somatic hybrids between Lycopersicon esculentum and Solanum acaule II TAG. 1988. - V. 75. - P. 679-684.

278. Sears E. R. The transfer of leaf rust resistance from Aegilops umbellulata to wheat // Brookhaven Symp. Biol. 1956. - N. 9. - P. 1-22.

279. Serraf I., Sihachakr D., Ducreux G., Brown S. C„ Allot M„ Barghi N., Rossignol L. Interspecific somatic hybridization in potato by protoplast electrofusion // Plant Sci. 1991.-V. 76.-P. 115-126.

280. Shepard J. F., Bidney D., Barsby T., Kemble R. Genetic transfer in plants through interspecific protoplast fusion // Science. 1983. - V. 219. - P. 683-688.

281. Shahin E. A., Yashar M. Factors influencing tomato protoplasts development // Tissue Culture and Agriculture / Eds. Henke R., Hughes K., Milton P. C., Hollaender A. Plenum Publishing Corporation, 1985. - P. 75-82.

282. Shaw D. S. Genetics // Advances in Plant Pathology, Phytophthora infestans, the cause of late blight of potato / Eds. Ingram D.S., Williams P. H. -London, San Diego, New York, Sidney, Tokyo, Toronto: Academic Press, 1991. V. 7. - P. 131-170.

283. Sjodin C., Glimelius K. Screening for resistance to black-leg Phoma lingam within Brassicaceae II J. Phytopathol. 1988. - V. 123. - P. 322-332.

284. Sjodin C., Glimelius K. Brassica naponigra, a somatic hybrid resistant to Phoma lingam II TAG. 1989a. - V. 77. - P. 651-656.

285. Sjodin C., Glimelius K. Transfer of resistance against Phoma lingam to Brassica napus by asymmetric somatic hybridization combined with toxin selection // TAG. 1989b. - V. 78. - P. 513-520.

286. Sidorov V., Maliga P. Fusion-complementation analysis of auxotrophic and chlorophyll-deficient lines isolated in haploid Nicotiana plumbaginifolia protoplast cultures // Mol. Gen. Genet. 1982. - V. 186. - P. 328-332.

287. Sidorov V. A., Zubko M. K., Kuchko A. A, Komarnitzky J. K., Gleba Y. Y. Somatic hybridization in potato: use of y-irradiated protoplasts of Solanum pinnatisectum in genetic reconstruction // TAG. 1987. - V. 74. - P. 364-368.

288. Sihachakr D., Haicour R., Chaput M.-H., Barrientos E., Ducreux G., Rossingol L. Somatic hybrid plants produced by electrofusion between Solanum melongena L. and Solanum torvum Sw. // TAG. 1989. - V. 77. - P. 1-6.

289. Smith O. Pollination and life-history studies of the tomato. New York: Cornell Univ. agric. exp. Station, 1935. - 16 p.

290. Smith P. G. Embryoculture of a tomato species hybridization // Proc. Amer. Soc. Hort. Sci. 1944. - V. 44. - P. 413-416.

291. Soost R. K., Lesley J. Gene studies in tomato species hybrids // J. Hered. -1957. -V. 48. P. 285-289.

292. Spooner D., Anderson G., Jansen R. Chloroplast DNA evidence for the interrelationships of tomatoes, potatoes and pepinos (Solanaceae) // Am. J. Bot. -1993. V. 80. - P. 676-688.

293. Spooner D., Sytsma K., Conti E. Chloroplast DNA evidence for genome differentiation in wild potatoes // Am. J. Bot. 1991. - V. 78. - P. 1354-1366.

294. Spooner D., Systma K. Re-examination of series relationships of Mexican and Central American wild potatoes ( Solanum sect. Petota ): evidence from chloroplast DNA restriction site variation // Syst. Bot. 1992. - P. 432-448.

295. Swaminathan M. S. Microsporogenesis in some commercial potato varieties // J. Hered. 1954. - V. 45. - P. 265.

296. Swiezynski K. M. Inheritance of Resistance to Viruses // Potato Genetics / Eds. Bradshaw J. E„ Mackay G. R. Oxford, UK, 1994. - P. 339-364.

297. Sybenga J., Parmar S., van Eden J., Shewry P. Mapping seed storage-protein loci Sec-1 and Sec-3 in relation to five chromosomal rearrangements in rye (Secale cereale L.) II TAG. 1990. - V. 79. - P. 201-208.

298. Sybenga J. Cytogenetics in plant breeding // Monograpfs on Theoretical and Applied Genetics. Heidelberg: Springer-Verlag, 1992. - P. 17.

299. Tabaeizadeh Z., Ferl R., Vasil I. Somatic hybridization in the Gramineae: Saccharum officinarum L. and Pennisetum americanum L. // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1986. - V. 83. - P. 5616-5619.

300. Takebe I., Labib G., Melchers G. Regeneration of whole plants from isolated mesophyll protoplasts of tobacco //Naturwissenschaften. 1971. - V. 58. - P. 318-320.

301. Tanksley S. D., Ganal M. W., Prince J. P., de Vicente M. C., Bonierbale M. W. High density molecular linkage maps of the tomato and potato genomes: biological inferences and practical applications // Genetics. 1992. - V. 132. - P. 1141-1160.

302. Tanksley C. D., Rick С. M. Isozymic gene linkage map of the tomato applications in genetics and breeding // TAG. 1980. - V. 57. - P. 161-170.

303. Taylor I. B. Biosystematics of the tomato // The tomato crop: a scientific basis for improvement / Eds. Atherton J. G., Rudich J. London: Chapman, Hall, 1986. - P. 1-34.

304. Thach N. Q., Frei U., Wenzel G. Somatic fusion for combining virus resistances in Solanum tuberosum L. // TAG. 1993. - V. 85. - P. 863-867.

305. Thieme R, Sonntag К., Gavrilenko Т., Tiemann H. Intraspezifische somatische Hybridisierung durch Protoplastenfusion und Charakterisierung der Hybriden bei der Kartoffel // Aktuelle Zichtungsforschung. Köln-Vogelsang: Postertexte, 1996. - P. 154-157.

306. Thieme R., Darsow U., Gavrilenko Т., Dorokhov D., Tiemann H. Production of somatic hybrids between S. tuberosum L. and late blight resistant Mexican wild potato species // Euphytica. 1997. - V. 97. - P. 189-200.

307. Thiemann H., Schreiter J. Zur Bluhintensitat und Blutenbiologie bei Dihaploiden von Solarium tuberosum L. // Biol. Zbl. 1976. - N 95. - P. 579-588.

308. Thomas M. R., Johnson L. B., White F. F. Selection of interspecific somatic hybrids of Medicago by using Agrobacterium transformed tissues // Plant Sci. 1990. -V. 69. - P. 189-198.

309. Uchimiya H., Ohgawara T., Kato H., Akiyama T., Harada H., Sugiura M. Molecular analysis of interspecific somatic hybrids between Nicotiana glauca and N. langsdorfii II TAG. 1983. - V. 64. - P. 117-118.

310. Thomas B. R., Pratt D. Embrio callus hybrids // Calif. Agr. 1982. - V. 36. - P. 19-20.

311. Umearus V., Umearus H. Inheritance of resistance to late blight // Potato Genetics / Eds. Bradshaw J. E., Mackay G. R. Wallingford, UK: CAB International, 1994. - P. 365-401.

312. Valkonen J. P. T., Brigneti L. F., Salazar L. F., Pehu E„ Gibson R. W. Interactions of Solanum ssp. of the Etuberosa group and nine potato infecting viruses and viroid//Ann. Appl. Biol. 1992. - V. 120. - P. 301-313.

313. Valkonen J. P. Natural genes and mechanisms for resistance to viruses in cultivated and wild potato species // Plant Breeding. 1994. - V. 112. - P. 1-16.

314. Vasil I. K., Vasil V. Advances in cereal protoplast research // Physiol. Plant. 1992. - V. 85. - P. 279-283.

315. Visser R., Hoekstra R, van der Leij, Pijnacker F., Witholt L., Feenstra W. In situ hybridization to somatic metaphase chromosomes of potato // TAG. 1988. -V. 76. - P. 420-424.

316. Waara S., Glimelius K. The potential of somatic hybridization in crop breeding // Euphytica. 1995. - V. 85. - P. 217-233.

317. Waara S., Tegelstrom H., Wallin A., Eriksson T. Somatic hybridization between anther-derived dihaploid clones of potato {Solanum tuberosum L. ) and theidentification of hybridplants by isoenzyme analysis // TAG. 1989. - V. 77. - P. 4956.

318. Wangenheim K. H. Ursachen von Sterilitat, Schlechten Kreuzbarkeit bei Solanum II Am. Pot. J. 1958. - V. 28. - P. 91-100.

319. Wann E. W., Johnson K. W. Intergeneric hybridization involving species of Solanum and Lycopersicon II Bot. Gaz. 1963. - V. 124. - P. 451-455.

320. Wenzel G., Schieder O., Przewzny T., Sopory S. K., Melchers G. Comparison of single-cell-culture-derived Solanum tuberosum L. plants and a model for their application in breeding programs // TAG. 1979. - V. 55. - P. 49-55.

321. Wettstein D. von, Pouslen C., Holder A. Ribulose-1, 5-biphosphate carboxylase as a nuclear and chloroplast marker // Ibid. 1978. - V. 53. - P. 193-198.

322. White J., Rees H. The chromosome cytology of a somatic hybrids petunia // Heredity. 1985. - V. 55. - P. 53-59.

323. Wijbrandi J., Capelle W. V., Hanhart C. J., Van Loenen Maritinet-Schuringa E. P., Koornneef M. Selection and characterization of somatic hybrids between Lycopersicon esculentum and Lycopersicon peruvianum II Plant Science. -1990. V. 70. - P. 197-208.

324. Wilkinson M. J. Genome evolution in potatoes // Potato Genetics / Eds. Bradshaw J. E., Mackay G. R. Wallingford, UK: CAB. International, 1994. - P. 4367.

325. Williams C. E., Hunt G. J., Helgeson J. P. Fertile somatic hybrids of Solanum species: RFLP analysis of a hybrid and its sexual progeny from crosses with potato // TAG. 1990. - V. 80. - P. 545-551.

326. Williamson V. M., Lambert K. N. Ho J.-Y. Root-knot nematode resistance in tomato // Molecular biology of tomato / Ed. Yoder J. 1993. - P. 275285.

327. Wolters A. M. A., Schoenmakers H. C. H., Kamstra S., van Eden J., Koorneef M., De Jong J. H. Mitotic and meiotic irregularities in somatic hybrids of Lycopersicon esculentum and Solanum tuberosum II Genome. 1994. - V. 37. - P. 726-735.

328. Xu Y., Pehu E. RFLP analysis of asymmetric somatic hybrids between Solanum tuberosum and irradiated S. brevidens II TAG. 1993. - V. 86. - P. 754-760.

329. Xu Y., Clark M. S., Pehu E. Use of RAPD markers to screen somatic hybrids between Solanum tuberosum and S. brevidens II Plant Cell Reports. 1993. -V. 12. - P. 107-109.

330. Xu Y., Jones M. G. K., Karp A., Pehu E. Analysis of the mitochondrial DNA of the somatic hybrids of Solanum brevidens and Solanum tuberosum using non-radiactive digoxigenin-labelled DNA probes // TAG. 1993. - V. 85. - P. 1017-1022.

331. Xu Y., Murto E., Dunckley R., Jones M. G. K., Pehu E. Production of asymmetric hybrids between Solanum tuberosum and irradiated S. brevidens II TAG. -1993. -V. 85. P. 729-734.

332. Zhong X.-B., Jong J. H., Zabel P. Preparation of tomato meiotic pachytene and mitotic metaphase chromosomes suitable for fluorescence in situ hybridization (FISH) // Chromosome Research. 1996. - V. 4. - P. 24-28.

Информация о работе

Гавриленко, Татьяна Андреевна
доктора биологических наук
Санкт-Петербург, 1999
ВАК 03.00.15

Диссертация

Межродовая, межвидовая, внутривидовая гибридизация пасленовых на примере родов Solanum и Lycopersicon - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы